JP2012503638A - 生物学的産物 - Google Patents
生物学的産物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2012503638A JP2012503638A JP2011528417A JP2011528417A JP2012503638A JP 2012503638 A JP2012503638 A JP 2012503638A JP 2011528417 A JP2011528417 A JP 2011528417A JP 2011528417 A JP2011528417 A JP 2011528417A JP 2012503638 A JP2012503638 A JP 2012503638A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- fab
- antibody
- seq
- dab
- single domain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
- C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/12—Antihypertensives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
- C07K16/245—IL-1
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/624—Disulfide-stabilized antibody (dsFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
Abstract
Description
−645Fvは、didAbL1及びH1と同等である(他に指示がない限り、各dABに使用するリンカーは同じになる)。
648Fvは、didAbL2及びH2と同等である(他に指示がない限り、各dABに使用するリンカーは同じになる)。
−645dsFvは、didAbL1及びH1と同等であり(他に指示がない限り、各dABに使用するリンカーは同じになる)、L1及びH1が、ジスルフィド結合によって安定化される。
−648dsFvは、didAbL2及びH2と同等であり(他に指示がない限り、各dABに使用するリンカーは同じになる)、L2及びH3が、ジスルフィド結合によって安定化される。
FabΔは、鎖間システイン結合(すなわち、CH及びCL又はCK間)を欠くFabである。
ヒト血清アルブミンに対して特異的なdAbの産生
ヒト血清アルブミンに対する特異性を有するdAbをコードする、インフレームDNAコード型転写ユニットを、組換えDNA技術を用いて産生した。
抗体断片の産生
軽鎖のC末端へのdAbの融合のために、(カッパの定常領域のKm3アロタイプを有する)ヒトカッパ軽鎖の定常領域、ペプチドリンカー及びdAbをコードするDNAを合成し、SacI−PvuIIの制限断片として、ヒトガンマ−1 CH1定常領域をコードするDNAを含む、UCB−Celltechの組織内の発現ベクターpTTOD(Fab)(Popplewell et al.、Methods Mol.Biol.2005;308:17−30に記載の、pTTO−1の誘導体)中にクローニングした。これにより、リンカーを介し、dAbと融合したヒト化軽鎖に対する遺伝子に続き、ヒト化重鎖Fab断片に対する遺伝子から成る、ジシストロニックな遺伝子配置を生じさせることが可能になり、両方ともtacプロモーターの制御下である。Gly4Serリンカーの上流のユニークなBspE1部位、又はAla−Proリッチなリンカーの上流のAscI部位もコードされる。
以下の実施例では、dAbが融合する抗体鎖は、cカッパの軽鎖に関しては、CK又はLCのいずれか、重鎖の定常ドメインCH1に関しては、CH1又はHCと示す。
Fab−dAb融合タンパク質を、dAbL3又はdAbH4と、FabAの軽鎖又は重鎖のいずれかの定常領域のC末端と融合させることによって構築した。可動性(SGGGGSE(配列番号1))又は硬性(G(APAPA)2(配列番号34))リンカーを使用して、dAbとcカッパ領域(配列番号75)を連結させる一方、リンカーDKTHTS(配列番号2)を使用して、dAbとCHI領域(配列番号76)を連結させた。定常領域−dAb融合物をコードするDNA配列を、自家pTTODベクターのFabA配列中にサブクローニングできるように、断片として合成的に製造した。
CH1−dAb融合物をコードするApaI−EcoRI断片を、dAbが可動性リンカーを介して軽鎖と融合している、既存のFab−dAbプラスミド中にサブクローニングすることによって、軽鎖及び重鎖上の両方にdAbL3又はdAbH4を有するFabA−didAbを構築した。
FabB−dAb、FabB−dAbH1(CH1−G4Sx2)、FabB−dAbH2(CH1−G4Sx2)、FabB−dAbL1(CH1−G4Sx2)、FabB−dAbL2(CH1−G4Sx2)を、PCRによって全てアセンブルし、次いでHCMV−MIEプロモーター及びSV40EポリA配列の制御下で、哺乳類の発現ベクターにクローニングした。これらを、哺乳類細胞における発現のために、FabB軽鎖を含む同様のベクターと対にした(以下を参照されたい)。
製品説明書に従い、Invitrogenの293fectinトランスフェクション試薬を使用して、HEK293細胞に重鎖及び軽鎖のプラスミドをトランスフェクトした。簡潔には、2μgの重鎖プラスミド+2μgの軽鎖プラスミドを、10μlの293fectin+340μlのOptimem培養液を用いてRTで20分間インキュベートした。混合物を、次いで懸濁液中で、5×106個のHEK293細胞に添加し、37℃で振動させながら4日間インキュベートした。
Fab−dAb構築物の相互作用に関する結合親和性及び動態学的パラメータを、CM5センサーチップ及びHBS−EP(10mMのHEPES(pH7.4)、150mMのNaCl、3mMのEDTA、0.05%v/vの界面活性剤P20)泳動用緩衝液を使用して、BiacoreT100上で行う表面プラズモン共鳴(SPR)によって決定した。Fab−dAb試料を、ヒトF(ab’)2特異的ヤギFab(Jackson ImmunoResearch、109−006−097)又は自家産生の抗ヒトCH1モノクローナル抗体のいずれかを使用して、センサーチップの表面に捕捉した。捕捉抗体の共有結合的固定化を、標準的なアミンカップリング化学反応によって成し遂げた。
周辺質の抽出
周辺質内のFab−dAbを含む大腸菌ペレットを、100mMのTris/HCl、pH7.4のEDTA10mMのオリジナルな培地量で再懸濁した。これらの懸濁液を、次いで250rpmで16時間4℃でインキュベートした。再懸濁したペレットを、10000×g、4℃で1時間遠心分離した。上澄み液を除去し、0.45μm濾過した。
Fab−dAbを、プロテインGクロマトグラフィによって、濾過した上澄み液から捕捉した。簡潔には、20分の滞留時間で、20mMのホスフェート、pH7.1のNaCl150mMで平衡化したGammabind Plus Sepharose(GE Healthcare)カラムに上澄み液をアプライした。カラムを20mMのホスフェート、pH7.1のNaCl150mMで洗浄し、結合した物質を、pH2.8のグリシン/HCl0.1Mで溶出した。溶出のピークを採取し、pHを、1Mの酢酸ナトリウムで約pH5に調節した。pHを調節した溶出物を濃縮し、10kのMWCOメンブレンを使用して、pH4.5の酢酸ナトリウム50mM中でダイアフィルトレーションにかけた。
Fab−dAbを、NaClの溶出勾配を用いて、pH4.5で陽イオン交換クロマトグラフィによって、さらに精製した。簡潔には、ダイアフィルトレーションにかけたタンパク質G溶出物を、pH4.5の酢酸ナトリウム50mMで平衡化したSource15S(GE Healthcare)カラムにアプライした。カラムを、pH4.5の酢酸ナトリウム50mMで洗浄し、結合した物質を、pH4.5の酢酸ナトリウム50mMにおいて、0から1MのNaClの20カラム容積直線的勾配を用いて溶出した。第3のカラム容積画分を、勾配の間中、採取した。画分を、A280及びSDS−PAGEによって解析し、関連画分をプールした。
必要である場合、Fab−dAbを、ゲル濾過によってさらに精製した。簡潔には、FabA−dAbL3(CK−SG4SE)のプールしたイオン交換の溶出画分を、50mMの酢酸ナトリウム、pH5.0のNaCl125mMで平衡化したSuperdex200(GE Healthcare)カラムにアプライし、50mMの酢酸ナトリウム、pH5.0のNaCl125mMのアイソクラチックな勾配により溶出した。1/120カラム容積画分を、勾配の間中、採取した。画分を、A280及びSDS−PAGEによって解析し、関連画分をプールした。
必要な場合、試料を水で希釈し、次いで10μLの2X試料泳動用緩衝液を10μlまで添加した。非還元試料に関しては、100mMのNEM2μLを、このポイントまで添加し、還元試料に関しては、10X還元剤2μLを添加した。試料をボルテックスし、85℃で5分間インキュベートし、冷却し、12500rpmで30秒間遠心分離した。調製した試料を、4〜20%のアクリルアミンTris/グリシンSDSゲルにロードし、125Vで100分間泳動した。ゲルを、ウェスタンブロット用PVDFメンブレン上に転写するか、クーマシーブルータンパク質染色で染色した。
ゲルを、150mAで16時間、12mMのTris、pH8.3のグリシン96mM中のPVDFメンブレンに転写した。PVDFメンブレンを、PBS+0.1%Tween20(ブロッキング緩衝液)中で、2%のMarvel(商標)で1時間ブロックした。
HRP−ウサギ抗ヒトカッパ軽鎖、ブロッキング緩衝液中で1時間5000倍希釈。
マウス抗ヒト重鎖、ブロッキング緩衝液中で1時間7000倍希釈。続いてHRP−ヤギ抗マウス、ブロッキング緩衝液中で1時間2000倍希釈。
ウサギ抗His6、ブロッキング緩衝液中で1時間1000倍希釈。続いてHRP−ヤギ抗ウサギIgG、ブロッキング緩衝液中で1時間1000倍希釈。
試料(2μg)を、2.1mmのC8Poroshellカラムにおいて80℃で、2ml/minの流速、及び4分間中18〜38%Bの勾配により解析した。A=H2O中の0.1%TFA、B=IPA:MeOHが80:20中の0.065%TFA。214nmの吸光度により検出する。
Fab−dAbの収率を、サンドイッチELISAを用いて測定した。簡潔は、Fab−dAbを抗CH1抗体で捕捉し、次いで抗カッパ−HRPで明らかにした。
試料(mFabD−didAb’)を、5μg/mlのFITC(フルオレセインイソチオシアネート)標識したHSAとともに45分間インキュベートした。試料/HSA−FITCインキュベーション物を、次いで活性化マウスCD4+T細胞に添加し、さらに45分間インキュベートした。細胞をPBSで洗浄し、細胞が結合したフルオレセインを、FACS(フルオレセイン活性化細胞選別)によって測定した。
抗アルブミン抗体の発生
1/2ロップウサギを、組換えchromapureヒト血清アルブミン(Jacksonから購入)で免疫した。ウサギは、皮下的に100μgのHSAタンパク質で3回免疫化を受け、完全フロイントアジュバントにおいて最初の免疫化、及び不完全フロイントにおいて次の免疫化を受けた。ヒト、マウス、ラット血清アルブミンと結合する、抗体1及び2、646、647及び649を、WO04/051268に記載の方法を用いて単離した。抗体1及び2の重鎖の可変ドメイン(VH)及び軽鎖の可変ドメイン(VL)に対する遺伝子を単離し、逆転写PCRによるクローニングの後に配列決定した。
ヒト化VL及びVH領域を、ヒトV領域のアクセプターフレームワーク及びフレームワーク領域におけるドナー残基を用いて設計した。1つのグラフトしたVL領域(L1(配列番号53)及びL2(配列番号55))及び1つのVH領域(H1(配列番号52)及びH2(配列番号54))を、各抗体1及び2それぞれに対して設計し、遺伝子を、オリゴヌクレオチドのアッセンブリ及びPCR変異誘発によって構築した。グラフトしたドメイン抗体及びそれらのCDRを図5に示す。
哺乳類細胞において発現したFabB−dAbの解析
FabB−dAb構築物を、方法に記載のように産生し、FabB−dAbを含む、トランスフェクトしたHEK293細胞からの上澄み液を、BIAcoreにおいて直接的に試験した。
哺乳類細胞において発現したFabB−didAbの解析
FabB−didAb構築物を、方法に記載のように産生し、didAbを含む、トランスフェクトしたHEK293細胞からの上澄み液を、BIAcoreにおいて直接的に試験した。
精製したFabA−dAbの解析
大腸菌中でFab−dAb、Fab’A−dAbL3(CK−SG4SE)Fab’A−dAbL3(CK−G[APAPA]2)を発現させるためのプラスミドを、方法に記載のように構築した。Fab−dAbを、大腸菌の周辺質中に発現させ、方法に記載のように均一に精製した。Fab−dAbの純度を、高温逆相HPLC、SDS−PAGE及びウェスタンブロットによって評価した。Fab−dAbを、Biacoreによって抗原結合性に関しても評価した。
方法に記載のように行った高温逆相HPLCにより、FabA−dAbL3(CK−SG4SE)及びFabA−dAbL3(CK−G[APAPA]2)に含まれる全種の定量的解析が得られた。各種の存在パーセンテージを表4に示す。
Fab−dAb試料を、方法に記載のように、非還元及び還元条件下で調製し、ゲルで泳動した。ゲルをクーマシー染色した。Fab−dAb試料、すなわちFab’A−dAbL3(CK−SG4SE)及びFab’A−dAbL3(CK−G[APAPA]2)の両方の結合性プロファイルは、高温逆相HPLCによって観察したプロファイルとよく一致する(図3)。
Fab−dAb試料を、方法に記載のように、非還元SDS−PAGEにさらし、続いて抗軽鎖及び抗重鎖の抗体を用いてウェスタンブロット解析にさらした。これにより、dAbが、Fabの軽鎖上にあり、重鎖が、両試料において修飾されなかったことが確認された(図4)。クーマシー染色、非還元SDS PAGEによって検出された全バンドが、Fab−dAb関連産物であることも実際に示す。
方法に記載のようなSPRによる動態学的解析を、ヒト血清アルブミンとFab’A−dAbL3(CK−SG4SE)及びFab’A−dAbL3(CK−G[APAPA]2)との結合性を評価するために使用した。表5の結果は、両構築物が、およそ1μMの同様の親和性(KD)で、ヒト血清アルブミンと結合できることを実際に示す。
大腸菌におけるFabA−didAbの発現
C末端ヒスチジンタグ(HIS6タグ)で停止するFabA−dAb及びFabA−didAb融合物を、大腸菌中で発現させた。周辺質の抽出後、dAb融合タンパク質を、C末端のHis6タグにより精製した。Fabの発現を、抗CH1及び抗cカッパ抗体を用いて、非還元ゲルのウェスタンブロットによって解析した。FabA−dAb及びFabA−didAbは、完全長タンパク質として発現し、両抗体の検出試薬と反応することが示された。
1つ又は複数のdAbが融合するFabA構築物とHSAとの結合性を特性評価するために、さらなる解析を行った。結合アッセイを、dAbL3又はdAbH4が、FabAの軽鎖又は重鎖のいずれかと融合している様々な構築物において行った(構築物の詳細及び結合性データの概要に関しては表8を参照されたい)。軽鎖又は重鎖上のいずれかに、dAbH4のみを保有する構築物が、比較的乏しい親和性(それぞれ約9μM及び3μM)でHSAと結合することがわかったが、(軽鎖又は重鎖上のいずれかの)単一融合物として、又は反対の鎖上の第2dAb(dAbL3又はdAbH4)と一組になって、dAbL3を保有する構築物に関して、より高い結合親和性が観察された。
FabB−didAbの発現及び精製
哺乳類の発現
トランスフェクションに先立って、CHO−XE細胞を、Earls Balanced Salts Solution(EBSS)中で洗浄し、ペレットにし、2×108細胞/mlでEBSSに再懸濁した。重鎖及び軽鎖のプラスミドを、400ugの全濃度で細胞に添加した。自家のエレクトロポレータ上の800μlの細胞/DNA混合に関する最適化した電気的パラメータを、トランスフェクションに使用した。トランスフェクトした細胞を、glutamax、HT及び抗真菌抗菌溶液を供給した1LのCD−CHO培地に、直接的にトランスフェクトした。細胞を、37℃で24時間、振動させながらインキュベートし、次いで32℃に変えた。酪酸ナトリウム3mMを4日目に添加した。1500×gの遠心分離によって上澄み液を14日目に採取し、細胞を除去した。発現レベルを、ELISAによって決定した。
ELISAによって評価したときの約55μg/mlのFabB−didAbを含む哺乳類の上澄み液を、分子量10kDaカットオフのポリエーテルスルホン(PES)膜に適合したMinisette濃縮器を使用して、1.8Lから200mlまで濃縮した。
濃縮した上澄み液を、20mMのホスフェート、pH7.1のNaCl150mMで平衡化したGammabind Plus Sepharose(GE Healthcare)カラムにアプライした。カラムを、20mMのホスフェート、pH7.1のNaCl150mMで洗浄し、結合した物質を、pH2.7のグリシン/HCl0.1Mで溶出した。溶出ピークを採取し、pHを、pH8.8のTris/HCl2Mで約pH7に調節した。pH調節した溶出物を、1mg/mlに濃縮し、分子量10kDカットオフのPES膜を用いて、20mMのホスフェート、pH7.1のNaCl150mM中でダイアフィルトレーションにかけた。
必要な場合、試料を水で希釈し、次いで10μLの4XLDS試料泳動用緩衝液を26μlまで添加した。非還元試料に関しては、100mMのNEM4μLを添加し、還元試料に関しては、10X還元剤4μLを添加した。試料をボルテックスし、85℃で5分間インキュベートし、冷却し、12500rpmで30秒間遠心分離した。調製した試料を、4〜20%のアクリルアミンTris/グリシンSDSゲルにロードし、125Vで110分間泳動した。ゲルを、クーマシーブルータンパク質染色で染色した。
Fab−didAbの収率を、サンドイッチELISAを用いて測定した。簡潔には、Fab−didAbを、抗CH1抗体で捕捉し、次いで抗カッパ−HRPで明らかにした。
FabB及びFabB−didAb試料を、方法に記載のように、非還元及び還元条件下で調製し、ゲルで分離し、染色した。図9を参照されたい。
FabB−FvにおけるThermofluor熱安定性アッセイ
試料(約1mg/mlでの試料1μl、PBS8μl及びSyproオレンジ蛍光色素の30×ストック1μl)を、384穴プレート中に4連で泳動した。7900HTファストリアルタイムPCRシステムを使用して、プレートを20から99℃に加熱し、蛍光(490nmで励起、530nmで発光)を測定する。結果を表D及び図10に示す。
FabB−Fvの凝集安定性アッセイ
PBS中の1mg/mlでの試料を、1400rpmでボルテックスしながら、25℃でインキュベートした。吸光度を595nmで測定した。この吸光度は、粒子による光散乱によるものであり、試料の凝集と相関することができる。FabB−645Fv(G4Sx2)及びFabB−648Fv(G4Sx2)の両方は、FabB単独と同じくらい凝集への抵抗性がある。それらは全て、IgG対照より凝集への耐性がある(図12)。
HSAに結合するFab−FvのpH依存性
所望のpHを実現するために、pH5.0、5.5、6.0及び7.0の泳動用緩衝液を、40mMのクエン酸、150mMのNaCl、3mMのEDTA、0.05%v/vの界面活性剤P20及び80mMのリン酸水素二ナトリウム、150mMのNaCl、3mMのEDTA、0.05%v/vの界面活性剤P20を混合することによってつくった場合を除き、方法に記載のように、Fab−Fv構築物とHSAの相互作用に関する結合親和性を決定した。
FabB−FvのインビボでのマウスPK
オスのBALB/cマウス中でのFabB−645Fv(G4Sx2)及びFabB−648Fv(G4Sx2)の薬物動態を、皮下(sc)又は静脈内(iv)のいずれかで、10mg/kgの単回投与の後に決定した。6匹のマウスに、各構築物及び投与経路で投与した。連続的な血液試料(30μL)を、皮下投与の後、次の時点:1、4、8、24、48、72、102及び168時間で、静脈内投与の後、30分、1、8、24、48、72、96及び168時間で、尾静脈から採取した。採取した血液を、血清分離のために凝血活性剤を含むSarstedtマイクロベットCB300Z中に分注し、室温で少なくとも20分間放置した。マイクロベットを次いで20℃で10,000rpmで5分間遠心分離した。血清を取り出し、解析に先立って貯蔵冷凍した。血清試料中のFabB−645Fv(G4Sx2)又はFabB−648Fv(G4Sx2)の濃度を、ELISAによって評価した。簡潔には、Nunc Maxisorb Immunomoduleプレートを、PBS中のhOX40−Fcでコートし、PBS中の1%BSAでブロックした。血清試料及び標準物質をPBS中の1%BSA中で希釈し、プレートに1時間アプライした。プレートをPBSで洗浄し、明らかになったヤギ抗ヒトカッパHRPコンジュゲートの抗体を、PBS中の1%BSA中に1時間アプライした。プレートを洗浄し、次いでTMB基質により展開し、続いて2.5Mの硫酸で停止した。630nmでの吸光度を測定し、濃度を標準曲線から決定した。
FabB−Fvのインビボでの有効性試験
FabB−645Fv及びFabB−648Fvがインビボで有効であるかどうかを調べる試験を行った。簡潔には、これはHuSCIDマウスにおける定常状態での投与に関わり、読み出し情報は、T細胞移植の防止であった。
アルブミンに対する645Fvの親和性を変化させるためのFabB−645Fv変異
FabB−645dsFv(S3xG4S)の645Fv部分の重鎖のCDRにおける選択した残基中に、変異誘発PCRによって点変異を導入した。例えば、I50Aは、Ile50とAlaの置換である。様々な変異を、以下の表11に示す。ヒトアルブミンに対するFab−645Fv変異体の親和性を、方法に記載のようなBIAcoreによって評価した。全変異は、ヒトアルブミンに対する親和性を変化させない又は低下させた。
Fab及びFv間の1−5Gly4Serリンカー長
哺乳類細胞における発現のためのFabB−645Fv融合プラスミドの構築
FabのC末端及びFvのN末端の間のSGGGGS、SGGGGSGGGGS、SGGGGSGGGGSGGGGS、SGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS又はSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSリンカーのいずれかを有するFabB−645Fv’をPCRによってアッセンブルし、次いでHCMV−MIEプロモーター及びSV40EポリA配列の制御下で、哺乳類の発現ベクター中にクローニングした。関連の重鎖及び軽鎖プラスミドを、哺乳類細胞中での発現のために対にした。
製品説明書に従い、Invitrogenの293fectinトランスフェクション試薬を使用して、HEK293細胞に重鎖及び軽鎖のプラスミドにトランスフェクトした。簡潔には、24μgの重鎖プラスミド+24μgの軽鎖プラスミドを、120μlの293fectin+4080μlのOptimem培地を用いてRTで20分間インキュベートした。混合物を、次いで60mLの懸濁液中の60×106個のHEK293細胞に添加し、37℃で振動させながら、4日間インキュベートした。全構築物は、同等によく発現した。
哺乳類の発現の懸濁液を、遠心分離によって澄まし、分子量10kDaカットオフの遠心分離濃縮器を用いて、上澄み液を約1.8mLに濃縮した。濃縮した上澄み液を、16000×gで10分間遠心分離して任意の沈殿物を除去し、次いで1.5mLを、1mlのHiTrapプロテインGカラム(GE Healthcare)上に1ml/minでロードした。カラムを、20mMのホスフェート、pH7.4のNaCl40mMで洗浄し、結合した物質を、pH2.7のグリシン/HCl0.1Mで溶出した。溶出ピーク(2mL)を採取し、pHを、1Mの酢酸ナトリウム250μLで約pH5に調節した。pH調節した溶出物を、分子量10kDaカットオフの遠心分離濃縮器を用いて、20mMのホスフェート、pH7.1のNaCl150mM中でダイアフィルトレーションにかけ、約250μLに濃縮した。全構築物は、同様の精製プロファイルを有し、最終濃度は0.5〜1.1mg/mlであった。
ヒト及びマウスアルブミンに対する、精製したFabB−645Fv(1−5xG4S)構築物の親和性を、方法に記載のように決定した。FabのC末端及びFvのN末端の間の1から5xGly4SerのFvの異なるリンカー長は、ヒト又はマウスアルブミンのいずれかに対する645Fvの親和性に影響を与えなかった。
FabB−645Fv(1−5xG4S)試料を、方法に記載のように、非還元及び還元条件下で精製し、ゲルで分離し、染色した。図15を参照されたい。
FabB−645Fv(1−5xG4S)試料を、1ml/minで、20mMのホスフェート、pH7.4のNaCl150mMのアイソクラチックな勾配で展開したSuperdex200 10/300GL Tricornカラム(GE Healthcare)上でサイズに関して解析した。
試料(約1mg/mlの試料1μl、PBS8μl及びSyproオレンジ蛍光色素の30×ストック1μl)を、384穴プレート中、4連で泳動した。7900HTファストリアルタイムPCRシステムを用いて、プレートを20から99℃に加熱し、蛍光(490nmで励起、530nmで発光)を測定した。結果を表14及び図17に示す。
Fab−FvにおけるFvのジスルフィド安定性
哺乳類細胞中での発現のためのFabB−645dsFv(2xG4S)、FabB−648dsFv(2xG4S)、FabΔB−645dsFv(2xG4S)及びFabΔB−648dsFv(2xG4S)融合プラスミド
変異誘発PCRによって、Fvの重鎖及び軽鎖の両方のフレームワーク領域において選択した残基での、FabB−645Fv(2xG4S)及びFabB−648Fv(2xG4S)DNA配列中に、点変異を導入した。Fvの重鎖と軽鎖の間の鎖間ジスルフィド結合を作るために導入した変異は、重鎖G44C及び軽鎖G100Cであった。同様に、システインを添加してFv中に鎖間ジスルフィド結合をつくり、変異誘発PCRにより、システインをセリンに変えることによって、Fabの重鎖及び軽鎖の間の天然鎖間ジスルフィドを除去した。鎖間ジスルフィド結合を含むFvを、dsFvと名付け、鎖間ジスルフィド結合を欠くFabを、FabΔと名付けた。これらの全構築物に対するDNAを、次いでHCMV−MIEプロモーター及びSV40EポリA配列の制御下で、哺乳類の発現ベクター中にクローニングした。関連する重鎖及び軽鎖のプラスミドを、哺乳類細胞中での発現のために対にした。
製品説明書に従い、Invitrogenの293fectinトランスフェクション試薬を用いて、HEK293細胞に重鎖及び軽鎖のプラスミドをトランスフェクトした。簡潔に述べると、24μgの重鎖プラスミド+24μgの軽鎖プラスミドを、120μlの293fectin+4080μlのOptimem培地を用いてRTで20分間インキュベートした。混合物を、次いで60mLの懸濁液中で60×106個のHEK293細胞に添加し、37℃で振動させながら、4日間インキュベートした。全構築物は、同等によく発現した。
哺乳類の発現の懸濁液を、遠心分離によって澄まし、分子量10kDaカットオフの遠心分離濃縮器を用いて、上澄み液を約1.8mLに濃縮した。濃縮した上澄み液を、16000×gで10分間遠心分離して任意の沈殿物を除去し、次いで1.5mLを、1mlのHiTrapプロテインGカラム(GE Healthcare)上に1ml/minでロードした。カラムを、20mMのホスフェート、pH7.4のNaCl40mMで洗浄し、結合した物質を、pH2.7のグリシン/HCl0.1Mで溶出した。溶出ピーク(2mL)を採取し、pHを、1Mの酢酸ナトリウム250μLで約pH5に調節した。pH調節した溶出物を、分子量10kDaカットオフの遠心分離濃縮器を用いて、20mMのホスフェート、pH7.1のNaCl150mM中でダイアフィルトレーションにかけ、約250μLに濃縮した。全構築物は、同様の精製プロファイルを有し、最終濃度は0.5〜0.8mg/mlであった。
ヒト及びマウスアルブミンに対する、精製したFabB−645dsFv(2xG4S)、FabB−648dsFv(2xG4S)FabΔB−645dsFv(2xG4S)、FabΔB−648dsFv(2xG4S)構築物の親和性を、方法に記載のように決定した。Fvのジスルフィド安定化は、ヒト又はマウスアルブミンの両方に対するFvの親和性に影響を与えないか、親和性をわずかに増加させた。
精製したFabB−645dsFv(2xG4S)、FabB−648dsFv(2xG4S)FabΔB−645dsFv(2xG4S)、FabΔB−648dsFv(2xG4S)試料を、方法に記載のように、非還元及び還元条件下で調製し、ゲルで分離し、染色した。図18を参照されたい。
精製したFabB−645dsFv(2xG4S)、FabB−648dsFv(2xG4S)、FabΔB−645dsFv(2xG4S)、FabΔB−648dsFv(2xG4S)試料を、1ml/minで20mMのホスフェート、pH7.4のNaCl150mMのアイソクラチックな勾配により展開したSuperdex200 10/300GL Tricornカラム(GE Healthcare)上でサイズに関して解析した。
試料(約1mg/mlの試料1μl、PBS8μl及びSyproオレンジ蛍光色素の30xストック1μl)を、384穴プレート中で4連で泳動した。7900HTファストリアルタイムPCRシステムを用いて、プレートを20から99℃に加熱し、蛍光(490nmで励起、530nmで発光)を測定した。
Fab−dAb及びFab−didAb構築物の相互作用に関する結合親和性及び動態学的パラメータを、CM5センサーチップ及びHBS−EP(10mMのHEPES(pH7.4)、150mMのNaCl、3mMのEDTA、0.05%v/v界面活性剤P20)泳動用緩衝液を用いて、BiacoreT100において行う表面プラズモン共鳴(SPR)によって決定した。ヒトFab試料を、ヒトF(ab’)2特異的ヤギFab(Jackson ImmunoResearch、109−006−097)又は自家産生の抗ヒトCH1モノクローナル抗体のいずれかを使用して、センサーチップの表面に捕捉した。マウスFab試料を、マウスF(ab’)2特異的ヤギFab(Jackson ImmunoResearch、115−006−072)を用いて捕捉した。捕捉抗体の共有結合的固定化を、標準的なアミンカップリング化学反応によって成し遂げた。
mFabC−mdidAb及びmFabD−mdidAbの哺乳類の発現
製品説明書に従い、Invitrogenの293fectinトランスフェクション試薬を使用して、HEK293細胞に重鎖及び軽鎖のプラスミドをトランスフェクトした。簡潔には、2μgの重鎖プラスミド+2μgの軽鎖プラスミドを、10μlの293fectin+340μlのOptimem培地を用いてRTで20分間インキュベートした。次いで、混合物を懸濁液中の5×106個のHEK293細胞に添加し、37℃で振盪させながら、6日間インキュベートした。
mFab−mdidAbの収率を、サンドイッチELISAを用いて測定した。簡潔に述べると、mFab−mdidAbを抗CH1抗体で捕捉し、次いで抗カッパ−HRPで明らかにした。
血清アルブミン及びヒトOX40と、精製したFabB−didAb、−dAbL1(CK−G4Sx2)&−dAbH1(CH1−G4Sx2)及びFabB−didAb、−dAbL2(CK−G4Sx2)&−dAbH2(CH1−G4Sx2)融合物との相互作用を評価するために、さらなる動態学的解析を行った(表19)。FabB−didAb、−dAbL1(CK−G4Sx2)&−dAbH1(CH1−G4Sx2)及びFabB−didAb、−dAbL2(CK−G4Sx2)&−dAbH2(CH1−G4Sx2)の両方は、オリジナルなFabBのヒトOX40に対する親和性を保持した(表20)。
血清アルブミン及びマウス細胞表面受容体Dと、mFabD−mdidAb、−mdAbL1(CK−G4Sx2)&mdAbH1(CH1−G4Sx2)及びmFabD−mdidAb、−mdAbL2(CK−G4Sx2)&mdAbH2(CH1−G4Sx2)との相互作用を評価するために、さらなる動態学的解析を行った(表22)。両mFabD−mdidAbは、HSAとの高い結合親和性をそれぞれ示した(それぞれKD=2.78nM及び8.97nM)。mFabD−mdidAb、−mdAbL2(CK−G4Sx2)&mdAbH2(CH1−G4Sx2)は同様の親和性(KD=22nM)で、MSAとも結合したが、mFabD−mdidAb、−mdAbL1(CK−G4Sx2)&mdAbH1(CH1−G4Sx2)に関しては、MSAとの結合性は見られなかった。両mFabD−mdidAbは、元のmFabDのマウス細胞表面受容体Dに対する親和性を保持した(表23)。
血清アルブミン及び細胞表面上で発現したマウス細胞表面受容体Dと、mFabD−mdidAb、−mdAbL1(CK−G4Sx2)&mdAbH1(CH1−G4Sx2)又はmFabD−mdidAb、−mdAbL2(CK−G4Sx2)&mdAbH2(CH1−G4Sx2)との同時の相互作用を評価するために、さらなる解析を行った。両mFabD−mdidAbは、FITC標識したHSA、及び活性化マウスT細胞の細胞表面上で発現した細胞表面受容体Xと同時に結合できた(図11)。mFabDは、活性化マウスT細胞の細胞表面上で発現した細胞表面受容体Xと結合でき、データは示さないが、FITC標識したHSAとは結合しなかった。
Claims (12)
- 対象とする抗原に対する第1特異性を有する免疫グロブリン部分、例えば、Fab又はFab’断片を含み、対象とする第2抗原に対する特異性を有する2つの単一ドメイン抗体(dAb)をさらに含む多価抗体融合タンパク質であって、該2つの単一ドメイン抗体がジスルフィド結合によって連結されている、上記多価抗体融合タンパク質。
- 前記第1抗原及び第2抗原が異なる実体である、請求項1に記載の多価抗体融合タンパク質。
- 前記2つの単一ドメイン抗体がVH/VL対である、請求項1又は2に記載の多価抗体融合タンパク質。
- 前記VHdAbが、Fab又はFab’重鎖に直接的又は間接的に接続されている、請求項4に記載の多価抗体融合タンパク質。
- 前記VLdAbが、Fab又はFab’軽鎖重鎖に直接的又は間接的に接続されている、請求項4又は5に記載の多価抗体融合タンパク質。
- 前記VHdAbが、Fab又はFab’軽鎖に直接的又は間接的に接続されている、請求項4に記載の多価抗体融合タンパク質。
- 前記VLdAbが、Fab又はFab’重鎖に直接的又は間接的に接続されている、請求項4又は6に記載の多価抗体融合タンパク質。
- 第2抗原がアルブミンである、請求項1から7までのいずれか一項に記載の多価抗体融合タンパク質。
- アルブミンがヒト血清アルブミンである、請求項8に記載の多価抗体融合タンパク質。
- 対象とする抗原に対する第1特異性を有する免疫グロブリン部分、例えば、Fab又はFab’断片を含み、対象とする第2抗原に対する特異性を有し、ヒト血清アルブミンと結合する単一ドメイン抗体(dAb)をさらに含む二重特異性抗体融合タンパク質であって、前記単一ドメイン抗体が、CDR−H1に関して図5(e)配列番号56又は図5(k)配列番号62に示された配列を有するCDR、CDR−H2に関して図5(f)配列番号57又は図5(l)配列番号63に示された配列を有するCDR、及びCDR−H3に関して図5(g)配列番号58又は図5(m)配列番号64に示された配列を有するCDRのうちの少なくとも1つを含む重鎖VH単一ドメイン抗体である上記二重特異性抗体融合タンパク質。
- 対象とする抗原に対する第1特異性を有する免疫グロブリン部分、例えば、Fab又はFab’断片を含み、対象とする第2抗原に対する特異性を有し、ヒト血清アルブミンと結合する単一ドメイン抗体(dAb)をさらに含む二重特異性抗体融合タンパク質であって、前記単一ドメイン抗体が、CDR−L1に関して図5(h)配列番号59又は図5(n)配列番号65に示された配列を有するCDR、CDR−L2に関して図5(i)配列番号60又は図5(o)配列番号66に示された配列を有するCDR、及びCDR−L3に関して図5(j)配列番号61又は図5(p)配列番号67に示された配列を有するCDRのうちの少なくとも1つを含む軽鎖VL単一ドメイン抗体である上記二重特異性抗体融合タンパク質。
- 対象とする抗原に対する第1特異性を有する免疫グロブリン部分、例えば、Fab又はFab’断片を含み、対象とする第2抗原に対する特異性を有し、ヒト血清アルブミンと結合する単一ドメイン抗体(dAb)をさらに含む二重特異性抗体融合タンパク質であって、前記単一ドメイン抗体が、配列番号56に示された配列を有するCDRH1、配列番号57に示された配列を有するCDRH2、配列番号58に示された配列を有するCDRH3、配列番号59に示された配列を有するCDRL1、配列番号60に示された配列を有するCDRL2、及び配列番号61に示された配列を有するCDRL3から選択される1、2、3、4、5又は6つのCDRを含む上記二重特異性抗体融合タンパク質。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB0817704.0 | 2008-09-26 | ||
GB0817704A GB0817704D0 (en) | 2008-09-26 | 2008-09-26 | Biological products |
GB0905314A GB0905314D0 (en) | 2009-03-26 | 2009-03-26 | Biological products |
GB0905314.1 | 2009-03-26 | ||
PCT/GB2009/002310 WO2010035012A1 (en) | 2008-09-26 | 2009-09-25 | Biological products |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015134223A Division JP2015178536A (ja) | 2008-09-26 | 2015-07-03 | 生物学的産物 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2012503638A true JP2012503638A (ja) | 2012-02-09 |
JP6063122B2 JP6063122B2 (ja) | 2017-01-18 |
Family
ID=41664777
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011528417A Expired - Fee Related JP6063122B2 (ja) | 2008-09-26 | 2009-09-25 | 生物学的産物 |
JP2015134223A Pending JP2015178536A (ja) | 2008-09-26 | 2015-07-03 | 生物学的産物 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015134223A Pending JP2015178536A (ja) | 2008-09-26 | 2015-07-03 | 生物学的産物 |
Country Status (17)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US10407513B2 (ja) |
EP (1) | EP2334705B1 (ja) |
JP (2) | JP6063122B2 (ja) |
CN (2) | CN105601745B (ja) |
BR (1) | BRPI0918947A2 (ja) |
CA (1) | CA2737241C (ja) |
CY (1) | CY1118713T1 (ja) |
DK (1) | DK2334705T3 (ja) |
EA (1) | EA201100527A1 (ja) |
ES (1) | ES2620603T3 (ja) |
HR (1) | HRP20170374T1 (ja) |
HU (1) | HUE033438T2 (ja) |
LT (1) | LT2334705T (ja) |
PL (1) | PL2334705T3 (ja) |
PT (1) | PT2334705T (ja) |
SI (1) | SI2334705T1 (ja) |
WO (1) | WO2010035012A1 (ja) |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2017520253A (ja) * | 2014-06-25 | 2017-07-27 | ユーシービー バイオファルマ エスピーアールエル | 多重特異性抗体コンストラクト |
JP2018515453A (ja) * | 2015-04-22 | 2018-06-14 | ユーシービー バイオファルマ エスピーアールエル | 単量体抗体Fab−dsFv多量体種のパーセンテージを増加させる方法 |
JP2019516785A (ja) * | 2016-05-01 | 2019-06-20 | ユーシービー バイオファルマ エスピーアールエル | 親和性を操作した血清タンパク質担体結合ドメイン |
JP2020515518A (ja) * | 2017-01-17 | 2020-05-28 | アブリンクス エン.ヴェー. | 改善された血清アルブミン結合剤 |
JP2020522250A (ja) * | 2017-06-05 | 2020-07-30 | ヌマブ セラピューティクス アクチェンゲゼルシャフト | 新規抗hsa抗体 |
US11414480B2 (en) | 2016-12-07 | 2022-08-16 | Ablynx N.V. | Serum albumin binding immunoglobulin single variable domains |
US11897944B2 (en) | 2017-01-17 | 2024-02-13 | Ablynx N.V. | Immunoglobulin single variable domain (ISVD) capable of binding to serum albumin |
Families Citing this family (140)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5616428B2 (ja) | 2009-04-07 | 2014-10-29 | ロシュ グリクアート アクチェンゲゼルシャフト | 三価の二重特異性抗体 |
US9676845B2 (en) | 2009-06-16 | 2017-06-13 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bispecific antigen binding proteins |
ES2667258T3 (es) | 2009-09-10 | 2018-05-10 | Ucb Biopharma Sprl | Anticuerpos multivalentes |
GB201005063D0 (en) * | 2010-03-25 | 2010-05-12 | Ucb Pharma Sa | Biological products |
US9234037B2 (en) | 2009-10-27 | 2016-01-12 | Ucb Biopharma Sprl | Method to generate antibodies to ion channels |
GB0922435D0 (en) | 2009-12-22 | 2010-02-03 | Ucb Pharma Sa | Method |
CA2778673A1 (en) | 2009-10-27 | 2011-05-05 | Karen Margrete Miller | Function modifying nav 1.7 antibodies |
GB0922434D0 (en) | 2009-12-22 | 2010-02-03 | Ucb Pharma Sa | antibodies and fragments thereof |
GB0920127D0 (en) | 2009-11-17 | 2009-12-30 | Ucb Pharma Sa | Antibodies |
GB0920324D0 (en) * | 2009-11-19 | 2010-01-06 | Ucb Pharma Sa | Antibodies |
TW201134488A (en) | 2010-03-11 | 2011-10-16 | Ucb Pharma Sa | PD-1 antibodies |
EP2596114A4 (en) * | 2010-07-14 | 2014-01-08 | Amgen Inc | IMMUNOGLOBULIN WITH DOMAIN INSERTION |
KR101612999B1 (ko) * | 2010-08-24 | 2016-04-15 | 로슈 글리카트 아게 | 활성화가능 이중특이적 항체 |
CN103068846B9 (zh) * | 2010-08-24 | 2016-09-28 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 包含二硫键稳定性Fv片段的双特异性抗体 |
EP2658869B1 (en) | 2010-12-30 | 2019-06-12 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Antigen binding formats for use in therapeutic treatments or diagnostic assays |
GB201100282D0 (en) | 2011-01-07 | 2011-02-23 | Ucb Pharma Sa | Biological methods |
US10208349B2 (en) | 2011-01-07 | 2019-02-19 | Ucb Biopharma Sprl | Lipocalin 2 as a biomarker for IL-17 inhibitor therapy efficacy |
CA2823812C (en) | 2011-01-14 | 2017-02-14 | Ucb Pharma S.A. | Antibody molecules which bind il-17a and il-17f |
SG194472A1 (en) * | 2011-01-28 | 2013-12-30 | Ca Nat Research Council | Engineering of immunoglobulin domains |
WO2012122528A1 (en) * | 2011-03-10 | 2012-09-13 | Hco Antibody, Inc. | Bispecific three-chain antibody-like molecules |
EP2753927B1 (en) * | 2011-09-06 | 2017-11-15 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Methods for analyzing biological macromolecular complexes and use thereof |
PL2758432T3 (pl) | 2011-09-16 | 2019-08-30 | Ucb Biopharma Sprl | Przeciwciała neutralizujące przeciw głównym egzotoksynom tcda i tcdb z clostridium difficile |
UA112203C2 (uk) * | 2011-11-11 | 2016-08-10 | Юсб Фарма С.А. | Злитий білок біоспецифічного антитіла, який зв'язується з ox40 людини та сироватковим альбуміном людини |
WO2013068571A1 (en) * | 2011-11-11 | 2013-05-16 | Ucb Pharma S.A. | Albumin binding antibodies and binding fragments thereof |
GB201208367D0 (en) | 2012-05-14 | 2012-06-27 | Ucb Pharma Sa | Biological product |
GB201208370D0 (en) | 2012-05-14 | 2012-06-27 | Ucb Pharma Sa | Antibodies |
CA2871882A1 (en) | 2012-06-27 | 2014-01-03 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for making antibody fc-region conjugates comprising at least one binding entity that specifically binds to a target and uses thereof |
EP2867253B1 (en) | 2012-06-27 | 2016-09-14 | F. Hoffmann-La Roche AG | Method for selection and production of tailor-made highly selective and multi-specific targeting entities containing at least two different binding entities and uses thereof |
GB201223276D0 (en) | 2012-12-21 | 2013-02-06 | Ucb Pharma Sa | Antibodies and methods of producing same |
ES2753950T3 (es) * | 2013-03-15 | 2020-04-15 | Amgen Res Munich Gmbh | Moléculas de unión monocatenarias que comprenden ABP del extremo N |
GB201315487D0 (en) | 2013-08-30 | 2013-10-16 | Ucb Pharma Sa | Antibodies |
MX371328B (es) * | 2013-08-30 | 2020-01-27 | Aprilbio Co Ltd | Constructo de fusion de la fraccion efectora del fragmento de union a antigeno (fab) de anti-albumina de suero y su metodo de preparacion. |
RS57043B1 (sr) | 2013-10-25 | 2018-05-31 | Psioxus Therapeutics Ltd | Onkolitički adenovirusi snabdeveni heterologus genima |
CN113278076A (zh) | 2013-11-11 | 2021-08-20 | 中外制药株式会社 | 含有改变了抗体可变区的抗原结合分子 |
GB201320066D0 (en) | 2013-11-13 | 2013-12-25 | Ucb Pharma Sa | Biological products |
US8992927B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-03-31 | Kymab Limited | Targeting human NAV1.7 variants for treatment of pain |
US9914769B2 (en) | 2014-07-15 | 2018-03-13 | Kymab Limited | Precision medicine for cholesterol treatment |
US9067998B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-06-30 | Kymab Limited | Targeting PD-1 variants for treatment of cancer |
US9045545B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-06-02 | Kymab Limited | Precision medicine by targeting PD-L1 variants for treatment of cancer |
US8986694B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-03-24 | Kymab Limited | Targeting human nav1.7 variants for treatment of pain |
ES2700149T3 (es) * | 2014-02-24 | 2019-02-14 | Takeda Gmbh | Proteínas de fusión de UTI |
GB201403775D0 (en) | 2014-03-04 | 2014-04-16 | Kymab Ltd | Antibodies, uses & methods |
GB201406608D0 (en) | 2014-04-12 | 2014-05-28 | Psioxus Therapeutics Ltd | Virus |
GB201409558D0 (en) | 2014-05-29 | 2014-07-16 | Ucb Biopharma Sprl | Method |
US9139648B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-09-22 | Kymab Limited | Precision medicine by targeting human NAV1.9 variants for treatment of pain |
GB201412659D0 (en) | 2014-07-16 | 2014-08-27 | Ucb Biopharma Sprl | Molecules |
GB201412658D0 (en) | 2014-07-16 | 2014-08-27 | Ucb Biopharma Sprl | Molecules |
US11154615B2 (en) | 2014-11-11 | 2021-10-26 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Library of antigen-binding molecules including modified antibody variable region |
CN107001482B (zh) | 2014-12-03 | 2021-06-15 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 多特异性抗体 |
GB201506870D0 (en) | 2015-04-22 | 2015-06-03 | Ucb Biopharma Sprl | Method |
AU2016254215A1 (en) | 2015-04-30 | 2017-10-26 | President And Fellows Of Harvard College | Anti-aP2 antibodies and antigen binding agents to treat metabolic disorders |
GB201508180D0 (en) | 2015-05-13 | 2015-06-24 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
US10316097B2 (en) | 2015-05-27 | 2019-06-11 | Ucb Biopharma Sprl | Method for the treatment of epilepsy, epileptogenesis, seizures or convulsions by an anti-colony-stimulating factor 1 receptor (CSF-1R) antibody |
WO2016192613A1 (zh) * | 2015-06-01 | 2016-12-08 | 中山大学 | 具有融合至常规Fab片段的单域抗原结合片段的二价抗体 |
UA124616C2 (uk) | 2015-07-06 | 2021-10-20 | Юсб Біофарма Срл | Зв'язуюче тау-білок антитіло |
CA2991264C (en) | 2015-07-06 | 2023-10-10 | Ucb Biopharma Sprl | Tau-binding antibodies |
GB201601073D0 (en) | 2016-01-20 | 2016-03-02 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
GB201601077D0 (en) | 2016-01-20 | 2016-03-02 | Ucb Biopharma Sprl | Antibody molecule |
GB201601075D0 (en) | 2016-01-20 | 2016-03-02 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies molecules |
DK3359688T3 (da) | 2015-10-05 | 2021-08-23 | Biogen Ma Inc | Molekylære signaturer til anvendelse til diagnose og analyse af respons på behandling af autoimmune sygdomme |
CN116059350A (zh) | 2015-10-27 | 2023-05-05 | Ucb生物制药有限责任公司 | 使用抗-il-17a/f抗体的治疗方法 |
GB201521391D0 (en) | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
GB201521382D0 (en) | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
GB201521383D0 (en) | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl And Ucb Celltech | Method |
GB201521389D0 (en) | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl | Method |
GB201521393D0 (en) | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
GB201522394D0 (en) | 2015-12-18 | 2016-02-03 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
GB201602414D0 (en) | 2016-02-10 | 2016-03-23 | Nascient Ltd | Biological materials and uses thereof |
GB201610198D0 (en) | 2016-06-10 | 2016-07-27 | Ucb Biopharma Sprl | Anti-ige antibodies |
EP4273252A3 (en) | 2016-08-29 | 2024-04-17 | Akamis Bio Limited | Adenovirus armed with bispecific t cell engager (bite) |
WO2018083258A1 (en) | 2016-11-03 | 2018-05-11 | Psioxus Therapeutics Limited | Oncolytic adenovirus encoding at least three transgenes |
EP3534947A1 (en) | 2016-11-03 | 2019-09-11 | Kymab Limited | Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses & methods |
WO2018083257A1 (en) | 2016-11-03 | 2018-05-11 | Psioxus Therapeutics Limited | Oncolytic adenovirus encoding transgenes |
US11129906B1 (en) | 2016-12-07 | 2021-09-28 | David Gordon Bermudes | Chimeric protein toxins for expression by therapeutic bacteria |
WO2018183366A1 (en) | 2017-03-28 | 2018-10-04 | Syndax Pharmaceuticals, Inc. | Combination therapies of csf-1r or csf-1 antibodies and a t-cell engaging therapy |
EP3624848A1 (en) | 2017-05-19 | 2020-03-25 | Syndax Pharmaceuticals, Inc. | Combination therapies |
PT3630143T (pt) | 2017-06-01 | 2023-08-29 | Akamis Bio Ltd | Vírus oncolítico e método |
WO2018224439A1 (en) * | 2017-06-05 | 2018-12-13 | Numab Innovation Ag | Novel anti-hsa antibodies |
WO2019004943A1 (en) | 2017-06-30 | 2019-01-03 | Aslan Pharmaceuticals Pte Ltd | METHOD OF TREATMENT USING ANTIBODY DIRECTED AGAINST IL-13R |
EP3470426A1 (en) | 2017-10-10 | 2019-04-17 | Numab Therapeutics AG | Multispecific antibody |
CN111194323B (zh) | 2017-10-10 | 2024-07-09 | 努玛治疗有限公司 | 多特异性抗体 |
JP7357616B2 (ja) | 2017-12-05 | 2023-10-06 | 中外製薬株式会社 | Cd3およびcd137に結合する改変された抗体可変領域を含む抗原結合分子 |
GB201811368D0 (en) | 2018-07-11 | 2018-08-29 | Ucb Biopharma Sprl | Antibody |
EP3841120A1 (en) | 2018-08-21 | 2021-06-30 | Citryll B.V. | Antibodies binding to citrullinated histone 2a and/or 4 |
BR112021005472A2 (pt) * | 2018-09-28 | 2021-06-15 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | molécula de ligação ao antígeno compreendendo uma região variável do anticorpo alterada |
SG11202103801UA (en) | 2018-10-16 | 2021-05-28 | UCB Biopharma SRL | Method for the treatment of myasthenia gravis |
GB201817309D0 (en) | 2018-10-24 | 2018-12-05 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
GB201817311D0 (en) | 2018-10-24 | 2018-12-05 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
WO2020092427A1 (en) * | 2018-10-29 | 2020-05-07 | Tigatx, Inc. | COMPOSITIONS AND METHODS COMPRISING IgA ANTIBODY CONSTRUCTS |
KR20210143788A (ko) | 2019-03-26 | 2021-11-29 | 아슬란 파마슈티컬스 피티이 엘티디 | 항-il-13r 항체 또는 이의 결합 단편을 이용하는 치료 |
CN114096559A (zh) | 2019-03-27 | 2022-02-25 | 蒂嘉特克斯公司 | 工程化iga抗体及其使用方法 |
EP3816185A1 (en) | 2019-11-04 | 2021-05-05 | Numab Therapeutics AG | Multispecific antibody directed against pd-l1 and a tumor-associated antigen |
GB201919062D0 (en) | 2019-12-20 | 2020-02-05 | Ucb Biopharma Sprl | Antibody |
GB201919061D0 (en) | 2019-12-20 | 2020-02-05 | Ucb Biopharma Sprl | Multi-specific antibody |
GB201919058D0 (en) | 2019-12-20 | 2020-02-05 | Ucb Biopharma Sprl | Multi-specific antibodies |
KR20210095781A (ko) | 2020-01-24 | 2021-08-03 | 주식회사 에이프릴바이오 | 항원결합 단편 및 생리활성 이펙터 모이어티로 구성된 융합 컨스트럭트를 포함하는 다중결합항체 및 이를 포함하는 약학조성물 |
GB202001447D0 (en) | 2020-02-03 | 2020-03-18 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
EP4103611B1 (en) | 2020-02-13 | 2024-03-27 | UCB Biopharma SRL | Bispecific antibodies binding hvem and cd9 |
WO2021160267A1 (en) | 2020-02-13 | 2021-08-19 | UCB Biopharma SRL | Bispecific antibodies against cd9 and cd7 |
US20230151108A1 (en) | 2020-02-13 | 2023-05-18 | UCB Biopharma SRL | Bispecific antibodies against cd9 and cd137 |
US20230151109A1 (en) | 2020-02-13 | 2023-05-18 | UCB Biopharma SRL | Bispecific antibodies against cd9 |
WO2021160269A1 (en) | 2020-02-13 | 2021-08-19 | UCB Biopharma SRL | Anti cd44-ctla4 bispecific antibodies |
JP2023515480A (ja) | 2020-02-21 | 2023-04-13 | 江蘇恒瑞医薬股▲ふん▼有限公司 | 抗il-2抗体、その抗原結合断片及びその医薬用途 |
CN115667298A (zh) | 2020-03-27 | 2023-01-31 | Ucb生物制药有限责任公司 | 自主凸起结构域肽 |
CN115397866A (zh) | 2020-03-31 | 2022-11-25 | 中外制药株式会社 | 靶向dll3的多特异性抗原结合分子及其用途 |
TW202144429A (zh) | 2020-05-14 | 2021-12-01 | 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司 | 抗cd25抗體、其抗原結合片段及其醫藥用途 |
EP3915580A1 (en) | 2020-05-29 | 2021-12-01 | Numab Therapeutics AG | Multispecific antibody |
TWI806087B (zh) * | 2020-06-30 | 2023-06-21 | 大陸商和鉑醫藥(上海)有限責任公司 | 免疫細胞銜接多特異性結合蛋白及其製備和應用 |
MX2022015959A (es) | 2020-07-02 | 2023-01-24 | Beijing Tuo Jie Biopharmaceutical Co Ltd | Anticuerpo anti-fxi/fxia, fragmento de union a antigeno del mismo y uso farmaceutico del mismo. |
TW202214306A (zh) | 2020-07-27 | 2022-04-16 | 大陸商上海拓界生物醫藥科技有限公司 | 抗cd79b抗體藥物偶聯物、其製備方法及其醫藥用途 |
GB202012326D0 (en) | 2020-08-07 | 2020-09-23 | Citryll B V | Diagnostic |
WO2022079199A1 (en) | 2020-10-15 | 2022-04-21 | UCB Biopharma SRL | Binding molecules that multimerise cd45 |
EP3988568A1 (en) | 2020-10-21 | 2022-04-27 | Numab Therapeutics AG | Combination treatment |
WO2022089767A1 (en) | 2020-11-02 | 2022-05-05 | UCB Biopharma SRL | Use of anti-trem1 neutralizing antibodies for the treatment of motor neuron neurodegenerative disorders |
IL303295A (en) | 2020-12-07 | 2023-07-01 | UCB Biopharma SRL | Multispecific antibodies and antibody combinations |
IL303294A (en) | 2020-12-07 | 2023-07-01 | UCB Biopharma SRL | Antibodies against interleukin-22 |
EP4267185A1 (en) * | 2020-12-23 | 2023-11-01 | Lumen Bioscience, Inc. | Constructs comprising single domain vhh antibodies against sars-cov-2 |
CA3208781A1 (en) | 2021-02-02 | 2022-08-11 | Bithi CHATTERJEE | Multispecific antibodies having specificity for ror1 and cd3 |
GB202102227D0 (en) | 2021-02-17 | 2021-03-31 | UCB Biopharma SRL | Antibodies |
KR20240000543A (ko) | 2021-04-25 | 2024-01-02 | 지앙수 헨그루이 파마슈티컬스 컴퍼니 리미티드 | 항-masp2 항체, 이의 항원-결합 단편 및 이의 의학적 용도 |
CA3218933A1 (en) | 2021-05-03 | 2022-11-10 | UCB Biopharma SRL | Antibodies |
IL308223A (en) | 2021-05-04 | 2024-01-01 | Citryll B V | Prevention of eosinophilic traps |
EP4085973A1 (en) | 2021-05-04 | 2022-11-09 | Citryll B.V. | Inhibition of eosinophil extracellular traps |
EP4365200A1 (en) | 2021-06-28 | 2024-05-08 | Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co., Ltd. | Anti-cd40 antibody, antigen-binding fragment and medical use thereof |
GB202111905D0 (en) | 2021-08-19 | 2021-10-06 | UCB Biopharma SRL | Antibodies |
KR20240049304A (ko) | 2021-08-25 | 2024-04-16 | 지앙수 헨그루이 파마슈티컬스 컴퍼니 리미티드 | 융합 단백질을 함유하는 약학적 조성물 |
CA3231320A1 (en) | 2021-09-15 | 2023-03-23 | Zhiliang CAO | Protein specifically binding to pd-1 and pharmaceutical use thereof |
TW202333784A (zh) | 2021-10-29 | 2023-09-01 | 新加坡商亞獅康私人有限公司 | 抗il13r抗體調配物 |
EP4183800A1 (en) | 2021-11-19 | 2023-05-24 | Medizinische Hochschule Hannover | Novel sars-cov-2 neutralizing antibodies |
WO2023137373A1 (en) * | 2022-01-12 | 2023-07-20 | Biomolecular Holdings Llc | Tetrahedral antibodies |
WO2023140780A1 (en) | 2022-01-24 | 2023-07-27 | Aslan Pharmaceuticals Pte Ltd. | Method of treating inflammatory disease |
WO2023163659A1 (en) | 2022-02-23 | 2023-08-31 | Aslan Pharmaceuticals Pte Ltd | Glycosylated form of anti-il13r antibody |
CN114657125B (zh) * | 2022-04-29 | 2023-08-08 | 中国科学院海洋研究所 | 鲨鱼单个核细胞的分离方法、鲨鱼稀释液及其用途 |
WO2024038095A1 (en) | 2022-08-16 | 2024-02-22 | Iome Bio | NOVEL ANTI-RGMb ANTIBODIES |
WO2024043837A1 (en) | 2022-08-26 | 2024-02-29 | Aslan Pharmaceuticals Pte Ltd | High concentration anti-il13r antibody formulation |
WO2024050354A1 (en) | 2022-08-31 | 2024-03-07 | Washington University | Alphavirus antigen binding antibodies and uses thereof |
GB202214756D0 (en) | 2022-10-07 | 2022-11-23 | Univ Oxford Innovation Ltd | Product |
GB202216284D0 (en) | 2022-11-02 | 2022-12-14 | Ucl Business Ltd | Self-regulation |
WO2024115393A1 (en) | 2022-11-28 | 2024-06-06 | UCB Biopharma SRL | Treatment of fibromyalgia |
GB202403366D0 (en) | 2024-03-08 | 2024-04-24 | Univ Oxford Innovation Ltd | Product |
Family Cites Families (64)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0281604B1 (en) | 1986-09-02 | 1993-03-31 | Enzon Labs Inc. | Single polypeptide chain binding molecules |
JP2919890B2 (ja) | 1988-11-11 | 1999-07-19 | メディカル リサーチ カウンスル | 単一ドメインリガンド、そのリガンドからなる受容体、その製造方法、ならびにそのリガンドおよび受容体の使用 |
SE509359C2 (sv) | 1989-08-01 | 1999-01-18 | Cemu Bioteknik Ab | Användning av stabiliserade protein- eller peptidkonjugat för framställning av ett läkemedel |
US6267964B1 (en) * | 1989-08-01 | 2001-07-31 | Affibody Technology Sweden Ab | Stabilized protein or peptide conjugates able to bond albumin having extended biological half-lives |
DE4118120A1 (de) * | 1991-06-03 | 1992-12-10 | Behringwerke Ag | Tetravalente bispezifische rezeptoren, ihre herstellung und verwendung |
DK1136556T3 (da) | 1991-11-25 | 2005-10-03 | Enzon Inc | Fremgangsmåde til fremstilling af multivalente antigen-bindende proteiner |
ATE149570T1 (de) | 1992-08-17 | 1997-03-15 | Genentech Inc | Bispezifische immunoadhesine |
GB9221657D0 (en) | 1992-10-15 | 1992-11-25 | Scotgen Ltd | Recombinant bispecific antibodies |
ATE199392T1 (de) | 1992-12-04 | 2001-03-15 | Medical Res Council | Multivalente und multispezifische bindungsproteine, deren herstellung und verwendung |
WO1995009917A1 (en) | 1993-10-07 | 1995-04-13 | The Regents Of The University Of California | Genetically engineered bispecific tetravalent antibodies |
US5972901A (en) * | 1994-03-23 | 1999-10-26 | Case Western Reserve University | Serpin enzyme complex receptor--mediated gene transfer |
US5641870A (en) * | 1995-04-20 | 1997-06-24 | Genentech, Inc. | Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification |
US6239259B1 (en) * | 1996-04-04 | 2001-05-29 | Unilever Patent Holdings B.V. | Multivalent and multispecific antigen-binding protein |
JP4219985B2 (ja) * | 1996-07-23 | 2009-02-04 | タノックス ファーマ ベスローテン フェンノートシャップ | 二つの共刺激経路を同時にブロックできる可溶性分子を用いたt細胞寛容の誘導 |
CN1203178C (zh) * | 1997-10-27 | 2005-05-25 | 尤尼利弗公司 | 多价抗原结合蛋白 |
DE69922159T2 (de) * | 1998-01-23 | 2005-12-01 | Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie | Mehrzweck-antikörperderivate |
DE19819846B4 (de) * | 1998-05-05 | 2016-11-24 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | Multivalente Antikörper-Konstrukte |
AU760854B2 (en) * | 1998-06-22 | 2003-05-22 | Immunomedics Inc. | Use of bi-specific antibodies for pre-targeting diagnosis and therapy |
JP2003518075A (ja) | 1999-12-24 | 2003-06-03 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | 生理活性化合物の消失半減期延長のための方法及び組成物 |
US20060228364A1 (en) | 1999-12-24 | 2006-10-12 | Genentech, Inc. | Serum albumin binding peptides for tumor targeting |
AU2001247616B2 (en) * | 2000-04-11 | 2007-06-14 | Genentech, Inc. | Multivalent antibodies and uses therefor |
DE10021678A1 (de) | 2000-05-05 | 2002-04-18 | Stefan Duebel | Antikörperkonstrukte mit variablen Regionen |
EP1299419A2 (en) * | 2000-05-24 | 2003-04-09 | Imclone Systems, Inc. | Bispecific immunoglobulin-like antigen binding proteins and method of production |
CA2411374C (en) | 2000-06-29 | 2012-10-30 | Abbott Laboratories | Dual specificity antibodies and methods of making and using |
US20020010334A1 (en) * | 2000-06-30 | 2002-01-24 | Xun Li | Processes to prepare pyrimidinediones |
AU2001270609A1 (en) | 2000-06-30 | 2002-01-14 | Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie Vzw | Heterodimeric fusion proteins |
JP2004523205A (ja) | 2000-07-25 | 2004-08-05 | イムノメディクス, インコーポレイテッド | 多価標的結合タンパク質 |
JP4336771B2 (ja) | 2001-03-09 | 2009-09-30 | モルフォシス アーゲー | 血清アルブミン結合部分 |
DK1399484T3 (da) * | 2001-06-28 | 2010-11-08 | Domantis Ltd | Dobbelt-specifik ligand og anvendelse af denne |
ES2276735T3 (es) * | 2001-09-14 | 2007-07-01 | Affimed Therapeutics Ag | Anticuerpos fv multimericos de cadena sencilla en tandem. |
WO2004001064A2 (en) | 2002-06-21 | 2003-12-31 | Dyax Corporation | Serum protein-associated target-specific ligands and identification method therefor |
DE60305919T2 (de) * | 2002-06-28 | 2007-01-18 | Domantis Limited, Cambridge | Dual-specifische liganden mit erhöhter halbwertszeit |
US20060140931A1 (en) | 2002-09-16 | 2006-06-29 | Nehal Mohamed | Bispecific molecule comprising an anti-cr1 antibody cross-linked to an antigen-binding antibody fragment |
WO2004041865A2 (en) | 2002-11-08 | 2004-05-21 | Ablynx N.V. | Stabilized single domain antibodies |
GB0230201D0 (en) * | 2002-12-27 | 2003-02-05 | Domantis Ltd | Retargeting |
GB0230203D0 (en) * | 2002-12-27 | 2003-02-05 | Domantis Ltd | Fc fusion |
CA2511910A1 (en) * | 2002-12-27 | 2004-07-15 | Domantis Limited | Dual specific single domain antibodies specific for a ligand and for the receptor of the ligand |
US20050163782A1 (en) | 2003-06-27 | 2005-07-28 | Biogen Idec Ma Inc. | Modified binding molecules comprising connecting peptides |
JP5087274B2 (ja) * | 2003-06-30 | 2012-12-05 | ドマンティス リミテッド | ポリペプチド |
WO2006107617A2 (en) * | 2005-04-06 | 2006-10-12 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Methods for generating stably linked complexes composed of homodimers, homotetramers or dimers of dimers and uses |
EP1868650B1 (en) * | 2005-04-15 | 2018-10-03 | MacroGenics, Inc. | Covalent diabodies and uses thereof |
EP2365000A3 (en) | 2005-05-18 | 2013-01-16 | Ablynx N.V. | Improved nanobodiesTM against tumor necrosis factor-alpha |
BRPI0615026A8 (pt) | 2005-08-19 | 2018-03-06 | Abbott Lab | imunoglobulina de domínio variável duplo e seus usos |
US7612181B2 (en) * | 2005-08-19 | 2009-11-03 | Abbott Laboratories | Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof |
GB0601513D0 (en) | 2006-01-25 | 2006-03-08 | Univ Erasmus Medical Ct | Binding molecules 3 |
EA200801515A1 (ru) * | 2006-01-24 | 2009-02-27 | Домантис Лимитед | Лиганды, которые связывают il-4 и/или il-13 |
BRPI0707824A2 (pt) | 2006-02-15 | 2011-05-10 | Imclone Systems Inc | proteÍna de ligaÇço a antÍgeno, e, mÉtodos de neutralizaÇço da ativaÇço de um receptor de tirosina quinase, de inibiÇço de angiogÊnese, de reduÇço de crescimento de tumor e de produÇço de uma proteÍna de ligaÇço a antÍgeno |
NZ591252A (en) * | 2006-03-17 | 2012-06-29 | Biogen Idec Inc | Methods of designing antibody or antigen binding fragments thereof with substituted non-covarying amino acids |
MX2008015524A (es) | 2006-06-12 | 2009-01-13 | Trubion Pharmaceuticals Inc | Proteinas de union multivalentes monocatenarias con funcion efectora. |
AT503889B1 (de) | 2006-07-05 | 2011-12-15 | Star Biotechnologische Forschungs Und Entwicklungsges M B H F | Multivalente immunglobuline |
BRPI0814060A2 (pt) * | 2007-07-06 | 2015-01-06 | Trubion Pharmaceuticals Inc | Peptídeos ligantes tendo um domínio de ligação específico disposto em c-terminal |
EP2014680A1 (en) | 2007-07-10 | 2009-01-14 | Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg | Recombinant, single-chain, trivalent tri-specific or bi-specific antibody derivatives |
CN101952312A (zh) | 2007-07-31 | 2011-01-19 | 米迪缪尼有限公司 | 多特异性表位结合蛋白及其应用 |
EP2178914A2 (en) | 2007-08-15 | 2010-04-28 | Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft | Monospecific and multispecific antibodies and method of use |
ES2622460T3 (es) * | 2007-09-26 | 2017-07-06 | Ucb Biopharma Sprl | Fusiones de anticuerpos con doble especificidad |
EP2050764A1 (en) | 2007-10-15 | 2009-04-22 | sanofi-aventis | Novel polyvalent bispecific antibody format and uses thereof |
AU2008328781A1 (en) | 2007-11-27 | 2009-06-04 | Ablynx N.V. | Amino acid sequences directed against heterodimeric cytokines and/or their receptors and polypeptides comprising the same |
KR101710472B1 (ko) | 2007-11-30 | 2017-02-27 | 글락소 그룹 리미티드 | 항원-결합 작제물 |
US8227577B2 (en) | 2007-12-21 | 2012-07-24 | Hoffman-La Roche Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
CA2714296A1 (en) * | 2008-02-20 | 2009-08-27 | G2 Inflammation Pty Ltd | Humanized anti-c5ar antibodies |
EP2373692A4 (en) | 2008-12-04 | 2013-11-20 | Abbvie Inc | IMMUNOGLOBULINE WITH DOUBLE VARIABLE DOMAIN AND ITS USE |
EP2435473B1 (en) | 2009-05-27 | 2013-10-02 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Tri- or tetraspecific antibodies |
ES2667258T3 (es) | 2009-09-10 | 2018-05-10 | Ucb Biopharma Sprl | Anticuerpos multivalentes |
GB201005063D0 (en) | 2010-03-25 | 2010-05-12 | Ucb Pharma Sa | Biological products |
-
2009
- 2009-09-25 WO PCT/GB2009/002310 patent/WO2010035012A1/en active Application Filing
- 2009-09-25 US US13/121,055 patent/US10407513B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2009-09-25 PT PT97366249T patent/PT2334705T/pt unknown
- 2009-09-25 ES ES09736624.9T patent/ES2620603T3/es active Active
- 2009-09-25 BR BRPI0918947A patent/BRPI0918947A2/pt active Search and Examination
- 2009-09-25 SI SI200931626A patent/SI2334705T1/sl unknown
- 2009-09-25 CN CN201610114944.0A patent/CN105601745B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2009-09-25 CN CN200980137520.4A patent/CN102164965B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2009-09-25 EA EA201100527A patent/EA201100527A1/ru unknown
- 2009-09-25 HU HUE09736624A patent/HUE033438T2/en unknown
- 2009-09-25 JP JP2011528417A patent/JP6063122B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2009-09-25 EP EP09736624.9A patent/EP2334705B1/en active Active
- 2009-09-25 CA CA2737241A patent/CA2737241C/en not_active Expired - Fee Related
- 2009-09-25 PL PL09736624T patent/PL2334705T3/pl unknown
- 2009-09-25 DK DK09736624.9T patent/DK2334705T3/en active
- 2009-09-25 LT LTEP09736624.9T patent/LT2334705T/lt unknown
-
2015
- 2015-07-03 JP JP2015134223A patent/JP2015178536A/ja active Pending
-
2017
- 2017-03-06 HR HRP20170374TT patent/HRP20170374T1/hr unknown
- 2017-03-14 CY CY20171100321T patent/CY1118713T1/el unknown
-
2019
- 2019-07-11 US US16/508,967 patent/US20200048372A1/en not_active Abandoned
Non-Patent Citations (8)
Title |
---|
JPN6014012014; J. Immunol., 2000, 165(12), pp.7050-7057 * |
JPN6014012016; J. Immunol. Methods, 2002, 267(2), pp.213-226 * |
JPN6014012019; Protein Eng., 2000, 13(10), pp.725-734 * |
JPN6014012021; Biomol. Eng., 2001, 18(2), pp.31-40 * |
JPN6014012024; Mol. Cancer Ther., 2008 Aug, 7(8), pp.2288-2297 * |
JPN6014012027; Arthritis Rheum., 2006, 54(6), pp.1856-1866 * |
JPN6014012030; Protein Eng. Des. Sel., 2008, 21(5), pp.283-288 (Epub 2008 Apr 2) * |
JPN6014012033; FEBS Lett., 1995, 377(2), pp.135-139 * |
Cited By (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2017520253A (ja) * | 2014-06-25 | 2017-07-27 | ユーシービー バイオファルマ エスピーアールエル | 多重特異性抗体コンストラクト |
US11345760B2 (en) | 2014-06-25 | 2022-05-31 | UCB Biopharma SRL | Multispecific antibody constructs |
JP2018515453A (ja) * | 2015-04-22 | 2018-06-14 | ユーシービー バイオファルマ エスピーアールエル | 単量体抗体Fab−dsFv多量体種のパーセンテージを増加させる方法 |
JP2019516785A (ja) * | 2016-05-01 | 2019-06-20 | ユーシービー バイオファルマ エスピーアールエル | 親和性を操作した血清タンパク質担体結合ドメイン |
JP7133544B2 (ja) | 2016-05-01 | 2022-09-08 | ユーシービー バイオファルマ エスアールエル | 親和性を操作した血清タンパク質担体結合ドメイン |
US11414480B2 (en) | 2016-12-07 | 2022-08-16 | Ablynx N.V. | Serum albumin binding immunoglobulin single variable domains |
JP2020515518A (ja) * | 2017-01-17 | 2020-05-28 | アブリンクス エン.ヴェー. | 改善された血清アルブミン結合剤 |
US11414481B2 (en) | 2017-01-17 | 2022-08-16 | Ablynx N.V. | Serum albumin binders |
JP7219220B2 (ja) | 2017-01-17 | 2023-02-07 | アブリンクス エン.ヴェー. | 改善された血清アルブミン結合剤 |
US11897944B2 (en) | 2017-01-17 | 2024-02-13 | Ablynx N.V. | Immunoglobulin single variable domain (ISVD) capable of binding to serum albumin |
JP2020522250A (ja) * | 2017-06-05 | 2020-07-30 | ヌマブ セラピューティクス アクチェンゲゼルシャフト | 新規抗hsa抗体 |
JP7130678B2 (ja) | 2017-06-05 | 2022-09-05 | ヌマブ セラピューティクス アクチェンゲゼルシャフト | 新規抗hsa抗体 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
LT2334705T (lt) | 2017-03-27 |
SI2334705T1 (sl) | 2017-05-31 |
PT2334705T (pt) | 2017-03-22 |
EP2334705A1 (en) | 2011-06-22 |
DK2334705T3 (en) | 2017-03-27 |
JP6063122B2 (ja) | 2017-01-18 |
WO2010035012A1 (en) | 2010-04-01 |
HUE033438T2 (en) | 2017-11-28 |
HRP20170374T1 (hr) | 2017-05-05 |
CN102164965B (zh) | 2016-03-30 |
EA201100527A1 (ru) | 2011-10-31 |
CN102164965A (zh) | 2011-08-24 |
CA2737241A1 (en) | 2010-04-01 |
CN105601745B (zh) | 2020-09-08 |
ES2620603T3 (es) | 2017-06-29 |
CA2737241C (en) | 2017-08-29 |
CY1118713T1 (el) | 2017-07-12 |
CN105601745A (zh) | 2016-05-25 |
PL2334705T3 (pl) | 2017-06-30 |
EP2334705B1 (en) | 2016-12-14 |
BRPI0918947A2 (pt) | 2015-12-01 |
US20200048372A1 (en) | 2020-02-13 |
WO2010035012A9 (en) | 2011-03-17 |
US10407513B2 (en) | 2019-09-10 |
US20110184152A1 (en) | 2011-07-28 |
JP2015178536A (ja) | 2015-10-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11427650B2 (en) | Dual specificity antibody fusions | |
JP6063122B2 (ja) | 生物学的産物 | |
JP5931730B2 (ja) | ジスルフィドで安定化された多価抗体 | |
EP2776466B1 (en) | Albumin binding antibodies and binding fragments thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20120924 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140325 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20140623 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20140630 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20140725 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20140801 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20140825 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20140901 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140925 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20150303 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150703 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20150714 |
|
A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20150911 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160912 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20161216 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6063122 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |