JP2006524639A - 党参および黄耆の組成物、それらの調製方法およびその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
a)不純物を、党参および黄耆から除去し、精製した物質を、煎じ薬用に調製された薬草片にする;
b)党参および黄耆をある特定の重量比に従って採取し、脱イオン水で洗浄する;
c)党参および黄耆の質量に従ってある特定量の脱イオン水を段階的に添加し、続いて物質を加熱して、1〜3回抽出して、薬学的抽出物を得る;
d)上記薬学的抽出物を濃縮して、濃縮液体を得る;
e)適切な量のエタノールを添加して、標準的に沈殿させた、液体を濾過し、濾過した液体からエタノールを回収し、濃縮し、乾固させて、党参および黄耆の抽出組成物を得る。
党参および黄耆の組成物の抗腫瘍効果、ならびにMTX(メトトレキサート)の致死効果に対する影響
1.実験薬物
党参および黄耆の組成物は、上述の実施例1で調製した党参および黄耆の抽出組成物であり、当該組成物中には、20ml当たり党参および黄耆の抽出物3.25gが存在した。続いて、それを水浴により2ml〜1mlに濃縮し、当該実験では蒸気により滅菌した。
体重18〜22gを有する雌Kunmingハイブリッドマウスは、the Animal House of China Research Institutionにより提供された。
1)マウスを無作為に高用量群、低用量群および対照群に分けた。マウスの肉腫180系統を腫瘍系統として使用した。新鮮な腫瘍組織を滅菌条件下で細胞プラズマ溶液にして、1:4の比で希釈した。各マウスの右の脇の下に溶液0.15mlを皮下接種し、24時間後に薬物を投与した。高用量群では、マウス1匹につき党参および黄耆の組成物の濃縮液体0.4mlを投与し、低用量群では、マウス1匹につき組成物の濃縮液体0.2mlを投与し、対照群に関しては、マウス1匹につき生理食塩水0.4mlを投与した。マウスはすべて、14日間毎日腹腔内注射した。15日目に、動物すべてを屠殺した。腫瘍を秤量して、腫瘍重量の阻害率を見出した。t検定方法によりデータを統計学的に解析した。
造血系に対する党参および黄耆の組成物の影響
1.実験薬物
党参および黄耆の組成物の1回の注射は20mlであり、同等に党参および黄耆の抽出物3.25gを含有していた。実験では、各マウスに0.2ml(10ml/kg/体重)を腹腔内注射した。
体重18〜22gを有するKunmingハイブリッドマウスに、肉腫S180系を接種した。接種の24時間後に、実験群のマウスに党参および黄耆の組成物の注射液体0.2ml(粗製薬剤約0.2gを含有する)を腹腔内注射し、実験が終了するまで対照群のマウスに同等量の水を注射した。実験では、マウス1匹当たりシクロホスファミド1.5mgを2回連続して腹腔内投与した。
党参および黄耆の組成物の注射は、腫瘍に対する協同的阻害効果を有した
この実験の実験薬物および動物は、実験例2と同様であった。
腫瘍体に対するシクロホスファミドと併用した党参および黄耆の組成物の注射の影響
党参および黄耆の組成物の注射は、化学療法により引き起こされるマウス髄質の阻害効果を緩和することができた。この実験では、組成物が抗癌効果を破壊するかどうかが試験された。
麻酔したイヌの心筋虚血、心筋梗塞、冠状動脈の関連血流、心筋酸素消費および生化学指数に対する党参および黄耆の組成物の影響
体重14.02±1.90kgを有する30匹の健常な成体イヌ(雄および雌)は、Beijing TONGLI Experimental Animal Breeding Factoryにより提供された(ライセンス番号010,2000)。
党参および黄耆の組成物の濃縮液体は、5ml/片、粗製薬剤2g/mlであった。1mg/片のヘルベッサー注射(ジルチアゼム塩酸塩)は、Tianjin TIANBIAN Pharmacy Co., Ltd.(B.N.0003003)により製造された。0.9%塩化ナトリウム注射は、Beijing Double-crane Pharmaceutical Co., Ltd.(B.N.000320332)により製造された。丹参葉(Radix Salviae Miltiorrhizae)の注射は、10ml/片、1.5g/mlであり、Zhengda Qingchunbao Pharmacy Co. Ltd.(Hangzhou, Zhejiang Province)(B.N.0003132)により製造された。ニトロブルーテトラゾール(N−BT)は、the Medicinal Materials Supply Station of the Military Medical Science College(B.N.971120)により製造された。エンドセリン(ET)ラジオイムノ薬物キットは、Beijing FURUI Bioengineering Co.(B.N.0102)により製造された。トロンボキサンB2(TXB2)および6−ケト−プロスタグランジンF1α(6−ケト−PGF1α)ラジオイムノ薬物キットは、Beijing FURUI Bioengineering Co.(B.N.0102)により製造された。
(1)ブランク対照群、3ml/kg、n=5
(2)ヘルベッサー注射群、0.5ml/kg、n=5
(3)丹参葉注射群、0.6g/kg、n=5
(4)党参および黄耆の組成物群、0.6g/kg、n=5
(5)党参および黄耆の組成物群、1.2g/kg、n=5
(6)党参および黄耆の組成物群、2.4g/kg、n=5。
動物をペントバルビタールナトリウムで麻酔し(30mg/kg、静脈内)、気管内挿管後に電気レスピレータと接続させた。第四左肋骨の位置で胸部を開き、心臓を露出させた。心膜を切り取って、心膜床を作製した。冠状動脈の左旋性岐を分離して、電磁気流量計(タイプMF−1100)のプローブをそこに配置させて、冠状動脈の血流を測定した。冠状動脈の前方下行性分岐の中央部分を分離して、結紮用にスレッドをそこに介して設置し、実験急性心筋層心筋虚血のモデルを作製した。多点を固定した心外膜電極を縫合して、マルチランニング生理学的レコーダ(タイプRM−6100、Japan Photoelectricity)と接続して、心外膜の心電図を表示および記録した<1>。冠状動脈を15分間結紮して、薬物投与前の対照値として記録した。実験薬物または生理食塩水を、大腿部静脈を介して注射した。薬物投与の5分、15分、30分、45分、60分、90分、120分および180分後に、心外膜心電図の30個の測定点を記録した。2mVを上回る上昇S−T切片を判断基準として採用して、心筋虚血の度合い(上昇S−T切片の総mv数Σ−ST)および心筋虚血の範囲(上昇S−T切片の総点数N−ST)を算出した。頸動脈を介して冠状静脈洞に挿管した後、血中酸素装置(タイプAVL912、Swiss)により冠状静脈の血中酸素含有量を測定する一方で、虚血前、虚血の15分(投与前)、薬物投与の15分、30分、60分、120分および180分後に血液試料を採取した。続いて、動物の頸動脈に挿管して、動脈の血中酸素含有量を測定した。冠状動脈の血流と一緒に算出して、心筋酸素消費を測定した:
心筋酸素消費=(動脈の血中酸素含有量−冠状静脈の血中酸素含有量)×冠状動脈の血流/100。
イヌの心筋虚血の度合い(Σ−ST)(心外膜の心電図により記録される)に対する影響
組成物は、イヌの心筋虚血の度合い(Σ−ST)に対する影響を有していた。十二指腸を介して薬物を投与した後、党参および黄耆の組成物の粗製薬剤1.2g/kg群および粗製薬剤2.4g/kg群はともに、心筋虚血の度合い(Σ−ST)の減少を示した。また、粗製薬剤6g/kg群の効果は、粗製薬剤3g/kg群の効果よりも良好であった。党参および黄耆の組成物の粗製薬剤2.4g/kg群のΣ−STは、薬剤投与前では293.80±97.91mVであった。その効果は、薬物投与後5分の時点で現れた。15分から180分まで、心筋虚血の度合いは、徐々に減少した。180分で、Σ−STは、151.40±59.54mVであり、45.70±26.23%の減少が見られた。薬物投与前のものおよび対照群と比較して、それは有意な差(P<0.05およびP<0.01)を示した。組成物の粗製薬剤2.4g/kg群のΣ−STは、薬物投与の30分後には減少し始め、薬物効果は、薬物投与が長期にわたるにつれ増大した。180分では、動物のΣ−STは、366.80±144.99mVから212.40±92.77mVに下降し、40.00±18.60%の減少が見られた。薬物投与前のものおよび対照群と比較して、それは有意な差(P<0.05およびP<0.01)を示した。
生理食塩水を注射した場合、対照群のN−STは、はっきりとは変化しなかった。党参および黄耆の組成物の粗製薬剤2.4g/kg群では、心筋虚血の範囲(N−ST)を減少させる明らかな効果が見られた。薬剤投与後120分および180分では、N−STは、29.40±0.89測定点から26.60±2.70測定点および26.20±2.28測定点に下降し、それぞれ9.62±7.52%および10.33±6.51%の減少が見られた。薬物投与前のものおよび対照群と比較して、有意な差(P<0.05)が見られた。
麻酔イヌの冠状動脈を縫合して、心筋虚血を誘発させた後、冠状動脈の血流を短期間で代償的に15%増加させた。ヘルベッサーならびに党参および黄耆の組成物を投与した後に、冠状動脈の血流を増加させる明白な効果が見られた。薬物投与後の粗製薬物2.4g/kg群では、冠状動脈の血流は、15〜180分の間で増加し、180分では23.13±23.22%の増加が見られた。生理食塩水の群と比較して、有意な差(P<0.05)が見られた。
生理食塩水の対照群では、薬物投与前後で、動脈/冠状静脈洞の血中酸素含有量および心筋酸素消費に明らかな変化は見られなかった。ヘルベッサーならびに党参および黄耆の組成物の群では、静脈洞の血中酸素含有量を増加させる効果動向が見られた。しかしながら、そこでは統計学的意義は見られなかった。党参および黄耆の組成物の3つの用量群では心筋酸素消費の明らかな変化は見られなかった。6−ケト−PGF1を投与した15分後、心筋酸素消費は明らかに減少した。
1.イヌの血清クレアチンキナーゼ(CK)および乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)の活性に対する影響
心筋虚血の前では、血清CKおよびLDHの含有量は、それぞれ491.70±201.29u/Lおよび86.73±30.01u/L(n=25)であった。冠状動脈を縫合して、急性心筋虚血を誘発させた後では、血液中のCKおよびLDHの含有量は、それぞれ669.37±239.09u/Lおよび100.30±31.29u/Lのレベルに明らかに増加した。心筋虚血前のものと比較して、心筋虚血後のCKおよびLDH含有量は、それぞれ43.98%および25.55%分増加した。CKおよびLDHの活性は、長期にわたる縫合に伴ってさらに増加した。ヘルベッサー群ならびに党参および黄耆の組成物の粗製薬物2.4g/kg群では、心筋虚血および心筋梗塞により引き起こされるCKおよびLDHの増加していく活性が有意に阻害された。生理食塩水の群と比較して有意な差(P<0.05)が見られた。
イヌの冠状動脈を連続的に縫合するプロセスでは、血漿中のETおよびTXB2の含有量は明らかに増加し、6−ケト−PGFIaおよび6−ケト−PGFIa/TXB2の比は明らかに減少した。ヘルベッサーならびに党参および黄耆の組成物は、心筋虚血および心筋梗塞により引きこされるET活性に対して明らかな阻害効果を有していた。生理食塩水の群と比較して、有意な差が見られた。また、同じ時間で、それは、6−ケト−PGFIaおよび6−ケト−PGFIa/TXB2の比を明らかに増加させることができる。
虚血再灌流により引き起こされる心筋梗塞に対する党参および黄耆の組成物の影響
体重260〜280gを有する56匹の雄のWistarマウスは、品質証明書第01−3056号とともにthe Animal Department of Beijing General Medical Courses Universityにより提供された。
党参および黄耆の組成物は、5ml/片、粗製薬物2g/mlであった。ヘルベッサー注射(注射用のジルチアゼム塩酸塩)は、10mg/片であり、Tianjin Tianbian Pharmaceutical Co., Ltd.により製造された。丹参葉注射は、10ml/片、1.5g/mlであり、QINGCHUNBAO Pharmaceutical Co.,Ltd. (Hangzhou, Znejiang Province)(B.N.:0003132)により製造された。ジルチアゼム塩酸塩は、the Medicinal Materials Supply Station of the PLA Academy of Military Medical Sciences(B.N.971120)により提供された。
動物を無作為に6つの群に分けた:擬似手術群(血清を正常対照として採取した)、1.0mg/kgモデル群、ヘルベッサー群、0.6g/kg丹参葉注射群、党参および黄耆の組成物の粗製薬剤8g/kg群、粗製薬剤4g/kg群、粗製薬剤2g/kg群。薬物を、生理食塩水を用いて所望の濃度に希釈した。投与した薬物の容積は、4ml/kgであった。また、薬物は、左の大腿部静脈を介して投与した。
イヌの心臓血行力学および心臓酸素消費に対する党参および黄耆の組成物の影響
体重14.10±0.22kgを有する30匹の健常な成体イヌ(雄雌)は、Beijing TONGLI Experimental Animal Farmにより提供された(動物ライセンス番号第010,2000号を伴って)。
党参および黄耆の組成物は、5ml/片および粗製薬剤2g/mlであった。ヘルベッサー注射(注射用ジルチアゼム塩酸塩)は、10mg/片であり、Tianjin Tianbian Pharmaceutical Co., Ltd.(B.N:0003003)により製造された。0.9%塩化ナトリウム注射は、Beijing Double-crane Pharmaceutical Co., Ltd.(B.N:000320332)により製造された。丹参葉注射は、10ml/片、1.5g/mlであり、QINGCHUNBAO Pharmaceutical Co. Ltd.(B.N:0003132)(Hangzhou, Zhejiang Province)により製造された。
(1)ブランク対照群、3ml/kgの生理食塩水、n=5
(2)ヘルベッサー注射群、0.5ml/kg、n=5
(3)丹参葉注射群、0.6g/kg、n=5
(4)党参および黄耆の組成物群、0.6g/kg、n=5
(5)党参および黄耆の組成物群、1.2g/kg、n=5
(6)党参および黄耆の組成物群、2.4g/kg、n=5。
動物をペントバルビタールナトリウムで静脈内麻酔し(30mg/kg、静脈内)、気管内挿管後に電気レスピレータと接続させた。第四左肋骨の位置で胸部を開き、心臓を露出させた。心膜を切り取って、心膜床を作製した。冠状動脈の左旋性岐および大動脈の根元を分離して、電磁気流量計(タイプMF−1100)のプローブをそこに配置させて、冠状動脈の血流および心拍出量を測定した。左心室の先端を挿管して、圧力エネルギートランスデューサ(MPU−0.5A)に接続した。キャリア増幅器(AG−601G)を用いて左心室の内部圧力を測定し、示差計(ED−601G)を用いて左心室の内部圧力の最大上昇率(dp/dtmax)を測定した。動物に、外頸静脈を介して冠状静脈洞へ挿管し、また頚動脈を介して挿管した。血液酸素装置(タイプAVL912、Swiss)を用いて冠状静脈洞および動脈の血液酸素含有量を測定して、心筋酸素消費を算出した。続いて、大腿動脈を挿管して、動脈の血圧を測定した。また次に、心電図のStandard Limb Lead II、心拍数および心電図の関連パラメータを算出した。式を用いて、血行力学の他の指数を算出した:心臓一回拍出量、酸素消費指数、心臓指数、冠状動脈の抵抗、全末梢血管抵抗および酸素利用率等。上述の指数はすべて、マルチランニング生理学的レコーダ(タイプRM−6000、Japan Photoelectricity)により同時に記録された。
イヌの動脈血圧、心拍数および心電図に対する影響
ヘルベッサー注射は、投与した後に、血圧を下げ、心拍数を落とす明らかな効果を有していた。党参および黄耆の組成物の粗製薬物用量1.2gおよび2.4g群では、動脈血圧は、投与の途中でおよび投与後の短期間内(1分)でともに下がった。党参および黄耆の組成物はまた、心拍数を落とした。動物の心電図StandardIIのPR波、QRS波、QT波およびT波のパラメータは、はっきりとは変化しなかった。
薬物を投与する前後で、生理食塩水の群では、冠状動脈の血流および抵抗には明らかな変化は見られなかった。党参および黄耆の組成物の粗製薬剤0.6g群では、薬物投与後に、冠状動脈の血流が増加し、組成物の他の2つの群では明らかな効果は見られなかった。党参および黄耆の組成物の3つの用量群では、冠状動脈の抵抗が減少した。また、薬物投与のプロセスにおいて、冠状動脈の抵抗は約15%低減し、連続的に60分間この低い状態を維持した。カルシウム拮抗薬であるヘルベッサー注射もまた、冠状動脈の血流および抵抗を著しく増加させた。
薬物投与後に、実験群すべてにおいて、動物の左心室の収縮力および作業における明らかな差は見られなかった。
党参および黄耆の組成物の3つの用量群では、対照群と比較して、左心室における内部圧力および内部圧力の最大上行速度(dp/dtmax)における明らかな差は見られなかった。
党参および黄耆の組成物の粗製薬剤2.4g/kg群では、心拍出量は徐々に増加し、投与の5分後に最も顕著な効果が出現した。投与前の指数および生理食塩水の群の指数と比較して、有意な差が見られた(P<0.05〜0.01)。また、同時に、外部末梢の抵抗は明らかに減少した。6−ケト−PGFIは、心臓一回拍出量を著しく増加させ、外部末梢の抵抗を減少させた。
党参および黄耆の組成物の粗製薬剤2.4g/kg群では、動物冠状静脈洞の血液酸素含有量は、投与後5〜15分の間に明らかに増加し、投与前のものおよび生理食塩水の群のものと有意な差が見られた(P<0.05〜0.001)。
党参および黄耆の組成物の群では、心筋層の酸素消費および酸素利用率は明らかには変化しなかった。心筋層の酸素消費指数は、薬物投与のプロセス中でおよび薬物投与後の短期間で、明らかに減少した。この実験では、標準的に麻酔をしたイヌの心臓血行力学および心筋酸素消費に対する党参および黄耆の組成物の影響を観察した。陽性対照薬物としてヘルベッサー注射を用いて、実験方法および得られた指数の信頼性ならびに感度を証明した。実験結果では、党参および黄耆の組成物が冠状動脈を拡張させて、冠状静脈洞の血液酸素含有量を増加させて、心筋層の血液および酸素供給を改善する効果を有していた。同時に、組成物は、左心室の作業を改善し、心拍出量を増加させ、心臓血管コンプライアンスを調節した。組成物は、心臓血管系においてある特定の調節の役割および改善の役割を果たし、虚血心疾患の臨床的治療に関して実験上の証拠を提供した。
ラットのin vitroでの血栓症および血液粘性に対する党参および黄耆の組成物の影響
実験薬物:
党参および黄耆の組成物:5ml/片;粗製薬剤2g/ml、丹参葉注射:10ml/片、1.5g/ml、QINGCHUBAO Pharmaceutical Co., Ltd.(Hangzhou, Zhejiang Province)(B.N.:0003132)により製造;注射用アスピリン−DL−リシン(0.9g/ボトル、アスピリン0.5gに等しい):LAIBILIN Pharmaceutical Co., Ltd.(Bengbu, Anhui Province)(B.N.:000116)により製造;0.9%塩化ナトリウム注射:Beijing Double-crane Pharmaceutical Co., Ltd.(B.N.:000320332)により製造。
60匹のラットを無作為に6つの群に分けた(1群当たり10匹):
(1)対照群(0.9%塩化ナトリウム注射、4ml/Kg)、
(2)党参および黄耆の組成物群の高用量(粗製薬剤8g/kg)、
(3)党参および黄耆の組成物群の中用量(粗製薬剤4g/kg)、
(4)党参および黄耆の組成物群の低用量(粗製薬剤2g/kg)、
(5)丹参葉注射群(粗製薬剤1.6g/kg)、
(6)注射用アスピリン−DL−リシン群(90mg/kg)。
ウサギの血小板凝集に対する党参および黄耆の組成物の影響
実験薬物:
党参および黄耆の組成物は、5ml/片および粗製薬剤2g/mlであった。丹参葉注射は、10ml/片、1.5g/mlであり、QINGCHUBAO Pharmaceutical Co., Ltd.(Hangzhou, Zhejiang Province)(B.N.:0003132)により製造された。0.9%塩化ナトリウム注射はBeijing Double-crane Pharmaceutical Co., Ltd.(B.N.:000320332)により製造された。注射用アスピリン−DL−リシン(0.9g/ボトル、アスピリン0.5gに等しい)は、LAIBILIN Pharmaceutical Co., Ltd.(Bengbu, Anhui Province)(B.N.:000116)により製造された。アデノシン二リン酸(ADP)二ナトリウム塩は、Shanghai Biochemistry Research Institute(B.N.:9209258)により製造され、生理食塩水を用いて、1.0mM/L溶液に調製され、4℃で保管した。アラキドン酸(AA)は、Fluka AGにより製造され、1.0mM/L NaOHを用いて5.0g/Lの濃度のナトリウム塩に一時的に調製した。コラーゲン(100μg/ml)は、KOKEN Co.により製造された。
体重2.75±0.15kgを有する48匹の健常な雄日本垂れ耳白色ウサギは、資格番号004(1999年)とともにthe Experimental Animals Center of China Veterinary Medicaments Supervision Instituteにより提供された。血小板凝集装置(タイプBS634)は、Beijing Biochemical Instrument Factoryにより製造された。
投与前に、耳の動脈に穴をあけ、血液を採取して、血小板凝集率を測定した。血小板凝集レベルおよび体重にしたがって、48匹のウサギを無作為に6つの群に分けた(1群当たりウサギ8匹)。
(2)党参および黄耆の組成物の高用量群(粗製薬剤5g/kg)、
(3)党参および黄耆の組成物の中用量群(粗製薬剤2.5g/kg)、
(4)党参および黄耆の組成物の低用量群(粗製薬剤1.25g/kg)、
(5)丹参葉注射群(粗製薬剤1g/kg)、
(6)注射用アスピリン−DL−リシン群(45mg/kg)。
耳の動脈にシリコン処理したインジェクターで穴をあけ、血液試料を採取し、それをシトロンナトリウム溶液で抗凝固処理した(血液:抗凝固剤=9:1)。血液試料溶液を200×gで8分間遠心分離し、上清、すなわち多血小板血漿(PRP)を取り出した。溶液の残部を2200×gで10分間遠心分離して、最上部の透明部分、すなわち乏血小板血漿(PPP)を取り出した。PRP中の血小板の計数は約4.0×105/mm3であった。Bornの比濁法に従って、PRP200μlおよび小さな磁気スティックの入った濁度チューブを血小板凝集装置に置いて、37℃で1分間維持した。PPPを規格化した後に、攪拌しながら誘導物質を添加して、凝集を誘導した。誘導物質の最終濃度は、47.6μM/L(ADP)、782.0μM/L(AA)、および4.8mg/ml(コラーゲン)である。血小板凝集に対する薬物の影響は、凝集曲線により分析し、最大凝集率が、装置により印刷された。最大凝集率に関する計算式は、下記の通りであった:
最大凝集率=(PRP凝集後の透過率−PRP凝集前の透過率)/(PPPの透過率−PRP凝集前の透過率)×100%
実験結果は、表14に見出すことができる。
(1)ADPを使用して、凝集を誘導した場合、薬物投与前の群すべての間では血小板凝集率に明らかな差は見られなかった。投与後、血小板凝集率は、対照群の血小板凝集率よりも、党参および黄耆の組成物の高用量群、ならびに丹参葉注射の群で明らかに低かった(P<0.05)。アスピリン−DL−リシン群の血小板凝集率は、対照群の血小板凝集率よりも明らかに低かった(P<0.01)。党参および黄耆の組成物の中用量群ならびに低用量群では、対照群の血小板凝集率と比較して、血小板凝集率に下降傾向が見られた。
1.実験薬物:
党参および黄耆の組成物は、上述の実行実施例に従って調製した党参および黄耆の抽出組成物であり、ここで各組成物20mlは、3.25gに等しい量の党参および黄耆を含有していた。上記組成物を水浴にひたし、2ml〜1mlに濃縮して、40分間蒸気を循環させることにより滅菌した。
2.実験動物:
Wistarラットは、微生物制御レベルIIでHuaxi College Animal Center of Sichuan Universityにより提供された。
60匹のラットを無作為に4つの群、すなわち正常対照群、モデリング群(LPS+NS群)、デキサメタゾン介入(処理)群(LPS+DEX群)ならびに党参および黄耆の組成物注射介入(処理)群(LPS+SQ群)に分けた。また、モデリング群、LPS+DEX群、およびLPS+SQ群それぞれを再度3つの時間段階群、すなわち1時間群、2時間群および4時間群に分けた。この実験では合計10つの群が存在し、1群当たりマウス6匹である。
1.準備作業
実験の3日前に、器具、容器および移植剤すべてを高温および高圧で滅菌して、後の使用のために乾燥させた。総RNAを抽出するのに使用される実験器具および試薬は、DEPC溶液中に一晩浸し、滅菌して乾燥させた。
モデリングの1週間前に、LPS+SQ群の18匹のラットに、前処理として党参および黄耆の抽出組成物2mlを毎日腹腔注射した。LPS+DEX群の18匹のラットに、モデリングの2時間前に50mg/kgのデキサメタゾンを腹腔注射した。LPS+NS群の18匹のラットに、モデリングの2時間前に生理食塩水を注射した。正常対照群を除いて、3つの上述の群すべてに、尾静脈においてLPS(4mg/kg)を注射した。
動物すべてを、既定の時間段階時点で腹腔注射により抱水クロラールで麻酔をした後、血液2mlを頸動脈からサンプリングし、800gr/分で8分間遠心分離した。上清を抽出し、後の使用のために−20℃で冷凍庫中に入れた。胸部を開き、右の肺の下葉をサンプリングした。それらをDEPC溶液で処理したEPチューブに入れて、総RNA抽出のために−70℃にて冷凍庫中に即座に入れた。右肺の上葉をサンプリングして、10%ホルムアミド溶液中に浸して、固定した。湿潤/乾燥重量の比の測定のために、左の肺を取り出した。
頻呼吸、唇チアノーゼ、精神衰弱、動きが少ないことおよび摂食が少ないことの症状が、尾静脈中にLPSを注射した実験動物すべて、特にLPS+NS群の動物において、あらゆる時間段階時点で出現した。しかしながら、症状は比較的穏やかであり、LPS+DEX群およびLPS+SQ群では比較的短期間持続した。動物はすべて、この実験で設定した時間段階時点すべてで生存した。
正常対照群では、肺組織は白色と赤みを帯び、軟質かつ弾性であるようであった。1時間のLPS+NS群では、うっ血および水腫が肺に観察され、表面上では時折斑点状出血が観察された。2時間の群では、肺の表面は、明らかなうっ血、水腫、フレーク状点状出血および出血巣を伴って濃赤色を呈していた。4時間の群の状態は概して、2時間の群の状態と同様であった。群LPS+DEXおよび群LPS+SQで観察される症状は、群LPS+NSで観察される症状と比較して、同じ時間段階時点で異なる程度にまで緩和されたようであった。
結果は、全体的な観察と規範的に一致した。正常対照群の肺組織は、薄い肺胞壁を有する構造で透明であった。拡張間質性肺において湿潤した炎症性細胞および水腫も存在していた。それは、急性肺障害の病理学的類別において軽度として類別された。2時間の群の肺細胞障害は、最も明白であった。顕著な拡張間質性肺は、滲出および水腫を伴って見て取れた。透明な膜が形成され、肺胞は出血し、大量の炎症性細胞が湿潤した。それは、ALI病理学的類別において中度〜重度として類別された。4時間の群の肺細胞の障害は、2時間の群の障害と基本的に同じであり、ALI病理学的類別において主として中度と類別された。LPS+NS群では、障害は、相当する時間段階時点である程度に緩和された。群すべての病理学的類別は、表15に見出すことができる。
モデリング群と他の介入群との間で1時間の段階時点では病理学的変化において有意な差は見られなかった(P>0.05)。しかしながら、2時間および4時間では病理学的変化において有意な差が見られた(p<0.05)。それぞれ種々の時点での介入群すべて間を比較すると、群LPS+NSでは有意な差が見られ(p<0.05)、群LPS+DEXおよびLPS+SQにおける差は、統計学的意義を持たなかった(p>0.05)。
時間段階時点すべてでの群LPS+NSの肺W/D比は、正常対照群の肺W/D比と比較して明らかに高かった(p<0.05)。群LPS+DEXおよびLPS+SQの肺W/D比は、同じ時間段階時点で減少した(P<0.05)。データは、表16に参照された。
本発明の免疫調節薬は、以下の効果を有することが、動物試験および臨床試験で示される:
1.本発明の免疫調節薬は、脾臓および腎臓を活性化することができ、かつ気の欠乏および弱い気(impairing QI)を患う患者すべてを治療することができる。
1.党参および黄耆の組成物は、イヌの急性心筋虚血および心筋梗塞の治療、心外膜心電図により記録される心筋虚血の度合い(Σ−ST)の緩和、心外膜心電図により記録される心筋虚血の範囲(N−ST)の減少、およびN−BT染色方法により表示される梗塞面積の減少に対する明白な改善効果を有する。党参および黄耆の組成物は、虚血性心臓における冠状動脈の血流を明らかに増加させることができる。その顕著な効果はまた、心筋虚血および心筋梗塞により引き起こされるLDHの増加していく放出および上昇していくCK活性の治療に存する。また、同時に、党参および黄耆の組成物は、心筋虚血中に6−ケト−PGF1aの比率および6−ケト−PGF1a/TXB2を血漿中で増加させることができる。
Claims (19)
- 原料として党参(Radix Codonopsis)および黄耆(Radix Astragali)を含む薬学的組成物。
- 前記党参および黄耆の重量比の範囲は、0.5:1〜1:0.5であることを特徴とする、請求項1に記載の薬学的組成物。
- 前記党参および黄耆の重量比の範囲は、1:1であることを特徴とする、請求項1または2に記載の薬学的組成物。
- 前記原料は、気(QI)を活気づけ、血を補う漢方薬(Chinese medicine)を含むことを特徴とする、請求項1に記載の薬学的組成物。
- 前記気(QI)を活気づけ、血を補う漢方薬は、唐当帰(Radix Angelicae Sinensis)、地黄(Radix rehmanniae Praeparata)、何首鳥(Radix Polygoni Multiflori)、白朮(Rhizoma Atractylodis Macrocephalae)、山薬(Rhizoma Dioscoreae)、またはそれらの組合せであることを特徴とする、請求項4に記載の薬学的組成物。
- 前記薬学的組成物を調製する方法であって:
a)党参および黄耆から不純物を除去した後、それらを煎じ薬用に調製された薬草片にする工程と、
b)ある特定の重量比で党参および黄耆を採取し、それらを脱イオン水で洗浄する工程と、
c)党参および黄耆の質量に従ってある特定量の脱イオン水を段階的に添加し、加熱して、1〜3回抽出する工程であって、それにより前記薬学的抽出物を得る、添加し、加熱し、抽出する工程と、
d)前記薬学的抽出物を濃縮して、濃縮液体を得る工程と、
e)提唱される量のエタノールを添加し、標準的に沈積させ、濾過し、濾過した液体からエタノールを回収し、乾固するまで濃縮して、それにより党参および黄耆の抽出組成物を得る工程と
を具備する方法。 - 水で煎じることにより薬物を抽出する工程c)において、添加する水の量は、最初は8倍量であり(1時間煎じる)、添加する水の量は、二度目は6倍量である(0.5時間煎じる)ことを特徴とする、請求項6に記載の方法。
- エタノールを添加することにより薬物を沈積させる工程e)において、エタノールの含有量は、最初は総重量の65%〜80%であり、エタノールの含有量は総重量の80%以上であることを特徴とする、請求項6に記載の方法。
- 免疫調節薬の調製工程における、請求項1ないし5のいずれか1項に記載の党参および黄耆の前記組成物の使用。
- 党参および黄耆の組成物は、化学療法剤と一緒に使用することができ、また紫外線療法または他の腫瘍阻害方法において使用することができることを特徴とする、請求項9に記載の使用。
- 虚血性心疾患の治療用薬物の調製工程における、請求項1ないし5のいずれか1項に記載の党参および黄耆の前記組成物の使用。
- 前記虚血性心疾患は、冠状動脈性心疾患、心筋梗塞、心筋炎、ならびに心筋虚血および心筋酸素欠乏症により引き起こされる他の心疾患を含むことを特徴とする、請求項11に記載の使用。
- 前記虚血性心疾患は、血小板粘性の増大に起因した血小板凝集および/または血栓症により引き起こされる心疾患を含むことを特徴とする、請求項11に記載の使用。
- 前記虚血性心疾患は、虚血性再灌流障害により引き起こされる心疾患を含むことを特徴とする、請求項11に記載の使用。
- 過剰な血小板凝集により引き起こされる疾患の治療用薬物の調製工程における、請求項1ないし5のいずれか1項に記載の党参および黄耆の前記組成物の使用。
- 前記過剰な血小板凝集により引き起こされる疾患は、大脳卒中、アテローム性動脈硬化症および末梢血管疾患を含むことを特徴とする、請求項15に記載の使用。
- 急性肺障害を予防および治療するための薬物の調製工程における、請求項1ないし5のいずれか1項に記載の党参および黄耆の前記組成物の使用。
- 前記組成物は、注射、錠剤、丸剤、カプセル、顆粒、溶液、懸濁剤または乳剤の形態で使用することができることを特徴とする、請求項9ないし17のいずれか1項に記載の使用。
- 前記組成物の有効投薬量範囲は、58〜70mg/kg(体重)/日であることを特徴とする、請求項9ないし17のいずれか1項に記載の使用。
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