CN106496202B - 一种生物碱类化合物及其制备方法与作为抗单纯疱疹ⅰ型病毒剂的应用 - Google Patents

一种生物碱类化合物及其制备方法与作为抗单纯疱疹ⅰ型病毒剂的应用 Download PDF

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Abstract

一种生物碱类化合物及其制备方法与作为抗单纯疱疹Ⅰ型病毒剂的应用，制备时先对真菌Scopulariopsis sp.(TA01‑33) 进行菌种发酵培养，发酵液提取浓缩后，依次进行正相硅胶柱层析、Sephadex LH‑20 凝胶柱层析、HPLC高效液相色谱，即得式I化合物，式I化合物经过一系列常规化学反应制备得到式II‑式V化合物。本发明提供一种抗单纯疱疹Ⅰ型病毒剂，其特征在于以本发明的式I‑式V化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗单纯疱疹I型病毒引起的疾病。

Description

一种生物碱类化合物及其制备方法与作为抗单纯疱疹Ⅰ型病 毒剂的应用
技术领域
本发明涉及一类新的生物碱 (Alkaloid) 化合物及其制备方法与应用，所述化合物具有抗单纯疱疹Ⅰ型病毒 (HSV-1, Herpes Simplex Virus 1)活性，可开发为抗单纯疱疹Ⅰ型病毒剂，用于治疗由单纯疱疹Ⅰ型病毒引起的神经炎症及其他疾病。
背景技术
单纯疱疹Ⅰ型病毒(HSV-1)是一种包裹着的DNA病毒，具有高发病率，潜伏期长，嗜神经组织的特点，潜伏于周围神经系统，主要感染儿童，免疫力低下者以及器官移植者，一旦受到外界适当刺激就会大规模爆发，引发脑炎和角膜炎，严重者能致人死亡。目前临床上抗病毒药物主要是核苷类抗生素，如阿昔洛韦，但近年来耐药性感染人群迅速增加。因此，寻找新的抗病毒药物尤其是结构新颖的抗病毒药物已成为亟待解决的课题。海洋微生物独特的生存环境(高压、高盐、缺氧、避光等)，促使海洋微生物产生大量结构新颖、具有抗病毒活性的化合物，为寻找潜在的抗病毒药物提供了重要来源。但是关于海洋微生物来源的具有抗HSV-1活性的化合物的报道还相当少，尤其是具有潜在开发成为手性药物的海洋来源化合物的报道。（Newman, D. J.; Cragg, G. M. J. Nat. Prod. 2012, 75, 311–335；Blunt, J. W.; Copp, B. R.; Keyzers, R. A.; Munro, M. H. G.; Prinsep, M. R. Nat. Prod. Rep. 2014, 31, 160–258, and previous annual reports.）
发明内容
本发明的目的在于提供一类新的生物碱类化合物如式I、式II、式III、式IV及式V所示，其制备方法以及制备药物组合物的应用，所述化合物对抗单纯疱疹I型病毒具有抑制作用，可用于治疗由单纯疱疹I型病毒引起的神经炎症及其他并发症等疾病。
菌种保藏信息：保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路 1 号院 3 号 中国科学院微生物研究所；保藏日期：2012年12月17日；保藏编号：CGMCC6959；分类命名：Scopulariopsis sp.。
本发明提供式I、式II、式III、式IV及式V化合物或其药学上可接受的盐：
R为或；
R为或, X为OH或C1-C4的烷氧基, Y为OH或C1-C4的烷氧基, Z为OH或C1-C4的烷氧基, W为OH 或C1-C4的烷氧基；
R为或, X为OH或C1-C4的烷酰氧基，Y为OH或C1-C4的烷酰氧基，Z为OH或C1-C4的烷酰氧基, W为OH 或C1-C4的烷酰氧基;
R为或, X为OH、C1-C4的烷氧基或C1-C4的烷酰氧基，Y为卤素(Cl、Br、F)或OH，Z为OH、OCH3、C1-C4的烷氧基或C1-C4的烷酰氧基, W为OH 或C1-C4的烷氧基或C1-C4的烷酰氧基；
R为或 ，X为OH、C1-C4的烷氧基或C1-C4的烷酰氧基，Y为H、OH、卤素、C1-C4的烷氧基或C1-C4的烷酰氧基，Z为OH、OCH3、C1-C4的烷氧基或C1-C4的烷酰氧基, W为OH 或C1-C4的烷氧基或C1-C4的烷酰氧基。
本发明化合物包括所有立体异构体，无论是混合物形式或是纯异构体的形式，本发明化合物可以在任何手性碳原子上形成不对称中心。这样，式I、式II、式III、式IV及式V化合物可以以对映体或非对映体形式或其混合物的形式存在。制备方法可以使用外消旋体、对映体或非对映体作为原料。当制备非对映体或对映体产物时，它们可以通过常规方法，例如层析、化学拆分或分级结晶分离。
本发明提供式I、式II、式III、式IV及式V化合物的制备方法，其特征在于先在菌种培养基中对分离自柳珊瑚Carijoa sp.的内生真菌Scopulariopsis sp. (TA01-33) 进行菌种培养，再在发酵培养基中对该真菌进行发酵培养，然后将所得发酵液用乙酸乙酯萃取；萃取液浓缩后分别进行正相硅胶柱层析、Sephadex LH-20 凝胶柱层析，再经HPLC高效液相制备色谱，将所得洗脱液浓缩，即可获得式I化合物；在溶有式I化合物的甲醇溶液中加入Pd/C催化氢化或溶有式I化合物的丙酮溶液中加入碳酸钾和卤代烷烃或酰氯等反应物，反应后得到式II、式III、式IV及式V化合物。
上述制备方法中菌种培养基优选为含有葡萄糖0.1%–5.0%（重量百分比，下同）、酵母膏0.01%–1%、蛋白胨0.01%–1%、琼脂0.1%–3.0%、氯化钠0.05%–5%，其余为水的培养基，培养温度优选为0–30°C，培养时间优选为3–15天；发酵培养基优选含有葡萄糖0.1%–5.0%（重量百分比，下同）、酵母膏0.01%–1%、蛋白胨0.01%–1%、氯化钠0.05%–5%，其余为水，培养温度优选为0–30°C，培养时间优选为10–60天；所述的正相硅胶柱层析采用的固定相优选200–300目硅胶，流动相优选体积比为5%–95%的乙酸乙酯-石油醚混合溶剂；所述Sephadex LH-20 凝胶柱层析采用的流动相优选体积比为石油醚:氯仿:甲醇=2:1:1的混合溶剂；所述HPLC高效液相制备色谱中采用的色谱柱为本领域常规ODS C18柱，优选为Kromasil 10×250 mm, 7 μm，流速优选为1.0–5.0 mL/min，流动相优选体积比为5%–95%的甲醇-水混合溶剂。
本发明中式I、式II、式III、式IV及式V化合物或其药学上可接受的盐包括其分子内盐、其溶剂化物或水合物。
本发明从海洋真菌中获得的生物碱类化合物及其衍生物对单纯疱疹Ⅰ型病毒具有极强的抑制活性，可用于开发抗单纯疱疹Ⅰ型病毒剂，应用前景广阔。
本发明的另一实施方案提供式I、式II、式III、式IV及式V化合物或其药学上可接受的盐在制备抗单纯疱疹Ⅰ型病毒剂中的应用。
本发明中术语“药学上可接受的盐”是指非毒性的无机或有机酸和/或碱的加成盐。可参见“Salt selection for basic drugs”, Int. J. Pharm. (1986), 33, 201–217。
为了便于对本发明的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则，本发明的实施方式不限于以下内容。
实施例1
柳珊瑚内生真菌Scopulariopsis sp.(TA01-33)的菌种培养
菌种培养所用的培养基含有葡萄糖1.0%（重量百分比，下同）、酵母膏0.2%、蛋白胨0.2%、琼脂1.0%、氯化钠3.0%，其余为水，使用时制成试管斜面，真菌菌株在30℃ 下培养5天。
柳珊瑚内生真菌Scopulariopsis sp.(TA01-33)的发酵
发酵培养所用的培养基含有葡萄糖1.0%（重量百分比，下同）、酵母膏0.2%、蛋白胨0.2%、氯化钠3.0%，其余为水；真菌菌株于28℃培养60天。
(3) 式I化合物的获得
取10 L步骤（2）得到的发酵液过滤，除去菌体，将滤液浓缩后，用等体积的乙酸乙酯萃取5次；萃取液浓缩后分别进行正相硅胶柱层析（固定相为200–300目硅胶；流动相为40%-60%乙酸乙酯/石油醚混合溶剂，体积比）、Sephadex LH-20 凝胶柱层析（石油醚：氯仿：甲醇=2：1：1的混合溶剂，体积比）后，再经HPLC高效液相制备色谱分离（色谱柱为Kromasil10×250 mm，7μm，流动相为70%或80%（体积比）的甲醇-水混合溶剂，流速为 2.0 mL/min），将所得洗脱液浓缩，得到式I化合物。
式I化合物的结构确证数据:
:无色结晶, [α]24 D = +133.5 (c 0.017, MeOH); 1H NMR(acetone-d 6, 400 MHz, TMS) δ H 3.67 (1H, s, H-3), 7.42 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-8), 6.57 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-9), 7.34 (5H, m, overlap, H-12,13,14,15,16),6.87 (1H, d, J = 16.4 Hz, H-17), 6.35 (1H, d, J = 16.4 Hz, H-18), 4.42 (1H,t, J = 7.2 Hz, H-20), 2.08 (1H, m, H-21a), 1.75 (1H, m, H-21b), 1.98 (1H, q,J = 4.4 Hz, H-22a), 1.89 (1H, m, H-22b), 5.05 (1H,m, H-24a), 4.75 (1H, m, H-24b), 1.73 (3H, s, H-25), 1.35 (3H, s, H-26), 3.51 (3H, s, H-27); 13C NMR(acetone-d 6, 100 MHz, TMS) δ C 166.3 (C-2), 85.6 (C-3), 79.9 (C-4), 112.0 (C-5), 156.9 (C-6), 121.5 (C-7), 127.9 (C-8), 107.7 (C-9), 137.1 (C-10), 140.1(C-11), 129.5 (C-12,16), 127.4 (C-13,15), 129.7 (C-14), 121.6 (C-17), 135.9(C-18), 83.6 (C-19), 82.7 (C-20), 31.8 (C-21), 39.3 (C-22), 147.2 (C-23),110.2 (C-24), 18.6 (C-25), 27.3 (C-26), 58.9 (C-27); 红外(溴化钾) ν max 3288,2970, 1721, 1689, 1618, 1379 and 1082 cm–1；紫外 (甲醇) λ max (log ε): 211(0.41), 233.6 (0.26), 280.9 (0.20), 287.4 (0.19), 322 (0.21) nm；质谱EIMS m/z435 [M]+; 高分辨质谱HREEIMS m/z 436.2114 [M+H]+ (calcd for C26H29NO5,436.2118)。
:无色结晶; [α]24 D = +133.5 (c 0.017, MeOH); 1H NMR(acetone-d 6, 400 MHz, TMS) δ H 3.66 (1H, d, J = 1.2 Hz, H-3), 7.43 (1H, d, J =8.0 Hz, H-8), 6.57 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-9), 7.35 (5H, m, overlap, H-12,13,14,15,16), 6.63 (1H, d, J = 16.4 Hz, H-17), 6.20 (1H, d, J = 16.4 Hz, H-18),1.07 (1H, t, J = 12.8 Hz, H-20a), 1.74 (1H, m, H-20b), 1.54 (1H, m, H-21),3.02 (1H, m, H-22), 1.71 (1H, m, H-23a), 1.49 (1H, m, H-23b), 1.78 (1H, m H-24a), 1.39 (1H, qd, J = 13.6, 3.2 Hz, H-24b), 1.01 (3H, s, H-25), 0.96 (3H,d, J = 6.8 Hz, H-26), 3.52 (3H, s, H-27); 13C NMR (acetone-d 6, 100 MHz, TMS)δ C 166.3 (C-2), 85.7 (C-3), 80.0 (C-4), 112.1 (C-5), 155.9 (C-6), 122.3 (C-7), 127.4 (C-8), 107.7 (C-9), 136.8 (C-10), 140.2 (C-11), 129.5 (C-12,16),127.4 (C-13,15), 129.6 (C-14), 122.5 (C-17), 137.5 (C-18), 37.7 (C-19), 46.9(C-20), 36.9 (C-21), 76.7 (C-22), 33.0 (C-23), 37.7 (C-24), 31.8 (C-25), 19.3(C-26), 58.9 (C-27); 红外IR(KBr) ν max 3366, 2926, 1687, 1600, 1421 and 1107cm–1; 紫外UV (MeOH) λ max (log ε): 204.8 (0.69), 211.2 (0.64), 252.8 (0.13),281.6 (0.05) nm; 质谱EIMS m/z 437 [M]+; 高分辨质谱HREIMS m/z 437.2200 [M]+(calcd for C26H31NO5, 437.2197)。
实施例2
（1）柳珊瑚内生真菌Scopulariopsis sp.(TA01-33)的菌种培养
菌种培养所用的培养基含有葡萄糖0.1%–5.0%（重量百分比，下同）、酵母膏0.01%–1%、蛋白胨0.01%–1%、琼脂0.1%–3.0%、氯化钠0.05%–5%，其余为水，使用时制成试管斜面，真菌菌株在0–30℃下培养3–15天。
（2）柳珊瑚内生真菌Scopulariopsis sp.(TA01-33)的发酵
发酵培养所用的培养基含有葡萄糖0.1%–5.0%（重量百分比，下同）、酵母膏0.01%–1%、蛋白胨0.01%–1%、氯化钠0.05%–5%，其余为水，真菌菌株于0–30℃培养10–60天。
(3) 式I化合物的提取分离
取5–50 L步骤（2）所得的发酵液过滤，除去菌体，将滤液浓缩后，用1–3倍体积的乙酸乙酯萃取2–5次；萃取液浓缩后分别进行正相硅胶柱层析（固定相为本领域常规正相硅胶，流动相为5%–95%的乙酸乙酯-石油醚混合溶剂，体积比）、Sephadex LH-20 凝胶柱层析（流动相为石油醚:氯仿:甲醇=2:1:1的混合溶剂，体积比）后，再经HPLC高效液相制备色谱（色谱柱为本领域常规ODS C18柱，流速为1.0–5.0 mL/min，流动相为5%–95%的甲醇-水混合溶剂，体积比），将所得洗脱液浓缩，得无色结晶，即为式I化合物。其中化合物的结构确证数据与实施例1中相应数据一致。
实施例1–2中未具体指明的其他菌种培养、发酵条件，以及正相硅胶柱色谱分离、Sephadex LH-20 凝胶柱层析分离、高效液相色谱分离等其他实验操作条件均为本领域常规的实验操作条件，本领域的技术人员可以根据实际需要，进行合理的选择。
实施例3
如实施例1-2的制备方法，得到式I化合物，通过氢化加成反应，取代反应，酰化反应等获得式II、式III、式IV及式V化合物。
式II化合物的制备：
1) 称取上述干燥后的式I化合物（0.1 mol）溶于DMF中，加入无水碳酸钾，常温条件下，在充分搅拌下向反应体系中加入碘甲烷，反应1-5h后，向反应体系中加水终止反应，用乙酸乙酯（500 mL）进行萃取，将萃取液浓缩后，进行柱层析，用乙酸乙酯洗脱，洗脱液浓缩，重结晶后得到式I化合物的甲基化产物。
相关化合物的结构确证数据：
： 白色粉末, [α]24 D = +102.5 (c 0.017, MeOH);红外(溴化钾) ν max 2970, 1730, 1689, 1618, 1400 and 1080 cm–1；紫外 (甲醇) λ max (log ε):211 (0.41), 233.6 (0.26), 280.9 (0.20), 285.4 (0.19), 325 (0.21) nm；质谱EIMSm/z 464 [M]+。
：白色粉末, [α]24 D = +103.5 (c 0.017, MeOH); 红外(溴化钾) ν max 2970, 1721, 1690, 1618, 1375 and 1082 cm–1；紫外 (甲醇) λ max (log ε):211 (0.41), 233.6 (0.26), 280.9 (0.20), 287.4 (0.19), 320 (0.21) nm；质谱EIMSm/z 494 [M]+。
：无色结晶; [α]24 D = +123 (c 0.012, MeOH);红外IR(KBr)ν max 2926, 1687, 1620, 1421 and 1102 cm–1; 紫外UV (MeOH) λ max (log ε): 202.8(0.69), 211.2 (0.64), 255.8 (0.13), 284.6 (0.05) nm; 质谱EIMS m/z 479 [M]+。
：无色结晶; [α]24 D = +104.5 (c 0.014, MeOH); 红外IR(KBr) ν max 2926, 1687, 1600, 1421 and 1107 cm–1; 紫外UV (MeOH) λ max (log ε):202.8 (0.69), 211.2 (0.64), 255.8 (0.13), 284.4 (0.05) nm; 质谱EIMS m/z 509[M]+。
2) 称取上述干燥后的式I化合物（0.1 mol）溶于硫醇中，加入BBr3，在-70℃丙酮干冰浴中充分搅拌，反应过夜后，终止反应，反应产物进行柱层析，洗脱液浓缩后得到式I化合物的的脱甲基衍生物。
相关化合物的结构确证数据：
：[α]24 D = +95 (c 0.014, MeOH); 红外IR(KBr) ν max 3350,2900, 1630, 1450 and 1135 cm–1; 紫外UV (MeOH) λ max (log ε): 200.8 (0.69), 215.2(0.64), 250.5 (0.13), 282 (0.05) nm; 质谱EIMS m/z 422 [M]+。
：[α]24 D = +130 (c 0.014, MeOH); 红外IR(KBr) ν max 3360,2929, 1650, 1410 and 1105 cm–1; 紫外UV (MeOH) λ max (log ε): 204.8 (0.69), 211.2(0.64), 254 (0.13), 270 (0.05) nm; 质谱EIMS m/z 423 [M]+。
式III化合物的制备：
称取上述干燥后的式I化合物（0.1 mol）溶于无水丙酮中，加入无水碳酸钾，常温条件下，在充分搅拌下向反应体系中加入乙酸酐，反应1-5h后，向反应体系中加水终止反应，用乙酸乙酯（500 mL）进行萃取，将萃取液浓缩后，进行柱层析，用乙酸乙酯洗脱，洗脱液浓缩，重结晶后得到式I化合物的乙酰化产物。
相关化合物的结构确证数据：
: 白色粉末; [α]24 D = +130.5 (c 0.022, MeOH); 红外(溴化钾) ν max 2970, 1720, 1618, 1379 and 1085 cm–1；紫外 (甲醇) λ max (log ε): 211(0.41), 233.6 (0.26), 280.9 (0.20), 285 (0.19), 325 (0.21) nm；质谱EIMS m/z520 [M]+。
：白色粉末; [α]24 D = +130 (c 0.015, MeOH); 红外(溴化钾)ν max 2970, 1721, 1618, 1380 and 1082 cm–1；紫外 (甲醇) λ max (log ε): 211 (0.41),234 (0.26), 282.4 (0.20), 285 (0.19), 325 (0.21) nm；质谱EIMS m/z 606 [M]+。
：白色粉末; [α]24 D = +123.5 (c 0.014, MeOH); 红外IR(KBr) ν max 2926, 1675, 1600, 1420 and 1100 cm–1; 紫外UV (MeOH) λ max (log ε):202.8 (0.69), 211.2 (0.64), 255 (0.13), 281.6 (0.05) nm; 质谱EIMS m/z 564[M]+。
：白色粉末; [α]24 D = +100.5 (c 0.016, MeOH); 红外IR(KBr) ν max 2926, 1687, 1620, 1421 and 1110 cm–1; 紫外UV (MeOH) λ max (log ε):204.8 (0.69), 215.2 (0.64), 252.8 (0.13), 285.6 (0.05) nm; 质谱EIMS m/z 650[M]+。
式IV化合物的制备
1) 称取上述干燥后的式I、式II或式III化合物（0.1 mol）溶于无水二氯甲烷中，加入1N磺酰氯，在冰水浴中充分搅拌，反应3-5h后，向反应体系中加氯化铵溶液终止反应，用乙酸乙酯 (500 mL) 进行萃取，将萃取液浓缩后，进行柱层析，用乙酸乙酯洗脱，洗脱液浓缩，重结晶后得到式I化合物的卤代产物。
相关化合物的结构确证数据：
：[α]24 D = +130 (c 0.014, MeOH); 红外IR(KBr) ν max 3360,2929, 1650, 1410 and 1105 cm–1; 紫外UV (MeOH) λ max (log ε): 204.8 (0.69), 211.2(0.64), 254 (0.13), 270 (0.05) nm; 质谱EIMS m/z 471.6 [M]+。
：[α]24 D = +100.2 (c 0.020, MeOH); 红外IR(KBr) ν max3330, 2900, 1620, 1415 and 1105 cm–1; 紫外UV (MeOH) λ max (log ε): 206.3 (0.69),210.2 (0.64), 254.3 (0.13), 270 (0.05) nm; 质谱EIMS m/z 472.5 [M]+。
2) 称取上述干燥后的式I的卤代产物（0.1 mol），加入1N氢氧化钠固体以及适量硝酸银和蒙脱石混合催化剂，96℃反应3-5h后，反应产物先后通过氯仿以及甲醇萃取，萃取液浓缩进行柱层析，洗脱液重结晶后得到式IV化合物。
相关化合物的结构确证数据：
：[α]24 D = +140 (c 0.016, MeOH); 红外IR(KBr) ν max 3340,2929, 1650, 1410 and 1105 cm–1; 紫外UV (MeOH) λ max (log ε): 206.8 (0.69), 215.2(0.64), 250 (0.13), 272 (0.05) nm; 质谱EIMS m/z 452 [M]+。
：[α]24 D = +142 (c 0.012, MeOH); 红外IR(KBr) ν max 3345,2900, 1650, 1400 and 1125 cm–1; 紫外UV (MeOH) λ max (log ε): 210.4 (0.69), 211.5(0.64), 254 (0.13), 270 (0.05) nm; 质谱EIMS m/z 453.6 [M]+
式V化合物的制备：
称取上述干燥后的式I、式II、式III或式IV化合物（0.1 mol）溶于脱水甲醇后置于充满氢气的反应瓶中，常温条件下，在充分搅拌下将适量Pd/C加到反应溶液中，反应过夜后，过滤除去钯碳，终止反应，将反应液浓缩后，进行柱层析，用乙酸乙酯洗脱，洗脱液浓缩，重结晶后得到式V化合物。
相关化合物的结构确证数据：
：无色结晶; [α]24 D = +133.5 (c 0.017, MeOH); 红外(溴化钾) ν max 3288, 2970, 1721, 1618, 1379 and 1082 cm–1；紫外 (甲醇) λ max (log ε):211 (0.41), 233.6 (0.26), 280.9 (0.20), 285 (0.19), 322 (0.21) nm；质谱EIMS m/ z 440.2 [M]+。
：白色粉末; [α]24 D = +133.5 (c 0.017, MeOH); 红外IR(KBr) ν max 3366, 2926, 1600, 1421 and 1105 cm–1; 紫外UV (MeOH) λ max (log ε):204.8 (0.69), 211.2 (0.64), 253 (0.13), 280 (0.05) nm; 质谱EIMS m/z 440 [M]+。
实施例3中未具体指明的其他有机化学反应条件，以及正相硅胶柱色谱分离等其他实验操作条件均为本领域常规的实验操作条件，本领域的技术人员可以根据实际需要，进行合理的选择。
实施例4
本发明式Ⅰ化合物的抗病毒活性
(1) 抗病毒活性测试
采用细胞病变抑制作用（CPE）对单纯疱疹Ⅰ型病毒(HSV-1)的体外抗病毒活性进行测试。
(2) 活性测试方法
将培养成单层的Hep-2细胞用胰酶消化后，接种于96孔板中，长成单层备用。将HSV-1病毒接种于Hep-2细胞上，加2%血清1640培养液后置37℃、5%CO2条件下培养，出现90%以上的病变后，反复冻融3次后吹打离心，定量分装，–80℃冰箱冻存备用。受试样品每管以10μL DMSO溶解后，加入200μL的2% 1640培养液，并连续10次2倍比稀释，共10个稀释度，然后横向接种于96板孔中的单层细胞上，11列为病毒对照、12列为细胞对照，37℃、5% CO2培养，每小时观察病变，连续观察24h（HSV-1）。病毒对照出现90%以上的病变后，将板孔内液体吸弃，加1%中性红染色，在540 nm波长测定OD值，用Reed-Muench方法计算药物半数有效浓度(IC50)，观察药物抑杀病毒的效果。
(3) 活性测试结果
试验结果显示，本发明制备的式I、式II、式III、式IV及式V化合物对HSV-1病毒具有不同程度的抑制作用，IC50值均在0.07-100 μM 之间，其中式I化合物的抗HSV-1病毒活性最为突出，远远强于阳性药利巴韦林的活性 (见表1)。更为重要的是本发明制备的式I化合物的毒性极低。
表1 式I化合物的抗HSV-1病毒活性
IC<sub>50</sub> (<i>μ</i>M) TC<sub>50</sub> (<i>μ</i>M) SI
0.07 64.94 955
0.21 36.9 179
利巴韦林 78 &gt;10<sup>4</sup> >128
实验表明，本发明的生物碱类化合物对HSV-1感染具有很强的抑制活性，可将其制成抗病毒药物，具有广阔的应用前景。

Claims (2)

1.一种生物碱类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述生物碱类化合物为：
, R为或,
X为OH或C1-C4的烷氧基, Y为OH或C1-C4的烷氧基, Z为OH或C1-C4的烷氧基, W为OH或C1-C4的烷氧基，
, R为或,
X为OH或C1-C4的烷酰氧基，Y为OH或C1-C4的烷酰氧基，Z为OH或C1-C4的烷酰氧基, W为OH 或C1-C4的烷酰氧基，
, R为或,
X为OH、C1-C4的烷氧基或C1-C4的烷酰氧基， Y为卤素或OH，Z为OH、C1-C4的烷氧基或C1-C4的烷酰氧基, W为OH 或C1-C4的烷氧基或C1-C4的烷酰氧基，
, R为或,
X为OH、C1-C4的烷氧基或C1-C4的烷酰氧基，Y为H、OH、卤素、C1-C4的烷氧基或C1-C4的烷酰氧基，Z为OH、C1-C4的烷氧基或C1-C4的烷酰氧基, W为OH 或C1-C4的烷氧基或C1-C4的烷酰氧基。
2.权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备抗单纯疱疹Ⅰ型病毒剂中的应用。
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