HU203563B - Process for producing opioid-polypeptides and pharmaceutical compositions containing them - Google Patents

Process for producing opioid-polypeptides and pharmaceutical compositions containing them Download PDF

Info

Publication number
HU203563B
HU203563B HU854270A HU427085A HU203563B HU 203563 B HU203563 B HU 203563B HU 854270 A HU854270 A HU 854270A HU 427085 A HU427085 A HU 427085A HU 203563 B HU203563 B HU 203563B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
arg
gly
leu
phe
ch3arg
Prior art date
Application number
HU854270A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT40145A (en
Inventor
Yutaka Tsuchiya
Takeru Kaneko
Takahiro Nakazawa
Shin Araki
Yoshihiro Arakawa
Hiroshi Yoshino
Kiyomi Yamatsu
Shinro Tachibana
Masuhiro Ikeda
Original Assignee
Eisai Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Eisai Co Ltd filed Critical Eisai Co Ltd
Publication of HUT40145A publication Critical patent/HUT40145A/hu
Publication of HU203563B publication Critical patent/HU203563B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/665—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
    • C07K14/675—Beta-endorphins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/665—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S930/00—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/01—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/26—Containing cys-cys disulfide bridge between nonadjacent cysteine residues

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

A leírás terjedelme: 16 oldal, 8 ábra
F jelentése -NH2, -NH-(l-6 szénatomos)-alkilcsoport, He-OH, CH3lle-OH, Asp-OH, β-Ala-OH, Sar-OH, D-Glu-OH, D-Leu-OH, D-Leu-NH2, DLeu-NH-(l-6 szénatomos)-alkilcsoport, D-LeuArg-NH2, D-Leu-Arg-NH-(l-4 szénatomos)-alkilcsoport, D-Leu-Asp-OH, D-Leu-Phe-OH, D-GluArg-NH2, D-Leu-Arg-D-Glu-OH, CH3Ala-OH — azzal a megkötéssel, hogy az (I) általános képletű polipeptidben A, B, C, D, E és F egyidejűleg nem jelenthet egy (Π) általános képletű L-aminosavból származó csoportot, amelyben R egy aminosav (e) képletű csoport nélküli részét jelenti.
NHj
-L
COOH —CH-COOH I nh2 (Π)
HU 203 563 B (e)
-1HU 203563Β
A találmány tárgya eljárás kiváló gyógyászati hatású, új opioid-polipeptidek és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására. Közelebbről, a találmány fájdalomcsillapító hatású polipeptidek előállítására vonatkozik.
A morfin fájdalomcsillapító hatásának mechanizmusa vonatkozásában végzett vizsgálatok eredményei arra utalnak, hogy az élő szervezetben olyan morfinszerű hatással rendelkező, úgynevezett endogén morfinszerű anyagok vannak jelen, amelyek a fájdalomérzést és a mentális (értelmi) tevékenységet befolyásolják. Számos vizsgálat során az enkefalint és endorfint különítették el, és ezeknek az opioid peptideknek a szerkezetét meghatározták. Ezt követően további részletes vizsgálatokat végeztek, s ezek során új opiod peptideket fedeztek fel, ilyenek a β-neoendorfin, δ-kazomorfin, kiotorfin, dermorfin és a dinorfin.
A fentiek közül a dinorfin opiod peptid szerkezeti képletét a jelen találmány egyes szerzői állapították meg. E vegyület szerkezete a következő:
H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-Ile-Arg-Pro
-Lys-Leu-Lys-Trp-Asp-Asn-Gln-OH
A dinorfin természetes opiod peptid, amely specifikus hatást fejt ki a K-receptorra, s ennek következtében olyan fájdalomcsillapító szer, amelynek alkalmazása hozzászokással (toleranciával) nem jár.
A dinorfin hátránya, hogy intravénás befecskendezés útján nem vált ki fájdalomcsillapító hatást, mert a vérben nem stabil.
Fennáll továbbá az igény rövidebb szénláncú, igen hatásos peptidek előállítására, mert a dinorfin viszonylag hosszú láncú polipeptid.
Peptidek területén végzett kutatásaink során azt találtuk, hogy a dinorfin fájdalomcsillapító hatása mind intravénás, mind szubkután adagolás útján elérhető az (I) álalános képletű, a dinorfinnál rövidebb láncú, 7-9 aminosavcsoportot tartalmazó új peptidekkel.
Ezek alapján a találmány tárgya eljárás az (I) általános képletű opiod peptidek és azok farmakológiái szempontból alkalmas sóinak az előállítására. Az (IJ) képletben
R1 és Rz jelentése azonosan hidrogénatom, vagy különböző és jelentésük hidrogénatom és 1 -4 szénatomos alkilcsoport;
A jelentése Gly, D-Ala, Sár, Továbbá D-Cys, ha C jelentése Cys, vagy D-Ser, ha C jelentése Ser;
B jelentése Phe, Phe(pNO2), CfbPhe;
C jelentése Leu, CH3Leu, terc-Leu, Met(O);
D jelentése Arg, CHsArg, továbbá homoArg, ha E-F jelentése D-Leu-NHfe;
E jelentése Arg, CH3Arg;
F jelentése -NH2, -NH-(l-6 szénatomos)-alkilcsoport, Ile-OH, CH3lle-OH, Asp-OH, β-Ala-OH, Sar-OH, D-Glu-OH, D-Leu-OH, D-Leu-NH2, DLeu-NH-(l-6 szénatomos)-alkilcsoport, D-LeuArg-NH2, D-Leu-Arg-NH-(l-4 szénatomos)-alldlcsoport, D-Leu-Asp-OH, D-Leu-Phe-OH, D-GluArg-NH2, D-Leu-Arg-D-Glu-OH, CH3Ala-OH.
A találmány szerinti peptideket felépítő aminosavak D- és L-aminosavak. Ha külön megjegyzést erre vonatkozóan nem teszünk, akkor L-aminosavakról van szó. A leírásban a peptidkémiában általá2 nosan használt betűjeleket és rövidítéseket alkalmazzuk. Ezek a következők:
Tyr: tirozin
Gly: glicin
Sár: szarkozin
Cys: tisztein
Phe: fenil-alanin
Arg: arginin
Leu: leucin
Ile: izoleucin
Nle: norleucin
Met: metionin
Met(O): metionin-szulfoxid
Ser: szerin
Val: valin homo-Arg: homoarginin
Orn: omitin
Glu: glutaminsav
Trp: triptofán
Asp: aszparaginsav
Alá: alanin
Pro: prolin
Gin: glutaminsav
Aib: 2-amino-izovajsav
Phe(p-Cl): 4-klór-fenü-alanin
Phe(p-Br): (4-bróm-fenil)-alanin
Phe-(p-NO2): (4-nitro-fenil)-alanin
Phe(p-I): (4-jód-fenil)-alanin
Phe(p-F): (4-fluor-fenil)-alanin
Phe(p-CH3): (4-metil-fenil)-alanin
Phe(p-CH3OÖ:(4-metoxi-feniI)-alanin
Phe(p-CF3):(4-trifluor-metil-fenil)-alanin
BOC: terc-butoxi-karbonil
Z: benzil-oxi-karbonil.
Cl2Bzl: 2,6-diklór-benzil
CH3Bzl: 4-metil-benzil
Tos: 4-toluolszulfonil, és
Bzl: benzil.
A CH3Phe, CHaLeu, CH3Arg, CH3fle-OH, CH3Ala-OH, CH3Tyr a megfelelő olyan aminosavakból származó csoportokat jelölik, amelyekben a CH3-csoport az a-NH2-csoporthoz kapcsolódik.
A farmakológiai szempontból alkalmas sókra példaként megnevezzük a szervetlen savakkal—így sósav, kénsav, brómhidrogénsav és jódhidrogénsav alkalmazásával—alkotott sókat, valamint a szerves savakkal — így maleinsawal, fumársawal, borostyánkősavval, ecetsawal, malonsawal és benzoesawal—alkotott sókat. A sókat ismert módon állítjuk elő úgy, hogy az (I) általános képletű vegyületeket a megfelelő szervetlen vagy szerves savval reagál tatjuk.
A fentebb elmondottak értelmében a találmány olyan új peptideket biztosít, amelyek gyógyszerként, elsősorban fájdalomcsillapító szerekként alkalmazhatók.
A találmány tehát azoknak a gyógyszerkészítményeknek az előállítására is vonatkozik, amelyek hatóanyagként a találmány szerinti peptideket tartalmazzák.
Az 1 -6 szénatomos alkilcsoport például a metil-, etil-, η-propil-, izopropil-, η-butil-, izobutil-, 1-metil-propil-, terc-butil-, ciklopropil-metil-, n-pentil-, 1 -etil-propil-, izoamil- és n-hexil-csoport.
A találmány szerinti (I) általános képletű vegyü-2HU 203563Β letek szerkezetét jellemzi az a korlátozás, hogy A, B, C, D, E és F egyidejűleg nem jelenthet egy (Π) általános képletű L-aminosavbóI származó csoportot, amelyben R egy aminosav (e) képletű csoport nélküli részét (egységét) jelenti; ugyanis az (I) általános képletű vegyűleteket felépítő aminosavaknak legalább egyike α-Ν-alkil-aminosav vagy D-aminosav.
Azok a találmány szerinti vegyületek, amelyekben a felépítő aminosavcsoportoknak legalább egyike valamilyen α-Ν-alkil-aminosav vagy D-amino10 sav, mentesek a fentiekben említett dinorf in és származékai lényeges hátrányaitól, amennyiben ez utóbbiak intravénás befecskendezéssel adagolva nem váltanak ki fájdalomcsillapító hatást, mert a vérben nem stabilisak. A találmány szerinti vegyületek in vivő stabilitása nagy, és így a gyakorlatban felhasználható igen értékes fájdalomcsillapító szerek.
Abból a célból, hogy a találmány megértését elősegítsük, az alábbiakban típusos példákat adunk meg a találmány szerinti vegyületekre, ez azonban semmiféle korlátozást nem jelent.
CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-NH2
CBfeTyr-Gly-Gly- Phe-Leu-Arg-CH3Arg-DLeu-Arg-NHCH2CH3
Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-D-Leu-NH2
CH3Tyr-Gly-Gly- Phe-Leu-Arg-Arg-D-GluArgNH2
CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Met(O)-Arg-CH3Arg-DLeu-Arg-NH2
Tyr-Sar-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-D-Leu-NH2
OfeTyr-Gly-GlyNH(CH2)5CH3
CH3Tyr-Gly-GlyD-Leu-NHCH2CH3
CH3Tyr-Gly-GlyLeu-NH2
Phe-Leu-Arg-Arg-D-LeuPhe-terc-Leu-Arg-CH3ArgPhe-CH3Leu-Arg-Arg-D35
Tyr-D-Ser-Gly- Phe-Ser-Arg-CH3Arg-D-LeuNHCH2CH3
CH3Tyr-Gly-Gly- Phe-Leu-Arg-Arg-D-LeuArg-NH2
CH3Tyr-Gly-Gly-D- Phe-Leu-Arg-Arg-D-LeuNH2
CH3Tyr-Gly-Gly- Phe-Leu-Arg--Arg-D-LeuOH
CH3Tyr-Gly-Gly-Phe(p-NO2)-Leu-Arg-CH3A rg-D-Leu-Arg-NHCH2CH3
CHfeTyr-Gly-Gly- CKbPhe-Leu-Arg-Arg-DLeu-NH2
CH3Tyr-Gle-Gly- Phe-Leu-Arg-CH3Arg-DLeu-OH
CKbTyr-D-Ala-Gly- Phe-Leu-Arg-Arg-D-LeuNH2
CH3Tyr-Gly-Gly- Phe-Leu-Arg-Arg-D-LeuNHCH2CH3
CH3Tyr-Gly-Phe(p-NO2)- Leu-Arg-Arg-DLeu-NH2
CH3Tyr-Gly-Gly-Phe(p-NO2)-Leu-Arg-CH3A.
rg-D-Leu-NHCH2CH3
CH3Tyr-Gly-Gly-Phe- Leu-CH3Arg-Arg-DLeu-NH2
CKbTyr-Gly-Gly- Phe-Leu-Arg-CH3Arg-DLeu-NHCH2CH3
CH3Tyr-Gly-Gly- Phe-Leu-Arg-CH3Arg-DLeu-NH2
CH3Tyr-Gly-Gly-Phe- Leu-Arg-Arg-D-LeuOCH2CH3
CH3Ty-rGly-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-NHCH2C
H(CH3)CH2CH3
CH3Tyr-Gly-Gly-Phe- Leu-Arg-Arg-D-LeuNH2
Tyr-D-Ala-Gly-CH3Phe -Met(O)-Arg-Arg-DAsp-OH
CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH3Arg-CH3A la-OH
CH3Tyr-Gly-Gly- Phe-Leu-Arg-CH3Arg-IleOH
CH3Tyr-Gly-Gly- Phe-Leu-Arg-CH3Arg-DLeu-OH
CH3Tyr-Gly-Gly -Phe-Leu-Arg-CH3Arg-DGlu-OH
CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH3Arg-CH3l le-OH
CH3Tyr-Gly-Gly- Phe-Leu-Arg-CH3Arg-pAla-OH
CH3Tyr-Gly-Gly -Phe-Leu-Arg-CH3Arg-DLeu-Asp-OH
CH3Tyr-Gly-Gly- Phe-Leu-Arg-CH3Arg-DLeu-Phe-OH
CH3Tyr-Gly-Gly- Phe-Leu-Arg-CH3Arg-DLeu-Arg-D-Glu-OH.
az (I) általános képletű peptideket a találmány értelmében úgy állítjuk elő, hogy az (I) általános képletnek megfelelő kívánt esetben védett aminosavakat kondenzáljuk, adott esetben a Cys-csoportokat tartalmazó vegyűleteket oxidáljuk, majd a kapott védett (I) általános képletű vegyületről a védőcsoportokat lehasítjuk, és kívánt esetben az így kapott (I) általános képletű vegyületet ismert módon farmakológiai szempontból alkalmas sójává alakítjuk.
A találmány szerinti peptidek bármilyen általánosan alkalmazott eljárással előállíthatok. A védőcsoportot tartalmazó peptidek a szokásos folyadék fázisos vagy szilárd eljárással szintetizálhatók. Általában előnyös az aminosavak oldalláncában jelen lévő funkciós csoport védelme. Az összes védőcsoportokat az utolsó lépésben távolít juk el. A funkciós csoportok védésére (az aminosavak oldalláncában) az összes eddig közölt védőcsoportok felhasználhatók. E védőcsoportokra példaként megemlítjük a tozil (Tos)-, nitro-(NO2)-, benzil- (Bzl)-, terc-butil(But)-, benzil-oxi-karbonil- (Z)- és terc-butoxi-karbonil (BOC)-csoportot.
