JP2002535996A - シュードモナス酸群を含む培養液からのシュードモナス酸ａの単離方法 - Google Patents
シュードモナス酸群を含む培養液からのシュードモナス酸ａの単離方法Info
- Publication number
- JP2002535996A JP2002535996A JP2000597447A JP2000597447A JP2002535996A JP 2002535996 A JP2002535996 A JP 2002535996A JP 2000597447 A JP2000597447 A JP 2000597447A JP 2000597447 A JP2000597447 A JP 2000597447A JP 2002535996 A JP2002535996 A JP 2002535996A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- pseudomonas
- extract
- acid
- pseudomonas acid
- isobutyl acetate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/16—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing two or more hetero rings
- C12P17/162—Heterorings having oxygen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. Lasalocid
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
塩化脂肪族炭化水素又は酢酸イソブチルを用いて酸性pHの培養液から生合成したシュードモナス酸Ａを抽出し、続いて精製することを含んで成る、シュードモナス細菌属のシュードモナス酸Ａ産生種のうちの１つの培養液から、医薬としての品質の抗生物質シュードモナス酸Ａを単離する方法を開示する。本発明は、（ａ）水−アルコールといくつかの脂肪族又は芳香族炭化水素との間での、蒸発した抽出残査の分配、及び次の増大した水含有水性アルコール層の塩化メチレン、酢酸エチル、又は酢酸イソブチルによる抽出；（ｂ）水性炭酸水素アンモニウム、水酸化アルカリ金属又は水酸化アンモニウム溶液による前記抽出物の抽出及び生じたアルカリ性水性抽出物の酸性化、引き続いての塩化脂肪族炭化水素又は酢酸イソブチルを再び用いての再抽出；並びに（ｃ）前記抽出物の濃縮並びに酢酸イソブチル及び石油エーテル、又はアセトニトリル、又は水性アセトニトリルの混合物中での結晶性シュードモナス酸Ａの再結晶化を含む、単離したシュードモナス酸Ａの精製方法を含む。
Description
【０００１】 本発明の分野 本発明は、シュードモナス酸（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎｉｃ ａｃｉｄ）混合体を
含む培養液からのシュードモナス酸Ａ（ムピロシン）の単離方法に関する。
含む培養液からのシュードモナス酸Ａ（ムピロシン）の単離方法に関する。
【０００２】 本発明の背景 シュードモナス酸Ａは、ムピロシンとしても知られる、式（Ｉ）：
【化２】 を有する抗生物質である。
【０００３】 シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓ
ｃｅｎｓ，蛍光菌）が、シュードモナス酸Ａに加え、Ｂ〜Ｄの文字で表される少
量の他の関連抗生物質を生合成することができることが知られており〔Ｅ．Ｂ．
Ｃｈａｉｎ，Ｇ．Ｍｅｌｌｏｗｓ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒ
ａｎｓ Ｉ．３１８（１９７７）；Ｊ．Ｐ．Ｃｌａｙｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔ
ｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，２１，８８１（１９８０）；Ｐ．Ｊ．Ｏ．
Ｈａｎｌｏｎ，Ｈ．Ｈ．Ｒｏｇｅｒｓ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ
Ｔｒａｎｓ Ｉ．２６５５（１９８３）〕、それぞれ式（II）〜（IV）
ｃｅｎｓ，蛍光菌）が、シュードモナス酸Ａに加え、Ｂ〜Ｄの文字で表される少
量の他の関連抗生物質を生合成することができることが知られており〔Ｅ．Ｂ．
Ｃｈａｉｎ，Ｇ．Ｍｅｌｌｏｗｓ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒ
ａｎｓ Ｉ．３１８（１９７７）；Ｊ．Ｐ．Ｃｌａｙｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔ
ｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，２１，８８１（１９８０）；Ｐ．Ｊ．Ｏ．
Ｈａｎｌｏｎ，Ｈ．Ｈ．Ｒｏｇｅｒｓ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ
Ｔｒａｎｓ Ｉ．２６５５（１９８３）〕、それぞれ式（II）〜（IV）
【化３】 で表される。
【０００４】 抗生物質シュードモナス酸の中でも、治療的な観点から最も価値があるのはシ
ュードモナス酸Ａであり、これは主にグラム陽性細菌（例えば、スタフィロコッ
カス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、ストレプ
トコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、
ストレプトコッカス・ニューモニエ（ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、クレブシエラ・
ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ））及びいくつか
のグラム陰性細菌（例えば、ヘモフィルス・インフルエンゼ（Ｈａｅｍｏｐｈｉ
ｌｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、ナイセリア・ゴノロエエ（Ｎｅｉｓｓｅｒ
ｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）に対する増殖阻害効果を有し、そしてその最小
阻害濃度は０．０２〜０．５mg／dm3 の範囲にある。シュードモナス酸Ａは、イ
ソロイシンｔＲＮＡ合成酵素を阻害することによって、病原細菌のペプチド合成
に対する効果を有する〔Ｊ．Ｈｕｇｈｅｓ ａｎｄ Ｇ．Ｍｅｌｌｏｗｓ，Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．Ｊ．１９１，２０１−２１９（１９８０）〕。この抗生物質の有利
な特徴は、それがヒト及び動物の両方にとってほとんど毒性が無く、そしてそれ
がエイムス試験において陰性であるということである。シュードモナス酸Ａは現
在、皮膚感染症（例えば膿痂疹、膿皮症）、鼻及び外耳感染症、ざ瘡、火傷、湿
疹、乾癬の処置のために、潰瘍形成の場合には二次感染の処置のために、及び院
内感染の予防のために様々な剤形でヒトの治療に使用されている。
ュードモナス酸Ａであり、これは主にグラム陽性細菌（例えば、スタフィロコッ
カス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、ストレプ
トコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、
ストレプトコッカス・ニューモニエ（ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、クレブシエラ・
ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ））及びいくつか
のグラム陰性細菌（例えば、ヘモフィルス・インフルエンゼ（Ｈａｅｍｏｐｈｉ
ｌｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、ナイセリア・ゴノロエエ（Ｎｅｉｓｓｅｒ
ｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）に対する増殖阻害効果を有し、そしてその最小
阻害濃度は０．０２〜０．５mg／dm3 の範囲にある。シュードモナス酸Ａは、イ
ソロイシンｔＲＮＡ合成酵素を阻害することによって、病原細菌のペプチド合成
に対する効果を有する〔Ｊ．Ｈｕｇｈｅｓ ａｎｄ Ｇ．Ｍｅｌｌｏｗｓ，Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．Ｊ．１９１，２０１−２１９（１９８０）〕。この抗生物質の有利
な特徴は、それがヒト及び動物の両方にとってほとんど毒性が無く、そしてそれ
がエイムス試験において陰性であるということである。シュードモナス酸Ａは現
在、皮膚感染症（例えば膿痂疹、膿皮症）、鼻及び外耳感染症、ざ瘡、火傷、湿
疹、乾癬の処置のために、潰瘍形成の場合には二次感染の処置のために、及び院
内感染の予防のために様々な剤形でヒトの治療に使用されている。
【０００５】 抗生物質群を含む培養液からのシュードモナス酸Ａの単離のための１つの方法
は、液−液抽出である。ドイツ特許第２，２２７，７３９号及び米国特許第４，
２８９，７０３号に従い、可溶性バリウム塩が発酵液に加えられ、続いて不溶性
不活性剤を有する微生物細胞が遠心によって分離され、そして最後に抗生物質が
メチルイソブチルケトンによって抽出される。前記抗生物質は、続いてメチルイ
ソブチルケトン抽出物からアルカリ水によって除去され、そして生じたアルカリ
性水性抽出物はメチルイソブチルケトンによる再抽出によって浄化される。得ら
れた粗製生成物はクロマトグラフィーにかけられ、そしてエステル誘導体がシュ
ードモナス酸の抗生物質混合物から調整され、そして調整用の薄層クロマトグラ
フィーで精製される。純粋な抗生物質の酸性型が加水分解によって得られる。
は、液−液抽出である。ドイツ特許第２，２２７，７３９号及び米国特許第４，
２８９，７０３号に従い、可溶性バリウム塩が発酵液に加えられ、続いて不溶性
不活性剤を有する微生物細胞が遠心によって分離され、そして最後に抗生物質が
メチルイソブチルケトンによって抽出される。前記抗生物質は、続いてメチルイ
ソブチルケトン抽出物からアルカリ水によって除去され、そして生じたアルカリ
性水性抽出物はメチルイソブチルケトンによる再抽出によって浄化される。得ら
れた粗製生成物はクロマトグラフィーにかけられ、そしてエステル誘導体がシュ
ードモナス酸の抗生物質混合物から調整され、そして調整用の薄層クロマトグラ
フィーで精製される。純粋な抗生物質の酸性型が加水分解によって得られる。
【０００６】 ベルギー特許第８７０，８５５号は、培養液がメチルイソブチルケトンで抽出
され、そしてその抽出物から、活性物質が炭酸水素ナトリウム溶液によって抽出
される方法に関連している。アルカリ水に不溶な材料が濾過によって分離され、
続いて濾液のpHが酸性化され、そしてメチルイソブチルケトンによって抽出され
る。最終的に、シュードモナス酸Ａが抽出物の濃縮及びメチルイソブチルケトン
−ｎ−ヘプタン混合物からの結晶化によって得られる。
され、そしてその抽出物から、活性物質が炭酸水素ナトリウム溶液によって抽出
される方法に関連している。アルカリ水に不溶な材料が濾過によって分離され、
続いて濾液のpHが酸性化され、そしてメチルイソブチルケトンによって抽出され
る。最終的に、シュードモナス酸Ａが抽出物の濃縮及びメチルイソブチルケトン
−ｎ−ヘプタン混合物からの結晶化によって得られる。
【０００７】 日本特許第５２−７００８３号は、培養液からのシュードモナス酸Ａの回収の
ための２つの方法に関連している。これらの方法のうち１つに従い、細菌細胞が
培養液から遠心によって分離され、続いて活性物質が上清から酢酸エチルによっ
て抽出される。続いて、シュードモナス酸群が酢酸エチル層から炭酸水素ナトリ
ウム溶液から再抽出され、そして酸性化後、再び酢酸エチルを用いて抽出される
。蒸発後、残査がシリカゲル上でクロロホルム−メタノール溶出剤の利用によっ
て精製され、そして最終的に純粋なシュードモナス酸Ａがジイソプロピルエーテ
ルからの結晶化によって達成される。他方の方法において、上文の方法で得られ
る粗製生成物は、ＤＥＡＥセファデックス陰イオン交換カラム上でメタール−ア
ンモニア溶出剤の利用によってクロマトグラフィーにかけられ、そしてシュード
モナス酸Ａ含有画分が分離される。
ための２つの方法に関連している。これらの方法のうち１つに従い、細菌細胞が
培養液から遠心によって分離され、続いて活性物質が上清から酢酸エチルによっ
て抽出される。続いて、シュードモナス酸群が酢酸エチル層から炭酸水素ナトリ
ウム溶液から再抽出され、そして酸性化後、再び酢酸エチルを用いて抽出される
。蒸発後、残査がシリカゲル上でクロロホルム−メタノール溶出剤の利用によっ
て精製され、そして最終的に純粋なシュードモナス酸Ａがジイソプロピルエーテ
ルからの結晶化によって達成される。他方の方法において、上文の方法で得られ
る粗製生成物は、ＤＥＡＥセファデックス陰イオン交換カラム上でメタール−ア
ンモニア溶出剤の利用によってクロマトグラフィーにかけられ、そしてシュード
モナス酸Ａ含有画分が分離される。
【０００８】 Ａ．Ｄ．Ｃｕｒｚｏｎｓは、リチウム塩の形成による培養液からのシュードモ
ナス酸Ａの回収を記述した（政府特許第０００５６１４号）。pH４．５で得られ
る活性成分含有メチルイソブチルケトン抽出物を、メタノールに溶解したリチウ
ム２−エチルヘキサン酸と反応させる。沈殿したシュードモナス酸Ａのリチウム
塩を分離し、水に溶解し、そしてpH４．５で放出されるシュードモナス酸Ａをメ
チルイソブチルケトンで抽出し、そしてｎ−ヘプタンの存在下で沈殿させる。
ナス酸Ａの回収を記述した（政府特許第０００５６１４号）。pH４．５で得られ
る活性成分含有メチルイソブチルケトン抽出物を、メタノールに溶解したリチウ
ム２−エチルヘキサン酸と反応させる。沈殿したシュードモナス酸Ａのリチウム
塩を分離し、水に溶解し、そしてpH４．５で放出されるシュードモナス酸Ａをメ
チルイソブチルケトンで抽出し、そしてｎ−ヘプタンの存在下で沈殿させる。
【０００９】 上文で論じた方法において、極性であり、かつ不水混和性の溶媒（メチルイソ
ブチルケトン、酢酸エチル、ｎ−ブタノール）が、培養液からのシュードモナス
酸群の回収に使用される。我々の実験に従い、選択的抽出がこれらの方法を用い
て十分に実現されることがないのは、シュードモナス酸群とは別に、他の極性及
び非極性不純物も大量に抽出されるためである。シュードモナス酸Ａは、大量の
不純物を含む有機溶媒のアルカリ性抽出によって、続いて酸性pHでの有機溶媒の
再抽出によって、そして続いて粗製生成物の結晶化によって、低い収率（１７〜
３４％）でのみ純粋型で回収されうる。精製のためのクロマトグラフィー的方法
の使用が製造規模において有利でないのは、高い人件費及び溶媒の需要のためで
ある。更に、クロマトグラフィー用吸着剤の存在下で、かつクロマトグラフィー
の過程の間、分子内変換が活性物質において起こり、これが生物学的に不活性な
二環式化合物９−｛４−〔１Ｓ，６Ｒ−８Ｒ（１Ｓ，３Ｓ−ジヒドロキシ−２Ｓ
−メチル−ブチル）−５Ｓ−ヒドロキシ−３，７−ジオキサビシクロ〔４．３．
０〕ノナン−４Ｓ−イル〕−３−メチル−ブタ−２（Ｅ）−エノイルオキシ｝ノ
ナン酸（式Ｖ）
ブチルケトン、酢酸エチル、ｎ−ブタノール）が、培養液からのシュードモナス
酸群の回収に使用される。我々の実験に従い、選択的抽出がこれらの方法を用い
て十分に実現されることがないのは、シュードモナス酸群とは別に、他の極性及
び非極性不純物も大量に抽出されるためである。シュードモナス酸Ａは、大量の
不純物を含む有機溶媒のアルカリ性抽出によって、続いて酸性pHでの有機溶媒の
再抽出によって、そして続いて粗製生成物の結晶化によって、低い収率（１７〜
３４％）でのみ純粋型で回収されうる。精製のためのクロマトグラフィー的方法
の使用が製造規模において有利でないのは、高い人件費及び溶媒の需要のためで
ある。更に、クロマトグラフィー用吸着剤の存在下で、かつクロマトグラフィー
の過程の間、分子内変換が活性物質において起こり、これが生物学的に不活性な
二環式化合物９−｛４−〔１Ｓ，６Ｒ−８Ｒ（１Ｓ，３Ｓ−ジヒドロキシ−２Ｓ
−メチル−ブチル）−５Ｓ−ヒドロキシ−３，７−ジオキサビシクロ〔４．３．
０〕ノナン−４Ｓ−イル〕−３−メチル−ブタ−２（Ｅ）−エノイルオキシ｝ノ
ナン酸（式Ｖ）
【化４】 及び化合物９−｛４−〔１Ｒ，６Ｓ−４Ｓ，１０Ｓ−ジヒドロキシ−３Ｒ−（２
Ｓ−ヒドロキシ−１Ｓ−メチル−プロピル）−２，８−ジオキサビシクロ〔４．
４．０〕デカン−９Ｓ−イル〕−３−メチルブタ−２（Ｅ）−エノイルオキシ｝
ノナン酸（式VI）
Ｓ−ヒドロキシ−１Ｓ−メチル−プロピル）−２，８−ジオキサビシクロ〔４．
４．０〕デカン−９Ｓ−イル〕−３−メチルブタ−２（Ｅ）−エノイルオキシ｝
ノナン酸（式VI）
【化５】 の形成を導く。これらの化合物の形成及び再結晶化を介するそれらの除去は、シ
ュードモナス酸Ａの回収率をかなり低下させる。
ュードモナス酸Ａの回収率をかなり低下させる。
【００１０】 シュードモナス酸Ａのリチウム塩の中間生成物を介しての単離方法はクロマト
グラフィー段階を全く含まないが、それが製造規模の方法にとって便利でないの
は、前記の方法で使用するリチウム塩が方法を複雑にし、そして製造規模で使用
するには費用がかかるためである。
グラフィー段階を全く含まないが、それが製造規模の方法にとって便利でないの
は、前記の方法で使用するリチウム塩が方法を複雑にし、そして製造規模で使用
するには費用がかかるためである。
【００１１】 従って、既知の方法の欠点が除かれ、そして製造規模でのこの利用が上文で言
及した抗生物質の高い回収率をもたらす、抗生物質シュードモナス酸Ａの単離の
ための新規な方法の必要性が当業界に存在している。
及した抗生物質の高い回収率をもたらす、抗生物質シュードモナス酸Ａの単離の
ための新規な方法の必要性が当業界に存在している。
【００１２】 本発明の要約 本発明は、式（Ｉ）
【化６】 の抗生物質シュードモナス酸Ａの単離方法であって、シュードモナス酸Ａを含む
抽出物が得られる様に、塩化脂肪族炭化水素又は酢酸イソブチルを用いて、酸性
pHで、シュードモナス細菌属のシュードモナス酸Ａ産生種の培養液からシュード
モナス酸Ａを抽出し；シュードモナス酸Ａを前記抽出物から精製する段階を含ん
で成る方法を述べる。任意に、精製されたシュードモナス酸Ａは結晶化される。
抽出物が得られる様に、塩化脂肪族炭化水素又は酢酸イソブチルを用いて、酸性
pHで、シュードモナス細菌属のシュードモナス酸Ａ産生種の培養液からシュード
モナス酸Ａを抽出し；シュードモナス酸Ａを前記抽出物から精製する段階を含ん
で成る方法を述べる。任意に、精製されたシュードモナス酸Ａは結晶化される。
【００１３】 本発明の１つの態様において、精製段階は、不純物を除去するために、水−ア
ルコールとほとんど極性のない溶媒との間に抽出物の蒸発残査を分配させ；水−
アルコール層を水で希釈し；そして精製したシュードモナス酸Ａを除去するため
に、より極性な溶媒で抽出することを含んで成る。
ルコールとほとんど極性のない溶媒との間に抽出物の蒸発残査を分配させ；水−
アルコール層を水で希釈し；そして精製したシュードモナス酸Ａを除去するため
に、より極性な溶媒で抽出することを含んで成る。
【００１４】 本発明の別の態様において、精製段階は、アルカリ性溶液が形成される様に、
炭酸水素アンモニウム、水酸化アルカリ金属又は水酸化アンモニウムの水溶液を
用いて、抽出物からシュードモナス酸を回収し；酸性溶液が形成される様に、前
記アルカリ性溶液を酸性化し；そして塩化脂肪族炭化水素又は酢酸イソブチルで
前記酸性溶液を抽出することを含んで成る。
炭酸水素アンモニウム、水酸化アルカリ金属又は水酸化アンモニウムの水溶液を
用いて、抽出物からシュードモナス酸を回収し；酸性溶液が形成される様に、前
記アルカリ性溶液を酸性化し；そして塩化脂肪族炭化水素又は酢酸イソブチルで
前記酸性溶液を抽出することを含んで成る。
【００１５】 本発明の詳細な説明 驚いたことに、シュードモナス酸Ａは酸性化の後、微生物細胞含有全培養液か
ら、及び塩化脂肪族炭化水素による前記細胞の分離後に得られた上清から抽出さ
れることがあり、次にシュードモナス酸Ａを伴う不活性不純物の多くが、水−ア
ルコール溶液と脂肪族炭化水素との間の、続く水性アルコールと芳香族炭化水素
との間の蒸発残査の分配によって上文の抽出物の蒸発後に粗製生成物から除去さ
れうる。好ましくは、前記アルコールはメタノールである。この方法を用いて、
前記粗製生成物からシュードモナス酸Ａは、酢酸イソブチル、アセトニトリル又
は水−アセトニトリル混合液からの再結晶後に薬物としての品質で得られうる。
ら、及び塩化脂肪族炭化水素による前記細胞の分離後に得られた上清から抽出さ
れることがあり、次にシュードモナス酸Ａを伴う不活性不純物の多くが、水−ア
ルコール溶液と脂肪族炭化水素との間の、続く水性アルコールと芳香族炭化水素
との間の蒸発残査の分配によって上文の抽出物の蒸発後に粗製生成物から除去さ
れうる。好ましくは、前記アルコールはメタノールである。この方法を用いて、
前記粗製生成物からシュードモナス酸Ａは、酢酸イソブチル、アセトニトリル又
は水−アセトニトリル混合液からの再結晶後に薬物としての品質で得られうる。
【００１６】 本発明の好ましい方法に従い、抗生物質シュードモナス酸Ａの単離の間、前記
微生物細胞は遠心によってほぼ中性のpHで分離される。ほぼ中性のpHでの培養液
の遠心後、大部分のシュードモナス酸Ａが上清にあり、そしてそれは好ましくは
pH４．５での上清からの抽出によって回収されうる。好ましくは、前記抗生物質
の抽出は塩化脂肪族炭化水素、最も好ましくは塩化メチレンによって行われる。
微生物細胞は遠心によってほぼ中性のpHで分離される。ほぼ中性のpHでの培養液
の遠心後、大部分のシュードモナス酸Ａが上清にあり、そしてそれは好ましくは
pH４．５での上清からの抽出によって回収されうる。好ましくは、前記抗生物質
の抽出は塩化脂肪族炭化水素、最も好ましくは塩化メチレンによって行われる。
【００１７】 塩化メチレン抽出物中のシュードモナス酸Ａの一次精製は、分配分離の適用に
よって行われうる。粗製生成物の可能性のある色素及び脂質不純物は１０％水含
有水−メタノール混合物と脂肪族炭化水素、例えばｎ−ヘキサン又はｎ−ヘプタ
ンとの間での分配によって分離されうる。大部分の脂質型非極性不活性不純物が
、ｎ−ヘキサン又はｎ−ヘプタン層に移される。水−メタノール層の水分量を２
５％にまで増大させ、そして芳香族炭化水素を用いて、好ましくはトルエンを用
いてそれを抽出することによって、更に極性の不活性不純物が粗製生成物から除
去されうる。
よって行われうる。粗製生成物の可能性のある色素及び脂質不純物は１０％水含
有水−メタノール混合物と脂肪族炭化水素、例えばｎ−ヘキサン又はｎ−ヘプタ
ンとの間での分配によって分離されうる。大部分の脂質型非極性不活性不純物が
、ｎ−ヘキサン又はｎ−ヘプタン層に移される。水−メタノール層の水分量を２
５％にまで増大させ、そして芳香族炭化水素を用いて、好ましくはトルエンを用
いてそれを抽出することによって、更に極性の不活性不純物が粗製生成物から除
去されうる。
【００１８】 前記水−メタノール層の水分量を５０％にまで増大させ、そしてそれを不水混
和性溶媒によって、好ましくは塩化メチレン、酢酸エチル、メチルイソブチルケ
トン、酢酸ｎ−ブチル、又は酢酸イソブチルによって抽出し、そして有機溶媒を
蒸発させることによって、シュードモナス酸Ａを含む粗製生成物が得られる。シ
ュードモナス酸Ａは結晶化によって、好ましくはメチルイソブチルケトン−ｎ−
ヘプタン溶媒混合液を用いて、生合成の間に形成するシュードモナス酸群の他の
成分から分離されうる。
和性溶媒によって、好ましくは塩化メチレン、酢酸エチル、メチルイソブチルケ
トン、酢酸ｎ−ブチル、又は酢酸イソブチルによって抽出し、そして有機溶媒を
蒸発させることによって、シュードモナス酸Ａを含む粗製生成物が得られる。シ
ュードモナス酸Ａは結晶化によって、好ましくはメチルイソブチルケトン−ｎ−
ヘプタン溶媒混合液を用いて、生合成の間に形成するシュードモナス酸群の他の
成分から分離されうる。
【００１９】 本発明の別の態様において、全ての培養液の抽出は、微生物細胞の存在下、pH
４．５で、塩化脂肪族炭化水素、好ましくは塩化メチレンによって行われうる。
シュードモナス酸群は、塩化メチレン抽出物から２０％炭酸水素ナトリウム溶液
によって抽出され、そしてシュードモナス酸群は、塩化メチレンによって、好ま
しくはpH４．５の水層から酸性型で得られる。
４．５で、塩化脂肪族炭化水素、好ましくは塩化メチレンによって行われうる。
シュードモナス酸群は、塩化メチレン抽出物から２０％炭酸水素ナトリウム溶液
によって抽出され、そしてシュードモナス酸群は、塩化メチレンによって、好ま
しくはpH４．５の水層から酸性型で得られる。
【００２０】 更に、酸性化の後、培養液に溶解し、そしてバイオマスの細胞に結合したシュ
ードモナス酸Ａが、抽出のために酢酸イソブチルを用いることによって、効果的
かつ選択的に抽出されうることも認識されている。培養液の抽出後、シュードモ
ナス酸Ａが酢酸イソブチル抽出物から、更に好ましくは炭酸水素アンモニウム、
水酸化アンモニウム又は水酸化アルカリ金属によって回収されうることも見出さ
れた。好ましい水酸化アルカリ金属は水酸化ナトリウムである。上文の抽出物を
酸性化し、そしてそれらを酢酸イソブチルによって抽出した後、濃縮した有機溶
媒抽出物は、結晶性の粗製生成物を蒸発によって調整して得ることができる。後
者を酢酸イソブチル、アセトニトリル及び／又は水−アセトニトリル混合液から
再結晶化した後、シュードモナス酸Ａを薬物の品質で得ることができる。
ードモナス酸Ａが、抽出のために酢酸イソブチルを用いることによって、効果的
かつ選択的に抽出されうることも認識されている。培養液の抽出後、シュードモ
ナス酸Ａが酢酸イソブチル抽出物から、更に好ましくは炭酸水素アンモニウム、
水酸化アンモニウム又は水酸化アルカリ金属によって回収されうることも見出さ
れた。好ましい水酸化アルカリ金属は水酸化ナトリウムである。上文の抽出物を
酸性化し、そしてそれらを酢酸イソブチルによって抽出した後、濃縮した有機溶
媒抽出物は、結晶性の粗製生成物を蒸発によって調整して得ることができる。後
者を酢酸イソブチル、アセトニトリル及び／又は水−アセトニトリル混合液から
再結晶化した後、シュードモナス酸Ａを薬物の品質で得ることができる。
【００２１】 本発明の好ましい態様に従い、全培養液からの前記抗生物質の抽出は、酢酸イ
ソブチルによって、好ましくはpH約４．５で行われる。乳濁液の形成を排除する
ために、解乳化剤、好ましくはＡｒｍｏｇａｒｄ Ｄ５３９７（ＡＫＺ０ Ｃｈ
ｅｍｉｃａｌｓ Ｌｔｄ．，Ｌａｎｃａｓｈｉｒｅ，Ｇｒｅａｔ Ｂｒｉｔａｉ
ｎ）が使用されうる。好ましくは、解乳化剤は１０容量％の酢酸ブチル溶液中で
約０．１％含んで成る。Ｗｅｓｔｆａｌｉａ型のセパレーター上で分離した酢酸
イソブチル抽出物から、シュードモナス酸群は水酸化ナトリウム水溶液を用いて
回収され、そして酸性pHでの抽出後に得られた粗製生成物は、石油エーテル（沸
点範囲：６０〜９５℃）及び酢酸イソブチル溶媒混合液から結晶化される。得ら
れた生成物は、好ましくはアセトニトリルから再結晶化され；続いて水溶液をそ
のままにしておき、続いて濾過した後に回収する。
ソブチルによって、好ましくはpH約４．５で行われる。乳濁液の形成を排除する
ために、解乳化剤、好ましくはＡｒｍｏｇａｒｄ Ｄ５３９７（ＡＫＺ０ Ｃｈ
ｅｍｉｃａｌｓ Ｌｔｄ．，Ｌａｎｃａｓｈｉｒｅ，Ｇｒｅａｔ Ｂｒｉｔａｉ
ｎ）が使用されうる。好ましくは、解乳化剤は１０容量％の酢酸ブチル溶液中で
約０．１％含んで成る。Ｗｅｓｔｆａｌｉａ型のセパレーター上で分離した酢酸
イソブチル抽出物から、シュードモナス酸群は水酸化ナトリウム水溶液を用いて
回収され、そして酸性pHでの抽出後に得られた粗製生成物は、石油エーテル（沸
点範囲：６０〜９５℃）及び酢酸イソブチル溶媒混合液から結晶化される。得ら
れた生成物は、好ましくはアセトニトリルから再結晶化され；続いて水溶液をそ
のままにしておき、続いて濾過した後に回収する。
【００２２】 シュードモナス酸Ａを生合成することのできるシュードモナス菌属のうちのい
ずれかの微生物の菌株のいずれかの培養液は、本発明の方法のための出発材料と
しての使用に適している。
ずれかの微生物の菌株のいずれかの培養液は、本発明の方法のための出発材料と
しての使用に適している。
【００２３】 微生物細胞の酸性処理のために、鉱酸、例えば塩酸、硫酸及びリン酸、並びに
有機酸、例えば酢酸及びシュウ酸の両方が使用されうる。シュウ酸及び硫酸は、
この目的のために特に有利である。
有機酸、例えば酢酸及びシュウ酸の両方が使用されうる。シュウ酸及び硫酸は、
この目的のために特に有利である。
【００２４】 発酵の終わりに、シュードモナス酸Ａ及び関連化合物の正確な量が高圧液体ク
ロマトグラフィーによって決定される。培養液はエタノールによって２回希釈さ
れ、超音波処理され、そして遠心され、そして上清は解析に使用される。本発明
の方法を用いて調整したシュードモナス酸Ａ及び関連化合物は、以下の保持時間
：式（Ｉ）のシュードモナス酸Ａ８．３４分、式（II）のシュードモナス酸Ｂ６
．８３分、式（III ）のシュードモナス酸Ｃ１６．８分、式（IV）のシュードモ
ナス酸Ｄ６．８分、式（Ｖ）の微量成分６．５５分、式（VI）の微量成分６．９
分〔機械 ＬＫＢ２２４８ポンプ、ＬＫＢ２１５７自動サンプラー、ＬＫＢ２１
５５カラムオーブン、ＬＫＢ２１４１ＵＶ検出器、解析２２２nm、カラム：Ｎｕ
ｃｌｅｏｓｉｌ Ｃ18１０μｍ（ＢＳＴ）、溶出液：アセトニトリル及び０．１
ＭＮａＨ2ＰＯ4水溶液(pH４．２）の混合物(３５：６５）、流速１．０ml／分〕
を有することが明らかとなった。
ロマトグラフィーによって決定される。培養液はエタノールによって２回希釈さ
れ、超音波処理され、そして遠心され、そして上清は解析に使用される。本発明
の方法を用いて調整したシュードモナス酸Ａ及び関連化合物は、以下の保持時間
：式（Ｉ）のシュードモナス酸Ａ８．３４分、式（II）のシュードモナス酸Ｂ６
．８３分、式（III ）のシュードモナス酸Ｃ１６．８分、式（IV）のシュードモ
ナス酸Ｄ６．８分、式（Ｖ）の微量成分６．５５分、式（VI）の微量成分６．９
分〔機械 ＬＫＢ２２４８ポンプ、ＬＫＢ２１５７自動サンプラー、ＬＫＢ２１
５５カラムオーブン、ＬＫＢ２１４１ＵＶ検出器、解析２２２nm、カラム：Ｎｕ
ｃｌｅｏｓｉｌ Ｃ18１０μｍ（ＢＳＴ）、溶出液：アセトニトリル及び０．１
ＭＮａＨ2ＰＯ4水溶液(pH４．２）の混合物(３５：６５）、流速１．０ml／分〕
を有することが明らかとなった。
【００２５】 単離したシュードモナス酸Ａの構造は、ＵＶ、ＩＲ、 1Ｈ−ＮＭＲ、13Ｃ−Ｎ
ＭＲ及び質量分光光度計試験によって決定した。本発明に従い調整したシュード
モナス酸Ａは、国際特許番号ＷＯ９２／１０４９３で公開されている多形型Ｉと
同一であった。
ＭＲ及び質量分光光度計試験によって決定した。本発明に従い調整したシュード
モナス酸Ａは、国際特許番号ＷＯ９２／１０４９３で公開されている多形型Ｉと
同一であった。
【００２６】 本発明に従う方法は、以下の例によって例示される。しかし、本発明はそれに
よって限定されると解釈されるべきではない。
よって限定されると解釈されるべきではない。
【００２７】 例例１ １２００μｇ／mlのムピロシンを有する５Ｌの培養液のpHは、連続的な撹拌の
もとで２０％硫酸（６０ml）によって４．５に調節された。酸性化した液体は、
２．５Ｌの塩化メチレンによって抽出した。続いて層を分離し、そしてはっきり
とした層を遠心によって乳化した有機層から調製した。これまでの段階に続いて
、培養液は再び１．２５Ｌの塩化メチレンで２回抽出した。一緒の塩化メチレン
抽出物を１．２５Ｌの脱イオン水で洗浄した。層を分離し、そして２０℃未満で
、塩化メチレン抽出物を最初に０．５Ｌ、そして次に０．２５Ｌの２％炭酸水素
ナトリウム溶液で抽出した。層を分離し、そして抽出物を一緒にした。一緒の抽
出物を２０℃未満に冷却し、そして抽出物のpHを、連続的な撹拌のもとで２０％
硫酸によって４．５に調節した。得られた酸性溶液は０．３Ｌで１回、そして０
．１９Ｌで１回、塩化メチレンを用いて抽出した。一緒の塩化メチレン抽出物を
０．１９Ｌの脱イオン水で洗浄し、そして続いて塩化メチレン抽出物を木炭（０
．４２ｇ）によって室温で清澄にした。清澄にした後、塩化メチレン抽出物を蒸
発させた。蒸発残査（約８ｇ）を室温で１６mlの酢酸イソブチルに溶解した。撹
拌しながら、溶液を０〜５℃に冷却し、そして撹拌を結晶化の開始まで続けた。
続いて、結晶化をこの温度で一晩行った。沈殿したムピロシンを濾過し、次にカ
バー洗浄を、２×４mlの冷却した（５℃未満）の酢酸イソブチル及び６mlの酢酸
イソブチル−石油エーテルの混合物（１：２）によって行った。この後、前記抗
生物質を２×２５mlの石油エーテル（沸点範囲：６０〜９５℃）中での懸濁によ
って洗浄し、そして真空で５０℃で乾燥させた。得られたムピロシンを、６０ml
の酢酸イソブチル中に４０〜４５℃で溶解した。溶液を室温に冷却し、そして６
０mlの石油エーテル（沸点範囲：６０〜９５℃）を前記溶液に一滴ずつ導入した
。続いて、結晶化を０〜５℃で一晩行った。沈殿した結晶を濾過し、カバー洗浄
を２×４mlの冷却した（５℃未満）酢酸イソブチル−石油エーテルの混合物（１
：２）で行った。次に、生成物を３×２０mlの石油エーテル中で懸濁することに
よって洗浄した。ムピロシンを恒量まで５０℃で真空で乾燥させた。この方法で
、次の特性を有する３．３ｇの純粋なムピロシンを得た： 融点：７３〜７５℃ 紫外スペクトル（１０μｇ／ml、９５％エタノール溶液）：λmax ＝２２２nm Ｅ1% 1cm ＝３０３．６ 赤外スペクトル（ＫＢｒ）：νＯＨ３４８３及び３３０６、νＣ＝Ｏ １７２８
（ＣＯＯＣＨ2 ）、１７２０（ＣＯＯＨ）ｃｍ-1
もとで２０％硫酸（６０ml）によって４．５に調節された。酸性化した液体は、
２．５Ｌの塩化メチレンによって抽出した。続いて層を分離し、そしてはっきり
とした層を遠心によって乳化した有機層から調製した。これまでの段階に続いて
、培養液は再び１．２５Ｌの塩化メチレンで２回抽出した。一緒の塩化メチレン
抽出物を１．２５Ｌの脱イオン水で洗浄した。層を分離し、そして２０℃未満で
、塩化メチレン抽出物を最初に０．５Ｌ、そして次に０．２５Ｌの２％炭酸水素
ナトリウム溶液で抽出した。層を分離し、そして抽出物を一緒にした。一緒の抽
出物を２０℃未満に冷却し、そして抽出物のpHを、連続的な撹拌のもとで２０％
硫酸によって４．５に調節した。得られた酸性溶液は０．３Ｌで１回、そして０
．１９Ｌで１回、塩化メチレンを用いて抽出した。一緒の塩化メチレン抽出物を
０．１９Ｌの脱イオン水で洗浄し、そして続いて塩化メチレン抽出物を木炭（０
．４２ｇ）によって室温で清澄にした。清澄にした後、塩化メチレン抽出物を蒸
発させた。蒸発残査（約８ｇ）を室温で１６mlの酢酸イソブチルに溶解した。撹
拌しながら、溶液を０〜５℃に冷却し、そして撹拌を結晶化の開始まで続けた。
続いて、結晶化をこの温度で一晩行った。沈殿したムピロシンを濾過し、次にカ
バー洗浄を、２×４mlの冷却した（５℃未満）の酢酸イソブチル及び６mlの酢酸
イソブチル−石油エーテルの混合物（１：２）によって行った。この後、前記抗
生物質を２×２５mlの石油エーテル（沸点範囲：６０〜９５℃）中での懸濁によ
って洗浄し、そして真空で５０℃で乾燥させた。得られたムピロシンを、６０ml
の酢酸イソブチル中に４０〜４５℃で溶解した。溶液を室温に冷却し、そして６
０mlの石油エーテル（沸点範囲：６０〜９５℃）を前記溶液に一滴ずつ導入した
。続いて、結晶化を０〜５℃で一晩行った。沈殿した結晶を濾過し、カバー洗浄
を２×４mlの冷却した（５℃未満）酢酸イソブチル−石油エーテルの混合物（１
：２）で行った。次に、生成物を３×２０mlの石油エーテル中で懸濁することに
よって洗浄した。ムピロシンを恒量まで５０℃で真空で乾燥させた。この方法で
、次の特性を有する３．３ｇの純粋なムピロシンを得た： 融点：７３〜７５℃ 紫外スペクトル（１０μｇ／ml、９５％エタノール溶液）：λmax ＝２２２nm Ｅ1% 1cm ＝３０３．６ 赤外スペクトル（ＫＢｒ）：νＯＨ３４８３及び３３０６、νＣ＝Ｏ １７２８
（ＣＯＯＣＨ2 ）、１７２０（ＣＯＯＨ）ｃｍ-1
【表１】
【表２】
【表３】
【００２８】 １５００μｇ／mlのムピロシンを有する５Ｌの培養液のpHを、連続的な撹拌の
もとで２０％硫酸によって４．５に調節した。酸性化した液体を２．５Ｌの酢酸
イソブチルによって抽出した。層を分離し、そしてはっきりとした層を遠心によ
って乳化した有機層から調製した。前の段階から引き続いて、培養液を１．２５
Ｌの酢酸イソブチルで再び抽出した。一緒の酢酸イソブチル抽出物を１．２５Ｌ
の脱イオン水で洗浄した。層を分離し、そして０．５Ｌの脱イオン水を酢酸イソ
ブチル抽出物に加えた。混合した層のpHを５％水酸化アンモニウムによって８．
０±０．２に調節した。層を分離し、そして酢酸イソブチル抽出物を、再び０．
５Ｌの脱イオン水でpH８．０±０．２で抽出した。一緒のアルカリ性抽出物を２
０℃未満に冷却し、そして抽出物のpHを、連続的な撹拌のもとで２０％硫酸によ
って４．５に調節した。得られた酸性溶液を０．５Ｌで１回、そして次に０．２
５Ｌで１回、酢酸イソブチルによって抽出した。一緒の酢酸イソブチル抽出物を
０．２５Ｌの脱イオン水で洗浄し、続いて前記酢酸イソブチル抽出物を室温で０
．５２ｇの木炭により清澄にした。清澄にした後、酢酸イソブチル抽出物を、最
終的に１３mlの量になる様に真空で濃縮した。続いて、ムピロシンの結晶化及び
再結晶化を例１の様に行った。この方法で、例１に記載したのと同一な物理学的
性質を有する３．７５ｇのムピロシンが得られた。
もとで２０％硫酸によって４．５に調節した。酸性化した液体を２．５Ｌの酢酸
イソブチルによって抽出した。層を分離し、そしてはっきりとした層を遠心によ
って乳化した有機層から調製した。前の段階から引き続いて、培養液を１．２５
Ｌの酢酸イソブチルで再び抽出した。一緒の酢酸イソブチル抽出物を１．２５Ｌ
の脱イオン水で洗浄した。層を分離し、そして０．５Ｌの脱イオン水を酢酸イソ
ブチル抽出物に加えた。混合した層のpHを５％水酸化アンモニウムによって８．
０±０．２に調節した。層を分離し、そして酢酸イソブチル抽出物を、再び０．
５Ｌの脱イオン水でpH８．０±０．２で抽出した。一緒のアルカリ性抽出物を２
０℃未満に冷却し、そして抽出物のpHを、連続的な撹拌のもとで２０％硫酸によ
って４．５に調節した。得られた酸性溶液を０．５Ｌで１回、そして次に０．２
５Ｌで１回、酢酸イソブチルによって抽出した。一緒の酢酸イソブチル抽出物を
０．２５Ｌの脱イオン水で洗浄し、続いて前記酢酸イソブチル抽出物を室温で０
．５２ｇの木炭により清澄にした。清澄にした後、酢酸イソブチル抽出物を、最
終的に１３mlの量になる様に真空で濃縮した。続いて、ムピロシンの結晶化及び
再結晶化を例１の様に行った。この方法で、例１に記載したのと同一な物理学的
性質を有する３．７５ｇのムピロシンが得られた。
【００２９】例３ １０００μｇ／mlの濃度のムピロシンを有する８０Ｌの培養液をＦ−１００型
超遠心機（製造業者：Ｂｕｄａｐｅｓｔｉ Ｖｅｇｙｉｐａｒｉ Ｇｅｐｇｙａ
ｒ）で遠心し、続いて上清のpHをシュウ酸（約０．６９Ｌ）で４．５に調節した
。酸性化した溶液を２４Ｌの塩化メチレンで２回抽出し、そして一緒の有機層を
真空で蒸発させた。油状の残査（約０．１４kg）を０．５６Ｌの１０％水含有メ
タノールに溶解し、そして次に溶液を０．５６Ｌのｎ−ヘキサンで２回抽出した
。メタノール溶液を脱イオン水によって２５％の含水量まで希釈し、そして溶液
を０．５６Ｌのトルエンで２回抽出した。続いて、メタノール溶液を脱イオン水
で５０％の含水量まで希釈し、そして溶液を０．５６Ｌの塩化メチレンで１回、
続いて０．２８Ｌの塩化メチレンで１回抽出した。一緒にした塩化メチレン抽出
物を真空で蒸発させた。得られた蒸発残査（約０．１１kg）を例１に従い処理し
、例１と同一の物理学的性質を有する４４mgのムピロシンが生じた。
超遠心機（製造業者：Ｂｕｄａｐｅｓｔｉ Ｖｅｇｙｉｐａｒｉ Ｇｅｐｇｙａ
ｒ）で遠心し、続いて上清のpHをシュウ酸（約０．６９Ｌ）で４．５に調節した
。酸性化した溶液を２４Ｌの塩化メチレンで２回抽出し、そして一緒の有機層を
真空で蒸発させた。油状の残査（約０．１４kg）を０．５６Ｌの１０％水含有メ
タノールに溶解し、そして次に溶液を０．５６Ｌのｎ−ヘキサンで２回抽出した
。メタノール溶液を脱イオン水によって２５％の含水量まで希釈し、そして溶液
を０．５６Ｌのトルエンで２回抽出した。続いて、メタノール溶液を脱イオン水
で５０％の含水量まで希釈し、そして溶液を０．５６Ｌの塩化メチレンで１回、
続いて０．２８Ｌの塩化メチレンで１回抽出した。一緒にした塩化メチレン抽出
物を真空で蒸発させた。得られた蒸発残査（約０．１１kg）を例１に従い処理し
、例１と同一の物理学的性質を有する４４mgのムピロシンが生じた。
【００３０】例４ １２００μｇ／ml濃度のムピロシンを含む１６０Ｌの培養液のpHを、連続的な
撹拌のもとで２０％硫酸（約２．７Ｌ）によって４．５±０．２に調節した。こ
の後、酸性化した液体を８０Ｌの酢酸イソブチルで抽出した。３０分の撹拌後、
０．１％の解乳化剤をそれに加えた（１ｇ Ａｒｍｏｇａｒｄ Ｄ５３９７／Ｌ
培養液、酢酸イソブチル溶液中）。層をＳＡ１−０１−１７５型のＷｅｓｔｆａ
ｌｉａのセパレーター（Ｗｅｓｔｆａｌｉａ Ｓｅｐａｒａｔｏｒ Ａ．Ｇ．，
Ｏｅｌｄｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）によって分離した。培養液を４０Ｌの酢酸イソブ
チルで再び抽出し、そして前の段階に従い分離した。酢酸イソブチル抽出物を４
０Ｌの脱イオン水で洗浄した。洗浄した酢酸イソブチル抽出物を２０Ｌの脱イオ
ン水で混合し、そして次に４００mlの１０質量％の硫酸マグネシウム溶液を解乳
化剤として混合物に加えた。続いて、水性酢酸イソブチル混合物のpHを水酸化ナ
トリウムによって８．０±０．２に調節した。２０分の撹拌後、層を分離し、そ
して酢酸イソブチル抽出物を再びpH８．２±０．２で抽出した。一緒にしたアル
カリ性水溶液を、８００mlの１０質量％の硫酸マグネシウムの存在下で１２Ｌの
酢酸イソブチルによって抽出した。層の分離後、８Ｌの酢酸イソブチルを水層に
加え、水性酢酸イソブチル混合物のpHを２０％硫酸溶液によって４．５±０．２
に調節した。２０分の撹拌後、層を分離し、そして酸性溶液を前述の様に再び抽
出した。一緒にした酢酸イソブチル抽出物を、１００ｍｌの１０質量％の硫酸マ
グネシウム溶液の存在下で５Ｌの脱イオン水によって洗浄した。層を分離し、そ
して酢酸イソブチル抽出物を最終的に１．１Ｌの体積になるまで真空で蒸発させ
た。酢酸イソブチル濃縮物を１１０mlの石油エーテル（沸点範囲６０〜９５℃）
と混合し、そして結晶化を０〜５℃で２４時間行った。沈殿した結晶を濾過し、
そして冷却した（５℃未満）酢酸イソブチルで洗浄した。次に、湿った粗製生成
物を６００mlの石油エーテル中で懸濁し、濾過し、そして真空で４０℃で脱水し
た。得られたムピロシンを５５０mlのアセトニトリルに４０〜５０℃で溶解し、
そして前述した温度で木炭（５．５ｇ）によって清澄にした。清澄にした後、溶
液を室温に冷却し、続いて０〜５℃で２４時間保った。沈殿したムピロシンを濾
過し、次にカバー洗浄を５０mlの冷却した（５℃未満）のアセトニトリルによっ
て行った。湿った結晶を２００mlの脱イオン水で懸濁し、続いて別の２００ml量
の脱イオン水を懸濁液に加えた。次に、結晶化を０〜５℃で２４時間行った。結
晶を濾過し、そしてカバー洗浄を２×５０mlの脱イオン水で行った。生成物を４
０℃で７２時間、真空のもとで乾燥させた。この方法で、例１と同じ物理学的性
質を有する８０．６ｇのムピロシンが得られた。
撹拌のもとで２０％硫酸（約２．７Ｌ）によって４．５±０．２に調節した。こ
の後、酸性化した液体を８０Ｌの酢酸イソブチルで抽出した。３０分の撹拌後、
０．１％の解乳化剤をそれに加えた（１ｇ Ａｒｍｏｇａｒｄ Ｄ５３９７／Ｌ
培養液、酢酸イソブチル溶液中）。層をＳＡ１−０１−１７５型のＷｅｓｔｆａ
ｌｉａのセパレーター（Ｗｅｓｔｆａｌｉａ Ｓｅｐａｒａｔｏｒ Ａ．Ｇ．，
Ｏｅｌｄｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）によって分離した。培養液を４０Ｌの酢酸イソブ
チルで再び抽出し、そして前の段階に従い分離した。酢酸イソブチル抽出物を４
０Ｌの脱イオン水で洗浄した。洗浄した酢酸イソブチル抽出物を２０Ｌの脱イオ
ン水で混合し、そして次に４００mlの１０質量％の硫酸マグネシウム溶液を解乳
化剤として混合物に加えた。続いて、水性酢酸イソブチル混合物のpHを水酸化ナ
トリウムによって８．０±０．２に調節した。２０分の撹拌後、層を分離し、そ
して酢酸イソブチル抽出物を再びpH８．２±０．２で抽出した。一緒にしたアル
カリ性水溶液を、８００mlの１０質量％の硫酸マグネシウムの存在下で１２Ｌの
酢酸イソブチルによって抽出した。層の分離後、８Ｌの酢酸イソブチルを水層に
加え、水性酢酸イソブチル混合物のpHを２０％硫酸溶液によって４．５±０．２
に調節した。２０分の撹拌後、層を分離し、そして酸性溶液を前述の様に再び抽
出した。一緒にした酢酸イソブチル抽出物を、１００ｍｌの１０質量％の硫酸マ
グネシウム溶液の存在下で５Ｌの脱イオン水によって洗浄した。層を分離し、そ
して酢酸イソブチル抽出物を最終的に１．１Ｌの体積になるまで真空で蒸発させ
た。酢酸イソブチル濃縮物を１１０mlの石油エーテル（沸点範囲６０〜９５℃）
と混合し、そして結晶化を０〜５℃で２４時間行った。沈殿した結晶を濾過し、
そして冷却した（５℃未満）酢酸イソブチルで洗浄した。次に、湿った粗製生成
物を６００mlの石油エーテル中で懸濁し、濾過し、そして真空で４０℃で脱水し
た。得られたムピロシンを５５０mlのアセトニトリルに４０〜５０℃で溶解し、
そして前述した温度で木炭（５．５ｇ）によって清澄にした。清澄にした後、溶
液を室温に冷却し、続いて０〜５℃で２４時間保った。沈殿したムピロシンを濾
過し、次にカバー洗浄を５０mlの冷却した（５℃未満）のアセトニトリルによっ
て行った。湿った結晶を２００mlの脱イオン水で懸濁し、続いて別の２００ml量
の脱イオン水を懸濁液に加えた。次に、結晶化を０〜５℃で２４時間行った。結
晶を濾過し、そしてカバー洗浄を２×５０mlの脱イオン水で行った。生成物を４
０℃で７２時間、真空のもとで乾燥させた。この方法で、例１と同じ物理学的性
質を有する８０．６ｇのムピロシンが得られた。
【００３１】 本発明のいくつかの現在好ましい態様を記載したが、記載した態様の変更及び
修飾が本発明の精神及び範囲から外れることなく行われうることは、本発明と関
連している業界の当業者にとって明らかであろう。従って、本発明が特許請求の
範囲及び法の利用可能な規定によって要求される範囲にのみ限定されることが意
図される。
修飾が本発明の精神及び範囲から外れることなく行われうることは、本発明と関
連している業界の当業者にとって明らかであろう。従って、本発明が特許請求の
範囲及び法の利用可能な規定によって要求される範囲にのみ限定されることが意
図される。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 セル，バレリア ハンガリー国，ハー−1123 ブダペスト， アバル ウッツァ 25／ア (72)発明者 サーボ，チャーバ ハンガリー国，ハー−4027 デブレツェ ン，フェイ アンドラース ウッツァ 21 (72)発明者 ナジィ ネエ アルバイ，エディト ハンガリー国，ハー−4029 デブレツェ ン，チルラグ ウッツァ 66 (72)発明者 ケリ，ビルモス ハンガリー国，ハー−4028 デブレツェ ン，マルコタニュオス ウッツァ 15 (72)発明者 レオノブ，ダビド イスラエル国，レオバト，ハケレム スト リート 11 (72)発明者 ラング，イルディコ ハンガリー国，ハー−1077 ブダペスト， イザベラ ウッツァ 13 (72)発明者 ビドゥロ ネエ イグロイ，マルジト ハンガリー国，ハー−1113 ブダペスト， バルトク ベー．ウート．86／デー (72)発明者 イェルコビチュ，ジュラ ハンガリー国，ハー−2092 ブダケシ，フ ノール ウッツァ 16 (72)発明者 ザラト，ヤノス ハンガリー国，ハー−1151 ブダペスト， ベレセジハズ ウッツァ 21 Ｆターム(参考） 4B064 AE54 BC01 BH02 BH04 BH05 BH06 BH07 CA02 CE08 CE15 DA02
Claims (17)
- 【請求項１】 式（Ｉ） 【化１】 の抗生物質シュードモナス酸（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎｉｃ ａｃｉｄ）Ａの単離方
法であって： シュードモナス酸Ａを含む抽出物が得られる様に、塩化脂肪族炭化水素又は酢
酸イソブチルを用いて、酸性pHで、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）
細菌属のシュードモナス酸Ａ産生種の培養液からシュードモナス酸Ａを抽出し、
そして； シュードモナス酸Ａを前記抽出物から精製する、 段階を含んで成る方法。 - 【請求項２】 精製段階が、水−アルコール層と少なくとも１つの有機溶媒
を含んで成る有機層との間に抽出物を分配し；そして前記有機溶媒を蒸発させる
ことを含んで成る、請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 前記アルコールがメタノールである、請求項２に記載の方法
。 - 【請求項４】 前記抽出物が１０％水−メタノール溶液と脂肪族炭化水素と
の間で分配される、請求項３に記載の方法。 - 【請求項５】 前記脂肪族炭化水素がヘキサン又はヘプタンである、請求項
４に記載の方法。 - 【請求項６】 前記脂肪族炭化水素がｎ−ヘキサンである、請求項５に記載
の方法。 - 【請求項７】 前記抽出物が２５％水−メタノール溶液と芳香族炭化水素と
の間に分配される、請求項３に記載の方法。 - 【請求項８】 前記芳香族炭化水素がトルエンである、請求項７に記載の方
法。 - 【請求項９】 前記抽出物が５０％水−メタノール溶液と不水混和性溶媒と
の間に分配される、請求項３に記載の方法。 - 【請求項１０】 前記不水混和性溶媒が、塩化メチレン、酢酸エチル、メチ
ルイソブチルケトン、酢酸ｎ−ブチル及び酢酸イソブチルから成る群から選択さ
れる、請求項９に記載の方法。 - 【請求項１１】 精製段階が、アルカリ性溶液が形成される様に炭酸水素ア
ンモニウム、水酸化アルカリ金属又は水酸化アンモニウムの水溶液を用いて、前
記抽出物からシュードモナス酸Ａを回収し；酸性溶液が形成される様に前記アル
カリ性溶液を酸性化し；そして前記酸性溶液を酢酸イソブチルで抽出することを
含んで成る、請求項１に記載の方法。 - 【請求項１２】 シュードモナス酸Ａが水酸化ナトリウム水溶液を用いて前
記抽出物から回収される、請求項１１に記載の方法。 - 【請求項１３】 シュードモナス酸Ａが水酸化アンモニウム水溶液を用いて
前記抽出物から回収される、請求項１１に記載の方法。 - 【請求項１４】 シュードモナス酸Ａが炭酸水素アンモニウム水溶液を用い
て前記抽出物から回収される、請求項１１に記載の方法。 - 【請求項１５】 精製したシュードモナス酸Ａを蒸発させ、そして結晶化す
る段階を更に含んで成る、請求項１に記載の方法。 - 【請求項１６】 粗製シュードモナス酸Ａが、酢酸イソブチル又は酢酸イソ
ブチル−石油エーテル混合物から結晶化される、請求項１５に記載の方法。 - 【請求項１７】 粗製シュードモナス酸Ａが、アセトニトリル、水、又はア
セトニトリル及び水の混合物から結晶化される、請求項１５に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US11844799P | 1999-02-03 | 1999-02-03 | |
| US60/118,447 | 1999-02-03 | ||
| PCT/US2000/002824 WO2000046388A1 (en) | 1999-02-03 | 2000-02-03 | Process for the isolation of pseudomonic acid a from pseudomonic acid complex-containing culture broth |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002535996A true JP2002535996A (ja) | 2002-10-29 |
| JP2002535996A5 JP2002535996A5 (ja) | 2005-12-22 |
Family
ID=22378653
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000597447A Pending JP2002535996A (ja) | 1999-02-03 | 2000-02-03 | シュードモナス酸群を含む培養液からのシュードモナス酸ａの単離方法 |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6245921B1 (ja) |
| EP (1) | EP1147210A4 (ja) |
| JP (1) | JP2002535996A (ja) |
| KR (1) | KR20010112258A (ja) |
| CN (1) | CN1345377A (ja) |
| AU (1) | AU771214B2 (ja) |
| BG (1) | BG105775A (ja) |
| BR (1) | BR0009178A (ja) |
| CA (1) | CA2360840A1 (ja) |
| CZ (1) | CZ20012725A3 (ja) |
| HK (1) | HK1041294A1 (ja) |
| HR (1) | HRP20010570A2 (ja) |
| HU (1) | HUP0105286A3 (ja) |
| IL (1) | IL144678A0 (ja) |
| IS (1) | IS6034A (ja) |
| MX (1) | MXPA01007805A (ja) |
| NO (1) | NO20013790L (ja) |
| PL (1) | PL349153A1 (ja) |
| SK (1) | SK10902001A3 (ja) |
| TR (1) | TR200102232T2 (ja) |
| WO (1) | WO2000046388A1 (ja) |
| YU (1) | YU55501A (ja) |
| ZA (1) | ZA200106057B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008530168A (ja) * | 2005-02-21 | 2008-08-07 | アルファーマ エーピーエス | ムピロシン精製法 |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1203184C (zh) * | 1999-02-03 | 2005-05-25 | 拜奥盖尔药厂有限公司 | 经微生物学方法制备假单胞菌酸a抗生素的方法 |
| ES2228294T1 (es) * | 2001-06-21 | 2005-04-16 | Biogal Gyogyszergyar Rt. | Proceso de fermentacion metabolico controlado para la produccion de acido pseudomonico. |
| EP1455769A4 (en) | 2001-12-28 | 2004-09-22 | Biogal Gyogyszergyar | METHOD FOR PRODUCING CRYSTALLINE AND AMORPHIC MUPIROCIN CALCIUM |
| IL150907A (en) * | 2002-07-25 | 2007-07-04 | Stephan Cherkez | Process for the preparation of stable amorphous calcium pseudomonate |
| ATE458476T1 (de) * | 2004-06-01 | 2010-03-15 | Teva Gyogyszergyar Zartkoeruen | Verfahren für die zubereitung der amorphen form eines medikamentes |
| GB2441328A (en) * | 2006-08-30 | 2008-03-05 | Alpharma Aps | A method for obtaining mupirocin calcium |
| US8268975B2 (en) * | 2009-04-03 | 2012-09-18 | Dow Agrosciences Llc | Demulsification compositions, systems and methods for demulsifying and separating aqueous emulsions |
| CN104370896A (zh) * | 2013-11-29 | 2015-02-25 | 江苏汉邦科技有限公司 | 一种纯化假单孢菌素的方法 |
| CN103820369B (zh) * | 2014-03-07 | 2015-11-18 | 浙江瑞邦药业有限公司 | 一种萤光假单胞菌及其应用 |
| CN109053707B (zh) * | 2018-09-19 | 2021-08-17 | 福建康鸿生物科技有限公司 | 一种莫匹罗星的提纯方法 |
| CN110823649A (zh) * | 2019-10-21 | 2020-02-21 | 河南中烟工业有限责任公司 | 一种卷烟主流烟气中有机酸的收集方法和检测方法 |
| CN116018342A (zh) * | 2020-08-25 | 2023-04-25 | 杭州中美华东制药有限公司 | 一种莫匹罗星的提取方法 |
| CN116867905A (zh) * | 2021-02-07 | 2023-10-10 | 杭州中美华东制药有限公司 | 一种莫匹罗星的发酵方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1395907A (en) * | 1971-06-12 | 1975-05-29 | Beecham Group Ltd | Antibiotics |
| JPS5270083A (en) | 1975-12-04 | 1977-06-10 | Yoshitomi Pharmaceut Ind Ltd | Manufacture of an antibiotics, trans-pseudomonic acid |
| CA1103264A (en) * | 1977-09-30 | 1981-06-16 | Norman H. Rogers | Purification of pseudomonic acid |
| CA1115699A (en) | 1978-05-20 | 1982-01-05 | Alan D. Curzons | Lithium pseudomonate and its preparation |
| ZA923242B (en) * | 1991-05-07 | 1993-01-27 | Sankyo Co | Novel anti-bacterial compound |
-
2000
- 2000-02-03 EP EP00908467A patent/EP1147210A4/en not_active Withdrawn
- 2000-02-03 YU YU55501A patent/YU55501A/sh unknown
- 2000-02-03 CA CA002360840A patent/CA2360840A1/en not_active Abandoned
- 2000-02-03 JP JP2000597447A patent/JP2002535996A/ja active Pending
- 2000-02-03 WO PCT/US2000/002824 patent/WO2000046388A1/en not_active Application Discontinuation
- 2000-02-03 SK SK1090-2001A patent/SK10902001A3/sk unknown
- 2000-02-03 PL PL00349153A patent/PL349153A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2000-02-03 CN CN00805537A patent/CN1345377A/zh active Pending
- 2000-02-03 IL IL14467800A patent/IL144678A0/xx unknown
- 2000-02-03 TR TR2001/02232T patent/TR200102232T2/xx unknown
- 2000-02-03 HU HU0105286A patent/HUP0105286A3/hu unknown
- 2000-02-03 AU AU29802/00A patent/AU771214B2/en not_active Ceased
- 2000-02-03 KR KR1020017009823A patent/KR20010112258A/ko not_active Application Discontinuation
- 2000-02-03 US US09/497,806 patent/US6245921B1/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-02-03 CZ CZ20012725A patent/CZ20012725A3/cs unknown
- 2000-02-03 BR BR0009178-2A patent/BR0009178A/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-02-03 MX MXPA01007805A patent/MXPA01007805A/es unknown
-
2001
- 2001-07-24 ZA ZA200106057A patent/ZA200106057B/en unknown
- 2001-07-27 HR HR20010570A patent/HRP20010570A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2001-08-01 IS IS6034A patent/IS6034A/is unknown
- 2001-08-02 NO NO20013790A patent/NO20013790L/no not_active Application Discontinuation
- 2001-08-03 BG BG105775A patent/BG105775A/xx active Pending
-
2002
- 2002-04-22 HK HK02103004.6A patent/HK1041294A1/zh unknown
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008530168A (ja) * | 2005-02-21 | 2008-08-07 | アルファーマ エーピーエス | ムピロシン精製法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IS6034A (is) | 2001-08-01 |
| HUP0105286A2 (hu) | 2002-05-29 |
| IL144678A0 (en) | 2002-06-30 |
| AU771214B2 (en) | 2004-03-18 |
| HUP0105286A3 (en) | 2003-03-28 |
| MXPA01007805A (es) | 2003-06-04 |
| SK10902001A3 (sk) | 2002-04-04 |
| NO20013790D0 (no) | 2001-08-02 |
| EP1147210A4 (en) | 2004-06-02 |
| BG105775A (en) | 2002-03-29 |
| ZA200106057B (en) | 2002-07-24 |
| KR20010112258A (ko) | 2001-12-20 |
| EP1147210A1 (en) | 2001-10-24 |
| CA2360840A1 (en) | 2000-08-10 |
| AU2980200A (en) | 2000-08-25 |
| US6245921B1 (en) | 2001-06-12 |
| PL349153A1 (en) | 2002-07-01 |
| YU55501A (sh) | 2003-07-07 |
| WO2000046388A1 (en) | 2000-08-10 |
| HK1041294A1 (zh) | 2002-07-05 |
| BR0009178A (pt) | 2001-11-20 |
| CN1345377A (zh) | 2002-04-17 |
| NO20013790L (no) | 2001-10-02 |
| CZ20012725A3 (cs) | 2002-03-13 |
| HRP20010570A2 (en) | 2002-08-31 |
| TR200102232T2 (tr) | 2002-02-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2002535996A (ja) | シュードモナス酸群を含む培養液からのシュードモナス酸ａの単離方法 | |
| RU2206613C2 (ru) | Способ выделения клавулановой кислоты | |
| EP0005614B1 (en) | Lithium pseudomonate, process for its isolation and its hydrolysis | |
| US4222942A (en) | Isolation of organic acids | |
| DE69633330T2 (de) | Verfahren zur herstellung von pharmazeutisch verträglichen salzen der clavulansäure | |
| DK141099B (da) | Fremgangsmåde til rensning af clavulansyre eller et salt deraf med en base. | |
| EP1856111B1 (en) | Purification of mupirocin | |
| JP3236282B1 (ja) | プラバスタチンを精製する方法 | |
| JP2002515022A (ja) | クラブラン酸カリウムの製造方法 | |
| US6417352B1 (en) | Process for the isolation of a pharmaceutically acceptable alkali metal salt of clavulanic acid | |
| WO1998021212A1 (en) | Process for the preparation of salts and esters of clavulanic acid | |
| JP2002121172A (ja) | プラバスタチン又はその薬理上許容される塩の精製方法 | |
| JP3463875B2 (ja) | プラバスタチンを精製する方法 | |
| WO2006046130A2 (en) | Process for the preparation of pravastatin | |
| DK146764B (da) | Alkalimetalclavulanat til anvendelse som mellemprodukt ved fremstilling af clavulansyre eller andre derivater deraf, samt blanding til anvendelse ved fremstilling af clavulansyre eller derivater deraf | |
| NL9500640A (nl) | Werkwijze voor de bereiding van clavulanzuur. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20040826 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20040826 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20071113 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20080507 |