JP2019524662A - ウイルス感染治療用のジヒドロピラノピリミジン - Google Patents

Abstract

本発明は、ジヒドロピラノピリミジン誘導体、その調製方法、医薬組成物、およびウイルス感染の治療におけるその使用に関する。

Description

本発明は、ジヒドロピラノピリミジン誘導体、その調製方法、医薬組成物、およびウイルス感染の治療におけるその使用に関する。

本発明は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）の調節または活性化作用が関与する、ウイルス感染、免疫疾患または炎症性疾患の治療におけるジヒドロピラノピリミジン誘導体の使用に関する。Ｔｏｌｌ様受容体は、ロイシンに富む細胞外ドメイン、および保存領域を含有する細胞質の伸長を特徴とする主要な膜貫通タンパク質である。自然免疫系は、一定のタイプの免疫細胞の細胞表面上に発現するこのＴＬＲを介して病原体関連分子パターンを認識することができる。外来病原体を認識すると、サイトカインの産生および食細胞における共刺激分子の上方制御が活性化される。これにより、Ｔ細胞挙動が調節される。

ほとんどの哺乳類種は、１０〜１５種のＴｏｌｌ様受容体を有すると推定されている。ヒトおよびマウスで合わせて１３種類のＴＬＲ（ＴＬＲ１〜ＴＬＲ１３と称される）が同定されており、他の哺乳動物種でもこれらの多くと同等の形態が発見されてきた。しかしながら、ヒトに見られるある特定のＴＬＲに相当するものが、全ての哺乳動物において存在するわけではない。例えば、ヒトのＴＬＲ１０に類似したタンパク質をコードする遺伝子がマウスに存在するが、過去のある時点で、レトロウイルスによって損傷されたと考えられる。一方、マウスは、ヒトでは示されないＴＬＲ１１、１２、および１３を発現する。他の哺乳動物は、ヒトに見られないＴＬＲを発現し得る。トラフグ属のフグ（Ｔａｋｉｆｕｇｕ ｐｕｆｆｅｒｆｉｓｈ）に見られるＴＬＲ１４によって示されるように、他の非哺乳動物種が、哺乳動物とは異なるＴＬＲを有することもある。これにより、ヒトの自然免疫のモデルとして実験動物を使用する方法が複雑になることがある。

ＴＬＲに関する概説については、次の雑誌論文を参照されたい。Ｈｏｆｆｍａｎｎ，Ｊ．Ａ．，Ｎａｔｕｒｅ，４２６，ｐ３３−３８，２００３；Ａｋｉｒａ，Ｓ．，Ｔａｋｅｄａ，Ｋ．，ａｎｄ Ｋａｉｓｈｏ，Ｔ．，Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２１，ｐ３３５−３７６，２００３；Ｕｌｅｖｉｔｃｈ，Ｒ．Ｊ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ：Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４，ｐ５１２−５２０，２００４。

国際公開第２００６／１１７６７０号パンフレットではプリン誘導体、国際公開第２０１２／１５６４９８号パンフレットではキナゾリン誘導体、および国際公開第２００７／０２４６１２号パンフレットでは置換ベンゾアゼピン、ならびに国際公開第２０１２／１３６８３４号パンフレットではピリミジンなどの、Ｔｏｌｌ様受容体に対して活性を示す化合物が既に記載されている。

しかし、従来技術の化合物と比較して、選択性が高く、より有効であり、かつ良好な安全性プロファイルを有する新規なＴｏｌｌ様受容体調節剤が強く求められている。

本発明によって、式（Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩ）

の化合物、またはその薬学的に許容される塩、互変異性体、立体異性体の形態、溶媒和物もしくは多形体（式中、
Ｒ_１は、アルコールまたはＣ_１〜３アルコキシから独立に選択される１つ以上の置換基で任意選択により置換されるＣ_１〜６アルキルであり；
Ｒ_２は、水素、フッ素、Ｃ_１〜３アルキル、シクロプロピル、−ＣＦ_３、Ｃ_１〜３アルコキシ、またはニトリルから選択される）
が提供される。

式ＩおよびＩＩの好ましい化合物としては、以下の構造が含まれる。

式ＩＩＩの最も好ましい化合物は、以下の構造を有する。

式（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ）の化合物、およびその薬学的に許容される塩、互変異性体、立体異性体の形態、溶媒和物または多形体は、医薬品として、特に、Ｔｏｌｌ様受容体７および８（特に、ＴＬＲ８）の調節剤としての活性を有する。

さらなる態様において、本発明は、式（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩、互変異性体、立体異性体の形態、溶媒和物もしくは多形体を、１種以上の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体とともに含む医薬組成物を提供する。

さらに、本発明に係る式（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体、立体異性体の形態もしくは多形体、あるいは式（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ）の前記化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体、立体異性体の形態もしくは多形体を含む医薬組成物は、薬剤として使用され得る。

本発明の別の態様は、式（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体、立体異性体の形態もしくは多形体、あるいは式（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ）の前記化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体、立体異性体の形態もしくは多形体を含む前記医薬組成物が、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８、好ましくはＴＬＲ８の調節が関与する疾患の治療に適宜使用できることである。

「（Ｃ_１〜３）−アルキル」または「（Ｃ_１〜６）−アルキル」という用語は、規定数の炭素原子を含有する、直鎖状、分枝鎖状または環状の飽和脂肪族炭化水素を指す。

「シクロアルキル」という用語は、シクロ−プロピルなどの規定数の炭素原子を含有する炭素環を指す。

「アルコキシ」という用語は、Ｃ_１〜３アルコキシなどの酸素に単結合されるアルキル（炭素と水素との鎖）基（例えば、メトキシ基またはエトキシ基）を指す。

本明細書で使用される場合、実線のくさび形結合または破線のくさび形結合としてではなく実線としてのみ示される結合を有する化学式、あるいは１つ以上の原子の周りに特定の配置（例えばＲ、Ｓ）を有するものとして別の方法で示されるあらゆる化学式は、それぞれあり得る立体異性体、または２つ以上の立体異性体の混合物を考慮している。

上記または下記の、「立体異性体」、「立体異性体の形態」または「立体化学的異性体形態」という用語は、互換的に使用される。

本発明は、本発明の化合物の全ての立体異性体を、純粋な立体異性体として、または２つ以上の立体異性体の混合物として含む。

エナンチオマーは、重ね合わせることができない互いの鏡像となっている立体異性体である。１対のエナンチオマーの１：１混合物は、ラセミ体またはラセミ混合物である。

ジアステレオマー（またはジアステレオ異性体）は、エナンチオマーではない立体異性体であり、すなわち、鏡像の関係にない。化合物が二重結合を含有する場合、置換基はＥ配置またはＺ配置となり得る。化合物が少なくとも二置換非芳香族環式基を含有する場合、置換基は、シス配置またはトランス配置であり得る。

したがって、本発明は、化学的に可能な場合は常に、エナンチオマー、ジアステレオマー、ラセミ体、Ｅ異性体、Ｚ異性体、シス異性体、トランス異性体、およびこれらの混合物を含む。

その全ての用語、すなわち、エナンチオマー、ジアステレオマー、ラセミ体、Ｅ異性体、Ｚ異性体、シス異性体、トランス異性体およびこれらの混合物の意味は、当業者に知られている。

絶対配置は、カーン・インゴルド・プレローグ順位則に従って特定される。不斉原子における配置は、ＲまたはＳのいずれかによって特定される。絶対配置が不明の分割された立体異性体は、これらが平面偏光を回転させる方向に応じて（＋）または（−）によって示すことができる。例えば、絶対配置が不明の分割されたエナンチオマーは、それらが平面偏光を回転させる方向に応じて（＋）または（−）で示すことができる。

特定の立体異性体が同定される場合、これは、前記立体異性体が他の立体異性体を実質的に含まない、すなわち他の立体異性体を、５０％未満、好ましくは２０％未満、より好ましくは１０％未満、より一層好ましくは５％未満、特に２％未満、最も好ましくは１％未満しか伴わないことを意味する。したがって、式（Ｉ）の化合物が例えば（Ｒ）として特定される場合、これは、その化合物が実質的に（Ｓ）異性体を含まないことを意味し、式（Ｉ）の化合物が例えばＥとして特定される場合、これは、その化合物が実質的にＺ異性体を含まないことを意味し、式（Ｉ）の化合物が例えばシスとして特定される場合、これは、その化合物が実質的にトランス異性体を含まないことを意味する。

式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の化合物の薬学的に許容される塩としては、その酸付加塩および塩基塩が挙げられる。好適な酸付加塩は、非毒性塩を形成する酸から形成される。好適な塩基塩は、非毒性塩を形成する塩基から形成される。

本発明の化合物はまた、非溶媒和形態および溶媒和形態で存在してもよい。本明細書では「溶媒和物」という用語は、本発明の化合物と、１種以上の薬学的に許容される溶媒分子、例えば、エタノールとを含む分子複合体を表すために用いられる。

「多形体」という用語は、本発明の化合物が２つ以上の形態または結晶構造で存在する能力を指す。

本発明の化合物は、結晶質または非晶質生成物として投与され得る。それらは、沈澱、結晶化、凍結乾燥、噴霧乾燥、または蒸発乾燥などの方法によって、例えば、固体プラグ、粉末、またはフィルムとして得ることができる。それらは、単独で、または本発明の１種以上の他の化合物と組み合わせて、もしくは１種以上の他の薬物と組み合わせて投与されてもよい。一般に、それらは、１種以上の薬学的に許容される賦形剤を伴う製剤として投与されることになる。本明細書では「賦形剤」という用語は、本発明の化合物以外の任意の成分を表すために使用される。賦形剤の選択は、特定の投与形態、溶解性および安定性への賦形剤の影響、ならびに剤形の性質などの要因に大きく依存する。

本発明の化合物またはその任意のサブグループは、投与目的のための様々な医薬品形態に製剤化され得る。適切な組成物として、全身投与薬物に通常使用される全ての組成物を挙げることができる。本発明の医薬組成物を調製するために、活性成分としての特定の化合物の有効量が、任意選択により付加塩形態において、薬学的に許容される担体と組み合わされて均質混合物にされ、この担体は、投与に所望される製剤の形態に応じて多種多様な形態をとり得る。これらの医薬組成物は、例えば、経口投与、経腸投与、または経皮投与に好適な単位剤形であることが望ましい。例えば、経口剤形の組成物を調製する際に、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤および液剤などの経口液体製剤の場合には、例えば、水、グリコール、オイル、アルコールなど；または散剤、丸剤、カプセル剤および錠剤の場合には、デンプン、糖、カオリン、希釈剤、滑剤、結合剤、崩壊剤などの固体担体などの通常の医薬媒体のいずれも用いられ得る。投与が容易であるため、錠剤およびカプセル剤が最も有利な経口単位剤形であり、その場合、固体医薬担体が当然使用される。使用の直前に、液体形態に変換することができる固形製剤もまた含まれる。経皮投与に好適な組成物においては、担体は、任意の性質を持った好適な添加剤を低比率で任意選択的に組み合わせた、浸透促進剤および／または好適な湿潤剤を任意選択的に含むが、これらの添加剤は、重大な有害作用を皮膚にもたらさない。前記添加剤は、皮膚への投与を容易にし得、かつ／または所望の組成物を調製するのに役立ち得る。これらの組成物は様々な方法で、例えば、経皮パッチ剤として、スポットオン製剤として、軟膏剤として投与することができる。本発明の化合物はまた、吸入または吹送による投与のために当該技術分野において用いられる方法および製剤を用いて、吸入または吹送によって投与され得る。したがって、一般に、本発明の化合物は、溶液、懸濁液または乾燥粉末の形態で肺に投与され得る。

投与を容易にし、投与量を均一にするために、前述の医薬組成物を単位剤形に製剤化することはとりわけ有利である。本明細書で使用される単位剤形とは、単位投与量として好適である物理的に個別の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体と共同して所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性成分を含有する。そのような単位剤形の例は、錠剤（分割錠剤またはコーティング錠剤を含む）、カプセル剤、丸剤、粉末パケット、ウエハー、坐剤、注射液または懸濁剤など、およびそれらの分離複合剤である。

感染症の治療の当業者は、本明細書で以下に示される試験結果から有効量を決定することができるであろう。一般に、有効な１日量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ体重〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜１０ｍｇ／ｋｇ体重であろうと考えられる。必要な用量を２回、３回、４回またはそれより多い回数のサブ用量として、１日の間に適切な間隔をおいて投与することが適切な場合がある。前記サブ用量は、例えば、単位剤形当たり１〜１０００ｍｇ、特に５〜２００ｍｇの活性成分を含有する単位剤形として製剤化され得る。

正確な投与量および投与頻度は、当業者によく知られているように、使用される特定の式（Ｉ）、（ＩＩ）のまたは（ＩＩＩ）の化合物、治療される特定の病態、治療される病態の重症度、特定の患者の年齢、体重および全身健康状態、ならびに個体が摂取している可能性がある他の薬に依存する。さらに、有効量は、治療される対象の応答に応じて、および／または本発明の化合物を処方する医師の評価に応じて、減少または増加させ得ることは明らかである。したがって、上記の有効量の範囲は指針であるに過ぎず、本発明の範囲または使用をいかなる程度であれ限定するものではない。

式（Ｉ）の化合物の調製

２−アミノ−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピラノ［４，３−ｄ］ピリミジン−４−オール（１）。塩酸グアニジン（９０６ｍｇ、９．４８ｍｍｏｌ）のエタノール（３０ｍＬ）懸濁液に、ナトリウムエトキシド（４．０３ｍＬ、９．４８ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を室温で１０分間撹拌し、その後エタノール（３５ｍＬ）中の４−オキソテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−カルボン酸メチル（１．００ｇ、６．３２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、８０℃で一晩加熱し、続いて濃縮乾固させ、残渣を水で希釈し、ＨＣｌ（１Ｎ水溶液）によりｐＨを４に調整した。得られた混合物を室温で２時間撹拌した。沈殿した固体を濾過により単離し、水で洗浄し、真空中で乾燥させて、淡黄色固体として標題の化合物を得た（８６０ｍｇ、８１％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ ２．３６（ｔ，Ｊ＝５．５６Ｈｚ，２Ｈ），３．７７（ｔ，Ｊ＝５．５６Ｈｚ，２Ｈ），４．２４（ｓ，２Ｈ），６．３４（ｓ，２Ｈ），１０．７８（ｓ，１Ｈ）．

