JP2008535509A - エリートイベントa5547−127、ならびに生物サンプル中の該イベントを同定するための方法およびキット - Google Patents
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Abstract
Description
植物におけるトランスジーンの表現型発現は、遺伝子自体の構造と植物ゲノム内のその配置の両方によって判定される。それと同時に、ゲノム内のさまざまな配置にある(外来DNA内の)トランスジーンの存在が、植物の表現型全体にさまざまな方法で影響を与える。遺伝子操作によって、植物の商業的に興味深い形質を農業生産もしくは工業生産へ導入するのに成功するには、各種ファクターが関与してくるので長期にわたるプロセスをたどらねばならない。遺伝子操作による形質転換植物の実際の形質転換と再生は、圃場試験における広範囲な遺伝学的特性、育種および評価など、一連の選択ステップのはじめのステップにすぎず、最終段階にいたるまで、エリートイベントを選択することはできない。
本発明は、生物サンプル中のエリートイベントA5547−127を同定するための方法であって、A5547−127の5’および/または3’の隣接配列を特異的に認識するプライマーまたはプローブに基づいた方法に関する。
植物ゲノム内への組換えDNA分子の組込みは、通常、細胞もしくは組織の形質転換の結果(または、別の遺伝子操作の結果)として発生する。特定の部位の組込みは、「無作為」の組込みによるか、または既定の配置による(標的とする組込みのプロセスを使用する場合)。
a)外来DNAの存在は、農業生産力や商業的価値に関連する特性など、他の所望の植物特性を損なわないこと、
b)イベントが、安定的に遺伝し、同一性制御に適したツールを開発できる、よく明確にされた分子構造によって特徴付けられること、
c)イベントを担持する植物が、通常の農業で使用する際にさらされる環境条件の範囲で、商業的に容認しうるレベルで、イベントの異型接合(もしくは半接合)および同型接合の両条件下で、対象となる遺伝子が、正しく、適切で安定した空間的および時間的表現型発現を呈すること。
−3’末端に5’隣接配列(配列番号1、ヌクレオチド1〜ヌクレオチド311)から選択された少なくとも17の連続したヌクレオチド、好ましくは20の連続したヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、17nt〜約300ntの長さにわたるオリゴヌクレオチド(5隣接配列を認識するプライマー);または
−3’末端に3’隣接配列(配列番号2、ヌクレオチド510〜1880の相補体)から選択された少なくとも17の連続したヌクレオチド、好ましくは20の連続したヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、17nt〜約300ntの長さにわたるオリゴヌクレオチド(3’隣接配列を認識するプライマー);または
−3’末端に挿入DNA配列(配列番号1、ヌクレオチド312〜ヌクレオチド810の相補体)から選択された少なくとも17の連続したヌクレオチド、好ましくは20の連続したヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、17nt〜約510ntの長さにわたるオリゴヌクレオチド(外来DNAを認識するプライマー);または
−挿入DNA配列(配列番号2、ヌクレオチド1〜ヌクレオチド509)から選択された少なくとも17の連続したヌクレオチド、好ましくは20の連続したヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、17nt〜約300ntの長さにわたるオリゴヌクレオチド。
−3’末端に配列番号1、ヌクレオチド1〜ヌクレオチド325から選択された少なくとも17の連続したヌクレオチド、好ましくは20の連続したヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、17nt〜約300ntの長さにわたるオリゴヌクレオチド;または
−3’末端に配列番号2、ヌクレオチド495〜ヌクレオチド1880の相補体から選択された少なくとも17の連続したヌクレオチド、好ましくは20の連続したヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、17nt〜約300ntの長さにわたるオリゴヌクレオチド;または
−3’末端における配列番号1、ヌクレオチド295〜ヌクレオチド810の相補体から選択された少なくとも17の連続したヌクレオチド、好ましくは20の連続したヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、17nt〜約300ntの長さにわたるオリゴヌクレオチド;または
−配列番号2、ヌクレオチド1〜ヌクレオチド525から選択された少なくとも17の連続したヌクレオチド、好ましくは20の連続したヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、17nt〜約300ntの長さにわたるオリゴヌクレオチド。
a.5’隣接配列を認識するプライマー
− 配列番号1、ヌクレオチド45〜ヌクレオチド64のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド22〜ヌクレオチド41のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド47〜ヌクレオチド64のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド183〜ヌクレオチド202のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド184〜ヌクレオチド203のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド301〜ヌクレオチド320のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド303〜ヌクレオチド322のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド306〜ヌクレオチド325のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド36〜ヌクレオチド55のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド182〜ヌクレオチド202のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド183〜ヌクレオチド203のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド184〜ヌクレオチド202のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド185〜ヌクレオチド203のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド185〜ヌクレオチド204のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド292〜ヌクレオチド311のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド295〜ヌクレオチド314のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド307〜ヌクレオチド325のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド8〜ヌクレオチド27のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド10〜ヌクレオチド29のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド11〜ヌクレオチド30のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド13〜ヌクレオチド32のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド20〜ヌクレオチド41のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド35〜ヌクレオチド54のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド37〜ヌクレオチド55のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド66〜ヌクレオチド85のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド67〜ヌクレオチド86のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド68〜ヌクレオチド87のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド181〜ヌクレオチド202のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド182〜ヌクレオチド203のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド184〜ヌクレオチド204のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド185〜ヌクレオチド202のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド186〜ヌクレオチド204のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド186〜ヌクレオチド203のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド248〜ヌクレオチド267のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド249〜ヌクレオチド268のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド290〜ヌクレオチド309のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド291〜ヌクレオチド311のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド293〜ヌクレオチド311のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド294〜ヌクレオチド314のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド301〜ヌクレオチド322のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド303〜ヌクレオチド320のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド305〜ヌクレオチド322のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド308〜ヌクレオチド325のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド11〜ヌクレオチド29のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド36〜ヌクレオチド54のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド41〜ヌクレオチド61のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド43〜ヌクレオチド64のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド66〜ヌクレオチド86のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド67〜ヌクレオチド85のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド67〜ヌクレオチド87のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド68〜ヌクレオチド86のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド69〜ヌクレオチド87のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド180〜ヌクレオチド197のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド183〜ヌクレオチド204のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド187〜ヌクレオチド204のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド200〜ヌクレオチド219のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド246〜ヌクレオチド263のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド247〜ヌクレオチド267のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド248〜ヌクレオチド268のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド249〜ヌクレオチド267のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド250〜ヌクレオチド268のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド290〜ヌクレオチド311のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド291〜ヌクレオチド308のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド291〜ヌクレオチド309のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド293〜ヌクレオチド214のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド8〜ヌクレオチド29のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド11〜ヌクレオチド32のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド37〜ヌクレオチド54のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド40〜ヌクレオチド61のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド64〜ヌクレオチド85のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド65〜ヌクレオチド86のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド66〜ヌクレオチド87のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド68〜ヌクレオチド85のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド69〜ヌクレオチド86のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド197〜ヌクレオチド218のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド201〜ヌクレオチド219のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド201〜ヌクレオチド218のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド234〜ヌクレオチド253のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド244〜ヌクレオチド263のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド246〜ヌクレオチド267のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド247〜ヌクレオチド268のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド250〜ヌクレオチド267のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド292〜ヌクレオチド309のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド198〜ヌクレオチド219のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド202〜ヌクレオチド219のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド233〜ヌクレオチド253のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド235〜ヌクレオチド254のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド235〜ヌクレオチド253のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド243〜ヌクレオチド263のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド232〜ヌクレオチド253のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド234〜ヌクレオチド254のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド242〜ヌクレオチド263のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド233〜ヌクレオチド254のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド234〜ヌクレオチド255のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド294〜ヌクレオチド215のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド247〜ヌクレオチド266のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド248〜ヌクレオチド266のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド249〜ヌクレオチド266のヌクレオチド配列
− 配列番号1、ヌクレオチド781〜ヌクレオチド800のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド301〜ヌクレオチド320のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド303〜ヌクレオチド322のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド422〜ヌクレオチド461のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド444〜ヌクレオチド463のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド778〜ヌクレオチド797のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド781〜ヌクレオチド799のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド788〜ヌクレオチド807のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド318〜ヌクレオチド337のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド322〜ヌクレオチド341のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド325〜ヌクレオチド344のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド329〜ヌクレオチド348のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド353〜ヌクレオチド372のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド376〜ヌクレオチド395のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド378〜ヌクレオチド397のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド384〜ヌクレオチド403のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド440〜ヌクレオチド459のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド442〜ヌクレオチド460のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド444〜ヌクレオチド462のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド442〜ヌクレオチド462のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド444〜ヌクレオチド464のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド449〜ヌクレオチド468のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド470〜ヌクレオチド489のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド484〜ヌクレオチド503のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド492〜ヌクレオチド511のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド781〜ヌクレオチド798のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド778〜ヌクレオチド798のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド781〜ヌクレオチド802のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド788〜ヌクレオチド806のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド301〜ヌクレオチド318のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド303〜ヌクレオチド320のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド301〜ヌクレオチド322のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド318〜ヌクレオチド336のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド318〜ヌクレオチド338のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド320〜ヌクレオチド339のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド322〜ヌクレオチド340のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド322〜ヌクレオチド342のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド325〜ヌクレオチド343のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド329〜ヌクレオチド347のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド346〜ヌクレオチド365のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド348〜ヌクレオチド367のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド353〜ヌクレオチド371のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド378〜ヌクレオチド396のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド376〜ヌクレオチド396のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド382〜ヌクレオチド400のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド382〜ヌクレオチド401のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド384〜ヌクレオチド404のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド442〜ヌクレオチド459のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド440〜ヌクレオチド460のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド444〜ヌクレオチド461のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド442〜ヌクレオチド463のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド444〜ヌクレオチド465のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド469〜ヌクレオチド488のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド470〜ヌクレオチド488のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド484〜ヌクレオチド504のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド490〜ヌクレオチド509のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド491〜ヌクレオチド510のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド492〜ヌクレオチド512のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド561〜ヌクレオチド580のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド563〜ヌクレオチド582のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド565〜ヌクレオチド584のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド568〜ヌクレオチド587のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド572〜ヌクレオチド591のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド590〜ヌクレオチド609のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド640〜ヌクレオチド659のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド695〜ヌクレオチド713のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド782〜ヌクレオチド799のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド778〜ヌクレオチド799のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド788〜ヌクレオチド805のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド788〜ヌクレオチド808のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド318〜ヌクレオチド335のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド315〜ヌクレオチド336のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド320〜ヌクレオチド338のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド318〜ヌクレオチド339のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド322〜ヌクレオチド339のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド320〜ヌクレオチド340のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド325〜ヌクレオチド342のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド322〜ヌクレオチド343のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド329〜ヌクレオチド346のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド325〜ヌクレオチド346のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド329〜ヌクレオチド349のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド346〜ヌクレオチド364のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド348〜ヌクレオチド366のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド346〜ヌクレオチド366のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド348〜ヌクレオチド368のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド353〜ヌクレオチド370のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド378〜ヌクレオチド395のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド376〜ヌクレオチド397のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド376〜ヌクレオチド399のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド384〜ヌクレオチド401のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド384〜ヌクレオチド405のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド440〜ヌクレオチド461のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド466〜ヌクレオチド487のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド484〜ヌクレオチド505のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド490〜ヌクレオチド508のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド492〜ヌクレオチド509のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド491〜ヌクレオチド509のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド490〜ヌクレオチド510のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド491〜ヌクレオチド511のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド492〜ヌクレオチド513のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド561〜ヌクレオチド579のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド561〜ヌクレオチド581のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド563〜ヌクレオチド581のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド568〜ヌクレオチド586のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド572〜ヌクレオチド590のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド572〜ヌクレオチド592のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド590〜ヌクレオチド610のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド596〜ヌクレオチド613のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド596〜ヌクレオチド614のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド640〜ヌクレオチド657のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド640〜ヌクレオチド658のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド640〜ヌクレオチド660のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド695〜ヌクレオチド712のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド696〜ヌクレオチド713のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド320〜ヌクレオチド337のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド320〜ヌクレオチド341のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド329〜ヌクレオチド350のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド346〜ヌクレオチド363のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド348〜ヌクレオチド365のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド346〜ヌクレオチド367のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド348〜ヌクレオチド369のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド354〜ヌクレオチド371のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド382〜ヌクレオチド403のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド482〜ヌクレオチド503のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド491〜ヌクレオチド518のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド490〜ヌクレオチド511のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド491〜ヌクレオチド512のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド563〜ヌクレオチド580のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド563〜ヌクレオチド582のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド565〜ヌクレオチド582のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド563〜ヌクレオチド584のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド568〜ヌクレオチド585のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド562〜ヌクレオチド589のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド572〜ヌクレオチド593のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド584〜ヌクレオチド605のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド590〜ヌクレオチド607のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド590〜ヌクレオチド611のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド596〜ヌクレオチド615のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド599〜ヌクレオチド618のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド540〜ヌクレオチド661のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド779〜ヌクレオチド798のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド788〜ヌクレオチド809のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド568〜ヌクレオチド589のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド596〜ヌクレオチド616のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド599〜ヌクレオチド619のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド745〜ヌクレオチド762のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド779〜ヌクレオチド797のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド779〜ヌクレオチド799のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド786〜ヌクレオチド805のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド596〜ヌクレオチド617のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド599〜ヌクレオチド620のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド779〜ヌクレオチド796のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド779〜ヌクレオチド800のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド786〜ヌクレオチド804のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド314〜ヌクレオチド335のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド786〜ヌクレオチド803のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド786〜ヌクレオチド806のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号1、ヌクレオチド296〜ヌクレオチド315のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1413〜ヌクレオチド1432のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド721〜ヌクレオチド740のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド767〜ヌクレオチド786のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1185〜ヌクレオチド1204のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1332〜ヌクレオチド1351のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1413〜ヌクレオチド1431のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1413〜ヌクレオチド1433のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド503〜ヌクレオチド522のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド507〜ヌクレオチド526のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド721〜ヌクレオチド739のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド722〜ヌクレオチド741のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド721〜ヌクレオチド741のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド770〜ヌクレオチド789のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド775〜ヌクレオチド794のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1135〜ヌクレオチド1154のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1185〜ヌクレオチド1202のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1185〜ヌクレオチド1205のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1191〜ヌクレオチド1210のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1332〜ヌクレオチド1350のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1332〜ヌクレオチド1352のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1413〜ヌクレオチド1430のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド506〜ヌクレオチド525のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド507〜ヌクレオチド525のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド507〜ヌクレオチド527のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド721〜ヌクレオチド738のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド722〜ヌクレオチド740のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド721〜ヌクレオチド742のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド775〜ヌクレオチド793のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド775〜ヌクレオチド795のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1135〜ヌクレオチド1153のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1135〜ヌクレオチド1155のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1185〜ヌクレオチド1206のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1191〜ヌクレオチド1209のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1316〜ヌクレオチド1335のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1325〜ヌクレオチド1344のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1332〜ヌクレオチド1353のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1413〜ヌクレオチド1434のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド507〜ヌクレオチド528のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド722〜ヌクレオチド739のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド725〜ヌクレオチド742のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド730〜ヌクレオチド749のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド770〜ヌクレオチド787のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド770〜ヌクレオチド791のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド771〜ヌクレオチド792のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド775〜ヌクレオチド792のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド775〜ヌクレオチド796のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1153〜ヌクレオチド1134のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1135〜ヌクレオチド1156のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1187〜ヌクレオチド1206のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1191〜ヌクレオチド1208のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1191〜ヌクレオチド1212のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1325〜ヌクレオチド1343のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1325〜ヌクレオチド1345のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1367〜ヌクレオチド1384のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1511〜ヌクレオチド1528のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド506〜ヌクレオチド527のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド730〜ヌクレオチド750のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1187〜ヌクレオチド1204のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1187〜ヌクレオチド1205のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1249〜ヌクレオチド1266のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1325〜ヌクレオチド1342のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1325〜ヌクレオチド1346のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド730〜ヌクレオチド751のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1187〜ヌクレオチド1208のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1334〜ヌクレオチド1353のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1334〜ヌクレオチド1352のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1334〜ヌクレオチド1354のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1334〜ヌクレオチド1351のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド1334〜ヌクレオチド1355のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド754〜ヌクレオチド771のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド842〜ヌクレオチド863のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド732〜ヌクレオチド751のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド732〜ヌクレオチド750のヌクレオチド配列の相補体
− 配列番号2、ヌクレオチド284〜ヌクレオチド303のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド285〜ヌクレオチド305のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド289〜ヌクレオチド308のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド160〜ヌクレオチド179のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド162〜ヌクレオチド181のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド283〜ヌクレオチド303のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド284〜ヌクレオチド304のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド286〜ヌクレオチド304のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド287〜ヌクレオチド306のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド288〜ヌクレオチド308のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド290〜ヌクレオチド308のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド394〜ヌクレオチド413のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド398〜ヌクレオチド417のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド399〜ヌクレオチド418のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド400〜ヌクレオチド418のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド119〜ヌクレオチド138のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド161〜ヌクレオチド179のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド161〜ヌクレオチド181のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド184〜ヌクレオチド203のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド192〜ヌクレオチド211のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド193〜ヌクレオチド212のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド195〜ヌクレオチド214のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド241〜ヌクレオチド260のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド283〜ヌクレオチド304のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド286〜ヌクレオチド303のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド286〜ヌクレオチド306のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド287〜ヌクレオチド304のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド287〜ヌクレオチド308のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド288〜ヌクレオチド306のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド366〜ヌクレオチド385のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド393〜ヌクレオチド412のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド395〜ヌクレオチド413のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド398〜ヌクレオチド418のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド399〜ヌクレオチド417のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド400〜ヌクレオチド417のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド401〜ヌクレオチド418のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド430〜ヌクレオチド449のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド81〜ヌクレオチド100のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド90〜ヌクレオチド109のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド159〜ヌクレオチド179のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド160〜ヌクレオチド181のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド185〜ヌクレオチド203のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド191〜ヌクレオチド211のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド192〜ヌクレオチド212のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド193〜ヌクレオチド211のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド194〜ヌクレオチド212のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド194〜ヌクレオチド214のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド196〜ヌクレオチド215のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド196〜ヌクレオチド214のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド219〜ヌクレオチド238のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド240〜ヌクレオチド260のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド242〜ヌクレオチド261のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド242〜ヌクレオチド260のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド275〜ヌクレオチド294のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド285〜ヌクレオチド306のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド289〜ヌクレオチド306のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド315〜ヌクレオチド334のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド319〜ヌクレオチド338のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド366〜ヌクレオチド383のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド372〜ヌクレオチド391のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド392〜ヌクレオチド412のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド392〜ヌクレオチド413のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド394〜ヌクレオチド412のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド397〜ヌクレオチド417のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド397〜ヌクレオチド418のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド424〜ヌクレオチド443のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド429〜ヌクレオチド449のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド431〜ヌクレオチド450のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド431〜ヌクレオチド449のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド439〜ヌクレオチド458のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド447〜ヌクレオチド466のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド481〜ヌクレオチド500のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド507〜ヌクレオチド526のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド79〜ヌクレオチド96のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド80〜ヌクレオチド100のヌクレオチド配列
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− 配列番号2、ヌクレオチド89〜ヌクレオチド109のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド91〜ヌクレオチド109のヌクレオチド配列
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− 配列番号2、ヌクレオチド396〜ヌクレオチド417のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド423〜ヌクレオチド443のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド430〜ヌクレオチド450のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド432〜ヌクレオチド449のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド438〜ヌクレオチド458のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド446〜ヌクレオチド466のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド448〜ヌクレオチド466のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド449〜ヌクレオチド466のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド481〜ヌクレオチド498のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド481〜ヌクレオチド499のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド482〜ヌクレオチド500のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド508〜ヌクレオチド526のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド79〜ヌクレオチド100のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド83〜ヌクレオチド100のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド88〜ヌクレオチド109のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド92〜ヌクレオチド109のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド185〜ヌクレオチド202のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド194〜ヌクレオチド215のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド217〜ヌクレオチド238のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド240〜ヌクレオチド261のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド241〜ヌクレオチド262のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド313〜ヌクレオチド334のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド317〜ヌクレオチド338のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド321〜ヌクレオチド338のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド370〜ヌクレオチド391のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド422〜ヌクレオチド443のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド428〜ヌクレオチド449のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド429〜ヌクレオチド450のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド437〜ヌクレオチド458のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド441〜ヌクレオチド458のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド445〜ヌクレオチド466のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド482〜ヌクレオチド499のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド504〜ヌクレオチド523のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド266〜ヌクレオチド287のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド446〜ヌクレオチド465のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド156〜ヌクレオチド175のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド448〜ヌクレオチド465のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド155〜ヌクレオチド175のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド157〜ヌクレオチド175のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド154〜ヌクレオチド175のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド312〜ヌクレオチド329のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド191〜ヌクレオチド210のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド190〜ヌクレオチド210のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド192〜ヌクレオチド210のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド157〜ヌクレオチド176のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド189〜ヌクレオチド210のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド193〜ヌクレオチド210のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド156〜ヌクレオチド176のヌクレオチド配列
− 配列番号2、ヌクレオチド155〜ヌクレオチド176のヌクレオチド配列
配列番号1: A5547−127の5’隣接領域を含むヌクレオチド配列
配列番号2: A5547−127の3’隣接領域を含むヌクレオチド配列
配列番号3: プライマーHCA150
配列番号4: プライマーDPA013
配列番号5: プライマーDPA228
配列番号6: プライマーKVM173
配列番号7: プライマーYTP228
配列番号8: プライマーYTP220
配列番号9: プライマーDPA024
配列番号10: プライマーYTP245
配列番号11: プライマーYTP170
配列番号12: プライマーYTP227
配列番号13: プライマーMDB688
配列番号14: プライマーKVM175
配列番号15: プライマーMDB687
配列番号16: プライマーSMO022
配列番号17: プライマーSMO024
配列番号18: 対照フラグメントの増幅用プライマー1
配列番号19: 対照フラグメントの増幅用プライマー2
エリートイベントA5547−127の隣接領域の同定
Cauliflower Mosaicウィルス由来の構成35Sプロモーターの制御下で、酵素フォスフィノスリシンアセチルトランスフェラーゼをコードするpat遺伝子のコード配列を含むベクターでダイズを形質転換することにより、除草剤耐性ダイズを開発した。
TAIL−PCR法により獲得した5’隣接領域を含むとして同定されているフラグメントを完全に配列決定した(配列番号1)。ヌクレオチド1〜311の間の配列は、植物DNAに対応しており、ヌクレオチド312〜810の間の配列は、外来DNAに対応している。
TAIL−PCR法により獲得した3’隣接領域を含むとして同定されているフラグメントを完全に配列決定した(配列番号2)。ヌクレオチド1〜509の間の配列は、外来DNAに対応しており、ヌクレオチド510〜1880の間の配列は、植物DNAに対応している。
2.1.プライマー
エリートイベント中の配列を認識する特異的プライマーを開発した。特に、A5547−127の5’隣接領域中の配列を認識するプライマーを開発した。次に、プライマーが約150ヌクレオチドの配列に広がるように、外来DNAの配列中で第二のプライマーを選択した。下記のプライマーが、A5547−127DNA上でのPCR反応で特に明確で再現可能な結果を示すことを突き止めた。
PCR反応における期待増幅フラグメントは下記のとおりである。
プライマー対SOY01−SOY02: 413bp(内在性対照)
プライマー対MDB688−MDB687: 151bp(A5547−127エリートイベント)
Edwards ら. (Nucleic Acid Research, 19, p1349, 1991) に従って、葉に穴を開けて、テンプレートDNAを調製した。他の方法で調製したDNAの使用時には、各種量の鋳型を用いてテストを実施した。通常、50ngのゲノムテンプレートDNAから、最適な結果が得られる。
偽陽性または偽陰性の誤りを回避するため、PCR実施時に、下記の陽性対照と陰性対照を含む必要がある。
−マスター混合対照(DNA陰性対照)。これは、反応にDNAを付加しないPCRである。期待した結果、すなわちPCR産物が観察されなかったときには、PCR混合物は標的DNAによって汚染されていないことを示している。
−DNA陽性対照(トランスジーン配列を含むことが知られているゲノムDNAサンプル)。この陽性対照の増幅に成功したことにより、標的配列の増幅を可能にする条件下でPCRが実施されたことを示している。
−野生型DNA対照。これは、提供されたテンプレートDNAが非トランスジーン植物から調製されたゲノムDNAであるPCRである。期待した結果、すなわちトランスジーンPCR生成物の増幅は認められないが、内在性PCR生成物の増幅は認められること、が観察されたときには、ゲノムDNAサンプル中には検出可能なトランスジーンのバックグラウンド増幅が存在しないことを示している。
最適な結果を、下記の条件下で得た。
−25μlの反応液のPCR混合物に、下記が含まれている。
2.5μlのテンプレートDNA
2.5μl 10X増幅緩衝液(Taqポリメラーゼとともに供給)
0.5μl 10mM dNTP
0.5μl MDB688(10pmols/μl)
0.5μl MDB687(10pmols/μl)
0.25μl SOY01(10pmols/μl)
0.25μl SOY02(10pmols/μl)
0.1μl Taq DNA ポリメラーゼ(5ユニット/μl)
水 25μlまで
−最適な結果を得るため従った熱循環プロファイルは、下記のとおりである。
95℃で4分間
続いて:
95℃で1分間
57℃で1分間
72℃で2分間を
5サイクル
続いて:
92℃で30秒間
57℃で30秒間
72℃で1分間を
25サイクル
続いて:
72℃で5分間
PCRの結果を最適に可視化するためには、10〜20μlのPCRサンプルを、適切な分子量マーカー(例えば、100bpラダーPHARMACIA)を用いて1.5%のアガロースゲル(トリスホウ酸塩緩衝液)にアプライする必要があると判断した。
1)DNA陽性対照が、期待PCR生成物(トランスジーンフラグメントと内在性フラグメント)を呈示しない場合、2)DNA陰性対照が、PCR増幅で陰性ではない(フラグメントなし)場合、および3)野生型DNA対照が、期待した結果(内在性フラグメントの増幅)を示さない場合は、一回のPCRの実施と単一のPCR混合物の範囲内でトランスジェニック植物のDNAサンプルから得られたデータは許容不可であると判断した。
未知のものをスクリーニングする前に、適切なすべての対照を用いて、試験を実施する必要がある。開発したプロトコルでは、研究所間で異なる構成要素(テンプレートDNAの調製、Taq DNAポリメラーゼ、プライマーの品質、dNTP、サーモサイクラーなど)に関して最適化を実施する必要があるであろう。
A5547−127の特異的組込みフラグメントを、特異的プライマーMDB687(配列番号15)およびMDB688(配列番号13)を用いたPCR増幅によって、または化学合成によって獲得し、標識を付する。この組込みフラグメントを、生物サンプル中のA5547−127の検出に特異的プローブとして使用する。核酸を、標準の手順に従って、サンプルから抽出する。次に、ハイブリッドの形成を可能にするよう最適化されたハイブリダイゼーション条件下で特異的プローブとこの核酸を接触させる。そして、ハイブリッドの形成の検出は、サンプルにおけるA5547−127核酸の存在を示す。場合によっては、サンプル中の核酸を特異的プローブと接触させる前に特異的プライマーを用いて、増幅する。または、組込みフラグメントの代わりに特異的プローブと接触する前に、核酸に標識を付する。場合によっては、サンプルと接触させる前に、特異的プローブを固体担体(フィルター、ストリップまたはビーズなどであるが、それらに限定されない)に付着させる。
Claims (28)
- 生物サンプル中のエリートイベントA5547−127を同定するための方法であって、A5547−127の5’または3’の隣接領域を特異的に認識する特異的プライマーまたはプローブで、A5547−127の特異的領域を検出することを含む方法。
- 請求項1記載の方法であって、
前記方法が、少なくとも二つのプライマーとのポリメラーゼ連鎖反応を利用して、前記生物サンプル中に存在する核酸から、100〜500bpの間のDNAフラグメントを増幅することを含み、
前記プライマーのうちの一つが、配列番号1、ヌクレオチド1〜ヌクレオチド311のヌクレオチド配列を有するA5547−127の5’隣接領域、または配列番号2、ヌクレオチド510〜ヌクレオチド1880の相補体のヌクレオチド配列を有するA5547−127の3’隣接領域を認識し、
前記プライマーの他のプライマーが、配列番号1、ヌクレオチド312〜ヌクレオチド810の相補体のヌクレオチド配列、または配列番号2、ヌクレオチド510〜ヌクレオチド1880のヌクレオチド配列を有する外来DNA中の配列を認識する、
方法。 - 請求項2記載の方法であって、
5’隣接領域を認識する前記プライマーが、配列番号1、ヌクレオチド1〜ヌクレオチド311のヌクレオチド配列から選択された17〜200の連続的ヌクレオチドのヌクレオチド配列からなるか、またはA5547−127の3’隣接領域を認識する前記プライマーが、配列番号2、ヌクレオチド510〜ヌクレオチド1880の相補体のヌクレオチド配列から選択された17〜200の連続的ヌクレオチドのヌクレオチド配列からなり、かつ
外来DNA中の配列を認識する前記プライマーが、配列番号1、ヌクレオチド312〜ヌクレオチド810の相補体のヌクレオチド配列、または配列番号2、ヌクレオチド510〜ヌクレオチド1880のヌクレオチド配列から選択される17〜200の連続的ヌクレオチドからなる、
方法。 - 請求項2記載の方法であって、
5’隣接領域を認識する前記プライマーが、配列番号1、ヌクレオチド1〜ヌクレオチド311のヌクレオチド配列から選択された少なくとも17の連続的ヌクレオチドのヌクレオチド配列をその極端の3’末端に含んでいるか、あるいはA5547−127の3’隣接領域を認識する前記プライマーが、配列番号2、ヌクレオチド510〜ヌクレオチド1880の相補体のヌクレオチド配列から選択された少なくとも17の連続的ヌクレオチドのヌクレオチド配列をその極端の3’末端に含んでおり、かつ
外来DNA中の配列を認識する前記プライマーが、配列番号1、ヌクレオチド312〜ヌクレオチド810の相補体のヌクレオチド配列、または配列番号2、ヌクレオチド510〜ヌクレオチド1880のヌクレオチド配列から選択された少なくとも17の連続的ヌクレオチドをその極端の3’末端に含んでいる、
方法。 - 前記プライマーが、それぞれ配列番号13と配列番号15の配列を含んでいる、請求項4記載の方法。
- A5547−127同定プロトコルを使用して、約151bpのフラグメントを増幅することを含む、請求項5記載の方法。
- 生物サンプル中のエリートイベントA5547−127を同定するためのキットであって、
配列番号1、ヌクレオチド1〜ヌクレオチド311のヌクレオチド配列を有する、A5547−127の5’隣接領域を認識する一つのプライマー、または配列番号2、ヌクレオチド510〜ヌクレオチド1880の相補体のヌクレオチド配列を有する、A5547−127の3’隣接領域を認識する一つのプライマー、および
配列番号1、ヌクレオチド312〜ヌクレオチド810の相補体のヌクレオチド配列、または配列番号2、ヌクレオチド510〜ヌクレオチド1880のヌクレオチド配列を有する前記外来DNA中の配列を認識する一つのプライマーを含む、
キット。 - 請求項7記載のキットであって、
5’隣接領域を認識する前記プライマーが、配列番号1、ヌクレオチド1〜ヌクレオチド311のヌクレオチド配列から選択された17〜200の連続的ヌクレオチドのヌクレオチド配列からなるか、あるいはA5547−127の3’隣接領域を認識する前記プライマーが、配列番号2、ヌクレオチド510〜ヌクレオチド1880の相補体のヌクレオチド配列から選択された17〜200の連続的ヌクレオチドのヌクレオチド配列からなり、かつ
外来DNA中の配列を認識する前記プライマーが、配列番号1、ヌクレオチド312〜ヌクレオチド810の相補体のヌクレオチド配列、または配列番号2、ヌクレオチド510〜ヌクレオチド1880のヌクレオチド配列から選択された17〜200の連続的ヌクレオチドからなる、
キット。 - 請求項7記載のキットにおいて、
5’隣接領域を認識する前記プライマーが、配列番号1、ヌクレオチド1〜ヌクレオチド311のヌクレオチド配列から選択された少なくとも17の連続的ヌクレオチドのヌクレオチド配列をその極端の3’末端に含んでいるか、あるいはA5547−127の3’隣接領域を認識する前記プライマーが、配列番号2、ヌクレオチド510〜ヌクレオチド1880の相補体のヌクレオチド配列から選択された少なくとも17の連続的ヌクレオチドのヌクレオチド配列をその極端の3’末端に含んでおり、かつ
外来DNA中の配列を認識する前記プライマーが、配列番号1、ヌクレオチド312〜ヌクレオチド810の相補体のヌクレオチド配列、または配列番号2、ヌクレオチド510〜ヌクレオチド1880のヌクレオチド配列から選択された少なくとも17の連続的ヌクレオチドをその極端の3’末端に含んでいる、
キット。 - 配列番号13の配列からなるプライマーと、配列番号15の配列からなるプライマーとを含む、請求項7記載のキット。
- A5547−127の5’または3’隣接領域中の配列を最適化したPCR条件下で、特異的に認識する配列を有する、A5547−127 PCR同定プロトコルで使用するためのプライマーであって、
前記5’隣接領域が、配列番号1、ヌクレオチド1〜ヌクレオチド311のヌクレオチド配列を有し、かつ前記3’隣接領域が、配列番号2、ヌクレオチド510〜ヌクレオチド1880の相補体のヌクレオチド配列を有する、
プライマー。 - 前記プライマーが、配列番号1、ヌクレオチド1〜ヌクレオチド311のヌクレオチド配列から選択された17〜200の連続的ヌクレオチドのヌクレオチド配列、または配列番号2、ヌクレオチド510〜ヌクレオチド1880の相補体のヌクレオチド配列から選択された17〜200の連続的ヌクレオチドのヌクレオチド配列からなる、請求項11記載のプライマー。
- 前記プライマーが、配列番号1、ヌクレオチド1〜ヌクレオチド311のヌクレオチド配列から選択された少なくとも17の連続的ヌクレオチドのヌクレオチド配列、または配列番号2、ヌクレオチド510〜ヌクレオチド1880の相補体のヌクレオチド配列から選択された少なくとも17の連続的ヌクレオチドのヌクレオチド配列をその極端の3’末端に含んでいる、請求項11記載のプライマー。
- 配列番号13の配列をその極端の3’末端に含むプライマー。
- 配列番号15の配列をその極端の3’末端に含むプライマー。
- A5547−127に対し特異的なプローブを使用して、生物サンプルの核酸をハイブリダイズすることを含む、請求項1記載の方法。
- 前記特異的プローブの配列が、A5547−127の5’隣接配列または3’隣接配列の部分、およびそれに隣接している外来DNAの配列を含む配列と、少なくとも80%の配列同一性を有する、請求項16の方法。
- 前記特異的プローブの配列が、配列番号1、ヌクレオチド260〜360、または配列番号2、ヌクレオチド460〜560、または前記配列の相補体と、少なくとも80%の配列同一性を有する、請求項17記載の方法。
- 生物サンプル中のエリートイベントA5547−127を同定するためのキットであって、A5547−127の特異的領域に特異的にハイブリダイズできる特異的プローブを含む、キット。
- A5547−127の5’隣接配列または3’隣接配列の部分、およびそれに隣接している外来DNAの配列を含む配列と、前記特異的プローブの配列が少なくとも80%の配列同一性を有する、請求項19記載のキット。
- 前記特異的プローブの配列が、配列番号1、ヌクレオチド260〜360、または配列番号2、ヌクレオチド460〜560、または前記配列の相補体と少なくとも80%の配列同一性を有する、請求項20記載のキット。
- 生物サンプル中のエリートイベントA5547−127を同定するための特異的プローブ。
- A5547−127の5’隣接配列または3’隣接配列の部分、およびそれに隣接している外来DNAの配列を含む配列、またはその相補体と、少なくとも80%の配列同一性を有する、請求項22記載のプローブ。
- 配列番号1、ヌクレオチド260〜360、または配列番号2、ヌクレオチド460〜560、または前記配列の相補体と少なくとも80%の配列同一性を有する、請求項23記載のプローブ。
- 配列が、配列番号1、ヌクレオチド260〜360、または配列番号2、ヌクレオチド460〜560、または前記配列の相補体に本質的に類似している、生物サンプル中のエリートイベントA5547−127を同定するための特異的プローブ。
- 種子サンプルにおいて、A5547−127の5’または3’隣接領域を特異的に認識する特異的プライマーまたはプローブでA5547−127の特異的領域を検出することを含む、種子純度を確認する方法。
- 種子ロットのサンプルにおいて、A5547−127の5’または3’隣接領域を特異的に認識する特異的プライマーまたはプローブでA5547−127の特異的領域を検出することを含む、A5547−127の存在を確認するため種子をスクリーニングする方法。
- ゲノム中にエリートイベントA5547−127を含む、ダイズ植物体、または細胞、部分、種子またはその子孫。
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