CN104208163B - 一种提高动物免疫力的中兽药组合物、应用及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种提高动物免疫力的中兽药组合物、应用及其制备方法,其原料药材由黄芪和女贞子组成,两种药材重量比例为3‑5:1,将原料药材混合,用万能粉碎机粉碎至80目,得到原料药材粗粉,再将药材粗粉用超微粉碎机在温度为‑10℃—‑20℃条件下粉碎至药物粒径为100—800目,即得。黄芪与女贞子组合具有滋阴益气的功效,是一种从整体上提升动物免疫能力的组合,与免疫抑制性疾病的发病机理和防治手段相契合,通过超微粉后的黄芪与女贞子组合具有有效成分溶出率高、生产工艺简单,质量可控等方面的优势。
Description
技术领域
本发明涉及中兽药领域,具体涉及一种提高动物免疫力的中兽药组合物、应用及其制备方法。
背景技术
目前,对于动物的疾病往往存在免疫抑制因素和混合感染的情况,加上对于某些动物疾病还没有能研发出有效的疫苗,所以临床对于动物的免疫系统疾病的处理手段相当匮乏。免疫抑制因素的存在,更是导致疫苗免疫失败的直接原因,病毒性的免疫抑制性因素会引起免疫抑制性疾病,包括猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟、猪圆环病毒、伪狂犬;饲料中的霉菌毒素污染和环境的应激也会导致机体的免疫系统损伤,导致免疫功能下降,对环境的抵抗力下降而发生免疫抑制性疾病。
因此,研发具有调动机体自身的防御系统,使动物的机体获得对外界环境变化的抵抗能力,同时消除免疫抑制因素,增加疫苗的免疫效力,治疗免疫抑制性疾病的方法,对于畜牧业的发展具有积极效应。
发明内容
为解决以上技术问题,本发明提供的技术方案是一种提高动物免疫力的中兽药组合物、应用及其制备方法。黄芪与女贞子组合具有滋阴益气的功效,是一种从整体上提升免疫能力的组合,与免疫抑制性疾病的发病机理和防治手段相契合,通过超微粉后的黄芪与女贞子组合具有有效成分溶出率高、生产工艺简单,质量可控等方面的优势。
本发明具体是通过以下三个方面的技术方案实现的:
第一方面,提供一种提高动物免疫力的中兽药组合物,原料药材由黄芪和女贞子组成,黄芪和女贞子重量比例为3—5:1。
优选的,黄芪和女贞子重量比例为4:1。
优选的,所述组合物的粒径范围为300—500目。
第二方面,提供一种提高动物免疫力的中兽药组合物在制备治疗免疫抑制性疾病的药物中的应用。
优选的,所述动物为猪。
优选的,所述免疫抑制性疾病为猪瘟或猪繁殖与呼吸综合症。
第三方面,提供一种提高动物免疫力的中兽药组合物的制备方法,包括如下的工艺流程:
(1)取适量黄芪与女贞子混合药材,用万能粉碎机粉碎至80目,得混合药材粗粉;
(2)取步骤(1)中的混合药材粗粉,用超微粉碎机在温度为-10℃—-20℃条件下粉碎至药物粒径为100—800目,即得。
优选的,步骤(2)中粉碎至药物粒径为300—500目。
本申请与现有技术相比,其详细说明如下:黄芪是研究明确的免疫增强剂,黄芪与女贞子的组合具有滋阴益气的功效,能从整体上提升动物免疫力。本申请中超微粉类型的散剂,药材粒度达到细胞破碎级,使药物细胞间和细胞内有效成分直接释放出来,提高药物中有效成分的溶出速度和溶出率,药效也相应增强,从而减少用药剂量,大大节约原料药材;同时本申请相对于颗粒剂而言,省去了蒸馏、过滤、浓缩、干燥等一系列步骤,生产工艺简单,省时省力。本申请能显著提高动物的免疫力,对动物的免疫抑制性疾病有显著的疗效。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案,下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。
实施例一
本申请组合物剂型、原料药材选择和配比的优选实验
一、药物制备
1、颗粒剂的制备
取黄芪和女贞子混合药材,黄芪与女贞子重量比分别为3:1,4:1,5:1(其中三种比例所对应的药材重量分别为:黄芪300g、女贞子100g,黄芪400g、女贞子100g,黄芪500g、女贞子100g)。使用70%的乙醇回流提取1h,过滤,药渣用10倍量水提取3次,每次1h,混合醇提取液和水提取液,旋转蒸发仪浓缩至稠膏,按照稠膏乳糖(1:3)制备软材,50℃干燥即得颗粒剂。将按照上述方法制备的颗粒剂编号为A,B,C。
取黄芪300g、400g、500g,女贞子100g,分别使用70%的乙醇回流提取1h,过滤,药渣用10倍量水提取3次,每次1h,混合醇提取液和水提取液,旋转蒸发仪浓缩至稠膏,按照稠膏乳糖(1:3)制备软材,50℃干燥即得颗粒剂,将四种颗粒剂分别编号为D、E、F、G。
2、超微粉的制备
取黄芪和女贞子混合药材,黄芪与女贞子重量比分别为3:1,4:1,5:1(其中三种比例所对应的药材重量分别为:黄芪300g、女贞子100g,黄芪400g、女贞子100g,黄芪500g、女贞子100g)。用万能粉碎机粉碎至80目,再用超微粉碎机在温度为-10℃—-20℃条件下粉碎至药物粒径约为500目,即得。将按照上述方法制备的组合物超微粉分别编号为H、I、J。
取黄芪300g、400g、500g,女贞子100g,分别用万能粉碎机粉碎至80目,再用超微粉碎机在温度为-10℃—-20℃条件下粉碎至药物粒径约为500目,即得。将按照上述方法制得的超微粉分别编号为K、L、M、N。
3、微粉颗粒的制备
取黄芪药材适量,用万能粉碎机粉碎至80目,然后使用超微粉碎机在温度为-10℃—-20℃条件下粉碎至药物粒径约为500目,制得黄芪超微粉。另取女贞子药材适量,使用70%的乙醇回流提取1h,过滤,药渣用10倍量水提取3次,每次1h,混合醇提取液和水提取液,旋转蒸发仪浓缩至稠膏,将黄芪超微粉和女贞子稠膏混合制粒,50℃干燥即得微粉颗粒。按照上述方法分别制备黄芪和女贞子重量比为3:1,4:1和5:1的微粉颗粒,分别编号为O、P、Q。
二、上述药物对免疫指标的恢复作用实验
(1)取18—22g小鼠380只,雌雄各半,分为19组,每组20只。其中分为1组正常组、1组模型组和17组实验组(A—Q)。
(2)实验室适应饲养一周后,模型组和实验组分别注射环磷酰胺150mg/kg,正常组注射等量生理盐水,连续两天。
其中,mg/kg表示:毫克环磷酰胺/千克动物体重。
(3)于第一次注射环磷酰胺开始,实验组分别灌胃给予A—Q药物的水分散液,正常组和模型组灌胃给予等量生理盐水,给药一周。实验过程中保持恒定的温度和适宜的光照。
(4)于末次给药后1h,测定小鼠的碳粒细胞吞噬率,并分别采集小鼠的脾脏、血浆和血清,测定脾脏指数,白细胞数量、淋巴细胞数量和血清干扰素-γ的浓度,数据使用spss19.0进行统计。
表1实施例一动物实验结果
分组 | 脾脏指数 | 吞噬指数 | 干扰素-γ | ||
正常组 | 0.393* | 3.96* | 4.95* | 1.82* | 0.052* |
模型组 | 0.268 | 2.43 | 2.67 | 1.05 | 0.035 |
A | 0.301 | 2.85* | 3.02 | 1.21 | 0.038 |
B | 0.356* | 3.46* | 4.25* | 1.53* | 0.041* |
C | 0.311* | 2.99 | 3.32* | 1.02 | 0.038 |
D | 0.309 | 2.54 | 2.69 | 1.13 | 0.039 |
E | 0.312* | 2.61 | 2.68 | 1.21 | 0.041* |
F | 0.304 | 2.44 | 2.63 | 1.19 | 0.039 |
G | 0.259 | 2.31 | 2.56 | 0.99 | 0.032 |
O | 0.376* | 3.68* | 4.86* | 1.68* | 0.048* |
P | 0.402* | 3.99* | 5.01* | 1.87* | 0.061* |
Q | 0.365* | 3.59* | 4.71* | 1.66* | 0.047* |
K | 0.314* | 2.38 | 2.87 | 1.24 | 0.039 |
L | 0.316* | 2.49 | 3.08 | 1.39* | 0.038 |
M | 0.322* | 2.58 | 3.11 | 1.42* | 0.039 |
N | 0.246 | 2.38 | 2.63 | 1.12 | 0.037 |
H | 0.312* | 2.83* | 3.05 | 1.23 | 0.039 |
I | 0.385* | 3.78* | 4.97* | 1.79* | 0.049* |
J | 0.313* | 2.96* | 3.22* | 1.12 | 0.041* |
注:*与模型组比较差异显著P<0.05
实验结果表明,环磷酰胺的免疫抑制作用非常明显,除正常组外,各组各项免疫指标均显著降低。各个剂型下,与单一黄芪和单一女贞子比较,黄芪和女贞子组合物效果都较优,女贞子有养阴、升高白细胞、抗炎的作用,女贞子的加入使黄芪提高免疫力作用增强,该组合物能将受到环磷酰胺影响的小鼠免疫系统各项免疫指标恢复到接近正常水平;而比较黄芪与女贞子的组合物的剂型,又以组合物超微粉这种剂型效果最好;在组合物超微粉中比较,又以黄芪和女贞子重量比4:1较优。
综上,申请的优选方案为黄芪和女贞子的组合物超微粉,其中黄芪与女贞子重量比为4:1最好,能将受到环磷酰胺影响的小鼠免疫系统各项免疫指标恢复到接近正常水平。
实施例二
本申请组合物超微粉的优选粒度范围实验
一、组合物的制备
(1)取黄芪和女贞子药材,重量比为4:1,使用万能粉碎机粉碎至80目,再用超微粉碎机在温度为-10℃—-20℃条件下粉碎,控制粉碎时间,过筛使药物的粒径分别为100—300目、300—500目和500—800目三个粒度范围,然后按照每袋100g分装在铝箔袋中备用,将三种不同粒度范围的组合物超微粉分别编号为A,B,C。
二、组合物超微粉对免疫指标的恢复作用实验
(1)取18—22g小鼠100只,雌雄各半,分为5组,每组20只,分别为正常组、模型组、100—300目(A)、300—500目(B)和500—800目(C)组。
(2)实验室适应饲养一周后,模型组、A组、B组、C组分别注射环磷酰胺50mg/kg.W,正常组注射等量灭菌生理盐水,连续两天。
其中,mg/kg.W表示:毫克环磷酰胺/千克动物体重.每周。
(3)于第一次注射环磷酰胺开始,A组、B组、C组灌胃给予组合物超微粉的水分散液,正常组和模型组灌胃给予等量生理盐水,给药一周。实验过程中保持恒定的温度和适宜的光照。
(4)于末次给药后1h,测定小鼠的碳粒细胞吞噬率并分别采集小鼠的脾脏、血浆和血清,测定脾脏指数,血常规仪白细胞数量、淋巴细胞数量和ELISA方法测定干扰素-γ的浓度,数据使用spss19.0进行统计。
表2实施例二动物实验结果
分组 | 正常组 | 模型组 | A | B | C |
脾脏指数 | 0.331* | 0.252 | 0.324* | 0.347* | 0.302* |
3.88* | 2.46 | 3.96* | 4.55* | 4.01* | |
5.05* | 2.72 | 5.86* | 6.01* | 5.94* | |
淋巴细胞 | 1.984* | 1.065 | 1.952* | 2.213* | 2.013* |
干扰素-γ | 0.053* | 0.034 | 0.069* | 0.084* | 0.066* |
注:*与模型组比较差异显著P<0.05
实验结果表明,粒度对于组合物超微粉的效果影响显著,但是并不是粒度越细效果越好,从已知的数据看,组合物超微粉的粒度范围在300—500目区间时,对恢复各项免疫指标的效果最好。也即,组合物超微粉的粒度优选方案为300—500目。
实施例三
本申请组合物超微粉对猪瘟病的治疗作用实验
一、药物制备
取黄芪和女贞子药材,重量比为4:1(其中黄芪400g,女贞子100g),使用万能粉碎机粉碎至80目,再用超微粉碎机在温度为-10℃—-20℃条件下粉碎,控制粉碎时间,过筛使药物的粒径在300—500目范围内,然后分装在铝箔袋中备用,编号为A。
分别取黄芪400g,女贞子100g,分别使用万能粉碎机粉碎至80目,再用超微粉碎机在温度为-10℃—-20℃条件下粉碎,控制粉碎时间,过筛使药物的粒径在300—500目范围内,然后分别分装在铝箔袋中备用,编号为B、C。
二、动物实验
随机选取体重相近的21日龄断奶仔猪100头,平均分为5组,分别为对照组、黄芪多糖组、A组、B组、C组。所有猪只于28日龄注射猪瘟细胞苗2头份,黄芪多糖组每吨饲料中添加市售黄芪多糖200g,A、B、C组每吨饲料中分别添加300—500目超微粉200g。逐日记录腹泻率和死亡率,并于35日龄采取猪的静脉血,
分离血清,使用ELISA试剂盒测定猪瘟抗体效价。
其中猪瘟细胞苗来源于武汉中博生物有限公司。
其中黄芪多糖从市场上购得,是黄芪的干燥根经提取、浓缩、纯化而成的水溶
性杂多糖,是黄芪发挥作用的主要成分。
表3实施例三动物实验结果
组别 | 原始头数 | 终末头数 | 死亡头数 | 腹泻头数 | 猪瘟抗体效价吸光度值 |
对照组 | 20 | 17 | 3 | 8 | 0.0612 |
黄芪多糖组 | 20 | 19 | 1 | 5 | 0.0682 |
A | 20 | 20 | 0 | 2 | 0.0951* |
B | 20 | 18 | 2 | 7 | 0.0725 |
C | 20 | 17 | 3 | 9 | 0.0693 |
注:*与对照组比较差异显著
从实验结果看,本申请的组合物组合物超微粉,不但能够显著提高猪瘟疫苗的抗体效价,即促进抗体的生成,同时能从整体上提高仔动物的抵抗力,减少死亡和腹泻,由于黄芪与女贞子的配伍,效果优于单一活性成分的黄芪和女贞子,并且优于目前市面上用于治疗猪瘟的黄芪多糖。
实施例四
本申请组合物超微粉对猪繁殖与呼吸综合症的治疗作用实验
一、药物制备
如实施例三所述的本申请组合物超微粉和单一成分黄芪、女贞子超微粉的制备方法。分别编号为A、B、C。
二、动物实验
邛崃某中型猪场,该场于2013年夏季爆发以猪繁殖与呼吸综合症为主的烈性疾病,发病猪表现为拒食,母猪流产和仔猪出生后呼吸困难。高热达40~4l℃,厌食和嗜睡,呼吸迫促呈腹式呼吸或过度呼吸。采集病猪血清,使用胶体金免疫试纸快速测定为猪繁殖与呼吸综合征病毒感染。
选取临床发病的猪120头,平均分为4组,分别为黄芪多糖组、A组、B组、C组,每组30头,黄芪多糖组500kg饮水中添加100g的黄芪多糖,A、B、C组500kg饮水中分别添加100g超微粉,其余处理相同,给药一周,逐日观察症状和死亡率。
其中黄芪多糖来源于市售,是黄芪的干燥根经提取、浓缩、纯化而成的水溶性杂多糖,是黄芪发挥作用的主要成分。
表4实施例四动物实验结果
组别 | 原始头数 | 死亡头数 | 有效头数 | 有效率 | 痊愈头数 | 治愈率 |
黄芪多糖组 | 30.00 | 11.00 | 19.00 | 0.63 | 17.00 | 0.57 |
A | 30.00 | 2.00 | 28.00 | 0.93 | 27.00 | 0.90 |
B | 30.00 | 8 | 22 | 0.73 | 21.00 | 0.70 |
C | 30.00 | 12 | 18 | 0.60 | 15.00 | 0.50 |
实验结果表明,本申请的组合物组合物超微粉在治疗猪繁殖与呼吸综合征过程中的效果显著,与单一活性成分的黄芪、女贞子比较,能大大提高病猪的存活率和治愈率,减少经济损失。说明黄芪和女贞子配伍,能够相互促进其功效的发挥,提高抗体水平,达到提升免疫力和治疗疾病的效果;同时其效果也优于目前市面上的黄芪多糖药物。
以上仅是本发明的优选实施方式,应当指出的是,上述优选实施方式不应视为对本发明的限制,本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明的精神和范围内,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (2)
1.一种提高动物免疫力的中兽药组合物的应用,其特征在于:用于制备治疗免疫抑制性疾病的药物,所述动物为猪,所述免疫抑制性疾病为猪瘟或猪繁殖与呼吸综合症,所述组合物由黄芪和女贞子组成,所述黄芪和女贞子重量比例为4:1,所述组合物的粒径范围在300-500目。
2.一种提高动物免疫力的中兽药组合物的制备方法,其特征在于:包括如下的工艺流程:
(1)取重量比例为4:1的黄芪与女贞子混合药材,用万能粉碎机粉碎至80目,得混合药材粗粉;
(2)取步骤(1)中的混合药材粗粉,用超微粉碎机在温度为-10℃--20℃条件下粉碎至药物粒径为300-500目即得。
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