KR20030043984A

KR20030043984A - 프라바스타틴 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염의정제 방법

Info

Publication number: KR20030043984A
Application number: KR10-2003-7004751A
Authority: KR
Inventors: 스기오노부나리; 다까마쯔야스유끼; 고지마순시; 스즈끼무쯔오; 하기사와미노루; 하마노기요시
Original assignee: 상꾜 가부시키가이샤
Priority date: 2000-10-16
Filing date: 2001-10-15
Publication date: 2003-06-02
Also published as: EP1327624A1; HUP0303123A2; WO2002032847A1; NO20031738D0; CZ2003956A3; AU2001294257A1; MXPA03003346A; BR0114680A; CN1481352A; CA2425882A1; JP2002121172A; SK4522003A3; HUP0303123A3; PL360920A1; NO20031738L; ZA200302968B; EP1327624A4; IL155158A0; US20030204105A1

Abstract

본 발명은 염석에 의해 프라바스타틴 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 정제하는 방법에 관한 것이다.

Description

프라바스타틴 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염의 정제 방법 {METHOD OF PURIFYING PRAVASTATIN OR ITS PHARMACOLOGICALLY ACCEPTABLE SALT}

프라바스타틴은 일본 공개특허공보 소57-2240호 (USP4346227) 에 HMG-CoA 환원효소 저해제로서 개시되어 있는 화합물로, 하기 화학식 I을 가지며,

현재 프라바스타틴나트륨이 고지혈증 치료제로서 발매되고 있다.

한편, 프라바스타틴도 포함되는 HMG-CoA 환원효소 저해제의 정제방법으로는 이하의 것이 알려져 있다.

(1) WO92/16276호 공보 (일본 특허공표공보 평6-506210호) 는「고성능 액체 크로마토그래피를 사용하는 것을 특징으로 하는 HMG-CoA 환원효소 저해제의 정제방법」에 관한 것으로, 구체적으로 기재되어 있는 HMG-CoA 환원효소 저해제는 락톤체를 최종 생성물로 하기 때문에 지용성 로바스타틴 및 심바스타틴으로서, 처음부터 나트륨염을 최종 생성물로 하는 프라바스타틴과는 다르다. 한편, WO00/17182호 공보는「치환 크로마토그래피를 사용하는 것을 특징으로 하는 HMG-CoA 환원효소 저해제의 정제방법」에 관한 것이다. 그러나, 어차피 공업적 생산을 고려하면, 고성능 액체 크로마토그래피나 치환 크로마토그래피와 같은 크로마토그래피를 사용하여 정제하는 것은 번잡하고 실용적이지 않다.

(2) WO99/42601호 공보

본 공보는「HMG-CoA 환원효소 저해제의 배양농축액을 산으로 pH 4.5 내지 7.5 로 조절한 후, 아세트산에틸로 HMG-CoA 환원효소 저해제를 추출하고, 원하는 바에 따라 락톤화시킨 후 결정화시킴으로써 99.6% 이상의 순도를 갖는 HMG-CoA 환원효소 저해제를 얻는 단리 또는 정제방법」에 관한 것이다.

본 공보의 실시예 3 에는 프라바스타틴의 단리 또는 정제방법이 기재되어 있지만, 본 실시예에서는 아세트산에틸로 추출된 프라바스타틴의 순도가 70.3% 채 못되는 데에 그쳐, 결국 그 후 크로마토그래피를 사용하여 정제하는 것으로 기재되어 있고, 게다가 최종적으로 얻어진 프라바스타틴의 순도에 대해서는 전혀 기재되어 있지 않아, 최종적으로 고순도의 프라바스타틴이 얻어지는지의 여부는 대체로 불분명하다.

또, 본 공보의 실시예에서 99.6% 이상의 고순도의 로바스타틴이 얻어진다고 보고되어 있지만, 최종 생성물의 HPLC 의 차트 (도 4) 를 보면 순도가 99.6% 이상인 로바스타틴이 얻어지고 있다고는 보기 어려워 신빙성이 없다.

여하튼 프라바스타틴의 정제를 위해서는 번잡한 크로마토그래피를 사용해야 함에는 변함이 없다.

그런데, 본 발명의 정제방법은 염석을 사용하는 것을 특징으로 하는데, 염석은 수용액에 무기염류 등을 첨가하여, 이전에 용해되어 있는 물질을 석출시키는 방법을 말한다.

통상, 염석은 단백질이나 아미노산과 같은 고분자 화합물을 불순물로부터 정제하기 위해서 사용된다. 예컨대, 단백질의 수용액에 다량의 염을 첨가함으로써 단백질분자와 수분자 상호작용이 염류이온에 의해 방해되기 때문에 단백질이 석출되는 것이다.

한편, 저분자 화합물의 수용액에 무기염류 등을 첨가한 경우도 염결정이 석출되는 경우가 있다. 이것은 상기 고분자 화합물에 염석을 사용하는 경우와는 다르다. 염류를 물에 첨가함으로써 염류의 수화력에 의해 주위의 수분자가 수화수로 고정되므로, 용질의 용해를 가능하게 하는 수분자의 양이 감소하여 용질이 석출되는 것이다. 그러나, 저분자 화합물이며 또한 매우 화학구조가 근사한 유연물질이 용질로서 수용액에 다수 녹아 있는 경우, 선택적으로 어떤 특정 화합물만을 고순도로 석출시키는 것은 곤란한 것으로 여겼다. 이로 인해, 프라바스타틴뿐만 아니라, 어떠한 HMG-CoA 환원효소 저해제에 대해서도 염석에 의해 정제한다는 기재나 시사는 없었다.

HMG-CoA 환원효소 저해제로서 프라바스타틴 외에 많은 화합물이 알려져 있지만, 예컨대 아토르바스타틴, 플루바스타틴, 이타바스타틴 등은 모두 합성에 의해 제조되는 화합물이다.

한편, 로바스타틴 및 심바스타틴은 프라바스타틴과 마찬가지로 발효에 의해 제조되는데, 로바스타틴 및 심바스타틴은 일단계 발효에 의해 생성되고, 프라바스타틴은 이단계 발효에 의해 생성되는 점에서 다르다. 즉, 프라바스타틴나트륨은 하기 반응식에 나타내는 바와 같이, 1단계의 발효에 의해 생성된 전구체를 2단계에서 미생물 변환배양을 실시함으로써 생성되는 것이다.

일반적으로 균을 발효시킨 경우, 화학반응으로 합성을 실시하는 것보다 예상할 수 없는 많은 불순물이 생성되게 되는 것이다. 각 공정마다 정제를 실시하였더라도 모든 불순물을 다 제거할 수 있는 것은 아니며, 특히 공업적 생산을 목적으로 한 대량 배양에서 불순물을 제거하는 것은 더욱 곤란하다.

그리고, 한편에서는「안전하며 유효한 의약을 제조하기 위한 중요한 인자의 하나가 고순도의 생성물을 얻는 것이다. 화학물질은 원료물질에서 화학합성, 생물에 의해 생산된 해당 물질을 단리 혹은 정제하거나, 또는 유전자 재조합 세포 등을 이용한 생산으로 생성된 해당 물질을 단리 또는 정제하는 등의 제법에 의해 취득된다. 일반적으로 유전자 재조합법을 포함하여 어떠한 제법을 채용하더라도, 원료의 순도, 반응의 불완전성, 단리 또는 정제과정에서의 분해 등에 따라 제조되는 화학물질은 순도 100% 인 것을 얻기는 곤란한 경우가 많다. 또, 의약 분야에서 진단약, 치료약은 불순물을 함유하면 진단이나 치료에 바람직하지 않은 영향을 미칠 가능성을 부정할 수 없는 것은, 본원발명이 속하는 기술분야에서의 기술상식에 속하는 것은 분명하여, 가능한 한 고순도의 생성물을 얻는 것이 중요시 되고 있다」(동경 고등법원 평성 9 년 (행개) 제 302 호 사건 (12 년 2 월 17 일 판결)) 라고 기재되어 있다.

특히 HMG-CoA 환원효소 저해제는 혈중 콜레스테롤을 유효하게 저하시키기 위해, 투여기간이 장기간에 걸치는 약제로서, 부작용을 적극 저감시키기 때문에 특히 고순도일 필요가 있는 것이다.

상기와 같이, 이단계 발효에 의해 생성되는 프라바스타틴류는 일단계 발효에 의해 생성되는 심바스타틴 및 로바스타틴에 비해 불순물도 보다 많이 생성되기 때문에 정제공정이 특히 중요하다.

따라서, 크로마토그래피와 같은 번잡하고 공업적으로 불리하지 않고, 공정생산성을 손상시키지 않고, 또한 크로마토그래피로 정제될 정도의 고순도이며, 프라바스타틴 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 단리 또는 정제하는 방법이 요구되었다.

발명의 개시

본 발명자들은 오랜 세월에 걸쳐 공정생산성을 손상시키지 않고, 크로마토그래피로 정제될 정도의 고순도이며, 프라바스타틴 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 단리 또는 정제하는 방법을 검토한 결과, 저분자 화합물인 프라바스타틴에 대해 염석을 사용함으로써 선택적으로 고순도의 프라바스타틴이 석출됨을 발견하고, 본 발명을 완성하였다.

본 발명은,

(1) 염석에 의해 프라바스타틴 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 정제하는 방법에 관한 것으로, 바람직하게는

(2) 염석에 사용되는 염이 알칼리금속염, 알칼리토류금속염 또는 암모늄염인 (1) 에 기재된 방법,

(3) 염석에 사용되는 염이 알칼리금속염 또는 암모늄염인 (1) 에 기재된 방법,

(4) 염석에 사용되는 염이 염화나트륨, 황산암모늄, 아세트산암모늄 또는 질산암모늄인 (1) 에 기재된 방법,

(5) 염석에 사용되는 염이 염화나트륨인 (1) 에 기재된 방법,

(6) 추가로, 불순물을 무기염기로 분해하는 공정을 조합하여 실시하는, (1) 내지 (5) 에서 선택되는 어느 한 항에 기재된 방법,

(7) 추가로, 불순물을 무기산으로 분해하는 공정을 조합하여 실시하는, (1) 내지 (6) 에서 선택되는 어느 한 항에 기재된 방법,

(8) 무기산이 인산 또는 황산인, (7) 에 기재된 방법,

(9) 무기산이 인산인, (7) 에 기재된 방법,

(10) 무기산을 사용하여 분해하는 공정의 pH 가 2 내지 5 인, (7) 내지 (9)에서 선택되는 어느 한 항에 기재된 방법 및,

(11) 프라바스타틴나트륨을 정제하는, (1) 내지 (10) 에서 선택되는 어느 한 항에 기재된 방법이다.

본 발명의 염석에 사용되는 염에서,

「알칼리금속염」이란, 예컨대 염화리튬, 염화칼륨, 염화나트륨과 같은 알칼리금속 할로겐화물, 아세트산리튬, 아세트산칼륨, 아세트산나트륨, 포름산리튬, 포름산칼륨, 포름산나트륨과 같은 알칼리금속 유기산화물, 질산리튬, 질산칼륨, 질산나트륨, 황산리튬, 황산칼륨, 황산나트륨과 같은 알칼리금속 무기산화물 등과 같은 알칼리금속을 함유하는 염이고,

「알칼리토류금속염」이란, 예컨대 염화마그네슘과 같은 알칼리토류금속 할로겐화물, 아세트산마그네슘, 포름산마그네슘과 같은 알칼리토류금속 유기산화물, 질산마그네슘, 황산마그네슘과 같은 알칼리토류금속 무기산화물 등의 알칼리토류금속을 함유하는 염이며,

「암모늄염」이란, 예컨대 염화암모늄, 아세트산암모늄, 포름산암모늄, 질산암모늄, 황산암모늄과 같은 암모늄염이다.

또한, 본 발명의 염석에 사용되는 염으로는 통상, 염으로 사용되는 것이면 특별히 한정은 없지만, 바람직하게는 알칼리금속염, 알칼리토류금속염 또는 암모늄염이며, 더욱 바람직하게는 알칼리금속염 또는 암모늄염이며, 보다 바람직하게는 염화나트륨, 황산암모늄, 아세트산암모늄 또는 질산암모늄이며, 가장 바람직하게는 염화나트륨이다.

「프라바스타틴 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염」의「약리학적으로 허용가능한 염」이란, 약리학적으로 부작용을 일으키지 않고, 통상 염으로 사용되는 것이면 특별히 한정되지 않지만, 예컨대 나트륨염, 칼륨염, 리튬염과 같은 알칼리금속염, 칼슘염, 마그네슘염과 같은 알칼리토류금속염, 알루미늄염, 철염 등의 금속염; 암모늄염과 같은 무기염, 알루미늄염, 철염, 아연염, 구리염, 니켈염, 코발트염 등의 금속염, t-옥틸아민염, 디벤질아민염, 모르폴린염, 글루코사민염, 페닐글리신알킬에스테르염, 에틸렌디아민염, N-메틸글루카민염, 구아니딘염, 디에틸아민염, 트리에틸아민염, 디시클로헥실아민염, N,N'-디벤질에틸렌디아민염, 클로로프로카인염, 프로카인염, 디에탄올아민염, N-벤질페네틸아민염, 피페라진염, 테트라메틸암모늄염, 트리스(히드록시메틸)아미노메탄염과 같은 유기염 등의 아민염; 및, 글리신염, 리신염, 알기닌염, 오르니틴염, 글루타민산염, 아스파라긴산염과 같은 아미노산염이며, 바람직하게는 알칼리금속염, 알칼리토류금속염, 무기염 또는 금속염이며, 더욱 바람직하게는 알칼리금속염이며, 가장 바람직하게는 나트륨염이다.

본 발명의 정제방법은 이하에 기재하는 방법에 의해 달성된다.

즉, 본 발명의 염석방법은 프라바스타틴 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염이 용해 또는 현탁되어 있는 수용액에 무기염을 첨가한 후, 냉각하고, 이어서 프라바스타틴 종(seed) 결정을 첨가하고 다시 냉각하여 프라바스타틴의 염을 석출시킴으로써 실시된다.