Az aminosavak α-helyzetű aminocsoportjainak védelmére bármelyik eddig ismertetett védőcsoport alkalmazható. A védőcsoportokat kombinált módon, előnyösen úgy választjuk, hogy az a-aminocsoportok védelmére használt csoportokat szelektíven el tudjuk távolítani az oldalláncokban lévő funkciós csoportok védőcsoportjainak a károsodása nélkül. így például, ha az α-amino-csoport védelmére terc-butoxi-karbonil-csoportot használunk, akkor az oldalláncban lévő funkciós csoportot előnyösen benzil- vagy benzil-oxi-karbonil-csoporttal védhetjük; ha az α-amino-csoportot benzü-oxikarbonil-csoporttal védjük, akkor viszont előnyös az oldalláncban lévő funkciós csoport védelmére a terc-butil- vagy terc-butoxi-karbonil-csoport használata. Ha a peptid N-terminális a Tyr aminocso-3HU 203563Β portja dialkilezett, akkor ez külön védelmet nem igényel.
A racemizálás megelőzése céljából a védett pepiidet előnyösen lépésenként szintetizáljuk, s ennek az eljárásnak a végrehajtása során a C-terminális oldaláról indulunk el; eljárhatunk azonban úgy is, hogy fragmentumokat kondenzálunk, és ezt a Gly helyzetében hajtjuk végre; eljárhatunk továbbá úgy is, hogy a fragmentum-kondenzációt bármilyen kívánt helyzetben végezzük.
A találmány szerinti eljárás végrehajtása során, akár a szilárd fázisú, akár a folyadék fázisú módszert alkalmazzuk, a védőcsoportokat a pepiidről eltávolítjuk, és a peptidet tisztítjuk. Az eljárás végrehajtása során az a) reakcióvázlat szerint járunk el a folyadék fázisban végrehajtott módszerrel. Az a) reakcióvázlatban X1 és X2 hidrogénatomot vagy alkilcsoportot jelent, Y1 és Y2 jelentése valamilyen aminosav-oldallánc, és R’ és R” védőcsoportot vagy peptidmaradékot jelent.
(1) A peptidkötést létesítő reakció:
A peptidkötést bármilyen eddig ismertetett eljárással létrehozhatjuk. Általánosan alkalmazott eljárás szerint eg^ (ΙΠ) általános képletű savkomponens — ahol X R” és Y2 jelentése a fentiekben meghatározott — karboxilcsoportját aktiváljuk ismert módszerrel, például az azid-, vagy diciklohexil-karbodiimid-, vegyes anhidrid- vagy aktív-észter-módszerrel, és az így kapott aktivált vegyületet reagálta tjük egy (TV) általános képletű aminkomponenssel, amelyben X , Y és R’ jelentése a fentiekben meghatározott.
E reakció során a körülményeket, az oldószereket és a hőmérsékletet a karboxücsoport aktiválására alkalmazott módszer szerint választjuk. A vegyes anhidrid-módszer szerint, amely egyike a típusos kondenzáló eljárásoknak, úgy járunk el, hogy egy (ψ) általános képletű savkomponenst — amelyben X , Y és R” jelentése a fentiekben meghatározott — aprotikus (protonmentes) oldószerben, például dimetil-formamidban, tetrahidrofuránban vagy etil-acetátban oldunk, az így kapott oldatot -20 °Cra hűtjük és egyenértékű mennyiségben előbb Nmetil-morfolint, majd etil-(klór-formiát)-ot adunk hozzá. Az oldatot 5 percig állni hagyjuk, majd hozzáadjuk a (IV) általános képletű vegyületet egyenértékű mennyiségben, az így kapott oldatot -15 °C és 0 °C közötti hőmérsékleten 2-5 órán át keverjük, s utána a szokásos módon feldolgozzuk. így egy (V) általános képletű, védett formában lévő peptidet kapunk, amelyben X1, X, Y1, Y2, R’ és R” jelentése a fentiekben meghatározott.
(2) Védőcsoport eltávolítása egy a-amino-csoportról:
A védőcsoport eltávolítását bármilyen ismert módszerrel, például katalitikus hidrogénezéssel végezhetjük; eljárhatunk azonban úgy is, hogy savat vagy bázist vagy hidrazint alkalmazunk. Az előnyös eljárást az α-amino-csoporton lévő védőcsoport természetétől függően kell megválasztani. Általánosan alkalmazott eljárás például a benzil-oxi-karbonil-csoport eltávolítására a katalitikus hidrogénezés; a terc-butoxi-karbonil-csoport trifluor-ecetsawal hasítható le. Az alábbiakban leírjuk azt az eljárást, amelynek során a terc-butoxi-karbonil-cso4 portot trifluor-ecetsawal távolít juk el.
Jéghűtés közben 0,25 ml anizolt és 5 ml trifluorecetsavat adunk 1 g (VI) általános képletű a-N-(butoxi-karbonil)-peptidhez, ahol X1, X, Y1, Y és R’ jelentése a fentiekben meghatározott. Az elegyet 60 percig keverjük, majd étert adunk hozzá, s így egY (VII) általános képletű peptid — ahol X1, X2, Y1, Y2 és R’ jelentése a fentiekben meghatározott — trifluor-acetátjához jutunk. E terméket valamilyen oldószerben feloldjuk, és egy aminnal — például trietil-aminnal — közömbösítjük; az így kapott terméket visszük a következő reakcióba.
(3) Az összes védőcsoportok eltávolítása:
A fentebb leírt kondenzáció és az a-amino-csoportok védőcsoportjai eltávolításának az ismétlése után—aminek során a peptidláncot meghosszabbítottuk — valamennyi védőcsoportot eltávolítjuk, hogy a kívánt peptidet nyerstermék formában megkapjuk. A védőcsoportokat ismert módon, így katalitikus hidrogénezéssel távolítjuk el. Eljárhatunk azonban úgy is, hogy alkálifémet és cseppfolyós ammóniát használunk a redukcióhoz; a védőcsoport eltávolítását végezhetjük továbbá savval vagy bázissal vagy hidrazinnal. A gyakorlatban a védőcsoport eltávolításának módszerét annak kémiai természetétől függően választjuk meg. Gyakran alkalmazott eljárás a védőcsoport eltávolítása hidrogén-fluoriddal, amely a következőképpen történik:
g védett formában lévő peptidet körülbelül 30 ml hidrogén-fluoridban oldunk 0,5 ml anizol jelenlétében, -15 °C és 0 °C közötti hőmérsékleten, zárt, a hidrogén-fluoridnak ellenálló reakcióedényben. Az oldatot 60 percig keverjük, majd a hidrogén-fluoridot a reakcióelegyből kidesztilláljuk. A maradékot éterrel mossuk, és vízben feloldjuk. Az oldatot Amberlit IRA-93 (ecetsav-típus) gyantával kezeljük, s utána liofilizáljuk. így a védőcsoportok nélküli, nyers pepiidhez jutunk.
(4) A nyers peptid tisztítása:
A nyers peptidet ismert módszerrel, így ioncserélő kromatográfiával, gélszűréssel, megoszlásos kromatográfiával, ellenáramú megoszlással vagy nagy teljesítményű (nagy nyomású) folyadékkromatográfiával tisztíthatjuk. A nagy nyomású folyadékkromatográfia segítségével a tisztítást például a következő módon végezhetjük:
100 mg nyers peptidet betáplálunk egy 20 mm átmérőjű, 250 mm magasságú, vivőanyagként Nucleosil 5 c 18 töltetet tartalmazó víz-acetonitril elegygyel végezzük. A kívánt pepiidnek megfelelő csúcsokat mutató frakciókat 210 nm hullámhosszon végzett UV detektálás segítségével összegyűjtjük, és liofilizáljuk. így a kívánt peptidhez jutunk.
Ha a peptid két Cys vagy D-cys egységet tartalmaz a molekulájában, akkor a nyers peptidet a tisztítási eljárás előtt ismert oxidációs folyamattal, levegő vagy hidrogén-peroxid segítségével oxidáljuk, s így a tisztítási eljárás után nagy tisztaságú, gyűrűs (ciklizált) terméket kapunk.
Az előzőek szerint előállított (I) általános képletű vegyületeket kívánt esetben szervetlen vagy szerves savakkal ismert módon történő reagáltatással farmakológiái szempontból elfogadható sóikká alakíthatjuk.
Az alábbi állatkísérletek eredményei mutatják a
-4HU 203563Β találmány szerinti vegyületek hatását, amelynek alapján a vegyületek gyógyszerként alkalmazhatók.
1. vizsgálati módszer
A fájdalomcsillapító hatás vizsgálata
A vizsgálandó vegyületet fiziológiás (0,09%-os) konyhasó-oldatban ddY-tórzsű, 20-27 g testtömegű egereknek, általában nyolctagú csoportoknak adagoltuk intravénás vagy szubkután úton. A fájdalomcsillapító hatást a „farokcsipeszes” próbával mértük [Jap. J. Pharmacol. 16,287 (1966)].
A farokcsipeszes próba végrehajtása során egy 300 g nyomást kifejtő szorítót (csipeszt) helyeztünk az állatok tövére, a végből-nyálkahártya befoglalásával, és megmértük azt a latenciaidőt, amely addig eltelt, amíg az állat a csipeszt harapdálni kezdte. Az állatokat a kísérlet előtt a farokcsipesz által előidézett fájdalomérzés szempontjából megvizsgáltuk, és azokat az állatokat, amelyek 3 másodpercen belül nem kezdték meg a csipesz harapását, a kísérletből kizártuk. A fájdalomcsillapító hatás kritériumának a 6 másodpercnél hosszabb latenciaidőket tekintettük.
A vizsgálandó vegyületek EDso értékeit (azaz az 50%-os fájdalomcsillapító hatású dózist) litchfield és Wilcoxon módszerével számítottuk ki [J. Pharmacol. Exp. Ther 96,99 (1949)]. Az eredményeket az 1. és 2. táblázatokban foglaltuk össze. Az 1. táblázat az intravénás befecskendezés után kapott eredményeket, a 2. táblázat pedig a szubkután befecskendezés után kapott eredményeket mutatja. A táblázatok baloldali első oszlopában lévő számok azoknak a példáknak a sorszámát jelentik, amelyekben az adott vegyület előállítását leírjuk.
1. táblázat
A vizsgálandó vegyületet leíró példa sorszáma -inő3szer (i.v.): EDsomg/kg
1. 0,75
2. 0,24
5. 3,4
6. 4,3
7. 3,9
8. 3,3
10. 1,2
18. 4,5
19. 2,0
21. 0,8
22. 3,0
24. 0,22
25. 1,8
27. 0,7
28. 0,7
29. 2,0
dinorfin(l-13) 25,0
2. táblázat
A vizsgálandó ”Farokcsipesz”vegyületet leíró -módszer (s.c.):
példasorszáma EDsomg/kg
1. 1,0
2. 0,44
21. 0,8
24. 0,32
27. 0,8
28. 1,5
2. vizsgálati módszer
Az opioid hatás vizsgálata:
A találmány szerinti vegyületek opioid hatását T. Oka és munkatársai módszerének alkalmazásával [Europ. J. Pharmacol. 73,235 (1980)] nyulak ondóelvezetőjén (vas deferens-én) vizsgáltuk, a következőképpen:
Érett hím nyulakat leöltünk úgy, hogy fülvénájukba levegőt vezettünk. Közvetlenül a halál beállta után laparotomiát végeztünk, és mind a jobb, mind a bal ondóelvezetőt kiemeltük. Az ondóelvezetőkből a magfolyadékot Ringer-oldatba folyattuk. Mindkét vezetékből a prosztata felé eső oldaltól számítva 2,5 cm hosszú részt kivágtunk. A vezetékeknek ezeket a darabjait fonal segítségével 6 ml térfogatú, állandó hőmérsékletű üvegcellában felfüggesztettük, és elektromos eszköz segítségével elektromosan stimuláltuk. A stimulust platinaelektródok között 0,1 Hz, 1 ms és 90 Volt paraméterekkel hoztuklétre. Csatlakozó rész segítségével, kijelzőn regisztráltuk az elektromos stimulálás következtében beálló összehúzódást.
Az opiod hatást az elektromos stimulálás következtében fellépő összehúzódás gátlásával határoztuk meg.
Az eredményeket IC50 értékekben (azaz az 50%os gátlást eredményező koncentrációkban) adtuk meg, és a 3. táblázatban foglaltuk össze.
3. táblázat
A vizsgálandó vegyületet leíró példasorszáma Anyúlondóelvevezetőjén végzett vizsgálat ED50 nanomól
1. 3,5
2. 0,04
3. 6,03
6. 4,5
8. 6,2
19. 2,8
24. 0,08
25. 0,58
27. 2,0
28. 6,5
dinorf in-A (1-17) 17,4
-5HU 203563Β
A 3. táblázatban látható eredmények világosan mutatják, hogy a találmány szerinti vegyületek a dinorfin-A-val összehasonlítva igen erős hatást fejtenek ki.
A találmány szerinti vegyületek továbbá erősen gátolják a tengerimalac-csípőbél (tengerimalac-iluem) hosszanti izmainak és az egér ondóelvezetőjének az elektromos stimulálás hatására bekövetkező összehúzódását.
A fentebb említett farmakológiái vizsgálati eredményekből nyilvánvalóan kitűnik, hogy a találmány szerinti eljárással előállított peptideknek a dinorfin hatásaihoz hasonló opioid hatásai vannak, e hatások nagyon erősek, és e vegyületek intravénás vagy szubkután befecskendezés útján adagolva figyelemre méltó fájdalomcsillapító hatást fejtenek ki.
A találmány szerinti vegyületek igen értékes sajátsága, hogy erős fájdalomcsillapító hatásukat intravénás vagy szubkután befecskendezés útján adagolva figyelemre méltó fájdalomcsillapító hatást fejtenek ki.
A találmány szerinti vegyületek igen értékes sajátsága, hogy erős fájdalomcsillapító hatásukat intravénás vagy szubkután befecskendezés útján, tehát szisztémás adagolás útján fejtik ki; ugyanis a dinorfin és eddig leírt származékai intravénás befecskendezés útján adagolva alig mutatnak fájdalomcsillapító hatást, mivel a vérben nem stabilisak.
Az 1. és 2. példákban leírt találmány szerinti peptidek toxicitása (legkisebb halálos adagja) és fájdalomcsillapító szempontjából hatásos adagja közötti viszonyt mutatja a 4. táblázat.
4. táblázat
A hatásos adag és a legkisebb halálos dózis, egereknek történő szubkután adagolás után
Avizsgá- Farokcsipesz”- Legkisebb
landóve- -módszer: halálos
gyületle- ED50 dózis
író példa mg/kg mg/kg
sorszáma
1. 1,0 100
2. 0,44 20
A találmány szerinti eljárással előállított (találmány szerinti) peptidek figyelemre méltó fájdalomcsillapító hatással rendelkeznek, és terápiás célra gyógyszerekként alkalmazhatók.
A találmány szerinti vegyületek fájdalomcsillapító szerekként való alkalmazása során az adagolást orálisan vagy parenterálisan végezhetjük. Általában az adagolást parenterálisan, intravénás, szubkután vagy intramuszkuláris befecskendezéssel végezzük, alkalmazhatunk azonban végbélkúpokat vagy nyelv alatti (szublingvális) tablettákat is. Az adag a tünetektől, a beteg korától, nemétől, testsúlyától, érzékenységétől, az adagolás módjától, a betegség súlyossági fokától, az adagolások közötti intervallumoktól, a gyógyszerkészítmény sajátságaitól, formulázásától, a készítmény jellegétől és a készítmény hatóanyagának jellegétől függ. Jóllehet az adagot nem kell különösen korlátozni, ez felnőtt egyének számára általában körülbelül 0,1 mg-tól 1000 mg-ig terjed, előnyösen naponta körülbelül 300 mg.
A találmány szerinti vegyületeket injekcióvá, végbélkúppá, szublingvális tablettává, tablettává és kapszulává formulázhatjuk a gyógyszerkészítés területén ismert eljárások segítségével.
Injekciós készítmény előállítása céljából az aktív hatóanyaghoz adalékanyagokat (segédanyagokat), így a pH-értéket beállító szert, pufferanyagot, szuszpendálószert és tartósítószert adunk, és az így kapott keveréket ismert módszerrel intravénás, szubkután vagy intramuszkuláris injekciós készítménnyé alakítjuk. Szükség esetén a keverék a szokásos módon liof ilizálható.
Szuszpendálószerként alkalmazható például metil-cellulóz, Polysorbate 60, hidroxi-etil-cellulóz, akácmézga, tragakantapor, karboxi-metil-cellulóznátriumsó és polioxietilén-szorbitán-monolaurát.
A stabilizálószerekre példaként megemlítjük a következőket: polioxietilénnel keményített ricinusolaj, Polysorbate 80, nikotinamid, polioxietüénszorbitán-monolaurát, macrogol, valamint ricinusolaj-zsírsavak etil-észterei.
Stabüizálószerként alkalmazható például nátrium-szulfit, nátrium-metabiszulfit, valamint észtertípusú vegyületek. Ilyen stabilizálószer például a 4hidroxi-benzoesav-metil-észter vagy etil-észter, szorbinsav, fenol, krezol és klór-krezol.
A találmány szerinti eljárást az alábbi, nem-korlátozó jellegű kiviteli példákban részletesen ismertetjük. A vékonyréteg kromatográfiás meghatározásokat Kieselgel 60 F 254 szilikagélen (Merck Co., Ltd cég terméke) végeztük.
7. példa
CH3Tyr-Gly-Gly- Phe-Leu-Arg-CH3-Arg-Dleu-NHC2H5 előállítása
1. lépés:
Boc-D-Leu-NHC2H5 előállítása g Boc-D-Leu-Oh.H2O 200 ml tetrahidrofuránnal készült oldatát -20 °C-ra hűtjük, és az oldathoz 11 ml N-metü-morfolint és 9,56 ml etil-(klórformiát)-ot adunk. Ezután 5 percig állni hagyjuk, majd 12,9 g 70%-os vizes etil-amin-oldatot adunk hozzá, és az elegyet körülbelül -5 °C hőmérsékleten 2 órán át keverjük. Betöményítés után a kapott maradékot etil-acetátban oldjuk, és előbb vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, majd vízzel mossuk. Ezután az etil-acetátos oldatot szárazra pároljuk, s így az 1) lépés cím szerinti termékét 24,5 g hozammal kapjuk, olvadáspont: 103-106 ”C.
Vékonyréteg-kromatogrammon (a következőkben: VRK) a vegyület Rf értéke 0,77 (kifejlesztés etil-acetáttal).
[a]D= +20,0° (c= 1, metanol)
Elemanalízis a C13H26N2O3 összegképlet alapján:
számított: C:60,44,H: 10,14,N: 10,84% talált: C: 60,42, Η: 10,33, N: 10,86%.
2. lépés:
Z-CH3Arg(Tos)-D-Leu-NHC2H5 előállítása
1,43 g Z-CH3Arg(Tos)-OH ([a]D= -15° (c=l, dimetil-formamid); P. Quitt és munkatársai /Helv.
-6HU 203563Β
Chim. Acta, 32, 327 (1963)/ módszerével szintetizáltuk) 15 ml tetrahidrofuránnal készült oldatát 30 ’C-ra hűtjük, s az oldathoz előbb 0,33 ml N-metil-morfolint, majd utána 0,29 ml etil-(klór-formiát)-ot adunk. Ezután 5 percig állni hagyjuk, majd 817 mg CF3COOH.H-D-Leu-NHC2H5 (amelyet Boc-D-Leu-NHC2Hs anizol jelenlétében végzett trifluor-ecetsavas kezelésével állítottunk elő) és 0,83 ml trietü-amin 7 ml tetrahidrofuránnal készült oldatát adjuk hozzá, és az elegyet körülbelül -5 °C hőmérsékleten 2 órán át keverjük. A betöményítés után kapott maradékot etil-acetátban oldjuk, vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal mossuk, utána vízzel mossuk, és a szerves fázist bepároljuk. így üvegszerű termék alakjában 1,58 g hómmal kapjuk a 2) lépés cím szerinti vegyületét.
VRK: Rf-értéke 0,68 (kifejlesztés metanol/kloroform 1:7 arányú elegyével) [a]D ± 0,5” (c-1, metanol)
Elemanalízis a C30H44N6O6S összegképlet alapján:
számított: C: 58,42, H: 7,19, N: 13,63%, talált: C:58,29,H:7,19,N: 13,40%.
3. lépés:
Boc-Arg(Tos)-CH3Arg(Tos)-D-Leu-NHC2H5 előállítása
1,1 gCH3Arg(Tos)-D-Leu-NHC2H5 (amelyet ZCH3Arg(Tos)-D-Leu-NHC2Hs csontszenes palládium-katalizátor jelenlétében végzett hidrogénezésével állítottunk elő), 983 mg Boc-Arg(Tos)-OH és 372 mg N-hidroxi-benzotriazol 4 ml dimetil-formamiddal készült oldatához 520 mg N-hidroxi-benzotriazol 4 ml dimetil-formamiddal készült oldatához 520 mg diciklohexil-karbodiimidet adunk jéghűtés közben, majd az elegyet hűtőszekrényben egy napon át keverjük, és utána szobahőmérsékleten szintén egy napig keverjük. A csapadék kiszűrése után kapott szűrletet betöményítjük, és a maradékot szilikagélből készült oszlopon kromatografáljuk. Az eluálást metanol és kloroform 1:15 arányú elegyével végezve a 3. lépés cím szerinti termékét 1,2 g hozammal kapjuk.
VRK: Rf-értéke 0,64 (kifejlesztés metanol/kloroform 1:7 arányú elegyével) [a]D= -20,6’ (c=l, metanol)
Elemanalízis a C40H64N10O9S. H2O összegképlet alapján:
számított: C: 52,72, H: 7,30, N: 15,37%, talált: C: 52,82, H: 7,22, N: 15,06%.
4. lépés:
Boc- Leu-Arg(Tos)-CH3Arg(Tos)-D-LeuNHC2H5 előállítása
1,645 g Boc-Leu-OH.H2O 12 ml dimetü-formamiddal készült oldatát -20 ’C-ra hűtjük, s hozzáteszünk előbb 0,726 ml N-metil-morfolint, majd 0,631 ml etil-(klór-formiát)-ot. Az elegyet 5 percig állni hagyjuk, s utána 4,986 g CF3COOH-Arg(Tos)CH3Arg(Tos)-D-Leu-NHC2H5 (amelyet BocArg(Tos)-CH3Arg(Tos)-D-Leu-NHC2H5 anizol jelenlétében végzett trifluor-ecetsavas kezeléssel állítottunk elő) és 0,726 ml N-metü-morfolin 12 ml dimetilformamiddal készült oldatát adjuk hozzá, és utána az elegyet körülbelül -5 ’C hőmérsékleten 2 órán át keverjük. A betöményítés után kapott maradékot etil-acetátban oldjuk, s az oldatot előbb vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, majd utána vízzel mossuk. A szerves fázis betöményítése után kapott maradékot metanol és éter elegyével kezelve szilárd tennék alakjában kapjuk a 4. lépés cím szerinti termékét 5,283 g hozammal, olvadáspont: 120-125 ’C (bomlás közben).
VRK: Rf-értéke 0,66 (kifejlesztés metanol/kloroform 1:7 arányú elegyével) [a]D= -25,8 ° (c=l, metanol)
Elemanalízis a C46H75N11O10S2 . CH3OH öszszegképlet alapján:
számított: C: 54,36, H: 7,67, N: 14,84%, talált: C: 54,49, H: 7,63, N: 14,62%.
5. lépés:
Boc-Phe- Leu-Arg(Tos)-CH3Arg(Tos)-D-LeuNHC2H5 előállítása
1,465 g Boc-Phe-OH 12 ml dimetil-formamiddal készült, -30 ’C-ra hűtött oldatához 0,608 ml N-metil-morfolint és 0,528 ml etil-(klór-formiát)-ot adunk, 5 percen át állni hagyjuk, utána 4,691 g CF3COOH.H-Phe-Leu-Arg(Tos)-CH3Arg(Tos)-DLeu-NHC2H5 (amelyet Boc-Phe-Leu-Arg(Tos)CH3Arg(Tos)-D-Leu-NHC2H5 anizol jelenlétében végzett trifluor-ecetsavas kezelésével állítottunk elő) és 0,608 ml N-metü-morfolin 12 ml dimetilformamiddal készült oldatát adjuk hozzá, majd az elegyet körülbelül -5 ’C-onként órán át keverjük. A betöményítés után kapott maradékot etil-acetátban oldjuk, és az oldatot előbb vizes nátrium-hidrogénkarbonát oldattal, majd utána vízzel mossuk. A szerves fázis bepárlási maradékát metanol és éter keverékével kezelve 5,072 g hozammal szilárd termék alakjában kapjuk az 5. lépés cím szerinti vegyületét, olvadáspont: 127-132 ’C (bomlás közben).VRK: Rf-értéke 0,66 (kifejlesztés metanol/kloroform 1:7 arányú elegyével.
[q]d= -25,4’ (c= metanol)
Elemanalízis a C55H84N12O11S2 . CH3OH öszszegképlet alapján:
számított: C: 56,76, H: 7,48, N: 14,18%, talált: C: 56,64, H: 7,33, N: 13,86%
6. lépés:
Boc-CH3Tyr(Cl2Bzl)-Gly-Gly-OH előállítása
9,09 g Boc-CH3Tyr(Cl2Bzl)OH ([a]D- -49’ /c-1, etanol/, előállítását Cheung és munkatársai /Can. J. chem. 55, 906 (1977)/ eljárásával végeztük) és 2,53 g N-hidroxi-szukcinimid 150 ml tetrahidrofuránnal készült oldatát jégbe hűtjük, 4,12 g diciklohexü-karbodiimidet adunk hozzá, és a reakcióelegyet éjszakán át hűtőszekrényben keverjük. Az így képződött fehér, kristályos anyagot kiszűrjük, és a szűrletet 2,91 g H-Gly-Gly-OH-t és 38 ml, 1,848 g nátrium-hidrogén-karbonátot tartalmazó vizes oldatot adunk. Az elegyet szobahőmérsékleten 2 napon át keverjük, utána betöményítjük. A maradékhoz híg, vizes citromsavoldatot és etü-acetátot adunk, majd elválasztjuk. A szerves fázist vízzel mossuk, bekoncentráljuk, és az így kapott terméket szilikagélből készült oszlopon kromatografál juk. Az eluálást metanol és kloroform 1:30 arányú elegyével végezzük. Az így kapót terméket éter és n-hexán elegyével kezelve 9,23 g hozammal, szüárd termék alakjában kapjuk a 6. lépés cím szerinti vegyületét, olvadáspont: 70-80 ’C (bomlás közben).
VRK: Rf-értéke 0,79 (kifejlesztés metanol/ecet7
-7HU 203563Β sav/kloroform 4.1:12 arányú elegyével).
[a]D= -47° (c= 1, metanol).
Elemanalízis a C26H31N3O7CI2.I/2C2H5OC2H5 összegképlet alapján:
számított: C: 55,54, H: 5,99, N: 6,94%, talált: C:55,45,H:5,81,N:6,89%.
7. lépés:
Boc-CH3Tyr(Cl2Bzl)Gly- Gly-Phe-LeuArg(Tos)-CH3Arg(Tos)-D-Leu-NHC2H5 előállítása
682 mg Boc-CH3Tyr(Cl2Bzl)-Gly-Gly-OH és
195 mg N-hidroxi-benzotriazol 4 ml dimetü-formamiddal készült oldatához jéghütés közben 272 mg diciklohexil-karbodiimidet adunk, majd 2 órán át tartó keverés után 1,167 g CF3COOH.H-Phe-LeuArg(Tos)-CH3Arg(Tos)-D-Leu-NHC2H5 (amelyet Boc-Phe-Leu-Arg(Tos)-CH3Arg (Tos)-D-LeuNHC2H5 anizol jelenlétében végzett trifluor-ecetsavas kezelésével állítottunk elő), 0,132 ml N-metilmorfolin és 8 ml dimetil-formamid elegyét adjuk hozzá, és a reakcióelegyet éjszakán át hűtőszekrényben keverjük. Az így képződött csapadékot kiszűrjük, és a szűrletet betöményít jük. A maradékot szüikagélből készült oszlopon kromatografáljuk, az eluálásra metanol és kloroform 1:20 arányú elegyét használjuk. Az így kapott terméket metanol és éter keverékével kezelve 1,391 g hozammal szilárd alakban kapjuk a 7. lépés cím szerinti vegyületét, olvadáspont: 130-135 °C (bomlás közben).
VRK: Rf-értéke 0,64 (kifejlesztés metanol/kloroform 1:7 arányú elegyével).
[a]D= -35,3° (c= 1, metanol)
Elemanalízis a
C76H105N15O15S2CI2.CH3OH.H2O összegképlet alapján:
számított: C: 55,92, H: 6,77, N: 12,70%, talált: C: 56,06, H: 6,49, N: 12,52%.
8. lépés:
CH3 Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH3Arg-DLeu-NHC2Hs előállítása
220 mg 7. lépésben készült vegyületet 0,2 ml anizol jelenlétében 10 ml hidrogén-fluoridban oldunk, zárt, a hidrogén-fluoridnak ellenálló reakcióedényben -5 °C hőmérsékleten. Ezután az elegyet 1 órán át keverjük, majd a hidrogén-fluoridot a reakciórendszerből kidesztilláljuk. A maradékot éterrel mossuk, majd vízben oldjuk. Az oldatot Amberlit IRA-93 (ecetsav-típusú) gyantával kezeljük, és liofilizáljuk. így 120 mg nyers peptidet kapunk, amelyet magas nyomású folyadékkromatográfiával (Nucleosil 5 C 18,2 0 x 25 cm) tisztítunk, az eluálást 0,1% sósavat tartalmazó 81:91 arányú víz-acetonitril eleggyel végezzük, s a terméket liofilizálva 70 mg hozammal kapjuk a 8. lépés, azaz az 1. példa cím szerinti vegyületét (a végterméket).
VRK: Rf-értéke 0,70 (kifejlesztés butanol/ecetsav/piridin/víz 15:5:5:8 arányú elegyével).
[a]D= -21,8° (c- 0,4,0,01 n sósav). TÖmegszínképi jellemzője (FAB): 1036 (/M+HT)
Az aminosav-elemzés eredményei: Gly 1,87 (2);
Leu l,96(2);Phe 1,00(1); Arg 0,95(1). (A CH3Tyrnak és CH3Arg-nak megfelelő csúcsokat nem számítottuk ki.)
2. példa
Tyr- D-Cys-Gly-Phe-Cys-Arg-CH3Arg-D-LeuArg-NH2
1. lépés:
Boc-D-Leu-Arg(Tos)-NH2 előállítása
2,493 g Boc-D-Leu-OHÜ2O 10 ml dimetil-formamiddal készült, -20 °C-ra hűtött oldatához 1, Imi N-metil-morfolint és 0,96 ml etil-(klór-formiát)-ot adunk, 5 percen át állni hagyjuk, s utána 4,414 g CF3COOH.H-Arg(Tos)-NH2 és 1,65. ml N-metilmorfolin 20 ml dimetü-formamiddal készült oldatát adjuk hozzá, és az elegyet körülbelül -5 °C-on két órán át keverjük. A betöményítés után kapott maradékot etil-acetátban oldjuk, és előbb nátriumhidrogén-karbonát-oldattal, majd vízzel mossuk. A szerves fázis betöményítése után kapott maradékhoz étert adva 4,96 g hozammal szilárd termék alakjában kapjuk az 1. lépés cím szerinti vegyületét, olvadáspont: 110-120 °C (bomlás közben).
VRK: Rf-értéke 0,49 (kifejlesztés metanol/kloroform 1:7 arányú elegyével).
[a]D=+13,0° (c= 1, metanol)
Elemanalízis a C24H40N6O6S.I/3H3O összegképlet alapján:
számított: C: 52,73, H: 7,50, N: 15,37%, talált: C: 52,77, H: 7,60, N: 15,14%.
2. lépés:
Z-CH3Arg(Tos)-D-Leu-Arg(Tos)-NH2 előállítása
3,336 g Z-CH3Arg(Tos)-OH 30 ml tetrahidrofuránnal készült és -20 °C-ra hűtött oldatához 0,77 ml N-metil-morfolint és 0,67 ml etil-(klór-formiát)-ot adunk, 5 percig állni hagyjuk, majd 3,882 g CF3COOH.H-D-Leu-Arg(Tos)-NH2 anizol jelenlétében végzett trifluor-ecetsavas kezelésével kaptunk) és 1,17 ml trietil-amin 30 ml tetrahidro-furánnal készült oldatát adjuk hozzá, majd körülbelül -5 °C hőmérsékleten 2 órán át keverjük. A betöményítés után kapott termékhez metanol és víz elegyét adva 6,14 g hozammal kapjuk szilárd alakban a 2. lépés cím szerinti vegyületét, olvadáspont: 110-113 °C (bomlás közben).
VRK: Rf-értéke 0,44 (kifejlesztés metanol/kloroform 1:7 arányú elegyével).
[a]D= -3,4° (c= 1, metanol).
Elemanalízis a C41H48N10O9S.CH3OH összegképletalapján:
számított: C:54,18,H:6,71,N: 15,04%, talált: C: 54,12, H: 6,62, N: 14,85%.
3. lépés:
Boc- Arg(Tos)-CH3Arg(Tos)-D-Leu-Arg(Tos)NH2 előállítása
4,734 g CH3Arg(Tos)-D-Leu-Arg(Tos)-NH2 (amelyet Z-CH3Arg(Tos)-D-Leu-Arg(Tos)-NH2 csontszenes palládium-katalizátor jelenlétében végzett hidrogénezésével állítottunk elő), 2,918 g Boc-Arg(Tos)-OH és 1,1 g N-hidroxi-benzotriazol 17 ml dimetü-formamiddal készült oldatához jéghűtés közben 1,543 g diciklohexil-karbodiimidet adunk, majd az elegyet egy napon át hűtőszekrényben, s utána 1 napon át szobahőmérsékleten keverjük. A csapadékot kiszűrjük, és a szűrlet betöményítése után kapott maradékot szüikagélből készült oszlopon kromatografáljuk. Az eluálást metanol és
-8HU 203563Β kloroform 1:15 arányú elegyével végezzük, és az így kapott maradékhoz étert adunk. így 4,917 g hozammal, szilárd alakban kapjuk a 3. lépés cím szerinti vegyületét, olvadáspont: 131-136 °C (bomlás közben).
VRK: Rf-értéke 0,44 (kifejlesztés metanol/kloroform 1:7 arányú elegyével).
[a]D= -16,7’ (c-1, metanol)
Elemanalízis a C51H78N14O12S3 . H2O összegképletalapján:
számított: C:51,31,H:6,76,N: 16,43%, talált: C: 51,15, H: 6,54, N: 16,48%.
4. lépés:
Boc- Cys(CH3Bzl)-Arg(Tos)-CH3Arg(Tos)-DLeu-Arg(Tos)-NH2 előállítása
747 mg Boc-Cys(CH3Bzl)-OH és 4 ml dimetilformamid -20 °C-ra hűtött oldatához 0,254 ml Nmetil-morfolint és 0,221 ml etil-(klór-formiát)-ot adunk, az elegyet 5 percig állni hagyjuk, és utána 2,497 g CF3COOH.HArg(Tos)-CH3Arg(Tos)-DLeu-Arg(Tos)-NH2 (amelyet Boc-Arg(Tos)CH3Arg(Tos)-D-Leu-Arg(Tos)-NH2 anizol jelenlétében végzett trifluor-ecetsavas kezelésével kaptunk), 0,277 ml N-metil-morfolin és 6 ml dimetüformamid elegyét adjuk hozzá, és az elegyet -5 °C körüli hőmérsékleten 2 órán át keverjük. A betöményítés után kapott maradékhoz etil-acetátot adunk, és oldódás után előbb nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, majd vízzel mossuk. A szerves fázis betöményítése után kapott maradékhoz metanol és éter keverékét adva a 4. lépés termékét 2,548 g hozammal, szilárd alakban kapjuk, olvadáspont: 126-132 °C (bomlás közben).
VRK: Rf-értéke 0,51 (kifejlesztés metanol/kloroform 1:7 arányú elegyével).
[a]D= -20,6’ (c-1, metanol)
Elemanalízis a C02H91N15O13S4. CH3OH. H2O összegképlet alapján:
számított: C: 52,81, H: 6,82, N: 14,66%, talált: C: 52,78, H: 6,43, N: 14.29%.
5. lépés:
Boc- Phe-Cys(CH3Bzl)-Arg(Tos)-CH3Arg(Tos)D-Leu-Arg(Tos)-NH2 előállítása
467 mg Boc- Phe - OH dimetil - formamidos, 20 °C-ra hűtött oldatához 0,194 ml N-metil-morfolint és 0,168 ml etil-(klór-formiát)-ot adunk, az elegyet 5 percig állni hagyjuk, s utána 2,234 g CF3COOH.H- Phe-Cys(CH3Bzl)-Arg(Tos)-D-LeuArg(Tos)-NH2 (amelyet Boc-Phe-Cys(CH3Bzl)Arg(Tos)-CH3Arg(Tos)-D-Leu-Arg(Tos)-NH2 anizol jelenlétében végzett trifluor-ecetsavas kezelésével kaptunk) és 0,211 ml N-metil-morfolin 5 ml dimetil-formamiddal készült oldatát tesszük hozzá, és az elegyet -5 °C körüli hőmérsékleten 2 órán át keverjük. A betöményítés után kapott maradékot etüacetátban oldjuk, vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal és vízzel mossuk. A szerves fázis betöményítése után kapott maradékhoz metanol és éter keverékét adva 2,126 g hozammal, szilárd alakban kapjuk az 5. lépés cím szerinti vegyületét, olvadáspont: 124-130 ’C (bomlással).
VRK: Rf-értéke 0,56 (kifejlesztés metanol/kloroform 1:7 arányú elegyével).
[a]D= -18,9° (c= 1, metanol)
Elemanalízis a C71H100N16O14S4.5/2CH3OH összegképlet alapján:
számított: C: 54,83, H: 6,89, N: 13,91%, talált: C: 54,62, H: 6,34, N: 13,64%.
lépes*
Boc-D-Cys(CH3Bzl)-Gly-OC2H5 előállítása
3,233 g Boc-D-Cys(CH3Bzl)-OH 15 ml dimetilformamiddal készült oldatát -20 °C-ra hűtjük, hozzáadunk 1,1 ml N-metil-morfolint és 0,956 ml etil(klór-formiát)-ot, 5 percig keverjük, s utána hozzáadjuk 1,396 gHCl.H-Gly-OC2H5 és 1,1 ml N-metilmorfolin 20 ml dimetil-formamiddal készült oldatát. Az elegyet -5 ’C körüli hőmérsékleten 2 órán át keverjük. A betöményítés után kapott maradékot etil-acetátban oldjuk, vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, majd vízzel mossuk, és a szerves fázist betöményítjük. A maradékhoz n-hexánt adva 3,6 g hozammal kapjuk szilárd formában a 6. lépés cím szerinti vegyületét, olvadáspont: 80-82 ’C.
VRK: Rf-értéke 0,74 (kifejlesztés kloroform/etil-acetát 2:1 arányú elegyével).
[oí]d= +30,2° (c= 1, metanol).
Elemanalízis a C20H30N2O5S összegképlet alapján:
számított: C: 58,51, H: 7,37, N: 6,82%, talált: C: 58,35, H: 7,23, N: 6,69%.
7. lépés:
Boc-Tyr(Cl2Bzl)-D-Cys(CH3Bzl)-Gly-OC2H5 előállítása
2,068 g Boc-Tyr(Cl2Bzl)-OH és 20 ml tetrahidrofurán -20 ’C-ra hűtött oldatához 0,517 ml N-metilmorfolint és 0,45 ml etü-(klór-formiát)-ot adunk, az elegyet 5 percig állni hagyjuk, s utána 1,94 g CF3COOH.H-D-Cys(CH3Bzl)-Gly-OC2H5 (amelyet Boc-D-Cys(CH3Bzl)-GIy-OC2H5 anizol jelenlétében végzett trifluor-ecetsavas kezelésével állítottunk elő) és 1 ml trietil-amin 20 ml tetrahidrofuránnal készült oldatát adjuk hozzá, majd -5 ’C körüli hőmérsékleten 2 órán át keverjük. A betöményítés után kapott maradékhoz vizet adunk, az így kapott csapadékot szűrjük, és metanol és kloroform elegyében feloldjuk. A betöményítés után kapott maradékhoz étert adva szilárd alakban, 2,611 g hozammal jutunk a 7. lépés cím szerinti vegyületéhez, olvadáspont: 149-150 “C.
VRK: Rf-értéke 0,63 (kifejlesztés kloroform/etil-acetát2:l arányú elegyével).
[a]D= +17,0 (c= 1, dimetü-formamid)
Elemanalízis a C36H43N3O7SCI2 összegképlet alapján:
számított: C: 59,01, H: 5,91, N: 5,73%, talált: C: 58,94, H: 5,75, N: 5,62%.
9. lépés:
Boc-Tyr(Cl2Bzl)-D-Cys(CH3Bzl)-Gly-OH előállítása
2,345 g 7. példában készült vegyület és 30 ml tetrahidrofurán oldatához 3,2 ml n nátrium-hidroxid oldatot adunk, és az elegyet szobahőmérsékleten egy órán át keverjük, majd 3,2 ml n sósavoldatot adunk hozzá. Az elegyet betöményítjük, és a maradékhoz vizet adunk. így szilárd alakban 1,899 g hozammal kapjuk a 8. lépés cím szerinti vegyületét, olvadáspontja: 133-138 ’C (bomlás közben).
VRK: Rf-értéke 0,25 (kifejlesztés metanol/kloroform 1:7 arányú elegyével).
[a]D- +35,8’ (c= 1, metanol)
-9HU 203663Β
Elemanalízis a C34H39N3O7SCI2 összegképlet alapján:
számított: C: 57,95, H: 5,58, N: 5,96%, talált: C: 57,81, H: 5,33, N: 5,92%.
9. lépés:
Boc-Tyr(Cl2Bzl)-D-Cys(CH3Bzl)-Gly-Phe-Cys(CH3BZI)- ARg(Tos)-CH3Arg(Tos)-Dl-LeuArg(Tos)-NH2 előállítása
983 mg 8. lépésben készült vegyület és 226 mgNhidroxi-benzotriazol 5 ml dimetü-formamiddal készült oldatához jéghűtés közben 316 mg diciklohexil-karbodiimidet adunk, az elegyet két órán át keverjük s utána 1,94 g CF3COOH.H-PheCys(CH3Bzl)- Arg(Tos)-CH3Arg(Tos)-D-LeuArg(Tos)-NH2 (amelyet Boc-Phe-Cys(CH3Bzl)Arg(Tos)-CH3Arg(Tos)-D-Leu-Arg(Tos)-NH2 anizol jelenlétében végzett trifluor-ecetsavas kezelésével kaptunk), 0,167 ml N-metil-morfolin és 10 ml dimetil-formamid elegyét adjuk hozzá, és az így kapott oldatot éjszakán át hűtőszekrényben keverjük. Az így kapott csapadékot kiszűrjük, és a szűrletet szilikagélből készült oszlopon kromatografáljuk. Az eluálást metanol és kloroform 1:20 arányú elegyével végezzük, s az így nyert terméket metanol és éter elegyével kezeljük. így szilárd alakban, 2,0 g hozammal jutunk a 9. lépés cím szerinti vegyületéhez, olvadáspont: 123-130 °C (bomlás közben).
VRK Rf-értéke 0,63 (kifejlesztés metanol/kloroform 1:7 arányú elegyével).
[a]D= -17,5° (c= 1, dimetil-formamid)
Elemanalízis a C100H129N19O18S5CI2 C2H5OC2H5.3/2CH3ON összegképlet alapján: számított: C: 56,60, H: 6,52, N: 11,89%, talált: C:56,38, H: 6,18, N: 11,72%.
10. lépés:
Tyr- D-Cys-Gly-Phe-Cys-Arg-CH3Arg-D-LeuArg-NH2 előállítása
515 mg 9. lépésben készült terméket 20 ml hidrogén - fluoridban oldunk 2 ml anizol jelenlétében 5 °C hőmérsékleten, zárt, hidrogén-fluoriddal szemben ellenálló reakcióedényben, az oldatot két órán át keverjük, majd a hidrogén-fluoridot a reakciórendszerből kidesztilláljuk. A maradékot éterrel mossuk, s utána vízben feloldjuk. Az oldatot Amberlit IRA-93 (ecetsav-típusú) ioncserélő gyantával kezeljük, s utána liofilizáljuk. Az így beszárított 320 mg terméket 1,3 liter vízben feloldjuk. Az oldatot Amberlit IRA-93 (ecetsav-típusú) ioncserélő gyantával kezeljük, s utána liofilizáljuk. Az így be18 szárított 320 mg terméket 1,3 liter vízben oldjuk, és az oldat pH-értékét vizes ammónium-hidroxid oldattal 8-ra állítjuk. Az elegybe 2 napon át keverés közben levegőt vezetünk, majd az elegy pH-értékét
6-ra állítjuk, és liofilizáljuk. Az így kapott nyers pepiidet magas nyomású folyadékkromatográf iával tisztítjuk (Nucleosil 5C18,20x25 cm; az eluálást 0,05% sósavat tartalmazó 88:12 arányú víz-acetonitril eleggyel végezzük). Liofilizálás után a 10. lé10 pés cím szerinti termékét, azaz a 2. példa cím szerinti vegyületét 140 mg hozammal kapjuk.
VRK: Rf-értéke 0,56 (kifejlesztés butanol/ecetsav/piridin/víz 15:5:5:8 arányú elegyével).
[a]D= -29° (c= 0,4,0,01 n sósav)
Tömegszínképi jellemzője (FAB): 1183 (/Μ+ΗΛ)
Az aminosav-elemzés eredményei: Gly 1,02(1); Cys 1,83 (2); Leu 1,04(1); Tyr 0,80(1); Phe 1,00(1); Arg 2,06(2), (A CH3Arg-nak megfelelő csúcsot nem számítottuk ki.)
3-29. példák
Az 1. táblázatban bemutatott vegyületeket ugyanazzal a folyadék fázisú eljárással állítottuk elő, mint az 1. és 2. példában leírt vegyületeket. E kísérleteink során az 1 -3 (Tys-Gly-Gly), 4-7 (PheLeu-Arg-Arg), 4-8 (Phe-Leu-Arg-Arg-He) és 4-9 (Phe-Leu-Arg-Arg-Ile-Alu) helyzetekben módosított dinorfin-származékokat állítottunk elő a lépésenként! eljárással, minden egyes peptid esetében A
C-terminális oldalról kiindulóan. Ezt követően az 1 -3 helyzetben módosított származékokat a 4-7, illetve 4-8, illetve 4-9 helyzetben módosított származékokkal kondenzáltuk a diciklohexil-karbodiimid + hidroxi-benzotriazol eljárással vagy a vegyes anhidrid módszerrel. Az összes védőcsoportokat eltávolítottuk hidrogén-fluoriddal, és az így kapott magas nyomású folyadékkromatográfia segítségével tisztítottuk. A 24. példa esetében valamennyi vé40 dőcsoportot hidrogén-fluoriddal eltávolítottuk, s utána a vegyületet levegővel oxidáltuk, majd magas nyomású folyadékkromatográfia segítségével tisztítottuk. A megfelelő, védett peptidek szintézise során következett reakciósorokat az 1 -5. ábrák mu45 tátják be.
A 6. táblázatban foglaltuk össze az^y előállított peptidek optikai forgatóképességi [a] d értékeit, a VRK vizsgálat során kapott Rf értéket, valamint az aminosav-elemzés értékeit.
5. táblázat
A vegyületet A vegyület leíró példa sorszáma
3. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-NH2
4. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-NHCH2CH(CH3)CH2CH3
5. CKfeTyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-D-Leu-OH
6. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-D-Leu-OC2H5
7. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-D-Leu-NH2
8. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-D-Leu-NHC2H5
9. CH3Ty-rGly-Gly-Phe-Leu-Arg-D-Leu-NH(CH3)5CH3
10. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe(p-NO2)Leu-Arg-Arg-D-Leu-NH2
11. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-homoArg-D-Leu-NH2
-10HU 203563Β
5. táblázat folytatása
A vegyületet A vegyület leíró példa sorszáma
12. CH3Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-D-Leu-NH2
13. CH3Tyr-Gly-Gly-CH3Phe-Leu-Arg-Arg-D-Leu-NH2
14. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-CH3Leu-Arg-Arg-D-Leu-NH2
15. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-D-Leu-NH2
16. Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-D-Leu-NH2
17. Tyr-Sar-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-D-Leu-NH2
18. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-CH3Arg-Arg-D-Leu-NH2
19. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH3Arg-D-Leu-NH2
20. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-terc-Leu-Arg-CH3Arg-D-Leu-NC2H5
21. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe(p-NO2)-Leu-Arg-CH3-Arg-D-Leu-NHC2H5
22. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Lys-CH3Arg-D-Leu-NH2
23. Tyr-D-Ser-Gly-Phe-Ser-Arg-CH3Arg-D-Leu-NHC2H5
24. Tyr-D-Cys-GIy-Phe-Cys-Arg-CH3Arg-D-Leu-NHC2H5
25. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-D-Leu-Arg-NH2
26. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-D-Glu-Arg-NH2
27. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH3Arg-D-Leu-Arg-NHC2Hs
28. CH3Tyr-Gly-Gly-Pbe(p-NO2)-Leu-Arg-CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Met(O9-Arg-GH3Arg-D-Leu-Arg-NH2 tercLeu: (CH3)3CCH(NH2)COOH homoArg:NH2C(-NH)NHCH2CH2CH2CH2CH(NH2)COOH
Phe(p-NO2):NO2- CH2CH(NH2)COOH
Sár: CH3NHCH2COOH (A 11. és 18. példákban Z-homoArg(Tos)OH-t, illetve Z-CH3Arg(Tos)OH-t alkalmaztunk védett aminosavként.)
6. táblázat
A vegyületet leíró példa sorszáma [a] D VRK: Rf-értéke Aminosav-elemzés
3. -6.7° 0,53 Gly 1,97; Leu 1,03; Phe 1,00; Arg 2,30;
4. -12,1° 0,62 Gly 1,96; Leu 1,00; Phe 1,00; Arg 2,01;
5. -1,8° 0,65 Gly 2,01; Leu 2,00; Phe 1,00; Arg 1,99;
6. +0,8° 0,63 Gly 1,94; Leu 1,96; Phe 1,00; Arg 1,97;
7. -7,5° 0,62 Gly 1,95; Leu 1,96; Phe 1,00; Arg 1,97;
8. +5,0° 0,64 Gly 1,91; Leu 2,14; Phe 1,00; Arg 2,18;
9. +1,0° 0,68 Gly 1,92; Leu 1,95; Phe 1,00; Arg 1,95;
10. +3,4° 0,59 Gly 1,97; Leu 2,00; Arg 2,01;
11. -4,2° 0,61 Gly 1,95; Leu 1,96; Phe 1,00; Arg 1,01;
12. +139° 0,68 Gly 1,01; Leu 1,96; Phe 1,00; Arg 1,98; Alá 1,00;
13. -17,2° 0,68 Gly 1,92; Leu 2,00; Arg 2,03;
14. -11,5° 0,61 Gly 1,99; Leu 1,02; Phe 1,00; Arg 2,03;
15. -12,0’ 0,67 Gly 1,90; Leu 1,93; Phe 1,00; Arg 1,94;
16. +15,0° 0,69 Gly 1,07; Leu 1,97; Phe 1,00; Arg 1,99; Alá 1,03; Tyr 0,95;
17. -3,8° 0,64 Gly 1,00; Leu l,98;Phe 1,00; Arg 2,00; Tyr 0,89;
18. -19,7° 0,59 Gly 1,93; Leu 1,91; Phe 1,00; Arg 0,98;
19. -23,4° 0,62 Gly 1,92; Leu 1,95; Phe 1,00; Arg 0,99;
20. -19,1° 0,70 Gly 2,06; Leu 1,01; Phe 1,00; Arg 0,99;
21. -16,6° 0,69 Gly 1,99; Leu 2,00; Arg 0,99;
22. -23,3’ 0,62 Gly 1,97; Leu 1,99; Phe 1,00;
23. -4,8° 0,65 Gly 1,01; Leu 1,00; Phe 1,00; Arg 1,01; Ser 1,72; Tyr 1,00;
24. -29,1’ 0,70 Gly l,01;Leu 1,05; Phe 1,00; Arg 1,02; Tyr 0,82; Cys 1,89;
25. -7,8’ 0,64 Gly 2,03; Leru 2,08; Phe 1,00; Arg 3,22;
26. -6,1’ 0,43 Gly 1,93; Leu 0,98; Phe 1,00; Arg 2,95; Glu 0,98;
27. -31,8° 0,62 Gly 1,94; Leu 1,90; Phe 1,00; Arg 1,91;
28. -27,2° 0,52 Gly 1,96; Leu 2,00; Arg 2,03;
29. -23,0° 0,46 Gly 2,00; Leu 1,00; Phe 1,00; Arg 1,97;
-11HU 203563Β
Az aminosav-elemzés során csak a Gly, Leu, Phe Arg, Alá, Tyr, Lys. Ser, Cys és Glu arányait számítottuk ki. Az [af d érték meghatározása: c= 0,4,
0,01η sósav.
A VRK-n az Rf érték bu tanol/ece tsav/piridin/víz 5
15:5:5:8 arányú elegyével való kifejezéssel határoztuk meg.
30. példa
CH3Tyr- Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH3Arg-D- 10 Ala-OH előálítása
1. lépés:
Z-CH3Arg(Tos)-D-Ala-OBut előállítása
3,336 g Z-CH3Arg(Tos)OH és 20 ml tetrahidrofurán -30 °C-ra hűtött oldatához 0,77 ml N-metil- 15 morfolint és 0,669 ml etil-(klór-fonniát)-ot adunk, az elegyet 5 percig állni hagyjuk, s utána 1,272 g HCl-H-D-Ala-OBut és 1,16 ml N-metil-morfolint 20 ml tetrahidrofuránnal készült oldatának hozzáadása után az elegyet -5 °C körüli hőmérsékleten 2 20 órán át keverjük. A betöményítés után kapott maradékot etil-acetátban oldjuk, s előbb vizes nátriumhidrogén-karbonát oldattal, majd vízzel mossuk. A szerves fázist szárazra párolva üvegszerű termék formájában, 44,16 g hozammal kapjuk az 1. lépés 25 cím szerinti termékét.
VRK: Rf-értéke 0,69 (kifejlesztés inetanoVkloroform 1:7 arányú elegyével) [a]D -15,5° (c= 1, metanol)
Elemanalízis a C29H41N5O7S összegképlet alap- 30 ján:
számított: C: 57,70, H: 6,85, N: 11,60%, talált: C: 57,54, H: 6,59, N: 11,31 %.
2. lépés:
Z-ARg(Tos)-CH3ARg(Tos)-D-Ala-OBut előállí- 35 tása
2,87 g CH3Arg(Tos)-D-Ala-OBut (amelyet az előbbi 1. lépésben készült termék csontszenes palládium-katalizátor jelenlétében végzett katalitikus hidrogénezésével állítottunk elő), 3,392 g Z-Arg(Tos)- 40 OH és 1,188 g N-hidroxi-benzotriazol 10 ml dimetil-formamiddal készült oldatához jéghűtés közben 1,662 g diciklohexil-karbodiimidet adunk, és a reakcióelegyet hűtőszekrényben 2 napon át keverjük.
Az így képződött csapadékot kiszűrjük, a szűrletet 45 betöményítjük, és a maradékot szilikagél-oszlopon kromatográfiával tisztítjuk. Az eluálást metanol és kloroform 1:20 arányú elegyével végezve üvegszerű termék alakjában, 2,04 g hozammal kapjuk a 2. lépés cím szerinti termékét. 50
VRK: Rf-értéke 0,57 (kifejlesztés metanol és kloroform 1:7 arányú elegyével).
[a]D -31,6° (c= 1, metanol).
Elemanalízis a C42H59N9O10S2.1/2 H2O összegképlet alapján: 55 számított: C: 54,65, H: 6,62, N: 13,66%, talált: C: 54,64, H: 6,48, N: 13,72%.
3. lépés:
Z-Leu-Arg(Tos)-CH2Arg(Tos)-Ala-OBut előállítása 60
0,629 g Z-Leu-OH 15 ml dimetil-formamiddal készült oldatát -20 °C-ra hűtjük, és ehhez az oldathoz 0,261 ml N-metil-morfolint és 0,227 ml etil(klór-formiát)-ot adunk. Az oldatot 5 percig állni hagyjuk, s utána 1,76 g HCl.H-Arg(Tos)- 65
CHsArg(Tos)-D-Ala-OBut (amelyet a 2. lépésben készült termék csontszenes palládium-katalizátor jelenlétében végzett hidrogénezésével állítottunk elő), 0,356 ml N-metil-morfolin és 15 ml formamid elegyét adjuk hozzá, majd az elegyet -5 °C körüli hőmérsékleten keverjük. A betöményítés után kapott maradékot etil-acetátban oldjuk, és előbb vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, majd vízzel mossuk. A szerves oldatot szárazra párolva a 3. lépés cím szerinti termékét 2,11 g hozammal, üvegszerű alakban kapjuk.
VRK: Rf-értéke 0,57 (kifejlesztés metanol/kloroform 1:7 arányú elegyével) [a]D -36,2° (c= 1, metanol)
Elemanalízis a C48H70N10O11S2 . 1/2CH3COOC2H5 összegképlet alapján: számított: C: 56,06, H: 6,96, N: 13,07%, talált: C: 56,02, H: 6,85, N: 13,08%.
4. lépés:
Z-Phe -Leu-Arg(Tos)-CH3Arg(Tos)-D-AlaOBut előállítása
595 mg Z-Phe-OH 15 ml dimetil-formamiddal készült oldatát -20 °C-a hűtjük, 0,219 ml N-metilmorfolint és 0,190 ml etil-(klór-formiát)-ot adunk hozzá, 5 percen át állni hagyjuk, s utána hozzáadjuk 1,68 g HCl.H-Leu-Arg(Tos)-CH3Arg(Tos)-D-AlaOBut (amelyet a 3. lépés cím szerinti termékének csontszenes palládium-katalizátor jelenlétében végzett hidrogénezésével kaptunk), 0,299 ml N-metil-morfolin és 15 ml dimetil-formamid elegyét, és a reakcióelegye -5 °C körüli hőmérsékleten 2 órán át keverjük. A betöményítés után kapott maradékot etil-acetátban oldjuk, vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal és vízzel mossuk, majd az oldószert ledesztilláljuk és a maradékhoz étert adunk Az éter dekantálása után kapott maradékot szárazra párolva üvegszerű termék alakjában 1,87 g hozammal kapjuk a 4. lépés cím szerinti vegyületét.
VRK: Rf-értéke 0,61 (kifejlesztés metanol/kloroform 1:7 arányú elegyével) [a]D -34,7° (c= 1, metanol)
Elemanalízis a C57H79N11O12S2 . C2H5OC2H5 összegképlet alapján:
számított: C:58,68,H:7,19,N: 12,34!, talált: C: 58,66, H: 6,83, N: 12,42%.
5. lépés:
Boc- CH3Tyr(Cl2Bzl)-Gly-Gly-Phe-LeuArg(Tos)-CH3Arg(Tos)-D-Ala-OBut előállítása
969 mg Boc-CH3Tyr(Cl2Bzl)-Gly-Gly-OH és 12 ml dimetil-formamid -20 °C-ra hűtött oldatához 0,188 ml N-metil-morfolint és 0,163 ml etil-(klórformiát)-ot adunk. Az oldatot 5 percig állni hagyjuk, és utána hozzáadjuk 1,67 g HC1.H-Phe-LeuArg(Tos)-CH3Arg(Tos)-A-Ala-OBut (amelyet a 4. lépésben készült vegyület csontszenes palládiumkatalizátor jelenlétében végzett hidrogénezésével kaptunk), és 0,256 ml N-metil-morfolin 15 ml dimetil-fonnamiddal készült oldatát, majd a reakcióelegyet -5 °C körüli hőmérsékleten 2 órán át keverjük. A betöményítés után kapott maradékot etil-acetátban oldjuk, az oldatot előbb vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, majd vízzel mossuk, a szerves fázisból az oldószert vákuumban ledesztilláljuk, és a lepárlási maradékot metanol és éter elegyével kezeljük. így szilárd alakban 2,196 g hozammal kap-12HU 203563Β juk az 5. lépés cím szerinti vegyületét, olvadáspont: 130-135 ’C (bomlás közben).
VRK: R-értéke 0,61 (kifejlesztés metanol/kloroform 1:7 arányú elegyével).
[ot]D - 40,7° (c= 1, metanol)
Elemanalízis a C75H102N14O16S2CI2.2CH3OH összegképlet alapján:
számított: C: 55,89, H: 6,70, N: 11,85%, talált: C: 55,95, H: 6,42, N: 11,78%.
6. lépés:
CEfeTyr- Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CHsArg-DAla-OH előállítása
200 mg 5. lépésben készült vegyület és 10 ml hidrogén-fluorid oldatát -5 ’C hőmérsékleten 0,2 ml anizol jelenlétében, zárt, hidrogén-fluoridnak ellenálló edényben 1 órán át keverünk, majd a hidrogén-fluoridot a reakciórendszerből kidesztilláljuk. A maradékot éterrel mossuk, majd vízben oldjuk, és az oldatot Amberlit IRA-93 (ecetsav-típusú) ioncserélő gyantával való kezeié sután liofilizáljuk. Az így kapott 120 mg nyers pepiidet magas nyomású folyadékkromatográfiával tisztítjuk (Nucleosil 5C 18,2 0 x 25 cm, az eluálást 0,05% sósavat tartalmazó 92:8 arányú víz-acetonitril eleggyel végezzük). Liofilizálás után a 6. lépés cím szerinti termékét 60 mg hozammal kapjuk.
VRK: Rf-értéke 0,54 (kifejlesztés butanol/ecetsav/piridin/víz 15:5:5:8 arányú elegyével) [ajD -35,1 ’ (c- 0,4,0,01 n sósav)
Tömegszínképi jellemzője (FAB): 967 (/M+H/+)
Az aminosav-elemzés eredményei: Gly 1,95(2); Leu 1,00(1); Phe 1,00(1); Arg 0,99(1); Alá 1,01(1). (A CH3Tyr-nak és CHsArg-nak megfelelő csúcsokat nem számítottuk ki.)
31. példa
CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH3Arg-CH3A la-OH előállítása
1. lépés:
Z-CH3Arg(Tos)-CH3Ala-OBut előállítása
4,508 g Z-CH3Arg(Tos)OH, 1,683 g HCl.CH3Ala-Obut, 1,533 g N-hidroxi-benzotriazol és 1,04 ml N-metil-morfolin 10 ml dimetil-formamiddal készült oldatához jéghűtés közben 2,144 g diciklohexil-karbodiimidet adunk, s az oldatot éjszakán át hűtőszekrényben keverjük. Az így képződött csapadékot kiszűrjük, a szűrletet betöményítjük, a maradékot etil-acetátban oldjuk, és előbb vizes citromsavoldattal, utána vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, végül vízzel mossuk. A szerves oldatot szárazra párolva üvegszerű termék alakjában, 4,24 g hozammal kapjuk az 1. lépés cím szerinti vegyületét.
VRK: Rf-értéke 0,61 (kifejlesztés metanol/kloroform 1:7 arányú elegyével) [a]D -57,8° (c=l, metanol)
Elemanalízis a C30H43N5O7S összegképlet alapján:
számított: C: 58,33, H: 7,02, N: 11,33%, talált: C: 58,11, H: 6,88, N: 11,41 %.
2. lépés:
Z-Arg(Tos)-CH3Arg(Tos)-CH3Ala-OBut előállítása
2,90 g CH3Arg(Tos)-CH3Ala-Obut (amelyet az
1. lépésben készült vegyület csontszenes palládium24 katalizátor jelenlétében végzett hidrogénezésével állítottunk elő), 3,329 g Z-Arg(Tos)OH és 1,166gNhidroxi-benzotriazol 10 ml dimetil-formamiddal készült, jéggel hűtött oldatához 1,359 g diciklohexil-karbodiimidet adunk, az oldatot 2 napon át hűtőszekrényben keverjük, majd a csapadékot kiszűrjük, és a szűrletet betöményít jük. A maradékot szilikagél-oszlopon kromatografálva tisztítjuk, az eluáláshoz metanol és kloroform 1:15 arányú elegyét használjuk. így 2,1 g hozammal, üvegszerű termék alakjában kapjuk a 2. lépés cím szerinti vegyületét.
VRK: Rf-értéke 0,46 (kifejlesztés metanol/kloroform 1:7 arányú elegyével) [a]D -57, Γ (c= 1, metanol)
Elemanalízis a C43H61N9O10S2.3/2 H2O összegképlet alapján:
számított: C: 54,07, H: 6,75, N: 13,20%, talált: C: 54,10, H: 6,35, N: 13,18%.
3. lépés:
Z-Leu-Arg(Tos)-CH3Arg(Tos)-CH3Ala-OBut előállítása
247 g Z-Leu-OH 10 ml dimetil-formamiddal készült, -20 °C-ra hűtött oldatához 0,102 ml N-metilmorfolin és 0,089 ml etil-(klór-formiát)-ot adunk, az elegyet 5 percig állni hagyjuk, s utána hozzáadjuk 700 mg HCl.H-Arg(Tos)-CH3Ala-OBut (amelyet a
2. lépésben készült vegyület csontszenes palládiumkatalizátor jelenlétében végzett hidrogénezésével állítottunk elő), 0,139 ml N-metil-morfolin és 10 ml dimetil-formamid oldatát, majd -5 ’C körüli hőmérsékleten 2 órán át keverjük. A betöményítés után kapott maradékot etil-acetátban oldjuk, előbb vizes nátrium-hidogén-karbonát oldattal, majd vízzel mossuk, utána a szerves fázisból az oldószert ledesztilláljuk, és a maradékhoz étert adunk. A dekantálás után kapott maradékot szárazra pároljuk, és így üvegszerű termék alakjában, 0,86ghozammal jutunk a 3. lépés cím szerinti vegyületéhez.
VRK: Rf-értéke 0,48 (kifejlesztés metanol/kloroform 1:7 arányú elegyével).
[ajD -60,3 (c= 1, metanol)
Elemanalízis a C49H72N10O11S2 . C2H5OC2H5 összegképlet alapján:
számított: C: 57,07, H: 7,41, N: 12,55%, talált: C: 56,83, H: 7,0”, N: 12,64%.
4. lépés:
Z- Phe-Leu-Arg(Tos)-CH3Arg(Tos)-CH3AlaOBut előállítása
224 mg Z-Phe-OH 7 ml dimetü-formamiddal készült, -20 °C-ra hűtött oldatához 0,082 ml N-metilmorfolint és 0,071 ml etil-(klór-formiát)-ot adunk, az oldatot 5 percig állni hagyjuk, s utána hozzáadjuk 640 mg HCl.H-Leu-Arg(Tos)-CH3Arg(Tos)CH3Ala-OBut (amelyet a 3. lépésben készült vegyület csontszenes palládium-katalizátor jelenlétében végzett hidrogénezésével állítottunk elő) és 0,112 ml N-metil-morfolin 7 ml dimetil-formamiddal készült oldatát, s utána az elegyet -5 ’C körüli hőmérsékleten 2 órán át keverjük. A betöményítés után kapott maradékot etil-acetátban oldjuk, vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, majd vízzel mossuk, a szerves fázisból az oldószert ledesztilláljuk, és a maradékhoz étert adunk. A dekantálás után kapott maradékot szárazra párolva 770 mg hozammal, üvegszerű termpék formájában kapjuk a 4.
-13HU 203563Β
26 lépés cím szerinti vegyületét.
VRK: Rf-értéke 0,54 (kifejlesztés metanol/kloroform 1:7 arányú elegyével).
[a]D -59,6° (c— 1, metanol)
Elemanalízis a C58H81N11O12S2 . C2H5OC2H5 összegképlet alapján:
számított: C: 58,98, H: 7,26, N: 12,20%, talált: C: 58,68, H: 6,91, N: 12,24%.
5. lépés:
Boc- CH3Tyr(Cl2Bzl)-Gly-Gly-Phe-Leu- 10 Arg(Tos)-CH3Arg(Tos)-CH3Ala-OBut előállítása
350 mg Boc-CH3Tyr(Cl2Bzl)-Gly-Gly-OH 5 ml dimetil-formamiddal készült, -20 °C-ra hűtött oldatához 0,068 ml N-metil-morfolint és 0,059 ml etil-(klór-formiát)-ot adunk, az oldatot 5 percig áll- 15 ni hagyjuk, utána hozzáadjuk 610 mg HC1.H-PheLeu-Arg(Tos)-CH3Arg(Tos)-CH3Ala-OBut (amelyet a 4. lépésben készült vegyület csontszenes palládium-katalizátor jelenlétében végzett hidrogénezésével állítottunk elő), és 0,092 ml N-metü-morfolin 20 6 ml dimetil-formamiddal készült oldatát, s utána 5 °C körüli hőmérsékleten 2 órán át keverjük. A betöményítés után kapott maradékot etil-acetátban oldjuk, vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, majd vízzel mossuk, utána a szerves fázist betörné- 25 nyítjük, és a maradékot metanol és éter elegyével kezeljük. így 760 mg hozammal, szilárd alakban kapjuk az 5. lépés cím szerinti vegyületét, olvadáspont: 125-133 °C (bomlás közben).
VRK: Rf-értéke 0,55 (kifejlesztés metanol/klo- 30 roform 1:7 arányú elegyével).
[ol]d -56,4° (c= 1, metanol)
Elemanalízis a C76H104N14O16S2CI2 I/2C2H5OC2H5 összegképlet alapján: számított: C: 57,06, H: 6,69, N: 11,94%, 35 talált: C: 56,71, H: 6,46, N: 11,49%.
6. lépés:
CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH3Arg-CH3A la-OH előállítása
210 mg 5. lépésben készült vegyületet 10 ml hid- 40 rogén-fluoridban oldva 0,2 ml anizol jelenlétében 5 °C-ra hűtünk, zárt rendszerben, hidrogén-fluorid hatásának ellenálló edényben. Az oldatot 1 órán át keverjük, utána a reakciórendszerből a hidrogénfluoridot kidesztilláljuk, a maradékot éterrel mos- 45 suk és vízben oldjuk. Az oldatot Amberlit IRA-93 (ecetsav-típusú ioncserélő gyantával kezeljük, majd liofilizáljuk. így 130 mg nyers peptidet kapunk, amelyet magas nyomású folyadékkroma tográf iával 5 tisztítunk (Nucleosíl 5 C18,2 0 x 25 cm; az eluálást 0,05% sósavat tartalmazó, 91:9 arányú víz-acetonitril eleggyel végezzük). Liofilizálás után a 6. lépés cím szerinti termékét, azaz a 31. példa cím szerinti termékét 50 mg hozammal kapjuk.
VRK: Rf-értéke 0,54 (kifejlesztés butanol/ecetsav/piridin/víz 15:5:5:8 arányú elegyével).
[a]D -64,7° (c= 0,4,0,01 n sósav)
Tömegszínképi jellemzője (FAB): 981 (/M+H/ )
Az aminosav-elemzés eredményei: Gly 1,92(2); Leu 1,01(1); Phe 1,00(1); Arg 0,986(1). (ACH3Tyrnak, CH3Arg-nakés CEUAla-nak megfelelő csúcsokat nem számítottuk ki.)
32-41. példák
A 7. táblázatban bemutatott vegyületeket ugyanazzal a folyadék fázisú eljárással állítottuk elő, mint a 30. és 31. példákban leírt vegyületeket. E kísérletek során 1-3 helyzetben (Tyr-Gly-Gly), 4-8 helyzetben (Phe-Leu-Arg-Arg-He), 4-9 helyzetben (Phe-Leu-Arg-Arg-Ile-Arg) és 4-10 helyzetben (Phe-Leu-Arg-Arg-Ile-Arg-Pro) módosított dinorfin-származékokat állítottunk elő a lépésenkénti eljárás alkalmazásával, minden egyes peptid esetében a C-terminális oldaláról kiindulóan. Ezt követően az 1 -3 helyzetben módosított származékokat a 4-8, illetve 4-9, illetve 4-10 helyzetben módosított származékokkal kondenzáltuk diciklohexil-karbodiimid és hidroxi-benzotriazol alkalmazásával vagy a vegyes anhidrid módszerrel. Az összes védőcsoportokat eltávolítottuk hidrogén-fluoriddal, és az így kapott terméket magas nyomású folyadékkromatográfia segítségével tisztítottuk fordított vivőfázis alkalmazásával. A megfelelő, védett peptidek szintézise során követett reakciósorokat a 6-8. ábrák mutatják be.
A 8. táblázatban foglaltuk össze az így ^állított peptidek optikai forgatóképességének [a] D-értékeit, a VRK-vizsgálat során kapott Rf-értékeket, valamint az aminosav-elemzés értékeit:
7. táblázat
A példa A vegyület sorszáma
32. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH3Arg-Ile-OH
33. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH3Arg-Asp-OH
34. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH3Arg-D-Leu-OH
35. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH3Arg-D-Glu-OH
36. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH3Arg-CH3Be-OH
37. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH3Arg-Sar-OH
38. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH3Arg-p-Ala-OH
39. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH3Arg-D-Leu-Asp-OH
40. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH3Arg-D-Leu-Phe-OH
41. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH3Arg-D-Leu-Arg-D-Glu-OH
-14HU 203563Β
8. táblázat
A példa sorszáma f l20^ [a] D VRK: Rf-érték Az aminosav-elemzés eredményei
32. -10,6° 0,63 Gly 1,96; Leu 1,05; Phe 1,00; Arg 1,01, Ile 0,99;
33. -35,4° 0,48 Gly 1,96; Leu 0,99; Phe 1,00; Arg 0,99; Asp 1,01;
34. -32,4° 0,68 Gly 1,95; Leu 1,95; Phe 1,00; Arg 0,99;
35. -30,8° 0,51 Gly 1,93; Leu 1,00; Phe 1,00; Arg 1,00; Glu 1,01;
36. -67,1° 0,63 Gly 1,95; Leu 0,97; Phe 1,00; Arg 0,96;
37. -23,9° 0,51 Gly 1,97; Leu 1,01; Phe 1,00; Arg 1,00;
38. -29,2° 0,56 Gly 1,96; Leu 1,01; Phe 1,00; Arg 1,01;
39. -28,6° 0,58 Gly 1,96; Leu 1,98; Phe 1,00; Arg 1,00; Asp 1,06;
40. -25,0° 0,70 Gly 1,93; Le 2,01; Phe 2,00; Arg 0,96;
41. -30,8 0,51 Gly 1,96; Leu 1,97; Phe 1,00; Arg 1,99; Glu 1,01;
Az aminosav-elemzés során csak a Gly, Leu, Phe,
Arg, Ile, ^p és Glu arányait számítottuk ki. 20
Az [a] d érték meghatározása: c- 0,4,0,01 n sósav.
A VRK-n az Rf-értékeket butanol/ecetsav/piridin/víz 15:5:5:8 arányú elegyével való kifejlesztéssel határoztuk meg. 25
A példákban előállított néhány vegyületet a fentiekben ismert hatástani vizsgálatnak vetettük alá.
9. táblázat 30
A vizsgálandó Farokcsipesz-
vegyület leíró -módszer
példasor- száma ED50, mg/kg i.v. s,c. 35
30. 0,7 1,9
31. 0,5 1,2
34. 2,1 0,9
36. 0,2 0,4 40
38. 1,7 0,6
Dinorfin (1-12) 25,0
45
10. táblázat
A vizsgálandó A nyúl ondóelvezetőjén 50
vegyület leíró végzett vizsgálat
példa sorszáma ICV5onanomól
30. 17,8
31. 24,5 55
36. 11,2
Dinorfin A (1-17) 17,4
11. táblázat
A vizsgálandó Farok- Legkisebb
vegyületet csipesz”- halálos
leíró példa -módszer: dózis
sorszáma ED50 mg/kg mg/kg
30. 1,9 100
31. 1,2 100
36. 0,4 100
SZABADALMI IGÉNYPONTOK

Claims (3)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Eljárás az (I) általános képletű polipeptidek és azok farmakológiai szempontból alkalmas sóinak az előállítására — ahol az (I) általános képletben
    R1 és R2 jelentése azonosan hidrogénatom, vagy különböző és jelentésük hidrogénatom és 1 -4 szénatomos alkücsoport;
    A jelentése Gly, D-Ala, Sár, Továbbá D-Cys, ha C jelentése Cys, vagy D-Ser, ha C jelentése Ser;
    B jelentése Phe, Phe(pNO2), CIfePhe;
    C jelentése Leu, CHaLeu, terc-Leu, Met(O);
    D jelentése Arg, CH3Arg, továbbá homoArg, ha E-F jelentése D-Leu-NH2í
    E jelentése Arg, CEfeArg;
    F jelentése -NH2, -NH-(l-6 szénatomos)-alkilcsoport, Ile-OH, CH3lle-OH, Asp-OH, β-Ala-OH, Sar-OH, D-Glu-OH, D-Leu-OH, D-Leu-NH2, DLeu-NH-(l-6 szénatomos)-alkilcsoport, D-LeuArg-NH2, D-Leu-Arg-NH-(l-4 szénatomos)-alkilcsoport, D-Leu-Asp-OH, D-Leu-Phe-OH, D-GluArg-NH2, D-Leu-Arg-D-Glu-OH, CH3Ala-OH, azzal a megkötéssel, hogy az (I) általános képletű polipeptidben A, B, C, D, E és F egyidejűleg nem jelenthet egy (Π) általános képletű L-aminosavból származó csoportot, amelyben R egy aminosav (e) képletű csoport nélküli részét jelenti, azzal jellemezve, hogy az (I) általános képletnek megfelelő kívánt esetben védett aminosavakat kondenzáljuk, adott esetben a Cys-csoportokat tartalmazó vegyületeket oxidáljuk, majd a kapott védett (I) általános képletű vegyületről a védőcsoportokat lehasítjuk és kívánt esetben az így kapott (I) általános képletű vegyületet
    -15HU 203563Β ismert módon farmakológiai szempontból alkalmas sójává alakítjuk.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás
    CH3Tyr- Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH3Arg-DLeu-NHC2H5,
    Ty-rD- Cys-Gly-Phe-Cys-Arg-CH3Arg-D-LeuArg-NH2,
    CH3Tyr- Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH3Arg-DLeu-NH2,
    Tyr-D- Cys-Gly-Phe-Cys-Arg-CIfaArg-D-LeuNHC2H5.
    CH3Tyr- Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH3Arg-DLeu-Arg-NHC2H5,
    CH3Tyr- Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH3ArgCH3Ala-OH,
    CH3Tyr- Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH3Arg30
    CH3lle-OH vagy
    Tyr- D-Cys-Gly-Phe-Cys-Arg-CH3Arg-CH3DeOH összetételű (I) általános képletű peptid vagy azok farmakológiai szempontból alkalmas sóinak az
    5 előállítására, azzal jellemezze, hogy megfelelően szubsztituált kiindulási vegyületeket alkalmazunk.
  3. 3. Eljárás fájdalomcsillapító hatású gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezze, hogy valamilyen, az 1. igénypont szerint előállított (I) ál10 talános képletű Dplipeptidet — ahol az (I) általános képletben R1, R2, A, B, C, D, E és F jelentése az 1. igénypontban megadott — vagy annak valamilyen farmakológiai szempontból alkalmas sóját a gyógyszergyártásban szokásos hordozó- és vivőanyagok15 kai összekeverjük, és gyógyszerkészítménnyé alakítjuk.
HU854270A 1984-11-09 1985-11-06 Process for producing opioid-polypeptides and pharmaceutical compositions containing them HU203563B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP59236076A JPH0680079B2 (ja) 1984-11-09 1984-11-09 ポリペプチド

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT40145A HUT40145A (en) 1986-11-28
HU203563B true HU203563B (en) 1991-08-28

Family

ID=16995360

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU854270A HU203563B (en) 1984-11-09 1985-11-06 Process for producing opioid-polypeptides and pharmaceutical compositions containing them

Country Status (21)

Country Link
US (1) US4707468A (hu)
EP (2) EP0614913A3 (hu)
JP (1) JPH0680079B2 (hu)
KR (1) KR880000765B1 (hu)
CN (1) CN1029684C (hu)
AT (1) ATE135712T1 (hu)
AU (1) AU588837B2 (hu)
CA (1) CA1267997A (hu)
DE (1) DE3588095T2 (hu)
DK (1) DK171300B1 (hu)
ES (1) ES8800272A1 (hu)
FI (1) FI92935C (hu)
GR (1) GR852689B (hu)
HU (1) HU203563B (hu)
IL (1) IL76924A (hu)
NO (1) NO169347C (hu)
NZ (1) NZ214122A (hu)
PH (1) PH23847A (hu)
PT (1) PT81441B (hu)
SU (1) SU1433415A3 (hu)
ZA (1) ZA858456B (hu)

Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2673376A1 (fr) * 1991-03-01 1992-09-04 Lefesvre Andre Composition pharmaceutique pour le traitement des tumeurs de kaposi.
US5817628A (en) * 1992-12-02 1998-10-06 The Rockefeller University Dynorphin a suppression of natural killer cell activity
SE9401596D0 (sv) * 1994-05-06 1994-05-06 Astra Ab New compounds
JP3385147B2 (ja) * 1996-01-31 2003-03-10 ユニ・チャーム株式会社 男性用尿とり袋
AU3499997A (en) * 1996-06-24 1998-01-14 Rockefeller University, The Method of using ligands of the kappa opioid receptor
IL138214A0 (en) * 1998-03-09 2001-10-31 Zealand Pharmaceuticals As Pharmacolgically active peptide conjugates having a reduced tendency towards enzymatic hydrolysis
US6232287B1 (en) * 1998-03-13 2001-05-15 The Burnham Institute Molecules that home to various selected organs or tissues
IL137820A (en) * 2000-08-10 2009-06-15 S I S Shulov Inst For Science Pharmaceutical composition for topical administration comprising an analgesic peptide
ES2281439T3 (es) * 2000-08-25 2007-10-01 Research Corporation Technologies, Inc Uso de anticonvulsionantes a base de aminoacidos para tratar el dolor.
EP1243262B1 (en) * 2001-03-20 2006-05-31 Schwarz Pharma Ag Novel use of a peptide class of compound for treating non-neuropathic inflammatory pain
DE60100055T2 (de) * 2001-03-21 2003-07-24 Sanol Arznei Schwarz Gmbh Neue Verwendung einer Klasse von Peptidverbindungen zur Behandlung von Allodynie oder andere Arten von chronischen oder Phantomschmerzen
US7622446B2 (en) * 2001-04-18 2009-11-24 The Open University Polypeptides, derivatives and uses thereof
US7491702B2 (en) * 2001-04-18 2009-02-17 The Open University Polypeptides related to amyloid precursor protein, pharmaceutical compositions thereof, and methods of treatment using the same
NZ550482A (en) 2004-04-16 2010-08-27 Sanol Arznei Schwarz Gmbh Use of peptidic compounds for the prophylaxis and treatment of chronic headache
WO2006021412A2 (en) * 2004-08-27 2006-03-02 Schwarz Pharma Ag Use of peptide compounds for treating bone cancer pain, chemotherapy-and nucleoside-induced pain
US20070048372A1 (en) * 2005-08-18 2007-03-01 Srz Properties, Inc. Method for treating non-inflammatory osteoarthritic pain
EP1754476A1 (en) * 2005-08-18 2007-02-21 Schwarz Pharma Ag Lacosamide (SPM 927) for treating myalgia, e.g. fibromyalgia
US20070043120A1 (en) * 2005-08-18 2007-02-22 Bettina Beyreuther Therapeutic combination for painful medical conditions
GB2432586B (en) * 2005-11-25 2010-01-13 Univ Open Treatment of neurodegenerative disorders
EP2462990B2 (en) * 2006-06-15 2018-04-18 UCB Pharma GmbH Pharmaceutical composition comprising lacosamide and levetiracetam with synergistic anticonvulsant effect
EP2205265A1 (en) * 2007-09-11 2010-07-14 Mondobiotech Laboratories AG Use of the peptide thymosin beta 4 alone or in combination with cecropin a as a therapeutic agent
CA2699012A1 (en) * 2007-09-11 2009-03-19 Mondobiotech Laboratories Ag Use of a peptide as a therapeutic agent
WO2018230751A1 (ko) * 2017-06-14 2018-12-20 주식회사 바이오솔루션 물질 p를 포함하는 주름 개선 또는 항염증 화장료 조성물
US10278957B2 (en) 2017-09-11 2019-05-07 Protagonist Therapeutics, Inc. Opioid agonist peptides and uses thereof
EP4175970A1 (en) * 2020-07-01 2023-05-10 Preveceutical Medical Inc. Peptides and uses thereof
RU2760133C1 (ru) * 2021-04-22 2021-11-22 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Научный центр биомедицинских технологий Федерального медико-биологического агентства". Амиды гептапептида для лечения HMGB1-зависимых заболеваний

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2703109A1 (de) * 1976-01-26 1977-08-04 Wellcome Found Biologisch wirksame amide
US4254106A (en) * 1976-01-26 1981-03-03 Burroughs Wellcome Co. Biologically active amides
US4123523A (en) * 1976-06-21 1978-10-31 Imperial Chemical Industries Limited Analgesic and sedative polypeptides
US4371463A (en) * 1977-02-17 1983-02-01 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Enzyme-resistant opiate pentapeptides
US4081434A (en) * 1977-03-11 1978-03-28 Hoffmann-La Roche Inc. Novel analogs of β-endorphin
US4127533A (en) * 1977-06-16 1978-11-28 Coy David Howard Novel octapeptides, intermediates therefor, and compositions and methods employing said octapeptides
US4139504A (en) * 1977-06-16 1979-02-13 Coy David Howard Novel nonapeptides, intermediates therefor, and compositions and methods employing said nonapeptides
GB1604850A (en) * 1977-11-24 1981-12-16 Wellcome Found Biologically active peptides
US4148786A (en) * 1978-06-26 1979-04-10 American Home Products Corporation Analgesic polypeptide
US4178284A (en) * 1978-12-11 1979-12-11 American Home Products Corporation Octapeptides
DE2936099A1 (de) * 1979-09-06 1981-04-02 Victor Dipl.- Chem. 8000 München Brantl Pharmakologisch aktive peptide
EP0044451B1 (en) * 1980-07-17 1984-04-18 Sandoz Ag Novel pentapeptides, processes for their production, pharmaceutical compositions comprising said pentapeptides and their use
JPS57134451A (en) * 1981-02-13 1982-08-19 Suntory Ltd Peptide opioide
DE3274798D1 (en) * 1981-10-05 1987-02-05 Nicholas P Plotnikoff Process for using endorphins as antitumour agents
US4462941A (en) * 1982-06-10 1984-07-31 The Regents Of The University Of California Dynorphin amide analogs
JPS59141547A (ja) * 1983-02-01 1984-08-14 Eisai Co Ltd 鎮痛作用を有する新規ペプタイドおよび製法
US4518711A (en) * 1983-05-16 1985-05-21 Gibson-Stephens Institute Conformationally constrained cyclic enkephalin analogs with delta receptor specificity

Also Published As

Publication number Publication date
ZA858456B (en) 1987-07-29
CA1267997A (en) 1990-04-17
FI854227A0 (fi) 1985-10-28
DK513385D0 (da) 1985-11-07
NO854435L (no) 1986-05-12
GR852689B (hu) 1986-02-21
SU1433415A3 (ru) 1988-10-23
CN85109722A (zh) 1986-10-08
ATE135712T1 (de) 1996-04-15
JPH0680079B2 (ja) 1994-10-12
PT81441B (pt) 1987-11-11
KR880000765B1 (en) 1988-05-06
FI92935C (fi) 1995-01-25
ES8800272A1 (es) 1987-10-16
HUT40145A (en) 1986-11-28
CN1029684C (zh) 1995-09-06
DK171300B1 (da) 1996-08-26
PT81441A (en) 1985-12-01
JPS61115097A (ja) 1986-06-02
DK513385A (da) 1986-05-10
ES548667A0 (es) 1987-10-16
IL76924A (en) 1990-07-12
NO169347B (no) 1992-03-02
FI92935B (fi) 1994-10-14
KR860004081A (ko) 1986-06-16
EP0614913A3 (en) 1997-06-04
NZ214122A (en) 1988-08-30
EP0181001B1 (en) 1996-03-20
PH23847A (en) 1989-11-23
FI854227L (fi) 1986-05-10
NO169347C (no) 1992-06-10
AU4938985A (en) 1986-05-15
AU588837B2 (en) 1989-09-28
DE3588095D1 (de) 1996-04-25
DE3588095T2 (de) 1996-09-19
EP0181001A2 (en) 1986-05-14
US4707468A (en) 1987-11-17
EP0181001A3 (en) 1989-04-19
IL76924A0 (en) 1986-04-29
EP0614913A2 (en) 1994-09-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU203563B (en) Process for producing opioid-polypeptides and pharmaceutical compositions containing them
JP4249806B2 (ja) ５位および６位で修飾されているＧｎＲＨ拮抗物質
US3853837A (en) Novel nonapeptide amide analogs of luteinizing hormone releasing factor
US6046167A (en) Peptide YY analogs
JP4191259B2 (ja) ＧｎＲＨ拮抗物質
HU186749B (en) Process for preparing new, biologically active peptides
EP0109418A1 (en) Gonadoliberin derivatives, process for the preparation and pharmaceutical and veterinary compositions thereof
US4490364A (en) CCK Agonists II
JPS62116595A (ja) 新規化合物、その製法及びそれを含む医薬組成物
JPS61191698A (ja) 新規な環状ヘキサペプチドｌｈｒｈ拮抗剤
WO1990000561A1 (en) Novel peptides
EP0333071A2 (en) Polypeptides, methods for their preparation, pharmaceutical compositions comprising them and use
WO1988003537A1 (en) Novel peptides
HU181843B (en) Process for producing acth derivatives of psichopharmacological activity
US4636490A (en) Novel peptidic derivatives inhibiting gastric secretion, process for preparing them and drugs containing them
KR890002774B1 (ko) 헨테트라콘타펩티드 crf 및 그 동족체와 관련된 펩티드류의 제조방법
EP0101929B1 (en) Polypeptide-diesters, their production and use
US4758552A (en) Gonadoliberin derivatives containing an aromatic aminocarboxylic acid in the 6-position, pharmaceutical and veterinary compositions containing them and process for preparing same
NO137151B (no) Analogifremgangsm}te for fremstilling av terapeutisk aktive ortiotropin-peptider
JPH051798B2 (hu)
CA1248089A (en) Analgesic peptide and process for the preparation thereof
US3759891A (en) (1-beta-alanine,15-ornithine)-corticotropin peptides
US4587233A (en) Use of Arg-Phe-amide derivatives
JP2553506B2 (ja) ポリペプチド

Legal Events

Date Code Title Description
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee