JP2002356433A

JP2002356433A - 免疫賦活剤

Info

Publication number: JP2002356433A
Application number: JP2001161756A
Authority: JP
Inventors: Shuichi Tamauchi; 秀一玉内; Masahiro Murakami; 正裕村上; Suketsune Iwagaki; 丞恒岩垣; Yasukazu Nagato; 康和長戸; Chieko Murayama; 千恵子村山
Original assignee: Amato Pharmaceutical Products Ltd; Tokai Education Instruments Co Ltd
Current assignee: Amato Pharmaceutical Products Ltd; Tokai Education Instruments Co Ltd
Priority date: 2001-05-30
Filing date: 2001-05-30
Publication date: 2002-12-13

Abstract

(57)【要約】【課題】副作用の少ない新規な免疫賦活剤、並びに上
記免疫賦活剤を利用した免疫賦活のための飲食品を提供
すること。【解決手段】縮合度３〜２０の環状及び／又は鎖状の
ポリ乳酸混合物を含む免疫賦活剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、免疫賦活剤に関す
る。より詳細には、本発明は、例えば、ウイルスやバク
テリア等の微生物による感染症や各種悪性腫瘍などの予
防や治療に有効な医薬品、特定保健用食品、健康食品等
として用いることができる免疫賦活剤に関する。

【０００２】

【従来技術】生体内の免疫系は、細菌、酵母、カビ、ウ
イルスなどの微生物による感染や、腫瘍に対する防御に
重要な役割を果しており、その主要な機構は、Ｔリンパ
球やＢリンパ球などの免疫担当細胞がこれらの微生物や
腫瘍を抗原受容体を介して認識することにより刺激を受
け、抗原特異的に活性化し、これらの異物を排除する能
力を高めることである。常に微生物に曝され、また、細
胞が変異している生体内では、こうしたＴリンパ球およ
びＢリンパ球の活性化は常時起こっている。また、抗原
特異的な活性化の他に、Ｔリンパ球およびＢリンパ球の
活性化には、菌体成分やレクチン等を認識する受容体を
介する抗原非特異的な活性化がある。抗原特異的および
抗原非特異的のいずれの活性化においても、他からの刺
激が加わるとＴリンパ球およびＢリンパ球の活性化はさ
らに促進される。

【０００３】生体の免疫能力の低下に基づくと考えられ
る各種疾患には、例えば癌，各種病原微生物感染症など
があり、これらの疾患を予防もしくは治療する目的でこ
れまでに種々の免疫増強剤が報告されている。免疫担当
細胞を活性化して微生物感染や腫瘍に対する生体の防御
機構を高めることを目的として、各種の免疫賦活剤が使
用されているが、有効性において満足しうるものは少な
い。また、これらの免疫賦活剤の中には、生体にとって
好ましくない免疫応答を誘導し、種々のアレルギー反応
をはじめとする副作用を引き起こすという問題を伴なう
ものもある。

【０００４】一方、食品の開発において、長い間、その
一次機能及び二次機能、すなわち栄養的特性および嗜好
的特性が研究の二大分野を形成していたが、近年になっ
て、生理機能調節特性と呼ばれる三次機能が見出され、
科学的に解明されつつある特定の疾病の予防に役立つ食
品として機能性食品が注目されるようになってきた。免
疫増強効果を有する機能性食品も幾つか提案されてお
り、今後更なる研究が期待される分野となってきている

【０００５】これまでの研究により、縮合度３〜２０の
環状及び／又は鎖状のポリＬ−乳酸混合物は、抗悪性腫
瘍剤として有用であることが報告されている（特開平９
−２２７３８８号公報および特開平１０−１３０１５３
号公報）。しかしながら、縮合度３〜２０の環状及び／
又は鎖状のポリ乳酸混合物が免疫賦活作用を発揮するか
どうかの評価については報告されていない。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、副作用の少
ない新規な免疫賦活剤を提供することを解決すべき課題
とした。本発明はまた、上記免疫賦活剤を利用した免疫
賦活のための飲食品を提供することを解決すべき課題と
した。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために鋭意検討した結果、縮合度３〜２０の
環状及び／又は鎖状のポリ乳酸混合物(ＣＰＬ)の経口投
与による免疫賦活効果の一つとしてマウスにおける末梢
でのナチュラルキラー(Natural Killer : ＮＫ)細胞活
性への増強効果を検討し、ＣＰＬ経口摂取がナチュラル
キラー細胞を活性化することを見出した。さらに、本発
明者らは、ＣＰＬの腹腔投与によるナチュラルキラー細
胞活性への増強効果を検討した結果、一定量以上のＣＰ
Ｌの腹腔投与により経口摂取の場合と同様の増強効果が
得られることを見い出した。本発明はこれらの知見に基
づいて完成したものである。

【０００８】即ち、本発明によれば、縮合度３〜２０の
環状及び／又は鎖状のポリ乳酸混合物を含む免疫賦活剤
が提供される。本発明の免疫賦活剤は、ナチュラルキラ
ー細胞の活性化のために使用することができる。

【０００９】好ましくは、ポリ乳酸中における反復単位
である乳酸は実質的にＬ−乳酸から成る。好ましくは、
縮合度３〜２０の環状及び／又は鎖状のポリ乳酸混合物
は、乳酸を不活性雰囲気下で脱水縮合し、得られた反応
液のエタノールおよびメタノール可溶分を逆相カラムク
ロマトグラフィーに付し、ｐＨ２〜３の２５〜５０重量
％のアセトニトリル水溶液で溶離後、ｐＨ２〜３の９０
重量％以上のアセトニトリル水溶液で溶離した画分であ
る。

【００１０】好ましくは、脱水縮合を窒素ガス雰囲気
下、段階的減圧及び昇温により行う。好ましくは、逆相
カラムクロマトグラフィーを、ＯＤＳカラムクロマトグ
ラフィーにより行う。本発明の別の側面によれば、上記
した本発明の免疫賦活剤を含む、免疫賦活のための飲食
品並びに家畜用飼料及び飼料添加物が提供される。

【００１１】本発明のさらに別の側面によれば、免疫賦
活剤又は免疫賦活のための飲食品の製造における、縮合
度３〜２０の環状及び／又は鎖状のポリ乳酸混合物の使
用が提供される。本発明のさらに別の側面によれば、縮
合度３〜２０の環状及び／又は鎖状のポリ乳酸混合物の
有効量をヒトなどの哺乳動物に投与することを含む、免
疫を賦活するための方法が提供される。

【００１２】

【発明の実施の形態】以下、本発明の実施態様および実
施方法について詳細に説明する。本発明の免疫賦活剤
は、縮合度３〜２０の環状及び／又は鎖状のポリ乳酸混
合物を有効成分として含むものである。

【００１３】本発明の免疫賦活剤は、ナチュラルキラー
細胞（ＮＫ細胞）を活性化することができ、これにより
生体の免疫能力を増強させる。なお、本発明でいう免疫
賦活とは、生体の有する免疫機能を活性化する効果だけ
ではなく、何らかの理由で生体の免疫機能が低下してい
る場合には、その機能を通常の状態まで回復させる効果
をも含むものである。

【００１４】ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）は、腫
瘍細胞及びウイルスに対する防御作用を発揮するリンパ
球の一種である。ＮＫ細胞は、ＤＣ５６及びＤＣ１６マ
ーカーの存在及びＤＣ３マーカーの欠如によって同定す
ることができる。ＮＫ細胞は、免疫適合宿主又は免疫抑
制された宿主において抗原非特異的抗腫瘍免疫に関与
し、原発性腫瘍や転移性腫瘍の発生の防止に寄与してい
る。このようにＮＫ細胞は抗原非特異的細胞傷害活性を
有するため、エフェクター細胞として養子免疫に用いる
ことも可能である。本発明の免疫賦活剤はナチュラルキ
ラー細胞を活性化することができるので、これにより腫
瘍細胞やウイルスに対する防御作用を発揮することがで
きる。

【００１５】本発明でいうＮＫ細胞の活性化とは、特
に、ＮＫ細胞の細胞傷害活性の増大及び／又はサイトカ
イン（ＩＬ−２、ＩＦＮγ等）の産生を意味する。これ
ら２つのパラメータは、当業者に公知の実施例に記載し
た方法に従って容易に測定可能である。

【００１６】本発明の免疫賦活剤は、感染やストレスな
どによる生体の免疫能力の低下に基づくと考えられる各
種疾患を予防するために使用することができ、例えば、
病原性細菌やウイルスの感染防御や癌の予防などを目的
として使用することができる。より具体的には、本発明
の免疫賦活剤は、哺乳動物（例えば、マウス、ネコ、イ
ヌ、牛、馬、羊、山羊、家兎、ヒトなど）に対して免疫
賦活作用を発揮し、ナチュラルキラー細胞の活性化によ
り、各種ウィルス感染症や腫瘍の治療または予防に有用
である。例えば、本発明の免疫賦活剤を腫瘍を保持する
哺乳動物に投与することにより、延命効果を発揮するこ
とができる場合がある。本発明の免疫賦活剤を用いるこ
とができる対象疾患としては、各種白血病、悪性リンパ
腫、骨肉腫、悪性黒色腫、悪性絨毛上皮、筋肉腫、卵巣
癌、子宮癌、前立腺癌、膵癌、胃ならびに腸などの消化
器癌、肺癌、食道癌、頚頭部腫瘍、脳腫瘍、肝癌などの
ウィルス性腫瘍などが挙げられるが、これらに限定され
るものではない。

【００１７】本発明の免疫賦活剤を病原性細菌やウイル
スの感染などに先立って予め摂取しておくと、感染しに
くく、また、感染しても治りやすいという予防的作用を
有する。従って、本発明の免疫賦活剤は、健康食品や医
薬品として日頃から摂取しておくことも好ましい。

【００１８】本発明の免疫賦活剤及び免疫賦活のための
飲食品においては、縮合度３〜２０の環状及び／又は鎖
状のポリ乳酸混合物が有効成分として用いられる。本明
細書で言う「ポリ乳酸混合物」とは、縮合度３〜２０の
環状及び／又は鎖状のポリ乳酸が任意の割合で存在する
混合物を意味する。即ち、「混合物」という用語は、縮
合度３〜２０の何れかを有するポリ乳酸の混合物である
ことを意味すると同時に、環状および鎖状のポリ乳酸の
混合物を含む概念としても用いられる。このような「ポ
リ乳酸混合物」は、本明細書中以下に述べるように、乳
酸を脱水縮合し、適当な方法で精製することにより得る
ことができる。なお、本明細書では便宜上「ポリ乳酸混
合物」という用語を用いたが、この中には一定の縮合度
を有する環状のポリ乳酸または一定の縮合度を有する鎖
状のポリ乳酸といった単一成分から成るポリ乳酸も含ま
れる。縮合度とは、ポリ乳酸中における反復単位である
乳酸単位の数を意味する。例えば、環状のポリ乳酸は下
記の構造式を有することが推測されるが、式中のｎが縮
合度を表す（即ち、ｎ＝３〜２０）。

【００１９】

【化１】

【００２０】本明細書で単に「乳酸」と称する場合、こ
の乳酸にはＬ−乳酸、Ｄ−乳酸またはこれらの任意の割
合の混合物の全てが包含される。本発明においては好ま
しくは、乳酸は実質的にＬ−乳酸から成る。ここで言う
「実質的に」とは、ポリ乳酸混合物中におけるＬ−乳酸
単位の比率［即ち、（Ｌ−乳酸単位数／Ｌ−乳酸単位数
＋Ｄ−乳酸単位数）×１００］が、例えば７０％以上、
好ましくは８０％以上、より好ましくは８５％以上、さ
らに好ましくは９０％以上、特に好ましくは９５％以上
であることを意味する。なお、ポリ乳酸混合物中におけ
るＬ−乳酸単位の比率は、出発物質として使用する乳酸
中に存在するＬ−乳酸とＤ−乳酸の比率に依存する。

【００２１】縮合度３〜２０の環状及び／又は鎖状のポ
リ乳酸混合物の製造方法は、特に限定されるものではな
いが、例えば、特開平９−２２７３８８号公報、特開平
１０−１３０１５３号公報、または特願平１１−３９８
９４号明細書（これらの特許明細書に記載の内容は全て
引用により本明細書の開示として含める。）などに記載
の製造方法により得ることができる。より具体的には、
例えば、縮合度３〜２０の環状及び／又は鎖状のポリ乳
酸混合物は、下記の方法Ａにより得ることができる。

【００２２】方法Ａ：先ず、乳酸（好ましくは、実質的
にＬ−乳酸から成る乳酸）を不活性雰囲気下で脱水縮合
させる。不活性雰囲気としては、例えば、窒素ガス、ア
ルゴンガスなどが挙げられるが、窒素ガスを用いるのが
好ましい。脱水縮合反応は、常圧〜１ｍｍＨｇ程度の減
圧下、１１０〜２１０℃、好ましくは１３０〜１９０℃
の温度で行われるが、段階的減圧および段階的昇温によ
って行うのが特に好ましい。反応時間は適宜設定できる
が、例えば１〜２０時間反応を行うことができる。段階
的減圧および段階的昇温を用いる場合には、反応時間を
２以上から成る部分的な反応時間に分け、それぞれの部
分において圧力と温度を設定して反応を行う。段階的減
圧を用いる場合は、例えば、常圧→１５０ｍｍＨｇ→３
ｍｍＨｇと減圧することができ、段階的昇温を用いる場
合は、例えば、１４５℃→１５５℃→１８５℃と昇温す
ることができる。実際には、これらを組み合わせて、例
えば、１４５℃で常圧で３時間、１４５℃で１５０ｍｍ
Ｈｇで３時間、１５５℃で３ｍｍＨｇで３時間そして１
８５℃で３ｍｍＨｇで１．５時間反応を行うことができ
る。

【００２３】次いで、この脱水縮合反応により得られた
反応混合物にエタノールおよびメタノールを加え、濾過
して濾液を乾燥してエタノールおよびメタノール可溶分
が得られる。即ち、本明細書で言う「エタノールおよび
メタノール可溶分」とはエタノールとメタノールの混合
液に可溶な画分を意味する。なお、エタノールおよびメ
タノール可溶分を得る際には、脱水縮合反応の反応混合
物をエタノールおよびメタノールと混合するが、その際
のエタノールとメタノールの比率は適宜設定することが
でき、例えばエタノール：メタノール＝１：９である。
なお、反応混合物にエタノールとメタノールを添加する
順番、方法などは限定されず、適宜選択することがで
き、例えば、脱水縮合反応の反応混合物に先ずエタノー
ルを添加し、次いでメタノールを添加することができ
る。

【００２４】上記で得られたエタノール・メタノール可
溶分を逆相カラムクロマトグラフィー、特にオクタデシ
ルシラン（ＯＤＳ）カラムを用いたクロマトグラフィー
に付し、まずｐＨ２〜３の２５〜５０重量％のアセトニ
トリル水溶液で溶離する画分を除去し、次いでｐＨ２〜
３の９０重量％以上のアセトニトリル水溶液、好ましく
は９９重量％以上のアセトニトリル水溶液で溶離してく
る画分を採取すると、縮合度３〜２０の環状及び／又は
鎖状のポリ乳酸混合物が得られる。上記のようにして得
られた環状及び／又は鎖状のポリ乳酸混合物は、水酸化
ナトリウムなどのアルカリ物質で中和し、減圧乾燥後、
常法により下記に述べるような所望の形態に製剤化する
ことができる。

【００２５】本発明で用いる縮合度３〜２０の環状及び
／又は鎖状のポリ乳酸混合物を製造するための別法とし
ては、例えば、特願平１１−２６５７１５号明細書に記
載された方法（方法Ｂとする）または特願平１１−２６
５７３２号明細書に記載された方法（方法Ｃとする）を
挙げることができる（これらの特許明細書に記載の内容
は全て引用により本明細書の開示として含める。）。以
下、方法Ｂおよび方法Ｃについて具体的に説明する。

【００２６】方法Ｂ：この方法は、ラクチドをＲＹＬｉ
（式中、Ｒは脂肪族基又は芳香族基を示し、Ｙは酸素原
子又はイオウ原子を示す）で表されるリチウム化合物の
存在下で重合させることによって環状乳酸オリゴマーを
製造する方法である。重合反応を実施する場合、リチウ
ム化合物（ＲＹＬｉ）の使用割合は、ラクチド１モル当
たり、１〜０．１モル、好ましくは０．２〜０．３モル
の割合である。反応温度は−１００〜０℃、好ましくは
−７８〜−５０℃である。反応は、−７８〜−５０℃の
温度で開始し、徐々に室温にまで昇温させるように実施
するのが好ましい。反応は、好ましくは反応溶媒の存在
下で実施される。反応溶媒としては、テトラヒドロフラ
ン等の環状エーテルの他、ジエチルエーテル、ジメトキ
シエタン等を用いることができる。反応雰囲気として
は、窒素ガスやアルゴン等の不活性ガス雰囲気が用いら
れる。反応圧力は特に制約されず、好ましくは常圧であ
る。

【００２７】なお、上記のようにして得られる乳酸オリ
ゴマーの組成（即ち、環状乳酸オリゴマーと鎖状乳酸オ
リゴマーの混合比率）は、反応助剤として用いるリチウ
ム化合物によって変動する。リチウム化合物として炭素
数１〜３のアルキルアルコールのリチウム化合物（ＲＯ
Ｌｉ）（式中、Ｒは炭素数１〜３のアルキル基）を用い
る場合には、環状乳酸オリゴマーと鎖状オリゴマーとの
混合物（環状乳酸オリゴマーの割合：８０〜８５重量
％）が得られる。一方、リチウム化合物としてｔ−ブチ
ルアルコール等の炭素数４以上のアルキルアルコールの
リチウム化合物や、チオフェノール化合物を用いるとき
には、実質的に環状乳酸オリゴマーのみを選択的に得る
ことができる。

【００２８】方法Ｃ：この方法は、（ｉ）乳酸を３５０
〜４００ｍｍＨｇの圧力条件で１２０〜１４０℃の範囲
の温度に加熱し、脱水縮合反応させるとともに、ラクチ
ドを留出させずに副生水のみを留出除去する第１加熱工
程、（ｉｉ）該第１加熱工程終了後、反応生成物を１５
０〜１６０℃の温度に加熱し、該反応圧力を降圧速度
０．５〜１ｍｍＨｇ／分で１５〜２０ｍｍＨｇまで降下
させるとともに、その降圧に際し、ラクチドの留出を回
避させながら副生水のみを留出除去し、該反応圧力が１
５〜２０ｍｍＨｇに降下後、同圧力条件及び反応温度１
５０〜１６０℃においてさらに反応を継続して鎖状乳酸
オリゴマーを主成分とする脱水縮合物を生成させる第２
加熱工程、（ｉｉｉ）該第２加熱工程終了後、０．１〜
３ｍｍＨｇの圧力条件で１５０〜１６０℃で加熱して該
鎖状乳酸オリゴマーを環化させ、環状オリゴマーを生成
させる第３加熱工程、からなることを特徴とする方法で
ある。

【００２９】この方法では先ず、第１加熱工程におい
て、減圧下において乳酸を加熱し、脱水縮合反応させ
る。この場合の反応時間は３〜１２時間、好ましくは５
〜６時間である。この第１加熱下での反応は、その反応
を円滑に進行させるために、乳酸の脱水縮合により生成
する副生水を留去させるが、この場合、乳酸２分子の脱
水縮合物であるラクチドが留去しないように実施する。
このためには、反応圧力を減圧、好ましくは３００〜５
００ｍｍＨｇ、より好ましくは３５０〜４００ｍｍＨｇ
に保持し、この圧力条件下において、１００〜１４０
℃、好ましくは１３０〜１４０℃の範囲に加熱するのが
よい。この第１加熱工程での反応により、主に、乳酸の
３〜２３分子の脱水縮合物を主成分とする反応生成物が
生じる。

【００３０】上記第１加熱工程の終了後、第２加熱工程
において、高められた平均重合度のオリゴマーが得られ
るように、前記第１加熱工程における反応温度よりも高
められた温度、好ましくは１４５〜１８０℃、より好ま
しくは１５０〜１６０℃の温度に加熱するとともに、反
応圧力を１０〜５０ｍｍＨｇ、好ましくは１５〜２０ｍ
ｍＨｇの圧力に降下させてさらに脱水縮合反応を継続す
る。

【００３１】この反応も、前記第１加熱工程の反応の場
合と同様に、反応を円滑に進行させるために副生水を留
去させるが、ラクチドが留去しない条件で実施する。反
応圧力を前記範囲の圧力にまで降下させる速度（降圧速
度）は、ラクチドの留出を回避し、且つ反応効率を高め
るためには、０．２５〜５ｍｍＨｇ／分、好ましくは
０．５〜１ｍｍＨｇ／分の範囲に保持することが通常は
必要である。前記範囲より低い降圧速度では、その所定
圧まで降圧させるのに必要な時間が長くなるため好まし
くなく、一方、前記範囲より高い降圧速度では、ラクチ
ドが副生水とともに留去するようになるので好ましくな
い。

【００３２】反応圧力が所定圧力にまで降下後、この反
応圧力において、さらに反応を継続する。この場合の加
熱時間は、３〜１２時間、好ましくは５〜６時間であ
る。前記第２加熱工程での反応により、平均重合度が３
〜３０、好ましくは３〜２３の乳酸オリゴマーが得られ
るが、この場合のオリゴマー中の環状オリゴマーの割合
は、通常、７０〜８０重量％程度である。

【００３３】上記第２加熱工程終了後、第３加熱工程に
おいて、反応圧力を０．２５〜５ｍｍＨｇ、好ましくは
０．５〜１ｍｍＨｇに保持し、１４５〜１８０℃、好ま
しくは１５０〜１６０℃の温度でさらに反応を継続す
る。反応時間は３〜１２時間、好ましくは５〜６時間で
ある。この場合に生じる副生水も留去させる。この場
合、ラクチドの留去も回避させることが好ましいが、反
応生成物にはラクチドは殆んど含まれないので、その降
圧速度を格別遅くする必要はない。前記第３加熱工程で
の反応により、平均重合度３〜３０、好ましくは３〜２
３で、かつ環状オリゴマーの割合が９０重量％以上、好
ましくは９９重量％以上の乳酸オリゴマーが生成され
る。なお、上記方法Ａ、ＢおよびＣは本発明で用いるポ
リ乳酸混合物の製造方法の具体例の一部を示したものに
すぎず、本発明においては他の方法で製造されたポリ乳
酸混合物を用いることもできる。

【００３４】本発明の免疫賦活剤は、他の化学療法剤お
よび／または他の免疫療法剤と併用することもできる。
他の化学療法剤としては、マイトマイシン、アドリアマ
イシン、シスプラチン、ビンデシン、ビンクリスチン、
サイクロフォスファミド、イフォマファミド、ブレオマ
イシン、ペプレオマイシンもしくはエトポシドのような
制癌剤が挙げられる。また他の免疫療法剤としては、微
生物もしくは細菌細胞壁骨核成分；免疫活性多糖天然型
もしくは遺伝子工学手法で得られるサイトカイン；また
はコロニー刺戟因子のようなものが挙げられ、上記免疫
活性多糖としてはレンチナンもしくはシゾフィラン等
が、細菌細胞壁骨核成分としてはムラミルジペプチド誘
導体等が、微生物としては乳酸菌等が、また天然型もし
くは遺伝子工学手法で得られるサイトカインとしてはイ
ンターフェロン等が挙げられる。

【００３５】本発明の免疫賦活剤は、前記の成分に加え
てさらに必要に応じ、本発明の効果を損なわない範囲内
で、医薬品類、医薬部外品類などの製剤に使用される成
分や添加剤を任意に選択・併用して製造することができ
る。本発明の免疫賦活剤は、単独の医薬品類として使用
できる以外に、医薬品類や医薬部外品類などに配合して
用いることもできる。また、本発明の免疫賦活剤は他の
機能性食品と一緒に配合にて用いたり、併用することが
できる。

【００３６】本発明の免疫賦活剤の形態は特に限定され
ず、経口投与又は非経口投与用の製剤形態の中から目的
に最も適した適宜の形態のものを選択することが可能で
ある。経口投与に適した製剤形態としては、例えば、錠
剤、カプセル剤、散剤、ドリンク剤、顆粒剤、細粒剤、
シロップ剤、溶液剤、乳剤、懸濁剤、チュアブル剤など
を挙げることができ、非経口投与に適する製剤形態とし
ては、例えば、注射剤（皮下注射、筋肉内注射、又は静
脈内注射など）、外用剤、点滴剤、吸入剤、噴霧剤など
が挙げられるが、これらに限定されることはない。

【００３７】経口投与に適当な液体製剤、例えば、溶液
剤、乳剤、又はシロップ剤などは、水、ショ糖、ソルビ
ット、果糖などの糖類、ポリエチレングリコール、プロ
ピレングリコールなどのグリコール類、ごま油、オリー
ブ油、大豆油などの油類、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エス
テル類などの防腐剤、ストロベリーフレーバー、ペパー
ミントなどのフレーバー類などを用いて製造することが
できる。また、カプセル剤、錠剤、散剤、又は顆粒剤な
どの固体製剤の製造には、乳糖、ブドウ糖、蔗糖、マン
ニットなどの賦形剤、澱粉、アルギン酸ソーダなどの崩
壊剤、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの滑沢
剤、ポリビニールアルコール、ヒドロキシプロピルセル
ロース、ゼラチンなどの結合剤、脂肪酸エステルなどの
界面活性剤、グリセリンなどの可塑剤などを用いること
ができる。

【００３８】非経口投与に適当な注射用又は点滴用の製
剤は、好ましくは、受容者の血液と等張な滅菌水性媒体
に有効成分である上記の物質を溶解又は懸濁状態で含ん
でいる。例えば、注射剤の場合、塩溶液、ブドウ糖溶
液、又は塩水とブドウ糖溶液との混合物からなる水性媒
体などを用いて溶液を調製することができる。腸内投与
のための製剤は、例えば、カカオ脂、水素化脂肪、又は
水素化カルボン酸などの担体を用いて調製することがで
き、座剤として提供される。また、噴霧剤の製造には、
有効成分である上記の物質を微細な粒子として分散させ
ることができ、受容者の口腔および気道粘膜を刺激せ
ず、かつ有効成分の吸収を容易ならしめる担体を用いる
ことができる。担体としては、具体的には、乳糖又はグ
リセリンなどが例示される。有効成分である物質及び使
用する担体の性質に応じて、エアロゾル又はドライパウ
ダーなどの形態の製剤が調製可能である。これらの非経
口投与用製剤には、グリコール類、油類、フレーバー
類、防腐剤、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、界面活
性剤、可塑剤などから選択される１種又は２種以上の飲
食品を添加することもできる。

【００３９】本発明の免疫賦活剤の投与量及び投与回数
は、投与の目的、投与形態、摂取者の年齢、体重又は性
別などの条件などを含む種々の要因により適宜設定する
ことができるが、一般的には、有効成分の投与量として
一日当り１〜１０，０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１０
〜２０００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは１０〜２００ｍ
ｇ／ｋｇである。上記投与量の製剤を一日１〜４回程度
に分けて投与することが好ましい。本発明の免疫賦活剤
の投与時期は特に限定されず、微生物感染の前でも後で
もよい。

【００４０】本発明はさらに、縮合度３〜２０の環状及
び／又は鎖状のポリ乳酸混合物を含む免疫賦活のための
飲食品にも関する。即ち、本発明で用いる縮合度３〜２
０の環状及び／又は鎖状のポリ乳酸混合物は、上記した
ような単独の製剤の形態で使用するのみならず、飲食品
の中に配合して用いることができる。本発明の免疫賦活
のための飲食品は、ポリ乳酸混合物を分解させることな
く配合し得るものであれば、その配合形態には特に制限
はない。

【００４１】本発明による免疫賦活のための飲食品の製
品の具体例としては、清涼飲料、ドリンク剤、健康食
品、特定保健用食品、機能性食品、機能活性型食品、栄
養補助食品、サプレメント、飼料、飼料添加物などと一
般に呼称される、飲料を含む健康食品または補助食品が
挙げられる。また、本発明の免疫賦活剤は、獣医薬、餌
飼料、家畜用飼料及び飼料添加物等として用いることも
できる。

【００４２】飲食品の具体例としては、例えば、チュー
インガム、チョコレート、キャンディー、錠菓、ゼリ
ー、クッキー、ビスケット、ヨーグルト等の菓子類、ア
イスクリーム、氷菓等の冷菓類、茶、清涼飲料（ジュー
ス、コーヒー、ココア等を含む）、栄養ドリンク剤、美
容ドリンク剤等の飲料、パン、ハム、スープ、ジャム、
スパゲティー、冷凍食品など任意の飲食品を挙げること
ができる。あるいは、本発明で用いるポリ乳酸混合物は
調味料又は食品添加剤などに添加して用いることもでき
る。本発明の免疫賦活のための飲食品を摂取することに
より免疫賦活効果が発揮され、実質的に有害な副作用を
示さない安全な飲食品を提供することができる。本発明
の免疫賦活のための飲食品は、ポリ乳酸混合物を、食品
に使われる一般的な原料に直接混合、分散したのち、公
知の方法により所望の形態に加工することによって得る
ことができる。

【００４３】本発明の免疫賦活のための飲食品はあらゆ
る形態の飲食品を包含するものであり、その種類は特に
制限されず、上記したような各種飲食物、あるいは各種
栄養組成物、例えば各種の経口又は経腸栄養剤や飲料等
に、本発明の免疫賦活剤を配合して飲食品として提供す
ることができる。このような飲食品の組成としては、縮
合度３〜２０の環状及び／又は鎖状のポリ乳酸混合物の
他に、蛋白質、脂質、糖質、ビタミン及び／又はミネラ
ル類などを含めることができる。飲食品の形態は特に限
定されず、摂取しやすい形態であれば、固形、粉末、液
体、ゲル状、スラリー状等のいずれであってもよい。

【００４４】飲食品中におけるポリ乳酸混合物の含有量
は特には限定されないが、一般的には０．１〜２０重量
％、より好ましくは０．１〜１０重量％程度である。飲
食品に含まれるポリ乳酸混合物の量は、本発明の目的と
する免疫賦活作用を発揮できる程度に含まれることが好
ましく、好ましくは摂取される飲食物１食中に０．１ｇ
から１０ｇ程度、より好ましくは０．５ｇから３ｇ程度
である。以下の実施例により本発明をさらに具体的に説
明するが、本発明は実施例によっていかなる点において
も限定されることはない。

【００４５】

【実施例】製造例１：ポリ乳酸混合物（以下、ＣＰＬと
も称する）の製造マントルヒーターに収めたセパラブルフラスコにＬ−乳
酸（Ｄ−乳酸も混入しているもの）５００ｍｌを入れ
た。窒素ガス３００ｍｌ／分の流入及び撹拌を行い、溜
出水は保温した下降型接続管を経て還流冷却器付フラス
コに導きながら、１４５℃で３時間加熱した。更に１５
０ｍｍＨｇに減圧して同温度で３時間加熱した後、３ｍ
ｍＨｇの減圧下１５５℃で３時間、最後に３ｍｍＨｇの
減圧下１８５℃で１．５時間加熱し、反応生成物である
ポリ乳酸を得た。得られたポリ乳酸は１００℃に保ち、
エタノール１００ｍｌに続いてメタノール４００ｍｌを
それぞれ加えた後放冷した。これをメタノール５００ｍ
ｌ中に加え、よく撹拌して静置した後濾過して精製し
た。その濾液を減圧乾燥してアセトニトリルに溶解し、
全量を２００ｍｌ（原液）とした。

【００４６】この原液を、予め平衡化した逆相ＯＤＳカ
ラム（TSK ｇｅｌ ODS−８０TM）にかけ、０．０１Ｍ
塩酸を含む３０％、５０％および１００％アセトニトリ
ル（ｐＨ２．０）でステップワイズに溶離し、アセトニ
トリル１００％溶出画分であるポリ乳酸（縮合度３〜２
０）を得た。得られた物質の質量スペクトルを図１に示
す。図１中の規則的なフラグメントイオンピークから明
らかなように、得られたポリ乳酸の混合物は、環状縮合
体を主体とし、直鎖状縮合体が少量混在した状態になっ
ている。

【００４７】試験例１：試験例１では、環状ポリ乳酸
(ＣＰＬ) の経口摂取による生体免疫反応、特に抗腫瘍
活性を示すエフェクター細胞の一つであるナチュラルキ
ラー（Natural Killer:ＮＫ）の活性について検討を加
えた。（材料および方法）６週令雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスにＣ
ＰＬ含有飼料を２〜６週間自然経口摂取させた。ＣＰＬ
の飼料への含有量は０．１％と１．０％の２種類を用い
た。脾臓細胞は脾臓摘出後細胞浮遊液とし、腸管上皮リ
ンパ球(Intraepithelial lymphocytes: IEL)は常法に従
って分離後、Precollにて精製したものを用いた。ＮＫ
活性は、その標的細胞であるリンホーマ（ＹＡＣ−１）
を⁵¹Ｃｒナトリウム溶液で標識し、エフェクター細胞と
１００：１、５０：１、２５：１の割合で混ぜて３７
℃、ＣＯ₂インキュベーターにて４時間反応後の培養上
清中の放射活性をγカウンターで測定して細胞障害活性
を算出した。また、サイトカインの検出は、細胞内サイ
トカイン染色を用い、分離した細胞をBreferdinで４〜
６時間処理した後、リンパ球表面抗原（ＣＤ４もしくは
ＣＤ８）に対する抗体で染色し、パラホルムアルデヒ
ド溶液で固定後サポニンで細胞膜に穴を開けて蛍光標識
抗サイトカイン抗体にて染色を行い、自動細胞分析装置
(FACScan)にて二次元解析を行った。

【００４８】（結果および考察）ＣＰＬの自然経口摂取
によって、脾臓中のＮＫ活性が、未摂取群の活性値に対
して３０‐４０％増強された。０．１％と１．０％摂取
群の間では差は認められず共に同程度のＮＫ活性を示し
た。lymphokine activated killer(ＬＡＫ)活性は、認
められなかった。細胞数に変化は認められなかった。ま
た、サイトカインの産生を細胞内染色で見た場合、CD8+
IL-2+細胞が、未摂取群の約２〜５倍増加していた。Ｉ
ＥＬに関しては、軽度のＮＫ活性が認められ、細胞数の
変化は認められなかった。以上のことより、ＣＰＬの経
口摂取は腸管および脾臓中のNK活性を増強することが明
らかになった。

【００４９】試験例２：試験例２では、腹腔内投与によ
るＮＫ活性の増強効果について検討した。

【００５０】（材料および方法）６週令雌Ｃ５７ＢＬ／
６マウスの腹腔にＣＰＬ４ｍｇ／ｍｏｕｓｅの濃度で隔
日で１０回投与した。最終投与２日後に脾臓を摘出し細
胞浮遊液にして、ＮＫ活性は、ＹＡＣ−１、ＬＡＫ活性
はＲＤＭ４を⁵¹Ｃｒナトリウム溶液で標識し、エフェク
ター細胞と標的細胞を１００：１、５０：１、２５：１
の割合で混ぜて３７℃、ＣＯ₂インキュベータにて４時
間反応後の培養上清中の放射活性をγカウンターで測定
して細胞障害活性を算出した。また、ＣＰＬの最終投与
濃度がその半量であるマウスについても同様に検討を加
えた。

【００５１】（結果および考察）（１）図２に、ＣＰＬ腹腔投与によるＣ５７ＢＬ／６マ
ウス脾臓の細胞数とＮＫ活性およびＬＡＫ活性の検討の
結果を示す。６週令雌マウスに１回４ｍｇのＣＰＬを隔
日に投与し、最終投与２日後に脾臓を摘出して細胞数と
ＮＫおよびＬＡＫ活性を測定した。ａ）４０ｍｇのＣＰＬ投与時の脾細胞数。溶媒:ＤＭＳ
Ｏ４０ｍｇのＣＰＬを投与したマウス脾臓のＮＫ活性及び
ＬＡＫ活性を、ｂ）ＹＡＣ−１（ＮＫ活性）、ｃ）ＲＤ
Ｍ４（ＬＡＫ活性）およびｄ）ＥＬ−４（ＮＫ・ＬＡＫ
非感受性）を標的細胞として⁵¹Ｃｒ-release法にて測定
した。図２の結果から分かるように、総投与量４０ｍｇ
のＣＰＬの腹腔投与において脾細胞数は対照群（通常
食）と差は認められなかった。しかし、ＮＫ活性および
ＬＡＫ活性は対照群に対して約２倍高い値を示した。ま
た、２０ｍｇＣＰＬ腹腔投与においては細胞数の変化お
よびＮＫ活性、ＬＡＫ活性ともに増強は認められなかっ
た。

【００５２】以上の結果、総量４０ｍｇＣＰＬの腹腔投
与により、マウス脾臓中のＮＫ・ＬＡＫ活性を増強する
ことが明らかになった。その増強効果は経口摂取の場合
と同様約２倍の効果であった。

【００５３】試験例３：本試験では運動選手にＣＰＬを
投与した。ＣＰＬ投与群（ｎ＝１０）と対照群（ｎ＝１
０）に分け、夏期合宿期間（６０日）とその後３０日間
を中心に、ＮＫ細胞数について検討した。ＣＰＬ投与群
では、１日当たり１０ｇの量のＣＰＬを６０日間に渡り
摂取させた。ＡＬＴＲＡ−ＥＰＩＣＳを用いて、ＣＤ５
６によるＮＫ細胞（％）を表示した。図３はその結果を
示す。ＣＰＬ投与により、ＮＫ細胞の有意な増加が認め
られた。

【００５４】

【発明の効果】本発明の免疫賦活剤は、ナチュラルキラ
ー細胞を活性化して、生体の免疫機能を増強させること
ができる。従って、本発明の免疫賦活剤又はこれを添加
した飲食品を摂取することによって、感染やストレスな
どによる生体の免疫能力の低下に基づくと考えられる各
種疾患を予防することができる。また、本発明において
有効成分として用いられるポリ乳酸混合物は、生体成分
に由来する乳酸の低縮合体であることから、生体適合性
が高く、副作用が少ない。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、製造例１で得られたポリ乳酸混合物の
質量スペクトルを示す。

【図２】図２は、ＣＰＬ腹腔投与によるＣ５７ＢＬ／６
マウス脾臓の細胞数とＮＫ活性およびＬＡＫ活性の検討
の結果を示す。

【図３】図３は、ＣＤ５６によるＮＫ細胞の比率（％）
を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者岩垣丞恒神奈川県秦野市東田原497−６ (72)発明者長戸康和神奈川県厚木市森の里２−20−12 (72)発明者村山千恵子神奈川県海老名市上今泉５−38−１Ｆターム(参考） 2B150 AA01 AA02 AA06 AA20 AB03 AB10 AB20 4B018 LE01 MD09 ME08 ME10 4C086 AA01 AA02 FA02 MA01 MA04 NA14 ZB09 ZB22 ZC75

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】縮合度３〜２０の環状及び／又は鎖状の
ポリ乳酸混合物を含む免疫賦活剤。
【請求項２】ナチュラルキラー細胞の活性化のために
使用する、請求項１に記載の免疫賦活剤。
【請求項３】ポリ乳酸中における反復単位である乳酸
が実質的にＬ−乳酸から成る、請求項１又は２に記載の
免疫賦活剤。
【請求項４】縮合度３〜２０の環状及び／又は鎖状の
ポリ乳酸混合物が、乳酸を不活性雰囲気下で脱水縮合
し、得られた反応液のエタノールおよびメタノール可溶
分を逆相カラムクロマトグラフィーに付し、ｐＨ２〜３
の２５〜５０重量％のアセトニトリル水溶液で溶離後、
ｐＨ２〜３の９０重量％以上のアセトニトリル水溶液で
溶離した画分である、請求項１から３の何れか１項に記
載の免疫賦活剤。
【請求項５】脱水縮合を窒素ガス雰囲気下、段階的減
圧及び昇温により行う、請求項４に記載の免疫賦活剤。
【請求項６】逆相カラムクロマトグラフィーを、ＯＤ
Ｓカラムクロマトグラフィーにより行う請求項４又は５
に記載の免疫賦活剤。
【請求項７】請求項１から６の何れかに記載の免疫賦
活剤を含む、免疫賦活のための飲食品。
【請求項８】請求項１から６の何れかに記載の免疫賦
活剤を含む、免疫賦活のための家畜用飼料及び飼料添加
物。