JP2015506380A - ウイルス感染の治療のためのピペリジノ−ピリミジン誘導体 - Google Patents

Abstract

本発明は、ピペリジノ−ピリミジン誘導体、それらの調製のための方法、医薬組成物、およびウイルス感染の治療におけるそれらの使用に関する。【化１】

Description

本発明は、ピペリジノ−ピリミジン誘導体、それらの調製のための方法、医薬組成物、およびウイルス感染の治療におけるそれらの使用に関する。

本発明は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）の調節、または活性化作用（ａｇｏｎｉｓｍ）が関与する、ウイルス感染、免疫疾患または炎症性疾患の治療におけるピペリジノ−ピリミジン誘導体の使用に関する。Ｔｏｌｌ様受容体は、細胞外ロイシンに富んだ領域および保存領域を含む細胞質拡張を特徴とする主要な膜貫通タンパク質である。自然免疫系は、特定のタイプの免疫細胞の細胞表面上で発現されるこれらのＴＬＲを介して病原体関連分子パターンを認識し得る。外来病原体の認識により、サイトカインの産生および食細胞における共刺激分子の上方制御が活性化される。これにより、Ｔ細胞挙動が調節される。

ほとんどの哺乳類種は、１０〜１５種のＴｏｌｌ様受容体を有すると推定されている。（ＴＬＲ１〜ＴＬＲ１３と命名された）１３種のＴＬＲが、ヒトおよびマウスでともに認識されており、これらの多くの同等の形態が、他の哺乳類種において見出された。しかしながら、ヒトに見られる特定のＴＬＲに相当するものが、全ての哺乳動物において存在するわけではない。例えば、ヒトにおけるＴＬＲ１０と類似したタンパク質をコードする遺伝子が、マウスにおいて存在するが、過去のどこかの時点で、レトロウイルスによって損傷されたようである。一方、マウスは、ヒトにおいては示されないＴＬＲ１１、１２、および１３を発現する。他の哺乳動物は、ヒトに見られないＴＬＲを発現し得る。他の非哺乳類種は、トラフグに見られるＴＬＲ１４によって示されるような、哺乳動物と異なるＴＬＲを有し得る。これにより、ヒト先天性免疫のモデルとして実験動物を使用するプロセスが複雑になり得る。

Ｔｏｌｌ様受容体の詳細な概説については、以下の学術論文、Ｈｏｆｆｍａｎｎ，Ｊ．Ａ．，Ｎａｔｕｒｅ，４２６，ｐ３３−３８，２００３；Ａｋｉｒａ，Ｓ．，Ｔａｋｅｄａ，Ｋ．，ａｎｄ Ｋａｉｓｈｏ，Ｔ．，Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２１，ｐ３３５−３７６，２００３；Ｕｌｅｖｉｔｃｈ，Ｒ．Ｊ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ：Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４，ｐ５１２−５２０，２００４を参照されたい。

国際公開第２００６／１１７６７０号パンフレットにおいてプリン誘導体、国際公開第９８／０１４４８号パンフレットおよび国際公開第９９／２８３２１号パンフレットにおいてアデニン誘導体、および国際公開第２００９／０６７０８１号パンフレットにおいてピリミジンなどの、Ｔｏｌｌ様受容体に対する活性を示す化合物が既に記載されている。

しかしながら、先行技術の化合物と比較して、好ましい選択性、より高い効力、より高い代謝的安定性、および向上した安全性プロフィール（例えば、低下したＣＶＳリスク）を有する新規なＴｏｌｌ様受容体モジュレータに対する強い必要性がある。

本発明によれば、式（Ｉ）

（式中、
Ａが、任意の立体化学配置におけるＣＨ_２、ＮＣＯＲ^２、ＣＨＲ^３およびＣＲ^３Ｒ^３からなる群から選択され、
Ｂが、任意の立体化学配置におけるＣＨ_２、ＮＣＯＲ^４、ＣＨＲ^３およびＣＲ^３Ｒ^３からなる群から選択され、
ただし、ＡがＮＣＯＲ^２である場合、ＢはＮＣＯＲ^４ではなく、ＡおよびＢの両方が、ＣＨ_２、ＣＨＲ^３またはＣＲ^３Ｒ^３から選択されるわけではなく、
Ｘが、任意の立体化学配置におけるＣＨ_２またはＣＨＲ^５から選択され、
Ｒ^１が、以下のもの：Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜７シクロアルキル、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、アミノ、ニトリル、アルコキシ、アルコキシ（Ｃ_１〜４）アルキル、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルバメートまたはスルホンのうちの１つまたは複数で任意に置換されるＣ_１〜８アルキルから選択され、
Ｒ^２が、置換または非置換のＣ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜７シクロアルキル、複素環、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルから選択され、これらのそれぞれが、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ_１〜６アルキル、ジ−（Ｃ_１〜６）アルキルアミノ、Ｃ_１〜６アルキルアミノ、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_１〜６アルコキシ、Ｃ_３〜６シクロアルキル、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド、複素環、アリール、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルまたはニトリルから独立して選択される１つまたは複数の置換基で任意に置換され、
Ｒ^３が、水素、置換または非置換のＣ_１〜６アルキル、アルコキシ、アルコキシ−（Ｃ_１〜４）アルキル、Ｃ_３〜７シクロアルキル、Ｃ_４〜７複素環、芳香族、二環式複素環、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルから選択され、これらのそれぞれが、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ_１〜６アルキル、ジ−（Ｃ_１〜６）アルキルアミノ、Ｃ_１〜６アルキルアミノ、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_１〜６アルコキシ、Ｃ_３〜６シクロアルキル、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド、複素環、アリール、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルまたはニトリルから独立して選択される１つまたは複数の置換基で任意に置換され、
Ｒ^４が、置換または非置換のＣ_１〜７アルキル、アルコキシ、アルコキシ−（Ｃ_１〜４）アルキル、アリールまたはＣ_３〜７シクロアルキルから選択され、これらのそれぞれが、複素環、ニトリル、ヘテロアリールアルキルまたはヘテロアリールで任意に置換され、
Ｒ^５が、芳香族、二環式複素環、アリール、ヘテロアリールから選択され、これらのそれぞれが、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ_１〜６アルキル、ジ−（Ｃ_１〜６）アルキルアミノ、Ｃ_１〜６アルキルアミノ、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_１〜６アルコキシ、Ｃ_３〜６シクロアルキル、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド、複素環、アリール、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルまたはニトリルから独立して選択される１つまたは複数の置換基で任意に置換される）
の化合物またはその薬学的に許容できる塩、互変異性体、溶媒和物もしくは多形体が提供される。

第１の実施形態において、本発明は、式（Ｉ）（式中、Ｒ１がブチルであり、Ａ、Ｂ、およびＸが上に規定されるとおりである）の化合物を提供する。

さらなる実施形態において、本発明は、式（Ｉ）（式中、Ｒ^１が、ヒドロキシルで置換されるＣ_４〜８アルキルであり、Ａ、Ｂ、およびＸが上に規定されるとおりである）の化合物に関する。

別の実施形態は、式Ｉ（式中、ヒドロキシルで置換されるＣ_４〜８アルキルであるＲ^１が、以下のもの

のうちの１つである）の化合物に関する。

さらに、本発明は、式（Ｉ）（式中、ＸがＣＨ_２であり、Ａ、およびＢが上に規定されるとおりである）の化合物も提供する。

別の実施形態において、本発明は、式（Ｉ）（式中、ＸがＣＨ_２であり、ＡがＣＨ_２であり、Ｂが上に規定されるとおりである）の化合物を提供する。

さらに、本発明は、式（Ｉ）（式中、Ｒ^２が、Ｃ_１〜３アルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、ニトリル、複素環、カルボン酸エステル、またはカルボン酸アミドでさらに置換され得る以下の例：

のうちの１つである）の化合物に関する。

好ましい化合物は、それぞれ以下の化学構造を有する化合物番号３および１である：

本発明に係る他の好ましい化合物は、以下の化学構造を有する化合物である：

式（Ｉ）の化合物およびその薬学的に許容できる塩、互変異性体、溶媒和物もしくは多形体は、医薬品として、特に、Ｔｏｌｌ様受容体（特に、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８）活性のモジュレータとしての活性を有する。

さらなる態様において、本発明は、１つまたは複数の薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤または担体とともに、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物もしくは多形体を含む医薬組成物を提供する。

さらに、本発明に係る式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物もしくは多形体、または式（Ｉ）の前記化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物もしくは多形体を含む医薬組成物は、薬剤として使用され得る。

本発明の別の態様は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物もしくは多形体、または式（Ｉ）の前記化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物もしくは多形体を含む前記医薬組成物が、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８の調節が関与する疾患の治療に相応に使用され得ることである。

「アルキル」という用語は、規定数の炭素原子を含有する直鎖状または分枝鎖状飽和脂肪族炭化水素を指す。

「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を指す。

「アルケニル」という用語は、少なくとも２つの炭素原子および少なくとも１つの炭素−炭素二重結合からなる上に定義されるアルキルを指す。

「アルキニル」という用語は、少なくとも２つの炭素原子および少なくとも１つの炭素−炭素三重結合からなる上に定義されるアルキルを指す。

「シクロアルキル」という用語は、規定数の炭素原子を含有する炭素環を指す。

「ヘテロアリール」という用語は、Ｎ、ＯおよびＳから、特に、ＮおよびＯから選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む、「アリール」という用語について定義される芳香環構造を意味する。

「アリール」という用語は、Ｎ、ＯおよびＳから、特に、ＮおよびＯから選択される１つまたは２つのヘテロ原子を任意に含む芳香環構造を意味する。前記芳香環構造は、４つ、５つ、６つまたは７つの環原子を有し得る。特に、前記芳香環構造は、５つまたは６つの環原子を有し得る。

「二環式複素環」という用語は、２つの縮合芳香環を含む、「アリール」という用語について定義される芳香環構造を意味する。各環は、Ｎ、ＯおよびＳから、特に、ＮおよびＯから選択されるヘテロ原子を任意に含む。

「アリールアルキル」という用語は、アルキル基で任意に置換される、「アリール」という用語について定義される芳香環構造を意味する。

「ヘテロアリールアルキル」という用語は、アルキル基で任意に置換される、「ヘテロアリール」という用語について定義される芳香環構造を意味する。

「アルコキシ」という用語は、例えば、メトキシ基またはエトキシ基のような、酸素に単結合されるアルキル（炭素および水素鎖）基を指す。

複素環は、飽和または部分的に飽和した分子を指し、エチルオキシド、テトラヒドロフラン、ジオキサンまたは他の環状エーテルを含む。窒素を含有する複素環としては、例えば、アゼチジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジンなどが挙げられる。他の複素環としては、例えば、チオモルホリン、ジオキソリニル（ｄｉｏｘｏｌｉｎｙｌ）、および環状スルホンが挙げられる。

ヘテロアリール基は、芳香族性の複素環式基である。これらは、単環式、二環式、または多環式であり、Ｎ、ＯまたはＳから選択される１つまたは複数のヘテロ原子を含有する。ヘテロアリール基は、例えば、イミダゾリル、イソオキサゾリル、フリル、オキサゾリル、ピロリル、ピリドニル（ｐｙｒｉｄｏｎｙｌ）、ピリジル、ピリダジニル、またはピラジニルであり得る。

式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容できる塩は、その酸付加塩および塩基塩を含む。好適な酸付加塩は、非毒性塩を形成する酸から形成される。好適な塩基塩は、非毒性塩を形成する塩基から形成される。

本発明の化合物はまた、非溶媒和および溶媒和形態で存在してもよい。「溶媒和物」という用語は、本発明の化合物および１つまたは複数の薬学的に許容できる溶媒分子、例えば、エタノールを含む分子錯体を表すために、本明細書において使用される。

「多形体」という用語は、本発明の化合物が２つ以上の形態または結晶構造で存在する能力を指す。

本発明の化合物は、結晶性または非晶質製品として投与され得る。それらは、沈殿、結晶化、凍結乾燥、噴霧乾燥、または蒸発乾燥などの方法によって、例えば、固体プラグ、粉末、またはフィルムとして得られる。それらは、単独でまたは本発明の１つまたは複数の他の化合物と組み合わせて、または１つまたは複数の他の薬剤と組み合わせて投与され得る。一般に、それらは、１つまたは複数の薬学的に許容できる賦形剤とともに製剤として投与されるであろう。「賦形剤」という用語は、本発明の化合物以外の任意の成分を表すために、本明細書において使用される。賦形剤の選択は、具体的な投与形態、溶解性および安定性に対する賦形剤の影響、および剤形の性質などの要因に大きく左右される。

本発明の化合物またはその任意のサブグループは、投与のために様々な医薬品形態へと製剤化され得る。適切な組成物として、薬剤を全身投与するのに通常用いられる全ての組成物が挙げられ得る。本発明の医薬組成物を調製するために、活性成分として、任意に付加塩形態の、有効量の特定の化合物が、薬学的に許容できる担体と緊密に混合して組み合わされ、その担体は、投与のために必要な製剤の形態に応じて様々な形態を取り得る。これらの医薬組成物は、例えば、経口、直腸、または経皮投与に好適な単一の剤形であるのが望ましい。例えば、経口剤形の組成物を調製する際、例えば、懸濁剤、シロップ、エリキシル剤、乳剤、および液剤（ｓｏｌｕｔｉｏｎ）などの経口液体製剤の場合、水、グリコール、油、アルコールなど；または粉剤、丸薬、カプセル剤、および錠剤の場合、でんぷん、糖、カオリン、希釈剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤などの固体担体などの通常の医薬品媒体のいずれも用いられ得る。投与しやすさのため、錠剤およびカプセル剤が、最も有利な経口投薬単位形態であり、その場合、固体医薬担体が明らかに用いられる。使用の直前に、液体形態に変換され得る固体形態製剤も含まれる。経皮投与に好適な組成物において、担体は、皮膚に大きな有害作用を与えない、少ない割合の任意の性質の好適な添加剤と任意に組み合わされた、浸透促進剤および／または好適な湿潤剤を任意に含む。前記添加剤は、皮膚への投与を容易にすることができ、および／または所望の組成物を調製するのに役立ち得る。これらの組成物は、様々な方法で、例えば、経皮パッチとして、スポットオン剤（ｓｐｏｔ−ｏｎ）として、軟膏として投与され得る。本発明の化合物はまた、この方法による投与のための当該技術分野において用いられる方法および製剤によって、吸入または注入（ｉｎｓｕｆｆｌａｔｉｏｎ）によって投与され得る。したがって、一般に、本発明の化合物は、液剤、懸濁剤または乾燥粉末の形態で肺に投与され得る。

投与しやすさおよび投与量の均一性のために、単位剤形で上記の医薬組成物を製剤化するのが特に有利である。本明細書において使用される際の単位剤形は、単一の投薬として好適な物理的に別個の単位を指し、各単位は、所要の医薬担体とともに所望の治療効果を生じるように計算された所定の量の活性成分を含有する。このような単位剤形の例は、錠剤（分割錠またはコーティング錠を含む）、カプセル剤、丸薬、粉末パケット、カシェ剤（ｗａｆｅｒ）、坐剤、注射用液剤または懸濁剤など、およびそれらの分割された複数のもの（ｓｅｇｒｅｇａｔｅｄ ｍｕｌｔｉｐｌｅ）である。

感染症の治療の当業者は、以下に示される試験結果から有効量を決定することができるであろう。一般に、有効な一日当たりの量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重であろうと考えられる。１日を通して適切な間隔で、２回、３回、４回またはそれ以上の分割用量（ｓｕｂ−ｄｏｓｅ）として必要な用量を投与するのが適切なことがある。前記分割用量は、例えば、単位剤形当たり１〜１０００ｍｇ、特に、５〜２００ｍｇの活性成分を含有する単位剤形として製剤化され得る。

正確な投薬量および投与の頻度は、当業者に周知のように、使用される式（Ｉ）の特定の化合物、治療される特定の病態、治療される病態の重症度、特定の患者の年齢、体重および全身的な身体状態ならびに個体が摂取している可能性のある他の薬剤に応じて決まる。さらに、有効量が、治療される被験体の応答に応じて、および／または本発明の化合物を処方する医師の評価に応じて、減少または増加され得ることが明らかである。したがって、上記の有効量の範囲は、指針に過ぎず、本発明の範囲または使用を、いかなる程度であれ限定することは意図されていない。

一般的な合成方法
スキーム１

式（Ｉ）（式中、ＢがＮＣＯＲ^４である）の化合物を、スキーム１にしたがって調製した。ＩＩＩの調製において、炭酸グアニジンが、エタノールなどのアルコール溶媒中で、塩基（例えばナトリウムエトキシド）とともにまたはそれを伴わずに使用され得ることが分かった。クロロピリミドＩＶを得るためのヒドロキシピリミジン環（ＩＩＩ）の塩素化は、１つの溶媒としてのＰＯＣｌ_３などの塩素化剤を用いて、他の溶媒（すなわちジクロロメタン）とともに、または塩基、例えばＮ，Ｎ−ジメチルアニリンと組み合わせてのいずれかで行われ得る。中間体Ｖを得るための塩素の置換は、塩基（例えばＤＩＰＥＡ）とともにまたはそれを伴わずに、過剰のアミン（ＮＨ_２−Ｒ^１）を用いて、極性溶媒（例えば、アセトニトリルまたはＤＭＦ）中で、高温で行われ得る。中間体ＶＩを得るためのＶのＢｏｃ保護は、ジクロロメタンまたはＴＨＦなどの非極性溶媒中で、触媒Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を用いて行われ得る。Ｎ−ベンジル（Ｂｎ）基の除去は、接触水素化を介して行われ得る。式Ｉのアミド生成物の形成は、ＶＩＩを、過剰の塩基（例えばトリエチルアミン）と組み合わせて酸塩化物と；カップリング剤（例えばＨＢＴＵ）および塩基（例えばトリエチルアミン）と組み合わせてカルボン酸と反応させることによって行われ得る。

式Ｉの化合物の調製
スキーム２．

Ｂの調製

エタノール（１７０ｍＬ）中のＡ（１９．５ｇ、６８．７ｍｍｏｌ）および炭酸グアニジン（１９．５ｇ、４１．２３ｍｍｏｌ）の懸濁液を、１２０℃で１６時間加熱した。溶媒を減圧下で除去し、アセトニトリル中で再構成し（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅ）、ここで、粗生成物が沈殿し、それをろ過によって単離した。固体を、さらに精製せずに、次の工程にそのまま使用した。
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ ２．３５〜２．４６（ｍ，２Ｈ）、２．５７〜２．６５（ｍ，２Ｈ）、３．０４（ｓ，２Ｈ）、３．６０（ｓ，２Ｈ）、６．２８（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ）、７．２７（ｄｔ，Ｊ＝８．７、４．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．３１〜７．３６（ｍ，４Ｈ）、１０．７４（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）
ＭＳ ｍ／ｚ：２５７［Ｍ＋Ｈ^＋］

Ｃの調製

オキシ塩化ホスホリル（ＰＯＣｌ_３）（９０ｍＬ）中のＢ（８．２ｇ、３２ｍｍｏｌ）の溶液を、１００℃で１６時間加熱した。冷ました後、溶媒を減圧下で除去し、残渣を、酢酸エチル（１５０ｍＬ）に溶解させ、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（３×１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を組み合わせて、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、固体をろ過によって除去し、ろ液の溶媒を減圧下で除去した。固体を、さらに精製せずに、次の工程に使用した。
ＭＳ ｍ／ｚ：２７５［Ｍ＋Ｈ^＋］

Ｄの調製

ジオキサン（２５ｍＬ）およびｎ−ブチルアミン（１．５ｍＬ、１５．２ｍｍｏｌ）中のＣ（２．７８ｇ、１０．１２ｍｍｏｌ）の溶液を、１２０℃で１６時間加熱した。室温に冷ました後、溶媒を減圧下で除去し、ジクロロメタンからジクロロメタン中５％のメタノールの勾配を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、粗生成物を精製した。
^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ ｐｐｍ ０．９０〜１．０１（ｍ，３Ｈ）、１．２８〜１．４６（ｍ，２Ｈ）、１．４９〜１．６４（ｍ，２Ｈ）、２．７０〜２．８１（ｍ，４Ｈ）、３．２１（ｓ，２Ｈ）、３．４４（ｔｄ，Ｊ＝７．１、５．７Ｈｚ、２Ｈ）、３．７４（ｓ，２Ｈ）、４．４７（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）、５．２１〜５．４６（ｍ，２Ｈ）、７．３０〜７．４０（ｍ，５Ｈ）
ＭＳ ｍ／ｚ：３１２［Ｍ＋Ｈ^＋］

Ｅの調製

ＴＨＦ（６０ｍＬ）中のＤ（３ｇ、９．６３ｍｍｏｌ）、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１２．６ｇ、５７．８ｍｍｏｌ）および４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（０．１１８ｇ、０．１ｍｍｏｌ）の溶液を、４時間にわたって８０℃まで加熱した。反応物を室温に冷まし、溶媒を減圧下で除去した。ヘプタンから酢酸エチルの勾配を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、粗生成物を精製した。
ＭＳ ｍ／ｚ：６１２［Ｍ＋Ｈ^＋］

Ｆの調製

Ｅ（０．７１１ｇ、１．１６ｍｍｏｌ）エタノール（６ｍＬ）の溶液に、０．２ｗ／ｗ当量のＰｄ／Ｃ（１０％、湿潤）（７１ｍｇ）を加えた。フラスコを密閉し；大気を真空によって除去した。フラスコに、水素ガスで満たしたバルーンを取り付けた。混合物を、室温で１６時間撹拌する。混合物を充填セライト上でろ過し、ろ液の溶媒を減圧下で除去した。ジクロロメタンからジクロロメタン中５％のメタノールの勾配を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、粗生成物を精製した。
^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ ｐｐｍ ０．９０（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ、３Ｈ）、１．１９〜１．３６（ｍ，２Ｈ）、１．４１〜１．５０（ｍ，２７Ｈ）、１．５１〜１．５８（ｍ，２Ｈ）、１．６４（ｓ，２Ｈ）、２．９１〜３．０２（ｍ，２Ｈ）、３．２６（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ、２Ｈ）、３．７１〜３．８２（ｍ，２Ｈ）、３．８６（ｓ，１Ｈ）
ＭＳ ｍ／ｚ：５２３［Ｍ＋Ｈ^＋］

化合物１の調製

ジクロロメタン（２ｍＬ）中の、Ｆ（１００ｍｇ、０．１９１ｍｍｏｌ）と、ＤＭＡＰ（２ｍｇ、０．０．１９ｍｍｏｌ）と、Ｅｔ_３Ｎ（０．０８１ｍＬ、０．５７６ｍｍｏｌ）との混合物に、０℃でシクロブタンカルボニルクロリド（２５ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温に達するまで放置し、１６時間撹拌した。ＨＣｌ（１Ｎ、１ｍＬ）を加え、反応物をさらに３０分間撹拌し、次に、ＮａＨＣＯ_３（飽和水溶液、１０ｍＬ）を加えた。混合物を、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、組み合わされた有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、固体をろ過によって除去し、ろ液の溶媒を減圧下で除去した。ヘプタンから酢酸エチルの勾配を用いたシリカカラムクロマトグラフィーによって、粗生成物を精製した。最良の画分を合わせ、溶媒を、減圧下で除去したところ、化合物１が得られた。
ＭＳ ｍ／ｚ：３０４［Ｍ＋Ｈ^＋］

実施例
式（Ｉ）（式中、ＡがＮＣＯＲ^２である）の化合物を、スキーム３にしたがって調製した。
スキーム３．

Ｈの調製

エタノール（５ｍＬ）中のＧ（０．５ｇ、１．７６ｍｍｏｌ）および炭酸グアニジン（１９０ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）の懸濁液を、１６時間にわたって加熱還流させた。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物がアセトニトリル中に沈殿し、それをろ過によって単離した。固体を、さらに精製せずに、次の工程にそのまま使用した。
ＭＳ ｍ／ｚ：２５７［Ｍ＋Ｈ^＋］

Ｉの調製

オキシ塩化ホスホリル（ＰＯＣｌ_３）（６５ｍＬ）中のＨ（６ｇ、２３．４ｍｍｏｌ）の溶液を、１００℃で３時間加熱した。冷ました後、溶媒を減圧下で除去し、残渣を、酢酸エチル（１５０ｍＬ）に溶解させ、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（３×１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を組み合わせて、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、固体をろ過によって除去し、ろ液の溶媒を減圧下で除去した。５％のメタノール中のジクロロメタンの勾配を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、粗固体を精製した。
ＭＳ ｍ／ｚ：２７５［Ｍ＋Ｈ^＋］

