JP2002121172A - プラバスタチン又はその薬理上許容される塩の精製方法 - Google Patents

プラバスタチン又はその薬理上許容される塩の精製方法

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伸弼 杉尾
Toshiuji Kojima
俊氏 小島
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睦夫 鈴木
Kiyoshi Hamano
潔 浜野
Yasuyuki Takamatsu
安行 高松
Minoru Hagisawa
稔 萩澤
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    • C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
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    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
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    • C07C2602/02—Systems containing two condensed rings the rings having only two atoms in common
    • C07C2602/14—All rings being cycloaliphatic
    • C07C2602/26—All rings being cycloaliphatic the ring system containing ten carbon atoms
    • C07C2602/28—Hydrogenated naphthalenes

Abstract

(57)【要約】 【課題】本発明は、塩析により、プラバスタチン又はそ
の薬理上許容される塩を精製する方法に関する。 【解決手段】塩析により、プラバスタチン又はその薬理
上許容される塩を精製する方法。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、塩析により、プラ
バスタチン又はその薬理上許容される塩を精製する方法
に関する。
【０００２】
【従来の技術】プラバスタチンは、特開昭５７−２２４
０号公報（ＵＳＰ４３４６２２７）にＨＭＧ-ＣｏＡリ
ダクターゼ阻害剤として開示されている化合物であり、
式（Ｉ）
【０００３】
【化１】 を有し、現在、プラバスタチンナトリウムが高脂血症治
療剤として発売されている。
【０００４】一方、プラバスタチンも含まれるＨＭＧ-
ＣｏＡリダクターゼ阻害剤の精製方法としては、以下の
ものが知られている。 （１）ＷＯ９２／１６２７６号公報（特表平６‐５０６
２１０号公報）は、「高性能液体クロマトグラフィーを
使用することを特徴とするＨＭＧ-ＣｏＡリダクターゼ
阻害剤の精製方法」に関し、具体的に記載されているＨ
ＭＧ-ＣｏＡリダクターゼ阻害剤は、ラクトン体を最終
生成物とするために、脂溶性のロバスタチン及びシンバ
スタチンであり、そもそも、ナトリウム塩を最終生成物
とするプラバスタチンとは相違する。一方、ＷＯ００／
１７１８２号公報は、「置換クロマトグラフィーを使用
することを特徴とするＨＭＧ-ＣｏＡリダクターゼ阻害
剤の精製方法」に関する。しかしながら、所詮、工業的
生産を考慮すれば、高性能液体クロマトグラフィーや置
換クロマトグラフィーのようなクロマトグラフィーを使
用して精製することは、煩雑で、実用的ではない。 （２）ＷＯ９９／４２６０１号公報 本公報は、「ＨＭＧ-ＣｏＡリダクターゼ阻害剤の培養
濃縮液を、酸でｐＨ４．５乃至７．５に調節した後、酢
酸エチルでＨＭＧ-ＣｏＡリダクターゼ阻害剤を抽出
し、所望によりラクトン化させた後結晶化することによ
り、９９．６％以上の純度を有するＨＭＧ-ＣｏＡリダ
クターゼ阻害剤を得る単離・精製方法」に関する。
【０００５】本公報の実施例３には、プラバスタチンの
単離・精製方法が記載されているものの、本実施例で
は、酢酸エチルで抽出されたプラバスタチンの純度が７
０．３％足らずに留まっており、結局のところ、その
後、クロマトグラフィーを用いて精製する記載があり、
しかも、最終的に得られたプラバスタチンの純度につい
ては全く記載されておらず、最終的に高純度のプラバス
タチンが得られているのか否かはそもそも不明である。
【０００６】また、本公報の実施例において、９９．６
％以上の高純度で得られるとされているロバスタチンで
さえ、最終生成物のＨＰＬＣのチャート（Fig.4）を見
る限り、純度が９９．６％以上のロバスタチンが得られ
ているとは考えにくく、信憑性がない。
【０００７】いずれにせよ、プラバスタチンの精製のた
めには、煩雑なクロマトグラフィーを使用せねばならな
いことは変わりがない。
【０００８】ところで、本発明の精製方法は、塩析を用
いることを特徴とするが、塩析は、水溶液に無機塩類等
を加え、先に溶解している物質を析出させる方法をい
う。
【０００９】通常、塩析は、タンパク質やアミノ酸のよ
うな高分子化合物を不純物から精製するために用いられ
る。例えば、タンパク質の水溶液に多量の塩を加えるこ
とにより、タンパク質分子と水分子相互作用を塩類イオ
ンが妨げるため、タンパク質が析出してくるのである。
【００１０】一方、低分子化合物の水溶液に無機塩類等
を加えた場合も、塩結晶が析出する場合がある。これ
は、上記高分子化合物に塩析を用いる場合とは異なる。
塩類が水に加えられることによって、塩類の水和力でま
わりの水分子を水和水として固定されるので、溶質が溶
解可能な水分子量が減少し、溶質が析出してくるのであ
る。しかしながら、低分子化合物であって、しかも、極
めて化学構造の近似した類縁物質が、溶質として、多
数、水溶液に解けている場合、選択的にある特定の化合
物のみを高純度で析出させることは困難であると考えら
れていた。このため、プラバスタチンのみならず、いか
なるＨＭＧ-ＣｏＡリダクターゼ阻害剤についても、塩
析により精製することは、記載も示唆もなかった。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】ＨＭＧ-ＣｏＡリダク
ターゼ阻害剤として、プラバスタチンの他に多くの化合
物が知られているが、例えば、アトロバスタチン、フル
バスタチン、イタバスタチン等は、全て合成により製造
される化合物である。
【００１２】一方、ロバスタチン及びシンバスタチン
は、プラバスタチンと同様に発酵により製造されるもの
の、一段階の発酵により生成され、この点、プラバスタ
チンの二段階発酵と相違する。すなわち、プラバスタチ
ンナトリウムは、下記式に示すとおり、二段階にわたっ
て菌により変換培養することにより生成されるものであ
る。
【００１３】
【化２】 そもそも、菌を発酵させた場合、化学反応で合成を行う
よりも、予想し得ない多くの不純物が生成してしまう
が、各工程毎に精製を行ったとしても不純物を除去しき
れるものではなく、特に工業的生産を目的とした大量培
養における、各工程の生成物についてはなおさらであ
る。
【００１４】そして、一方では、「安全で有効な医薬を
製造するための重要な因子の一つが、高純度の生成物を
得ることである。化学物質は、原料物質から化学合成、
生物により生産された当該物質を単離・精製する又は遺
伝子組換え細胞等を利用した生産で生成された当該物質
を単離・精製する等の製法により取得される。一般的
に、遺伝子組換法を含めいかなる製法を採用しようが、
原料の純度、反応の不完全性、単離・精製過程での分解
等により、製造される化学物質は１００％の純度のもの
を得ることは困難なことが多い。また、医薬の分野にお
いて、診断薬、治療薬は、不純物を含むと診断や治療に
好ましくない影響を及ぼす可能性を否定することができ
ないのは、本願発明の属する技術分野における技術常識
に属することは明らかであり、できる限り高純度の生成
物を得る事が重要とされている。」（東京高裁平成９年
（行ケ）第３０２号事件（１２年２月１７日判決））の
である。
【００１５】特に、ＨＭＧ-ＣｏＡリダクターゼ阻害剤
は、血中コレステロールを有効に低下させるために、投
与期間が長期にわたるような薬剤であるため、特に高純
