CN1513497A - 一种调节免疫的组合物药物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种调节免疫的药物组合物，其主要成分由党参、黄芪按一定重量配比而成，其配比比例大致为0.5∶1至1∶0.5，优选1∶1。它可以制备成任何一种常用剂型，如口服液、片剂、胶囊剂、颗粒剂以及注射剂等。本发明药物具有补脾益肾、扶正固本、维护造血功能、减轻放疗及化疗药物的毒副作用，能减少放、化疗过程中白细胞下降、增加巨噬细胞吞噬功能，提高淋巴细胞转化能力等，是一种理想的免疫调节剂。本发明药物组合物还具有一定的抑瘤作用。本发明还公开了所述药物组合物的制备方法。
Description
技术领域
本发明涉及一种具有免疫作用、并抗肿瘤的中药，尤其是一种免疫调节剂及其制备方法。
背景技术
消化道恶性肿瘤为我国的高发肿瘤。由于难于及时发现，故早诊率较低，这不仅使该人群失去了宝贵的手术机会，而且由于机体邪盛正衰，气虚血瘀而致使机体免疫功能低下，不能耐受有效的化学药物治疗，近年来已成为临床上非常棘手的问题。
目前，恶性肿瘤的治疗方法有许多种，但概括而言都采用中西医结合的方法。众所周知，由于西药的治疗如环磷酰胺、氨甲喋呤、5-氟尿嘧啶、顺铂或阿霉素等主要通过抑制肿瘤细胞的核酸或蛋白质的合成而抑制肿瘤细胞的生长，因此对正常机体细胞也有明显的毒副作用，从而导致机体出现一些症状如恶心、呕吐、骨髓抑制等等，使很多病人不能耐受化疗而中断治疗，严重者甚至会危及生命。另外，由于肿瘤的发生与发展与人体的免疫功能有十分密切的关系，尤其是细胞免疫功能有着明显的关系，因此，在临床医学上一直有需要寻找一种理想的免疫调节剂，用来提高全身的应激能力，维护化疗过程中机体的免疫活性，减少毒副作用，延长患者的生存期。
目前也有关于中药免疫调节剂的研究。如谢岩等在ZL94101456.8中报道了一种含有人参和黄芪成分的注射液，用于提高人体免疫功能，抑制肿瘤的发生和发展。但在该专利中没有提供任何能够证明药物效果的实验数据，而且人参作为药物成份价格昂贵，长期服用对肿瘤病人来说负担较重，也容易造成病人因经济原因放弃治疗。
发明内容
为了解决上述问题，本发明人经过反复研究，并通过动物和临床实验的反复验证，终于找到了适用于肿瘤化疗病人长期使用的、能增强机体免疫力、减轻肿瘤病人化疗引起的骨髓抑制、降低死亡率的中药制剂，并且从而完成了本发明。
本发明的一个目的是提供一种从中药党参、黄芪中提取出的具有药用价值的组合物。
本发明的另一个目的是提供一种该药物组合物的制备方法。
根据本发明的免疫调节剂，主要是由党参和黄芪为原料制成。
所述的党参和黄芪的重量比范围优选为0.5∶1至1∶0.5，更优选为1∶1。
根据本发明的免疫调节剂的原料药中还可以含有补气、补血类中药，如当归、熟地、何首乌、白术、山药等。
本发明的免疫调节剂的制备方法包括下列步骤：
a)将党参、黄芪除杂质，加工成饮片；
b)按一定重量比称取党参和黄芪，用去离子水将其冲洗干净；
c)根据称取的党参和黄芪的重量分次加入一定量的去离子水，
加热提取1～3次，得到药物提取物；
d)将药物提取物浓缩，得浓缩液；
e)加入适量乙醇，常规沉淀，过滤，回收滤液中的乙醇并浓缩至干，即得党参、黄芪提取组合物。
在步骤c)中将药物加水提取时，优选第一次加水8倍量，煎煮1小时，第二次加水6倍量，煎煮0.5小时。
在步骤e)中将药物加乙醇沉淀时，优选第一次乙醇含量占总重量的65％-80％，第二次乙醇含量不少于总重量的80％。
本发明所述的中药党参Codonopsis Pilosula(Franch.)Nannf为桔梗科植物的干燥根；中药黄芪(膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.或蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.Var.mongholicus(Bge.)Hsiao)的干燥根。
本发明提供的免疫调节剂中，每1克中含总固体物不少于0.325克，其主要成分为糖类物质(包括多糖、单糖)、有机酸、皂苷、香豆精(少量)、黄酮苷、生物碱、甾醇类、烷烃类物质等。其中主要活性成分为皂苷类、香豆精类以及黄酮类物质。
在应用时，本发明的药物可以根据需要加入一种或多种药学上可以接受的载体，如稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等，制备成需要的剂型。
本发明提供的药物，根据实际需要，可进一步加工制成口服液、片剂、胶囊剂、颗粒剂以及注射剂等多种剂型。上述剂型均可按照药学领域的常规方法制备。
经动物试验和临床试验表明，本发明的免疫调节剂具有以下作用：
1.可以补脾益肾，治疗一切气虚、气损病人。
2.改善临床症状，延长肿瘤患者生存期，具有扶正固本作用。
3.维护造血功能，减轻放疗及化疗药物的毒副作用，减少放、化疗过程中白细胞下降。
4.增加巨噬细胞吞噬功能，提高淋巴细胞转化能力等，是一种理想的免疫调节剂。
5.有一定的抑瘤作用。
本发明对传统的中药党参、黄芪进行了全面的、系统的研究，明确了它们的有效部位，阐明了该药物的作用机制。并且有针对性地设计提取工艺，在保证药物有效性的同时，尽可能地去除杂质，以降低使用剂量，减小毒副作用。方法简单，实用性强，并且很有创造性和启发性，为中药现代化奠定了坚实的基础。
附图说明
图1为中药党参、黄芪的提取工艺。
具体实施方式
以下通过实施例来进一步阐述本发明的免疫调节剂及其制备方法。
实施例1：党参、黄芪的提取与分离，以获得党参和黄芪的组合物。
分别将党参、黄芪除杂质，加工成饮片。准确称定党参与黄芪各400克用去离子水冲洗干净，加入3200ml去离子水，加热提取1小时后，放出提取液；再加入2400ml去离子水，加热提取1小时后，放出提取液；再加入2400ml去离子水，加热提取0.5小时后，放出提取液。三次提取液过滤后合并，浓缩至600ml，再加入浓度为95％的乙醇使含醇量为60％，沉淀24小时，过滤；滤液回收至400ml，加入浓度为95％的乙醇使含醇量为80％，沉淀，过滤，回收乙醇并浓缩至400g，即得党参和黄芪提取组合物。
对本发明的药物可加适量乙醇冷藏保存，也可烘干后室温保存。在本发明的药物中，每1克中含总固体物不少于0.325克，其主要成分为糖类物质(包括多糖、单糖)、有机酸、皂苷、香豆精(少量)、黄酮苷、生物碱、甾醇类、烷烃类物质等。其中主要活性成分为皂苷类、香豆精类以及黄酮类物质。
以下通过试验例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果，这些试验例包括本发明免疫调节剂组合物的动物实验和临床疗效观察实验。
试验例1：党参、黄芪提取组合物的抗肿瘤作用及对氨甲喋呤致死作用的影响
1实验药物
党参、黄芪提取组合物：按上述实施例1制备的党参、黄芪提取组合物，其中每20ml中含等量党参、黄芪提取物3.25g，实验时将之水浴浓缩2ml至1ml，流通蒸汽消毒40分钟灭菌。
氨甲喋呤：上海第二制药厂，批号为870615。实验时配成1mg/ml水溶液。
2实验动物：昆明杂种小鼠，雌性，体重18～22g，由中研院动物房提供。
3实验方法：
1)将小鼠随机分为大剂量组、小剂量组和对照组。瘤株选用小鼠肉瘤180，选取新鲜瘤组织在无菌条件下制成细胞匀浆，以1∶4稀释，每只小鼠右腋皮下接种0.15ml，于接种后24小时开始给药。大剂量组给党参、黄芪提取组合物浓缩液0.4ml/只；小剂量组0.2ml/只，对照组给生理盐水0.4ml/只，均为腹腔注射，每日一次，连续给药14天，第15天处死动物，称取瘤重，求瘤重抑制率，用t检验法进行统计学处理。
2)小鼠分为两组，接种瘤细胞方法同前，于接种前三天开始给药组与对照组分别腹腔注射党参、黄芪提取物组合物和生理盐水0.2ml/只，每日一次，连续八次，于给药第四天接种瘤细胞，接种六小时后，腹腔内一次注射氨甲喋呤水溶液22mg/kg，观察给氨甲喋呤后10天内动物死亡情况，比较两组动物生存率。
4实验结果：
1)党参、黄芪提取组合物对小鼠肉瘤180的影响，结果见表1、表2。
表1党参、黄芪提取组合物(大剂量组)对小鼠肉瘤180的影响
| 实验次数 | 组别 | 药物剂量(g/kg) | 动物数 | 瘤重g(X±SD) | 抑瘤率(％) | P值 |
| 1 | 对照组大剂量组 | 6.50 | 2120 | 3.95±2.382.50±1.66 | 36.7 | 0.01＜P＜0.05 |
| 2 | 对照组大剂量组 | 6.50 | 148 | 3.24±1.431.53±0.74 | 55.28 | P＜0.01 |
| 3 | 对照组大剂量组 | 6.50 | 2121 | 5.97±2.953.95±2.63 | 33.84 | 0.01＜P＜0.05 |
表2 党参、黄芪提取组合物(小剂量组)对小鼠肉瘤180的影响
| 实验次数 | 组别 | 药物剂量(g/kg) | 动物数 | 瘤重g(X±SD) | 抑瘤率(％) | P值 |
| 1 | 对照组小剂量组 | 3.25 | 209 | 2.97±1.722.21±1.09 | 20.86 | P＞0.05 |
| 2 | 对照组小剂量组 | 3.25 | 147 | 3.42±1.432.62±1.67 | 23.40 | P＞0.05 |
| 3 | 对照组小剂量组 | 3.25 | 1512 | 3.89±1.223.12±0.66 | 19.69 | P＞0.05 |
从表1、表2中可以看出，给药14天后两用药组平均瘤重均小于对照组，提取物6.50g/kg组抑瘤率三次实验分别为36.7％、55.28％、33.84％，经统计学处理与对照组具有显著性差异。提取物3.25g/kg抑瘤率三次实验分别为20.86％、23.40％、19.69％，说明党参、黄芪提取组合物对小鼠肉瘤180有抑制作用。
2)党参、黄芪提取组合物对氨甲喋呤致死作用的影响，结果见表3。
表3党参、黄芪提取组合物对氨甲喋呤致死作用的影响
| 组别 | 动物 | 给氨甲喋呤后动物死亡数 | 十天后 | 十天后 |
| 数 | 第4天 | 第5天 | 第6天 | 第7天 | 第8天 | 生存数 | 生存率％ | |
| 氨甲喋呤+参芪组 | 13 | 2 | 1 | 2 | 1 | 7 | 53.85※ | |
| 氨甲喋呤组 | 21 | 1 | 7 | 3 | 6 | 4 | 19.04 |
※经直接计算概率法检验0.01＜P＜0.05
从表3可以看出，参芪组十天生存率明显高于对照组。经卡方检验P＜0.05，统计学处理有显著差异。实验提示党参、黄芪提取组合物对氨甲喋呤的致死作用具有保护性减毒作用，即可延长生存期。
上述两项实验表明党参、黄芪提取组合物对小鼠180有抑制作用，能够降低氨甲喋呤对小鼠的死亡率，延长动物生存期。
试验例2：参芪注射液对造血系统的影响
1实验药物：参芪注射液溶液，每支20ml，含等量党参、黄芪提取物3.25g，实验时每只小鼠腹腔注射0.2ml(合每公斤体重10ml)。
2实验动物：昆明种小鼠，体重18-22g，接种s180瘤株，接种瘤细胞24小时后，实验组腹腔注入参芪注射液0.2ml(约含生药0.2g)，对照组注射同量水直至实验结束。实验中分两次腹腔注入环磷酰胺，每只1.5mg。
3实验结果：
1)参芪注射液对小鼠骨髓细胞总数的影响
表4 参芪注射液对小鼠骨髓细胞总数的影响
| 动物数 | 106/股骨(M±SD) | P值 | |
| 环磷酰胺对照组 | 10 | 9.95±3.38 | |
| 环磷酰胺加参芪组 | 14 | 19.98±5.21 | ＜0.001 |
表4结果说明环磷酰胺可造成小鼠骨髓细胞总数下降，合并参芪注射液后，骨髓细胞总细胞总数比对照组升高。
2)参芪注射液对小鼠骨髓有核细胞的影响
表5 参芪注射液对小鼠骨髓有核细胞的影响
| 动物数 | 106/股骨(M±SD) | P值 | |
| 环磷酰胺对照组 | 10 | 5.06±1.38 | ＜0.01 |
| 环磷酰胺加参芪组 | 14 | 8.45±5.06 |
骨髓有核细胞代表有造血功能的细胞。表5结果说明，合并参芪注射液，骨髓有核细胞计数明显高于单纯环磷酰胺对照组。
3)参芪注射液对小鼠骨髓细胞体积的影响
表6参芪注射液对小鼠骨髓细胞体积的影响
| 动物数 | M±SD | P值 | |
| 环磷酰胺对照组 | 10 | 125.90±19.26 | ＜0.01 |
| 环磷酰胺加参芪组 | 14 | 149.93±23.96 |
骨髓细胞体积大小反映细胞的成熟程度，越幼稚，细胞体积越大，幼稚多代表造血母细胞。表6的结果说明合并参芪注射液比单纯环磷酰胺对照组平均体积大。(P＜0.01)
4)参芪注射液对小鼠骨髓细胞压积的影响
表7 参芪注射液对小鼠骨髓细胞压积的影响
| 动物数 | M±SD | P值 | |
| 环磷酰胺对照组 | 10 | 23.80±8.40 | ＜0.01 |
| 环磷酰胺加参芪组 | 14 | 34.40±11 |
骨髓细胞压积的高低代表细胞的大小和多少，表7结果说明合并参芪注射液比单纯环磷酰胺对照组压积增多。(P＜0.01)
试验例3：参芪注射液具有协同的抑瘤作用
本试验例所用的实验药物与实验动物同试验例2。
实验结果
参芪注射液合并环磷酰胺对瘤体的影响
参芪注射液能减轻化疗药对小鼠骨髓的抑制，但是否破坏化疗药的抗癌效果。关于这一点，以下实验进行了验证。
表8 参芪注射液合并化疗药对瘤体的影响
| 动物数 | M±SD | 抑瘤率 | P值 | |
| 空白对照 | 9 | 2.60±1.08 | ||
| 环磷酰胺对照组 | 10 | 0.89±0.55 | 65％△ | ＜0.001△ |
| 环+参芪一组 | 9 | 0.33±0.37 | 87％※ | ＜0.05※ |
| 环+参芪二组 | 14 | 0.41±0.35 | 57％※ | ＜0.05※ |
△环磷酰胺对照组与空白组对照比较
※环磷酰胺对照组与环磷酰胺+参芪组比较
表8的结果说明本发明的党参、黄芪免疫调节剂组合物不但没有破坏化疗药的抗癌效果，相反，合并后参芪注射液比单纯化疗提高抑瘤率。参芪一组为人用量4倍，参芪二组为人用量2倍。
Claims (8)
1.一种药物组合物，其特征在于它主要是由党参和黄芪为原料制成。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述的党参和黄芪的重量比范围为0.5∶1至1∶0.5。
3.根据权利要求1或2任一项所述的药物组合物，其特征在于所述的党参和黄芪的重量比为1∶1。
4.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述的原料药还可以含有补气、补血类中药。
5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于所述的补气、补血类中药是当归、熟地、何首乌、白术、山药或其结合。
6.一种含有权利要求1所述的药物组合物的制备方法，它包括下列步骤：
a)将党参、黄芪除杂质，加工成饮片；
b)按一定重量比称取党参和黄芪，用去离子水将其冲洗干净；
c)根据称取的党参和黄芪的重量分次加入一定量的去离子水，加热提取1～3次，得到药物提取物；
d)将药物提取物浓缩，得浓缩液；
e)加入适量乙醇，常规沉淀，过滤，回收滤液中的乙醇并浓缩至干，即得党参、黄芪提取组合物。
7.根据权利要求6所述的方法，其中在步骤c)中将药物加水提取时，第一次加水8倍量，煎煮1小时，第二次加水6倍量，煎煮0.5小时。
8.根据权利要求6所述的方法，其中在步骤e)中将药物加乙醇沉淀时，第一次乙醇含量应占总重量的65％-80％，第二次乙醇含量不少于总重量的80％。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |