DE69837474T2 - Antimikrobielle vorbeugung gegen und behandlung von aids und anderer infektiöser krankheiten - Google Patents

Antimikrobielle vorbeugung gegen und behandlung von aids und anderer infektiöser krankheiten Download PDF

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Description

  • HINTERGRUND DER ERFINDUNG
  • Die vorliegende Erfindung betrifft den Human-Immunmangel-Virus und insbesondere medizinische Behandlungen und Vorbeugungen gegen den Human-Immunmangel-Virus und andere mikrobielle Infektionen.
  • Es ist berichtet worden, dass es derzeit etwa 22 Millionen Menschen gibt, die weltweit mit dem Human-Immunmangel-Virus(HIV) infiziert sind. Der größte Anteil von neuen HIV-Fällen hat ihren Ursprung in Afrika und der Karibik. Der übliche Ablauf einer HIV-Infektion wird in unterschiedliche Stadien eingeteilt: 1) Virusübertragung; 2) akutes retrovirales Syndrom; 3) Serokonversion; 4) ein klinisch latenter Zeitraum mit oder ohne persistierender generalisierter Lymphadenopathie(PGL); 5) frühe symptomatische HIV-Infektion, die früher als AIDS-bezogenen Komplex oder ARC bekannt war, oder seit jüngstem als "B-Symptome" gemäß der CDC-Klassifizierung von 1993 bezeichnet wird; 6) erworbenes Immunmangelsyndrom (AIDS)(AIDS-Indikator-Bedingung gemäß den CDC-Kriterien von 1987 oder den revidierten CDC-Kriterien von 1993, welche eine CD4-Zellzahl von < 200/mm3 einschließen); und 7) fortgeschrittene HIV-Infektion, die durch eine CD4-Zellzahl von < 50/mm3 gekennzeichnet ist. CD4-Zellen sind Lymphozyten, die durch HIV angegriffen werden. Im Jahr 1993 änderte die CDC die Definition von AIDS, um alle Patienten mit einer CD4-Zahl von < 200/mm3 einzuschließen; diese Definition schließt Patienten in den Stufen 4–7 ein, unabhängig von Symptomen.
  • Das anfängliche akute retrovirale Syndrom wird durch eine steile Abnahme in den CD4-Zellzahlen, hohe kultivierbare Plasmavirämie und hohe Konzentrationen von HIV-RNA im Plasma begleitet. Eine klinische Erholung tritt auf, und die HIV-RNA-Plasmavirämie auf hohem Niveau wird durch die Entwicklung einer zytotoxischen T-Lymphozyten (CPL)-Antwort verringert. Die CD4-Zellzahl nimmt über mehrere Jahre hinweg allmählich ab und zeigt dann eine beschleunigte Abnahme bei 1,5–2 Jahre vor einer AIDS-definierenden Diagnose. HIV-RNA-Konzentrationen im Plasma sind relativ stabil, bis die HIV in einem späten Stadium ist, wenn die CD4-Zahl < 200/mm3 ist, und der klinische Verlauf ist durch Infektionen, bestimmte Tumore, Kräftezerfall und neurologische Komplikationen gekennzeichnet. Im Allgemeinen entwickeln etwa 10% der Patienten eine AIDS-definierende Diagnose, noch bevor die CD4-Zahl auf 200/mm3 abnimmt. Der derzeitige mittlere Zeitraum bis zu einer AIDS-definierenden Komplikation bei einer CD4-Zahl von 200/mm3 beträgt 12–18 Monate. Ohne eine Therapie gegen HIV oder eine PCP-Prophylaxe beträgt der durchschnittliche Zeitraum von der Virusübertragung bis hin zu einer AIDS-definierenden Diagnose etwa 10 Jahre, und die Überlebenszeit nach einer AIDS-definierenden Komplikation betrug früher etwa ein Jahr.
  • Die gesamte Abfolge von Ereignissen für einen durchschnittlichen Patienten, ohne eine gegen HIV gerichtete Behandlung, beträgt etwa 10 Jahre von der Serokonversion bis zum Tod. Die mittlere Zeit von HIV-Serokonversion bis zu AIDS betrug nach Berichten etwa 7 Jahre für Transfusionsempfänger, 10 Jahre für Hämophile, 10 Jahre für Drogenabhängige und 8–12 Jahre für homosexuelle Männer. Die Progressionsraten erscheinen bezüglich des Geschlechtes, der Rasse und der Risikokategorie ähnlich, wenn sie bezüglich der Pflegequalität angepasst werden. Für Patienten im Alter von 16–24 Jahren bei Serokonversion betrug die mittlere Zeit 15 Jahre; für jene bei über 35 Jahren bei Serokonversion betrug sie 6 Jahre.
  • Eine HIV-Infektion kann durch Geschlechtsverkehr, durch Arzneistofftransfusionen mit kontaminiertem Blut, durch Drogensüchtige mit infizierten Nadeln oder durch perinatale Übertragung erworben werden. Eine symptomatische primäre HIV-Infektion, die auch als ein akutes retrovirales Syndrom bezeichnet wird, wurde bei den vorgenannten Risikokategorien mit einer Häufigkeit von 50–90% angegeben. Dieses Syndrom wurde ebenfalls bei sieben von acht Pflegekräften, bei denen eine HIV-Übertragung durch berufsmäßiges Ausgesetztsein erfolgte, festgestellt. Die Zeit von der Exposition bis zum Beginn der Symptome beträgt für gewöhnlich 2–4 Wochen, jedoch kann die Inkubation bis zu sechs Wochen betragen. Typische Symptome sind: Fieber, Adenopathie, Pharyngitis, Ausschlag mit erythematösem Makulopapular mit 5–10 mm großen Läsionen auf Gesicht und Leib, manchmal auf den Extremitäten, einschließlich Handflächen und Sohlen, oder eine mukokutanöse Ulzeration an Mund, Ösophagus oder Genitalien, Myalgien oder Arthralgien, Durchfall, Kopfschmerzen, Hepatosplenomegalie, Schleimhautcandidose, Übelkeit und Erbrechen. Neurologische Symptome können Meningoenzephalitis, periphere Neuropathie, Fazioplegie, Guillain-Barré-Syndrom, Brachialis neuritis, Radikulopathie, kognitive Beeinträchtigung und Psychose einschließen. Die akute Erkrankung wird allgemein durch hochgradige HIV-Virämie mit p24-Antigenämie, Plasmavirämie und hohen Titern an HIV in mononukleären Zellen des peripheren Blutes begleitet.
  • Die zytotoxische T-Lymphozyten(CTL)-Antwort ist zuerst und geht für gewöhnlich einer nachweisbaren humoralen Antwort mehrere Wochen voraus. Die CTL-Antwort wird von einer 3–5 log-Abnahme in der HIV-Konzentration im peripheren Blut begleitet. Das hohe Ausmaß an Virämie während dieser akuten Phase der Erkrankung kann mit einer Verbreitung des Virus zum ZNS und lymphatischem Gewebe einhergehen. Das Lymphgewebe dient als das Hauptreservoir der HIV-Last und der Replikation. Die Infektion von nicht-lymphoiden Organen mit hohen Spiegeln an HIV scheint in späten Stadien des HIV aufzutreten.
  • Das Vorhandensein dieser Symptome im Vergleich zur asymptomatischen Serokonversion sowie einer längeren Krankheit von mehr als 14 Tagen scheinen mit einer rascheren Entwicklung zu AIDS zu korrelieren. Serokonversion mit positiver HIV-Serologie erfolgt allgemein 6–12 Wochen nach der Übertragung, wie durch Transfusion oder Nadelverletzungen durch einen Beschäftigten in der Krankenpflege. Der mittlere Zeitraum beträgt 63 Tage. Die CTL-Antwortreaktion geht mit einer starken Reduzierung der quantitativen viralen Belastung im Blut, der klinischen Erholung von dem akuten retroviralen Syndrom und der Rückkehr der CD4-Zellen-Auszählung zu höheren Werten, die häufig für die meisten Labors im normalen Bereich liegen, einher.
  • Der HIV-Patient wird klinisch asymptomatisch und hat allgemein keine Befunde nach einer körperlichen Untersuchung mit Ausnahme einer anhaltenden generalisierten Lymphadenopathie (PGL), welche vergrößerte Lymphknoten umfasst. Untersuchungen von Lymphknoten zeigen hohe Konzentrationen von HIV als extrazellulärem Virus, das auf den Fortsätzen von follikulären dendritischen Zellen innerhalb von Keimzentren und als intrazellulärer Virus vorwiegend in latenter Form festgehalten wird. Das Lymphgewebe dient als Hauptreservoir für HIV, die follikulären dendritischen Zellen filtern und fangen freies Virus und infizierte CD4-Zellen ein, und die Viruslast in den mononukleären Zellen im peripheren Blut ist relativ gering. Mit dem Fortschreiten der Erkrankung wird die Lymphknotenkonfiguration durch HIV aufgebrochen.
  • Virologische Untersuchungen bei Patienten mit asymptomatischer HIV-Infektion zeigen hohe Raten der HIV-Replikation mit der Bildung von durchschnittlich 109 Virionen täglich. Die virale Replikation geht mit einer massiven Zerstörung und der Bildung von 109 CD4-Zellen täglich einher. Die Umsatzrate der CD4-Zellen repräsentiert 6–7% der CD4-Zellen des gesamten Körpers, sodass der gesamte Vorrat alle 15 Tage umgesetzt wird. AIDS wurde als eine Folge von kontinuierlicher, hochgradiger Replikation von HIV-1 angesehen, die zur virus- und immunvermittelten Zerstörung von CD4-Lymphozyten führt.
  • Eine fortgeschrittene HIV-Infektion tritt bei Patienten mit einer CD4-Zellenzahl von < 50/mm3 auf. Diese Patienten haben eine begrenzte Lebenserwartung mit einem Median der Überlebensdauer von 12–18 Monaten. Praktisch alle Patienten, die an HIV-bedingten Komplikationen sterben, befinden sich in diesem CD4-Zellzahlstratum.
  • Die Food & Drug Administration(FDA) hat zahlreiche Inhibitoren der Reversen Transkriptase(RT) zugelassen. RT-Enzyme wandeln virale RNA in DNA um. RT-Enzyme wandeln virale RNA in DNA um. RT-Inhibitoren können diesen Prozess unterbrechen. Der RT-Inhibitor AZT, welcher unter den Handelsnamen Retrovir und Zidovudin von Glaxo Wellcome vertrieben wird, wurde 1987 von der FDA genehmigt. Der RT-Inhibitor ddI, welcher unter den Handelsnamen Videx und Didanosin von Bristol-Myers Squibb vertrieben wird, wurde 1991 von der FDA zugelassen. Der RT-Inhibitor ddC, der unter den Handelsnamen HIVID und Dideoxycyytidin von Hoffman-LaRoche vertrieben wird, wurde 1992 von der FDA zugelassen. Der RT-Inhibitor d4T, der unter den Handelsnamen Zerit und Stavudin von Bristol-Meyers Squibb vertrieben wird, wurde 1994 von der FDA zugelassen. Der RT-Inhibitor 3TC, der unter den Handelsnamen Epivir und Lamivundin von Glaxo Wellcome vertrieben wird, wurde 1995 von der FDA zugelassen. Der TR-Inhibitor Nevirapin, der unter dem Handelsnamen Viramun von Boehringer Ingelheim vertrieben wird, wurde 1996 von der FDA zugelassen.
  • Die Food & Drug Administration(FDA) hat nun drei Proteaseinhibitoren für die Behandlung einer Human-Immunmangel-Virus-(HIV-)Infektion zugelassen. Saquinavir, das unter dem Handelsnamen Invirase von Hoffman-LaRoche Laboratories vertrieben wird, war der erste Protease inhibierende Wirkstoff, der von der FDA zugelassen wurde. Ritonavir, ein weiterer Protease-Inhibitor, der unter dem Handelsnamen Norvir von Abbott Laboratories vertrieben wird, erhielt die FDA-Zulassung im März 1996, ebenso wie Indinavir, das unter dem Handelsnamen Crixivan von Merck & Co vertrieben wird.
  • Proteaseinhibitoren haben eine andere Wirkungsweise als die zuvor zugelassenen Anti-HIV-Arzneistoffe, wie die Nukleosid-Analoga AZT und 3TC, die unter den Handelsnamen Zidovudin und Lamivundin von Glaxo Wellcome vertrieben werden, ddl und d4T, die unter den Handelsnamen Didanosin und Stavudin von Bristol-Myers Squibb vertrieben werden, und ddC, das unter dem Handelsnamen Dideoxycytidin von Roche Laboratories, vertrieben wird. Proteaseinhibitoren blockieren das Enzym, welches HIV für die Vollendung seines Replikationszyklus und die Bildung von lebensfähigen neuen Viren benötigt. Ohne das Proteaseenzym können virale Strukturproteine nicht richtig hergestellt werden, und es wird ein fehlerhaftes, nicht-infektiöses Virus gebildet. Die Nukleosid-Analoga blockieren ein anderes Reverse-Transkriptase-Enzym. Diese Wirkung kann verhindern, dass virale RNA virale DNA erzeugt, welche sich dann in der DNA von menschlichen Zellen einlagern kann. Das Kombinieren von einem oder mehreren Inhibitoren Reverser-Transkriptase mit einem Proteaseinhibitor, manchmal als "Cocktail" bezeichnet, soll angeblich die HIV-Replikation an zwei Punkten im Replikationszyklus angreifen. Klinische Versuche, in denen Saquinavir mit AZT, ddC oder beiden kombiniert wird, zeigen eine stärkere Abnahme von HIV-Partikeln im Blut, manchmal als Viruslast bezeichnet, und einen größeren Anstieg der CD4-Zellen (T-Lymphozyten) als bisher mit Inhibitoren von Reverser-Transkriptase allein beobachtet wurde. Manchmal waren die Cocktails toxisch und unwirksam für einige Patienten. Der klinische Nutzen bezüglich einer verbesserten Überlebensrate oder einer verringerten Erkrankungsfortschrittsrate wurde jedoch nicht vollständig für die Kombination (Cocktails) von RT-Inhibitoren und Proteaseinhibitoren nachgewiesen. Ärzte beginnen, HIV jedoch als eine chronische, handhabbare Erkrankung zu betrachten, und nicht als ein Todesurteil.
  • Saquinavir-Proteaseinhibitoren wurden von der FDA für die Anwendung in der Kombination mit Inhibitoren von Reverser-Transkriptase bei Patienten mit fortgeschrittenem AIDS zugelassen. Saquinavir-Proteaseinhibitoren können von einigen Patienten ohne die hämotologischen oder neurologischen Toxizitäten, die mit den Nukleosid-Analoga anzutreffen sind, vertragen werden. Bestimmte verschreibungspflichtige Arzneimittel, einschließlich Rifampin, Rifabutin, Phenobarbital, Dilantin und Dexamethason, können die Plasmaspiegel von Saquinavir-Proteaseinhibitoren signifikant absenken und sollten bei Patienten, die Saquinavir nehmen, vermieden werden. Über die virale Resistenz gegenüber Saquinavir-Proteaseinhibitoren ist wie bei anderen Anti-HIV-Arzneistoffen berichtet worden.
  • Ritonavir- und Indinavir-Proteaseinhibitoren scheinen gegen HIV wirksamer zu sein als die gegenwärtige Formulierung von Saquinavir. Ritonavir-Proteaseinhibitoren erfordern eine Kühlung. Ritonavir-Proteaseinhibitoren werden derzeit in Kombination mit Nukleosid-Analoga (Arzneistoffe wie AZT) oder als Monotherapie eingesetzt. In einer frühen Studie wurden 32 Patienten mit Ritonavir plus AZT plus ddC behandelt. Nach 20 Wochen stiegen die mittleren CD4-Zellzahlen von 83 Zellen/mm3 an der Basislinie auf 106 Zellen/mm3 an. Die Viruslast, ein Maß für die Zahl der Viruskopien im Blut, nahm um nahezu das 100-Fache ab. Ritonavir wird mit 600 mg oral zweimal täglich dosiert, was zwölf Kapseln pro Tag erfordern kann. Der Arzneistoff ist in 100 mg Kapseln verfügbar. Nebenwirkungen sind ziemlich häufig und schließen gastrointestinale Symptome mit Übelkeit, Erbrechen und Durchfall ein. Andere Nebenwirkungen schließen Taubheit und Kribbeln, insbesondere um den Mund, sowie Leberentzündung, welche eine Form von Hepatitis ist, ein.
  • Indinavir-Proteaseinhibitoren erhielten eine schnellere FDA-Zulassung auf Basis von Studien, welche die mittleren Anstiege bei den CD4-Auszählungen von etwa 100 Zellen/mm3 und die Abnahmen in der Viruslast von fast dem 100-Fachen mit einer Kombination von AZT plus 3TC plus Indinavir nachweisen. Indinavir wird mit 800 mg oral dreimal täglich dosiert (2 Kapseln, 3 Mal täglich). Im Gegensatz zu Ritonavir kann Indinavir auf einen leeren Magen zur Verbesserung der Absorption genommen werden. Indinavir verursacht weniger gastrointestinale Nebenwirkungen als Ritonavir und scheint insgesamt von einigen Patienten besser vertragen zu werden. Die Hauptnebenwirkung von Indinavir-Proteaseinhibitoren ist die Entwicklung von Nierensteinen. Der Arzneistoff wird teilweise im Urin ausgeschieden und kann unter Bildung von Steinen kristallisieren, wenn keine ausreichende Hydratation aufrechterhalten wird. Indinavir-Proteaseinhibitoren können ebenfalls die Leber beeinträchtigen, was zu einem Anstieg der Blutspiegel von Bilirubin, d. h. einem aus dem Zerfall von roten Blutzellen gebildeten Gallenpigment führt. Indinavir-Proteaseinhibitoren können auch Arzneistoffwechselwirkungen verursachen.
  • Die Analyse der Resistenz gegenüber Proteaseinhibitoren wurde nicht vollständig bestimmt. Saquinavir- und Ritonavir-Proteaseinhibitoren können derzeit den Patienten ungefähr $US 600 pro Monat kosten. Indinavir-Proteaseinhibitoren werden auf etwa 30% unter diesem Preis veranschlagt. Eine Drei-Arzneistoff-Kombination von AZT plus 3TC plus Ritonavir-Proteaseinhibitoren kann einen Patienten mehr als $US 1000/Monat kosten. Kombinationen (Cocktails) von RT-Inhibitoren und Proteaseinhibitoren können gar $ 25 000 pro Jahr kosten. Obwohl Proteaseinhibitoren hilfreich sein können, haben die medizinische Gemeinschaft und Gesellschaft noch nicht die Probleme der Patientenkosten für diese teuren Arzneistoffe gelöst.
  • Herpes simplex-Virus(HSV), das häufig als "Herpes virus" oder "Herpes" bezeichnet wird, ist eine infektiöse Erkrankung, welche auch national Krisenausmaße mit geschätzten Zahlen von infizierten Leuten von 70%–80% unserer Bevölkerung erreicht hat, wie von der American Societal Health Association (ASHA) berichtet, und wächst jährlich um 500 000 Personen. Es gibt zwei gängige Typen von Herpes: Herpes simplex-Virus 1(HSV 1) und Herpes simplex-Virus 2(HSV 2). Herpes gelangt durch winzige Risse im epidermalen Gewebe in der Regel durch Kontakt mit einem infizierten Wirt in den menschlichen Körper und ist durch den Ausbruch von einem oder mehreren Bläschen, in der Regel in Gruppen, nach einer Inkubationsperiode von ungefähr vier Tagen gekennzeichnet. Typischerweise setzt der Verlauf des infektiösen Ausbruchs mit dem prodromalen Stadium ein, geht zum Ausbruch von Bläschen über, gefolgt von einer Geschwürbildung, einer Koaleszierung, einer Auflösung und der Latenzperiode. Der Ausbruch kann mehrere Wochen dauern und dauert durchschnittlich zwei bis drei Wochen. Bei einigen immungeschädigten Personen kann der Ausbruch Monate dauern. Die Bläschen können irgendwo auf der Haut oder Schleimhaut auftreten und treten typischerweise auf den Lippen als Fieberbläschen, Drüsen, der Mundschleimhaut, der Konjunktiva und der Kornea, den Genitalien, der analen Schleimhaut und dem perianalen Gewebe auf.
  • Herpes-Symptome schließen Folgendes ein: Leistenschwellung, Schmerz, Fieber, Unbehagen, Kopfschmerzen, Muskelschmerzen und angeschwollene Drüsen. Einige Personen, bei denen der Nervus trigeminus mit oralem Herpes in Mitleidenschaft gezogen wurde, haben furchtbare Gesichtsschmerzen, Schwierigkeiten beim Schlucken, Essen, und Gesichtsschwellungen. Personen, bei denen der Sakralnerv betroffen ist, haben starke Oberschenkelschmerzen, Schwellungen und große Schwierigkeiten beim Laufen.
  • Herpes simplex-Virus-(HSV-)Infektion ist rekrudeszent, sitzt in den Nervenganglien und kehrt dann infolge irgendeines, bislang noch unbekannten Anreizes wieder. Wiederkehrende Herpesinfektionen können von fast allem ausgelöst werden, darin eingeschlossen: zu starkes Ausgesetztsein an Sonnenlicht; Mangelernährung; Stress; Menstruation; Immunsuppression; bestimmte Lebensmittel; Arzneistoffe; fieberhafte Krankheit; etc. Vor kurzem wurde Herpesvirus von Herzgewebe isoliert.
  • HSV 1- und HSV 2-Infektionen bedeuten sehr ernsthafte Gesundheitsbedrohungen, die häufig: Blindheit; erhöhtes Krebsrisiko des Gebärmutterhalses; aseptische Meningitis und Encephalitis; neonatale Todesfälle; Virämie; etc. verursachen. Die verheerenden Wirkungen dieser Erkrankung gehen deutlich über den medizinischen Rahmen menschlichen Leidens hinaus. HSV ist für ernsthafte psychologische und emotionale Qualen sowie einen beträchtlichen wirtschaftlichen Verlust für die Nation und die Welt verantwortlich.
  • Verschiedene Behandlungen für Herpes sind vorgeschlagen worden und schlossen die topische Applikation solcher Mittel, wie Povidon-Iod, Idoxuridin, Trifluorthymidin oder Acyclovir, ein. Solche Behandlungen erreichten unterschiedliche Erfolgsgrade. Die meisten der ersten Behandlungen stellten sich als enttäuschend heraus. Acyclovir, das oral für die systemische Behandlung von HSV genommen wird, ist in gewisser Hinsicht wirksam. Allerdings ist Acyclovir nur bei einem Unterbrechen der Replikation des Virus erfolgreich. Es ist nicht beim Behandeln eines infektiösen Ausbruchs weder systemisch noch topisch erfolgreich. Es wird von Stämmen berichtet, die gegenüber Acyclovir resistent sind. Personen mit dem Autoimmundefizienzsyndrom(AIDS) sind stark immungeschädigt und leiden insbesondere an schwächenden Ausbrüchen von HSV. Weiterhin können AIDS-Personen Acyclovir-resistente Stämme von HSV tragen, die Acyclovir für diese Personen unwirksam machen können.
  • Wainberg et al. (Arch. AIDS Res., 1(1), 1987, S. 57–58) haben festgestellt, dass Benzalkoniumchlorid die Aktivität von Reverser-Transkriptase von HIV-1 bei dessen Exposition ans Virus verringert.
  • Die US 4 797 420 beschreibt eine Desinfektionsreinigerformulierung für harte Oberflächen. Die Formulierung enthält Alkyldimethylbenzylammoniumchlorid und ist besonders wirksam gegen Herpes simplex-Viren.
  • Es ist daher wünschenswert, eine sichere und erfolgreiche medizinische Behandlung zu entwickeln, um die Behandlung und Verhinderung der sehr ernst haften Probleme von HIV und anderen infektiösen Erkrankungen zu unterstützen.
  • ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
  • Es werden eine verbesserte medizinische Behandlung und Arzneimittel bereitgestellt, die bei einer systemischen Verabreichung das Anhaften von Humanem-Immunmangel-Virus(HIV) an Zielzellen hemmt und die Ausbreitung von HIV verhindert. Vorteilhafter Weise kann die Anwendung der neuen medizinischen Behandlung und Arzneimittel hilfreich sein bei der Verhinderung der sexuellen Übertragung von HIV und anderer Viren. Bezeichnenderweise sind die verbesserte medizinische Behandlung und die Arzneimittel sicher, weniger kostspielig und wirksam.
  • Das verbesserte Arzneimittel, die auch als Viracea 2 HIV-4 bezeichnet wird, umfasst eine neuartige medizinische Zusammensetzung, Formulierung, antimikrobielle Verbindung und Lösung. Die neue antimikrobielle medizinische Behandlung und das mikrobizide Arzneimittel sind erfolgreich bei der systemischen Behandlung von in erster Linie HIV und können bei der Behandlung anderer mikrobieller Infektionen, einschließlich, aber nicht beschränkt auf Varicella zoster-Virus (Herpes zoster) und Cytomegalovirus, nützlich sein. In einigen Fällen kann es erwünscht sein, das neue Arzneimittel topisch anzuwenden.
  • Während das neue Arzneimittel und antimikrobielle Verbindung besonders nützlich ist bei der dramatischen Inhibierung von Humaner-Immunmangel-Virusinfektion(HIV), kann es auch bei der Behandlung anderer mikrobieller Erkrankungen (durch Mikroben verursachte Erkrankungen) nützlich sein, wie Epstein-Barr, Papilloma-Virus, Staphylokokken, Streptokokken, Mykobakterien, Influenza, Parainfluenza, Adenoviren, Encephalitis, Meningitis, Arbovirus, Arenavirus, anaerobe Bazillen, Picornavirus, Coronavirus und Syncytial-Virus sowie Herpes simplex-Virus, Varicella zoster-Virus und Cytomegalovirus.
  • Während medizinische Behandlung und Arzneimittel besonders nützlich sind für die Unterdrückung von HIV und anderen infektiösen Erkrankungen bei Personen (Menschen) (Homo sapiens), können sie auch für veterinäre Zwecke für die Behandlung viraler und bakterieller Infektionen und infektiöser Erkrankungen bei Tieren nützlich sein, wie Hunde, Katzen, Vögel, Pferde, Kühe, Schafe, Schweine (Schlacht- und Wildschweine) und anderen Nutztieren, sowie Nagern und anderen Tieren, die in Zoos zu sehen sind.
  • Vorteilhafterweise führte die verbesserte medizinische Behandlung und das Arzneimittel der vorliegenden Erfindung zu unerwarteten, überraschend guten Resultaten. Diese leicht anzuwendende Mikrobizidlösung kann für die unverzügliche Absorption bei der parenteralen Verabreichung sorgen. Bei der Verabreichung kann es zu einer leicht kribbelnden Wirkung kommen. Innerhalb von Minuten nach der Verabreichung kann ein leichter medizinischer Geschmack im Mund zu spüren sein. Anfängliche in-vitro-Tests der neuen medizinischen Behandlung und des Arzneimittels zeigten äußerst überraschende inhibitorische Wirkungen auf das HIV-Virus. Erwünschtermaßen ist das neue Arzneimittel aus leicht verfügbaren, frei verkäuflichen (OTC) Chemikalien oder Produkten hergestellt und stellt eine sichere, komfortable und wirtschaftliche Behandlung bereit.
  • Erwünschtermaßen schließt das neue Arzneimittel (medizinische Zusammensetzung) Mikroben-inhibitoren ein, welche mikrobielle Infektionen von Mikroben verursachenden Erkrankungen inhibieren, unterdrücken und stoppen. Die Mikrobeninhibitoren umfassen antimikrobielle Isolate, botanische Extrakte oder Phytochemikalien von mindestens einem Teil von einer oder mehreren der weiter unten aufgelisteten speziellen Pflanzen. Die Mikrobeninhibitoren können virale Inhibitoren zur Inhibierung viraler Erkrankungen umfassen, wie HIV, Herpes simplex-Virus 1(HSV 1), Herpes simplex-Virus 2(HSV 2), Varicella zoster-Virus(Herpes zoster), Cytomegalovirus, Epstein-Barr, Papilloma-Virus, viraler Influenza, viraler Parainfluenza, Adenovirus, viraler Encephalitis, virale Meningitis, Arbovirus, Arenavirus, Picornavirus, Coronavirus und Syncytial-Virus. Die Mikrobeninhibitoren können auch bakterielle Inhibitoren zur Unterdrückung bakterieller Erkrankungen, wie Staphylokokken, Streptokokken, Mykobakterien, bakterieller Encephalitis, bakterieller Meningitis und anaeroben Bazillen umfassen. In einigen Fällen können die Mikrobeninhibitoren pilzliche Inhibitoren einschließen.
  • Bessere Resultate können erzielt werden, wenn Echinacea und Commophora (auch als Commiphora bezeichnet) oder andere Pflanzen in dem Arzneimittel nicht in ihrem rohen, unbehandelten und ungeschnittenen Zustand verwendet werden. Für noch bessere Resultate kann das Arzneimittel die folgenden Substanzen ausschließen: Arabinose, Betain, Cellulose, Kupfer, Fructose, Fettsäuren, Galaktose, Glucose, Eisen, Kalium, Protein, Harz, Sucrose und Xylose.
  • Die verbesserte medizinische Behandlung stellt eine neue Methode und ein neues Verfahren zur Anwendung bei der Behandlung der oben genannten infektiösen Erkrankungen vor. Für einige infektiöse Erkrankungen können die mikrobiellen Inhibitoren auf den mikrobiell infizierten Bereich (Region oder Oberfläche) aufgebracht und dort belassen werden, bis die äußeren Symptome und körperlichen Manifestationen der Infektion um den infizierten Bereich verschwinden, zurückgehen oder sich auflösen. Das Arzneimittel kann durch Injektion mittels Spritze, sublingual, intramural, durch Sprühen, Betupfen, Einpudern, Auftupfen mit einem Wattebauch, Auftragen mit einem Schwamm, Aufstreichen, Schütten bzw. Gießen, Verteilen, Abdecken bzw. Überziehen oder starkes Aufbeschichten des Arzneimittels auf die mikrobiell infizierten Bereiche mit einem festen Überzug verabreicht werden, wie: Lymphknoten, Lymphsystem, T-Zellen, Mundschleimhaut, Nasenschleimhaut, vaginales Gewebe, labiales Gewebe, rektales Gewebe, anales Gewebe, perianales Gewebe, Lippen, kutanes Gewebe, okulares Gewebe, Konjunktiva und Augenlider.
  • Vorzugsweise werden die mikrobiellen Inhibitoren oder die antimikrobielle Verbindung systemisch mit einer Spritze in den rektalen Kanal oder die Vagina appliziert, um die sexuelle Übertragung von HIV zu behandeln oder zu verhindern. Die mikrobiellen Inhibitoren oder die antimikrobielle Verbindung können in der zuvor genannten Weise 4–20 Mal pro Tag an 4 bis 18 aufeinander folgenden Tage appliziert werden, um die virale Belastung von mit HIV infizierten Patienten wesentlich zu verringern, d. h. um die Menge an HIV- und AIDS-Virus im Körper zu verringern.
  • Vorzugsweise ist das verbesserte Arzneimittel, die medizinische Zusammensetzung oder die mikrobielle Verbindung ein phytochemisches Konzentrat, welches mit einem Surfactant, einem Nährstoff und einem Träger, Lösungsmittel oder Diluens kombiniert und simultan oder gleichzeitig angewendet wird, um eine mikrobizide medizinische Lösung bereitzustellen. Der Nährstoff dient als ein Katalysator, Aktivator, phytochemischer Initiator, Ernährungsergänzung und Hilfsträger. Der Nährstoff kann eines oder mehrere der Folgenden umfassen: ein wasserlösliches Vitamin, ein fettlösliches Vitamin, Vitamin A, Vitamin B-Komplex (B-Vitamin-Komplex), Vitamin D, Vitamin E, Vitamin K, Vitamin B1, Vitamin B2, Vitamin B5, Vitamin B6, Vitamin B12, Vitamin B15 und vorzugsweise Folacin oder Folsäure.
  • Zu diesem Zweck umfasst die interessierende mikrobizide Lösung ein antimikrobielles Detergenssurfactant mit botanischen Extrakten. Die oberflächenaktiven Mittel sind vorzugsweise kationische Mittel, welche einzelne oder eine beliebige Zahl von quaternären Ammoniumchloriden mit 6-18 Kohlenstoffatomen umfassen können, wie Alkylbenzyldimethylammoniumchlorid, Mischungen von Alkylbenzyldimethylammoniumchlorid, Alkyldimethyl/Ethylbenzylammoniumchlorid, Diisobutylphenoxyethoxyethyldimethylbenzylammoniumchlorid, N-(C12C14C16)-Dimethylbenzylammoniumchlorid, Benzalkoniumchlorid, Octyldecyldimethylammoniumchlorid, Didecyldimethylammoniumchlorid, Dioctyldimethylammoniumchlorid, Dialkyldimethylammoniumchlorid, Dialkylmethylbenzylammoniumchlorid, Octyldecyldimethylammoniumchlorid, Dimethylbenzylammoniumchlorid, Lauryldimethylbenzylammoniumchlorid, o-Benzyl-p-chlorphenol, Dideryldimethylammoniumchlorid, Doctyldimethylammoniumchlorid, Alkyl(C14C12C16)-dimethylbenzylammoniumchlorid, und vorzugsweise umfasst es Alkylbenzyldimethylammoniumchlorid, am meisten bevorzugt Benzalkoniumchlorid. Der Bereich an Aktivität des kationischen Surfactants kann 5% bis 90%, jedoch für beste Ergebnisse 8% bis 20% betragen. Quaternäre Ammoniumsalze sind im Handel leicht verfügbar. In einigen Fällen kann es brauchbar sein, andere Surfactants zu verwenden, wie, jedoch nicht beschränkt auf: DMSO, Glykolsäure-Surfactants, Enzymsurfactants, ampholytische Surfactants, switterionische Surfactants und nichtionische Surfactants. Die Surfactants können Detergenzien, Benetzungsmittel, Emulgiermittel, Entschäumer und/oder die Oberflächenspannung senkende Additive umfassen.
  • Träger sind brauchbar zum Mischen der Bestandteile, wobei die Bestandteile in Lösung gehalten werden, und ein leichtes Verfahren des Auftragens bzw. des Applizierens auf die betroffene Fläche, ob durch ein Spray, Tropfer oder Applikator, bereitgestellt wird. Obgleich eine wässrige Lösung, vorzugsweise ein steriler wässriger Träger und Lösungsmittel, für beste Ergebnisse bevorzugt ist, kann es in einigen Fällen wünschenswert sein, eine andere Flüssigkeit oder feste Träger zu verwenden, wie: Glycerin, Mineralöl, Silica, Baumwollsamenöl, Kokosnussöl, pflanzliches Öl, Samenöl, Fischöl oder tierisches Öl, Alkohol, Talkum, Maismehl, Bienenwachs, Carnaubawachs, Beta-Caroten, Knoblauchöl, Campheröl, lösliche Vitamine, lösliche Mineralien, Rapssamenöl, Nussöle, Olivenöl, Liposome, Ascorbinsäure, Nachtkerzenöl, Pycgnogenol, Traubensamenöl, Lanolin, Ethocyn, Collagen, Aloe vera, Bienenpollen, Gelee Royal, Chondroitinsulfat A, Meeresgemüsen bzw. -pflanzen, EDTA, Fettsäuren, Kräuter, Leci thin, Bioflavinoide, Kornöle oder -pulver, Algen, Tees, Essigsorten, Acidophilus, Zellsalze, Ascorbinsäuren, Hydra 5, Drüsensubstanzen(Glandulars), Aminosäuren, Psyllium, Pflanzenderivate oder andere sterile Träger.
  • Die botanischen Extrakte, antimikrobiellen Isolate oder Phytochemikalien, die in diesem neuen Arzneimittel und medizinischen Behandlung enthalten sind, können aus folgendem bestehen:
    Myrrhen-Gummiharz, Sesquiterpenen, Curzenon, Dihydrofuranodien-6-on, 2-Methoxylfurandien, Essigsäure, alpha-Amyron, Arabinose, alpha-Bisabolen, gamma-Bisabolen, Cadinen, Campesterin, Cholesterin, Zimtaldehyd, Commiferin, alpha-Commiphorsäure, beta-Commiphorsäure, gamma-Commiphorsäure, Commiphorinsäure, m-Cresol, Cuminalkohol, Cuminaldehyd, Dipenten, Elemol, 3-epi-alpha-Amyrin, Eugenol, Furanodien, Furanodienon, Galaktose, Gummiharz, Heerabolen, alpha-Heerabomyrrhol, beta-Heerabomyrrhol, Heeraboresen, Limonen, 4-O-Methyl-glucuronsäure, n-Nonacesan, beta-Sitosterol, Xylose, Caropylene(Carophylene), Lynderstyrin(Lindestyrin), Arabinose, Betain, Echinacen, Echinacin B, Echinacosid, Echinolon, Enzyme, Fructose, Fettsäuren, Galaktose, Glucose, Glucuronsäure, Inulin, Inuloid, Pentadecadien, Polyacetylenverbindungen; Polysaccharide wie Arabinogalactan; Harz, Rhamnose, Sucrose, Tannine, Vitamine A, C und E, Alkylamide, Apigenin, Arabinogalacta, Ascorbinsäure, Behensäure-Ethylsäure, Betain, Borneol, Bornylacetat, Kaffeesäure, 2-O-Caffeoyl-3-(5-alpha-carboxybeta)-3,4-dihydroxyphenyl, 2-O-Caffeoyl-3-O-cumaroyltarasäure, 6-O-Cafteoylechinacosid, 2-O-Caffeoyl-3-O-feruloylweinsäure, 2-O-Caffeoylweinsäure, Calcium, Carbonat, beta-Carotin, Carophyllen, Carophyllenepoxid, Chlorogensäure, Cichorsäure, Cichorsäuremethylester, Cyanadin-3-O-(beta-d-glycopyranosid), Cynadin-3-(6-O-malonylbeta-d-glycopyranosid), Cynarin, Deca(2e,4e,6e)-triensäure-isobutylamid, Desrhamnosylverbascosid, 3,5-Dicaffeoylchinasäure, 4-5-O-Dicaffeoylchinasäure, 2,3-O-Diferulolweinsäure, Dodeca-(2e,4e)-diensäureisobutylamid, Dodeca-2,4-dien-1-yl-isovalerat, Dodeca-(2e,6z,8e,10e)-tetraensäure-isobutylamid, beta-Farnesen, 2-O-Feruloyweinsäure, Germacren, Heptadeca-(8z,11z)-dien-2-on, Heteroxylan, Humule-8-12,(e)-10-Hydroxy-4,10-dimethyl-4,11-dodecadien-2-on, 13-Hydroxyoctadeca-(9z,11e,15z)-triensäure, Inulin, Isochlorogensäure, Isorhamnetin-3-rutinosid, Isotussilagin, Kämpferol, Kämpferol-3-glucosid, Kämpferol-3-nutinosid, Limonen, Luteolin, Luteolin-7-glucosid, 2-Methyltetradeca-5,12-dien, 2-Methyltetradeca-6,12-dien, Methyl-p-hydroxycinnamat, Marcin, Niacin, Palmitinsäure, Pentadeca-(8z,11z)- dien-2-on, Pentadeca-(8z,13z)-dien-11-lyn-2-on, Pentadeca-8-en-2-on, Pentadeca-(8z)-en-2-on, Pentadeca(8z)-en-11,13-dien-2-on, 1-Pentadecen, Penta-(1,8z)-dien, Phosphor, alpha-Pinen, beta-Pinen, Polyacetylene, Ponticaepoxid, Quercetagetin-7-glucosid, Quercetin, Quercetin-3-galactosid, Quercetin-3-glucosid, Quercetin-3-robinosid, Quercetin-3-xylosid, Quercetin-3-xylosylgalactosid, Rhamnoarabinogalactan, Riboflavin, Rutin, Rutosid, beta-Sitosterol, Sitosterol-3-beta-o-glucosid, Stigmasterol, Weinsäure, Tetradeca-(8z)-en-11,13-dien-2-on, Thiamin, n-Triacontanol, Trideca-1-en-3,5,7,9,10-pentayn, Tussilagin, Vanillin, Verbascosid. Für bessere Ergebnisse schließen die phytochemischen Konzentrate die obigen Phytochemikalien ein, wobei aber Arabinose, Betain, Cellulose, Fructose, Fettsäuren, Galaktose, Glucose, Eisen, Kalium, Protein, Harz, Sucrose und Xylose ausgeschlossen sind.
  • Die botanischen Extrakte, antimikrobiellen Isolate und Phytochemikalien können aus Anteilen von Pflanzen abgetrennt, extrahiert und isoliert werden, wie Pimpinella anisum, Myroxylon, Arctostaphylos, Carum, Capsicium, Eugenia mytacea, Coriandrum, Inula, Allium, Gentiana, Juniperus, Calendula, Origanum, Mentha labiate, Commiphora, Plantago, Rosmarinus, Ruta, Lamiaceae, Meliosa, Baptisa, Artemisa, Sage, Mentha, Parthenium integrifolium, Eucalyptus, Asteriacea und vorzugsweise: (1) aus der Gattung Echinacea der Familie Astericaea, nämlich Echinacea purpurea, Echinacea angustofolia, (Echinacea pallidae), Echinacea vegetalis, Echinacea atribactilus und ihre Echinacea pallida und Kulturen; sowie aus der Gattung Commophora, nämlich, Commophora myrrha, Commophora molmol, Commophora erythraea und ihre Kulturen. Für beste Ergebnisse sind die Phytochemikalien und antimikrobiellen Isolate Extrakte von Echinacea purpurea, Echinacea angustifolia und Commophora myrrha.
  • Die erfindungsgemäße Technologie, Behandlung und das Arzneimittel ergeben sehr attraktive, unerwartete, überraschend gute und konsistente Ergebnisse. Tests zeigen, dass die mikrobizide Lösung (Arzneimittel) und die medizinische Behandlung extrem brauchbar sind, um: eine HIV-Infektion zu regulieren bzw. zu kontrollieren, die Anheftung vom HIV-Virus an Zielzellen zu inhibieren, als ein vorbeugendes Mikrobizid zu wirken, die Latenzperioden von HIV und anderen Erkrankungen zu verlängern und HIV und andere Viren dramatisch zu inhibieren, wohingegen die für den Patienten und die Umwelt im Allgemeinen sicher sind.
  • Eine detailliertere Erläuterung der Erfindung wird in der nachfolgenden Beschreibung und den anhängigen Ansprüchen bereitgestellt.
  • DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER BEVORZUGTEN AUSFÜHRUNGS-FORMEN
  • Ein Mikrobizid und eine Behandlung werden bereitgestellt, um den humanen Immundefizienzvirus, der ebenfalls als humaner-Immunmangel-Virus oder HIV bezeichnet wird, zu inhibieren. Wünschenswerterweise inhibiert das HIV-Mikrobizid sowie die -Behandlung vollständig HIV sowie andere infektiöse mikrobielle Erkrankungen, und sie sind sicher und nicht-toxisch für Menschen, Tiere und die Umwelt.
  • Das HIV-Mikrobizid und das -arzneimittel können ein Surfactant und eines kräuterartige Botanicum umfassen, wodurch ein botanischer Extrakt, eine Phytochemikalie, ein antimikrobielles Isolat, ein antivirales Isolat, ein Mikrobeninhibitor und ein Virusinhibitor bereitgestellt werden. Die bevorzugte Mikrobizidzusammensetzung kann Folgendes umfassen: ein Surfactant; ein wässriges Verdünnungsmittel; ein Nährstoff; und des kräuterartigen Botanicums der Gattung Echinacea(E.) der Familie Asteracea, die Arten: purpurea, angustifolia, pallidae, vegetalis, atribactilus und die Kulturen, sowie den kräuterartigen botanischen Stoff der Gattung Commiphora, die Arten: Commiphora myrrha, Commiphora molmol, Commiphora erythraea und ihre Kulturen. Vorzugsweise sind das kräuterartige Botanicum Extrakte und Isolate, welche Commiphora-Phytochemikalien und Echinacea-Phytochemikalien umfassen, wie sie in Commiphora myrrha, Echinacea purpurea, Echinacea pallidae und Echinacea angustifolia gefunden und daraus extrahiert werden. Für beste Ergebnisse umfassen die medizinische Behandlung und das Mikrobizid (Arzneimittel) Folgendes: ein kationisches Surfactant, die Phytochemikalien von Echinacea purpurea, Echinacea angustifolia; und Commiphora myrrha, ein steriles wässriges Verdünnungsmittel und Folacin. Das Verhältnis von Commiphora myrrha zu Echinacea purpurea und Echinacea angustifolia liegt vorzugsweise im Bereich von 1:2 bis 1:4.
  • Das Surfactant liefert eine gewisse Zerstörung am zellulären Oberflächenniveau mit einem breiten Spektrum der antimikrobiellen Wirkung. Surfactantsen dieser Natur können quaternäre Ammoniumsalze mit 6-18 Kohlenstoffatomen umfassen. Vorzugsweise ist das quaternäre Ammoniumsalz-Surfactant eine Mischung von Alkyldimethylbenzylammoniumchloriden, welche folgende sein können:
    Benzalkoniumhalogenid, Benzalkoniumbromid, Benzalkoniumchlorid und am meisten bevorzugt Benzalkoniumchlorid. Die HIV-Behandlung kann eine 100%ige aktive wässrige Lösung umfassen, kann jedoch auch im Konzentrat verwendet werden. Die Lösung kann, bezogen auf das Gewicht, verschiedene Konzentrationen an Surfactants umfassen, wie 0,005% bis 0,8%, vorzugsweise 0,02% bis 0,30% und am meisten bevorzugt 0,02% bis 0,26%.
  • Die Phytochemikalien in der botanischen Echinacea zeigten beeindruckende Aktivität gegen Bakterien, Viren und einigen Pilzen. Der exakte Mechanismus ist unbekannt. Wenn das erfindungsgemäße Mikrobizid topisch auf HIV und HSV 1 & 2 getestet wurde, ist es wirksam bei der Behandlung von infektiösen Herpes simplex-Ausbrüchen. Wenn es in vitro getestet wurde, zeigte es inhibitorische Wirkung gegen HIV-1 und HSV 1 & 2.
  • Die phytochemische Konzentratzusammensetzung umfasst die folgenden isolierten Bestandteile, botanischen Extrakte, mikrobiellen Inhibitoren und antimikrobiellen Isolate: Polysaccharide, Echinacen, Echinacein, Echinacosid(Kaffeesäureester), Echinolon, Echinadiol, Enzyme, Glucuronsäure, Inuloid, Pentadecadien, Polyacetylenverbindungen, Arabinogalactan, Rhamnose, PS I(ein 4-O-Methylglucoronoarabinoxylan, Mr 35 kD) und PS II(ein Säure-Rhamnoarabinogalactan, Mr 450 kD), Cynarin(1,5-Di-O-cafteoylchinasäure), Chicorsäure(2,3-O-Di-caffeyolweinsäure) und Derivate, Alkylamide, Keto-Alkine und – Alkene; Chinone; Öle, einschließend: Borneol, Bornylacetat; Pentadeca-8(z)-en-2-on, Germacren D; Caryophyllen; Caryophyllenepoxid; Anthocyanine Pyrrolizidinalkaloide; lipophile Amide, Isobutylamide; Polyacetylene; Myrrhen-Gummiharz; Curzerenon(Furahoeudesman-Typ); Dihydrofuanodien-6-on; 2-Methoxyfuranodien(Furanoelemen-Typ); Lyndestyrol(Furanogermacran-Typ); Alkylamide, Apigenin, Arabinoglacta, Ascorbinsäure; Behensäure-Ethylsäure, Betain, Borneol, Bornylacetat, Kaffeesäure, 2-O-Caffeoyl-3-(5-alpha-carboxybeta)-3,4-dihydroxyphenyl, 2-O-Caffeoyl-3-O-cumaroyltarasäure, 6-O-Caffeoylechinacosid, 2-O-Cafteoyl-3-O-feruloyltweinsäure, 2-O-Caffeyolweinsäure, Beta-Caroten, Carophyllen, Carophyllenepoxid, Chlorogensäure, Cichorsäure, Cichorsäuermethylester, Cyanadin-3-O-(beta-d-glycopyranosid), Cynadin-3-(6-O-malonyl-beta-d-glycopyranosid), Cynarin, Deca-(2e,4e,6e)triensäure-isobutylamid, Desrhamnosylverbascosid, 3,5-Dicaffeoylchinasäure, 4-5-O-Dicafteoylchinasäure, 2,3-O-Diferuloltweinsäure, Do-deca-(2e,4e)-diensäure-isobutylamid, Dodeca-2,4-dien-1-yl-isovalerat, Dodeca-(2e,6z,8e,10e)-tetraensäure-isobutylamid, beta-Farnesen, 2-O- Feruloylweinsäure, Germacren, Heptadeca-(8z,11z)-dien-2-on, Heteroxylan, Humulen 8-12, (e)-10-Hydroxy-4, 10-dimethyl-4,11-dodecadien-2-on, 13-Hydroxyocta-deca-(9z,11e,15z)-triensäure, Inulin, Isochlorogensäure, Isorhamnetin-3-rutinosid, Isotussilagin, Kämpferol, Kampferol-3-glucosid, Kampferol-3-nutinosid, Limonen, Luteolin, Luteolin-7-glucosid, 2-Methyltetradeca-5,12-dien, 2-Methyltetradeca-6,12-dien, Methyl-p-hydroxycinnamat, Marcine, Niacin, Palmitinsäure, Pentadeca-(8z,11z)-dien-2-on, Pentadeca-(8z,13z)-dien-11-lyn-2-on, Pentadeca-8-en-2-on, Pentadeca-(8z)-en-2-on, Pentadeca-(8z)-en-11,13-dien-2-on, 1-Pentadecen, Penta-(1,8z)-dien, Phosphor, alpha-Pinen, beta-Pinen, Polyacetylene, Ponticaepoxid, Quercetagetin-7-glucosid, Quercetin, Quercetin-3-galactosid, Quercetin-3-glucosid, Quercetin-3-robinosid, Quercetin-3-xylosid, Quercetin-3-xylosylgalactosid, Rhamnoarabinogalactan, Riboflavin, Rutin, Rutosid, beta-Sitosterol, Sitosterol-3-beta-o-glucosid, Stigmasterol, Weinsäure, Tetradeca-(8z)-en-11,13-dien-2-on, Thiamin, n-Triacontanol, Trideca-1-en-3,5,7,9,10-pentayn, Tussilagin, Vanillin, Verbascosid, Sesquiterpene; Essigsäure, alpha-Amyron, Arabinose, alpha-Bisabolen, gamma-Bisabolen, Cadinen, Campesterin, Cholesterin, Zimtaldehyd, Commiferin, alpha-Commiphorsäure, beta-Commiphorsäure, gamma-Commiphorsäure, Commiphorinsäure, m-Cresol, Cuminalkohol, Cuminaldehyd, Dipenten, 3-epi-alpha-Amyrin, Eugenol, Furanodien, Furanodienon, Galaktose, Gummiharz, Heerabolen, alpha-Heerabomyrrhol, beta-Heerabomyrrhol, Heeraboresen, Limonen, 4-O-Methyl-glucuronsäure, n-Nonacesan, beta-Sitosterol, Xylose, Caropylene (Carophylene), Myrrhen-Gummiharz, Curzenon, Dihydrofuanodien-6-on und 2-Methoxyfurandien.
  • Für bessere Ergebnisse umfassen die antimikrobiellen Isolate des phytochemischen Konzentrates, bezogen auf das Gewicht (basierend auf dem Gesamtgewicht der erfindungsgemäßen medizinischen Zusammensetzung): 0,3–9% Echinacosid; 0,1–7% PS I(ein 4-O-Methylglucoronarabinoxylan, Mr 35 kD) und PS II(ein Säure-Rhamnoarabinogalactan, Mr 450 kD); 0,1–10% Cynarin(1,5-Di-O-caffeoylchinasäure) und Chicorsäure(2,3-O-Di-caffeoylweinsäure) und Derivate; 0,2–4% Echinolon; 0,2–8% Echinacin B; 0,1–6% Echinacein; 0,2–7% Anthocyanine, umfassend Cyanidin-3-O-β-D-glucopyranosid und 3-O-(6-O-Malonyl-β-D-glucopyranosid); 0,01–0,06% Pyrrolidizidinalkaloide, umfassend Tussilagin und Isotussilagin; 0,003–0,009% isomere Dodecaisobutylamide und 2E,4E,8Z,10E/Z-Tetraensäure; 0,01–2% Caryophylene; sowie Commophora myrrha-Phytochemikalien, umfassend: Myrrhen-Gummiharz, Curzenon, Di hydrofuanodien-6-on, 2-Methoxyfurandien, Lynderstyrol(Lindestren)-sesquiterpene, Essigsäure, alpha-Amyron, Arabinose, alpha-Bisabolen, gamma-Bisabolen, Cadinen, Campesterol, Cholesterol, Zimtaldehyd, Commiferin, alpha-Commiphorsäure, beta-Commiphorsäure, gamma-Commiphorsäure, Commiphorinsäure, m-Cresol, Cuminalkohol, Cuminaldehyd, Dipenten, Elemol, 3-epi-alpha-Amyrin, Eugenol, Furanodien, Furanodienon, Galaktose, Gummiharz, Heerabolen, alpha-Heerabomyrrhol, beta-Heerabomyrrhol, Heeraboresen, Limonen, 4-O-Methyl-glucuronsäure, n-Nonacesan, beta-Sitosterol, Xylose, Caropylene(Carophylene) und Lynderstyrin (Lindestyrin).
  • Das phytochemische Konzentrat kann bis, bezogen auf das Gewicht, Folgendes umfassen: 2%–90% der medizinischen Zusammensetzung und Lösung und umfasst vorzugsweise nicht weniger als 15% der Zusammensetzung und Lösung; und für beste Ergebnisse umfasst 40%–60% der medizinischen Zusammensetzung und Lösung.
  • Das Diluens löst das Surfactant und phytochemische Konzentrate und kann als ein Träger in Sprays, Tuben und Flaschen zum Tropfen wirken. Das bevorzugte Diluens ist ein wässriges Lösungsmittel und ist am meisten bevorzugt ein steriles wässriges Diluens. Das Verhältnis vom Wasser in der wässrigen Lösung zum Surfactant kann im Bereich von 30 000:1 bis 250:1 und vorzugsweise von 5 000:1 bis 750:1 liegen. Das Verhältnis von Wasser zu den kombinierten Konzentraten von Benzalkoniumchlorid und Phytochemikalien kann einen Bereich von 2:1 bis 100:1 umfassen, mit einem bevorzugten Bereich von 4:1 bis 40:1, und kann für beste Ergebnisse ein Verhältnis von 6:1 bis 20:1 umfassen.
  • Für beste Ergebnisse umfassen die verbesserte mikrobizide Behandlung und das Arzneimittel (Mikrobizid) für Herpes, bezogen auf das Gewicht, folgendes: 0,02% bis 0,3% Surfactant, und um Toxizität zu vermeiden, vorzugsweise weniger als 0,26%; 40% bis 60% Echinacea- und Commophora-Phytochemikalien; 0,01% bis 25%, am meisten bevorzugt 2% bis 12% Nährstoff; und 20% bis 60%, am meisten bevorzugt 29,74% bis 59,8% steriles Wasser. Das Arzneimittel (Mikrobizid) umfasst wünschenswerterweise einen Vitaminnährstoff, welcher als Nährstoffträger dient und einen synergistischen Effekt vermittelt, wenn er mit Commophora myrrha, Echinacea purpurea und Echinacea angustifolia kombiniert wird. Der Nährstoff kann eines oder mehrere der folgenden umfassen: Vitamin A, Vitamin B-Komplex, Vitamin D, Vitamin E, Vitamin K, ein wasserlösliches Vitamin, ein fettlösliches Vitamin, Vitamin B1, Vitamin B2, Vitamin B5, Vitamin B6, Vitamin B12, Vitamin B15 und vorzugsweise Folacin oder Folsäure.
  • Obgleich Wasser das bevorzugte Diluens und der wässrige Träger ist, kann es in einigen Fällen wünschenswert sein, andere Träger zu verwenden, um das Konzentrat durch eine Spritze oder ein Sprühgerät auszutreiben oder um eine größere Löslichkeit und Effektivität zu erreichen. Es kann ebenfalls in einigen Fällen wünschenswert sein, ein die Viskosität regulierendes Mittel einzuschließen. Ferner kann es, wenn gleich abzuschätzen ist, dass die Lagerdauer des verbesserten Arzneimittels zwei Jahre ist, notwendig sein, ein geeignetes Konservierungsmittel hinzuzusetzen.
  • Für den bevorzugten Einsatz als ein Mikrobizid, das gegen HIV vorbeugend wirkt, sollte die medizinische Lösung (Arzneimittel) systemisch, vaginal oder rektal angewendet werden. Das Verfahren der Anwendung des Arzneimittels kann erfolgen durch: Spritzen, Sprühen, Betupfen, Tropfer oder andere Verfahren. Die Anwendung oder Beschichtung der Lösung (Arzneimittel) sollte während des Koitus aufrechterhalten werden. Anionische Seifen und anionische Detergenzien und insbesondere Seifen mit Proteingehalt können kontraindiziert sein. Vorzugsweise sollte die Fläche der Anwendung gewaschen, gereinigt und getrocknet werden vor der Anwendung des Arzneimittels. Zur Behandlung als ein HIV-antivirales Mittel kann das Arzneimittel durch Spritzen der Dosierungsbehandlung in das Rektum oder die Vagina oder durch andere Verfahren angewendet werden.
  • BENZALKONIUMCHLORID
  • Ein bevorzugtes Surfactant ist Benzalkoniumchlorid. Benzalkoniumchlorid in wässriger Lösung ist im Handel verfügbar unter dem Handelsnamen und dem Markenzeichen Zephiran®, welches von Sanofi Winthrop Pharmaceuticals (früher Winthrop Labs) vertrieben wird. Benzalkoniumchlorid ist ein schnell wirkendes, gegen Infektion wirkendes Surfactant mit einer mäßig langen Wirkdauer. Das Surfactant ist aktiv gegen Bakterien und einige Viren, Pilze und Protozoen. Bakterielle Sporen werden als resistent angesehen. Lösungen von Benzalkoniumchlorid sind bakteriostatisch oder bakteriozid je nach der Konzentration. Der exakte Mechanismus der bakteriellen Wirkung von Benzalkoniumchlorid ist unbekannt, jedoch nimmt man an, dass er auf eine Enzyminaktivierung zurückzu führen ist. Die Aktivität von Benzalkoniumchlorid nimmt im Allgemeinen mit zunehmender Temperatur und zunehmendem pH-Wert zu. Gram-positive Bakterien sind gegen Benzalkoniumchlorid empfindlicher als gram-negative Bakterien.
  • Leider wird Benzalkoniumchlorid durch Seifen, anionische Detergenzien, Serum und bestimmte Proteine inaktiviert. Benzalkoniumchlorid ist in vielen Laboratorien aus den oben genannten Gründen in Misskredit gefallen. Wenn Benzalkoniumchlorid allein verwendet wurde und topisch in vivo getestet wurde, war es unwirksam bei infektiösem Herpes simplex-Ausbrüchen. Wenn es in vitro bei HIV und HSV1 & 2 getestet wurde, zeigte Benzalkoniumchlorid unerwünscht hohe Ausmaße der Toxizität gegenüber den Zellen, und zwar selbst bei hohen Verdünnungen, was medizinisch nicht akzeptabel ist. Die chemische Formel von Benzalkoniumchlorid wird unten gezeigt. Andere Typen von Benzalkoniumchlorid können zur Anwendung kommen. Benzalkoniumchlorid
    Figure 00200001
  • PHYTOCHEMIKALIEN
  • Obgleich rohe, unbehandelte, unverarbeitete, nicht-isolierte Echinacea im Allgemeinen nicht wünschenswert ist, um HIV und Herpes intramural zu behandeln, kann, wenn geeignet filtriert, eine intramurale Verabreichung möglich sein. Ganz bedeutend ist, dass anscheinend einige, jedoch nicht alle, der isolierten Bestandteile und botanischen Extrakte von Echinacea und Commiphora (wie bereits früher oben beschrieben) Phytochemikalien, antimikrobielle Isolate, botanische Extrakte und Mikrobeninhibitoren bereitstellen, welche eine antimikrobielle Aktivität besitzen oder aufweisen, welche bei der Behandlung von HIV, Herpes-Virus und anderen infektiösen Erkrankungen wirksam erscheint.
  • Wie bereits vorstehen angemerkt, umfasst die phytochemische Konzentratzusammensetzung die folgenden isolierten Bestandteile, botanischen Extrakte, mikrobiellen Inhibitoren und antimikrobiellen Isolate: Polysaccharide, Echinacen, Echinacein, Echinacosid(Kaffeesäureester), Echinolon, Echinadiol, Enzy me, Glucuronsäure, Inuloid, Pentadecadien, Polyacetylenverbindungen, Arabinogalactan, Rhamnose, PS I(ein 4-O-Methylglucoronoarabinoxylan, Mr 35 kD) und PS II(ein Säure-Rhamnoarabinogalactan, Mr 450 kD), Cynarin(1,5-Di-O-caffeoylchinasäure), Säure(2,3-O-Di-caffeyolweinsäure) und Derivate, Alkylamide, Keto-Alkine und -Alkene; Chinone; Öle, einschließlich: Borneol, Bornylacetat; Pentadeca-8(z)-en-2-on, Germacren D; Caryophyllen; Caryophyllenepoxid; Anthocyanine Pyrrolizidinalkaloide; lipophile Amide, Isobutylamide; Polyacetylene; Myrrhen-Gummiharz; Curzerenon(Furahoeudesman-Typ); Dihydrofuanodien-6-on; 2-Methoxyfuranodien(Furanoelemen-Typ); Elamol, Lyndestyrol (Furanogermacran-Typ); Alkylamide, Apigenin, Arabinoglacta, Ascorbinsäure; Behensäure-Ethylsäure, Betain, Borneol, Bornylacetat, Kaffeesäure, 2-O-Caffeoyl-3-(5-alpha-carboxybeta)-3,4-dihydroxyphenyl, 2-O-Caffeoyl-3-O-cumaroyltarasäure, 6-O-Caffeoylechinacosid, 2-O-Caffeoyl-3-O-feruloyltweinsäure, 2-O-Caffeyolweinsäure, Beta-Caroten, Carophyllen, Carophyllenepoxid, Chlorogensäure, Cichorsäure, Cichorsäuermethylester, Cyanadin-3-O-(beta-d-glycopyranosid), Cynadin-3-(6-O-malonyl-beta-d-glycopyranosid), Cynarin, Deca-(2e,4e,6e)triensäure-isobutylamid, Desrhamnosylverbascosid, 3,5-Dicaffeoylchinasäure, 4-5-O-Dicaffeoylchinasäure, 2,3-O-Diferuloltweinsäure, Do-deca-(2e,4e)-diensäure-isobutylamid, Dodeca-2,4-dien-1-yl-isovalerat, Dodeca-(2e,6z,8e,10e)-tetraensäure-isobutylamid, Epishobunol, beta-Farnesen, 2-O-Feruloylweinsäure, Germacren, Heptadeca-(8z,11z)-dien-2-on, Heteroxylan, Humulen 8-12, (e)-10-Hydroxy-4,10-dimethyl-4,11-dodecadien-2-on, 13-Hydroxyocta-deca-(9z,11e,15z)-triensäure, Isochlorogensäure, Isorhamnetin-3-rutinosid, Isotussilagin, Kämpferol, Kampferol-3-glucosid, Kampferol-3-nutinosid, Limonen, Luteolin, Luteolin-7-glucosid, Magnesium, Mangan, 2-Methyltetradeca-5,12-dien, 2-Methyltetradeca-6,12-dien, Methyl-p-hydroxycinnamat, Marcine, Niacin, Palmitinsäure, Pentadeca-(8z,11z)-dien-2-on, Pentadeca-(8z,13z)-dien-11-lyn-2-on, Pentadeca-8-en-2-on, Pentadeca-(8z)-en-2-on, Pentadeca-(8z)-en-11,13-dien-2-on, 1-Pentadecen, Penta-(1,8z)-dien, Phosphor, alpha-Pinen, beta-Pinen, Polyacetylene, Ponticaepoxid, Quercetagetin-7-glucosid, Quercetin, Quercetin-3-galactosid, Quercetin-3-glucosid, Quercetin-3-robinosid, Quercetin-3-xylosid, Quercetin-3-xylosylgalactosid, Rhamnoarabinogalactan, Riboflavin, Rutin, Rutosid, Selen, Silicat, beta-Sitosterol, Sitosterol-3-beta-o-glucosid, Natrium, Stigmasterol, Sulfat, Weinsäure, Tetradeca-(8z)-en-11,13-dien-2-on, Thiamin, n-Triacontanol, Trideca-1-en-3,5,7,9,10-pentayn, Tussilagin, Vanillin, Verbascosid, Sesquiterpene; Essigsäure, alpha-Amyron, Arabinose, alpha-Bisabolen, gamma- Bisabolen, Cadinen, Campesterin, Cholesterin, Zimtaldehyd, Commiferin, alpha-Commiphorsäure, beta-Commiphorsäure, gamma-Commiphorsäure, Commiphorinsäure, m-Cresol, Cuminalkohol, Cuminaldehyd, Dipenten, Elemol, 3-epi-alpha-Amyrin, Eugenol, Furanodien, Furanodienon, Galaktose, Gummiharz, Heerabolen, alpha-Heerabomyrrhol, beta-Heerabomyrrhol, Heeraboresen, Limonen, 4-O-Methyl-glucuronsäure, n-Nonacesan, beta-Sitosterol, Xylose, Caropylene(Carophylene), Lynderstyrin(Lindestyrin), Caropylene(Carophylene), Myrrhen-Gummiharz, Curzenon, Dihydrofrianodin-6-on, 2-Methoxyfurandien und Lynderstyrin(Lindestyrin).
  • Die chemische Formel von einigen der botanischen Extrakte von Echinacea sind unten gezeigt.
  • Figure 00220001
    Echinacosid
  • Figure 00220002
    Cichorsäure
  • Figure 00230001
    Echinacein
  • Figure 00230002
    Echinolon
  • Die chemische Formel von einigen der botanischen Extrakte von Commiphoria myrrha sind unten gezeigt.
  • Figure 00230003
  • Myrrhe wird ebenfalls manchmal wie folgt bezeichnet: Myrrh, Mirre, Myrrhis, Gummi-Myrrhe, Myrrha vera, Gum-Myrrh, Commiphora-Harz, Gruggal-Gummi, Gruggal-Harz, Heerabol myrrh., Myrrhe, Manniliche myrrhe, Opopanax und Hirabol myrrh. Myrrhe kann Gummiharz umfassen, welches von Einschnitten, die in der Rinde von Bäumen der Gattung Commiphora myrrha, d. h. dem Myrrhenbaum, gemacht wurden, erhalten wurden. Myrrhe kann ebenfalls balsamische Säfte von Balsamodendron myrrha, d. h. der arabischen Myrrhe, einem buraziösen bzw. kletteartigen Baum, umfassen. Myrrhe kann ebenfalls von Osmorhiza oder Washingtonia extrahiert werden, welche manchmal ebenfalls als eine süße Hundspetersilie bezeichnet wird. Der Myrrhenbaum ist beheimatet in Erithrea, Abessinien, Somalia, Jemen, Sudan und anderorts.
  • Die Myrrhen herstellenden Commiphora-Spezien sind Büsche oder kleine Bäume mit scharf zugespitzten Dornen an dem Stamm. Die ungleichmäßigen dreigeteilten Blätter sind alternierend, und die kleinen Blumen sind in terminalen Ripsen angeordnet. Wenn beschädigt, geben die schizogenen Harzkanäle den Arzneistoff Myrrhe ab.
  • Myrrhe ist ein luftgetrocknetes Öl-Gummiharz, das von der Rinde von Commiphora-Spezien abgesondert wird. Das Material umfasst unregelmäßige, abgerundete Körner oder Klumpen mit verschiedenen Größen mit Löchern, und ihre Farbe reicht von Dunkelbraun und fast Schwarz bis hin zu Hell- oder Dunkelorange-Braun; einige Teile können gelb oder farblos bis blassgelb sein. Die Oberfläche ist hauptsächlich mit einem grauen bis gelblichen grauen Pulver bedeckt; die Fraktur ist konchoidal und führt zu dünnen, durchscheinenden Fragmenten. Myrrhe kann einen süßen Duft und einen strengen und aromatischen Geruch haben. Myrrhe kann einen bitteren und aromatischen Geschmack haben. Myrrhe kann beißend sein und beim Kauen an den Zähnen kleben.
  • Commiphora molmol und andere Commiphora-Spezien sind, soweit es die chemische Zusammensetzung ihres Gum-Harzes anbetrifft, mit der von Myrrhe DAB 10 vergleichbar. Es gibt eine beträchtliche Verwirrung in der Literatur in Bezug auf die Quellen von Myrrhe und der Identität der involvierten Commiphora-Spezien. Gemeine (oder "Hirabol")-Myrrhe scheint von Commiphora myrrha abzustammen. Myrrhe aus Somalia soll von Commiphora molmol kommen. Gleichwohl ist die systematische (taxonomische) Beziehung zwischen Commiphora myrrha und Commiphora molmol nicht klar. Die Quelle von abessini scher Myrrhe ist Commiphora madagascariensis oder Commiphora abyssinica. Opopanax, welches ebenfalls als Bisabol-Myrrhe oder parfümiertes Bdellium bezeichnet wird, hat angenommenermaßen seinen Ursprung entweder von Commiphora erythraea (Ehrenb) oder Opopanax.
  • Die Zusammensetzung von Myrrhe ist sehr komplex und nur teilweise bekannt, wobei 40–60% der Myrrhe in Ethanol löslich ist und ein Harz und ein essenzielles Öl umfasst. Myrrhe besteht fast gänzlich aus Sesquiterpenen. Die Hauptkomponenten von Sesquiterpenen sind: Furanosesquiterpene des Germacraneleman-, Eudesman- und Guaian-Typs. Darüber hinaus gibt es Sesquiterpen-Kohlenwasserstoffe, z.B. β- und δ-Elemen, β-Bourbonen, β-Caryophyllen, Humulen und Sesquiterpenalkohole, z.B. Elemol. Angenommenermaßen sind einige der Furanosesquiterpene charakteristisch für pharmazeutische Myrrhe. Rohes Myrrhen-Gum oder rohes Mucilago schließt 20% Proteine und 65% Kohlenhydrate ein, welche aus Galaktose, 4-O-Methylglucuronsäure und Arabinose bestehen. Commophora myrrhaphyto-Chemikalien umfassen: Essigsäure, alpha-Amyron, Arabinose, alpha-Bisabolen, gamma-Bisabolen, Cadinen, Campesterol, Cholesterol, Zimtaldehyd, Commiferin, alpha-Commiphorsäure, beta-Commiphorsäure, gamma-Commiphorsäure, Commiphorinsäure, m-Cresol, Cuminalkohol, Cuminaldehyd, Dipenten, Elemol, 3-epi-alpha-Amyrin, Eugenol, Furanodien, Furanodienon, Galaktose, Gumn, Heerabolen, alpha-Heerabomyrrhol, beta-Heerabomyrrhol, Heeraboresen, Limonen, 4-O-Methylglucuronsäure, n-Nonacesan, beta-Sitosterol, Xylose, Caropylene(Carophylene), Myrrhen-Gum-Harz, Curzenon, Dihydro-fuanodien-6-on, 2-Methoxyfurandien und Lynderstyrin(Lindestyrin).
  • Die Tinktur aus Myrrhe kann einen entzündungshemmenden Effekt aufweisen. Makro- und mikroskopisch kann Myrrhe als ein bräunlich-gelbes Pulver erscheinen, das durch gelbliche Splitter oder kugelförmige Körner von verschiedenen Größen gekennzeichnet ist, zusammen mit feinem granulären Material, welches in Wasser quillt. In Chloralhydrat-Präparaten gibt es nur einige wenige Fragmente von Gewebe der Pflanzenquelle: rötlich-braune Fragmente von Kork, einzelne oder Gruppen von polyedrischen bis länglichen Steinzellen, teilweise mit in starkem Maße verdickten, Poren aufweisenden und lignifizierten Wänden und bräunlichen Inhalten; Fragmenten von dünnwandigen Parenchyma und sclerenchymatösen Fasern und 10–25 μm großen unregelmäßigen prismatischen bis polyedrischen Kristallen aus Calciumoxalat.
  • Myrrhe sollte vor Licht und Feuchtigkeit in gut geschlossenen Behältern geschützt werden. Am besten mit einem Trocknungsmittel, da der Kohlenhydratteil des Arzneistoffes leicht Wasser absorbiert. Vorzugsweise sollte Myrrhe nicht pulverförmiger Form gelagert werden.
  • FOLSÄURE
  • Der bevorzugte Nährstoff ist Folsäure für beste Ergebnisse. Folsäure, ebenfalls als Folacin, Pteroylglutaminsäure, Foldin, Folaemin, Foliamin, Folicet, Folipac, Folletes, Folsan, Folvite, Incafolic, Millafol oder Cytofol bezeichnet, ist ein gelbes, kristallines, in Wasser lösliches Vitamin der B-Komplex-Gruppe, die für das Zellwachstum und die Reproduktion essenziell ist. Folsäure fungiert als ein Co-Enzym mit den Vitaminen B12 und Vitamin C beim Abbau und der Nutzung von Proteinen und bei der Bildung von Nukleinsäuren und Häm in Hämoglobin. Folsäure steigert ebenfalls den Appetit und stimuliert die Produktion von Chlorwasserstoffsäure im Verdauungstrakt. Folsäure wird in der Leber gelagert und kann durch die bakterielle Flora des Gastrointestinaltraktes synthetisiert werden. Ein Mangel an Folsäure kann zu einem schlechten Wachstum, einem Vergrauen des Haares, Glossitis, Stomatitis, gastrointestinalen Verletzungen und Durchfall führen, und er kann zu megaloblastischer Anämie führen. Ein Mangel wird durch eine unangemessene Nahrungsaufnahme des Vitamins, eine Malabsorption oder metabolischen Abnormalien verursacht. Der Bedarf nach Folsäure wird in der Schwangerschaft, in der Kindheit und bei Stress erhöht. Folsäure ist sowohl wärme- als auch lichtlabil, und es tritt ein beträchtlicher Verlust des Vitamins auf, wenn es für einen langen Zeitraum gelagert worden ist. Folsäure ist nicht toxisch und wirksam bei der Behandlung von spezifischen Mangelzuständen. Die chemische Formel von Folsäure ist unten gezeigt.
  • Figure 00260001
    Folsäure (Pteroylglutaminsäure)
  • Die Struktur von Folsäure wird unten dargelegt:
  • Figure 00270001
    Pteroylglutaminsäure (Folsäure)
  • Das Folsäuremolekül enthält Glutaminsäure, p-Aminobenzoesäure und ein Pterin; die Kombination aus dem Pterin und der p-Aminobenzoesäure wird als Pteronsäure bezeichnet. Die gezeigte Struktur ist die Pteroylglutaminsäure der Leber. Die durch Bakterien hergestellte Folsäure enthält drei Glutaminsäurereste, die in der γ-Glutamyl-Verknüpfung kombiniert sind. Viele Tiergewebe enthalten Pteroylheptaglutaminsäure, wobei die Glutaminsäurereste erneut in der γ-Glutamyl-Verknüpfung liegen. Synthetische Pteroylpolyglutaminsäuren, in welchen die Glutaminsäuremoleküle in α-Glutamylbindungen liegen, sind aktiv bei bakteriellen Wachstumsassays; Pteroyl-γ-glutaminsäuren sind sowohl bei Bakterien und bei der Behandlung von makrozytischer Anämie beim Menschen wirksam. Ein Enzym in Tiergeweben hydrolysiert die natürlich auftretenden Pteroylpolyglutamatverbindungen zu Pteroylmonoglutaminsäure und freier Glutaminsäure.
  • Eine andere Strukturformel von Pteroylglutaminsäure (PteGlu1) ist unten gezeigt.
    Figure 00280001
  • Die Strukturen und Nomenklatur von Pteroylglutaminsäure (Folsäure).
  • Hauptabschnitte des Folsäuremoleküls schließen einen Pteridinring, der durch eine Methylenbrücke an Paraaminobenzoesäure geknüpft ist, welche durch eine Amidverknüpfung an Glutaminsäure gebunden ist, ein. Obgleich Pteroylglutaminsäure die gängige pharmazeutische Form von Folsäure ist, ist es weder das hauptsächliche Folat-Vertreter in Nahrungsmitteln, noch das aktive Coenzym für intrazellulären Stoffwechsel. Nach der Absorption wird PteGlu1 schnell an den Positionen 5, 6, 7 und 8 zu Tetrahydrofolsäure (H4PteGlu1) reduziert, welches dann als ein Akzeptor von einer Anzahl von Ein-Kohlenstoff-Einheiten wirkt. Diese sind entweder an der Position 5 oder 10 des Pteridinringes gebunden oder überbrücken diese Atome unter Bildung eines neuen fünfgliedrigen Rings.
  • Vitamin B12 und Folsäure sind diätetische essenzielle Verbindungen für den Menschen. Ein Mangel eines Vitamins davon führt zu einer fehlerhaften Synthese von DNA in einer beliebigen Zelle, welche die chromosomale Replikation und Teilung versucht. Da Gewebe mit der größten Zellumsatzrate die dramatischsten Änderungen zeigen, ist das hämatopoetische System besonders empfindlich gegenüber einem Mangel an diesen Vitaminen. Klinisch ist das früheste Anzeichen eines Mangels eine megaloblastische Anämie, wobei die Störung in der DNA-Synthese zu einer charakteristischen morphologischen Abnormität der Vorläuferzellen im Knochenmark führt. Abnorme makrozytische rote Blutzellen sind das Ergebnis, und der Patient wird schwer anämisch.
  • Methylcobalamin unterstützt die Methionin-Synthetase-Reaktion, welche essenziell für einen normalen Stoffwechsel von Folat ist. Methylgruppen, die durch Methyltetrahydrofolat (CH3H4PteGlu1) beigesteuert werden, werden zur Bildung von Methylcobalamin verwendet, welches dann als ein Methylgruppendonor für die Umwandlung von Homocystein zu Methionin wirkt. Diese Folat-Cobalamin-Wechselwirkung ist der Angelpunkt für die normale Synthese von Purinen und Pyrimidinen und damit für DNA. Die Methionin-Synthetase-Reaktion ist in starkem Maße für die Kontrolle des Recyclings von Folat-Cofaktoren verantwortlich; die Aufrechterhaltung von intrazellulären Konzentrationen von Folylpolyglutamaten; und durch die Synthese von Methionin und dessen Produkts, S-Adenosylmethionin, die Aufrechterhaltung einer Anzahl von Methylierungsreaktionen. Da Methyltetrahydrofolat der hauptsächliche Folat-Vertreter ist, welcher den Zellen zugeführt wird, ist der Transfer der Methylgruppe zu Cobalamin essenziell für die angemessene Versorgung mit Tetrahydrofolat (H4PteGlu1), das Substrat für eine Reihe metabolischer Schritte. Tetrahydrofolat ist eine Vorstufe für die Bildung von intrazellulären Folylpolyglutamaten; es wirkt ebenfalls als Akzeptor einer Ein-Kohlenstoff-Einheit bei der Umwandlung von Serin zu Glycin, mit der resultierenden Bildung von 5,10-Methylentetrahydrofolat (5,10-CH2H4PteGlu). Das letztere Derivat liefert die Methylengruppe an Desoxyuridylat für die Synthese von Thymidylat – eine extrem wichtige Reaktion bei der DNA-Synthese. Bei dem Verfahren wird 5,10-CH2H4PteGl zu Dihydrofolat (H2PteGlu) umgewandelt. Der Zyklus wird dann durch die Reduktion des H2PteGlu zu H4PteGlu durch Dihydrofolat-Reduktase komplettiert, dem Schritt, welcher durch Folat-Antagonisten wie Methotrexat blockiert wird. Andere Stoffwechselwege führen ebenfalls zu der Synthese von 5,10-Methylentetrahydrofolat.
  • Tabelle A: Biosynthese von Folsäure
  • Die Biosynthese von Folsäure ist unten gezeigt. Das Symbol ppp repräsentiert Triphosphat.
  • Figure 00310001
  • Folat kann zu Geweben als CH3H4PteG1 transportiert werden. Die Leber reduziert und methyliert PteGlu1 (und H2 oder H4PteGlu1) aktiv und transportiert dann das CH3H4PteGlu1 in die Galle für eine Reabsorption durch die Gedärme und eine nachfolgende Zuführung zu Geweben, CH3H4PteGlu wirkt als ein Methyldonor für die Bildung von Methylcobalamin und als eine Quelle von H4PteGlu und anderen Folatvertretern, wie bereits früher beschrieben. Folat wird innerhalb von Zellen als Polyglutamat gespeichert.
  • SURFACTANTS
  • Obgleich Benzalkoniumchlorid das bevorzugte Surfactant für beste Ergebnisse ist, kann es in einigen Fällen wünschenswert sein, andere quaternäre Ammoniumsurfactants oder andere Surfactants zu verwenden.
  • Die quaternäre Ammoniumverbindung kann Dicocodimoniumchlorid sein, welches ebenfalls als Dicocoalkyldimethylchloride oder Dicocodimethylammoniumchlorid oder Di-C8-18-alkyldimethyl-chloride bekannt ist. Dies kann in Kombination mit Isopropanol, wie 20–30%igem Isopropanol, verwendet werden. Die bevorzugte Quelle von quaternärer Verbindung umfasst: 70–80% quaternäre Ammoniumverbindung und weniger als 0,03% Methylchlorid, besitzt eine spezifische Dichte von etwa 0,87 bei 115°F, einen Dampfdruck von 33 mmHg bei 68°F, einen anfänglichen Siedepunkt von 180°F bei 760 mmHg und eine Flüchtigkeit von 20–30%, und es wird unter dem Handelsnamen CarSpray 300 von Witco Corporation, Dublin, Ohio, USA, hergestellt. Die quaternäre Verbindung kann Desinfektionsqualitäten bereitstellen und dient als ein Fungizid, um Pilz- und Hefeinfektionen zu behandeln.
  • Andere quaternäre Ammoniumverbindungen können brauchbar sein, wie sie unter dem Handelsnamen Jet Quat 2C-75 von Jetco Chemicals, Inc. aus Corsicana, Texas, USA, hergestellt werden, oder unter den Handelsnamen Carspray 400 und Carnauba Spray 200 von Witco Corporation, Dublin, Ohio, USA, hergestellt werden, oder sie enthalten 9% denaturierten Ethylalkohol, wie unter dem Handelsnamen BTC 2125M von Stephan Company, Northfield, Illinois, USA, vertrieben, oder die folgenden MAQUAT-Produkte, welche n-Alkyldimethylbenzylammoniumchlorid umfassen, hergestellt von Mason Chemical Company, Arlington Heights, Illinois, USA. LC-12S (67% C12, 25% C14, 7% C16, 1% C18), MC 1416(5% C12, 60% C14, 30% C16, 5% C18), MC 1412 (40% C12, 50% C14, 10% C16), SC-18-Stearylpaste oder -flocken (5% C16, 95% C18), TC-76 oder MQ-2525 (5% C12, 60% C14, 30% C16 und 5% C18) und MC 6025–50% (25% C12, 60% C14 und 15% C16). Jet Quat 2C-75 umfasst 50–75% Dicocodimethyl-quaternäres-Ammoniumchlorid, 20–50% Isopropylalkohol, besitzt eine spezifische Dichte von 0,88 und einen Siedepunkt von 180°F. CarSpray 400 umfasst: 55–65% quaternäre Ammoniumverbindungen, 20–30% Amine, C14–18 & C16–18, ungesättigt, Alkyl, ethoxyliert, 10–20% Isopropanol und weniger als 0,03% Methylchlorid und besitzt eine spezifische Dichte von etwa 0,88 bei 75°F, einen Dampfdruck von 33 mmHg bei 68°F, einen anfänglichen Siedepunkt von 180°F bei 760 mmHg und eine Flüchtigkeit von 10–20%. Carnauba-Spray 200 umfasst: 50–60% quaternäre Ammoniumverbindungen, 10–20% Isopropanol, 15–25% Wasser, 1–10% alkoyliertes Carnaubawachs und weniger als 0,03% Methylchlorid und besitzt eine spezifische Dichte von etwa 0,90 bei 80°F, einen Dampfdruck von 33 mmHg bei 68 F, einen anfänglichen Siedepunkt von 180°F bei 760 mm/Hg und eine Flüchtigkeit von 20–40%.
  • Nichtionische Surfactants sind oberflächenaktive Verbindungen, welche in Wasserlösung nicht ionisieren. Häufig besitzen diese hydrophile Charakteristika aufgrund der Anwesenheit einer oxygenierten Kette (z.B. einer Polyoxyethylenkette), wobei der lyophile Teil des Moleküls von Fettsäuren, Phenolen, Alkoholen, Amiden oder Aminen abgeleitet ist. Beispielhafte Verbindungen sind Poly(ethylenoxid)kondensate von Alkylphenolen, z.B. das Kondensationsprodukt, welches von einem Mol Nonylphenol und zehn Mol Ethylenoxid gebildet ist, und die Kondensationsprodukte von aliphatischen Alkoholen und Ethylenoxid, z.B. das Kondensationsprodukt, welches aus 1 Mol Tridecanol und 12 Mol Ethylenoxid gebildet wird.
  • Die nichtionischen Surfactants umfassen Phenolethoxylate, umfasst ein Kondensatprodukt von Ethylenoxid und ein Alkylphenol oder einen aliphatischen Alkohol. Die nichtionischen Surfactants umfassen vorzugsweise Nonophenolethoxylat wie T-DET und/oder Octaphenolethoxylat. Die nichtionischen Surfactants sind Reaktionsprodukte von Ethylenoxid und Nonolphenol und/oder Octalphenol. Das Verhältnis von dem Phenol zu dem Ethylenoxid kann im Bereich von 2:20 bis 4:16 liegen und beträgt vorzugsweise etwa 8:12.
  • Nichtionische synthetische Surfactants können nichtionische Detergenzien umfassen. Nichtionische synthetische Surfactants können ebenfalls durch das Kondensieren von Ethylenoxid mit einer hydrophoben Base, gebildet durch die Kondensation von Propylenoxid mit Propylenglykol, gebildet werden. Der hydrophobe Teil des Moleküls, welcher natürlich Wasserunlöslichkeit zeigt, besitzt ein Molekulargewicht von etwa 1200 bis 2500. Die Addition von Polyoxyethylenresten zu diesem hydrophoben Teil tendiert dazu, die Wasserlöslichkeit des Moleküls als Ganzes zu erhöhen, und der flüssige Charakter des Produktes kann bis zu dem Punkt aufrechterhalten werden, bei dem der Polyoxyethylengehalt etwa 50% des Gesamtgewichtes des Kondensationsproduktes ausmacht. Andere nichtionische synthetische Surfactants können folgende einschließen: Polyethylenoxidkondensate von Alkylphenolen, z.B. Kondensationsprodukte von Alkylphenolen oder Dialkylphenolen, bei denen die Alkylgruppe etwa 6 bis 12 Kohlenstoffatome in entweder geradkettiger oder verzweigtkettiger Konfiguration enthalten, mit Ethylenoxid. Ethylenoxid kann in Mengen von 8 bis 25 Mol Ethylenoxid pro Mol Alkylphenol vorliegen. Der Alkylsubstituent in solchen Verbindungen kann von polymerisiertem Propylen, Diisobutylen, n-Octen oder n-Nonen abgeleitet sein.
  • Nichtionische Surfactants können ebenfalls aus der Kondensation von Ethylenoxid mit dem Reaktionsprodukt von Propylenoxid und Ethylendiamin, z.B. Verbindungen, die etwa 40% bis etwa 80% Polyoxyethylen, bezogen auf das Gewicht, enthalten und ein Molekulargewicht von etwa 5000 bis etwa 11000, resultierend aus der Reaktion von Ethylenoxidgruppen mit einer hydrophoben Base, die das Reaktionsprodukt von Ethylendiamin und überschüssigem Propylenoxid umfasst, hergestellt werden; die Base besitzt ein Molekulargewicht in der Größenordnung von 2500 bis 3000.
  • Andere nichtionische Surfactants schließen das Kondensationsprodukt von aliphatischen Alkoholen mit 8 bis 18 Kohlenstoffatomen in entweder geradkettiger oder verzweigtkettiger Konfiguration mit Ethylenoxid ein, z.B. eine Kokosnussalkohol-Ethlyenoxid-Kondensation mit 10 bis 30 Mol Ethylenoxid pro Mol Kokosnussalkohol, und wobei die Kokosnussalkoholfraktion 10 bis 14 Kohlenstoffatome aufweist.
  • Weitere nichtionische Surfactants schließen langkettige tertiäre Aminoxide entsprechend der folgenden allgemeinen Formel ein: R1R3R2N → O worin R1 ein Alkylrest mit etwa 8 bis 18 Kohlenstoffatomen ist; und R2 und R3 jeweils Methyl- oder Ethylreste sind. Der Pfeil in der Formel ist eine herkömmliche Darstellung einer semipolaren Bindung. Beispiele für Aminoxide, die für die Verwendung geeignet sind, schließen Folgende ein: Dimethyldodecylaminoxid, Dimethyloctylaminoxid, Dimethyldecylaminoxid, Dimethyltetradecylaminoxid und Dimethylhexadecylaminoxid.
  • Andere nichtionische Surfactants schließen Folgende ein: langkettige tertiäre Phosphinoxide, entsprechend der folgenden allgemeinen Formel RR'R''P → O worin R ein Alkyl-, Alkenyl- oder Monohydroxyalkylrest im Bereich von 10 bis 18 Kohlenstoffatomen in der Kettenlänge ist und R' und R'' jeweils Alkyl- oder Monohydroxyalkylgruppen sind, welche 1 bis 3 Kohlenstoffatome enthalten. Der Pfeil in der Formel ist eine herkömmliche Darstellung einer semipolaren Bindung. Beispiele für geeignete Phosphinoxide sind: Dimethyldodecylphosphinoxid, Dimethyltetradecylphosphinoxid, Ethylmethyltetradecylphosphinoxid, Cetyldimethylphosphinoxid, Dimethylstearylphosphinoxid, Cetylethylpropylphosphinoxid, Diethyldodecylphosphinoxid, Diethyltetradecylphosphinoxid, Dipropyldodecylphosphinoxid, Bis-(2-hydroxymethyl)dodecylphosphinoxid, Bis-(2-hydroxyethyl)dodecylphosphinoxid, (2-Hydroxypropyl)methyltetradecylphosphinoxid, Dimethyloleylphosphinoxid und Dimethyl-(2-hydroxydodecyl)phosphinoxid.
  • In einigen Fällen kann es zweckmäßig sein, andere Surfactants zu verwenden, wie ein anderes kationisches Surfactant, ein ampholytisches Surfactant oder ein zwitterionisches Surfactant.
  • Die kationischen Surfactants können kationische Detergenzien einschließen. Die kationischen Surfactants umfassen Verbindungen, welche in einem wässrigen Medium ionisieren, wodurch Kationen erhalten werden, die die lyophile Gruppe enthalten. Typisch für diese Verbindungen sind quaternäre Ammoniumsalze, welche eine Alkylgruppe mit etwa 12 bis etwa 18 Kohlenstoffatomen enthalten, wie Laurylbenzyldimethylammoniumchlorid.
  • Ampholytische Surfactants sind Verbindungen mit sowohl anionischen als auch kationischen Gruppen im gleichen Molekül. Beispiele für solche Verbindungen sind Derivate von aliphatischen Aminen, welche eine lange Kette mit etwa 8 bis etwa 18 Kohlenstoffatomen und eine anionische Wasser solubilisierende Gruppe, z.B. Carboxysulfo, Sulfo oder Sulfato, enthalten. Beispiele für ampholytische Detergenzien sind: Natrium-3-dodecylaminopropansulfonat, Natrium-N methyltaurat und verwandte Substanzen, wie mit höherem Alkyl zweifach substituierte Aminosäuren, Betaine, Thetine, sulfatierte, langkettige, olefinische Amine und sulfatierte Imidazolinderivate.
  • Zwitterionische Surfactants können synthetische Detergenzien umfassen. Zwitterionische Surfactants sind im Allgemeinen Derivate von aliphatischen quaternären Ammoniumverbindungen, in denen der aliphatische Rest eine gerade Kette ist oder verzweigt sein kann, und wobei einer der aliphatischen Substituenten etwa 8 bis 18 Kohlenstoffatome enthält und einer eine Wasser solubilisierende anionische Gruppe, z.B. Carboxy-, Sulfo- oder Sulfato-, enthält. Beispiele für Verbindungen, die in diese Definition fallen, sind 3-(N,N-Dimethyl-Nhexadecylammonio)-propan-1-sulfonat und 3-(N,N-Dimethyl-Nhexadecylammonio)-2-hydroxypropan-1-sulfonat.
  • KLINISCHE PHARMAKOLOGIE
  • Wenn die Echinacea- und Commiphora-Phytochemikalien (antimikrobielle Isolate, botanische Extrakte und Mikroben-Inhibitoren) mit folgenden Substanzen gemischt, vereinigt und angewendet wurden: einem Surfactant, vorzugsweise Benzalkoniumchlorid; einem Nährstoffträger, vorzugsweise Folsäure; und einem sterilen wässrigen Träger; waren die Ergebnisse unerwartet und überraschend gut bei der Auflösung (Behandlung) von HIV und anderen infektiösen Erkrankungen, und die Wirksamkeit des Arzneimittels (Mikrobizid) erhöhte sich dramatisch. Ganz signifikant, wenn in in vitro getestet wurde, zeigte der einzigartige Wirkstoff unerwartete und überraschend gute antivirale Aktivität gegen HIV, einschließlich einer Hemmung der Anheftung von HIV an Zielzellen. Wenn das synergistische Arzneimittel topisch in vivo getestet wurde, wurden Herpessimplex-Infektionen sofort zum Stillstand gebracht. Wenn das synergistische Arzneimittel in vitro getestet wurde, war das Benzalkoniumchlorid-Surfactant im Wesentlichen weniger toxisch und innerhalb eines sicheren Spiegels, und es lag ein höherer Grad an inhibitorischer Aktivität gegen HIV und HSV 1 & 2 vor. Die Synergismus-Wechselwirkung und das Mischen von den Echinacea- und Commiphora-Phytochemikalien, von Folsäure und Surfactant wurden gezeigt und unter Berücksichtigung der raschen Lösbarkeit der Komponenten, wenn sie gemischt werden, und der leichten Hafteigenschaft, die durch die Eigenschaften in Lösung erzeugt wurden, festgestellt. Darüber hinaus verbesserten die chemischen Eigenschaften der Echinacea- und Commiphora-Phytochemikalien, der Surfactant-Nährstoff-Träger (Nährstoff) und der wässrige Träger die Stabilisie rung und erhöhten die Reaktivität, die bei der Behandlung infektiöser Erkrankungen nützlich ist.
  • Das Arzneimittel kann in unterschiedlichen Verdünnungen angewandt werden auf: Mund- und Nasenschleimhaut; vaginalem Gewebe; Lippengewebe; analem und perianalem Gewebe; penilem Gewebe; kutanem Gewebe; offenem subkutanem Gewebe; und in höheren Verdünnungen auf okularen Entzündungen und vorzugsweise bei rektaler oder vaginaler Verabreichung. Durch Variieren der Konzentrationen kann das Arzneimittel möglicherweise parenteral verabreicht werden. Das Arzneimittel kann in vaginalen oder analen Passagen; bei Druckverband; im Ohrkanal; bei okkludierenden bzw. abdeckenden Verbänden; bei Stütz- bzw. Gipsverbänden oder Ingestion kontraindiziert sein, und eine solche Anwendung kann Reizungen oder chemische Verbrennungen erzeugen. Es ist möglicherweise nicht ratsam, das Arzneimittel zur Behandlung von anaeroben pilzlichen Infektionen anzuwenden, da einige Pilze resistent sein können.
  • BEISPIELE 1–7
  • In-vivo-Tests
  • Bei einer anfänglichen topischen Anwendung wurde eine in-vivo-Studie durchgeführt, um die Wirkungen der medizinischen Behandlung und des Arzneimittels der vorliegenden Erfindung bei sieben menschlichen Testpersonen zu bewerten, die auf HSV 1 oder 2 positiv getestet wurden. Die Testpersonen wurden topisch mit dem Arzneimittel behandelt, die Benzalkoniumchlorid-Surfactant in einer wässrigen Lösung (in einem Verhältnis von 1:750) in Kombination mit der kräuterartigen botanischen Echinacea purpurea in Pulverform, welche die zuvor aufgelisteten Phytochemikalien enthielt, umfasste. Die Applizierung der Zusammensetzung erfolgte durch eine zweistufige Verfahrensweise, indem zuerst der befallene Bereich oder das Bläschen mit dem Benzalkoniumchlorid-Surfactant in einer wässrigen Lösung durch Besprühen, Betupfen oder mit Hilfe einer Tropfflasche bzw. Tropfpipette; anschließendes Aufbringen eines Überzugs der pulverförmigen Phytochemikalien über dem benetzten Bereich entweder durch einen Tupfer oder manuelles Verspritzen des Pulvers auf den infizierten Bereich benetzt wurden. Ein wichtiger Aspekt bei dieser Behandlung war die Beibehaltung einer vollständigen Abdeckung des befallenen Bereichs für die Dauer des Ausbruchs. Aus diesem Grund wurde der Ausbruchbereich mit der medizinischen Zusammensetzung durch erneutes Aufbringen je nach Bedarf bedeckt gehalten.
  • Von den sieben Testpersonen waren sechs weiblich und eine männlich. Zu Beginn dieser Studie war das Alter der männlichen Testperson 38, die weiblichen Testpersonen waren 8, 27, 30, 32, 38 und 39 Jahre alt. Es gab zwölf infektiöse Ausbrüche über einen Zeitraum von ungefähr sechs Wochen. Neun der Ausbrüche waren HSV 2, genitaler Herpes, und drei waren HSV 1, Fieberbläschen. Die 8 Jahre alten und die 27 Jahre alten weiblichen Personen zeigten HSV 1 (Fieberbläschen). Die 30 Jahre alten, 38 Jahre alten und die 39 Jahre alten weiblichen Personen zeigten HSV 2 (genitaler Herpes). Die 38 Jahre alte Person wies ebenfalls ein HSV 1-Fieberbläschen auf. Die männlichen zeigten HSV 2 (genitaler Herpes). Alle getesteten Personen hatten eine allgemein bekannte Krankheitsgeschichte und konnten den Standardverlauf ihrer Erkrankung nachweisen. Um objektive Daten zu erhalten, wusste keine der Testpersonen irgendetwas über die Testbehandlung oder über irgendeine Wirkung des Arzneimittels. Bei Wiederholungstests wurde den Testpersonen gesagt, dass möglicherweise Placebos unter die Wirkstoffproben gemischt wurden.
  • In sieben Fällen wurde die antimikrobielle Verbindung (Arzneimittel) direkt auf Gewebe im Prodromstadium appliziert. In fünf Fällen wurde die antimikrobielle Verbindung direkt auf ausgebrochene Bläschen appliziert. Die antimikrobielle Verbindung wurde bei Bedarf erneut appliziert, um eine Abdeckung beizubehalten.
  • Beobachtungen: Mit jeder Applizierung des Arzneimittels berichtete jeder Einzelne (Testperson) über ein kribbelndes Gefühl während einiger Sekunden. Sie berichteten ebenfalls, dass es einen hohen Grad der Anhaftung des Arzneimittels (antimikrobielle Verbindung) an dem/den Bläschen oder befallenen Bereich gab. Das Anhaften der Zusammensetzung an dem Epithelgewebe blieb in einem gewissen Grade selbst nach dem Duschen oder Spülen mit Wasser des Bereichs bestehen.
  • Ergebnisse: Die Ergebnisse der Tests der 7 Testpersonen mit der medizinischen Behandlung und dem Arzneimittel waren überraschend gut und sehr konsistent. In jedem der Fälle berichtete die Testperson glücklich, dass, nachdem die Zusammensetzung (Arzneimittel) auf die befallene Stelle appliziert worden war, der Schmerz innerhalb von 10 bis 20 Minuten vollständig aufhörte, wohingegen in der Vergangenheit nichts jemals den Schmerz gelindert hatte. In den sieben Fällen, in denen die Verbindung (Arzneimittel) im Prodromstadium appliziert wurde, berichteten die Testpersonen, dass der Schmerz aufhörte, alle Symptome, die früher bis zum vollen Ausbruch eskaliert wären, aufhörten und es nie wieder zu einem Ausbruch kam. Alle äußeren Symptome und körperlichen Manifestationen von Herpes verschwanden innerhalb weniger Stunden, nachdem das Arzneimittel appliziert worden war. In den fünf Fällen, in denen die Zusammensetzung (Arzneimittel) auf ausgebrochene Bläschen appliziert worden war, berichteten die Testpersonen, dass der Schmerz innerhalb Minuten aufhörte und das Brennen, Jucken und die Reizung sich in zwei bis vier Stunden auflösten und die Bläschen austrockneten und innerhalb von einundzwanzig Stunden verschwunden waren. In allen Fällen hörten die anderen, noch extremeren schwächenden Symptome auf, wie: Fieber, Unbehagen, Leistenschwellungen, nässende Wunden und Urinieren unter Schmerzen, nachdem das Arzneimittel appliziert worden war.
  • In der Folge wurde dort, wo Testpersonen eine Dosis der Zusammensetzung (Arzneimittel) zum Testen auf zukünftige Ausbrüche verabreicht wurde, berichtet, dass, wenn sich die Anfangssymptome eines Ausbruchs zeigten, was das Prodromstadium eines Ausbruchs signalisiert, die Zusammensetzung (Arzneimittel) unverzüglich durch die Testpersonen laut den Instruktionen appliziert wurde und der Ausbruch völlig gestoppt und aufgelöst wurde. Bezeichnenderweise wurde von Testpersonen, die an die Erfahrung mehrerer Ausbrüche jährlich gewohnt waren, ebenfalls berichtet, dass sie spürbar längere Latenzperioden hatten. Bei einer Weiterverfolgung über 3 Jahre bei einer Person, die über starke monatliche Ausbrüche über vier Jahre vor der Anwendung dieses Arzneimittels berichtet hatte, wird von ihr nun berichtet, dass sie keinen Ausbruch in mehr als einem Jahr seit der Verwendung dieses Arzneimittels hatte.
  • Weitere Beobachtungen: Eine männliche Testperson berichtete, dass sie nach der anfänglichen Aufbringung während der Prodromphase eines Ausbruchs duschte und vergaß, die Zusammensetzung (Arzneimittel) erneut über einen Zeitraum von ungefähr 30 Stunden aufzubringen. Demzufolge kamen mehrere Bläschen zum Ausbruch und begannen zu koaleszieren. Die Testperson brachte die Zusammensetzung (Arzneimittel) dann erneut auf und hielt anschließend den Bereich mit der Zusammensetzung gut bedeckt. Im Anschluss löste sich der Ausbruch in 21 Stunden in der gleichen Weise wie bei den anderen menschlichen Testpersonen auf.
  • Eine weitere Beobachtung zeigte an, dass die Zusammensetzung (Arzneimittel) in Gegenwart bestimmter Proteine oder Seifen abgeschwächt werden kann oder weniger wirksam sein kann. Eine weibliche Testperson ist wohl beim Reinigen des befallenen Bereichs vor der Aufbringung der Zusammensetzung (Arzneimittel) übereifrig gewesen. Dazu kam es während eines dritten Ausbruchs, nachdem man mit der Zusammensetzung (Arzneimittel) bei den zwei früheren Ausbrüchen Erfolg hatte. In diesem Fall stellten sich, als die Zusammensetzung (Arzneimittel) appliziert wurde, kein vertrautes Kribbelgefühl und keine Linderung der Symptome ein. Ungefähr 24 Stunden verstrichen, bevor sie Rat suchte und der Ausbruch bis zum vollen Bläschenausbruchstadium mit allen vorgenannten Symptomen der Erkrankung eskaliert war. Sie wurde instruiert, alle Seifenreste von dem Bereich gründlich abzuspülen, den Bereich zu trocknen und die Zusammensetzung (Arzneimittel) erneut zu applizieren. Nach der Befolgung der Instruktionen berichtete sie, dass sich der Ausbruch durch Applizieren der medizinischen Zusammensetzung vollständig aufgelöst hatte, wie dies bei den zwei früheren Ausbrüchen der Fall war.
  • BEISPIELE 8–13
  • Dermatologische und Tierversuche
  • Es wurden Tierversuche zur Bestimmung jeglicher möglichen dermatologischen allergischen Reaktion, die durch die medizinische Zusammensetzung (Arzneimittel) ausgelöst wurde, durchgeführt. Sechs Versuchstiere wurden verwendet. Die Tiere schlossen 3 weibliche Kaninchen (Alter unbekannt); 2 Hunde (1 weiblicher, 2 Jahre alt, und 1 männlicher, 9 Jahre alt); und eine 3 Jahre alte sterilisiere männliche Katze ein. In diesen Tierversuchen wurde die oben genannte Zusammensetzung (Arzneimittel) in dem zuvor angegebenen Verfahren auf die Innenseite des Außenohrs von jedem Tier appliziert. In allen Fällen wurde der behandelte Bereich mit der Verbindung über vierundzwanzig Stunden bedeckt gehalten, was der Zeit entspricht, die menschliche Testpersonen gebraucht hatten. Die mit den sechs Versuchstieren durchgeführten Tests zeigten, dass es keine Anzeichen von dermatologischer Reizung oder allergischer Reaktion gab.
  • BEISPIEL 14
  • Die oben genannte medizinische Verbindung, die Virusinhibitoren enthielt, wurde auch bei einer durch Papillomavirus verursachten Warze auf dem Maul eines zwei Jahre alten kastrierten Vollblutpferdes getestet. Papillomavirus-Warzen sind schwer zu behandeln. Die Warze hatte 25 mm Durchmesser. Die antimikrobielle Verbindung (Arzneimittel) wurde zweimal täglich appliziert. Die Warze wurde dann bei jeder Applikation gemessen.
  • Ergebnisse: Ziemlich unerwartet nahm die Größe der Warze dramatisch um etwa 3 mm pro Tag ab, solange das Arzneimittel auf die Warze appliziert wurde, und am fünften Tag fiel sie vollständig ab. Es wurde beobachtet, dass zuerst die Oberflächenschichten der Warze sich aufzulösen begannen, wodurch große erythematöse Papeln freigelegt wurden. Danach nahm interessanterweise die Größe der Warzen nicht bloß durch Abschuppen oder Ablösen ab, sondern sie verkleinerten sich am Verbindungspunkt auf der Epidermis des Tieres und fielen ab, wobei sie noch in gewisser Weise intakt waren, ohne dass es zu einer Vernarbung als Folgeerscheinung kam.
  • In einer laufenden in vivo-Langzeitstudie dieser Erfindung, die mit den ersten sieben Testpersonen im April 1989 begann und sich jetzt über 7 Jahre erstreckte, wurden etwa 100 infektiöse Ausbrüche mit dem Arzneimittel in unterschiedlichen Konzentrationen behandelt, wie zuvor beschrieben wurde. In allen Fällen waren die überraschend guten Ergebnisse dieselben. 1. Der Schmerz verschwindet innerhalb von Minuten; 2. Es kommt zu keinem Ausbruch, wenn die Zusammensetzung im Prodromstadium appliziert wird; 3. Der Ausbruch löst sich in einundzwanzig Stunden auf, wenn im Bläschenstadium appliziert wird.
  • In vifro-Tests
  • Labortests wurden an der University of Chicago, Clinical Microbiology Laboratories, durchgeführt, um die inhibitorische Aktivität in vitro der medizinischen Behandlung und Zusammensetzung (Arzneimittel) zu bestimmen. Die Labortests wurden vom Testleiter (Associate Director), PhD, und Außerordentlichen Professor der Pathologie durchgeführt. Die in vitro-Tests der medizinischen Zusammensetzung, die weiter unten als "Arzneistoff" bezeichnet wird, ergaben überraschend gute Resultate. Es wurde festgestellt, dass die medizinische Be handlung und Zusammensetzung eine überraschend hervorragende inhibitorische Aktivität bzgl. HSV 1 und HSV 2 zeigte. Es wurde von dem Pathologen angegeben, dass er "Hunderte" von anderen Verbindungen getestet hatte und noch nie etwas so Gutes gesehen hatte, wie durch diese Verbindung bewirkt.
  • Es folgen Tests des Arzneimittels, die durchgeführt wurden, und Ergebnisse, die an der University of Chicago erhalten wurden. Zur leichteren Interpretation einiger der wissenschaftlichen Daten und Testergebnisse finden die nachstehenden Definitionen Anwendung:
    "MEM" bezieht sich auf das 'minimal essentielle Medium'. Dies ist das Kulturmedium, das in Labors zum Züchten der Zellen verwendet wird, mit welchen Tests durchgeführt wurden.
    "Fibroblast" ist eine Mesenchym-Humanzelle (eine Zelle, die im Bindegewebe, Blut, Knochen, den Lymphgefäßen und dem Knorpelgewebe zu finden ist).
    "IC50" bezieht sich auf die inhibitorische Konzentration. Für diese Tests wurde ein 50-%-Endpunkt gewählt, wie es üblich ist. Die nachfolgende Zahl gibt die größte Verdünnung unter 50% an. Daher ist sie die Definition des Endpunkts.
    Wenn ein Bereich unter einer Verdünnung leer gelassen ist, gibt dies an, dass es bei dieser Verdünnung möglicherweise eine Toxizität gab, der Test ist möglicherweise nicht lesenswert gewesen oder es sind keine interpretierbaren Daten verfügbar.
    Wenn ein unter Verdünnung stehender Bereich unter mit einem Bindestrich (-) gekennzeichnet ist, so gibt dies an, dass es keine Plaques gibt und Herpes (HSV) erfolgreich inhibiert wird.
  • BEISPIELE 15–17
  • In diesen in-vitro-Tests wurden die folgenden Arzneistoffe (Arzneimittel) verwendet:
    Referenz-Arzneistoff #1. = Benzalkoniumchlorid-Surfactant in einer wässrigen Lösung in einem Verhältnis von 1:750. Das Surfactant in der wässrigen Lösung wurde vor dem Gebrauch filtriert und in einem identischen Volumen von 2X MEM verdünnt unter Erhalt einer 1:1500-Verdünnung in 1X MEM.
  • Referenz-Arzneistoff #2 = Echinacea-Pulver (Phytochemikalien) in einer wässrigen Lösung. Dieses Präparat wurde durch Warminfusion in sterilem Wasser extrahiert. Die extrahierten Phytochemikalien wurden vor dem Gebrauch zentrifugiert und filtriert. Die filtrierten Phytochemikalien wurden in einem identischen Volumen von 2X MEM verdünnt unter Erhalt des unverdünnten Präparats in 1X MEM.
  • Referenz-Arzneistoff #3 = Echinacea-Pulver (Phytochemikalien) wurden extrahiert und mit Benzalkoniumchlorid-Surfactant durch ein Kaltinfusionsverfahren kombiniert. Das kombinierte Präparat wurde vor dem Gebrauch zentrifugiert und filtriert und in einem identischen Volumen von 2X MEM verdünnt unter Erhalt des unverdünnten Präparats in 1X MEM.
    • 1. Drei 24-Kammer-Platten wurden mit Fibroplasten inokuliert. Drei verschiedene Extraktionen (zum Vergleich) in fünf Konzentrationen der Zusammensetzung wurden zum Screening auf antivirale Aktivität in Konzentrationen von: unverdünnt, 1:2, 1:4, 1:8 und 1:16 in 1X MEM verwendet. Es gab vier Kontrollkammern auf jeder Platte, die MEM ohne Arzneistoff enthielten.
    • 2. Die Wachstumsmedien wurden aus den Kammern entfernt und 200 μl HSV-1 wurden in jede Kammer der oberen Hälfte jeder Platte zugegeben: HSV-1 wurde 1:5000 verdünnt (2,0 μl Stamm-HSV-1 in 10 mL MEM). Der Virustiter war 3 × 106 pro mL. Ferner wurden 200 μl HSV-2 jeder Kammer der unteren Hälfte jeder Platte zugegeben. HSV-2 wurde 1:2000 verdünnt (5,0 μl Stamm-HSV-2 in 10 mL MEM). Der Virustiter war 6 × 105 pro mL.
    • 3. Die Platten wurden bei 37°C zwei Stunden lang inkubiert.
    • 4. Das Inokulum wurde entfernt und 1 mL des MEM, das die Arzneistoffe #1–3 enthielt, wurden den vier Kammern zugegeben. Die Konzentration des Arzneistoffs im Vergleich mit dem MEM ist weiter unten angegeben. Tabelle 1
      Figure 00440001
    • 5. Ergebnisse: HSV-1, flüssige Deckschicht, Arzneistoff unmittelbar nach der Virusabsorption zugegeben.
    • Platte 1, Arzneistoff #1 kontaminiert mit Bakterien! Kein Wachstum, möglicherweise Zelltrümmer.
    • Platte 2, Arzneistoff #2 kontaminiert mit Bakterien! Kein Wachstum, möglicherweise Zelltrümmer.
    • Platte 3, Arzneistoff #3 die Resultate sind in den Tabellen 2 und 3 weiter unten angegeben.
    Tabelle 2 - Arzneistoff #3 HSV 1 - Testergebnisse
    Figure 00440002
    Tabelle 3 - Arzneistoff #3 HSV 2 - Testergebnisse
    Figure 00440003
    • *geringe Toxizität
    • **sehr kleine Plaques
    • Kommentare: Tests mit Arzneistoff #3 lieferten hervorragende Ergebnisse. Die Zellen sehen ohne Kontamination gut aus. Bei den geringeren Verdünnungen kann das Präparat für einige der Zellen toxisch sein. Dieses Präparat war unerwartet erfolgreich in seiner inhibitorischen Aktivität.
  • BEISPIELE 18–20
  • Drei 24-Kammer-Platten wurden mit Fibroblasten und den folgenden Arzneistoffen inokuliert.
  • Referenz-Testarzneistoff #1A = Benzalkoniumchlorid-Surfactant in einer wässrigen Lösung. Der Benzalkoniumchlorid-Surfactant wurde durch Erzeugen einer 1:375-Verdünnung in Wasser (32 μl in 12,0 mL sterilem Wasser) hergestellt. Dies wurde vor dem Gebrauch gefiltert und dies wurde in einem identischen Volumen von 2X MEM verdünnt unter Erhalt einer 1:750-Verdünnung in 1X MEM. Die Verdünnung erfolgte zur Aufrechterhaltung des Verhältnisses.
  • Referenz-Testarzneistoff #2A = Echinacea purpurea-Pulver (Phytochemikalien) in einer wässrigen Lösung. Dieses Präparat war eine 50 mg/mL-Lösung (300 mg in 6,0 mL Wasser) von Echinacea purpurea-Pulver in sterilem Wasser. Die Mischung wurde gevortext und vier Stunden lang kühl aufbewahrt. Das Echinacea-Pulverpräparat wurde vor dem Gebrauch mit 3500 U/min 15 Minuten lang bei 10°C zentrifugiert und filtriert und danach in einem identischen Volumen von 2X MEM verdünnt unter Erhalt des unverdünnten Präparats in 1X MEM.
  • Referenz-Testarzneistoft #3A = Echinacea purpurea-Pulver (Phytochemikalien), gelöst in Benzalkoniumchlorid-Surfactant. Dieses Präparat war eine 50 mg/mL-Lösung (300 mg in 6,0 mL Benzalkoniumchlorid, 1:375). Die Mischung wurde gevortext und vier Stunden lang kühl aufbewahrt. Die Phytochemikalien- und Surfactant-Mischung wurde vor dem Gebrauch mit 3500 U/min 15 Minuten lang bei 10°C zentrifugiert und filtriert und danach in einem identischen Volumen von 2X MEM verdünnt unter Erhalt des unverdünnten Präparats in 1X MEM.
    • 1. Drei Platten wurden zum Screening der drei Arzneistoffpräparate verwendet. Die zum Screening auf antivirale Aktivität benötigten Konzentrationen waren: 1:2, 1:4, 1:8 und 1:16 in 1X MEM. Es gab vier Kontroll-Kammern auf jeder Platte, die MEM ohne Arzneistoff enthielten.
    • 2. Die Wachstumsmedien wurden aus den Kammern entfernt und 200 μl HSV-1 wurden in jede Kammer der oberen Hälfte jeder Platte zugegeben. HSV-1 wur de 1:5000 verdünnt (2,0 μl Stamm-HSV-1 in 10 mL MEM). Der Virustiter war 3 × 106 pro mL.
    • 3. Die Platten wurden bei 37°C vier Stunden lang inkubiert.
    • 4. Das Inokulum wurde entfernt und 1 mL des MEM, das die Arzneistoffe #1A–3A enthielt, wurden den vier Kammern zugegeben. Tabelle 4
      Figure 00460001
    • 5. Ergebnisse: HSV-1, flüssige Deckschicht, Zusammensetzung unmittelbar nach der Virusabsorption zugegeben.
    Tabelle 5 - Arzneistoff #1A - HSV 1 Testergebnisse
    Figure 00460002
    • Kommentare: Diese Kammern weisen ein feines Ausfällungsprodukt über den Zellen auf. Benzalkoniumchlorid wird vermutlich mit dem Protein in dem Medium ausgefällt.
    Tabelle 6 - Arzneistoff #2A - HSV 1 - Testergebnisse
    Figure 00470001
    • Kommentare: Es gab zwar einige Plaques, doch sie waren sehr klein.
    Tabelle 7 - Arzneistoff #3A - HSV 1 - Testergebnisse
    Figure 00470002
    • Kommentare: Obwohl es eine gewisse Toxizität gab, war dieser Arzneistoff sehr erfolgreich bei der Inhibierung des Virus, es schien keine Plaques zu geben.
  • BEISPIELE 21–24
  • Vier 24-Kammer-Platten wurden mit Fibroblasten inokuliert.
  • Referenz-Testarzneistoft #1B = Benzalkoniumchlorid-Surfactant in einem wässrigen Diluens. Das Benzalkoniumchlorid wurde durch Erzeugen einer 1:1000-Verdünnung in Wasser hergestellt (10 μl in 10,0 mL sterilem Wasser). Dies wurde vor dem Gebrauch gefiltert und in einem identischen Volumen von 2X MEM verdünnt unter Erhalt einer 1:2000-Verdünnung in 1X MEM. (500 μl Arzneistoff plus 500 μl 2X MEM).
  • Referenz-Testarzneistoft #2B = Echinacea purpurea-Pulver (Phytochemikalien) in einer wässrigen Lösung. Dieses Präparat war eine 50 mg/mL-Lösung (250 mg in 5,0 mL Wasser) von Echinacea purpurea-Pulver in sterilem Wasser. Die Mischung wurde gevortext und vier Stunden lang kühl aufbewahrt. Das Echinacea-Pulverpräparat wurde vor dem Gebrauch mit 3500 U/min 15 Minuten lang bei 10°C zentrifugiert und filtriert und in einem identischen Volumen von 2X MEM verdünnt unter Erhalt des unverdünnten Präparats in 1X MEM. (500 μl Arzneistoff plus 500 μl 2X MEM).
  • Referenz-Testarzneistoft #3B = Echinacea purpurea-Pulver (Phytochemikalien), gelöst in Benzalkoniumchlorid-Surfactant. Dieses Präparat war eine 50 mg/mL-Lösung (250 mg in 5,0 mL Benzalkoniumchlorid, 1:1000). Die Mischung wurde gevortext und vier Stunden lang kühl aufbewahrt. Die Echinacea-Phytochemikalien und Surfactanten wurden vor dem Gebrauch mit 3500 U/min 15 Minuten lang bei 10°C zentrifugiert und filtriert und danach in einem identischen Volumen von 2X MEM verdünnt unter Erhalt des Präparats in 1X MEM. (500 μl Arzneistoff plus 500 μl 2X MEM).
  • Referenz-Testarzneistoff #4B = Echinacea purpurea-Pulver (Phytochemikalien) in einer wässrigen Lösung (Diluens) und dann vermischt mit Benzalkoniumchlorid-Surfactant in einem Verhältnis von 1:1000. Dieses Präparat war eine 50 mg/mL-Lösung (250 mg in 5,0 mL Wasser) von Echinacea purpurea-Pulver in sterilem Wasser. Die Mischung wurde gevortext und vier Stunden lang kühl aufbewahrt. Die wässrigen Phytochemikalien wurden vor dem Gebrauch mit 3500 U/min 15 Minuten lang bei 10°C zentrifugiert und filtriert. Diese Präparation wurde in einem identischen Volumen an Benzalkoniumchlorid in einem Verhältnis von 1:1000 verdünnt, um die Echinacea-Benzalkoniumchlorid-Mischung zu erhalten. Diese Mischung wurde mit dem gleichen Volumen an 2X MEM verdünnt, um das 1:4-Präparat in 1X MEM zu erhalten (500 μl Arzneistoff #1 und 250 μl Arzneistoff #2 plus 500 μl 2X MEM).
    • 1. Vier Platten wurden zum Screening der vier Arzneistoffpräparate verwendet. Die zum Screening auf antivirale Aktivität benötigten Konzentrationen waren: 1:20, 1:40, 1:80 und 1:160 und 1:320 in 1X MEM. Es gab vier Kontrollkammern auf jeder Platte, die MEM ohne Arzneistoff enthielten.
    • 2. Die Wachstumsmedien wurden aus den Kammern entfernt und 200 μl HSV-1 wurden in jede Kammer der oberen zwei Reihen jeder Platte zugegeben: HSV-1 wurde 1:5000 verdünnt (2,0 μl Stamm-HSV-1 in 10 mL MEM). Der Virustiter belief sich auf 3 × 106 pro mL. Ebenfalls wurden 200 μl HSV-2 jeder Kammer der unteren Hälfte jeder Platte hinzugesetzt. HSV-2 wurde 1:2 000 verdünnt (5,0 μl Vorrats-HSV-2 in 10 mL MEM). Der Virustiter belief sich auf 6 × 105 pro mL.
    • 3. Die Platten wurden bei 37°C vier Stunden lang inkubiert.
    • 4. Das Inokulum wurde entfernt und 1 mL des MEM, das die Arzneistoffe #1–4 enthielt, wurde den vier Kammern zugegeben. Tabelle 8
      Figure 00490001
    • 5. Ergebnisse: HSV-1, flüssige Deckschicht, Arzneistoff unmittelbar nach der Virusabsorption zugegeben.
    Tabelle 9 - Arzneistoff #1B - HSV 1 - Testergebnisse
    Figure 00490002
    • Kommentare: Leicht toxisch, Test war schwer zu lesen.
    • HSV-2, flüssige Deckschicht, Arzneistoff unmittelbar nach der Virusabsorption zugegeben. Tabelle 10 - Arzneistoff #1B - HSV 2 - Testergebnisse
      Figure 00490003
      • Kommentare: Test war zu toxisch, um einen guten Ablesewert zu erhalten.
      Tabelle 11 - Arzneistoff #2B - HSV 1 - Testergebnisse
      Figure 00500001
      • Kommentare: Kleine Plaques.
      Tabelle 12 - Arzneistoff #2B - HSV 2 - Testergebnisse
      Figure 00500002
      Tabelle 13 - Arzneistoff #3B - HSV 1 - Testergebnisse
      Figure 00500003
      • Kommentare: Obwohl es eine gewisse Toxizität gab, war der Arzneistoff sehr erfolgreich, es schien keine Plaques zu geben.
      Tabelle 14 - Arzneistoff #3B-HSV 2-Testergebnisse
      Figure 00500004
      • Kommentare: Ein schwieriger Test, um einen wirklich guten Ablesewert zu bekommen. Jedoch besitzt der Arzneistoff eine erfolgreiche inhibitorische Aktivität.
      Tabelle 15 - Arzneistoff #4B - HSV 1 - Testergebnisse
      Figure 00510001
      • Kommentare: Zu toxisch bei den höheren Spiegeln. Trotzdem gab es eine inhibitorische Aktivität bei 1:320.
      Tabelle 16 - Arzneistoff #4B - HSV 2 - Testergebnisse
      Figure 00510002
      • Kommentare: Toxizität vermutlich auf das Benzalkoniumchlorid zurückzuführen. Der Arzneistoff zeigte bei der 1:320-Verdünnung eine sehr starke inhibitorische Aktivität.
  • Die in vitro-Tests der Beispiele 21–24 verwendeten Rohmaterialien, die nicht gereinigt bzw. aufgearbeitet waren. Trotzdem zeigen die Tests eine überraschend gute virale inhibitorische Aktivität und eine vermutliche Synergie zwischen den Bestandteilen.
  • In den vorausgehenden In-vitro-Tests, in denen die Referenz-Arzneistoffe #3, 3A und 3B Echinacea purpurea-Phytochemikalien waren, die extrahiert und mit Benzalkoniumchlorid-Surfactant kombiniert wurden, zeigten diese die größere antivirale Aktivität, und zeigten, was am bemerkenswertesten ist, eine Synergie zwischen den Komponenten: Echinacea purpurea und Benzalkoniumchlorid. Dies kann möglicherweise durch eine gemeinsame Stabilität und eine verbesserte Reaktivität zwischen den zwei Komponenten erklärt werden. Das Benzal koniumchlorid in der synergistischen Mischung zeigte einen geringeren Grad der Toxizität, und die synergetische Kombination zeigte einen größeren Grad der antiviralen Aktivität, besonders mit HSV-2.
  • HIV-TESTS
  • Viracea-2 wurde für die Evaluation von Anti-HIV-Aktivität in Modell-Assays von akuter Infektion getestet. Zusätzliche Assays wurde zur Evaluierung des Bereichs und der Wirkungsweise der Verbindung durchgeführt.
  • Viracea 2 wurde als Lösung bereitgestellt. Die Formulierung schloss das Filtrieren der Lösung und eine Zentrifugation ein. Die hohe Testkonzentration, die in jedem der Assays verwendet wurde, variierte von einer 1:5-Verdünnung bis zu einer 1:100-Verdünnung in Gewebekulturmedium. Jede Verbindung wurde vor dem Gebrauch bei 70°C aufbewahrt.
  • Vermehrung und Quantifizierung von Zelllinien und Virusstämmen
  • Zellen, die in den Verbindungs-Screening-Assays verwendet wurden, wurden als die CEM-SS-Zelllinie bezeichnet. Diese Zellen sind gegenüber einer Infektion mit HIV überaus empfänglich, bilden rasch multinukleierte Syncytia und werden am Ende von HIV abgetötet. Diese Zellen werden leicht (2–7 × 103 Zellen pro ml) in RPM1 1640-Gewebekulturmedium unterhalten, das mit 10% fötalem Rinderserum, Glutamin und Antibiotika ergänzt war. Die Zellen werden zweimal wöchentlich bei einer Verdünnung von 1:20 passagiert. Die Passagierungszahl wird jede Woche protokolliert, und die Zellen werden nach zwanzig Wochen Passagierung weggeworfen, und die frischen CEM-SS-Zellen werden aufgetaut und in dem Assay verwendet. Vorräte von CEM-SS-Zellen wurden in flüssigem Stickstoff in 1 ml NUNC-Gefäßen in 90% fötalem Kälberserum und 10% Dimethylsulfoxid (DMSO) eingefroren. Nach dem Auftauen stehen CEM-SS-Zellen routinemäßig für die Nutzung in dem Primär-Screening-Assay nach zwei Wochen in Kultur bereit. Vor dem Ersetzen einer späten Passagierungs-Zellline werden die neuen CEM-SS-Zellen in dem Screening-Assay-Protokoll, welches den aktuellen Vorrat von infektiösem Virus und AZT nutzt, getestet. Wenn das Infizierungsvermögen des Virus bei den neuen Zellen sich signifikant unterscheidet oder wenn AZT weniger aktiv erscheint als erwartet, werden die neuen Zellen nicht in das Screening-Programm eingeführt. Mycoplasma-Tests werden routinemäßig mit allen Zelllinien durchgeführt (siehe weiter oben).
  • Virus-Pools werden in CEM-SS-Zellen hergestellt und titriert, in 5-ml-Aliquoten gegeben und bei –135°C eingefroren. Nach dem Auftauen wird ungebrauchtes Virus weggeworfen, um Veränderungen beim infektiösen Titer zu vermeiden. Optimierungs-Assays dokumentierten eine Ein-log-Reduzierung beim Virustiter bei dem ersten Gefrier-/Auftau-Zyklus und eine weniger drastische Titerreduzierung mit nachfolgenden Gefrier/Auftau-Durchgängen. Viruspools werden durch die akute Infektion von 5 × 105 CEM-SS-Zellen mit HIV in einem Volumen von 200 μl bei einer Mehrfachinfektion hergestellt, die dazu bestimmt ist, zu einer vollständigen Zellabtötung bei einer Nachinfektion am 7. Tag zu führen (ungefähr 0,05 für das IIIB-Isolat von HIV-1 und 0,01 für das RF-Isolat von HIV-1). Die Infektion wird eine Stunde lang bei 37°C weiterlaufen gelassen, und dann werden die Zellen in einen T25-Kolben transferiert und das Volumen wird auf 2 ml erhöht. Bei der Nachinfektion am Tag 1 wird das Volumen auf 5 ml gebracht, und am Tag 2 wird das Volumen auf 10 ml erhöht. Beginnend am Tag 4 werden die Zellen pelletiert, der Überstand wird sichergestellt, und die Zellen werden erneut in einer frischen 10-ml-Allquote von Gewebekulturmedium suspendiert. Vollständige Mediumaustausche auf täglicher Basis, anstatt das Zulassen von Wachstum der Zellen in dem Medium über eine längere Zeit, ermöglichen es, dass das in dem primären Screening genutzte Virus-Inoculum relativ wenig an Nährstoffen erschöpft wird, wenn es zum Infizieren von Zellen verwendet wird. Die angewandte Anfärbungsreaktion (XTT) erfordert, dass die Glucose-Konzentration hoch bleibt. Vertiefungen mit durch Zellwachstum aufgebrauchter Glucose lassen keine metabolische Umwandlung des Tetrazolium-Farbstoffs zu dem Formazan-Produkt zu.
  • Zellfreie Überstände von den akut infizierten Zellen werden am Tag 4, Tag 5, Tag 6 und Tag 7 sichergestellt. Ein Aliquot vom Überstand wird separat an jedem Tag für die Verwendung bei der Titerbestimmung zurückbehalten. Titerbestimmungen schließen ein Assay der Reversen-Transkriptase-Aktivität, eine Endpunkt-Titrierung oder eine Plaque-Assay-(CEM-SS-)Quantifizierung von infektiösen Partikeln und die Quantifizierung der Zellabtötungs-Kinetik ein. Es wurde festgestellt, dass Höchstspiegel von infektiösem Virus in den akut infizierten Kulturen produziert werden, wenn die Lebensfähigkeit der Zellen auf einen Wert unterhalb des 50-%-Spiegels abfällt. Da das primäre Screening-Assay die Schutzwirkungen einer Verbindung durch ihre Fähigkeit zur Inhibierung von HIV-induzierten cytopathischen Wirkungen quantifiziert, wird die Menge an Virus, die zum Abtöten von CEM-SS-Zellen in 6 Tagen erforderlich ist, zur Bestimmung der Menge von Virus, die pro Vertiefung in dem primären Screening-Assay erforderlich ist, routinemäßig genutzt. Jeder der täglichen Pools wird in dem primären Screening-XTT-Assayprotokoll durch die Durchführung zweifacher Verdünnungen des Virus, beginnend bei einer hohen Testkonzentration von 50 μl an Virus pro Well, titriert. Das Tetrazolium-Farbstoff-XTT-Anfärbungsvertahren wird zur Bestimmung der exakten Menge an Virus, die erforderlich ist, um die CEM-SS-Zellen in jedem Well abzutöten, genutzt, und diese Mindestmenge an Virus wird für die Durchführung aller Primärtests genutzt. Identische Verfahren werden zur Herstellung aller im Labor genutzten Virusisolate angewandt, einschließlich von der im Labor abgeleiteten Stämme von HIV-1, HIV-2 und STV. Die klinischen Isolate, die genutzt werden, werden in frischen Humanzellen passagiert, und die Verfahren für das Wachstum dieser Zellen und die Bildung von Viruspools sind weiter unten beschrieben.
  • Mikrotiter-Antivirus-XTT-Assay
  • Zellpräparation
  • CEM-SS-Zellen oder eine andere etablierte humane Zelllinie, die in diesen Experimenten verwendet werden, wurden in T-150-Kolben für die Verwendung in dem Assay passagiert. Am Tag vor dem Assay wurden die Zellen im Verhältnis 1:2 aufgeteilt, um sicherzustellen, dass sie sich zum Zeitpunkt der Infektion in einer exponentiellen Wachstumsphase befinden. Am Tag des Assays wurden die Zellen zweimal mit Gewebekulturmedium gewaschen und in frischem Gewebekulturmedium erneut suspendiert. Eine Gesamtzell- und Lebensfähigkeitszählung wurde mit Hilfe eines Hämazytometers und eines Trypanblau-Farbstoff-Ausschlusses durchgeführt. Die Zellenlebensfähigkeit war höher als 95% für die in dem Assay genutzten Zellen. Die Zellen wurden pelletisiert und mit 2,5 × 104 Zellen pro ml Gewebekulturmedium erneut suspendiert. Zellen wurden den Arzneistoff enthaltenden Platten in einem Volumen von 50 μl zugegeben.
  • Viruspräparation
  • Ein vortitriertes Aliquot des Virus wurde aus dem Gefrierfach (–80°C) entnommen und langsam auf Raumtemperatur in einem biologischen Sicherheitsschrank auftauen gelassen. Das Virus wurde erneut suspendiert und in Gewebekulturmedium verdünnt, sodass die Menge des Virus, die jeder Wand in einem Volumen von 50 μl hinzugefügt wurde, der Menge entspricht, von der er mittelt wurde, dass sie zu einer vollständigen Zellabtötung 6 Tage nach der Infektion führt. Im Allgemeinen erforderten die mit dem IIIB-Isolat von HIV gebildeten Viruspools die Zugabe von 5 μl Virus pro Well. Pools von RF-Virus waren um das fünf- bis zehnfache wirksamer, wobei 0,5–1 μl pro Well benötigt wurden. Die TCID50-Berechnung durch Endpunkt-Titrierung in CEM-SS-Zellen zeigte, dass die Mehrfachinfektion dieser Assays im Bereich von 0,005–2,5 lag.
  • Plattenformat
  • Das Format der Testplatte wurde standardisiert und enthielt Zellen-Kontrollwells (= nur Zellen), Virus-Kontrollvertiefungen (= Zellen plus Virus), Arzneistoff-Toxizitäts-Kontrollwells (= Zellen plus nur Arzneistoff), colorimetrische Arzneistoff-Kontrollwells (= nur Arzneistoff) sowie Wells gemäß des Experiments (= Arzneistoff plus Zellen plus Virus).
  • BEISPIELE 25–48
  • XTT-Anfärbung von Screening-Platten
  • Nach 6 Tagen Inkubation bei 37°C in einem 5%-CO2-Inkubator wurden die Testplatten durch Anfärben mit dem Tetrazolium-Farbstoff XTT analysiert. XTT-Tetrazolium wird durch die mitochondrialen Enzyme von metabolisch aktiven Zellen zu einem löslichen Formazan-Produkt metabolisiert, was die schnelle quantitative Analyse der Inhibierung von HIV-induzierter Zellabtötung durch Anti-HIV-Testsubstanzen erlaubt. Am 6. Tag nach der Infektion wurden Platten aus dem Inkubator entfernt und begutachtet. Die Verwendung von Mikrotiter-Platten mit rundem Boden ermöglicht eine schnelle makroskopische Analyse der Aktivität einer bestimmten Testverbindung durch die Bewertung der Pelletgröße. Die Ergebnisse der makroskopischen Beobachtungen wurden durch weitere mikroskopische Analyse bestätigt und verbessert. XTT-Lösung wurde lediglich als eine Vorratslösung von 1 mg/ml in PBS hergestellt. Phenazinmethosulfat-(PMS-)Lösung wurde mit 15 mg/ml in PBS hergestellt und im Dunkeln bei –20°C aufbewahrt, XTT/PMS-Vorratslösung wurde unmittelbar vor dem Gebrauch durch 1:100-Verdünnung des PMS in PBS und Zusetzen von 40 μl pro ml XTT-Lösung hergestellt. Fünfzig Mikroliter XTT/PMS wurden jedem Well der Platte zugegeben, und die Platte wurde 4 Stunden lang bei 37°C erneut inkubiert. Selbstanhaftende Plattenversiegelungsmittel wurden an Stelle der Deckel verwendet, die versiegelte Platte wurde mehrmals umgedreht, um das lösliche Formazan-Produkt zu mischen, und die Platte wurde spektrophotometrisch bei 450 nm mit einem Vmax-Platten-Lesegerät von Molecular Devices abgelesen. Unter Anwendung einer% CPE-Reduzierung wurde die% Zellenlebensfähigkeit, IC25,50&95, TC25,50&95 und andere Kennzahlen berechnet.
  • TABELLE 17 ANTIVIRALE 1N-VITRO-ERGEBNISSE XTT-ASSAY FÜR VIRACEA 2
    Figure 00560001
  • TABELLE 18 VIRACEA 2
    Figure 00570001
  • TABELLE 19 VIRACEA 2
    Figure 00570002
  • BEISPIELE 49–54
  • Assay der Aktivität von Reverser-Transkriptase
  • Eine Mikrotiter-basierte Reverse-Transkriptase(RT)-Reaktion wurde genutzt. Tritium markiertes Thymidintriphosphat (NEN) (TTP) wurde in destilliertem H2O bei 5 Ci/ml resuspendiert. Poly rA und Oligo dT wurden als eine Vorratslösung hergestellt, welche bei –20°C gehalten wurde. Der RT-Reaktionspuffer wurde frisch auf einer täglichen Basis hergestellt und bestand aus 125 μl 1M EGTA, 125 μl dH2O, 125 μl Triton X-100, 50 μl 1M Tris (pH 7,4), 50 μl 1M DTT und 40 μl 1M MgCl2. Diese drei Lösungen wurden miteinander in einem Verhältnis von 1 Teil TTP, 2,5 Teilen poly rA:oligo dT, 2,5 Teilen Reaktion, dem Reaktionspuffer, und 4 Teilen destilliertem Wasser gemischt. 10 μL dieser Reaktionsmischung wurden in eine Rundbodenmikrotiterplatte gegeben, 15 μL Virus enthaltender Überstand wurden hinzugesetzt und gemischt. Die Platte wurde bei 37°C inkubiert und 60 Minuten lang inkubiert. Nach der Reaktion wurde das Reaktionsvolumen auf Filtermatten getropft, 6 Mal 5 Minuten lang jeweils in einem 5%igen Natriumphosphatpuffer, 2 Mal 1 Minute lang jeweils in destilliertem Wasser, 2 Mal 1 Minute lang jeweils in 70%igem Ethanol gewaschen und dann getrocknet. Die getrocknete Filtermatte wurde in einen Probenbeutel aus Plastik gegeben. Betaplate-Szintillationsfluid wurde hinzugesetzt, und der Beutel wurde mittels Hitze verschlossen. Die aufgenommene Radioaktivität wurde unter Verwendung eines Szintillationszählers von Wallac Microbeta quantifiziert.
  • TABELLE 20 VIRACEA-2: PBMC/ROJO
    Figure 00580001
  • TABELLE 21 VIRACEA-2: PBMC/ROJO
    Figure 00590001
  • ELISA
  • ELISA-Kits wurden von Coulter bezogen. Das Assay wird gemäß den Empfehlungen des Herstellers durchgeführt. Vor der ELISA-Analyse wurden die Reverse-Transkriptase-Aktivitätsassays routinemäßig durchgeführt, und die Werte wurden für die eingebaute Radioaktivität in dem RT-Aktivitätsassay verwendet, um die Verdünnung der Proben, die für das ELISA erforderlich sind, zu bestimmen. Kontrollkurven wurden in jedem Assay erstellt, um die Menge an Capsidprotein in jeder Probe exakt zu quantifizieren. Die Daten wurden durch spektrophotometrische Analyse bei 450 nm unter Verwendung eines Vmax-Plattenlesegerätes von Molecular Devices, erhalten. Die P24-Konzentrationen wurden aus den Werten der optischen Dichte unter Verwendung des Softwarepacketes Soft Max von Molecular Devices errechnet.
  • Infektiöse Partikel
  • Infektiöse Viruspartikel wurden unter Verwendung des CEM-SS-Plaque-Assays und des quantitativen Infektiositätassays für HIV-1 und HIV-2 quantifiziert. Flachboden-96-Well-Mikrotiterplatten wurden mit 50 μl Poly-L-Lysin zu 50 μg/ml 2 Stunden lang bei 37°C überzogen. Die Wells wurden dann mit PBS gewaschen und 2,5 × 105 CEM-SS-Zellen wurden in die Mikrotiterwell gegeben, wo sie auf dem Boden der Platte fixiert wurden. Ausreichend Zellen wurden hinzugegeben, um eine Monoschicht von CEM-SS-Zellen in jedem Well zu bilden. Virus enthaltender Überstand wurde von jedem Well von der XTT-Phase hinzugegeben, einschließlich Virus- und Zellkontrollen und jeder seriellen Verdün nung der Testsubstanz. Die Anzahl an Syncitien wurde in der Flachboden-96-Well-Mikrotiterplatte mit einem umgekehrten CK2 Mikroskop von Olympus an 4 Tagen nach der Infektion bestimmt. Jedes Syncytium resultierte aus einem einzelnen infektiösen HIV-Virion.
  • Anti-HIV-Aktivität in frischen humanen Zellen: Assay in frischen humanen T-Lymphocyten
  • Frische humane Peripherblut-Lymphocyten(PBL) wurden von freiwilligen Spendern des Roten Kreuzes, die seronegativ für HIV und HBV waren, isoliert. Leukophorese-Blut wird 1:1 mit Dulbecco's phosphatgepufferter Saline(PBS) verdünnt, die auf 14 ml Dichtegradient von Ficoll-Hypaque in einem 50 ml großen Zentrifugenröhrchen geschichtet ist. Die Röhrchen wurden dann 30 Minuten lang bei 600 × g. zentrifugiert. Streifenförmige PBLs wurden behutsam von den resultierenden Grenzflächen abgesogen und anschließend 2 Mal mit PBS durch Niedriggeschwindigkeits-Zentrifugation gewaschen. Nach dem letzten Waschen wurden die Zellen durch Trypanblau-Ausschluss ausgezählt und zu 1 × 107/ml in RPMI-1640 resuspendiert mit 15% fötalem Rinderserum(FBS), 2 mM L-Glutamin, 4 μg/ml PHA-P und die Inkubation über 48–72 Stunden bei 37°C wurde ermöglicht. Nach der Inkubation wurden die PBLs zentrifugiert und in RPMI-1640 mit 15% FBS, 2mM L-Glutamin, 100 U/ml Penicillin, 100 μg/ml Streptomycin, 10 μg/ml Gentamicin und 20 U/ml rekombinanten humanen IL-2 zurückgesetzt. Die PBLs wurden bis zur Verwendung in dem Assayprotokoll in diesem Medium bei einer Konzentration von 1–2 × 106/ml mit zweiwöchentlichem Mediumwechsel gehalten.
  • Für das PBL-Assay wurden PHA-P stimulierende Zellen von mindestens zwei normalen Spendern zusammengefasst bzw. gepoolt, zu 2 × 106/ml in frischem Medium gegeben und in den Innenwells einer 96-Well-Rundboden-Mikroplatte zu 50 μl/Mulde ausplattiert. Testarzneistoff-Verdünnungen wurden zu einer 2X-Konzentration in Mikrotiterröhrchen hergestellt und 100 μl von jeder Konzentration wurden in entsprechenden Mulden im Standardformat platziert. 50 μl einer vorbestimmten Verdünnung einer Virusvorratslösung wurde in jede Testmulde gegeben. Mulden mit Zellen und Virus allein wurden für die Viruskontrolle verwendet. Separate Platten wurden für Arzneistoff-Cytoxitätsstudien identisch ohne Virus angesetzt, unter Verwendung eines XTT-Assaysystems.
  • In dem Standard PBL-Assay (MOI: 0,2) wurde das Assay am Tag 7 beendet, nach dem Sammeln zellfreier Überstandsproben für das Reverse-Transkriptase-Aktivitätsassay. In dem niedrig-MOI-PBL-Assay (MOI: 0,02) wurden Überstandsproben am Tag 6, Tag 11 und Tag 14 nach der Infektion gesammelt und auf R1-Aktivität analysiert. Mit Tritium markiertes Thymidintriphosphat (NEN) (TTP) wurde in destilliertem H2O zu 5 Ci/ml resuspendiert. Poly-rA und Oligo-dt wurden als eine Vorratslösung hergestellt, welche bei – 20°C aufbewahrt wurde. Der RT-Reaktionspuffer wurde frisch auf einer täglichen Basis hergestellt und besteht aus 125 μl 1M EGTA, 125 μl dH2O, 110 μl 10% SDS, 50 μl 1M Tris (pH 7,4), 50 μl 1M DTT und 40 μl 1M MgCl2. Diese drei Lösungen wurden in einem Verhältnis von 2 Teilen TTP, 1 Teil Poly-rA:Oligo-dT und 1 Teil Reaktionspuffer zusammengemischt. Zehn Mikroliter von dieser Reaktionsmischung wurde in eine Rundboden-Mikrotiterplatte gegeben und 15 μl an Virus enthaltenem Überstand wurde hinzugesetzt und gemischt. Die Platte wurde bei 37°C in einem Wasserbad inkubiert, und zwar mit einem festen Halter, um das Untertauchen der Platte zu verhindern, und 60 Minuten lang inkubiert. Nach der Reaktion wurde das Reaktionsvolumen auf DE81-Papierstücke getupft, 5 mal 5 Minuten lang jeweils in einem 5% Natrium-Phosphat-Puffer, 2 Mal eine Minute lang jeweils in destilliertem Wasser, 2 Mal eine Minute lang jeweils in 70%igem Ethanol gewaschen, und dann getrocknet. Opti-Fluor O wurde zu jeder Probe hinzugesetzt und die aufgenommene Radioaktivität wurde quantifiziert, unter Verwendung eines Wallac 1450 Microbetaplus-Flüssigszintillationszählers.
  • Der Einbau von Tritium-markiertem Thymidin wurde in Parallelkulturen am Tag 7 gemessen. Jede Mulde wurde mit 1 μCi an Tritium-Tymidin gepulst und die Zellen wurden 18 Stunden später mit einem Skatron Zellernter auf Glasfaserfilterpapier geerntet. Die Filter wurden getrocknet, in ein Szintillationsfläschen mit 1 ml an Szintillisationscocktail gegeben und die eingebaute Radioaktivität wurde auf einem Packard Tri-Carbh 1900 TR-Flüssigszintillationszähler quantifiziert.
  • BEISPIELE 55–78
  • Anti-HIV-Aktivität in frischen humanen Zellen: Assay in frischen humanen Monocytmakrophagen
  • Für die Isolation von adhärenten Zellen wurden 3 × 106 nicht-PHA stimulierte Peripherblutzellen in Hanks gepuffertem Salz mit Calcium und Magnesium, er gänzt mit 10% humanem AB-Serum, resuspendiert. Die Zellen wurden in einer 24-Mulden-Mikrotiterplatte bei 37°C 2 Stunden langplatziert. Nicht-adhärente Zellen wurden durch energisches sechsmaliges Waschen entfernt. Die adhärenten Zellen wurden 7 Tage lang in RPMI-1640-Gewebekulturmedium mit 15% fötalem Rinderserum kultiviert. Die Kulturen wurden vorsichtig auf Konfluenz während dieser Inkubationsperiode überwacht. Die Infektion der Zellen wurde mit den monocytotropischen HIV-1-Stämmen BaL oder ADA und den zusammenpassenden Paaren von AZT-Sensitiv- und AZT-Resistenz-Virusisolaten durchgefüht. Jedes dieser Virusisolate wurde von dem „NLAID AIDS Research and Reference Reagent Program" erhalten. Hoch-Titer-Pools von jedem dieser Viren wurden aus infizierten Kulturen von adhärenten Pheripherblutzellen geerntet und in 1,0 ml großen Aliquoten bei –80°C eingefroren. Monocyten-Makrophagen-Monoschichten wurden bei einer MOI von 0,1 infiziert. Die in den Monoschichten zu evaluierenden Verbindungen wurden bei einer MOI von 0,1 infiziert. Die in dem Monocyten-Makrophagen-Assay zu evaluierenden Verbindungen wurden den Monoschichten kurz vor der Infektion hinzugesetzt, um das Potential für die Identifizierung aktiver Verbindungen zu maximieren.
  • Am zweiten Tag nach der Infektion wurde das Medium dekantiert und die Kulturen wurden zweimal mit Komplettmedium gewaschen, um überschüssigen Virus zu entfernen. Frisches Medium allein oder Medium, das die entsprechende Konzentration an Arzneistoffen enthielt, wurde hinzugesetzt, und die Inkubation wurde für weitere 5 Tage fortgesetzt. XTT-Tetrazolium- oder Trypanblau-Ausschluss-Assays für die Zelllebensfähigkeit und HIV-p24-ELISA-Assays für die Herstellung von p24-Kern-Antigen wurden am Tag 7 nach der Infektion durchgeführt. ELISA-Kits wurden von Coulter bezogen. Kontrollkurven wurden in jedem Assay erzeugt, um die Menge an Capsid-Protein in jeder Probe exakt zu quantifizieren. Die Daten wurden durch spektrophotometrische Analyse bei 450 nm unter Verwendung eines Vmax Plattenlesegerätes von Molecular Devices erhalten. Die P24-Konzentrationen wurden aus den Werten der optischen Dichte unter Anwendung des Softwarepacketes Soft Max von Molecular Device berechnet.
  • TABELLE 22 MAKROPHAGEN-ASSAY FÜR VIRACEA 2 pp/ml P-24-Aktivität
    Figure 00630001
  • TABELLE 23 MAKROPHAGEN-ASSAY FÜR VIRACEA 2 Toxizitätsstudien Absorption
    Figure 00630002
  • TABELLE 24 ANTI-HIV - MAKROPHAGEN-ASSAY (P24) für VIRACEA #2
    Figure 00640001
  • TABELLE 25 Viracea #2
    Figure 00640002
  • TABELLE 26 ANTI-HIV - MAKROPHAGEN-ASSAY (P24) für VIRACEA #2
    Figure 00650001
  • TABELLE 27 Viracea #2
    Figure 00650002
  • TABELLE 28 IN VITRO ANTI-HIV - MAKROPHAGEN-ASSAY für VIRACEA 2
    Figure 00660001
  • TABELLE 29 VIRACEA 2
    Figure 00660002
  • Beispiele 79–90
  • Bindungs- und Fusions-Inhibitions-Assays
  • Diese Assays wenden HeLa-CD4-LTR-β-Galaktosidasezellen an, welche eine tat-Protein-induzierte Transaktivierung des β-Galaktosidasegens verwenden, gesteuert durch den HIV-1 „long terminal repeat" (LTR)-Promotor. Das Assay wurde verwendet, um sowohl die Bindung von infektiösen Vironen an Zellen, als auch Zell-Zell-Fusionsvorgänge zu quantifizieren. Infizierte Zellen bilden Syncy tien aus, welche leicht nach einer Inkubation mit X-Gal mikroskopisch gezählt werden können. Das HIV-Bindungs-Inhibitions-Assay schloss das Ausplattieren von 1 × 104 HeLa-CD4-LTR-B-Galaktosidasezellen in 200 μl Flachboden-96-Well-Mikrotiterplatten ein. Die Zellen wurden übernacht inkubiert, Medium wurde entfernt und durch 100 μl verschiedener Konzentrationen von ISIS 5320 oder Kontrollverbindung ersetzt. Eine Stunde später wurden 100 μl an Virus enthaltendem Medium jeder Mulde hinzugegeben. Die Zellen wurden eine zusätzliche Stunde lang inkubiert, und die Monoschicht wurde ausgiebig gewaschen, um ungebundenen Virus und extrazelluläre Verbindung zu entfernen. Nach 48 Stunden wurden die Zellen fixiert und mit X-Gal eingefärbt. Blaue, multinukleäre Zellen wurden dann mittels einem Inversemikroskop gezählt. Das Zell-Zell-Fusions-Inhibitions-Assay wurde auch in Flachboden-96-Well-Mikrotiterplatten ausgeführt. HeLa-CD4-LTR-β-Galaktosidasezellen (5 × 103) wurden zu jedem Well hinzugesetzt und 1 Stunde lang mit der Testverbindung inkubiert, vor der Zugabe von 5 × 103 HL2/3-Zellen (28). Die Zellen wurden zusätzliche 48 Stunden inkubiert und fixiert und mit X-Gal eingefärbt. Blaue Syncytien wurden mikroskopisch gezählt. Das Einfärben der Zellen wurde durch Fixierung der Zellen mit einer Lösung aus 1% Formaldehyd und 0,2% Glutaraldehyd und Einfärben der fixierten Zellen mit 4 μM Kaliumhexacyanoferrat(II), 4 μM Kaliumhexacyanoferrat(III), 2 μM MgCl2 und 0,4% X-Gal in PBS durchgeführt. Die Trans-Aktivierung der β-Galaktosidase-Expression wurde auch durch ein ELISA überwacht. Zellextrakte wurden durch ein Gefrier-Auftauen hergestellt und auf die β-Galaktosidaseaktivität, gemäß den Empfehlungen des Herstellers, überprüft. Die Ergebnisse des ELISA wurden spektrophotometisch bei 405 nm unter Verwendung eines Vmax-Mikrotiter-Plattenlesegerätes von Molecular Devices quantifiziert.
  • TABELLE 30 Beta-pal-Fusionsassav: Viracea #2/SK1
    Figure 00680001
  • TABELLE 31 Beta-gal-Fusionsassay: Viracea #2/SK2
    Figure 00680002
  • TABELLE 32 Beta-gal-Fusionsassay: Viracea #2
    Figure 00690001
  • TABELLE 33 Viracea #2
    Figure 00690002
  • Topisches Mikrobizid-Assay
  • MEI 180-Zervixepithelzellen wurden in den Innenwänden einer 96-Well-Flachboden-Mikrotiterplatte in einer Dichte von 5 × 10 Zellen pro Well ausplattiert und übernacht inkubiert. Chronisch infizierte H9-Zellen wurden eine Stunde lang mit 200 μg/ml Mitomycin C in Komplettmedium behandelt, ausgiebig gewaschen und zu 4 × 105 pro ml resuspendiert. Die Konzentration des verwendeten Mitomycin C führte zum Abtöten der chronisch infizierten Zellen innerhalb von 48 Stunden der Behandlung, die ausreichend Zeit für Zell-Zell-Übertragung von Virus zu den ME-180-Zellen gewährleistete, während sichergestellt war, dass die Virus-Endpunkt-Quantifizierung einen Beitrag von den chronisch infizierten Zellen nicht einschließen würde. Antivirale Verbindungen und chronisch infizierte Zellen (2 × 104) wurden zu jedem Well, die ME180-Zellen enthielt, zugegeben und 6 Stunden lang inkubiert. Nach der Cokultivierung wurde die Monoschicht ausgiebig gewaschen und frisches Medium wurde hinzugesetzt. Medium wurde entfernt und frisches Medium wurde nach 24 und 48 Stunden nach der Infektion hinzugesetzt, um abgestorbene Lymphocyten zu entfernen. Am Tag 6 nach der Infektion wurden Überstandsproben entfernt und auf Virusgehalt durch p24 ELISA analysiert.
  • CD4-Expressions-Assays
  • Die Quantifizierung des Effektes von Viracea auf die CD4-Expression wurde unter Verwendung cytometrischer Standarddurchflusstechniken durchgeführt. Die Zellen wurden eine Sunde lang bei 37°C in Gewebekulturmedium mit Viracea behandelt. Kurz gesagt, wurden 106 CEM-SS-Zellen mit oder ohne Verbindung 60 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubiert. Monoklonaler Anti-CD4-Antikörper (20 μl, 3 μg/ml) (Becton-Dickinson, San Jose, CA) wurde hinzugesetzt, und die Zellen wurden bei 4°C 40 Minuten lang inkubiert. Die Zellen wurden dann zweimal mit PBS gewaschen, in 1°C Paraformaldehyd resuspendiert und unter Verwendung eines Becton-Dickinson FACSort-Durchflusscytometers analysiert.
  • Makromolekulare Synthese
  • CEM-SS-Zellen wurden in dreifacher Ausführung in der An- oder Abwesenheit der Verbindung 24 Stunden bei 37°C in einem befeuchteten CO2-Inkubator kul tiviert. Nach 24 Stunden wurde 1 μCi[Methyl-3H]-Thymidin, [5-3H]-Uridin oder [3,4,5-3H]-Leucin der Kultur zugesetzt und die Inkubation wurde weitere 8 Stunden fortgesetzt. Die Zellen wurden unter Verwendung eines Skatron Zellernters auf Glasfaserfilterpapiere transferiert. Die Glasfasern wurden mit destiliertem Wasser gewaschen, in einem Szintillationsfläschen platziert, und die Quantität der eingebauten Radioaktivität wurde mit einem Tri-Carb-Szintillationszähler von Packard quantifiziert.
  • HIV-Testergebnisse
  • Viracea-2 wurde in dem Mikrotiter-Anti-HIV-Assay evaluiert, welches die Fähigkeit einer Testverbindung quantifiziert, die HIV-Replikation und HIV-induzierte Zellzerstörung zu inhibieren. Es wurde festgestellt, dass die Verbindung aktiv gegen den RF-Stamm des HIV-1 in CEM-SS-Zellen ist. Viracea-2 wies einen IC25 bei einer 1:900 Verdünnung auf und erreichte keinen 50% Inhibitionswert. Viracea-2 wies Toxizität (TC30) zu den CEM-SS-Zellen bei Verdünnungen von etwa 1:20 bzw. 1:250 auf. Die positive Kontrollverbindung, ddC, wies den erwarteten Aktivitätsspiegel gegen den RF-Virus auf.
  • Viracea-2 wurde für Aktivität in frischen humanen PBMCs, die mit dem klinischen HIV-Isolat ROJO infiziert wurden, evaluiert. Dieses Niedrigdurchfluss-Isolat wurde als ein Arzneistoffsensitiv (AZT, ddC, Nevirapin), Syncytiuminduzierendes Virusisolat bestimmt. Viracea-2 inhibierte die Replikation von diesem Isolat bei nichttoxischen Konzentrationen nicht. Weitere Evaluierung der Verbindung in PMBCs, die mit ROJO infiziert waren, wurde unter Verwendung von IL2-Stimulation der PBMCs eher als durch PHA-Blastogenese durchgeführt. Wieder wurde keine Aktivität unterhalb von Konzentrationen, welche das Wachstum der PBMCs inhibieren, festgestellt. AZT wies den erwarteten Aktivitätsspiegel in diesen Assays auf.
  • Viracea-2 wurde in frischen, humanen Monocyt-Makrophagen, die mit dem klinischen Niedrigdurchfluss-Isolat ADA infiziert waren, evaluiert. In diesen Assays wiesen die Verbindungen hohe Aktivitätsspiegel auf. Die effektive 50%-Konzentration von Viracea-2 betrug 1:10000. Toxizität wurde in der Monocyten-Makrophagen-Monoschicht durch morphologische Untersuchung oder durch XTT-Tetrazoliumfärbung nicht festgestellt. AZT wies den erwarteten Aktivitätsspiegel in diesen Assays auf.
  • Von Viracea-2 wurde festgestellt, dass es die Anheftung von infektiösem Virus an die CD4-exprimierenden HeLa-CD4-LTR-β-Galaktosidasezellen inhibiert. Die Inhibition der Virusbindung an die Zielzellen wurde bei Verdünnungen von etwa 1:1000 bis 1:3200 der Verbindung festgestellt. Die Verbindung besaß keinen antiviralen Effekt auf die Fusion der Hüll-exprimierenden HL2/3-Zellen mit den HeLa-CD4-LTR-β-Galaktosidase-Zellen. Die Toxizität der Verbindung wurde in dem Fusionsassay festgestellt, wo die Verbindung während der gesamten Dauer des Assays anwesend war, und in dem Bindungsassay, wo die Verbindung nur 2 Stunden lang anwesend war. Chicago Sky Blue, ein sulfonierter Farbstoff, wies die erwarteten Aktivitätsspiegel in jedem dieser Assays auf.
  • Viracea-2 verhindert die Übertragung des Virus von chronisch infizierten Lymphocyten zu der ME180-Zervixepithelzelllinie bei einer Verdünnung von etwa 1:500 (IC30). Eine Toxizität zu den ME180-Zellen wurde in diesem Assay nicht festgestellt. In diesem Assay war der Arzneistoff nur während der Infektionszeit (4 Stunden) anwesend. Dextransulfat (Positivkontrolle, sulfatiertes Polysaccharid) und Dextran (Negativkontolle) wiesen den erwarteten Aktivitätsspiegel in diesen Assays auf.
  • Viracea-2 hatte keinen Effekt auf die Expression von CD4 auf der Zelloberfläche.
  • Die Inhibition des Einbaus von Thymidin (DNA), Uridin (RNA) oder Leucin (Protein) in Makromoleküle mit hohem Molekulargewicht wurde bei Verdünnungen festgestellt, die größer als 1:320 waren. Die Inhibition der Makromolekülsynthese entsprach der Toxizität der Verbindung in CEM-SS-Zellen.
  • Zusammenfassung der HIV-Testergebnisse
  • Viracea-2 inhibiert die HIV-Infektion in eingeführten T-Zellen mit einem engen therapeutischen Index. Viracea-2 inhibiert potentiell die HIV-Replikation in Monocytmakrophagen. Viracea-2 inhibiert die Anheftung von Virus an Zielzellen, aber verhindert nicht die Fusion von infizierten und nicht infizierten Zellen. Viracea-2 inhibiert die Virusübertragung in einem topischen Mikrobizid-Assay und kann bei der Prävention der sexuellen Übertragung von HIV brauchbar sein. Viracea-2 hat keinen Effekt auf die Zelloberflächen-CD4-Expression.
  • PRÄVENTION UND BEHANDLUNG
  • Die antimikrobielle Verbindung sieht ein Antimikrobizid und ein Arzneimittel vor, welche (1) helfen können, die sexuelle Übertragung von HIV zu verhindern; (2) die virale Kraft von HIV und anderer Viren zu regulieren; (3) HIV auszumerzen, (4) die Latenzperioden vom Autoimmundefizienzsyndrom (AIDS) in Patienten, welche sich HIV zugezogen haben, auszuweiten; (5) den Schmerz und das Leid der HIV-Patienten zu mindern; (6) die infektiöse Ausbreitung von HIV zu senken; und (7) bessere und erfolgreichere Behandlung von Patienten mit HIV bereitzustellen. Die medizinische Behandlung kann auch die physischen Symptome eines infektiösen Ausbruches von HIV, Herpes simplex-Virus 1 oder 2 (HSV 1 oder HSV 2) oder anderer infektiöser, mikrobieller Erkrankungen beseitigen. Das Vorhergehende kann durch systemisches Auftragen oder Injektion der oben beschriebenen, bevorzugten, antimikrobiellen Verbindung (Arzneimittel) mit einer Spritze in den Rektalkanal (Rektum, Rektalgewebe, Anus oder Analgewebe) oder in die Vagina (Vaginalgewebe) eines Patienten, der mit HIV oder anderen infektiösen, mikrobiellen Erkrankungen infiziert ist, 8–12 Mal am Tag, vorzugsweise 10 Mal am Tag in Intervallen alle zwei Stunden, über eine Zeitspanne von 10–18 aufeinanderfolgenden Tagen, vorzugsweise 14 aufeinanderfolgende Tage (zwei Wochen) für beste Ergebnisse, ausgeführt werden. Die Dosierung, Konzentration und Menge von der antimikrobiellen Verbindung (Arzneimittel) kann, abhängig von der Schwere und dem Ausmaß der Erkrankung ebenso wie vom Alter, Geschlecht, Gewicht, von der Rasse und von der Gesundheit des Patienten, variieren. Erstrebenswerterweise wird der infizierte Bereich ausgespült (gewaschen) und getrocknet, um jegliche Seife oder Reste auf dem infizierten Bereich zu entfernen, bevor die antimikrobielle Verbindung (Arzneimittel) aufgetragen wird. Für die Behandlung des Herpes simplex-Virus 1 oder 2 kann die antimikrobielle Verbindung auf den infizierten Bereich, wie z.B. über 19–24 Stunden aufgetragen werden. Vorzugsweise werden vesikuläre Ausschläge vom Herpesvirus in 19–24 Stunden beseitigt und Herpesläsionen werden infolgedessen geheilt.
  • Unter den vielen Vorteilen der medizinischen Behandlung und des Arzneimittels (Verbindungen) der Erfindung sind folgende:
    • 1. Hervorragende Behandlung und Prävention von HIV und anderer infektiöser Erkrankungen.
    • 2. Ausgezeichnete Ergebnisse bei der Schmerzbeendigung von HIV, viraler Herpes simplex-Infektionen und anderer mikrobieller Infektionen ohne Toxizität.
    • 3. Außerordentliche Leistung bei der schnellen Beseitigung von Ausbrüchen von HIV, Herpes simplex-Virus oder anderer mikrobieller Erkrankungen.
    • 4. Es rettet die Leben von Neugeborenen, Kindern, Erwachsenen und Tieren.
    • 5. Es reduziert den weltweiten wirtschaftlichen Verlust durch HIV, Herpes und anderer mikrobieller Erkrankungen.
    • 6. Es löst viele der gravierenden emotionalen und mentalen Angstzustände von an HIV und Herpes Leidenden.
    • 7. Leicht erhältliche Materialien (Inhaltsstoffe).
    • 8. Ökonomisch.
    • 9. Sicher.
    • 10. Einfach in der Anwendung.
    • 11. Zuverlässig.
    • 12. Effektiv.

Claims (11)

  1. Zusammensetzung, enthaltend einen Nährstoff und eine Pflanze, dadurch gekennzeichnet, dass der Nährstoff Folsäure ist, die Pflanze einen botanischen Extrakt der Gattung Echinacea umfasst und die Echinacea Echinacea purpurea umfasst.
  2. Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei die Zusammensetzung ferner eine zweite Pflanze einschließt, umfassend einen botanischen Extrakt der Gattung Commiphora.
  3. Zusammensetzung nach Anspruch 2, wobei die Commiphora eine Spezies umfasst, bestehend aus Commiphora myrrha, Commiphora molmol oder Commiphora erythraea.
  4. Zusammensetzung nach entweder Anspruch 2 oder 3, wobei die Commiphora Commiphora myrrha umfasst.
  5. Zusammensetzung nach entweder Anspruch 3 oder 4, wobei das Verhältnis von Commiphora myrrha zu der Echinacea im Bereich von 1:2 bis 1:4 liegt.
  6. Zusammensetzung gemäß mindestens einem der Ansprüche 2 bis 5, wobei die Zusammensetzung antimikrobielle Isolate enthält, gewählt aus der Gruppe bestehend aus: Sesquiterpenen; Essigsäure, alpha-Amyron, Arabinose, alpha-Bisabolen, gamma-Bisabolen, Cadinen, Campesterol, Cholesterin, Zimtaldehyd, Commiferin, alpha-Commiphorsäure, beta-Commiphorsäure, gamma-Commiphorsäure, Commiphorinsäure, m-Cresol, Cuminalkohol, Cuminaldehyd, Dipenten, Elemol, 3-epi-alpha-Amyrin, Eugenol, Furanodien, Furanodienon, Galactose, Gum, Heerabolen, alpha-Heerabomyrrhol, beta-Heerabomyrrhol, Heeraboresen, Limonen, 4-O-Methyl-glucuronsäure, n-Nonacesan, beta-Sitosterin, Xylose, Myrrhen-Gummiharz, Curzenon, Dihydrofuranodien-6-on, 2-Methoxyfurandien, Lynderstyrol, Echinacen, Echinacen B, Echinacein, Echinacosid, Kaffeesäure p ester, Echinolon, Enzymen, Glucuronsäure, Inulin, Inuloid, Pentadecadien, Polyacetylenverbindungen, Polysacchariden; Arabinogalactan; Rhamnose; Tanninen, PS I(ein 4-O-Metylglucoronarabinoxylan, Mr3 5Kd); PS II (ein Säure-Rhamnoarbinogalactan, Mr450 kD); Cynarin; 1,5-Di-O-caffeoylchinasäure; Chicorsäure; 2,3-O-Di-caffeoylweinsäure; Borneol, Bornylacetat; Pentadeca-8(z)-en-zon; Germacren D; Caryophyllen, Caryophyllenepoxid, Anthocyanin, Pyrrolizidinalkaloid, lipophiles Amid; Isobutylamid, Polyacetylen, Anthocyanin, 3-O-B-D-Glucopyranosid, 3-O-(6-O-Mabonyl)-B-D-glucopyranosid, Tussilagin, Isotussilagin, isomeres Dodeca-isobutylamid, Tetraensäure, Alkylamiden, Apigenin, Arabinogalacta, Ascorbinsäure, Behensäureethylsäure, Betain, Borneol, Bornylacetat, Kaffeesäure, 2-O-Caffeoyl-3-(5-alpha-carboxybeta)-3,4-dihydroxyphenyl, 2-O-Caffeoyl-3-O-cumaroyltarasäure, 6-O-Caffeoylechinacosid, 2-O-Caffeoyl-3-O-feruloylweinsäure, 2-O-Caffeoylweinsäure, beta-Carotin, Carophyllen, Carophyllenepoxid, Chlorogensäure, Cichorsäure, Cichorsäuremethylester, Cyanadin-3-O-(beta-d-glycopyranosid), Cynadin-3-(6-O-malonyl-beta-d-glycopyranosid), Cynarin, Deca(2e,4e,6e)-triensäure-isobutylamid, Desrhamnosylverbascosid, 3,5-Dicaffeoylchinasäure, 4-5-O-Dicaffeoylchinasäure, 2,3-O-Diferulolweinsäure, Dodeca-(2e,4e)-diensäure-isobutylamid, Dodeca-2,4-dien-1-yl-isovalerat, Dodeca-(2e,6z,8e,10e)-tetraensäure-isobutylamid, beta-Farnesen, 2-O-Feruloylweinsäure, Germacren, Heptadeca-(8z,11z)-dien-2-on, Heteroxylan, Humule-8-12,(e)-10-Hydroxy-4, 10-dimethyl-4,11-dodecadien-2-on, 13-Hydroxyoctadeca-(9z,11e,15z)-triensäure, Isochlorogensäure, Isorhamnetin-3-rutinosid, Isotussilagin, Kämpferol, Kämpferol-3-glucosid, Kämpferol-3-nutinosid, Limonen, Luteolin, Luteolin-7-glucosid, 2-Methyltetradeca-5,12-dien, 2-Methyltetradeca-6,12-dien, Methyl-p-hydroxycinnamat, Marcin, Niacin, Palmitinsäure, Pentadeca-(8z,1<RTIIz)-dien-2-on, Pentadeca-(8z,13z)-dien-11-1yn-2-on, Pentadeca-8-en-2-on, Pentadeca-(8z)-en-2-on, Pentadeca(8z)-en-11,13-dien-2-on, 1-Pentadecen, Penta-(1,8z)-dien, Phosphor(III), alpha-Pinen, beta-Pinen, Polyacetylene, Ponticaepoxid, Quercetagetin-7-glucosid, Quercetin, Quercetin-3-galactosid, Quercetin-3-glucosid, Quercetin-3-robinosid, Quercetin-3-xylosid, Quercetin-3-xylosylgalactosid, Rhamnoarabinogalactan, Riboflavin, Rutin, Rutosid, beta-Sitosterin, Sitosterol-3-beta-o-glucosid, Stigmasterin, Weinsäure, Tetradeca-(8z)-en-11,13-dien-2-on, Thiamin, n-Triacontanol, Trideca-1-en-3,5,7,9,10-pentayn, Tussilagin, Vanillin, Verbascosid und Carophylenen.
  7. Zusammensetzung nach Anspruch 6, wobei die antimikrobiellen Isolate Myrrhen-Gummiharz umfassen.
  8. Zusammensetzung nach einem der vorausgehenden Ansprüche, wobei das Trockengewicht der Zusammensetzung umfasst: 0,01% bis 12% Folsäure; und 2% bis 90% Echinacea purpurea und Commiphora myrrha.
  9. Zusammensetzung nach einem der vorausgehenden Ansprüche, wobei die Zusammensetzung weiterhin ein Diluens und ein Surfactant einschließt.
  10. Zusammensetzung nach einem der vorausgehenden Ansprüche für die Verwendung als ein Medikament.
  11. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 6 bis 9 für die Herstellung eines Medikaments für die Behandlung von humanem Immundefizienzvirus (HIV), Herpes simplex-Virus 1, Herpes simplex-Virus 2, Varicella zoster-Virus (Herpes zoster), Cytomegalovirus, Epstein-Barr, Papilloma-Virus, viraler Influenza, viraler Parainfluenza, Adenovirus, viraler Encephalitis, viraler Meningitis, Arbovirus, Arenavirus, Picornavirus, Cornoavirus, Syncytial-Virus, Cellulitis, Staphylokokken, Streptokokken, Mykobakterien, bakterieller Encephalitis, bakterieller Meningitis oder anaeroben Bazillen.
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