CN103610738A - 一种防治禽流感、提高鸡群免疫的中药颗粒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种防治禽流感、提高鸡群免疫的中药颗粒及其制备方法，该方法是通过将紫锥菊提取物、金银花叶提取物和黄芪提取物混合制得。本发明防治禽流感、提高鸡群免疫的中药选用药材合理、显效速度快、既能防治禽流感，又能提高鸡群的免疫状况，增强机体抗病毒能力，可以让蛋鸡自由采食，防止减蛋综合症引起的产蛋下降。同时还具有副作用小、成本低、药物稳定性高等优点。本发明工艺简单高效，易于操作。本发明提出的防治禽流感、提高鸡群免疫的中药的用途，用于防治禽流感、提高鸡群免疫效果显著。
Description
技术领域
本发明属于畜牧兽医、中药领域，具体涉及到一种防治禽流感、提高鸡群免疫的中药颗粒及其制备方法。
背景技术
禽流感是由A型流感病毒引起的一种禽类的急性、高度接触性烈性传染病。鸡、火鸡、鹌鹑等家禽及野鸟、水禽、海鸟等野禽均可感染，其临床表现为呼吸系统疾病、蛋鸡产蛋下降，甚至出现禽类大批死亡。当鸡群受高致病力毒株感染时，发病率和死亡率可达50%～80%，甚至100%，给世界各国带来了巨大的经济损失。由于禽流感病毒表面的红细胞凝集素和神经氨酸酶不断发生变异，给疫苗预防带来一定的困难，国内外常用的防治禽流感的药物主要有金刚烷胺、金刚乙胺、病毒灵和病毒唑等，但毒副作用较大，且长期使用易产生耐药性，同时导致产蛋鸡产量下降。目前动物源性食品的药物残留问题已经限制了我国食品的出口，国家农业部已明令禁止使用西药抗病毒成分用于畜牧业。相对于化学合成药物而言，中药不仅具有耐药性低、副作用和不良反应少等优点，同时还有抑制病毒复制、调节免疫功能、改善血液循环、解热镇痛及抗菌消炎等功效。因此，从传统中草药中开发出对防治禽流感有效而不产生副作用的药物已经成为研究热点。
紫锥菊是原产于美洲的一类菊科野生花卉，在我国北京等地已引种栽培成功，其主要化学成分有咖啡酸衍生物、多糖及烷基酰胺类等物质。是国际上受到普遍重视的一种免疫促进和调节剂，通过激活免疫细胞提高机体自身免疫系统功能而用来治疗和预防疾病。
金银花叶为忍冬科植物忍冬的干燥叶，是金银花种植的副产物，产量大约是金银花的十倍。同花一样，金银花叶也主要含有挥发油、有机酸、黄酮、皂苷及鞣质等化合物。其抗病毒及抑菌活性与花蕾相当或优于花蕾。金银花叶可促进免疫细胞的增殖分化及淋巴细胞数量的增加，从而增强动物的细胞免疫和体液免疫功能，同时由于其价格低廉，在家禽养殖业中具有良好的应用前景。
黄芪为豆科植物膜荚黄芪和蒙古黄芪的干燥根，主要含有多糖类、皂苷类及黄酮类等物质。在养禽业，黄芪不仅作为促生长饲料添加剂，还具有增强机体免疫力、防治疾病、抗应激等作用。现代研究证实黄芪可以双向调节机体免疫功能，促进免疫细胞产生干扰素，延缓细胞衰老、抗菌及抗疲劳，能增强机体的适应性和抗病力，同时具有明显的抗流感病毒作用。本发明中选用黄芪配金银花叶，补清结合，补不助热，清不伤正。
申请公布号为CN101869706A的专利公开了一种由紫锥菊提取物、黄芪多糖组成的纳米乳佐剂及其制备方法；申请公布号为CN101856385A的专利公开了一种含有紫锥菊提取物的组合物及其制备方法，主要包括紫雏菊1份、黄芪提取物2份和少量叶黄素。该组合物用以提高人体免疫力，但以上发明中均未涉及具体的提取物的制备方法。
申请公布号为CN101023976A的专利公开了一种以紫锥菊提取物和黄芪提取物为原料的具有抗病毒作用的药物组合物及其制备方法，所述提取物的制备方法中紫锥菊采用55%乙醇提取，而黄芪采用30%乙醇渗漉；申请公布号为CN1704085A的专利公开了一种由紫锥菊和黄芪为原料组成的具有免疫调节作用的药物组合物及其制备方法，该制剂仅用于改善机体免疫力。
发明内容
本发明要解决的第一个技术问题是提供一种防治禽流感、提高鸡群免疫的中药颗粒，该中药副作用小、成本低、药物稳定性高。
为解决第一个技术问题，本发明采用下述技术方案：
一种防治禽流感、提高鸡群免疫的中药颗粒，是由中药提取物和药学上可接受的辅料制成，其特征在于，所述中药提取物包括下述重量份的原料：紫锥菊提取物30～45份、金银花叶提取物30～45份和黄芪提取物20～40份。