４−クロロ−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピラノ［４，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン（２）。２−アミノ−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピラノ［４，３−ｄ］ピリミジン−４−オール（４５０ｍｇ、２．６９ｍｍｏｌ）のＰＯＣｌ_３（６ｍＬ）中混合物を、１００℃で５時間加熱し、続いて室温に一晩置いた。反応混合物を濃縮し、Ｋ_２ＣＯ_３（飽和水溶液）をゆっくりと添加した（ｐＨ＝８まで）。得られた水性懸濁液を、ＥｔＯＡｃにより３回抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、固体を濾過により除去し、濃縮させて、淡黄色固体として標題の化合物を得た（３７０ｍｇ、７４％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ ２．６４（ｔ，Ｊ＝５．８１Ｈｚ，２Ｈ），３．８９（ｔ，Ｊ＝５．８１Ｈｚ，２Ｈ），４．４７（ｓ，２Ｈ），６．８９（ｓ，２Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ ＲＴ：１．６４ｍｉｎ，ｍ／ｚ＝１８６．３，方法Ａ）

Ｎ^４−ブチル−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピラノ［４，３−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（３）。密閉したチューブ内で、４−クロロ−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピラノ［４，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン（２２０ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（１ｍＬ）懸濁液に、ｎ−ブチルアミン（０．４６９ｍＬ、４．７４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた懸濁液を１２０℃まで一晩加熱した。反応混合物を濃縮し、粗生成物を、ＣＨ_２Ｃｌ_２／（ＣＨ_３ＯＨ、５％ＮＨ_３水溶液含有）の勾配を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して油を得、これをＥｔ_２Ｏ中でトリチュレーションした。得られた固体を濾過により単離し、真空下で乾燥させて、淡黄色固体として標題の化合物を得た（１６１ｍｇ、６１％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ ０．８９（ｔ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，３Ｈ），１．２９（ｍ，２Ｈ），１．４８（ｍ，２Ｈ），２．４０（ｔ，Ｊ＝５．５６Ｈｚ，２Ｈ），３．２７（ｍ，２Ｈ），３．７９（ｔ，Ｊ＝５．５６Ｈｚ，２Ｈ），４．２９（ｓ，２Ｈ），５．６７（ｓ，２Ｈ），６．０５（ｔ，Ｊ＝５．３１Ｈｚ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ ＲＴ：１．８９ｍｉｎ，ｍ／ｚ＝２２２．９，方法Ａ）

（２Ｒ）−２−［（２−アミノ−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピラノ［４，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］ヘキサン−１−オール（４、式Ｉによる化合物）。密閉したチューブ内で、４−クロロ−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピラノ［４，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン（１３４ｍｇ、０．７２２ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（０．６７０ｍＬ）懸濁液に、Ｄ−ノルロイシノール（３３８ｍｇ、２．８９ｍｍｏｌ）を添加した。得られた懸濁液を１２０℃で一晩加熱した。反応混合物を濃縮し、粗生成物を、ＣＨ_２Ｃｌ_２／（ＣＨ_３ＯＨ、５％ＮＨ_３水溶液含有）の勾配を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して油を得、これをＥｔ_２Ｏ中でトリチュレーションした。得られた固体を濾過により単離し、真空下で乾燥させて、灰白色固体として標題の化合物を得た（１４３ｍｇ、７４％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ ０．８５（ｔ，Ｊ＝６．８２Ｈｚ，３Ｈ），１．２０−１．３１（ｍ，４Ｈ），１．４２（ｍ，１Ｈ），１．５９（ｍ，１Ｈ），２．４０（ｔ，Ｊ＝５．５６Ｈｚ，２Ｈ），３．３８（ｍ，２Ｈ），３．８０（ｔ，Ｊ＝５．５６Ｈｚ，２Ｈ），４．１３（ｍ，１Ｈ），４．２８（ｄ，Ｊ＝１４．１５Ｈｚ，１Ｈ），４．３３（ｄ，Ｊ＝１４．１５Ｈｚ，１Ｈ），４．５７（ｔ，Ｊ＝５．３０Ｈｚ，１Ｈ），５．５４（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ，１Ｈ），５．６６（ｓ，２Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ ＲＴ：１．８６ｍｉｎ，ｍ／ｚ＝２６６．９，方法Ａ）．［α］_Ｄ ^２０ ＋２０．４（ｃ ０．２７，ＤＭＦ）

式（ＩＩ）の化合物の調製

２−アミノ−５，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オール（５）。塩酸グアニジン（８３２ｍｇ、８．７１ｍｍｏｌ）のエタノール（３０ｍＬ）懸濁液に、ナトリウムエトキシド（３．７１ｍＬ、８．７１ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を室温で１０分間撹拌し、その後エタノール（３０ｍＬ）中の３−オキソテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸エチル（１．００ｇ、５．８１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、８０℃で一晩加熱し、続いて濃縮乾固させ、残渣を水で希釈し、（ＨＣｌ、１Ｎ水溶液）によりｐＨを４に調整した。得られた混合物を室温で２時間撹拌した。沈殿した固体を濾過により単離し、水で洗浄し、真空中で乾燥させて、淡桃色固体として標題の化合物を得た（９７０ｍｇ、１００％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ ２．２６（ｔ，Ｊ＝５．５６Ｈｚ，２Ｈ），３．７５（ｔ，Ｊ＝５．５６Ｈｚ，２Ｈ），４．１４（ｓ，２Ｈ），６．２９（ｓ，２Ｈ），１０．７１（ｓ，１Ｈ）．

４−クロロ−５，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，４−ｄ］ピリミジン−２−アミン（６）。２−アミノ−５，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オール（３９８ｍｇ、２．３８ｍｍｏｌ）のＰＯＣｌ_３（５．３ｍＬ）中混合物を、１００℃で５時間加熱し、続いて室温に一晩置いた。反応混合物を濃縮し、Ｋ_２ＣＯ_３（飽和水溶液）をゆっくりと添加した（ｐＨ＝８まで）。得られた水性懸濁液を、ＥｔＯＡｃにより３回抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧下で除去して、淡桃色固体として標題の化合物を得た（２３１ｍｇ、５２％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ ２．５５（ｔ，Ｊ＝５．８１Ｈｚ，２Ｈ），３．８７（ｔ，Ｊ＝５．８１Ｈｚ，２Ｈ），４．４０（ｓ，２Ｈ），６．８８（ｓ，２Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ ＲＴ：１．７１ｍｉｎ，ｍ／ｚ＝１８６．３，方法Ａ）．

Ｎ^４−ブチル−５，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，４−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（７）。密閉したチューブ内で、４−クロロ−５，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，４−ｄ］ピリミジン−２−アミン（１５０ｍｇ、０．８０８ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（０．７ｍＬ）懸濁液に、ｎ−ブチルアミン（３１９μＬ、３．２３ｍｍｏｌ）を添加した。得られた懸濁液を１２０℃で一晩加熱した。反応混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物を、ＣＨ_２Ｃｌ_２／（ＣＨ_３ＯＨ、５％ＮＨ_３水溶液含有）の勾配を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して油を得、これをＥｔ_２Ｏ中でトリチュレーションした。得られた固体を濾過により単離し、真空下で乾燥させて、淡黄色固体として標題の化合物を得た（１２８ｍｇ、７１％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ ０．８９（ｔ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，３Ｈ），１．３０（ｍ，２Ｈ），１．５０（ｍ，２Ｈ），２．２５（ｔ，Ｊ＝５．０６Ｈｚ，２Ｈ），３．１５−３．１９（ｍ，１Ｈ），３．２６（ｍ，２Ｈ），３．８２（ｔ，Ｊ＝５．５６Ｈｚ，２Ｈ），４．１８（ｓ，２Ｈ），５．６５（ｓ，２Ｈ），６．２７（ｍ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ ＲＴ：２．０１ｍｉｎ，ｍ／ｚ＝２２２．９，方法Ａ）

（２Ｒ）−２−［（２−アミノ−５，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］ヘキサン−１−オール（８、式ＩＩによる化合物）。密閉したチューブ内で、４−クロロ−５，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，４−ｄ］ピリミジン−２−アミン（１６３ｍｇ、８７８μｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（８１５μＬ）懸濁液に、Ｄ−ノルロイシノール（４１２ｍｇ、３．５１ｍｍｏｌ）を添加した。得られた懸濁液を１２０℃で一晩加熱した。反応混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物を、ＣＨ_２Ｃｌ_２／（ＣＨ_３ＯＨ、５％ＮＨ_３水溶液含有）の勾配を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して油を得、これをＥｔ_２Ｏ中でトリチュレーションした。得られた固体を濾過により単離し、真空下で乾燥させて、ベージュ色固体として標題の化合物を得た（８５ｍｇ、３６％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ ０．８５（ｔ，Ｊ＝６．５７Ｈｚ，３Ｈ），１．１９−１．３３（ｍ，４Ｈ），１．４４（ｍ，１Ｈ），１．６０（ｍ，１Ｈ），２．２７（ｍ，２Ｈ），３．３５（ｍ，１Ｈ），３．４２（ｍ，１Ｈ），３．８３（ｔ，Ｊ＝５．５６Ｈｚ，２Ｈ），４．１３（ｍ，１Ｈ），４．１９（ｓ，２Ｈ），４．５９（ｔ，Ｊ＝５．５６Ｈｚ，１Ｈ），５．６４（ｓ，２Ｈ），５．７３（ｄ，Ｊ＝８．５９Ｈｚ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ ＲＴ：１．９５ｍｉｎ，ｍ／ｚ＝２６６．９，方法Ａ）．［α］_Ｄ ^２０ ＋２１．８（ｃ ０．２８，ＤＭＦ）

式（ＩＩＩ）の化合物の調製

２−ジアゾ−６−ヒドロキシ−３−オキソヘキサン酸エチル（９）。ジアゾ酢酸エチル（１３．４ｇ、１１８ｍｍｏｌ）とジヒドロフラン−２（３Ｈ）−オン（６．７５ｇ、７８．４ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（４２０ｍＬ）溶液に、ＬｉＨＭＤＳの無水ＴＨＦ（７８．４ｍＬ、１１８ｍｍｏｌ、１．５Ｍ）溶液を−７８℃で滴加し、反応混合物を−７８℃で９０分間撹拌した。反応混合物をＮａＨＣＯ_３水溶液で希釈し、得られた二相溶液をＥｔＯＡｃにより３回抽出した。合わせた有機層をＮＨ_４Ｃｌ（水溶液）、続いて塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧下で除去した。粗生成物を、ヘプタン／ＥｔＯＡｃの勾配を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、黄色油として標題の化合物を得た（５．７８ｇ、３７％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ １．２５（ｔ，Ｊ＝７．０８Ｈｚ，３Ｈ），１．６７（ｍ，２Ｈ），２．８１（ｔ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，２Ｈ），３．４０（ｔｄ，Ｊ＝６．５０Ｈｚ，Ｊ＝５．２０Ｈｚ，２Ｈ），４．２３（ｑ，Ｊ＝７．０８Ｈｚ，２Ｈ），４．４５（ｔ，Ｊ＝５．２０Ｈｚ，１Ｈ）．

５−ヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６−カルボン酸エチル（１０）。２−ジアゾ−６−ヒドロキシ−３−オキソヘキサン酸エチル（５．７８ｇ、２８．９ｍｍｏｌ）の乾燥トルエン（２００ｍＬ）溶液に、酢酸ロジウム（ＩＩ）ダイマー（２５５ｍｇ、０．５７７ｍｍｏｌ）を添加し、得られた緑色懸濁液を室温で一晩撹拌し、濾過して茶色溶液を得、これを溶離液としてＣＨ_２Ｃｌ_２を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、無色油として標題の化合物を得た（２．４７ｇ、４５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ １．２４（ｔ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，３Ｈ），１．８４（ｍ，２Ｈ），２．３２（ｔ，Ｊ＝６．５７Ｈｚ，１Ｈ），３．８２（ｍ，２Ｈ），４．２１（ｄ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，２Ｈ），１０．１９（ｓ，１Ｈ）．

２−アミノ−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−オール（１１）。塩酸グアニジン（１．３８ｇ、１４．４ｍｍｏｌ）のエタノール（４５ｍＬ）懸濁液に、ナトリウムエトキシド（６．１４ｍＬ、１４．４ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を室温で１０分間撹拌し、その後５−ヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６−カルボン酸エチル（１．８４ｇ、９．６２ｍｍｏｌ）のエタノール（４５ｍＬ）溶液を添加した。反応混合物を８０℃で一晩加熱した。反応混合物を濃縮乾固させ、残渣を水で希釈し、１ＮのＨＣｌ水溶液によりｐＨを４に調整した。得られた混合物を室温で一晩撹拌した。沈殿した固体を濾過し、大量の水で洗浄し、真空中で乾燥させて、橙色個体として標題の化合物を得た（５８０ｍｇ、３６％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ １．８５（ｍ，２Ｈ），２．３６（ｔ，Ｊ＝６．６０Ｈｚ，２Ｈ），３．９０（ｔ，Ｊ＝５．０６Ｈｚ，２Ｈ），５．９０（ｓ，２Ｈ），１０．７６（ｓ，１Ｈ）．

４−クロロ−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｄ］ピリミジン−２−アミン（１２）。２−アミノ−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−オール（５８０ｍｇ、３．４７ｍｍｏｌ）のオキシ塩化リン（８ｍＬ）中混合物を、１１５℃で３０分間加熱し、室温まで冷却した。反応混合物を濃縮し、Ｋ_２ＣＯ_３飽和水溶液をゆっくりと添加した（ｐＨ＝８まで）。得られた水性懸濁液を、ＥｔＯＡｃにより３回抽出した。合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、３４３ｍｇの淡黄色個体を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ １．９７（ｍ，２Ｈ），２．６６（ｔ，Ｊ＝６．６０Ｈｚ，２Ｈ），４．１３（ｔ，Ｊ＝５．０５Ｈｚ，２Ｈ），６．３９（ｓ，２Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ ＲＴ：１．７０ｍｉｎ，ｍ／ｚ＝１８６．３，方法Ａ）．

Ｎ^４−ブチル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（１３）。４−クロロ−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｄ］ピリミジン−２−アミン（１５０ｍｇ、０．８０８ｍｍｏｌ）とｎ−ブチルアミン（０．３１９ｍＬ、３．２３ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（４ｍＬ）中混合物を１１５℃で一晩加熱した。粗生成物を、ＣＨ_２Ｃｌ_２／（ＣＨ_３ＯＨ、５％ＮＨ_３水溶液含有）の勾配を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して油を得、これをＣＨ_３ＣＮ（２ｍＬ）と水（１０ｍＬ）の混合物中で凍結乾燥させて、橙色油として標題の化合物を得た（１５１ｍｇ、８４％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ ０．８８（ｔ，Ｊ＝７．３６Ｈｚ，３Ｈ），１．２７（ｍ，２Ｈ），１．４８（ｍ，２Ｈ），１．９２（ｍ，２Ｈ），２．４４（ｔ，Ｊ＝６．６２Ｈｚ，２Ｈ），３．２７（ｍ，２Ｈ），４．０４（ｔ，Ｊ＝５．００Ｈｚ，２Ｈ），５．７３（ｍ，２Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ ＲＴ：２．１３ｍｉｎ，ｍ／ｚ＝，２２３．０，方法Ａ．

（２Ｒ）−２−［（２−アミノ−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］ヘキサン−１−オール（１４、式（ＩＩＩ）による化合物）。４−クロロ−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｄ］ピリミジン−２−アミン（９０ｍｇ、０．４８５ｍｍｏｌ）とＤ−ノルロイシノール（２２７ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（２．４ｍＬ）中混合物を１１５℃で２０時間加熱し、続いて反応混合物を室温まで冷却し、減圧下にて濃縮した。粗生成物を、ＣＨ_２Ｃｌ_２／（ＣＨ_３ＯＨ、５％ＮＨ_３水溶液含有）の勾配を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、粘稠な黄色油として標題の化合物を得た（９２ｍｇ、７１％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ ０．８５（ｔ，Ｊ＝６．５７Ｈｚ，３Ｈ），１．１５−１．３３５（ｍ，４Ｈ），１．４２（ｍ，１Ｈ），１．５７（ｍ，１Ｈ），１．９２（ｍ，２Ｈ），２．４２（ｔ，Ｊ＝６．１３Ｈｚ，２Ｈ），３．３４（ｍ，１Ｈ），３．４１（ｍ，１Ｈ），３．９３−４．０９（ｍ，３Ｈ），４．６７（ｔ，Ｊ＝４．５７Ｈｚ，１Ｈ），５．４２（ｓ，２Ｈ）５．７７（ｄ，Ｊ＝９．０９Ｈｚ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ ＲＴ：１．９９ｍｉｎ，ｍ／ｚ＝２６７．０，方法Ａ．［α］_Ｄ ^２０ ＋１５（ｃ ０．２６，ＤＭＦ）．

ＬＣ−ＭＳ法
ＬＣ測定を、脱気装置を有するバイナリポンプ、オートサンプラー、ダイオードアレイ検出器（ＤＡＤ）および下記の方法で明記するカラムを備えた、カラムを４０℃の温度に保持するＵＰＬＣ Ａｃｑｕｉｔｙ（Ｗａｔｅｒｓ）システムを使用して行った。カラムからの流れを、ＭＳ検出器に送った。ＭＳ検出器はエレクトロスプレーイオン源を備えるものであった。キャピラリーニードル電圧は３ｋＶであり、イオン源温度を、Ｑｕａｔｔｒｏ（Ｗａｔｅｒｓ製のトリプル四重極型質量分析装置）上で１３０℃に維持した。ネブライザーガスとして窒素を使用した。Ｗａｔｅｒｓ−Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘデータシステムを用いてデータ収集を行った。

方法Ａ。逆相ＵＰＬＣは、Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＢＥＨ（架橋エチルシロキサン／シリカハイブリッド）Ｃ１８カラム（１．７μｍ、２．１×１００ｍｍ）を用いて、０．３４３ｍＬ／分の流量で実施した。２種の移動相（移動相Ａ：９５％ ７ｍＭ酢酸アンモニウム／５％ アセトニトリル；移動相Ｂ：１００％アセトニトリル）を使用し、８４．２％Ａおよび１５．８％Ｂ（０．４９分間の保持）から２．１８分間で１０．５％Ａおよび８９．５％Ｂとし、１．９４分間保持し、０．７３分間で初期条件に戻し、０．７３分間保持する勾配条件で操作した。注入量２μＬを使用した。コーン電圧は、正イオン化モードと負イオン化モードで２０Ｖであった。質量スペクトルは、０．１秒の走査間遅延を使用して、１００〜１０００の走査を０．２秒で行うことにより取得した。

式（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ）の化合物の生物学的活性
ヒトＴＬＲ７活性およびヒトＴＬＲ８活性の評価。化合物がヒトＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８を活性化する能力を、ＴＬＲ７またはＴＬＲ８発現ベクターおよびＮＦｋＢ−ｌｕｃレポーター構築物で一過的にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞を用いた細胞レポーターアッセイで評価した。

簡潔に述べると、ＨＥＫ２９３細胞を、培養培地（１０％ＦＣＳおよび２ｍＭグルタミンが補充されたＤＭＥＭ）中で増殖させた。１５ｃｍディッシュ内での細胞のトランスフェクションについては、細胞をトリプシン−ＥＤＴＡで剥離し、ＣＭＶ−ＴＬＲ７またはＴＬＲ８プラスミド（１７００ｎｇ）と、ＮＦｋＢ−ｌｕｃプラスミド（８５０ｎｇ）と、トランスフェクション試薬との混合物をトランスフェクトし、加湿した５％ＣＯ_２雰囲気中３７℃で４８時間インキュベートした。次に、トランスフェクトした細胞をＰＢＳ中で洗浄し、トリプシン−ＥＤＴＡで剥離し、１．２５×１０^５個の細胞／ｍＬの密度で培地に再懸濁した。次に、４０マイクロリットルの細胞を、１００％ＤＭＳＯ中２００ｎＬの化合物が既に存在する、３８４ウェルプレートの各ウェル中に分注した。３７℃、５％ＣＯ_２で６時間インキュベートした後、１５μＬのＳｔｅａｄｙ Ｌｉｔｅ Ｐｌｕｓ基質（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を各ウェルに添加し、ＶｉｅｗＬｕｘ ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で読み取りを実施してルシフェラーゼ活性を測定した。４通り実施した測定値から用量反応曲線を作成した。最低有効濃度（ＬＥＣ）値を、アッセイの標準偏差より少なくとも２倍高い効果を誘発する濃度として定義し、各化合物について測定した。

３８４ウェルプレート中で、ＣＭＶ−ＴＬＲ７構築物のみをトランスフェクトした、ウェル当たり４０μＬの細胞（１．２５×１０^５個の細胞／ｍＬ）とともに、同様の希釈系列の化合物を使用して、化合物の毒性を並行して測定した。３７℃、５％ＣＯ_２で６時間インキュベートした後に、ウェル当たり１５μＬのＡＴＰ ｌｉｔｅ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を添加し、ＶｉｅｗＬｕｘ ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で読み取ることによって、細胞生存率を測定した。データをＣＣ_５０として報告した。

並行して、ＮＦκＢ−ｌｕｃレポーター構築物のみをトランスフェクトした、１ウェル当たり４０μＬの細胞（１．２５×１０^５個の細胞／ｍＬ）とともに、同様の希釈系列の化合物（１００％ＤＭＳＯ中、２００ｎＬの化合物）を使用した。３７℃、５％ＣＯ_２で６時間インキュベートした後、１５μＬのＳｔｅａｄｙ Ｌｉｔｅ Ｐｌｕｓ基質（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を各ウェルに添加し、ＶｉｅｗＬｕｘ ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で読み取りを実施して、ルシフェラーゼ活性を測定した。カウンタースクリーンデータをＬＥＣとして報告した。

上記のＨＥＫ２９３ＮＦ−ｋＢカウンタースクリーンアッセイにおいて、どの化合物にも活性は見られなかった（ＬＥＣ＞２５μＭ）。

Claims (5)

1. 式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）
   
   の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩、互変異性体、立体異性体の形態、溶媒和物もしくは多形体（式中、
   Ｒ_１は、アルコールまたはＣ_１〜３アルコキシから独立に選択される１つ以上の置換基で任意選択により置換されるＣ_１〜６アルキルであり；
   Ｒ_２は、水素、フッ素、Ｃ_１〜３アルキル、シクロプロピル、−ＣＦ_３、Ｃ_１〜３アルコキシ、またはニトリルから選択される）。
2. 下記の構造を有する請求項１に記載の化合物。
   
3. 請求項１に記載の式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）、もしくはその薬学的に許容される塩、互変異性体、立体異性体の形態、溶媒和物もしくは多形体、または請求項２に記載の構造のいずれかを、１種以上の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体とともに含む医薬組成物。
4. 薬剤として使用するための、請求項１に記載の式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）の化合物、もしくはその薬学的に許容される塩、互変異性体、立体異性体の形態、溶媒和物もしくは多形体、または請求項３に記載の医薬組成物。
5. ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８、好ましくはＴＬＲ８の調節が関与する疾患の治療に使用するための、請求項１に記載の式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）の化合物、もしくはその薬学的に許容される塩、互変異性体、立体異性体の形態、溶媒和物もしくは多形体、または請求項３に記載の医薬組成物。