JP2000245493A

JP2000245493A - ポリアミン組成物の製造法

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Publication number: JP2000245493A
Application number: JP11056833A
Authority: JP
Inventors: Yoshihiro Tanimoto; 佳博谷本; Takashi Yakabe; 隆史矢賀部; Hiroshi Nakano; 拓中埜; Masaharu Shimatani; 雅治島谷
Original assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Current assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Priority date: 1999-03-04
Filing date: 1999-03-04
Publication date: 2000-09-12
Anticipated expiration: 2019-03-04
Also published as: US6951746B2; BR0015861B1; DE60022565D1; US20020110880A1; EP1035212A3; JP4266055B2; EP1035212A2; DE60022565T2; BR0015861A; EP1035212B1

Abstract

(57)【要約】【課題】効率よく、高い回収率で酵母菌体内容物
からポリアミン組成物を大量に製造する方法の提供。【解決手段】酵母菌体内容物をヌクレアーゼで消化す
るか、あるいはアルカリで加水分解した後、ポリアミン
を回収することによりポリアミン組成物を製造する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、酵母菌体内容物か
らポリアミン組成物を効率良く、大量に製造する方法に
関する。詳しくは、酵母菌体内容物をヌクレアーゼで消
化するか、あるいはアルカリで加水分解した後、ポリア
ミンを回収するポリアミン組成物の製造法に関する。酵
母菌体内容物からポリアミン組成物を製造するに際し
て、本発明の方法を適用することにより、ポリアミンの
回収率を高めることができる。

【０００２】

【従来の技術】ポリアミンは、第一級アミノ基を２つ以
上もつ直鎖状の脂肪族炭化水素の総称であり、代表的な
ポリアミンとして、プトレッシン、スペルミジン及びス
ペルミンを挙げることができる。ポリアミンの生理作用
としては、(1) 細胞増殖作用、(2) 細胞分化促進作用、
(3) 免疫必須因子、(4) 抗アレルギー作用、(5) 蛋白質
合成促進作用、(6) 核酸との相互作用による構造の安定
化、(7) 酵素活性調節作用等が知られている。最近で
は、経口摂取したポリアミンが消化管粘膜細胞の増殖や
分化を促進するという効果について多くの報告がなされ
ている。(O.Peulenet al., Arch. Physiol. Biochem.,
vol.106, pp.46-55, 1998; W.P.Deloyer etal., Arch.
Physiol. Biochem., vol.104, pp.163-172, 1996; M.Ka
ouass et al., Dig. Dis. Sci., vol.41, pp.1434-144
4, 1996; E.Harada et al., Comp. Biochem. Physiol.,
vol.109A, pp.667-673, 1994; G.Capano et al., J. P
ediatr. Gastroenterol. Nutr., vol.19, pp.34-42, 19
94; G.E.Wild et al., Biol.Neonate, vol.63, pp.246-
257, 1993; Buts J.-P. et al., Digestive Diseasesan
d Science, vol.38, p.1091, 1993; Dufour,C. et al.,
Gastroenterology,vol.95, p.112, 1988)。

【０００３】これらの報告では、スペルミジンやスペル
ミンの生理効果について調べられており、また、スペル
ミジンよりもスペルミンの方が高い消化管成熟促進作用
を有していることが明らかにされている。さらに、経口
摂取したポリアミンが速やかに体内に取り込まれて組織
で利用されることが報告されており、また、プトレッシ
ンよりもスペルミジンやスペルミンの方が速やかに吸収
されることも報告されている(Bardocz,S. et al., J. N
utr. Biochem, vol.4, p.66, 1993)。そして、ポリアミ
ンを食品に利用した例として、スペルミンやスペルミジ
ンを添加することによりコンニャク特有の臭いを低減
し、他の食品と調理しても悪影響を与えないコンニャク
（特開平6- 38690号公報）やポリアミンを配合すること
により蛋白質の吸収を促進させて、良好な発育及び健康
状態を保持させるポリアミン配合栄養組成物 (特開平6-
305956号公報) 等が提案されている。また、ポリアミン
を医薬品として利用した例として、胃酸分泌を阻止する
方法及び胃酸分泌阻止用摂取用組成物（特開昭 58-1319
14号公報）や免疫賦活剤（特開昭59-98015号公報及び特
開平2-223514号公報）等が提案されている。

【０００４】ところで、食品中に含まれるポリアミン量
は、肉類、チーズ、味噌等の発酵食品で多く、乳や野菜
で少ないことが知られている(Bardocz,S. et al., J. N
utr.Biochem, vol.4, p.66, 1993;ポリアミン研究会第1
2回研究発表会講演要旨集,p.4, 1995)。したがって、牛
乳を主原料とする乳児用調製粉乳等の栄養組成物中に含
まれるポリアミン量は非常に少ない。一方、人乳中には
比較的多量のポリアミンが含まれていることが報告され
ており (日本小児栄養消化器病学会雑誌, vol.9, no.2,
pp.115-121, 1995)、ポリアミン含量の少ない栄養組成
物にポリアミンを強化することは生理学的観点から望ま
しいものといえる。なお、ポリアミン含量の高い栄養組
成物として蛋白質加水分解乳がButsらにより紹介されて
いるが(Buts,J.P. et al., J. Pediatr. Gastroentero
l. Nutr., vol.21, p.44, 1995)、この蛋白質加水分解
乳中に含まれるポリアミンは、蛋白質加水分解に使用し
た粗酵素に由来するポリアミンであり、ポリアミンの強
化を目的としたものではない。

【０００５】また、酵母菌体からのポリアミンの製造法
及びこの方法により製造したポリアミンを配合した栄養
組成物が提案されている (特開平10-52291号公報) 。こ
の方法では、酵母菌体を酸性条件下で処理することによ
り異臭味のないポリアミンを製造することができる。し
かし、酸性条件下では、一部のポリアミンが高分子物質
と共に沈澱してしまうので、酵母菌体中に含まれるポリ
アミンを全て回収することはできなかった。また、一部
のポリアミンは生体内で高分子物質と結合しているの
で、そのまま分画処理を行っても、全てのポリアミンを
回収することはできなかった。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、ポリア
ミン組成物を効率良く、大量に製造する方法を開発する
べく、鋭意研究を重ねてきたところ、酵母菌体内容物を
ヌクレアーゼで消化するか、あるいはアルカリで加水分
解することにより、効率良く高い回収率でポリアミン組
成物を回収することができることを見出し、本発明を完
成するに至った。したがって、本発明は、効率良く高い
回収率で酵母菌体内容物からポリアミン組成物を製造す
る方法を提供することを課題とする。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明では、ポリアミン
組成物を製造するに際して、酵母菌体内容物を原料と
し、この酵母菌体内容物をヌクレアーゼで消化するか、
あるいはアルカリで加水分解した後、ポリアミンを回収
してポリアミン組成物を製造する。本発明で原料として
使用することができる酵母菌体内容物は、パン酵母、ワ
イン酵母、ビール酵母、トルラ酵母等を物理的に破砕し
抽出したり、熱水で抽出したり、自己消化させて抽出し
たりして調製することができる。酵母菌体を物理的に破
砕し酵母菌体内容物を抽出する方法としては、例えば、
高圧ホモジナイザー、超音波破砕等で酵母菌体を破砕し
酵母菌体内容物を抽出すればよい。なお、使用する高圧
ホモジナイザーは、細胞壁や細胞膜に損傷を与えること
ができ、かつ菌体内液と菌体外液の交換を引き起こす能
力を有しており、700kgf/cm^２以上の圧力を出せるもの
が望ましく、このような高圧ホモジナイザーを使用し 7
00〜1,400kgf/cm^２の圧力で酵母菌体を破砕すればよ
い。このような高圧ホモジナイザーは、ラニー社、ゴー
リン社、日本精機社等で製造されている。また、使用す
る超音波破砕機は、機械的に細胞を破壊することができ
るものが望ましく、このような超音波破砕機を使用し10
〜90kHz で菌体懸濁液を数十秒から数分、数回に分けて
破砕すればよい。このような超音波破砕機は、Branson
社、Ultrasonic社、Rayton社等で製造されている。