度であることが必要とされるのである。
【００１６】上記のとおり、二段階発酵により生成され
るプラバスタチン類は、一段階発酵により生成されるシ
ンバスタチン及びロバスタチンに比べて、不純物もより
多く生成されるため、精製工程が特に重要である。
【００１７】従って、クロマトグラフィーのような煩雑
なものではなく、工程生産性を損なわず、しかもクロマ
トグラフィーで精製される程度の高純度で、プラバスタ
チン又はその薬理上許容される塩を単離・精製する方法
が望まれていた。
【００１８】そこで、本発明者らは、永年に亘りこのよ
うな単離・精製する方法を検討した結果、低分子化合物
であるプラバスタチンに塩析を用いることにより、選択
的に高純度のプラバスタチンが析出することを見出し、
本発明を完成した。
【００１９】
【課題を解決するための手段】本発明の、プラバスタチ
ン又はその薬理上許容される塩の新規な精製方法は、塩
析により、プラバスタチン又はその薬理上許容される塩
を精製する方法であり、好適には、塩析に用いられる塩
が、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩又はアンモニ
ウム塩である上記方法であり、より好適には、塩析に用
いられる塩が、アルカリ金属塩又はアンモニウム塩であ
る上記方法であり、更に好適には、塩析に用いられる塩
が、塩化ナトリウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニ
ウム又は硝酸アンモニウムである上記方法であり、最も
好適には、塩析に用いられる塩が、塩化ナトリウムであ
る上記方法である。
【００２０】本発明の、プラバスタチン又はその薬理上
許容される塩の、新規な更なる精製方法は、上記方法に
加えて、更に、不純物を無機塩基で分解する工程を行
う、又は／及び、更に、不純物を無機酸で分解する工程
を行うことによる、プラバスタチン又はその薬理上許容
される塩の精製方法である。
【００２１】不純物を無機酸で分解する工程を行う、プ
ラバスタチン又はその薬理上許容される塩の精製方法の
場合に、好適には、無機酸が、リン酸又は硫酸である方
法であり、及び／又は無機酸を用いて分解する工程のｐ
Ｈが、２乃至５であることを特徴とする方法である。
【００２２】本発明において、塩析に用いられる「アル
カリ金属塩」とは、例えば、塩化リチウム、塩化カリウ
ム、塩化ナトリウム、酢酸リチウム、酢酸カリウム、酢
酸ナトリウム、ギ酸リチウム、ギ酸カリウム、ギ酸ナト
リウム、硝酸リチウム、硝酸カリウム、硝酸ナトリウ
ム、硫酸リチウム、硫酸カリウム、硫酸ナトリウムのよ
うなアルカリ金属を含有する塩をいう。
【００２３】塩析に用いられる「アルカリ土類金属塩」
とは、例えば、塩化マグネシウム、酢酸マグネシウム、
ギ酸マグネシウム、硝酸マグネシウム、硫酸マグネシウ
ムのようなアルカリ土類金属を含有する塩をいう。
【００２４】塩析に用いられる「アンモニウム塩」と
は、例えば、塩化アンモニウム、酢酸アンモニウム、ギ
酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム
のようなアンモニウム塩をいう。
【００２５】なお、塩析に用いられる塩としては、通
常、塩として使用されるものであれば特に限定はない
が、好適には、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩又
はアンモニウム塩であり、更に好適には、アルカリ金属
塩又はアンモニウム塩であり、より好適には、塩化ナト
リウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウム又は硝酸
アンモニウムであり、最も好適には、塩化ナトリウムで
ある。
【００２６】「プラバスタチン又はその薬理上許容され
る塩」の「薬理上許容される塩」とは、薬理学的に副作
用を起こさず、通常、塩として使用されるものであれば
特に限定はないが、好適には、ナトリウム塩、カリウム
塩、リチウム塩のようなアルカリ金属塩、カルシウム
塩、マグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩、アル
ミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバル
ト塩等の金属塩；アンモニウム塩のような無機塩を挙げ
ることができる。
【００２７】不純物の無機塩基分解で使用される「無機
塩基」とは、通常の反応において塩基として使用される
無機物質であれば特に限定はないが、例えば、炭酸リチ
ウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムのようなアルカリ
金属炭酸塩類；炭酸水素リチウム、炭酸水素ナトリウ
ム、炭酸水素カリウムのようなアルカリ金属重炭酸塩
類；水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウ
ムのようなアルカリ金属水素化物類；水酸化リチウム、
水酸化ナトリウム、水酸化カリウムのようなアルカリ金
属水酸化物類；リチウムメトキシド、ナトリウムメトキ
シド、ナトリウムエトキシド、カリウムｔ−ブトキシド
のようなアルカリ金属アルコキシド類を挙げることがで
き、好適には、アルカリ金属水酸化物類であり、最も好
適には、水酸化ナトリウムである。
【００２８】不純物の無機酸分解で使用される「無機
酸」とは、通常、酸として用いられる無機物質であれば
特に限定はないが、例えば、臭化水素酸、塩酸、硫酸、
過塩素酸、リン酸、硝酸のような無機酸を挙げることが
でき、好適には、リン酸又は硫酸である。
【００２９】本発明の精製方法は、以下に記載する方法
によって達成される。
【００３０】本発明の塩析方法は、プラバスタチンの薬
理上許容される塩が、溶解又は懸濁している水溶液に無
機塩を加えた後、冷却し、次いで、プラバスタチン種結
晶を添加し、再度冷却することにより、プラバスタチン
の塩を析出させることにより行なわれる。
【００３１】塩析に用いられる塩は、プラバスタチンの
薬理上許容される塩と同じカチオンを有していてもいな
くてもよい。
【００３２】プラバスタチンの薬理上許容される塩が溶
解又は懸濁した水溶液に加える無機塩の量は、好適に
は、水溶液中のプラバスタチンの量に対して、５％乃至
４０％であり、最も好適には、１５％乃至３５％であ
る。
【００３３】プラバスタチンの薬理上許容される塩が溶
解又は懸濁した水溶液に無機塩を加え、加熱する際の温
度は、使用される無機塩の種類により異なるが、通常、
２０℃乃至６０℃であり、好適には、３０℃乃至４５℃
である。
【００３４】本発明の、プラバスタチン又はその薬理上
許容される塩の、新規な更なる精製方法は、塩析に加え
て、更に、不純物を無機塩基で分解する工程を行うか、
又は／及び、更に、不純物を無機酸で分解する工程を行
うが、各工程については、以下の方法により行なわれ
る。
【００３５】プラバスタチン又はその薬理上許容される
塩の不純物を無機塩基で分解する工程は、不活性溶媒の
存在下又は非存在下（好適には、存在下）に、プラバス
タチン又はその薬理上許容される塩を、ｐＨ１０〜ｐＨ
１４を付与する条件（好適には、ｐＨ１１〜ｐＨ１３）
で行われる。
【００３６】反応温度及び反応時間は、ｐＨ値にも依存
するが、基本的には、反応温度が低ければ反応時間は長
くする必要があり、反応温度が高ければ反応時間は短く
する必要があるが、例えば、−１０℃〜１１０℃（好適
には、０℃〜１００℃）にて、１５分乃至６０時間（好
適には、３０分間乃至７２時間）、処理することにより
行なわれ、より好適には、０℃付近で、３０時間前後で
ある。
【００３７】上記反応において使用される不活性溶媒と
しては、本反応に不活性なもので、通常、溶媒として使
用されるものであれば特に限定はないが、例えば、メタ
ノ−ル、エタノ−ル、ｎ−プロパノ−ル、イソプロパノ
−ル、ｎ−ブタノ−ル、イソブタノ−ル、ｔ−ブタノ−
ル、イソアミルアルコ−ル、ジエチレングリコール、グ
リセリン、オクタノール、シクロヘキサノール、メチル
セロソルブのようなアルコ−ル類；水；水と上記有機溶
媒との混合溶媒；であり、好適には、水又は水と上記有
機溶媒との混合溶媒であり、最も好適には、水又は水と
エタノ−ルとの混合溶媒である。
【００３８】反応終了後、目的化合物であるプラバスタ
チンは常法に従って、上記反応液から採取される。例え
ば、硫酸水溶液のような酸を加え、酢酸エチルのような
水と混和しない有機溶媒を加え、目的化合物を含む有機
層を分離し、水等で洗浄して、溶剤を留去することによ
って得られる。更に必要ならば、活性炭を加えて脱色
し、ろ過して活性炭を除去した後、ナトリウムメトキシ
ド、ナトリウムエトキシド、水酸化ナトリウムのような
塩を形成する試薬を加え、ロータリエバポレーター等に
より減圧下濃縮して、プラバスタチンの塩を得ることが
できる。
【００３９】プラバスタチン又はその薬理上許容される
塩の不純物を無機酸により分解する工程は、不活性溶媒
の存在下又は非存在下（好適には、存在下）、プラバス
タチン又はその薬理上許容される塩を、ｐＨ２乃至５を
付与する条件（好適にはｐＨ３乃至４）で行われる。
【００４０】反応温度及び反応時間は、ｐＨ値にも依存
するが、基本的には、反応温度が低ければ反応時間は長
くする必要があり、反応温度が高ければ反応時間は短く
する必要があるが、例えば、２０℃〜８０℃（好適に
は、４０℃〜６０℃）にて、１分間乃至６時間（好適に
は、５分間乃至２０分間）、処理することにより行なわ
れる。
【００４１】上記反応において使用される不活性溶媒と
しては、本反応に不活性なものであれば特に限定はない
が、上記無機塩基を用いて不純物を分解する工程におい
て使用される不活性溶媒と同様のものを挙げることがで
きる。
【００４２】反応終了後、目的化合物であるプラバスタ
チンは常法に従って、上記反応液から採取される。例え
ば、酢酸エチルのような水と混和しない有機溶媒を加
え、目的化合物を含む有機層を分離し、水等で洗浄し
て、溶剤を留去することによって得られる。更に必要な
らば、活性炭を加えて脱色し、ろ過して活性炭を除去し
た後、水酸化ナトリウム、ナトリウムメトキシド、ナト
リウムエトキシドのような塩を形成する試薬を加え、ロ
ータリエバポレーター等により減圧下濃縮して、プラバ
スタチンの塩を得ることができる。
【００４３】なお、所望により、プラバスタチン又はそ
の薬理上許容される塩を、上記により精製した後、結晶
化することもでき、一般に有機合成化学の技術において
周知の方法、例えば、Ullmann's, Encyclopedia of Ind
ustrial Chemistry" Vol. A24, 5th edition (1993), p
p. 437-505に記載の方法により以下のように行うことが
できる。
【００４４】結晶化の方法としては、例えば、精製され
たプラバスタチン又はその薬理上許容される塩に、有機
溶媒及び水を加え、加温溶解し、接種することにより、
プラバスタチン又はその薬理上許容される塩の結晶を得
ることができる。
【００４５】結晶化に使用される有機溶媒としては、例
えば、ヘキサン、ヘプタンのような脂肪族炭化水素類；
トルエン、キシレンのような芳香族炭化水素類；酢酸メ
チル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、炭酸ジ
エチルのようなエステル類；酢酸のような有機酸類；メ
タノ−ル、エタノ−ル、ｎ−プロパノ−ル、イソプロパ
ノ−ル、ｎ−ブタノ−ル、イソブタノ−ル、ｔ−ブタノ
−ル、イソアミルアルコ−ル、ジエチレングリコール、
グリセリン、オクタノールのようなアルコ−ル類；アセ
トン、メチルエチルケトンのようなケトン類；ジエチル
エーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラ
ン、ジオキサン、ジメトキシエタン、ジエチレングリコ
ールジメチルエーテルのようなエ−テル類；ホルムアミ
ド、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、ヘ
キサメチルリン酸トリアミドのようなアミド類；ジメチ
ルスルホキシドのようなスルホキシド類；水と１種類以
上の上記溶媒との混合溶媒；であり、更に好適には、水
と、アルコ−ル類、エステル類及びケトン類から選択さ
れる１種類以上の有機溶媒との混合溶媒であり、最も好
適には、水、アルコール類及びエステル類の混合溶媒で
ある。
【００４６】なお、本発明の精製度の分析は、高性能液
体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を介して行うことが
できる。ＨＰＬＣの測定条件は、 Ａ：移動相：メタノール：水：酢酸(100)：トリエチル
アミン混液(600:400:1:1); 検出波長：UV２３８nm； カラム：エルマ光学製カラムERC‐ODS‐1262 φ6mm×1
0cm； カラム温度：30℃； 流量：1ml/min Ｂ：移動相：メタノール：水：酢酸(100)：トリエチル
アミン混液(450:550:1:1)； 検出波長：UV２３８nm； カラム：ＢＥＣＫＭＡＮ社製カラムＵＬＴＲＡＳＰＨＥ
ＲＥ ODS φ4.6mm×15cm 5μm； カラム温度：25℃； 流量：1.3ml/min Ｃ：移動相：20%アセトニトリル、30%メタノール、50%T
EAP緩衝液（0.3%Triethylamine-H3PO4（ｐH3.2））； 検出波長：UV２３８nm； カラム：Waters社製逆相カラムSymmetry C18 3.5μm,
4.6mm×15cm； 流量：1ml/min である。
【００４７】以下に、参考例及び実施例を示し、本発明
を更に詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらに限定
されるものではない。
【００４８】
【参考例】プラバスタチンの培養濃縮液２００ｍｌ（プ
ラバスタチンナトリウムの含有量：２１ｇ）に酢酸エチ
ル２６４ｍｌを加え、室温で攪拌しながら２０％硫酸水
溶液でｐＨ５．４に調整した。室温にて抽出後、酢酸エ
チル層と水層に分離した。
【００４９】水層に酢酸エチル２６４ｍｌを加え、抽
出分液し、酢酸エチル層を得た。酢酸エチル層と酢
酸エチル層を合わせて、水１００ｍｌを加え、室温で
攪拌しながら、４８％水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ
８．７に調整した。室温にて抽出分液した後、酢酸エチ
ル層と水層に分離した。水層をナスフラスコ（５
００ｍｌ）に仕込み、エバポレーターで約２／５量まで
減圧濃縮し、逆抽出水層濃縮液８８ｍｌ（プラバスタチ
ンナトリウムの含有量：１９．３ｇ）を得た。
【００５０】
【実施例】
【００５１】
【実施例１】参考例で得られた逆抽出水層濃縮液３ｍｌ
［ＨＰＬＣ（条件Ａ）によるプラバスタチンナトリウム
の純度：７８．６９％］を試験管に小分けし、約５０℃
まで加温後、塩化ナトリウムを０．９０ｇ添加し、３３
℃でプラバスタチンナトリウムを接種し、０℃まで冷却
後、ろ過した。結晶を冷水で洗浄し、プラバスタチンナ
トリウムの塩析結晶を得た。ＨＰＬＣ（条件Ａ）による
プラバスタチンナトリウムの純度は、９１．３６％であ
った。
【００５２】
【実施例２】参考例で得られた逆抽出水層濃縮液３ｍｌ
［ＨＰＬＣ（条件Ａ）によるプラバスタチンナトリウム
の純度：７８．６９％］を試験管に小分けし、約５０℃
まで加温後、硫酸アンモニウムを０．８３ｇ添加し（オ
イル状物分液：上層、下層）、３３℃でプラバスタチン
ナトリウムを接種し、０℃まで冷却し、ろ過した。結晶
を冷水で洗浄し、プラバスタチンナトリウムの塩析結晶
（結晶上層：褐色固体、結晶下層：白色スラリ状）を得
た。ＨＰＬＣ（条件Ａ）によるプラバスタチンナトリウ
ムの純度は、結晶上層８３．８２％、結晶下層９１．７
４％であった。
【００５３】
【実施例３】参考例で得られた逆抽出水層濃縮液３ｍｌ
［ＨＰＬＣ（条件Ａ）によるプラバスタチンナトリウム
の純度：７８．６９％］を試験管に小分けし、約５０℃
まで加温した。酢酸アンモニウムを０．８３ｇ添加する
と、数分で結晶が析出した。０℃まで冷却し、冷水２ｍ
ｌを加えてスラリ化した後、ろ過した。結晶を冷水で洗
浄し、プラバスタチンナトリウムの塩析結晶を得た。Ｈ
ＰＬＣ（条件Ａ）によるプラバスタチンナトリウムの純
度は、９０．１０％であった。
【００５４】
【実施例４】参考例で得られた逆抽出水層濃縮液３ｍｌ
［ＨＰＬＣ（条件Ａ）によるプラバスタチンナトリウム
の純度：７８．６９％］を試験管に小分けし、約５０℃
まで加温した。酢酸アンモニウムを０．８３ｇ添加する
と、数分で結晶が析出した。水３ｍｌを添加後、約５０
℃まで加温し、結晶を溶解した後、３３℃でプラバスタ
チンナトリウムを接種し、０℃まで冷却し、ろ過した。
結晶を冷水で洗浄し、プラバスタチンナトリウムの塩析
結晶を得た。ＨＰＬＣ（条件Ａ）によるプラバスタチン
ナトリウムの純度は、９３．２２％であった。
【００５５】
【実施例５】参考例で得られた逆抽出水層濃縮液３ｍｌ
［ＨＰＬＣ（条件Ａ）によるプラバスタチンナトリウム
の純度：７８．６９％］を試験管に小分けし、約５０℃
まで加温後、硝酸アンモニウムを０．８３ｇ添加し、３
３℃でプラバスタチンナトリウムを接種し、０℃まで冷
却し、ろ過した。結晶を冷水で洗浄し、プラバスタチン
ナトリウムの塩析結晶を得た。ＨＰＬＣ（条件Ａ）によ
るプラバスタチンナトリウムの純度は、９３．１８％で
あった。
【００５６】
【実施例６】参考例で得られた逆抽出水層濃縮液３ｍｌ
［ＨＰＬＣ（条件Ａ）によるプラバスタチンナトリウム
の純度：７８．６９％］を試験管に小分けし、約５０℃
まで加温後、硝酸アンモニウムを０．８３ｇ添加し、３
８℃まで冷却すると結晶が析出した。５３℃まで加温し
たが結晶は溶解せず、０℃まで冷却し、ろ過した。結晶
を冷水で洗浄し、プラバスタチンナトリウムの塩析結晶
を得た。ＨＰＬＣ（条件Ａ）によるプラバスタチンナト
リウムの純度は、９３．３７％であった。
【００５７】
【実施例７】（無機塩基分解）プラバスタチンの培養濃
縮液３００ｍｌ（プラバスタチンナトリウムの含有量：
３７ｇ）を４つ口フラスコ（５００ｍｌ）に仕込み、１
００℃まで加熱した後、２当量分の水酸化ナトリウムを
水溶液として添加した（ｐＨ１１．５）。１００℃で３
時間攪拌後冷却し、室温にて２０％硫酸水溶液でｐＨ
９．０に調整し、アルカリ処理液を得た（プラバスタチ
ンナトリウムの含有量：３３ｇ）。
【００５８】このアルカリ処理液７０ｍｌ（プラバスタ
チンナトリウムの含有量：５．３ｇ）に酢酸エチル１３
２ｍｌを加え、室温で攪拌しながら２０％硫酸水溶液
で、ｐＨ５．４に調整した。室温にて攪拌抽出後、酢酸
エチル層と水層に分離した。水層に酢酸エチル１
３２ｍｌを加え、抽出分液し、酢酸エチル層を得た。
一方、酢酸エチル層に水２５ｍｌを加え、抽出分液
し、酢酸エチル層及び水層を得た。また、酢酸エチ
ル層と水層を合わせて抽出分液し、酢酸エチル層
を得た。酢酸エチル層に水６０ｍｌを加え、室温で攪
拌しながら、４８％水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ８．
７に調整後、抽出分液し水層を得た。酢酸エチル層
と水層を合致し、室温で攪拌しながら４８％水酸化ナ
トリウム水溶液でｐＨ８．７に調整後、抽出分液し逆抽
出水層５０ｍｌ（プラバスタチンナトリウムの含有量：
４．４ｇ）を得た。ＨＰＬＣ（条件Ａ）によるプラバス
タチンナトリウムの純度は、８４．８８％であった。 （塩析）この逆抽出水層を、エバポレーターで約１／２
量まで減圧濃縮し、４８％水酸化ナトリウム水溶液でｐ
Ｈ１２に調整後、塩化ナトリウムを用いて実施例１と同
様に塩析を行い、プラバスタチンナトリウムの塩析結晶
を得た。ＨＰＬＣ（条件Ａ）によるプラバスタチンナト
リウムの純度は、９９．５４％であった。
【００５９】この後、参考のために、常法に従って再結
晶し、洗浄した後、４０℃で真空乾燥したところ、プラ
バスタチンナトリウムの結晶が、２．１４ｇ得られた。
ＨＰＬＣ（条件Ｂ）によるプラバスタチンナトリウムの
純度は、９９．８５％であった。
【００６０】なお、培養濃縮液を上記条件で無機塩基分
解する代わりに、上記逆抽出水層を、約２０％濃縮した
液６０ｍｌを、０℃まで冷却した後、４当量分の水酸化
ナトリウムを水溶液として添加し（ｐＨ１４付近）、０
℃で３０時間攪拌（無機塩基分解）したところ、上記よ
りも更に良好な純度のプラバスタチンナトリウムが得ら
れた。
【００６１】
【実施例８】変換培養を終えたプラバスタチンの培養液
１０ＬをカセイソーダでｐＨ１２とした後、５０℃に加
温し、３０分間撹拌した。培養液を室温に冷却後、ろ過
助剤として５００ｇのセライト５４５（商標）（セライ
ト コーポレーション社製）を加えてろ過した。分離し
