HU226910B1 - Készítmény humán immundeficiencia vírus és más vírusfertõzések okozta betegségek antimikrobás megelõzésére és kezelésére - Google Patents

Készítmény humán immundeficiencia vírus és más vírusfertõzések okozta betegségek antimikrobás megelõzésére és kezelésére Download PDF

Info

Publication number
HU226910B1
HU226910B1 HU0001379A HUP0001379A HU226910B1 HU 226910 B1 HU226910 B1 HU 226910B1 HU 0001379 A HU0001379 A HU 0001379A HU P0001379 A HUP0001379 A HU P0001379A HU 226910 B1 HU226910 B1 HU 226910B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
cells
virus
acid
hiv
drug
Prior art date
Application number
HU0001379A
Other languages
English (en)
Inventor
Meryl Squires
Original Assignee
Meryl Squires
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Meryl Squires filed Critical Meryl Squires
Publication of HUP0001379A2 publication Critical patent/HUP0001379A2/hu
Publication of HUP0001379A3 publication Critical patent/HUP0001379A3/hu
Publication of HU226910B1 publication Critical patent/HU226910B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/14—Quaternary ammonium compounds, e.g. edrophonium, choline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A61K31/198—Alpha-amino acids, e.g. alanine or edetic acid [EDTA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7135—Compounds containing heavy metals
    • A61K31/714—Cobalamins, e.g. cyanocobalamin, i.e. vitamin B12
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/28—Asteraceae or Compositae (Aster or Sunflower family), e.g. chamomile, feverfew, yarrow or echinacea
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/32—Burseraceae (Frankincense family)
    • A61K36/328—Commiphora, e.g. mecca myrrh or balm of Gilead
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/27—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/28—Insulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/141—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers
    • A61K9/145—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers with organic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

A találmány tárgya készítmény humán immundeficiencia vírus és más fertőzések okozta betegségek antimikrobás megelőzésére és kezelésére, amely készítmény tartalmaz tápanyagot és növényt.
Ismeretes, hogy jelenleg világszerte már mintegy 22 millió ember fertőzött a humán immundeficiencia vírussal (HÍV). Az új HIV-esetek legnagyobb része Afrikából és a karib térségből származik. A HIV-fertőzés tipikus kifejlődése különböző stádiumokra osztható: 1. vírustranszmisszió; 2. akut retrovírusos szindróma; 3. szerokonverzió; 4. klinikai tünetmentesség időszaka perzisztáló generalizált lymphadenopátiával (PGL) vagy anélkül; 5. korai tünetes HIV-fertőzéses időszak, amit korábban AIDS-szel kapcsolatos komplexumként vagy ARC-ként ismertek, mostanában az 1993-as CDC osztályozással összhangban inkább „B szimptómáknak” neveznek; 6. szerzett immundeficiencia szindróma (AIDS) (az AIDS-jelző állapot az 1987-es és a módosított 1993-as CDC ismérveknek megfelelően, amelyek tartalmazzák, hogy CD4 sejtszám <200/mm3); és 7. előrehaladott HIV-fertőzés, amelyet a CD4 sejtszám <50/mm3 jellemez. A CD4 sejtek a HÍV által célba vett lymphocyták. 1993-ban a CDC megváltoztatta az AIDS meghatározását, és beleérti valamennyi CD4 sejtszám <200/mm3 beteget; ez a definíció felöleli a 4-7. stádiumban levő betegeket, a szimptómákra való tekintet nélkül.
A kezdeti akut retrovírusos szindróma a CD4 sejtszám hirtelen csökkenésével, magas tenyésztési fokú plasma viraemiával és a plazmában magas HÍV RNS koncentrációkkal jár együtt. Klinikai gyógyulás következik, és a magas HÍV RNS szintű plasma viraemia csökken a citotoxikus T-lymphocyta (CTL) válasz termelődéssel. A CD4 sejtszám fokozatosan, több év alatt csökken, majd 1,5-2 évvel az AIDS-megállapító diagnózis előtt felgyorsult csökkenést mutat. A plazma HÍV RNS koncentrációja viszonylag stabil a HÍV késői stádiumáig, amikor a CD4 sejtszám <200/mm3, és a klinikai lefolyást fertőzések, különféle tumorok, sorvadás és neurológiai komplikációk jellemzik. Általában a betegek mintegy 10%-a eljut az AIDS-megállapító diagnózisig, mielőtt a CD4 sejtszám 200/mm3-re csökken. A jelenlegi átlagos idő a CD4 sejtszám 200/mm3-re csökkenése után egy, az AIDS okozta szövődmény kialakulásáig 12-18 hónap. HIV-ellenes terápia vagy PCP prophylaxis hiányában a vírustranszmisszió és a határozott AIDS-megállapító diagnózis közötti átlagos idő mintegy 10 év, és AIDS okozta szövődmény utáni túlélés körülbelül egy év volt korábban.
Átlagos beteg esetén az események teljes lefolyása HIV-ellenes terápia hiányában a szerokonverziótól a halálig megközelítően 10 év. Az átlagos idő a HlV-szerokonverziótól az AIDS-ig a beszámolók szerint vérátömlesztett betegeknél mintegy 7 év, hemofíliásoknál 10 év, kábítószereseknél 10 év és homoszexuális férfiaknál 10-12 év. A lefolyási sebességek hasonlóaknak tűnnek a szexuális, faji és kockázati kategóriáknál, azonos gondozási minőség esetén. A szerokonverzió idején 16-24 éves betegeknél ez az átlagos idő 15 év volt; ugyanez a szerokonverzió idején 35 éven felülieknél 6 év volt.
A HIV-fertőzés terjedhet szexuális érintkezés útján, fertőzött vérrel történő gyógyszertranszfúzióval, kábítószernek fertőzött tűkkel való adagolása útján vagy szüléssel történő átvitellel. A tünetes, primer HIV-fertőzést, amit akut retrovírusos szindrómának is neveznek, az előző kockázati kategóriákban 50-90% gyakoriságúnak referálják. Ezt a szindrómát figyelték meg nyolc közül hét egészségügyi dolgozónál is, akik foglalkozásuk során lettek HIV-fertőzöttek. A fertőződéstől a szimptómák megjelenéséig terjedő idő rendszerint 2-4 hét, de a lappangás hat hét is lehet. A tipikus tünetek a következők: láz, adenopathia, pharyngitis, kiütés, amely erythemás maculopapulákat tartalmaz 5-10 mm-es sebekkel az arcon és a törzsön, néha a végtagokon, beleértve a tenyeret és a talpat, vagy nyálkahártyafekélyek a szájban, a nyelőcsőben vagy a genitáliákon, izomfájdalmak és ízületi fájdalmak, hasmenés, fejfájás, hepatosplenomegalia, szájpenész, hányinger és hányás. A neurológiai tünetek lehetnek: meningoencephalitis, perifériás neuropathia, faciális bénulás, Guillain—Barrészindróma, brachialis neuritis, radiculopathia, cognitive károsodás és psychosis. Az akut betegség általában magas szintű p24 antigénes HÍV viraemiával, plasma viraemiával és a perifériális vér mononukleáris sejtjeinek magas HÍV titerével jár.
A citotoxikus T-lymphocyta (CTL) válasz az első, és rendszerint megelőzi néhány héttel a detektálható testnedvi választ. A CTL válasz a perifériás véráram HÍV koncentrációjának 3-5 lóg csökkenésével jár. A betegség ezen akut fázisa során a viraemia magas szintje a vírusnak a központi idegrendszerben és a nyirokszövetekben való elterjedésével társulhat. A nyirokszövet mintegy fő rezervoárként szolgál a HIV-vírus keletkezéséhez és replikációjához. Úgy tűnik, hogy a nem lymphhoid szervek magas HIV-szintű fertőzöttsége a HÍV késői stádiumaiban fordul elő.
A tünetek megjelenése inkább, mint a tünetmentes szerokonverzió, ugyanúgy, mint egy 14 napon túl elhúzódó betegség, összefüggni látszik az AIDS gyorsabb kifejlődésével. A pozitív HÍV szerológiájú szerokonverzió általában az átvitelt, így a transzfúziót vagy egy egészségügyi dolgozó tűvel megsértését követő 6-12 hét alatt történik. Az átlagos időszak 63 nap. A CTL válasz a vér kvantitatív vírusszintjének hirtelen csökkenéséből, az akut retrovírusos szindrómából történő klinikai gyógyulásból és a CD4 sejtszámnak magasabb, gyakran a legtöbb laboratórium szerint normális szintre történő visszanövekedéséből tevődik össze.
A HIV-beteg klinikailag tünetmentes lesz, és általában fizikális vizsgálata során semmi nem észlelhető, kivéve a nyirokcsomók megnagyobbodásával járó perzisztáló generalizált lymphadenopatia (PGL) esetét. A nyirokcsomók vizsgálata magas HIV-koncentrációkat mutat, mivel a follicularis dendrites sejtek nyúlványaikkal a germinális központokban extracelluláris víruscsapdaként szolgálnak, az intracelluláris vírus pedig döntően latens formában van jelen. A nyirokszövet mintegy fő rezervoárként szolgál a HIV-nek, a follicularis dendrites sejtek szűrik és csapdát állítanak a szabad vírusnak és a fertőzött CD4 sejteknek, míg a peri2
HU 226 910 Β1 fériás vér mononukleáris sejtjeiben a vírusszint viszonylag alacsony. A kór kifejlődésével a HÍV a nyirokcsomók szerkezetét elroncsolja.
A tünet nélküli HIV-fertőzéses betegek virológiái vizsgálatai nagy arányú, átlagosan napi 109 vírus HÍV replikációt mutatnak. A vírusreplikáció nagymértékű roncsolással és napi 109 CD4 sejt képződésével jár. A CD4 sejtek átalakulása a test összes CD4 sejtjeinek 6-7%-át jelenti, úgyhogy a teljes állomány átalakulása minden 15 napban végbemegy. Az AIDS a folyamatos, magas szintű HIV-1 replikáció egy következményének tekinthető, amely a CD4 lymphociták vírus- és immunvezérelt pusztulásához vezet.
Előrehaladott HIV-fertőzés következik be a betegekben a CD4 sejtszám <50/mm3 értékénél. Ezen betegek életkilátása korlátozott, 12-18 hónap átlagos túléléssel. Gyakorlatilag minden beteg, aki a HIV-vel összefüggő szövődményekben hal meg, ebben a CD4 sejtszám tartományban van.
A Food & Drog Administration (FDA) sok reverz transzkriptáz (RT) inhibitort engedélyezett. Az RT enzimek átalakítják a vírusos RNS-t DNS-sé. Az RT inhibitorok ezt a fent leírt folyamatot képesek megszakítani. Az RT inhibitor AZT-t, amelyet Retrovir és Zidovudine márkaneveken forgalmaz a Glaxo Wellcome, 1987-ben engedélyezte az FDA. Az RT inhibitor ddl-t, amelyet Videx és Didanosine márkaneveken forgalmaz a BristolMyers Squibb, 1991-ben engedélyezte az FDA. Az RT inhibitor ddC-t, amelyet HIVID és Dideoxycytidine márkaneveken forgalmaz a Hoffman-LaRoche, 1992-ben engedélyezte az FDA. Az RT inhibitor d4T-t, amelyet Zerit és Stavudine márkaneveken forgalmaz a BristolMyers Squibb, 1994-ben engedélyezte az FDA. Az RT inhibitor 3TC-t, amelyet Epivir és Lamivudine márkaneveken forgalmaz a Glaxo Wellcome, 1995-ben engedélyezte az FDA. Az RT inhibitor Nevirapine-t, amelyet Viramune márkanéven forgalmaz a Boehringer Ingelheim, 1996-ban engedélyezte az FDA.
A Food & Drog Administration (FDA) most engedélyezett három proteáz inhibitort a humán immundeficiencia vírus (HÍV) fertőzés kezelésére. Az Invirase márkanéven a Hoffman-LaRoche Laboratories által forgalmazott Saquinavir volt az első proteáz inhibitor szer, amelyet az FDA engedélyezett. A Ritonavir, egy másik proteáz inhibitor, amelyet Novir márkanéven az Abbott Laboratories forgalmaz, 1996. márciusban kapott FDA engedélyt, ugyanúgy, ahogy a Crixivan márkanéven a Merck & Co által forgalmazott Indinavir.
A proteáz inhibitorok hatásmechanizmusa eltér a korábban engedélyezett anti-HIV gyógyszerekétől, mint a nukleozid analóg AZT-től és 3TC-től, amelyeket Zidovudine és Lamivudine márkaneveken forgalmaz a Glaxo Wellcome, a ddl-től és a d4T-től, amelyeket Didanosine és Stavudine márkaneveken forgalmaz a Bristol-Myers Squibb, valamint a ddC-től, amit Dideoxycytidin márkanéven forgalmaz a Hoffman-LaRoche. A proteáz inhibitorok azt az enzimet blokkolják, amelyet a HÍV az újratermelődési ciklusának befejezéséhez és életképes új vírusok kialakításához igényel. Proteáz enzim nélkül a vírus szerkezeti proteinjei nem képződhetnek megfelelően, és hibás, nem fertőző vírus alakul ki. A nukleozid analógok blokkolnak egy enzim-reverz transzkriptázt. Ez a hatás képes megakadályozni, hogy a vírus RNS-ből vírus DNS képződjön, amely azután be tudna épülni a humán sejtek DNS-ébe. Egy vagy több reverz transzkriptáz inhibitornak proteáz inhibitorral történő, esetenként „koktél”-nak nevezett kombinációja bizonyítottan az újratermelődési ciklus két pontján támadja meg a HÍV újratermelődését. Klinikai kísérletek, amelyek során a Saquinavirt AZT-vel, ddC-vel vagy mindkettővel kombinálják, a vérben nagyobb HIVrészecskeszám-csökkenést mutatnak, néha a vírust terhelőnek mutatkoznak, és a CD4 sejtek (T lymphocyták) nagyobb sejtszámnövekedését mutatják, mint amilyet korábban megfigyeltek egyedül a reverz transzkriptáz inhibitorokat alkalmazva. A koktélok néhány beteg esetén néha toxikusak és hatástalanok voltak. Az RT inhibitorok és a proteáz inhibitorok kombinációi (a koktélok) esetén a klinikai előny a növekvő túlélési időben vagy a kór kialakulásának csökkenő arányában még nem teljesen bizonyított. Az orvosok mindazonáltal kezdik a HIV-et inkább egy krónikus, kezelhető kórnak tekinteni, mint halálos ítéletnek.
Előrehaladott állapotú AIDS-betegek kezelésére az FDA engedélyezte a Saquinavir proteáz inhibitoroknak a reverz transzkriptáz inhibitorokkal kombinációban történő alkalmazását. A Saquinavir proteáz inhibitorok néhány betegnél a hematológiai vagy neurológiai toxikusság nélkül tolerálhatok, ellentétben a nukleozid analógokkal. Bizonyos szokásos gyógyszerek, így a rifampin, rifabutin, phenobarbital, dilantin és a dexamethasone, szignifikánsan csökkenthetik a Saquinavir proteáz inhibitorok plazmaszintjét, és kerülendők a Saquinavirt szedő betegeknél. Vírusrezisztencia ugyanúgy ismeretes a Saquinavir proteáz inhibitorokkal szemben, mint más anti-HIV gyógyszerek esetén.
A Ritonavir és az Indinavir proteáz inhibitorok hatékonyabbnak tűnnek a HIV-vel szemben, mint a forgalomban levő Saquinavir készítmények. A Ritonavir proteáz inhibitorok hűtést igényelnek. A Ritonavir proteáz inhibitorokat jelenleg nukleozid analógokkal (AZT-szerű gyógyszerek) kombinálva vagy monoterápiaként alkalmazzák. Egy régi vizsgálat során 32 beteget kezeltek Ritonavir, AZT és ddC-vel. 20 hét után az átlagos CD4 sejtszámok a 83 sejt/mm3 bázisértékről 106 sejt/mm3-re emelkedtek. A vírusszint, a vérben levő vírusegyedek számértéke, csaknem a századrészére csökkent. A Ritonavirt 600 mg-os dózisban, orálisan, naponta kétszer adták, ami napi 12 kapszulát jelentett. A gyógyszer 100 mg-os kapszulákban kiszerelve kapható. A mellékhatások meglehetősen szokványosak, beleértve a gastrointestinalis tüneteket, émelygéssel, hányással, hasmenéssel. Egyéb mellékhatás is előfordult, zsibbadás és bizsergés, különösen a száj körül, valamint májgyulladás, mint a hepatitisnek egy formája.
Az Indinavir proteáz inhibitorok gyorsított FDA-engedélyt kaptak az AZT, 3TC és Indinavir kombinációval végzett vizsgálatok alapján, melyek során a CD4 sejtek mintegy 100 sejt/mm3 átlagos értékre növekedését és
HU 226 910 Β1 a vírusszint századrészére csökkenését bizonyították. Az Indinavirt 800 mg-onként, naponta háromszor (naponta 3-szor 2 kapszula) orálisan adagolták. Ellentétben a Ritonavirral, az Indinavir a felszívódás növelése érdekében üres gyomorral is bevehető. Az Indinavir kevesebb gastrointestinális mellékhatást okoz, mint a Ritonavir, és mindenekfelett néhány beteg számára jobban tolerálhatónak tűnik. Az Indinavir proteáz inhibitorok lényeges mellékhatása a vesekövek képződése. A gyógyszer a vizeletben részben kiválik, és ha nincs biztosítva megfelelő hidratáció, kövekként kikristályosodhat. Az Indinavir proteáz inhibitorok is károsítják a májat, a bilirubinszint emelkedését okozzák a vérben, ugyanis a vörösvérsejtek bomlásakor epefesték képződik. Indinavir proteáz inhibitorok is okozhatnak gyógyszerkölcsönhatásokat.
A proteáz inhibitorok rezisztenciavizsgálata még nem teljesen befejezett. A Saquinavir és a Ritonavir proteáz inhibitorok jelenleg egy betegnek közelítően havi 600 USD-ba kerülnek. Az Indinavir proteáz inhibitorok ára ennél mintegy 30%-kal alacsonyabb. Az AZT3TC-Ritonavir proteáz inhibitorokból álló három gyógyszeres kombináció egy betegnek havonta több mint 1000 USD-ba kerülhet. Az RT inhibitorok és proteáz inhibitorok kombinációi (a koktélok) ugyanakkor 25 000 USD-ba kerülhetnek évente. Bár a proteáz inhibitorok hasznosak lehetnek, az egészségügyi alap és a társadalom ezen drága gyógyszerek esetén még nem oldotta meg a betegek költségproblémáját.
Az általában „herpeszvírus” vagy „herpeszének hivatkozott herpes simplex vírus (HSV) okozta fertőző kór, amely ugyancsak válságos méreteket öltött országonként, az USA-ban a népesség 70—80%-át teszik ki a fertőzött emberek az American Societal Health Association (ASHA) közlése szerint, és ez évente 500 000 emberrel növekszik. Két közönséges herpesztípus van: herpes simplex vírus 1 (HSV-1) és herpes simplex vírus 2 (HSV-2). A herpesz az emberi testet rendszerint egy fertőző vírusgazdával való érintkezéssel, az epidermális szövetek apró sérülésein keresztül támadja meg. Kitörését rendszerint mintegy négynapos lappangási időt követően egy vagy több, csoportokban megjelenő kiütés jelzi. A fertőzés kitörésének folyamata tipikusan egy prodromális állapottal kezdődik, előrehaladása hólyagos kiütésekhez vezet, majd ezt követi a fekélyesedés, egybeolvadás, felszívódás és a lappangó periódus. A kitörés több hétig tarthat, átlagosan két-három hét. Bizonyos immunveszélyeztetett egyének esetén a kitörés hónapokig is tarthat. A kiütések bárhol megjelenhetnek a bőrön vagy a nyálkahártyán, tipikus a megjelenésük az ajkakon ajaksömörként, mirigyeken, szájnyálkahártyán, kötőhártyán és szaruhártyán, genitáliákon, anális nyálkahártyán és perianális szöveten.
A herpesz tünetei a következők: lágyékduzzanat, fájdalom, láz, rossz közérzet, fejfájás, izomfájdalmak és duzzadt mirigyek. Néhány betegnek, akiknél a szájherpesz a nervus trigeminust támadta, kínzó arcfájdalma, nyelési, étkezési nehézségei és arcduzzadása van. Akiknél a szakrális idegeket támadta a kór, komoly felsőlábszár-fájdalmuk, dagadásuk és nagyfokú járási problémájuk van.
A herpes simplex vírus (HSV) fertőzés visszatérő, visszamarad az idegdúcokban, majd valami, ma még ismeretlen stimulus következményeként visszatér. A kiújuló herpeszfertőzéseket szinte bármi siettetheti, így a túlzott napozás, elégtelen táplálkozás, stressz, menstruáció, immunhiány, bizonyos élelmiszerek, gyógyszerek, lázas betegségek stb. Az utóbbi időben herpeszvírust izoláltak szívszövetből.
A HSV-1 és HSV-2 fertőzés nagyon komoly egészségügyi veszélyt jelent. Gyakran okoz vakságot, megnövekedett méhnyakrákkockázatot, steril agyvelőgyulladást, agyhártyagyulladást, újszülöttkori halált, viraemiát stb. Ezen kór pusztító hatásai jóval túlmennek az emberi szenvedés orvosi határain. A HSV egy sor pszichológiai és emocionális szenvedésért felelős, ugyanakkor alapvető gazdasági veszteséget is jelent a nemzeteknek és a világnak.
A herpesz különféle kezelési módjait javasolták és javasolják, beleértve az olyan hatóanyagok, mint a provodone-jodid, idoxuridine, trifluor-timidin vagy acyclovir helyi alkalmazását. Az ilyen kezelések sikere változó mértékű. A legelső kezelések csalódást keltettek. Az Acyclovir, orálisan adva a HSV rendszeres kezelésére, valamelyest hatékony. Mindazonáltal az Acyclovir csak a vírusreplikáció megállításában eredményes, nem sikeres a fertőzéskitörés kezelésére, sem aktuális, sem rendszeres kezelés során. Beszámoltak az Acyclovirrel szemben rezisztens törzsekről is. Az autoimmun deficiencia szindrómás (AIDS) betegek súlyosan immunkárosodottak, és különösen szenvednek a HSV legyengítő hatású kitöréseitől. Továbbá az AIDSbetegek hordozhatják a HSV acyclovirrezisztens törzseit, ami ezen betegek számára hatástalanná teheti az Acyclovirt.
Wainberg és társai [Arch. AIDS Rés., 1 (1), 1987, 57-58. oldal] megfigyelték, hogy a benzalkónium-klorid csökkenti a HIV-1 reverz transzkriptáz aktivitást.
Az US 4797420 számú szabadalmi leírás egy fertőtlenítő tisztítószer összetételt ír le, mely alkil-dimetilbenzil-ammónium-kloridot tartalmaz, és különösen hatásos herpes simplex vírussal szemben.
A WO 98/11778 számú nemzetközi szabadalmi bejelentés Echinaceát és benzalkónium-kloridot tartalmazó összetételt ismertet, elsősorban herpes simplex vírus ellen.
Fontos feladat egy biztonságos és eredményes gyógyászati készítmény kifejlesztése, hogy segítsen kezelni és megelőzni a HÍV és más fertőző kórok okozta súlyos problémákat.
A találmány egy továbbfejlesztett gyógyászati készítményt biztosít, amely arra szolgál, hogy rendszeres alkalmazása során megakadályozza a humán immundeficiencia vírusnak (HÍV) a célsejtekhez történő kapcsolódását, és gátolja a HÍV szétszóródását. Előnyösen az új gyógyászati készítmény segíthet megakadályozni a HÍV és más vírusok szexuális átvitelét. E továbbfejlesztett gyógyászati készítmény biztonságos, kevésbé költséges és hatásos.
HU 226 910 Β1
A találmány tehát készítmény, amely tartalmaz tápanyagot és növényt, és a tápanyag folsavat, a növény pedig Echinacea nemzetséghez tartozó gyógynövényt tartalmaz, és az Echinacea Echinacea purpureát tartalmaz. A találmány továbbá készítmény, amely tartalmaz tápanyagot és növényt, és a tápanyag folsavat, a növény pedig Echinacea nemzetséghez, továbbá Commiphora nemzetséghez tartozó gyógynövényeket tartalmaz, ahol az Echinacea Echinacea purpureát tartalmaz. A Commiphora előnyösen olyan fajt tartalmaz, amely Commiphora myrrha, Commiphora molmol vagy Commiphora erythrea. A Commiphora előnyösen Commiphora myrrhát tartalmaz. A Commiphora myrrhának az Echinacea purpureához viszonyított aránya mintegy 1:2 és mintegy 1:4 között van. Előnyösen a készítmény tömegszázalék szerint tartalmaz: 0,01 tömeg%-tól 25 tömeg%-ig, előnyösen 2 tömeg%-tól 12 tömeg%-ig folsavat; 2 tömeg%-tól 90 tömeg%-ig, előnyösen 40 tömeg%-tól 60 tömeg%-ig Echinacea purpureát és Commiphora myrrhát; és 20 tömeg%-tól 60 tömeg%-ig vizet. A készítmény felületaktív anyagként mintegy 0,02 tömeg% mennyiségtől kezdve kevesebb mint 0,26 tömeg% mennyiségig kvaterner ammóniumsót is, előnyösen benzalkónium-kloridot tartalmaz.
A kifejlesztett, a Viracea 2, HIV-4-nek is nevezett gyógyszer, új gyógyászati kompozíciót, formulációt, antimikrobás szert és oldatot jelent. Az új antimikrobás gyógyászati készítmény elsősorban a HÍV rendszeres kezelésében sikeres, továbbá hasznos lehet más mikrobás fertőzések kezelésében is, korlátozási szándék nélkül megemlítve például a varicella zoster vírust (herpes zoster) és a cytomegalovirust. Bizonyos körülmények között előnyös lehet az új gyógyszer helyi alkalmazása.
Noha az új gyógyszer és antimikrobás szer főleg a humán immundeficiencia vírus (HÍV) fertőzés drasztikus gátlására szolgál, hasznos lehet más mikrobás kórok (mikroba okozta kórok), úgymint az Epstein-Barr, papilloma vírus, cellulitis, staphylococcusok, streptococcusok, mycobacteriumok, influenza, parainfluenza, adenovírus, encephalitis, meningitis, arbovirus, arenavirus, anaerob baktériumok, picornavirus, coronavirus és synsytialvirus, valamint a herpes simplex vírus, varicella zoster vírus és cytomegalovirus kezelésére is.
Habár a gyógyászati készítmény főleg az emberekben (humán) (homo sapiens) szolgál HÍV és más fertőző kórok gátlására, állatgyógyászati célokra is hasznos lehet, az állatokban, így kutyák, macskák, madarak, lovak, tehenek, birka, disznó (malac és hízó) és más haszonállatok, vagy ugyanúgy rágcsálók és más, állatkertekben látható állatokban fellépő vírusos és bakteriális fertőzések és fertőző kórok kezelésére.
A jelen találmány szerinti továbbfejlesztett gyógyászati készítmény váratlan, meglepően jó eredményeket szolgáltatott. Ezen könnyen alkalmazható mikrobicid oldat parenterális kezelés során azonnali abszorpciót nyújt. A kezelés során gyenge zsibbadás léphet fel. Az alkalmazás idején néhány percig a szájban gyenge gyógyszeres íz tapasztalható. Az új gyógyászati készítmény első in vitro vizsgálata során különösen meglepő
HIV-inhibíciós hatást mutattak ki. Az új gyógyszer előnyösen könnyen hozzáférhető, pulton át kapható (OTC) vegyszerekből vagy termékekből készül, és biztonságos, kényelmes és gazdaságos kezelést tesz lehetővé.
Előnyösen az új gyógyszer (gyógyászati készítmény) mikroba inhibitorokat tartalmaz, amelyek gátolják, elfojtják és leállítják a mikrobiológiai fertőzéseket a mikrobák okozta kórok keltésében. A mikroba inhibitorok a későbbiekben felsorolt növények közül egynek vagy többnek legalább egy részéből készített antimikrobás kivonatát, növényi kivonatát vagy növényi hatóanyagát tartalmazzák. A mikroba inhibitorok tartalmazhatnak vírus inhibitorokat a vírusos kórok, mint a HÍV, a herpes simplex vírus 1 (HSV-1), a herpes simplex vírus 2 (HSV-2), varicella zoster vírus (herpes zoster), cytomegalovirus, Epstein-Barr, papilloma vírus, vírusos influenza, vírusos parainfluenza, adenovírus, vírusos encephalitis, vírusos meningitis, arbovirus, arenavirus, picornavirus, coronavirus és synstialvirus ellen. A mikroba inhibitorok tartalmazhatnak bakteriális inhibitorokat is a bakteriális kórok, mint a cellulitis, staphylococcusok, streptococcusok, mycobacteriumok, bakteriális encephalitis, bakteriális meningitis és anaerob baktériumok gátlására. Bizonyos esetekben a mikroba inhibitorok tartalmazhatnak gomba inhibitorokat.
Jobb eredmények érhetők el, ha a gyógyszerben az Echinaceát és Commophorát (Commiphorának is nevezik) vagy más növényeket nem alkalmazzák nyers, kezeletlen és vágatlan állapotban. Még jobb eredmények elérése érdekében a gyógyszer ne tartalmazzon arabinózt, betaint, cellulózt, rezet, fruktózt, zsírsavakat, galaktózt, glükózt, vasat, káliumot, fehérjét, gyantát, szacharózt és xilózt.
A kifejlesztett gyógyászati készítmény új módszert és eljárást szolgáltat a fenti fertőző betegségek kezeléséhez. Néhány fertőző kór esetén a mikrobás inhibitorokat lehet a fertőzött terület mikrobiológiailag fertőzött részén (a felszínén vagy környékén) alkalmazni, amíg a fertőzés külső tünetei és fizikai jelei eltűnnek, elosztanak vagy felszívódnak a fertőzött helyről. A gyógyszer beadható injekciós befecskendezéssel, nyelv alatti készítményként, spray-ként, pamacsolással, behintéssel, kenéssel, szivacsos mosással, ecseteléssel, ráöntéssel, permetként, befedéssel, vagy sűrű bevonatként alkalmazható a mikrobiológiailag fertőzött területeken, így a nyirokcsomókon, a nyirokrendszeren, T-sejteken, szájnyálkahártyán, orrnyálkahártyán, vaginális szöveten, ajakszöveten, rektális szöveten, anális szöveten, perianális szöveten, ajkakon, bőrszöveten, szemszöveten, kötőhártyán és a szemhéjakon.
A mikrobás inhibitorok vagy antimikrobás szerek a rektális csatornába vagy a vaginába rendszeresen injektálva a HÍV szexuális átvitelének kezelésére vagy megelőzésére előnyösen alkalmazhatók. A mikrobás inhibitorok vagy antimikrobás szerek az előzőekben leírt módokon, naponta 4-20-szor, 4-18 egymást követő napon alkalmazhatók HIV-fertőzött betegek vírusszintjének lényeges csökkentésére, azaz a testben levő HÍV- és AIDS-vírus mennyiségének csökkentésére.
HU 226 910 Β1
A kifejlesztett gyógyszer, gyógyászati készítmény vagy mikrobás szer előnyösen egy fitokémiai koncentrátum, amelyet felületaktív anyaggal, tápanyaggal és vivőanyaggal, oldószerrel vagy hígítószerrel kombinálva, szimultán vagy párhuzamosan, mikrobicid gyógyszeroldat előállítására alkalmaznak. A tápanyag katalizátorként, aktivátorként, fitokémiai iniciátorként, táplálkozási kiegészítőként és kiegészítő vivőanyagként szolgál. A tápanyag tartalmazhat egyet vagy többet a következőkből: vízoldható vitamin, zsíroldható vitamin, A-vitamin, B komplex vitamin (B-vitamin komplex), D-vitamin, E-vitamin, K-vitamin, B1-vitamin, B2-vitamin, B5-vitamin, B6-vitamin, B12-vitamin, B15-vitamin és előnyösen folacin és folsav.
E célból a vonatkozó mikrobicid oldat antimikrobás detergens felületaktív anyagot és növényi kivonatokat tartalmaz. A felületaktív anyagok előnyösen kationos felületaktív anyagok, amelyek tartalmaznak a következők közül egyetlen vagy akárhány 6-18 szénatomos kvaterner ammónium-kloridot: alkil-benzil-dimetilammónium-kloridot, alkil-benzil-dimetil-ammóniumklorid, alkil-metil/etil-benzil-ammónium-klorid, n-alkildimetil-benzil-ammónium-klorid, diizobutil-fenoxi-etoxietil-dimetil-benzil-ammónium-klorid, N-(C12C14C16)dimetil-benzil-ammónium-klorid, benzalkónium-klorid, oktil-decil-dimetil-ammónium-klorid, didecil-dimetilammónium-klorid, dioktil-dimetil-ammónium-klorid, dialkil-dimetil-ammónium-klorid, dialkil-metil-benzilammónium-klorid, oktil-decil-dimetil-ammónium-klorid, dimetil-benzil-ammónium-klorid, lauril-dimetil-benzilammónium-klorid, o-benzil-p-klór-fenol, didecil-dimetilammónium-klorid, dioktil-di metil-ammónium-klorid, (C^C^C^j-alkil-dimetil-benzil-ammónium-klorid keverékét, és előnyösen alkil-benzil-dimetil-ammóniumkloridot, legelőnyösebben benzalkónium-kloridot tartalmaz. A kationos felületaktív anyag aktivitási sávja a szerben 5-90 t% lehet, de előnyösen 8-20 t%. A kvaterner ammóniumsók a kereskedelemben könnyen beszerezhetők. Bizonyos esetekben hasznos lehet más felületaktív anyagok, például, de ezekre nem korlátozva, DMSO, glikolsav, enzim, amfolitikus, zwitterionos felületaktív anyagok és nemionos felületaktív anyagok alkalmazása. A felületaktív anyagok tartalmazhatnak detergenseket, nedvesítőszereket, emulgeátorokat, habzásgátlókat és/vagy felületi feszültséget csökkentő adalékokat.
