CZ2003956A3 - Způsob purifikace pravastatinu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli - Google Patents

Description

Předkládaný vynález se týká způsobu purifikace pravastatinu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli. Způsob využívá techniku vysolování.

Dosavadní stav techniky:

Pravastatin je popsán v upřesnění japonské patentové přihlášky č. Sho 57-2 240 (USP 4 346 227) jako inhibitor HMG-CoA reduktázy a má vzorec I. Sodná sůl pravastatinu byla uvedena na trh jako anti-hyperlipidemické činidlo.

Pro purifikaci inhibitorů HMG-CoA reduktázy, včetně pravastatinu, jsou využívány tyto způsoby:

(1) Způsob purifikace inhibitorů HMG-CoA reduktázy vysokoúčinnostní kapalinovou chromatografií je popsán v upřesnění WO 92/16 276 (Japonská patentová přihláška (Kohyo) č. Hei 6-506 210). Zde popsané inhibitory HMG-CoA reduktázy, jako např. lovastatin, který je rozpustný v tucích, jsou v laktonové formě. Sodná sůl pravastatinu se výrazně odlišuje od laktonové formy, tj. od inhibitorů HMG-CoA reduktázy rozpustných v tucích. Způsob purifikace inhibitorů HMG-CoA reduktázy nahrazovací chromatografií je popsána v upřesnění WO 00/17 182. Tyto způsoby purifikace, vysokoúčinnostní kapalinová chromatografie a nahrazovací chromatografie, jsou komplikované a nepraktické z pohledu průmyslové produkce inhibitorů HMG-Coa reduktázy.

(2) Způsob izolace nebo purifikace inhibitoru HMG-CoA reduktázy, ve které se pH koncentrovaného kultivačního média, obsahujícího inhibitor HMG-CoA reduktázy, • 9 ·· • · · ♦ • · · · • · ··· · • · · ·· · · • · · • · ··· • · · · • « · ·

Φ· ·· ·· *··· r · · • · · • · · • r · · ·· ·· upraví kyselinou tak, aby se pohybovalo v rozmezí 4,5 až 7,5. Při této metodě se inhibitor HMG-CoA reduktázy extrahuje pomocí ethylacetátu a pokud je třeba, inhibitor se laktonizuje a krystalizuje, aby měl výsledný inhibitor HMG-CoA reduktázy čistotu

99,6 % a více. Tato způsob je popsána v upřesnění WO 99/42 601. Způsob izolace nebo purifikace pravastatinu je popsán v Příkladu 3 tohoto vynálezu. V tomto příkladu je čistota pravastatinu získaného extrakcí pomocí ethylacetátu pouze 70,3 %. Tento surový produkt je pak chromatograficky přečištěn, aby byl získán požadovaný produkt. Čistota tohoto výsledného produktu ovšem není popsána. Proto není jasné, je-li konečný produkt vysoce čistý pravastatin.

V jednom příkladu tohoto vynálezu je popsáno, že byl získán lovastatin o čistotě

99,6 % nebo více. Ovšem HPLC diagram (Obr. 4) konečného produktu tohoto vynálezu čistotu zpochybňuje.

Je tedy jasné, že pro purifikaci pravastatinu je nutno důkladně ovládat náročné chromatografické techniky.

Způsoby purifikace dle tohoto vynálezu využívají techniky vysolování. Termín „technika vysolování “ popisuje způsob, při kterém se sráží rozpuštěná látka z vodného roztoku přidáním anorganické soli. Techniky vysolování jsou většinou používány k purifikaci makromolekulárních sloučenin jako jsou bílkoviny nebo aminokyseliny. Tak například pokud se přidá k vodnému roztoku proteinových molekul velké množství soli, dojde k přerušení vazeb mezi molekulami vody a bílkovin a výsledkem je vysrážení bílkovinných molekul.

Na druhé straně, pokud je anorganická sůl přidána k vodnému roztoku nízkomolekulárních sloučenin, k vysrážení pomocí solných krystalů dojde jen v určitých případech. Tyto případy se liší od vysolování makromolekulárních sloučenin popsaných výše. V tomto případě dojde ktomu, že po přidání soli do roztoku se molekuly vody fixují okolo molekuly soli. Je to dáno schopností soli tvořit hydráty. Tím pádem se ale sníží množství molekul vody, které rozpuštěnou látku udržují v roztoku a výsledkem je opět vysrážení rozpuštěné látky. Bylo zjištěno, že je velmi náročné selektivně srážet konkrétní rozpuštěnou látku ve vysoké čistotě z vodného roztoku obsahujícího velké množství sloučenin, které mají velice podobnou chemickou strukturu. Z tohoto důvodu zde dosud neexistoval návod nebo popis způsobu purifikace pravastatinu a jiných inhibitorů HMG-CoA reduktázy technikami vysolování.

φφφ

Z dalších inhibitorů HMG-CoA reduktázy jsou kromě pravastatinu známy také atorvastatin, fluvastatin a itavastatin, které jsou připravovány synteticky. Na druhé straně například lovastatin a simvastatin jsou připravovány fermentaci podobně jako pravastatin. Tyto sloučeniny jsou připravovány fermentaci v jednom kroku. Sodná sůl pravastatinu se vyrábí podle následujícího reakčního schématu. Nejprve se v jednom kroku fermentačně vyrobí meziprodukt, který podléhá následně další fermentační mikrobiální přeměně na konečný produkt.

Penicillium citrinum

Obecně při fermentaci vzniká daleko více nežádoucích nečistot než při chemické syntéze. I když jsou produkty každé fermentace purifikovány, nikdy nedojde k úplnému odstranění všech nečistot z konečného produktu. Dále je velmi náročné odstraňovat nečistoty z produktu, který vznikl během fermentace v průmyslovém měřítku.

Na druhé straně existuje rozhodnutí (Rozhodnutí Tokijského vyššího soudu č. Hei 9 (gyou ke) 302; datum rozhodnutí 17. února 2000), ve kterém je uvedeno, že jedním z důležitých faktorů při přípravě bezpečného a účinného farmaceutického činidla je právě získání produktu o vysoké čistotě; chemická látka se vyrábí chemickou syntézou z jednoho či více výchozích materiálů, fermentaci mikroorganismy nebo pomocí buněk připravených genetickou rekombinací. Poté následuje izolace a purifikace produktu. V mnoha případech je obtížné získat 100% čistou chemickou látku v jakémkoli ze třech možných výše popsaných způsobů, včetně způsobu využívající genetickou rekombinací, protože čistota chemické látky závisí na čistotě výchozích materiálů, proměnlivosti reakce a zpětné reakce během izolace a purifikace. Z pohledu farmaceutických odborníků je nesporné, že nečistoty přítomné v chemické látce působí nepříznivě na léčbu a diagnózu nemoci. Proto je velmi žádoucí, aby byla získána chemická látka v co nejvyšší možné čistotě.

• ·

Konkrétně je nezbytné, aby byly inhibitory HMG-CoA reduktázy co nejčistší, aby se předešlo vedlejším účinkům, protože tyto inhibitory jsou podávány většinou dlouhodobě, aby účinně snižovaly hladinu cholesterolu v krvi.

Purifikace pravastatinu je velmi důležitá, protože pravastatin, vyráběný ve dvou krocích fermentaci, obsahuje více nečistot než simvastatin a lovastatin, které se také vyrábí fermentaci, ovšem v jednom kroku. Proto je vhodné, aby byly zajištěny důkladná izolace a purifikace pravastatinu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, při kterých by byl získán produkt, jehož čistota by byla stejná jako čistota stejného produktu získaného chromatografií. Přitom by byla udržena produktivita v průmyslovém měřítku a nemusely by se využívat průmyslově nepraktické a nevýhodné způsoby jako je například chromatografie.

Podstata vynálezu

Již mnoho let se se značným úsilím studují způsoby vedoucí k izolaci a purifikaci pravastatinu a jeho farmaceuticky přijatelných solí v čistotě, která odpovídá čistotě látky získané chromatografií, a kde si tyto způsoby udržují schopnost průmyslového využití. Bylo zjištěno, že pravastatin, který má nízkou molekulovou hmotnost, je selektivně srážen ve vysoké čistotě technikou vysolování a tento vynález byl dokončen.

Tento vynález se týká:

(1) způsobu purifikace pravastatinu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, vyznačujícího se tím, že se použije technika vysolování;

pokud možno (2) způsobu podle (1), vyznačujícího se tím, že se při technice vysolování použije sůl, vybraná ze skupiny obsahující sůl alkalického kovu, kovu alkalických zemin nebo amonnou sůl.

(3) způsobu podle (1), vyznačujícího se tím, že se při technice vysolování použije sůl, vybraná ze skupiny obsahující sůl alkalického kovu nebo amonnou sůl.

(4) způsobu podle (1), vyznačujícího se tím, že se při technice vysolování použije sůl, vybraná ze skupiny obsahující chlorid sodný, síran amonný, octan amonný nebo dusičnan amonný.

(5) způsobu podle (1), vyznačujícího se tím, že se při technice vysolování použije chlorid sodný.

·· ·· ·· · · ·· · · · · • · · · 9 · · 9 9 9 ·· · · ···· · 9 9 • ······ ·· · · · · « • · * · 9 · · · · · · (6) způsobu podle jakéhokoli ze způsobů (1) až (5), vyznačujícího se tím, že se dále použije anorganická zásada k rozkladu nečistot.

(7) způsobu podle jakéhokoli ze způsobů (1) až (5), vyznačujícího se tím, že se dále použije anorganická kyselina k rozkladu nečistot.

(8) způsobu podle (7), vyznačujícího se tím, že se jako anorganická kyselina použije kyselina fosforečná nebo sírová.

(9) způsobu podle (7), vyznačujícího se tím, že se jako anorganická kyselina použije kyselina fosforečná.

(10) způsobu podle jakéhokoli ze způsobů (7) až (9), vyznačujícího se tím, že se pH roztoku při rozkladu nečistot využívající anorganickou kyselinu pohybuje v rozmezí 2 až 5.

(11) způsobu purifikace sodné soli pravastatinu podle jakéhokoli ze způsobů (1) až (10).

Příklady solí, které se využívají při technice vysolování tohoto vynálezu: sůl alkalického kovu je sůl obsahující alkalický kov, např. halogenidy alkalických kovů jako např. chlorid lithný, chlorid draselný nebo chlorid sodný; sůl karboxylové kyseliny s alkalickým kovem jako např. octan lithný, octan draselný, octan sodný, mravenčan lithný, mravenčan draselný nebo mravenčan sodný; neboje to alkalická sůl anorganické kyseliny jako např. dusičnan lithný, dusičnan draselný, dusičnan sodný, síran lithný, síran draselný nebo síran sodný.

Sůl alkalických zemin je sůl obsahující kov alkalických zemin, např. halogenid kovu alkalických zemin jako např. chlorid hořečnatý; sůl karboxylové kyseliny s kovem alkalických zemin jako např. octan hořečnatý nebo mravenčan hořečnatý; nebo sůl alkalických zemin anorganické kyseliny jako např. dusičnan hořečnatý nebo síran hořečnatý.

Amonnou solí se rozumí např. amonná sůl jako je chlorid amonný, octan amonný, mravenčan amonný, dusičnan amonný nebo síran amonný.

Navíc sůl, která se využívá při technice vysolování tohoto vynálezu není striktně určena, pokud možno je to sůl alkalického kovu, kovu alkalických zemin nebo amonná sůl; lépe je to sůl alkalického kovu nebo amonná sůl; nejlépe chlorid sodný, síran amonný, octan amonný nebo dusičnan amonný a vůbec nejlépe chlorid sodný.

·· · · ·· ·· · · · · ···· · · · ·· · • · · · · ···· · · ·

Farmaceuticky přijatelná sůl z definice „pravastatin nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl“ není striktně určena, musí být pouze zajištěno, aby neměla žádné vedlejší účinky a používala se obvykle jako sůl. Pokud možno je to sůl alkalického kovu, např. sodná sůl, draselná sůl nebo lithná sůl; sůl kovů alkalických zemin jako např. vápenatá nebo hořečnatá sůl; anorganická sůl jako např. amonná sůl; sůl kovu např. hliníku, železa, mědi, niklu nebo kobaltu; aminová sůl např. organická sůl jako je t-oktylaminová sůl, dibenzylaminová sůl, morfolinová sůl, glukosaminová sůl, fenylglycinalkylesterová sůl, ethylendiaminová sůl, N-methylglukaminová sůl, guanidinová sůl, diethylaminová sůl, triethylaminová sůl, dicyklohexylaminová sůl, Ν,Ν'-dibenzylethylendiaminová sůl, chloroprokainová sůl, prokainová sůl, diethanolaminová sůl, N-benzylfenethylaminová sůl, piperazinová sůl, tetramethylamonná sůl nebo tris(hydroxymethyl)aminomethanová sůl; nebo sůl odvozená od aminokyseliny jako např. glycinová sůl, lysinová sůl, argininová sůl ornithinová sůl, sůl kyseliny glutamové nebo asparagové; pokud možno sůl alkalického kovu, kovu alkalických zemin, anorganická sůl nebo sůl kovu; lépe sůl alkalického kovu a nejlépe sodná sůl.

Purifikační proces vynálezu se provádí následovně:

Technika vysolování tohoto vynálezu se provádí přidáváním anorganické soli do roztoku nebo suspenze pravastatinu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli ve vodě; směs se ochladí; ke zchlazené směsi se přidá pár zrnek pravastatinu; následuje znovu ochlazení, aby se předešlo srážení pravastatinové soli.

Sůl, která se používá při technice vysolování může ale nemusí mít stejný kationt jako farmaceuticky přijatelná sůl pravastatinu.

Množství anorganické soli, které se přidává do roztoku nebo suspenze pravastatinu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, se pohybuje v rozmezí 5 % až 40 % množství vody zmíněné výše a nejlépe je to 15 % až 35 %.

Po přidání anorganické soli k roztoku nebo suspenzi pravastatinu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli se směs zahřeje v závislosti na druhu použité anorganické soli většinou na 20 °C až 60 °C, lépe na 30 °C až 45 °C.

Způsob purifikace pravastatinu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli zahrnuje jak techniku vysolování, tak i možnou další techniku, která rozkládá nečistoty pomocí • «toto · · · ·· · • ·· · to ···· · · · to············ · y ·· ········· anorganické zásady a/nebo anorganické kyseliny. Jednotlivé způsoby se řídí dle následujícího.

Anorganická zásada používaná na rozklad nečistot není striktně určena, měla by se používat v reakcích obvykle jako zásada a může to být např. uhličitan alkalického kovu jako je uhličitan lithný, uhličitan sodný nebo uhličitan draselný; hydrogenuhličitan alkalického kovu jako je např. hydrogenuhličitan lithný, hydrogenuhličitan sodný nebo hydrogenuhličitan draselný; hydrid alkalického kovu jako je např. hydrid lithia, hydrid sodíku nebo hydrid draslíku; hydroxid alkalického kovu jako je hydroxid lithný, hydroxid sodný nebo hydroxid draselný; nebo alkoxid alkalického kovu jako je např. methoxid lithný, methoxid sodný, ethoxid sodný nebo t-butoxid draselný; pokud možno hydroxid alkalického kovu a nejlépe hydroxid sodný.

Rozklad nečistot přítomných v pravastatinu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli pomocí anorganické zásady se provádí za přítomnosti nebo nepřítomnosti inertního rozpouštědla (pokud možno za přítomnosti inertního rozpouštědla) v rozmezí pH 10 až

14.

Reakční teplota a reakční čas pro rozklad nečistot přítomných v pravastatinu nebo v jeho farmaceuticky přijatelné soli pomocí anorganické zásady závisí na pH: v zásadě platí, že pokud je reakční teplota nízká, reakční čas je dlouhý; pokud je reakční teplota vysoká, reakční čas je krátký. Například pokud se reakční teplota pohybuje v rozmezí -10 °C až 110 °C, odpovídá jí reakční čas v rozmezí 15 minut až 200 hodin.

Zásaditý rozklad nečistot ( pomocí anorganické zásady) přítomných v koncentrovaném kultivačním médiu obsahující pravastatin, produkovaný mikroorganismy, se provádí při pH v rozmezí 11 až 14 (lépe 11 až 12), reakční teplotě 40 °C až 110 °C (lépe 95 °C až 105 °C) a reakční čas se pohybuje v rozmezí 2 až 24 hodin (lépe 2 až 5 hodin).

Na druhé straně se rozkladný proces nečistot (pomocí anorganické kyseliny) přítomných v extraktu získaném extrakcí vodným zásaditým roztokem (pokud možno s pH 8 až 9) z organického extrahovaného roztoku získaného extrakcí koncentrovaného kultivačního média obsahující pravastatin, produkovaný mikroorganismy, organickým rozpouštědlem v kyselých podmínkách (pH 4 až 6). Tento rozkladný proces (pomocí anorganické kyseliny) se přednostně provádí při pH v rozmezí 13 až 14 (lépe 13,5 až • · ··· ·

14), reakční teplotě -10 °C až 50 °C (přednostně -5 °C až 5 °C) a reakční čas se pohybuje v rozmezí 2 až 180 hodin (lépe 20 až 50 hodin a nejlépe 25 až 35 hodin).

Inertní rozpouštědlo, které se používá při rozkladném procesu (pomocí anorganické zásady) nečistot přítomných v pravastatinu nebo v jeho farmaceuticky přijatelné soli není striktně určeno, nesmí mít nepříznivé účinky na reakci a mělo by se obvykle užívat jako rozpouštědlo, může to být např. alkohol jako třeba methanol, ethanol, n-propanol, ísopropanol, n-butanol, isobutanol, t-butanol, isoamylalkohol, di(ethylenglykol), glycerol, oktanol, cyklohexanol nebo 2-methoxyethanol; voda; nebo směs vody a jakéhokoli výše popsaného alkoholu; pokud možno voda nebo směs vody a jakéhokoli výše popsaného alkoholu; nejlépe však voda nebo směs vody a ethanolu.

Poté se požadovaný produkt, pravastatin, izoluje z reakční směsi pomocí běžných metod. Například se získává přidáním vodného roztoku kyseliny jako např. vodné kyseliny sírové k reakční směsi; extrakcí výsledné směsi organickým rozpouštědlem nemísitelným s vodou, např. ethylacetátem; promytím organické vrstvy obsahující požadovaný produkt s vodou a následovně odpařením rozpouštědla. Sůl pravastatinu se získává ošetřením organické vrstvy, pokud je to nutné, aktivním uhlím, aby došlo k odbarvení, aktivní uhlí je pak odstraněno filtrací, přidá se srážecí činidlo jako např. methoxid sodný, ethoxid sodný nebo hydroxid sodný k filtrátu a následně se výsledná směs zkoncentruje v rotačním evaporátoru za sníženého tlaku apod.

Anorganická sůl, která se využívá při rozkladném procesu při odstraňování nečistot pomocí anorganické kyseliny, není striktně určena, měla by se obvykle používat jako anorganická kyselina a může to být např. bromovodíková kyselina, chlorovodíkoví kyselina, kyselina sírová, kyselina perchlorová, kyselina fosforečná nebo kyselina dusičná; pokud možno kyselina fosforečná nebo sírová a nejlépe kyselina fosforečná.

Rozkladný proces nečistot přítomných v pravastatinu nebo v jeho farmaceuticky přijatelné soli pomocí anorganické kyseliny se provádí za přítomnosti nebo v nepřítomnosti inertního rozpouštědla (pokud možno v přítomnosti rozpouštědla) při pH v rozmezí 2 až 5 (lépe při pH v rozmezí 3 až 4).

·· · ·· · ·· ·· ·♦ ·· • · · · · · · · · · ♦ 4 4 · · 4 · · · · · · _η · · ··· ·· · · · · · · «

V · 4 4 4444 4444

4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4

Reakční teplota a reakční čas procesu rozkladu nečistot, přítomných v pravastatinu nebo v jeho farmaceuticky přijatelné soli, pomocí anorganické kyseliny závisí na pH: v zásadě platí, že pokud je pokud je reakční teplota nízká, reakční čas je dlouhý; pokud je reakční teplota vysoká, reakční čas je krátký. Například pokud se reakční teplota pohybuje v rozmezí 20 °C až 80 °C (pokud možno 40 °C až 60 °C), odpovídá jí reakční čas v rozmezí 1 minuty až 6 hodin (pokud možno 5 až 20 minut).

Inertní rozpouštědlo, které se používá při kyselém rozkladném procesu nečistot (pomocí anorganické kyseliny) přítomných v pravastatinu nebo v jeho farmaceuticky přijatelné soli, není striktně určeno za předpokladu, že nemá nepříznivé účinky na reakci a mohou to být stejná rozpouštědla, která byla použita při zásaditém rozkladném procesu nečistot (pomocí anorganické zásady) a která byla zmíněna již výše.

Po této reakci se požadovaný produkt, pravastatin, izoluje z reakční směsi běžnými způsobmi. Například může být získán extrakcí reakční směsi organickým rozpouštědlem nemísitelným s vodou jako je ethylacetát; promýváním organické vrstvy obsahující požadovaný produkt vodou; a následným odpařením rozpouštědla. Sůl pravastatinu se dá získat, pokud je to nutné, ošetřením organické vrstvy aktivním uhlím, aby došlo k odbarvení, aktivní uhlí je pak odstraněno filtrací, přidá se srážecí činidlo jako např. hydroxid sodný, methoxid sodný nebo ethoxid sodný k filtrátu a následně se výsledná směs zkoncentruje v rotačním evaporátoru za sníženého tlaku apod.

Navíc, pokud je to nutné, lze získaný purifikovaný pravastatin nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl krystalizovat dle běžných metod známých odborníkům v oblasti chemické syntézy (např. Ullman's, Encyclopedia of Industrial Chemistry, Vol. A24, 5. vydání (1993) pp 435-505), a to následovně.

Krystalickou formu pravastatinu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli lze získat rozpuštěním purifikovaného pravastatinu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, které byly získány pomocí způsobu popsané výše, v zahřívaném organickém rozpouštědle nebo vodě, po kterém následuje samotná krystalizace.

Organické rozpouštědlo, které se používá při krystalizací, je např. alifatický uhlovodík jako hexan nebo heptan; aromatický uhlovodík jako toluen nebo xylen; ester jako je methylacetát, ethylacetát, propylacetát, butylacetát nebo diethyl uhličitan;

organická kyselina jako kyselina octová; alkohol jako je methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, isobutanol, t-butanol, isoamylalkohol, di(ethylenglykol), glycerol • · ·· · · • · ·* · · ·· • 111 111 9 9 1

1111 11 111 19 1

1 911 11 11 111 1 1 • ι 1 1111 1111 nebo oktanol; keton jako je aceton nebo methylethylketon; éter jako diethyléter, diisopropyléter, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan, di(ethylenglykol)dimethyléter; amid jako formamid, dimethylformamid, dimethylacetamid nebo triamid hexamethylfosforečné kyseliny; sulfoxid jako dimethylsulfoxid; nebo směs vody a jednoho nebo více výše zmíněných rozpouštědel, pokud možno směs vody a jednoho nebo více organických rozpouštědel vybraných ze skupiny obsahující alkoholy, estery a ketony a nejlépe směs vody, alkoholu a esteru.

Výhoda vynálezu

Pravastatin nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl o vysoké čistotě lze získat purifikaci uvedenou v tomto vynálezu bez použití chromatografie, která, pokud se provádí v průmyslovém měřítku, je neúčinná, nepraktická a neproduktivní.

Průmyslová využitelnost

Pokud se pravastatin nebo jeho farmaceuticky využitelná sůl tohoto vynálezu použije jako farmaceutické činidlo, pak se může podávat samostatně; orálně se podává v jednotkové dávce ve formě tablety, kapsle, granule, prášku nebo sirupu, které se připraví smícháním s farmaceuticky přijatelnou vhodnou pomocnou látkou, rozpouštědlem apod.; parenterálně se podává v jednotkové dávce ve formě injekce nebo čípku apod.

Čistotu produktu předkládaného vynálezu lze určit pomocí vysokoúčinnostní kapalinové chromatografie (HPLC). Podmínky pro HPLC jsou následující:

A: Mobilní fáze: směs methanolu: vody: ledové kyseliny octové: triethylaminu (600:400:1:1)

Detekční vlnová délka: UV 238 nm;

Sloupec: ERC-ODS-1262 <j>6 mm x 10 cm (produkt Elmer Optics Co., Ltd.);

Teplota sloupce: 30 °C;

Průtok: 1 ml/min.

B: Mobilní fáze: směs methanolu: vody: ledové kyseliny octové: triethylaminu (450:550:1:1)

000 0 • ••0 ·00 00 0 0 0 0 0 0 0 000 0 0 0 0 000000 00 000 0 0 • 0 0 0000 0 0 0 0 00 0· 00 00 00 00

Detekční vlnová délka: UV 238 nm;

Sloupec; Ultrasphere ODS 5pm, φ4,6 mm x 15 cm (produkt Beckmann Co., Ltd.); Teplota sloupce: 25 °C;

Průtok; 1,3 ml/min.

C; Mobilní fáze: 20 % acetonitril, 30 % methanol, 50 % TEAP pufr (0,3% triethylamin-H3PO4 (pH 3,2))

Detekční vlnová délka: UV 238 nm;

Sloupec: Symmetry C18 3,5pm, φ4,6 mm x 15 cm (produkt Waters Co., Ltd.); Teplota sloupce: 30 °C;

Průtok: 1 ml/min.

Předkládaný vynález bude dále ilustrován referenčními příklady a příklady. Šířka tohoto vynálezu ovšem není striktně omezena pouze na tyto příklady.

Příklady

Referenční příklad 1

Ethylacetát (264 ml) byl přidán ke koncentrovanému kultivačnímu médiu (200 ml) obsahující 21 g sodné soli pravastatinu. pH výsledné směsi bylo upraveno za stálého míchání při teplotě místnosti na 5,4 20% vodným roztokem kyseliny sírové. Ethylacetátové vrstva 1 byla oddělena od vodné fáze 1 získané směsi. Vodná fáze 1 byla extrahována ethylacetátem (264 ml), aby vznikla ethylacetátové vrstva 2. Ethylacetátové vrstvy 1 a 2 byly smíchány a k těmto vrstvám byla přidána voda (100 ml). pH výsledné směsi bylo upraveno za stálého míchání při teplotě místnosti na 8,7 48% vodným roztokem hydroxidu sodného. Ethylacetátové vrstva 3 byla oddělena od vodné fáze 3 získané směsi. Vodná fáze 3 byla přenesena do 500 ml baňky s kulatým dnem a zkoncentrována za podmínek sníženého tlaku na 2/5 objemu, aby byl získán vodný koncentrovaný reverzní extrakt (88 ml obsahující 19,3 g sodné soli pravastatinu).

Příklad 1

Vodný koncentrovaný reverzní extrakt (3 ml) získaný z Referenčního příkladu 1 (extrakt obsahoval 78,69 % sodné soli pravastatinu, jehož čistota byla určena pomocí HPLC za podmínek uvedených pod bodem A) byl přenesen do testovací zkumavky.

·· ·««· • · ·· ·· · · • · 4 · · * · 4 4 4

4 4 4 4 4 444 4 4 4 . _ 4444444444*44 4

I? 44 444444444

44 44 44 44 44

Vzorek byl nejdříve zahříván na 50 °C a poté k němu byl přidán chlorid sodný (0,9 g) a při 33 °C se přidalo pár krystalizačních zrnek sodné soli pravastatinu. Výsledná směs byla zchlazena na 0 °C, přefiltrována a krystaly promyty ve studené vodě, aby byly získány krystaly sodné soli pravastatinu technikou vysolování. Krystaly obsahovaly 91,36 % čisté sodné soli pravastatinu, jejíž čistota byla určena pomocí HPLC za podmínek uvedených pod bodem A.

Příklad 2

Vodný koncentrovaný reverzní extrakt (3 ml) získaný z Referenčního příkladu 1 (extrakt obsahoval 78,69 % sodné soli pravastatinu, jejíž čistota byla určena pomocí HPLC za podmínek uvedených pod bodem A) byl přenesen do testovací zkumavky. Vzorek byl nejdříve zahříván na 50 °C a poté k němu byl přidán síran amonný (0,83 g) (olejovité produkty se rozdělily do horní a dolní fáze) a při 33 °C se přidalo pár krystalizačních zrnek sodné soli pravastatinu. Výsledná směs byla zchlazena na 0 °C, přefiltrována a krystaly promyty ve studené vodě, aby byly získány krystaly sodné soli pravastatinu technikou vysolování (horní vrstva krystalů obsahovala hnědou pevnou látku a spodní vrstva krystalů obsahoval bílou řídkou pevnou látku). Horní vrstva krystalů obsahovala 83,82 % čisté sodné soli pravastatinu a spodní vrstva krystalů obsahovala 91,74 % čisté sodné soli pravastatinu, čistota byla určena pomocí HPLC za podmínek uvedených pod bodem A.

Příklad 3

Vodný koncentrovaný reverzní extrakt (3 ml) získaný z Referenčního příkladu 1 (extrakt obsahoval 78,69 % sodné soli pravastatinu, jehož čistota byla určena pomocí HPLC za podmínek uvedených pod bodem A) byl přenesen do testovací zkumavky. Vzorek byl nejdříve zahříván na 50 °C a poté k němu byl přidán octan amonný (0,83 g). Během několika minut se vysrážely krystaly. Výsledná směs byla zchlazena na 0 °C, byla k ní přidána studená voda (2 ml) a směs byla zcezena a přefiltrována. Krystaly byly promyty ve studené vodě, aby byly získány krystaly sodné soli pravastatinu technikou vysolování. Krystaly obsahovaly 90,10 % čisté sodné soli pravastatinu, jejíž čistota byla určena pomocí HPLC za podmínek uvedených pod bodem A.

Příklad 4 • to tototo· • to ·· ·· ···· to·· ·· · • ••to toto ··· « · · • to toto· toto toto ··· · · to· · ···· ···· ·· ·· ·· ·· ·· ··

Vodný koncentrovaný reverzní extrakt (3 ml) získaný z Referenčního příkladu 1 (extrakt obsahoval 78,69 % sodné soli pravastatinu, jehož čistota byla určena pomocí HPLC za podmínek uvedených pod bodem A) byl přenesen do testovací zkumavky. Vzorek byl nejdříve zahříván na 50 °C a poté k němu byl přidán octan amonný (0,83 g). Během několika minut se vysrážely krystaly. K získané směsi byla přidána voda (3 ml). Směs se pak zahřála na 50 °C a krystaly byly rozpuštěny. K získané směsi se při 33 °C přidala krystalizační zrnka sodné soli pravastatinu a směs byla zchlazena na 0 °C. Krystaly byly získány filtrací a poté promyty ve studené vodě, aby byly získány krystaly sodné soli pravastatinu technikou vysolování. Krystaly obsahovaly 93,22 % čisté sodné soli pravastatinu, jejíž čistota byla určena pomocí HPLC za podmínek uvedených pod bodem A.

Příklad 5

Vodný koncentrovaný reverzní extrakt (3 ml) získaný z Referenčního příkladu 1 (extrakt obsahoval 78,69 % sodné soli pravastatinu, jehož čistota byla určena pomocí HPLC za podmínek uvedených pod bodem A) byl přenesen do testovací zkumavky. Vzorek byl nejdříve zahříván na 50 °C a poté k němu byl přidán dusičnan amonný (0,83 g) a při 33 °C se přidalo pár krystalizačních zrnek sodné soli pravastatinu. Výsledná směs byla zchlazena na 0 °C, přefiltrována a krystaly promyty ve studené vodě, aby byly získány krystaly sodné soli pravastatinu technikou vysolování. Krystaly obsahovaly

93,18 % čisté sodné soli pravastatinu, jejíž čistota byla určena pomocí HPLC za podmínek uvedených pod bodem A.

Příklad 6

Vodný koncentrovaný reverzní extrakt (3 ml) získaný z Referenčního příkladu 1 (extrakt obsahoval 78,69 % sodné soli pravastatinu, jehož čistota byla určena pomocí HPLC za podmínek uvedených pod bodem A) byl přenesen do testovací zkumavky. Vzorek byl nejdříve zahříván na 50 °C a poté k němu byl přidán dusičnan amonný (0,83 g). Směs pak byla chlazena a při 38 °C se začaly srážet krystaly. Směs byla znovu zahřívána na 53 °C, ovšem krystaly se nerozpustily. Výsledná směs byla zchlazena na 0 °C, přefiltrována a krystaly promyty ve studené vodě, aby byly získány krystaly sodné soli pravastatinu technikou vysolování. Krystaly obsahovaly 93,37 % čisté sodné soli pravastatinu, jejíž čistota byla určena pomocí HPLC za podmínek uvedených pod bodem A.

φφ φφφφ

Φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φφφ φ φ φ φ φφ φφ φφ φ φ φ φ φ φ φ φ φφφφ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φφφ φφφ φ φ φ φ φ φφ φφ

Příklad 7 (1) Purifikace pomocí zásaditého procesu rozkladu nečistot (pomocí anorganické zásady)

Koncentrované kultivační médium (300 ml) obsahující 37 g sodné soli pravastatinu bylo přeneseno do baňky s kulatým dnem a čtyřmi hrdly (500 ml), zahříváno na 100 °C a k médiu byly přidány 2 ekvivalenty vodného roztoku hydroxidu sodného (pH 11,5). Směs se pak zahříval na 100 °C po dobu 3 hodin, poté byla zchlazena na teplotu místnosti a pH výsledné směsi bylo upraveno na pH = 9 při teplotě místnosti 20% vodným roztokem kyseliny sírové tak, aby byl získán zásaditý roztok obsahující 33 g sodné soli pravastatinu. K 70 ml tohoto zásaditého roztoku, obsahujícího 5,3 g sodné soli pravastatinu byl přidán ethyacetát (132 ml) a pH směsi bylo upraveno na 5,4 při teplotě místnosti a za stálého míchání 20% vodným roztokem kyseliny sírové. Ethylacetátová vrstva 1 byla oddělena od vodné fáze 1 získané směsi. Vodná fáze 1 byla extrahována ethylacetátem (132 ml), aby vznikla ethylacetátová vrstva 2. Mezitím byla ethylacetátová vrstva 1 promyta vodou (25 ml), aby vznikla ethylacetátová vrstva 3 a vodná fáze 3. Ethylacetátová vrstva 2 byla promyta vodnou fází 3, aby vznikla ethylacetátová vrstva 4. K ethylacetátové vrstvě 3 byla přidána voda (60 ml) a pH této směsi bylo upraveno za stálého míchání při teplotě místnosti na 8,7 48% vodným roztokem hydroxidu sodného. Vodná vrstva 5 byla oddělena od ethylacetátové vrstvy. pH směsi ethylacetátové vrstvy 4 a vodné fáze 5 bylo upraveno mícháním při teplotě místnosti na 8,7 48% vodným roztokem hydroxidu sodného ta k, aby vznikl vodný reverzní extrakt (50 ml). Extrakt obsahoval 4,4 g sodné soli pravastatinu (obsahující 84,88 % čisté sodné soli pravastatinu). Čistota byla určena pomocí HPLC za podmínek uvedených pod bodem A.

(2) Purifikace technikou vysolování

Vodný reverzní extrakt byl zkoncentrován za podmínek sníženého tlaku na poloviční objem. pH této směsi bylo upraveno za stálého míchání při teplotě místnosti na 12 48% vodným roztokem hydroxidu sodného. Výsledná směs byla ošetřena chloridem sodným podle návodu v Příkladu 1, aby byly získány metodou vysolování krystaly obsahující sodnou sůl pravastatinu o čistotě 99, 54 %. Čistota byla určena pomocí HPLC za podmínek uvedených pod bodem A. Krystaly byly rekrystalizovány běžnou metodou, promyty a vysušeny při 40 °C ve vakuu tak, aby byly získány krystaly • 0 ····

0 0 · 0 0 0 0 0 0

00 0 00000 0 0 0 • · 000 00 0· 000 0 0

Ί C ·· 000000000

0000 0000 0·00 (2,14 g) sodné soli pravastatinu o čistotě 99,85 %. Čistota byla určena pomocí HPLC za podmínek uvedených pod bodem B.

Navíc nebyl použit zásaditý rozkladný proces (pomocí anorganické zásady) koncentrovaného kultivačního média za podmínek uvedených výše, ale roztok, získaný odpařením 20 % vody již získaného vodného reverzního extraktu, byl zchlazen na 0 °C. Ke koncentrovanému roztoku byly přidány 4 ekvivalenty hydroxidu sodného a výsledná směs (o pH 14) se míchala při 0 °C po dobu 30 hodin (proces zásaditého rozkladu pomocí anorganické zásady), aby byla získána čistší sodná sůl pravastatinu, než v příkladech uvedených výše.

Příklad 8

Po mikrobiální konverzi bylo pH kultivačního média (10 I), obsahující pravastatin, upraveno na 12 hydroxidem sodným. Roztok se zahřál na 50 °C a při této teplotě se po dobu 30 minut míchal. Poté se výsledná reakční směs ochladila na teplotu místnosti a byl k ní přidán pro usnadnění filtrace Celite 545™ (500 g, produkt Celite Corp.) a směs byla přefiltrována. Oddělené mycelium bylo znovu resuspendováno ve vodě (3 I). Roztok byl přefiltrován a filtráty smíchány tak, aby dosáhl objemu 10 I. pH filtrátu bylo upraveno na 5,7 pomocí 25% vodným roztokem kyseliny sírové. Pravastatin byl za stálého míchání vyextrahován pomocí propylacetátu (5 I) z vodné fáze. pH oddělené vodné fáze bylo upraveno na 5,7 pomocí 75% vodného roztoku kyseliny sírové a tento roztok byl znovu za stálého míchání extrahován propylacetátem (5 I). Propylacetátové vrstvy byly smíchány a tento roztok promyt za stálého míchání nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Horní vrstva (8 I) byla odstraněna a byla k ní přidána voda (1 I). pH výsledné směsi bylo upraveno na 9,5 pomocí 25% vodným hydroxidem sodným a byla oddělena vodná fáze (1 I) obsahující sodnou sůl pravastatinu. K vodnému roztoku byl přidán ethanol (350 ml) a pH směsi bylo upraveno na 3 pomocí fosforečné kyseliny. Výsledná směs se míchala při 50 °C po dobu 10 minut. pH této směsi bylo upraveno na 12 pomocí 25% vodného roztoku hydroxidu sodného a výsledná směs se míchala při 50 °C po dobu 30 minut. Roztok byl zkoncentrován za podmínek sníženého tlaku v rotačním evaporátoru na výsledný objem 800 ml. pH koncentrovaného roztoku bylo upraveno na 12 pomocí 48% vodného roztoku hydroxidu sodného a výsledná směs byla ošetřena chloridem sodným podle Příkladu 1, aby byly získány krystaly (60 g) obsahující 99, 7 % čisté sodné soli pravastatinu. Čistota byla určena pomocí HPLC za podmínek uvedených pod bodem C.

• 9 4«0 ·

9« ·· 99

9 * 9 499 9* *

4 4 4 9 *·94 4 9 9

9 999 99 99 449 9 9 *4 * *94* 4*94

44 44 9* ·· 4 *

Krystaly pak byly znovu krystalizovány běžnou metodou, promyty a vysušeny ve 40 °C ve vakuu, aby byly získány krystaly (55 g) obsahující 99,85 % čisté sodné soli pravastatinu. Čistota byla určena pomocí HPLC za podmínek uvedených pod bodem C.

Claims (11)

1. Způsob purifikace pravastatinu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, vyznačující se tím, že se použije technika vysoiování.

2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se při technice vysoiování použije sůl, vybraná ze skupiny obsahující sůl alkalického kovu, kovu alkalických zemin nebo amonnou sůl.

3. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se při technice vysoiování použije sůl, vybraná ze skupiny obsahující sůl alkalického kovu nebo amonnou sůl.

4. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se při technice vysoiování použije sůl, vybraná ze skupiny obsahující chlorid sodný, síran amonný, octan amonný nebo dusičnan amonný.

5. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se při technice vysoiování použije chlorid sodný.

6. Způsob podle jakéhokoli z nároků 1 až 5, vyznačující se tím, že dále zahrnuje rozklad nečistot pomocí anorganické zásady.

7. Způsob podle jakéhokoli z nároků 1 až 6, vyznačující se tím, že dále zahrnuje rozklad nečistot pomocí anorganické kyseliny.

8. Způsob podle nároku 7, vyznačující se tím, že se jako anorganická kyselina použije kyselina fosforečná nebo sírová.

9. Způsob podle nároku 7, vyznačující se tím, že se jako anorganická kyselina použije kyselina fosforečná.

10. Způsob podle jakéhokoli z nároků 7 až 9, vyznačující se tím, že se pH roztoku při rozkladu nečistot za použití anorganické kyseliny pohybuje v rozmezí 2 až 5.

• · ♦· «··· ·» 99 ** «·»·*« ♦ 94 ·

4 9 4 4 9 9 944 4 9 · • 494444 4 9 499 · ·

4 4 4 4 4 14 4 4 4 4

4 4 4 4 44 44 44 44

11. Způsob purifikace sodné soli pravastatinu podle jakéhokoli z nároků 1 až 10.