Ｊの調製

ＤＭＡ（２５ｍＬ）およびｎ−ブチルアミン（１．５ｍＬ、１５．２ｍｍｏｌ）中のＩ（２．７８ｇ、１０．１２ｍｍｏｌ）の溶液を、１２０℃で１６時間加熱した。室温に冷ました後、溶媒を減圧下で除去し、ジクロロメタンからジクロロメタン中３％のメタノールの勾配を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、粗生成物を精製した。
^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ ｐｐｍ ０．７６〜０．８７（ｍ，３Ｈ）、１．１６〜１．３５（ｍ，２Ｈ）、１．３８〜１．７１（ｍ，２Ｈ）、２．００（ｑｕｉｎ，Ｊ＝６．９Ｈｚ、２Ｈ）、２．６４（ｔｄ，Ｊ＝７．４、２．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．４６（ｄｄ，Ｊ＝１１．４、２．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．５２（ｄｄ，Ｊ＝５．１、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．７２（ｓ，２Ｈ）、３．８４（ｔｄ，Ｊ＝６．３、１．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．０６（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．４８（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ）、４．８９（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ、１Ｈ）、６．７２〜６．８０（ｍ，２Ｈ）、７．０２（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、７．２５（ｓ，１Ｈ）
ＭＳ ｍ／ｚ：３１２［Ｍ＋Ｈ^＋］

Ｋの調製

ＴＨＦ（５０ｍＬ）中のＪ（３ｇ、９．６３ｍｍｏｌ）、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１２．６ｇ、５７．８ｍｍｏｌ）および４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（０．１１８ｇ、０．１ｍｍｏｌ）の溶液を、４時間にわたって８０℃まで加熱した。反応物を室温に冷まし、溶媒を減圧下で除去した。ヘプタンから酢酸エチルの勾配を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、粗生成物を精製した。
ＭＳ ｍ／ｚ：６１２［Ｍ＋Ｈ^＋］

Ｌの調製

Ｋ（０．７１１ｇ．１．１６ｍｍｏｌ）エタノール（６ｍＬ）の溶液に、０．２ｗ／ｗ当量のＰｄ／Ｃ（１０％、湿潤）（０．０７１ｇ）を加え、水素（バルーン）の雰囲気下で１６時間撹拌した。混合物を充填セライト上でろ過し、ろ液の溶媒を減圧下で除去した。ヘプタンから酢酸エチルの勾配を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、粗生成物を精製した。
ＭＳ ｍ／ｚ：５２３［Ｍ＋Ｈ^＋］

化合物２の調製

Ｌ（１００ｍｇ、０．１９１ｍｍｏｌ）の溶液に、ジクロロメタン（３ｍＬ）中のＥｔ_３Ｎ（５８ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）塩化ベンゾイル（３０ｍｇ、０．２１１ｍｍｏｌ）、およびＤＭＡＰ（２ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）を加え、次に、室温で１６時間撹拌した。これに、ＮａＨＣＯ_３（飽和水溶液、１０ｍＬ）を加え、混合物を、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を組み合わせて、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、固体をろ過によって除去し、ろ液の溶媒を減圧下で除去した。ジクロロメタンからジクロロメタン中５％のメタノールの勾配を用いたシリカカラムクロマトグラフィーによって、粗生成物を精製した。精製されたｂｏｃ保護された生成物を、イソプロパノール中のＨＣｌの添加によって脱保護した。

化合物３の調製

ＤＭＦ（３ｍＬ）中のＬ（９０ｍｇ、０．１７３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（３３ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（７２ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）および１−メチル−２−ピロールカルボン酸（２３ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌した。これに、ＮａＨＣＯ_３（飽和水溶液、１０ｍＬ）を加え、混合物を、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を組み合わせて、乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、固体をろ過によって除去し、ろ液の溶媒を減圧下で除去した。ジクロロメタンからジクロロメタン中３％のメタノールの勾配を用いたシリカカラムクロマトグラフィーによって、粗生成物を精製した。精製されたｂｏｃ保護された生成物を、イソプロパノール中のＨＣｌの添加によって脱保護した。

化合物４の調製

ジクロロメタン（２ｍＬ）中のＬ（１１０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、トリエチルアミン（６０ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）およびシクロプロパンカルボニルクロリド（２４ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１６時間撹拌した。これに、ＮａＨＣＯ_３（飽和水溶液、５０ｍＬ）を加え、混合物を、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を組み合わせて、乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、固体をろ過によって除去し、ろ液の溶媒を減圧下で除去した。ヘプタンから酢酸エチルの勾配を用いたシリカカラムクロマトグラフィーによって、粗生成物を精製した。精製されたｂｏｃ保護された生成物を、イソプロパノール中のＨＣｌの添加によって脱保護した。

表１：式（Ｉ）の化合物
生成物を、上述した方法のうちの１つによって調製した。表Ｉ Ａは、Ａ＝ＮＣＯＲ^２である化合物を表し、表Ｉ Ｂは、Ｂ＝ＮＣＯＲ^４である化合物を表し、表Ｉ Ｃは、それぞれ両方の位置異性体化合物を含む。

分析方法
全ての化合物を、ＬＣ−ＭＳによって特性評価した。以下のＬＣ−ＭＳ方法を使用した：

全ての分析を、デガッサを備えたバイナリポンプ、オートサンプラ、サーモスタットカラムコンパートメントおよびダイオードアレイ検出器からなるＡｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズの液体クロマトグラフィー（ＬＣ）システムに連結されたＡｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズのＬＣ／ＭＳＤ四重極を用いて行った。質量分析計（ＭＳ）を、正イオンモードでの大気圧エレクトロスプレーイオン化（ＡＰＩ−ＥＳ）源を用いて操作した。キャピラリ電圧を３０００Ｖに設定し、フラグメンタ電圧を７０Ｖに設定し、四重極温度を１００℃に維持した。乾燥ガス流量および温度値はそれぞれ、１２．０Ｌ／分および３５０℃であった。３５ｐｓｉｇの圧力で、窒素を噴霧器ガスとして使用した。データ収集を、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎソフトウェアを用いて行った。

２．６ｍＬ／分の流量で、３５℃でＹＭＣ ｐａｃｋ ＯＤＳ−ＡＱ Ｃ１８カラム（５０ｍｍの長さ×４．６ｍｍの内径；３μｍの粒子）において分析を行った。勾配溶離を、９５％（水＋０．１％のギ酸）／５％のアセトニトリルから５％（水＋０．１％のギ酸）／９５％のアセトニトリルへと４．８０分間で行い、次に、最終的な移動相組成物を、さらに１．００分間保持した。標準的な注入量は２μＬであった。収集範囲を、ＵＶ−ＰＤＡ検出器では１９０〜４００ｎｍおよびＭＳ検出器では１００〜１４００ｍ／ｚに設定した。

３００ＭＨｚのＵｌｔｒａｓｈｉｅｌｄ磁石を備えたＢＲＵＫＥＲ Ａｖａｎｃｅ ＩＩＩ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒを用いて行われるＮＭＲ分析。

生物学的アッセイの説明
ＴＬＲ７およびＴＬＲ８活性の評価
化合物がヒトＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８を活性化する能力を、ＴＬＲ７またはＴＬＲ８発現ベクターおよびＮＦκＢ−ｌｕｃレポーター構築物で一過的にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞を用いた細胞レポーターアッセイで評価した。一例として、ＴＬＲ発現構築物は、それぞれの野生型配列またはＴＬＲの２番目のロイシンリッチリピートの欠失を含む変異配列を発現する。このような変異ＴＬＲタンパク質は、アゴニスト活性化の影響をより受けやすいことが既に示されている（米国特許第７４９８４０９号明細書）。

簡潔に述べると、ＨＥＫ２９３細胞を、培養培地（１０％のＦＣＳおよび２ｍＭのグルタミンが補充されたＤＭＥＭ）中で成長させた。１０ｃｍの皿における細胞のトランスフェクションのために、細胞をトリプシン−ＥＤＴＡで剥がし、ＣＭＶ−ＴＬＲ７またはＴＬＲ８プラスミド（７５０ｎｇ）と、ＮＦκＢ−ｌｕｃプラスミド（３７５ｎｇ）と、トランスフェクション試薬との混合物でトランスフェクトし、加湿した５％のＣＯ２雰囲気中３７℃で、一晩インキュベートした。次に、トランスフェクトされた細胞をトリプシン−ＥＤＴＡで剥がし、ＰＢＳ中で洗浄し、１．６７×１０^５個の細胞／ｍＬの密度で培地に再懸濁させた。次に、３０マイクロリットルの細胞を、４％のＤＭＳＯ中の１０μＬの化合物が既に存在する、３８４ウェルプレートにおける各ウェル中に計量分配した。３７℃、５％のＣＯ２で６時間のインキュベーションの後、１５μｌのＳｔｅａｄｙ Ｌｉｔｅ Ｐｌｕｓ基質（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を各ウェルに加えることによって、ルシフェラーゼ活性を測定し、ＶｉｅｗＬｕｘ ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）において読み取りを行った。４通りに行った測定から用量反応曲線を作成した。アッセイの標準偏差より少なくとも２倍高い効果を誘発する濃度として定義される最低有効濃度（ＬＥＣ）値を、各化合物について求めた。

３８４ウェルプレートにおいて、ＣＭＶ−ＴＬＲ７構築物のみ（１．６７×１０^５個の細胞／ｍＬ）でトランスフェクトされた、ウェル当たり３０μＬの細胞とともに同様の希釈系列の化合物を用いて、化合物の毒性を、並行して決定した。ウェル当たり１５μＬのＡＴＰ ｌｉｔｅ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を加え、ＶｉｅｗＬｕｘ ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）において読み取ることによって、３７℃、５％のＣＯ２で６時間のインキュベーションの後の細胞生存率を測定した。データをＣＣ５０として報告した。

式（Ｉ）の化合物の生物学的活性。全ての化合物は、上述したＨＥＫ ２９３ ＴＯＸアッセイにおいて、２４ｕＭを超えるＣＣ５０を示した。

表２．式（Ｉ）の化合物の生物学的活性
表ＩＩ Ａは、Ａ＝ＮＣＯＲ^２である化合物を表す一方、表ＩＩ Ｂは、Ｂ＝ＮＣＯＲ^４である化合物を表し、表ＩＩ Ｃは、それぞれ両方の位置異性体化合物を含む。

Claims (10)

1. 式（Ｉ）
   

   

   
   （式中、
   Ａが、任意の立体化学配置におけるＣＨ_２、ＮＣＯＲ^２、ＣＨＲ^３およびＣＲ^３Ｒ^３からなる群から選択され、
   Ｂが、任意の立体化学配置におけるＣＨ_２、ＮＣＯＲ^４、ＣＨＲ^３およびＣＲ^３Ｒ^３からなる群から選択され、
   ただし、ＡがＮＣＯＲ^２である場合、ＢはＮＣＯＲ^４ではなく、ＡおよびＢの両方が、ＣＨ_２、ＣＨＲ^３またはＣＲ^３Ｒ^３から選択されるわけではなく、
   Ｘが、任意の立体化学配置におけるＣＨ_２またはＣＨＲ^５から選択され、
   Ｒ^１が、以下のもの：Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜７シクロアルキル、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、アミノ、ニトリル、アルコキシ、アルコキシ−（Ｃ_１〜４）アルキル、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルバメートまたはスルホンのうちの１つまたは複数で任意に置換されるＣ_１〜８アルキルから選択され、
   Ｒ^２が、置換または非置換のＣ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜７シクロアルキル、複素環、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルから選択され、これらのそれぞれが、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ_１〜６アルキル、ジ−（Ｃ_１〜６）アルキルアミノ、Ｃ_１〜６アルキルアミノ、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_１〜６アルコキシ、Ｃ_３〜６シクロアルキル、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド、複素環、アリール、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルまたはニトリルから独立して選択される１つまたは複数の置換基で任意に置換され、
   Ｒ^３が、水素、置換または非置換のＣ_１〜６アルキル、アルコキシ、アルコキシ−（Ｃ_１〜４）アルキル、Ｃ_３〜７シクロアルキル、Ｃ_４〜７複素環、芳香族、二環式複素環、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルから選択され、これらのそれぞれが、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ_１〜６アルキル、ジ−（Ｃ_１〜６）アルキルアミノ、Ｃ_１〜６アルキルアミノ、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_１〜６アルコキシ、Ｃ_３〜６シクロアルキル、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド、複素環、アリール、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルまたはニトリルから独立して選択される１つまたは複数の置換基で任意に置換され、
   Ｒ^４が、置換または非置換のＣ_１〜７アルキル、アルコキシ、アルコキシ−（Ｃ_１〜４）アルキル、アリールまたはＣ_３〜７シクロアルキルから選択され、これらのそれぞれが、複素環、ニトリル、ヘテロアリールアルキルまたはヘテロアリールで任意に置換され、
   Ｒ^５が、芳香族、二環式複素環、アリール、ヘテロアリールから選択され、これらのそれぞれが、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ_１〜６アルキル、ジ−（Ｃ_１〜６）アルキルアミノ、Ｃ_１〜６アルキルアミノ、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_１〜６アルコキシ、Ｃ_３〜６シクロアルキル、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド、複素環、アリール、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルまたはニトリルから独立して選択される１つまたは複数の置換基で任意に置換される）
   の化合物またはその薬学的に許容できる塩、互変異性体、溶媒和物もしくは多形体。
2. Ｒ^１がブチルであり、Ａ、Ｂ、およびＸが上に規定されるとおりである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
3. Ｒ^１が、ヒドロキシルで置換されるＣ_４〜８アルキルであり、Ａ、Ｂ、およびＸが上に規定されるとおりである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
4. ヒドロキシルで置換されるＣ_４〜８アルキルであるＲ^１が、以下のもの
   

   

   
   のうちの１つである、請求項３に記載の式（Ｉ）の化合物。
5. ＸがＣＨ_２であり、ＡおよびＢが上に規定されるとおりである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
6. ＸがＣＨ_２であり、ＡがＣＨ_２であり、Ｂが上に規定されるとおりである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
7. Ｒ^２が、Ｃ_１〜３アルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、ニトリル、複素環、カルボン酸エステル、またはカルボン酸アミドでさらに置換され得る以下の例：
   

   

   
   のうちの１つである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
8. １つまたは複数の薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤または担体とともに、請求項１〜７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、互変異性体、溶媒和物もしくは多形体を含む医薬組成物。
9. 薬剤として使用するための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、互変異性体、溶媒和物もしくは多形体、または請求項８に記載の医薬組成物。
10. ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８の調節が関与する疾患の治療に使用するための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、互変異性体、溶媒和物もしくは多形体、または請求項８に記載の医薬組成物。