염석에 사용되는 염은 프라바스타틴의 약리학적으로 허용가능한 염과 동일한양이온을 갖고 있어도 되고 갖고 있지 않아도 된다.

프라바스타틴의 약리학적으로 허용가능한 염이 용해 또는 현탁된 수용액에 첨가하는 무기염의 양은 바람직하게는 상기 수용액의 양에 대해 5% 내지 40% 이며, 가장 바람직하게는 15% 내지 35% 이다.

프라바스타틴의 약리학적으로 허용가능한 염이 용해 또는 현탁된 수용액에 무기염을 첨가하여 가열할 때의 온도는 사용되는 무기염의 종류에 따라 다르지만, 통상 20℃ 내지 60℃ 이며, 바람직하게는 30℃ 내지 45℃ 이다.

본 발명의 프라바스타틴 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염의 정제방법은, 염석에 첨가하고 다시 불순물을 무기염기로 분해하는 공정을 조합하여 실시하거나/실시하고, 다시 불순물을 무기산으로 분해하는 공정을 조합하여 실시하는데, 각 공정에 대해서는 이하의 방법에 의해 실시된다.

불순물의 무기염기 분해에서 사용되는「무기염기」란, 통상적인 반응에서 무기염기로 사용되는 것이면 특별히 한정은 없지만, 예컨대 탄산리튬, 탄산나트륨, 탄산칼륨과 같은 알칼리금속 탄산염류; 탄산수소리튬, 탄산수소나트륨, 탄산수소칼륨과 같은 알칼리금속 중탄산염류; 수소화리튬, 수소화나트륨, 수소화칼륨과 같은 알칼리금속 수소화물류; 수산화리튬, 수산화나트륨, 수산화칼륨과 같은 알칼리금속 수산화물류; 또는 리튬메톡시드, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드, 칼륨 t-부톡시드와 같은 알칼리금속 알콕시드류를 들 수 있고, 바람직하게는 알칼리금속 수산화물류이며, 가장 바람직하게는 수산화나트륨이다.

프라바스타틴 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염의 불순물을 무기염기로분해하는 공정은 불활성 용매의 존재하 또는 비존재하 (바람직하게는 존재하) 에 프라바스타틴 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 pH 10 내지 pH 14 를 부여하는 조건에서 실시된다.

프라바스타틴 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염의 불순물을 무기염기로 분해할 때의 반응온도 및 반응시간은 pH 값에 의존하기도 하지만, 기본적으로는 반응온도가 낮으면 반응시간은 길게 할 필요가 있고, 반응온도가 높으면 반응시간은 짧게 할 필요가 있는데, 예컨대 반응온도는 －10℃ 내지 110℃ 이며, 반응시간은 15 분 내지 200 시간이다.

또, 균에 의해 생성된 프라바스타틴류를 함유하는 배양농축액에 함유되는 불순물을 무기염기로 분해하는 경우의 바람직한 반응조건은 pH 는 11 내지 14 (보다 바람직하게는 11 내지 12) 이며, 반응온도는 40℃ 내지 110℃ (보다 바람직하게는 95℃ 내지 105℃) 이며, 반응시간은 2 시간 내지 24 시간 (보다 바람직하게는 2 시간 내지 5 시간) 이다.

한편, 균에 의해 생성된 프라바스타틴류를 함유하는 배양농축액으로부터 유기용매를 사용하여 산성 (바람직하게는 pH 4 내지 6) 으로 일단 추출분액한 후, 알칼리성 (바람직하게는 pH 8 내지 9) 으로 역추출한 수용액에 함유되는 불순물을 무기염기로 분해하는 경우의 바람직한 반응조건은 pH 는 13 내지 14 (보다 바람직하게는 13.5 내지 14) 이며, 반응온도는 －10℃ 내지 50℃ (보다 바람직하게는 －5℃ 내지 5℃) 이며, 반응시간은 2 시간 내지 180 시간 (보다 바람직하게는 20 시간 내지 50 시간이며, 가장 바람직하게는 25 시간 내지 35 시간) 이다.

프라바스타틴 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염의 불순물을 무기염기로 분해할 때에 사용되는 불활성 용매로는, 본 반응에 불활성인 것으로, 통상 용매로서 사용되는 것이면 특별히 한정은 없지만, 예컨대 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 이소프로판올, n-부탄올, 이소부탄올, t-부탄올, 이소아밀알콜, 디에틸렌글리콜, 글리세린, 옥탄올, 시클로헥산올, 메틸셀로솔브와 같은 알콜류; 물; 또는 물과 상기 알콜류와의 혼합용매이며, 바람직하게는 물 또는 물과 상기 알콜류와의 혼합용매이며, 가장 바람직하게는 물 또는 물과 에탄올과의 혼합용매이다.

