ES2347492T3 - Derivados de o-sustituido-dibencilurea como antagonistas del receptor trpv1. - Google Patents

Derivados de o-sustituido-dibencilurea como antagonistas del receptor trpv1. Download PDF

Info

Publication number
ES2347492T3
ES2347492T3 ES07848984T ES07848984T ES2347492T3 ES 2347492 T3 ES2347492 T3 ES 2347492T3 ES 07848984 T ES07848984 T ES 07848984T ES 07848984 T ES07848984 T ES 07848984T ES 2347492 T3 ES2347492 T3 ES 2347492T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
trifluoromethyl
benzyl
urea
methoxybenzyl
compounds
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES07848984T
Other languages
English (en)
Inventor
Pier Giovanni Baraldi
Pier Andrea Borea
Pierangelo Geppetti
Francesca Fruttarolo
Maria Giovanna Pavani
Marcello Trevisani
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Pharmeste SRL
Original Assignee
Pharmeste SRL
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pharmeste SRL filed Critical Pharmeste SRL
Application granted granted Critical
Publication of ES2347492T3 publication Critical patent/ES2347492T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C335/00—Thioureas, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C335/04—Derivatives of thiourea
    • C07C335/06—Derivatives of thiourea having nitrogen atoms of thiourea groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C335/10—Derivatives of thiourea having nitrogen atoms of thiourea groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton
    • C07C335/12—Derivatives of thiourea having nitrogen atoms of thiourea groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton the carbon skeleton containing six-membered aromatic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/17—Amides, e.g. hydroxamic acids having the group >N—C(O)—N< or >N—C(S)—N<, e.g. urea, thiourea, carmustine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C275/00—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C275/04—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of urea groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C275/20—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of urea groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton
    • C07C275/24—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of urea groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton containing six-membered aromatic rings

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)

Abstract

Compuestos de fórmula (I) **(Ver fórmula)** en la que R se selecciona de halógeno, alquilo, alcoxilo, arilo y heteroarilo; R1 se selecciona de 2-hidroxietilo, 2,3-dihidroxipropilo, 3-hidroxipropilo, 2,2-dihidroxietilo, 3,3-dihidroxipropilo, 1,3-dioxolan-etilo, 1,3-dioxan-metilo, 1,3-dioxolan-metilo, 1,3-dioxan-etilo, 3-fluoro-2-hidroxipropilo, 3-carboxi-2-hidroxi-propilo, 3-cloro-2-hidroxipropilo, 2-hidroxipropilo, 2-hidroxi-propen-2-ilo, morfolinoetilo, piperazinoetilo, hidroximetilo, bencilo, 4-(hidroximetil)bencilo, 4-clorobencilo, 4-fluorobencilo y 4-hidroxibencilo R2 es terc-butilo o trifluorometilo; R3 se selecciona independientemente de hidrógeno, carboxilo, ciano, alquilo o hidroxialquilo, incluyendo todos los posibles isómeros ópticos y diastereoisómeros de los mismos, en los que "halógeno" es un átomo de halógeno seleccionado de flúor, cloro, bromo y yodo; "alquilo" es un grupo alquilo (C1-C4) lineal o ramificado; "alcoxilo" es un grupo alcoxilo (C1-C4) lineal o ramificado; "arilo" es fenilo, opcionalmente sustituido con uno o más grupos halógeno, alquilo, alcoxilo tal como se definieron anteriormente en el presente documento, grupos ciano o amino, que pueden ser iguales o diferentes entre sí; y "heteroarilo" es un heterociclo de 5 ó 6 miembros que contiene uno o más átomos de nitrógeno, oxígeno o azufre, que pueden ser iguales o diferentes entre sí.

Description

Derivados de O-sustituido-dibencilurea como antagonistas del receptor TRPV1.
Campo de la invención
La presente invención se refiere a antagonistas del receptor vaniloide, en particular a derivados de O-hidroxialquil-dibencilurea que antagonizan el receptor vaniloide TRPV1.
Estado de la técnica
Evidencias experimentales recientes han demostrado que la expresión del receptor vaniloide TRPV1 (canal de potencial de receptor transitorio) aumenta en el transcurso de estados inflamatorios. Esto sugirió que los antagonistas del receptor vaniloide podrían ser útiles para el tratamiento de estados de dolor inflamatorio, por ejemplo dolor neuropático crónico, síndrome de vejiga hiperactiva, hemorroides, hiperalgesia inflamatoria, dolor posoperatorio, extracción dental, enfermedades de las vías respiratorias y gastrointestinales.
Se conocen varios antagonistas del receptor vaniloide; algunos de ellos se derivan de capsaicina y se denominan antagonistas capsaicinoides.
Descripción de la invención
La presente invención se refiere a compuestos de fórmula (I) en la que:
1 
\vskip1.000000\baselineskip
R se selecciona de halógeno, alquilo, alcoxilo, arilo y heteroarilo;
R_{1} se selecciona de 2-hidroxietilo, 2,3-dihidroxipropilo, 3-hidroxipropilo, 2,2-dihidroxietilo, 3,3-dihidroxipropilo, 1,3-dioxolan-etilo, 1,3-dioxan-metilo, 1,3-dioxolan-metilo, 1,3-dioxan-etilo, 3-fluoro-2-hidroxipropilo, 3-carboxi-2-hidroxi-propilo, 3-cloro-2-hidroxipropilo, 2-hidroxi-propen-2-ilo, morfolinoetilo, piperazinoetilo, hidroximetilo, bencilo, 4-(hidroximetil)bencilo, 4-clorobencilo, 4-fluorobencilo y 4-hidroxibencilo
R_{2} es terc-butilo o trifluorometilo;
R_{3} se selecciona independientemente de hidrógeno, carboxilo, ciano, alquilo o hidroxialquilo,
incluyendo todos los posibles isómeros ópticos y diastereoisómeros de los mismos.
Para el objetivo de la presente solicitud:
el término "halógeno" indica un átomo de halógeno seleccionado de flúor, cloro, bromo o yodo;
el término "alquilo" indica un grupo alquilo (C_{1-}C_{4}) lineal o ramificado;
el término "alcoxilo" indica un grupo alcoxilo (C_{1-}C_{4}) lineal o ramificado;
el término "arilo" indica fenilo, opcionalmente sustituido con uno o más grupos halógeno, alquilo, alcoxilo tal como se definieron anteriormente en el presente documento, grupos ciano o amino, que pueden ser iguales o diferentes entre sí;
el término "heteroarilo" indica un heterociclo de 5 ó 6 miembros que contiene uno o más átomos de nitrógeno, oxígeno o azufre, que pueden ser iguales o diferentes entre sí, tal como pirrol, tiofeno, furano, imidazol, tiazol, isotiazol, oxazol, piridina o pirimidina.
Un primer grupo preferido de compuestos de fórmula (I) es aquél en el que:
R es cloro o bromo;
R_{1} es 2-hidroxietilo;
R_{2} es terc-butilo o trifluorometilo;
R_{3} es hidrógeno.
\vskip1.000000\baselineskip
Un segundo grupo de compuestos preferidos de fórmula (I) es aquél en el que:
R es cloro o bromo;
R_{1} es 2,3-dihidroxipropilo;
R_{2} es trifluorometilo;
R_{3} es hidrógeno.
\vskip1.000000\baselineskip
Un tercer grupo de compuestos preferidos de fórmula (I) es aquél en el que:
R es metilo, fenilo, piridina o 4-(sustituido)-fenilo;
R_{1} es (R)-(-)-2,3-dihidroxipropilo;
R_{2} es trifluorometilo;
R_{3} es hidrógeno.
\vskip1.000000\baselineskip
Un cuarto grupo de compuestos preferidos de fórmula (I) es aquél en el que:
R es cloro o bromo;
R_{1} es (R)-(-)-2,3-dihidroxipropilo;
R_{2} es trifluorometilo;
R_{3} es hidrógeno.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplos de compuestos particularmente preferidos son:
1-[4-(2-hidroxietoxi)-2-bromo-5-metoxibencil]-3-[4-(trifluorometil)-bencil]urea;
1-[4-(2-hidroxietoxi)-2-cloro-5-metoxibencil]-3-[4-(trifluorometil)-bencil]urea;
1-[4-(2-hidroxietoxi)-2-bromo-5-metoxibencil]-3-[4-(terc-butilo)-bencil]urea;
1-[4-(2-hidroxietoxi)-2-cloro-5-metoxibencil]-3-[4-(terc-butilo)-bencil]urea;
1-[4-(2,3-dihidroxipropoxi)-2-cloro-5-metoxibencil]-3-[4-(trifluorometil)-bencil]urea;
1-[4-(2,3-dihidroxipropoxi)-2-bromo-5-metoxibencil]-3-[4-(trifluorometil)-bencil]urea;
1-[4-((R)-(-)-2,3-dihidroxipropoxi)-2-cloro-5-metoxibencil]-3-[4-(trifluorometil)-bencil]urea;
1-[4-((R)-(-)-2,3-dihidroxipropoxi)-2-fenil-5-metoxibencil]-3-[4-(trifluorometil)-bencil]urea;
1-[4-((R)-(-)-2,3-dihidroxipropoxi)-2-(piridin-3-il)-5-metoxibencil]-3-[4-(trifluorometil)-bencil]urea;
1-[4-((R)-(-)-2,3-dihidroxipropoxi)-2-(4-clorofenil)-5-metoxibencil]-3-[4-(trifluorometil)-bencil]urea;
1-[4-((R)-(-)-2,3-dihidroxipropoxi)-2-bromo-5-metoxibencil]-3-[4-(trifluorometil)-bencil]urea.
Los compuestos de fórmula general (I) pueden preparase por medio de métodos convencionales, tal como la reacción de un compuesto de fórmula (II), en la que R, R_{1} y R_{3} son tal como se definieron anteriormente,
2
con un compuesto de fórmula (III) en la que R_{2} y R_{3} son tal como se definieron anteriormente:
3
Los compuestos de fórmula (I), sus isómeros y sales pueden inhibir el receptor vaniloide TRPV1 y pueden usarse para la preparación de composiciones farmacéuticas para el tratamiento de estados inflamatorios, dolor neuropático crónico, síndrome de vejiga hiperactiva, hemorroides, hiperalgesia inflamatoria, dolor posoperatorio, extracción dental, enfermedades de las vías respiratorias y gastrointestinales y dolor tumoral.
Estas formulaciones pueden preparase mediante métodos y excipientes convencionales, tales como los dados a conocer en Remington's Pharmaceutical Sciences Handbook, XVII ed. Mack Pub., N.Y., EE.UU.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Esquema pasa a página siguiente)
\newpage
La invención se ilustra a continuación en el presente documento con mayor detalle en el esquema 1 y en los ejemplos.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema 1
4 
\vskip1.000000\baselineskip
Reactivos y condiciones: (i) Anhídrido acético, Pyr; (ii) NBS o NCS, DMF, 0ºC; (iii) HCl ac. al 10%, dioxano; (iv) cuando R= Br, Pd(PPh_{3})_{4}, Na_{2}CO_{3}, ácido borónico, DME, 90ºC; (v) haluro de hidroxialquilo, K_{2}CO_{3}, DMF, 100ºC; (vi) HCl a 37%, EtOH, Rfx; (vii) Trifosgeno, 4-(sustituido)bencilamina, DIEA, CH_{2}Cl_{2}, 10 min.
Sustituyentes: 6a: R= Cl, R_{1}=2-hidroxietilo; R_{2}= terc-butilo, R_{3}= H; 6b: R= Br, R_{1}=2-hidroxietilo; R_{2}= terc-butilo, R_{3}= H; 6c: R= Cl, R_{1}=2,3-dihidroxipropilo; R_{2}= trifluorometilo, R_{3}= H; 6d: R= Br, R_{1}=2,3-dihidroxipropilo; R_{2}= trifluorometilo, R_{3}= H; 6e: R= Cl, R_{1}= 3-hidroxipropilo; R_{2}= trifluorometilo, R_{3}= H; 6f: R= Cl, R_{1}= 3-hidroxipropilo; R_{2}= terc-butilo, R_{3}= H; 6g: R= Cl, R_{1}= 2-hidroxietilo; R_{2}= trifluorometilo, R_{3}= H; 6h: R= Br, R_{1}= 2-hidroxietilo; R_{2}= trifluorometilo, R_{3}= H; 6i: R= fenilo, R_{1}= 2,3-dihidroxipropilo; R_{2}= trifluorometilo; R_{3}= H; 6l: R= piridin-3-ilo, R_{1}= 2,3-dihidroxipropilo; R_{2}= trifluorometilo; R_{3}= H; 6m: R= 4-(cloro)-fenilo, R_{1}= 2,3-dihidroxipropilo; R_{2}= trifluorometilo; R_{3}= H.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplos
Se controlaron las reacciones de manera rutinaria mediante cromatografía en capa fina (CCF) sobre gel de sílice (placas Merck F_{245} recubiertas previamente) y se visualizaron los productos con una disolución de permanganato de potasio o yodo. Se registraron los espectros de ^{1}H-RMN en CDCl_{3}, CF_{3}COOD o DMSO-d_{6} con un espectrómetro Varian VXR 200. Las posiciones de los picos se dan en partes por millón (\delta) a campo bajo con respecto a tetrametilsilano como patrón interno, y los valores de J se dan en Hz. Se registraron los espectros IR con un espectrómetro Pye Unicam SP 300 usando la técnica de las pastillas de KBr. Se obtuvieron espectros de masas con un espectrómetro Shimadzu QP5050 DI 50. La expresión "éter de petróleo ligero" se refiere a la fracción de petróleo que entra en ebullición a 40-60ºC. Se determinaron los puntos de fusión (P.f.) con un instrumento Buchi-Tottoli y están sin corregir. Se realizaron las cromatografias usando gel de sílice de 60-200 de malla de Merck. Los compuestos sintetizados mostraron espectros de ^{1}H-RMN según las estructuras asignadas. Los análisis elementares estuvieron dentro de \pm0,4% de los valores teóricos para C, H y N.
Ejemplo 1 1.1. Síntesis de 4-acetoxi-3-metoxi-N-acetil-bencilamina
Se añadió anhídrido acético (1 ml, 10,5 mmol) a una disolución de clorhidrato de 4-hidroxi-3-metoxi-bencilamina (0,5 g, 2,63 mmol) en piridina (5 ml) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 6 horas. Se eliminó el disolvente mediante evaporación a presión reducida y se suspendió el residuo en agua (100 ml). Se extrajo la fase acuosa con acetato de etilo (3 x 20 ml) y se transformaron en la forma anhidra (Na_{2}SO_{4}) las fases orgánicas combinadas y evaporaron a presión reducida produciendo el compuesto del título como un sólido blanco (0,45 g, rendimiento del 75%).
^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 2,01 (s, 3H, CH_{3}), 2,31 (s, 3H, CH_{3}), 3,81 (s, 3H, OCH_{3}), 4,38 (d, 2H, J=6, CH_{2}), 5,90 (sa, 1H, NH), 6,90 (m, 3H, aromático).
EM: m/z 238,1 (M^{+} C_{12}H_{15}NO_{4}).
1.2. Síntesis de 2-bromo-4-acetoxi-5-metoxi-N-acetil-bencilamina
Se añadió N-bromosuccinimida (6,3 mmol, 1,1 g) a una disolución de 4-acetoxi-3-metoxi-N-acetil-bencilamina del ejemplo 1,1 (1,5 g, 4,2 mmol) en DMF seca (8 ml) y se agitó la mezcla durante 30' a 0ºC y entonces durante 16 horas a temperatura ambiente.
Se observó la formación de un precipitado blanco cuando se añadió agua (40 ml) a la reacción.
Se retiró el sólido mediante filtración y se lavó dos veces con agua fría (2 x 20 ml), entonces se secó sobre P_{2}O_{5} produciendo el compuesto del título como un sólido blanco (1,4 g, rendimiento del 99%).
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta 1,89 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 3,76 (s, 3H, OCH_{3}), 4,27 (d, 2H, CH_{2}, J=8), 7,09 (s, 1H, aromático), 7,25 (s, 1H, aromático), 8,35 (t, 1H, NH).
NOESY bidimensional (DMSO-d_{6}): el acoplamiento entre el singlete a 2,24 ppm y el singlete a 7,25 ppm confirma que el bromo está en la posición 2 del anillo aromático.
EM: m/z 316 (M^{+} C_{12}H_{14}BrNO_{4}).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 2 2. Procedimiento general para la síntesis de 2-(fenil/piridina-3-il/4-(cloro)fenilo)-4-hidroxi-5-metoxi-N-acetil-bencilamina
Se desoxigenó una disolución de 2-bromo-4-acetoxi-5-metoxi-N-acetil-bencilamina (600 mg, 1,9 mmol) en DME (15 ml) haciendo pasar N_{2} a través de la mezcla durante 5 min. Entonces se añadió Pd(PPh_{3})_{4} (0,09 eq. mol.) y una disolución del ácido borónico apropiado (1,4 eq. mol.) en etanol abs. (3 ml). Se agitó la mezcla durante 10 min. entonces se añadió una disolución acuosa 2 M de Na_{2}CO_{3} (9 ml) y se calentó la reacción a 90ºC durante 12 h. Se evaporó el disolvente a presión reducida, se añadió agua (60 ml) y se extrajo la fase acuosa con EtOAc (3 x 30 ml). Se transformaron en la forma anhidra sobre Na_{2}SO_{4} las fases orgánicas recombinadas, se evaporaron y se purificó el residuo mediante cromatografía (EtOAc:éter de petróleo 6:4) produciendo los compuestos del título como sólidos.
2.1. 2-fenil-4-hidroxi-5-metoxi-N-acetil-bencilamina
Sólido blanco, rendimiento del 95%.
^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 1,89 (s, 3H), 3,92 (s, 3H), 4,33 (d, 2H, J=4,4), 5,41 (sa, 1H), 5,75 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 6,94 (s, 1H), 7,41-7,29 (m, 5H).
EM: m/z 271 (M^{+} C_{16}H_{17}NO_{3}).
2.2. 2-(piridina-3-il)-4-hidroxi-5-metoxi-N-acetil-bencilamina
Sólido amarillo pálido, rendimiento del 68%.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta 1,79 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 4,04 (d, 2H, J=4), 6,65 (s, 1H), 6,98 (s, 1H), 7,42 (m, 1H), 7,71 (m, 1H), 8,41 (ta, 1H), 8,54 (m, 1H), 9,19 (s, 1H).
EM: m/z 272 (M^{+} C_{15}H_{16}N_{2}O_{3}).
2.2. 2-(4-cloro)fenil-4-hidroxi-5-metoxi-N-acetil-bencilamina
Sólido amarillo pálido, rendimiento del 78%.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta 1,81 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 4,08 (d, 2H, J=4), 6,01 (t, 1H), 6,79 (s, 1H), 6,98 (s, 1H), 7,44 (dd, 4H), 8,15 (s, 1H).
EM: m/z 305 (M^{+} C_{16}H_{16}ClNO_{3}).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 3 3.1. Síntesis de 2-bromo-4-hidroxi-5-metoxi-N-acetil-bencilamina
Se añadió ácido clorhídrico ac. al 10% (2,5 ml) a una disolución de 2-bromo-4-acetoxi-5-metoxi-N-acetil-bencilamina 2 (0,45 g, 1,66 mmol) en dioxano (15 ml) y se sometió la mezcla a reflujo durante 2 horas, entonces se enfrió y se concentró el disolvente a vacío y se basificó el residuo con NaOH ac. al 10%. Se recogió el sólido resultante mediante filtración, se lavó con agua fría y se secó proporcionando el compuesto del título como un sólido blanco con rendimiento cuantitativo.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta 2,18 (s, 3H, CH_{3}), 3,87 (s, 3H, OCH_{3}), 4,00 (d, 2H, CH_{2}), 6,91 (s, 1H, aromático), 7,32 (s, 1H, aromático), 8,46 (t, 3H, NH_{2}), 9,80 (sa, 1H, OH).
P.f.: >300ºC.
3.2. Síntesis de 2-bromo-4-(2-hidroxietoxi)-5-metoxi-N-acetil-bencilamina
A una disolución del compuesto 3 (0,4 g, 1,46 mmol) en DMF seca (15 ml) se le añadieron K_{2}CO_{3} seco (2 eq. mol.) y 2-yodoetanol (2 eq. mol.). Se sometió la mezcla a reflujo durante 6 horas, entonces se eliminó el disolvente mediante evaporación a presión reducida. Tras la adición de agua se extrajo la fase acuosa con EtOAc (3X 25 ml) y se transformaron en la forma anhidra sobre Na_{2}SO_{4} las fases orgánicas y se evaporaron a presión reducida proporcionando el compuesto del título como un sólido amarillo pálido (0,38 g, rendimiento del 81%).
^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 2,00 (s, 3H), 3,84 (s, 3H), 3,92 (t, 2H, J=2), 4,09 (t, 2H, J=2,1), 4,44 (d, 2H, J=4), 5,21 (t, 1H), 5,90 (sa, 1H), 6,96 (s, 1H), 7,07 (s, 1H). 3,3.
3.3. Síntesis de clorhidrato de 2-bromo-4-(2-hidroxietoxi)-5-metoxibencilamina
Se añadió ácido clorhídrico al 37% (0,2 ml) a una disolución de 2-bromo-4-(2-hidroxietoxi)-5-metoxi-N-acetil-bencilamina 4 (0,1 g, 0,31 mmol) en etanol abs. (5 ml) y se sometió la mezcla a reflujo durante 12 horas. Tras enfriar, se eliminó el disolvente mediante evaporación a presión reducida y se recristalizó el residuo en una mezcla de metanol/etil éter produciendo el compuesto del título como un sólido amarillo pálido con rendimiento cuantitativo.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta 3,95 (s, 3H), 4,14 (t, 2H, J=2), 4,19 (m, 2H), 5,01 (m, 2H), 5,44 (t, 1H), 7,02 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 7,38 (m, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 4 Procedimiento general para la síntesis de 2-(fenil/piridin-3-il/4-(cloro)fenil)-4-(2,3-dihidroxipropoxi)-5-metoxi-N-acetil-bencilamina
A una disolución de 2-(fenil/piridin-3-il/4-(cloro)fenil)-4-hidroxi-5-metoxi-N-acetil-bencilamina (1,1 mmol) en DMF seca (10 ml) se le añadieron K_{2}CO_{3} seco (2 eq. mol.) y 3-cloro-1,2-dihidroxipropano (2 eq. mol.). Se sometió la mezcla a reflujo durante 12 horas, entonces se eliminó el disolvente mediante evaporación a presión reducida. Tras la adición de agua se extrajo la fase acuosa con EtOAc (3 X 25 ml) y se lavaron las fases orgánicas con NaOH al 3% (20 ml), se transformaron en la forma anhidra sobre Na_{2}SO_{4} y se eliminaron mediante evaporación a presión reducida proporcionando el compuesto del título como sólidos tras la cristalización en Et_{2}O.
4.1. 2-fenil-4-(2,3-dihidroxipropoxi)-5-metoxi-N-acetil-bencilamina
Sólido amarillo pálido, rendimiento del 72%.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta 1,83 (s, 1H), 3,44 (t, 2H), 3,79 (s, 1H), 3,95 (m, 7H), 4,10 (d, 2H, J=4,2), 4,62 (t, 1H), 4,92 (d, 1H), 6,79 (s, 1H), 6,98 (s, 1H), 7,36 (m, 5H), 8,16 (t, 1H). 4.2. 2-(piridin-3-il)-4-(2,3-dihidroxipropoxi)-5-metoxi-N-acetil-bencilamina
Sólido amarillo pálido, rendimiento del 60%.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta 1,80 (s, 3H), 3,44 (t, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,96 (m, 3H), 4,08 (d, 2H), 4,62 (t, 1H), 4,93 (d, 1H), 6,84 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 7,44 (m, 1H), 7,77 (m, 1H), 8,20 (ta, 1H), 8,56 (m, 2H).
4.3. 2-(4-cloro)-fenil-4-(2,3-dihidroxipropoxi)-5-metoxi-N-acetil-bencilamina
Sólido amarillo pálido, rendimiento del 65%.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta 1,81 (s, 3H), 3,42 (d, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,90 (m, 4H), 4,08 (d, 2H), 6,79 (s, 1H), 6,98 (s, 1H), 7,45 (dd, 4H), 8,20 (ta, 1H).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 5 5.1. Síntesis de 2-bromo-4-(2,3-dihidroxipropoxi)-5-metoxi-N-acetil-bencilamina
A una disolución de 2-bromo-4-hidroxi-5-metoxi-N-acetil-bencilamina 3 (0,3 g, 1,1 mmol) en DMF seca (10 ml) se le añadieron K_{2}CO_{3} seco (2 eq. mol.) y 3-cloro-1,2-dihidroxipropano (2 eq. mol.). Se sometió la mezcla a reflujo durante 6 horas, entonces se eliminó el disolvente mediante evaporación a presión reducida. Tras la adición de agua se extrajo la fase acuosa con EtOAc (3 X 25 ml) y se transformaron en la forma anhidra sobre Na_{2}SO_{4} las fases orgánicas y se eliminaron mediante evaporación a presión reducida proporcionando el compuesto del título como un sólido amarillo pálido (0,35 g, rendimiento del 84%).
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta 1,88 (s, 3H), 3,44 (t, 2H), 3,74 (s, 3H), 3,88-3,96 (m, 3H), 4,22 (d, 2H, J=6), 4,66 (t, 1H), 4,96 (d, 1H, J=6), 6,93 (s, 1H), 7,14 (s, 1H), 8,25 (t, 1H).
5.2. Síntesis de clorhidrato de 2-bromo-4-(2,3-dihidroxipropoxi)-5-metoxibencilamina
Se añadió ácido clorhídrico al 37% (0,3 ml) a una disolución de 2-bromo-4-(2,3-dihidroxipropoxi)-5-metoxi-N-acetil-bencilamina 4 (0,3 g, 0,86 mmol) en etanol abs. (12 ml) y se sometió la mezcla a reflujo durante 12 horas. Tras enfriar, se eliminó el disolvente mediante evaporación a presión reducida y se recristalizó el residuo en una mezcla de metanol/etil éter produciendo el compuesto del título como un sólido naranja pálido con rendimiento cuanti-
tativo.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta 3,42 (t, 2H), 3,74 (s, 3H), 3,74-3,95 (m, 4H), 4,21 (d, 2H, J=6), 4,98 (m, 4H), 7,13 (s, 1H), 7,38 (s, 1H).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 6 Procedimiento general para la síntesis de clorhidrato de 2-(fenil/piridin-3-il/4-(cloro)fenil)-4-(2,3-dihidroxipropoxi)-5-metoxi-bencilamina
Se añadió ácido clorhídrico al 37% (5 ml) a una disolución de 2-(fenil/piridin-3-il/4-(cloro)fenil)-4-(2,3-dihidroxipropoxi)-5-metoxi-N-acetil-bencilamina (8 mmol) en etanol abs. (25 ml) y se sometió la mezcla a reflujo durante 12 horas. Tras enfriar, se eliminó el disolvente mediante evaporación a presión reducida y se recristalizó el residuo en una mezcla de metanol/etil éter produciendo el compuesto del título como sólidos con un rendimiento cuanti-
tativo.
6.1. Síntesis de 2-cloro-4-acetoxi-5-metoxi-N-acetil-bencilamina
Se añadió N-clorosuccinimida (3,15 mmol, 0,42 g) a una disolución de 4-acetoxi-3-metoxi-N-acetil-bencilamina del ejemplo 1.1 (0,5 g, 2,1 mmol) en DMF seca (6 ml) y se agitó la mezcla durante 30' a 0ºC y entonces durante 16 horas a temperatura ambiente.
Cuando se añadió agua a la reacción (40 ml) se observó la formación de un precipitado blanco.
Se retiró el sólido mediante filtración y se lavó dos veces con agua fría (2 x 20 ml), entonces se secó sobre P_{2}O_{5} produciendo el compuesto del título como un sólido blanco (0,45 g, rendimiento del 83%).
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta 1,85 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 3,74 (s, 3H, OCH_{3}), 4,21 (d, 2H, CH_{2}, J=8), 7,01 (s, 1H, aromático), 7,22 (s, 1H, aromático), 8,32 (t, 1H, NH).
NOESY bidimensional (DMSO-d_{6}): el acoplamiento entre el singlete a 2,21 ppm y el singlete a 7,22 ppm confirma que el cloro está en la posición 2 del anillo aromático.
EM: m/z 272,1 (M^{+} C_{12}H_{14}ClNO_{4}).
6.2. Síntesis de 2-cloro-4-hidroxi-5-metoxi-N-acetil-bencilamina
Se añadió ácido clorhídrico ac. al 10% (2,5 ml) a una disolución de 2-cloro-4-acetoxi-5-metoxi-N-acetil-bencilamina 2 (0,45 g, 1,66 mmol) en dioxano (15 ml) y se sometió la mezcla a reflujo durante 2 horas. Tras enfriar, se redujo el disolvente a vacío y se basificó el residuo con NaOH ac. al 10%. Se recogió el sólido resultante mediante filtración, se lavó con agua fría y se secó proporcionando el compuesto del título como un sólido blanco con rendimiento cuantitativo.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta 2,15 (s, 3H, CH_{3}), 3,82 (s, 3H, OCH_{3}), 3,99 (d, 2H, CH_{2}), 6,86 (s, 1H, aromático), 7,30 (s, 1H, aromático), 8,41 (t, 3H, NH_{2}), 9,77 (sa, 1H, OH).
P.f.: >300ºC.
6.3. Síntesis de 2-cloro-4-(2,3-dihidroxipropoxi)-5-metoxi-N-acetil-bencilamina
Se añadieron K_{2}CO_{3} seco (2 eq. mol.) y 2-yodoetanol (2 eq. mol.) a una disolución de 2-cloro-4-hidroxi-5-metoxi-N-acetil-bencilamina 3 (0,4 g, 1,46 mmol) en DMF seca (15 ml). Se sometió la mezcla a reflujo durante 6 horas, entonces se eliminó el disolvente mediante evaporación a presión reducida. Tras la adición de agua se extrajo la fase acuosa con EtOAc (3 X 25 ml) y se transformaron en la forma anhidra sobre Na_{2}SO_{4} las fases orgánicas y se evaporaron a presión reducida proporcionando el compuesto del título como un sólido amarillo pálido (0,38 g, rendimiento del 81%).
^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 2,00 (s, 3H), 3,84 (s, 3H), 3,92 (t, 2H, J=2), 4,09 (t, 2H, J=2,1), 4,44 (d, 2H, J=4), 5,21 (t, 1H), 5,90 (sa, 1H), 6,96 (s, 1H), 7,07 (s, 1H).
6.4. Síntesis de clorhidrato de 2-cloro-4-(2,3-dihidroxipropoxi)-5-metoxibencilamina
Se añadió ácido clorhídrico al 37% (0,2 ml) a una disolución de 2-bromo-4-(2-hidroxietoxi)-5-metoxi-N-acetil-bencilamina 4 (0,1 g, 0,31 mmol) en etanol abs. (5 ml) y se sometió la mezcla a reflujo durante 12 horas. Tras enfriar, se eliminó el disolvente mediante evaporación a presión reducida y se recristalizó el residuo en una mezcla de metanol/etil éter produciendo el compuesto del título como un sólido amarillo pálido con rendimiento cuantitativo.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 7 Procedimiento general para la síntesis de los compuestos 6a-6m
Se disolvió trifosgeno (0,37 eq. mol.) en CH_{2}Cl_{2} (3 ml). Se añadió lentamente una mezcla de 4-terc-butil/trifluoro-
metil-bencilamina (0,33 mmol) y DIEA (2,2 eq. mol.) en CH_{2}Cl_{2} (2 ml) a la disolución con agitación de trifosgeno durante un periodo de 30 min. usando una bomba de jeringa. Tras 5 min. se añadió una disolución de un clorhidrato de amina 5 adecuado (0,33 mmol) en una porción. Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 2-4 h, se evaporó a presión reducida, se diluyó con EtOAc (20 ml), se lavó con KHSO_{4} ac. al 10%, NaHCO_{3} ac. al 5%. y salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se evaporó hasta sequedad. Se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida (EtOAc al 100%) proporcionando el compuesto del título como un sólido.
7.1. 1-[4-(2-Hidroxietoxi)-2-bromo-5-metoxibencil]-3-[4-(terc-butil)-bencil]urea 6b
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta 1,26 (s, 9H), 3,37 (s, 3H), 3,70 (m, 4H), 3,98 (t, 2H, J=2), 4,61 (sa, 4H), 4,87 (t, 1H, J=2,1), 6,98 (sa, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,23 (d, 2H, J=7,8), 7,34 (d, 2H, J=8), 7,80 (sa, 1H), 8,00 (sa, 1H).
P.f.: 138ºC.
EM: m/z 481,4 (M^{+} C_{22}H_{29}BrN_{2}O_{3}S).
7.2. 1-[4-(2,3-Dihidroxipropoxi)-2-cloro-5-metoxibencil]-3-[4-(trifluorometil)-bencil]urea 6c
Sólido blanco, rendimiento del 80%.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta 3,44 (t, 2H, J=6), 3,68 (s, 1H), 3,74-4,00 (m, 5H), 4,22 (d, 2H, J=6), 4,32 (d, 2H, J=6), 4,67 (t, 1H), 4,94 (d, 1H), 6,45 (ta, 1H), 6,65 (ta, 1H), 6,90 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 7,48 (d, 2H, J=7,8), 7,69 (d, 2H, J=8).
EM: m/z 462 (M^{+} C_{20}H_{22}ClF_{3}N_{2}O_{5}).
P.f.: 154-5ºC.
(R)-(-)6c: [\alpha]_{D}^{20} = -8,33 (EtOH al 95%).
7.3. 1-[4-(2,3-Dihidroxipropoxi)-2-bromo-5-metoxibencil]-3-[4-(trifluorometil)-bencil]urea 6d
Sólido blanco, rendimiento del 84%.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta 3,41 (t, 2H, J=6), 3,74 (s, 1H), 4,00-3,85 (m, 5H), 4,19 (d, 2H, J=6), 4,32 (d, 2H, J=6), 4,62 (t, 1H), 4,95 (d, 1H), 6,49 (ta, 1H), 6,68 (ta, 1H), 6,90 (s, 1H), 7,13 (s, 1H), 7,45 (d, 2H, J=7,8), 7,65 (d, 2H, J=8).
EM: m/z 507 (M^{+} C_{20}H_{22}BrF_{3}N_{2}O_{5}).
P.f.: 164ºC.
(R)-(-)6d: [\alpha]_{D}^{20} = -8,5 (EtOH al 95%).
7.4. 1-[4-(2-Hidroxietoxi)-2-bromo-5-metoxibencil]-3-[4-(trifluorometil)-bencil] urea 6h
Sólido blanco, rendimiento del 73%.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta 3,67 (s, 3H), 3,47 (m, 2H), 3,94 (t, 2H, J=4), 4,16 (d, 2H, J=6), 4,32 (d, 2H, J=6), 4,85 (t, 1H, J=2), 6,52 (ta, 1H), 6,68 (ta, 1H), 6,90 (s, 1H), 7,14 (s, 1H), 7,49 (d, 2H, J=8), 7,65 (d, 2H, J=8).
EM: m/z 477 (M^{+} C_{19}H_{20}BrF_{3}N_{2}O_{4}).
P.f.: 162ºC.
7.5. 1-[4-(2,3-dihidroxipropoxi)-2-fenil-5-metoxibencil]-3-[4-(trifluorometil)-bencil]urea 6i
Sólido blanco, rendimiento del 35%.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta 3,41 (t, 2H), 3,78 (s, 3H), 4,06 (m, 3H), 4,23 (d, 2H), 4,26 (d, 2H), 4,61 (t, 1H), 4,95 (d, 1H), 6,40 (t, 1H), 6,51 (t, 1H), 6,80 (s, 1H), 6,99 (s, 1H), 7,36 (m, 7H), 7,68 (d, 2H).
EM: m/z 504 (M^{+} C_{26}H_{27}F_{3}N_{2}O_{5}).
P.f.: 168ºC.
7.6. 1-[4-(2,3-dihidroxipropoxi)-2-(piridin-3-il)-5-metoxibencil]-3-[4-(trifluorometil)-bencil]urea 6l
Sólido amarillo pálido, rendimiento del 30%.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta 3,44 (t, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,91 (m, 4H), 4,05 (d, 2H, J=4,3), 4,29 (d, 2H, J04,2), 4,61 (t, 1H), 4,92 (d, 1H), 6,51 (m, 2H), 6,84 (s, 1H), 7,03 (s, 1H), 4,45 (m, 3H), 7,68 (d, 2H), 7,77 (m, 1H), 8,56 (m, 1H).
EM: m/z 505 (M^{+} C_{25}H_{26}F_{3}N_{3}O_{5}).
P.f.: 201ºC.
7.7. 1-[4-(2,3-dihidroxipropoxi)-2-(4-cloro)fenil-5-metoxibencil]-3-[4-(trifluorometil)-bencil]urea 6m
Sólido blanco, rendimiento del 45%.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta 3,44 (t, 2H), 3,74 (s, 3H), 3,93 (m, 4H), 4,07 (d, 2H), 4,30 (d, 2H), 4,62 (t, 1H), 4,92 (d, 1H), 6,41 (m, 2H), 6,78 (s, 1H), 6,98 (s, 1H), 7,43 (m, 6H), 7,69 (d, 2H).
EM: m/z 538 (M^{+} C_{26}H_{26}ClF_{3}N_{2}O_{5}).
P.f.: 174ºC.
Ensayos biológicos Animales
Se realizaron experimentos in vivo con PharmEste srl (Ferrara, Italia) y con la Universidad de Ferrara, siguiendo los protocolos aprobados por la comisión de uso y cuidado de animales de la Universidad de Ferrara.
Ensayo de unión a radioligandos
Se usaron ratas Sprague-Dawley macho con un peso corporal entre 250 y 350 g. Para los ensayos de unión, se decapitaron las ratas con anestesia y se retiró la médula espinal y se rompió usando un homogeneizador tisular Polytron en tampón enfriado en hielo que contenía KCl 5 mM, NaCl 5,8 mM, CaCl_{2} 0,75 mM, MgCl_{2} 2 mM, sacarosa 320 mM, Hepes 10 mM, pH 8,6 (Szallasi y Blunberg, 1992; 1993). En experimentos de competencia, se incubaron las membranas a 37ºC durante 60 min. con [^{3}H]RTX (0,4 nM) y con concentraciones crecientes de compuestos de prueba en el intervalo de desde 0,1 nM hasta 3 \muM. Se evaluó la unión no específica en presencia de RTX 1 \muM. Se analizaron los estudios de saturación y competencia con el programa Ligand (Bradford, 1976; Munson y Rodbard, 1980).
Mediciones de fluorescencia de Ca^{2+} en ganglios del trigémino de ratas en cultivo
Se determinó la curva de calibración usando un tampón que contenía éster de Fura-2-AM y concentraciones definidas de Ca^{2+} libre. Entonces se usó esta curva para convertir los datos obtenidos de la razón F_{340}/F_{380} en [Ca^{2+}]_{i} (nM) (Kudo, Y). Se estudiaron los efectos de pretratamientos con los compuestos 6a-6m sobre el aumento en [Ca^{2+}]_{i} producido por capsaicina 30 nM.
Alodinia secundaria inducida por capsaicina en rata
Se inyectó capsaicina (5 nmoles/50 \mul/pata) en la superficie plantar de la piel lampiña de la pata derecha de ratas anestesiadas con dietil éter (Chaplan et al., 1994). Se administraron por vía oral los compuestos 6c y 6d 2 horas antes de la inyección de capsaicina. Se evaluó la alodinia táctil 90 min tras la exposición a capsaicina.
Reactivos
Se prepararon concentraciones madre de capsaicina (10 mM) en etanol absoluto. Se prepararon los compuestos 6a-6m en el 50% de DMSO y el 50% de Tween 80. Se disolvieron el éster de Fura-2-AM y ionomicina en el 100% de DMSO. Se disolvieron todos los demás fármacos en agua destilada. Entonces se hicieron las diluciones apropiadas con disolución de tampón Krebs.
Resultados Ensayos de unión a radioligandos
Los compuestos 6a-6m desplazaron [^{3}H]RTX de su sitio de unión en las membranas de médula espinal de rata a bajas concentraciones, tal como se indica mediante los valores de K_{i} notificados en la tabla 1.
Ensayo de fluorescencia de Ca^{2+}
La capsaicina (30 nM) aumentó [Ca^{2+}]_{i} en la gran mayoría (el 95%) de células neuronales de trigémino de rata, que por tanto se identificaron como neuronas que expresan TRPV1. Los valores de CI_{50} de inhibición de la movilización de [Ca^{2+}]_{i} provocada por capsaicina se resumen en la tabla 1.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 1 K_{i} y valores de CI_{50} de algunos compuestos representativos de la invención
5 
\vskip1.000000\baselineskip
También se sintetizaron los isómeros (R)-(-) y (S)-(+) de los compuestos 6c y 6d con el fin de apreciar la diferencia en actividad con respecto a los compuestos racémicos. El isómero más activo fue la forma (R)-(-) mientras que la forma (S)-(+) fue al menos 300 veces menos activa tal como se muestra en la tabla 2.
Debido a los resultados obtenidos con la síntesis de los dos isómeros individuales, se sintetizaron los compuestos 6i-6m directamente en las formas (R)-(-) activas.
TABLA 2 Comparación entre los compuestos 6c e 6d con sus isómeros activos
6 
\vskip1.000000\baselineskip
Se expresan los resultados como la media y los límites fiduciales del 95%.
Alodinia secundaria inducida por capsaicina en rata
En un estudio más extenso, se sometieron a prueba los compuestos 6c y 6d frente a alodinia secundaria inducida por capsaicina en ratas. 90 min. después de la exposición a capsaicina, los compuestos 6c y 6d (ambos a 30 \mumol/kg, v.o.), evitaron significativamente el efecto pro-alodínico de capsaicina (53,1% y 47,9% de inhibición, respectiva-
mente).
Estudios ADME
Con el fin de seleccionar candidatos a fármacos adecuados, se realizaron estudios ADME in vitro con compuestos 6c, 6d seleccionados junto con sus isómeros activos, para evaluar las propiedades de estos compuestos según los sustituyentes.
Se calcularon los valores de logD a pH=7,0 in silico, mientras se analizaron las pruebas in vitro:
- estabilidad metabólica en hepatocitos humanos crioconservados;
- citotoxicidad en células Hep G2;
- farmacocinética de casete en rata.
Se compararon los datos de los compuestos de la invención con los obtenidos con dos compuestos estructuralmente diferentes dados a conocer recientemente como antagonistas de TRPV1, concretamente JYL 1421 (Jakab et al., 2005) y SB-705498 (Rami et al., 2006) y con los obtenidos con dos fármacos ampliamente usados, uno con semivida corta (naloxona) y otro con semivida larga (tolbutamida). Los datos de ADME más relevantes permiten una rápida comparación de la influencia de sustituyentes específicos, especialmente sobre la estabilidad metabólica.
Preparación de hepatocitos
Se descongelaron rápida y cuidadosamente las células y se diluyeron con tampón de Krebs-Henseleit (KHB) enfriado en hielo. Tras la centrifugación (50 g, 5 min.) se desechó el sobrenadante y se resuspendieron las células en un volumen de KHB enfriado en hielo a una densidad mayor que 2X (con respecto a la concentración final de incubación) de células viables/ml basado en la concentración nominal en viales crioconservados. Se contaron las células viables mediante exclusión con azul trípano con un hemocitómetro y se corrigió con precisión la concentración de hepatocitos viables hasta la concentración 2X con KHB.
Preparación de células Hep G2
Se cultivaron las células durante 3 días, se tripsinizaron y se resuspendieron en 20 ml de medio de cultivo. Entonces se contaron las células y se diluyeron para obtener una concentración final adecuada para sembrar 40.000 células/pocillo en placas de cultivo celular de 96 pocillos (200 \mul/pocillo).
Se sembraron las células en las columnas 1 a 11 (la columna 12 contenía medio sin células), entonces se colocaron durante 16-24 horas a 37ºC con el 5% de CO_{2}.
Preparación de compuestos
Se prepararon los compuestos de referencia y de prueba a concentraciones de incubación 2X (10 y 1 \muM) diluyendo 10 \mul de disolución madre con 0,99 ml de KHB hasta una concentración de 10 \muM y 5 \mul de disolución madre con 0,995 \mul de KHB hasta una concentración de 5 \muM. Entonces se dispensaron 300 \mul de disoluciones 10 \muM y 1 \muM respectivamente a 2 y 1 tubo de ensayo de incubación (tubo Sterilin T.C. de 17 x 100 mm).
Estudio farmacocinético de casete preliminar en ratas conscientes con catéter
Se administraron los compuestos juntos a ratas. Se guardaron los compuestos a -20ºC cuando no se usaban. Se realizaron la formulación, vía de administración, identificación de muestras de plasma y análisis farmacocinético según los protocolos convencionales (Raynaud, FI et al, 2004; Manitpisitkul, P. et al., 2004; Singh S. et al., 2006).
Resultados
Con respecto a los compuestos Ia, Ib, Ic dados a conocer en el documento WO 2005/123666 A1, esta nueva serie de derivados de o-hidroxialquil-urea mostró una mejora evidente inesperada en cuanto a la estabilidad metabólica y una citotoxicidad comparable a la de los compuestos de referencia JYL 1421 y SB-705498 y una buena semivida, siendo su aclaramiento relativamente lento. También fueron aceptables los valores de citotoxicidad expresados como CI_{50} micromolar. La tabla 3 notifica el perfil ADME de dos compuestos de la invención con respecto a los compuestos dados a conocer en el documento WO 2005/123666.
Además, los isómeros (R)-(-) de los compuestos 6c y 6d mostraron una mejora adicional en cuanto a la semivida, manteniendo al mismo tiempo buenos valores de estabilidad metabólica y baja citotoxicidad (tabla 3).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 3 Perfil ADME de los compuestos 6c, 6d y sus isómeros activos con respecto a compuestos de referencia seleccionados
7 
\vskip1.000000\baselineskip
Referencias
1. PharmEste S.r.l. documento WO 2005/123666 A1.
2. Bradford MM. Anal Biochem. 1976, 72, 248-254.
3. Munson PJ. et al., Anal Biochem 1980, 107, 220-239.
4. Rigoni, M. et al., Br. J. Pharmacol. 2003, 138, 977-985.
5. Kudo, Y. et al., Jap. J. Pharmacol. 1986, 41, 345-351.
6. Chaplan N. et al., J Neurosci Methods. 1994, 53, 55-63
7. Jakab B. et al. Eur. J. Pharmacol. 2005, 517, 35-44.
8. Rami HK. et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2006, 16, 3287-3291.
9. Raynaud FI. et al. Mol. Cancer Ther. 2004, 3, 353-362.
10. Manitpisitkul, P. et al. Drug Discov. Today, 2004, 9, 652-658.
11. Singh S. Curr. Drug Metab. 2006, 7, 165-182.

Claims (10)

1. Compuestos de fórmula (I)
8
en la que
R se selecciona de halógeno, alquilo, alcoxilo, arilo y heteroarilo;
R_{1} se selecciona de 2-hidroxietilo, 2,3-dihidroxipropilo, 3-hidroxipropilo, 2,2-dihidroxietilo, 3,3-dihidroxipropilo, 1,3-dioxolan-etilo, 1,3-dioxan-metilo, 1,3-dioxolan-metilo, 1,3-dioxan-etilo, 3-fluoro-2-hidroxipropilo, 3-carboxi-2-hidroxi-propilo, 3-cloro-2-hidroxipropilo, 2-hidroxipropilo, 2-hidroxi-propen-2-ilo, morfolinoetilo, piperazinoetilo, hidroximetilo, bencilo, 4-(hidroximetil)bencilo, 4-clorobencilo, 4-fluorobencilo y 4-hidroxibencilo
R_{2} es terc-butilo o trifluorometilo;
R_{3} se selecciona independientemente de hidrógeno, carboxilo, ciano, alquilo o hidroxialquilo,
incluyendo todos los posibles isómeros ópticos y diastereoisómeros de los mismos,
en los que
"halógeno" es un átomo de halógeno seleccionado de flúor, cloro, bromo y yodo;
"alquilo" es un grupo alquilo (C_{1-}C_{4}) lineal o ramificado;
"alcoxilo" es un grupo alcoxilo (C_{1-}C_{4}) lineal o ramificado;
"arilo" es fenilo, opcionalmente sustituido con uno o más grupos halógeno, alquilo, alcoxilo tal como se definieron anteriormente en el presente documento, grupos ciano o amino, que pueden ser iguales o diferentes entre sí; y
"heteroarilo" es un heterociclo de 5 ó 6 miembros que contiene uno o más átomos de nitrógeno, oxígeno o azufre, que pueden ser iguales o diferentes entre sí.
\vskip1.000000\baselineskip
2. Compuestos según la reivindicación 1, en los que:
R es cloro o bromo;
R_{1} es 2-hidroxietilo;
R_{2} es terc-butilo o trifluorometilo;
R_{3} es hidrógeno.
\vskip1.000000\baselineskip
3. Compuestos según la reivindicación 1, en los que:
R es cloro o bromo;
R_{1} es 2,3-dihidroxipropilo;
R_{2} es trifluorometilo;
R_{3} es hidrógeno.
\vskip1.000000\baselineskip
4. Compuestos según la reivindicación 1, en los que:
R es metilo, fenilo, piridina o 4-(sustituido)-fenilo;
R_{1} es (R)-(-)-2,3-dihidroxipropilo;
R_{2} es trifluorometilo;
R_{3} es hidrógeno.
\vskip1.000000\baselineskip
5. Compuestos según la reivindicación 1, en los que:
R es cloro o bromo;
R_{1} es (R)-(-)-2,3-dihidroxipropilo;
R_{2} es trifluorometilo;
R_{3} es hidrógeno.
\vskip1.000000\baselineskip
6. Compuesto según la reivindicación 1 seleccionado de:
1-[4-(2-hidroxietoxi)-2-bromo-5-metoxibencil]-3-[4-(trifluorometil)-bencil]urea;
1-[4-(2-hidroxietoxi)-2-cloro-5-metoxibencil]-3-[4-(trifluorometil)-bencil]urea;
1-[4-(2-hidroxietoxi)-2-bromo-5-metoxibencil]-3-[4-(terc-butilo)-bencil]urea;
1-[4-(2-hidroxietoxi)-2-cloro-5-metoxibencil]-3-[4-(terc-butilo)-bencil]urea;
1-[4-(2,3-dihidroxipropoxi)-2-cloro-5-metoxibencil]-3-[4-(trifluorometil)-bencil]urea;
1-[4-(2,3-dihidroxipropoxi)-2-bromo-5-metoxibencil]-3-[4-(trifluorometil)-bencil]urea;
1-[4-((R)-(-)-2,3-dihidroxipropoxi)-2-cloro-5-metoxibencil]-3-[4-(trifluorometil)-bencil]urea;
1-[4-((R)-(-)-2,3-dihidroxipropoxi)-2-fenil-5-metoxibencil]-3-[4-(trifluorometil)-bencil]urea;
1-[4-((R)-(-)-2,3-dihidroxipropoxi)-2-(piridin-3-il)-5-metoxibencil]-3-[4-(trifluorometil)-bencil]urea;
1-[4-((R)-(-)-2,3-dihidroxipropoxi)-2-(4-clorofenil)-5-metoxibencil]-3-[4-(trifluorometil)-bencil]urea;
1-[4-((R)-(-)-2,3-dihidroxipropoxi)-2-bromo-5-metoxibencil]-3-[4-(trifluorometil)-bencil]urea.
\vskip1.000000\baselineskip
7. Compuestos de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 para uso como medicamentos.
8. Uso de compuestos de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 para la preparación de composiciones farmacéuticas para la terapia de estados inflamatorios.
9. Uso según la reivindicación 8, en el que el estado inflamatorio se selecciona de dolor neuropático crónico, síndrome de vejiga hiperactiva, dolor tumoral, hemorroides, hiperalgesia inflamatoria, dolor posoperatorio, extracción dental, enfermedades de las vías respiratorias y gastrointestinales.
10. Composiciones farmacéuticas que contienen compuestos de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en mezcla con excipientes y/o vehículos adecuados.
ES07848984T 2006-12-21 2007-12-06 Derivados de o-sustituido-dibencilurea como antagonistas del receptor trpv1. Active ES2347492T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP06026533 2006-12-21
EP06026533A EP1939173A1 (en) 2006-12-21 2006-12-21 O-substituted-dibenzyl urea- or thiourea- derivatives as trpv1 receptor antagonists

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2347492T3 true ES2347492T3 (es) 2010-10-29

Family

ID=38139789

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES07848984T Active ES2347492T3 (es) 2006-12-21 2007-12-06 Derivados de o-sustituido-dibencilurea como antagonistas del receptor trpv1.

Country Status (25)

Country Link
US (1) US7750049B2 (es)
EP (2) EP1939173A1 (es)
JP (1) JP5302214B2 (es)
KR (1) KR101460177B1 (es)
CN (1) CN101563317B (es)
AT (1) ATE479652T1 (es)
BR (1) BRPI0720421A2 (es)
CA (1) CA2673219C (es)
CY (1) CY1110833T1 (es)
DE (1) DE602007008942D1 (es)
DK (1) DK2094653T3 (es)
EA (1) EA015152B1 (es)
ES (1) ES2347492T3 (es)
HR (1) HRP20100588T1 (es)
IL (1) IL199422A (es)
MX (1) MX2009006582A (es)
NO (1) NO20092336L (es)
NZ (1) NZ577796A (es)
PL (1) PL2094653T3 (es)
PT (1) PT2094653E (es)
RS (1) RS51555B (es)
SI (1) SI2094653T1 (es)
UA (1) UA95986C2 (es)
WO (1) WO2008075150A1 (es)
ZA (1) ZA200904278B (es)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2203411B1 (en) 2007-09-20 2016-01-06 Ramot at Tel-Aviv University Ltd. N-phenyl anthranilic acid derivatives and uses thereof
EP3547991A1 (en) 2016-12-02 2019-10-09 Symrise AG Cosmetic blends
RU2755206C1 (ru) 2020-05-20 2021-09-14 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г.Б. Елякова Дальневосточного отделения Российской академии наук (ТИБОХ ДВО РАН) Средство пролонгированного анальгетического действия и лекарственный препарат на его основе

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8715357D0 (en) * 1987-06-30 1987-08-05 Sandoz Inst For Medical Resear Organic compounds
GB9519270D0 (en) * 1995-09-21 1995-11-22 Sandoz Pharma Uk Organic compounds
CN100439332C (zh) * 2000-08-21 2008-12-03 株式会社太平洋 硫脲衍生物以及包含该衍生物的药物组合物
JP2003192660A (ja) * 2001-12-26 2003-07-09 Bayer Ag 尿素誘導体
US6858615B2 (en) * 2002-02-19 2005-02-22 Parion Sciences, Inc. Phenyl guanidine sodium channel blockers
ITMI20041231A1 (it) * 2004-06-18 2004-09-18 Pharmeste Srl Antagonisti del recettore dei vanilloidi trpv1

Also Published As

Publication number Publication date
DE602007008942D1 (de) 2010-10-14
US7750049B2 (en) 2010-07-06
CA2673219C (en) 2015-04-14
IL199422A (en) 2015-01-29
PT2094653E (pt) 2010-09-23
KR101460177B1 (ko) 2014-11-10
SI2094653T1 (sl) 2011-01-31
EA200900625A1 (ru) 2009-12-30
DK2094653T3 (da) 2010-10-25
JP2010513455A (ja) 2010-04-30
WO2008075150A1 (en) 2008-06-26
ZA200904278B (en) 2010-08-25
EP1939173A1 (en) 2008-07-02
US20100105740A1 (en) 2010-04-29
CN101563317B (zh) 2012-12-12
EA015152B1 (ru) 2011-06-30
NO20092336L (no) 2009-06-18
CY1110833T1 (el) 2015-06-10
MX2009006582A (es) 2009-07-02
NZ577796A (en) 2011-10-28
EP2094653A1 (en) 2009-09-02
HRP20100588T1 (hr) 2010-12-31
ATE479652T1 (de) 2010-09-15
CN101563317A (zh) 2009-10-21
CA2673219A1 (en) 2008-06-26
EP2094653B1 (en) 2010-09-01
PL2094653T3 (pl) 2011-02-28
RS51555B (en) 2011-06-30
JP5302214B2 (ja) 2013-10-02
UA95986C2 (uk) 2011-09-26
KR20090090347A (ko) 2009-08-25
BRPI0720421A2 (pt) 2013-12-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2630115T3 (es) Derivados de 5-fluoro-n-(piridin-2-il)piridin-2-amina con sulfoximina sustituida y su uso como inhibidores de quinasa cdk9
ES2881776T3 (es) Compuestos tricíclicos útiles para tratar las infecciones por ortomixovirus
ES2702362T3 (es) Compuestos a base de tiopirimidina y usos de los mismos
ES2974494T3 (es) Compuestos tricíclicos fusionados de piridazinona útiles para tratar las infecciones por ortomixovirus
AU2020273158A1 (en) Dosage forms and regimens for amino acid compounds
ES2533910T3 (es) Compuesto novedoso de pirimidina que tiene estructura de dibencilamina y medicamento que comprende el compuesto
ES2605564T3 (es) Sal farmacéuticamente aceptable de (E)-N-[4-[[3-cloro-4-(2-piridilmetoxi)fenil]amino]-3-ciano-7-etoxi-6-quinolil]-3-[(2R)-1-metilpirrolidin-2-il]prop-2-enamida, método de preparación para la misma, y uso médico de la misma
ES2629023T3 (es) Dihidropirimidinonas bicíclicas sustituidas y su uso como inhibidores de la actividad elastasa de neutrófilos
ES2738573T3 (es) Sal de compuesto heterocíclico que contiene nitrógeno o cristal del mismo, composición farmacéutica e inhibidor de FLT3
ES2923579T3 (es) Derivados de 2,4-diaminoquinazolina y uso de los mismos en el tratamiento de infecciones víricas, cáncer o alergias
JP6755922B2 (ja) 新規な化合物、それらの調製及びそれらの使用
ES2784308T3 (es) N-(pirrolidin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina sustituida como inhibidor de la Janus cinasa
ES2347492T3 (es) Derivados de o-sustituido-dibencilurea como antagonistas del receptor trpv1.
WO2022232838A1 (en) Expanded dosage regimens for integrin inhibitors
ES2263058T3 (es) Derivados de pirimidina como inhibidores selectivos de cox-2.
ES2316918T3 (es) Derivados de pirimidina utiles como inhibidores selectivos de cox-2.
ES2909709T3 (es) Inhibidores del receptor 2 activado por proteasa
WO2019170051A1 (zh) 一种DACOs类NNRTIs氨基酸酯衍生物、其制备方法、药物组合物及应用
ES2777550T3 (es) Profármaco de roflumilast
LT et al. 44100 Ferrara (IT)
TW202332433A (zh) 含羧酸生物電子等排體之dhodh抑制劑
BR122023025728A2 (pt) Derivados de 10-(di(fenil)metil)-4-hidróxi-8,9,9a-10-tetra-hidro-7hpirrolo[1&#39;,2&#39;:4,5]pirazino[1,2-b]piridazina-3,5-diona e compostos relacionados como inibidores de da replicação de ortomixovírus, seus usos para tratamento de influenza, composição farmacêutica, e combinação