JP2010513455A

JP2010513455A - Ｔｒｐｖ１受容体拮抗薬としてのｏ−置換ジベンジル尿素誘導体

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Publication number: JP2010513455A
Application number: JP2009542247A
Authority: JP
Inventors: バラルディ，ピエル・ジョヴァンニ; ボレア，ピエル・アンドレーア; ジェペッティ，ピエランジェロ; フルッタローロ，フランチェスカ; パヴァーニ，マリーア・ジョヴァンナ; トレヴィサーニ，マルチェロ
Original assignee: Pharmeste SRL
Current assignee: Pharmeste SRL
Priority date: 2006-12-21
Filing date: 2007-12-06
Publication date: 2010-04-30
Anticipated expiration: 2027-12-06
Also published as: US7750049B2; ZA200904278B; UA95986C2; EA200900625A1; CN101563317A; KR20090090347A; HRP20100588T1; NO20092336L; EA015152B1; WO2008075150A1; CA2673219A1; JP5302214B2; CY1110833T1; KR101460177B1; CA2673219C; EP2094653A1; DK2094653T3; PL2094653T3; PT2094653E; BRPI0720421A2

Abstract

本発明は、Ｒがハロゲン、アルキル、アルコキシ、アリール、およびヘテロアリールから選択される式（Ｉ）の化合物に関し；Ｒ_１は、２−ヒドロキシエチル、２，３−ジヒドロキシプロピル、３−ヒドロキシプロピル、２，２−ジヒドロキシエチル、３，３−ジヒドロキシプロピル、１，３−ジオキソラン−エチル、１，３−ジオキサン−メチル、１，３−ジオキソラン−メチル、１，３−ジオキサン−エチル、３−フルオロ−２−ヒドロキシプロピル、３−カルボキシ−２−ヒドロキシプロピル、３−クロロ−２−ヒドロキシプロピル、２−ヒドロキシプロピル、２−ヒドロキシ−プロペン−２−イル、モルホリノエチル、ピペラジノエチル、ヒドロキシメチル、ベンジル、４−（ヒドロキシメチル）ベンジル、４−クロロベンジル、４−フルオロベンジル、および４−ヒドロキシベンジルから選択される。Ｒ_２は、tert−ブチルまたはトリフルオロメチルであり；Ｒ_３は、水素、カルボキシ、シアノ、アルキル、またはヒドロキシアルキルから独立して選択される。式（Ｉ）の化合物は、慢性神経因性疼痛、過活動膀胱症候群、腫瘍疼痛、痔核、炎症性痛覚過敏、術後疼痛、抜歯、気道疾患、および消化器系疾患などの炎症状態の治療のための薬学的組成物の調製に使用することができる。

Description

発明の分野
本発明は、バニロイド受容体拮抗薬に関し、特にバニロイドＴＲＰＶ１受容体と拮抗するＯ−ヒドロキシアルキルジベンジル尿素誘導体に関する。

最新技術
近年の実験的証拠は、バニロイドＴＲＰＶ１受容体（一過性受容体電位チャネル）の発現が、炎症状態の過程において増加することを証明している。このことは、バニロイド受容体拮抗薬が、例えば、慢性神経因性疼痛、過活動膀胱症候群、痔核、炎症性痛覚過敏、術後疼痛、抜歯、気道疾患、および消化器系疾患等の炎症性疼痛症状の治療に有用でありえることを示唆していた。

多くのバニロイド受容体拮抗薬が公知であり；それらのいくつかはカプサイシン由来であり、カプサイシン拮抗薬と呼ばれる。

発明の説明
本発明は、式（Ｉ）の化合物に関し、式中：

Ｒは、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、アリール、およびヘテロアリールから選択され；
Ｒ_１は、２−ヒドロキシエチル、２，３−ジヒドロキシプロピル、３−ヒドロキシプロピル、２，２−ジヒドロキシエチル、３，３−ジヒドロキシプロピル、１，３−ジオキソラン−エチル、１，３−ジオキサン−メチル、１，３−ジオキソラン−メチル、１，３−ジオキサン−エチル、３−フルオロ−２−ヒドロキシプロピル、３−カルボキシ−２−ヒドロキシ−プロピル、３−クロロ−２−ヒドロキシプロピル、２−ヒドロキシ−プロペン−２−イル、モルホリノエチル、ピペラジノエチル、ヒドロキシメチル、ベンジル、４−（ヒドロキシメチル）ベンジル、４−クロロベンジル、４−フルオロベンジル、および４−ヒドロキシベンジルから選択され、
Ｒ_２は、tert−ブチルまたはトリフロロメチルであり；
Ｒ_３は、水素、カルボキシ、シアノ、アルキル、またはヒドロキシアルキルから独立して選択され、
考えられるすべての光学異性体およびそれらのジアステレオ異性体を含む。

本出願の目的において：
用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素から選択されるハロゲン原子を指し；
用語「アルキル」は、直鎖状または分枝状の（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル基を指し；
用語「アルコキシ」は、直鎖状または分枝状の（Ｃ_１−Ｃ_４）アルコキシ基を指し；
用語「アリール」は、本明細書において上記で定義されるように、一つ以上の互いに同一または異なり得るハロゲン、アルキル、アルコキシの基で場合により置換されてもよいフェニル、シアノまたはアミノの基を指し；
用語「ヘテロアリール」は、ピロール、チオフェン、フラン、イミダゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、ピリジンまたはピリミジンなどの互いに同一または異なり得る一つ以上の窒素、酸素、または硫黄の原子を含有する５員または６員のヘテロ環を指す。

式（Ｉ）の化合物の第１の好ましいグループでは：
Ｒは、塩素または臭素であり；
Ｒ_１は、２−ヒドロキシエチルであり；
Ｒ_２は、tert−ブチルまたはトリフルオロメチルであり；
Ｒ_３は、水素である。

式（Ｉ）の化合物の第２の好ましいグループでは：
Ｒは、塩素または臭素であり；
Ｒ_１は、２，３−ジヒドロキシプロピルであり；
Ｒ_２は、トリフルオロメチルであり；
Ｒ_３は、水素である。

式（Ｉ）の化合物の第３の好ましいグループでは：
Ｒは、メチル、フェニル、ピリジン、または４−（置換）−フェニルであり；
Ｒ_１は、（Ｒ）−（−）−２，３−ジヒドロキシプロピルであり；
Ｒ_２は、トリフルオロメチルであり；
Ｒ_３は、水素である。

式（Ｉ）の化合物の第４の好ましいグループでは：
Ｒは、塩素または臭素であり；
Ｒ_１は、（Ｒ）−（−）−２，３−ジヒドロキシプロピルであり；
Ｒ_２は、トリフルオロメチルであり；
Ｒ_３は、水素である。

特に好ましい化合物の例は：
１−［４−（２−ヒドロキシエトキシ）−２−ブロモ−５−メトキシベンジル］−３−［４−（トリフルオロメチル）−ベンジル］ウレア；
１−［４−（２−ヒドロキシエトキシ）−２−クロロ−５−メトキシベンジル］−３−［４−（トリフルオロメチル）−ベンジル］ウレア；
１−［４−（２−ヒドロキシエトキシ）−２−ブロモ−５−メトキシベンジル］−３−［４−（tert−ブチル）−ベンジル］ウレア；
１−［４−（２−ヒドロキシエトキシ）−２−クロロ−５−メトキシベンジル］−３−［４−（tert−ブチル）−ベンジル］ウレア；
１−［４−（２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−２−クロロ−５−メトキシベンジル］−３−［４−（トリフルオロメチル）−ベンジル］ウレア；
１−［４−（２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−２−ブロモ−５−メトキシベンジル］−３−［４−（トリフルオロメチル）−ベンジル］ウレア；
１−［４−（（Ｒ）−（−）−２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−２−クロロ−５−メトキシベンジル］−３−［４−（トリフルオロメチル）−ベンジル］ウレア；
１−［４−（（Ｒ）−（−）−２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−２−フェニル−５−メトキシベンジル］−３−［４−（トリフルオロメチル）−ベンジル］ウレア；
１−［４−（（Ｒ）−（−）−２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−２−（ピリジン−３−イル）−５−メトキシベンジル］−３−［４−（トリフルオロメチル）−ベンジル］ウレア；
１−［４−（（Ｒ）−（−）−２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−２−（４−クロロフェニル）−５−メトキシベンジル］−３−［４−（トリフルオロメチル）−ベンジル］ウレア；
１−［４−（（Ｒ）−（−）−２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−２−ブロモ−５−メトキシベンジル］−３−［４−（トリフルオロメチル）−ベンジル］ウレア
である。

一般式（Ｉ）の化合物は、Ｒ、Ｒ_１およびＲ_３が上記定義のとおりである式（ＩＩ）の化合物と、

Ｒ_２およびＲ_３が上記定義のとおりである式（ＩＩＩ）の化合物：

との反応などの従来の方法により調製することができる。

式（Ｉ）の化合物、それらの異性体および塩は、バニロイドＴＲＰＶ１受容体を阻害することが可能であり、炎症状態、慢性神経因性疼痛、過活動膀胱症候群、痔核、炎症性痛覚過敏、術後疼痛、抜歯、気道疾患および消化器系疾患、ならびに腫瘍疼痛の治療のための薬学的組成物の調製に使用することができる。

これらの製剤は、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences Handbook第１７版（Mack Pub編集、米国、ニューヨーク州）に開示される従来の方法および賦形剤により調製できる。

本発明は、以下で、スキーム１および実施例において、より詳細に例示される。

試薬および条件：（ｉ）酢酸アニドリド、Ｐｙｒ；（ｉｉ）ＮＢＳまたはＮＣＳ、ＤＭＦ、０℃；（ｉｉｉ）１０％ＨＣｌ水溶液、ジオキサン；（ｉｖ）Ｒ＝Ｂｒの時、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４、Ｎａ_２ＣＯ_３、ボロン酸、ＤＭＥ、９０℃；（ｖ）ヒドロキシアルキルハライド、Ｋ_２ＣＯ_３、ＤＭＦ、１００℃；（ｖｉ）ＨＣｌ３７％、ＥｔＯＨ、Ｒｆｘ；（ｖｉｉ）トリホスゲン、４−（置換）ベンジルアミン、ＤＩＥＡ、ＣＨ_２Ｃｌ_２、１０分間。

置換基：６ａ：Ｒ＝Ｃｌ、Ｒ_１＝２−ヒドロキシエチル；Ｒ_２＝tert−ブチル、Ｒ_３＝Ｈ；６ｂ：Ｒ＝Ｂｒ、Ｒ_１＝２−ヒドロキシエチル；Ｒ_２＝tert−ブチル、Ｒ_３＝Ｈ；６ｃ：Ｒ＝Ｃｌ、Ｒ_１＝２，３−ジヒドロキシプロピル；Ｒ_２＝トリフルオロメチル、Ｒ_３＝Ｈ；６ｄ：Ｒ＝Ｂｒ、Ｒ_１＝２，３−ジヒドロキシプロピル；Ｒ_２＝トリフルオロメチル、Ｒ_３＝Ｈ；６ｅ：Ｒ＝Ｃｌ、Ｒ_１＝３−ヒドロキシプロピル；Ｒ_２＝トリフルオロメチル、Ｒ_３＝Ｈ；６ｆ：Ｒ＝Ｃｌ、Ｒ_１＝３−ヒドロキシプロピル；Ｒ_２＝tert−ブチル、Ｒ_３＝Ｈ；６ｇ：Ｒ＝Ｃｌ、Ｒ_１＝２−ヒドロキシエチル；Ｒ_２＝トリフルオロメチル、Ｒ_３＝Ｈ；６ｈ：Ｒ＝Ｂｒ、Ｒ_１＝２−ヒドロキシエチル；Ｒ_２＝トリフルオロメチル、Ｒ_３＝Ｈ；６ｉ：Ｒ＝フェニル、Ｒ_１＝２，３−ジヒドロキシプロピル；Ｒ_２＝トリフルオロメチル；Ｒ_３＝Ｈ；６ｌ：Ｒ＝ピリジン−３−イル、Ｒ_１＝２，３−ジヒドロキシプロピル；Ｒ_２＝トリフルオロメチル；Ｒ_３＝Ｈ；６ｍ：Ｒ＝４−（クロロ）−フェニル、Ｒ_１＝２，３−ジヒドロキシプロピル；Ｒ_２＝トリフルオロメチル；Ｒ_３＝Ｈ。

実施例
反応は、シリカゲル（プレコートしたＦ_２４５メルクプレート）上で、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により、ルーチンにモニターし、生成物は、ヨウ素または過マンガン酸カリウム溶液で可視化させた。^１ＨＮＭＲスペクトルは、ＶａｒｉａｎＶＸＲ２００分光計でＣＤＣｌ_３、ＣＦ_３ＣＯＯＤ、またはＤＭＳＯ−ｄ_６中で記録した。ピーク位置は、内部標準としてのテトラメチルシランからダウンフィールドした百万分率（δ）で示され、Ｊ値はＨｚで示されている。ＩＲスペクトルは、ＫＢｒＷａｆｅｒ法を用いてＰｙｅＵｎｉｃａｍＳＰ３００分光計で記録した。質量スペクトルは、島津製ＱＰ５０５０ＤＩ５０分光計で求めた。「軽石油エーテル」という表現は、４０℃〜６０℃で沸騰させた石油留分を指す。融点（ｍ．ｐ．）は、Ｂｕｃｈｉ−Ｔｏｔｔｏｌｉ器具上で計測し、補正していない。クロマトグラフィーは、Ｍｅｒｃｋ６０−２００メッシュシリカゲルを用いて行った。合成された化合物は、割り当てられた構造と一致する^１ＨＮＭＲスペクトルを示した。元素分析は、Ｃ、ＨおよびＮに関して理論値の±０．４％以内であった。

実施例１
１．１．４−アセトキシ−３−メトキシ−Ｎ−アセチル−ベンジルアミンの合成
無水酢酸（１ml、１０．５mmol）を、４−ヒドロキシ−３−メトキシ−ベンジルアミン塩酸塩（０．５g、２．６３mmol）のピリジン（５ml）溶液に加え、混合物を室温で６時間攪拌した。溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣を水（１００ml）に懸濁させた。水層を酢酸エチルで抽出し（３×２０ml）、合わせた有機相を無水化させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下で蒸発させて、表題化合物を白色固体（０．４５g、収率７５％）として得た。

１．２．２−ブロモ−４−アセトキシ−５−メトキシ−Ｎ−アセチルベンジルアミンの合成
Ｎ−ブロモスクシンイミド（６．３mmol、１．１g）を、実施例１．１の４−アセトキシ−３−メトキシ−Ｎ−アセチル−ベンジルアミン（１．５g、４．２mmol）の乾燥ＤＭＦ（８ml）溶液に加え、混合物を０℃で３０分間、その後室温で１６時間攪拌した。

反応物に水（４０ml）を加えたところ、白色沈殿物の形成が観察された。

固体を濾去し、冷水で２回洗浄し（２×２０ml）、その後Ｐ_２Ｏ_５上で乾燥して表題化合物を白色固体（１．４g、収率９９％）として得た。

２次元ＮＯＥＳＹ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）：２．２４ppmでの一重項と７．２５ppmでの一重項との結合により、臭素が芳香環の２位に存在することを確認した。
ＭＳ：ｍ／ｚ３１６（Ｍ^＋Ｃ_１２Ｈ_１４ＢｒＮＯ_４）。

実施例２
２．２−（フェニル／ピリジン−３−イル／４−（クロロ）−フェニル）−４−ヒドロキシ−５−メトキシ−Ｎ−アセチルベンジルアミンの合成の一般的手順
２−ブロモ−４−アセトキシ−５−メトキシ−Ｎ−アセチルベンジルアミン（６００mg、１．９mmol）のＤＭＥ（１５ml）溶液を、混合物にＮ_２を５分間通気させることにより脱酸素した。次に、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（０．０９モル当量）および適切なボロン酸（１．４モル当量）の無水エタノール（３ml）溶液を加えた。混合物を１０分間攪拌し、その後、Ｎａ_２ＣＯ_３（９ml）の２Ｍ水溶液を加え、反応物を９０℃で１２時間加熱した。溶媒を減圧下で蒸発させ、水（６０ml）を加えて、水相をＥｔＯＡｃ（３×３０ml）で抽出した。再び合わせた有機相をＮａ_２ＳＯ_４上で無水化させ、蒸発させて、残渣をクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：石油エーテル６：４）により精製し表題化合物を固体として得た。

２．１．２−フェニル−４−ヒドロキシ−５−メトキシ−Ｎ−アセチルベンジルアミン

２．２．２−（ピリジン−３−イル）−４−ヒドロキシ−５−メトキシ−Ｎ−アセチルベンジルアミン

２．３．２−（４−クロロ）フェニル−４−ヒドロキシ−５−メトキシ−Ｎ−アセチルベンジルアミン

実施例３
３．１．２−ブロモ−４−ヒドロキシ−５−メトキシ−Ｎ−アセチルベンジルアミンの合成
１０％塩酸水溶液（２．５ml）を２−ブロモ−４−アセトキシ−５−メトキシ−Ｎ−アセチル−ベンジルアミン２（０．４５g、１．６６mmol）のジオキサン（１５ml）溶液に加え、混合物を２時間還流し、その後冷却し、溶媒を真空下で濃縮し、残渣を１０％ＮａＯＨ水溶液で塩基性化した。得られた固体を濾過により集め、冷水で洗浄し、乾燥させて、表題化合物を定量的収率の白色固体として得た。

３．２．２−ブロモ−４−（２−ヒドロキシエトキシ）−５−メトキシ−Ｎ−アセチルベンジルアミンの合成
化合物３（０．４g、１．４６mmol）の乾燥ＤＭＦ（１５ml）溶液に乾燥Ｋ_２ＣＯ_３（２モル当量）および２−ヨードエタノール（２モル当量）を加えた。混合物を６時間還流させ、その後溶媒を減圧下で蒸発させた。水を加えた後、水層をＥｔＯＡｃ（３×２５ml）で抽出し、有機相をＮａ_２ＳＯ_４上で無水化させ、減圧下で蒸発させて、表題化合物を淡黄色固体（０．３８g、収率８１％）として得た。

３．３．２−ブロモ−４−（２−ヒドロキシエトキシ）−５−メトキシベンジルアミン塩酸塩の合成
３７％塩酸（０．２ml）を、２−ブロモ−４−（２−ヒドロキシエトキシ）−５−メトキシ−Ｎ−アセチルベンジルアミン４（０．１g、０．３１mmol）の無水エタノール（５ml）溶液に加え、混合物を１２時間還流させた。冷却後、溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣をメタノール／エチルエーテル混合物から再結晶して、表題化合物を定量的収率の淡黄色固体として得た。

実施例４
２−（フェニル／ピリジン−３−イル／４−（クロロ）フェニル）−４−（２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−５−メトキシ−Ｎ−アセチルベンジルアミン合成の一般的手順
２−（フェニル／ピリジン−３−イル／４−（クロロ）フェニル）−４−ヒドロキシ−５−メトキシ−Ｎ−アセチルベンジルアミン（１．１mmol）の乾燥ＤＭＦ（１０ml）溶液に、乾燥Ｋ_２ＣＯ_３（２モル当量）および３−クロロ−１，２−ジヒドロキシプロパン（２モル当量）を加えた。混合物を１２時間還流し、その後溶媒を減圧下で蒸発させた。水を加えた後、水層をＥｔＯＡｃ（３×２５ml）で抽出し、有機相を３％ＮａＯＨ（２０ml）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で無水化させ、減圧下で蒸発させて、Ｅｔ_２Ｏから結晶化した後に表題化合物を固体として得た。

４．１．２−フェニル−４−（２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−５−メトキシ−Ｎ−アセチルベンジルアミン

４．２．２−（ピリジン−３−イル）−４−（２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−５−メトキシ−Ｎ−アセチルベンジルアミン

４．３．２−（４−クロロ）−フェニル−４−（２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−５−メトキシ−Ｎ−アセチルベンジルアミン

実施例５
５．１．２−ブロモ−４−（２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−５−メトキシ−Ｎ−アセチルベンジルアミンの合成
２−ブロモ−４−ヒドロキシ−５−メトキシ−Ｎ−アセチルベンジルアミン３（０．３g、１．１mmol）の乾燥ＤＭＦ（１０ml）溶液に、乾燥Ｋ_２ＣＯ_３（２モル当量）および３−クロロ−１，２−ジヒドロキシプロパン（２モル当量）を加えた。混合物を６時間還流させ、その後溶媒を減圧下で蒸発除去させた。水を加えた後、水層をＥｔＯＡｃ（３×２５ml）で抽出し、有機相をＮａ_２ＳＯ_４上で無水化させ、減圧下で蒸発除去させて、表題化合物を淡黄色固体（０．３５g、収率８４％）として得た。

５．２．２−ブロモ−４−（２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−５−メトキシベンジルアミン塩酸塩の合成
３７％塩酸（０．３ml）を、２−ブロモ−４−（２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−５−メトキシ−Ｎ−アセチルベンジルアミン４（０．３g、０．８６mmol）の無水エタノール（１２ml）溶液に加え、混合物を１２時間還流させた。冷却後、溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣をメタノール／エチルエーテル混合物から再結晶して、表題化合物を定量的収率の淡橙色固体として得た。

実施例６
２−（フェニル／ピリジン−３−イル／４−（クロロ）−フェニル）−４−（２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−５−メトキシ−ベンジルアミン塩酸塩の合成の一般的手順
３７％塩酸（５ml）を、２−（フェニル／ピリジン−３−イル／４−（クロロ）−フェニル）−４−（２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−５−メトキシ−Ｎ−アセチルベンジルアミン（８mmol）の無水エタノール（２５ml）溶液に加え、混合物を１２時間還流させた。冷却後、溶媒を減圧下で蒸発させ、そして、残渣をメタノール／エチルエーテルの混合物から再結晶して、定量的収率で表題化合物の固体を得た。

６．１．２−クロロ−４−アセトキシ−５−メトキシ−Ｎ−アセチルベンジルアミンの合成
Ｎ−クロロスクシンイミド（３．１５mmol、０．４２g）を、実施例１．１の４−アセトキシ−３−メトキシ−Ｎ−アセチル−ベンジルアミン（０．５g、２．１mmol）の乾燥ＤＭＦ（６ml）溶液に加え、混合物を０℃で３０分、次に室温で１６時間攪拌した。

水を反応物（４０ml）に加えたところ、白色沈殿物の形成が観察された。

固体を濾去し、冷水で２回洗浄し（２×２０ml）、次にＰ_２０_５上で乾燥させて、表題化合物を白色固体（０．４５g、収率８３％）として得た。

２次元ＮＯＥＳＹ分光法（ＤＭＳＯ−ｄ_６）：２．２１ppmでの一重項と７．２２ppmでの一重項との結合により、臭素が芳香環の２位に存在することを確認した。
ＭＳ：ｍ／ｚ２７２．１（Ｍ^＋Ｃ_１２Ｈ_１４ＣｌＮＯ_４）。

６．２．２−クロロ−４−ヒドロキシ−５−メトキシ−Ｎ−アセチルベンジルアミンの合成
１０％塩酸水溶液（２．５ml）を２−クロロ−４−アセトキシ−５−メトキシ−Ｎ−アセチル−ベンジルアミン２（０．４５g、１．６６mmol）のジオキサン（１５ml）溶液に加え、混合物を２時間還流させた。冷却後、溶媒を真空下で還元し、残渣を１０％NaOH水溶液で塩基性化した。得られた固体を濾過により集め、冷水で洗浄し、乾燥させて、表題化合物を定量的収率の白色固体として得た。

６．３．２−クロロ−４−（２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−５−メトキシ−Ｎ−アセチルベンジルアミンの合成
乾燥Ｋ_２ＣＯ_３（２モル当量）および２−ヨードエタノール（２モル当量）を、２−クロロ−４−ヒドロキシ−５−メトキシ−Ｎ−アセチル−ベンジルアミン３（０．４g、１．４６mmol）の乾燥ＤＭＦ（１５ml）溶液に加えた。混合物を６時間還流させ、その後溶媒を減圧下で蒸発させた。水を加えた後、水層をＥｔＯＡｃ（３×２５ml）で抽出し、有機相をＮａ_２ＳＯ_４上で無水化させ、減圧下で蒸発させて、表題化合物を淡黄色固体（０．３８g、収率８１％）として得た。

６．４．２−クロロ−４−（２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−５−メトキシベンジルアミン塩酸塩の合成
３７％塩酸（０．２ml）を、２−ブロモ−４−（２−ヒドロキシエトキシ）−５−メトキシ−Ｎ−アセチルベンジルアミン４（０．１g、０．３１mmol）の無水エタノール（５ml）溶液に加え、混合物を１２時間還流させた。冷却後、溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣をメタノール／エチルエーテルの混合物から再結晶させて、表題化合物を定量的収率の淡黄色固体として得た。

実施例７
化合物６ａ〜６ｍの合成の一般的手順
トリホスゲン（０．３７モル当量）を、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３ml）に溶解した。４−tert−ブチル／トリフルオロメチルベンジルアミン（０．３３mmol）およびＤＩＥＡ（２．２モル当量）のＣＨ_２Ｃｌ_２（２ml）中の混合物を、トリホスゲンの攪拌溶液に３０分間かけてシリンジポンプを用いてゆっくり加えた。５分後、適切なアミン塩酸塩５（０．３３mmol）の溶液を一度に加えた。反応混合物を室温で２〜４時間攪拌し、減圧下で蒸発させ、ＥｔＯＡｃ（２０ml）で希釈し、１０％ＫＨＳＯ_４水溶液、５％ＮａＨＣＯ_３水溶液、および塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて、蒸発乾固させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（１００％ＥｔＯＡｃ）により精製し、表題化合物を固体として得た。

７．１．１−［４−（２−ヒドロキシエトキシ）−２−ブロモ−５−メトキシベンジル］−３−［４−（tert−ブチル）−ベンジル］ウレア６ｂ

７．２．１−［４−（２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−２−クロロ−５−メトキシベンジル］−３−［４−（トリフルオロメチル）−ベンジル］ウレア６ｃ

７．３．１−［４−（２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−２−ブロモ−５−メトキシベンジル］−３−［４−（トリフルオロメチル）−ベンジル］ウレア６ｄ

７．４．１−［４−（２−ヒドロキシエトキシ）−２−ブロモ−５−メトキシベンジル］−３−［４−（トリフルオロメチル）−ベンジル］ウレア６ｈ

７．５．１−［４−（２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−２−フェニル−５−メトキシベンジル］−３−［４−（トリフルオロメチル）−ベンジル］ウレア６ｉ

７．６．１−［４−（２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−２−（ピリジン−３−イル）−５−メトキシベンジル］−３−［４−（トリフルオロメチル）−ベンジル］ウレア６ｌ

７．７．１−［４−（２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−２−（４−クロロ）フェニル−５−メトキシベンジル］−３−［４−（トリフルオロメチル）−ベンジル］ウレア６ｍ

バイオアッセイ
動物
インビボ実験を、PharmEste srl（イタリア、フェラーラ）とフェラーラ大学と共に、フェラーラ大学のAnimal Care and Use Committeeの承認を得たプロトコールに従って実施した。

放射性リガンド結合アッセイ
体重２５０g〜３５０gの雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを使用した。結合アッセイでは、ラットを麻酔下で断頭し、脊髄を摘出し、Ｐｏｌｙｔｒｏｎ組織ホモジナイザーを用いて、ＫＣｌ５mM、ＮａＣｌ５．８mM、ＣａＣｌ_２０．７５mM、ＭｇＣｌ_２２mM、スクロース３２０mM、Ｈｅｐｅｓ１０mMを含有するｐＨ８．６の氷冷緩衝液中で破砕した（SzallasiおよびBlunberg, 1992;1993）。競合試験では、膜を、［^３Ｈ］ＲＴＸ（０．４nM）の場合と、試験化合物の濃度を０．１nMから３μMの範囲で増加させた場合とで、３７℃で６０分間インキュベートした。ＲＴＸ１μMの存在下では、非特異的結合の評価は行わなかった。飽和試験および競合試験では、リガンドプログラムにより分析を行った（Bradford, 1976; MunsonおよびRodBard, 1980）。

培養ラットの三叉神経節におけるＣａ^２＋蛍光測定
較正曲線は、Ｆｕｒａ−２−ＡＭ−エステルおよび規定濃度の遊離Ｃａ^２＋を含有する緩衝液を用いて決定した。その後、この較正曲線を用いて、Ｆ３４０／Ｆ３８０の比から得たデータを[Ｃａ^２＋]_ｉ（nM）に換算した（Kudo, Y）。カプサイシン３０nMにより生じる[Ｃａ^２＋]_ｉの濃度増加に対する、化合物６ａ〜６ｍによる前処理の効果を調べた。

ラットにおけるカプサイシン誘発二次性アロディニア
カプサイシン（５nmol/５０μl/paw）を、ジエチルエーテルで麻酔したラットの右足の無毛皮膚の足底面に注射した（Chaplanら、1994）。化合物６ｃおよび６ｄは、カプサイシン注射の２時間前に経口で投与した。接触性アロディニアをカプサイシン投与の９０分後に評価した。

試薬
ストック濃度のカプサイシン（１０mＭ）を無水エタノール中で調製した。化合物６ａ〜６ｍは、５０％ＤＭＳＯと５０％Ｔｗｅｅｎ８０の中で調製した。Ｆｕｒａ−２−ＡＭ−エステルおよびイオノマイシンを１００％ＤＭＳＯに溶解した。他の薬剤はすべて、蒸留水に溶解した。適切な希釈剤を、その後Ｋｒｅｂｓ緩衝液中で作製した。

結果
放射性リガンド結合アッセイ
化合物６ａ〜６ｍは、表１に報告されるＫ_ｉ値で示されるような低濃度で、ラット脊髄膜における結合部位から[^３Ｈ]ＲＴＸを移動させた。

Ｃａ^２＋蛍光分析
カプサイシン（３０nM）が、ラット三叉神経ニューロン細胞の大部分（９５％）において［Ｃａ^２＋］_ｉを増大させたことから、これらがＴＲＰＶ１発現ニューロンであることがわかった。カプサイシン誘発性［Ｃａ^２＋］_ｉ動員の阻害におけるＩＣ_５０値を表１にまとめる。

化合物６ｃおよび６ｄの異性体（Ｒ）−（−）ならびに（Ｓ）−（＋）−もまた、ラセミ化合物との活性の差異を評価するために合成した。最も活性な異性体は、（Ｒ）−（−）型であり、一方（Ｓ）−（＋）−型は表２に示すように、少なくとも３００倍活性が低かった。

２種の別々の異性体の合成から得た結果によると、化合物６ｉ〜６ｍは、活性（Ｒ）−（−）型で直接合成されていた。

結果は、平均値と９５％信頼限界で表す。

ラットにおけるカプサイシン誘発二次性アロディニア
さらに拡大した試験において、ラットでのカプサイシン誘発二次性アロディニアに対する化合物６ｃおよび６ｄの作用について調べた。カプサイシン投与の９０分後、化合物６ｃおよび６ｄ（共に経口投与で３０μmol/kg）は、カプサイシンによるアロディニア誘発作用を有意に防止した（それぞれ、５３．１％および４７．９％の阻害）。

ＡＤＭＥ試験
適切な候補薬を選択するために、選択化合物６ｃ、６ｄとともにそれらの活性異性体について、インビトロでのＡＤＭＥ試験を行い、これら化合物の特性を置換基により評価した。

インビトロ試験の分析の際、ｐＨ＝７．０におけるＬｏｇＤ値をコンピュータで算出した：
− 低温保存したヒト肝細胞における代謝安定性；
− ＨｅｐＧ２細胞に対する細胞毒性；
− ラットにおけるカセット投与での薬物動態。

本発明の化合物のデータを、ＴＲＰＶ１拮抗薬として最近開示された構造的に異なる２種の化合物、ＪＹＬ１４２１（Jakabら、2005）およびＳＢ−７０５４９８（Ramiら、2006）について得たデータと、広く使用されている短半減期（ナロキソン）と長半減期（トルブタミド）の２種の薬剤について得たデータと比較した。最も関連性の高いＡＤＭＥデータは、特定の置換基の影響、とりわけ代謝安定性への影響についての迅速な比較を可能にする。

肝細胞の調製
細胞を迅速かつ慎重に解凍し、氷冷Krebs-Henseleit緩衝液（ＫＨＢ）中で希釈した。遠心分離（５０g、５分間）の後、上清を排出し、細胞を、凍結保存バイアル中の名目密度に基づき１ml当たりの生細胞の（インキュベート時の最終濃度に対して）２倍を超える密度で、１容量の氷冷ＫＨＢ中に再懸濁させた。生細胞をトリパンブルー色素排除法により血球計算器を用いて計数し、生肝細胞の密度をＫＨＢの２倍の密度に正確に補正した。

ＨｅｐＧ２細胞の調製
細胞を３日間培養し、トリプシン処理し、２０mlの培地中に再懸濁させた。次いで、細胞を計数し希釈して、４０．０００細胞／ウェルを９６ウェル細胞培養プレート（２００μl/well）に播種する場合に適切な最終密度を求めた。

細胞をカラム１〜１１（カラム１２は、細胞のない培地を含む）に播種し、次いで、５％ＣＯ_２で３７℃にて１６〜２４時間放置した。

化合物の調製
試験化合物および基準化合物を２種類の培養濃度（１０μmおよび１μm）で調製した。原液１０μlをＫＨＢ０．９９ml中に希釈し、濃度を１０μmとし、原液５μlをＫＨＢ０．９９５μl中に希釈し濃度を５μmとした。濃度１０μmと濃度１μmの溶液３００μlを、それぞれ培養試験管２本と１本とに分注した（Sterilin製ＴＣ管１７×１００mm）。

カテーテル挿入覚醒ラットにおけるカセット投与での予備薬物動態試験
化合物を一緒にラットに投与した。化合物は、使用しない場合は、−２０℃で保存した。剤形、投与経路、血漿試料同定および薬物動態解析は、標準的なプロトコルに従った（Raynaud, Flら、2004; Manitpisitkul, P.ら、2004; Singh S.ら、2006）。

結果
国際公開公報第ＷＯ２００５／１２３６６６Ａ１号に開示される化合物ｌａ、ｌｂ、ｌｃに対して、この一連の新しいＯ−ヒドロキシアルキル尿素誘導体は、代謝安定性および細胞毒性において、基準化合物ＪＹＬ１４２１およびＳＢ−７０５４９８と同等の予想外の明確な改善を示し、良好な半減期、比較的緩徐なクリアランスを示した。また、マイクロモル濃度のＩＣ_５０で表わされる細胞毒性値も許容可能であった。表３は、国際公開公報第２００５／１２３６６６号に開示される化合物に対する本発明の２種の化合物のＡＤＭＥプロファイルについて報告している。

また、化合物６ｃおよび６ｄの（Ｒ）−（−）−異性体は、半減期においてさらなる改善を示し、同時に代謝安定性および低い細胞毒性の良好な値を維持した（表３）。

Claims

式（Ｉ）の化合物であって、

式中、Ｒは、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、アリールおよびヘテロアリールから選択され；
Ｒ_１は、２−ヒドロキシエチル、２，３−ジヒドロキシプロピル、３−ヒドロキシプロピル、２，２−ジヒドロキシエチル、３，３−ジヒドロキシプロピル、１，３−ジオキソランエチル、１，３−ジオキサン−メチル、１，３−ジオキソラン−メチル、１，３−ジオキサン−エチル、３−フルオロ−２−ヒドロキシプロピル、３−カルボキシ−２−ヒドロキシ−プロピル、３−クロロ−２−ヒドロキシプロピル、２−ヒドロキシプロピル、２−ヒドロキシ−プロペン−２−イル、モルホリノエチル、ピペラジノエチル、ヒドロキシメチル、ベンジル、４−（ヒドロキシメチル）ベンジル、４−クロロベンジル、４−フルオロベンジル、および４−ヒドロキシベンジルから選択され；
Ｒ_２は、tert−ブチルまたはトリフルオロメチルであり；
Ｒ_３は、水素、カルボキシ、シアノ、アルキル、またはヒドロキシアルキルから独立して選択され、
考えられるすべての光学異性体およびそれらのジアステレオ異性体を含み、
ここで、「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素から選択されるハロゲン原子であり；
「アルキル」は、直鎖状または分枝状の（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル基であり；
「アルコキシ」は、直鎖状または分枝状の（Ｃ_１−Ｃ_４）アルコキシ基であり；
「アリール」は、上記で定義されるとおりの互いに同一または異なり得る、ハロゲン、アルキル、アルコキシの基、シアノまたはアミンの基の一つ以上と、場合により置換されるフェニルであり；そして
「ヘテロアリール」は、互いに同一または異なり得る、一つまたは複数の窒素、酸素、または硫黄の原子を含有する５員または６員のヘテロ環である、
化合物。
Ｒが、塩素または臭素であり；
Ｒ_１が、２−ヒドロキシエチルであり；
Ｒ_２が、tert−ブチルまたはトリフルオロメチルであり；
Ｒ_３が、水素である、請求項１記載の化合物。
Ｒが、塩素または臭素であり；
Ｒ_１が、２，３−ジヒドロキシプロピルであり；
Ｒ_２が、トリフルオロメチルであり；
Ｒ_３が、水素である、請求項１記載の化合物。
Ｒが、メチル、フェニル、ピリジン、または４−（置換）−フェニルであり；
Ｒ_１が、（Ｒ）−（−）−２，３−ジヒドロキシプロピルであり；
Ｒ_２が、トリフルオロメチルであり；
Ｒ_３が、水素である、請求項１記載の化合物。
Ｒが、塩素または臭素であり；
Ｒ_１が、（Ｒ）−（−）−２，３−ジヒドロキシプロピルであり；
Ｒ_２が、トリフルオロメチルであり；
Ｒ_３が、水素である、請求項１記載の化合物。
１−［４−（２−ヒドロキシエトキシ）−２−ブロモ−５−メトキシベンジル］−３−［４−（トリフルオロメチル）−ベンジル］ウレア；
１−［４−（２−ヒドロキシエトキシ）−２−クロロ−５−メトキシベンジル］−３−［４−（トリフルオロメチル）−ベンジル］ウレア；
１−［４−（２−ヒドロキシエトキシ）−２−ブロモ−５−メトキシベンジル］−３−［４−（tert−ブチル）−ベンジル］ウレア；
１−［４−（２−ヒドロキシエトキシ）−２−クロロ−５−メトキシベンジル］−３−［４−（tert−ブチル）−ベンジル］ウレア；
１−［４−（２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−２−クロロ−５−メトキシベンジル］−３−［４−（トリフルオロメチル）−ベンジル］ウレア；
１−［４−（２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−２−ブロモ−５−メトキシベンジル］−３−［４−（トリフルオロメチル）−ベンジル］ウレア；
１−［４−（（Ｒ）−（−）−２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−２−クロロ−５−メトキシベンジル］−３−［４−（トリフルオロメチル）−ベンジル］ウレア；
１−［４−（（Ｒ）−（−）−２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−２−フェニル−５−メトキシベンジル］−３−［４−（トリフルオロメチル）−ベンジル］ウレア；
１−［４−（（Ｒ）−（−）−２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−２−（ピリジン−３−イル）−５−メトキシベンジル］−３−［４−（トリフルオロメチル）−ベンジル］ウレア；
１−［４−（（Ｒ）−（−）−２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−２−（４−クロロフェニル）−５−メトキシベンジル］−３−［４−（トリフルオロメチル）−ベンジル］ウレア；
１−［４−（（Ｒ）−（−）−２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−２−ブロモ−５−メトキシベンジル］−３−［４−（トリフルオロメチル）−ベンジル］ウレア
から選択される化合物。
薬剤として使用するための、請求項１〜６いずれか一項記載の式（Ｉ）の化合物。
バニロイドＴＲＰＶ１受容体拮抗薬としての、請求項１〜６いずれか一項記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
炎症状態の治療に用いる薬学的組成物の調製のための、請求項１〜６いずれか一項記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
炎症状態が、慢性神経因性疼痛、過活動膀胱症候群、腫瘍疼痛、痔核、炎症性痛覚過敏、術後疼痛、抜歯、気道疾患および消化器系疾患から選択される、請求項９記載の化合物の使用。
適切な賦形剤および／またはビヒクルと混合される、請求項１〜６いずれか一項記載の式（Ｉ）の化合物を含む薬学的組成物。