WO2023016554A1 - 靶向cd22的抗原结合蛋白及其用途 - Google Patents
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Abstract
一种靶向CD22的抗原结合蛋白及其用途，尤其涉及一种包含该抗原结合蛋白的嵌合抗原受体及其应用，所述嵌合抗原受体包含靶向部分，所述靶向部分包含HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列。还提供了包含或表达该嵌合抗原受体的细胞。所述抗原结合蛋白以约2E-08M或以下的K D值与CD22蛋白结合。所述嵌合抗原受体可以特异性结合CD22蛋白。
Description
本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种靶向CD22的抗原结合蛋白及其用途。
近年来，随着肿瘤免疫疗法的发展和临床研究的进展，嵌合抗原受体T细胞(Chimeric Antigen Receptor-T cells，CAR-T)免疫疗法以其独特的抗肿瘤优势，目前是最有发展前景的肿瘤免疫疗法之一。CAR-T细胞是由单克隆抗体的单链可变区和T细胞信号转导区连接而成，抗体与相应的肿瘤抗原结合后能以主要组织相容性复合体以非限制性方式使T细胞活化，进而发挥抗肿瘤效应。CAR的结构分为：胞外抗原结合区、铰链区、跨膜结构域和胞内信号传导结构域。目标抗原的选择对于CAR的特异性、有效性以及基因改造T细胞自身的安全性来讲都是关键的决定因素。
肿瘤表面抗原CD22是分子量为140kDa的糖蛋白，是唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素家族的一员，有几个Ig样的胞外区。它限制性表达在B细胞恶性肿瘤与正常B细胞中，60-80％的B细胞恶性肿瘤表达CD22。几乎所有的B前体细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)表达CD22，90％以上的弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)和滤泡淋巴瘤(FL)表达CD22；慢性淋巴细胞白血病(B-CLL)、毛细胞白血病(HCL)也具有高水平的CD22表达。因此CD22是CAR-T治疗恶性血液肿瘤疗法中，继CD19之外的又一理想靶点，给肿瘤的免疫治疗带来了新的方向。
目前的CAR-T疗法通常以来源于单克隆抗体抗原结合区域的scFv段作为抗原结合区。细胞外的scFv结构域在结合表达于靶细胞表面的靶蛋白以后，可以激活CAR结构的共刺激域和激活域。但是scFv分子量比较大而且容易形成多聚体，影响CAR的功能。因此，亟需包含结构新颖的抗原结合区的CAR来治疗肿瘤。
发明内容
本申请提供了一种靶向CD22的抗原结合蛋白，尤其涉及一种包含该抗原结合蛋白的嵌合抗原受体。所述抗原结合蛋白具有下述性质的一种或多种：1)能够特异性识别人CD22。所述嵌合抗原受体具有下述性质的一种或多种：1)能够特异性识别人CD22；2)能够有效杀伤肿瘤细胞，例如血液瘤。
在某些实施方式中，所述嵌合抗原受体包含靶向部分，所述靶向部分包含HCDR3，所述 HCDR3包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述靶向部分中的HCDR3包含SEQ ID NO:19至SEQ ID NO:21中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述靶向部分包含HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述靶向部分中的HCDR2包含SEQ ID NO:11至SEQ ID NO:12中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述靶向部分包含HCDR1，所述HCDR1包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述靶向部分中的HCDR1包含SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:6中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述靶向部分包含SEQ ID NO:55所示的重链可变区中的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
在某些实施方式中，所述靶向部分包含SEQ ID NO:24至SEQ ID NO:30中任一项所示的重链可变区中的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
在某些实施方式中，所述靶向部分包含HCDR1、HCDR2、HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列；所述HCDR2包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列；以及所述HCDR1包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述靶向部分中的HCDR3包含SEQ ID NO:19至SEQ ID NO:21中任一项所示的氨基酸序列；所述靶向部分中的HCDR2包含SEQ ID NO:11至SEQ ID NO:12中任一项所示的氨基酸序列；以及所述靶向部分中的HCDR1包含SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:6中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述靶向部分中的HCDR1、HCDR2和HCDR3包含选自下述的任意一组的氨基酸序列：
a)HCDR1：SEQ ID NO:4，HCDR2：SEQ ID NO:11，和HCDR3：SEQ ID NO:19；
b)HCDR1：SEQ ID NO:5，HCDR2：SEQ ID NO:12，和HCDR3：SEQ ID NO:20；和
c)HCDR1：SEQ ID NO:6，HCDR2：SEQ ID NO:12，和HCDR3：SEQ ID NO:21。
在某些实施方式中，所述靶向部分包含H-FR1，所述H-FR1的C末端与所述HCDR1的N末端直接或间接地相连，且所述H-FR1包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述靶向部分中的H-FR1包含SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:3中任 一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述靶向部分包含H-FR2，所述H-FR2位于所述HCDR1与所述HCDR2之间，且所述H-FR2包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述靶向部分中的H-FR2包含SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:10中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述靶向部分包含H-FR3，所述H-FR3位于所述HCDR2与所述HCDR3之间，且所述H-FR3包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述靶向部分中的H-FR3包含SEQ ID NO:13至SEQ ID NO:18中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述靶向部分包含H-FR4，所述H-FR4的N末端与所述HCDR3的C末端直接或间接地相连，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述靶向部分中的H-FR4包含SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:23中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述靶向部分包含H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4，所述H-FR1包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列；所述H-FR2包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列；所述H-FR3包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列；以及所述H-FR4包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述靶向部分中的H-FR1包含SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:3中任一项所示的氨基酸序列；所述靶向部分中的H-FR2包含SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:10中任一项所示的氨基酸序列；所述靶向部分中的H-FR3包含SEQ ID NO:13至SEQ ID NO:18中任一项所示的氨基酸序列；以及所述靶向部分中的H-FR4包含SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:23中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述靶向部分中的H-FR1、H-FR2、H-FR3和H-FR4包含选自下述的任意一组氨基酸序列：
a)H-FR1：SEQ ID NO:1，H-FR2：SEQ ID NO:7，H-FR3：SEQ ID NO:13和H-FR4：SEQ ID NO:22；
b)H-FR1：SEQ ID NO:2，H-FR2：SEQ ID NO:8，H-FR3：SEQ ID NO:14和H-FR4：SEQ ID NO:22；
c)H-FR1：SEQ ID NO:2，H-FR2：SEQ ID NO:9，H-FR3：SEQ ID NO:15和H-FR4：SEQ ID NO:22；
d)H-FR1：SEQ ID NO:1，H-FR2：SEQ ID NO:7，H-FR3：SEQ ID NO:16和H-FR4：SEQ ID NO:22；
e)H-FR1：SEQ ID NO:3，H-FR2：SEQ ID NO:10，H-FR3：SEQ ID NO:17和H-FR4：SEQ ID NO:23；
f)H-FR1：SEQ ID NO:3，H-FR2：SEQ ID NO:7，H-FR3：SEQ ID NO:17和H-FR4：SEQ ID NO:23；
g)H-FR1：SEQ ID NO:3，H-FR2：SEQ ID NO:7，H-FR3：SEQ ID NO:18和H-FR4：SEQ ID NO:23。
在某些实施方式中，所述靶向部分包括抗体或抗原结合片段。
在某些实施方式中，所述抗原结合片段选自下组：Fab，Fab’，F(ab)2，Fv片段，F(ab’)2，scFv，di-scFv，VHH和/或dAb。
在某些实施方式中，所述靶向部分包括VHH。
在某些实施方式中，所述VHH靶向CD22。
在某些实施方式中，所述靶向部分包含SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述靶向部分包含SEQ ID NO:24至SEQ ID NO:30中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的嵌合抗原受体包含跨膜结构域。
在某些实施方式中，所述跨膜结构域包含源自选自下述蛋白的跨膜结构域或其组合：CD8、CD28、4-1BB、CD4、CD27、CD7、PD-1、TRAC、TRBC、CD3ε、CD5、ICOS、OX40、NKG2D、2B4、CD244、FcεRIγ、BTLA、CD30、GITR、HVEM、DAP10、CD2、NKG2C、LIGHT、DAP12，CD40L、TIM1、CD226、DR3、CD45、CD80、CD86、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD134、CD137、CD154和SLAM。
在某些实施方式中，所述跨膜结构域包括源自CD8的跨膜结构域。
在某些实施方式中，所述跨膜结构域包含SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述跨膜结构域的N端与所述靶向部分的C端连接。
在某些实施方式中，所述嵌合抗原受体包含共刺激信号传导结构域。
在某些实施方式中，所述共刺激信号传导结构域包含源自选自下述蛋白的共刺激信号传导结构域或其组合：CD28、CD137、CD27、CD2、CD7、CD8、OX40、CD226、DR3、SLAM、CDS、ICAM-1、NKG2D、NKG2C、B7-H3、2B4、FcεRIγ、BTLA、GITR、HVEM、DAP10、DAP12、CD30、CD40、CD40L、TIM1、PD-1、LFA-1、LIGHT、JAML、CD244、CD100、 ICOS、CD83的配体、CD40和MyD88。
在某些实施方式中，所述共刺激信号传导结构域包括源自CD137的共刺激信号传导结构域。
在某些实施方式中，所述共刺激信号传导结构域包含如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述共刺激信号传导结构域的N端与所述跨膜结构域的C端连接。
在某些实施方式中，所述嵌合抗原受体包含胞内信号传导结构域。
在某些实施方式中，所述胞内信号传导结构域包含源自选自下述蛋白的胞内信号传导结构域或其组合：CD3zeta、CD3delta、CD3gamma、CD3ε、CD79a、CD79b、FceRIγ、FceRIβ、FcγRIIa、牛白血病病毒gp30、Epstein-Barr病毒(EBV)LMP2A、猿免疫缺陷病毒PBj14Nef、卡波西肉瘤疱疹病毒(HSKV)、DAP10和DAP-12。
在某些实施方式中，所述嵌合抗原受体中所述胞内信号传导结构域包括源自CD3zeta的胞内信号传导结构域。
在某些实施方式中，所述胞内信号传导结构域包含如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述胞内信号传导结构域的N端与所述共刺激信号传导结构域的C端连接。
在某些实施方式中，所述嵌合抗原受体包含SEQ ID NO:38至SEQ ID NO:44中任一项所示的氨基酸序列。
另一方面，本申请提供了一种分离的抗原结合蛋白，其以约2E-08M或以下的K
D值与CD22蛋白特异性结合。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述HCDR3包含SEQ ID NO:19至SEQ ID NO:21中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述HCDR2包含SEQ ID NO:11至SEQ ID NO:12中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含HCDR1，所述HCDR1包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述HCDR1包含SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:6中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含SEQ ID NO:55所示的重链可变区中的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含SEQ ID NO:24至SEQ ID NO:30中任一项所示的重链可变区中的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述HCDR3包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列；所述HCDR2包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列；以及所述HCDR1包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述HCDR3包含SEQ ID NO:19至SEQ ID NO:21中任一项所示的氨基酸序列；所述HCDR2包含SEQ ID NO:11至SEQ ID NO:12中任一项所示的氨基酸序列；以及所述HCDR1包含SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:6中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述HCDR1、HCDR2和HCDR3包含选自下述的任意一组的氨基酸序列：
a)HCDR1：SEQ ID NO:4，HCDR2：SEQ ID NO:11，和HCDR3：SEQ ID NO:19；
b)HCDR1：SEQ ID NO:5，HCDR2：SEQ ID NO:12，和HCDR3：SEQ ID NO:20；和c)HCDR1：SEQ ID NO:6，HCDR2：SEQ ID NO:12，和HCDR3：SEQ ID NO:21。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含H-FR1，所述H-FR1的C末端与所述HCDR1的N末端直接或间接地相连，且所述H-FR1包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述H-FR1包含SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:3中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含H-FR2，所述H-FR2位于所述HCDR1与所述HCDR2之间，且所述H-FR2包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述H-FR2包含SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:10中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含H-FR3，所述H-FR3位于所述HCDR2与所述HCDR3之间，且所述H-FR3包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述H-FR3包含SEQ ID NO:13至SEQ ID NO:18中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含H-FR4，所述H-FR4的N末端与所述HCDR3的C末端直接或间接地相连，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述H-FR4包含SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:23中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4，所述H-FR1包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列；所述H-FR2包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列；所述H-FR3包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列；以及所述H-FR4包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述H-FR1包含SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:3中任一项所示的氨基酸序列；所述H-FR2包含SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:10中任一项所示的氨基酸序列；所述H-FR3包含SEQ ID NO:13至SEQ ID NO:18中任一项所示的氨基酸序列；以及所述H-FR4包含SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:23中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述H-FR1、H-FR2、H-FR3和H-FR4包含选自下述的任意一组氨基酸序列：
a)H-FR1：SEQ ID NO:1，H-FR2：SEQ ID NO:7，H-FR3：SEQ ID NO:13和H-FR4：SEQ ID NO:22；
b)H-FR1：SEQ ID NO:2，H-FR2：SEQ ID NO:8，H-FR3：SEQ ID NO:14和H-FR4：SEQ ID NO:22；
c)H-FR1：SEQ ID NO:2，H-FR2：SEQ ID NO:9，H-FR3：SEQ ID NO:15和H-FR4：SEQ ID NO:22；
d)H-FR1：SEQ ID NO:1，H-FR2：SEQ ID NO:7，H-FR3：SEQ ID NO:16和H-FR4：SEQ ID NO:22；
e)H-FR1：SEQ ID NO:3，H-FR2：SEQ ID NO:10，H-FR3：SEQ ID NO:17和H-FR4：SEQ ID NO:23；
f)H-FR1：SEQ ID NO:3，H-FR2：SEQ ID NO:7，H-FR3：SEQ ID NO:17和H-FR4：SEQ ID NO:23；
g)H-FR1：SEQ ID NO:3，H-FR2：SEQ ID NO:7，H-FR3：SEQ ID NO:18和H-FR4：SEQ ID NO:23。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含重链可变区VH，所述VH包含SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述VH包含SEQ ID NO:24至SEQ ID NO:30中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包括抗体或其抗原结合片段。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述抗原结合片段选自下组：Fab，Fab’，F(ab)2，Fv片段，F(ab’)2，scFv，di-scFv，VHH和dAb。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包括VHH或其抗原结合片段。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述抗体选自下组：单克隆抗体、人源化抗体、嵌合抗体和全人源抗体。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含SEQ ID NO:24至SEQ ID NO:30中任一项所示的氨基酸序列。
另一方面，本申请提供了一种多肽，其包含所述的嵌合抗原受体和/或所述分离的抗原结合蛋白。
另一方面，本申请提供了一种免疫缀合物，其包含所述分离的抗原结合蛋白。
另一方面，本申请提供了分离的核酸分子，其编码所述的嵌合抗原受体，所述的分离的抗原结合蛋白，或者所述的多肽。
另一方面，本申请提供了一种载体，其包含所述分离的核酸分子。
另一方面，本申请提供了一种细胞，其包含所述的嵌合抗原受体，所述分离的抗原结合蛋白，所述的多肽，所述的免疫缀合物，所述分离的核酸分子和/或所述的载体。
在某些实施方式中，所述的细胞包括免疫细胞。
在某些实施方式中，所述免疫细胞选自下组：T细胞、B细胞、天然杀伤细胞(NK细胞)、巨噬细胞、NKT细胞、单核细胞、树突状细胞、粒细胞、淋巴细胞、白细胞和/或外周血单个核细胞。
在某些实施方式中，所述细胞包括T细胞。
另一方面，本申请提供了一种制备所述的嵌合抗原受体，所述分离的抗原结合蛋白和/或所述的多肽的方法，所述方法包括在使得所述的分离的抗原结合蛋白和/或所述的多肽表达的条件下，培养所述的细胞。
另一方面，本申请提供了一种药物组合物，其包含所述的嵌合抗原受体，所述分离的抗原结合蛋白，所述的多肽，所述的免疫缀合物，所述分离的核酸分子，所述的载体，所述的细胞，和/或药学上可接受的佐剂和/或赋形剂。
另一方面，本申请提供了一种用于检测CD22蛋白的方法，其包括：
施用所述分离的抗原结合蛋白，所述的多肽或所述的免疫缀合物。
另一方面，本申请提供了一种CD22蛋白的检测试剂盒，其包含所述分离的抗原结合蛋白，所述的多肽或所述的免疫缀合物。
另一方面，本申请提供了所述分离的抗原结合蛋白，所述的多肽或所述的免疫缀合物在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测CD22蛋白的存在和/或含量。
另一方面，本申请提供了所述的嵌合抗原受体，所述分离的抗原结合蛋白，所述的多肽和/或所述的免疫缀合物在制备预防和/或治疗肿瘤的药物中的用途。
在某些实施方式中，所述肿瘤包括血液瘤。
在某些实施方式中，所述肿瘤包括与CD22的表达相关的肿瘤。
在某些实施方式中，所述肿瘤选自下组：白血病和淋巴瘤。
另一方面，本申请提供了所述的嵌合抗原受体，所述分离的抗原结合蛋白，所述的多肽，所述的免疫缀合物，所述分离的核酸分子，所述的载体，和/或所述的细胞，其用于预防和/或治疗肿瘤。
在某些实施方式中，所述肿瘤包括血液瘤。
在某些实施方式中，所述肿瘤包括与CD22的表达相关的肿瘤。
在某些实施方式中，所述肿瘤选自下组：白血病和淋巴瘤。
另一方面，本申请提供了一种预防和/或治疗疾病或病症的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的所述的嵌合抗原受体，所述分离的抗原结合蛋白，所述的多肽，所述的免疫缀合物，所述分离的核酸分子，所述的载体，和/或所述的细胞。
在某些实施方式中，所述肿瘤包括血液瘤。
在某些实施方式中，所述肿瘤包括与CD22的表达相关的肿瘤。
在某些实施方式中，所述肿瘤选自下组：白血病和血液瘤。
本领域技术人员能够从下文的详细描述中容易地洞察到本申请的其它方面和优势。下文的详细描述中仅显示和描述了本申请的示例性实施方式。如本领域技术人员将认识到的，本申请的内容使得本领域技术人员能够对所公开的具体实施方式进行改动而不脱离本申请所涉及发明的精神和范围。相应地，本申请的附图和说明书中的描述仅仅是示例性的，而非为限制性的。
本申请所涉及的发明的具体特征如所附权利要求书所显示。通过参考下文中详细描述的 示例性实施方式和附图能够更好地理解本申请所涉及发明的特点和优势。对附图简要说明如下：
图1显示的是本申请所述示例性的抗原结合蛋白与表达于K562细胞表面的人CD22的结合曲线。
图2显示的是本申请所述示例性的瞬转CD22-CAR质粒的Jurkat-NFAT与Raji作用后RLU检测结果。
图3显示的是本申请所述流式检测人源化CD22-CAR-04 CART细胞与CD22蛋白的结合结果。
图4显示的是本申请所述示例性的人源化CD22-CAR-04 CART细胞对Raji-LUC细胞的杀伤作用。
图5显示的是本申请所述示例性的人源化CD22-CAR-04 CART细胞对Nalm6-LUC细胞的杀伤作用。
图6显示的是Raji-LUC小鼠活体成像荧光强度检测结果。
图7显示的是Raji-LUC小鼠活体成像荧光图。
图8显示的是Raji-LUC小鼠体重变化结果。
图9显示的是Naml6-LUC小鼠活体成像荧光强度检测结果。
图10显示的是Naml6-LUC小鼠活体成像荧光图。
图11显示的是Nalm6-LUC小鼠体重变化结果。
以下由特定的具体实施例说明本申请发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所公开的内容容易地了解本申请发明的其他优点及效果。
术语定义
在本申请中，术语“分离的抗原结合蛋白”通常是指能够特异性识别和/或中和特定抗原的多肽聚合体。例如，分离的抗原结合蛋白可以包括重链的一部分。例如，分离的抗原结合蛋白可以包括重链可变区。术语“分离的抗原结合蛋白”可以包括单域抗体。例如，分离的抗原结合蛋白可以包括但不限于人单域抗体。
在本申请中，术语“单域抗体”或“sdAb”或“VHH”通常是指缺失抗体轻链而只有重链可变区的一类抗体。在某些情形中，单域抗体可以来自双峰驼、单峰驼、羊驼、美洲驼、护士鲨、大星鲨或鳐鱼(例如，可参见康晓圳等，生物工程学报,2018,34(12):1974-1984)。 例如，单域抗体可以来自羊驼。单域抗体可由重链可变区(VH)构成。术语“重链可变区”通常是指抗原结合片段的重链的氨基末端结构域。重链可变区可进一步被区分为称为互补决定区(CDR)的高变区，它们散布在成为框架区(FR)的更保守的区域中。每个重链可变区可由三个CDR和四个FR区构成，它们从氨基端至羧基端可按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。重链可变区含有与抗原(例如，CD22)相互作用的结合结构域。
在本申请中，术语“跨膜结构域”通常是指细胞表面蛋白中一段跨越细胞膜的序列，其可以包含疏水性alpha螺旋。跨膜结构域可以与细胞内信号传导结构域相连接，起着传递信号的作用。在本申请中，跨膜结构域可以源自任意的I型、II型或III型跨膜蛋白。在本申请中，跨膜结构域可以包含源自选自下组蛋白的跨膜结构域或其组合：CD8、CD28、4-1BB、CD4、CD27、CD7、PD-1、T细胞受体的亚基、构成CD3复合体的多肽、IL2受体、CD5、ICOS、OX40、NKG2D、2B4、CD244、FcεR、FcεRIγ、BTLA、CD30、GITR、HVEM、DAP10、CD2、NKG2C、LIGHT、DAP12，CD40L、TIM1、CD226、DR3、CD45、CD80、CD86、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD134、CD137、CD154和SLAM。例如，T细胞受体的亚基可以包括TCRα、TCRβ、TCRγ或TCRδ。例如，构成CD3复合体的多肽可以包括CD3ε、CD3δ、CD3γ或CD3ζ。例如，跨膜结构域可以包括源自所述CD8的跨膜结构域。
在本申请中，术语“嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor，CAR)”通常是指包含能够结合抗原的靶向部分和至少一个胞内结构域的融合蛋白。CAR是嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)的核心部件，其可包括靶向部分(例如，靶向肿瘤特异性抗原和/或肿瘤相关抗原)、信号肽、跨膜结构域、共刺激信号传导结构域和胞内信号传导结构域。在本申请中，所述CAR可以基于抗体的抗原(例如CD22)特异性与T细胞受体活化胞内结构域组合在一起。经遗传修饰表达CAR的T细胞可以特异地识别和消除表达靶抗原的恶性细胞。关于CAR和CAR-T细胞的描述，可参见例如Sadelain M,Brentjens R,Rivi`ere I.The basicprinciples of chimeric antigen receptor design.Cancer Discov.2013；3(4):388-398；Turtle CJ,Hudecek M,Jensen MC,Riddell SR.Engineered T cells for anti-cancer therapy.Curr Opin Immunol.2012；24(5):633-639；Dotti G,Gottschalk S,Savoldo B,Brenner MK.Design and development of therapies using chimeric antigen receptor-expressing T cells.Immunol Rev.2014；257(1):107-126；以及WO2013154760、WO2016014789。
在本申请中，术语“共刺激信号传导结构域”通常是指可以提供免疫共刺激分子的胞内 结构域，所述共刺激分子为淋巴细胞对抗原的有效应答所需要的细胞表面分子。在某些情形中，共刺激信号传导结构域可以包含源自选自下组蛋白的共刺激信号传导结构域或其组合：CD28、CD137、CD27、CD2、CD7、CD8、CD80、CD86、OX40、CD226、DR3、SLAM、CDS、ICAM、NKG2D、NKG2C、B7-H3、2B4、FcεRIγ、BTLA、GITR、HVEM、DAP10、DAP12、CD30、CD40、CD40L、TIM1、PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BBL、OX40L、ICOS-L、CD30L、CD70、CD83、HLA-G、MICA、MICB、淋巴毒素β受体、LFA-1、LIGHT、JAML、CD244、CD100、ICOS、CD83的配体、CD40和MyD88。例如，共刺激信号传导结构域可以包括源自CD137的共刺激信号传导结构域。
在本申请中，术语“胞内信号传导结构域”通常是指位于细胞内部能够转导信号的结构域。在本申请中，所述胞内信号传导结构域可以将信号传导至细胞内。通常，胞内信号传导结构域为用于指导蛋白质寻靶的任何一段连续的氨基酸序列。在某些情形中，胞内信号传导结构域可以包含源自选自下组的蛋白的胞内信号传导结构域或其组合：CD3zeta、CD3delta、CD3gamma、CD3ε、CD79a、CD79b、CD66d、CD5、CD22、FcRγ、FcRβ、FcRε、FceRIγ、FceRIβ、FcγRIIa、牛白血病病毒gp30、Epstein-Barr病毒(EBV)LMP2A、猿免疫缺陷病毒PBj14Nef、卡波西肉瘤疱疹病毒(HSKV)、DAP10、DAP12，和至少包含一个ITAM的结构域。例如，胞内信号传导结构域可以包括源自CD3zeta的胞内信号传导结构域。
在本申请中，术语“抗体”通常是指一种能够特异性识别和/或中和特定抗原的多肽分子。例如，抗体可包含通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链组成的免疫球蛋白，并且包括任何包含其抗原结合部分的分子。术语“抗体”包括单克隆抗体、抗体片段或抗体衍生物，包括但不限于人抗体(全人源抗体)、人源化抗体、嵌合抗体、单链抗体(例如，scFv)，以及与抗原结合的抗体片段(例如，Fab、Fab’和(Fab)2片段)。术语“抗体”还包括抗体的所有重组体形式，例如在原核细胞中表达的抗体、未糖基化的抗体以及本文所述的任何与抗原结合的抗体片段及其衍生物。每条重链可由重链可变区(VH)和重链恒定区构成。每条轻链可由轻链可变区(VL)和轻链恒定区构成。VH和VL区可进一步被区分为称为互补决定区(CDR)的高变区，它们散布在称为构架区(FR)的更保守的区域中。每个VH和VL可由三个CDR和四个FR区构成，它们从氨基端至羧基端可按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导该免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括免疫系统的多种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一成分(Clq)。
在本申请中，术语“抗原结合片段”通常是指抗体中发挥特异性结合抗原功能的一个或 多个片段。抗体的抗原结合功能可通过抗体的全长片段来实现。抗体的抗原结合功能也可通过以下来实现：包括Fv、ScFv、dsFv、Fab、Fab’或F(ab’)2的片段的重链，或者，包括Fv、ScFv、dsFv、Fab、Fab’或F(ab’)2的片段的轻链。(1)Fab片段，通常由VL、VH、CL和CH结构域组成的一价片段；(2)F(ab’)2片段，可包含通过铰链区处的二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(3)由VH和CH结构域组成的Fd片段；(4)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；(5)由VH结构域组成的dAb片段(Ward等，(1989)Nature 341：544-546)；(6)分离的互补决定区(CDR)和(7)可任选地通过接头连接的两个或以上分离的CDR的组合。此外，还可包括由VL和VH配对形成的一价单链分子Fv(scFv)(参见Bird等(1988)Science 242：423-426；以及Huston等(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.85：5879-5883)。所述“抗原结合片段”还可包括免疫球蛋白融合蛋白，所述融合蛋白包含选自以下的结合结构域：(1)与免疫球蛋白铰链区多肽融合的结合结构域多肽；(2)与铰链区融合的免疫球蛋白重链CH2恒定区；和(3)与CH2恒定区融合的免疫球蛋白重链CH3恒定区。例如，所述的抗原结合片段还可以包括单域抗体。
在本申请中，术语“单克隆抗体”通常是指一群基本同源的抗体，即包含该群的各个抗体除了可能的以微量存在的天然发生的突变之外是相同的。单克隆抗体是高度特异性的，直接针对单个抗原性位点。例如，所述单克隆抗体可以通过杂交瘤技术制备或者通过使用重组DNA方法在细菌、真核动物或植物细胞中产生。单克隆抗体也可以得自噬菌体抗体文库，使用例如Clackson etal.,Nature,352:624-628(1991)和Marks et al.,Mol.Biol.，222:581-597(1991)所述的技术进行。
在本申请中，术语“嵌合抗体”通常是指这样的抗体，其中每个重链或轻链氨基酸序列的一部分与来自特定物种的抗体中相应氨基酸序列同源，或者属于特定的类别，而该链的其余区段则与另一物种中的相应序列同源。例如，轻链和重链的可变区均来自一个动物物种(如小鼠、大鼠等)的抗体的可变区，而恒定部分则与来自另一物种(如人)的抗体序列同源。例如，为获得嵌合抗体，可利用非人源的B细胞或杂交瘤细胞产生可变区，而与其组合的恒定区则来自人。所述可变区具有易于制备的优点，并且其特异性不受与其组合的恒定区的来源的影响。同时，由于嵌合抗体的恒定区可来源于人类，因此嵌合在注射时抗体引发免疫应答的可能性会低于使用恒定区为非人来源的抗体。
在本申请中，术语“人源化抗体”通常是指一种嵌合抗体，其含有较少的来自非人免疫球蛋白的序列，从而降低异种抗体引入到人类中时的免疫原性，同时保持抗体的完全抗原结合亲和力和特异性。例如，可以使用CDR移植(Jones et al.,Nature 321:522(1986))及其变 体；包括“重塑”(reshaping)，(Verhoeyen,et al.,1988 Science 239:1534-1536；Riechmann,et al.,1988 Nature 332:323-337；Tempest,et al.,Bio/Technol 1991 9:266-271)，“高度加成”(hyperchimerization)，(Queen,et al.,1989 Proc Natl Acad Sci USA 86:10029-10033；Co,et al.,1991 Proc Natl Acad Sci USA 88:2869-2873；Co,et al.,1992 J Immunol 148:1149-1154)和“贴面”(veneering)，(Mark,et al.,“Derivation of therapeutically active humanized and veneered anti-CD18 antibodies.”In:Metcalf B W,Dalton B J,eds.Cellular adhesion:molecular definition to therapeutic potential.New York:Plenum Press,1994:291-312)、表面重建(美国专利US5639641)等技术手段，对非人源的结合域进行人源化。如果其他区域，例如铰链区和恒定区结构域也源自非人来源，则这些区域也可以被人源化。
在本申请中，术语“肿瘤”通常是指局部组织细胞增生所形成的赘生物。例如，所述肿瘤可以包括血液瘤。例如，所述肿瘤可包括淋巴瘤。例如，所述肿瘤可包括白血病。例如，所述肿瘤可包括与CD22的表达相关的肿瘤。术语“与CD22的表达相关的肿瘤”通常是指与正常细胞相比，所述肿瘤微环境中或肿瘤细胞表面CD22的表达改变。例如，所述“与CD22的表达相关的肿瘤”可以是与正常细胞相比，肿瘤微环境中或肿瘤细胞表面CD22的表达量上调的肿瘤。所述与CD22的蛋白表达相关的肿瘤可以是CD22阳性的肿瘤。在CD22阳性的肿瘤中，与正常细胞相比，肿瘤细胞表面或肿瘤微环境中的CD22的蛋白表达量高约1％，5％，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，60％，70％，80％或更高。
在本申请中，术语“免疫缀合物”通常是指所述其他治疗剂与所述分离的抗原结合蛋白缀合(例如，通过连接分子共价相连)而形成的缀合物，该缀合物可以通过所述分离的抗原结合蛋白与靶细胞上的抗原的特异性结合，将所述其他治疗剂递送至靶细胞(例如，肿瘤细胞)。此外，所述抗原也可以由所述靶细胞分泌，并位于所述靶细胞外的间隙。
在本申请中，术语“K
D”(同样地，“K
D”或“K
D”)通常指“亲和常数”或“平衡解离常数”，并指在滴定测量中在平衡时、或者通过将解离速率常数(kd)除以结合速率常数(ka)所获得的值。使用结合速率常数(ka)、解离速率常数(kd)和平衡解离常数(K
D)表示结合蛋白(例如本申请所述的分离的抗原结合蛋白)对抗原(例如，CD22蛋白)的结合亲和力。确定结合和解离速率常数的方法为本领域熟知。使用基于荧光的技术提供了高灵敏度以及在生理缓冲液中在平衡时检查样品的能力。例如，可以通过Biacore(生物分子相互作用分析)测定(例如，可以从BIAcoreInternationalAB，aGEHealthcarecompany，Uppsala，瑞典获得的仪器)所述K
D值，也可以使用其他实验途径和仪器例如Octet检测。另外，也可以使用可以从SapidyneInstruments(Boise，Idaho)获得的KinExA(动态排阻测定(KineticExclusionAssay)) 测定所述K
D值，或者使用表面等离子共振仪(SPR)测定所述K
D值。
在本申请中，术语“K562细胞”通常是指人类永生化骨髓性白血病细胞系。K562属于红白血病细胞系，具有恶性程度高、增殖速度快的特点。最初分离自一名处于急性期的53岁女性慢性骨髓性白血病(CML)患者的胸水。
在本申请中，术语“核酸分子”通常是指从其天然环境中分离的或人工合成的任何长度的分离形式的核苷酸、脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其类似物。
在本申请中，术语“载体”通常是指能够在合适的宿主中自我复制的核酸分子。所述载体可将插入的核酸分子转移到细胞中和/或细胞之间。所述载体可包括主要用于将DNA或RNA插入细胞中的载体、主要用于复制DNA或RNA的载体，以及主要用于DNA或RNA的转录和/或翻译的表达的载体。所述载体可以是当引入合适的细胞时能够转录并翻译成多肽的多核苷酸。通常，通过培养包含所述载体的合适的细胞，所述载体可以产生期望的表达产物。在本申请中，所述载体可包含慢病毒载体。
在本申请中，术语“细胞”通常是指可以或已经含有包括本申请所述的核酸分子的质粒或载体，或者能够表达本申请所述的嵌合抗原受体或本申请所述的抗原结合蛋白的个体细胞，细胞系或细胞培养物。所述细胞可以包括单个细胞的子代。由于天然的，意外的或故意的突变，子代细胞与原始亲本细胞在形态上或在基因组上可能不一定完全相同，但能够表达本申请所述的嵌合抗原受体或抗原结合蛋白即可。所述细胞可以通过使用本申请所述的载体体外转染细胞而得到。所述细胞可以是原核细胞(例如大肠杆菌)，也可以是真核细胞(例如酵母细胞，例如COS细胞，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，HeLa细胞，HEK293细胞，COS-1细胞，NS0细胞或骨髓瘤细胞)。在一些实施方式中，所述细胞可以是免疫细胞。例如，所述免疫细胞可以选自下组：T细胞、B细胞、天然杀伤细胞(NK细胞)、巨噬细胞、NKT细胞、单核细胞、树突状细胞、粒细胞、淋巴细胞、白细胞和/或外周血单个核细胞。例如，所述免疫细胞可以是T细胞。
在本申请中，术语“治疗”通常是指：(i)预防可能易患疾病、病症和/或病状、但尚未诊断出患病的患者出现该疾病、病症或病状；(ii)抑制该疾病、病症或病状，亦即遏制其发展；以及(iii)缓解该疾病、病症或病状，亦即使得该疾病、病症和/或病状和/或与该疾病、病症和/或病状相关联的症状消退。
在本申请中，术语“多肽”、“肽”、“蛋白”和“蛋白质”可互换地使用，通常是指具有任何长度的氨基酸的聚合物。该聚合物可以是直链或支链的，它可以包含修饰的氨基酸，并且可以被非氨基酸中断。这些术语还涵盖已经被修饰的氨基酸聚合物。这些修饰可以包含：二 硫键形成、糖基化、脂化(lipidation)、乙酰化、磷酸化、或任何其他操纵(如与标记组分结合)。术语“氨基酸”包括天然的和/或非天然的或者合成的氨基酸，包括甘氨酸以及D和L旋光异构体、以及氨基酸类似物和肽模拟物。
在本申请中，术语“多核苷酸”、“核苷酸”、“核苷酸序列”、“核酸”和“寡核苷酸”可互换地使用，通常是指具有任何长度的核苷酸的聚合形式，如脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸、或其类似物。多核苷酸可具有任何三维结构，并且可以执行已知或未知的任何功能。以下是多核苷酸的非限制性实例：基因或基因片段的编码区或非编码区、根据连接分析定义的多个座位(一个座位)、外显子、内含子、信使RNA(mRNA)、转运RNA、核糖体RNA、短干扰RNA(siRNA)、短发夹RNA(shRNA)、micro-RNA(miRNA)、核酶、cDNA、重组多核苷酸、分支多核苷酸、质粒、载体、任何序列的分离的DNA、任何序列的分离的RNA、核酸探针、和引物。多核苷酸可以包含一个或多个经修饰的核苷酸，如甲基化的核苷酸和核苷酸类似物。如果存在，可以在聚合物组装之前或之后进行核苷酸结构的修饰。核苷酸的序列可以被非核苷酸组分中断。多核苷酸可以在聚合后，如通过与标记的组分缀合来进一步修饰。
除了本文提到的特定蛋白质和核苷酸之外，本申请还可包括其功能性变体、衍生物、类似物、同源物及其片段。
术语“功能性变体”指与天然存在序列具有基本上同一的氨基酸序列或由基本上同一的核苷酸序列编码并能够具有天然存在序列的一种或多种活性的多肽。在本申请的上下文中，任何给定序列的变体是指其中残基的特定序列(无论是氨基酸或核苷酸残基)已经经过修饰而使得所述多肽或多核苷酸基本上保留至少一种内源功能的序列。可以通过天然存在的蛋白质和/或多核苷酸中存在的至少一个氨基酸残基和/或核苷酸残基的添加、缺失、取代、修饰、替换和/或变异来获得变体序列，只要保持原来的功能活性即可。
在本申请中，术语“衍生物”通常是指本申请的多肽或多核苷酸而言包括自/对序列的一个(或多个)氨基酸残基的任何取代、变异、修饰、替换、缺失和/或添加，只要所得的多肽或多核苷酸基本上保留其至少一种内源功能。
在本申请中，术语“类似物”通常对多肽或多核苷酸而言，包括多肽或多核苷酸的任何模拟物，即拥有该模拟物模拟的多肽或多核苷酸的至少一种内源功能的化学化合物。
通常，可以进行氨基酸取代，例如至少1个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或20个以上)氨基酸取代，只要经修饰的序列基本上保持需要的活性或能力。氨基酸取代可包括使用非天然存在的类似物。
用于本申请的蛋白质或多肽也可以具有氨基酸残基的缺失、插入或取代，所述氨基酸残 基产生沉默的变化并导致功能上等同的蛋白质。可以根据残基的极性、电荷、溶解性、疏水性、亲水性和/或两性性质的相似性进行有意的氨基酸取代，只要保留内源性功能即可。例如，带负电荷的氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸；带正电荷的氨基酸包括赖氨酸和精氨酸；并且含具有相似亲水性值的不带电极性头基的氨基酸包括天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸。
在本申请中，术语“CD22抗原”通常是指人B淋巴细胞上与增殖和分化有关的重要膜抗原。人CD22的氨基酸序列可以见于UniProt/Swiss-Prot登录号P20273。本申请中，表达至少2种嵌合抗原受体(CAR)的核酸分子的抗原结合结构域靶向的抗原可以是CD22。
在本申请中，术语“和/或”应理解为意指可选项中的任一项或可选项的两项。
在本申请中，术语“包含”通常是指包括明确指定的特征，但不排除其他要素。
在本申请中，术语“约”通常是指在指定数值以上或以下0.5％-10％的范围内变动，例如在指定数值以上或以下0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％、9％、9.5％、或10％的范围内变动。
在本申请中，术语“包括”通常是指包含、总括、含有或包涵的含义。在某些情况下，也表示“为”、“由……组成”的含义。
发明详述
本申请所述分离的抗原结合蛋白
一方面，本申请提供一种分离的抗原结合蛋白，其在Biacore测定中，可以以2E-08M或以下的K
D值(例如，所述K
D不高于约2E-08M、不高于约1.5E-08M、不高于约1E-08M、不高于约9E-09M、不高于约8E-09M、不高于约7E-09M、不高于约6E-09M、不高于约5E-09M、不高于约4E-09M、不高于约3E-09M、不高于约2E-09M、不高于约1E-09M或不高于5E-10M或以下)与人CD22蛋白特异性结合。
一方面，本申请提供一种分离的抗原结合蛋白，其可以包含抗体重链可变区VH中的至少一个CDR，所述VH可以包含SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列。
例如，所述VH可以包含SEQ ID NO:24至SEQ ID NO:30中任一项所示的氨基酸序列。在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白的HCDR可以通过任何形式划分，只要VH与SEQ ID NO:24至SEQ ID NO:30中任一项所示的氨基酸序列相同，以任何形式划分得到的HCDR都可落入本申请的保护范围内。
抗体的CDR又称互补决定区，是可变区的一部分。该区域的氨基酸残基可以与抗原或抗原表位接触。抗体CDR可以通过多种编码系统来确定，如CCG、Kabat、Chothia、IMGT、 AbM、North’s、综合考虑Kabat/Chothia等。这些编码系统为本领域内已知，具体可参见，例如，http://www.bioinf.org.uk/abs/index.html#kabatnum。本领域技术人员可以根据抗体的序列和结构，用不同的编码系统确定出CDR区。使用不同的编码系统，CDR区可能存在差别。在本申请中，所述CDR涵盖根据任何CDR划分方式划分得到的CDR序列；也涵盖其变体，所述变体包括所述CDR的氨基酸序列经过取代、缺失和/或添加一个或多个氨基酸。例如1-30个、1-20个或1-10个，又例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个或9个氨基酸取代、缺失和/或插入；也涵盖其同源物，所述同源物可以为与所述CDR的氨基酸序列具有至少约85％(例如，具有至少约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更高的)序列同源性的氨基酸序列。在某些实施方式中，本申请所述分离的抗原结合蛋白通过IMGT编码系统定义。
在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含重链可变区VH，所述VH可包含HCDR1、HCDR2和HCDR3中的至少一个、两个或三个。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的HCDR3可包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的HCDR3序列可根据IMGT编码系统定义。例如，所述抗原结合蛋白包含HCDR3，所述HCDR3与SEQ ID NO:48所示的序列相比，在选自下述位置的氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等):X
15和X
17。
ATDPWTDCSLDGRYX
15YX
17Y(SEQ ID NO:48)，其中，X
15可以是E或R，X
17可以是D，G或N。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的HCDR3可包含SEQ ID NO:19至SEQ ID NO:21中任一项所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的HCDR3序列可根据IMGT编码系统定义。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的HCDR2可包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的HCDR2序列可根据IMGT编码系统定义。例如，所述抗原结合蛋白包含HCDR2，所述HCDR2与SEQ ID NO:49所示的序列相比，在选自下述位置的氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等):X
3。
ISX
3RDGNT(SEQ ID NO:49)，其中，X
3可以是G或S。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的HCDR2可包含SEQ ID NO:11至SEQ ID NO:12中任一项所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的HCDR2序列可根据IMGT编码系统定义。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的HCDR1可包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列。 例如，所述抗原结合蛋白的HCDR1序列可根据IMGT编码系统定义。例如，所述抗原结合蛋白包含HCDR1，所述HCDR1与SEQ ID NO:50所示的序列相比，在选自下述位置的氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等):X
3，X
5和X
6。
GFX
3VX
5X
6YA(SEQ ID NO:50)，其中，X
3可以是P或S，X
5可以是A或D，X
6可以是D或G。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的HCDR1可包含SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:6中任一项所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的HCDR1序列可根据IMGT编码系统定义。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的HCDR3可包含SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的HCDR3序列可根据IMGT编码系统定义。例如，所述抗原结合蛋白包含HCDR3，所述HCDR3与SEQ ID NO:56所示的序列相比，在选自下述位置的氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等):X
17。
ATDPWTDCSLDGRYEYX
17Y(SEQ ID NO:56)，其中，X
17可以是G或N。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的HCDR3可包含SEQ ID NO:19至SEQ ID NO:20中任一项所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的HCDR3序列可根据IMGT编码系统定义。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的HCDR2可包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的HCDR2序列可根据IMGT编码系统定义。例如，所述抗原结合蛋白包含HCDR2，所述HCDR2与SEQ ID NO:49所示的序列相比，在选自下述位置的氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等):X
3。
ISX
3RDGNT(SEQ ID NO:49)，其中，X
3可以是G或S。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的HCDR2可包含SEQ ID NO:11至SEQ ID NO:12中任一项所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的HCDR2序列可根据IMGT编码系统定义。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的HCDR1可包含SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的HCDR1序列可根据IMGT编码系统定义。例如，所述抗原结合蛋白包含HCDR1，所述HCDR1与SEQ ID NO:57所示的序列相比，在选自下述位置的氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等):X
5和X
6。
GFPVX
5X
6YA(SEQ ID NO:57)，其中，X
5可以是A或D，X
6可以是D或G。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的HCDR1可包含SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:5所示 的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的HCDR1序列可根据IMGT编码系统定义。
例如，所述抗原结合蛋白的HCDR1可包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；且所述HCDR3可包含SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体B010-B-22Nb-01或与其具有相同HCDR3(例如，与其具有相同的HCDR1-3)的抗原结合片段。
例如，所述抗原结合蛋白的HCDR1可包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；且所述HCDR3可包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体B010-B-22Nb-02或与其具有相同HCDR3(例如，与其具有相同的HCDR1-3)的抗原结合片段。
例如，所述抗原结合蛋白的HCDR1可包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；且所述HCDR3可包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体B010-B-22Nb-03或与其具有相同HCDR3(例如，与其具有相同的HCDR1-3)的抗原结合片段。
例如，所述抗原结合蛋白的HCDR1可包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；且所述HCDR3可包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体B010-B-22Nb-04、B010-B-22Nb-04-H4、B010-B-22Nb-04-H5、B010-B-22Nb-04-H6或与其具有相同HCDR3(例如，与其具有相同的HCDR1-3)的抗原结合片段。
例如，所述抗原结合蛋白的VH可包含框架区H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的H-FR1与SEQ ID NO:51所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
1和X
16。
X
1VQLVESGGGLVQPGX
16SLRLSCAAS(SEQ ID NO:51)，其中，X
1可以是A或E，X
16可以是G或R。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:3中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR2可包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的H-FR2与SEQ ID NO:52所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
1，X
4，X
11，X
12，X
14，X
15和X
17。
X
1AWX
4RQAPGKX
11X
12EX
14X
15SX
17(SEQ ID NO:52)，其中，X
1可以是I或M，X
4可 以是F或V，X
11可以是E或G，X
12可以是L或R，X
14可以是G或W，X
15可以是I或V，X
17可以是C或Y。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR2可包含SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:10中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR3可包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的H-FR3与SEQ ID NO:53所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
2，X
3，X
7，X
12，X
20，X
21，X
27，X
29和X
30。
YX
2X
3DSVX
7GRFTX
12SRDNAKNX
20X
21YLQMNX
27LX
29X
30EDTAVYYC(SEQ ID NO:53)，其中，X
2可以是D或Y，X
3可以是A，Q或V，X
7可以是E或K，X
12可以是I或V，X
20可以是S或T，X
21可以是L或V，X
27可以是D或S，X
29可以是E，K或R，X
30可以是D或P。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR3可包含SEQ ID NO:13至SEQ ID NO:18中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR4可包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的H-FR4与SEQ ID NO:54所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
3和X
6。
WGX
3GTX
6VTVSS(SEQ ID NO:54)，其中，X
3可以是L或Q，X
6可以是L或Q。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR4可包含SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:23中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的H-FR1与SEQ ID NO:58所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
16。
AVQLVESGGGLVQPGX
16SLRLSCAAS(SEQ ID NO:58)，其中，X
16可以是G或R。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:2中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR2可包含SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的H-FR2与SEQ ID NO:59所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
1和X
15。
X
1AWFRQAPGKEREGX
15SC(SEQ ID NO:59)，其中，X
1可以是I或M，X
15可以是I 或V。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR2可包含SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:9中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR3可包含SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的H-FR3与SEQ ID NO:60所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
2，X
3，X
7，X
12和X
27。
YX
2X
3DSVX
7GRFTX
12SRDNAKNTVYLQMNX
27LKPEDTAVYYC(SEQ ID NO:60)，其中，X
2可以是D或Y，X
3可以是A或V，X
7可以是E或K，X
12可以是I或V，X
27可以是D或S。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR3可包含SEQ ID NO:13至SEQ ID NO:15中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR4可包含SEQ ID NO:22中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的H-FR1与SEQ ID NO:61所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
1。
X
1VQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(SEQ ID NO:61)，其中，X
1可以是A或E。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:3中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR2可包含SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的H-FR2与SEQ ID NO:62所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
4，X
11，X
12，X
14和X
17。
IAWX
4RQAPGKX
11X
12EX
14VSX
17(SEQ ID NO:62)，其中，X
4可以是F或V，X
11可以是E或G，X
12可以是L或R，X
14可以是G或W，X
17可以是C或Y。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR2可包含SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:10中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR3可包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的H-FR3与SEQ ID NO:63所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
3，X
20，X
21，X
29和X
30。
YYX
3DSVKGRFTISRDNAKNX
20X
21YLQMNSLX
29X
30EDTAVYYC(SEQ ID NO:63)，其 中，X
3可以是A或Q，X
20可以是S或T，X
21可以是L或V，X
29可以是E或R，X
30可以是D或P。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR3可包含SEQ ID NO:16至SEQ ID NO:18中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR4可包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的H-FR4与SEQ ID NO:54所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
3和X
6。
WGX
3GTX
6VTVSS(SEQ ID NO:54)，其中，X
3可以是L或Q，X
6可以是L或Q。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR4可包含SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:23中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列；且所述H-FR4可包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列；且所述H-FR4可包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列；且所述H-FR4可包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:3中任一项所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:10中任一项所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:13至SEQ ID NO:18中任一项所示的氨基酸序列；且所述H-FR4可包含SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:23中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列；且所述H-FR4可包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体B010-B-22Nb-01或与其具有相同H-FR1-4的抗原结合片段。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列；且所述H-FR4可包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结 合蛋白可包括抗体B010-B-22Nb-02或与其具有相同H-FR1-4的抗原结合片段。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列；且所述H-FR4可包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体B010-B-22Nb-03或与其具有相同H-FR1-4的抗原结合片段。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列；且所述H-FR4可包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体B010-B-22Nb-04或与其具有相同H-FR1-4的抗原结合片段。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列；且所述H-FR4可包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体B010-B-22Nb-04-H4或与其具有相同H-FR1-4的抗原结合片段。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列；且所述H-FR4可包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体B010-B-22Nb-04-H5或与其具有相同H-FR1-4的抗原结合片段。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列；且所述H-FR4可包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体B010-B-22Nb-04-H6或与其具有相同H-FR1-4的抗原结合片段。
在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含重链可变区，所述重链可变区可包含SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白包含VH，所述VH与SEQ ID NO:55所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
1，X
16，X
28，X
30，X
31，X
34，X
37，X
44，X
45，X
47，X
48，X
50，X
53，X
60，X
61，X
65，X
70，X
78，X
79，X
85，X
87，X
88，X
111，X
113，X
117，X
120。
X
1VQLVESGGGLVQPGX
16SLRLSCAASGFX
28VX
30X
31YAX
34AWX
37RQAPGKX
44X
45EX
47X
48SX
50ISX
53RDGNTYX
60X
61DSVX
65GRFTX
70SRDNAKNX
78X
79YLQMNX
85LX
87X
88EDTAVYYCATDPWTDCSLDGRYX
111YX
113YWGX
117GTX
120VTVSS(SEQ ID NO：55)，其中，X
1可以是A或E，X
16可以是G或R，X
28可以是P或S，X
30可以是A或D，X
31可以是D或G， X
34可以是I或M，X
37可以是F或V，X
44可以是E或G，X
45可以是L或R，X
47可以是G或W，X
48可以是I或V，X
50可以是C或Y，X
53可以是G或S，X
60可以是D或Y，X
61可以是A，Q或V，X
65可以是E或K，X
70可以是I或V，X
78可以是S或T，X
79可以是L或V，X
85可以是D或S，X
87可以是E，K或R，X
88可以是D或P，X
111可以是E或R，X
113可以是D，G或N，X
117可以是L或Q，X
120可以是L或Q。
在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含重链可变区，所述重链可变区可包含SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白包含VH，所述VH与SEQ ID NO:64所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
16，X
30，X
31，X
34，X
48，X
53，X
60，X
61，X
65，X
70，X
85，X
113。
AVQLVESGGGLVQPGX
16SLRLSCAASGFPVX
30X
31YAX
34AWFRQAPGKEREGX
48SCISX
53RDGNTYX
60X
61DSVX
65GRFTX
70SRDNAKNTVYLQMNX
85LKPEDTAVYYCATDPWTDCSLDGRYEY X
113YWGLGTQVTVSS(SEQ ID NO:64)，其中，X
16可以是G或R，X
30可以是A或D，X
31可以是D或G，X
34可以是I或M，X
48可以是I或V，X
53可以是G或S，X
60可以是D或Y，X
61可以是A或V，X
65可以是E或K，X
70可以是I或V，X
85可以是D或S，X
113可以是G或N。
在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含重链可变区，所述重链可变区可包含SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白包含VH，所述VH与SEQ ID NO:65所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
1，X
37，X
44，X
45，X
47，X
50，X
61，X
78，X
79，X
87，X
88，X
117和X
120。
X
1VQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSVDDYAIAWX
37RQAPGKX
44X
45EX
47VSX
50ISSRDGNTYYX
61DSVKGRFTISRDNAKNX
78X
79YLQMNSLX
87X
88EDTAVYYCATDPWTDCSLDGRYRYDYWGX
117GTX
120VTVSS(SEQ ID NO:65)，其中，X
1可以是A或E，X
37可以是F或V，X
44可以是E或G，X
45可以是L或R，X
47可以是G或W，X
50可以是C或Y，X
61可以是A或Q，X
78可以是S或T，X
79可以是L或V，X
87可以是E或R，X
88可以是D或P，X
117可以是L或Q，X
120可以是L或Q。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的重链可变区可包含SEQ ID NO:24至SEQ ID NO:30中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含重链可变区，所述重链可变区可包含HCDR1-3以及H-FR1-4。例如，所述HCDR1可包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；所述HCDR3可包含SEQ ID NO:19所示的氨基酸 序列。例如，所述H-FR1可包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列；所述H-FR4可包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的重链可变区可包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体B010-B-22Nb-01或与其具有相同重链可变区的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含重链可变区，所述重链可变区可包含HCDR1-3以及H-FR1-4。例如，所述HCDR1可包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；所述HCDR3可包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。例如，所述H-FR1可包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列；所述H-FR4可包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的重链可变区可包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体B010-B-22Nb-02或与其具有相同重链可变区的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含重链可变区，所述重链可变区可包含HCDR1-3以及H-FR1-4。例如，所述HCDR1可包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；所述HCDR3可包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。例如，所述H-FR1可包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列；所述H-FR4可包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的重链可变区可包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体B010-B-22Nb-03或与其具有相同重链可变区的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含重链可变区，所述重链可变区可包含HCDR1-3以及H-FR1-4。例如，所述HCDR1可包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；所述HCDR3可包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列。例如，所述H-FR1可包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列；所述H-FR4可包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的重链可变区可包含SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体B010-B-22Nb-04或与其具有相同重链可变区的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含重链可变区，所述重链可变区可包含HCDR1-3以 及H-FR1-4。例如，所述HCDR1可包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；所述HCDR3可包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列。例如，所述H-FR1可包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列；所述H-FR4可包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的重链可变区可包含SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体B010-B-22Nb-04-H4或与其具有相同重链可变区的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含重链可变区，所述重链可变区可包含HCDR1-3以及H-FR1-4。例如，所述HCDR1可包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；所述HCDR3可包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列。例如，所述H-FR1可包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列；所述H-FR4可包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的重链可变区可包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体B010-B-22Nb-04-H5或与其具有相同重链可变区的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含重链可变区，所述重链可变区可包含HCDR1-3以及H-FR1-4。例如，所述HCDR1可包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；所述HCDR3可包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列。例如，所述H-FR1可包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列；所述H-FR4可包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的重链可变区可包含SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体B010-B-22Nb-04-H6或与其具有相同重链可变区的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白可以与参比抗体竞争结合人CD22。
在本申请中，所述参比抗体可包含重链可变区VH，所述VH可包含HCDR1、HCDR2和HCDR3中的至少一个、两个或三个。
在本申请中，所述参比抗体的HCDR3可包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体的HCDR3序列可根据IMGT编码系统定义。例如，所述参比抗体包含HCDR3，所述HCDR3与SEQ ID NO:48所示的序列相比，在选自下述位置的氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等):X
15和X
17。
ATDPWTDCSLDGRYX
15YX
17Y(SEQ ID NO:48)，其中，X
15可以是E或R，X
17可以是D，G或N。
在本申请中，所述参比抗体的HCDR3可包含SEQ ID NO:19至SEQ ID NO:21中任一项所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体的HCDR3序列可根据IMGT编码系统定义。
在本申请中，所述参比抗体的HCDR2可包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体的HCDR2序列可根据IMGT编码系统定义。例如，所述参比抗体包含HCDR2，所述HCDR2与SEQ ID NO:49所示的序列相比，在选自下述位置的氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等):X
3。
ISX
3RDGNT(SEQ ID NO:49)，其中，X
3可以是G或S。
在本申请中，所述参比抗体的HCDR2可包含SEQ ID NO:11至SEQ ID NO:12中任一项所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体的HCDR2序列可根据IMGT编码系统定义。
在本申请中，所述参比抗体的HCDR1可包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体的HCDR1序列可根据IMGT编码系统定义。例如，所述参比抗体包含HCDR1，所述HCDR1与SEQ ID NO:50所示的序列相比，在选自下述位置的氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等):X
3，X
5和X
6。
GFX
3VX
5X
6YA(SEQ ID NO:50)，其中，X
3可以是P或S，X
5可以是A或D，X
6可以是D或G。
在本申请中，所述参比抗体的HCDR1可包含SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:6中任一项所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体的HCDR1序列可根据IMGT编码系统定义。
在本申请中，所述参比抗体的HCDR3可包含SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体的HCDR3序列可根据IMGT编码系统定义。例如，所述参比抗体包含HCDR3，所述HCDR3与SEQ ID NO:56所示的序列相比，在选自下述位置的氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等):X
17。
ATDPWTDCSLDGRYEYX
17Y(SEQ ID NO:56)，其中，X
17可以是G或N。
在本申请中，所述参比抗体的HCDR3可包含SEQ ID NO:19至SEQ ID NO:20中任一项所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体的HCDR3序列可根据IMGT编码系统定义。
在本申请中，所述参比抗体的HCDR2可包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体的HCDR2序列可根据IMGT编码系统定义。例如，所述参比抗体包含HCDR2，所述HCDR2与SEQ ID NO:49所示的序列相比，在选自下述位置的氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等):X
3。
ISX
3RDGNT(SEQ ID NO:49)，其中，X
3可以是G或S。
在本申请中，所述参比抗体的HCDR2可包含SEQ ID NO:11至SEQ ID NO:12中任一项所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体的HCDR2序列可根据IMGT编码系统定义。
在本申请中，所述参比抗体的HCDR1可包含SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体的HCDR1序列可根据IMGT编码系统定义。例如，所述参比抗体包含HCDR1，所述HCDR1与SEQ ID NO:57所示的序列相比，在选自下述位置的氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等):X
5和X
6。
GFPVX
5X
6YA(SEQ ID NO:57)，其中，X
5可以是A或D，X
6可以是D或G。
在本申请中，所述参比抗体的HCDR1可包含SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体的HCDR1序列可根据IMGT编码系统定义。
例如，所述参比抗体的HCDR1可包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；且所述HCDR3可包含SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体可包括抗体B010-B-22Nb-01或与其具有相同HCDR3(例如，与其具有相同的HCDR1-3)的抗原结合片段。
例如，所述参比抗体的HCDR1可包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；且所述HCDR3可包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体可包括抗体B010-B-22Nb-02或与其具有相同HCDR3(例如，与其具有相同的HCDR1-3)的抗原结合片段。
例如，所述参比抗体的HCDR1可包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；且所述HCDR3可包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体可包括抗体B010-B-22Nb-03或与其具有相同HCDR3(例如，与其具有相同的HCDR1-3)的抗原结合片段。
例如，所述参比抗体的HCDR1可包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；且所述HCDR3可包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体可包括抗体B010-B-22Nb-04、B010-B-22Nb-04-H4、B010-B-22Nb-04-H5、B010-B-22Nb-04-H6或与其具有相同HCDR3(例如，与其具有相同的HCDR1-3)的抗原结合片段。
嵌合抗原受体
在本申请中，所述嵌合抗原受体包含靶向部分。所述靶向部分可特异性结合CD22。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包含重链可变区VH，所述VH可包含 HCDR1、HCDR2和HCDR3中的至少一个、两个或三个。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR3可包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR3序列可根据IMGT编码系统定义。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分包含HCDR3，所述HCDR3与SEQ ID NO:48所示的序列相比，在选自下述位置的氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等):X
15和X
17。
ATDPWTDCSLDGRYX
15YX
17Y(SEQ ID NO:48)，其中，X
15可以是E或R，X
17可以是D，G或N。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR3可包含SEQ ID NO:19至SEQ ID NO:21中任一项所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR3序列可根据IMGT编码系统定义。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR2可包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR2序列可根据IMGT编码系统定义。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分包含HCDR2，所述HCDR2与SEQ ID NO:49所示的序列相比，在选自下述位置的氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等):X
3。
ISX
3RDGNT(SEQ ID NO:49)，其中，X
3可以是G或S。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR2可包含SEQ ID NO:11至SEQ ID NO:12中任一项所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR2序列可根据IMGT编码系统定义。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR1可包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR1序列可根据IMGT编码系统定义。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分包含HCDR1，所述HCDR1与SEQ ID NO:50所示的序列相比，在选自下述位置的氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等):X
3，X
5和X
6。
GFX
3VX
5X
6YA(SEQ ID NO:50)，其中，X
3可以是P或S，X
5可以是A或D，X
6可以是D或G。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR1可包含SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:6中任一项所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR1序列可根据IMGT编码系统定义。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR3可包含SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR3序列可根据IMGT编码系统定义。 例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分包含HCDR3，所述HCDR3与SEQ ID NO:56所示的序列相比，在选自下述位置的氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等):X
17。
ATDPWTDCSLDGRYEYX
17Y(SEQ ID NO:56)，其中，X
17可以是G或N。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR3可包含SEQ ID NO:19至SEQ ID NO:20中任一项所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR3序列可根据IMGT编码系统定义。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR2可包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR2序列可根据IMGT编码系统定义。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分包含HCDR2，所述HCDR2与SEQ ID NO:49所示的序列相比，在选自下述位置的氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等):X
3。
ISX
3RDGNT(SEQ ID NO:49)，其中，X
3可以是G或S。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR2可包含SEQ ID NO:11至SEQ ID NO:12中任一项所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR2序列可根据IMGT编码系统定义。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR1可包含SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR1序列可根据IMGT编码系统定义。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分包含HCDR1，所述HCDR1与SEQ ID NO:57所示的序列相比，在选自下述位置的氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等):X
5和X
6。
GFPVX
5X
6YA(SEQ ID NO:57)，其中，X
5可以是A或D，X
6可以是D或G。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR1可包含SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR1序列可根据IMGT编码系统定义。
例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR1可包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；且所述HCDR3可包含SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包括抗体B010-B-22Nb-01或与其具有相同HCDR3(例如，与其具有相同的HCDR1-3)的抗原结合片段。
例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR1可包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；且所述HCDR3可包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包括抗体B010-B-22Nb-02或与其具有相同HCDR3(例如，与其具有相同的HCDR1-3)的抗原结合片段。
例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR1可包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；且所述HCDR3可包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包括抗体B010-B-22Nb-03或与其具有相同HCDR3(例如，与其具有相同的HCDR1-3)的抗原结合片段。
例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的HCDR1可包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；且所述HCDR3可包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包括抗体B010-B-22Nb-04、B010-B-22Nb-04-H4、B010-B-22Nb-04-H5、B010-B-22Nb-04-H6或与其具有相同HCDR3(例如，与其具有相同的HCDR1-3)的抗原结合片段。
例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的VH可包含框架区H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR1可包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR1与SEQ ID NO:51所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
1和X
16。
X
1VQLVESGGGLVQPGX
16SLRLSCAAS(SEQ ID NO:51)，其中，X
1可以是A或E，X
16可以是G或R。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR1可包含SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:3中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR2可包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR2与SEQ ID NO:52所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
1，X
4，X
11，X
12，X
14，X
15和X
17。
X
1AWX
4RQAPGKX
11X
12EX
14X
15SX
17(SEQ ID NO:52)，其中，X
1可以是I或M，X
4可以是F或V，X
11可以是E或G，X
12可以是L或R，X
14可以是G或W，X
15可以是I或V，X
17可以是C或Y。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR2可包含SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:10中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR3可包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR3与SEQ ID NO:53所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
2，X
3，X
7， X
12，X
20，X
21，X
27，X
29和X
30。
YX
2X
3DSVX
7GRFTX
12SRDNAKNX
20X
21YLQMNX
27LX
29X
30EDTAVYYC(SEQ ID NO:53)，其中，X
2可以是D或Y，X
3可以是A，Q或V，X
7可以是E或K，X
12可以是I或V，X
20可以是S或T，X
21可以是L或V，X
27可以是D或S，X
29可以是E，K或R，X
30可以是D或P。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR3可包含SEQ ID NO:13至SEQ ID NO:18中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR4可包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR4与SEQ ID NO:54所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
3和X
6。
WGX
3GTX
6VTVSS(SEQ ID NO:54)，其中，X
3可以是L或Q，X
6可以是L或Q。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR4可包含SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:23中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR1可包含SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR1与SEQ ID NO:58所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
16。
AVQLVESGGGLVQPGX
16SLRLSCAAS(SEQ ID NO:58)，其中，X
16可以是G或R。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR1可包含SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:2中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR2可包含SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR2与SEQ ID NO:59所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
1和X
15。
X
1AWFRQAPGKEREGX
15SC(SEQ ID NO:59)，其中，X
1可以是I或M，X
15可以是I或V。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR2可包含SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:9中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR3可包含SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR3与SEQ ID NO:60所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
2，X
3，X
7，X
12和X
27。
YX
2X
3DSVX
7GRFTX
12SRDNAKNTVYLQMNX
27LKPEDTAVYYC(SEQ ID NO:60)，其中，X
2可以是D或Y，X
3可以是A或V，X
7可以是E或K，X
12可以是I或V，X
27可以是D或S。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR3可包含SEQ ID NO:13至SEQ ID NO:15中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR4可包含SEQ ID NO:22中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR1可包含SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR1与SEQ ID NO:61所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
1。
X
1VQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(SEQ ID NO:61)，其中，X
1可以是A或E。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR1可包含SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:3中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR2可包含SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR2与SEQ ID NO:62所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
4，X
11，X
12，X
14和X
17。
IAWX
4RQAPGKX
11X
12EX
14VSX
17(SEQ ID NO:62)，其中，X
4可以是F或V，X
11可以是E或G，X
12可以是L或R，X
14可以是G或W，X
17可以是C或Y。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR2可包含SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:10中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR3可包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR3与SEQ ID NO:63所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
3，X
20，X
21，X
29和X
30。
YYX
3DSVKGRFTISRDNAKNX
20X
21YLQMNSLX
29X
30EDTAVYYC(SEQ ID NO:63)，其中，X
3可以是A或Q，X
20可以是S或T，X
21可以是L或V，X
29可以是E或R，X
30可以是D或P。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR3可包含SEQ ID NO:16至SEQ ID NO:18中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR4可包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR4与SEQ ID NO:54所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
3和X
6。
WGX
3GTX
6VTVSS(SEQ ID NO:54)，其中，X
3可以是L或Q，X
6可以是L或Q。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR4可包含SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:23中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR1可包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列；且所述H-FR4可包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR1可包含SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列；且所述H-FR4可包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR1可包含SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列；且所述H-FR4可包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR1可包含SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:3中任一项所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:10中任一项所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:13至SEQ ID NO:18中任一项所示的氨基酸序列；且所述H-FR4可包含SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:23中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR1可包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列；且所述H-FR4可包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包括抗体B010-B-22Nb-01或与其具有相同H-FR1-4的抗原结合片段。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR1可包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列；且所述H-FR4可包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包括抗体B010-B-22Nb-02或与其具有相同H-FR1-4的抗原结合片段。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR1可包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列；且所述H-FR4可包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包括抗体B010-B-22Nb-03或与其具有相同H-FR1-4的抗原结合片段。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR1可包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列；且所述H-FR4可包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包括抗体B010-B-22Nb-04或与其具有相同H-FR1-4的抗原结合片段。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR1可包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列；且所述H-FR4可包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包括抗体B010-B-22Nb-04-H4或与其具有相同H-FR1-4的抗原结合片段。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR1可包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列；且所述H-FR4可包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包括抗体B010-B-22Nb-04-H5或与其具有相同H-FR1-4的抗原结合片段。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的H-FR1可包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列；且所述H-FR4可包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包括抗体B010-B-22Nb-04-H6或与其具有相同H-FR1-4的抗原结合片段。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包含重链可变区，所述重链可变区可包含SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分包含VH，所述VH与SEQ ID NO:55所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
1，X
16，X
28，X
30，X
31，X
34，X
37，X
44，X
45，X
47，X
48，X
50，X
53，X
60，X
61，X
65，X
70，X
78，X
79，X
85，X
87，X
88，X
111，X
113，X
117，X
120。
X
1VQLVESGGGLVQPGX
16SLRLSCAASGFX
28VX
30X
31YAX
34AWX
37RQAPGKX
44X
45EX
47X
48SX
50ISX
53RDGNTYX
60X
61DSVX
65GRFTX
70SRDNAKNX
78X
79YLQMNX
85LX
87X
88EDTAVYYCATDPWTDCSLDGRYX
111YX
113YWGX
117GTX
120VTVSS(SEQ ID NO：55)，其中，X
1可以是A或E，X
16可以是G或R，X
28可以是P或S，X
30可以是A或D，X
31可以是D或G，X
34可以是I或M，X
37可以是F或V，X
44可以是E或G，X
45可以是L或R，X
47可以是G或W，X
48可以是I或V，X
50可以是C或Y，X
53可以是G或S，X
60可以是D或Y，X
61可以是A，Q或V，X
65可以是E或K，X
70可以是I或V，X
78可以是S或T，X
79可以是L或V，X
85可以是D或S，X
87可以是E，K或R，X
88可以是D或P，X
111可以是E或R，X
113可以是D，G或N，X
117可以是L或Q，X
120可以是L或Q。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包含重链可变区，所述重链可变区可包含SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包含VH，所述VH与SEQ ID NO:64所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
16，X
30，X
31，X
34，X
48，X
53，X
60，X
61，X
65，X
70，X
85，X
113。
AVQLVESGGGLVQPGX
16SLRLSCAASGFPVX
30X
31YAX
34AWFRQAPGKEREGX
48SCISX
53RDGNTYX
60X
61DSVX
65GRFTX
70SRDNAKNTVYLQMNX
85LKPEDTAVYYCATDPWTDCSLDGRYEY X
113YWGLGTQVTVSS(SEQ ID NO:64)，其中，X
16可以是G或R，X
30可以是A或D，X
31可以是D或G，X
34可以是I或M，X
48可以是I或V，X
53可以是G或S，X
60可以是D或Y，X
61可以是A或V，X
65可以是E或K，X
70可以是I或V，X
85可以是D或S，X
113可以是G或N。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包含重链可变区，所述重链可变区可包含SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包含VH，所述VH与SEQ ID NO:65所示的序列相比，在选自下组的一个或多个氨基酸处存在氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代等)：X
1，X
37，X
44，X
45，X
47，X
50，X
61，X
78，X
79，X
87，X
88，X
117和X
120。
X
1VQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSVDDYAIAWX
37RQAPGKX
44X
45EX
47VSX
50ISSRDGNTYYX
61DSVKGRFTISRDNAKNX
78X
79YLQMNSLX
87X
88EDTAVYYCATDPWTDCSL DGRYRYDYWGX
117GTX
120VTVSS(SEQ ID NO:65)，其中，X
1可以是A或E，X
37可以是F或V，X
44可以是E或G，X
45可以是L或R，X
47可以是G或W，X
50可以是C或Y，X
61可以是A或Q，X
78可以是S或T，X
79可以是L或V，X
87可以是E或R，X
88可以是D或P，X
117可以是L或Q，X
120可以是L或Q。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分的重链可变区可包含SEQ ID NO:24至SEQ ID NO:30中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包含重链可变区，所述重链可变区可包含HCDR1-3以及H-FR1-4。例如，所述HCDR1可包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；所述HCDR3可包含SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列。例如，所述H-FR1可包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列；所述H-FR4可包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的重链可变区可包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包括抗体B010-B-22Nb-01或与其具有相同重链可变区的嵌合抗原受体的靶向部分。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包含重链可变区，所述重链可变区可包含HCDR1-3以及H-FR1-4。例如，所述HCDR1可包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；所述HCDR3可包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。例如，所述H-FR1可包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列；所述H-FR4可包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的重链可变区可包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包括抗体B010-B-22Nb-02或与其具有相同重链可变区的嵌合抗原受体的靶向部分。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包含重链可变区，所述重链可变区可包含HCDR1-3以及H-FR1-4。例如，所述HCDR1可包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；所述HCDR3可包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。例如，所述H-FR1可包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列；所述H-FR4可包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的重链可变区可包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包括抗体B010-B-22Nb-03或与其具有相同重链可变区的嵌合抗原受体的靶向部分。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包含重链可变区，所述重链可变区可包含HCDR1-3以及H-FR1-4。例如，所述HCDR1可包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；所述HCDR3可包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列。例如，所述H-FR1可包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述H-FR2可 包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列；所述H-FR4可包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的重链可变区可包含SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包括抗体B010-B-22Nb-04或与其具有相同重链可变区的嵌合抗原受体的靶向部分。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包含重链可变区，所述重链可变区可包含HCDR1-3以及H-FR1-4。例如，所述HCDR1可包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；所述HCDR3可包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列。例如，所述H-FR1可包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列；所述H-FR4可包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的重链可变区可包含SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包括抗体B010-B-22Nb-04-H4或与其具有相同重链可变区的嵌合抗原受体的靶向部分。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包含重链可变区，所述重链可变区可包含HCDR1-3以及H-FR1-4。例如，所述HCDR1可包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；所述HCDR3可包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列。例如，所述H-FR1可包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列；所述H-FR4可包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的重链可变区可包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包括抗体B010-B-22Nb-04-H5或与其具有相同重链可变区的嵌合抗原受体的靶向部分。
在本申请中，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包含重链可变区，所述重链可变区可包含HCDR1-3以及H-FR1-4。例如，所述HCDR1可包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；所述HCDR3可包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列。例如，所述H-FR1可包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列；所述H-FR4可包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分的重链可变区可包含SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体的靶向部分可包括抗体B010-B-22Nb-04-H6或与其具有相同重链可变区的嵌合抗原受体的靶向部 分。
在本申请中，所述嵌合抗原受体可包含跨膜结构域。例如，所述跨膜结构域可以包含但不限于源自选自下述蛋白的跨膜结构域或其组合：CD8、CD28、4-1BB、CD4、CD27、CD7、PD-1、TRAC、TRBC、CD3ε、CD5、ICOS、OX40、NKG2D、2B4、CD244、FcεRIγ、BTLA、CD30、GITR、HVEM、DAP10、CD2、NKG2C、LIGHT、DAP12，CD40L、TIM1、CD226、DR3、CD45、CD80、CD86、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD134、CD137、CD154和SLAM。例如，所述跨膜结构域可包括源自CD8的跨膜结构域。例如，所述跨膜结构域可包含SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列。例如，所述跨膜结构域可包含与SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)序列同源性的氨基酸序列。
在本申请中，所述的嵌合抗原受体可包含共刺激信号传导结构域。例如，所述共刺激信号传导结构域可包含但不限于源自选自下述蛋白的共刺激信号传导结构域或其组合：CD28、CD137、CD27、CD2、CD7、CD8、OX40、CD226、DR3、SLAM、CDS、ICAM-1、NKG2D、NKG2C、B7-H3、2B4、FcεRIγ、BTLA、GITR、HVEM、DAP10、DAP12、CD30、CD40、CD40L、TIM1、PD-1、LFA-1、LIGHT、JAML、CD244、CD100、ICOS、CD83的配体、CD40和MyD88。例如，所述共刺激信号传导结构域可包括源自CD137的共刺激信号传导结构域。例如，所述共刺激信号传导结构域可包含如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列。例如，所述共刺激信号传导结构域可包含与SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)序列同源性的氨基酸序列。
在本申请中，所述嵌合抗原受体可包含胞内信号传导结构域。例如，所述胞内信号传导结构域可包含源自选自下述蛋白的胞内信号传导结构域或其组合：CD3zeta、CD3delta、CD3gamma、CD3ε、CD79a、CD79b、FceRIγ、FceRIβ、FcγRIIa、牛白血病病毒gp30、Epstein-Barr病毒(EBV)LMP2A、猿免疫缺陷病毒PBj14Nef、卡波西肉瘤疱疹病毒(HSKV)、DAP10和DAP-12。例如，所述胞内信号传导结构域可包括源自CD3zeta的胞内信号传导结构域。例如，所述胞内信号传导结构域可包含如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列。例如，所述胞内信号传导结构域可包含与SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)序列同源性的氨基酸序列。
例如，所述跨膜结构域的N端可以与所述靶向部分的C端连接。例如，所述跨膜结构域 的C端可以与所述共刺激信号传导结构域的N端连接。例如，所述共刺激信号传导结构域的C端可以与所述胞内信号传导结构域的N端连接。
例如，所述嵌合抗原受体从N端到C端可以依次包含下述结构域：靶向部分、跨膜结构域、共刺激信号传导结构域和胞内信号传导结构域。
例如，所述嵌合抗原受体从N端到C端可以依次包含下述结构域：本申请的抗原结合蛋白(例如，VHH)、源自CD8的跨膜结构域、源自CD137的共刺激信号传导结构域和源自CD3zeta的胞内信号传导结构域。
在本申请中，所述嵌合抗原受体可包含SEQ ID NO:38至SEQ ID NO:44中任一项所示的氨基酸序列。例如，所述嵌合抗原受体可包含与SEQ ID NO:38至SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)序列同源性的氨基酸序列。
多肽和免疫缀合物
另一方面，本申请提供了一种或多种多肽，其可包含本申请的分离的抗原结合蛋白。例如，所述多肽可包括融合蛋白。例如，所述多肽可包括多特异性抗体(例如，双特异性抗体)。
另一方面，本申请提供了一种或多种免疫缀合物，所述免疫缀合物可包含本申请的分离的抗原结合蛋白。在某些实施方式中，所述免疫缀合物还可包含药学上可接受的治疗剂、标记物和/或检测剂。
核酸、载体和细胞
另一方面，本申请还提供了分离的一种或多种核酸分子，所述一种或多种核酸分子可编码本申请所述分离的抗原结合蛋白或多肽。例如，所述一种或多种核酸分子中的每一个核酸分子可以编码完整的所述抗原结合蛋白，也可以编码其中的一部分(例如，HCDR1-3、重链可变区中的一种或多种)。所述一种或多种核酸分子可编码本申请所述的嵌合抗原受体。例如，所述核酸分子可包含SEQ ID NO:31至SEQ ID NO:37的核苷酸序列。
例如，当核酸分子分别编码所述抗原结合蛋白或多肽的一部分时，核酸分子编码的产物合在一起可以形成有功能的(例如，可结合CD22)的本申请的分离的抗原结合蛋白。
本申请所述的核酸分子可以为分离的。例如，其可以是通过以下方法产生或合成的：(i)在体外扩增的，例如通过聚合酶链式反应(PCR)扩增产生的，(ii)通过克隆重组产生的，(iii)纯化的，例如通过酶切和凝胶电泳分级分离，或者(iv)合成的，例如通过化学合成。例如，所述分离的核酸可以是通过重组DNA技术制备的核酸分子。
在本申请中，可以通过本领域已知的多种方法来制备编码所述分离的抗原结合蛋白的核 酸，这些方法包括但不限于，采用逆转录PCR和PCR获得本申请所述分离的抗原结合蛋白或多肽的核酸分子。
另一方面，本申请提供了一种或多种载体，其包含本申请所述的一种或多种核酸分子。每种载体中可包含一种或多种所述核酸分子。此外，所述载体中还可包含其他基因，例如允许在适当的宿主细胞中和在适当的条件下选择该载体的标记基因。此外，所述载体还可包含允许编码区在适当宿主中正确表达的表达控制元件。这样的控制元件为本领域技术人员所熟知的，例如，可包括启动子、核糖体结合位点、增强子和调节基因转录或mRNA翻译的其他控制元件等。在某些实施方式中，所述表达控制序列为可调的元件。所述表达控制序列的具体结构可根据物种或细胞类型的功能而变化，但通常包含分别参与转录和翻译起始的5’非转录序列和5’及3’非翻译序列，例如TATA盒、加帽序列、CAAT序列等。例如，5’非转录表达控制序列可包含启动子区，启动子区可包含用于转录控制功能性连接核酸的启动子序列。所述表达控制序列还可包括增强子序列或上游活化子序列。在本申请中，适当的启动子可包括，例如用于SP6、T3和T7聚合酶的启动子、人U6RNA启动子、CMV启动子及其人工杂合启动子(如CMV)，其中启动子的某部分可与其他细胞蛋白(如人GAPDH，甘油醛-3-磷酸脱氢酶)基因启动子的某部分融合，其可包含或不包含另外的内含子。本申请所述的一种或多种核酸分子可以与所述表达控制元件可操作地连接。
所述载体可以包括，例如质粒、粘粒、病毒、噬菌体或者在例如遗传工程中通常使用的其他载体。例如，所述载体可为表达载体。例如，所述载体可为病毒载体。可以将病毒载体直接给予至患者(体内)或可以通过间接的形式，例如，在体外使用病毒处理细胞，然后将处理过的细胞给予至患者(离体)。病毒载体技术在本领域中是公知的，并在例如Sambrook等(2001,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,New York)和其他病毒学和分子生物学手册中进行了描述。常规的基于病毒的系统可以包括用于基因转移的逆转录病毒载体、慢病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体以及单纯疱疹病毒载体。在某些情形中，可以用逆转录病毒、慢病毒和腺相关病毒的方法将基因转移整合进宿主基因组中，使插入的基因长期表达。慢病毒载体是能够转导或感染非分裂细胞并典型地产生较高病毒效价的逆转录病毒载体。慢病毒载体可包含长末端重复序列5’LTR和截短的3’LTR、RRE、rev应答元件(cPPT)、中央终止序列(CTS)和/或翻译后调控元件(WPRE)。本申请所述的载体可以被引入细胞。
另一方面，本申请提供了一种细胞。所述细胞可包含本申请所述的分离的抗原结合蛋白、所述的多肽、所述的免疫缀合物、一种或多种核酸分子和/或本申请所述的一种或多种载体。 例如，每种或每个细胞可包含一个或一种本申请所述的核酸分子或载体。例如，每种或每个细胞可包含多个(例如，2个或以上)或多种(例如，2种或以上)本申请所述的核酸分子或载体。例如，可将本申请所述的载体引入所述宿主细胞中，例如原核细胞(例如，细菌细胞)、CHO细胞、NS/0细胞、HEK293T细胞、293F细胞或HEK293A细胞，或者其他真核细胞，如来自植物的细胞、真菌或酵母细胞等。可通过本领域已知的方法将本申请所述的载体引入所述宿主细胞中，例如电穿孔、lipofectine转染、lipofectamin转染等。例如，所述细胞可以包括酵母细胞。例如，所述细胞可以包括大肠杆菌细胞。例如，所述细胞可以包括哺乳动物细胞。例如，所述细胞可以包括免疫细胞。
所述细胞可以包括免疫细胞。在某些情形中，所述细胞可以包括免疫细胞。例如，所述细胞可包括T细胞、B细胞、天然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、NKT细胞、单核细胞、树突状细胞、粒细胞、淋巴细胞、白细胞和/或外周血单个核细胞。例如，所述细胞可包括T细胞。
药物组合物
另一方面，本申请提供了一种药物组合物。所述药物组合物可包含本申请所述的分离的抗原结合蛋白、所述的多肽、所述的免疫缀合物、所述分离的核酸分子、所述的载体、所述的细胞，和/或药学上可接受的佐剂和/或赋形剂。在本申请中，所述药学上可接受的佐剂可以包括缓冲剂、抗氧化剂、防腐剂、低分子量多肽、蛋白质、亲水聚合物、氨基酸、糖、螯合剂、反离子、金属复合物和/或非离子表面活性剂。除非与本申请所述的细胞不相容，否则任何常规介质或试剂均可以考虑用于本申请的药物组合物中。在本申请中，所述药学上可接受的赋形剂可以包括在药物制剂中除主药以外的附加物，也可称为辅料。例如，所述赋形剂可以包括片剂中的粘合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂。例如，所述赋形剂可以包括中药丸剂中的酒、醋、药汁等。例如，所述赋形剂可以包括半固体制剂软膏剂、霜剂中的基质部分。例如，所述赋形剂可以包括液体制剂中的防腐剂、抗氧剂、矫味剂、芳香剂、助溶剂、乳化剂、增溶剂、渗透压调节剂、着色剂。
试剂盒、用途和方法
另一方面，本申请提供了一种用于检测或测定CD22的方法，所述方法可包括使用所述分离的抗原结合蛋白或所述的多肽。
在本申请中，所述方法可包括体外方法，离体方法，非诊断或非治疗目的的方法。
例如，所述方法可包括用于非诊断目的的检测CD22的存在和/或含量的方法，其可包括下述步骤：
1)使样品与本申请的抗原结合蛋白接触；以及
2)检测样品结合的所述抗原结合蛋白的存在和/或含量来确定获自受试者的样品中CD22的存在和/或表达水平。
另一方面，本申请提供了一种CD22的试剂盒，其可包括使用所述分离的抗原结合蛋白或所述的多肽。
在本申请中，所述试剂盒还可包含使用说明，所述使用说明记载用于检测CD22的存在和/或含量的方法。例如，所述方法可包括体外方法，离体方法，非诊断或非治疗目的的方法。
另一方面，本申请提供了一种所述的分离的抗原结合蛋白或所述的多肽在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒可用于检测CD22的存在和/或含量的方法。例如，所述方法可包括体外方法，离体方法，非诊断或非治疗目的的方法。
另一方面，本申请提供了分离的抗原结合蛋白、所述的多肽、所述的免疫缀合物、所述分离的核酸分子、所述的载体、所述的药物组合物用于预防、缓解和/或治疗疾病或病症。
另一方面，在本申请中，所述的试剂盒和/或所述的药物组合用于预防、缓解和/或治疗疾病或病症。
例如，所述疾病或病症可包括肿瘤。例如，所述肿瘤可包括与CD22的表达相关的肿瘤。术语“与CD22的表达相关的肿瘤”通常是指与正常细胞相比，所述肿瘤微环境中或肿瘤细胞表面CD22的表达改变。例如，所述“与CD22的表达相关的肿瘤”可以是与正常细胞相比，肿瘤微环境中或肿瘤细胞表面CD22的表达量上调的肿瘤。所述与CD22的蛋白表达相关的肿瘤可以是CD22阳性的肿瘤。在CD22阳性的肿瘤中，与正常细胞相比，肿瘤细胞表面或肿瘤微环境中的CD22的蛋白表达量高约1％，5％，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，60％，70％，80％或更高。
例如，所述肿瘤可以包括血液瘤。例如，所述肿瘤可包括淋巴瘤。例如，所述肿瘤可包括白血病。
另一方面，本申请提供了一种所述的分离的抗原结合蛋白、所述的多肽、所述的免疫缀合物、所述的分离的核酸分子、所述的载体，所述的细胞和/或所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防、缓解和/或治疗疾病或病症。
另一方面，本申请提供了一种药物组合在制备药物中的用途，所述药物用于预防、缓解和/或治疗疾病或病症。
例如，所述疾病或病症可包括肿瘤。例如，所述肿瘤可包括与CD22的表达相关的肿瘤。术语“与CD22的表达相关的肿瘤”通常是指与正常细胞相比，所述肿瘤微环境中或肿瘤细胞表面CD22的表达改变。例如，所述“与CD22的表达相关的肿瘤”可以是与正常细胞相 比，肿瘤微环境中或肿瘤细胞表面CD22的表达量上调的肿瘤。所述与CD22蛋白表达相关的肿瘤可以是CD22阳性的肿瘤。在CD22阳性的肿瘤中，与正常细胞相比，肿瘤细胞表面或肿瘤微环境中的CD22的蛋白表达量高约1％，5％，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，60％，70％，80％或更高。
例如，所述肿瘤可以包括血液瘤。例如，所述肿瘤可包括淋巴瘤。例如，所述肿瘤可包括白血病。
另一方面，本申请提供了一种预防和/或治疗疾病或病症的方法，其包括向有需要的受试者施用所述的分离的抗原结合蛋白、所述的分离的核酸分子、所述的载体，所述的细胞、所述的药物组合物。
例如，所述疾病或病症可包括肿瘤。例如，所述肿瘤可包括与CD22的表达相关的肿瘤。术语“与CD22的表达相关的肿瘤”通常是指与正常细胞相比，所述肿瘤微环境中或肿瘤细胞表面CD22的表达改变。例如，所述“与CD22的表达相关的肿瘤”可以是与正常细胞相比，肿瘤微环境中或肿瘤细胞表面CD22的表达量上调的肿瘤。所述与CD22蛋白表达相关的肿瘤可以是CD22阳性的肿瘤。在CD22阳性的肿瘤中，与正常细胞相比，肿瘤细胞表面或肿瘤微环境中的CD22的蛋白表达量高约1％，5％，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，60％，70％，80％或更高。
例如，所述肿瘤可以包括血液瘤。例如，所述肿瘤可包括淋巴瘤。例如，所述肿瘤可包括白血病。
本申请所述药物组合物及方法可与其他类型的癌症疗法结合使用，诸如化学疗法、手术、放射、基因疗法等。本申请中所描述的药物组合物及方法可用于其他依赖于免疫反应的疾病病状，诸如炎症、免疫疾病及感染性疾病。
在本申请中，所述受试者可以包括人或非人动物。例如，所述非人动物可以选自下组：猴、鸡、鹅、猫、狗、小鼠和大鼠。此外，非人动物也可以包括任何除人以外的动物物种，例如家畜动物，或啮齿类动物，或灵长类动物，或家养动物，或家禽动物。所述人可以是高加索人、非洲人、亚洲人、闪族人，或其他种族，或各种种族的杂合体。又例如，所述人可以是老年、成年、青少年、儿童或者婴儿。
可以根据在实验动物中的有效量推测在人类中的有效量。例如，Freireich等人描述了动物和人的剂量的相互关系(基于每平方米身体表面的毫克数)(Freireich et al.，Cancer Chemother.Rep.50，219(1966))。身体表面积可以从患者的身高和体重近似确定。参见例如Scientific Tables，Geigy Pharmaceuticals，Ardsley，N.Y.，537(1970)。
本申请可包括以下的实施方案：
1.嵌合抗原受体，其包含靶向部分，所述靶向部分包含HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列。
2.根据实施方案1所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包含HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列。
3.根据实施方案1-2中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包含HCDR1，所述HCDR1包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
4.根据实施方案1-3中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包含SEQ ID NO:65所示的重链可变区中的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
5.根据实施方案1-4中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包含SEQ ID NO:27至SEQ ID NO:30中任一项所示的重链可变区中的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
6.根据实施方案1-5中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包含HCDR1、HCDR2、HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列；所述HCDR2包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；以及所述HCDR1包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
7.根据实施方案1-6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包含H-FR1，所述H-FR1的C末端与所述HCDR1的N末端直接或间接地相连，且所述H-FR1包含SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列。
8.根据实施方案7所述的嵌合抗原受体，其中所述H-FR1包含SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:3中任一项所示的氨基酸序列。
9.根据实施方案1-8中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包含H-FR2，所述H-FR2位于所述HCDR1与所述HCDR2之间，且所述H-FR2包含SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列。
10.根据实施方案9所述的嵌合抗原受体，其中所述H-FR2包含SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:10中任一项所示的氨基酸序列。
11.根据实施方案1-10中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包含H-FR3，所述H-FR3位于所述HCDR2与所述HCDR3之间，且所述H-FR3包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列。
12.根据实施方案11所述的嵌合抗原受体，其中所述H-FR3包含SEQ ID NO:16至SEQ ID NO:18中任一项所示的氨基酸序列。
13.根据实施方案1-12中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包含H-FR4，所述 H-FR4的N末端与所述HCDR3的C末端直接或间接地相连，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。
14.根据实施方案13所述的嵌合抗原受体，其中所述H-FR4包含SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:23中任一项所示的氨基酸序列。
15.根据实施方案1-14中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包含H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4，所述H-FR1包含SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列；所述H-FR2包含SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列；所述H-FR3包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列；以及所述H-FR4包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。
16.根据实施方案15所述的嵌合抗原受体，其中所述H-FR1包含SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:3中任一项所示的氨基酸序列；所述H-FR2包含SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:10中任一项所示的氨基酸序列；所述H-FR3包含SEQ ID NO:16至SEQ ID NO:18中任一项所示的氨基酸序列；以及所述H-FR4包含SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:23中任一项所示的氨基酸序列。
17.根据实施方案15-16中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述H-FR1、H-FR2、H-FR3和H-FR4包含选自下述的任意一组氨基酸序列：
a)H-FR1：SEQ ID NO:1，H-FR2：SEQ ID NO:7，H-FR3：SEQ ID NO:16和H-FR4：SEQ ID NO:22；
b)H-FR1：SEQ ID NO:3，H-FR2：SEQ ID NO:10，H-FR3：SEQ ID NO:17和H-FR4：SEQ ID NO:23；
c)H-FR1：SEQ ID NO:3，H-FR2：SEQ ID NO:7，H-FR3：SEQ ID NO:17和H-FR4：SEQ ID NO:23；
d)H-FR1：SEQ ID NO:3，H-FR2：SEQ ID NO:7，H-FR3：SEQ ID NO:18和H-FR4：SEQ ID NO:23。
18.根据实施方案1-17中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包括抗体或抗原结合片段。
19.根据实施方案18所述的嵌合抗原受体，其中所述抗原结合片段选自下组：Fab，Fab’，F(ab)2，Fv片段，F(ab’)2，scFv，di-scFv，VHH和/或dAb。
20.根据实施方案1-19中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包括VHH。
21.根据实施方案20所述的嵌合抗原受体，其中所述VHH靶向CD22。
22.根据实施方案1-21中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包含SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列。
23.根据实施方案1-22中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包含SEQ ID NO:27至SEQ ID NO:30中任一项所示的氨基酸序列。
24.根据实施方案1-23中任一项所述的嵌合抗原受体，其包含跨膜结构域。
25.根据实施方案24所述的嵌合抗原受体，其中所述跨膜结构域包含源自选自下述蛋白的跨膜结构域或其组合：CD8、CD28、4-1BB、CD4、CD27、CD7、PD-1、TRAC、TRBC、CD3ε、CD5、ICOS、OX40、NKG2D、2B4、CD244、FcεRIγ、BTLA、CD30、GITR、HVEM、DAP10、CD2、NKG2C、LIGHT、DAP12，CD40L、TIM1、CD226、DR3、CD45、CD80、CD86、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD134、CD137、CD154和SLAM。
26.根据实施方案24-25中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述跨膜结构域包括源自CD8的跨膜结构域。
27.根据实施方案24-26中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述跨膜结构域包含SEQ IDNO:45所示的氨基酸序列。
28.根据实施方案24-27中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述跨膜结构域的N端与所述靶向部分的C端连接。
29.根据实施方案1-28中任一项所述的嵌合抗原受体，其包含共刺激信号传导结构域。
30.根据实施方案29所述的嵌合抗原受体，其中所述共刺激信号传导结构域包含源自选自下述蛋白的共刺激信号传导结构域或其组合：CD28、CD137、CD27、CD2、CD7、CD8、OX40、CD226、DR3、SLAM、CDS、ICAM-1、NKG2D、NKG2C、B7-H3、2B4、FcεRIγ、BTLA、GITR、HVEM、DAP10、DAP12、CD30、CD40、CD40L、TIM1、PD-1、LFA-1、LIGHT、JAML、CD244、CD100、ICOS、CD83的配体、CD40和MyD88。
31.根据实施方案29-30中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述共刺激信号传导结构域包括源自CD137的共刺激信号传导结构域。
32.根据实施方案29-31中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述共刺激信号传导结构域包含如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列。
33.根据实施方案29-32中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述共刺激信号传导结构域的N端与所述跨膜结构域的C端连接。
34.根据实施方案1-33中任一项所述的嵌合抗原受体，其包含胞内信号传导结构域。
35.根据实施方案34所述的嵌合抗原受体，其中所述胞内信号传导结构域包含源自选自下述蛋白的胞内信号传导结构域或其组合：CD3zeta、CD3delta、CD3gamma、CD3ε、CD79a、CD79b、FceRIγ、FceRIβ、FcγRIIa、牛白血病病毒gp30、Epstein-Barr病毒 (EBV)LMP2A、猿免疫缺陷病毒PBj14Nef、卡波西肉瘤疱疹病毒(HSKV)、DAP10和DAP-12。
36.根据实施方案34-35中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述胞内信号传导结构域包括源自CD3zeta的胞内信号传导结构域。
37.根据实施方案34-36中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述胞内信号传导结构域包含如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列。
38.根据实施方案34-37中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述胞内信号传导结构域的N端与所述共刺激信号传导结构域的C端。
39.根据实施方案1-38中任一项所述的嵌合抗原受体，其包含SEQ ID NO:41至SEQ ID NO:44中任一项所示的氨基酸序列。
40.分离的抗原结合蛋白，其以约2E-08M或以下的K
D值与CD22蛋白特异性结合。
41.根据实施方案40所述的分离的抗原结合蛋白，其包含HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列。
42.根据实施方案40-41中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列。
43.根据实施方案40-42中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含HCDR1，所述HCDR1包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
44.根据实施方案40-43中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含SEQ ID NO:65所示的重链可变区中的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
45.根据实施方案40-44中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含SEQ ID NO:27至SEQ ID NO:30中任一项所示的重链可变区中的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
46.根据实施方案44-45中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述HCDR3包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列；所述HCDR2包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；以及所述HCDR1包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
47.根据实施方案40-46中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR1，所述H-FR1的C末端与所述HCDR1的N末端直接或间接地相连，且所述H-FR1包含SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列。
48.根据实施方案47所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR1包含SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:3中任一项所示的氨基酸序列。
49.根据实施方案40-48中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR2，所述H-FR2位于所述HCDR1与所述HCDR2之间，且所述H-FR2包含SEQ ID NO:62所示的氨基 酸序列。
50.根据实施方案49所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR2包含SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:10中任一项所示的氨基酸序列。
51.根据实施方案40-50中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR3，所述H-FR3位于所述HCDR2与所述HCDR3之间，且所述H-FR3包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列。
52.根据实施方案51所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR3包含SEQ ID NO:16至SEQ ID NO:18中任一项所示的氨基酸序列。
53.根据实施方案40-52中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR4，所述H-FR4的N末端与所述HCDR3的C末端直接或间接地相连，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。
54.根据实施方案53所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR4包含SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:23中任一项所示的氨基酸序列。
55.根据实施方案40-54中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4，所述H-FR1包含SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列；所述H-FR2包含SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列；所述H-FR3包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列；以及所述H-FR4包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。
56.根据实施方案55所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR1包含SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:3中任一项所示的氨基酸序列；所述H-FR2包含SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:10中任一项所示的氨基酸序列；所述H-FR3包含SEQ ID NO:16至SEQ ID NO:18中任一项所示的氨基酸序列；以及所述H-FR4包含SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:23中任一项所示的氨基酸序列。
57.根据实施方案55-56中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR1、H-FR2、H-FR3和H-FR4包含选自下述的任意一组氨基酸序列：
a)H-FR1：SEQ ID NO:1，H-FR2：SEQ ID NO:7，H-FR3：SEQ ID NO:16和H-FR4：SEQ ID NO:22；
b)H-FR1：SEQ ID NO:3，H-FR2：SEQ ID NO:10，H-FR3：SEQ ID NO:17和H-FR4：SEQ ID NO:23；
c)H-FR1：SEQ ID NO:3，H-FR2：SEQ ID NO:7，H-FR3：SEQ ID NO:17和H-FR4：SEQ ID NO:23；
d)H-FR1：SEQ ID NO:3，H-FR2：SEQ ID NO:7，H-FR3：SEQ ID NO:18和H-FR4： SEQ ID NO:23。
58.根据实施方案40-57中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含重链可变区VH，所述VH包含SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列。
59.根据实施方案58所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述VH包含SEQ ID NO:27至SEQ ID NO:30中任一项所示的氨基酸序列。
60.根据实施方案40-59中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包括抗体或其抗原结合片段。
61.根据实施方案60所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合片段选自下组：Fab，Fab’，F(ab)2，Fv片段，F(ab’)2，scFv，di-scFv，VHH和dAb。
62.根据实施方案40-61中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包括VHH或其抗原结合片段。
63.根据实施方案60-62中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗体选自下组：单克隆抗体、人源化抗体、嵌合抗体和全人源抗体。
64.根据实施方案40-63中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含SEQ ID NO:27至SEQ ID NO:30中任一项所示的氨基酸序列。
65.多肽，其包含实施方案1-39中任一项所述的嵌合抗原受体和/或实施方案40-64中任一项所述的分离的抗原结合蛋白。
66.免疫缀合物，其包含实施方案40-64中任一项所述的分离的抗原结合蛋白。
67.分离的核酸分子，其编码实施方案1-39中任一项所述的嵌合抗原受体，实施方案40-64中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，或者实施方案65所述的多肽。
68.载体，其包含实施方案67所述的分离的核酸分子。
69.细胞，其包含实施方案1-39中任一项所述的嵌合抗原受体，实施方案40-64中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，实施方案65所述的多肽，实施方案66所述的免疫缀合物，实施方案67所述的分离的核酸分子和/或实施方案68所述的载体。
70.根据实施方案69中所述的细胞，其包括免疫细胞。
71.根据实施方案70所述的细胞，其中所述免疫细胞选自下组：T细胞、B细胞、天然杀伤细胞(NK细胞)、巨噬细胞、NKT细胞、单核细胞、树突状细胞、粒细胞、淋巴细胞、白细胞和/或外周血单个核细胞。
72.根据实施方案69-71中任一项所述的细胞，其中所述细胞包括T细胞。
73.制备实施方案1-39中任一项所述的嵌合抗原受体，实施方案40-64中任一项所述的分离的抗原结合蛋白和/或实施方案65所述的多肽的方法，所述方法包括在使得所述的分离 的抗原结合蛋白和/或所述的多肽表达的条件下，培养实施方案69-72中任一项所述的细胞。
74.药物组合物，其包含实施方案1-39中任一项所述的嵌合抗原受体，实施方案40-64中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，实施方案65所述的多肽，实施方案66所述的免疫缀合物，实施方案67所述的分离的核酸分子，实施方案68所述的载体，实施方案69-72中任一项所述的细胞，和/或药学上可接受的佐剂和/或赋形剂。
75.一种用于检测CD22蛋白的方法，其包括：
施用实施方案40-64中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，实施方案65所述的多肽或实施方案66所述的免疫缀合物。
76.一种CD22蛋白的检测试剂盒，其包含实施方案40-64中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，实施方案65所述的多肽或实施方案66所述的免疫缀合物。
77.实施方案40-64中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，实施方案65所述的多肽或实施方案66所述的免疫缀合物在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测CD22蛋白的存在和/或含量。
78.实施方案1-39中任一项所述的嵌合抗原受体，实施方案40-64中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，实施方案65所述的多肽，实施方案66所述的免疫缀合物，实施方案67所述的分离的核酸分子，实施方案68所述的载体和/或实施方案69-72中任一项所述的细胞在制备预防和/或治疗肿瘤的药物中的用途。
79.根据实施方案78所述的用途，其中所述肿瘤包括血液瘤。
80.根据实施方案78-79中任一项所述的用途，其中所述肿瘤包括与CD22的表达相关的肿瘤。
81.根据实施方案78-80中任一项所述的用途，其中所述肿瘤选自下组：白血病和淋巴瘤。
82.实施方案1-39中任一项所述的嵌合抗原受体，实施方案40-64中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，实施方案65所述的多肽，实施方案66所述的免疫缀合物，实施方案67所述的分离的核酸分子，实施方案68所述的载体，和/或实施方案69-72中任一项所述的细胞，其用于预防和/或治疗肿瘤。
83.根据实施方案82所述的用途，其中所述肿瘤包括血液瘤。
84.根据实施方案82-83中任一项所述的用途，其中所述肿瘤包括与CD22的表达相关的肿瘤。
85.根据实施方案82-84中任一项所述的用途，其中所述肿瘤选自下组：白血病和淋巴瘤。
86.一种预防和/或治疗疾病或病症的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的实施方案 1-39中任一项所述的嵌合抗原受体，实施方案40-64中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，实施方案65所述的多肽，实施方案66所述的免疫缀合物，实施方案67所述的分离的核酸分子，实施方案68所述的载体，和/或实施方案69-72中任一项所述的细胞。
87.根据实施方案86所述的方法，其中所述肿瘤包括血液瘤。
88.根据实施方案86-87中任一项所述的方法，其中所述肿瘤包括与CD22的表达相关的肿瘤。
89.根据实施方案86-88中任一项所述的方法，其中所述肿瘤选自下组：白血病和血液瘤。
不欲被任何理论所限，下文中的实施例仅仅是为了阐释本申请的抗原结合蛋白、嵌合抗原受体、制备方法和用途等，而不用于限制本申请发明的范围。
实施例
实施例1羊驼免疫
采用重组人CD22蛋白(11958-H02，北京义翘神州科技股份有限公司)免疫一只健康的雌性成年羊驼(Alpaca)。首次免疫将500μg重组人CD22蛋白与等体积弗氏完全佐剂乳化后颈部淋巴结附近左右两侧注射；加强免疫采用500μg重组人CD22蛋白与等体积弗氏完全或不完全佐剂乳化后颈部淋巴结附近左右两侧注射，并进行几次加强免疫，末次免疫一周后采血，监测抗血清效价。
实施例2羊驼免疫库构建
免疫结束后，收集羊驼外周血，采用淋巴细胞分离液分离得到淋巴细胞；采用TRIzol
TM试剂提取总RNA；采用PrimeScript
TMII第一链cDNA合成试剂盒反转录得到cDNA，巢式PCR扩增VHH基因。采用胶纯化试剂盒回收VHH基因片段后采用限制性内切酶Bgl 1酶切消化，随后将其克隆至噬菌粒载体pADL-10b，将构建好的克隆产物转化至E.coli TG1电转化感受态细胞，构建VHH基因文库；采用平板梯度稀释法测定库容量为2.2×10
9pfu，菌落PCR结果显示文库插入率为97.9％。从上述基因文库中取10-100倍库容量的活细胞进行接种培养，培养至对数期后采用M13K07噬菌体进行救援，救援培养后，离心收集噬菌体，采用PEG-NaCl纯化噬菌体，即得噬菌体展示文库，可直接用于后续筛选。
实施例3噬菌体展示筛选本申请的抗原结合蛋白
将重组人CD22(11958-H08H1-B，北京义翘神州科技股份有限公司)和重组猴CD22 (90246-C08H，北京义翘神州科技股份有限公司)包被到96孔板中，通过Elisa实验筛选3-5轮，将CD22特异性的噬菌体逐步得到富集。挑选大量阳性克隆进行Elisa检测并对阳性克隆筛选和测序，根据序列比对确定独特的克隆并将其序列分为框架区FR和互补决定区CDR。通过以上方法，共获得4株亲和力较高的靶向人CD22的单域抗体(sdAb)。这4株抗体分别命名为B010-B-22Nb-01、B010-B-22Nb-02、B010-B-22Nb-03和B010-B-22Nb-04。
实施例4抗体的人源化设计
为了降低驼源抗体的免疫原性，任选地可以将已筛选出的有生物学活性的抗体进行人源化。驼源单克隆抗体的人源化根据本领域许多文献公示的方法进行。简言之，可以使用人抗体恒定结构域替代亲本(驼源抗体)恒定结构域，根据驼源抗体和人抗体的同源性选择人种系抗体序列，进行CDR移植。然后可以以驼源抗体的三维结构为基础，通过VH的氨基酸残基进行回复突变，将驼源抗体的恒定区替换为人恒定区，得到最终的人源化结合蛋白B010-B-22Nb-04-H4、B010-B-22Nb-04-H5和B010-B-22Nb-04-H6。
表1为本申请抗原结合蛋白的CDR、重链可变区VH、FR。
表1本申请抗原结合蛋白的CDR、重链可变区VH、FR
实施例5抗原结合蛋白的结合亲和力
用Biacore检测不同CD22抗原结合蛋白与抗原(CD22蛋白，来源:北京义翘神州科技股份有限公司，货号:11958-H08H1-B)蛋白的结合亲和性。
混合100mL 10×HBS-EP+缓冲液和900mL Milli-Q水，得到1L 1×HBS-EP+缓冲液。
用1:1混合的50mM NHS和200mM EDC(NHS和EDC来自氨基偶联试剂盒)活化CM5芯片1-8通道的表面，流速为10μL/min，时间420秒。以10μL/min流速注射Anti-hFc或抗小鼠Fc抗体(稀释在pH4.5的醋酸钠溶液中，浓度20μg/mL)200秒，最后用1M乙醇胺盐酸盐(pH8.5)封闭芯片上多余的有活性的羧基。用1×HBS-EP+以10μL/min流速，冲洗芯片表面2小时，以稳定基线，仪器设定温度为25℃。
初始循环，由测样和再生两步组成，测量前重复3次，以稳定基线。
测样：以30μL/min流速向1-8通道注射1×HBS-EP+缓冲液120秒，解离60秒。
再生：向1-8通道注射10mM甘氨酸pH1.5，30μL/min，30秒，稳定30秒。
结合动力学参数测定的实验步骤:动力学测定的运行缓冲液是1×HBS-EP+(pH7.4)溶液。捕获：在Anti-hFc或抗小鼠Fc芯片第1-8通道的测试通道分别注射不同抗体，流速10μL/min，60s，进行捕获。用1×HBS-EP+(pH 7.4)将抗原CD22蛋白，(来源:北京义翘神州科技股份有限公司，货号:11958-H08H1-B)稀释至100nM。测样：以30μL/min流速向1-8通道注射，1个0浓度样品用于去除背景信号；抗原抗体的结合和解离时间分别为180和400秒。再生：以30μL/min流速向1-8通道注射10mM甘氨酸pH1.5，30秒，然后稳定60秒。使用Biacore8K分析软件计算每个本申请抗原结合蛋白的平衡解离常数(K
D值)。参比通道(FC1)用于背景的扣减。
以上试验表明，本申请CD22抗原结合蛋白具有与抗原的结合亲和力，SPH-B010-B-22PC-1(百英生物公司，货号B179301)为阳性对照抗体。
如表2所示，用Biacore检测不同抗原结合蛋白与抗原蛋白的结合亲和性。
表2不同抗原结合蛋白与抗原蛋白的结合亲和性
实施例6本申请的抗原结合蛋白与表达于细胞表面的人CD22的结合
基于流式细胞术测定法测定CD22抗原结合蛋白与表达于K562细胞表面的人CD22的结合能力。通过比较本申请不同CD22抗原结合蛋白与表达于K562细胞表面的人CD22的结合曲线来测定其结合能力。
6.1为了筛选人CD22结合蛋白，对K562细胞进行了基因改造，使其过量表达人源CD22，该细胞被命名为K562-hCD22细胞。将K562-hCD22细胞消化，铺于96孔板中。
6.2用含2％FBS的PBS分别配制阳性对照抗体(SPH-B010-B-22PC-1，百英生物，货号B179301)和本申请抗原结合蛋白抗体最大浓度为15μg/ml，3倍稀释，8个点，稀释好的样品加入96孔板中，4摄氏度孵育1小时。
6.3用含2％FBS的PBS洗板3次。
6.4将PE标记的-人IgG(Biolegend,货号410708)分别用2％FBS的PBS按产品说明书比例稀释，稀释好的样品加入96孔板中，4摄氏度孵育0.5小时。
6.5用含2％FBS的PBS洗板2次。
6.6用2％FBS的PBS重新悬浮细胞，使用流式细胞仪测定PE通道的中位荧光度值(MFI)。
在以上试验表明，本申请的抗原结合蛋白具有与K562细胞表面的人CD22的结合活性，并且优于阳性对照抗体。
如图1所示，基于流式细胞术测定本申请的抗原结合蛋白与K562细胞表面的人CD22的结合曲线。
实施例7 CD22-CAR的生物学活性
构建靶向CD22的嵌合抗原受体具体包括：靶向人CD22的单域抗体VHH序列、CD8跨膜结构域、CD137共刺激信号传导结构域和CD3zeta胞内信号传导结构域，它们按照依次串联的方式连接。获得的嵌合抗原受体分子(CAR分子)分别命名为CD22-CAR-01(氨基酸序列如SEQ ID NO:38所示，核酸序列如SEQ ID NO:31所示)、CD22-CAR-02(氨基酸序列如SEQ ID NO:39所示，核酸序列如SEQ ID NO:32所示)、CD22-CAR-03(氨基酸序列如SEQ ID NO:40所示，核酸序列如SEQ ID NO:33所示)、CD22-CAR-04(氨基酸序列如SEQ ID NO:41所示，核酸序列如SEQ ID NO:34所示)。
通过荧光素酶报告基因系统检测的荧光强度比较CD22-CAR-01、CD22-CAR-02、CD22- CAR-03、CD22-CAR-04瞬转至Jurkat-NFAT细胞中并在Raji细胞刺激下荧光素酶(Luciferase，简写为LUC)的表达。
1)使用电转缓冲液配制Jurkat-NFAT细胞分别与CD22-CAR-01、CD22-CAR-02、CD22-CAR-03、CD22-CAR-04、m971质粒混合的电转体系，并执行电转程序。其中m971为阳性对照。
2)电转后细胞放入37℃，5％CO
2培养箱中过夜培养并测定转染效率。
3)按照转染CD22-CAR-01、CD22-CAR-02、CD22-CAR-03、CD22-CAR-04后的Jurkat-NFAT:Raji＝1:1混合两种细胞，共同孵育作为实验组；另以未转染处理的Jurkat-NFAT细胞和Raji细胞共同孵育作为阴性对照组；转染m971的Jurkat-NFAT细胞和Raji细胞共同孵育作为阳性对照组。37℃，5％CO
2孵育4h。
4)使用荧光素酶检测试剂(Promega,E6120)，利用酶标仪检测96孔板的化学发光值(RLU)。
结果：(图2)转染CD22-CAR-01、CD22-CAR-02、CD22-CAR-03、CD22-CAR-04质粒的Jurkat-NFAT细胞与Raji细胞相互作用4h后均能够激活Jurkat-NFAT细胞，选择B010-B-22Nb-04抗原结合蛋白进行人源化设计，CAR构建和CART制备。
实施例8全基因合成CD22嵌合抗原受体分子并构建慢病毒表达载体，包装病毒
将获得的人源化CD22抗原结合蛋白都分别构建到慢病毒载体上来筛选出更有效的靶向CD22的嵌合抗原受体。
基因合成含有不同抗原结合蛋白的靶向CD22的嵌合抗原受体的基因序列：
构建人源化的靶向CD22的嵌合抗原受体具体包括：靶向人CD22的单域抗体VHH序列、CD8跨膜结构域、CD137共刺激信号传导结构域和CD3zeta胞内信号传导结构域，它们按照依次串联的方式连接。获得的嵌合抗原受体分子(CAR分子)分别命名为CD22-CAR-04-H4(氨基酸序列如SEQ ID NO:42所示，核酸序列如SEQ ID NO:35所示)、CD22-CAR-04-H5(氨基酸序列如SEQ ID NO:43所示，核酸序列如SEQ ID NO:36所示)、CD22-CAR-04-H6(氨基酸序列如SEQ ID NO:44所示，核酸序列如SEQ ID NO:37所示)。嵌合抗原受体基因序列由金维智公司合成并克隆至pLVX-EF1a-IRES-Puro载体上EcoRI和BamHI两个酶切位点之间。将构建好的慢病毒质粒和包装质粒Pspax2，pMD2.G一起用PEI转染试剂转染293T细胞，培养一定时间后收集病毒并对病毒进行浓缩备用。
实施例9制备CAR-T细胞
收集人外周血T淋巴细胞，用实施例8中制备的慢病毒的转染T淋巴细胞，制备得到CAR-T细胞，分别命名为CD22-CAR-04-H4、CD22-CAR-04-H5、CD22-CAR-04-H6。
1)取12孔板，配制含有5ug/ml抗CD3、2.5ug/ml抗CD28以及20ug/ml Retronectin抗体混合液，抗体混合液以500ul/well包被，室温孵育2h及以上。
2)复苏冻存的PBMC细胞1支。使用5ml PBS洗一次，按照试剂盒(MojoSort
TM人CD3 T细胞分离试剂盒，biolegend，480022)使用说明实施分选步骤以获得CD3+T细胞。
3)取孵育完毕的12孔板，用500ul/孔PBS溶液洗1次，PBMC细胞液按照1E6/孔加入孔板中，补充T细胞培养基至1ml/孔，放入37℃，5％CO
2培养箱进行激活24小时。
4)取12孔板，加入病毒，放入37℃，5％CO
2培养箱进行培养24h。补充T细胞培养基1ml/孔，放入37℃，5％CO
2培养箱进行培养48小时及以上。转移CAR T细胞悬液至T25培养瓶中，补充T细胞培养基，之后扩大培养获得所需的CART细胞。
实施例10检测CART细胞对靶细胞的杀伤作用
对Raji和Nalm6转入萤火虫荧光素酶，获得的Raji-LUC和Nalm6-LUC细胞。以CART：Raji-LUC/Nalm6-LUC细胞株＝10:1，5:1，2.5:1，1.25:1的不同比例，将CART细胞分别与Raji-LUC/Nalm6-LUC细胞株混合和共孵育，作为试验组；同时采用无关序列制备载体包装获得的病毒转染后的T淋巴细胞作为对照组定义为NC。
在孵育4小时后通过酶标仪进行体外杀伤检测，比较不同效靶比下，CART细胞对Raji-LUC/Nalm6-LUC细胞的杀伤作用，并与无关序列制备载体包装获得的病毒转染后的T淋巴细胞进行比较。
结果：人源化CD22-CAR-04 CART(即，CD22-CAR-04-H4、CD22-CAR-04-H5和CD22-CAR-04-H6 CART)细胞均能与CD22蛋白结合。流式检测人源化CD22-CAR-04 CART细胞与CD22蛋白结合结果如表3所示。杀伤实验结果显示本申请的人源化CD22-CAR-04的CAR T(即，CD22-CAR-04-H4、CD22-CAR-04-H5和CD22-CAR-04-H6 CART)细胞对Raji-LUC/Nalm6-LUC细胞有明显的体外杀伤作用(图4图5)。
图3为流式检测人源化CD22-CAR-04 CART细胞与CD22蛋白结合，图4图5为人源化CD22-CAR-04 CART细胞对Raji-LUC和Nalm6-LUC细胞杀伤作用。
表3流式检测人源化CD22-CAR-04 CART细胞与CD22蛋白结合结果
| 组别 | CD22结合率(％) | MFI |
| CD22-CAR-04-H4 | 76.75 | 71,082.45 |
| CD22-CAR-04-H5 | 77.86 | 114,189.71 |
| CD22-CAR-04-H6 | 76.65 | 105,875.28 |
| CD22-CAR-04 | 86.89 | 161,377.29 |
实施例11 CD22-CAR-T细胞Raji-LUC模型体内抑瘤实验
1.小鼠荷瘤模型构建
使用自行构建的表达有萤光素酶的靶肿瘤细胞Raji-LUC，接种于NDG小鼠(购自百奥赛图江苏基因生物科技有限公司)，尾静脉脉注射成瘤。将2.5×10
5上述靶细胞重悬于200μl无血清培养液中，小鼠尾静脉注射。
2.活体成像
Raji-LUC小鼠模型成瘤5天后，在小鼠腹膜内注射萤光素酶底物D-Luciferin，注射用量为3mg/只，将小鼠麻醉后置于小动物活体成像仪中成像。Raji-LUC小鼠模型成瘤5天后，将表达CD22-CAR-04、CD22-CAR-04-H4、CD22-CAR-04-H5、CD22-CAR-04-H6嵌合抗原受体的T淋巴细胞用PBS洗涤后用无血清培养液重悬，调整细胞密度为1.5×10
7个/ml。每只小鼠尾静脉注射3×10
6个细胞，共200μl。设置使用未转染CAR的T细胞处理的小鼠为对照组。实验完成后，每周进行两次定期活体成像检测，收集肿瘤消除效果。
3.肿瘤生物荧光测量
注射CAR-T细胞后，每周测量生物荧光两次，以注射细胞当天为第0天。
4.小鼠体重测量
注射CAR-T细胞后，每周测量体重两次，以注射细胞当天为第0天。
图6、图7显示的是Raji-LUC小鼠活体成像结果，成像结果体现肿瘤细胞的数量。结果显示，与生物荧光强度不断增强的未转染CAR的T细胞组相比，转染了CD22-CAR-04、CD22-CAR-04-H4、CD22-CAR-04-H5、CD22-CAR-04-H6的T细胞组的小鼠体内的肿瘤细胞数量显著减少，其中CD22-CAR-04-H4 CAR-T组抑瘤效果最好，在给药后Day17抑瘤率约为99.73％。
图8显示的是Raji-LUC小鼠体重变化结果，结果显示给药后小鼠体重波动稳定，且治疗期间均无动物死亡，没有表现明显的药物毒性，耐受良好。
实施例12 CD22-CAR-T细胞Nalm6-LUC模型体内抑瘤实验
1.小鼠荷瘤模型构建
使用自行构建的表达有萤光素酶的靶肿瘤细胞Nalm6-LUC，接种于NSG小鼠(购自上海南方模式生物科技股份有限公司)，尾静脉脉注射成瘤。将2.5×10
5上述靶细胞重悬于200μl无血清培养液中，小鼠尾静脉注射。
2.活体成像
Nalm6-LUC小鼠模型成瘤3天后，在小鼠腹膜内注射萤光素酶底物D-Luciferin，注射用量为3mg/只，将小鼠麻醉后置于小动物活体成像仪中成像。Nalm6-LUC小鼠模型成瘤3天后，将表达CD22-CAR-04、CD22-CAR-04-H4、CD22-CAR-04-H5、CD22-CAR-04-H6嵌合抗原受体的T淋巴细胞用PBS洗涤后用无血清培养液重悬，调整细胞密度为1.5×10
7个/ml。每只小鼠尾静脉注射3×10
6个细胞，共200μl。设置使用未转染CAR的T细胞处理的小鼠为对照组。实验完成后，每周进行两次定期活体成像检测，收集肿瘤消除效果。
3.肿瘤生物荧光测量
注射CAR-T细胞后，每周测量生物荧光两次，以注射细胞当天为第0天。
4.小鼠体重测量
注射CAR-T细胞后，每周测量体重两次，以注射细胞当天为第0天。
图9、图10显示的是Naml6-LUC小鼠活体成像结果，结果显示未转染CAR的T细胞组的小鼠荧光强度快速上升，转染了CD22-CAR-04、CD22-CAR-04-H4、CD22-CAR-04-H5、CD22-CAR-04-H6的T细胞组的小鼠体内均表现出显著的抑瘤效果，且各实验组间抑瘤效果未表现出明显差异。
图11显示的是Nalm6-LUC小鼠体重变化结果，给药后小鼠体重正常，且治疗期间均无动物死亡，没有表现明显的药物毒性，耐受良好。
前述详细说明是以解释和举例的方式提供的，并非要限制所附权利要求的范围。目前本申请所列举的实施方式的多种变化对本领域普通技术人员来说是显而易见的，且保留在所附的权利要求和其等同方式的范围内。
Claims (99)
- 嵌合抗原受体，其包含靶向部分，所述靶向部分包含HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中所述HCDR3包含SEQ ID NO:19至SEQ ID NO:21中任一项所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求1-2中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包含HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求3所述的嵌合抗原受体，其中所述HCDR2包含SEQ ID NO:11至SEQ ID NO:12中任一项所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求1-4中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包含HCDR1，所述HCDR1包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求5所述的嵌合抗原受体，其中所述HCDR1包含SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:6中任一项所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求1-6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包含SEQ ID NO:55所示的重链可变区中的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
- 根据权利要求1-7中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包含SEQ ID NO:24至SEQ ID NO:30中任一项所示的重链可变区中的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
- 根据权利要求1-8中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包含HCDR1、HCDR2、HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列；所述HCDR2包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列；以及所述HCDR1包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求9所述的嵌合抗原受体，其中所述HCDR3包含SEQ ID NO:19至SEQ ID NO:21中任一项所示的氨基酸序列；所述HCDR2包含SEQ ID NO:11至SEQ ID NO:12中任一项所示的氨基酸序列；以及所述HCDR1包含SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:6中任一项所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求9-10中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述HCDR1、HCDR2和HCDR3包含选自下述的任意一组的氨基酸序列：a)HCDR1：SEQ ID NO:4，HCDR2：SEQ ID NO:11，和HCDR3：SEQ ID NO:19；b)HCDR1：SEQ ID NO:5，HCDR2：SEQ ID NO:12，和HCDR3：SEQ ID NO:20；和c)HCDR1：SEQ ID NO:6，HCDR2：SEQ ID NO:12，和HCDR3：SEQ ID NO:21。
- 根据权利要求1-11中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包含H-FR1，所述H-FR1的C末端与所述HCDR1的N末端直接或间接地相连，且所述H-FR1包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求12所述的嵌合抗原受体，其中所述H-FR1包含SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:3中任一项所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求1-13中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包含H-FR2，所述H-FR2位于所述HCDR1与所述HCDR2之间，且所述H-FR2包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求14所述的嵌合抗原受体，其中所述H-FR2包含SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:10中任一项所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求1-15中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包含H-FR3，所述H-FR3位于所述HCDR2与所述HCDR3之间，且所述H-FR3包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求16所述的嵌合抗原受体，其中所述H-FR3包含SEQ ID NO:13至SEQ ID NO:18中任一项所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求1-17中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包含H-FR4，所述H-FR4的N末端与所述HCDR3的C末端直接或间接地相连，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求18所述的嵌合抗原受体，其中所述H-FR4包含SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:23中任一项所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求1-19中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包含H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4，所述H-FR1包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列；所述H-FR2包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列；所述H-FR3包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列；以及所述H-FR4包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求20所述的嵌合抗原受体，其中所述H-FR1包含SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:3中任一项所示的氨基酸序列；所述H-FR2包含SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:10中任一项所示的氨基酸序列；所述H-FR3包含SEQ ID NO:13至SEQ ID NO:18中任一项所示的氨基酸序列；以及所述H-FR4包含SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:23中任一项所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求20-21中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述H-FR1、H-FR2、H-FR3和H-FR4包含选自下述的任意一组氨基酸序列：a)H-FR1：SEQ ID NO:1，H-FR2：SEQ ID NO:7，H-FR3：SEQ ID NO:13和H-FR4：SEQ ID NO:22；b)H-FR1：SEQ ID NO:2，H-FR2：SEQ ID NO:8，H-FR3：SEQ ID NO:14和H-FR4：SEQ ID NO:22；c)H-FR1：SEQ ID NO:2，H-FR2：SEQ ID NO:9，H-FR3：SEQ ID NO:15和H-FR4：SEQ ID NO:22；d)H-FR1：SEQ ID NO:1，H-FR2：SEQ ID NO:7，H-FR3：SEQ ID NO:16和H-FR4：SEQ ID NO:22；e)H-FR1：SEQ ID NO:3，H-FR2：SEQ ID NO:10，H-FR3：SEQ ID NO:17和H-FR4：SEQ ID NO:23；f)H-FR1：SEQ ID NO:3，H-FR2：SEQ ID NO:7，H-FR3：SEQ ID NO:17和H-FR4：SEQ ID NO:23；g)H-FR1：SEQ ID NO:3，H-FR2：SEQ ID NO:7，H-FR3：SEQ ID NO:18和H-FR4：SEQ ID NO:23。
- 根据权利要求1-22中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包括抗体或抗原结合片段。
- 根据权利要求23所述的嵌合抗原受体，其中所述抗原结合片段选自下组：Fab，Fab’，F(ab)2，Fv片段，F(ab’)2，scFv，di-scFv，VHH和/或dAb。
- 根据权利要求1-24中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包括VHH。
- 根据权利要求25所述的嵌合抗原受体，其中所述VHH靶向CD22。
- 根据权利要求1-26中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包含SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求1-27中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向部分包含SEQ ID NO:24至SEQ ID NO:30中任一项所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求1-28中任一项所述的嵌合抗原受体，其包含跨膜结构域。
- 根据权利要求29所述的嵌合抗原受体，其中所述跨膜结构域包含源自选自下述蛋白的跨膜结构域或其组合：CD8、CD28、4-1BB、CD4、CD27、CD7、PD-1、TRAC、TRBC、CD3ε、CD5、ICOS、OX40、NKG2D、2B4、CD244、FcεRIγ、BTLA、CD30、GITR、HVEM、DAP10、CD2、NKG2C、LIGHT、DAP12，CD40L、TIM1、CD226、DR3、CD45、CD80、CD86、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD134、CD137、CD154和SLAM。
- 根据权利要求29-30中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述跨膜结构域包括源自CD8 的跨膜结构域。
- 根据权利要求29-31中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述跨膜结构域包含SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求29-32中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述跨膜结构域的N端与所述靶向部分的C端连接。
- 根据权利要求1-33中任一项所述的嵌合抗原受体，其包含共刺激信号传导结构域。
- 根据权利要求34所述的嵌合抗原受体，其中所述共刺激信号传导结构域包含源自选自下述蛋白的共刺激信号传导结构域或其组合：CD28、CD137、CD27、CD2、CD7、CD8、OX40、CD226、DR3、SLAM、CDS、ICAM-1、NKG2D、NKG2C、B7-H3、2B4、FcεRIγ、BTLA、GITR、HVEM、DAP10、DAP12、CD30、CD40、CD40L、TIM1、PD-1、LFA-1、LIGHT、JAML、CD244、CD100、ICOS、CD83的配体、CD40和MyD88。
- 根据权利要求34-35中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述共刺激信号传导结构域包括源自CD137的共刺激信号传导结构域。
- 根据权利要求34-36中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述共刺激信号传导结构域包含如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求34-37中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述共刺激信号传导结构域的N端与所述跨膜结构域的C端连接。
- 根据权利要求1-38中任一项所述的嵌合抗原受体，其包含胞内信号传导结构域。
- 根据权利要求39所述的嵌合抗原受体，其中所述胞内信号传导结构域包含源自选自下述蛋白的胞内信号传导结构域或其组合：CD3zeta、CD3delta、CD3gamma、CD3ε、CD79a、CD79b、FceRIγ、FceRIβ、FcγRIIa、牛白血病病毒gp30、Epstein-Barr病毒(EBV)LMP2A、猿免疫缺陷病毒PBj14Nef、卡波西肉瘤疱疹病毒(HSKV)、DAP10和DAP-12。
- 根据权利要求39-40中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述胞内信号传导结构域包括源自CD3zeta的胞内信号传导结构域。
- 根据权利要求39-41中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述胞内信号传导结构域包含如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求39-42中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述胞内信号传导结构域的N端与所述共刺激信号传导结构域的C端连接。
- 根据权利要求1-43中任一项所述的嵌合抗原受体，其包含SEQ ID NO:38至SEQ ID NO:44中任一项所示的氨基酸序列。
- 分离的抗原结合蛋白，其以约2E-08M或以下的K D值与CD22蛋白特异性结合。
- 根据权利要求45所述的分离的抗原结合蛋白，其包含HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求46所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述HCDR3包含SEQ ID NO:19至SEQ ID NO:21中任一项所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求45-47中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求48所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述HCDR2包含SEQ ID NO:11至SEQ ID NO:12中任一项所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求45-49中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含HCDR1，所述HCDR1包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求50所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述HCDR1包含SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:6中任一项所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求45-51中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含SEQ ID NO:55所示的重链可变区中的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
- 根据权利要求45-52中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含SEQ ID NO:24至SEQ ID NO:30中任一项所示的重链可变区中的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
- 根据权利要求45-53中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包括重链可变区VH，所述重链可变区包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列；所述HCDR2包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列；以及所述HCDR1包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求54所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述HCDR3包含SEQ ID NO:19至SEQ ID NO:21中任一项所示的氨基酸序列；所述HCDR2包含SEQ ID NO:11至SEQ ID NO:12中任一项所示的氨基酸序列；以及所述HCDR1包含SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:6中任一项所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求54-55中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述HCDR1、HCDR2和HCDR3包含选自下述的任意一组的氨基酸序列：a)HCDR1：SEQ ID NO:4，HCDR2：SEQ ID NO:11，和HCDR3：SEQ ID NO:19；b)HCDR1：SEQ ID NO:5，HCDR2：SEQ ID NO:12，和HCDR3：SEQ ID NO:20；和c)HCDR1：SEQ ID NO:6，HCDR2：SEQ ID NO:12，和HCDR3：SEQ ID NO:21。
- 根据权利要求45-56中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR1，所述H-FR1的C末端与所述HCDR1的N末端直接或间接地相连，且所述H-FR1包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求57所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR1包含SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:3中任一项所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求45-58中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR2，所述H-FR2位于所述HCDR1与所述HCDR2之间，且所述H-FR2包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求59所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR2包含SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:10中任一项所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求45-60中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR3，所述H-FR3位于所述HCDR2与所述HCDR3之间，且所述H-FR3包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求61所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR3包含SEQ ID NO:13至SEQ ID NO:18中任一项所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求45-62中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR4，所述H-FR4的N末端与所述HCDR3的C末端直接或间接地相连，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求63所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR4包含SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:23中任一项所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求45-64中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4，所述H-FR1包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列；所述H-FR2包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列；所述H-FR3包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列；以及所述H-FR4包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求65所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR1包含SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:3中任一项所示的氨基酸序列；所述H-FR2包含SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:10中任一项所示的氨基酸序列；所述H-FR3包含SEQ ID NO:13至SEQ ID NO:18中任一项所示的氨基酸序列；以及所述H-FR4包含SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:23中任一项所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求65-66中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR1、H-FR2、H-FR3和H-FR4包含选自下述的任意一组氨基酸序列：a)H-FR1：SEQ ID NO:1，H-FR2：SEQ ID NO:7，H-FR3：SEQ ID NO:13和H-FR4：SEQ ID NO:22；b)H-FR1：SEQ ID NO:2，H-FR2：SEQ ID NO:8，H-FR3：SEQ ID NO:14和H-FR4：SEQ ID NO:22；c)H-FR1：SEQ ID NO:2，H-FR2：SEQ ID NO:9，H-FR3：SEQ ID NO:15和H-FR4：SEQ ID NO:22；d)H-FR1：SEQ ID NO:1，H-FR2：SEQ ID NO:7，H-FR3：SEQ ID NO:16和H-FR4：SEQ ID NO:22；e)H-FR1：SEQ ID NO:3，H-FR2：SEQ ID NO:10，H-FR3：SEQ ID NO:17和H-FR4：SEQ ID NO:23；f)H-FR1：SEQ ID NO:3，H-FR2：SEQ ID NO:7，H-FR3：SEQ ID NO:17和H-FR4：SEQ ID NO:23；g)H-FR1：SEQ ID NO:3，H-FR2：SEQ ID NO:7，H-FR3：SEQ ID NO:18和H-FR4：SEQ ID NO:23。
- 根据权利要求45-67中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含重链可变区VH，所述VH包含SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求68所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述VH包含SEQ ID NO:24至SEQ ID NO:30中任一项所示的氨基酸序列。
- 根据权利要求45-69中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包括抗体或其抗原结合片段。
- 根据权利要求70所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合片段选自下组：Fab，Fab’，F(ab)2，Fv片段，F(ab’)2，scFv，di-scFv，VHH和dAb。
- 根据权利要求45-71中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包括VHH或其抗原结合片段。
- 根据权利要求70-72中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗体选自下组：单克隆抗体、人源化抗体、嵌合抗体和全人源抗体。
- 根据权利要求45-73中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含SEQ ID NO:24至SEQ ID NO:30中任一项所示的氨基酸序列。
- 多肽，其包含权利要求1-44中任一项所述的嵌合抗原受体和/或权利要求45-74中任一项所述的分离的抗原结合蛋白。
- 免疫缀合物，其包含权利要求45-74中任一项所述的分离的抗原结合蛋白。
- 分离的核酸分子，其编码权利要求1-44中任一项所述的嵌合抗原受体，权利要求45-74中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，或者权利要求75所述的多肽。
- 载体，其包含权利要求77所述的分离的核酸分子。
- 细胞，其包含权利要求1-44中任一项所述的嵌合抗原受体，权利要求45-74中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，权利要求75所述的多肽，权利要求76所述的免疫缀合物，权利要求77所述的分离的核酸分子和/或权利要求78所述的载体。
- 根据权利要求79所述的细胞，其包括免疫细胞。
- 根据权利要求80所述的细胞，其中所述免疫细胞选自下组：T细胞、B细胞、天然杀伤细胞(NK细胞)、巨噬细胞、NKT细胞、单核细胞、树突状细胞、粒细胞、淋巴细胞、白细胞和/或外周血单个核细胞。
- 根据权利要求81所述的细胞，其中所述细胞包括T细胞。
- 制备权利要求1-44中任一项所述的嵌合抗原受体，权利要求45-74中任一项所述的分离的抗原结合蛋白和/或权利要求75所述的多肽的方法，所述方法包括在使得所述的分离的抗原结合蛋白和/或所述的多肽表达的条件下，培养权利要求79-82中任一项所述的细胞。
- 药物组合物，其包含权利要求1-44中任一项所述的嵌合抗原受体，权利要求45-74中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，权利要求75所述的多肽，权利要求76所述的免疫缀合物，权利要求77所述的分离的核酸分子，权利要求78所述的载体，权利要求79-82中任一项所述的细胞，和/或药学上可接受的佐剂和/或赋形剂。
- 一种用于检测CD22蛋白的方法，其包括：施用权利要求45-74中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，权利要求75所述的多肽或权利要求76所述的免疫缀合物。
- 一种CD22蛋白的检测试剂盒，其包含权利要求45-74中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，权利要求75所述的多肽或权利要求76所述的免疫缀合物。
- 权利要求45-74中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，权利要求75所述的多肽或权利要求76所述的免疫缀合物在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测CD22蛋白的存在和/或含量。
- 权利要求1-44中任一项所述的嵌合抗原受体，权利要求45-74中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，权利要求75所述的多肽，权利要求76所述的免疫缀合物，权利要求77所述的分离的核酸分子，权利要求78所述的载体和/或权利要求79-82中任一项所述的细胞在制备预防和/或治疗肿瘤的药物中的用途。
- 根据权利要求88所述的用途，其中所述肿瘤包括血液瘤。
- 根据权利要求88-89中任一项所述的用途，其中所述肿瘤包括与CD22的表达相关的肿瘤。
- 根据权利要求88-90中任一项所述的用途，其中所述肿瘤选自下组：白血病和淋巴瘤。
- 权利要求1-44中任一项所述的嵌合抗原受体，权利要求45-74中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，权利要求75所述的多肽，权利要求76所述的免疫缀合物，权利要求77所述的分离的核酸分子，权利要求78所述的载体，和/或权利要求79-82中任一项所述的细胞，其用于预防和/或治疗肿瘤。
- 根据权利要求92所述的用途，其中所述肿瘤包括血液瘤。
- 根据权利要求92-93中任一项所述的用途，其中所述肿瘤包括与CD22的表达相关的肿瘤。
- 根据权利要求92-94中任一项所述的用途，其中所述肿瘤选自下组：白血病和淋巴瘤。
- 一种预防和/或治疗疾病或病症的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的权利要求1-44中任一项所述的嵌合抗原受体，权利要求45-74中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，权利要求75所述的多肽，权利要求76所述的免疫缀合物，权利要求77所述的分离的核酸分子，权利要求78所述的载体，和/或权利要求79-82中任一项所述的细胞。
- 根据权利要求96所述的方法，其中所述肿瘤包括血液瘤。
- 根据权利要求96-97中任一项所述的方法，其中所述肿瘤包括与CD22的表达相关的肿瘤。
- 根据权利要求96-98中任一项所述的方法，其中所述肿瘤选自下组：白血病和血液瘤。
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