た菌体に、水を３Ｌ加え、再度懸濁させた後、ろ過し
た。得られた２つのろ液を合わせて、１０Ｌの培養ろ液
を得た。このろ液を、２５％硫酸で、ｐＨ５．７とした
後、５Ｌの酢酸プロピルを加えて撹拌し、プラバスタチ
ンを抽出した。
【００６２】分離した水層を７５％硫酸でｐＨ５．７と
した後、５Ｌの酢酸プロピルを加えて撹拌し抽出した。
得られた２つの酢酸プロピル層を合わせて、これに２Ｌ
の飽和食塩水を加えて、撹拌して洗浄した。上層を分離
して得た８Ｌの抽出液に、１Ｌの水を加え、撹拌しなが
ら２５％水酸化ナトリウム水溶液を加えて、ｐＨ９．５
とした後、水層を分離してプラバスタチンナトリウム水
溶液１Ｌを得た。
【００６３】得られた水溶液に、３５０ｍｌのエタノー
ルを加え、リン酸でｐＨ３．０に調整した後、５０℃で
１０分間撹拌した。その後、２５％水酸化ナトリウム水
溶液を加えてｐＨ１２とし、更に、５０℃で３０分撹拌
を続けた。溶液を減圧下ロータリーエバポレーターで８
００ｍｌまで濃縮し、４８％水酸化ナトリウム水溶液で
ｐＨ１２に調整した後、塩化ナトリウムを用いて実施例
１と同様に塩析を行い、プラバスタチンナトリウムの塩
析結晶を得た（プラバスタチンナトリウムの含有量：６
０ｇ）。ＨＰＬＣ（条件Ｃ）によるプラバスタチンナト
リウムの純度は、９９．７％であった。
【００６４】この後、参考のために、常法に従って再結
晶し、洗浄した後、４０℃で真空乾燥したところ、プラ
バスタチンナトリウムの結晶が、５５ｇ得られた。ＨＰ
ＬＣ（条件Ｃ）よるプラバスタチンナトリウムの純度
は、９９．８５％であった。
【００６５】
【発明の効果】本発明の精製方法は、カラムクロマトグ
ラフィーのような煩雑かつ生産性の低く、工業的生産に
向かない方法を使用することなく、従って、工程生産性
及びプラバスタチンの純度を損なうことなく、高純度の
プラバスタチン又はその薬理上許容される塩を得ること
ができた。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 鈴木 睦夫 神奈川県平塚市中原上宿173 三共株式会 社内 (72)発明者 浜野 潔 東京都品川区広町１丁目２番58号 三共株 式会社内 (72)発明者 高松 安行 福島県いわき市泉町下川字大剱389−４ 三共株式会社内 (72)発明者 萩澤 稔 神奈川県平塚市中原上宿173 三共株式会 社内 Ｆターム(参考） 4H006 AA02 AD15 AD17 BC53 BE03 BE04 BE61 BE63 BJ30 BN10 BN20 BS10

Claims (9)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】塩析により、プラバスタチン又はその薬理
    上許容される塩を精製する方法。
  2. 【請求項２】塩析に用いられる塩が、アルカリ金属塩、
    アルカリ土類金属塩又はアンモニウム塩である、請求項
    １記載の方法。
  3. 【請求項３】塩析に用いられる塩が、アルカリ金属塩又
    はアンモニウム塩である、請求項１記載の方法。
  4. 【請求項４】塩析に用いられる塩が、塩化ナトリウム、
    硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウム又は硝酸アンモニ
    ウムである、請求項１記載の方法。
  5. 【請求項５】塩析に用いられる塩が、塩化ナトリウムで
    ある、請求項１記載の方法。
  6. 【請求項６】更に、不純物を無機塩基で分解する工程を
    行う、請求項１乃至請求項５より選択されるいずれか一
    項に記載の方法。
  7. 【請求項７】更に、不純物を無機酸で分解する工程を行
    う、請求項１乃至請求項６より選択されるいずれか一項
    に記載の方法。
  8. 【請求項８】無機酸が、リン酸又は硫酸である、請求項
    ７記載の方法。
  9. 【請求項９】無機酸を用いて分解する工程のｐＨが、２
    乃至５であることを特徴とする請求項７又は請求項８記
    載の方法。
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