반응종료후, 목적화합물인 프라바스타틴은 통상적인 방법에 따라 상기 반응액에서 채취된다. 예컨대, 황산수용액과 같은 산수용액을 첨가하고, 아세트산에틸과 같은 물과 혼합되지 않는 유기용매를 첨가하고, 목적화합물을 함유하는 유기층을 분리하여 물 등으로 세정하고, 용제를 증류제거함으로써 얻어진다. 추가로 필요하다면 활성탄을 첨가하여 탈색시키고, 여과에 의해 활성탄을 제거한 후, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드, 수산화나트륨과 같은 염을 형성하는 시약을 첨가하여 회전 농축기 등으로 감압하 농축하여 프라바스타틴의 염을 얻을 수 있다.

불순물의 무기산 분해에서 사용되는「무기산」이란, 통상 무기산으로 사용되는 것이면 특별히 한정은 없지만, 예컨대 브롬화수소산, 염산, 황산, 과염소산, 인산, 질산과 같은 무기산을 들 수 있고, 바람직하게는 인산 또는 황산이고, 가장 바람직하게는 인산이다.

프라바스타틴 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염의 불순물을 무기산에 의해 분해하는 공정은 불활성 용매의 존재하 또는 비존재하에 (바람직하게는 존재하), 프라바스타틴 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 pH 2 내지 5 를 부여하는 조건 (바람직하게는 pH 3 내지 4) 에서 실시된다.

프라바스타틴 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염의 불순물을 무기산에 의해 분해할 때의 반응온도 및 반응시간은 pH 값에 의존하기도 하지만, 기본적으로는 반응온도가 낮으면 반응시간은 길게 할 필요가 있고, 반응온도가 높으면 반응시간은 짧게 할 필요가 있는데, 예컨대 반응온도는 20℃ 내지 80℃ (바람직하게는 40℃ 내지 60℃) 이며, 반응시간은 1 분간 내지 6 시간 (바람직하게는 5 분간 내지 20 분간) 이다.

프라바스타틴 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염의 불순물을 무기산에 의해 분해할 때에 사용되는 불활성 용매로는 본 반응에 불활성인 것이면 특별히 한정은 없지만, 상기 무기염기를 사용하여 불순물을 분해하는 공정에서 사용되는 불활성 용매와 동일한 것을 들 수 있다.

반응종료후, 목적화합물인 프라바스타틴은 통상적인 방법에 따라 상기 반응액에서 채취된다. 예컨대, 아세트산에틸과 같은 물과 혼합되지 않는 유기용매를 첨가하고, 목적화합물을 함유하는 유기층을 분리하여 물 등으로 세정하고, 용제를 증류제거함으로써 얻어진다. 추가로 필요하다면 활성탄을 첨가하여 탈색시키고, 여과에 의해 활성탄을 제거한 후, 수산화나트륨, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드와 같은 염을 형성하는 시약을 첨가하여 회전 농축기 등으로 감압하 농축하여 프라바스타틴의 염을 얻을 수 있다.

또한, 원하는 바에 따라 프라바스타틴 또는 약리학적으로 허용가능한 염을상기에 의해 정제한 후, 결정화할 수도 있고, 일반적으로 유기합성화학의 기술에서 주지 방법 [예컨대, Ullmann's, Encyclopedia of Industrial Chemistry, Vol.A24, 5th edition (1993), pp. 437-505 에 기재된 방법] 에 의해 이하와 같이 실시할 수 있다.

결정화 방법으로는 예컨대 정제된 프라바스타틴 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염에 유기용매 및 물을 첨가하여 가온용해시키고 접종시킴으로써 프라바스타틴 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염의 결정을 얻을 수 있다.

결정화에 사용되는 유기용매로는 예컨대 헥산, 헵탄과 같은 지방족 탄화수소류; 톨루엔, 자일렌과 같은 방향족 탄화수소류: 아세트산메틸, 아세트산에틸, 아세트산프로필, 아세트산부틸, 탄산디에틸과 같은 에스테르류; 아세트산과 같은 유기산류; 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 이소프로판올, n-부탄올, 이소부탄올, t-부탄올, 이소아밀알콜, 디에틸렌글리콜, 글리세린, 옥탄올과 같은 알콜류; 아세톤, 메틸에틸케톤과 같은 케톤류; 디에틸에테르, 디이소프로필에테르, 테트라히드로푸란, 디옥산, 디메톡시에탄, 디에틸렌글리콜, 디메틸에테르와 같은 에테르류; 포름아미드, 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드, 헥사메틸인산트리아미드와 같은 아미드류; 디메틸술폭시드와 같은 술폭시드류; 또는 물과 1 종류 이상의 상기 용매와의 혼합용매이며, 더욱 바람직하게는 물과 알콜류, 에스테르류 및 케톤류에서 선택되는 1 종류 이상의 유기용매와의 혼합용매이며, 가장 바람직하게는 물, 알콜류 및 에스테르류의 혼합용매이다.

발명의 효과

본 발명의 정제방법을 사용함으로써, 칼럼 크로마토그래피와 같은 번잡하고 생산성이 낮으며, 공업적 생산에 적합하지 않은 방법을 사용하지 않고 고순도의 프라바스타틴 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 얻을 수 있다.

이하에 참고예 및 실시예를 기재하여, 본 발명을 더욱 상세하게 설명하지만, 본 발명의 범위는 이것들에 한정되는 것은 아니다.

참고예 1

프라바스타틴의 배양농축액 200㎖ (프라바스타틴나트륨의 함유량: 21g) 에 아세트산에틸 264㎖ 를 첨가하고, 실온에서 교반하면서 20% 황산수용액을 첨가하여 pH 5.4 로 조정하였다. 실온에서 추출후, 아세트산에틸층 ① 과 수층 ① 로 분리하였다.

수층 ① 에 아세트산에틸 264㎖ 를 첨가하고 추출분액하여 아세트산에틸층 ② 를 얻었다. 아세트산에틸층 ① 과 아세트산에틸층 ② 를 합쳐 물 100㎖ 를 첨가하고, 실온에서 교반하면서 48% 수산화나트륨 수용액을 첨가하여 pH 8.7 로 조정하였다. 실온에서 추출분액한 후, 아세트산에틸층 ③ 과 수층 ③ 으로 분리하였다. 수층 ③ 을 둥근 플라스크 (500㎖) 에 주입하고, 농축기로 약 2/5 양까지 감압농축하여 역추출 수층 농축액 88㎖ (프라바스타틴나트륨의 함유량: 19.3g) 를 얻었다.

실시예 1

참고예 1 에서 얻어진 역추출 수층 농축액 3㎖ [HPLC (조건 A) 에 의한 프라바스타틴나트륨의 순도: 78.69%] 를 시험관에 소구분하여 약 50℃ 까지 가온후, 염화나트륨을 0.90g 첨가하고, 33℃ 에서 프라바스타틴나트륨을 접종하여 0℃ 까지 냉각후, 여과하였다. 결정을 빙수로 세정하여 프라바스타틴나트륨의 염석결정을 얻었다. HPLC (조건 A) 에 의한 프라바스타틴나트륨의 순도는 91.36% 였다.

실시예 2

참고예 1 에서 얻어진 역추출 수층 농축액 3㎖ [HPLC (조건 A) 에 의한 프라바스타틴나트륨의 순도: 78.69%] 를 시험관에 소구분하여 약 50℃ 까지 가온후, 황산암모늄을 0.83g 첨가하고 (오일상물 분액은 상층 및 하층으로 분리됨), 33℃ 에서 프라바스타틴나트륨을 접종하여 0℃ 까지 냉각후, 여과하였다. 결정을 빙수로 세정하여 프라바스타틴나트륨의 염석결정 (결정 상층은 갈색 고체, 결정 하층은 백색 슬러리 상태였음) 을 얻었다. HPLC (조건 A) 에 의한 프라바스타틴나트륨의 순도는 결정 상층 83.82%, 결정 하층 91.74% 였다.

실시예 3

참고예 1 에서 얻어진 역추출 수층 농축액 3㎖ [HPLC (조건 A) 에 의한 프라바스타틴나트륨의 순도: 78.69%] 를 시험관에 소구분하여 약 50℃ 까지 가온하였다. 아세트산암모늄을 0.83g 첨가하자 몇분안에 결정이 석출되었다. 0℃까지 냉각하고, 빙수 2㎖ 를 첨가하여 슬러리화시킨 후, 여과하였다. 결정을 빙수로 세정하여 프라바스타틴나트륨의 염석결정을 얻었다. HPLC (조건 A) 에 의한 프라바스타틴나트륨의 순도는 90.10% 였다.

실시예 4

참고예 1 에서 얻어진 역추출 수층 농축액 3㎖ [HPLC (조건 A) 에 의한 프라바스타틴나트륨의 순도: 78.69%] 를 시험관에 소구분하여 약 50℃ 까지 가온하였다. 아세트산암모늄을 0.83g 첨가하자 몇분안에 결정이 석출되었다. 물 3㎖ 를 첨가후, 약 50℃ 까지 가온하여 결정을 용해시킨 후, 33℃ 에서 프라바스타틴나트륨을 접종하여 0℃ 까지 냉각후, 여과하였다. 결정을 빙수로 세정하여 프라바스타틴나트륨의 염석결정을 얻었다. HPLC (조건 A) 에 의한 프라바스타틴나트륨의 순도는 93.22% 였다.

실시예 5

참고예 1 에서 얻어진 역추출 수층 농축액 3㎖ [HPLC (조건 A) 에 의한 프라바스타틴나트륨의 순도: 78.69%] 를 시험관에 소구분하여 약 50℃ 까지 가온후, 질산암모늄을 0.83g 첨가하고, 33℃ 에서 프라바스타틴나트륨을 접종하여 0℃ 까지 냉각후, 여과하였다. 결정을 빙수로 세정하여 프라바스타틴나트륨의 염석결정을 얻었다. HPLC (조건 A) 에 의한 프라바스타틴나트륨의 순도는 93.18% 였다.

실시예 6

참고예 1 에서 얻어진 역추출 수층 농축액 3㎖ [HPLC (조건 A) 에 의한 프라바스타틴나트륨의 순도: 78.69%] 를 시험관에 소구분하여 약 50℃ 까지 가온후, 질산암모늄을 0.83g 첨가하여 38℃ 까지 냉각하자 결정이 석출되었다. 53℃ 까지 가온하였지만 결정은 용해되지 않아 0℃ 까지 냉각후, 여과하였다. 결정을 빙수로 세정하여 프라바스타틴나트륨의 염석결정을 얻었다. HPLC (조건 A) 에 의한 프라바스타틴나트륨의 순도는 93.37% 였다.

실시예 7

(1) 무기염기 분해에 의한 정제

프라바스타틴의 배양농축액 300㎖ (프라바스타틴나트륨의 함유량: 37g) 를 4 구 플라스크 (500㎖) 에 주입하여 100℃ 까지 가열한 후, 2 당량분의 수산화나트륨을 수용액으로 첨가하였다 (pH 11.5). 100℃ 에서 3 시간 동안 교반후 냉각하고, 실온에서 20% 황산수용액으로 pH 9.0 으로 조정하여 알칼리처리액을 얻었다 (프라바스타틴나트륨의 함유량: 33g).

이 알칼리처리액 70㎖ (프라바스타틴나트륨의 함유량: 5.3g) 에 아세트산에틸 132㎖ 를 첨가하여, 실온에서 교반하면서 20% 황산수용액으로 pH 5.4 로 조정하였다. 실온에서 교반추출후, 아세트산에틸층 ① 과 수층 ① 로 분리하였다. 수층 ① 에 아세트산에틸 132㎖ 를 첨가하고, 추출분액하여 아세트산에틸층 ② 를 얻었다. 한편, 아세트산에틸층 ① 에 물 25㎖ 를 첨가하여, 추출분액하여 아세트산에틸층 ③ 및 수층 ③ 을 얻었다. 또, 아세트산에틸층 ② 와 수층 ③ 을 합하고 추출분액하여 아세트산에틸층 ④ 를 얻었다. 아세트산에틸층 ③ 에 물 60㎖ 를 첨가하여 실온에서 교반하면서 48% 수산화나트륨 수용액으로 pH 8.7 로 조정후, 추출분액하여 수층 ⑤ 를 얻었다. 아세트산에틸층 ④ 와 수층 ⑤ 를 합하고 실온에서 교반하면서 48% 수산화나트륨 수용액으로 pH 8.7 로 조정후, 추출분액하여 역추출 수층 50㎖ (프라바스타틴나트륨의 함유량: 4.4g) 를 얻었다. HPLC (조건 A) 에 의한 프라바스타틴나트륨의 순도는 84.88% 였다.

(2) 염석에 의한 정제

이 역추출 수층을 농축기로 약 1/2 양까지 감압농축하여 48% 수산화나트륨 수용액으로 pH 12 로 조정후, 염화나트륨을 사용하여 실시예 1 과 마찬가지로 염석을 실시하여 프라바스타틴나트륨의 염석결정을 얻었다. HPLC (조건 A) 에 의한 프라바스타틴나트륨의 순도는 99.54% 였다.

이 후, 참고를 위해, 통상적인 방법에 따라 재결정하고, 세정한 후, 40℃ 에서 진공건조시킨 결과, 프라바스타틴나트륨의 결정이 2.14g 얻어졌다. HPLC (조건 B) 에 의한 프라바스타틴나트륨의 순도는 99.85% 였다.

또한, 배양농축액을 상기 조건에서 무기염기 분해하는 대신에, 상기 역추출 수층을 약 20% 농축한 액 60㎖ 를 0℃ 까지 냉각한 후, 4 당량분의 수산화나트륨을 수용액으로 첨가하여 (pH 14 부근), 0℃ 에서 30 시간 동안 교반 (무기염기 분해) 한 결과, 상기보다 더욱 양호한 순도의 프라바스타틴나트륨이 얻어졌다.

실시예 8

변환 배양을 마친 프라바스타틴의 배양액 10L 를 수산화나트륨으로 pH 12 로 한 후, 50℃ 로 가온하여 30 분 동안 교반하였다. 배양액을 실온으로 냉각후, 여과보조제로서 500g 의 세라이트 545 (상표) (세라이트 코포레이션사 제조) 를 첨가하여 여과하였다. 분리된 균체에 물을 3L 첨가하여 다시 현탁시킨 후, 여과하였다. 얻어진 2 개의 여과액을 합쳐 10L 의 배양여과액을 얻었다. 이 여과액을 25% 황산으로 pH 5.7 로 한 후, 5L 의 아세트산프로필을 첨가하고 교반하여 프라바스타틴을 추출하였다.

분리된 수층을 75% 황산으로 pH 5.7 로 한 후, 5L 의 아세트산프로필을 첨가하고 교반하여 추출하였다. 얻어진 2 개의 아세트산프로필을 합쳐 이것에 2L 의 포화식염수를 첨가하고 교반하여 세정하였다. 상층을 분리하여 얻은 8L 의 추출액에 1L 의 물을 첨가하고, 교반하면서 25% 수산화나트륨 수용액을 첨가하여 pH 9.5 로 한 후, 수층을 분리하여 프라바스타틴나트륨 수용액 1L 를 얻었다.

얻어진 수용액에 350㎖ 의 에탄올을 첨가하여 인산으로 pH 3.0 으로 조정한 후, 50℃ 에서 10 분 동안 교반하였다. 그 후, 25% 수산화나트륨 수용액을 첨가하여 pH 12 로 하고, 다시 50℃ 에서 30 분 교반을 계속하였다. 용액을 감압하 회전 농축기로 800㎖ 까지 농축하고, 48% 수산화나트륨 수용액으로 pH 12 로 조정한 후, 염화나트륨을 사용하여 실시예 1 과 마찬가지로 염석을 실시하여 프라바스타틴나트륨의 염석결정을 얻었다 (프라바스타틴나트륨의 함유량: 60g). HPLC (조건 C) 에 의한 프라바스타틴나트륨의 순도는 99.7% 였다.

이 후, 참고를 위해, 통상적인 방법에 따라 재결정하고, 세정한 후, 40℃ 에서 진공건조시킨 결과, 프라바스타틴나트륨의 결정이 55g 얻어졌다. HPLC (조건 C) 에 의한 프라바스타틴나트륨의 순도는 99.85% 였다.

본 발명의 프라바스타틴 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 의약으로 사용하는 경우에는, 그 자체 또는 적절한 약리학적으로 허용되는 부형제, 희석제 등과 혼합하여, 예컨대 정제, 캡슐제, 과립제, 산제 혹은 시럽제 등에 의한 경구적 또는 주사제 혹은 좌제 등에 의한 비경구적으로 투여할 수 있다.

또한, 본 발명의 정제도의 분석은 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC) 를 사용하여 실시할 수 있다. HPLC 의 측정조건은,

A: 이동상: 메탄올:물:아세트산:트리에틸아민 혼합물 (600:400:1:1);

검출파장: UV238㎚;

칼럼: 엘마광학제조 칼럼 ERC-ODS-1262 φ6㎜×10㎝;

칼럼온도: 30℃;

유량: 1㎖/분,

B: 이동상: 메탄올:물:아세트산:트리에틸아민 혼합물 (450:550:1:1);

검출파장: UV238㎚;

칼럼: BECKMAN 사 제조 칼럼 ULTRASPHERE ODS φ4.6㎜×15㎝ 5㎛;

칼럼온도: 25℃;

유량: 1.3㎖/분, 또는

C: 이동상: 20% 아세토니트릴, 30% 메탄올, 50% TEAP 완충액

(0.3% 트리에틸아민-H₃PO₄(pH 3.2));

검출파장: UV238㎚;

칼럼: Waters 사 제조 역상 칼럼 Symmetry C18 3.5㎛, 4.6㎜×15㎝;

유량: 1㎖/분

이다.

Claims

염석에 의해 프라바스타틴 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 정제하는 방법.
제 1 항에 있어서, 염석에 사용되는 염이 알칼리금속염, 알칼리토류금속염 또는 암모늄염인 방법.
제 1 항에 있어서, 염석에 사용되는 염이 알칼리금속염 또는 암모늄염인 방법.
제 1 항에 있어서, 염석에 사용되는 염이 염화나트륨, 황산암모늄, 아세트산암모늄 또는 질산암모늄인 방법.
제 1 항에 있어서, 염석에 사용되는 염이 염화나트륨인 방법.
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 추가로 불순물을 무기염기로 분해하는 공정을 조합하여 실시하는 방법.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 추가로 불순물을 무기산으로분해하는 공정을 조합하여 실시하는 방법.
제 7 항에 있어서, 무기산이 인산 또는 황산인 방법.
제 7 항에 있어서, 무기산이 인산인 방법.
제 7 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서, 무기산을 사용하여 분해하는 공정의 pH 가 2 내지 5 인 방법.
제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서, 프라바스타틴나트륨을 정제하는 방법.