A vivőanyagok hasznosak az összetevők elegyítéséhez, az összetevők oldatban tartásához, és biztosítják az oldatnak a fertőzött területre való egyszerű feljuttatását akár spray, csepegtetés vagy applikátor segítségével. Bár a legjobb eredményekhez előnyös egy vizes oldat, előnyösen egy steril vizes oldat, vizes vivőanyaggal és oldószerrel, bizonyos körülmények között azonban kívánatos lehet más, folyékony vagy szilárd vivőanyagok alkalmazása, úgymint: glicerin, ásványi olaj, kovasav, gyapotmagolaj, kókuszdióolaj, növényi olaj, magolaj, halolaj vagy más állati olaj, alkohol, talkum, kukoricaliszt, kukoricaliszt, méhviasz, karnaubaviasz, béta-karotin, fokhagymaolaj, kámforolaj, oldható vitaminok, oldható ásványi anyagok, repcemagolaj, dióolajok, olívaolaj, liposzómák, aszkorbinsav, ligetszépeolaj, pycnogenol, szőlőmagolaj, lanolin, ethocin, kollagén, aloe vera, méhpollen, méhpempő, kondroitinszulfát. A tengeri növények, EDTA, zsírsavak, füvek, lecitin, bioflavonoidok, gabonaolajok vagy -porok, algák, teák, ecetek, savmegkötők, sejtsók, aszkorbinsavak, hydra 5, mirigyek, aminosavak, psyllium, növényi származékok vagy egyéb steril vivőanyagok.
Eme új gyógyszernél alkalmazott növényi kivonatok, antimikrobás izolátumok vagy fitokemikáliák a következőket tartalmazhatják: myrrha gumi gyanta, sequiterpenek, curzenon, dihidrofuanodien-6-on, 2-metilfurán-dién, elemol, ecetsav, alfa-amyrone, arabinóz, alfa-bisabolene, gamma-bisabolene, cadinene, campesterol, koleszterin, fahéjaldehid, commiferin, alfa-commiphora sav, béta-commiphora sav, gamma-commiphora sav, commiphora sav, m-krezol, köményalkohol, köményaldehid, dipentén, elemol, 3-epi-alfa-amyrin, eugenol, furanodiene, furanodienone, galaktóz, gumi, heerabolene, alfa-heerabomyrrhol, béta-heerabomyrrhol, heeraborense, limonene, 4-0-metil-glükuronsav, n-nonacesane, béta-szitoszterin, xilóz, karopilének (carophylenes), lynderstyrene (lindestyrene), arabinóz, bétáin, réz, echinacen, echinacin B, echinakozid, echinolon, enzimek, fruktóz, zsírsavak, galaktóz, glukóz, glukuronsav, inulin, inuloid, vas, pentadekadién, polyacelylene vegyületek, poliszacharidok, például, de nem korlátozva erre, az arabinogalaktan; kálium, fehérje, gyanta, ramnóz, szacharóz, kén, tanninok, A-, C- és E-vitaminok, alkil-amidok, apigenin, arabinogalakta, aszkorbinsav, behenia-sav-etil-sav, bétáin, borneol, bornil-acetát, koffeinsav, 2-0-koffeoil-3-(5-alfa-karboxibeta)-3,4-dihidroxi-fenil, 2-0-koffeoil-3-0-kumaroil-borkősav, 6-0-koffeoil-echinakozid, 2-0-koffeoil-3-0-feruloyl-borkősav, 2-0-koffeoil-borkősav, kalcium, karbonát, béta-karotin, karofillén, karofillén-epoxid, -klorid, klorogensav, cikóriasav, cikóriasav-metil-észter, kobalt, cianadin-3-0-(béta-d-glükopiranozid), cinadin-3(6-0-malonil-béta-d-glükopiranozid), cinarin, deka(2e,4e,6e)-trienoiksav-izobutil-amid, dez-ramnozil-verbaszkozid, 3,5-dikoffeoil-kinasav, 4—5-0-dikoffeoil-kinasav, 2,3-0-diferulol-borkősav, dodeka-(2e,4e)-dienoiksav-izobutil-amid, dodeka-2,4-dien-1-yl-izovalerat, dodeka-(2e,6z,8e,10e)-tetraenoiksav-izobutil-amid, epishobunol, béta-farnesen, 2-0-feruloy-borkősav, germakrén, heptadeka-(8z,11z)-dien-2-on, heteroxilan, humulen 8-12, (e)-10-hidroxi-4,10-dimetil-4,11-dodekadién2-on, 13-hidroxi-oktadeka-(9z,11 e, 15z)-trienoiksav, inulin, vas, izoklorogensav, izorhamnetin-3-rutonozid, izotusszilagin, kaempferol, kaempferol-3-glukozid, kaempferol-3-nutinozid, limonen, luteolin, luteolin-7glukozid, magnézium, mangán, 2-metil-tetradeka-5,12dien, 2-metil-tetradeka-6,12-dien, metil-p-hidroxicinnamát, marcene, niacin, palmitinsav, pentadeka(8z, 11z)-dien-2-on, pentadeka-(8z,13z)-dien-11-lyn2-on, pentadeka-8-en-2-on, pentadeka-(8z)-en-2-on, pentadeka-(8z)-en-11,13-dien-2-on, 1 -pentadecen, penta-(1,8z)-dien, foszfor, alfa-pinen, béta-pinen, poliacetilének, pontica-epoxid, kálium, protein, quercetagetin-7-glukozid, quercetin, quercetin-3-galaktozid,
HU 226 910 Β1 quercetin-3-glukozid, quercetin-3-robinozid, quercetin3-xilozid, quercetin-3-xilozil-galaktozid, ramnoarabinogalaktán, riboflavin, rutin, rutozid, szelén, szilikát, bétaszitoszterin, szitoszterin-3-béta-o-glukozid, nátrium, stigmaszterin, szulfát, borkősav, tetradeka-(8z)en-11,13-dien-2-on, tiamin, n-triakontanol, trideka-1en-3,5,7,9,10-pentain, tusszilagin, vanallin, verbaszkozid. Jobb eredmények érhetők el, ha a fitokémiai koncentrátumok a fenti fitokemikáliákat tartalmazzák, de az arabinóz, bétáin, cellulóz, réz, fruktóz, zsírsavak, galaktóz, glikóz, vas, kálium, protein, gyanta, szacharóz és xilóz kivételével.
A növényi kivonatokat, antimikrobás izolátumokat és fitokemikáliákat a következő növények részeiből szeparálják, extrahálják és izolálják: pimpinella anisum, myroxylon, arctostaphylos, carum, capsicum, eugenia mytacea, coriandrum, inula, allium, gentiana, juniperus, calendula, origanum, mentha labiate, commiphora, plantago, rosmarinus, ruta, lamiaceae, meliosa, baptisa, artemisa, sage, mentha, parthenium integrifolium, eucalyptus, asteriacea, és előnyösen: (1) az Astericaea családhoz tartozó Echinacea nemzetségből, nevezetesen az Echinacea purpureából, Echinacea angustofoliumból, (Echinacea pallidae), Echinacea vegetalisból, Echinacea atribactilusból és Echinacea pallidumból, valamint és ezek kultúrnövény-változataiból, valamint a Commophora nemzetségből, mégpedig a Commophora myrrhából, Commophora molmolból, Commophora erythraeából, valamint ezek kultúrnövény-változataiból. A legjobb eredmény érdekében a fitokemikáliák és antimikrobás izolátumok Echinacea purpureából, Echinacea angustofoliumból és Commophora myrrhából készített kivonatok.
A találmány szerinti gyógyszer nagyon látványos, nem várt, meglepően jó és egyenletes eredményeket szolgáltat. A vizsgálatok a mikrobicid oldatot (a gyógyszert) különlegesen hasznosnak mutatják: a HlV-fertőzések kontrollálásához, a HIV-vírusnak a célsejtekre irányuló támadásai gátlására, preventív mikrobicidként, a HÍV és más kórok lappangási idejének megnyújtására és a HÍV és más vírusok erőteljes visszafojtásában, miközben általánosan veszélytelen mind a beteg, mind a környezet számára.
A találmány részletesebb ismertetését tartalmazza a következő leírás és a hozzá csatlakozó igénypontok.
Az előnyös kiviteli alakok részletes ismertetése
Egy mikrobicid került kifejlesztésre a humán immundeficiencia vírus vagy HÍV gátlására. A mikrobicid és a kezelés - előnyösen - teljesen gátolja a HIV-et, és ugyanúgy más, fertőző mikrobás kórokat, ugyanakkor emberre, állatra és környezetre nézve biztonságos és nem toxikus módon.
A HÍV mikrobicid és gyógyszer tartalmaz egy felületaktív anyagot és egy gyógynövényt, amely biztosítja a növényi kivonatot, fitokemikáliát, antimikrobás izolátumot, antivirális izolátumot, mikroba inhibitort és vírus inhibitort. Az előnyös mikrobicid készítmény tartalmaz felületaktív anyagot, vizes hígítószert, tápanyagot és az Asteracea családnak az Echinacea (E) nemzetségéhez tartozó gyógynövényeket, a következő fajtákat: purpurea, angustofolia, pallidae, vegetalis, atribactilust és ezek kultúrnövény-változatait, valamint a Commiphora nemzetséghez tartozó lágy szárú gyógynövényeket: Commiphora myrrha, Commiphora molmol, Commiphora erythraea fajtákat és ezek kultúrnövény-változatait. A lágy szárú gyógynövények - előnyösen - kivonatok és izolátumok, amelyek Commiphora és Echinacea fitokemikáliákat tartalmaznak, amelyek Commiphora myrrhából, Echinacea purpureából, Echinacea pallidae-ból és Echinacea angustofoliából extrahálhatók. A legjobb eredményeket szolgáltató gyógyászati készítmény összetétele: kationos felületaktív anyag, az Echinacea purpureából származó fitokemikáliák, és Commiphora myrrha, egy steril vizes hígító és folacin. A Commiphora myrrha aránya az Echinacea purpurea és Echinacea angustofoliához előnyösen 1:2 és 1:4 közötti.
A felületaktív anyag bizonyos mértékű sebtisztítást nyújt a sejtfelszínen, széles spektrumú antimikrobás hatással. Az ilyen természetű felületaktív anyagok 6-18 szénatomszámú kvaterner ammóniumsókat tartalmazhatnak. A kvaterner ammóniumsó, mint felületaktív anyag, alkil-dimetil-benzil-ammónium-halogenidek keveréke, amelyek lehetnek: benzalkónium-halogenid, benzalkónium-bromid, benzalkónium-klorid, és legelőnyösebben benzalkónium-klorid. A HIV-kezelés során alkalmazható 100%-os aktív vizes oldat, de koncentrátum is. Az oldat különböző koncentrációkban tartalmazhatja a felületaktív anyagokat, így 0,005-0,8 t% között, előnyösen 0,02-0,30 t% és még előnyösebben 0,02-0,261% között.
Az Echinacea növényben levő fitokemikáliák bizonyítottan hatékony aktivitásúak baktériumok, vírusok és néhány gomba ellen. A pontos hatásmechanizmus ismeretlen. Amikor a találmány szerinti mikrobicidet vizsgálták helyileg HÍV és HSV 1 & 2-re, az hatékonynak bizonyult a herpes simplex fertőzések kitöréseinek kezelésében. In vitro vizsgálatok során HIV-1 és HSV 1 & 2-vel szemben mutatott inhibitor aktivitást.
A fitokémiai koncentrátum készítmények a következő izolált összetevőket, növényi kivonatokat, mikrobiológiai inhibitorokat és antimikrobás izolátumokat tartalmazzák: poliszacharidok, echinacen, echinacein, echinakozid (koffeinsav-észter), echinolon, echinadiol, enzimek, glükuronsav, inuloid, pentadekadién, poliacetilénvegyületek, arabinogalaktán, ramnóz, PS I (egy 4-0metil-glükorono-arabinoxilan, Mr 35 kD) és PS II (egy savas ramnoarabinogalaktan, Mr450 kD), cinarin-(1,5di-0-koffeoil-kinasav), cikóriasav-(2,3-0-dikoffeoil-borkősav) és származékai, alkil-amidok, keto-alkinek és keto-alkének; kinonok; olajok, beleértve a borneol, bornil-acetát; pentadeka-8(z)-en-2-on, germakrén D; kariofillén, kariofillén-epoxid, antocianinok, pirrolizidin alkaloidok; lipofil amidok, izobutil-amidok; poliacetilének; myrrha gumi gyanta; kurzerenon (furahoeudesmane típus); dihidrofuranodien-6-on; 2-metoxi-furanodien (furanoelemene típus); elamol; lyndestyrene (furanogermacrane típus); alkil-amidok, apigenin, arabinogalakta, aszkorbinsav, behenia-sav-etil-sav, bétáin, borneol,
HU 226 910 Β1 bornil-acetát, koffeinsav, 2-0-koffeoil-3-(5-alfa-karboxibeta), 3,4-dihidroxi-fenil, 2-0-koffeoil-3-0-kumaroil-borkősav, 6-0-koffeoil-echinakozid, 2-0-koffeoil-3-0-feruloyl-borkősav, 2-0-koffeoil-borkősav, kalcium, karbonát, béta-karotin, karofillén, karofillén-epoxid, -klorid, klorogén sav, cikóriasav, cikóriasav-metil-észter, kobalt, cianadin-3-0-(béta-d-glükopiranozid), cinadin-3(6-0-malonil-béta-d-glükopiranozid), cinarin, deka(2e,4e,6e)-trienoiksav-izobutil-amid, desramnosilverbascosid, 3,5-dikoffeoil-kinasav, 4—5-0-dikoffeoil-kinasav, 2,3-0-diferulol-borkősav, dodeka-(2e,4e)-dienoiksav-izobutil-amid, dodeka-2,4-dien-1-yl-izovalerát, dodeka-(2e,6z,8e,10e)-tetraénsav-izobutil-amid, epishobunol, béta-farnesen, 2-0-feruloy-borkősav, germakrén, heptadeka-(8z,11z)-dien-2-on, heteroxilan, humulene-8-12(e)-10-h id roxi-4,10-dimetil-4,11 -dodekadien2-on, 13-hidroxi-oktadeka-(9z,11e,15z)-triénsav, inulin, vas, izoklorogén sav, izoramnetin-3-rutinozid, izotussilagine, kaempferol, kaempferol-3-glukozid, kaempferol-3-nutinozid, limonen, luteolin, luteolin-7-glukozid, magnézium, mangán, 2-metil-tetradeka-5,12-dién, 2-metil-tetradeka-6,12-dién, metil-p-hidroxi-cinnamát, marcene, niacin, palmitinsav, pentadeka-(8z,11z)dien2-on, pentadeka-(8z,13z)-dien-11-lyn-2-on, pentadeka8-en-2-on, pentadeka-(8z)-en-2-on, pentadeka-(8z)en-11,13-dien-2-on, 1-pentadecen, penta-(1,8z)-dien, foszfor, alfa-pinen, béta-pinen, poliacetilének, pontikaepoxid, kálium, fehérje, querce-tagetin-7-glukozid, quercetin, quercetin-3-galaktozid, quercetin-3-glukozid, quercetin-3-robinozid, quercetin-3-xilozid, quercetin-3xilozil-galaktozid, ramnoarabinogalaktan, riboflavin, rutin, rutozid, szelén, szilikát, béta-szitoszterin, szitosztehn-3-béta-O-glukozid, nátrium, stigmasterol, szulfát, borkösav, tetradeka-(8z)-en-11,13-dien-2-on, thiamin, n-triacontanol, trideka-1-en-3,5,7,9,10-pentayne, tussilagine, vanallin, verbaszkozid, sequiterpének, ecetsav, alfa-amyrone, arabinoz, alfa-bisabolene, gamma-bisabolene, cadinen, campesterol, koleszterin, fahéjaldehid, commiferin, alfa-commiphora sav, béta-commiphora sav, gamma-commiphora sav, commiphorin sav, m-krezol, köményalkohol, köményaldehid, dipentene, elemol, 3-epi-alfa-amyrin, eugenol, furanodiene, furanodienone, galaktóz, gumi, heerabolene, alfa-heerabomyrrhol, béta-heerabomyrrhol, heeraborense, limonene, 4-0-metil-glükuronsav, n-nonacesane, béta-szitoszterin, xilóz, caropylenes (karofillének), myrrha gumi gyanta, kurzenon, dihidrofuranodien-6-on és 2-metoxifurandien.
A legjobb eredmények elérésére a fitokémiai koncentrátumok antimikrobás izolátumai tömegarányban (a találmány szerinti gyógyászati kompozíció teljes tömegére vonatkoztatva) az alábbiakat tartalmazzák: 0,3-9 t% echinacoside; 1-7 t%, PS I (a 4-0-metilglükurono-arabinoxilan, Mr 35 kD) és PS II (savas ramnoarabinogalaktan, Mr450 kD); 0,1-10 t% cinarin (1,5dikoffeoil-kinasav) és cikóriasav (2,3-0-dikoffeoil-borkősav) és származékai; 0,2-4 t% echinolon; 0,2-8 t% echinacin B; 0,1-6 t% echinaceine; 0,2-7 t%-nyi, cyanidin-3-0-p-D-glukopiranozidot és 3-0-(6-0-malonilβ-D glukopiranozid)-ot tartalmazó antocianinek;
0,01-0,6 t%-nyi, tusszilagint és izotusszilagint tartalmazó pyrrolizidine alkaloidok; 0,003-0,009 t% izomerdodeka-izobutil-amidok és 2E, 4E, 8Z, 10E/Z-tetraénsav; 0,01-2 t% caryopylenes; valamint Commophora myrrha fitokemikáliákat, amelyek a következőket tartalmazzák: myrrha gumi gyanta, kurzenon, dihidrofuanodien-6-on, 2-metoxi-furandiene, lynderstyren (lindestrene) sequiterpének, ecetsav, alfa-amyrone, arabinóz, alfa-bisabolen, gamma-bisabolen, cadinen, campesterol, koleszterin, fahéjaldehid, commiferin, alfa-commiphora sav, béta-commiphora sav, gamma-commiphora sav, commiphora sav, m-krezol, köményalkohol, köményaldehid, dipentene, elemol, 3-epi-alfa-amyrin, eugenol, furanodiene, furanodienone, galaktóz, gumi, heerabolene, alfa-heerabomyrrhol, béta-heerabomyrrhol, heeraborense, limonene, 4-0-metil-glukuronsav, n-nonacesane, béta-szitoszterin, xilóz, caropylenes (carophylenes) és lynderstyrene (lindestyrene).
A fitokémiai koncentrátum 2-90 tömeg%, előnyösen legalább 15 tömeg% gyógyászati kompozíciót és oldatot tartalmaz; a legjobb eredmények eléréséért 40-60 tömeg% gyógyászati kompozíciót és oldatot tartalmaz.
A hígító feloldja a benzalkónium-kloridot (a felületaktív anyagot) és a fitokémiai koncentrátumokat, és vivőanyagként hat a spray-kben, tubusos és cseppentős üveges készítményekben. Előnyös a vizes hígító, és legelőnyösebb a steril vizes hígító. A vizes oldatban a víz és benzalkónium-klorid aránya 30 000:1 és 250:1 között lehet, előnyösen 5000:1 és 750:1 közötti. A víznek és a benzalkónium-kloridból és fitokemikáliákból álló kombinált koncentrátumoknak az aránya 2:1 és 100:1 között lehet, előnyösen 4:1 és 40:1 közötti, és a legjobb eredmények eléréséért 6:1 és 20:1 közötti.
A herpeszre a legjobb eredményeket mutató mikrobicid készítmény (mikrobicid) összetétele: 0,02-0,301% benzalkónium-klorid, a toxikusság elkerüléséért előnyösen kevesebb mint 0,26 t%; 40-60 t% Echinacea és Commophora fitokemikáliák; 0,01-25 t%, legelőnyösebben 2-12 t% tápanyag; és 20-601%, legelőnyösebben 29,74-59,8 t% steril víz. Kívánatos, hogy a gyógyszer (mikrobicid) tartalmazzon vitamin tápanyagot, amely mintegy tápanyag-vivőanyagként szolgál, és a Commophora myrrhával, Echinacea purpureával és Echinacea angustofoliával kombinálva szinergens hatást mutat. A tápanyag tartalmazhat a következő vitaminokból egyet vagy többet: A-vitamin, B-vitamin komplex, D-vitamin, E-vitamin, K-vitamin, vízoldható vitamin, zsíroldható vitamin, B1-vitamin, B2-vitamin, B5-vitamin, B6-vitamin, B12-vitamin, B15-vitamin, és előnyösen fölad n és folsav.
Bár a víz az előnyös hígító és vizes vivőanyag, bizonyos körülmények között előnyös lehet más vivőanyagok alkalmazása ahhoz, hogy injekciós fecskendőn vagy permetezőn átjuttatható koncentrációt, vagy nagyobb oldékonyságot és hatékonyságot lehessen elérni. Bizonyos esetekben kívánatos lehet viszkozitást szabályozó ágens hozzáadása is. Továbbá, mivel a kifejlesztett gyógyszer eltarthatósága két évre becsülhető, szükséges lehet megfelelő konzerválószer hozzáadása.
HU 226 910 Β1
Mint HÍV elleni megelőző mikrobicidet, a gyógyszeroldatot (gyógyszert) az előnyös alkalmazás érdekében rendszeresen, vaginálisan vagy rektálisan kell alkalmazni. A gyógyszer alkalmazási módja lehet injektálás, spray-vel befúvás, felkenés, csepegtetés vagy más módszerek. Az alkalmazásnak, illetve az oldat (gyógyszer) bevonatának tartani kell a coitus idején. Anionos szappanok, anionos detergensek, és különösen a fehérjetartalmú szappanok kontraindikáltak lehetnek. Előnyösen, a gyógyszer alkalmazását megelőzően, az alkalmazás területét le kell mosni, tisztítani és megszárítani. HÍV antivirális kezelésként a gyógyszer alkalmazható úgy, hogy a kezelési dózist injektálva vagy más módszerekkel a rektumba vagy vaginába juttatják.
Benzalkónium-klorid
A benzalkónium-klorid előnyös felületaktív anyag. A benzalkónium-klorid vizes oldatként a kereskedelemben Zephiran® márkanéven és védjeggyel kapható, a Sanofi-Winthrop Pharmaceuticals (korábban Winthop Labs) forgalmazza. A benzalkónium-klorid gyorsan ható, mérsékelten hosszú hatástartamú antiinfektív felületaktív anyag. A felületaktív anyag baktériumok, néhány vírus, gomba és protozoa ellen hatékony. A baktériumspórák rezisztensnek minősülnek. A benzalkónium-klorid oldatai a koncentrációnak megfelelően bakteriosztatikusak vagy baktericidek. A benzalkónium-klorid konkrét bakteriális hatásmechanizmusa ismeretlen, de az enzim inaktiválás következményének gondolják. A benzalkónium-klorid aktivitása a hőmérséklet és a pH növekedésével általában nő. A Grampozitív baktériumok a benzalkónium-kloridra érzékenyebbek, mint a Gram-negatív baktériumok.
Sajnos a benzalkónium-kloridot a szappanok, anionos detergensek, vérsavó és bizonyos fehérjék inaktiválják. A fentiek miatt a benzalkónium-kloridot sok laboratóriumban mellőzik. A benzalkónium-kloridot egyedül és helyileg in vivő tesztelve a herpes simplex vírus fertőzés kitörésére hatástalannak bizonyult. A benzalkónium-kloridot in vitro HIV-en és HSV 1 & 2-n vizsgálva még nagy hígításokban is gyógyászatilag elfogadhatatlan, nemkívánatos magas sejttoxicitási szintet mutatott. A benzalkónium-klorid kémiai képlete az alábbiakban látható. A benzalkónium-klorid más típusai is használhatók.
Benzalkónium-klorid
Cl’ CH3 ch3
Fitokemikáliák
Míg a nyers, kezeletlen, feldolgozatlan, izolálatlan Echinacea általában kerülendő a HÍV és a herpesz intramurális kezelése során, a megfelelő szűréssel az intramurális kezelés is megvalósítható. Lényeges, úgy tűnik, hogy néhány, de nem az összes Echinaceából és Commiphorából izolált komponens és növényi kivonat (a korábban leírtak) olyan fitokemikáliát, antimikrobás izolátumot, növényi kivonatot és mikrobicid inhibitort szolgáltat, amelyek olyan antimikrobás aktivitást mutatnak, mely hatásosnak látszik a HÍV, a herpeszvírus és más fertőző kórok elleni kezelésben.
Amint az előzőekben megállapítottuk, a fitokémiai koncentrátum készítmények a következő izolált összetevőket, növényi kivonatokat, mikrobiológiai inhibitorokat és antimikrobás izolátumokat tartalmazzák: poliszacharidok, echinacen, echinacein, echinacoside (koffeinsav-észter), echinolone, echinadiol, enzimek, glükuronsav, inuloid, pentadekadién, poliacetilénvegyületek, arabinogalaktan, ramnóz, PS I (egy 4-0-metilglükurono-arabinoxilan, Mr 35 kD) és PS II (egy savas ramnoarabinogalaktan, Mr 450 kD), cynarin-(1,5-di-0koffeoil-kinasav), cikóriasav-(2,3-0-dikoffeoil-borkősav) és származékai, alkil-amidok, keto-alkinek és keto-alkének; kinonok; olajok, beleértve a borneol, bornil-acetát; pentadeka-8(z)-en-2-on, germacrene D; caryophyllene, caryophyllene epoxid, antocianinok, pyrrolizidine alkaloidok; lipofil amidok, izobutil-amidok; poliacetilének; myrrha gumi gyanta: curzerenone (furahoeudesmane típus); dihidrofuranodien-6-on; 2-metoxi-furanodien (furanoelemene típus); elamol; lyndestyrene (furanogermacrane típus); alkil-amidok, apigenin, arabinogalakta, aszkorbinsav, behenia-sav-etil-sav, bétáin, borneol, bornilacetát, koffeinsav, 2-0-koffeoil-3-(5-alfa-karboxi-beta), 3,4-dihidroxi-fenil, 2-0-koffeoil-3-0-kumaroil-borkősav, 6-0-koffeoil-echinacoside, 2-0-koffeoil-3-0-feruloy-borkősav, 2-0-koffeoil-borkősav, kalcium, karbonát, bétakarotin, carophyllene, carophyllene-epoxid, -klorid, klorogenic-sav, cikóriasav, cikóriasav-metil-észter, kobalt, cyanadin-3-0-(béta-d-glycopyranoside), cynadin-3-(6-0malonyl-béta-d-glycopyranoside), cynarin, deka(2e,4e,6e)-trienoic-sav-izobutil-amid, des-ramno-sylverbascoside, 3,5-dikoffeoil-kinasav, 4—5-0-dikoffeoil-kinasav, 2,3-0-diferulol-borkősav, dodeka-(2e,4e)-dienoicsav-izobutil-amid, dodeka-2,4-dien-1-yl-izovalerát, dodeka-(2e,6z,8e,10e)-tetraenoic-sav-izobutil-amid, epishobunol, béta-farnesene, 2-0-feruloy-borkősav, germacrene, heptadeka-(8z,11z)-dien-2-on, heteroxilan, humulene-8-12(e)-10-hid roxi-4,10-d i meti I-4,11 -dodekadien-2-on, 13-hidroxi-oktadeka-(9z,11 e, 15z)-trienoicsav, inulin, vas, izoklorogen-sav, izoramnetin-3-rutinoside, izotussilagine, kaempferol, kaempferol-3-glukozid, kaempferol-3-nutinoside, lomonene, luteolin, luteolin-7glukozid, magnézium, mangán, 2-metil-tetradeka-5,12dién, 2-metil-tetradeka-6,12-dién, metil-p-hidroxicinnamát, marcene, niacin, palmitinsav, pentadeka(8z,11z)-dien-2-on, pentadeka-(8z,13z)-dien-11-lyn2-on, pentadeka-8-en-2-on, pentadeka-(8z)-en-2-on, pentadeka-(8z)-en-11,13-dien-2-on, 1 -pentadecen, penta-(1,8z)-dien, foszfor, alfa-pinen, béta-pinen, poliacetilének, pontica-epoxide, kálium, fehérje, quercetagetin-7-glukozid, quercetin, quercetin-3-galaktozid, quercetin-3-glukozid, quercetin-3-robinozid, quercetin9
HU 226 910 Β1
3-xilozid, quercetin-3-xylosyl-galaktozid, ramnoarabinogalaktan, riboflavin, rutin, rutozid, szelén, szilikát, bétaszitoszterin, szitoszterin-3-béta-0-glukozid, nátrium, stigmaszterol, szulfát, borkősav, tetradeka-(8z)en-11,13-dien-2-on, thiamin, n-triacontanol, trideka-1en-3,5,7,9,10-pentayne, tussilagine, vanallin, verbaszkozid, sequiterpének, ecetsav, alfa-amyrone, arabinóz, alfa-bisabolene, gamma-bisabolene, cadinene, campesterol, koleszterin, fahéjaldehid, commiferin, alfacommiphora sav, béta-commiphora sav, gamma-commiphora sav, commiphorin sav, m-krezol, köményalkohol, köményaldehid, dipentén, elemol, 3-epi-alfa-amyrin, eugenol, furanodiene, furanodienone, galaktóz, gumi, heerabolene, alfa heerabomyrrhol, béta-heerabomyrrhol, heeraborense, limonene, 4-0-metil-glükuronsav, n-nonacesane, béta-szitoszterin, xilóz, caropylenes (carophylenes), myrrha gumi gyanta, curzenone, dihidrofuranodien-6-on, 2-metoxi-furandiene és lyndersyrene (lindestyrene).
Az Echinacea néhány növényi kivonatának szerkezeti képlete az alábbi:
A Commiphora néhány növényi kivonatának szerkezeti képlete az alábbi:
(Furahoeudesmane típus)
4,5-Dihidrofuranodien-6-on (Furanoelemene típus)
Lindestrene (Furanogermacrane típus)
Cikóriasav
A myrrhát néha a következőknek is referálják: mirrh, myrrhis, gummi myrrha, myrrha vera, gum myrrha, Commiphora gyanta, gruggal gumi, gruggal gyanta, Heerabol myrrh, mirrhe, Manniliche mirrhe, Opopanax és Hirabol mirrh. A myrrha tartalmazhat a Commiphora myrrha nemzetséghez tartozó fák, azaz a myrrha fa kérgének bevágásakor nyerhető gumigyantát. A myrrha tartalmazhat még a Balsamodendron myrrhából, úgymint az Arabian myrtle, egy buraceous fából nyert balzsamlét is. A myrrha extrahálható az Osmorhizából vagy Washingtoniából is, amit néha spa10
HU 226 910 Β1 nyol turbolyának is referálnak. A myrrha fa Eritreában, Abesszíniában, Szomáliában, Jemenben, Szudánban és máshol is őshonos.
A myrrhatermelő Commiphora fajok cserjék vagy kis fák, nagy, határozottan hegyes tövisekkel a törzsükön. Az egyenlőtlen, hármasával álló levelek megváltoznak, és a kis virágok szélső füzérekben helyezkednek el. Amikor a gyantajárat megsérül, kiszivárog a myrrha drog.
A myrrha levegőn száradó, oleogumi gyanta, ami a Commiphora fajok kérgéből származik. Az anyag szabálytalan, változatos méretű, üreges, kerek szemcséket vagy rögöket tartalmaz, amelyek változatos színűek, a sötétbarnától és majdnem feketétől a világos vagy sötét narancs-barnáig, néhány részecske lehet sárga, vagy sárgától a halványsárgáig. A felületet többnyire szürkétől a sárgásszürkéig színű por borítja, a törési felülete kagyló alakú, és vékony, átlátszó töretdarabokat ad. A myrrhának lehet édes, kellemes illata és fanyar, aromás íze. A myrrha lehet csípős ízű, és rágásakor hozzátapadhat a fogakhoz.
A Commiphora molmol és más Commiphora fajok, valamint a myrrha DAB 10 gumi gyantáik összetételét tekintve hasonlóak. Az irodalomban meglehetős zűrzavar van a myrrha eredete és a különféle Commiphora fajok azonosítása tekintetében. Úgy tűnik, hogy a közönséges (vagy hirabol) myrrha a Commiphora myrrhából származik. A Szomáliái myrrhet a Commiphora molmolból származónak mondják. Mindazonáltal a Commiphora myrrha és a Commiphora molmol közötti rendszertani összefüggés nem tisztázott. Az abesszin myrrha eredete a Commiphora madagascariensis vagy a Commiphora abyssinica. Az Opopanax, amelyet ugyancsak bisabol mirrhnek vagy illatos bdelliumnak referálnak, vélhetően a Commiphora erythraea-ból (Ehrenb) vagy Opopanaxból származik.
A myrrha összetétele nagyon bonyolult és csak részben ismert, a myrrha 40-60%-a etanolban oldható, és egy gyantát, valamint egy illóolajat tartalmaz. A myrrha csaknem teljesen sesquiterpenekből áll. A sesquiterpenek fő komponensei: a germacrane elemane, eudesmane és guaiane típusú furanosesquiterpenek. Továbbá tartalmaz sesquiterpen-szénhidrogéneket, ezek például a β- és δ-elemene, β-bourbonene, β-caryophyllene, humulene és sesquiterpen-alkoholok, például elemol. A gyógyászati myrrhára feltehetően néhány sesquiterpen jellemző. A nyers myrrhagumi vagy ragasztó 20% proteint, 65%-ban szénhidrátokat, amelyek galaktózból, 4-0-metil-glukuronsavból és arabinózból tevődnek össze. A Commophora myrrha fitokemikáliák a következőket tartalmazzák: ecetsav, alfa-amyrone, alfa-bisabolene, gamma-bisabolene, cadinene, campesterol, koleszterin, cynnamaldehyde, commiferin, alfa-commiphora sav, béta-commiphora sav, gamma-commiphora sav, commiphorin sav, m-krezol, köményalkohol, köményaldehid, dipentén, elemol, 3-epialfa-amyrin, eugenol, furanodiene, furanodienone, galaktóz, gumi, heerabolene, alfa-heerabomyrrhol, bétaheerabomyrrhol, heeraborense, limonene, 4-0-metilglukuronsav, n-nonacesane, béta-szitoszterin, xilóz, caropylenes (carophylenes), myrrha gumi gyanta, curzenone, dihidrofuanodien-6-on, 2-methoxi-furandiene és lynderstyrene (lyndestyrene).
A myrrhaoldatnak lehet lázcsillapító hatása. Makro- és mikroszkopikusan a myrrha előfordulhat barnássárga porként, és a finoman szemcsézett anyagon jellemzően sárga szálkákkal vagy különféle méretű térbeli szemcsékkel, amelyek vízben megduzzadnak. Klorál-hidrát-keretekben a növényforrásnak csak néhány szövettöredéke van: vörösesbarna parafa töredékek, egyedüli vagy csoportos, soklapútól a téglalap alapú oszlopszerű sejtekkel, részben összepréselt üreges fás szerkezetű falakkal és barnás béltartalommal; vékonyfalú parenchyma töredékek és sclerenchyma szálak, valamint 10-15 pm-es kalcium-oxalát-kristályok, szabálytalan hasáb alakútól a soklapúig.
A myrrhát jól zárt konténerekben, fénytől és nedvességtől védve, lehetőleg nedvszívó anyaggal együtt kell tárolni, mivel a drog szénhidrátrésze könnyen abszorbeál vizet. A myrrhát lehetőleg nem porított formájában kell tárolni.
Folsav
A legjobb eredmények eléréséhez a folsav előnyös tápanyag. A folsav, amelyet említenek még mintfolacin, pteroil-glutaminsav, foldin, folaemin, foliamin, folicet, folipac, folettes, folsan, folvite, incafolic, millafol vagy cytofol, a sejtnövekedéshez és reprodukcióhoz nélkülözhetelen B komplex csoportnak egy sárga, kristályos vízoldható vitaminja. A proteinek lebontásában és hasznosításában, a hemoglobinban levő nukleinsavak és a hem kialakításában a folsav a B12-vitaminnal és a C-vitaminnal koenzimként működik. A folsav az étvágyat is növeli, és stimulálja az emésztőtraktusban a sósavtermelést. A folsav a májban raktározódik, és a gastrointestinális traktus baktériumflórája szintetizálhatja. A folsav hiánya visszamaradó növekedést, hajőszülést, glossitist, stomatitist, gastrointestinális zavarokat és hasmenést okozhat, valamint megaloblastos anémiához vezethet. Hiányát a vitaminfelvétel szempontjából nem megfelelő étrend, felszívódási zavar vagy anyagcsere-rendellenesség okozhatja. Fokozott a folsavigény terhesség idején, csecsemőkorban és stressznél. A folsav fény- és hőérzékeny, hosszú tárolás során jelentős vitaminvesztés következik be. A folsav nem toxikus, és különféle hiányállapotok kezelésében hatékony. A folsav kémiai képlete az alábbi:
I
COOH
Folsav (pteroil-glutaminsav)
HU 226 910 Β1
A folsav szerkezetét az alábbiakban mutatjuk be:
2-amino-4-hidroxi-6-metil-pteridin p-amino-benzoesav glutaminsav
OH
N
I
H..N-C
CH.,—N
O
I! Η H
C—N—C—CH..—CH.,—COOH
COOH
Pteroic-sav
Pteroil-glutaminsav (folsav)
A folsavmolekula glutaminsavat, p-amino-benzoesavat és pterint tartalmaz; a pterin és a p-amino-benzoesav kombinációját pterocid-savnak nevezik. A bemutatott szerkezet a májban levő pteroil-glutaminsav. A baktériumok által termelt folsav három, γ-glutamilkötéssel összekapcsolt glutaminsavegységet tartalmaz. Sok állati szövet tartalmaz pteroil-glutaminsavat, a glutaminsavegységek ugyancsak γ-glutamilkötéssel kapcsolódnak. A szintetikus pteroil-glutaminsavak, amePteroil lyekben a glutaminsavmolekulák glutamilkötésekkel kapcsolódnak, bakteriális növekedési tesztekben aktí20 vak; a pteroil-y-glutaminsavak mind baktériumokra, mind az emberi macrocytes anémia kezelésében hatékonyak. Az állati szövetek egy enzime a természetesen előforduló pteroil-glutamát-vegyületeket pteroil-monoglutaminsavvá és szabad glutaminsavvá hidrolizálja.
A pteroil-glutaminsav (PteGlu^ másik szerkezeti képlete az alábbi:
Monoheptaglutamát
A pteroil-glutaminsav (folsav) szerkezete és nómenklatúrája
Helyzet Gyök Származék
N5 -ch3 CH3H4PteGlu metil-tetrahidrofolát
N5 -CHO 5.CHOH4 PteGlu folinsav (Citrovorum factor)
NW -CHO 10.CHOH4 PteGlu 10-formil-tetrahidrofolát
|\|5-10 -CH- 5,10.CHH4 PteGlu 5,10-metenil-tetrahidrofolát
N5-10 -ch2- 5,10.CH2H4 PteGlu 5,1O-metilén-tetrahidrofolát
N5 -CHNH CHNHH4PteGlu forrni mi no-tetrah id rofolát
N10 -CH2OH CH2OHH4PteGlu hidroxi-metil-tetrahidrofolát
A folsavmolekula fő része egy metilénhíddal paraamino-benzoesavhoz kapcsolódó pteridingyűrű, amely amidkötéssel glutaminsavhoz csatlakozik. Habár a pteroil-glutaminsav a folsav megszokott gyógyszerformája, ez mégsem a legfontosabb folátszármazék a táplálékban, és nem is a sejten belüli anyagcsere aktív koenzime. Az abszorpciót követően a PteGlug az 5, 6, 7 és 8 helyzetekben gyorsan redukálódik, tetrahidrofol55 savvá (H4PteGlu1), amely azután számos egy szénatomos egység akceptoraként működik. Ezek vagy a pteridingyűrű 5-ös vagy 10-es helyzetében csatlakoznak, vagy egy új öttagú gyűrű kialakítása érdekében hidat képeznek ezen atomok között.
A B12 -vitamin és a folsav nélkülözhetetlenek az emberi étrendben. A kettő közül bármelyik vitamin hiánya bármely, a kromoszóma replikációval vagy megosztás12
HU 226 910 Β1 sál próbálkozó sejtben a DNS hibás szintézisét eredményezi. Mivel a legnagyobb sejtátalakulási sebességű szövetek mutatják a legdrámaibb változásokat, a hematopoietikus rendszer különösen érzékeny ezen vitaminok hiányára. Klinikailag a legkorábbi jele a hiánynak a megaloblastos anémia, amelynél a DNS-szintézisben bekövetkezett működési zavar a csontvelőben levő prekurzorsejtek jellegzetes morfológiai abnormitását eredményezi. Abnormális makrocitás vörösvérsejtek termelődnek, és a beteg vészesen anémiás lesz.
A metil-kobalamin segíti a metionin-szintetáz reakciót, ami nélkülözhetetlen a normál folátanyagcseréhez. A metil-tetrahidrofolátból (CH3H4PteGlu1) származó metilcsoportok alkalmasak a metil-kobal-amin kialakítására, amely azután metilcsoport donorként működik a homociszteinnek metioninná történő konverziójában. Ez a folát-kobalamin kölcsönhatás a purinok és pirimidinek, és ezért a DNS normális szintézisének a kulcsa. A metionin-szintetáz reakció nagyban felelős a folát kofaktorok újratermelésének szabályozásáért, a folil-poliglutamátok intracelluláris koncentrációinak fenn20 tartásáért; és így a metioninnak és S-adenozil-metionin származékának szintézisén keresztül számos metilálási reakció fenntartásának kontrolijáért. Mivel a metil-tetrahidrofolát a sejtek ellátásához a fő folátszármazék, a metilcsoportok átvitele a kobal-aminra nélkülözhetetlen a megfelelő tetrahidrofolát- (H4PteGlu1) ellátáshoz, mely utóbbi számos anyagcserelépés szubsztrátja. A tetrahidrofolát az intracelluláris folil-poliglutamátok képződésének prekurzora; a szerinből glicin konverzió során egy egy szénatomos egység akceptoraként is hat, és végül 5,10-metilén-tetrahidrofoláttá (5,10-CH2H4PteGlu) alakul. Ez utóbbi származék szolgáltatja a metiléncsoportot a timidilátszintézisnél, a DNS-szintézis egy különösen fontos reakciójánél, a deoxiuridilezéshez. Az eljárásban az 5,10-CH2H4PteGlu átalakul dihidrofoláttá (H2PteGlu). A ciklus azután a H2PteGlu-nak dihidrofolát-reduktázzal H4PteGlu-ná történő redukciójával fejeződik be, amely lépést a folát antagonisták, mint például a methotrexate blokkolják. Az 5,10-metilén-tetrahidrofolát szintéziséhez más reakcióút is vezet.
A) táblázat A folsav bioszintézise
A folsav bioszintézise az alábbi. A PPP szimbólum jelentése trifoszfát.
OH
.NH, ‘NH
Dihidro-neopterin trifoszfát , (IV)
CH,—C—CH—CH—CH-OPP? ii Γ . i O OH OH
2-amino-4-hidroxi-6-hidroximetildihidro-pteridin (V)
HU 226 910 Β1
Dihidro-pteroic-sav (VII)
A folát CH3H4PteG1-ként juthat a szövetekhez. A máj hatékonyan csökkenti és metilálja a PteGlu-|-et (és H2 vagy H4 PteGluret), majd a CH3H4PteGlu1-et az epébe juttatja, hogy a bélben reabszorbeálódjon, majd azt követően a szövetekben felszabaduljon. A CH3H4PteGlu a metil-kobal-amin kialakulásában metildonorként, a H4PteGlu és más folátvegyületek forrásaként működik, ahogyan azt már az előzőekben leírtuk. A folát a sejtekben, poliglutamátokként raktározódik.
Felületaktív anyagok
Bár a legjobb eredmények eléréséhez a benzalkónium-klorid az előnyös felületaktív anyag, bizonyos körülmények között szükséges lehet más kvaterner ammóniumvegyület vagy egyéb felületaktív anyag alkalmazása.
A kvaterner ammóniumvegyület lehet dikoko-dimonium-klorid, amely dikoko-alkil-dimetil-kloridokként vagy dikoko-dimetil-ammónium-kloridként vagy DÍ-C8-18-alkil-dimetil-kloridokként is ismert. Ez alkalmazható izopropanollal, például 20-30% izopropanollal kombinálva. Az előnyös kvaterner vegyület forrás: 70-80% kvaterner ammóniumvegyületet és kevesebb mint 0,03% metil-kloridot tartalmaz, fajsúlya 46 °C-on (=115 F) körülbelül 0,87, gőznyomása 20 °C-on (=68F) 33 Hgmm, kezdeti forráspontja 760 Hgmm-nél 82 °C (=180 F), illékonysága 20-30%, és CarSpray 300 márkanéven a Witco Corporation, Dublin, Ohio, USA gyártmánya. A kvaterner ammóniumvegyület fertőtlenítő hatást nyújthat, és fungicidként szolgál gombás és élesztőgombás fertőzések kezelése során.
Más kvaterner ammóniumvegyületek is alkalmazhatóak, például a Jet Quat 2C-75 márkanéven gyártott Jetco Chemicals, Inc. of Corsicana, Texas, USA termék, vagy a CarSpray 400 és Carnauba Spray 200 márkaneveken a Witco Corporation, Dublin, Ohio, USA által gyártott termékek, vagy a 9% denaturált etilalkohol-tartalmú, BTC 2125M márkanéven a Stephan Company, Northfield, Illinois, USA által forgalmazott, vagy a következő n-alkil-dimetil-benzil-ammóniumklorid-tartalmú és a Mason Chemical Company, Arlington Heights, Illinois, USA által gyártott MAQUAT termékek, LC-12S (67% C12, 25% C14, 7% C16, 1% C18),
MC1416 (5% C12, 60% C14, 30% C16, 5% C18), MC1412 (40% C12, 50% C14, 10% C16), SC-18 sztearil-paszta vagy -pehely (5% C16, 95% C18), TC-76 vagy MQ-2525 (5% C12, 60% C14, 30% C16 és 5% C18) és MC6025-50% (25% C12, 60% C14 és 15% C16). A Jet Quat 2C-75 összetétele: 50-75% dikoko-dimetil-kvaterner-ammónium-klorid, 20-50% izopropil-alkohol, fajsúlya 0,88 és forráspontja 82 °C. A CarSpray 400 összetétele: 55-65% kvaterner ammóniumvegyületek, 20-30% aminok, C14-18 és C16-18 szénláncú telítetlen alkil, etoxilált alkillánc, 10-20% izopropanol, és kevesebb mint 0,03% metilklorid, fajsúlya 24 °C-on (=75 F) közelítőleg 0,88, gőznyomása 20 °C-on (=68 F) 33 Hgmm, kezdeti forráspontja 760 Hgmm-nél 82 C (=180 F)-fok és illékonysága 10-20%. A Carnauba Spray 200 összetétele: 50-60% kvaterner ammóniumvegyületek, 10-20% izopropanol, 15-25% víz, 1-10% alkilezett karnaubaviasz és kevesebb mint 0,03% metil-klorid, fajsúlya 27 °C-on (=80 F) közelítőleg 0,90, gőznyomása 20 °C-on (=68 F) 33 Hgmm, kezdeti forráspontja 760 Hgmm-nél 82 °C (=180 F) és illékonysága 20-40%.
A nemionos felületaktív anyagok vizes oldatban nem ionizálódó felületaktív anyagok. A bennük levő oxigénezett lánc [például poli(oxi-etilén)-lánc] következtében gyakran látszólag hidrofil jellegzetességekkel bírnak, a molekula liofil része zsírsavakból, fenolokból, alkoholokból, amidokból vagy aminokból származik. Ezt jól példázó vegyületek az alkil-fenolok poli(etilén-oxid)-kondenzátumai, például az egy molekula nonil-fenolból és tíz molekula etilén-oxidból képződött kondenzációs termék, és az alifás alkoholok és etilén-oxid kondenzációs termékei, például az 1 mól tridekanolból és 12 mól etilén-oxidból kialakult kondenzációs termék.
A nemionos felületaktív anyagok tartalmazhatják az etilén-oxid és egy alkil-fenol vagy egy alifás alkohol kondenzált termékét tartalmazó fenoletoxilátumokat. A nemionos felületaktív anyagok előnyösen tartalmazhatnak nonofenol-etoxilátot, például T-DET-et és/vagy oktafenol-etoxilátot. A nemionos felületaktív anyagok az etilén-oxid és a nonofenol és/vagy oktafenol reakciójának termékei. A fenol és az etilén-oxid aránya 2:20-tól 4:16-ig változhat, és előnyösen körülbelül 8:12.
HU 226 910 Β1
A nemionos szintetikus felületaktív anyagok tartalmazhatnak nemionos detergenseket. A nemionos szintetikus felületaktív anyagok képződhetnek az etilénoxidnak és egy propilén-oxid és propilénglikol kondenzációjából keletkezett hidrofób bázisnak a kondenzálásából is. A molekula hidrofób része, amely természetesen vízoldhatatlan, 1200 és 2500 közötti molekulatömegű. Ezen hidrofób részhez a poli(oxi-etilén)-gyökök hozzáadása hajlamos növelni a molekula egészének vízoldhatóságát, és a termék folyadék jellege megmaradhat azon a ponton, ahol a poli(oxi-etilén)-tartalom a kondenzációs termék teljes tömegének körülbelül 50%-a. Más, nemionos szintetikus felületaktív anyagok tartalmazhatják: alkil-fenolok poli(etilén-oxid)-kondenzátumait, például az alkil-fenoloknak vagy a dialkilfenoloknak - ahol az alkilcsoport akár nyílt láncú, akár elágazó láncú konfigurációban 6-12 szénatomot tartalmaz - etilén-oxiddal képzett kondenzációs termékeit. Az etilén-oxid 8-25 mól etilén-oxid per mól alkil-fenol mennyiségben lehet jelen. Az ilyen vegyületekben az alkilszubsztituens a polimerizált propilénből, diizobutilénből, n-okténből vagy n-nonénből származhat.
A nemionos felületaktív anyagok előállíthatok az etilén-oxidnak és a propilén-oxid és etilén-diamin reakciótermékének kondenzációjával is. Például 40-80 tömeg% poli(oxi-etilén)t tartalmazó és mintegy 5000 és mintegy 11 000 közötti molekulatömegű vegyületek állíthatók elő etilén-oxid-csoportoknak, valamint az etilén-diaminnak és feleslegben levő propilén-oxidnak a reakciótermékét tartalmazó hidrofób bázisok reakciójának eredményeképpen; a bázis molekulatömege nagyságrendben 2500 és 3000 közötti.
Az egyéb nemionos felületaktív anyagok közé tartoznak az akár egyenes láncú, akár elágazó lánckonfigurációjú, 8-18 szénatomos alifás alkoholoknak etilénoxiddal képzett kondenzációs termékei, például a kókuszdió-alkohol etilén-oxid-kondenzátuma 10-30 mól etilén-oxidot tartalmaz egy mól kókuszdió-alkoholra számítva, és a kókuszdió-alkohol-rész 10-14 szénatomos.
További nemionos felületaktív anyagok az R1R3R2N >0 általános képletnek megfelelő, hosszú szénláncú tercier amin-oxidok, ahol Rq jelentése 8-18 szénatomos alkilgyök, és R2 és R3 egyenként metil- vagy etilgyökök. A képletben a nyíl a szemipoláris kötés konvencionális jelölése. Felhasználásra alkalmas amin-oxidok például: a dimetil-dodecil-amin-oxid, dimetil-oktil-amin-oxid, dimetil-decil-amin-oxid, dimetiltetradecil-amin-oxid és a dimetil-hexadecil-amin-oxid.
További nemionos felületaktív anyagok lehetnek az RR'RP >0 általános képletnek megfelelő hosszú szénláncú tercier foszfin-oxidok, ahol R jelentése 10-18 szénatomos lánchosszúságú alkil-, alkenil-vagy monohidroxi-alkil-gyök, R’ és R” egyenként 1-3 szénatomos alkil- vagy monohidroxi-alkil-csoportok. A képletben a nyíl a szemipoláris kötés konvencionális jelölése. Alkalmas foszfin-oxidok példái: dimetil-dodecilfoszfin-oxid, dimetil-tetradecil-foszfin-oxid, etil-metiltetradecil-foszfin-oxid, cetil-dimetil-foszfin-oxid, dimetilsztearil-foszfin-oxid, cetil-etil-propil-foszfin-oxid, dietildodecil-foszfin-oxid, dietil-tetradecil-foszfin-oxid, dipropil-dodecil-foszfin-oxid, bisz(2-hidroxi-metil)-dodecilfoszfin-oxid, bisz(2-hidroxi)-dodecil-foszfin-oxid, (2-hidroxi-propil)-metil-tetradecil-foszfin-oxid, dimetil-oleilfoszfin-oxid és dimetil-(2-hidroxi-dodecil)-foszfin-oxid.
Bizonyos körülmények között előnyös lehet más felületaktív anyagok alkalmazása, úgymint: más kationos felületaktív anyag, amfolitikus felületaktív anyag vagy egy zwitterionos felületaktív anyag.
A kationos felületaktív anyagok lehetnek kationos detergensek. A kationos felületaktív anyagok olyan vegyületeket tartalmaznak, amelyek vizes közegben ionizálódnak, és liofil csoportot tartalmazó kationokat adnak. Ezen vegyületek közül tipikusak a kvatemer ammóniumsók, amelyek mintegy 12-18 szénatomos alkilcsoportot tartalmaznak, például a lauril-benzil-dimetil-ammónium-klorid.
Az amfolitikus felületaktív vegyületeknek ugyanazon molekulájában mind anionos, mind kationos csoportjaik vannak. Ilyen vegyületeket példáznak az alifás aminok olyan származékai, amelyek egy mintegy 8-18 szénatomos hosszú szénláncot és anionos vízoldható csoportot, például karboxi-szulfo-, szulfo- vagy szulfatocsoportot tartalmaznak. Az amfolitikus detergensek példái: nátrium-3-dodecil-amino-propánszulfonát, nátrium-N-metil-taurát és rokon vegyületek, úgymint a hosszabb alkil-diszubsztituált-aminosavak, betainok, thetinek, hosszú láncú szulfátéit olefin-aminok és a szulfátéit imidazolinszármazékok.
A zwitterionos felületaktív anyagok lehetnek szintetikus detergensek. A zwitterionos felületaktív anyagok általában alifás kvatemer ammóniumvegyületek származékai, amelyekben az alifás gyök lehet egyenes vagy elágazó láncú, és amelyekben az alifás szubsztituensek egyike mintegy 8-18 szénatomot tartalmaz, és egyike anionos, vízoldható csoportot, például karboxi-, szulfo- vagy szulfatocsoportot tartalmaz. Az ezen definíció alá eső vegyületeket példázzák: a 3-(N-N-dimetilN-hexadecil-ammonio)-propán-1-szulfonát és a 3-(N-N-dimetil-N-hexadecil-ammonio)-2-hidroxi-propán-1-szulfonát.
Klinikai farmakológia
Az Echinacea és a Commiphora fitokemikáliákat (antimikrobás izolátumok, növényi kivonatok és mikroba inhibitorok) összekeverve, kombinálva és együtt alkalmazva: felületaktív anyaggal, előnyösen benzalkónium-kloriddal; vivő tápanyaggal, előnyösen folsavval; és steril vizes vivőanyaggal; a HÍV és más fertőző kórok kezelése során az eredmények nem vártak és meglepően jók voltak, és a gyógyszer (mikrobicid) hatékonysága drámaian megnövekedett. In vitro teszt során e különleges összetétel váratlan és meglepően jó antivirális aktivitást mutatott a HÍV ellen, beleértve a HÍV célsejthez történő kapcsolódásának gátlását is. A szinergens gyógyszer helyi, in vivő tesztelése során a herpes simplex fertőzés azonnal megszűnt. A szinergens gyógyszer in vitro tesztelése során a benzalkónium-klorid felületaktív anyag lényegesen kevésbé volt toxikus, és a toxicitás a megengedett szinten belüli
HU 226 910 Β1 volt, és magasabb szintű inhibitor aktivitást mutatott a HÍV és a HSV 1 & 2 ellen. Az Echinacea és Commiphora fitokemikáliák, folsav és felületaktív anyag összekeverése és a bekövetkezett szinergens kölcsönhatás megfigyelhető és bizonyított volt, látva az elegyítés során az oldatban a komponensek gyors oldódását és a gyenge adhéziós képesség kialakulását. Továbbá az Echinacea és Commiphora fitokemikáliák, a felületaktív anyag, a tápanyaghordozó anyag (tápanyag) és a vizes vivőanyag kémiai tulajdonságai fokozott stabilitást és megnövekedett reaktivitást mutattak, ami hasznos a fertőző kórok kezelésénél.
A gyógyszer különféle hígításokban alkalmazható a különböző célokra: orális és nazális nyálkahártyára, vaginális szövetre, ajakszövetre, anális és perianális szövetre, penile szövetre, bőrszövetre, nyílt szubkután szövetre; és nagyobb hígításokban szemfertőzésekre és előnyösen rektális vagy vaginális kezelésre. A koncentráció változtatásával a gyógyszer parenterális kezelésre is alkalmas lehet. A gyógyszer kontraindikált lehet vaginális vagy anális traktusokban, borogatókötésekben, füljáratban, zárt kötszerekben és bevételre, az ilyen alkalmazások irritációkat vagy kémiai égési sebeket válthatnak ki. A gyógyszer alkalmazása anaerob gombás fertőzések kezelésére nem ajánlott, mivel néhány gomba rezisztens lehet.
Echinacea purpureát és benzalkónium-kloridot tartalmazó készítményre vonatkozóan közlünk a továbbiakban 1-24. referenciapéldákat, hivatkozással azok eredeti forrására, a P9902055 magyarországi szabadalmi bejelentésre.
1-7. referenciapéldák
In vivő vizsgálatok
Egy első, helyi alkalmazás, in vivő kísérlet során, amely arra irányult, hogy felbecsülje a jelen találmány szerinti gyógyászati készítmény hatásait, hét embert kezeltünk, akik HSV 1 vagy 2 tesztben pozitívak voltak. A betegeket helyileg kezeltük, benzalkónium-klorid felületaktív anyagot vizes oldatban (1:750 arányban) és ezzel kombinációban az előzőekben felsorolt fitokemikáliákat tartalmazó Echinacea purpurea gyógynövényt porított alakban tartalmazó gyógyszerrel. A készítmény alkalmazása kétlépéses eljárással történt, először a megtámadott terület vagy hólyag megnedvesítése a benzalkónium-klorid felületaktív anyag vizes oldatával, permetezve, bekenve vagy csepegtető alkalmazásával; majd a porított fitokemikáliák bevonatát felvisszük a megnedvesített felületre, akár vattával, akár manuálisan rászórva a port a fertőzött területre. Ezen kezelésnél fontos szempont volt a fertőzött terület teljes borítottságát fenntartani a kiütések fennállásának teljes időtartama alatt. Ezért a kiütések területét a gyógyászati kompozíció szükség szerinti újraalkalmazásával, beborítva tartottuk.
A hét személy közül hat nő volt, és egy volt férfi. A kísérlet kezdetén a férfi 38 éves volt, a nők pedig 8, 27, 30, 32, 38 és 39 évesek. Közelítőleg hat hét alatt tizenkét fertőző kitörés történt. A kitörések közül kilenc HSV-2 volt, genitális herpesz, és három volt HSV-1, ajaksömör. A 8 éves és a 27 éves nőkön mutatkozott a HSV-1 (ajaksömör). A 30 éves, a 38 éves és a 39 éves nőkön HSV-2 (genitális herpesz) mutatkozott. A 38 évesnek HSV-1 ajaksömöre is volt. A férfin HSV-2 (genitális herpesz) mutatkozott. Valamennyi vizsgált személynek jól dokumentált kortörténete volt, és betegségük szokásos lefolyását jól lehetett identifikálni. Objektív adatok nyerése érdekében egyik vizsgált személy sem tudott semmit a tesztkezelésről vagy a gyógyszer bármilyen hatásáról. A tesztek ismétlése során a betegeknek megmondtuk, hogy a készítményminták közé placebók is lehetnek keverve.
Hét esetben az antimikrobás szert (gyógyszert) a betegség előstádiumában, közvetlenül alkalmaztuk. Öt esetben az antimikrobás szer közvetlenül a kiütéshólyagokon került alkalmazásra. A borítottság megőrzéséért az antimikrobás kompozíciót szükség szerint újra alkalmaztuk.
Megfigyelések: A gyógyszer minden alkalmazásánál minden egyes személy (vizsgált egyének) néhány másodpercig bizsergő érzésről számolt be. Ugyancsak elmondták, hogy a gyógyszer (antimikrobás) összetétel jelentős mértékben tapad a kiütés(ek)re vagy a fertőzött területre. A készítmény tapadása a hámszövetre valamilyen mértékben még a felület áztatása vagy vizes leöblítése után is megmarad.
Eredmények: A gyógyászati készítménnyel hét személyen történt tesztelés eredményei váratlanul, meglepően jók és nagyon egyenletesek voltak. A vizsgált személyek minden esetben boldogan számoltak be arról, hogy amint a készítményt (gyógyszert) a fertőzött területen alkalmazták, a fájdalom 10-20 percen belül teljesen megszűnt, míg korábban semmi nem enyhítette a fájdalmukat. A hét esetben, amelyekben az összetételt (gyógyszert) az előstádiumban alkalmaztuk, a betegek elmondták, hogy a fájdalom megszűnt, valamennyi tünet, amely korábban a teljes kifejlet során kiteljesedett, megszűnt, és a kitörés soha többé nem fordult elő újra. A gyógyszer alkalmazása után néhány órán belül a herpesz valamennyi külső tünete és fizikai megnyilvánulása eltűnt. Az öt esetben, amelyekben az összetétel (gyógyszer) közvetlenül a kiütéshólyagkon került alkalmazásra, a betegek arról számoltak be, hogy a fájdalom perceken belül megszűnt, az égés, viszketés és irritáció kettő-négy órán belül elmúlt, a hólyagok kiszáradtak, és huszonegy órán belül elmúltak. Valamennyi esetben az egyéb, szélsőségesebb, legyengítő tünetek, mint láz, rossz közérzet, inguinalis duzzadás, nedvedző sömör és fájdalmas vizelés a gyógyszer alkalmazására megszűnt.
Nyomon követve, amikor a vizsgált személyeknél a leendő kitörésekre tesztelték a készítményt (gyógyszert), arról számoltak be, hogy ha a betegek az instrukciók szerint, azonnal alkalmazták az összetételt (gyógyszert), amint egy kitörés kezdeti jelei mutatkoztak, jelezve a kitörés prodromális stádiumát, a kitörés teljesen abbamaradt és elmúlt. Lényeges, hogy a betegek, akik megszokták, hogy évente több kitörésen mentek át, arról is beszámoltak, hogy jelentősen meghosszabbodtak a latens periódusaik. Egy hároméves
HU 226 910 Β1 nyomon követés során egy nő beteg, aki elmondta, hogy ezen gyógyszer alkalmazása előtt négy éven keresztül, havonta több kitörése is volt, most arról számolt be, hogy már egy éve nem tapasztalt kitörést e gyógyszer alkalmazása óta.
További megfigyelések: Egy férfi beteg arról számolt be, hogy egy kitörés prodromális stádiumában, a kezdeti alkalmazás után zuhanyozott, és közelítőleg 30 órán keresztül elfelejtette a készítményt (gyógyszert) újra alkalmazni. Következményképpen különféle hólyagok jöttek ki és kezdtek összeolvadni. A beteg a továbbiakban újra alkalmazta a készítményt (gyógyszert), és ezután a területet a készítménnyel jól beborítva tartotta. Ennek következtében a kitörés 21 óra alatt ugyanúgy elmúlt, ahogyan a többi betegnél bemutattuk.
Más megfigyelés azt jelezte, hogy bizonyos fehérjék és szappanok jelenlétében a készítmény (gyógyszer) gyengülhet, vagy kevésbé hatékony. Egy nő beteg a készítmény (gyógyszer) alkalmazása előtt talán túlságosan buzgón tisztogatta a fertőzött területet. Ez a harmadik kitörés idején történt, azután, hogy a két előző kitörés esetén a készítmény (gyógyszer) sikeres volt. Ebben az esetben a készítmény (gyógyszer) alkalmazása során a szokásos bizsergő érzet és a tünetek enyhülése nem jelentkezett. Közelítően 24 óra telt el, amíg tanácsot kért, és a kitörés továbbterjedt a teljes hólyagos kiütéses stádiumig, ami együtt járt a kór összes, korábban ismertetett tünetével. Azt tanácsoltuk, hogy teljesen öblítsen le minden szappanmaradványt a felületről, szárítsa meg a felületet, és alkalmazza újra a készítményt (gyógyszert). Az instrukciókat követve a nő beteg arról számolt be, hogy a kitörés teljesen megszűnt, ahogyan az történt a gyógyszer alkalmazása során az előző két kitörés esetében is.
8-13. referenciapéldák
Dermatológiai és állatgyógyászati vizsgálatok
A gyógyászati kompozíció (gyógyszer) esetleges dermatológiai allergiás reakcióinak meghatározására állatkísérleteket végeztünk. Hat állategyedet vizsgáltunk. Az állatok 3 hím üregi nyúl (kora ismeretlen), 2 kutya (egy 2 éves hím és egy 9 éves nőstény) és 1 heréit 3 éves macska voltak. Ezekben az állatkísérletekben a fenti készítményt (gyógyszert) alkalmaztuk, az előre meghatározott módon, valamennyi állat külső fülének a belsején. A kezelt területet minden esetben 24 órán keresztül, a humán kísérlettel azonos ideig, az összetétellel teljesen beborítva tartottuk. A hat állaton elvégzett kísérlet során dermatológiai irritációnak vagy allergiás reakciónak jele sem volt.
14. referenciapélda
A fenti, vírus inhibitorokat tartalmazó gyógyászati szert vizsgáltuk egy kétéves heréit ló pofáján levő papilloma vírus okozta szemölcsön. A papilloma vírus okozta szemölcsök kezelése nehéz. A szemölcsátmérő 25 mm volt. Az antimikrobás összetételt (gyógyszert) naponta kétszer alkalmaztuk. Minden alkalmazásnál mértük a szemölcsöt.
Eredmények: A szemölcs gyógyszeres kezelése során a szemölcs mérete teljesen váratlanul, rohamosan csökkent, naponta közelítőleg 3 mm-rel, és az ötödik napon teljesen leesett. Megfigyeltük, hogy előszóra szemölcs felületi rétegei kezdtek kopni, és nagy erythemas papulák mutatkoztak. Majd érdekes módon a szemölcsök méretükben nem kisebbedtek rétegesen vagy hámlással, hanem az epidermishez csatlakozó pontjaiknál lettek kisebbek, és még csaknem épen, sebhelymaradvány nélkül leestek.
Jelen találmánynak egy folyamatban lévő, hosszan tartó in vivő kísérletében, amely az első hét személlyel 1989 áprilisában kezdődött, és már 7 évet fog át, a gyógyszernek a korábban leírt különféle koncentrációival, közelítőleg 100 fertőző kitörést kezeltünk. Valamennyi esetben ugyanaz volt a meglepően jó eredmény: 1. A fájdalom perceken belül elmúlt; 2. Amikora készítményt a prodromális stádiumban alkalmaztuk, nem fordult elő kitörés; 3. Amikor az alkalmazás a hólyagos stádiumban történt, a kitörés huszonegy óra alatt abbamaradt.
In vitro vizsgálat
A University of Chicago, Clinical Microbiology Laboratoriesban laboratóriumi in vitro vizsgálatokat végeztek a gyógyászati kompozíció inhibitor aktivitásának meghatározására. A laboratóriumi vizsgálatokat a patológia orvosigazgatója és docense vezette. Az alábbiakban „gyógyszerének nevezett gyógyszerkészítmény in vitro vizsgálata meglepően jó eredményeket hozott.
Megállapították, hogy a gyógyászati kompozíciónak a HSV-1-re és a HSV-2-re váratlanul, meglepően kiváló inhibitor aktivitása mutatkozott. A patológus kijelentette, hogy más vegyületek százait vizsgálta, és mégsem látott soha olyan jó hatást, mint amilyent ez az összetétel mutatott.
A gyógyszer vizsgálatai, amelyeket a University of Chicagóban végeztek, és a kapott eredmények az alábbiak. Néhány tudományos adat és vizsgálati eredmény egyszerű interpretálása érdekében a következő definíciókat használjuk:
„MÉM” jelenti a Minimál Essential Médiumot, a minimális szükséges tápanyagot. Ez a laboratóriumban használt, a vizsgálatba vont sejtek tenyésztésére szolgáló közepes táptalaj.
„Fibroblast”, humán mesenchyma sejt (kötőszövetben, vérben, csontban, nyirokban és porcban megtalálható sejt).
„IC50” jelenti az inhibitorkoncentrátumot. Ezen vizsgálathoz az 50% végpontot választották, mint tipikusát. A következő szám az 50% alatti legnagyobb hígítást jelenti. Ezért ez a végpont definíciója.
Ha egy hely a hígítás alatt üresen maradt, az azt jelenti, hogy abban a hígításban előfordulhat toxicitás, a teszt nem volt értékelhető, vagy nincs hozzáférhető, közölhető adat.
Ha egy helyet a hígítás alatt kötőjellel (-) jelöltek, az azt jelzi, hogy ott nincs folt, és a herpesz (HSV) gátlása sikeres.
HU 226 910 Β1
15-17. referenciapéldák
Ezekben az in vitro vizsgálatokban a következő gyógyszereket alkalmaztuk:
1. Referencia-gyógyszer: Benzalkónium-klorid felületaktív anyag 1:750 arányú vizes oldata. A felületaktív anyag vizes oldatát az alkalmazás előtt szűrtük, azonos térfogatú 2*MEM-mel hígítottuk, hogy 1:1500 arányban hígított 1*MEM-et kapjunk.
2. Referencia-gyógyszer: Echinacea por (fitokemikáliák) vizes oldatban. Ezt a készítményt meleg steril-vizes áztatással extraháltuk. Az extrahált fitokemikáliákat alkalmazás előtt centrifugáltuk és szűrtük. A szűrt fitokemikáliákat azonos térfogatú 2*MEM-mel hígítottuk, hogy 1*MEM-ben kapjuk a hígítatlan készítményt.
3. Referencia-gyógyszer: Echinacea port (fitokemikáliák) extraháltunk, és hideg áztatási folyamatban benzalkónium-klorid felületaktív anyaggal kombináltuk. A kombinált készítményt a felhasználás előtt centrifugáltuk és szűrtük, majd azonos térfogatú 2*MEM-ben hígítottuk, hogy a hígítatlan készítményt 1*MEM-ben kapjuk.
1. Három 24 cellás lemezre fibroblastokat oltottunk. A készítmény három különböző extrakcióját a koncentrációk szerinti antivirális hatás ellenőrzésére (összehasonlításként) öt koncentrációban teszteltük: hígítatlan, 1:2,
1:4, 1:8 és 1:16 1*MEM-ben. Minden lemezen négy, gyógyszer nélküli MEM-et tartalmazó kontrollcella volt.
2. A növesztő táptalajt eltávolítottuk a cellákból, és minden lemez felső felének valamennyi cellájába 200 μΙ HSV-1-et adagoltunk. A HSV-1-et 1:5000 arányban hígítottuk (2,0 μΙ szokásos HSV-1 tenyészet 10 ml MEMben). A vírustiter milliliterenként 3*10® volt. Ugyancsak minden lemez alsó felének valamennyi cellájába 200 μΙ HSV-2-t adagoltunk. A HSV-2-t 1:2000 arányban hígítottuk (5,0 μΙ szokásos HSV-2 tenyészet 10 ml MEMben). A vírustiter milliliterenként 6*105 volt.
3. A lemezeket 37 °C-on két órán keresztül inkubáltuk.
4. Az inokulumot eltávolítottuk, és a négy cellához az 1-3. gyógyszert tartalmazó 1 ml MEM-et adagoltuk. A gyógyszernek a MEM-hez viszonyított koncentrációját az alábbiakban jelezzük:
1. táblázat
Koncentráció Hígítatlan 1:2 1:4 1:8 1:16
Gyógyszer (μΙ) 4000 2000 1000 500 250
MÉM (μΙ) - 2000 3000 3500 3750
5. Eredmények: HSV-1, folyadékborítás, a gyógy- 30 2. lemez, 2. gyógyszer baktériummal fertőzött1 szer hozzáadása a vírusabszorpció után azonnal. Nincs növekedés, esetleg töredékek.
1. lemez, 1. gyógyszer baktériummal fertőzött! 3. lemez, 3. gyógyszer. Az eredményeket az alábbi
Nincs növekedés, esetleg töredékek. 2. és 3. táblázatban jelezzük.
2. táblázat
3. gyógyszer HSV-1 teszteredmények
Koncentráció Hígítatlan 1:2 1:4 1:8 1:16
Folt 54 toxikus toxikus - 6* 12**
Folt 42 toxikus toxikus - 4* 16“
Átlag 48 5 14 IC50>1:16
3. táblázat
3. gyógyszer HSV-2 teszteredmények
Koncentráció Hígítatlan 1:2 1:4 1:8 1:16
Folt 46 toxikus toxikus - 22* 32**
Folt 49 toxikus toxikus - 21* 28**
Átlag 48 22 30 ICS0=1:8
* gyenge toxicitás ** nagyon kis foltok
Megjegyzések: A 3. gyógyszer tesztelése kiváló eredményeket nyújtott. A sejtek szépnek, fertőzésmentesnek látszottak. Kisebb hígításoknál a készítmény néhány sejtre toxikus lehet. Ez a készítmény inhibitor aktivitását tekintve nem várt módon sikeres volt.
18-20. referenciapéldák
Három 24 cellás lemezre fibroblastokat és a következő gyógyszereket oltottuk:
1A. Referencia-tesztgyógyszer: Benzalkónium-klorid felületaktív anyag vizes oldata. A benzalkónium-klo60 rid felületaktív anyagból 1:375 arányú vizes oldatot ké18
HU 226 910 Β1 szítettek (32 μΙ 12,0 ml steril vízben). Ezt az alkalmazás előtt szűrtük, majd azonos térfogatú 2*MEM-mel hígítottuk, hogy 1:750 arányban hígított 1*MEM-et kapjunk. A hígítás az arány megtartásának érdekében készült.
2A. Referencia-tesztgyógyszer: Echinacea por (fitokemikáliák) vizes oldatban. Ez a készítmény az Echinacea purpurea por 50 mg/ml steril vizes oldata volt (300 mg 6,0 ml vízben). A keveréket kevertettük, és négy órán keresztül hűtöttük. Az Echinacea por készítményt a felhasználás előtt 3500-as percenkénti fordulatszámmal 15 percen keresztül 10 °C-on centrifugáltuk, szűrtük, majd azonos térfogatú 2*MEM-mel hígítottuk, hogy a hígítatlan készítményt 1*MEM-ben kapjuk.
3A. Referencia-tesztgyógyszer: Echinacea purpurea por (fitokemikáliák) benzalkónium-klorid felületaktív anyagban oldva. Ez a készítmény 50 mg/ml-es oldat volt (300 mg 6,0 ml benzalkónium-kloridban, 1:375). A keveréket kevertettük, és négy órán keresztül hűtöt20 tük. A fitokemikáliák és a felületaktív anyag elegyét a felhasználás előtt 3500-as percenkénti fordulatszámmal 15 percen keresztül 10 °C-on centrifugáltuk, szűrtük, majd azonos térfogatú 2*MEM-mel hígítottuk, hogy a hígítatlan készítményt 1*MEM-ben kapjuk.
1. A gyógyszer ellenőrzéséhez három lemezt használtunk. Az antivirális hatás ellenőrzéséhez szükséges koncentrációk voltak: az 1:2, 1:4, 1:8 és 1:16 1*MEMben. Minden lemezen négy, gyógyszer nélküli MEM-et tartalmazó kontrollcella volt.
2. A növesztő táptalajt eltávolítottuk a cellákból, és minden lemez felső felének valamennyi cellájába 200 μΙ HSV-1-et adagoltunk. A HSV-1-et 1:5000 arányban hígítottuk (2,0 μΙ HSV-1 tenyészet 10 ml MEMben). A vírustiter milliliterenként 3*106 volt.
3. A lemezeket 37 °C-on négy órán keresztül inkubáltuk.
4. Az oltóanyagot eltávolítottuk, és a négy cellához az 1A-3A. gyógyszert tartalmazó 1 ml MEM-et adagoltuk.
4. táblázat
Koncentráció Hígítatlan 1:2 1:4 1:8 1:16
Gyógyszer (μΙ) 4000 2000 1000 500 250
MÉM (μΙ) - 2000 3000 3500 3750
5. Eredmények: HSV-1, folyadékborítás, a készítmény hozzáadása a vírusabszorpció után azonnal.
5. táblázat
1A. gyógyszer - HSV-1 teszteredmények
Koncentráció 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32
Folt 70 toxikus toxikus toxikus toxikus toxikus
Folt 68
Folt 58
Folt 74
Átlag 70 IC50
Megjegyzések: Ezen cellákban a sejtek felett finom eloszlású csapadék volt. A táptalajban talán a benzalkónium-klorid válik ki a fehérjével.
6. táblázat
2A. gyógyszer - HSV-1 teszteredmények
Koncentráció 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32
Folt 72 - - - 9* 12*
Folt 74 - - - 7 8
Folt 79 - - - 4 12
Folt 71 - - - 7 11
Átlag 70 IC50>1:32
Megjegyzések: Bár volt néhány folt, azok nagyon kicsik voltak.
HU 226 910 Β1
7. táblázat
3A. gyógyszer - HSV-1 teszteredmények
Koncentráció 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32
Folt 72 toxikus toxikus toxikus toxikus *
Folt 68 -
Folt 67 -
Folt 70 -
Átlag 70 ICS0>1:32
Megjegyzések: Bár volt némi toxicitás, ezen gyógyszer a vírus gátlásában nagyon sikeres volt, egyáltalán nem jelent meg folt.
21-24. referenciapéldák
Négy 24 cellás lemezt oltottunk fibroblastokkal.
1B. Referencia-tesztgyógyszer: Benzalkónium-klorid felületaktív anyag vizes oldata. A benzalkónium-kloridból 1:1000 arányú vizes hígítást készítettünk (10 μΙ 20 10,0 ml steril vízben). Ezt az alkalmazás előtt szűrtük, majd azonos térfogatú 2xMEM-mel hígítottuk, hogy 1:2000 arányú hígítást kapjunk 1xMEM-ben (500 μΙ gyógyszer és 500 μΙ 2xMEM).
2B. Referencia-tesztgyógyszer: Echinacea purpu- 25 reá por (fitokemikáliák) vizes oldatban. Ez a készítmény az Echinacea purpurea por 50 mg/ml (250 mg 5 ml vízben) steril vizes oldata volt. A keveréket kevertettük, és négy órán keresztül hűtöttük. Az Echinacea por készítményt a felhasználás előtt 3500-as percen- 30 kénti fordulatszámmal 15 percen keresztül 10 °C-on centrifugáltuk, szűrtük, majd azonos térfogatú 2xMEM-mel hígítottuk, hogy a hígítatlan készítményt 1xMEM-ben kapjuk (500 μΙ gyógyszer és 500 μΙ 2χΜΕΜ). 35
3B. Referencia-tesztgyógyszer: Echinacea purpurea por (fitokemikáliák) benzalkónium-klorid felületaktív anyagban oldva. Ez a készítmény 50 mg/ml-es oldat volt (250 mg 5,0 ml benzalkónium-kloridban, 1:1000).
A keveréket kevertettük, és négy órán keresztül hűtőt- 40 tűk. Az Echinacea fitokemikáliák és a felületaktív anyag elegyét a felhasználás előtt 3500-as percenkénti fordulatszámmal 15 percen keresztül 10 °C-on centrifugáltuk, szűrtük, majd azonos térfogatú 2xMEM-mel hígítottuk, hogy a készítményt 1xMEM-ben kapjuk (500 μΙ 45 gyógyszer és 500 μΙ 2χΜΕΜ).
4B. Referencia-tesztgyógyszer: Echinacea purpurea por (fitokemikáliák) vizes oldata (hígító), majd
1:1000 arányban benzalkónium-klorid felületaktív anyaggal elegyítve. Ez a készítmény az Echinacea purpurea por 50 mg/ml-es steril vizes oldata volt (250 mg 5,0 ml steril vízben). A keveréket kevertettük, és négy órán keresztül hűtöttük. A vizes fitokemikáliákat a felhasználás előtt 3500-as percenkénti fordulatszámmal 15 percen keresztül 10 °C-on centrifugáltuk, szűrtük. Ezt a készítményt azonos térfogatú, 1:1000 arányú benzalkónium-kloriddal hígítottuk, hogy Echinacea és benzalkónium-klorid keverékét nyerjük. A keveréket azonos térfogatú 2xMEM-mel hígítottuk, hogy 1xMEMben 1:4 készítményt kapjunk (500 μΙ 1. gyógyszer, 250 μΙ 2. gyógyszer és 500 μΙ 2χΜΕΜ).
1. A négy gyógyszerkészítmény ellenőrzéséhez négy lemezt használtunk. Az antivirális hatás ellenőrzéséhez szükséges koncentrációk voltak: az 1:20, 1:40, 1:80, 1:160 és 1:320 1xMEM-ben. Minden lemezen négy, gyógyszer nélküli MEM-et tartalmazó kontrollcella volt.
2. A növesztő táptalajt eltávolítottuk a cellákból, és minden lemez felső két sorának valamennyi cellájába 200 μΙ HSV-1-et adagoltunk. A HSV-1-et 1:5000 arányban hígítottuk (2,0 μΙ HSV-1 tenyészet 10 ml MEMben). A vírustiter milliliterenként 3χ106 volt. 200 μΙ HSV-2-t is adagoltunk, minden lemez alsó felének valamennyi cellájába. A HSV-2-t 1:2000 arányban hígítottuk (5,0 μΙ HSV-2 tenyészet 10 ml MEM-ben). A vírustiter milliliterenként 6χ105 volt.
3. A lemezeket 37 °C-on négy órán keresztül inkubáltuk.
4. Az oltóanyagot eltávolítottuk, és a négy cellához az 1-4. gyógyszert tartalmazó 1 ml MEM-et adagoltuk.
8. táblázat
Koncentráció 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320
Gyógyszer (μΙ) 400 200 100 50 25
MÉM (μΙ) 3600 3800 3900 3950 3975
5. Eredmények: HSV-1, folyadékborítás, a gyógyszer hozzáadása a vírusabszorpció után azonnal. 60
HU 226 910 Β1
9. táblázat
1B. gyógyszer - HSV-1 teszteredmények
Koncentráció 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320
Folt 37 toxikus toxikus toxikus toxikus 15?*
Folt 45 18?*
Átlag 41 'C50
Megjegyzések: Gyengén toxikus, a teszt értékelése nehéz volt. HSV-2, folyadékborítás, a gyógyszer hozzáadása a vírusabszorpció után azonnal.
10. táblázat
1B. gyógyszer - HSV-2 teszteredmények
Koncentráció 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320
Folt 38 toxikus toxikus toxikus toxikus 21
Folt 42 17
Átlag 40 19
IC50> 1:320
Megjegyzések: A teszt túlságosan toxikus volt ahhoz, hogy jól értékelhető legyen.
11. táblázat
2B. gyógyszer - HSV-1 teszteredmények
Koncentráció 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320
Folt 39 2* 8* 23‘ 24 44
Folt 40 3 18 11 28 38
Átlag 40 3 13 17 26 IC50>1:180
Megjegyzések: Kicsi foltok.
12. táblázat
2B. gyógyszer - HSV-2 teszteredmények
Koncentráció 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320
Folt 48 21 33
Folt 52 22 38
Átlag 50 21,5 35,5 IC50>1:20
13. táblázat
3B. gyógyszer - HSV-1 teszteredmények
Koncentráció 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320
Folt 44 1* 17 31 37
Folt 46 - 16 28 27
Átlag 45 - 17 30 32 IC50>1:40
Megjegyzések: Bár volt némi toxicitás, a gyógyszer nagyon sikeres, foltok nem jelentek meg.
HU 226 910 Β1
14. táblázat
3B. gyógyszer - HSV-2 teszteredmények
Koncentráció 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320
Néhány sejt 11* 27 30 35
Folt 44 10 32
Átlag 44 11 29,5 IC50>1:20
Megjegyzések: A tesztet nehéz volt igazán jól értékelni. Mindazonáltal a gyógyszer sikeres inhibitor hatású.
15. táblázat
4B. gyógyszer - HSV-1 teszteredmények
Koncentráció 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640
Folt 47 toxikus toxikus toxikus 33
Folt 48 28
Átlag 48 30 IC50>1:320
Megjegyzések: Magasabb szinteknél túlságosan toxikus. Mindazonáltal 1:320-nál inhibitor aktivitás volt.
16. táblázat
4B. gyógyszer - HSV-2 teszteredmények
Koncentráció 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640
Folt 38 toxikus toxikus toxikus 2* 16
Folt 40 4 20
Átlag 39 3 18 IC50> 1:640
Megjegyzések: A toxicitás talán a benzalkónium-klorid következménye. A gyógyszer 1:320 hígításnál nagyon erős inhibitor aktivitást mutatott.
A 21-24. példák in vitro tesztjeiben tisztítatlan nyersanyagokat alkalmaztunk. Mindamellett a tesztek meglepően jó virális inhibitor aktivitást és az összetevők közötti valószínű szinergizmust mutattak.
Az előbbi in vitro teszt során alkalmazott gyógyszerek, a 3., 3A. és 3B. referencia-gyógyszerek, a benzalkónium-kloriddal extrahált és kombinált Echinacea purpurea fitokemikáliák mutatták a legnagyobb antivirális aktivitást és a komponensek, az Echinacea purpurea és a benzalkónium-klorid közötti legrendkívülibb szinergizmust. Ez valószínűleg a két komponens közötti megosztott stabilitással és megnövekedett reaktivitással magyarázható. A benzalkónium-klorid a szinergens keverékben kisebb mértékű toxicitást mutatott, és a szinergens kombináció (gyógyszer) különösen a HSV2-vel nagyobb fokú antivirális aktivitást mutatott.
HIV-tesztek
Akut fertőzéses modellkísérletben vizsgáltuk az Echinacea purpurea és benzalkónium-klorid-tartalmú Viracea-1 és a jelen találmány szerinti Viracea-2 esetén az anti-HIV aktivitást. További kísérleteket végeztünk a két szer összehasonlítására és hatásmechanizmusának értékelésére.
A Viracea-1 és a Viracea-2 szereket oldatokként alkalmaztuk. A formulálás az oldatok szűréséből és centrifugálásából állt. Valamennyi, 1:5 és 1:100 között vál35 toztatott, hígított szövettenyészeten a magas tesztkoncentrációkat alkalmaztuk. A felhasználás előtt minden kompozíciót 70 °C-on tartottunk.
A sejtvonalak és vírustörzsek tenyésztése és kvantálása
A szerek ellenőrzési vizsgálataihoz alkalmazott sejtekként a CEM-SS sejtvonalat választottuk. Ezen sejtek nagyon érzékenyek a HIV-vel történő fertőzésre, gyorsan képeznek multinukleáris syncytiákat, és a HÍV miatt alkalmasint el is pusztulnak. Ezek a sejtek könnyen fenntarthatok (milliliterenként 2-7><103 sejt) 10% magzati marhaszérummal, glutaminnal és antibiotikumokkal kiegészített RPMI 1640 szövettenyésztő táptalajon. A sejteket hetenként kétszer 1:20 hígításban szélesztettük. A szélesztések számát hetenként növeltük, a sejteket az első átoltás után húsz héttel eldobtuk, friss CEM-SS sejteket engedtettünk fel és alkalmaztunk a vizsgálatokhoz. A CEM-SS sejt törzstenyészeteket 1 ml-es NUNC fiolákban, 90% magzati borjúszérumban és 10% dimetil-szulfoxidban (DMSO), folyékony nitrogénben fagyasztottuk le. A felengedtetést követően a CEM-SS sejtek alkalmasak a primer ellenőrzési vizsgálatra történő felhasználásra két héttel a tenyésztés után. Az utoljára szélesztett sejtvonal kicserélése előtt az új CEM-SS sejteket a jelen fertőző vírustörzzsel és AZT-vel teszteltük. Ha a vírus fertőzőképes22
HU 226 910 Β1 sége az új sejteken szignifikánsan különböző, vagy ha az AZT az elvárhatónál kevésbé aktívnak tűnik, az új sejtek nem kerülhetnek be az ellenőrzési programba. A mycoplasmatesztelést rendszerint minden sejtvonalon (lásd fent) elvégeztük.
A vírustörzstenyészeteket CEM-SS sejtekben állítják elő és titerezik, 5 ml-es aliquotokat készítenek, és -135 °C-on lefagyasztják. A szélesztés után a felhasználatlan vírust, a fertőző titer változásának elkerülésére, kidobják. Optimalizálási vizsgálatokban az első fagyasztási-szélesztési ciklus során a vírustiter logaritmikus csökkenését dokumentálták, és kevésbé drasztikus titercsökkenést a következő fagyasztási-szélesztési ciklusok során. A vírustörzstenyészeteket 5*105 CEM-SS sejt HIV-vel történő akut infekciójával állítják elő, 200 μΙ térfogatban levő, sokféleképpen fertőzőnek mutatkozott, a fertőzést követő 7 nap alatt (közelítően 0,05 HIV-1 lllB izolátum és 0,01 HIV-1 RF izolátum) teljes sejtpusztítást mutató HIV-vel. A fertőzést 37 °C-on egy órán keresztül hagyják végbemenni, majd a sejteket T25-ös üvegbe viszik át, és a térfogat 2 ml-re növekszik. A fertőzést követő 1. napon a térfogat 5 ml-re növekszik, a 2. napon pedig a térfogat 10 ml-re nő. A 4. nap elején a sejtek pelyhessé válnak, a felülúszót félreteszik, és a sejteket szövettenyésztési táptalaj 10 ml-nyi aliquotjában újraszuszpendálják. A naponta végzett teljes táptalajcserék inkább lehetővé teszik, hogy a primer ellenőrzéshez alkalmazott vírusinokulum a sejtek fertőzésekor tápanyagokban viszonylag teljes legyen, mintha hosszabb ideig ugyanabban a táptalajban hagyják a sejtnövekedést. Az alkalmazott színreakció (XTT) megkívánja, hogy a glukózkoncentráció magas maradjon. A sejtnövekedés miatt glukóztól kiürült cellákban nem történhet meg a tetrazóliumszínezéknek formazántermékké történő metabolikus átalakulása.
Az akut fertőzött sejtekről a sejtmentes felülúszót a 4., 5., 6. és 7. napon teszik félre. A félretett felülúszók egy aliquotját mindennap a titer meghatározására használják. A titermeghatározások a reverz transzkriptáz aktivitás meghatározásából, végponttitrálásból vagy foltmeghatározásból (CEM-SS), a fertőző részecskék mennyiségi meghatározásából és a sejtpusztulás kinetikájának mennyiségi meghatározásából áll. Meghatározták, hogy a fertőző vírus csúcsszintjei az akut fertőzött tenyészetekben jelentkeznek, mivel a sejtek életképessége az 50%-os szint felett megszűnik. Mivel a primer ellenőrzési vizsgálat egy szer védőhatását a HIV-indukált citopatikus hatások gátlásának képességével mennyiségileg meghatározza, a CEM-SS sejtek 6 nap alatti elpusztításához szükséges vírusmennyiség rutinszerűen alkalmazható a primer ellenőrzéshez cellánként szükséges vírus mennyiségének meghatározására. A napi minták mindegyikét a primer XTT ellenőrzés protokollja szerint titráltuk, úgy, hogy kétszeresére hígítottuk a kezdeti, 50 μΙ vírus/cella magas tesztkoncentrációjú vírust. A tetrazóliumszínezék XTT festő módszert az összes CEM-SS sejtnek valamennyi cellában történő elpusztításához szükséges vírus mennyiségének pontos meghatározására használtuk, és a vírusnak ezen minimális mennyiségét alkalmaztuk valamennyi primer teszt kivitelezéséhez. Ugyanez a módszer alkalmas a laboratóriumban használt valamennyi vírusizolátum előállítására, beleértve a laboratóriumi HIV-1, HIV-2 és STV származék törzseket. Az alkalmazott klinikai izolátumokat friss humán sejteken szélesztik, és ezen sejtek növesztési módszerei, valamint a vírustörzstenyészetek előállításának módszere az alábbiakban van leírva.
Antivirális XTT mikromeghatározás
Sejtpreparátum
A meghatározáshoz CEM-SS sejteket vagy más, ezen vizsgálatokhoz elfogadott humán sejtvonalat T-150-es palackokban szélesztettek. A vizsgálatot megelőző napon a sejteket 1:2 arányban megosztják, hogy azok a fertőzés idején biztosan az exponenciális sejtnövekedési fázisban legyenek. A vizsgálat napján a sejteket kétszer átmosták a szövettenyésztési táptalajjal, majd friss szövettenyésztési táptalajban újraszuszpendálták. A teljes sejtszám és az életképesség meghatározását hemocitométerrel, valamint a tripánkék színezhetőségi (azaz színezhetőség kizárási) módszerrel végzik. A sejt életképessége a vizsgálat során alkalmazott sejteknek több mint 95%-a volt. A sejteket 2,5* 104 sejt/ml-re tömörítették, és szövettenyésztési táptalajban újraszuszpendálták. A sejtek 50 μΙ-nyi térfogatait adagoltuk a gyógyszert tartalmazó lemezekre.
Víruskészítmény
A vírus elővizsgáit aliquotját kivettük a (-80 °C) hűtőtárolóból, és biológiailag védett helyen hagytuk lassan szoba-hőmérsékletűre felengedni. A vírust szövettenyésztési táptalajban újraszuszpendáltuk és hígítottuk úgy, hogy a cellákba beadagolt 50 μΙ-nyi vírusmennyiség az a meghatározott vírusmennyiség legyen, amely a fertőzés után 6 nappal teljes sejtpusztulást okoz. A vírus oltóanyagok általában a HÍV III.B. izolátumával készültek, amelyből cellánként 5 μΙ-nyi hozzáadása volt szükséges. Az RF víruskészítmények ötször-tízszer hatékonyabbak voltak, a cellánkénti igény 0,5-1 μΙ-nyi volt. A CEM-SS sejtekben történő végponttitrálással számított TCID50 jelezte, hogy ezen vizsgálatok fertőzés sokszorozódása 0,005-2,5 közötti.
Lemezforma
A tesztlemezek alakja standardizált volt, és sejt kontroll cellákat (csak sejteknek), vírus kontroll cellákat (sejt és vírus), gyógyszer toxicitás kontroll cellákat (sejtek és gyógyszer), gyógyszer kolorimetrikus kontroll cellákat (csak gyógyszer), valamint vizsgálati cellákat (gyógyszer, sejt és vírus) tartalmazott.
25-48. példák
Ellenőrző lemezek XTT festése °C-on, 5% CO2-ot tartalmazó inkubátorban végzett 6 napi inkubáció után a tesztlemezeket XTT tetrazólium színezékes festéssel elemeztük. Az XTT tetrazóliumot a metabolikusan aktív sejtek mitokondriális enzimei oldható formazántermékké metabolizálják, így lehetővé
HU 226 910 Β1 teszik az anti-HIV tesztanyagokkal kiváltott HIV-indukált sejtpusztulás inhibíciójának gyors kvantitatív analízisét.
nappal a fertőzést követően a lemezeket kivettük az inkubátorból és értékeltük. A gömbölyű alapú mikrotiterlemezek alkalmazása a pelletméret meghatározásával 5 lehetővé teszi egy adott tesztszer aktivitásának gyors makroszkopikus analízisét. A makroszkopikus megfigyelések eredményeit a további mikroszkopikus analízis igazolta és megerősítette. XTT oldat csak törzsoldatként, 1 mg/ml-es oldat, PBS-ben készült. A fenazin-meto-szulfát (PMS)-oldatot 15 mg/ml-esre készítettük PBSben, és sötétben, -20 °C-on tároltuk, az XTT/PMS törzs10 oldatot közvetlenül a felhasználás előtt, a PMS 1:100 arányú PBS-es hígításával és 40 μΙ/ml XTT oldat hozzáadásával készítettük. A lemez valamennyi cellájába 50 μΙ/ml XTT/PMS-t adagoltunk, a lemezt 37 °C-on 4 órán keresztül ismét inkubáltuk. Fedőként tapadólemez-rögzítéseket alkalmaztunk, a lezárt lemezeket többször megfordítottuk, hogy az oldott formazántermék keveredjen, majd a lemezeket 450 nm-nél spektrofotometriásán, Molecular Devices Vmax lemezleolvasó műszerrel értékeltük. A %-os CPE redukció alapján számítottuk a %-os sejtéletképességet, az IC25, 50 & 95, TC25 50 & 95 értékeket és egyéb indexeket.
17. táblázat
In vitro antivirális eredmények XTT vizsgálatok Viracea-2
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
reagens háttér műanyag háttér
0,169 0,163 0,164 0,166 0,160 0,170 0,074 0,072 0,067 0,067 0,067 0,068
tox. cc/vc kísérleti magas konc. tox. tox. kísérleti alacsony konc. cc/vc tox.
1,468 1,421 0,461 0,257 1,170 1,467 1,501 0,207 0,222 0,214 1,506 1,503
1,321 1,397 1,316 0,209 0,191 1,340 1,494 0,200 0,202 0,204 1,446 1,487
0,906 1,345 0,249 0,764 0,836 0,953 1,485 0,227 0,179 0,179 1,453 1,500
0,219 0,256 1,190 0,207 0,210 0,234 1,491 0,204 0,190 0,228 0,192 1,506
0,168 0,190 0,161 0,161 0,148 0,157 1,503 0,237 0,195 0,202 0,186 1,501
0,242 0,223 0,238 0,239 0,230 0,242 1,495 0,201 0,204 0,227 0,189 1,503
kolorimetrikus háttér - magas koncentráció kolorimetrikus háttér - alacsony koncentráció
0,258 0,172 0,159 0,165 0,163 0,165 0,165 0,166 0,166 0,171 0,159 0,169
18. táblázat Viracea-2
STRN RF
Reagens 0,165 Viracea-2 gyógyszer 25% 50% 95%
Víruskontroll 0,041 TC 1:450 1:250 1:100
Sejtkontroll 1,263 IC 1:900
Differencia 1,222 Antivirális Index (Al) 2,02
19. táblázat Viracea-2
Viracea-2 gyógyszer Antivirális tesztértékek Citotoxicitási tesztértékek
jel a lemezen konc. (μιτι) közepes O. D. % vörös a vírus CPE-ben közepes O. D. sejt % láthatóság kolorimetrikus kontroll
Az oszlopok értékeinek elhelyezkedése 7-től 12-ig (a lemez jobb oldala) alacsony B 0,00003 0,004 0% 1,335 100% 0,004
C 0,0001 0,002 0% 1,331 100% -,006
D 0,00032 -,017 0% 1,321 100% 0,006
E 0,001 0,000 0% 1,332 100% 0,001
HU 226 910 Β1
19. táblázat (folytatás)
Viracea-2 gyógyszer Antivirális tesztértékek Citotoxicitási tesztértékek
jel a lemezen konc. (μιτι) közepes O. D. % vörös a vírus CPE-ben közepes O. D. sejt % láthatóság kolorimetrikus kontroll
F 0,0032 0,004 0% 1,336 100% 0,001
G 0,01 0,005 0% 1,334 100% 0,000
Az oszlopok értékeinek elhelyezkedése 1-től 6-ig (a lemez bal oldala) B 0,032 0,090 7% 1,302 100% 0,000
C 0,1 0,368 30% 1,167 92% -,002
D 0,32 0,410 34% 1,764 61% 0,000
E 1 0,002 0% 1,067 5% -,006
F 3,2 -,056 0% -,010 0% 0,007
magas G 10 -,063 0% -,016 0% 0,093
49-54. példák
Reverz transzkriptáz aktivitás meghatározása Mikrotiteres reverz transzkriptáz (RT) reakciót alkalmaztunk. Triciált timidin-trifoszfátot (NEN) (TTP) desztillált vízben felszuszpendáltunk, 5 Ci/ml-re. 25 Törzsoldatként poli-rA és oligo-dT oldatot készítettünk, amelyeket-20 °C-on tároltunk. Az RT puffer reagens naponta szükséges mennyisége frissen készült,
125 μΙ 1 M EGTA, 125 μΙ dH2O, 125 μΙ Triton X-100, μΙ 1 M Tris (pH=7,4), 50 μΙ 1 M DTT és 40 μΙ 1 M 30 MgCI2 összetétellel. Ezen három oldatot összekevertük 1 rész TTP, 2,5 rész poli-rA és oligo-dT, 2,5 rész puffer reagens és 4 rész desztillált víz arányban. Ezen reakcióelegy 10 mikroliterét gömbölyű aljú mikrotiterlemezre adagoltuk, hozzáadtuk a vírust tartalmazó 15 μΙ felülúszót, és összekevertük. A lemezt 37 °C-on 60 percig inkubáltuk. A reakciót követően a reakcióelegyet szűrőpapírra öntöttük, 6 alkalommal, 5 percig mostuk 5%-os nátrium-foszfát-pufferrel, 2-szer 1 percig desztillált vízzel mostuk, 2-szer 1 percig 70%-os etanollal mostuk, majd megszárítottuk. A megszárított szűrőpapírt műanyag mintaedénybe tettük, Betaplate szcintillációs folyadékot adtunk hozzá, és az edénykét leforrasztottuk. A beépült radioaktivitást Wallac Microbeta szcintillációs számlálóval mennyiségileg kiértékeltük.
20. táblázat
Viracea-2: PBMC/ROJO
Reverz transzkriptáz aktivitás
Koncentráció 1:0 1:100 000 1:32 000 1:10 000 1:3200 1:1000 1:320 1:100 1:32 1:10
1. minta 28 139 31 734 36 488 34 880 31 240 2 287 7 436 463 96 38
2. minta 24 587 27 559 33 120 23 103 33 408 20 550 9 478 265 103 81
3. minta 32 527 24 114 23 828 28 137 23 174 25 825 11 132 309 77 55
4. minta 28 418 27 802 31 145 26 677 29 274 16 221 9 349 346 92 58
VC% 100,0 97,8 109,6 100,9 103,0 57,1 32,9 1,2 0,3 0,2
21. táblázat
Viracea-2: PBMC/ROJO
Toxicitásértékek
Koncentráció 1:0 1:100 000 1:32 000 1:10 000 1:3200 1:1000 1:320 1:100 1:32 1:10
1. minta 2,029 1,547 1,460 1,488 1,345 1,354 0,860 0,546 0,429 0,611
2. minta 2,120 1,503 1,548 1,622 1,902 1,489 0,971 0,529 0,434 0,627
3. minta 1,879 1,364 1,463 1,720 1,649 1,223 0,772 0,451 0,433 0,633
4. minta 2,009 1,471 1,490 1,610 1,632 1,355 0,868 0,509 0,432 0,624
VC% 100,0 73,2 74,2 80,1 81,2 67,5 43,2 25,3 21,5 31,0
HU 226 910 Β1
Elisa
Az. ELISA kiteket a Coultertől vásároltuk. A vizsgálatokat a gyártó előírásai szerint végeztük. Az ELISA analízis előtt a szokásos módon reverz transzkriptáz aktivitás meghatározást végeztünk, és az így kapott értékeket az RT aktivitás meghatározás során a beépült radioaktivitás értékeként használtuk, hogy meghatározhassuk a mintáknak az ELISA teszthez szükséges hígítását. Minden vizsgálathoz kontrollgörbét készítettünk, hogy pontosan értékeljük valamennyi mintában a capsid protein mennyiségét. Az adatokat spektrofotometriás analízis során, 450 nm-nél, Molecular Devices Vmax lemezleolvasó műszert alkalmazva nyertük. Az optikai denzitás értékekből a Soft Max Molecular Devices szoftverét alkalmazva, P24 koncentrációkat számoltunk.
Fertőző részecskék
A fertőző vírusrészecskék mennyiségi meghatározását a CEM-SS foltvizsgálati módszerrel, valamint a HIV-1 és HIV-2 kvantitatív fertőzőképességi vizsgálati módszerrel végeztük. Sima aljú, 96 cellás mikrotiterlemezeket 50 μΙ-nyi 50 μΙ/ml-es poli-L-lizinnel borítottunk be, 2 órán át 37 °C-on tartottuk. A cellákat azután PBSsel mostuk, majd 2,5χ105 CEM-SS sejtet helyeztünk el a mikrotitercellában, ahol azok a lemez alján fixálódtak. Monomolekuláris CEM-SS sejtréteg kialakulásához elegendő sejt jutott minden cellába. Az XTT fázis minden cellájából vírustartalmú felülúszót adtunk hozzá, beleértve a vírust, a kontrollsejteket és a tesztanyag teljes hígítási sorát. A syncytiák számát 4 nappal a fertőzést követően, Olympus CK2 inverz mikroszkóppal számláltuk meg a 96 cellás mikrotiterlemezek egyenes alján. Minden syncytium egyetlen fertőző HIV-vírustól származott.
Anti-HIV aktivitás friss humán sejtekben: vizsgálatok friss humán T-lymphocitákban Friss humán perifériás vér lymphocytákat (PBL) izoláltak HÍV és HBV szeronegatív önkéntes Vöröskereszt-véradóktól. A leukocytamentesített vért sótartalmú Dulbecco foszfátpufferral 1:1 arányban hígítottuk, 50 ml-es centrifugacsőben rárétegeztük 14 ml FicollHypaque reagensre. A csöveket azután 30 percen keresztül 600xg-vel centrifugáltuk. Az elválasztott PBLeket óvatosan leszívattuk a felületről, ezt követően lassú centrifugálással PBS-sel 2xátmostuk. Az utolsó mosás után a sejteket tripánkék festéssel megszámláltuk, majd 15% magzati borjúszérummal (FBS), 2 mM L-glutaminnal, 4 pg/ml PHA-P-vel RPMI 1640ben 1x107/ml-esre újraszuszpendáltuk, és 37 °C-on 48-72 órán keresztül inkubáltuk. Az inkubáció után a PBL-t centrifugáltuk, és 15% magzati borjúszérummal (FBS), 2 mM L-glutaminnal, 100 U/ml penicillinnel, 100 pg/ml streptomycinnel, 10 pg/ml gentamicinnel és 20 U/ml rekombináns humán IL-2-vel ismét felvettük RPMI 1640-ben. A PBL-eket a protokolltesztben történő felhasználásig kéthetenkénti táptalajcserékkel ebben az 1-2x10E6/ml koncentrációjú közegben tartottuk.
A PBL meghatározáshoz legalább két normáldonortól gyűjtött PHA-P stimulált sejteket vittünk 2x10E6/ml-es friss táptalajba, 50 μΙ/cella mennyiségben beadagoltuk a 96 cellás gömbölyű aljú mikrolemezek külső celláiba. A tesztgyógyszer hígításait mikrotitercsövekben, 2x-es koncentrációkkal készítettük, és minden koncentrációból 100 μΙ-nyit helyeztünk el a szokásos elrendezésben a megfelelő cellákban. Minden tesztcellába előre meghatározott hígítású vírustörzs 50 pl mennyiségét adagoltuk. Víruskontrollként egyedül a sejteket és egyedül a vírust tartalmazó cellák szolgáltak. A gyógyszer toxicitásának tanulmányozására az XTT meghatározás előírásait alkalmazva, azonos módon, vírus nélküli külön lemezeket helyeztünk el.
A standard PBL meghatározás szerint (MOI: 0,2) a vizsgálatot a sejtmentes felülúszómintáknak a reverz transzkriptáz aktivitás meghatározáshoz történő összegyűjtését követően, a 7. napon fejeztük be. Az alacsony MOI PBL vizsgálat (MOI: 0,02) során a felülúszómintákat a fertőzést követő 6. napon, 11. napon és a 14. napon gyűjtöttük és vizsgáltuk Rl aktivitásra. Triciált timidin-trifoszfátot (NEN) (TTP) desztillált vízben 5 Ci/ml-re szuszpendáltunk. Törzsoldatként poli-rA és oligo-dT oldatot készítettünk, amelyet -20 °C-on tároltunk. Az RT puffer reagens naponta szükséges mennyisége frissen készült, 125 pl 1 M EGTA, 125 pl dH2O, 110 pl 10%-os SDS, 50 pl 1 M Tris (pH=7,4), 50 pl 1 M DTT és 40 pl 1 M MgCI2 összetétellel. Ezen három oldatot 2 rész TTP, 1 rész poli-rA és oligo-dT és 1 rész puffer reagens arányban összekevertük. Ezen reakcióelegy 10 mikroliterét gömbölyű aljú mikrotiterlemezre adagoltuk, hozzáadtuk a vírust tartalmazó 15 pl felülúszót, és összekevertük. A lemezt 37 °C-on vízfürdőn, 60 percig inkubáltuk, miközben a lemezeket szilárd támasszal védtük az elmerüléstől. A reakciót követően a reakcióelegyet DE81 szűrőpapírokra öntöttük, mindegyiket 5 alkalommal, 5 percig 5%-os nátriumfoszfát-pufferrel mostuk, 2-szer 1 percig mindegyiket desztillált vízzel, 2-szer 1 percig mindegyiket 70%-os etanollal mostuk, majd megszárítottuk. Minden mintához Opti-fluor O-t adtunk, és a beépült radioaktivitást Wallac 1450 Microbetaplus folyadékszcintillációs számláló alkalmazásával mennyiségileg meghatároztuk.
A triciált timidin beépülését parallel tenyészetben mértük, a 7. napon. Minden cellát 1 pCi triciált timidinnel kezeltünk, és a sejteket 18 órával később, Skatron sejtleszedővel, üvegszálas szűrőpapírokra leszedtük. A szűrőpapírokat megszárítottuk, 1 ml szcintillációs koktéllal szcintillációs csőbe helyeztük, és a beépült radioaktivitást Packard Tri-Carbh 1900 TR folyadékszcintillációs számlálón leolvastuk.
55-78. példák
Anti-HIV aktivitás friss humán sejtekben: meghatározás friss humán monocytamacrophagokban
Az adherens sejtek izolálására 3χ106 nem PHA stimulált perifériás vérsejtet sótartalmú Hanks-pufferben,
HU 226 910 Β1 kalciummal és magnéziummal kiegészített 10% humán AB szérummal felszuszpendáltunk. A sejteket 24 cellás mikrotiterlemezre vittük fel, 37 °C-on 2 órára. A nem adherens sejteket hatszori alapos átmosással eltávolítottuk. Az adherens sejteket hét napon át tenyészetet- 5 tűk 15% magzati borjúszérummal, RPMI 1640 szövettenyésztő táptalajban. A tenyészeteket ezen inkubálási periódus alatt óvatosan figyeltük, hogy összefolynak-e.
A sejtek fertőzését monocytatropikus HIV-1 BaL vagy ADA törzsekkel és egymáshoz illő AZT-érzékeny és 10 AZT-rezisztens víruspárok izolátumaival végeztük.
Ezen vírusizolátumok mindegyikét az NLAID AIDS Research and Reference Reagent Programtól szereztük be. Ezen vírusok magas titerű törzstenyészetét a perifériás vér adherens sejtjeinek fertőzött, és 1 ml-es ali- 15 quotokban, -80 °C-on lefagyasztott tenyészeteiből nyertük. A monocyta-macrophag monorétegeket 0,1 MOl-nál fertőztük. A monorétegekben értékelendő szereket 0,1 MOl-nál fertőztük. A monocyta-macrophag módszerben értékelendő szereket röviddel a fér- 20 tőzés előtt adtuk a monorétegekhez, hogy maximalizáljuk az aktív szerek azonosításának lehetőségét.
A fertőzés után két nappal a táptalajt dekantáltuk, a tenyészetet a vírus feleslegének eltávolítása érdekében teljes táptalajjal kétszer átmostuk. Friss táptalajt önmagában, vagy a megfelelő koncentrációjú gyógyszert tartalmazó táptalajt adtunk hozzá, és az inkubálást további 5 napig folytattuk. A sejt életképességének meghatározására az XTT-tetrazólium vagy tripánkék festési módszert és a HÍV p24 ELISA tesztet a p24 core antigén előállítására, a fertőzést követő 7. napon végeztük el. Az ELISA kiteket a Coultertől szereztük be. Minden vizsgálathoz kontrollgörbét készítettünk, hogy pontosan értékeljük valamennyi mintában a capsid protein mennyiségét. Az adatokat spektrofotometriás analízis során, 450 nm-nél, Molecular Devices Vmax lemezleolvasó műszert alkalmazva nyertük. Az optikai denzitás értékekből a Soft Max Molecular Devices szoftverét alkalmazva számítottuk ki a P24 koncentrációkat.
22. táblázat
Viracea-2 macrophag vizsgálata P-24 aktivitás pg/ml
AZT kontroll Viracea-2
μΜ vs. ADA hígítás vs. ADA
4 8,65 8,65 17,45 1:100 42,19 22,95 34,49
1,28 9,20 6,45 25,15 1:312 4,25 15,25 41,09
0,410 13,60 10,00 16,35 1:976 14,70 17,45 39,44
0,131 53,74 13,60 62,54 1:3051 63,64 26,25 48,79
0,042 82,89 72,44 96,63 1:9536 48,79 570,60 180,80
0,013 175,80 168,70 316,00 1:29802 278,60 243,50 450,80
0,004 914,90 891,20 499,20 1:93132 305,60 599,80 435,90
0,0014 821,90 594,80 983,10 1:291038 548,10 947,90 913,20
0,0004 1097,00 1160,00 1098,00 1:909494 814,80 790,60 820,80
23. táblázat
Viracea-2 macrophag vizsgálata Toxicitási abszorbancia vizsgálatok
AZT kontroll Viracea-2
μΜ vs. ADA hígítás vs. ADA
4 1,140 0,981 1,427 1:100 1,271 1,244 1,289
1,28 1,692 1,318 0,985 1:312 1,081 1,154 1,393
0,410 1,505 1,258 1,522 1:976 1,073 1,183 1,536
0,131 1,427 1,347 1,043 1:3051 1,482 1,032 1,518
0,042 1,534 1,725 1,720 1:9536 1,031 1,330 1,053
0,013 1,818 1,526 1,363 1:29802 1,344 1,449 1,497
0,004 1,578 1,112 1,034 1:93132 1,024 1,554 1,446
0,0014 1,386 1,350 1,133 1:291038 1,692 1,112 1,411
0,0004 1,451 1,081 1,342 1:909494 1,182 1,163 1,373
HU 226 910 Β1
24. táblázat
Anti-HIV makrofázis vizsgálat (P24) Viracea-2-4.
P24 aktivitás (pg/mL)
Hígítás 0 1:909494 1:291038 1:93132 1:29802 1:9536 1:3051 1:976 1:312 1:100
1. minta 1366,8 1347 524,1 634,4 457,5 349,9 193,5 138 120,9 46,96
2. minta 1366,8 1151 693,8 782,2 321,5 228 271,4 190,2 4,718 96,46
3. minta 1366,8 1000 877,9 642,9 507 382,2 136,1 202,1 171,7 92,5
Átlag 1366,8 1166,0 695,6 686,5 428,7 320,0 200,3 176,8 99,1 78,5
VC% 100,0 85,3 55,1 50,2 31,4 23,4 14,7 12,9 7,3 5,8
25. táblázat Viracea-2-4.
XTT toxicitási érték (abszorbancia)
Hígítás 0 1:909494 1:291038 1:93132 1:29802 1:9536 1:3051 1:976 1:312 1:100
1. minta 3,293 3,85 3,606 3,787 3,693 3,657 2,927 3,134 3,131 3,393
2. minta 3,293 3,005 3,662 3,542 3,685 3,828 3,408 2,833 3,074 3,263
3. minta 3,293 3,457 3,648 2,59 2,808 2,558 2,735 2,932 2,892 3,345
Átlag 3,293 3,437 3,639 3,306 3,395 3,348 3,023 2,966 3,032 3,334
CC% 100,0 104,4 110,5 100,4 103,1 101,7 91,8 90,1 92,1 101,2
26. táblázat
Anti-HIV makrofázis vizsgálat (P24) Viracea-2-5.
P24 aktivitás (pg/mL)
Hígítás 0 1:909494 1:291038 1:93132 1:29802 1:9536 1:3051 1:97 1:312 1:100
1. minta 1298,2 1350 793,9 1001 515,9 274 196,3 65,8 16,28 3,904
2. minta 1298,2 1350 858,6 851 780,4 393,3 102,9 110,2 38,79 16,28
3. minta 1298,2 1454 1262 801,2 837,8 396,1 222,2 113,1 42,73 15,72
Átlag 1298,2 1384,7 971,5 884,4 711,4 354,5 173,5 96,4 32,6 12,0
VC% 100,0 106,7 74,8 68,1 54,8 27,3 13,4 7,4 2,5 0,9
27. táblázat Viracea-2-5.
XTT toxicitási érték (abszorbancia)
Hígítás 0 1:909494 1:291038 1:93132 1:29802 1:9536 1:3051 1:976 1:312 1:100
1. minta 3,139 3,459 3,568 3,567 3,634 3,562 3,134 3,311 3,171 2,974
2. minta 3,139 3,018 3,295 3,505 3,533 3,359 2,833 3,313 3,133 2,909
3. minta 3,139 3,21 3,261 3,263 3,297 3,051 2,932 2,829 3,151 3,35
Átlag 3,139 3,228 3,375 3,445 3,488 3,312 2,966 3,151 3,152 3,078
CC% 100,0 102,9 107,5 109,7 111,1 105,5 91,8 100,4 100,4 98,0
HU 226 910 Β1
28. táblázat
In vitro anti-HIV makrofázis vizsgálat Viracea-2
P24 aktivitás (pg/mL)
Hígítás 0 1:909494 1:291038 1:93132 1:29802 1:9536 1:3051 1:976 1:312 1:100
1. minta 1045,9 820,80 913,20 435,90 450,80 180,80 48,78 39,44 41,09 34,49
2. minta 1046,8 790,60 947,90 599,80 243,50 570,60 26,25 17,45 15,25 22,95
3. minta 1045,8 814,80 548,10 305,60 276,60 48,79 63,64 14,70 4,25 42,19
Átlag 1045,8 808,7 803,1 447,1 324,3 266,7 46,2 23,9 20,2 33,2
VC% 100,0 77,3 76,8 42,8 31,0 26,6 4,4 2,3 1,9 3,2
29. táblázat Viracea-2
XTT toxicitási érték (abszorbancia)
Hígítás 0 1:909494 1:291038 1:93132 1:29802 1:9536 1:3051 1:976 1:312 1:100
1. minta 1,439 1,373 1,411 1,446 1,497 1,053 1,518 1,536 1,393 1,289
2. minta 1,439 1,163 1,112 1,554 1,494 1,330 1,032 1,183 1,154 1,244
3. minta 1,439 1,182 1,692 1,024 1,334 1,031 1,482 1,073 1,081 1,271
Átlag 1,439 1,239 1,405 1,341 1,442 1,138 1,344 1,264 1,209 1,268
CC% 100,0 86,1 97,6 93,2 100,2 78,1 93,4 87,8 84,0 88,1
79-90. példák
Kötési és fúzió inhibíciós meghatározások Ezen meghatározások a HIV-1 hosszú végcsoportos ismétlődésű (long terminál repeat, LTR) promoteréböl származó β-galaktozidáz gén tat-protein-indukált transzaktiválás vizsgálatára alkalmas HeLa-CD4-LTRβ-galaktozidáz sejteknek a meghatározására szolgálnak. A módszert mennyiségi meghatározásra alkalmaztuk mind a fertőző vírusoknak a sejtekhez kötődésénél, mind a sejt-sejt fúziók esetén. A fertőzött sejtek syncytiákat képeznek, és X-gal-lal történt inkubáció után mikroszkopikusan könnyen megszámlálhatok. A HÍV kötés inhibíciós vizsgálatot 200 μΙ-ben levő 1*104 HeLa-CD4-LTR^-galaktozidáz sejteken, egyenes aljú 96 cellás mikrotiterlemezeken végeztük. A sejteket egy éjjelen át inkubáltuk, majd a táptalajt eltávolítottuk és 100 μΙ-nyi különböző koncentrációjú ISIS 5320-ra vagy kontrollkompozícióra cseréltük. Egy órával később valamennyi cellába 100 μΙ vírustartalmú táptalajt adagoltunk. A sejteket további egy órán át inkubáltuk, és a monoréteget alaposan mostuk, hogy a kötésbe nem jutott vírust és a sejten kívüli kompozíciót eltávolítsuk. 48 óra elteltével a sejteket fixáltuk és X-gal-lal festettük. A kék, sokmagvú sejteket azután inverz mikroszkóp alatt megszámoltuk. A sejt-sejt fúzió gátlás meghatározását is egyenes aljú 96 cellás mikrotiterlemezeken végeztük. Minden cellába (5χ103) HeLa-CD4-LTR^-galaktozidáz sejtet adagoltunk, és tesztkompozícióval egy órán át inkubáltuk a további 5*103 HL2/3 sejt (28) hozzáadását megelőzően. A sejteket további 48 órán keresztül inkubáltuk, fixáltuk és X-gal-lal festettük. A kék syncytiákat mikroszkopikusan megszámláltuk. A sejtek festését úgy végeztük, hogy a sejteket 1%-os formaldehidoldattal és 0,2%-os glutáraldehiddel fixáltuk, majd a fixált sejteket PBS-ben 4 μΜ kálium-ferro-cianiddal, 4 μΜ kálium-ferri-cianiddal, 2 μΜ MgCI2-dal és 0,4% X-gal-lal festettük. A β-galaktozidáz átaktiválódását is követtük az ELISA teszttel. A sejtkivonatokat fagyasztással-felengedéssel készítettük, és vizsgáltuk a β-galaktozidáz aktivitását, a gyártó ajánlásainak megfelelően. Az ELISA teszt eredményeit spektrofotometriásán 405 nm-nél, Molecular Devices Vmax mikrotiterlemez-leolvasó műszert alkalmazva értékeltük.
30. táblázat
Béta-gal fúziós vizsgálat: Viracea-2/SK1
A kék sejtek száma cellánként
Hígítás 0 1:3200 1:1000 1:320 1:100 1:32 1:10
1. minta 49,0 26,0 16,0 17,0 10,0 2,0 1,0
2. minta 32,0 18,0 16,0 11,0 3,0 2,0 0,0
HU 226 910 Β1
30. táblázat (folytatás)
A kék sejtek száma cellánként
Hígítás 0 1:3200 1:1000 1:320 1:100 1:32 1:10
3. minta 59,0 19,0 20,0 14,0 5,0 3,0 1,0
Átlag 46,7 21,0 17,3 14,0 6,0 2,3 0,7
VC% 100,0 45,0 37,1 30,0 12,8 5,0 1,4
STD DEV 29,3 9,3 4,9 6,4 7,7 1,2 1,2
31. táblázat
Béta-gal fúziós vizsgálat: Viracea-2/SK2
Toxicitás %
Hígítás 0 1:3200 1:1000 1:320 1:100 1:32 1:10
1. minta 1,441 1,59 1,965 1,972 1,799 1,932 0,829
2. minta 1,5 1,543 1,83 1,835 1,897 1,386 0,882
3. minta 1,425 1,536 1,839 1,867 2,036 1,615 0,758
Átlag 1,455 1,558 1,875 1,891 1,911 1,644 0,823
Életképesség % 100,0 106,9 129,0 130,0 131,3 113,0 56,6
32. táblázat
Béta-gal fúziós vizsgálat: Viracea-2
A kék sejtek száma cellánként
Koncentráció 0 1:3200 1:1000 1:320 1:100 1:32 1:10
1. minta 38,0 64,0 50,0 56,0 40,0 50,0 0,0
2. minta 48,0 56,0 77,0 54,0 53,0 54,0 0,0
3. minta 32,0 44,0 46,0 42,0 48,0 47,0 0,0
Átlag 39,3 54,7 57,7 50,7 47,0 50,3 0,0
VC% 100,0 139,0 146,6 128,8 119,5 128,0 0,0
STD DEV 20,5 25,6 42,9 19,3 16,7 8,9 0,0
33. táblázat Viracea-2
Toxicitás %
Koncentráció 0 1:3200 1:1000 1:320 1:100 1:32 1:10
1. minta 1,425 1,998 1,87 1,85 1,592 0,956 0,174
2. minta 1,5 1,911 1,959 1,904 1,645 0,988 0,174
3. minta 1,441 1,976 1,902 1,939 1,623 0,965 0,182
Átlag 1,456 1,962 1,914 1,898 1,620 0,970 0,177
Életképesség % 100,0 134,8 131,5 130,4 111,3 56,6 12,1
Helyi mikrobicid vizsgálat 55
ME1180 nyaki hámsejtet helyeztünk el egyenes aljú cellás mikrotiterlemez belső falaiban, 5x10 sejt cellánkénti sűrűséggel, és egy éjszakán keresztül inkubáltuk. A krónikusan fertőzött H9 sejteket egy órán át kezeltük 200 pg/ml mitomycin C tartalmú teljes táptalajjal, 60 majd alaposan mostuk, és 4x105/ml-re újraszuszpendáltuk. A mitomycin C alkalmazott koncentrációja 48 órás kezelés alatt a krónikusan fertőzött sejtek pusztulásához vezetett, megfelelő időt adva az ME 180 sejtekhez történő sejt-sejt vírustranszmisszióra, miáltal biztosította, hogy a végpont-meghatározáskor a
HU 226 910 Β1 vírusszám nem tartalmazza a krónikusan fertőzött sejtek számát. Valamennyi ME 180 sejtet tartalmazó cellához antivirális kompozíciót és krónikusan fertőzött sejtet (2*104) adtunk, majd 6 órán át inkubáltuk. Az együtt tenyésztést követően a monoréteget alaposan mostuk, és friss táptalajt adtunk hozzá. 24 és 48 órával a fertőzést követően a táptalajt eltávolítottuk, és friss táptalajt adagoltunk, hogy az elhalt lymphocytákat eltávolítsuk. 6 nappal a fertőzést követően a felülúszókat eltávolítottuk, és a mintáik vírustartalmát p24 ELISA teszttel vizsgáltuk.
CD4 expressziós vizsgálatok
A Viraceának a CD4 expresszióra kifejtett hatásának mennyiségi meghatározását standard átfolyásos vérsejtszámlálási technikával (cytometriával) végeztük. A sejteket szövettenyésztő táptalajon, egy órán át, 37 °C-on Viraceával kezeltük. Rövidesen, 60 perc alatt 106 CEM-SS sejtet inkubáltunk, szobahőmérsékleten, kompozícióval vagy anélkül. Anti-CD4 monoklonális antitestet (20 μΙ, 3 pg/ml) (Becton-Dickinson, San Jose, CA) adtunk hozzá, és a sejteket 4 °C-on, 40 percen keresztül inkubáltuk. A sejteket azután PBS-sel kétszer mostuk, 1 °C-os para-formaldehidben visszaszuszpendáltuk, és Becton-Dickinson FACSort folyadék cytometert alkalmazva analizáltuk.
Makromolekuláris szintézis
Nedves CO2-os inkubátorban, 37 °C-on, 24 órán keresztül CEM-SS sejteket tenyésztettünk, három kísérletben, kompozíció jelenlétében vagy anélkül. A tenyészethez 24 óra elteltével 1 pCi [metil-3H]-timidint, [5-3H]-uridint vagy [3,4,5-3H]-uridint adtunk, és az inkubációt további 8 órán keresztül folytattuk. A sejteket Skatron sejtszedő alkalmazásával üvegszálas szűrőpapírokra vittük át. Az üvegszűrőket desztillált vízzel mostuk, szcintillációs fiolában helyeztük el, és Packard Tri-Carb szcintillációs számlálóval meghatároztuk a beépült radioaktivitás mennyiségét.
HIV-teszteredmények
Mikrotiter anti-HIV meghatározásban vizsgáltuk a Viracea-1-et és a Viracea-2-t, amely mennyiségileg jellemzi egy tesztkompozíciónak a HIV-replikációt és a HIV-indukált sejtpusztulást gátló képességét. A két kompozíció a CEM-SS sejtekben a HIV-1 RF törzse ellen aktívnak mutatkozott. A Viracea-1 1:400 hígításnál gátolta a HIV-indukált cytopatikus hatást (IC30), míg a Viracea-2 1:900 hígításban IC25-nek mutatkozott, és nem érte el az 50% gátlási értéket. A CEM-SS sejtekre mind a Viracea-1, mind a Viracea-2 toxicitást (TC30) mutatott, egyenként, közelítőleg 1:20 és 1:250 hígításokban. A pozitív kontroll ddC kompozíció az RF vírussal szemben a várt szintű aktivitást mutatta.
Vizsgáltuk a Viracea-1 és a Viracea-2 aktivitását friss, humán PBMC-kben a ROJO klinikai HÍV izolátumával fertőzve. Ez a lassú szélesztésű izolátum gyógyszerérzékeny (AZT, ddC, nevipramine), syncytium indukáló vírus izolátumnak bizonyult. A nem toxikus koncentrációkban sem a Viracea-1, sem a Viracea-2 nem gátolta ezen izolátum replikációját. A kompozíciók további vizsgálatát a ROJO-val fertőzött PBMC-kben inkább a PBMC-k IL2 stimulálását, mint a PHA blastogenesisét alkalmazva végeztük. Ugyanígy, a PBMC-k növekedését gátló koncentrációk alatt aktivitás nem volt kimutatható. Ezen vizsgálatok során az AZT a várt szintű aktivitást mutatta.
Vizsgáltuk a Viracea-1-et és a Viracea-2-t, az ADA lassú szélesztésű klinikai izolátumával fertőzött friss humán monocyta-makrofágokban. Ezen vizsgálatok során mindkét kompozíció magas szintű aktivitást mutatott, a Viracea-2 volt egyértelműen jobb. A Viracea-1 és a Viracea-2 50% hatékonyságú koncentrációja egyenként az 1:4000 és 1:10 000 arányú volt. Morfológiai vizsgálattal vagy az XTT-tetrazólium festéssel a monocyta-makrofág monorétegre toxieitás nem volt kimutatható. Ezen vizsgálatoknál az AZT az aktivitás várt szintjét mutatta.
Úgy találtuk, hogy a Viracea-1 és a Viracea-2 gátolja a fertőző vírusnak a CD4-expressziós HeLa-CD4LTR-p-galaktozidáz sejtekhez történő kapcsolódását. A vírusnak a célsejtekhez történő kötődésének gátlása mindkét kompozíció esetén, közelítőleg az 1:1000 és az 1:3200 közötti hígításoknál mutatkozott. A burokexpresszáló HL2/3 sejteknek a HeLa-CD4-LTR-p-galaktozidáz sejtekkel történő egyesülésére egyik kompozíciónak sem volt antivirális hatása. Amikor a fúziós vizsgálat egész tartama alatt kompozíció volt jelen, mindkét kompozíció esetén toxicitást figyeltünk meg, ugyanúgy, mint a Viracea-2-vel végzett fúziós vizsgálatban, ahol a kompozíció csak két órán keresztül volt jelen. A Chicago Sky Blue, egy szulfonált színezék, ezen vizsgálatok mindegyikében a várt szintű aktivitást mutatta.
A Viracea-2 közelítően 1:500 (IC30) hígításban megakadályozta a krónikusan fertőzött lymphocytákból a ME180 nyaki hámsejtvonalhoz történő vírustranszmissziót. Ebben a vizsgálatban a ME180 sejtekre toxieitás nem mutatkozott. E vizsgálat során a gyógyszer csak a fertőzés ideje alatt (4 óra) volt jelen. Ezen vizsgálatok során a dextrán-szulfát (pozitív kontroll, szulfátéit poliszacharid) és a dextrán (negatív kontroll) a várt szintű aktivitást mutatta.
Sejtfelületen a CD4 expressziójára a Viracea-2-nek nem volt hatása.
A timidinnek (DNS), uridinnek (RNS) vagy a leucinnak (fehérje) a nagy molekulasúlyú makromolekulákba történő beépülésének gátlását figyeltük meg az 1:320nál nagyobb hígításoknál. A makromolekula szintézis gátlása megegyezik a CEM-SS sejtekben levő kompozíciók toxicitásával.
A HIV-teszteredmények összefoglalása
A Viracea-1 és a Viracea-2 csekély terápiás indexszel gátolja a T-sejtekben a HIV-fertőzést. A Viracea-1 és a Viracea-2 a monoeyta makrofágokban potenciálisan gátolja a HIV-replikációt. A Viracea-1 és a Viracea-2 gátolja a vírusnak a célsejthez történő kapcsolódását, de nem akadályozza meg a fertőzött és
HU 226 910 Β1 nem fertőzött sejtek fúzióját. Helyi mikrobicid vizsgálatban a Viracea-2 gátolja a vírustranszmissziót, és hasznos lehet a HÍV szexuális átvitelének megelőzésében. A Viracea-2-nek sejtfelületen a CD4 expresszióra nincs hatása.
Megelőzés és kezelés
Az antimikrobás kompozíció mikrobicidet és gyógyszert szolgáltat, amely (1) segíthet megelőzni a HÍV szexuális transzmisszióját; (2) ellenőrizheti a HÍV és más vírusok vírusterhelését; (3) kiirthatja a HIV-et; (4) megnyújthatja a HIV-fertőzött betegekben az autoimmun deficiencia szindróma (AIDS) lappangási idejét; (5) csökkentheti a HIV-betegek fájdalmát és szenvedését; (6) csökkentheti a HÍV fertőző szóródását; és (7) a HIV-fertőzött betegek jobb és eredményesebb kezelését nyújthatja. A gyógyszeres kezelés enyhítheti a HÍV, a herpes simplex vírus 1 vagy 2 (HSV-1 vagy HSV) vagy más fertőző mikrobás kórok fertőző kitöréseinek fizikai tüneteit is. Az előbbi megvalósulhat a szokásos alkalmazással, vagy valamely HIV-vel vagy más fertőző mikrobás kórral fertőzött beteg esetén a fentiekben leírt előnyös antimikrobás kompozíciónak (gyógyszernek) a legjobb eredmények elérése érdekében naponta 8-12-szer, előnyösen 10-szer, kétóránként, 10-18 egymást követő napon, előnyösen 14 egymást követő napon (két hét) fecskendővel a rektális csatornába (rektumba, rektális szövetbe, anusba vagy anális szövetbe) vagy a vaginába (vaginális szövetbe) történő injektálásával. Az adagolás, a koncentráció, az antimikrobás kompozíció (gyógyszer) változtatható a betegség súlyosságától, kiterjedésétől, valamint a beteg korától, nemétől, súlyától, életvitelétől és egészségi állapotától függően. A fertőzött területet előnyösen leöblítik (lemossák) és megszárítják, hogy az antimikrobás kompozíció (gyógyszer) alkalmazása előtt a fertőzött területről a szappant vagy más maradványt eltávolítsák. A herpes simplex vírus 1 vagy 2 kezelésére az antimikrobás kompozíció alkalmazható a fertőzött területen, 19-24 órán keresztül. Előnyösen, a herpeszvírus hólyagos kiütései 19-24 óra alatt eloszlanak, és a herpeszsebek fokozatosan meggyógyulnak.

Claims (8)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Készítmény, amely tartalmaz tápanyagot és növényi részt vagy kivonatot, azzal jellemezve, hogy a tápanyag folsav, a növény pedig Echinacea nemzetséghez tartozó növény, és kívánt esetben Commiphora nemzetséghez tartozó további növény, és az Echinacea Echinacea purpurea.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a Commiphora a Commiphora myrrha, Commiphora molmol vagy Commiphora erythrea.
  3. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a Commiphoraként Commiphora myrrhát tartalmaz.
  4. 4. A 2. vagy 3. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a Commiphora myrrhának az Echinacea purpureához viszonyított aránya 1:2 és 1:4 között van.
  5. 5. A 2-4. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a készítmény tartalmaz: 0,1 tömeg%-tól 25 tömeg%-ig, előnyösen 2 tömeg%-tól 12 tömeg%-ig folsavat; 2 tömeg%-tól 90 tömeg%-ig, előnyösen 40 tömeg%-tól 60 tömeg%-ig Echinacea purpureát és Commiphora myrrhát; és előnyösen vizet 20 tömeg%-tól 60 tömeg%-ig.
  6. 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a készítmény felületaktív anyagként 0,02 tömeg% és kevesebb mint 0,26 tömeg% mennyiségig kvaterner ammóniumsót is tartalmaz.
  7. 7. A 6. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a kvaterner ammóniumsó benzalkónium-klorid.
  8. 8. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti készítmény alkalmazása betegségek kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására, mely betegségek kórokozói lehetnek: a humán immundeficiencia vírus (HÍV), herpes simplex vírus 1, herpes simplex vírus 2, varicella zoster vírus (herpes zoster), citomegalovirus, Epstein-Barr, papilloma vírus, vírusos influenza, vrusos parainfluenza, adenovírus, vírusos encephalitis, vírusos meningitis, arbovirus, arenavirus, picornavirus, coronavirus, synstialvirus, cellulitis, staphylococcusok, streptococcusok, mycobacteriumok, bakteriális encephalitis, bakteriális meningitis vagy anaerob baktériumok.
HU0001379A 1997-03-26 1998-03-24 Készítmény humán immundeficiencia vírus és más vírusfertõzések okozta betegségek antimikrobás megelõzésére és kezelésére HU226910B1 (hu)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/824,041 US6350784B1 (en) 1996-02-12 1997-03-26 Antimicrobial prevention and treatment of human immunedeficiency virus and other infectious diseases
PCT/US1998/005792 WO1998042188A1 (en) 1997-03-26 1998-03-24 Antimicrobial prevention and treatment of human immunedeficiency virus and other infectious diseases

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HUP0001379A2 HUP0001379A2 (hu) 2000-08-28
HUP0001379A3 HUP0001379A3 (en) 2000-11-28
HU226910B1 true HU226910B1 (hu) 2010-03-01

Family

ID=25240459

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0001379A HU226910B1 (hu) 1997-03-26 1998-03-24 Készítmény humán immundeficiencia vírus és más vírusfertõzések okozta betegségek antimikrobás megelõzésére és kezelésére

Country Status (30)

Country Link
US (3) US6350784B1 (hu)
EP (1) EP0980203B1 (hu)
JP (2) JP2001527541A (hu)
KR (1) KR100403418B1 (hu)
CN (1) CN1258191A (hu)
AP (1) AP1163A (hu)
AT (1) ATE358418T1 (hu)
AU (1) AU727339B2 (hu)
BG (1) BG63612B1 (hu)
BR (1) BR9807892A (hu)
CA (1) CA2285394C (hu)
CZ (1) CZ298406B6 (hu)
DE (1) DE69837474T2 (hu)
DK (1) DK0980203T3 (hu)
EA (1) EA002423B1 (hu)
EE (1) EE9900436A (hu)
ES (1) ES2285765T3 (hu)
GE (1) GEP20022749B (hu)
HU (1) HU226910B1 (hu)
IL (1) IL132003A (hu)
IS (1) IS5191A (hu)
NO (1) NO325017B1 (hu)
NZ (1) NZ500002A (hu)
OA (1) OA11198A (hu)
PL (1) PL196036B1 (hu)
RS (1) RS49963B (hu)
SK (1) SK285810B6 (hu)
TR (1) TR199902674T2 (hu)
UA (1) UA65563C2 (hu)
WO (1) WO1998042188A1 (hu)

Families Citing this family (64)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6350784B1 (en) * 1996-02-12 2002-02-26 Meryl J. Squires Antimicrobial prevention and treatment of human immunedeficiency virus and other infectious diseases
US9662360B2 (en) 2008-10-09 2017-05-30 Meritus Corporation Treatment of herpes, pseudomonas, staph, and hepatitis
US20090191288A1 (en) * 1996-02-12 2009-07-30 Squires Meryl J Composition to Treat Herpes, Pseudomonas, Staph, Hepatitis and Other Infectious Diseases
JP4873785B2 (ja) 1999-03-26 2012-02-08 サンスター株式会社 Ｉ型アレルギー予防乃至治療用組成物
CA2373844A1 (en) * 1999-06-30 2001-01-11 Unilever Plc Cosmetic skin care compositions containing cumic alcohol
CA2375647A1 (en) 1999-07-08 2001-01-18 Patrick T. Prendergast Use of flavones, coumarins and related compounds to treat infections
US6759434B2 (en) 1999-09-22 2004-07-06 B. Ron Johnson Anti-infective compositions, methods and systems for treating disordered tissue
US8173709B2 (en) * 1999-09-22 2012-05-08 Quadex Pharmaceuticals, Llc Anti-infective methods for treating pathogen-induced disordered tissues
US6211243B1 (en) 1999-09-22 2001-04-03 B. Ron Johnson Methods for treating cold sores with anti-infective compositions
WO2001034170A2 (en) * 1999-11-04 2001-05-17 Maria Antoinette Brandes Phytotherapeutic composition
US7147859B2 (en) * 2000-05-15 2006-12-12 Laboratorios Biosintetica Ltda. Application of phytosterols (and their isomers), folic acid, cyanocobalamin and pyridoxin in dietetic (alimentary) fibers
DE60033699D1 (de) * 2000-06-19 2007-04-12 Skopichenko Dettwiler Victoria Kräuterzusammensetzung enthaltend calendula und eucalyptus für die behandlung und heilung von erkrankungen
AU2002219472A1 (en) * 2001-01-02 2002-07-16 Elisabeth Shanahan-Prendergast Treatment for inhibiting neoplastic lesions using incensole and/or furanogermacrens
IL143318A0 (en) * 2001-05-23 2002-04-21 Herbal Synthesis Corp Herbal compositions for the treatment of mucosal lesions
AU2002367976B2 (en) * 2001-06-05 2007-06-21 The Regents Of The University Of Michigan Nanoemulsion vaccines
US7923023B2 (en) * 2002-02-25 2011-04-12 Astech International LLC Method and composition for delivery of medicants to animals
CH696628A5 (de) * 2002-02-26 2007-08-31 Eprova Ag Verwendung von Folaten zur Herstellung einer Zubereitung geeignet zur Vorbeugung und Behandlung von Entzündungen und entzündungsassoziierter Krankheiten, im Speziellen zur Beeinflussung der
GB0212405D0 (en) * 2002-05-29 2002-07-10 Insignion Holdings Ltd Composition and its therapeutic use
US7115563B2 (en) 2002-05-29 2006-10-03 Insignion Holding Limited Composition and its therapeutic use
US8492443B2 (en) * 2002-07-08 2013-07-23 Joe S. Wilkins, Jr. Treatment for herpes simplex virus and other infectious diseases
FR2843125B1 (fr) * 2002-08-02 2012-11-16 Coletica Principes actifs stimulant les beta-defensives humaines de type 2 et/ou de type 3, et compositions cosmetiques ou pharmaceutiques comprenant de tels principes actifs
EP2387882A3 (en) * 2002-08-12 2012-10-31 Lonza Inc. Antimicrobial compositions comprising cinnamaldehyde
US7273889B2 (en) * 2002-09-25 2007-09-25 Innovative Drug Delivery Systems, Inc. NMDA receptor antagonist formulation with reduced neurotoxicity
IL153124A (en) * 2002-11-27 2010-06-30 Herbal Synthesis Corp Solid composition that can be glued to the lining
US20050036972A1 (en) * 2003-03-10 2005-02-17 Hy-Gene Biomedical Corporation System for managing pathogens and irritants and monitoring usage of anti-bacterial formulations
GB0326518D0 (en) * 2003-11-13 2003-12-17 Compton Developments Ltd Anti-cancer compounds
WO2005046695A1 (en) * 2003-11-17 2005-05-26 Maria Waithira Njuguna Injection vitamin b complex for treatment of non specific vaginitis (bacterial vaginitis)
US20080124408A1 (en) * 2004-07-07 2008-05-29 Mediherb Holdings Ltd. Echinacea Formulation
WO2006031230A1 (en) * 2004-09-10 2006-03-23 Hy-Gene Biomedical Corporation System for managing pathogens and irritants and monitoring usage of anti-bacterial formulations
US10138279B2 (en) 2006-04-13 2018-11-27 Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for Bacillus anthracis vaccination
US20080038295A1 (en) * 2006-04-13 2008-02-14 Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for orthopox virus vaccination
US9839685B2 (en) * 2006-04-13 2017-12-12 The Regents Of The University Of Michigan Methods of inducing human immunodeficiency virus-specific immune responses in a host comprising nasally administering compositions comprising a naonemulsion and recombinant GP120 immunogen
JP2007332126A (ja) * 2006-06-16 2007-12-27 Teikyo Univ ヒトおよび愛玩動物のための抗白癬入浴剤
CN101697966B (zh) * 2007-01-08 2011-10-19 杭州民生药业有限公司 蓬莪术环二烯在制备治疗由病毒引起的疾病的药物中的应用
DE102007029042A1 (de) * 2007-06-21 2008-12-24 Analyticon Discovery Gmbh Pharmazeutische Zusammensetzung mit einem Trihydroxychromenone-Derivate
US8637094B2 (en) 2007-07-18 2014-01-28 Iraj E. Kiani Composition and method for treating viral conditions
US7850998B2 (en) * 2007-07-18 2010-12-14 Kiani Iraj E Method of treating viral conditions
US7700137B1 (en) 2007-07-18 2010-04-20 Kiani Iraj E Anti-viral compositions and method
WO2009143524A2 (en) * 2008-05-23 2009-11-26 The Regents Of The University Of Michigan Nanoemulsion vaccines
CA2731445C (en) * 2008-07-22 2018-05-15 Izun Pharmaceuticals, Inc. Topical anti-inflammatory combination having actives of sambucus nigra, centella asiatica or echinacea purpurea
CH699653B1 (de) * 2008-09-08 2010-05-14 Bioforce Ag Roggwil Tg Zubereitung zur Prävention und/oder Behandlung und/oder Verhinderung der Weiterverbreitung von Atemwegserkrankungen.
WO2010091280A1 (en) * 2009-02-06 2010-08-12 Alcon Research, Ltd. N-halogenated amino acid formulations comprising phosphine or amine oxides
US20100303935A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Squires Meryl J Medicinal Composition
ES2566646T3 (es) * 2009-06-16 2016-04-14 The Regents Of The University Of Michigan Vacunas en nanoemulsión
EP2324840B1 (en) * 2009-11-18 2019-03-20 Croda Italiana S.p.A. Production of caffeoylquinic acids from plant cell cultures of echinacea angustifolia
EP2523675B1 (en) * 2010-01-11 2019-03-06 Vitro-Bio Sarl New synergistic compositions for the treatment of topical viral infections
AU2011227202A1 (en) * 2010-03-17 2012-10-04 Arbonne International Llc Oral supplement
WO2012069605A1 (en) 2010-11-26 2012-05-31 Dr. August Wolff Gmbh & Co. Kg Arzneimittel Novel e,e-diene compounds and their use as medicaments and cosmetics
DK2500026T3 (da) * 2011-03-17 2013-08-26 Sonia Pharma Gmbh Behandling af menopausale symptomer som moderne indikation for myrra
US8287924B2 (en) 2011-03-17 2012-10-16 Sonia Pharma Gmbh Treatment of menopausal symptoms as novel indication for myrrh
JP5519879B2 (ja) * 2011-03-17 2014-06-11 ソニア ファーマ ゲーエムベーハー ミルラの新規な適用としての更年期症状としての膣の委縮の処置
KR101334348B1 (ko) * 2011-12-21 2013-11-29 한국생명공학연구원 바이러스 억제 활성을 갖는 플라보노이드 화합물
US9463180B2 (en) 2013-03-14 2016-10-11 Quadex Pharmaceuticals, Llc Treatment of molluscum contagiosum
US9549930B2 (en) 2013-03-14 2017-01-24 Quadex Pharmaceuticals, Llc Combined systemic and topical treatment of disordered and/or prodromal stage tissue
US9125911B2 (en) 2013-03-14 2015-09-08 Quadex Pharmaceuticals, Llc Combined systemic and topical treatment of disordered tissues
PT2792389T (pt) * 2013-04-17 2020-01-20 Global Health Solutions Ag Composição farmacêutica antiviral contendo um extracto de junco picante
CA2955981C (en) 2014-07-22 2022-10-25 Ralco Nutrition, Inc. Antiviral compositions comprising one or more essential oils
CN106496202B (zh) * 2015-09-06 2019-08-06 中国海洋大学 一种生物碱类化合物及其制备方法与作为抗单纯疱疹ⅰ型病毒剂的应用
US20200179299A1 (en) 2018-12-07 2020-06-11 Global Biolife Inc. Composition and method of controlling infectious diseases with functional fragrances
EP3894018A4 (en) * 2018-12-11 2022-11-02 Glyciome, LLC TOPICAL, ISOTONIC COMPOSITIONS FOR GENITAL USE
KR102416208B1 (ko) * 2020-01-08 2022-07-01 건국대학교 산학협력단 발효된 선복화 추출물을 포함하는 항인플루엔자 바이러스용 조성물
IT202000018970A1 (it) * 2020-08-03 2022-02-03 Asoltech Srl Composizione a base di mirra
LU102656B1 (de) 2021-03-11 2022-09-12 Prosecur Gmbh Flüssiges Nahrungsergänzungsmittel zur Immunstimulation, Verfahren zu dessen Herstellung sowie Verwendung
CN115414349B (zh) * 2022-08-26 2023-11-03 武汉科前生物股份有限公司 芹菜素在制备治疗猫鼻支气管炎药物中的用途

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4283421A (en) * 1979-12-19 1981-08-11 Ray Frank F Anti-viral treatment
US4760079A (en) * 1983-01-10 1988-07-26 Baltech, Inc. Treatment of diseases caused by herpes viruses
US4935448A (en) * 1983-01-10 1990-06-19 Baldone Joseph A Treatment of diseases caused by herpes viruses
US4661354A (en) * 1984-06-21 1987-04-28 Finnerty Edmund F Topical treatment of herpes simplex with a zinc sulfate-camphor water solution
US4797420A (en) * 1984-08-14 1989-01-10 Jabco Manufacturing, Inc. Disinfectant formulation and method of use
US4585656A (en) * 1984-08-20 1986-04-29 Rosenthal Harold R Treatment of herpes
DE3521143A1 (de) * 1985-06-13 1986-12-18 Robugen Gmbh Arzneimittel zur behandlung schwerer herpes-infektionen
DE3522075A1 (de) * 1985-06-20 1987-01-02 Lomapharm Rudolf Lohman Gmbh K Sesquiterpenverbindungen, verfahren zu ihrer isolierung und arzneimittel, enthaltend diese verbindungen
EP0213099A3 (de) * 1985-08-23 1989-07-19 Cederroth Nordic Aktiebolag Mittel mit antiphlogistischer, immunstimulierender und zytoprotektiver Wirkung, ihre Herstellung und pharmazeutische Verwendungen
DE3533563A1 (de) * 1985-09-20 1987-03-26 Michael Birzer Mep-aids mittel
FR2620698B1 (fr) * 1987-09-23 1990-08-10 Atlantic Pharma Prod Fluorure d'ammonium quaternaire et son application dans une substance inhibitrice ou destructrice d'etres vivants unicellulaires
US5149529A (en) * 1988-04-08 1992-09-22 Board Of Trustees Of Leland Chiron Corporation Compositions and treatment for herpes simplex
DE4017091A1 (de) 1990-05-27 1991-11-28 Walter Dr Mach Molekuelverbundsystem zur kontra-eskalativen therapie viraler infektionskrankheiten
US6348503B1 (en) * 1996-02-12 2002-02-19 Meryl J. Squires Method and topical treatment composition for herpesvirus hominis
US6355684B1 (en) * 1990-10-11 2002-03-12 Meryl J. Squires Antimicrobial treatment for herpes simplex virus and other infectious diseases
US6350784B1 (en) * 1996-02-12 2002-02-26 Meryl J. Squires Antimicrobial prevention and treatment of human immunedeficiency virus and other infectious diseases
US5248503A (en) * 1992-01-03 1993-09-28 Emanuel King Rosalba Herbal dietary supplement
US5461029A (en) * 1992-04-24 1995-10-24 American Cyanamid Company Method of treating herpes viral infections using HBNF and MK proteins
US5455033A (en) * 1993-05-21 1995-10-03 Degree/Silverman M.D. Inc. Medicinal composition for treatment of inflammation
NL9500216A (nl) 1995-02-06 1996-09-02 Bio Pharma Sciences Bv Farmaceutische samenstelling voor de behandeling van herpes.
US5876728A (en) * 1995-02-15 1999-03-02 Howard David Kass Natural composition extracted from plants used in the treatment of cancer
AU679162B3 (en) * 1995-11-21 1997-06-19 Stolair Pty Ltd Therapeutic compositions

Also Published As

Publication number Publication date
SK131899A3 (en) 2000-12-11
ES2285765T3 (es) 2007-11-16
CN1258191A (zh) 2000-06-28
WO1998042188A1 (en) 1998-10-01
BR9807892A (pt) 2000-02-22
YU48099A (sh) 2002-03-18
NZ500002A (en) 2001-09-28
NO994639D0 (no) 1999-09-24
HUP0001379A3 (en) 2000-11-28
TR199902674T2 (xx) 2000-02-21
AP1163A (en) 2003-06-30
BG63612B1 (bg) 2002-07-31
AP9901661A0 (en) 1999-09-30
CA2285394A1 (en) 1998-10-01
SK285810B6 (sk) 2007-08-02
DE69837474D1 (de) 2007-05-16
IL132003A (en) 2005-08-31
EA199900773A1 (ru) 2000-10-30
IS5191A (is) 1999-09-23
EP0980203A4 (en) 2004-05-06
HUP0001379A2 (hu) 2000-08-28
DK0980203T3 (da) 2007-07-30
JP2001527541A (ja) 2001-12-25
KR100403418B1 (ko) 2003-10-30
IL132003A0 (en) 2001-03-19
ATE358418T1 (de) 2007-04-15
OA11198A (en) 2003-05-30
EP0980203B1 (en) 2007-04-04
US20060024393A1 (en) 2006-02-02
US6350784B1 (en) 2002-02-26
RS49963B (sr) 2008-09-29
CA2285394C (en) 2013-01-08
PL196036B1 (pl) 2007-11-30
US20030104082A1 (en) 2003-06-05
CZ298406B6 (cs) 2007-09-26
KR20010005603A (ko) 2001-01-15
EP0980203A1 (en) 2000-02-23
NO994639L (no) 1999-11-24
BG103786A (bg) 2000-10-31
GEP20022749B (en) 2002-08-26
DE69837474T2 (de) 2007-12-13
JP2000119188A (ja) 2000-04-25
UA65563C2 (uk) 2004-04-15
EE9900436A (et) 2000-04-17
NO325017B1 (no) 2008-01-14
CZ336899A3 (cs) 2000-07-12
PL336168A1 (en) 2000-06-05
AU727339B2 (en) 2000-12-07
US7071233B2 (en) 2006-07-04
EA002423B1 (ru) 2002-04-25
AU6771898A (en) 1998-10-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU226910B1 (hu) Készítmény humán immundeficiencia vírus és más vírusfertõzések okozta betegségek antimikrobás megelõzésére és kezelésére
US20090191288A1 (en) Composition to Treat Herpes, Pseudomonas, Staph, Hepatitis and Other Infectious Diseases
AU716247B2 (en) Antimicrobial treatment for herpes simplex virus and other infectious diseases
US9662360B2 (en) Treatment of herpes, pseudomonas, staph, and hepatitis
HRP20041177A2 (hr) Mikrobicidni pirimidini ili triazini za prevenciju prijenosa hiv seksualnim putem
MXPA99008750A (es) Prevencion y tratamiento antimicrobianos de virus de inmunodeficiencia humana y otras enfermedades infecciosas
MXPA98009256A (en) Antimicrobial treatment for herpes simplex virus and other infectious diseases

Legal Events

Date Code Title Description
FH92 Termination of representative

Representative=s name: MESZAROS GYULANE, BUDAPATENT SZABADALMI ES VED, HU

FD9A Lapse of provisional protection due to non-payment of fees
NF4A Restoration of patent protection
FH91 Appointment of a representative

Free format text: FORMER REPRESENTATIVE(S): MESZAROS GYULANE, BUDAPATENT SZABADALMI ES VEDJEGY IRODA KFT., HU

Representative=s name: IFJ. SZENTPETERI ADAM SZABADALMI UEGYVIVOE S.B, HU

NF4A Restoration of patent protection
MM4A Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees
NF4A Restoration of patent protection
MM4A Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees
NF4A Restoration of patent protection
MM4A Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees
NF4A Restoration of patent protection
MM4A Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees