JP2001503254A

JP2001503254A - 免疫刺激ポリヌクレオチド／免疫調節分子複合体

Info

Publication number: JP2001503254A
Application number: JP51864998A
Authority: JP
Inventors: カーソン，デニス，エー．; ラズ，アイアル; ローマン，マーク
Original assignee: ザリージェンツオブザユニバーシティーオブカリフォルニア
Priority date: 1996-10-11
Filing date: 1997-10-09
Publication date: 2001-03-13
Anticipated expiration: 2017-10-09
Also published as: US20040006010A1; WO1998016247A1; DE69733020D1; JP4111403B2; ATE292980T1; CA2268825C; EP1537877A2; US7208478B2; EP0930893A1; CA2268825A1; EP1537877A3; DE69733020T2; US20030232780A1; US6610661B1; ES2241042T3; AU4992197A; EP0930893B1

Abstract

(57)【要約】免疫刺激ポリヌクレオチド−免疫調節分子複合体組成物が開示される。これらの組成物には、免疫調節分子に結合されたポリヌクレオチドが含まれており、この分子は、抗原を含み、さらにサイトカインおよびアジュバントのような免疫調節物質を含み得る。複合体のポリヌクレオチド部分は、少なくとも１種の免疫刺激オリゴヌクレオチドヌクレオチド配列(ＩＳＳ)を含む。また、脊椎動物宿主へのボリヌクレオチド−免疫調節複合体調製物の投与における免疫応答を調節する方法も開示される。

Description

【発明の詳細な説明】免疫刺激ポリヌクレオチド／免疫調節分子複合体関連米国特許出願本出願は、1996年10月11日に出願した米国仮特許出願第60/028,118号の一部継続および実用転換(utility conversion)である。連邦政府に支援された研究の陳述本明細書に開示された研究の支援は、国立衛生研究所によって助成金No.AI373 05および／またはAR25443に基づいて提供されたものである。発明の分野本発明は、少なくとも１種の免疫刺激オリゴヌクレオチド（ＩＳＳ−ＰＮ）を含むか、該オリゴヌクレオチドからなるポリヌクレオチドに結合した、抗原などの免疫調節分子（ＩＭＭ）を含む組成物に関する。また、本発明は、抗原に対する脊椎動物宿主の免疫応答をモジュレートする方法にも関する。関連技術の歴史従来、抗原に対する宿主の免疫感作は、宿主に抗原を繰り返し接種することによって行われる。大部分の現在のワクチンは合理的な抗体応答を引き出すが、細胞性応答（特に、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）クラスＩ−制限細胞傷害性Ｔ細胞）は、一般的に存在しないか、弱い。結核およびマラリアなどの多くの感染症に関し、体液性応答は感染に対してほとんど防御価値がない。タンパク質抗原に対する細胞性免疫応答が弱いので、これらの抗原に対する免疫応答のモジュレーションは明白な重要性を有する。タンパク質またはペプチド抗原に対する免疫応答を変更する能力は、腫瘍治療、アレルギー疾患の治療、および激しい細胞性免疫応答の誘導によって生じるその他の症状の治療に密接な関係を有する。発明の概要本発明は、ＩＭＭ（抗原を含む）に結合してＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体(con jugate)を形成するＩＳＳ−ＰＮを含む組成物を提供する。本発明のＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体は、抗原に対する宿主の体液性および細胞性免疫応答を変更するという意味で、生物学的応答変更因子である。特に、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体のＩＳＳ−ＰＮ成分およびＩＭＭ成分は、ＩＭＭ、抗原またはＩＳＳ−ＰＮ単独に対する宿主免疫応答よりも高いレベルまで抗原に対する宿主免疫応答の大きさを共同作用的に増強する。また、ＩＳＳ− ＰＮ／ＩＭＭ複合体は、宿主細胞性免疫応答をヘルパーＴリンパ球２型（Ｔｈ２）表現型からヘルパーＴリンパ球１型（Ｔｈ１）表現型のほうにシフトさせる。ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体に対するこれらの応答は、特に、抗原に対する宿主免疫応答の重要な初期相中において急激である。これらの目的のために、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体が、抗原感作宿主組織をＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体と接触させるいずれかの経路によって送達される。この様式で投与されたＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体は、宿主の体液性（抗体）および細胞性（Ｔｈ１型）免疫応答を増強する。したがって、宿主の免疫応答性を増強した後、免疫感作せずに感作抗原によってチャレンジするための方法を使用すると、抗原チャレンジに応答したＩｇＥ産生の抑制によりＴｈ２媒介性の免疫感作誘導アナフィラキシーの危険が回避される。この本発明の局面に対して特に都合のよい使用は、アレルゲンが皮膚および粘膜のような身体に入った場合の標的組織における局所化アレルギー応答の治療である。また、本発明によるＴｈ２表現型の抑制は、抗原刺激ＩＬ−４およびＩＬ−５産生を低減することにも有用である。したがって、本発明は、宿主にＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体を送達して通常の抗原免疫感作（例えば、ワクチン接種またはアレルギー免疫療法）に関連したＴｈ２表現型を抑制することを包含する。本発明により得られたＴｈ１表現型へのシフトには、ＩＦＮα、βおよびγならびにＩＬ−１２およびＩＬ−１８の分泌の増大が伴う。これらの各サイトカインは、ウイルスなどの細胞内病原体に対する宿主の免疫防御を高める。したがって、本発明は、宿主にＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体を送達して病原体感染を抑制することを包含する。また、Ｔｈ１表現型においては血管新生も増大する（表面上はＩＬ−１２による刺激による）。したがって、本発明は、宿主にＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体を送達して治療的血管新生を刺激し、局所的な血流が重要な病因学的役割を果たす症状、例えば、網膜症を治療することを包含する。本発明のＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体は、少なくとも１種の免疫刺激オリゴヌクレオチド（ＩＳＳ−ＯＤＮ）部分を含むか、該部分からなるポリヌクレオチドに結合したＩＭＭを含む。ＩＳＳ−ＯＤＮ部分は、修飾オリゴヌクレオシドまたは修飾ヌクレオシドの配列を含むか、それらからなり得る少なくとも６個のヌクレオチド塩基を有する一本鎖または二本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡオリゴヌクレオチドである。ＩＳＳ−ＯＤＮ部分には、パリンドロームであり得るＣｐＧ含有ヌクレオチド配列またはｐ（ＩＣ）ヌクレオチド配列を含むか、それらが隣接し得るものである。オリゴヌクレオチド部分がＣｐＧ配列を含む場合、5'-プリン、プリン、ＣＧ、ピリミジン、ピリミジン-3'からなるヘキサマー構造を含み得る。そのようなヘキサマー構造としては、例えば、AACGTT、AGCGTT、GACGTT、GGCGTT、AACGTC 、およびAGCGTCが挙げられる。本発明の一つの局面においては、ＩＳＳ−ＰＮはＩＳＳ−ＯＤＮからなる。あるいは、ＩＳＳ−ＰＮはＩＳＳ−ＯＤＮを含む。本発明の複合体には、ＰＮが、通常は可溶性抗原によって刺激されないＭＨＣクラスＩプロセシング経路にＩＭＭ抗原を導入するための担体として作用するが、ＩＳＳ活性が無く、したがってＴｈ１表現型免疫応答を刺激しないＰＮ／ＩＭＭも含まれる。そのようなＰＮ／ＩＭＭとしては、例えば、ＣｐＧモチーフが、例えばＧｐＧモチーフに突然変異されたものが挙げられる。本発明の一つの局面においては、ＩＳＳ−ＰＮに対するＩＭＭ複合体パートナーは抗原からなる。そのような抗原は、タンパク質、ペプチド、糖タンパク質、多糖類およびガングリオシドからなる抗原の群から選択される。本発明の別の局面においては、ＩＭＭ複合体パートナーは抗原を含み、さらに、アジュバント、ホルモン、増殖因子、サイトカイン、ケモカイン、ターゲッティングタンパク質リガンド、およびトランス活性化因子からなる分子の群から選択される免疫刺激分子を含む。本発明の別の局面においては、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体は、例えば、モノクローナル抗体、受容体リガンドおよび／またはリポソームへの結合によって標的送達に関して修飾される。本発明の方法の実施に使用するために、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体の製剤学的に許容可能な組成物が提供される。意図する治療方針に適切な場合、ＩＳＳ− ＰＮ／ＩＭＭ複合体は、抗炎症剤または免疫治療剤とともに投与され得る。したがって、本発明の方法の実施における使用に特に有用な組成物は、抗炎症剤（例えば、グルココルチコイド）が混合されているか、さらにＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体に結合されているものである。また、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体は、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体および任意のさらなる薬剤を含むキット、ならびに宿主組織へのＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体の送達用装置および治療される宿主におけるＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体の生物学的効果を測定するための試薬の形態でも提供され得る。図面の簡単な説明図１は、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ（１：５比）によって刺激された激しいＴｈ１型免疫応答（ＩＭＭ抗原に対するＩｇＧ２ａの産生によって測定）を示すデータを、ＩＳＳ含有抗原コードプラスミド（ｐＡＣＢ−Ｚ）；抗原単独（β-gal）；ＩＳＳを混合した抗原（１：５比）；非刺激性ＰＮに結合した抗原（ｍＩＳＳ複合体；１：５比）；アジユバント（alum）中の抗原によって刺激されたＴｈ２様応答のレベル、ならびに参照のためのナイーブ(naive)(非曝露)マウスのＩｇＧ２ａレベルと比較したグラフである。横軸は、抗体のレベル（単位／ml）を示すものであり、縦軸は、一次抗原曝露後の週数を示すものである。図２は、ＩＳＳ含有抗原コードプラスミド（ｐＡＣＢ−Ｚ）；抗原単独（β-g al）；ＩＳＳを混合した抗原（１：５比）；非刺激性ＰＮに結合した抗原（ｍＩＳＳ複合体；１：５比）；アジユバント（alum）中の抗原によって刺激されたＴｈ２型免疫応答のレベル（ＩＭＭ抗原に対するＩｇＧ１の産生によって測定）、ならびに参照のためのナイーブ（非曝露）マウスのＩｇＧ１レベルを示すデータを、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ（１：５比）で免疫感作されたマウスにおいて生じた激しいＴｈ１型免疫応答と比較したグラフである。横軸は、抗体のレベル（単位／ml）を示すものであり、縦軸は、一次抗原曝露後の週数を示すものである。図３は、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭによって刺激された激しいＴｈ１型免疫応答（ＩＭＭ抗原に対するＩｇＧ２ａの産生によって測定）を示すデータを、抗原単独（ＡｇＥ）および非刺激性ＰＮに結合した抗原（ｍＩＳＳ複合体）によって刺激されたＴｈ２様応答のレベルと比較したグラフである。横軸は、抗体のレベル（単位／ml）を示すものであり、縦軸は、一次抗原曝露後４週間目におけるレベル（斜線のバー）および二次抗原チャレンジ後２週間目のレベル（塗りつぶしたバー）を示すものである。図４は、抗原単独（ＡｇＥ）および非刺激性ＰＮに結合した抗原（ｍＩＳＳ複合体）によつて刺激されたＴｈ２型免疫応答のレベル（ＩＭＭ抗原に対するＩｇＧ１の産生によって測定）を示すデータを、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ免疫感作マウスにおいて刺激された激しいＴｈ１型免疫応答と比較したグラフである。抗原：ＰＮの比はすべて１：５である。横軸は、抗体のレベル（単位／ml）を示すものであり、縦軸は、一次抗原曝露後４週間目におけるレベル（斜線のバー）および二次抗原チャレンジ後２週間目のレベル（塗りつぶしたバー）を示すものである。図５は、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭによるＴｈ２関連抗抗原（ＡｇＥ）ＩｇＥ産生の抑制を示すデータを、抗原単独（ＡｇＥ）および非刺激性ＰＮに結合した抗原（ｍＩＳＳ複合体）によって刺激されたＩｇＥ産生のレベルと比較したグラフである。抗原：ＰＮの比はすべて１：５である。横軸は、抗体のレベル（カウント／分；cpm）を示すものであり、縦軸は、一次抗原曝露後４週間目におけるレベル（斜線のバー）および二次抗原チャレンジ後２週間目のレベル（塗りつぶしたバー）を示すものである。図６は、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭによって刺激された高レベルのＴｈ１関連インターフェロンγ（ＩＦＮｇ）産生を示すデータを、ＩＳＳ含有抗原コードプラスミド（ｐＡＣＢ−Ｚ）；抗原単独（β-gal）；ＩＳＳを混合した抗原；非刺激性ＰＮに結合した抗原（ｍＩＳＳ複合体）；アジュバント（alum）中の抗原によって刺激された相対的に低レベルのＴｈ１サイトカイン、ならびに参照のためのナイーブ（非曝露）マウスのＩＦＮｇレベルと比較したグラフである。抗原：ＰＮの比はすべて１：５である。横軸は、サイトカインのレベル（ng／ml）を示すものであり、縦軸は、一次抗原曝露後４週間目におけるサイトカインのレベル（斜線のバー）を示すものである。図７は、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭによって刺激された激しい抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答を示すデータを、ＩＳＳ含有抗原コードプラスミド（ｐＡＣＢ−Ｚ）；抗原単独（β-gal）；ＩＳＳを混合した抗原；非刺激性ＰＮに結合した抗原（ｍＩＳＳ複合体）；アジュバント（alum）中の抗原によって刺激されたＣＴＬ産生のレベル、ならびに参照のためのナイーブ（非曝露）マウスのＣＴＬレベルと比較したグラフである。抗原：ＰＮの比はすべて１：５である。横軸は、得られた抗原特異的細胞溶解のレベル（対照；抗原無の百分率）を示すものであり、縦軸は、異なるエフェクター（抗原）：標的比が０：１〜10：１で検出されたＣＴＬのレベルを示すものである。記号は、各細胞集団がどのようにして処理されたかを規定するものである。発明の詳細な説明Ａ．ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体の生物学的活性本発明のＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭによって刺激される免疫応答は、通常のワクチン接種に対する脊椎動物免疫応答とは大きさおよび質の両方において相違する。前者に関して、抗原に対する宿主免疫応答は、単独でまたは共に非複合体の状態で投与されたＩＳＳ−ＰＮまたは抗原への曝露において得られるレベルよりも高いレベルまで増強される。したがって、本発明の一つの驚くべき局面は、抗原含有ＩＭＭへのＩＳＳ−ＰＮの結合が、宿主を予測よりも効率的に抗原に対して免疫感作するＩＳＳ−ＰＮの免疫刺激活性とＩＭＭの免疫調節活性の間の相乗効果を生じさせるということである。都合がよいことに、本発明によって刺激される免疫応答は、通常のワクチン接種に対する脊椎動物の免疫応答とは、後者がＴｈ２表現型で発生するが前者はＴｈ１表現型で発生する点で相違している。この点に関して、ＣＤ４＋リンパ球が一般的に２つのサブセット、すなわちＴｈ１およびＴｈ２細胞の一方に分類されることを思い起こすことが有用である。Ｔｈ１細胞は、主として、ＩＬ−２、ＩＦＮγおよびＴＮＦβ（後者二つはマクロファージ活性化および遅延型過敏症を媒介する）を分泌するが、Ｔｈ２細胞は、主として、ＩＬ−４（ＩｇＥ抗体の産生を刺激する）、ＩＬ−５（組織の顆粒球浸潤を刺激する）、ＩＬ−６およびＩＬ−１０を分泌する。これらのＣＤ４＋サブセットは、別のサブセットに負の影響を及ぼすものであり、すなわち、Ｔｈ１リンホカインの分泌はＴｈ２リンホカインの分泌を阻害し、また逆にＴｈ２リンホカイン分泌はＴｈ１リンホカイン分泌を阻害する。Ｔｈ１活性化に好都合であると考えられる因子はウイルス感染によって誘導されるものと似ており、細胞内病原体、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−α、ＩＦＮγ、ＩＬ −１２およびＩＬ−１８への曝露、ならびに低用量の抗原への曝露が含まれる。また、Ｔｈ１型免疫応答は自己免疫疾患においても優勢である。Ｔｈ２活性化に好都合であると考えられている因子には、ＩＬ−４およびＩＬ−１０への曝露、Ｂリンパ球の一部におけるＡＰＣ活性ならびに高用量の抗原が含まれる。活性Ｔｈ１（ＩＦＮγ）細胞は細胞性免疫を増大させるので、細胞内感染に対する応答において特定の価値があるが、活性Ｔｈ２細胞は抗体産生を増大させるので、（ＩＬ−４刺激によるＩｇＥ抗体産生の誘導と関連したアナフィラキシー事象の危険を冒して）細胞外感染に対する応答において価値がある。したがって、宿主免疫応答をＴｈ１からＴｈ２レパートリーへ、およびＴｈ２からＴｈ１レパートリーへシフトさせる能力は、抗原チャレンジ（例えば、感染およびアレルギー症状）に対する宿主免疫を制御するための実質的な臨床上の有意性を有するものである。その目的のために、本発明の方法は、感作抗原に対する宿主免疫応答をＴｈ１表現型にシフトさせるものである（実施例Ｉ）。その結果として、Ｔｈ２関連サイトカイン産生およびＩｇＥの抗原刺激産生（実施例IIおよびIII）が抑制され、よって宿主の長期アレルギー性炎症の危険が低減され、抗原誘導アナフィラキシーの危険が最小になる。また、ＣＴＬ産生も本発明によって治療された動物においてより高い程度にまで刺激される。ＣＴＬ産生はクラスＩＭＨＣ経路における抗原プロセシングに結びついているので、ＣＴＬ産生の増大は、非免疫刺激ＰＮ／ＩＭＭならびにＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭから生じ得る（実施例IV）。本発明は、いずれかの特定の作用機構に限定されるものではないが、ＰＮが、通常は可溶性抗原によって刺激されない宿主ＭＨＣクラスＩプロセシング経路を介する提示のために抗原提示細胞による外来抗原の取込みを促進するということが考えられる。したがって、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭはＭＨＣクラスＩプロセシング経路（ＩＳＳ活性を持たないＰＮ／ＩＭＭによっても得られ得る）に抗原を運搬し、次いでＴｈ１表現型におけるサイトカインカスケードを刺激する（ＩＳＳ活性の結果である）。どんな作用の機構でも、感作抗原に対する宿主の免疫応答性を増強させ、免疫応答をＴｈ１表現型にシフトさせるためにＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭを用いると、免疫感作誘導アナフィラキシーの危険が回避され、感作抗原に応答するＩｇＥ産生が抑制され、そして免疫感作に使用するための感作抗原を同定する必要性が排除される。本発明に関して、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭで治療した宿主の「Ｔｈ１表現型における免疫応答性を増強させる」ということは、（１）抗原チャレンジの前後に測定したＩＬ−４のレベルの低下；または抗原準備した(antigen-primed)、もしくは抗原準備およびチャレンジした対照と比較した場合の治療された宿主におけるＩＬ−４のレベルの低下（または不存在）の検出；（２）抗原チャレンジの前後のＩＬ−１２、ＩＬ−１８および／またはＩＦＮ（α、βもしくはγ）のレベルの増大；または抗原準備した、または抗原準備およびチャレンジした対照と比較した場合のＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭで治療した宿主におけるＩＬ−１２、ＩＬ−１８および／またはＩＦＮ（α、βまたはγ）のレベルの上昇の検出；（３）治療された宿主におけるＩｇＧ２ａ抗体産生；または（４）抗原チャレンジの前後に測定した抗原特異的ＩｇＥのレベルの低下；または抗原準備した、または抗原準備およびチャレンジした対照と比較した場合のＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭで治療した宿主における抗原特異的ＩｇＥのレベルの低下（または不存在）の検出によって証明される。そのような値を測定するための代表的な方法は、さらに、実施例に記載されている。したがって、本発明のＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体は、任意の抗原に対する脊椎動物宿主における強固な免疫応答を刺激する、比較的安全で、有効な手段を提供する。Ｂ．ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体：構造および調製１．ＩＳＳ−ＰＮ基礎(root)構造本発明のＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体のＩＳＳ−ＯＤＮ基部にはオリゴヌクレオチドが含まれており、これはプラスミドなどのより大型のヌクレオチド構築物の一部であり得る。したがって、「ポリヌクレオチド」という用語は、オリゴヌクレオチド、修飾オリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオシドを、単独でまたはより大型の構築物の一部として含む。ポリヌクレオチドは、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）、二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）、一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）または二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＤＮＡ）であり得る。ポリヌクレオチド部分は直鎖状または環状に配列され得るものであり、またはオリゴヌクレオチド部分は、直鎖状および環状セグメントの両方を含み得るものである。オリゴヌクレオチドの修飾としては、限定するものではないが、3'OHまたは5’OH基の修飾、ヌクレオチド塩基の修飾、糖成分の修飾、およびリン酸基の修飾が挙げられる。ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体のオリゴヌクレオチド塩基は、リボヌクレオチド（リボースを唯一のまたは主な糖成分として含む）、デオキシリボヌクレオチド（デオキシリボースを主な糖成分として含む）を含み得るものであり、または確立された当技術分野の現状にしたがって、修飾された糖または糖類似体が本発明のオリゴヌクレオチドに含まれ得る。したがって、リボースおよびデオキシリボースに加えて、糖成分はペントース、デオキシペントース、ヘキソース、デオキシヘキソース、グルコース、アラビノース、キシロース、リキソース、および糖「類似」シクロペンチル基であり得る。糖は、ピラノシル体またはフラノシル体であり得る。本発明の修飾オリゴヌクレオチドにおいては、糖成分は、好ましくは、リボース、デオキシリボース、アラビノースまたは2'-O-メチルリボースのフラノシドであり、糖は、ＩまたはＪアノマー配置のいずれかのそれぞれの複素環式塩基に結合され得る。これらの糖または糖類似体、ならびにかかる糖または糖類似体が複素環式塩基（核酸塩基）に結合している各「ヌクレオシド」の調製はそれ自体公知であり、そのような調製が任意の特定の実施例に関係し得る範囲を除き、本明細書に記載する必要はない。本発明の修飾オリゴヌクレオチドにおける糖または糖類似体部分に結合し得るリン誘導体（または修飾リン酸基）は、一リン酸、二リン酸、三リン酸、アルキルリン酸、アルカンリン酸、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなどであり得る。上記のリン酸類似体の調製ならびにそれらのヌクレオチド、修飾ヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチドへの組込みもそれ自体公知であり、本明細書に記載する必要はない。ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体のオリゴヌクレオチド塩基に組み込まれる複素環式塩基、または核酸塩基は、天然の主要プリンおよびピリミジン塩基、（すなわち、上記のようなウラシルまたはチミン、シトシン、アデニンおよびグアニン）、ならびに前記主要塩基の天然および合成の修飾体であり得る。当業者は、種々の複素環式塩基および種々の糖成分（および糖類似体）を含む多数の「合成」非天然ヌクレオシドが従来技術において利用可能になっているので、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体のオリゴヌクレオチド塩基は天然核酸の主要５塩基成分以外に一つまたはいくつかの複素環式塩基を含み得るということがわかるであろう。しかしながら、好ましくは、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体のオリゴヌクレオチド塩基における複素環式塩基は、ウラシル-5-イル、シトシン-5-イル、アデニン-7-イル、アデニン-8-イル、グアニン-7-イル、グアニン-8-イル、4-アミノピロロ[2, 3-d]ピリミジン-5-イル、２−アミノ-4-オキソピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル、2-アミノ-4-オキソピロロ[2,3-d]ピリミジン-3-イル基から選択され、ここで、プリンは９位によりオリゴヌクレオチドの糖部分に結合しており、ピリミジンは１位により、ピロロピリミジンは７位により、そしてピラゾロピリミジンは１位により結合する。構造的に、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭのＩＳＳ−ＰＮ成分の基礎オリゴヌクレオチドは、少なくとも１種の非メチル化ＣｐＧモチーフを含み得る非コード配列である。一定の哺乳動物種（例えば、げっ歯動物）において免疫刺激活性を有するＩＳＳ−ＰＮ内の任意のＣｐＧ配列の相対位置は、5'-CG-3'（すなわち、3'位にあるＧに対してＣは5'位にある）である。ＰＮ／ＩＭＭは、通常、ＣｐＧジヌクレオチドにおけるシトシンを別のヌクレオチドで置換することによって得られ得るものであり；特に有用な置換はＧｐＧジヌクレオチド含有ＰＮを形成するグアニンによるものである。いくつかのオリゴヌクレオチドＩＳＳ（ＩＳＳ−ＯＤＮ）が公知である。そのようなＩＳＳ−ＯＤＮにおいては、ＣｐＧモチーフには少なくとも２つのプリンヌクレオチド（例えば、ＧＡまたはＡＡ）および少なくとも２つのピリミジンヌクレオチド（5'-プリン−プリン-[C]-[G]-ピリミジン−ピリミジン-3'）が隣接している。ＣｐＧモチーフ含有ＩＳＳ−ＯＤＮは、Ｂリンパ球増殖を刺激するものと考えられている(例えば、Kriegら，Nature，374:546-549，1995を参照されたい)。前記ＩＳＳ−ＰＮのコア(core)ヘキサマー構造には、上流および／または下流に任意の数または組成のヌクレオチドまたはヌクレオシドが隣接し得る。しかしながら、標的組織へのＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭの取込みを高めるためには、ＩＳＳ −ＰＮは少なくとも６塩基の長さであり、好ましくは６〜200塩基の長さである。当業者は、ＩＳＳ−ＰＮの調製の参考のために、公知のＩＳＳ−ＯＤＮの報告されたヌクレオチド配列をよく知っており、または容易に同定することができる。この点についての参照を容易にするために、下記の出典は特に役立つものである： Yamamotoら，Microbiol．Immunol.，36:983(1992) Ballasら，J．Immunol.，157:1840(1996) Klinmanら，J．Immunol.，158:3635(1997) Satoら，Science，273:352(1996) これらの各文献は、公知のＩＳＳ−ＯＤＮのヌクレオチド組成に関する当技術分野の知識のレベルを説明する目的のために参照により本明細書に含まれるものである。特に、本発明において有用なＩＳＳ−ＰＮおよびＰＮは、下記のヘキサマーヌクレオチド配列、１．ＩＳＳ−ＰＮについては「ＣｐＧ」モチーフを有するヘキサマー、またはＰＮについては、ＸｐＹモチーフ（ＹがＧである場合にはＸはＣではなく、ＸがＧである場合にはＹはＣではない）を有するヘキサマー、および２．ＲＮＡＩＳＳ−ＯＤＮとして使用するために前記ヘキサマー配列におけるヌクレオチドがイノシンおよび／またはウラシル置換されているものを有するものを含む。例えば、本発明において有用なＤＮＡ基ＩＳＳ−ＰＮは、下記のヘキサマーヌクレオチド配列： AACGTT、AGCGTC、GACGTT、GGCGTT、AACGTC、AGCGTC、 GACGTC、GGCGTC、AACGCC、AGCGCC、GACGCC、GGCGCC、 AGCGCT、GACGCT、GGCGCT、TTCGAA、GGCGTTおよびAACGCC （それぞれ、配列番号１〜１８）を有するものを含む。本発明において有用なＲＮＡ基ＩＳＳ−ＰＮは、下記のヘキサマーヌクレオチド配列： AACGUU、AACGpI、AACGpC、AGCGUC、AGCGpI、AGCGpC、 GACGCU、GACGCpI、GACGCpC、GACGUU、GACGpI、GACGpC、 GACGUC、GACGpI、GACGpC、およびポリ(I・C) （それぞれ、配列番号１９〜３３）を有するものを含む。ＩＳＳ−ＰＮは、パリンドローム領域を含んでも含まなくてもよい。パリンドロームが存在する場合、パリンドロームは、コアヘキサマー配列にＣｐＧモチーフが存在する場合にはせいぜいそこまで伸長し得るものであり、または、ヘキサマー配列ならびに隣接ヌクレオチド配列のより多くを含み得る。さらに、骨格リン酸基修飾（例えば、メチルリン酸、ホスホロチオエート、ホスホロアミデートおよびホスホロジチオエートヌクレオチド間結合）によつてＩＳＳ−ＰＮに抗菌活性が付与され得るものであり、in vivoでの安定性が高められ、それらを治療用途において特に有用なものにする。特に有用なリン酸基修飾はＩＳＳ−ＰＮのホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート体への転化である。潜在的抗菌特性に加えて、ホスホロチオエートおよびホスホロジチオエートは非修飾オリゴヌクレオチド対応物よりもin vivo分解に対して耐性があり、本発明のＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭを宿主に対してより利用可能なものにする。２．ＩＭＭ複合体パートナーＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体（conjugate）のオリゴヌクレオチド塩基は、抗原を含み更に免疫調節剤を含み得るＩＭＭと複合している。「抗原」は、抗体またはＴ細胞抗原受容体により認識され特異的に結合される物質である。抗原としては、ペプチド、タンパク質、糖タンパク質及び多糖が挙げられ得、それらの一部及び組合わせを含む。抗原は天然に見出すことができるものかまたは合成することができるものであり得る。本明細書中で用いられる用語「免疫調節的（immunomodulatory）」は、免疫刺激的（immunostimulatory）並びに免疫抑制的（immunosuppressive）効果を含む。免疫刺激効果は、限定されるものでないが、直接にまたは間接に細胞性または体液性免疫応答を増強する効果を含む。免疫刺激効果の例は、限定されるものでないが、抗原特異的な抗体産生の増加；ＮＫ細胞、ＣＤ４＋Ｔリンパ球、CD8+Ｔリンパ球、マクロファージなどのようなリンパ球集団の活性化または増殖；並びに、限定されるものでないが、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＦＮα、 β及びγ、TNF-αなどを含む免疫刺激サイトカインと関連するＴｈ１の合成の増加を含む。免疫抑制効果は、直接にまたは間接に細胞性または体液性免疫応答を低下させる効果を含む。免疫抑制効果の例は、限定されるものでないが、ＩｇＥ産生低下のような抗原特異的な抗体産生の低下；免疫寛容（immune tolerance）を生じさせるような免疫抑制活性を有するリンパ球または他細胞集団の活性化；及びある特定の細胞機能に対して抑制効果を有するサイトカイン合成の増加を含む。この一例は、ＩＬ −４が誘導するＩｇＥ及びＩｇＧ１へのクラススィッチを遮断することができるＩＦＮ−γであり、これによりこれらの抗体サブクラスのレベルを低下する。かくして、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭに対する複合体パートナーとしての使用に適した「免疫調節剤」は、抗原またはサイトカインのようなペプチドであり得る。ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体パートナーがペプチドである場合、適切なペプチドとして、精製した天然のペプチド、合成ペプチド、組換えタンパク質、粗タンパク質抽出物、弱毒または不活化ウイルス、細胞、微生物、またはそのようなペプチドの断片が挙げられる。ＩＭＭ複合体パートナーとして作用し得るタンパク質抗原は、植物花粉、ダストダニタンパク質、動物あか（dander）、唾液、及び菌類胞子ならびに感染症微生物のようなアレルゲンを含む広範囲の種類の供給源に由来する抗原を含む。後者の例として、HIV-1、HIV-2、肝炎、単純ヘルペス、ロタウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、ヒト及びウシ乳頭腫ウイルス、及び遅発性脳炎ウイルスのような弱毒または不活化ウイルスが挙げられる。腫瘍形成に対する免疫では、該複合体は、（生のまたは放射線照射された）腫瘍細胞、腫瘍細胞抽出物、または腫瘍抗原のタンパク質サブユニットを含むことができる。免疫に基づく避妊用ワクチンは、複合体のペプチド部分として精子タンパク質を含むことにより作製することができる。ＩＭＭ複合体パートナーの成分としての使用に適したサイトカインには、インターロイキン（ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３など）、インターフェロン（例えば、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ）、エリスロボエチン、コロニー刺激因子（例えば、G-CSF、M-CSF、GM-CSF）及びTNF-αがある。ＩＭＭ複合体パートナーは、また、特異的受容体へのタンパク質結合を媒介するかまたは特異的な細胞タイプまたは組織へのターゲッティングを媒介するアミノ酸配列を含むことができる。例としては、限定されるものでないが、抗体または抗体フラグメント；ヒト成長ホルモンのようなペプチドホルモン；及び酵素が挙げられる。B7（CD80）のような同時刺激性分子、転写因子のようなトランス活性化タンパク質、マクロファージ走化性タンパク質（MCP:macrophage chemotact ic protein）のようなケモカイン及び他の遊走（chemoattractant）または走化性ペプチドもまた、ペプチドに基づく有用な複合体パートナーである。更に特定的には、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体パートナーとしての使用に適した抗原は、オリゴヌクレオチドと複合してＢ細胞またはＴ細胞抗原特異的応答を誘発する能力のある分子を含む。好ましくは、抗原はその抗原に特異的な抗体応答を誘発する。様々な種類の分子が抗原である。それらには、限定されるものでないが、糖、脂質、局所ホルモン（autacoids）及びホルモン並びに複合糖質、及びりん脂質のような巨大分子を含む。小分子は抗原化するためにハプテン化する必要があり得る。好ましくは、抗原はペプチド、多糖（ワクチンで用いられるカプセル多糖のような）、ガングリオシド及び糖タンパク質である。抗原は無傷の抗原または抗原のＴ細胞エピトープであり得る。これらは、化学的及び酵素的方法を用いる単離と合成を含む当業者に公知のいくつかの方法を通して取得することができる。多くのステロール脂肪酸及びリン脂質に対するごとき、ある特定の場合には、抗原部分は市販されている。多くの抗原ペプチド及び抗原タンパク質が当該技術分野では公知であり、利用可能である；その他は通常の技術を使い同定することができる。公知の抗原の例は、限定されるものでないが、ａ．反応性主要ダストダニアレルゲンDer pI及びDer pII（Chuaら，J.Exp.Med .，167:175-182，1988;Chuaら，Int.Arch.Allegy Appl．Immunol.，91:124-129 ，1990;を参照）、Der pIIアレルゲンのＴ細胞エピトープペプチド（Joost van Neervenら，J.Immunol.，151:2326-2335，1993を参照）、抗原Ｅ（Amb aI）高含量のブタグサ（ragweed）花粉アレルゲン（Rafnarら，J.Biol.Chem.，266:1229- 1236，1991を参照）、ホスホリパーゼＡ₂（ハチ毒）アレルゲンとそのＴ細胞エピトープ（Dhillonら，J.Allergy Clin．Immunol.，:42- ，1992を参照）、オウシュウシラカバ（white birch）花粉（Betvl）（Breitenederら，ＥＭＢＯ．8 :1935-1938，1989を参照）、Fel dI主要な家庭ネコアレルゲン（Rogersら，Mol. Immunol.，30:559-568，1993を参照）、樹木花粉（Elsayedら，Scand．J．Clin ．Lab．Invest．Suppl.，204:17-311991を参照）及び草花粉（Malley，J．Repro d．Immunol.，16:173-86，1989を参照）のようなアレルゲン、ｂ．不活化ボリオウイルス（Jiangら，J．Biol．Stand.，14:103-9，1986）、 A型肝炎ウイルスの弱毒変異株（Bradleyら，J．Med．Virol.，14:373-86，1984 ）、弱毒変異麻疹ウイルス（Jamesら，N．Engl.J.Med.，332:1262-6，1995）及び百日Lederle Vaccines and Pediatrics）のような生、弱毒性及び不活化微生物、ｃ．ヒト精子タンパク質のような避妊抗原（Leaら，Biochim．Biophys．Acta ， 1307:263，1996）を含む。公開配列データ及びこれらの記事に記載された抗原の単離と合成の方法は、有用な抗原の供給源に関する当該技術分野の知識を説明するための参考として、本明細書に取り込まれる。当業者であれば、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体パートナーとしての使用に有用な他の抗原の同一性に精通し、または容易に確かめることができる。ＩＭＭ封入に対して、特に有用な免疫刺激ペプチドは、ＩＬ−１２（Blissら，J.Immunol.，156:887-894，1996）、ＩＬ−１８、ＩＮＦ−α、β及びγまたはTGF-αのようなＴｈ１免疫応答を刺激するペプチドである。アジュバント（例えばキーホールリンペットヘモシアニン（keyhole limpet hemocyanin）、KLH）のＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体への複合（conjugation）は、更に本発明のＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ複合体の活性を増強することができる。他の有用なアジュバントとしては、コレラ毒素、プロコレラジェノイド（proc holeragenoid）、コレラ毒素Ｂサブユニット及び真菌多糖が挙げられ、限定されるものでないが、シゾフィラン、ムラミルジペプチド、ムラミルジペプチド誘導体、ホルボールエステル、ミクロスフェア、非ヘリコバクター・ピロリ(Helicob acter pylori )細菌溶解物、大腸菌（Escherichia coli）の不安定毒素、ブロックポリマー、サポニン、及びISCOMを含む。追加のアジュバントについて、当業者は、また、例えば、Azuma，I.，”Synthetic Immunoadjuvants:Application t o Non-Specific Host Stimulation and Potentiation of Vaccine Immunogenici ty”Vaccine，vol．10，1000(1992);Pockley，A.G．& Montgomery，P.C.，”In vivo Adjuvant Effect of Lnterleukins 5 and 6 on Rat Tear IgA Antibody Re sponses”Immunology，vol．73，19-23(1991);Adam，A．& Lederer,E．”Muramy l peptides as Immunomodulators”ISI ATLAS OF SCIENCE 205(1988);Clements ，J.D.,ら．”Adjuvant Activity of Escherichia coli Heat-labile Enterotox in and Effect on the Induction of Oral Tolerance in Mice to Unrelated Pr otein Antigens”Vaccine，vol．6，269(1988);Ben Ahmeida，E.T.S.,ら”Immun opotentiation of Local and Systemic Humoral Immune Responses by ISCOMs，Liposomes and FCA:Role in Protection Against Influe nza A in Mice”Vaccine，vol．11，1302(1993);and Gupta，R.K．ら”Adjuvant s--A Balance Between Toxicity and Adjuvanticity”Vaccine，vol．11，290-3 08(1993)を参照し得る。当業者は、上述したＩＭＭの非抗原成分はまた、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ（抗原のみ）複合体と複合しない形態で投与することができることを認めるであろう。従って、そのような成分の同時投与は本発明に包含される。Ｃ．ポリヌクレオチド複合体の合成１．ポリヌクレオチド部分ＩＳＳ−ＰＮは、当該技術分野で周知の技術及び核酸合成装置を用いて合成することができる。これに関する参考としては、例えば、Ausubelら，Current Pro tocols in Molecular Biology，第２章及び第４章（Wiley Interscience，1989) ;Maniatisら，Molecular Cloning:A Laboratory Manual(Cold Spring Harbor La b.，New York，1982);米国特許第4,458,066号及び米国特許第4,650,675号を参照すること。酵素的に組み立てる場合、例えば米国特許第5,124,246号に記載のように、個々のユニットをＴ４ＤＮＡまたはＲＮＡリガーゼのようなリガーゼで連結することができる。オリゴヌクレオチド分解は、米国特許第4,650,675号に例示されるごとくオリゴヌクレオチドをヌクレアーゼに曝露して実施することができる。これらの参考文献は、合成ポリヌクレオチドの生成に関する当該技術分野の知識を実証する目的で本明細書に参考として取り込まれる。該ＩＳＳ−ＰＮは何もコードしていないので、合成中、オープンリーディングフレームを維持することについての注意は必要ない。あるいは、ＩＳＳ−ＰＮは微生物種（特にミコバクテリア）から、核酸ハイブリダイゼーションのような当該技術分野で周知の技術を用い単離することができる。好ましくは、この様に単離したＩＳＳ−ＰＮは実質的に純粋な状態；すなわち、リポ多糖のような内因性の混入物を伴なわない状態に精製される。大きなポリヌクレオチドの部分として単離されたＩＳＳ−ＰＮは、エンドヌクレアーゼ消化のような当該技術羽分野で周知の技術を使い、所望の長さに短くすることができる。当業者は、本発明に使用可能なＩＳＳ−ＰＮを得るためのポリヌクレオチドの単離、精製及び消化に適した技術に精通しているであろうし、または容易に確かめることができる。環状ＩＳＳ−ＰＮは単離することができ、組換え法により合成することができ、または化学的に合成することができる。環状ＩＳＳ−ＰＮを単離または組換え法によリ得られる場合、該ＩＳＳ−ＰＮは好ましくはプラスミドであろう。より小さい環状オリゴヌクレオチドの化学合成は文献の方法（Gaoら，Nucleic Acids Res．(1995)23:2025-9;Wangら，Nucleic Acids Res．(1994)22:2326-33）を使い実施することができる。ＩＳＳ−ＰＮはまた、修飾オリゴヌクレオチドを含有し得る。これらの修飾オリゴヌクレオチドは標準的な化学的反応を使って合成することができる。効率的な固体支持体に基づくメチルホスホネートの構築が記述されている。Agrawalら，(19)Tet ．Lett.28:3539-3542。ホスホトリエステル（Millerら，JACS 93，665 7-6665）、ホスホルアミデート（Jagerら，Biochemistry 27，7247-7246）、及びホスホロジチオエート（米国特許第5,453,496号）のような、他のリンベースの(phosphorous based)修飾オリゴヌクレオチドの合成も記述されている。他の非リンベースのオリゴヌクレオチドも用いることができる（Stirchakら，Nuclei c Acids Res．17，6129-6141）。塩基修飾ヌクレオシドの調製、及び該塩基修飾ヌクレオシドを前駆体として使う修飾オリゴヌクレオチドの合成は、例えば米国特許第4,910,300号、第4,948,8 82号及び米国特許第5,093,232号に記述されている。これらの塩基修飾ヌクレオシドは、それらを化学合成によりオリゴヌクレオチドの末端かまたは内部位置のいずれかに取り込まれ得るように設計されている。オリゴヌクレオチドの末端または内部位置のいずれかに存在するそのような塩基修飾ヌクレオシドは、ペプチドまたは他の抗原の付着部位として作用することができる。糖部分を修飾したヌクレオシドもまた記述されており（例えば米国特許第4,849,513号、第5,015,733 号、第5,118,800号、第5,118,802号）、同様に使うことができる。オリゴヌクレオチドにリン酸基修飾を施す技術は、当該技術分野で公知であり詳細な説明は必要としない。このような有用な技術の一つのレビューとして、ターゲットオリゴヌクレオチド産物に対するリン酸トリエステル中間体を調製し、ヨード水溶液または無水アミンのような他の試薬により天然に存在するリン酸トリエステルに酸化する。得られるオリゴヌクレオチドホスホルアミデートを硫黄で処理してホスホロチオエートを生成することができる。同じ一般的な技術（硫黄処理工程を除く）を、メチルホスホネートからメチルホスホアミデートを得るために適用することができる。リン酸基修飾技術に関する更なる詳細については、当業者は米国特許第4,425,732号；第4,458,066号；第5,218,103号；第5,453,4 96号、並びにTetrahedron Lett.，21:4149(1995)、7:5575(1986)、25:1437(1984 )及びJournal Am.Chem.Soc.，93:6657(1987)を調べ得、これらの開示は、これら化合物の調製に関する当該技術分野の知識の標準的水準を説明する唯一の目的で本明細書に参考として取り込まれる。２．ＰＮ成分のＩＭＭ成分への連結ＩＳＳ−ＰＮ成分は、様々な方法で複合体のＩＭＭ部に連結することができる。ＩＳＳ−ＰＮの3'または5'末端において、またはＰＮの内部位置における適切に修飾された塩基へ連結することができる。もし、ペプチドが適切な反応基（例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）を有すれば、シトシン残基のＮ⁴ アミノ基と直接に反応させることができる。ＩＳＳ−ＰＮ中のシトシン残基の数と位置に依って、一つ以上の残基に特異的な標識付けを達成することができる。代わりに、修飾オリゴヌクレオチド（例えば当該技術分野で公知のもの）は、ＩＳＳ−ＰＮのいずれの末端、または内部位置に取り込ませることができる。これらはブロックされた官能基を含み得、これらの官能基はブロックを外すと目的のペプチド上に存在するかまたは付着された様々な官能基と反応性を有する。複合体のＩＭＭ部分は、ＩＳＳ−ＰＮの3'末端に固体支持体化学を通して付着することができる。例えば、ＩＳＳ−ＰＮ部分を、支持体上に予め合成されたポリペプチド部分に付着させることができる（Haralambidisら，，Nucleic Acids Res．(1990)18:493-99）；Haralambidisら，，Nucleic Acids Res．(1990)18:50 1-505）。代わりに、ＰＮを、3'末端から伸びる開裂可能なリンカーを通して固体支持体に結合するように合成することができる。ＩＳＳ−ＰＮが支持体から化学開裂すると、末端チオール基がＩＳＳ−ＰＮの3'末端に残される（Zuckermann ら，Nucleic Acids Res．(1987)15:5305-5321；Coreyら，(1987)Science 238:14 01-1403）か、または末端アミノ基がＰＮの3'末端に残される（Nelsonら，Nucleic Acids Re s．(1989)17:1781-94）。アミノ修飾ＰＮのペプチドのアミノ基への結合（conju gation）は、Benoitら，Neuromethods（1987）6:43-72に記載されたように行うことができる。チオール修飾ＩＳＳ−ＰＮのペプチドのカルボシル基への結合は、Sinahら，Oligonucleotide Analogues:A Practical Approach（1991）IRL Pre ssに記載されたように行うことができる。複合体のＩＭＭ部分は、合成中にＩＳＳ−ＰＮに結合したアミン、チオール、またはカルボキシル基を通して、ＩＳＳ−ＰＮの5'末端に付着させることができる。好ましくは、ＩＳＳ−ＰＮは固体支持体に固定されており、一方に保護アミン、チオール、またはカルボキシル、他方にホスホロアミダイトを含む連結基が 5'−ヒドロキシルに共有結合している(Agrawalら,Nucleic Acids Res．(1986)14 :6227-6245;Connolly，Nucleic Acids Res．（1985）13:4485-4502;Coullら，Te trahedron Lett．（1986）27:3991-3994;Kremskyら，Nucleic Acids Res．（198 7）15:2891-2909;Connolly，Nucleic Acids Res．（1987）15:3131-3139;Bischo ffら，Anal．Biochem．(1987)164:336-344;Blanksら，Nucleic Acids Res．（19 88）16:10283-10299;米国特許第4,849,513号，第5,015,733号，第5,118,800号及び第5,118,802号)。脱保護に続いて、潜在的なアミン、チオール及びカルボキシル官能基を使ってＰＮをペプチドに共有結合することができる(Benoitら，Neuro methods（1987）6:43-72;Sinahら，Oligonucleotide Analogues:A Practical Ap proach(1991)IRL Press)。ペプチド部分はＩＳＳ−ＰＮのどの位置の修飾シトシンまたはウラシルにでも付着させることができる。アミンまたはカルボキシル基のような潜在的な反応性官能基を持つ「リンカーアーム（linker arm）」を該修飾塩基のＣ-5位置に結合させることにより、ペプチド連結のためのハンドルが得られる（Ruth，4th Annu al Congress for Recombinant DNA Research,p.123）。ＩＳＳ−ＰＮのペプチドへの連結はまた、高親和性のビオチン−ストレプトアビジンコンプレックスのような非共有結合的相互作用を通して形成することができる。ビオチニル基は例えば、オリゴヌクレオチドの修飾塩基に結合させることができる（Rogetら，Nucleic Acids Res．(1989)17.7643-7651）。ストレプトアビジン部をペプチド部分に結合すると、ストレプタビジン結合ペプチドとビオチニル化ＰＮの非共有的結合コンプレックスの形成が可能となる。ＩＳＳ−ＰＮの脂質への連結は標準的な方法で形成することができる。これらの方法は、限定されるものでないが、オリゴヌクレオチドーリン脂質複合体（Ya nagawaら，Nucleic Acids Symp．Ser．(1988)19:189-92）、オリゴヌクレオチド −脂肪酸複合体（Grabarekら，Anal．Biochem．(1990)185:131-35;Starosら，An al．Biochem．(1986)156:220-22）、及びオリゴヌクレオチドーステロール複合体（Boujradら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA(1993)90:5728-31）の合成を含む。ＩＳＳ−ＰＮのオリゴ糖への連結は、標準の公知の方法を使い形成することができる。これらの方法は、限定されるものでないが、該オリゴ糖が免疫グロブリンの一部であるオリゴヌクレオチドーオリゴ糖複合体の合成を含む（O'Shanness yら，J．Applied Biochem．(1985)7:347-55）。アジュバントとサイトカインもまた、遺伝子的にまたは化学的にＩＳＳ−ＯＤＮ複合体に連結してもよい。融合ペプチドのこのタイプの例は当業技術者には公知であり、Czerkinskyら，Infect．Immun.，57：1072-77(1989);Nasharら，Vacc ine，11:235-40(1993);及びDertztbaugh and Elson，Infect．Immun.，61:48-55 (1993)にも見出すことができる。環状ＩＳＳ−ＰＮのＩＭＭへの連結はいくつかの方法で形成することができる。環状ＰＮが組換えまたは化学的方法を使って合成される場合、修飾ヌクレオシド（Ruth，in Oligonucleotides and Analogues:A Practical Approach(1991)IR L Press）。その後、標準の連結技術を使って環状ＩＳＳ−ＰＮを抗原または免疫刺激ペプチドに結合することができる（Goodchild，Bioconjugate Chem．(199 0)1:165）。環状ＩＳＳ−ＰＮが単離されるかまたは組換えまたは化学的方法を使って合成される場合、抗原または免疫刺激ペプチドに結合している反応基（例えばカルベン、ラジカル）を化学的に活性化、または光活性化することにより、連結を形成することができる。ペプチド及び他の分子をＩＳＳ−ＰＮに付着するための追加的な方法は、C．K essler:Nonradioactive labeling methods for nucleic acids in L.J．Kricka （編）”Nonisotopic DNA Probe Techniques,”Academic Press 1992、及びGeoghe gan and Stroh，Bioconjug．Chem.，3:138-146，1992に見出すことができる。Ｄ．ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭの宿主への投与のための方法と経路１．薬物送達（Drug delivery）本発明のＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭは、ex vivo法（例えば、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭとインキュベーションしたまたはＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭでトランスフェクションした細胞の送達）及び全身または局所経路を含む薬物送達に適した何らかの利用可能な方法と経路とを使って宿主に投与される。しかし、当業者は、ＩＳＳ− ＰＮ／ＩＭＭを抗原感作組織に特異的に送達する方法および局所経路が、治療効果の直接性とin vivo分解の回避のため、殆どの環境下で全身投与経路より好ましいことを認めるであろう。多くの外因性抗原の宿主への侵入点は、皮膚または粘膜を通してである。従って、皮膚（例えば、皮膚または皮下の症状）または粘膜（例えば、呼吸器、眼球、舌または生殖器の症状）を標的とする送達方法と経路が特に有用であろう。臨床分野の当業者であれば、皮膚及び粘膜への薬物送達の方法を熟知しているであろうし、または容易に確かめることができる。しかし、概説として、本発明に有用な薬物送達の例示的な方法と経路を簡単に以下に述べる。鼻腔内投与手段は、呼吸器炎症、特に鼻通路から気管または気管支に伝達される抗原により媒介される炎症を対象とする場合に特に有用である。かかる手段は本発明のポリヌクレオチド組成物のエーロゾル懸濁物の吸入（inhalation）または吹送（insulfflation）を含む。ポリヌクレオチド組成物の鼻粘膜、気管及び気管支への送達に適した噴霧装置は当業界で公知であり、従って本明細書においては詳細に記載しない。鼻腔内の薬物送達に関する一般的概説として、当業者は、Chien，Novel Drug Dehvery Systems,第５章(MarcelDekker，1992)を参照するであろう。経皮経路による投与並びに皮下注射は、アレルギー反応及び皮膚の炎症を対象とする場合に有用である。医薬を皮膚に送達する手段の例は、適切な医薬的調製物の局所適用、経皮伝達、注射及び表皮投与である。経皮伝達には、吸収促進剤またはイオン泳動法（iontophoresis）が適切な方法である。かかる方法に関する概説として、当業者は、Chien，同上，第７章を参照するであろう。イオン泳動伝達は市販「パッチ（patch）」を用いて実施することができ、該パッチは各産物を電気パルスによって皮膚を破壊せずに通し、数日あるいはそれ以上連続的に送達する。この方法の使用は、比較的高い濃度の医薬組成物の制御した伝達を可能とし、複合医薬の注入を可能とし、さらに吸収促進剤の同時使用を可能とする。この方法の使用に対する例示的なパッチ製品は、ジエネラル・メディカル社（ General Medical Company of Los Angeles，CA）の製品、LECTRO PATCH（商標）である。この製品は、貯槽電極を電子的に中性ｐＨに維持し、連続的及び／または周期的に投与するために異なる濃度の用量を提供できるように調節することができる。パッチの調製と使用は、LECTRO PATCH製品に付された製造者の説明書に従って実施されるべきであり；これらの説明書は本明細書に参考として組み込むものとする。表皮投与は、刺激原に対する免疫応答を引き起こすに十分な機械的または化学的な表皮最外層の刺激を本質的に含む。表皮投与に使用する例示的器具としては、多数の非常に細い直径の短い爪（tyne）が挙げられ、これを用いて爪上にコーティングされたＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭを皮膚中に掻き入れることができる。パスツール・メリュー社（Pasteru Merieux of Lyon，France）により製作されるMON O-VACC旧ツベルクリン試験に含まれるこの器具は、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭの表皮投与の使用に適している。該器具の使用は、該器具製品に含まれる製造者の説明書に従う；使用及び投与に関するこれらの説明書を、該器具の通常の使用を説明する参考として本明細書に組み込むものとする。この実施様態でも使用し得る類似の器具は、アレルギー試験を実施するために現在使われている器具である。眼への投与（例えば、アレルギー性結膜炎の治療用）は、眼への医薬調製物の侵入的または局所的適用を含む。点眼、局所クリーム及び注射液は、全て、眼への薬物送達に対する適切な方法の例である。全身投与は、医薬調製物の侵入的または全身に吸収される局所投与を含む。局所的適用、並びに静脈内及び筋内注射は薬物の全身投与のための通常の手段の例である。２．投薬パラメーター本発明のＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭの特別な利点は、比較的少ない用量でも免疫調節活性を発揮し得る点である。用いる用量は達成すべき臨床の目標に依って変化するが、適切な用量範囲は、単回用量として約1〜1000μｇまでのＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ/ml担体を提供する範囲である。あるいは、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭの目標用量は、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ投与後最初の24〜48時間内に採取した宿主血液サンプル中で、約１〜10μＭと考えることができる。最近の研究に基づくと、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭはこれら用量レベルでは微毒または無毒であると思われる。この点に関して、本発明のＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭの抗炎症及び免疫治療活性は本質的に用量依存性である点に注意すべきである。従って、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭの効能を２倍に増加するためには、各単回用量の濃度を２倍にする。臨床的には、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭを低用量（例えば、約１μｇ/ml〜約50g/ml）で投与し、その後、用量を所望の治療目標を達成するに必要な用量に増加することが望ましい。この開示により提供される教示に関して、臨床分野における当業者は、本発明に従ったＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭの投与に対する適切なパラメーターを熟知しているであろうし、または容易に確かめることができる。３．ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ組成物ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭは、宿主に対する送達のための薬学的に許容可能な組成で調製することができる。本発明のＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭと使用するのに好ましい薬学的に許容可能な担体としては、滅菌水性の非水溶液、懸濁液及び乳化液を挙げることができる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のごとき植物油、及びオレイン酸エチルのごとき注射可能な有機エステルである。水性担体としては、生理食塩水及び緩衝化媒質を含む水、アルコール性／水性溶液、乳化液または懸濁液が挙げられる。非経口ビヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース（Ringer's dextros e）、デキストロース及び塩化ナトリウム、ラクテートリンゲル液（lactated Ri nger's）または固定油が挙げられる。静脈内ビヒクルとしては、液体及び栄養補充剤、電解質補充剤（リンゲルデキストロースをベースとした補充剤のごとき）などが挙げられる。例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、及び不活性ガスなどのごとき保存剤及び他の添加物が存在していてもよい。ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭの組成物はまた、本発明によるその後の再構築と使用のために、当業界で公知の手段を使って凍結乾燥してもよい。吸収促進剤、界面活性剤及び化学刺激剤（例えば、ケラチン分解剤（keritino lytic agents））はＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ組成物の標的組織への伝達を促進することができる。有機薬物またはペプチドをベースとした薬物の粘膜送達に使われ成功してきた吸収促進剤及び界面活性剤についての一般原理に関する参考には、 Chlen，Novel Drug Dehvery Systems，第４章（Marcel Dekker，1992）を参照すること。特に、適切な鼻用吸収促進剤の例は、Chien，前掲、第５章、表２及び３に述べられており；より穏やかな薬剤が好ましい。粘膜／鼻腔送達において本発明の方法の使用に適した薬剤はまた、Changら，Nasal Drug Dehvery，”Treatise on Controlled Drug Delivery”，第９章及びその表3〜4B，（Marcel Dekker，199 2）に記載されている。皮膚を通しての薬物の吸収を促進することが知られる適切な薬剤は、Sloan，Use of Solubility Parameters from Regular Solution Th eory to Describe Partitioning-Driven Processes ，第５章，”Prodrugs:Topic al and Ocular Drug Delivery”（Marcel Decker，1992）、及び同テキスト中の色々な場所に記載されている。これらの参考文献を、薬物送達技術に関する当業界の知識と技術の水準を説明することのみを目的として本明細書に組み込むものとする。コロイド分散系を、特定組織を標的とするＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭの送達に使用することができる。コロイド分散系としては、巨大分子錯体、ナノカプセル、微小球、ビーズ並びに水中油型乳化液、ミセル、混合ミセル、及びリポソームを含む脂質に基づく系が挙げられる。本発明の好ましいコロイド系はリポソームである。リポソームは、in vitro及びin vivo送達ビヒクルとして有用な人工膜小胞である。0.2〜0.4μｍの範囲のサイズの巨大単層小胞（LUV：large unilamellar v esicle）は、大きな巨大分子を含む水性緩衝液の実質的な部分を封じ込めることが可能である。ＲＮＡ、ＤＮＡ及び無傷のビリオンを水性内部に封じ込め、細胞に生物学的活性な形態で送達することができる（Fraleyら，Trends Biochem． Sci.,6:77，1981）。晴乳動物細胞に加えて、リポソームは植物中のポリヌクレオチド、酵母及び細菌細胞の送達用に使われている。リポソームが有効な遺伝子導入ビヒクルであるためには、次の特性が存在する必要がある：（１）高効率でアンチセンスポリヌクレオチドをコードする遺伝子をそれらの生物学的活性を低下させることなく封じ込めること；（２）非標的細胞と比較して、標的細胞と優先的かつ実質的に結合すること；（３）標的細胞の細胞質へ小胞の水性内容物を高効率で送達すること；（４）遺伝情報を正確かつ効果的に発現すること（Mann inoら，Biotechniques，6:682，1988）。リポソームの組成は、通常、リン脂質、特に高い相転移温度のリン脂質の組み合わせと、通常、ステロイド、特にコレステロールとの組み合わせである。他のリン脂質または他の脂質を用いてもよい。リポソームの物理的特性はｐＨ、イオン強度、及び二価カチオンの存在に依存する。リポソーム生成に有用な脂質の例としては、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴリピド、セレブロシド及びガングリオシドのごときホスファチジル化合物が挙げられる。特に有用なのは、脂質部分が14〜18個の炭素原子、特に16 〜18個の炭素原子を含有し、飽和しているジアシルホスファチジルグリセロールである。例示的なリン脂質としては、卵ホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン及びジステアロイルホスファチジルコリンが挙げられる。リポソームのターゲッティングは、解剖学的及び機械学的因子に基づいて分類することができる。解剖学的分類は選択性、例えば、器官特異性、細胞特異性、及び細胞内器官特異性のレベルに基づく。機械学的ターゲッティングは、それが受動的かまたは能動的かに基づいて分類される。受動的ターゲッティングは、洞様毛細管（sinusoidal capillaries）を有する器官の細網内皮系（RES：reticul o-endothelial system）細胞に分配するリポソームの自然傾向を利用する。他方、能動的ターゲッティングは、自然に存在する局在化部位以外の器官及び細胞型へのターゲッティングを達成する目的で、リポソームをモノクローナル抗体、糖、糖脂質、またはタンパク質のごとき特異的なリガンドにカップリングするか、またはリポソームの組成またはサイズを変化することによってリポソームを改変することを含む。標的送達系の表面は様々な方法で修飾することができる。リポソーム標的送達系の場合、ターゲッティングリガンドのリポソーム２重層との安定した会合を維持する目的で、脂質基をリポソームの脂質二重層に組み込むことができる。脂質鎖をターゲッティングリガンドと結合するために様々な公知の連結基を使うことができる（例えば、Yanagawaら，Nuc.Acids Symp.Ser.，19:189(1988);Grabarek ら，Anal.Biochem.，185:131(1990);Starosら，Anal.Biochem.，156:220(1986) 及びBoujradら，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90:5728(1993)を参照すること、これらの開示は、ＰＮの脂質への複合化に関する当業界の知識の標準的水準を説明するためのみに参考として本明細書に組み込むものとする）。ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭの標的送達はまた、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭのウイルス及び非ウイルス組換え発現ベクター表面への、抗原または他のリガンドへの、モノクローナル抗体への、または所望の結合特異性を有する何らかの分子への複合化により達成することができる。ペプチド医薬の本発明によるＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭとの同時投与は、また、組換え発現ベクターにより送達可能な何らかの治療的に有益なタンパク質をコードする組換え発現ベクター（プラスミド、コスミド、ウイルスまたはレトロウイルス）に、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭをcisでまたはtransで組み込むことにより達成することができる。もし本発明を実施するために使用する発現ベクターへのＩＳＳ −ＰＮ／ＩＭＭの組み込みが望まれるのであれば、かかる組み込みは通常の技術により実施することができ、当業者であれば詳細な説明を必要としない。しかし、概説として、当業者はAusubel，Current Protocols in Molecular Biology,前掲、を参照するとよい。Ｄ．活性ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭのスクリーニング或る特定の化合物が本発明で有用なＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭの性質を有することの確認は、先の第A.I節で記載したように該ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭがサイトカイン分泌及びＩｇＧ抗体アイソタイプ産生に影響を与えるかを評価することにより得ることができる。かかる評価を行うために有用なin vitro技術の詳細を実施例で与える：当業者は、また、本明細書に教示されたパラメータに沿って、サイトカイン分泌及び抗体産生を測定する他の方法を知るか、容易に確認することができる。Ｅ．本発明の方法を実施するために使用するキット上述した方法で使用するためのキットも本発明により提供される。かかるキットは次のいずれかまたは全てを含むことができる：ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ（複合化または非複合化）；薬学的に許容可能な担体（ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭと予め混合されていてよい）または凍結乾燥したＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭを再構築するための懸濁液基剤；追加の医薬；それぞれのＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ及び追加の医薬のための滅菌バイアル、またはそれらの混合物のための単一バイアル；ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭを宿主に送達するために使用する器具；抗炎症及び／または目的の免疫刺激効果が治療動物で達成された確証を検出するためのアッセイ試薬及び適切なアッセイ器具。本発明の実施を説明する実施例を以下に記述する。実施例は参考の目的のためのみであって、添付された請求の範囲により定義された本発明を限定するものではない。実施例で使われた全ての省語と用語は、他に断りのない限り、期待される通常の意昧を持つ。実施例ＩＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ投与後の宿主におけるＴｈ１応答の選択的誘導マウスにおいて、ＩｇＧ２Ａ抗体はＴｈ１型免疫応答に対する血清学的マーカーであるが、ＩｇＧ１抗体はＴｈ２型免疫応答の指標である。Ｔｈ２応答はアレルギーに関連するＩｇＥ抗体クラスを含む；可溶性タンパク質抗原は比較的強いＴｈ２応答を刺激する傾向がある。対照的に、Ｔｈ１応答はマクロファージ及び樹状細胞に結合する抗原により誘導される。もし応答があれば、どの応答が本発明のＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭを投与されたマウスにより生成するかを決定するために、Balb/cマウスの８群を、10μｇのβ− ガラクトシダーゼタンパク質（アビジンに複合化した；Sigma，St．Louis，MO）で免疫してモデルアレルギー表現型を生成した。以下の表に記述したように、マウスのいくつかには抗原のみを投与し、いくつかには抗原−ＩＳＳ−ＰＮ複合体または抗原複合体として無刺激性ＰＮ変異体を用いた複合体を投与し、そして、その他には非複合化混合物中の抗原をＩＳＳ−ＰＮとともに投与した。ナイーブマウスを対照とした。 DY1018が有するヌクレオチド配列はホスホチオアート主鎖を持つ5'-TGACTGTGAACGTTCGAGATGA-3'であり、かつ、DY 1019が有するヌクレオチド配列はホスホチオアート主鎖を持つ5'-TGACTGTGAAGGTTGGAGATGA-3'である。２週間間隔で、各マウスの血清中に存在するβ−ガラクトシダーゼに対するＩｇＧ２Ａ及びＩｇＧ１を、酵素をコーティングしたマイクロタイタープレート上でELISA（ＩｇＧ１及びＩｇＧ２Ａサブクラスに対し特異的な抗体を使いて）により測定した。図１に示したように、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭを投与したマウスのみが高い力価のＩｇＧ２Ａ抗体を生成し、８週間にわたって数が増加した。図２に示したように、抗原自体またはＰＮ／ＩＭＭを用いたマウスの免疫化は、比較的高い力価のＩｇＧ１抗体の生成を誘導した。各図に示したデータはマウスの各群から得られた値の平均を含む。二次抗原チャレンジ前後の宿主の治療の効果を評価するために、Balb/cマウスの３群をアラム中の10μｇの抗原Ｅ（ＡｇＥ）で免疫化してモデルアレルギー表現型を生成し、そして、初回免疫後５週間に再び抗原、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭまたは（無刺激性）ＰＮ／ＩＭＭ変異体でチャレンジした。初回免疫後４週間目（二次抗原チャレンジの１週間前）及び７週間目（二次抗原チャレンジの２週間後）にＩｇＧ１及びＩｇＧ２Ａ抗体に対するEILSAを記載したごとく実施した。再び、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭを投与したマウスは、抗原免疫化及びＰＮ／ＩＭＭ変異体で免疫化したマウスと比較して、抗原（ＩＭＭ）に対し強いＴｈ１型応答を示したが（図３）、同じマウスのＴｈ２型応答は逆となった（図４）。これらのデータは、抗原初回免疫した（抗原チャレンジ前の）宿主及び抗原チャレンジした宿主の両方に対して、本発明のＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭの投与により、選択的なＴｈ１応答が誘導されることを示す。実施例II ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ免疫化による抗原に対するＩｇＥ抗体応答の抑制Ｔｈ２型細胞免疫応答よりはむしろＴｈ１型細胞免疫応答の刺激を通じて達成されるＩｇＥ抑制を実証するために、5〜8週齢Balb/cマウスを先の実施例に記載したごとくＡｇＥで免疫化した。抗ＡｇＥＩｇＥを96ウエルポリビニルプレート中での固相ラジオイムノアッセイ（RAST）を用いて検出した（Coligan，”Current Protocols In Immunology ”，Unit 7.12.4，Vol.1，Wiley & Sons，1994に記載されたELISA法のラジオアイソトープ修飾法）。但し、マウスε鎖に特異的な精製ポリクローナルヤギ抗体をヒトFabに特異的な抗体の代わりに用いた。抗ＡｇＥＩｇＥを検出するために、プレートをＡｇＥ（10μｇ/ml）でコーティングした。使用したアッセイによる測定可能最低ＩｇＥ濃度は0.4ng ＩｇＥ/mlであった。各マウス群による抗−抗原応答を特定的に測定すると、図５に示されるごとく、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ免疫マウスの抗ＡｇＥＩｇＥレベルは追加免疫の前後共に一貫して低かったが、タンパク質及びＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ変異体を注射したマウスは、抗原チャレンジ後に高レベルの抗ＡｇＥを発現した。これらのデータは、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ免疫化マウスが該抗原に対して抗原特異的なＴｈ１応答を発現した（Ｔｈ２ＩｇＥ応答を抑制しつつ）ことを示す。実施例III ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ送達後のマウスのＩＮＦγレベル BALB/cマウスをβgalで実施例Ｉに記載したごとく免疫化し、それから24時間後に犠牲にした。各マウスから脾細胞を採取した。 96ウエルマイクロタイタープレートを生理食塩水中の濃度１μｇ/mlの抗CD3抗体（Pharmingen，La Jolla，CA）でコーティングした。抗CD3抗体は、Ｔ細胞受容体（TCR）複合体への結合効果を擬態する化学シグナルを送達することによってＴ細胞を刺激する。プレートを洗浄し、牌細胞を各ウエル（４×10⁵/ウエル）の10％ウシ胎児血清を含むRPM1640の培地中に添加した。1、２及び３日後に上清を採取した。Ｔｈ１サイトカイン（ＩＮＦγ）レベルを抗ＩＮＦγマウス抗体アッセイ（例えば、Coligan，”Current Protocols In Immunology”，Unit 6.9.5，Vol.1，W iley & Sons，1994を参照すること）で試験した。比較的低いレベルのＩＮＦ-γ がＴｈ２表現型のマウスに予測され、比較的高いレベルのＩＮＦ-γがＴｈ１表現型のマウスに予測されるであろう。図５に示したように、Ｔｈ１刺激ＩＮＦ-γ分泌のレベルは、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ治療マウスでは増加したが、他のセットの各マウスでは実質的に低下し（対照と比較して）、後者マウスにおいてＴｈ２型表現型及びＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭ治療マウスにおいてＴｈ１表現型の発現を示した。実施例IV ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭによるＣＴＬ応答の追加免疫リンパ球の混合物を採取し、βgal抗原と単独または実施例Ｉで記載した構築物及び混合物の部分として接触させた。図６に示したように、ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭに応答するＣＴＬ産生は一貫して、他の形態で送達された抗原に対する応答より高く；ＩＳＳ−ＰＮとＩＭＭ抗原の非複合化混合物で処理した動物より２倍も高かった。本実験において、抗原チャレンジ後にM-ＩＳＳ−ＰＮ／ＩＭＭで処理したマウスの通常に免疫化したマウスと比較した高い値は、DY1019の抗原担体特性に因ると考えられる。かくして、細胞免疫応答により媒介される長期免疫が、本発明による処理によりもたらされる。本発明の請求は次のとおりである：

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者ラズ，アイアルアメリカ合衆国 92122 カリフォルニア州，サンディエゴ，カミナフエルタ 7965 (72)発明者ローマン，マークアメリカ合衆国 92037 カリフォルニア州，ラホヤ，ヴィララホヤドライブ 8742―33

Claims

【特許請求の範囲】１．少なくとも１種の免疫刺激ヌクレオチド配列(ＩＳＳ)を含むポリヌクレオチドに結合した免疫調節分子を含有する免疫調節組成物であって、前記分子が抗原を含むものである、前記組成物。２．抗原が、タンパク質、糖タンパク質、多糖類およびガングリオシドからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。３．ＩＳＳが、基ＣｐＧ、p(GC)およびp(IC)から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項２に記載の組成物。４．ＩＳＳが、ＣＧ含有オリゴヌクレオチドを含む、請求項２に記載の組成物。５．ＩＳＳが、さらに、pGヌクレオチド配列を含む、請求項４に記載の組成物。６．ＣＧ含有オリゴヌクレオチドが、配列5'-プリン、プリン、ＣＧ、ピリミジン、ピリミジン-3'を有する、請求項４に記載の組成物。７．ＣｐＧ、p(GC)またはp(IC)含有ヌクレオチド配列が、パリンドローム２本鎖または非パリンドローム１本鎖オリゴヌクレオチドである、請求項３に記載の組成物。８．オリゴヌクレオチド配列が、AACGTT、AGCGTT、GACGTT、GGCGTT、AACGTC、AG CGTC、GACGTC、GGCGTC、AACGCC、AGCGCC、GACGCC、GGCGCC、AACGCT、AGCGCT 、GACGCT、およびGGCGCTからなる群から選択される、請求項６に記載の組成物。９．オリゴヌクレオチド配列が、AACGTT、AGCGTT、GACGTT、GGCGTT、AACGTC、およびAGCGTCからなる群から選択される、請求項６に記載の組成物。 10．オリゴヌクレオチド配列が、AACGTT、AGCGTT、およびGACGTTからなる群から選択される、請求項６に記載の組成物。 11．ポリヌクレオチドが、さらに、直鎖状ＤＮＡ配列を含む、請求項２に記載の組成物。 12．ポリヌクレオチドが、さらに、環状ＤＮＡ配列を含む、請求項２に記載の組成物。 13．ポリヌクレオチドが、さらに、ＲＮＡヌクレオチド配列を含む、請求項２に記載の組成物。 14．ＲＮＡヌクレオチド配列が、AACGUU、AACGpI、AACGpC、AGCGUC、AGCGpI、AG CGpC、GACGCU、GACGCpI、GACGCpC、GACGUU、GACGpI、GACGpC、GACGUC、GACG pI、GACGpCからなる群から選択される配列を含む、請求項１３に記載の組成物。 15．ＲＮＡヌクレオチド配列が、２本鎖ポリ(I・C)配列を含む、請求項１３に記載の組成物。 16．ＲＮＡヌクレオチド配列が、AACGUU、AACGpI、AACGpC、AGCGUC、AGCGpI、AG CGpCからなる群から選択される配列を含む、請求項１３に記載の組成物。 17．ＲＮＡヌクレオチド配列が、AACGUU、AACGpI、AACGpCからなる群から選択される配列を含む、請求項１３に記載の組成物。 18．ボリヌクレオチドが、さらに、少なくとも１種の修飾オリゴヌクレオチドを含む、請求項２に記載の組成物。 19．ＩＳＳが直鎖状ＤＮＡ配列内に含まれ、さらに、ＩＳＳがプリン、プリン、ＣＧ、ピリミジン、ピリミジンヌクレオチド配列を含む、請求項１１に記載の組成物。 20．ＩＳＳが直鎖状ＤＮＡ配列内に含まれ、さらに、ＩＳＳがＣＧ含有pGヌクレオチド配列を含む、請求項１１に記載の組成物。 21．ＩＳＳが環状ＤＮＡヌクレオチド配列内に含まれ、さらに、ＩＳＳがプリン、プリン、ＣＧ、ピリミジン、ピリミジンヌクレオチド配列を含む、請求項１２に記載の組成物。 22．ＩＳＳが環状ＤＮＡヌクレオチド配列内に含まれ、さらに、ＩＳＳがＣＧ含有pGヌクレオチド配列を含む、請求項１２に記載の組成物。 23．ＩＳＳがＲＮＡヌクレオチド配列内に含まれ、さらに、ＩＳＳがプリン、プリン、ＣＧ、ピリミジン、ピリミジンヌクレオチド配列を含む、請求項１３に記載の組成物。 24．ＩＳＳがＲＮＡヌクレオチド配列内に含まれ、さらに、ＩＳＳがＣＧ含有pG ヌクレオチド配列を含む、請求項１３に記載の組成物。 25．ＣＧ含有ヌクレオチド配列が、さらに、修飾オリゴヌクレオチドを含む、請求項４に記載の組成物。 26．5'-プリン、プリン、ＣＧ、ピリミジン、ピリミジン-3'ヌクレオチド配列が、さらに、修飾オリゴヌクレオチドを含む、請求項６に記載の組成物。 27．少なくとも１種のＩＳＳを含むポリヌクレオチドに結合した免疫調節分子を含有する免疫調節組成物であって、前記分子が抗原および免疫刺激ペプチドを含むものである、前記組成物。 28．ポリヌクレオチドがＤＮＡまたはＲＮＡである、請求項２７に記載の組成物。 29．免疫刺激ペプチドが、同時刺激性(co-stimulatory)分子、サイトカイン、ケモカイン、ターゲティンタンパク質リガンド、およびトランス活性化因子からなる群から選択される、請求項２７に記載の組成物。 30．ＩＳＳが、基ＣＧ、p(GC)およびp(IC)から選択されるＤＮＡまたはＲＮＡヌクレオチド配列を含む、請求項２７に記載の組成物。 31．ＩＳＳが、ＣＧ含有オリゴヌクレオチドを含む、請求項２７に記載の組成物。 32．ＩＳＳが、さらに、pGヌクレオチド配列を含む、請求項３１に記載の組成物 33．ＣＧ含有オリゴヌクレオチド配列が、ヌクレオチド配列5'-プリン、プリン、ＣＧ、ピリミジン、ピリミジン-3'である、請求項３１に記載の組成物。 34．ＣＧ含有ヌクレオチド配列が、パリンドローム２本鎖または非パリンドローム１本鎖オリゴヌクレオチドである、請求項３１に記載の組成物。 35．ヌクレオチド配列が、AACGTT、AGCGTT、GACGTT、GGCGTT、AACGTC、AGCGTC、 GACGTC、GGCGTC、AACGCC、AGCGCC、GACGCC、GGCGCC、AACGCT、AGCGCT、GACG CT、およびGGCGCTからなる群から選択される、請求項３３に記載の組成物。 36．ヌクレオチド配列が、AACGTT、AGCGTT、GACGTT、GGCGTT、AACGTC、およびAG CGTCからなる群から選択される、請求項３３に記載の組成物。 37．ヌクレオチド配列が、AACGTT、AGCGTT、およびGACGTTからなる群から選択される、請求項33に記載の組成物。 38．ポリヌクレオチドが、さらに、直鎖状ＤＮＡヌクレオチド配列を含む、請求項２９に記載の組成物。 39．ポリヌクレオチドが、さらに、環状ＤＮＡヌクレオチド配列を含む、請求項２９に記載の組成物。 40．ポリヌクレオチド部分が、さらに、ＲＮＡヌクレオチド配列を含む、請求項２９に記載の組成物。 41．ＲＮＡヌクレオチド配列が、AACGUU、AACGpI、AACGpC、AGCGUC、AGCGpI、AG CGpC、GACGCU、GACGCpI、GACGCpC、GACGUU、GACGpI、GACGpC、GACGUC、GACG pI、GACGpCからなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項４０に記載の組成物。 42．ＲＮＡヌクレオチド配列が、２本鎖ポリ(I・C)ヌクレオチド配列を含む、請求項４０に記載の組成物。 43．ＲＮＡヌクレオチド配列が、AACGUU、AACGpI、AACGpC、AGCGUC、AGCGpI、AG CGpCからなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項４０に記載の組成物。 44．ＲＮＡヌクレオチド配列が、AACGUU、AACGpI、AACGpCからなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項４０に記載の組成物。 45．ポリヌクレオチド部分が、さらに、少なくとも１種の修飾オリゴヌクレオチドを含む、請求項２９に記載の組成物。 46．ＩＳＳが直鎖状ＤＮＡヌクレオチド配列内に含まれ、さらに、ＩＳＳがプリン、プリン、ＣＧ、ピリミジン、ピリミジンヌクレオチド配列を含む、請求項３８に記載の組成物。 47．ＩＳＳが直鎖状ＤＮＡヌクレオチド配列内に含まれ、さらに、ＩＳＳがＣＧ含有pGヌクレオチド配列を含む、請求項３８に記載の組成物。 48．ＩＳＳが環状ＤＮＡヌクレオチド配列内に含まれ、さらに、ＩＳＳがプリン、プリン、ＣＧ、ピリミジン、ピリミジンヌクレオチド配列を含む、請求項３９に記載の組成物。 49．ＩＳＳが環状ＤＮＡヌクレオチド配列内に含まれ、さらに、ＩＳＳがＣＧ含有pGヌクレオチド配列を含む、請求項３９に記載の組成物。 50．ＩＳＳがＲＮＡヌクレオチド配列内に含まれ、さらに、ＩＳＳがプリン、プリン、ＣＧ、ピリミジン、ピリミジンヌクレオチド配列を含む、請求項４０に記載の組成物。 51．ＩＳＳがＲＮＡヌクレオチド配列内に含まれ、さらに、ＩＳＳがＣＧ含有pG ヌクレオチド配列を含む、請求項４０に記載の組成物。 52．ＣＧ含有ヌクレオチド配列が、さらに、修飾オリゴヌクレオチドを含む、請求項３１に記載の組成物。 53．5'-プリン、プリン、ＣＧ、ピリミジン、ピリミジン-3'ヌクレオチド配列が、さらに、修飾オリゴヌクレオチドを含む、請求項３３に記載の組成物。 54．少なくとも１種のＩＳＳを含むポリヌクレオチドに結合した免疫調節分子を含有する免疫調節組成物を投与することを含む免疫応答調節方法であって、前記分子が抗原を含むものである、前記方法。 55．投与の経路が経皮経路である、請求項５４に記載の方法。 56．投与の経路が低周波数超音波送達である、請求項５４に記載の方法。 57．抗原が、タンパク質、糖タンパク質、多糖類およびガングリオシドからなる群から選択される、請求項５４に記載の方法。 58．ＩＳＳが、基ＣＧ、p(GC)およびp(IC)から選択されるＤＮＡまたはＲＮＡヌクレオチド配列を含む、請求項５７に記載の方法。 59．ＩＳＳが、ＣＧ含有オリゴヌクレオチドを含む、請求項５７に記載の方法。 60．ＩＳＳが、さらに、pGヌクレオチド配列を含む、請求項５９に記載の方法。 61．ＣＧ含有ヌクレオチド配列が、ヌクレオチド配列5'-プリン、プリン、ＣＧ、ピリミジン、ピリミジン-3'である、請求項５９に記載の方法。 62．ＣＧ含有ヌクレオチド配列が、パリンドロームまたは非パリンドロームオリゴヌクレオチドヌクレオチド配列である、請求項５９に記載の方法。 63．ヌクレオチド配列が、AACGTT、AGCGTT、GACGTT、GGCGTT、AACGTC、AGCGTC、 GACGTC、GGCGTC、AACGCC、AGCGCC、GACGCC、GGCGCC、AACGCT、AGCGCT、GACG CT、およびGGCGCTからなる群から選択される、請求項５９に記載の方法。 64．ヌクレオチド配列が、AACGTT、AGCGTT、GACGTT、GGCGTT、AACGTC、およびAG CGTCからなる群から選択される、請求項５９に記載の方法。 65．ヌクレオチド配列が、AACGTT、AGCGTT、およびGACGTTからなる群から選択される、請求項５９に記載の方法。 66．免疫応答調節が、Ｔｈ１応答の誘導を含む、請求項５４に記載の方法。 67．抗原分子が、タンパク質、糖タンパク質、および多糖類からなる群から選択される、請求項６６に記載の方法。 68．ＩＳＳが、基ＣＧ、p(GC)およびp(IC)から選択されるＤＮＡまたはＲＮＡヌクレオチド配列を含む、請求項６７に記載の方法。 69．ＩＳＳが、ＣＧ含有オリゴヌクレオチドを含む、請求項６７に記載の方法。 70．ＩＳＳが、さらに、pGヌクレオチド配列を含む、請求項６９に記載の方法。 71．ＣＧ含有ヌクレオチド配列が、ヌクレオチド配列5'-プリン、プリン、ＣＧ、ピリミジン、ピリミジン-3'である、請求項６９に記載の方法。 72．ＣＧ含有ヌクレオチド配列が、２本鎖パリンドロームまたは１本鎖非パリンドロームオリゴヌクレオチドヌクレオチド配列である、請求項６９に記載の方法。 73．ヌクレオチド配列が、AACGTT、AGCGTT、GACGTT、GGCGTT、AACGTC、AGCGTC、 GACGTC、GGCGTC、AACGCC、AGCGCC、GACGCC、GGCGCC、AACGCT、AGCGCT、GACG CT、およびGGCGCTからなる群から選択される、請求項６９に記載の方法。 74．ヌクレオチド配列が、AACGTT、AGCGTT、GACGTT、GGCGTT、AACGTC、およびAG CGTCからなる群から選択される、請求項６９に記載の方法。 75．ヌクレオチド配列が、AACGTT、AGCGTT、およびGACGTTからなる群から選択される、請求項６９に記載の方法。 76．少なくとも１種のＩＳＳを含むポリヌクレオチドに結合した免疫調節分子を含有する免疫調節組成物を投与することを含む免疫応答調節方法であって、前記分子が抗原および免疫刺激ペプチドを含むものである、前記方法。 77．投与の経路が経皮経路である、請求項７６に記載の方法。 78．投与の経路が低周波数超音波送達である、請求項７６に記載の方法。 79．免疫刺激ペプチドが、同時刺激性分子、サイトカイン、ケモカイン、ターゲティンタンパク質リガンド、およびトランス活性化因子からなる群から選択される、請求項７６に記載の方法。 80．ＩＳＳが、基ＣＧ、p(GC)およびp(IC)から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項79に記載の方法。 81．ＩＳＳが、ＣＧ含有オリゴヌクレオチドを含む、請求項７９に記載の方法。 82．ＩＳＳが、さらに、pGヌクレオチド配列を含む、請求項８１に記載の方法。 83．ＣＧ含有ヌクレオチド配列が、ヌクレオチド配列5'-プリン、プリン、ＣＧ、ピリミジン、ピリミジン-3'である、請求項８１に記載の方法。 84．ＣＧ含有ヌクレオチド配列が、２本鎖パリンドロームまたは１本鎖非パリンドロームオリゴヌクレオチドヌクレオチド配列である、請求項８１に記載の方法。 85．ヌクレオチド配列が、AACGTT、AGCGTT、GACGTT、GGCGTT、AACGTC、AGCGTC、 GACGTC、GGCGTC、AACGCC、AGCGCC、GACGCC、GGCGCC、AACGCT、AGCGCT、GACG CT、およびGGCGCTからなる群から選択される、請求項８１に記載の方法。 86．ヌクレオチド配列が、AACGTT、AGCGTT、GACGTT、GGCGTT、AACGTC、およびAG CGTCからなる群から選択される、請求項８１に記載の方法。 87．ヌクレオチド配列が、AACGTT、AGCGTT、およびGACGTTからなる群から選択される、請求項８１に記載の方法。 88．免疫応答調節が、Ｔｈ１応答の誘導を含む、請求項７６に記載の方法。 89．抗原が、タンパク質、糖タンパク質、および多糖類からなる群から選択される、請求項８８に記載の方法。 90．ＩＳＳが、基ＣＧ、p(GC)およびp(IC)から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項８９に記載の方法。 91．ＩＳＳが、ＣＧ含有オリゴヌクレオチドを含む、請求項８９に記載の方法。 92．ＩＳＳが、さらに、pGヌクレオチド配列を含む、請求項９１に記載の方法。 93．ＣＧ含有ヌクレオチド配列が、ヌクレオチド配列5'-プリン、プリン、ＣＧ、ピリミジン、ピリミジン-3'である、請求項９１に記載の方法。 94．ＣＧ含有ヌクレオチド配列が、２本鎖パリンドロームまたは１本鎖非パリンドロームオリゴヌクレオチドヌクレオチド配列である、請求項９１に記載の方法。 95．ヌクレオチド配列が、AACGTT、AGCGTT、GACGTT、GGCGTT、AACGTC、AGCGTC、 GACGTC、GGCGTC、AACGCC、AGCGCC、GACGCC、GGCGCC、AACGCT、AGCGCT、GACG CT、およびGGCGCTからなる群から選択される、請求項９１に記載の方法。 96．ヌクレオチド配列が、AACGTT、AGCGTT、GACGTT、GGCGTT、AACGTC、およびAG CGTCからなる群から選択される、請求項９１に記載の方法。 97．ヌクレオチド配列が、AACGTT、AGCGTT、およびGACGTTからなる群から選択される、請求項９１に記載の方法。 98．哺乳動物宿主に、免疫調節分子に結合したポリヌクレオチドを投与することを含む、哺乳動物免疫系のクラスＩＭＨＣプロセシング経路に可溶性抗原を導入して抗原に対するＣＴＬ応答を惹起する方法であって、前記分子が抗原を含むものである、前記方法。 99．ポリヌクレオチドが少なくとも１種のＩＳＳを含む、請求項９８に記載の方法。 100．ポリヌクレオチドがＩＳＳを含まない、請求項９８に記載の方法。 101．抗原が、タンパク質、糖タンパク質および多糖類からなる群から選択される、請求項９８に記載の方法。 102．ＩＳＳが、基ＣＧ、p(GC)およびp(IC)から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項９８に記載の方法。 103．ＩＳＳが、ＣＧ含有オリゴヌクレオチドを含む、請求項９８に記載の方法。 104．ＩＳＳが、さらに、pGヌクレオチド配列を含む、請求項１０３に記載の方法。 105．ＣＧ含有ヌクレオチド配列が、ヌクレオチド配列5'-プリン、プリン、ＣＧ、ピリミジン、ピリミジン-3'である、請求項１０３に記載の方法。 106．ＣＧ含有ヌクレオチド配列が、２本鎖パリンドロームまたは１本鎖非パリンドロームオリゴヌクレオチドヌクレオチド配列である、請求項１０３に記載の方法。 107．ヌクレオチド配列が、AACGTT、AGCGTT、GACGTT、GGCGTT、AACGTC、AGCGTC 、GACGTC、GGCGTC、AACGCC、AGCGCC、GACGCC、GGCGCC、AACGCT、AGCGCT、GA CGCT、およびGGCGCTからなる群から選択される、請求項１０２に記載の方法。 108．ヌクレオチド配列が、AACGTT、AGCGTT、GACGTT、GGCGTT、AACGTC、およびA GCGTCからなる群から選択される、請求項１０２に記載の方法。 109．ヌクレオチド配列が、AACGTT、AGCGTT、およびGACGTTからなる群から選択される、請求項１０２に記載の方法。 110．ポリヌクレオチドがＧｐＧオリゴヌクレオチドを含む、請求項９８に記載の方法。 111．ヌクレオチド配列が、AAGGTT、AGGGTT、GAGGTT、GGGGTT、AAGGTC、AGGGTC 、GAGGTC、GGGGTC、AAGGCC、AGGGCC、GAGGCC、GGGGCC、AAGGCT、AGGGCT、GA GGCT、およびGGGGCTからなる群から選択される、請求項１１０に記載の方法。 112．ヌクレオチド配列が、AAGGTT、AGGGTT、GAGGTT、GGGGTT、AAGGTC、およびA GGGTCからなる群から選択される、請求項１１０に記載の方法。 113．ヌクレオチド配列が、AAGGTT、AGGGTT、およびGAGGTTからなる群から選択される、請求項１１０に記載の方法。 114．免疫調節分子に結合したポリヌクレオチドを含有する、哺乳動物免疫系のクラスＩＭＨＣプロセシング経路に可溶性抗原を導入して抗原に対するＣＴＬ応答を惹起するための組成物であって、前記分子が抗原を含むものである、前記組成物。 115．抗原が、タンパク質、糖タンパク質および多糖類からなる群から選択される、請求項１１４に記載の組成物。 116．ポリヌクレオチドが、ＧpＧオリゴヌクレオチドを含む、請求項１１４に記載の組成物。 117．ヌクレオチド配列が、AAGGTT、AGGGTT、GAGGTT、GGGGTT、AAGGTC、AGGGTC 、GAGGTC、GGGGTC、AAGGCC、AGGGCC、GAGGCC、GGGGCC、AAGGCT、AGGGCT、GA AGGGCT、GGGCT、およびGGGGCTからなる群から選択される、請求項１１６に記載の組成物。 118．ヌクレオチド配列が、AAGGTT、AGGGTT、GAGGTT、GGGGTT、AAGGTC、およびA GGGTCからなる群から選択される、請求項１１６に記載の組成物。 119．ヌクレオチド配列が、AAGGTT、AGGGTT、およびGAGGTTからなる群から選択される、請求項１１６に記載の組成物。