【０００８】酵母菌体から酵母菌体内容物を熱水で抽出
する方法としては、例えば、酵母菌体濃度が５〜25％、
望ましくは10〜20％の菌体懸濁液に、食塩濃度が１〜10
％、望ましくは４〜８％となるように食塩を加え、pHが
４〜８、望ましくはpH５〜７、温度が90〜100 ℃、望ま
しくは95〜100 ℃で１〜５時間、望ましくは３〜５時間
加温し酵母菌体内容物を抽出すればよい。酵母菌体を自
己消化させて酵母菌体内容物を抽出する方法としては、
例えば、酵母エキスを製造する際に使用する食塩、脂肪
酸エステル、有機酸、有機溶媒等の自己消化促進剤を加
え、酵母菌体の自己消化を促進すればよい（特公昭54-1
3496号公報、特開昭55-34096号公報、特開昭 59-109152
号公報) 。また、超高圧の静水圧処理、超音波処理、高
圧ホモジナイザー処理等の機械的刺激を与え、酵母菌体
の自己消化を促進すればよい (特開平2-255059号公報、
特公昭50-25539号公報) 。なお、37〜55℃の温度で酵母
菌体を保持することにより、菌体内の蛋白質やＲＮＡが
自己消化され、アミノ酸や３'-ヌクレオチド、５'-ヌク
レオチドにそれぞれ分解される。

【０００９】また、市販の酵母抽出物や酵母リボ核酸を
酵母菌体内容物として使用することもできる。市販の酵
母抽出物等としては、例えば、ＲＮ、ＲＮ７、ＲＴ、Ｒ
Ｎ７−Ｐ、ＲＢ２−Ｐ、ＲＴ−Ｐ (以上、サッポロエー
ジェンシー社製) 、ミーストＳ、ミーストＮ、ミースト
ＰＩＧ、スーパーミーストＲ−１、スーパーミーストパ
ウダーＡ−００１、スーパーミーストＲ−７、乾燥ビー
ル酵母Ｙ２Ａ、ビール酵母エキス <エビオス> Ｐ２Ｇ
(以上、アサヒビール食品社製) 、乾燥ビール酵母 (ア
サヒビール薬品社製) 、酵母エキスＣ、酵母エキスＷ、
酵母エキスＬ、酵母エキスＨ (以上、協和醗酵工業社
製) 、酵母エキスエミックＹＧ (田辺製薬社製) 、乾
燥ビール酵母ＢＹ−Ｓ、脱苦味酵母ＢＹ−Ｇ、酵母リボ
核酸 (以上、キリンビール社製) 等を挙げることができ
る。

【００１０】本発明で、酵母菌体内容物をヌクレアーゼ
で消化する方法としては、例えば、酵母菌体内容物を含
む溶液にヌクレアーゼを加え、pH３〜10、10〜70℃で
0.1〜24時間処理すればよい。使用するヌクレアーゼと
しては、デオキシリボヌクレアーゼＩ、ヌクレアーゼ、
ヌクレアーゼＰ１、ヌクレアーゼＳ１、ホスホジエステ
ラーゼＩ、リボヌクレアーゼＡ、リボヌクレアーゼＢ、
リボヌクレアーゼＴ_１、リボヌクレアーゼＴ_２、リボ
ヌクレアーゼＵ_２等、核酸を分解する性質を有するも
のであれば良く、市販品のヌクレアーゼでそのまま処理
してもよいし、また、ヌクレアーゼ活性を有する植物や
動物の組織、微生物菌体、微生物培養液等で処理しても
よい。さらに、使用する酵母菌体内容物自身が有するヌ
クレアーゼで処理することも可能である。

【００１１】本発明で、酵母菌体内容物をアルカリで加
水分解する方法としては、例えば、酵母菌体内容物を含
む溶液に 0.1〜５Ｎとなるようにアルカリを加え、20〜
100℃で 0.1〜24時間処理すればよい。使用するアルカ
リとしては、水酸化ナトリウムや水酸化カリウム等を挙
げることができる。このように、酵母菌体内容物をヌク
レアーゼで消化するか、あるいはアルカリで加水分解し
た後、ポリアミンを回収することにより、ポリアミン組
成物を製造することができる。

【００１２】

【発明の実施の形態】パン酵母、ビール酵母、トルラ酵
母等から調製した酵母菌体内容物、あるいは市販の酵母
抽出物や酵母リボ核酸を酵母菌体内容物として、この酵
母菌体内容物をヌクレアーゼ消化するか、あるいはアル
カリで加水分解する。そして、ポリアミンを回収するこ
とによりポリアミン組成物を製造することができる。こ
のようにして得られたポリアミン組成物については、溶
液のままで使用することができるし、噴霧乾燥や凍結乾
燥等を行って粉末として使用することもできる。さら
に、脱塩や精製を行った後、溶液のままで、あるいは粉
末として使用することもできる。なお、市販の酵母抽出
物や酵母リボ核酸を酵母菌体内容物として使用する場合
は、酵母抽出物や酵母リボ核酸を予め酸で１回又は数回
処理して上清を廃棄し、沈澱を回収して、この沈澱を酵
母菌体内容物として使用することにより、生理効果の高
いポリアミンであるスペルミジン及びスペルミンの含有
比率を高めることができ、また、ポリアミン組成を調整
することもできる。また、酵母菌体内容物をヌクレアー
ゼで消化するか、あるいはアルカリで加水分解した後、
除蛋白することにより、ポリアミン含量を高めることが
でき、さらに精製する場合の負荷を軽減することもでき
る。ポリアミン溶液から除蛋白する方法としては、酸処
理、塩析、プロテアーゼ消化等を挙げることができる。

【００１３】酸処理で除蛋白する方法としては、例え
ば、ポリアミン溶液を10℃以下に冷却した後、酸を加え
てpHを２以下とし、２〜６時間放置して生成した沈澱を
除去し上清を回収すればよい。使用する酸としては、硫
酸、塩酸、酢酸、リン酸、トリクロル酢酸、過塩素酸、
スルホサリチル酸、ギ酸等の無機酸や有機酸を挙げるこ
とができる。塩析で除蛋白する方法としては、例えば、
ポリアミン溶液に塩化鉄等の塩類を加えて数時間加熱
し、蛋白質やその他の不純物を凝集させて遠心分離等の
処理により除去し、上清を回収すれば良く、また、ポリ
アミン溶液に硫酸アンモニウム等の塩類を加えて５℃以
下に冷却し、蛋白質を凝集させて遠心分離等の処理によ
り除去し、上清を回収すればよい。

【００１４】プロテアーゼ消化で除蛋白する方法として
は、例えば、ポリアミン溶液にプロテアーゼを加え、pH
１〜10、10〜70℃で 0.1〜24時間処理すればよい。使用
するプロテアーゼとしては、トリプシンやパパイン等の
動植物に由来するプロテアーゼ、あるいはアスペルギル
ス(Aspergillus) 属菌、リゾープス(Rhizopus)属菌、バ
チルス(Bacillus)属菌等の微生物が産生するプロテアー
ゼ等、蛋白質を分解する性質を有するものであればよ
く、市販品のプロテアーゼでそのまま処理してもよい
し、また、プロテアーゼ活性を有する植物や動物の組
織、微生物菌体、微生物培養液等で処理してもよい。ま
た、必要に応じて、ポリアミン溶液をイオン交換樹脂処
理、膜分画、電気透析等の手段で脱塩や精製を行っても
よい。なお、これらの手段を適宜組み合わせることによ
り、より高純度のポリアミン組成物を得ることができ
る。

【００１５】イオン交換樹脂処理の方法としては、例え
ば、ポリアミン溶液をイオン交換樹脂を充填したカラム
に通液し、ポリアミンとアミノ酸、ペプチド、蛋白質、
糖類等の夾雑物とを分離する。使用するイオン交換樹脂
としては、イオン交換基がスルホン酸基、スルホプロピ
ル基、リン酸基、カルボキシルメチル基、アミノエチル
基、ジエチルアミノ基、４級アミノエチル基、４級アン
モニウム基等であればよく、陽イオン交換樹脂でも陰イ
オン交換樹脂でもいずれも使用することができる。な
お、陽イオン交換樹脂を使用した場合、ポリアミンは陽
イオン交換樹脂に吸着されるので、非吸着物質を十分に
分離した後、硫酸、塩酸等の酸性溶液や塩化ナトリウム
等の塩溶液でポリアミンを溶出して回収すればよい。ま
た、陰イオン交換樹脂を使用した場合、ポリアミンは陰
イオン交換樹脂に吸着されないので、ポリアミンを含む
非吸着画分を回収すればよい。

【００１６】膜分画の方法としては、例えば、セルロー
ス系、酢酸セルロース系、ポリスルホン系、ポリアミド
系、ポリアクリルニトリル系、ポリ四フッ化エチレン
系、ポリエステル系、ポリプロピレン系等で分画分子量
が 1,000〜100,000 の範囲の限外濾過（ＵＦ）膜を使用
してポリアミン溶液のＵＦを行い、ポリアミンを含む透
過液を回収すればよい。また、食塩阻止率30〜80％のナ
ノフィルトレーション (ＮＦ) 膜を使用してポリアミン
溶液のＮＦを行い、脱塩してもよい。電気透析の方法と
しては、例えば、陽イオン交換膜と陰イオン交換膜とに
よって仕切られた各膜間にポリアミン溶液と食塩水とを
交互に供給して電気透析を行えばよい。なお、電気透析
の条件は、初期電流密度 0.5〜15A/dm^２、電圧 0.1〜
1.5V／槽が望ましい。このようにして得られたポリアミ
ン組成物は、医薬や経腸栄養剤等の医療用栄養組成物と
して、また、育児用粉乳、離乳食等の乳幼児用栄養組成
物として、さらには、栄養強化食品や一般の食品類の添
加物として、利用することができる。次に、実施例及び
比較例を示し、本発明をさらに詳しく説明する。なお、
実施例及び比較例におけるポリアミン含量の分析は、川
上らの方法（日本小児栄養消化器病学会雑誌, vol.9, p
p.115-121, 1995)に従って行なった。

【００１７】

【実施例１】トルラ酵母(Candida utilis) 菌体を使用
し、酵母菌体内容物をヌクレアーゼで消化することによ
りポリアミン組成物を製造した。トルラ酵母(Candida
utilis) を糖蜜培地に植菌し、30℃で48時間通気撹拌培
養を行った。培養後、培養液を４℃で30分間遠心分離
（5,000g）し、酵母菌体を集菌した。集菌した酵母菌体
を冷水で洗浄した後、酵母菌体濃度が15％の菌体懸濁液
を調製し、食塩濃度が 4.8％、pH 6.0、95℃で 3.5時間
の条件で酵母菌体内容物を抽出した。この酵母菌体内容
物の溶液に塩化鉄を加え、pHを 5.0に調整して90℃で90
分間加熱し蛋白質やその他の夾雑物を凝集させ、珪藻土
で濾過して上清を回収した後、この上清を５℃まで冷却
し、塩酸を加えてpHを 1.5に調整し、４時間放置してポ
リアミンを沈澱させ回収した。この沈澱を水に懸濁した
後、30％水酸化ナトリウムを加えてpHを 6.0に調整して
溶解し、ヌクレアーゼＡ（関東化学社製）1mg/mlを加え
て25℃で15時間消化し、ポリアミン溶液を得た。このポ
リアミン溶液を陽イオン交換樹脂(Dowex 50WX8 (Ｈ^＋
型))を充填したカラムに通液し、陽イオン交換樹脂にポ
リアミンを吸着させた後、0.7M食塩水をカラムに通液し
て樹脂を充分洗浄して不純物を除去し、吸着したポリア
ミンを6N塩酸で溶出した。そして、この溶出液に30％水
酸化ナトリウム溶液を加えて中和した後、電気透析して
脱塩し、凍結乾燥してポリアミン組成物を製造した。こ
のようにして、酵母菌体１kg（湿重量）当たり、ポリア
ミン 465mgを含むポリアミン組成物 698mgが得られた。
これは従来法 (比較例１) によるポリアミン組成物の収
量と比べて３倍になっている。また、ポリアミン 465mg
のうちスペルミジン及びスペルミンの合計量は 446mgで
あり、ポリアミン全体に占めるスペルミジン及びスペル
ミンの割合が96％までに高まっていた。

【００１８】．

【実施例２】ワイン酵母(Saccharomyces cerevisiae)
菌体を使用し、酵母菌体内容物をヌクレアーゼで消化す
ることによりポリアミン組成物を製造した。ワイン酵母
(Saccharomyces cerevisiae) 菌体を水に懸濁して酵母
菌体濃度が10％の菌体懸濁液を調製し、高圧ホモジナイ
ザー(TYPE10.51VH、RANNIE社製) を使用して圧力1,000k
gf/cm^２で物理的破砕を行い、酵母菌体内容物を抽出し
た。この酵母菌体内容物の溶液に30％水酸化ナトリウム
を加えてpHを 8.0に調整し、リボヌクレアーゼＡ（関東
化学社製）及びトリプシン（ベーリンガーマンハイム社
製）それぞれ1mg/mlを加えて37℃で18時間消化し、ポリ
アミン溶液を得た。このポリアミン溶液をＰＬＣＣセル
ロースメンブレン（分画分子量 5,000、ミリポア社製)
を使用してＵＦを行い、残存する酵素や未分解の蛋白質
等の高分子物質を除去した後、ＵＦ透過液を陰イオン交
換樹脂(Dowex 1X8 (Cl⁻型))を充填したカラムに通液
し、夾雑するアミノ酸を陰イオン交換樹脂に吸着させて
除去し、非吸着画分を回収した。そして、この溶液を凍
結乾燥してポリアミン組成物を製造した。このようにし
て、酵母菌体１kg（湿重量）当たり、ポリアミン87mgを
含むポリアミン組成物 183mgが得られた。これは従来法
(比較例２) によるポリアミン組成物の収量と比べて
2.1倍になっている。また、ポリアミン87mgのうちスペ
ルミジン及びスペルミンの合計量は82.7mgであり、ポリ
アミン全体に占めるスペルミジン及びスペルミンの割合
が95％までに高まっていた。

