JP4452314B2 - ポリアミン組成物の製造法 - Google Patents
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トルラ酵母(Candida utilis) 菌体を使用し、酵母菌体内容物をヌクレアーゼで消化することによりポリアミン組成物を製造した。トルラ酵母(Candida utilis) を糖蜜培地に植菌し、30℃で48時間通気撹拌培養を行った。培養後、培養液を4℃で30分間遠心分離(5,000g)し、酵母菌体を集菌した。集菌した酵母菌体を冷水で洗浄した後、酵母菌体濃度が15%の菌体懸濁液を調製し、食塩濃度が 4.8%、pH 6.0、95℃で 3.5時間の条件で酵母菌体内容物を抽出した。この酵母菌体内容物の溶液に塩化鉄を加え、pHを 5.0に調整して90℃で90分間加熱し蛋白質やその他の夾雑物を凝集させ、珪藻土で濾過して上清を回収した後、この上清を5℃まで冷却し、塩酸を加えてpHを 1.5に調整し、4時間放置してポリアミンを沈澱させ回収した。この沈澱を水に懸濁した後、30%水酸化ナトリウムを加えてpHを6.0に調整して溶解し、ヌクレアーゼA(関東化学社製)1mg/mlを加えて25℃で15時間消化し、ポリアミン溶液を得た。このポリアミン溶液を陽イオン交換樹脂(Dowex 50WX8 (H+ 型))を充填したカラムに通液し、陽イオン交換樹脂にポリアミンを吸着させた後、0.7M食塩水をカラムに通液して樹脂を充分洗浄して不純物を除去し、吸着したポリアミンを6N塩酸で溶出した。そして、この溶出液に30%水酸化ナトリウム溶液を加えて中和した後、電気透析して脱塩し、凍結乾燥してポリアミン組成物を製造した。このようにして、酵母菌体1kg(湿重量)当たり、ポリアミン 465mgを含むポリアミン組成物 698mgが得られた。これは従来法 (比較例1) によるポリアミン組成物の収量と比べて3倍になっている。また、ポリアミン 465mgのうちスペルミジン及びスペルミンの合計量は 446mgであり、ポリアミン全体に占めるスペルミジン及びスペルミンの割合が96%までに高まっていた。
ワイン酵母(Saccharomyces cerevisiae) 菌体を使用し、酵母菌体内容物をヌクレアーゼで消化することによりポリアミン組成物を製造した。ワイン酵母(Saccharomyces cerevisiae) 菌体を水に懸濁して酵母菌体濃度が10%の菌体懸濁液を調製し、高圧ホモジナイザー(TYPE10.51VH、RANNIE社製) を使用して圧力1,000kgf/cm2で物理的破砕を行い、酵母菌体内容物を抽出した。この酵母菌体内容物の溶液に30%水酸化ナトリウムを加えてpHを8.0に調整し、リボヌクレアーゼA(関東化学社製)及びトリプシン(ベーリンガーマンハイム社製)それぞれ1mg/mlを加えて37℃で18時間消化し、ポリアミン溶液を得た。このポリアミン溶液をPLCCセルロースメンブレン(分画分子量 5,000、ミリポア社製) を使用してUFを行い、残存する酵素や未分解の蛋白質等の高分子物質を除去した後、UF透過液を陰イオン交換樹脂(Dowex 1X8 (Cl− 型))を充填したカラムに通液し、夾雑するアミノ酸を陰イオン交換樹脂に吸着させて除去し、非吸着画分を回収した。そして、この溶液を凍結乾燥してポリアミン組成物を製造した。このようにして、酵母菌体1kg(湿重量)当たり、ポリアミン87mgを含むポリアミン組成物 183mgが得られた。これは従来法 (比較例2) によるポリアミン組成物の収量と比べて 2.1倍になっている。また、ポリアミン87mgのうちスペルミジン及びスペルミンの合計量は82.7mgであり、ポリアミン全体に占めるスペルミジン及びスペルミンの割合が95%までに高まっていた。
酵母菌体内容物として酵母リボ核酸(キリンビール社製)を使用し、酵母菌体内容物をアルカリで加水分解することによりポリアミン組成物を製造した。酵母リボ核酸濃度が5%となるよう0.3N水酸化カリウムに溶解し、37℃で18時間加水分解し、ポリアミン溶液を得た。このポリアミン溶液を陽イオン交換樹脂(Dowex 50WX8 (H+ 型))を充填したカラムに通液し、陽イオン交換樹脂にポリアミンを吸着させた後、0.5M食塩水をカラムに通液して樹脂を充分洗浄して不純物を除去し、吸着したポリアミンを6N塩酸で溶出した。そして、この溶出液に水酸化ナトリウム溶液を加えて中和した後、電気透析して脱塩し、凍結乾燥してポリアミン組成物を製造した。このようにして、酵母リボ核酸1kg当たり、ポリアミン 1,460mgを含むポリアミン組成物 1,750mgが得られた。これは従来法 (比較例3) によるポリアミン組成物の収量と比べて 3.2倍になっている。また、ポリアミン 1,460mgのうちスペルミジン及びスペルミンの合計量は 1,431mgであり、ポリアミン全体に占めるスペルミジン及びスペルミンの割合が98%までに高まっていた。
パン酵母(Saccharomyces cerevisiae) 菌体を使用し、酵母菌体内容物を自己消化することによりポリアミン組成物を製造した。パン酵母(Saccharomyces cerevisiae) 菌体を水に懸濁して酵母菌体濃度が20%の菌体懸濁液を調製した後、この菌体懸濁液1kgを 2 l容のフラスコに移し、乳酸8gを加えて45℃で24時間自己消化させ、その後、90℃まで加温して10分間保持することにより自己消化を停止し、ポリアミン溶液を得た。このポリアミン溶液を陽イオン交換樹脂(Dowex 50WX8 (H+ 型))を充填したカラムに通液し、陽イオン交換樹脂にポリアミンを吸着させた後、0.6M食塩水をカラムに通液して樹脂を充分洗浄して不純物を除去し、吸着したポリアミンを6N塩酸で溶出した。そして、この溶出液に水酸化ナトリウム溶液を加えて中和した後、電気透析して脱塩し、噴霧乾燥してポリアミン組成物を製造した。このようにして、酵母菌体1kg(湿重量)当たり、ポリアミン95mgを含むポリアミン組成物 314mgが得られた。また、ポリアミン95mgのうちスペルミジン及びスペルミンの合計量は88.4mgであった。
トルラ酵母(Candida utilis) 菌体を使用し、ポリアミン組成物を製造した。トルラ酵母(Candida utilis) を糖蜜培地に植菌し、30℃で48時間通気撹拌培養を行った。培養後、培養液を4℃で30分間遠心分離(5,000g)し、酵母菌体を集菌した。集菌した酵母菌体を冷水で洗浄した後、酵母菌体濃度が15%の菌体懸濁液を調製し、食塩濃度が 4.8%、pH 6.0、95℃で 3.5時間の条件で酵母菌体内容物を抽出した。この酵母菌体内容物の溶液に塩化鉄を加え、pHを 5.0に調整して90℃で90分間加熱し蛋白質やその他の夾雑物を凝集させ、セライト(ジョン−マンビル社製)を用いて吸引濾過し上清を回収した後、この上清を5℃まで冷却し、塩酸を加えてpHを 1.5に調整し、4時間放置してポリアミンを沈澱させ回収した。この沈澱を水に懸濁した後、30%水酸化ナトリウムを加えてpHを6.0に調整して溶解し、ポリアミン溶液を得た。このポリアミン溶液を陽イオン交換樹脂(Dowex 50WX8 (H+ 型))を充填したカラムに通液し、陽イオン交換樹脂にポリアミンを吸着させた後、0.7M食塩水をカラムに通液して樹脂を充分洗浄して不純物を除去し、吸着したポリアミンを6N塩酸で溶出した。そして、この溶出液に30%水酸化ナトリウム溶液を加えて中和した後、電気透析して脱塩し、凍結乾燥してポリアミン組成物を製造した。このようにして、酵母菌体1kg(湿重量)当たり、ポリアミン 155mgを含むポリアミン組成物 500mgが得られた。また、ポリアミン 155mgのうちスペルミジン及びスペルミンの合計量は 142.6mg (92%) であった。
ワイン酵母(Saccharomyces cerevisiae) 菌体を使用し、ポリアミン組成物を製造した。ワイン酵母(Saccharomyces cerevisiae) 菌体を水に懸濁して酵母菌体濃度が10%の菌体懸濁液を調製し、高圧ホモジナイザー(TYPE10.51VH、RANNIE社製) を使用して圧力1,000kgf/cm2で物理的破砕を行い、酵母菌体内容物を抽出した。この酵母菌体内容物の溶液をPLCCセルロースメンブレン(分画分子量 5,000、ミリポア社製) を使用してUFを行い、高分子物質を除去した後、UF透過液を陰イオン交換樹脂(Dowex 1X8 (Cl− 型))を充填したカラムに通液し、夾雑するアミノ酸を陰イオン交換樹脂に吸着させて除去し、非吸着画分を回収した。そして、この溶液を凍結乾燥してポリアミン組成物を製造した。このようにして、酵母菌体1kg(湿重量)当たり、ポリアミン42mgを含むポリアミン組成物 220mgが得られた。また、ポリアミン42mgのうちスペルミジン及びスペルミンの合計量は37.8mg (90%) であった。
酵母菌体内容物として酵母リボ核酸(キリンビール社製)を使用し、ポリアミン組成物を製造した。酵母リボ核酸濃度が5%となるよう水に溶解し、ポリアミン溶液を得た。このポリアミン溶液を陽イオン交換樹脂(Dowex 50WX8 (H+ 型))を充填したカラムに通液し、陽イオン交換樹脂にポリアミンを吸着させた後、0.5M食塩水をカラムに通液して樹脂を充分洗浄して不純物を除去し、吸着したポリアミンを6N塩酸で溶出した。そして、この溶出液に水酸化ナトリウム溶液を加えて中和した後、電気透析して脱塩し、凍結乾燥してポリアミン組成物を製造した。このようにして、酵母リボ核酸1kg当たり、ポリアミン 460mgを含むポリアミン組成物 550mgが得られた。また、ポリアミン 460mgのうちスペルミジン及びスペルミンの合計量は 437mg (95%) であった。
Claims (1)
- 酵母菌体内容物をアルカリで加水分解した後、ポリアミンを回収することを特徴とするポリアミン組成物の製造法。
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