JP2013523179A5

JP2013523179A5 -

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Publication number: JP2013523179A5
Application number: JP2013505069A
Authority: JP
Filing date: 2011-04-12
Publication date: 2014-05-29

Claims

１つ以上の目的のＦｎＩＩＩドメイン（ＦＯＩ）に由来する２つのフィブロネクチンＩＩＩ型（ＦｎＩＩＩ）単量体足場を含んでいる組み換え多量体足場であって、ここで
（ａ）各々のＦｎＩＩＩ単量体足場は、ＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、およびＦＧと命名された６つのループ領域に連結された、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、およびＧと命名された７つのβ鎖を含んでおり、
（ｂ）前記ＦｎＩＩＩ単量体足場は、直列して接続され、ここで前記単量体のうちの少なくとも２つは、天然には存在しない分子内ジスルフィド結合を含み、
（ｃ）前記組み換え多量体足場は、少なくとも１つの標的に対して特異的に結合し、かつ
（ｄ）前記標的に対する作用は、同族のＦｎＩＩＩ単量体足場の作用よりも改善されている、多量体足場。
前記多量体足場が、３、４、５、６、７、または８個のＦｎＩＩＩ単量体足場を含む、請求項１に記載の多量体足場。
少なくとも２つのＦｎＩＩＩ単量体足場が、リンカーによって接続される、請求項１または２に記載の多量体足場。
少なくとも２つのＦｎＩＩＩ単量体足場が、ＦｎＩＩＩ単量体足場の間にリンカーを割り込むことなく直接接続される、請求項１または２に記載の多量体足場。
前記ＦｎＩＩＩ単量体足場のうちの少なくとも１つが異種部分に融合されている、請求項１〜４のいずれか１項に記載の多量体足場。
少なくとも２つのＦｎＩＩＩ単量体足場が異なる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の多量体足場。
各々のβ鎖が、目的のＦｎＩＩＩドメイン（ＦＯＩ）の同種のβ鎖に対する少なくとも５０％の相同性を有し、かつ少なくとも１つのループは、ＦＯＩ中の同種のループの非天然変異体である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の多量体足場。
前記ＦＯＩが、配列番号１〜４および１４のいずれか１つからなる群より選択される配列を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の多量体足場。
少なくとも１つのＦｎＩＩＩ単量体足場のβ鎖が、配列番号１、４または１４中の同族のβ鎖に対し少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の多量体足場。
少なくとも１つのＦｎＩＩＩ単量体足場について、Ａβ鎖が、配列番号４１または４２を含み、Ｂβ鎖が、配列番号４３を含み、Ｃβ鎖が配列番号４５または１３１を含み、Ｄβ鎖が配列番号４６を含み、Ｅβ鎖が配列番号４７を含み、Ｆβ鎖が配列番号４９、５０または５１を含み、かつＧβ鎖が配列番号５２または５３を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の多量体足場。
各々のＦｎＩＩＩ足場が標的に結合し、さらに少なくとも１つのＦｎＩＩＩ単量体足場が以下のアミノ酸配列を含み：
ＩＥＶ（Ｘ_ＡＢ）_ｎＡＬＩＴＷ（Ｘ_ＢＣ）_ｎＣＥＬＸ_１ＹＧＩ（Ｘ_ＣＤ）_ｎＴＴＩＤＬ（Ｘ_ＤＥ）_ｎＹＳＩ（Ｘ_ＥＦ）_ｎＹＥＶＳＬＩＣ（Ｘ_ＦＧ）_ｎＫＥＴＦＴＴ、または
ＩＥＶ（Ｘ_ＡＢ）_ｎＡＬＩＴＷ（Ｘ_ＢＣ）_ｎＩＥＬＸ_１ＹＧＩ（Ｘ_ＣＤ）_ｎＴＴＩＤＬ（Ｘ_ＤＥ）_ｎＹＳＩ（Ｘ_ＥＦ）_ｎＹＣＶＳＬＩＳ（Ｘ_ＦＧ）_ｎＫＥＣＦＴＴ、または
ＩＥＶ（Ｘ_ＡＢ）_ｎＡＬＩＴＷ（Ｘ_ＢＣ）_ｎＣＥＬＸ_１ＹＧＩ（Ｘ_ＣＤ）_ｎＴＴＩＤＬ（Ｘ_ＤＥ）_ｎＹＳＩ（Ｘ_ＥＦ）_ｎＹＣＶＳＬＩＣ（Ｘ_ＦＧ）_ｎＫＥＣＦＴＴ、
ここでＸ_ＡＢ、Ｘ_ＢＣ、Ｘ_ＣＤ、Ｘ_ＤＥ、Ｘ_ＥＦ、およびＸ_ＦＧは、それぞれＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、およびＦＧのループに存在するアミノ酸残基を表し、Ｘ_１は、アミノ酸残基ＡまたはＴを表し、かつここでループの長さｎ= ２〜２６である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の多量体足場。
ＡＢループが、配列番号３５を含み、ＣＤループが配列番号３７を含み、かつＥＦループが配列番号３９を含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の多量体足場。
ＢＣループが、配列番号３６を含み、ＤＥループが配列番号１１を含み、かつＦＧループが配列番号４０を含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の多量体足場。
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の多量体足場をコードする単離された核酸分子。
請求項１４に記載の核酸に対して作動可能に連結された発現ベクター。
請求項１５に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
前記多量体足場が発現される条件下で、請求項１５に記載のベクターを含む宿主細胞を培養することを含む、組み換え多量体足場を産生する方法。
薬学的に許容される賦形剤中に請求項１〜１３のいずれか１項に記載の組み換え多量体足場を含む組成物。