【００１９】

【実施例３】酵母菌体内容物として酵母リボ核酸（キリ
ンビール社製）を使用し、酵母菌体内容物をアルカリで
加水分解することによりポリアミン組成物を製造した。
酵母リボ核酸濃度が５％となるよう0.3N水酸化カリウム
に溶解し、37℃で18時間加水分解し、ポリアミン溶液を
得た。このポリアミン溶液を陽イオン交換樹脂(Dowex 5
0WX8 (Ｈ^＋型))を充填したカラムに通液し、陽イオン
交換樹脂にポリアミンを吸着させた後、0.5M食塩水をカ
ラムに通液して樹脂を充分洗浄して不純物を除去し、吸
着したポリアミンを6N塩酸で溶出した。そして、この溶
出液に水酸化ナトリウム溶液を加えて中和した後、電気
透析して脱塩し、凍結乾燥してポリアミン組成物を製造
した。このようにして、酵母リボ核酸１kg当たり、ポリ
アミン 1,460mgを含むポリアミン組成物 1,750mgが得ら
れた。これは従来法 (比較例３) によるポリアミン組成
物の収量と比べて 3.2倍になっている。また、ポリアミ
ン 1,460mgのうちスペルミジン及びスペルミンの合計量
は 1,431mgであり、ポリアミン全体に占めるスペルミジ
ン及びスペルミンの割合が98％までに高まっていた。

【００２０】

【実施例４】パン酵母(Saccharomyces cerevisiae) 菌
体を使用し、酵母菌体内容物を自己消化することにより
ポリアミン組成物を製造した。パン酵母(Saccharomyces
cerevisiae) 菌体を水に懸濁して酵母菌体濃度が20％
の菌体懸濁液を調製した後、この菌体懸濁液１kgを 2 l
容のフラスコに移し、乳酸8gを加えて45℃で24時間自己
消化させ、その後、90℃まで加温して10分間保持するこ
とにより自己消化を停止し、ポリアミン溶液を得た。こ
のポリアミン溶液を陽イオン交換樹脂(Dowex 50WX8 (Ｈ
^＋型))を充填したカラムに通液し、陽イオン交換樹脂
にポリアミンを吸着させた後、0.6M食塩水をカラムに通
液して樹脂を充分洗浄して不純物を除去し、吸着したポ
リアミンを6N塩酸で溶出した。そして、この溶出液に水
酸化ナトリウム溶液を加えて中和した後、電気透析して
脱塩し、噴霧乾燥してポリアミン組成物を製造した。こ
のようにして、酵母菌体１kg（湿重量）当たり、ポリア
ミン95mgを含むポリアミン組成物 314mgが得られた。ま
た、ポリアミン95mgのうちスペルミジン及びスペルミン
の合計量は88.4mgであった。

【００２１】

【比較例１】トルラ酵母(Candida utilis) 菌体を使用
し、ポリアミン組成物を製造した。トルラ酵母(Candida
utilis) を糖蜜培地に植菌し、30℃で48時間通気撹拌
培養を行った。培養後、培養液を４℃で30分間遠心分離
（5,000g）し、酵母菌体を集菌した。集菌した酵母菌体
を冷水で洗浄した後、酵母菌体濃度が15％の菌体懸濁液
を調製し、食塩濃度が 4.8％、pH 6.0、95℃で 3.5時間
の条件で酵母菌体内容物を抽出した。この酵母菌体内容
物の溶液に塩化鉄を加え、pHを 5.0に調整して90℃で90
分間加熱し蛋白質やその他の夾雑物を凝集させ、セライ
ト（ジョン−マンビル社製）を用いて吸引濾過し上清を
回収した後、この上清を５℃まで冷却し、塩酸を加えて
pHを 1.5に調整し、４時間放置してポリアミンを沈澱さ
せ回収した。この沈澱を水に懸濁した後、30％水酸化ナ
トリウムを加えてpHを 6.0に調整して溶解し、ポリアミ
ン溶液を得た。このポリアミン溶液を陽イオン交換樹脂
(Dowex 50WX8 (Ｈ^＋型))を充填したカラムに通液し、
陽イオン交換樹脂にポリアミンを吸着させた後、0.7M食
塩水をカラムに通液して樹脂を充分洗浄して不純物を除
去し、吸着したポリアミンを6N塩酸で溶出した。そし
て、この溶出液に30％水酸化ナトリウム溶液を加えて中
和した後、電気透析して脱塩し、凍結乾燥してポリアミ
ン組成物を製造した。このようにして、酵母菌体１kg
（湿重量）当たり、ポリアミン 155mgを含むポリアミン
組成物 500mgが得られた。また、ポリアミン 155mgのう
ちスペルミジン及びスペルミンの合計量は 142.6mg (92
％) であった。

【００２２】

【比較例２】ワイン酵母(Saccharomyces cerevisiae)
菌体を使用し、ポリアミン組成物を製造した。ワイン酵
母(Saccharomyces cerevisiae) 菌体を水に懸濁して酵
母菌体濃度が10％の菌体懸濁液を調製し、高圧ホモジナ
イザー(TYPE10.51VH、RANNIE社製) を使用して圧力1,00
0kgf/cm^２で物理的破砕を行い、酵母菌体内容物を抽出
した。この酵母菌体内容物の溶液をＰＬＣＣセルロース
メンブレン（分画分子量 5,000、ミリポア社製) を使用
してＵＦを行い、高分子物質を除去した後、ＵＦ透過液
を陰イオン交換樹脂(Dowex 1X8 (Cl⁻型))を充填した
カラムに通液し、夾雑するアミノ酸を陰イオン交換樹脂
に吸着させて除去し、非吸着画分を回収した。そして、
この溶液を凍結乾燥してポリアミン組成物を製造した。
このようにして、酵母菌体１kg（湿重量）当たり、ポリ
アミン42mgを含むポリアミン組成物 220mgが得られた。
また、ポリアミン42mgのうちスペルミジン及びスペルミ
ンの合計量は37.8mg (90％) であった。

【００２３】

【比較例３】酵母菌体内容物として酵母リボ核酸（キリ
ンビール社製）を使用し、ポリアミン組成物を製造し
た。酵母リボ核酸濃度が５％となるよう水に溶解し、ポ
リアミン溶液を得た。このポリアミン溶液を陽イオン交
換樹脂(Dowex 50WX8 (Ｈ^＋型))を充填したカラムに通
液し、陽イオン交換樹脂にポリアミンを吸着させた後、
0.5M食塩水をカラムに通液して樹脂を充分洗浄して不純
物を除去し、吸着したポリアミンを6N塩酸で溶出した。
そして、この溶出液に水酸化ナトリウム溶液を加えて中
和した後、電気透析して脱塩し、凍結乾燥してポリアミ
ン組成物を製造した。このようにして、酵母リボ核酸１
kg当たり、ポリアミン 460mgを含むポリアミン組成物 5
50mgが得られた。また、ポリアミン 460mgのうちスペル
ミジン及びスペルミンの合計量は 437mg (95％) であっ
た。

【００２４】

【発明の効果】酵母菌体内容物からポリアミン組成物を
大量製造するに際して、本発明の方法を適用することに
より、ポリアミンの回収率を高めることができる。ま
た、ポリアミンのうち有効であるといわれているスペル
ミジン及びスペルミンの占める割合も高めることができ
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者島谷雅治埼玉県狭山市新狭山２−７−１ＬＳＰ新狭山207 Ｆターム(参考） 4B064 CA06 CA21 CC03 CD30 CE02 CE11 4H006 AA02 AC52 BE10

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】酵母菌体内容物をヌクレアーゼで消化す
るか、あるいはアルカリで加水分解した後、ポリアミン
を回収することを特徴とするポリアミン組成物の製造
法。
【請求項２】ヌクレアーゼが、酵母菌体内容物中に含
まれるヌクレアーゼである請求項１記載のポリアミン組
成物の製造法。