CN1704085A - 一种具有免疫调节作用的药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种中药复方药物组合物，它是由紫锥菊、黄芪为原料制成的药剂，重量配比为：紫锥菊1－3份、黄芪1－3份。本发明还提供了该药物组合物的制备方法，以及在制备具有免疫增强作用的保健食品和药物中的用途。该药物组合物原料配伍可有效掩盖紫锥菊的异味，有协同增效作用，且生产工艺简单，服用剂量小，使用方便，副作用小，价格低廉。

Description

一种具有免疫调节作用的药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及中药领域，具体地说是提供一种具有免疫增强作用中药复方药物组合物及其制备方法，以及各重量配比的原料在制备具有免疫增强作用的保健食品和药物中的用途。

背景技术

人体免疫功能与疾病发生的关系十分密切，免疫功能低下，会给人体带来多种危害，易发生各种感染性疾病：如流感、上呼吸道感染、病毒性肝炎，口角疱疹等、慢性鼻窦炎，扁桃体炎、手足真菌感染(手、足灰指甲)、体癣、股癣等；癌症的发病率升高；易产生消化系统功能紊乱：消化不良，慢性腹泻，肝功能异常等。免疫功能低下时，人体还可能出现疲乏感，工作效率低下；周身不适感，消瘦，低度发热等多种症状。因此，应用各种具有免疫增强作用的药物和保健食品治疗和改善机体免疫功能低下具有重要的临床意义。

紫锥菊(Echinacea purpurea)是原产于美洲的一种菊科草本植物，现在欧洲及其它地区均有引种栽培。我国北京、南京、上海等地也有引种栽培。紫锥菊提取物主要含多糖、咖啡酸衍生物及异丁酰胺类化合物；美洲民间用根治疗多种细菌感染，现代则作为免疫促进剂和免疫调节剂。经药理研究表明，紫锥菊能刺激巨噬细胞的吞噬功能，刺激T淋巴细胞增殖，刺激巨噬细胞杀伤P815瘤细胞的活性，显著增强机体免疫功能。紫锥菊粗多糖和咖啡酸衍生物菊苣酸为紫锥菊免疫增强作用的主要活性成分。毒理研究表明，紫锥菊及其多种提取物毒性极低，安全性大。国外亦有不少关于紫锥菊的复方制剂，如德国Schaper & Brummer药厂所生产的施保利通^(Esberitox^N)，处方由紫锥菊、侧柏叶、赝靛根三味药物组成；紫锥菊与接骨木、贯叶连翘、没药配伍治疗病毒和非病毒粘膜感染【CA2447180】；紫锥菊与大蒜、核桃、三色堇配伍刺激免疫系统【NL1016519C】。

黄芪为应用历史悠久的传统天然药物，始载于《神农本草经》列为上品，谓其“补虚，治小儿百病”，《名医别录》谓“补丈夫虚损，五劳赢瘦，益气”，黄芪具有良好的补虚益气作用，为古代治疗体虚诸证的重要药物。现代药理及临床研究已充分表明，黄芪具有显著的调节机体免疫功能的作用。黄芪可增加机体的非特异性免疫功能以及调节体液免疫和细胞免疫趋于正常，而且在临床实际中具有明显疗效，因而黄芪是一很有希望的生物调节剂，黄芪多糖(APS)是黄芪的有效成分，具有多方的免疫增强作用：如黄芪多糖促进抗体生成；黄芪多糖能增强巨噬细胞的吞噬功能和吞噬指数等。黄芪作为一种重要的免疫增强剂，常常与其他具有免疫增强作用的中药配伍组成复方制剂，如当归补血汤(黄芪、当归)，玉屏风散(黄芪、白术、防风)，参芪膏(人参、黄芪)。【王红梅，姚小曼，黄芪的免疫调节作用研究进展，中国食品卫生杂志，12(3)：37-39；雷载权，张廷模，中华临床中药学，北京：人民卫生出版社，1998，1607-1615】

值得指出的是，紫锥菊制剂虽然作为免疫促进剂在国外广泛使用，但不少文献报道指出，以紫锥菊为原料的制剂具有让人不舒服的气味和滋味，口感较差。如Dr.Bruce Barrett曾在一篇关于紫锥菊应用的综述中指出，62篇关于紫锥菊不良反应或副作用的文献报道中，有21篇文献提到了紫锥菊制剂的不良滋味。【B.Barrett，Echinacea：A safety review.Journalof the American Botanical Council 57：36-39，2003.】

但以上治疗或改善免疫功能低下的相关配方中，未见紫锥菊与中药黄芪的组成的植物药或中药配方的报道。

发明内容

本发明所要解决的技术方案是提供一种以黄芪、紫锥菊为原料制备的药物组合物。本发明的另一技术方案是提供该药物组合物的制备方法和用途。

本发明提供了一种药物组合物，它是由紫锥菊和黄芪为原料制成的药剂。可以是紫锥菊和黄芪，再配伍人参、党参、白术、当归、西洋参等具有免疫增强作用的传统中药。

它是由下述重量配比的原料制成的药剂：紫锥菊1-3份、黄芪1-3份。具体的可以是紫锥菊1份、黄芪2份；也可以是紫锥菊1份、黄芪3份；也可以是紫锥菊3份、黄芪1份；也可以是紫锥菊3份、黄芪2份；也可以是紫锥菊2份、黄芪1份；也可以是紫锥菊1份、黄芪1份。其中，优选的是紫锥菊1份、黄芪1份；或者紫锥菊2份、黄芪1份。

在制备上述本发明药物组合物时，可以用紫锥菊原生药粉、黄芪原生药粉；也可以用紫锥菊的水提取物、黄芪水提取物；也可以用紫锥菊各种有机溶剂(如乙醇)的提取物、黄芪各种有机溶剂(如乙醇、甲醇)的提取物；还可以用紫锥菊多糖提取物、黄芪多糖提取物。

本发明还提供了该药物组合物的一种制备方法，包括下列步骤：

a、称取下列中药材为原料：紫锥菊1～3份、黄芪1～3份；

b、紫锥菊，用水煎煮、离心，弃去沉淀，得紫锥菊提取物上清液，作为活性成份I；

c、取黄芪，用水煎煮、乙醇沉淀，醇沉后所得沉淀用乙醇溶解，离心，所得溶液再用乙醇沉淀，收集沉淀物，挥干乙醇，得到黄芪提取物，为活性成分II；

d、活性成份I、II加上药学上可接受的辅料混合，制成各种剂型。

其中步骤b中，加水煎煮提取1～3次，每次1-3小时，合并提取液。步骤c中，用乙醇沉淀时所用乙醇浓度为30-95％/v/v，用乙醇溶解时所用乙醇浓度为30-50％v/v。

本发明还提供一种具有免疫增强作用的药物组合物，它含有上文所述的紫锥菊和黄芪原生药或提取物，再加上药学上可接受的载体或辅助性成分可制成药剂。所述的药剂是口服制剂，如口服液、胶囊、软胶囊、颗粒剂、片剂、滴丸、汤剂、茶剂。

本发明还提供各重量配比的原料药在制备免疫增强的保健食品和药物中的用途。

本发明提供的药物组合物，较之单味紫锥菊或单味黄芪的制剂具有更加良好可靠的免疫增强活性和临床疗效，同时，该组合物制剂具有生产工艺简单，服用剂量小，使用方便，副作用小，价格低廉等特点。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

具体实施方式

实施例1：本发明药物组合物A的口服液、片剂的制备

①黄芪提取物的制备：称取黄芪药材500g，加12倍量水煎煮2次，水提取液经浓缩后醇沉，取沉淀加30％v/v乙醇，离心，沉淀(弃去)，取溶液浓缩后醇沉，取沉淀，挥干乙醇，即得黄芪(多糖)提取物浸膏

②紫锥菊提取物的制备：

称取紫锥菊药材500g，加12倍量水煎煮2次，所得水提液加热浓缩至一定量，冷藏36小时后，离心，得上清液，将上清液浓缩得紫锥菊提取物浸膏。

③本发明药物组合物A口服液的制备：

将①、②所得黄芪提取物和紫锥菊提取物浸膏混合，加入柠檬酸、山梨酸甲、蒸馏水等，混匀，加热溶解、冷藏、滤过、分装、灭菌，制成1000ml口服液。

④本发明药物组合物A片剂的制备：

分别将①、②所得黄芪提取物和紫锥菊提取物喷雾干燥，混匀，用85％乙醇制粒，加入崩解剂和润滑剂，压片，制得150片片剂。

实施例2本发明药物组合物A口服液多糖含量测定：

方法：精密量取1ml供试品溶液(实施例1所得口服液)至10ml比色管中，另取6支比色管，一支作空白对照，其余加葡萄糖标准溶液各0.10，0.30，0.50，0.70，0.90ml(相当于葡萄糖标准品10，30，50，70，90ug)，分别加水补足至1.00ml。再精密量取4ml的0.5％硫酸一蒽酮液入各比色管，摇匀，置沸水浴中加热20min，迅速用水冷却至室温，于620nm波长处，以空白校正零点，用1cm比色皿测吸光度。

计算：样品中的多糖按下式计算

      多糖(g/100ml)＝W×250×100/(1000×5×1000)

      W：测定液中相当于标准葡萄糖：ug

结果：经以上方法测定实施例1所得组合物A口服液多糖含量限度为每100ml含多糖170mg。

实施例3本发明药物组合物B、药物组合物C、药物组合物D浸膏的制备

组合物B浸膏的制备：按紫锥菊2份、黄芪1份分别称取药材，按常规水煎煮提取法制备组合物B水提浸膏。

组合物C浸膏的制备：按紫锥菊3份、黄芪1份分别称取药材，按常规水煎煮提取法制备组合物B水提浸膏。

组合物D浸膏的制备：按紫锥菊1份、黄芪2份、人参1份分别称取药材，按常规水煎煮提取法制备组合物D水提浸膏。

实施例4本发明药物组合物与单一紫锥菊的口感对比

对比结果见下表：

	气味	滋味
			单一紫锥菊制剂	腥	咸
(紫锥菊+黄芪)口服液	略具豆香味	微甜，微咸

通过将本发明药物组合物的原料紫锥菊与中药黄芪提取物，按本发明药物组合物原料的重量配伍，能够较明显改善单一紫锥菊制剂所存在的口感差的弊病，提高患者的耐受性。

以下通过药效试验来进一步阐述本发明所述药物的有益效果。

实验例一、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)

将雄性Balb/c小鼠，体重18-22克，四川大学华西实验动物中心提供(合格证号：川实动管质第122号)，随机分成4组，各组10只，即生理盐水对照组，本发明的药物组合物浸膏低剂量组(3.33ml/Kg.bw)、中剂量组(6.67ml/Kg.bw)、高剂量组(13.33ml/Kg.bw)(分别相当于临床成人日服用建议剂量的5倍、10倍和20倍)。本发明的药物组合物浸膏按实施例1方法制备，每g浸膏相当于原配方药材10g。

连续灌胃25天后，于每只小鼠腹腔注射20％鸡红细胞悬液1ml，30分钟后，颈椎脱臼处死，将其固定在鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水2ml，转动鼠板1分钟，吸出腹腔洗液4ml，平均滴于2张载玻片上，置湿盒37℃30分钟，取出在生理盐水中漂洗、晾干、固定，颈椎脱臼处死，将其固定在鼠板上，4％GiemsaPBs染色3分钟，蒸馏水漂洗晾干，镜检。按公式计算吞噬百分率及吞噬指数，并进行统计学处理。结果如下：

各剂量组与对照组小鼠相比，其腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率均有显著性增高(P＜0.05)；3.33ml/Kg.bw剂量、13.33ml/Kg.bw剂量与对照组小鼠相比，其腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬指数均有显著增高(P＜0.05)，6.67ml/Kg.bw剂量与对照组小鼠相比，其腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬指数有显著性增高(P＜0.01)。

表1.对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响

组  别	动物数(只)	吞噬百分率(％)( X±S)	吞噬指数P1值*    ( X±S)	P2值*
					对照组3.33ml/Kg.bw6.67ml/Kg.bw13.33ml/Kg.bw	12121212	31.79±5.6937.13±6.8438.67±5.9437.31±3.67	-     0.91±0.18＜0.05  1.26±0.25＜0.05  1.51±0.33＜0.05  1.18±0.33	＜0.05＜0.01＜0.05

^*P₁为各剂量组与对照组吞噬百分率比较

^*P₂为剂量组与对照组吞噬指数细胞

通过上述的药效学试验结果表明：该本发明药物组合物能明显提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力，且并通过实验说明，本发明药物组合物的使用剂量为6.67ml/Kg.bw时，提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力作用最强。说明本发明药物组合物对某些免疫功能的影响并不呈简单的线性关系，还需要有剂量上的选择。

实验例二 本发明药物组合物A(紫锥菊1份+黄芪1份)、紫锥菊提取物、黄芪提取物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响(半体内法)

将雄性Balb/c小鼠，体重18-22克。四川大学华西实验动物中心提供(合格证号：川实动管质第122号)，随机分成4组，各组12只，即：生理盐水对照组；本发明药物组合物A组(以下简称组合物A组，按实施例1方法制备，以配方原药材量计算，给药剂量为6.6g药材/kg，相当于临床成人日服用量的10倍)；紫锥菊提取物组(以下简称紫锥菊组，参照实施例1方法制备，以配方原药材量计算，给药剂量为3.3药材g/kg，相当于临床成人日服用量的10倍)；黄芪提取物组(以下简称黄芪组，参照实施例1方法制备，以配方原药材量计算，给药剂量为3.3g药材/kg，相当于临床成人日服用量的10倍)。

连续灌胃25天后，于每只小鼠腹腔注射20％鸡红细胞悬液1ml，30分钟后，颈椎脱臼处死，将其固定在鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水2ml，转动鼠板1分钟，吸出腹腔洗液1ml，平均滴于2张载玻片上，置湿盒37℃30分钟，取出在生理盐水中漂洗、晾干、固定，颈椎脱臼处死，将其固定在鼠板上，4％GiemsaPBs染色3分钟，蒸馏水漂洗晾干，镜检。按公式计算吞噬百分率及吞噬指数，并进行统计学处理。结果如下：

与对照组小鼠相比，紫锥菊组、组合物A组腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率均有显著性增高(分别P＜0.05、P＜0.01)；紫锥菊组、黄芪组、组合物A组吞噬指数均有显著性增高(分别P＜0.01、P＜0.05、P＜0.001)；与紫锥菊组相比，组合物A组腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率、吞噬指数均有显著性增高(P＜0.05)。

表1.对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响( X±S)

组别	动物数(只)	吞噬百分率(％)	吞噬指数
				对照组紫锥菊组黄芪组组合物A组	12121212	31.79±5.6935.73±3.02*34.57±4.2940.67±5.74**#	0.91±0.181.31±0.22**1.15±0.29*1.51±0.33***#

注：与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；与紫锥菊组比较，^#P＜0.05

以上实验结果表明，本发明提供的药物组合物A(紫锥菊1份+黄芪1份)，较之单味紫锥菊或单味黄芪的制剂，其药效并非是两味药物单一的叠加，而是具有良好的协同增效功能。

实验例三 本发明药物组合物B、药物组合物C、药物组合物D对自然杀伤细胞(NK细胞)活性的影响(乳酸脱氢酶测定法)

将雄性Balb/c小鼠，体重18-22克。四川大学华西实验动物中心提供(合格证号：川实动管质第122号)，随机分成4组，各组12只，即生理盐水对照组组，本发明的药物组合物B组(6.67g/Kg)、本发明药物组合物C组(6.67g/Kg)、本发明药物组合物D组(6.67g/Kg)。本发明的药物组合物B、C、D浸膏按实施例3方法制备，以上动物试验给药剂量均以配方原药材量计算。

连续灌胃25天后，颈椎脱臼处死动物，取出脾脏，撕碎，过200目筛网后，用Hank’s液洗3次，用完全1640培养液配成5×10⁶个/ml细胞悬液。将各只小鼠的细胞悬液取300μl分置于96孔培养板中，每孔100μl，每孔加靶细胞(YAC-1细胞，1×10⁵个/ml，同时做靶细胞自然释放孔(靶细胞100μl+培养液100μl)及最大释放孔(靶细胞100μl+1％NP-40100μl)各8孔，37℃5％CO₂培养4小时，取出1500rpm离心5分钟。将各孔上清液100μl置于另一培养板中，每孔再加入100μl基础液，10分钟后1mol/LHCl 30μl终止反应，在490nm处测定O.D.值，按公式计算NK细胞活性率，并进行统计学处理。结果如下：

组合物B浸膏组与对照组小鼠相比，其NK细胞活性率有显著性差异(P＜0.05)，组合物C浸膏组与对照组小鼠相比，其NK细胞活性率有显著性增高(P＜0.05)，组合物D浸膏组与对照组小鼠相比，其NK细胞活性率有显著性增高(P＜0.01)。

            表2.对小鼠NK细胞活性的影响(X±S)

组  别	动物数(只)	NK细胞活性率(％)( X±S)	P值*
				对照组组合物B浸膏组合物C浸膏组合物D浸膏	12121212	14.48±3.9218.98±2.4117.32±2.7219.21±2.69	＜0.05＜0.05＜0.01

^*P表示各剂量组与对照组NK细胞活性率比较

通过上述的药效学试验结果表明：本发明药物组合物B、C、D能明显提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力和小鼠NK细胞活性。

Claims (9)

1、一种药物组合物，其特征在于：它是含有紫锥菊、黄芪为原料制成的药剂。

2、根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：它是由紫锥菊、黄芪为原料制成的药剂。

3、根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于：它是由下述重量配比的原料制成的药剂：紫锥菊1-3份、黄芪1-3份。

4、根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于：它是由下述重量配比的原料制成的药剂：紫锥菊1份、黄芪1份。

5、根据权利要求1～4所述的药物组合物，其特征在于：以紫锥菊原生药粉及黄芪原生药粉为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制成的药剂。

6、根据权利要求1～4所述的药物组合物，其特征在于：以紫锥菊提取物及黄芪提取物为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制成的药剂。

7、根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于：所述的紫锥菊提取物为紫锥菊水提取物，或紫锥菊有机溶剂提取物，或紫锥菊多糖提取物；黄芪提取物为黄芪水提取物，或黄芪有机溶剂提取物，或黄芪多糖提取物。

8、权利要求3所述的药物组合物的制备方法，包括下列步骤：

a、称取下列中药材为原料：紫锥菊1～3份、黄芪1～3份；

b、取紫锥菊，用水煎煮、离心，弃去沉淀，得紫锥菊提取物上清液，作为活性成份I；

c、取黄芪，用水煎煮、乙醇沉淀，醇沉后所得沉淀用乙醇溶解，乙醇浓度为30-95％v/v，离心，所得溶液再用乙醇沉淀，乙醇浓度为30-50％v/v，收集沉淀物，挥干乙醇，得到黄芪提取物，为活性成分II；

d、活性成份I、II加上药学上可接受的辅料混合，制成各种剂型。

9、权利要求3所述的各重量配比的原料在制备具有免疫增强作用的保健食品或药物中的用途。