JP2006515520A5 - - Google Patents
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Claims (45)
- 組換え型ポリクローナル製造細胞系統として適切な細胞の収集物を生成するための方法であって、
a)変異体核酸配列の集合を含むベクターライブラリーを提供する段階であって、前記ベクターの各々が1)特定の抗原を結合させる全く異なる成員を含むポリクローナルタンパク質の全く異なる成員をコードする全く異なる核酸配列の1つの単一コピー、及び2)1つ以上のリコンビナーゼ認識配列を含んでいる、段階、
b)宿主細胞系統内に前記ベクターライブラリーを導入する段階であって、前記宿主細胞系統の各々の個別細胞の前記ゲノムが、そのゲノム内の単一の特異的部位で前記ベクターものと整合するリコンビナーゼ認識配列を含んでいる、段階;
c)段階(a)の前記変異体核酸配列が前記宿主細胞系統の前記細胞内で部位特異的に組込まれるような形で1つ以上のリコンビナーゼの前記細胞内での存在を保証する段階であって、ここで、前記1つ以上のリコンビナーゼは、i)前記核酸配列が中に導入される前記細胞により発現されるか;(ii)段階aの前記ベクターにより操作可能な形でコードされるか;iii)第2のベクターから発現を通して提供されるか;又はiv)1つのタンパク質として前記細胞に提供されるかのいずれかである、段階;及び
d)変異体核酸配列の前記ライブラリーから、組込まれたコピーを含む細胞を選択する段階、
を含む方法。 - 前記ポリクローナルタンパク質が前記細胞収集物と天然においては関連していない、請求項1に記載の方法。
- 前記ポリクローナルタンパク質がポリクローナル抗体又は抗体フラグメントである、請求項1又は2に記載の方法。
- 前記ポリクローナルタンパク質がポリクローナルT細胞レセプタ又はT細胞レセプタフラグメントである、請求項1又は2に記載の方法。
- 前記ベクターライブラリーが、このベクターライブラリーを用いた前記宿主細胞の収集物のバルクトランスフェクションにより前記宿主細胞系統内に導入される、請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ベクターライブラリーが、前記ベクターライブラリーのうちの5〜50個のベクターを含む画分での前記宿主細胞のアリコートの半バルクトランスフェクションにより前記宿主細胞系統内に導入され、前記細胞が、段階(d)の選択に先立ち又はそれに後続して組換え型ポリクローナル製造細胞系統として適切な細胞収集物を形成するべくプールされている、請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- 部位特異的組込みのための前記ベクターライブラリーが、前記ベクターライブラリーの個別成員で別々に前記宿主細胞をトランスフェクションすることによって前記宿主細胞系統内に導入され、前記細胞が、段階(d)の選択に先立ち又はそれに後続して組換え型ポリクローナル製造細胞系統として適切な細胞収集物を形成するべくプールされる、請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- 段階(a)中の変異体核酸の集合が、前記特定の抗原を結合させるタンパク質をコードする核酸の同定及び/又は単離を可能にするスクリーニング手順を用いて単離又は同定される、請求項1〜7のいずれか1項に記載の方法。
- スクリーニング手順がバイオパニング段階及び/又は免疫検出検定を内含している、請求項8に記載の方法。
- 前記スクリーニング手順が、ファージ提示法、リボソーム提示法、DNA提示法、RNAペプチド提示法、共有結合提示法、細菌表面提示法、酵母表面提示法、真核生物ウイルス提示法、ELISA及びELISPOTから成る群から選択される、請求項8又は9に記載の方法。
- 前記変異体核酸配列が少なくとも3つの変異体核酸配列を含む、請求項1〜10のいずれか1項に記載の方法。
- 変異体核酸配列の前記ライブラリーの個別成員が、前記細胞収集物内の個別細胞の単一の予め定義されたゲノム遺伝子座内に組込まれており、前記遺伝子座が前記組換え型ポリクローナルタンパク質の各成員の高レベル発現を媒介する能力をもつ、請求項1〜11のいずれか1項に記載の方法。
- 各々の全く異なる核酸配列が、2つの異なるポリペプチド鎖から成るポリクローナルタンパク質の一成員をコードする一対の遺伝子セグメントを含む、請求項1〜12のいずれか1項に記載の方法。
- 前記遺伝子セグメント対が、抗体重鎖可変領域コーディング配列及び抗体軽鎖可変領域コーディング配列を含む、請求項13に記載の方法。
- 前記遺伝子セグメント対が、T細胞レセプタアルファ鎖可変領域コーディング配列及びT細胞レセプタベータ鎖可変領域コーディング配列を含む、請求項13に記載の方法。
- 前記遺伝子セグメント対が、T細胞レセプタガンマ鎖可変領域コーディング配列及びT細胞レセプタデルタ鎖可変領域コーディング配列を含む、請求項13に記載の方法。
- 前記変異体核酸配列ライブラリーが、前記変異体核酸配列内部にある天然に発生する多様性を含んでいる、請求項1〜16のいずれか1項に記載の方法。
- 天然に発生する多様性が、前記変異体核酸配列内に存在するCDR領域内に位置している、請求項17に記載の方法。
- 前記細胞収集物が、哺乳動物細胞系統又は細胞型から誘導されている、請求項1〜18のいずれか1項に記載の方法。
- 前記哺乳動物細胞系統が、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞、COS細胞、BHK細胞、YB2/0、NIH3T3、骨髄腫細胞、線維芽細胞、HeLa、HEK293、PER.C6及びそれらから誘導された細胞系統から成る群から選択される、請求項19に記載の方法。
- ポリクローナルタンパク質の製造方法であって、前記ポリクローナルタンパク質が、特定の抗原を結合させる全く異なる成員を含んでおり、
a)変異体核酸配列のライブラリーを含む細胞収集物を提供する段階であって、前記核酸配列の各々が前記ポリクローナルタンパク質の全く異なる成員をコードし、前記核酸配列の各々が前記細胞収集物内の各々個別の細胞のゲノムの同じ単一の部位にて組込まれている、段階、
b)前記ポリクローナルタンパク質の発現を容易にする条件の下で、前記細胞収集物を培養する段階;及び
c)細胞培養細胞又は細胞培養上清から前記発現されたポリクローナルタンパク質を回収する段階、
を含む方法。 - 段階(a)内の前記細胞収集物が、請求項1〜20のいずれか1項に記載の方法に従って生成される、請求項21に記載の方法。
- 前記ポリクローナルタンパク質が前記細胞収集物と天然においては関連していない、請求項21又は22に記載の方法。
- 段階(a)中の前記変異体核酸ライブラリーが、前記特定の抗原を結合させるタンパク質をコードする核酸の同定及び/又は単離を可能にするスクリーニング手順を用いて、より早期の段階で単離又は同定される、請求項21〜23のいずれか1項に記載の方法。
- 前記スクリーニング手順がバイオパニング段階及び/又は免疫検出検定を内含している、請求項24に記載の方法。
- 前記スクリーニング手順が、ファージ提示法、リボソーム提示法、DNA提示法、RNAペプチド提示法、共有結合提示法、細菌表面提示法、酵母表面提示法、真核生物ウイルス提示法、ELISA及びELISPOTから成る群から選択される、請求項24又は25に記載の方法。
- 前記ポリクローナルタンパク質がポリクローナル抗体又は抗体フラグメントである、請求項21〜26のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ポリクローナルタンパク質がポリクローナルT細胞レセプタ又はT細胞レセプタフラグメントである、請求項21〜26のいずれか1項に記載の方法。
- 前記変異体核酸配列の前記相対的発現レベルが監視される、請求項21〜28のいずれか1項に記載の方法。
- 前記発現レベルがmRNAレベル及び/又はタンパク質レベルで監視される、請求項29に記載の方法。
- 段階(b)での前記培養は、遅くとも前記相対的発現レベルが予め定められた範囲外となった時点で終結される、請求項29又は30に記載の方法。
- 変異体核酸配列ライブラリーでトランスフェクションされた細胞収集物を含む組換え型ポリクローナル製造細胞系統であって、前記収集物中の各々の細胞が、特定の抗原を結合させるポリクローナルタンパク質の全く異なる成員をコードし、かつ前記収集物内の個別の細胞のゲノム内で同じ単一の部位にある前記ライブラリーの1成員でトランスフェクションされこの成員を発現する能力を有しており、前記核酸配列が前記収集物中の前記細胞と天然においては関連していない組換え型ポリクローナル製造細胞系統。
- 前記変異体核酸配列ライブラリーが、ポリクローナル抗体又は抗体フラグメントの個別成員の間で天然に発生する多様性を有する前記ポリクローナル抗体又は抗体フラグメントをコードする、請求項32に記載の組換え型ポリクローナル製造細胞系統。
- 前記変異体核酸配列ライブラリーが、ポリクローナルT細胞レセプタ又はT細胞レセプタフラグメントの個別成員の間で天然に発生する多様性を有する前記ポリクローナルT細胞レセプタ又はT細胞レセプタフラグメントをコードする、請求項32に記載の組換え型ポリクローナル製造細胞系統。
- 前記細胞収集物が、哺乳動物細胞系統又は細胞型から誘導される、請求項32〜34のいずれか1項に記載の組換え型ポリクローナル製造細胞系統。
- 前記哺乳動物細胞系統が、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞、COS細胞、BHK細胞、YB2/0、NIH3T3、骨髄腫細胞、線維芽細胞、HeLa、HEK293、PER.C6及びそれらから誘導された細胞系統から成る群から選択される、請求項35に記載の組換え型ポリクローナル製造細胞系統。
- 天然に発生する変異体核酸配列の集合を含む部位特異的組込み用ベクターライブラリーであって、前記ベクターの各々が、1)特定の抗原を結合させるポリクローナルタンパク質の全く異なる成員をコードする全く異なる核酸配列の1つのコピー、及び2)1つ以上のリコンビナーゼ認識配列を含んでいる、ベクターライブラリー。
- 天然に発生する変異体核酸配列の前記集合がポリクローナル抗体又は抗体フラグメントをコードする、請求項37に記載のライブラリー。
- 天然に発生する変異体核酸配列の前記集合が、ポリクローナルT細胞レセプタT細胞レセプタフラグメントをコードする請求項37に記載のライブラリー。
- 前記ベクターライブラリーの各成員がさらに、リコンビナーゼコーディング核酸配列を含む、請求項37〜39のいずれか1項に記載のライブラリー。
- 変異体核酸配列のライブラリーを含む細胞の収集物であって、該核酸配列のそれぞれがポリクローナルタンパク質の別個の成員をコードしており、該ポリクローナルタンパク質が、特定の抗原に結合する別個の成員を含んでおり、該核酸配列のそれぞれが、該細胞の収集物中の個々の細胞のゲノムの同じ単一部位に組み込まれており、該核酸配列が該収集物中の該細胞と天然においては関連していないものである、細胞の収集物。
- 変異体核酸配列のライブラリーが請求項37〜40のいずれか1項に記載のライブラリーである、請求項41に記載の細胞の収集物。
- ライブラリー中に元々存在するコード配列の少なくとも50%が、該細胞の収集物から発現される最終のポリクローナルタンパク質の異なる個々の成員として同定されうる、請求項41または42に記載の細胞の収集物。
- VHおよびVL遺伝子セグメントのペアーのライブラリーでトランスフェクトされた、ポリクローナル抗体を発現する細胞系統であって、細胞系統中の各細胞が、ライブラリーのVHおよびVL遺伝子の1のペアーにてトランスフェクトされており、該ペアーを発現しうるものであり、該遺伝子が、特定の抗原に結合するポリクローナル抗体の別個の成員をコードしており、かつ、該細胞系統中の個々の細胞のゲノム中の同じ単一部位に存在しており、該核酸配列が収集物中の該細胞と天然においては関連していないものである、細胞系統。
- VHおよびVL遺伝子セグメントのペアーのライブラリーが請求項38に記載のライブラリーである、請求項44に記載の細胞系統。
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