所述紫锥菊提取物是取紫锥菊药材，加相当于紫锥菊8～14倍重量的浓度为40～80%的乙醇回流提取2～4次，每次0.5～2h，减压回收乙醇，60℃浓缩至相对密度为1.03～1.20的溶液，经聚酰胺柱层析，浓度为40～80%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，真空干燥，粉碎，制得。优选地，是取紫锥菊药材，加12倍量50%乙醇回流提取3次，每次1h，减压回收乙醇，60℃浓缩至相对密度为1.10的溶液，经聚酰胺柱层析，50%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，真空干燥，粉碎制得。
所述金银花叶提取物是取金银花叶药材，加相当于金银花8～14倍重量的浓度为50～90%的乙醇回流提取2～4次，每次1～3h，过滤，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，真空干燥，粉碎，制得。优选地，是取金银花叶药材，加14倍量60%乙醇溶液回流提取3次，每次1h，滤过，滤液合并，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，真空干燥，粉碎，制得。
所述黄芪提取物，取黄芪药材，加相当于黄芪6～12倍重量的水回流提取2～4次，每次1～3h，60℃减压浓缩至相对密度为1.03～1.20的溶液，再加95%乙醇至含醇量达40～90%，离心，取沉淀，真空干燥，粉碎，制得。优选地，是取黄芪药材，加10倍量水回流提取3次，每次1h，减压浓缩至60℃相对密度为1.10的溶液，再加95%乙醇至含醇量达80%，离心，取沉淀，真空干燥，粉碎，制得。
本发明要解决的第二个技术问题是提供一种防治禽流感、提高鸡群免疫的中药颗粒的制备方法，该方法简单方便、易于操作，适合大规模生产。
为解决第二个技术问题，本发明采用下述技术方案：
一种防治禽流感、提高鸡群免疫的中药颗粒的制备方法，包括以下步骤：
（1）取紫锥菊药材，加相当于紫锥菊8～14倍重量的浓度为40～80%的乙醇回流提取2～4次，每次0.5～2h，减压回收乙醇，60℃浓缩至相对密度为1.03～1.20的溶液，经聚酰胺柱层析，浓度为40～80%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，干燥，粉碎，制得紫锥菊提取物；
（2）取金银花叶药材，加相当于金银花8～14倍重量的浓度为50～90%的乙醇回流提取2～4次，每次1～3h，过滤，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，干燥，粉碎，制得金银花叶提取物：；
（3）取黄芪药材，加相当于黄芪6～12倍重量的水回流提取2～4次，每次1～3h，60℃减压浓缩至相对密度为1.03～1.20的溶液，再加95%乙醇至含醇量达40～90%，离心，取沉淀，干燥，粉碎，制得黄芪提取物；
（4）以重量计，将30～45份紫锥菊提取物、30～45份金银花叶提取物和20～40份黄芪提取物混匀，加入药学上可接受的辅料，制粒，干燥，即得。
优选地，辅料为蔗糖和糊精，且蔗糖和糊精的重量比为1～4:1；更优选地，蔗糖和糊精的重量比为3:1。
优选地，辅料与总提取物的重量比为1.2～2.0：1；更优选地，辅料与总提取物的重量比为2.0：1。
优选地，用50%～90%乙醇制粒；更优选地，用70%乙醇制粒。
上述防治禽流感、提高鸡群免疫的中药提取物中主要包括以下化合物：绿原酸、香叶木素、异鼠李素-3-O-葡萄糖苷、芦丁、木犀草苷、洋蓟酸、菊苣酸。
采用本生产工艺获得的药材提取物中绿原酸、木犀草苷和菊苣酸的含量较高，绿原酸、木犀草苷具有抗菌、消炎、抗病毒的作用而菊苣酸具有抗炎和增强免疫的功能。本发明中药提取物的主要成分含量：金银花提取物中绿原酸的含量为230～320mg/g,木犀草苷的含量为15mg/g～30mg/g；紫锥菊提取物中菊苣酸的含量为180～230mg/g。因此运用本发明生产工艺提取得到的药材提取物具有较好的药效。
本发明具有如下有益效果：
本发明防治禽流感、提高鸡群免疫的中药选用药材合理、显效速度快、既能防治禽流感，又能提高鸡群的免疫状况，增强机体抗病毒能力，可以让蛋鸡自由采食，防止减蛋综合症引起的产蛋下降。同时还具有副作用小、成本低、药物稳定性高等优点。本发明工艺简单高效，易于操作。本发明提出的防治禽流感、提高鸡群免疫的中药的用途，用于防治禽流感、提高鸡群免疫效果显著。
具体实施方式
实施例1
（1）取紫锥菊药材，加12倍量50%乙醇回流提取3次，每次1h，减压回收乙醇，浓缩至60℃相对密度为1.10的溶液，经聚酰胺柱层析，50%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，真空干燥，粉碎，得紫锥菊提取物。
（2）取金银花叶药材，加14倍量60%乙醇溶液回流提取3次，每次1h，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，真空干燥，粉碎，得金银花叶提取物。
（3）取黄芪药材，加10倍量水回流提取3次，每次1h，减压浓缩至60℃相对密度为1.10的溶液，再加95%乙醇至含醇量达80%，离心，取沉淀，真空干燥，粉碎，得黄芪提取物。
（4）取上述紫锥菊提取物42.6g，金银花叶提取物41.1g，黄芪提取物36.3g，然后加入辅料（重量比为3:1的蔗糖和糊精），混合均匀，总提取物与辅料重量比为1:2，用浓度为70%的乙醇制粒，60℃烘干，整粒，即得产品。
所述的三种药材提取物，经硅胶柱色谱，三氯甲烷-甲醇系统梯度洗脱，所得组份再经聚酰胺柱色谱、凝胶柱色谱、反相C18柱色谱、HPLC制备色谱及高速逆流色谱等现代分离手段，进行进一步分离，并结合理化性质和IR、MS、1H-NMR、13C-NMR等现代波谱方法，鉴定得提取物中主要包括以下化合物：绿原酸、香叶木素、异鼠李素-3-O-葡萄糖苷、芦丁、木犀草苷、洋蓟酸、菊苣酸7种化合物。金银花提取物中绿原酸的含量为320mg/g,木犀草苷的含量为30mg/g；紫锥菊提取物中菊苣酸的含量为230mg/g。
实施例2
（1）取紫锥菊药材，加12倍量50%乙醇回流提取3次，每次1h，减压回收乙醇，浓缩至60℃相对密度为1.10的溶液，经聚酰胺柱层析，50%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，真空干燥，粉碎，得紫锥菊提取物。
（2）取金银花叶药材，加14倍量60%乙醇溶液回流提取3次，每次1h，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，真空干燥，粉碎，得金银花叶提取物。
（3）取黄芪药材，加10倍量水回流提取3次，每次1.5h，减压浓缩至60℃相对密度为1.10的溶液，再加95%乙醇至含醇量达80%，离心，取沉淀，真空干燥，粉碎，得黄芪提取物。
（4）取上述紫锥菊提取物39.7g，金银花叶提取物40.3g，黄芪提取物35.2g，加入辅料（重量比为4:1的蔗糖和糊精），混合均匀，总提取物与辅料重量比为1:1.2，用浓度为70%的乙醇制粒，60℃烘干，整粒，即得产品。鉴定得提取物中主要包括以下化合物：绿原酸、香叶木素、异鼠李素-3-O-葡萄糖苷、芦丁、木犀草苷、洋蓟酸、菊苣酸7种化合物。金银花提取物中绿原酸的含量为310mg/g,木犀草苷的含量为25mg/g；紫锥菊提取物中菊苣酸的含量为206mg/g。
实施例3
（1）取紫锥菊药材，加10倍量50%乙醇回流提取3次，每次1h，减压回收乙醇，浓缩至60℃相对密度为1.20的溶液，经聚酰胺柱层析，50%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，真空干燥，粉碎，得紫锥菊提取物。
（2）取黄芪药材，加12倍量水回流提取2次，每次3h，减压浓缩至60℃相对密度为1.20的溶液，再加95%乙醇至含醇量达70%，离心，取沉淀，真空干燥，粉碎，得黄芪提取物。
（3）将上述紫锥菊提取物42.6g，黄芪提取物36.3g，与辅料（重量比为1:1的蔗糖和糊精）混合均匀，总提取物与辅料重量比为1:1.6，60%乙醇制粒，60℃烘干，整粒，包装，即得产品。鉴定得提取物中主要包括以下化合物：绿原酸、异鼠李素-3-O-葡萄糖苷、洋蓟酸、菊苣酸4种化合物。金银花提取物中绿原酸的含量为283mg/g,木犀草苷的含量为28mg/g；紫锥菊提取物中菊苣酸的含量为230mg/g。
实施例4
（1）取紫锥菊药材，加8倍量80%乙醇回流提取4次，每次0.5h，减压回收乙醇，浓缩至60℃相对密度为1.10的溶液，经聚酰胺柱层析，90%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，真空干燥，粉碎，得紫锥菊提取物。
（2）取金银花叶药材，加8倍量90%乙醇溶液回流提取4次，每次1h，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，真空干燥，粉碎，得金银花叶提取物。
（3）取黄芪药材，加8倍量水回流提取4次，每次1h，减压浓缩至60℃相对密度为1.10的溶液，再加95%乙醇至含醇量达40%，离心，取沉淀，真空干燥，粉碎，得黄芪提取物。
（4）取上述紫锥菊提取物42.6g，金银花叶提取物41.1g，黄芪提取物36.3g，加入辅料（重量比为3:1的蔗糖和糊精），混合均匀，总提取物与辅料重量比为1:2，90%乙醇制粒，60℃烘干，整粒，包装，即得。鉴定得提取物中主要包括以下化合物：绿原酸、香叶木素、异鼠李素-3-O-葡萄糖苷、芦丁、木犀草苷、洋蓟酸、菊苣酸7种化合物。
实施例5
（1）取紫锥菊药材，加12倍量40%乙醇回流提取2次，每次2h，减压回收乙醇，浓缩至60℃相对密度为1.20的溶液，经聚酰胺柱层析，50%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，真空干燥，粉碎，得紫锥菊提取物。
（2）取金银花叶药材，加10倍量70%乙醇溶液回流提取3次，每次2h，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，真空干燥，粉碎，得金银花叶提取物。
（3）取黄芪药材，加6倍量水回流提取4次，每次1h，减压浓缩至60℃相对密度为1.03的溶液，再加95%乙醇至含醇量达90%，离心，取沉淀，真空干燥，粉碎，得黄芪提取物。
（4）取上述紫锥菊提取物42.6g，金银花叶提取物41.1g，黄芪提取物36.3g，加入辅料（重量比为4:1的蔗糖和糊精），混合均匀，总提取物与辅料重量比为1:2，50%乙醇制粒，60℃烘干，整粒，包装，即得。鉴定得提取物中主要包括以下化合物：绿原酸、香叶木素、异鼠李素-3-O-葡萄糖苷、芦丁、木犀草苷、洋蓟酸、菊苣酸7种化合物。
实施例6
（1）取紫锥菊药材，加14倍量60%乙醇回流提取2次，每次2h，减压回收乙醇，浓缩至60℃相对密度为1.03的溶液，经聚酰胺柱层析，90%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，真空干燥，粉碎，得紫锥菊提取物。
（2）取金银花叶药材，加14倍量50%乙醇溶液回流提取2次，每次3h，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，真空干燥，粉碎，得金银花叶提取物。
（3）取黄芪药材，加10倍量水回流提取2次，每次3h，减压浓缩至60℃相对密度为1.20的溶液，再加95%乙醇至含醇量达40%，离心，取沉淀，真空干燥，粉碎，得黄芪提取物。
（4）取上述紫锥菊提取物43.3g，金银花叶提取物43.9g，黄芪提取物35.8g，加入辅料（重量比为4:1的蔗糖和糊精），混合均匀，总提取物与辅料重量比为1:2，50%乙醇制粒，60℃烘干，整粒，包装，即得。鉴定得提取物中主要包括以下化合物：绿原酸、香叶木素、异鼠李素-3-O-葡萄糖苷、芦丁、木犀草苷、洋蓟酸、菊苣酸7种化合物。
实施例7
防治禽流感、提高鸡群免疫的中药的抗流感病毒试验
a.试验药物及材料
SPF级昆明种小鼠，18～22g，雌雄各半，山东大学实验动物中心提供。恒温水浴锅、不锈钢桶、秒表。病毒唑(利巴韦林)，四川百利药业有限责任公司，批号111005。
b.试验方法
流感病毒鼠肺适应株（FM1），由中国微生物菌种保藏管理委员会医学病毒中心提供，使用前接种10日龄鸡胚，常规培养48h收集尿囊液，测定血凝滴度为1:1280。测定其对小鼠的半数致死量(LD50)。
1对小鼠流感病毒性肺炎的影响
将体重为18～22g的小鼠60只，随机分为5组，雌雄各半，每组12只。第1组为正常对照组、第2组为病毒对照组，第3组为试验1组，第4组为试验2组，第5组为病毒唑对照组。药物组（第3-5组）于感染前1d开始滴鼻给药，0.05ml/次，2次/d，连续5d，对照组（第1-2组）给予同体积蒸馏水滴鼻。各组在乙醚轻度麻醉下流感病毒以LD50量感染鼠肺，感染后96h处死，称体重后，取出全肺，用生理盐水洗净，并用干净滤纸吸掉残余盐水，称重，计算肺指数值(每100g体重的肺质量，即肺指数=肺质量/体重×100)和肺指数抑制率[(病毒对照组平均肺指数—药物组平均肺指数)/病毒对照组平均肺指数×100%]，结果见表1：
表1 对小鼠流感病毒感染小鼠肺指数的影响
| 分组 | 剂量(g/kg体重) | 肺指数 | 抑制率（%） |
| 正常组 | -- | 0.75±0.10* | -- |
| 病毒对照组 | -- | 1.39±0.47 | -- |
| 试验1组 | 0.98 | 0.95±0.25* | 31.65 |
| 试验2组 | 1.04 | 0.98±0.38* | 29.50 |
| 病毒唑 | 0.20 | 0.92±0.21* | 33.81 |
注：与模型组比较*p<0.05
结果表明，各药物试验组及正常组与病毒对照组相比肺指数有显著差异（p<0.05）；试验1组疗效较试验2组好，且试验组肺指数与病毒唑组无明显差异。
2对小鼠体内流感病毒增殖的影响
在乙醚轻度麻醉下以流感病毒LD50量感染小鼠，感染前1d开始滴鼻给药，2次/d，0.05ml/只。在感染后48h，取肺，固定，制片，脱腊，先以FMl兔免疫血清浸染，冲洗后再加稀释的羊抗兔IgG荧光抗体(华美生物工程公司生产)，于荧光显微镜下观察细支气管数量，计算含有特异性荧光颗粒的细支气管数量，计算各组细支气管内含特异性荧光颗粒百分率(出现特异性荧光颗粒的细支气管数量/计数的细支气管总数×100%)，荧光阳性率高表明病毒颗粒增殖多，并进行统计学处理，结果见表2：
表2 对流感病毒增殖的影响
| 分组 | 剂量(g/kg体重) | N有（条） | N无（条） | P（%） |
| 病毒对照组 | -- | 218 | 138 | 61.24 |
| 试验1组 | 0.98 | 99 | 261 | 27.50 |
| 试验2组 | 1.04 | 102 | 247 | 29.23 |
| 病毒唑 | 0.20 | 93 | 255 | 26.72 |
注：N有:含有特异性荧光颗粒的细支气管数量；
N无:没有特异性荧光颗粒的细支气管数量；
p=N有/（N有+N无）
结果表明，各药物试验组与病毒对照组相比，药物试验组明显抑制病毒增殖；试验组与病毒唑组无明显差异，且试验1组荧光颗粒百分率较试验2组低。
3对流感病毒所致小鼠死亡的保护作用
将体重为18～22g的小鼠60只，随机分为5组，雌雄各半，每组12只。第1组为正常对照组、第2组为病毒对照组，第3组为试验1组，第4组为试验2组，第5组为病毒唑对照组。分别以LD50量滴鼻感染，给药组自感染病毒前1d开始到感染后4d，共滴鼻给药0.05ml/次，2次/d，病毒对照组滴鼻给予同体积蒸馏水，逐日观察动物发病和记录死亡数，共观察14d，计算死亡保护率[（对照组死亡率-给药组死亡率)×100%]、延长生命率[（给药组平均存活日数-对照组平均存活日数)/对照组平均存活日数×100%]，结果见表3：
表3 对流感病毒所致小鼠死亡的保护作用
注：与模型组比较*p<0.05,**p<0.01
结果表明，正常小鼠组无小鼠死亡，其余各组均有小鼠死亡；病毒对照组小鼠死亡最多，与其他4组比较差异显著（p<0.05）；试验组小鼠死亡率明显低于病毒对照组（p<0.01），而与病毒唑组无明显差异，且试验1组死亡率低于试验2组，病毒对照组小鼠的平均存活时间最短，与其他各组比较均有显著差异。
结论：以上抗流感病毒试验结果表明试验1组（即实施例1所得颗粒）对感染流感病毒的小鼠具有明显的抗病毒作用，与病毒唑组作用差异不大。
实施例8
重复实施例1，其不同之处仅在于，紫锥菊提取物改为30g，金银花叶提取物30g，黄芪提取物20g。
实施例9
重复实施例1，其不同之处仅在于，紫锥菊提取物改为45g，金银花叶提取物45g，黄芪提取物40g。
实施例10
抗流感病毒试验
1、试验药物及材料
SPF级11日龄鸡胚、禽流感病毒（H5亚型禽流感病毒QJ株）均由山东省农业科学院家禽所提供；恒温水浴锅、不锈钢桶、秒表。试验组1：给予实施例1所得颗粒，试验组2：给予实施例2所得颗粒，试验组3：给予实施例3所得颗粒。
2、试验方法与结果
各试验药物组（1.0mg/mL）与等量H5亚型禽流感病毒QJ株（100EID50/0.1mL）混匀，同时设生理盐水对照正常组（正常组）和接种0.1mL/胚的病毒对照，在生物安全柜中采用绒毛尿囊腔接种法接种11日龄SPF鸡胚，接种量0.2mL/胚，每个浓度接种5枚鸡胚，接种后石蜡封口，放于37℃温箱中孵育，每天翻肧2次，观察鸡胚生长情况并记录鸡胚死亡情况，弃去24h内的死胚，连续观察5d。将24h后死去的鸡胚放入4℃冰箱，次日无菌收集尿囊液3000r/min离心15min，取各鸡胚尿囊液进行血凝试验。5d后将所有鸡胚放入4℃冰箱过夜，次日进行血凝试验，记录不同时间段鸡胚死亡数、血凝滴度，结果见表4。
表4 抗禽流感病毒鸡胚试验结果（5枚/组）
“HA”：尿囊液血凝价。
结果表明，各药物试验组及正常组与病毒对照组相比，具有良好的抗禽流感病毒作用，且试验1、2组效果好于其他各组。
实施例11
1、免疫增强试验
6日龄罗斯308肉雏鸡（山东省农业科学院家禽所提供），选体重，发育及健康状况接近的300只，随机分为5组，每组60只。鸡传染性法氏囊病毒抗体（IBDV）检测试剂盒购自Biochek公司；鸡传染性法氏囊弱毒苗购自瑞普生物药业有限公司；白介素-2，ELISA检测试剂盒购自Biowen公司。
试验组1：给予实施例1所得颗粒，试验组2：给予实施例2所得颗粒，试验组3：给予实施例3所得颗粒。
将6日龄罗斯308肉雏鸡随机分为5组，第1～3组为试验药物组，第4组为对照一组：正常免疫不用药组，第5组为对照二组：不免疫不用药组。6日龄的肉雏鸡按剂量灌服药物，连续7d。13日龄进行鸡传染性法氏囊弱毒苗接种免疫。分别于13、20、27、34、41日龄时，每组随机取15只检测IBDV抗体；于20、27、34日龄时，每组随机取15只，心脏采血检测外周血中IL-2含量，记录数值，用Excel 2007和SPSS 13.0软件包进行处理，结果见表5～6。
表5 对试验鸡IBDV抗体水平的影响 log10
| 分组 | 13日龄 | 20日龄 | 27日龄 | 34日龄 | 41日龄 |
| 试验1组 | 2.278±0.011 | 3.984±0.056***### | 4.028±0.107***### | 4.113±0.063***### | 4.008±0.123***### |
| 试验2组 | 2.280±0.122 | 3.976±0.063***### | 4.000±0.094***### | 4.094±0.065***### | 4.033±0.121***### |
| 试验3组 | 2.258±0.011 | 2.976±0.063*** | 3.009±0.088** | 3.074±0.054*** | 2.979±0.085*** |
| 对照一组 | 2.245±0.012 | 2.816±0.111 | 2.847±0.166 | 2.874±0.200 | 2.033±0.121 |
| 对照二组 | 2.201±0.131 | 2.567±0.042 | 2.007±0.074 | 1.580±0.011 | 1.168±0.035 |
表6 对试验鸡的IL-2影响pg/mL
| 分组 | 20日龄 | 27日龄 | 34日龄 |
| 试验1组 | 81.04±3.516***### | 73.27±3.363***### | 67.96±3.323***## |
| 试验2组 | 79.71±3.150***### | 71.200±3.777***## | 64.627±4.767***# |
| 试验3组 | 68.043±3.134*** | 66.867±3.611*** | 67.760±2.772*** |
| 对照一组 | 61.043±6.512 | 53.709±3.163 | 51.043±4.738 |
注：*表示试验组与对照一组相比，#表示试验1组、2组与3组相比。
结果表明，各试验药物组均能显著提高IBDV抗体和IL-2水平，具有非常显著的免疫增强作用，而且试验1组和2组的效果优于试验3组。
Claims (8)
1.一种防治禽流感、提高鸡群免疫的中药颗粒，是由中药提取物和药学上可接受的辅料制成，其特征在于，所述中药提取物包括下述重量份的原料：紫锥菊提取物30～45份、金银花叶提取物30～45份和黄芪提取物20～40份。
2.根据权利要求1所述的防治禽流感、提高鸡群免疫的中药颗粒，其特征在于，所述紫锥菊提取物是取紫锥菊药材，加相当于紫锥菊8～14倍重量的浓度为40～80%的乙醇回流提取2～4次，每次0.5～2h，减压回收乙醇，60℃浓缩至相对密度为1.03～1.20的溶液，经聚酰胺柱层析，浓度为40～80%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，干燥，粉碎制得。
3.根据权利要求1所述的防治禽流感、提高鸡群免疫的中药颗粒，其特征在于，所述金银花叶提取物是取金银花叶药材，加相当于金银花8～14倍重量的浓度为50～90%的乙醇回流提取2～4次，每次1～3h，过滤，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，干燥，粉碎制得。
4.根据权利要求1所述的防治禽流感、提高鸡群免疫的中药颗粒，其特征在于，所述黄芪提取物是取黄芪药材，加相当于黄芪6～12倍重量的水回流提取2～4次，每次1～3h，60℃减压浓缩至相对密度为1.03～1.20的溶液，再加95%乙醇至含醇量达40～90%，离心，取沉淀，干燥，粉碎制得。
5.一种防治禽流感、提高鸡群免疫的中药颗粒的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
（1）取紫锥菊药材，加相当于紫锥菊8～14倍重量的浓度为40～80%的乙醇回流提取2～4次，每次0.5～2h，减压回收乙醇，60℃浓缩至相对密度为1.03～1.20的溶液，经聚酰胺柱层析，浓度为40～80%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，干燥，粉碎，制得紫锥菊提取物；
（2）取金银花叶药材，加相当于金银花8～14倍重量的浓度为50～90%的乙醇回流提取2～4次，每次1～3h，过滤，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，干燥，粉碎，制得金银花叶提取物：；
（3）取黄芪药材，加相当于黄芪6～12倍重量的水回流提取2～4次，每次1～3h，60℃减压浓缩至相对密度为1.03～1.20的溶液，再加95%乙醇至含醇量达40～90%，离心，取沉淀，干燥，粉碎，制得黄芪提取物；
（4）以重量计，将30～45份紫锥菊提取物、30～45份金银花叶提取物和20～40份黄芪提取物混匀，加入药学上可接受的辅料，制粒，干燥，即得。
6.根据权利要求5所述的防治禽流感、提高鸡群免疫的中药颗粒的制备方法，其特征在于，所述辅料为蔗糖和糊精，且蔗糖和糊精的重量比为1～4:1。
7.根据权利要求5或6所述的防治禽流感、提高鸡群免疫的中药颗粒的制备方法，其特征在于，辅料与总提取物的重量比为1.2～2.0：1。
8.根据权利要求5所述的防治禽流感、提高鸡群免疫的中药颗粒的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，用50%～90%乙醇制粒。
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