PT81441B - Processo para a prepafracao de novos polipeptideos, utilizaveis como analgesicos - Google Patents

Description

Descrição do objecto do invento que

EISAI COMPANY,LTD., japonesa,industrial com sede em 6-10 Koishikawa 4-Chome, Bunkyo-Ku,Tõ quio, Japão, pretende obter em Portugal, para:"PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE NOVOS POLIPEPTÍDIOS UTILIZÁVEIS COMO ANALGÉSICOS"

O presente invento refere-se a um processo para a prepara ção de novos polipêptideos que têm efeitos medicinais excelen tes. Mais particularmente, o presente invento diz respeito a polipêptideos que têm a seguinte fórmula geral:

> L-Tyr-A-Gly-B-C-D-E-F R²

1 2

na qual R e R podem ser iguais ou diferentes e cada um representa um ãtomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior ou alcenilo inferior, A representa um D-aminoãcido, Gli ou Sar, desde que quando o D-aminoãcido ê D-Cis, esteja ligado com L-Cis ou D-Cis na posição 5 por intermédio de uma ligação S-S para efectuar o fecho do anel intramolecular,B repre senta L-Phe ou D-Phe em que o anel benzénico pode ser substi tuído ou um seu derivado -N-alquilo, C representa um L-ami noãcido D-Cis ou um seu derivado -N-alquilo, D e E representam um aminoácido L ou D-bãsico cada um ou um seu deriva3

do -N-alquilo, F representa um grupo da fórmula; -OR (na 3

qual R é H ou um grupo alquilo inferior), um grupo da fórmu la:

-N

4 5

(na qual R e R sao iguais ou diferentes e cada um deles representa H ou um grupo alquilo inferior), um grupo da fórmula: -G-OR (na qual G ê um L- ou D-aminoãcido ou Gli ou um

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seu derivado o(-N-alquilo e R° representa H ou um grupo alqui lo inferior), um grupo da fórmula:

-G-N

\⁸

- - 7 8

(na qual G é conforme atrás definido e R e R podem ser

iguais ou diferentes e cada um deles representa H ou um gru _ 9

po alquilo inferior), um grupo da formula: -G-L-Arg-OR ou G-D-Arg-OR (nos quais G ê conforme atrás definido e R representa H ou um grupo alquilo inferior ou um grupo da fórmu la:

-G-L-Arg-N

R'

10

7

y*¹¹

ou

-G-Arg-N

10

(nas quais G ê conforme atrás definido e e podem ser iguais ou diferentes e cada um deles representa H ou um grupo alquilo inferior),um grupo da fórmula -G-H-OR 12 na qual G é conforme atrás definido, H ê um grupo aminoácido neutro ou um grupo aminoácido acídico e R é hidrogénio ou um gru po alquilo inferior; ou um grupo da fórmula: -G-Arg-I-OR 13 na qual I é um grupo d-aminoãcido e R13 é hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, desde que todos os aminoácidos que constituem o polipéptido da fórmula atrás mencionada não representem simultaneamente um L-aminoácido da fórmula geral:

R

ι

NH₂ -ch-cooh

(na qual R representa um grupo correspondente a uma fórmula estrutural de um aminoácido destituído de um grupo da fórmula:

-CH-COOH ,

I

nh₂

ou seus sais farmacologicamente aceitáveis, assim como um processo para a sua produção e medicamentos que os contêm.

Os aminoácidos que constituem os peptidos aqui descritos incluem D- e L-aminoãcidos. Salvo indicação em contrário, os

-2-

aminoácidos são L-aminoãcidos. Os símbolos aqui usados têm o mesmo significado que na prática geral deste domínio da química dos pêptidos.Designadamente, são os seguintes:

Tir:	tirosina
Gli:	glicina
Sar:	sarcosina
Cis:	cisteina
Phe:	fenilalanina
Arg:	arginina
Leu:	leucina
Ile:	isoleucina
Nle:	norleucina
Met:	metionina
Met (.0) :	metionina sulfóxido
Ser:	serina
Val:	valina
Homo-Arg:	homoarginina
Orn:	ornitina
Glu:	ácido glutâmico
Tri:	triptofanó
Asp:	ácido aspártico
Ala:	alanina
Pro:	prolina
Gin:	glutamina
Aib:	ácido 2-aminoisobutírico
Phe(p-Cl):	p-clorofenilalanina
Phe(p-Br):	p-bromo-fenilalanina
Phe(p-NO2).	p-nitro-fenilalanina
Phe(p-I) :	p-iodo-fenilalanina
Phe(p-P):	p-fluoro-fenilalanina
Phe(p-CH3) :	p-metil-fenilalanina
Phe(p-CH30):	p-metoxi-fenilalanina
Phe·: (p-CF3) :	p-trifluoro-metil-fenilalanina
BOC:	tert-butoxi-carbonilo
Z:	benziloxi-carbonilo

-356740

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CJ^Bzl: 2,6-dicloro-benzilo

CH-Bzl: 4-metil-benzilo

3

Tos: p-tolueno-sulfonilo,e

Bzl: benzilo

Os resultados obtidos em estudos acerca do mecanismo dos efeitos analgésicos da morfina indicam gue o organismo vivo contém substâncias analogas à morfina ditas endógenas gue regulam diversas sensações vitais como a dor e a acção mental. Depois de diversos estudos, isolaram-se a encefalina e a endorfina na forma de péptidos opióides e determinaram-se as suas estruturas. Seguidamente, fizeram-se novos estudos in tensivos nesta técnica, e descobriram-se diversos novos pépti dos opióides como B-neoendorfina, B-casomorfina, quiotorfàna, dermorfina e dinorfina.

Entre estes compostos, a dinorfina ê um péptido opiõide com a seguinte fórmula estrutural, descoberta por alguns dos inventores do presente invento:

H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-Ile-ArgPro-Lys-Leu-Lys-Trp-Asp-Asn-Gln-OH

A dinorfina é um péptido opiõide que tem efeitos específicos num receptor K, e, portanto, a sua utilização como analgésico não tendo efeitos secundários é de esperar tolerân cia ou segurança.

No entanto, a dinorfina tem um defeito, que consiste em não ter efeito analgésico por injecção intravenosa, visto que é instável no sangue.

Por outro lado, procura-se um péptido muito activo que tenha uma cadeia mais curta, porque a dinorfina ê um péptido que tem uma cadeia relativamente comprida.

Os inventores fizeram estudos aprofundados de péptidos tendo uma cadeia mais curta que a da dinorfina e capazes de manifestar o seu efeito analgésico tanto por injecção intra venosa como por injecção subcutânea, e acabaram por descobrir que o objectivo desejado pode ser atingido com a utilização de novos péptidos que têm a fórmula (I) seguinte, compreenden

-4

ζ

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do 7 a 9 aminoácidos e representados pela fórmula (I) adian te.

0 presente invento proporciona polipéptidos com a seguin te fórmula geral:

> L-Tyr-A-Gly-B-C-D-E-F

(I)

1 2

na qual R e R podem ser iguais ou diferentes e cada um deles representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo in ferior ou alcenilo inferior, A representa um D-aminoãcido, Gli ou Sar, desde que, quando o D-aminoãcido é D-Cis, esteja ligado com L-Cis ou D-Cis na posição 5- por meio de uma liga ção S-S para efectuar o fecho do anel intramolecular, B represente L-Phe ou D-Phe no qual o anel benzenico pode ser substituído ou um seu derivado ot-N-alquilo, C representa um L-aminoácido, D-Cis ou um seu derivado o^-N-alquilo, D e E representam cada um deles um L- ou D-aminoãcido básico ou um seu derivado CK-alquilo, F representa um grupo da fórmula -OR (no qual R ê H ou um grupo alquilo inferior), um grupo da fórmula:

4 5

'na qual R e R sao iguais ou diferentes e cada um representa H ou um grupo alquilo inferior), um grupo da fórmula:

-G-OR^ (na qual G é um L- ou D-aminoácido ou Gil ou um seu

g

derivado O<-N-alquilo e R representa H ou um grupo alquilo inferior), um grupo da fórmula:

iguais ou diferentes e cada um representa H ou um grupo alqui

-5_ 9

lo inferior), um grupo da formula: -G-L-Arg-OR ou

9 9

G-D-Arg-OR (na gual G e conforme atras definido e R repre-

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senta H ou um grupo alquilo inferior ou um grupo da fórmula:

10

e R·^ podem ser

iguais ou diferentes e cada um representa H ou um grupo alqui lo inferior), um grupo da fórmula: -G-H-OR12 na qual G é conforme atrás definido? H é um grupo aminoácido neutro ou um

grupo aminoácido acídico e R12 é hidrogénio ou um grupo alqui

lo inferior; ou um grupo da fórmula: -G-Arg-I-OR13 na qual I é um grupo d-aminoãcido e R13 ê hidrogénio ou um grupo alquilo inferior? desde que quando todos os aminoácidos que constji tuem o polipéptido da fórmula atrás mencionada não representem simultaneamente um L-amihoãcido da fórmula geral:

nh₂-ch-cooh

(na qual R representa um grupo correspondente a uma fórmula estrutural de um aminoácido destituído de um grupo da fórmula:

-CH-COOH

NH

ou sais farmacologicamente aceitáveis dos mesmos.

Entre os exemplos dos sais farmacologicamente aceitáveis da presente descrição encontram-se sais ácidos inorgânicos?por exemplo cloridrato? sulfato? hromidrato e iodidrato? assim co mo sais ácidos orgânicos? por exemplo maleato, fumarato? succinato? acetato? malonato? citrato e benzoato.

Um objecto do presente invento ê proporcionar um proces so para a preparação de novos péptidos utilizáveis como medicamentos .

Ainda outro objecto do presente invento ê proporcionar um processo de preparar analgésicos que contêm os referidos medicamentos.

A expressão "grupos alquilo inferior", na definição atrás mencionada de R^ e R^ diz respeito a grupos alquilo de cadeia linear? ramificada? cíclica ou de anéis que têm 1 a 6

-6ζ

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átomos de carbono, por exemplo grupos metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, 1-metil-propilo,tert-butilo, ciclo-propil-metilo, n-pentilo, 1-etil-propilo, isoamilo e n-hexilo. A expressão "grupos alquilo inferior" na defi niçao atrãs mencionada de R e R diz respeito aos que corres^ pondem aos grupos alquilo atrãs mencionados mas têm uma dupla ligação nalguma posição. O termo "alquilo" nos derivados

-N-alquilo ’ da definição dos aminoácidos tem o mesmo significa do que o dos grupos alquilo inferior atrãs mencionados.

A estrutura do composto (I) do presente invento é carac terizada pelo facto de os polipéptidos nos quais todos os ami noácidos que os constituem serem L-aminoãcIdos da formula geral: R

I

H₂N-CH-COOH

(na qual R representa um grupo correspondente a uma formula estrutural de um aminoácido destituído de um grupo da fórmula:

-CH-COOH)

nh₂

estarem dela excluídos, designadamente, pelo facto de um dos aminoácidos constituintes, pelo menos, ser um °< -N-aIquilami no ácido ou um D-aminoãcido.

Os compostos de acordo com o presente Invento, em que pelo menos um dos aminoácidos constituintes, ê um oÇ-N-alquilaminoãcido ou um D-aminoãcido, estão isentos dos graves inconvenientes da dinorfina atrãs mencionada e dos seus derivados, que não podem manifestar efeitos analgésicos, por exemplo por meio de injecção intravenosa, porque são instáveis no sangue. Os compostos de acordo com o presente invento,que têm uma grande estabilidade in vivo e são praticamente utili zãveis como analgésicos, são, assim, muito valiosos.

Os D-aminoãcidos na definição de A dos compostos (I) de acordo com o presente invento não têm uma limitação particular. Os seus exemplos preferidos incluem D-Met, D-Ala,D-Ser, D-Cis e D-Thr.

-7-

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Os substituintes em "L-Phe e D-Phe nos quais o anel ben zenico é substituído" na definição de B são de preferência um grupo nitro, átomos de halogéneo como cloro, bromo, iodo e flúor e trifluoro-metilo, alquilo inferior e alcoxi inferior.

Os L-aminoácidos na definição de C não têm uma limitaçac particular. Os seus exemplos preferidos incluem L-Leu, L-Ile, L-Nle, L-tert-Leu, L-Met, L-met(O), L-Ser, L-Cis e L-Val.

Os exemplos preferidos dos L- e D-aminoãcidos básicos ns definição de D e E incluem L- e D-Arg, L- e D-Lis e D-homo-Arg e L- e D-Orn. Além disso, os exemplos preferidos destes aminoá eidos na definição de E incluem também derivados °<-N-alquilo destes aminoácidos básicos.

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Qualquer aminoácido pode constituir um grupo alfa-aminoã eido de G na fórmula. Inclui de preferência Gli, Ala, Val,Leu, Ile, Ser, Thr, Cis, Met, Asp, Glu, Asn, Gin, Pro, Lis, Orn, Arg, His, Phe, Tir, Trp, tert.-Leu, ácido 2-amino-isobutírico e alfa-metil-Leu. 0 grupo aminoácido para G pode estar na for ma de isómero d- ou 1- quando contém um átomo de carbono assi_ métrico.Mais preferivelmente é L-Ile, L-Leu, L-Ala, L-Val, L-Asp, L-Pro, L-tert.-Leu, D-Ala, D-Val, D-Leu, D-Glu, D-Pro, ácido 2-amino-isobutírico e °<-metil-Leu.

Qualquer grupo aminoácido neutro e qualquer grupo aminoã eido acídico são utilizados para H na fórmula, incluindo a parte D- e L- quando têm um átomo de carbono assimétrico. Pre ferível ê Gli, Sar, L-Ala,D-Ala, L-Phe, D-Phe, L-Asp e D-Asp.

Qualquer grupo aminoácido é utilizado para I na fórmula. Preferível ê D-Pro, D-Ala e D-Glu.

Para facilitar a compreensão do presente invento, vão in dicar-se adiante exemplos de compostos típicos, exemplos que de modo nenhum limitam o presente invento:

-956740

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° CH^Tyr-G£y-G£y-Phe-Leu-Arg-Arg-NH₂

° Tyr-D-Met-G£y-Phe(p-C£)-Leu-Orn-D-Arg-D

-AJla-NECH^CH-CH2 2 3

’ CH^Tyr-GJly-GJly-Phe-Leu-Arg-CH^Arg-D-LeuArg-NHCK₂CH₃

o CHj Tyr-D-A^a-G^y- Phe-Tyr-Arg-Arg-D-Leu^NE2

CH

o ⁵ >Tyr-G^y-G^y-Phe(p-CE,)-Met-Arg-LysAsp-Arg - NECE₂ CHj

o Tyr-D-AjJ-a-G^y-Phe-Leu-Arg-Arg-D-Leu- NE₂ o CE_; Ty r - G^y-C-^y-Phe-Leu-Arg - Ar g-D-G^u.-ArgNE ₂

o CE₂ = CE-CE₂ Tyr-D-Thr-G^y-?he(p-CF₃)-Va^Arg- Orn-GA-y- OCE₂ ( CE₂ ) ₂ CE₃

o CE- (CE₂ ) _uCE₂Tyr-G^y-G^y-Phe-N^e-ArghozeA.rg-Sar- 0C( CE₃ ) - ‘

o CHj Tyr -G^y-G^y-Phe-Met(O)- Ar g -'CE -Arg -D-Leu Arg-NH₂

o Tyr-D-Cys-G^y-?he-D-Cys-Arg-CE-Arg-D-Leunech₂ ce₃

o Tyr-Sar-G^.y-Phe-Leu-Arg-Arg-D-Leu-NH₂

^>CE₂ Tyr-G^y-G^y-Phe(p-CE₃ O)-l^e-Arg·

-10Ζ

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ο CH- Tyr-G^y-G^y-Phe-Leu-Arg-Arg-L-Leush(oh₂),ch,

O CE₃CEjTzr-D-Arg-G^y-?lie(p-Sr)-K^e-CH₃ArgCHj Arg-Arg-KH₂

o C Ξ ₅ T y r - C-A^; - C-J^y - e - ΐ e r t - L e u - A r g - C Η ₅ A r g D-Leu-NHCH.CH.

o Tyr-L“Tyr-G^y-?he-C-^u-I)-Arg-Arg-Asn-NH₂ o CE₅ ?yr-C-j?zy-G^y-Phe -CHjLeu.-Arg-Arg-L-LeuNH₂

O Tyr-D-Ser-C-^y-Phe-Ser-Ars-CHjArg-D-LeuNHCHgCHj

O CH₂ = CH-CH₂ Tyr-L-Asp-G^y-Phe (?-I) -A^aArg-D-Arg-Trp-0CH₂ CH3

CH_; ⁰ > Tyr-G^y-G^y-?he(x,-C^)-?he-AT-g-Dce₃ce₂

CE.CE,

Ly_s-Ser-N<

o CE 3 Tyr-G^y-G^y-Phe-Le u-Arg-Arg-3?-LeuArg-NE₂

o CE3 Tyr-G^y-G^y-L - Phe - Le u.-Arg-Ar g-D-LeuNH.

-11-

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CH

CH

3 -D-Lys

>CH·Tyr-D-Lys-G^y-Phs-?rp-D-Lys-ArgΛ

5

OCH₂(CS₂)_uCH5

o CHg = CH?yr-C*^y-C-^y-Phe(-D-NOo )-?hr-D-4rgch₃

D-Arg-Pr O-E<

ch₃

o CH₃Tyr-C-^y-C-^y-Phe-Leu-Arg-Arg-D-Leu-OH o CH₃Tyr-C-^y-G^y-Phe(p-NO₂)-Leu-Arg-CH₃ArgD-Leu-Arg-NHCH₂CH₃

'-i

o Tyr-D-Cys-G^y-Phe-Cys-Arg-CH₅Arg-D-Leunece₂ce₃

o Tyr-D-G^u-G^y-Plie (p-C^) -Asp-Arg-CE- OrnCK₃I^e -D-Arg-NHCH₂ CH₂ CHj

o CE₃ CE₂ Tyr-G^y-G^y-Phe-Leu.-Arg-Arg-D-?h.eArg-NE₂

o CE ₃Tyr -G^y-c-^y-Phe-Leu-Arg- CH jArg-D-A^-aOE

o CE₃ Tyr-G^y-G^y-?he(p-Br )-N^e - Arg-Arg-EisArg-NE₂

I j

o Tyr-D-Cys-C-^y-Plie-Cys-Arg-D-Arg-Lys-DArg-NE₂

o CEjTyr-G^y-G^y-Phe-Leu-Arg-CEj. ~g-OCE₂CH₃

-12Ζ

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Ο CE, - CE = CETyr-C-^y-G^y-Fhe(p-NO₂ ) -Met-ArgArg-Phe-Arg-NHCE₃

O. CHj Tyr-D-.-.- a-G^y-CE₃?he-Met(o) -Arg-CHjArg -L£e-NE₂

o CE₃ Tyr -C-^-y-C-^y- CE₅ Phe - Leu.-Arg-Arg-D-Leu.-⁰- 2

o Tyr-D-A^£-C-^y-Phe-CE₅Met-Arg-Arg-Leu-Argnece₂ce₃

O ^c > Tyr-C-^y-C-/y-Phe-Leu-Arg-Argce₂= ce-ce₂ L-C-^a-Arg-NE₂

o CEj Tyr-G jJy-G^y-Phe-Leu-Arg-CE. Ar g-D-Leu0Ξ

o CE₅ Tyr-G^y-G^y-Phe-Met-Lys-CH.Lys-Met-NE₂ o CE jTyr-G^y-G^y-Phe-Leu-Arg-Arg-D-Thr-Argne₂

o Tyr-D-S er-C-^y-Phe (p-P) - Leu-Arg-Arg-D-ΑΓ:..NECE_,

o CHj Tyr -G^-y-G^y-Phe -Leu-Arg-CEj Arg-C-^a-NH₂ o CEjTyr-D-A^a-G^y-Phe-Leu-Arg-Arg-D-Leu-NEg o Tyr-D-S er-C-^-y-Phe -Pr o-D-Ora-Arg-CE -A^-aD-Arg-NE₂

-13-

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o Tyr-D-AAa-G^y-C ₂Ε ₅Phe (p-F)-Met-Arg-ArgD-Trp-NE₂

o CEiTyr-G^y-G^y-Phe-Leu-CEiArg-CE₃Arg-DD J

Lys-NH₂

o CE ₃ Tyr-G^y-C-^y-?he-Leu-Arg-Arg-D-LeuNECEnCE,

C- Í

o Tyr-D-líe t-C-y-y-Phe (p-NO ₂ ) -Leu-D-Arg-ArgD-?rO-Arg-0CE₂CE₃

o Tyr-D-S sr-Gj^y-Phe-I^e-Arg-D-Arg-Leu.CE

NECH₂ CE<

CS

o — CE₂ Tyr-C-^y-G^y-Phe-Va^-Lys-CE₃Lys G/u -D-Ar g-NE ₂

o CE₃Tyr-G^y-G^y-Phe(p-NO₂)-Leu-Arg-ArgD-Leu-NE.

CH,

CH.

> CE-CE₂ Tyr-G^y-G^y-Phe (p-F)-N/e-ArgArg-D-Arg-NECH <

ce₂ ce₃

CE,

o CE₃ Tyr-D-Pro-Gjyy-Phe-tert-Leu.- Om- CEj OrnMet-Arg-NHg

o Tyr-D-Trp-G^y-Phe(p-NO- )Met-Arg-C_?E-ArgA

A^a-Arg-NECE₃

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o CE ₃ Tyr-G^.y-G^y-Phe (p-N0_? )-Leu-Arg-CE-ArgD-Leu-NECE₂ CEj

° Tyr-D-Ei s -G_£y- Phe -Me ΐ (0) -Lys-Arg-D-EisArg-NE₂

o CEj Tyr-D-Leu-G^y-Phe-Leu-Arg-Arg-D-Serne₂

I-i

o CEj Tyr - D-Cye - G.£y-Phe - Cys-Arg-Ar g~G.0n-NE ₂

o CE -Tyr-C-^y-G^y-Phe -Leu-CE₅Arg-Arg-D-LeuNE

o Tyr-D-Phe-G^y-Phe-Leu-Arg-CE-Arg-Eis-ArgCEjCíz-aCEj

N <

ce₂ ce₂ce₅

o CEj Ty r-G^y-G^y-Ph. e-Leu-Arg-CEj Arg-D-Leunece₂ ch₃

⁰ Tyr-D-Ser-G^.y-Phe(p- C^-) -Leu- Orn-Orn-ThrD-Arg-NE₂

o CEj Tyr-G^y-G^y-Phe-Leu-Arg-CEj Arg-D-Leu.NE ₂

o CEj Tyr-L-Met-G^y-Pke-Pro-Arg-Arg-D-TryCE₂ CEj

NE <

ce₂ce₃

o CEj CE₂ Tyr-G^y-G^.y-Fhe(?-P)-^e t-ArghomoArg-G^y-NHCE.

-15-

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o CHj Tyr-G^y-G^y-Phe-Leu-Arg-Arg-D-Leuoch₂ ce₃

o Tyr-D-Va^-G^y-Phe(p-N0₂)-G^n-Arg-Arg-BVa^- NE₂

o Tyr-B-Cys-G^y-Ph6-Cys-Arg-CH -Arg-D-LeuArg-NE₂

o CEjTyr-G^.y-G^y-Phe-Leu-Arg-Argnece₂ce(ce₃)ce₂ce₃

o CE-Tyr-G^y-G^y-Phe-Leu-Lys-CE-Arg-B-Leunh₂

o Tyr-G^y-G^y-Phe-Leu-Arg-CEj Lys-Tyr-NE₂ o CEj Tyr-G^y-G^y-Phe-iíe’t-Arg- CH₃ Arg-Va^-NH₂ o CHj Tyr-G^y-G^y-Phθ-Leu-Arg-Arg-B-Leu-NE₂ o CH₂ =CH-CH₂Tyr-B-G^u-G^y-?he-Lys-B-Argch₂ce₃

Arg-CHj Leu-N <

ce₂ch₃

o CH₃ Tyr-GA-y-G^-y - Phe -Leu-homoAr g-Arg -BLeu-NH₂ CHj

β > Tyr-G^.y-G^y-Ph.e(p-C^)-Arg-CE₃LyeCE,

Arg-CHjVa^-NHg

β Tyr-B-Aj^a-G^y-CEjPhe-Me t (O) -Arg-Arg-BAs p-OH

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• cHjTYtf-Gly-Gly-Phe-Leii-Arg-Cí^Arg-Pro-OH

• cHjTyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Lys-CH^Arg-CH^Ile-OH

• CH^Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH^Arg-Aib-OH

• CH^Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CHjLys-D-Ala-OH

• CH₃Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH₃Arg-NCH₂CH₂COOH

ch₃

^e CH₃Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Lys-CH₃Lys-CH₃Val-OH

• CH₃Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH₃Arg-NHCH₂CH₂CH₂COOH

CH,

CH--CH I ^{2 x}

⁰ CH₃Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH₃Arg-NH-C-COOH

é^R3

⁰ CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH3Argn0H^Leu-OC2H5 ° ^Cíi3.

CH.

,Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH₃Arg-D-Val-Gly-OH

CH.

CH₃CH₂Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH₃Arg-D-Pro-Ala-OH

CH₃Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH₃Arg-D-Leu-Sar-OH

I

CH₂=CH-CH₂Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH₃Arg-CH₃Ile-D-Ala-OH D>-CH₂-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH₃Ãrg-D-Leu-Arg-D-Pro-OH

^e CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arç-CK3Arg-D-Ala-OH ⁰ CH3Tyr-Gly-Gly-P.he-Leu-Arg-CH₃Arg-CH₃Ala-OH ⁰ CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arç-CH3Arg-Ile-OH ⁰ CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH₃Arg-Asp-OH ° CH₃Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arç-CH₃Arg-D-Leu-OH ⁰ CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-Ch3Arg-D-Glu-OH ⁰ CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH₃Arg-CH,lle-OH

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⁰ CH₃Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH₃Arg-Sar-OH

⁰ CH₇Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH_,Arg-S“Ala-0H

O o

° CH₃Tyr-Glv-Gly-Phe-Leu-Arg-CH₃Arg-D-Leu-Asp-OH ⁶ CH₃Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH₃Arg-D-Leu-Phe-OH ^!

⁰ CH^Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH^Arg-D-Leu-Arg-D-Glu-OH .

Os peptidos do presente invento podem ser sintetizados por quaisquer processos convenientes. Os peptidos protegidos podem ser sintetizados por processos correntes de fase líquida ou de fase sólida. Geralmente prefere-se que seja protegido um grupo funcional numa cadeia lateral de aminoácidos. Todos os grupos protectores são retirados na fase final. Os gru pos protectores para os grupos funcionais das cadeias secunda rias dos aminoácidos incluem todos os grupos protectores mencionados ate agora. Exemplos típicos destes grupos incluem grupos tosilo (Tos), nitro (N0₃), benzilo (Bzl), ter-butilo (But), benziloxi-carbonílo (Z) e ter-butoxi-carbonilo (BOC).

Como grupos protectores para os grupos ©(-amino nos aminoácidos, podem utilizar-se todos os grupos protectores mencionados até agora. No entanto, prefere-se escolher a com binação dos grupos protectores de maneira que apenas os grupos protectores dos grupos -amino possam ser retirados selectivamente sem exercer qualquer influência nos grupos protectores dos grupos funcionais das cadeias laterais. Por exemplo, quando se emprega um grupo tert-butoxi-carbonilo como grupo protector do grupo <X-amino, prefere-se um grupo benzilo ou benziloxi-carbonilo para proteger o grupo funcional da cadeia secundária. Quando se utiliza um grupo benziloxi-carbonilo na protecção do grupo ©(-amino, prefere-se um grupo tert-butilo ou tert-butoxi-carbonilo para proteger o grupo funcional da ca deia secundária. Quando o grupo amino de Tir no terminal N ê dialquilado, o grupo amino pode ser deixado tal como estã sem qualquer protecção adicional. Para impedir a racemização, o

-18-

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péptido protegido é sintetizado preferivelmente por um proce^ so de vários passos, caracterizado pelo facto de todos os ami noácidos serem ligados sequencialmente começando no terminal C, ou um processo caracterizado pelo facto de a condensação de fragmento ser efectuada na posição de Gli. É também possível efectuar a condensação de fragmento em qualquer posição desejada.

Quer no processo de fase sólida quer no processo de fase líquida de acordo com o presente invento, os grupos protectores são retirados do péptido e este é purificado por meio da repetição das reacções das fórmulas seguintes para sintetizar o péptido. .As fases deste processo serão representadas com re ferência ao processo de fase líquida:

R" - N - CHCOOH + HN - CHCOR'

condensação

2 2 11 X Y^Z X Y

R"

R" - N - CHCON - CHCOR'

retirada de grupo protector de grupo o(-amino

HN - CHCON - CH - COR'

1 2

em que X e X representam cada um deles H ou um grupo alqui, „1 „2 ___

lo, Y^x e x representam uma cadeia secundária aminoácida e R'

e R" representam um grupo protector ou um resíduo de péptido.

(1) Reacção de formação de uma ligação péptidica:

A ligação pétidica pode ser formada por qualquer dos pro

cessos mencionados atê agora. Um processo utilizado correntemente compreende a activação do grupo carbonilo de um componente ácido da fórmula geral:

-1956740

385263

X

R" - N

I

CHCOOH

por um método corrente, por exemplo método da azida, método do diciclo-hexil-carbodiimida (DCC), método do anidrido mistu rado ou do éster activo, e reagindo o composto activo com um componente amina da fórmula geral:

X¹ Y¹

I I

HN - CHCOR'

As condições da reacção, por exemplo o dissolvente de reacção e a temperatura desta, podem variar conforme o método de activação do grupo carboxilo.O método de anidrido misturado, que é um dos métodos de condensação correntes, ê efectuado como segue:um componente ãcido da fórmula geral.

X² Ϊ² I I

R" - N - CHCOOH

ê dissolvido num dissolvente aprótico, por exemplo dimetilformamida, tetraidrofurano ou acetato de etilo, a solução resultante ê arrefecida para cerca de -209C e em seguida adi cionam-se sucessivamente quantidades equimolares de N-metil-morfolina e cloro-carbonato de etilo à solução. Decorridos 5 minutos, adicionou-se-lhe um componente amina da fórmula gera:

X¹ Y¹ ι t

HN - CHCOR'

numa quantidade equimolar, e agitou-se a mistura da temperatu ra de -15 a 09C durante 2 a 5 horas e em seguida tratou-se a mistura de maneira usual para obter um péptido protegido da fórmula geral:

2 2 11 X Y X¹ Y^X

1 I I I

R" - N - CHCON - CHCOR’

(2) Remoção de um grupo protector de um grupo -amino:

A remoção de um grupo protector efectua-se por um processo corrente, por exemplo um processo de redução catalítica, um processo em que se utiliza um ãcido, um processo em que se emprega uma base e um processo em que se emprega hidra zina. Um processo preferido é escolhido de entre estes proces

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sos, conforme a natureza do grupo protector do grupoO<-amino. Os processos típicos incluem um em sue o grupo protector é re tirado por redução catalítica do grupo benziloxi-carbonilo e um em gue o grupo tert-butoxi-carbonilo ê retirado com acido trifluoro-acético. Vai agora ser descrita de maneira pormenorizada uma forma de realização do processo para a remoção do grupo tert-butoxi-carbonilo com ácido trifluoro-acético: adicionam-se o,25 ml de anisol e 5 ml de ácido trifluoro-acético da 1 g de um OC-N-butoxi-carbonil-pêptído da férmula geral:

γ·

I

BOC - N - CHCON - CHCOR'

com arrefecimento por meio de gelo. A mistura é agitada duran te 60 minutos e em seguida tratada com êter para se obter um trifluoro-acetato de um péptido Ua férmula geral:

2 2 11

X Y X Y

I I I I HN - CHCON - CHCOR’

Este produto ê dissolvido num dissolvente e neutralizado com uma amina, por exemplo trietilamina, para se obter um composto a ser submetido à reacção subsequente.

(3) Remoção de todos os grupos protectores:

Depois de se repetirem a condensação e a remoção dos gru pos prptectores de grupos OC-amino para alongar a cadeia pépti dica, retiram-se todos os grupos protectores para se obter o péptido impuro pretendido. Os grupos protectores são retirados por um processo corrente, por exemplo um processo de redução catalítica, um processo em que se utiliza amoníaco/metal alca lino, um processo em que se emprega um ácido, um processo em gue se emprega uma base ou um processo em que se utiliza hiirazina. Na prática, o processo é escolhido conforme a nature za do grupo protector. Um dos processos aplicados com frequên □ia compreende a remoção do grupo protector com fluoreto de lidrogênio (HF) da maneira seguinte:

Dissolve-se 1 g de um pêtido protegido em cerca de 30 ml

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de HF em presença de 0,5 ml de anisol â temperatura de -15 a 09C num recipiente de reacção de HF fechado. A solução é man tida em agitação durante 60 minutoé e separa-se HF do sistema de recção por destilação. 0 resíduo ê lavado com éter e dissolvido em ãgua. A solução ê tratada com Amberlite IRA-93 (tipo ácido acético) e congelada para se obter um péptido im puro a partir do qual se separaram os grupos protectores.

(4) Purificação do péptido impuro:

0 péptido impuro pode ser purificado por um processo corrente, por exemplo cromatografia de permutação de iões, filtração em gel, cromatografia de partição, distribuição em contracorrente, e cromatografia líquida de grande realiza ção. A purificação efectua-se, por exemplo, pela cromatografia líquida de grande realização efectuada como se segue: in troduzem-se 100 mg de péptido impuro numa coluna com o diâme tro de 20 mm e a altura de 250 mm, a qual contêm Nucleosil 5 c 18 como excipiente e em seguida elutriado com HCl 0,05% (h₂o-ch₃cn).

Colheram-se fracções que tinham mãximos correspondentes ao péptido pretendido, por detecção em UV 210 nm, e congelaram-se para se obter o péptido desejado.

fa

Quando o péptido contém duas unidades Cis ou D-Cis na molécula, oxida-se o péptido impuro por melo de um processo de oxidação corrente, com ar ou peróxido de hidrogénio, antes da purificação, a fim de se obter um produto de anel fechado com grande pureza.

Os resultados das seguintes experiências com animais descreverão mais completamente os efeitos dos composto de acordo com o presente invento utilizados em medecina.

Experiência 1

Experiências analgésicas

Dissolveu-se um composto de teste em soro fisiológico e trataram-se ratinhos machos de estirpe ddY (20-27 g de peso corporal, geralmente estudados em grupos de 8), intravenosa

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ou subcutâneamente. Mediram-se as actividades analgésicas por meio da experiência do beliscão na cauda.

Na experiência do beliscão na cauda, 1) colocou-se uma pinça, que exerce uma pressão de 300 g na base da cauda, incluindo a mucosa anal, e mediram-se as latências da mordedura da pinça. Escolheram-se os animais em relação â percepção da pinça na cauda, e os ratinhos que não morderam dentro de 3 se gundos foram eliminados das experiências. Uma latência de mais de 6 segundos foi utilizada como padrão para analgesia.

Os valores ϋΕ^θ (dose analgesicamente eficaz a 50%} foram calculados pelo método de Litchfield e Wilcoxon 2). Os re sultados estão indicados nos Quadros 1 e 2. O Quadro 1 indica os resultados obtidos pela injecçâo intravenosa. O Quadro 2 indica os resultados obtidos pela injecçâo subcutânea.

Os numeros da coluna do composto de teste nos Quadros 1 e 2 correspondem aos dos compostos finais produzidos nos exemplos apresentados adiante.

-23

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QUADRO N? 1

Conposto de teste (Exemplo N9)	Método do beliscão na cauda (i.v) ED50 (mg/Kg)
1	0.75
2	0.24
5	3.4
6	4.3
7	3.9
8	, 3.3
10	1.2
18	4.5
19	2.0
21	0.8
22	3.0
24	0.22
25	1.8
27	0.7
28	0.7
29	2.0
Dinorfina (1-13)	>25.0

-2456740

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QUADRO N? 2

Composto de experiência (Exenplo N9)	Método do boliscão na cauda (s.e.) DE50 (mg/Kg)
1	1.0
2	0.44
21	0.8
24	0.32
27	9.8
28	1.5

(Nota 1) O método do beliscão na cauda foi aplicado de acordo com Takagi, H: et al., Jap. J. Pharmacol. Vol 16,287 a 294 (1966).

(Nota 2) 0 método de Litchfield-Wilcoxon foi aplicado de acor do com Litchfield, J.T., e F.Wilcoxon, J.Pharmacol. Exp. Ther. 96, 99 a 113 (1949).

Experiência 2

Actividade oplóide

As actividades opiõides dos compostos de acordo com o presente invento foram examinadas pelo método que utiliza vas deferens de coelho de acordo com T.Oka, K.Negishi, M.Suda, T.Matsumiya, T.Inaza e M.Ueki, Europ. J.Pharmacol.Vol.73 235 (1980). Nesta experiência, sacrificaram-se coelhos machos adultos por meio da introdução de ar numa veia ótica. Imediatamente após a morte, efectuou-se uma laparotomia e retiraramse os vasa deferens direito e esquerdo. Espremeu-se o sémen □ara fora dos canais para solução de Ringer. Uma parte de cada canal foi cortada (comprimento de 2,5 cm a partir de uma extre nidade do lado da glândula da próstata). Os pedaços dos canais liferentes foram suspensos por meio de um fio numa célula de vidro com temperatura constante de 6 ml e estimulados electri.

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camente com um dispositivo de estímulo elêctrico com eléctro dos de platina em condições de 0,1 Hz, 1 ms e 90 võltios. Registou-se uma contracção provocada pelo estímulo elêctrico por intermédio de um transdutor.

Determinou-se a actividade opiõide com base na inibição da contracção provocada pelo estímulo elêctrico.

Os resultados estão indicados no Quadro 3 em termos de concentração para 50% de inibição (ΟΙ^θ).

Composto de teste (Exemplo N?)	Método de vas deferens de coelho CI5O wo
1	3.5
2	0.04
3	6.03
6	4.5
8	6.2
19	2.8
24	0.08
25	0.58
27	‘ 2.0
28	6.5
dinorfina A (1-17)	17.4

0 Quadro 3 mostra que os compostos de acordo com o presente invento manifestam uma actividade muito forte em comparação com a dinorfina A.

Por outro lado, os referidos compostos têm fortes actividades de inibição da concentração de músculos longitudinais íleos de uma cobaia e canais deferentes de um rato provocadas pelo estimulo elêctrico.

Os resultados farmacológicos atrás mencionados mostram

que os compostos pêptidicos obtidos de acordo com o presente

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invento têm actividades opiõides análogas âs da dinorfina e os seus efeitos são muito intensos e que os efeitos analgésicos notáveis são apresentados pela injecção intravenosa ou a injecção subcutânea.

É muito importante que os compostos de acordo com o presente invento manifestem os fortes efeitos analgésicos com administração sistémica peia injecção intravenosa ou subcutânea, enquanto que a dinorfina e os seus derivados até agora tornados conhecidos apresentam muito poucos efeitos analgésicos com injecção intravenosa, porque são instáveis no sangue.

A relação entre a toxicidade (dose letal mínima) do composto petídico obtido nos Exemplos 1 e 2 do presente invento e a dose eficaz estã indicada no Quadro 4.

Composto de teste (Exemplo N9)	Beliscão na cauda DE50 (mg/Kg)	Dose letal mínima (mg/Kg)
Exemplo 1	1.0	100
Exemplo 2	0.44	20

Os compostos peptídicos obtidos pelo processo do presente invento têm efeitos analgésicos notáveis e podem ser utilizados como medicamentos no campo terrapêutico.

Quando se empregam os compostos do presente invento como analgésicos, são administrados por via oral ou via parentêrica. Em geral, são ministrados parentericamente na forma de in jecção intravenosa, subcutânea ou intramuscular, em supositórios ou em comprimidos sublinguais. A dose varia conforme os sintomas, idade do doente, sexo, peso corporal, sensibilidade, modo de administração, fase da doença, intervalos, propriedades da preparação médica, formulação, natureza da preparação e natureza do ingrediente activo. Embora, desta maneira, a do sagem não tenha limitação particular, ê geralmente de cerca de 0,1 a 1.000 mg, preferivelmente cerca de 1 a 300 mg/dia

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para adultos.

Os compostos do presente invento podem ser elaborados em injecções, supositórios, comprimidos sublinguais, comprimidos e cápsulas, por meio de um processo usual neste domínio têcni co.

Na preparação da injecção, juntam-se ao ingrediente activo aditivos, por exemplo um agente regulador de pH, agente tampão, agente de suspensão, solubilizador, estabilizador,agen te isotonizador e preservante, e a mistura obtida é elaborada numa injecção intravenosa, subcutânea ou intramuscular por meio de um processo corrente. Se fôr necessários, a mistura pode ser liofilizada por métodos convencionais.

Os exemplos de agentes de suspensão incluem metil-celulose, Polisorbato 60, hidroxi-etil-celulose, acácia, pó de tragacanto, carboxi-netil-celulose de sódio e monolaurato de polioxi-etileno sorbitano.

Os exemplos dos solubilizadores incluem óleo de rícino en durecido pôlioxi-etileno, Polisorbato 80, nicotinamida, mono laurato de polioxi-etileno sorbitano, macrogol e ésteres etílicos de ãcidos gordos de óleo de rícino.

Os exemplos de estabilizadores incluem sulfito de sódio, meta-sulfito de sódio e éteres-. Os exemplos de preservantes incluem p-hidroxi-benzoato de metilo, p-hidroxi-benzoato de etilo, ácido sórbico, fenol, cresol e cloro-cresol.

O presente invento vai ser descrito com referência aos exemplos típicos que se seguem, os quais de modo nenhum limi tam o invento.

Exemplo 1

1) Síntese de CH^Tir-Gli-Gli-Phe-Leu-Arg-CHg Arg-D-Leu-NHC^

Dissolveram-se 25 g de Boc-D-Leu-OH.í^O em 200 ml de TIF.

Arrefeceu-se a solução atê -209C. Juntaram-se 11 ml de N-metil-morfolina e 9,56 ml de cloro,carbonato de etilo à solução. Decorridos 5 minutos, juntaram-se-lhe 12,9 g de uma so

-28-

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lução aquosa de etilamina a 70% e agitou-se a mistura até à temperatura de cerca de -59C durante 2 horas. Depois de concentração, dissolveu-se o resíduo em acetato de etilo e lavou-se com uma solução aquosa de NaHCOg é água sucessivamente. Depois de concentração até â secura, obtiveram-se 24,5 g de

Boc-D-Leu-NHC„H_r .

2 5

p.f.: 103 - 1069C

CCD: Valor Rf 0,77 (acetato de etilo)

rotação óptica_D = +20.09 (C=l,metanol) análise elementar para ^cg3^H26^N2°3^:

calculado (%) encontrado (%)

C Η N 60.44 10.14 10.84

60.42 10.33 10.86

2) Síntese de Z-CH^Arg

(Tos)-D-Leu-NHC₂H₅

Dissolveram-se 1,43 g de Z-CH^Arg(Tos) -OH, HpO D =-159 (C = 1, dimetilformamida), sintetizados a partir de H-Arg(Tos)-OH por um processo de P. Quitt et al., Helvetica Chlmica Acta, 32, 327 (1963) em 15 ml de tetraidrofurano. Depois de arrefecimento atê -309C, adicionaram-se 0,33 ml de N-metil-morfolina e 0,29 ml de cloro-carbonato de etilo à solução. Decorridos 5 minutos, adicinou-se-lhe uma solução de 817 mg de

CFgCOOH.H-D-Leu-NHC₂Ht. (sintetizado por meio de tratamento de Boc-D-Leu-NHC₂H^ com CF₃COOH em presença de anisol) e 0.83 ml de trietilamina em 7ml de tetraidrofurano e agitou-se a mistu ra até cerca de -59C durante 2 horas. Depois de concentração, dissolveu-se o resíduo em acetato de etilo, lavou-se com uma solução aquosa de NaHCO^e ãgua sucessivamente e concentrou-se até â secura para se obterem 1,58 g de Z-CH^Arg (Tos)-D-Leu-NHC₂H^ vitreo.

CCD: Valor Rf 0,68 (metanol/clorofórmlo, 1:7) rotação óptica£sO_D= 0± 0.59(C = 1, metanol) análise elementar para ^θΗ^Ν^Οθε:

-2956749

385263

C

calculado (%) 58.42

encontrado (%) 58.29

H	N
7.19	13.63
7.19	13.40

3) Síntese de Boc-Arg (Tos) -CH^Arg(Tos) -D-Leu-NHC^H^

Dissolveram-se 1,1 g de CH₃Arg(Tos)-D-Leu-NHC₂H^ obtido por meio de redução catalítica de Z-CH₃Arg (Tos)-D-Leu-NHC₂H₃ em presença de Pd/C, 983 mg de Boc-Arg(Tos)-OH e 372 mg de N-hidroxi-benzo-triazol em 4 ml de dimetilformamida. Juntaram-se 520 mg de diciclo-hexil-carbodiimida ã solução arrefe cendo com gelo e agitou-se a mistura num frigorífico durante um dia e em seguida à temperatura ambiente durante um dia.Se pararam-se por filtração os precipitados que assim se formaram e concentrou-se o filtrado. .0 resíduo de concentração foi purificado de acordo com cromatografia em coluna de síli ca gel (eluente: MeOH/CHCl₃ = 1/15) para se obterem 1,2 g de Boc-Arg(Tos)-CH₃Arg(Tos)-D-Leu-NHC₂H₅ vítreo.

CCD: Valor Rf 0,64(metanol/clorofórmio, 1:7) rotação óptica p ⁼ "20.69 (C = 1, metanol) análise elementar para C^gHg^N^pOgS^ .^0:

calculado (%) encontrado (%)

C	Η '	N
52.72	7.30	15.37
52.82	7.22	15.06

4) Síntese de Boc-Leu-Arg(Tos)-CH₃Arg(Tos)-D-Leu-NHC₂H₃

Dissolveram-se 1,645 g de Boc-Leu-0H.H₂0 em 12 ml de dircetil-formamida. Arrefereceu-se a solução atê -209C. Adiciona ram-se 0,726 ml de N-metil-morfolina e 0,631 ml de cloro-caroonato de etilo â solução.

Decorridos 5 minutos, adicionou-se uma solução de 4,986 g de

2F₃COOH.H-Arg(Tos)-CH₃Arg(Tos)-D-Leu-NHC₂Hg, sintetizada por

-30-

56740

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meio de tratamento de Boc-Arg (Tos) -CH^Arg (Tos) -D-Leu-NEU^H^ com CF^COOH em presença de anisol, e 0,726 ml de N-metilmorfo lina em 12 ml de dimeti1-formamida â solução, e a mistura foi mantida em agitação â temperatura de cerca de -59C durante 2 horas. Depois de concentração, o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo e a solução foi lavada com uma solução aquosa de NaHCO^ e em seguida com ãgua. Apos concentração seguida por solidificação com metanol/eter, obtiveram-se 5,283 g de Boc-Leu-Arg(Tos) -CH^ArgíTos) -D-Leu-NIK^H,..

p.f.: 120 - 1259 (deo)

CCD: Valor Rf 0,66 (metanol/clorofõrmio, 1:7)

rotação óptica: _D = -25.89 (C = 1, metanol)

análise elementar para C. ,Η^,-Ν. .Ο_{η n}S_ ,CH_OH:

^r 46 75 11 10 2 3

calculado (%) encontrado(%)

c	H	N
54.36	7.67	14.84
54.49	7.63	14.62

5) Síntese de Boc-Phe-Leu-Arg(Tos) -CH₃Arg(Tos) -D-Leu-NIK^Hj.

Dissolveram-se 1,465 g de Boc-Phe-OH em 12 ml de dimetilformamida. Arrefeceu-se a solução atê -309C. Juntaram-se 0,608 ml de N-metil-morfolina e 0,528 ml de cloro-carbonato de etilc à solução. Decorridos 5 minutos, adicionou-se uma solução de 4,691 g de CFgCOOH.H-Phe-Leu-Arg(Tos) -CH^ArgfTos) -D-Leu-NIK^Hj-, sintetizada por meio do tratamento de Boc-Phe-Leu-Arg(Tos)-CH^ArgíTos)-D-Leu-NHX^Hg com CF^COOH em presença de anisol,e 0,608 ml de N-metil-morfolina em 12 ml de dimetil-formamida â solução, e a mistura foi mantida em agitação atê â temperatura de -59C durante 2 horas.

Depois de concentração, dissolveu-se o resíduo em acetato de etilo e lavou-se a solução com uma solução aquosa de NaHCO^ e água sucessivamente. Após concentração, seguida por solidificação com metanol/éter, obtiveram-se 5,072 g de Boc-Phe-Leu-Arg(Tos)-CH^Arg(Tos)-D-Leu-NHC2H5.

-31-

56740

385263

p.f.: 127 - 1329C (dec.)

CCD: Valor Rf 0,66 (metanol/clorofõrmio, m:7)

rotação õptica DO _D = -25.49 (C = 1, metanol)

análise elementar para

^C55^H84^N12°11^S2-^CH3^OH:

calculado (%) encontrado (%)

C	H	N
56.74	7.48	14.18
56.64	7.33	13.86

6) Síntese de Boc-CH^Tir (Cl Bzl) -Gli-Gli-OH

Dissolveram-se 9,09 g de Boc-CH^Tir(Cl₂Bzl)OH,

= -499(C = 1,C₂H₃OH), sintetizado por um processo de

S.T. Cheung et al., Can.J. Chem., 55, 906 (1977J e 2,53 g de N-hidroxisuccinimida em 150 ml de tetraidrofurano. Depois de arrefecimento com gelo, juntaram-se 4,12 g de dicicloexilcarbodiimida ã solução e a mistura foi mantida em agitação até ao dia seguinte num frigorífico. Os cristais brancos assim formados foram separados por filtração e adicionaram-se ao fil trado 2,91 g de H-Gli-Gli-OH e 38 ml de uma solução aquosa de 1,848 g de NaHCO^. A mistura foi mantida em agitação à temperatura ambiente durante 2 dias e em seguida foi concentrada. Adicionaram-se-lhe uma solução aquosa diluída de ãcido cítrico e acetato de etilo e separou-se uma camada de acetato de etilo. Depois de lavagem com ãgua, seguida por concentração, purificou-se o produto de acordo com cromatografia de coluna de sílica gel elutriada com MeOH/CHCl^ = 1/30 e solidificou-se com éter/n-hexano para obter 9,23 g de Boc-CH^Tir- (CH₂Bzl) -Gli-Gli-OH.

p.f.: 70 - 809C (dec.)

CCD: Valor Ref 0,79 (xretanol/ãcido acético/clorofõrmio,4:1:12

rotação õptica = -479 (C = 1, metanol)

analise elementar para ^C26^H3i^N3°7^C-*-2./2C₂HgOC₂H^:

-3256740

385263

calculado (%) 55

encontrado (%) 55

1	H	N
54	5.99	6.94
45	5.81	6.89

7) Síntese de Boc-CH₃Tir(Cl₂Bzl)Gli-Gli-Phe-Leu-Arg(Tos)CH-Arg(Tos)-D-Leu-NHC-HO z □

Dissolveram-se 682 mg de Boc-CH₃Tir(C^Bzl)-Gli-Gli-OH e 195 mg de N-hidroxi-benzo-triazol em 4 ml de dimetil-forma mida. Adieionaram-se 272 mg de diciclo-hexil-carbodiimida ã solução enquanto se arrefece com gelo. Depois de manter em agitação durante 2 horas, adicionou-se uma solução de 1,167 g de CF COOH.H-Phe-Leu-Arg(Tos)-CH₃Arg(Tos)-D-Leu-NHC₂H₅,sin tetizada por meio de tratamento de Boc-Phe-Leu-Arg(Tos)-CH₃ Arg(Tos)-D-Leu-NHC₂H5 com CF₃COOH em presença de anisol, e adicionaram-se 0,132 ml de N-metil-morfonilo em 8 ml de dime til-formamida à solução e agitou-se a mistura num frigorífico até. ao dia seguinte. Filtrou-se um precipitado assim formado e o filtrado foi concentrado e purificado por meio de cromatografia de coluna de sílica gel (eluente:MeOH/CHCl₃ = 1/20). Depois de solidificação com metanol/éter, obtiveram-se 1,391 g de Boc-CH₃Tir(C^Bzl)-Gli-Gli-Phe-Leu-Arg(Tos)-CH₃Arg(Tos)-D-Leu-NHC₂H₃.

p.f.: 130 - 1359C (dec.)

CCD: Valor Rf 0,64 (metanol/clorofórmio, 1:7) rotação óptica: t?Ç]_D ⁼ “35.39 (C = 1, metanol) analise elementar para ^C75^Hiq5^N]_5°i5^S2^C^2'^CH3^OH*^H2^O:

calculado (%) encontrado (%)

C	H	N
55.92	6.77	12.70
56.06	6.49	12.52

8) Síntese de CH₃Tir-Gli-Gli-Phe-Leu-Arg-CH₃Arg-D-Leu-NHC₂H₅

Dissolveram-se 220 mg de Boc-CH₃Tir(Cl₂Bzl)-Gli-Gli-Phe-33-

56740

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-Leu-Arg (Tos)-CH₃Arg (Tos)-D-Leu-NíK^Hp. em 10 ml de fluoreto de hidrogénio (HF) em presença de 0,2 ml de anisol num recipiente de reacção HF fechado à temperatura de -59C. Manteve-se a mistura em agitação durante 1 hora e em seguida separou-se HF por destilação do sistema de reacção. Lavou-se o resíduo com êter e dissolveu-se em ãgua. Tratou-se a solução com Amberlite IRA-93 (tipo ãcido acético) e congelou-se. Purifica ram-se 120 mg de péptido impuro assim obtido por meio de cromatografia líquida de grande realização CNucleosil 5 C 18,2 0 x 24 cm, eluído com 0,1% HCI (H₂O-CH₃CN, 81/91)3 e em seguida congelou-se para obter 70 mg de CH^Tir-Gli-Gli-Phe-Leu-Arg-CH₃Arg-D-Leu-NHC₂H₅.

CCD: Valor Rf 0,70 (butanol/ãcido acético/piridina/ãgua, 15:5:5:8)

rotação óptica: [οζ _] _D = -21.89 (C = 0.4, 0.01 N - HCI)

E.M. (FAB): 1036 ( Qm + H| ⁺) análise amino ãcido:

Gli 1,87(2) Leu 1,92(2) Phe 1,00(1) Arg 0,95(1)

(não se calcularam máximos devidos a CH₃Tir e CH₃ Arg.)

Exemplo 2

I-1

Sintese de Tri-D-Cis-Gli-Phe-Cis-Arg-CH₃Arg-D-Leu-Arg-NH₂

1) Síntese de Boc-D-Leu-Arg(Tos)-NH₂

Dissolveram-se 2,493 g de Boc-D-Leu-0H.H₂0 em 10 ml de dimetil-formamida. Arrefeceu-se a solução atê -209C. Juntaram-se 1,1 ml de N-metil-morfolina e 0,96 ml de cloro-carbonato de etilo ã solução. Decorridos 5 minutos, adicionou-se-lhe uma solução de 4,414 g de CF₃COOH.H-Arg(Tos)-NH₂ e 1,65 ml de N-metil-morfolina em 20 ml de dimetil-formamida e agitou-se a mistura até cerca de -59C durante 2 horas. Depois de concentra

-34-

56740

385263

ção , o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo e lavado com NaHCO^ e ãgua sucessivamente.

Depois de concentração, juntou-se êter para solidificar o pro duto. Desta meneira, obtiveram-se 4,96 g de Boc-D-Leu-Arg(Tos) -nh₂.

p.f: 110 - 1209C (dec.)

CCD: Valor Rf 0,49 (metanol/clorofõrmio, 1:7)

rotação õptica: w = +13.09 (C = 1, metanol) análise elementar para ^C24^H40^N6^G6^S'^'^/Z^^H2°^:

calculado (%) encontrado (%)

c	H	N
52.73	7.50	15.37
52.77	7.60	15.14

2) Síntese de Z-CH^Arg(Tos)-D-Leu-Arg(Tos)-NH₂

Dissolveram-se 3,336 g de Z-CH^Arg(Tos)-OH em 30 ml de tetraidrofurano. Arrefeceu-se a solução até -209C. Juntaram-se 0,77 ml de N-meti1-morfolinae 0,67 ml de cloro-carbonato de etilo à solução. Decorridos 5 minutos, adicionou-se uma solução de 3,882 g de CF₂"COOH.Η-D-Leu-Arg(Tos)-NH₂ sintetizada por meio de tratamento de Boc-D-Leu-Arg(Tos)-NH₂ com CF^COOH em presença de anisol, e 1,17 ml de trietilamina em 30 ml de tetraidrufurano à solução e agitou-se a mistura até cerca de -59C durante 2 horas. Depois de concentração seguida por soli dificação com metanol/água, obtiveram-se 6,14 g de

Z-CHgArg(Tos)-D-Leu-Arg(Tos)-NH₂.

p.f.: 100 - 1139C

CCD: Valor Rf 0,44 (metanol/clorofôrmio, 1:7)

Rotação óptica: “3*49 (C = 1,metanol)

análise elementar para Ο^^Η^θΝ^θΟθδ₂.CH^OH:

calculado (S) encontrado (%)

C

54.18

54.12

H

6.71

6.62

N

15.04

14.85

-35-

56740

385263

3) Síntese de Boc-Arg (Tos)-CH^Arg (Tos)-D-Leu-Arg (Tos)-N^

Obtiveram-se 4,734 g de CH^Arg (Tos)-D-Leu-Arg (Tos)-N^ por meio de redução catalítica de Z-CH^Arg(Tos)-D-Leu-Arg(Tos) -NH2 em presença de Pd/C. Dissolveram-se 2,918 g de Boc-Arg (Tos)OH e 1,1 g de N-hidroxi-benzo-triazol em 17 ml de dimetil-formamida.

Juntaram-se 1,543 g de diciclo-hexil-carbodiimida à solu ção com arrefecimento em gelo e manteve-se a mistura em agita ção num frigorífico durante um dia e depois â temperatura' ambiente durante um dia. Separou-se'por filtração um precipitado que assim se formou e concentrou-se o filtrado. Purificou-se o resíduo de acor do com cromatografia em coluna de sílica gel(elutriado com MeOH/CHCl₃=1/15) e solidicou-se com éter para se obterem 4,917 g de Boc-Arg(Tos)-CHgArg(Tos)-D-Leu-Arg(Tos)-NH2.

p.f.: 131 - 1369C (dec.)

CCD: Valor Rf 0,44 (metanol/clorofôrmio, 1:7)

rotação óptica: CpQj-, = “16.79 (C = 1, metanol)

análise elementar para ·^Η2^0:

calculado (%) encontrado(%)

c	H	N
51.32	6.76	16.43
51.15	6.54	16.48

4) Síntese de Boc-Cis(CH^Bz!)-Arg(Tos)-CH^Arg(Tos)-D-Leu-Arg(Tos)“HN2

Dissolveram-se 747 mg de Boc-Cis(CHgBzl)-OH em 4 ml de dimetil-formamida. Arrefeceu-se a solução até -209C. Adicionaram-se-lhe 0,254 ml de N-metil-morfolina e 0,221 ml de cloro-carbonato de etilo. Decorridos 5 minutos, adicionou-se uma solução de 2,497 g de CFgCOOH.H-ArgíTos) -D-Leu-Arg(Tos) “N^, sintetizada por meio de tratamento de Boc-Arg (Tos)-CH^Arg (Tos) -D-Leu-Arg(Tos)-NH2 com CF3COOH em presença de anisol,e adi-36-

56740

385263

cionaram-se 0,277 ml de N-metilmorfolina em 6 ml de dimetil-formamida à solução e agitou-se a mistura até cerca de -59C durante 2 horas. Depois de concentração, dissolveu-se a mistu ra em acetato de etilo e em seguida lavou-se com NaHCO^ e ãgua sucessivamente. Depois de nova concentração, solidificou-se o produto ccm metanol/éter para obter 2,548 g de Boc-Cis(CH^Bzl)-Arg(Tos)-CH^Arg(Tos)-D-Leu-Arg(Tos)“NH^·

p.f.: 126 - 1329 C

CCD: Valor Rf 0,51 (metanol/clorofórmio, 1 ;7)

rotação óptica: ⁼ “20.69 (C = 1, metanol)

anãlise elementar para C,„H_niN_n_O_n_S..CH-OH.H_nO:

62 91 15 13 4 3 2

calculado (%). encontrado (.%)

c	H	N
52.81	6.82	14.66
52.78	6.43	14.29

5) Síntese de Boc-Phe-Cis (.CH^Bzl)-Arg(.Tos)-CH^Arg (Tos)-D-Leu-Arg(Tos)~NH₂

Dissolveram-se 467 mg de Boc-Phe-OH em dimetil-formamida. Arrefeceu-se a solução até -209C. Adicionaram-se 0,194 ml de N-metil-morfolina e 0,168 ml de cloro-carbonato de etilo à so lução. Decorridos 5 minutos, adicionou-se uma solução de 2,234 g de CF COOH.H-Phe-Cis(CH₃Bzl)-Arg(Tos)-CH₃Arg(Tos)-D-Leu-Arg (Tos)-NH₂, sintetizado pelo tratamento de Boc-Phe-Cis(CH₃Bzl)-Arg(Tos)-CH₃Arg(Tos)-D-Leu-Arg(Tos)-NH₂ com CF₃COOH em presen ça de anisol, e adicionaram-se â solução 0,211 ml de N-metil-morfolina em 5 ml de dimetil-formamida e manteve-se a mistura em agitação até cerca de -59C durante 2 horas.

Depois de concentração, dissolveu-se o resíduo em acetato de etilo e lavou-se a solução com uma solução aquosa de NaHCC>₃ e ãgua sucessivamente. Depois de nova concentração, solidificou-se o produto com metanol/êter para obter 2,126 g de Boc-Phe-Cis(CH₃Bzl)-Arg(Tos)-CH₃Arg(Tos)-D-Leu-Arg(Tos)-NH₂.

-37-

56740

385263

p.f.: 124 - 1309C(dec.)

CCD: Valor Rf 0,56 (metanol/clorofórmio, 1:7)

rotação óptica DVIq ⁼ “18.99 (C = 1, metanol)

análise elementar para ^C7i^H]_oo^N16°14^S4 .5/2CH₃OH:

calculado (%) encontrado (%)

c	H	N
54.83	6.89	13.91
54.62	6.34	13.64

6) Síntese de Boc-D-Cis (CH^Bzl)-Gli-OC^H,.

Dissolveram-se 3,233 g de Boc-D-Cis(CH^Bzl)OH em 15 ml de dimetil-formamida. Arrefeceu-se a solução atê -209C. Adicionaram-se 1,1 ml de N-metil-morfolina e 0,956 ml de cloro-carbonato de etilo â solução. Decorridos.5 minutos, adicionou-se uma solução de 1,396 g de HCl.H-Gli-C^H,. e 1,1 ml de N-metilmorfolina em 20 ml de dimetilformamida à solução e agitou-se a mistura durante cerca de 2 horas até cerca de -59C aproximadamente. Depois de concentração, dissolveu-se o resíduo em acetato de etilo e lavou-se a solução com uma solução aquosa de NaHCO^ e ãgua sucessivamente. Depois de concentração, adicionou-se-lhe n-hexano para solidificar o produto. Desta maneira, obtiveram-se 3,6 g de Boc-D-Cis-Gli-°C₂ ^H5’

p.f.: 80 - 829C

CCD: Valor Rf 0,74 (clorofórmio/acetato de etilo, 2:1)

rotação óptica CoQ_D ⁼ +30.29 (C = 1, metanol) análise elementar para ^20^Η30^Ν2θ5^δ:

calculado (%) encontrado (%)

C

58.51

58.35

Η N

7.37 6.82

7.23 6.69

-3856740

385263

7) Síntese de Boc-Tir -D-Cis (CH^Bzl) -Gli-CK^H

Dissolveram-se 2,068 g de Boc-Tir (C^Bzl) -OH em 20 ml de tetraidrofurano. Arrefeceu-se a solução atê -209C. Adicionaram-se 0,517 ml de N-metilmorfolina e 0,45 ml de cloro-carbonato de etilo à solução. Decorridos 5 minutos, adicionou-se uma solução de 1,94 g de CF^COOH.H-D-Cis(CH^Bzl)-Gli-OC₂Hg, sintetizada por meio de tratamento de Boc-D-Cis(CH^Bzl)-GliOC₂H(- com CF COOH em presença de anisol, e adicionou-se 1 ml de trietilamina em 20 ml de tetraidrofurano â solução e agitou-se a mistura até cerca de -59C durante 2 horas.

Depois de concentração, adicionou-se-lhe água para formar um precipitado, gue foi filtrado e dissolvido numa mistura de metanol e clorofórmio. Depois de concentração, adicionou-se-lhe éter para solidificar o produto. Desta maneira,ob tiveram-se 2,661 g de Boc-Tir (Cl₂Bzl)-D-Cis (CH^Bzl)-Gli-OC₂H,-.

p.f.: 149 - 1509C

CCD:

rotação

análise

Valor Rf 0,63 (clorofórmio/acetato de etilo, 2:1) õptica: £oÇ3_d = +17.0? (C = 1, dimetilformamida) elementar para C^gH^N^O^SC^:

calculado (%) encontrado (%)

c	H	N
59.01	5.91	5.73
58.94	5.75	5.62

8) Síntese de Boc-Tir(Cl₂Bzl)-D-Cis(CH^Bzl)-Gli-OH

Dissolveram-se 2,345 g de Boc-Tir(Cl₂Bzl)-D-Cis (CH„Bzl)-Gli-OC„H_r em 30 ml de tetraidrofurano e em seguida adicionaram-se-lhe 3,2 ml de N-NaOH. Agitou-se a mistura â temperatura ambiente durante 1 hora.Adicionaram-se à mistura 3,2 ml de Ν-HCl. Concentrou-se a mistura resultante. Adicionou-se-lhe ãgua para solidificar o produto. Desta maneira, obtiveram-se 1,899 g de Boc-Tir(Cl₂Bzl)-D-Cis(CH^Bzl)-Gli-OH.

-39-

56740

385263

p.f.:

CCD:

rotação

análise

133 - 1389C (dec.)

Valor Rf 0,25 (metanol/clorofõrmio, 1:7)

óptica: _{= +35>89} (c = 1, metanol)

elementar para C^H^N^O^SC^:

calculado (%) encontrado(%)

c	H	N
57.95	5.58	5.96
57.81	5.33	5.92

9) Síntese de Boc-Tir (C^Bzl) -D-Cis (CH^Bzl) -Gli-Phe-Cis (CHgBzl)-Arg(Tos)-CH₃Arg(Tos)-D-Leu-Arg(Tos)-NH₂

Dissolveram-se 983 mg de Boc-Tir (Cl₂Bzl)-D-Cis (CH^Bzl)-Gli-OH e 226 mg de N-hidroxi-benzo-triazol em 5 ml de dime til-formamida. Juntaram-se 316 mg de diciclo-hexil-carbodiimi da â solução enquanto se arrefecia com gelo. Depois de manter em agitação durante 2 horas, adicionou-se uma solução de 1,94

g de CF₃COOH.H-Phe-Cis(CH₃Bzl)-Arg(Tos)-CH₃Arg(Tos)-D-Leu-Arg(Tos)-NH₂, sintetizada por meio de tratamento de Boc-Phe-Cis(CH₃Bzl)-Arg(Tos)-CH₃Arg(Tos)-D-Leu-Arg(Tos)-NH₂ com CF₃COOH em presença de anisol, e adicionaram-se 0,167 ml de N-metil-morfolina em 10 ml de dimeti1-formamida à solução e a mistura foi mantida em agitação num frigorífico até ao dia se guinte. Filtrou-se um precipitado assim formado. Depois de cromatografia em coluna de sílica gel(elutriada com

MeOH/CHCl₃=l/20) seguida por solidificação com metanol/éter, obtiveram-se 2,0 g de Boc-Tir(Cl₂Bzl)-D-Cis(CH₃Bzl)-Gli-Phe-Cis(CH₃Bzl)-Arg(Tos)-CH₃Arg(Tos)-D-Leu-Arg(Tos)-NH₂.

p.f.: 123 - 1309C (dec.)

CCD: Valor Rf 0,63 (metanol/clorofõrmio, 1:7)

rotação óptica: M _D = -17.59 (C = 1,dimetilformamida)

análise elementar para C_{n ηη}Η_η „_ηΝ_{Ί η}Ο_{η o}S,.Cl_n.

100 129 19 18 5 2

^C2^H5^OC2^H5-³/^2CH3^OH:

-4056740

385263

calculado (%) encontrado (%)

56.60	6.52	11.89
56.38	6.18	11.72

10) Síntese de Tir-D-Cis-Gli-Phe-Cis-Arg-CH^Arg-D-Leu-Arg-nh₂

Dissolveram-se 515 mg de Boc-Tir (Cl₂Bzl)-D-Cis (CH^Bzl)-Gli-Phe-Cis(CH^Bzl)-Arg(Tos)-CHgArg(Tos)-D-Leu-Arg(Tos)-NH₂ em 20 ml de HF em presença de 2 ml de anisol a -59C num dispo sitivo fechado de reacção de fluoreto de hidrogénio (HF).Manteve-se a solução em agitação durante 2 horas e em seguida se parou-se o HF por destilação do sistema de reacção. Lavou-se o resíduo com éter e dissolveu-se em ãgua. Tratou-se a solução com Amberlite IRA-93 (tipo acido acético) e em seguida congelou-se. Dissolveram-se 320 mg do produto seco em 1,3 li tros de ãgua e ajustou-se a solução ao pH=8 com amoníaco aquoso. Introduziu-se ar na solução com agitação durante 2 dias e ajustou-se a mistura a um pH=6 e em seguida congelou-se. O péptido impuro assim obtido foi purificado de acordo com cromatografia líquida de grande realização CNucleosil 5C 18, 20 x 25 cm, elutriada com 0,05% HC1 (^O/CH^CN,88/12)J e congelado para se obterem 140 mg de Tri-D-Cis-Gli-Phe-CÍs-Arg-CH₂Arg-D-Leu-Arg-NH₂.

CCD: Valor Rf 0,56 (butanol/ãcido acético/piridina/água, 15:5:5:8 )

rotação õptica: (pCJ _D= -299 (C = 0.4, 0.01N-HC1)

E.M. (FAB): 1183 (jM+m| *)

análise aminoacido:

(Não se calculou

Gly 1.02(1) Cis 1.83(2) Tyr 0.80(1) Phe 1.00(1) o máximo devido a CH^Arg)

Leu 1.04(1) Arg 2.06(2)

Exemplos 3 a 29

Efectuou-se a síntese dos compostos mencionados no Qua-41-

dro 1 pelo mesmo processo de fase líquida corrente que nos Exemplos 1 e 2. Nestas experiências, efectuaram-se as sínteses de derivados dinorfina modificada nas posições 1 a 3(Tir-Gli-Gli), nas posições 4 a 7 (Phe-Leu-Arg-Arg-Ile) e nas posições 4 a 9 (Phe-Leu-Arg-Arg-Ile-Arg) utilizando o processo vários passos a partir do terminal C- em cada péptido. Em seguida, condensaram-se conjuntamente os derivados nas posições 1 a 3 e os derivados nas posições 4 a 7, 4 a 8 ou4 a 9 pelo mê todo DCC-HOBt ou método de anidrido misturado. Todos os grupos protectores foram separados com fluoreto de hidrogénio (HF) e o produto foi purificado de acordo com cromatografia de grande realização preparatória, empregando um portador de fase invertido. No exemplo 24,todos os grupos protectores fo ram separados com HF, e o composto foi oxidado com ar e depois purificado por meio de cromatografia líquida de grande reali zação preparatória. As vias de reacção na síntese dos pêptidos protegidos respectivos estão representadas nas figuras 1

^{a 5}* ~ 20 Os resultados da determinação de rotação óptica M Dvalor Rf de CCD e análise de aminoácido dos péptidos pretendi dos obtidos conforme atrás indicado estão mencionados no Quadro 6.

-4256740

385263

1 QUADRO 5

--Sxenplo	Composto
3	CHjTyr-C^y-G^y-Phe-Leu-Arg-Arg-NH2
4	CH.Tyr-O^y-O/y-Phe-Leu-Arg-Arg-NHCH2CH(CH3)CH2CHj
5	% CH .Tyr-O^y-O^y-Phe-Lea-Arg-Arg-D-Leu-OH
6	CK j Tyr-O^y-O^y-Ph© -Lea-Arg-Arg-D-Leu. -OCjH 5
7	CK 5Tyr-C^y-O^y-Phe-Lea-Arg-Arg-D-Leu-NHj
8	CH 3 Ty r-G/<y-O/y-Phe - Le a-Arg-Ar g - D-Leu-NHC 2 H 5
?	CH jTyr-G^y-Oj^y-Phe- Leu -Arg -A r g-D-Le u - NH (CH 2 ) 5CH3
1 0	CH j Tyr -G/y-Oj^y- Phe (p-NO2)-Lea-Arg-Arg-D-Lea-NH2
1 1	CHjTyr-O^y-O^y-Phe-Leu-homoArg-Arg-D-Leu-NHj
1 z	CH j Tyr-D-A^-a-G^y-Phe-Lea-Arg-Arg-D-Lea-NHj
1 3	CHjTyr-O^y^y-CH jPhe-Leu-Arg-Arg-D-Leu-NHj
1 4	CH}Ty r-O^y-O^y-Phe-CH}Le u-A r g- A r g-D-Le u-ΗH 2
1 5	CH 5Ty r-O^y-O/y-D-Phe-Le a-Ar g-Ar g-D-Le a-HH 2
1 6	Ty r-D-A/a-O/y-PhB- Lea-Arg-Arg-D-Lea-NH2
1 7	Tyr-Sar-G^y-Phe-Leu-Arg-Arg-D-Leu-NHj
’8 {	CH}Tyr-G^y-G/y-Phe-Le a-CH }Ar g-Arg-D-Leu-HEj
! 1 ? I i	CH £yr-G^y-O/'y-Phe -Leu-Arg-CHjArg-D-Leu-NH2

-4356740

385263

o ϊ ftS

LExemploj Composto

o

atí

z

aC

ac

cu

O

?

I

to

u

<

I

o

z	1 zi						ac	3	to
1	Φ		«n	W\			z	©	k
3	P		ac	K	fU	po	1	ft	<
o	l	tu	fu	fu	ac	ac	to	1	1
P	p	• M	O	o	z	z	k	ft	3
1	1	Z	33	ac	1	1	<	1	©
P	to	1	Z	z	to	to	1	to	ft
l	k	3	1	1	k	k	3	k	1
tõ	<	©	ύ		<	<	©	<	«
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<	*»<	I	ft	ft	3	3	1	ac	to
	O	ft	1	I	©		O	o	k
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1	u	k	tO	to	ft	O	k	k	ac
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<		ac	m	·<.	k	k	K	3	to
1	Φ	o	K	ac	<	<	o	©	kl
Zi	P	1	O	o	1	I	1	ft	<
Φ	I	a	1	1	to	to	to	1	1
P		ft	to	to	k	k	k	ΖΆ
1		ft	k	k	<	<	<	CU	o
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-P	Pl	ft	©	r-ft	ft	ft	ft	Pi
í	<-z	1	ω	O	1	1	I	—'	1
Φ	Φ	o	1	1	©	©	©	©	©
X		Λ	©	©	JC	JC	ft	ft	ft
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O	O				O	d>	o	C)	C
1	1	1	O	O	1	1	1	1	1
	bt	ft	1	1	ft	ft	ft	ft	ft
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ó	o	O	©	-ft	o	O	O	o	O
1	1	1	(0	o	1	1	1	I	I
u	P	k	1	1	k	k	k	k	k
	s	ft	fi	ft	ft	ft	ft	ft	ft
H	H	H	1	1	H	H	H	H	H
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O	o	O	H	H	O	o	O	o	o

D	v—	CN	*0		in	*©		CO	Cft
CN	CN	CN	CN	CN	CN	CN	CN	CN	CN

	ac
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	O	ru
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Z-U	ac	o
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O -Ί	II 1
		<\J
	α	o
ac	Γ^ί	X
o
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• t	• ·	s~\
		Pd
3		O
©	tc	xz;
ft	u	1
1	<;	Pi
P	o
k	E	Φ
©	O	Jl
P	x;	fM

8ar : CH,HHCH,COOH

-44

56740

385263

Fig.l Exemplos 3 e 4

NH CE ₇ CE ( CH , , C H ₂ CH

NH

-45-

56740

385263

oo

rH

ro

m

FIGURA 2 Exemplos

u	o
o	o
(Q

3!

Z

α

ru

o

3!

Z

K

z

m

2C

O

o

t;

o

p;

(Nos exemplos 11 e 18, utilizaram-se Z-homoArg(Tos)OH e Z-CH₃Arg(Tos)OH, respectivamente,como ãcido E.protegido).

-46

56740

385263

m

O

f-l

ω

u

<

w\

w

o

Pi

Pi

1

tí

«

•Ci

PJ

Π3

FIGURA 3 Exemplos 19

oc>

o	0
0	0	SC
m	ra
		sc
		0

0	0
0	0	w
w	«
		sc
		0

0 0 ra	o 0 W	Pi
		5 C	α 3

O	0
0	0
ra	ra

o	•
	Z^v
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μ»	tí
α	w
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tsl	ts
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56740

385263

Exemplo 30

Síntese de CH^Tir-Gli-Gli-Phe-Leu-Arg-CH^Arg-D-Ala-OH:

1) Síntese de Z-CH^ArgíTos)-D-Ala-OBu :

Dissolveram-se 3,336 g de Z-CH^Arg(Tos)OH em 20 ml de te traidrofurano. Arrefeceu-se a solução atê -309C. Adicionaram-se 0,77 ml de N-metil-morfolina e o,669 ml de cloro-carbonato de etilo à solução. Decorridos 5 minutos, adicionou-se-lhe uma solução de 1,272 g de HCl-H-D-Ala-OBu^" e 1,16 ml de N-metil-morf olina em 20 ml de tetraidrofurano, e manteve-se a mis tura em agitação até cerca de -59C durante 2 horas. Depois de concentração, dissolveu-se o resíduo em acetato de etilo e la vou-se com uma solução aquosa de NaHCO^ e ãgua, sucessivamen' te. Depois de concentração atê â secura, obtiveram-se 4,16 g de Z-CH^Arg(Tos)-D-Ala-OBu^ vítreo.

CCD: Valor Rf 0,69 (metanol/clorofõrmio, 1:7) rotação õptica: IpCí _D ⁼ “15.59 (C = 1, metanol) análise elementar para ^C29^H4i^N5°7^S:

calculado (%) encontrado(%)

C H

57.70 6.85

57.54 6.59

N

11.60

11.31

2) Síntese de Z-Arg(Tos)-CH^Arg(Tos)-D-Ala-OBu^

4Obtiveram-se 2,87 g de CH_?Arg(Tos)-D-Ala-OBu por meio de redução catalítica de Z-CH₃Arg(Tos)-D-Ala-OBu em presença de Pd/C. Dissolveram-se 3,392 g de Z-Arg(Tos)-OH e 1,188 g de N-hidroxi-benzo-triazol em 10 ml de dimetil-formamida. Adicio naram-se 1,662 g de diciclo-hexil-carbodiimida ã solução arre fecendo com gelo e manteve-se a mistura em agitação num frigo rifico durante 2 dias. Separou-se por filtração o precipitado assim formado e concentrou-se o filtrado. Purificou-se o resíduo por meio de cromatografia de coluna de sílica gel (eluen

-52-

56740

385263

te:metanol/clorofórmio = 1/2OJ para obter 2,04 g de t

Z-Arg(Tos)-CHgArg(Tos)-D-Ala-OBu vitreo.

CCD: Valor Rf 0,57 (metanol/clorofórmio, 1:7) rotação õptica: _D = -31.6? (C = ;, metanol)

análise elementar para ^C42^H59^Ng°io^S2.1/21^0

calculado (.%) encontrado (%)

c	H	N
54.65	6.62	13.66
54.64	6.48	13.72

3) Síntese de Z-Leu-Arg.(Tos) -CH₃Arg(Tos) -D-Ala-OBu

Dissolveram-se 0,629 g de Z-Leu-OH em 15 ml de dimetil-formamida. Arrefeceu-se a solução até -209C. Adicionaram-se 0,261 ml de N-metil-morfolina e 0,227 ml de cloro-carbonato

de etilo â solução. Depois de 5 minutos, adicionou-se uma so

lução de 1,76 g de HCl.H-Arg(Tos)-CH₃Arg(Tos)-D-Ala-OBu^t,pre

parada por meio de redução catalítica de Z-Arg(Tos)-CH_Arg t 3

(Tos)-D-Ala-OBu em presença de Pd/C, e 0,356 ml de N-metil-morfolina em 15 ml de dimetil-formamida, â solução, e mante ve-se a mistura em agitação até cerca de -5?C durante 2 horas. Depois de concentração, dissolveu-se o resíduo em aceta to de etilo e lavou-se a solução com uma solução aquosa de NaHCO₃ e ãgua, sucessivamente. Depois de concentração até â

secura, obtiveram-se 2,11 g de Z-Leu-Arg(Tos)-CH-Arg(Tos)-Dt . ^J

-Ala-OBu vítreo.

CCD: Valor Rf 0,57 (metanol/clorofórmio, 1:7) rotação õptica: Cp<l _D ~ -36.29 (C = 1, metanol) análise elementar para ^C43^H7q^Nxq°h^S2.1/2CH₃COOC₂H,.:

calculado (%) encontrado (%)

c	H	N
56.06	6.96	13.07
56.02	6.85	13.08

-53-

56740

385263

4) Síntese de Z-Phe-Leu-Arg (Tos) -CH^Arg(Tos) -D-Ala-OBu¹'

Dissolveram-se 595 mg de Z-Phe-OH em 15 ml de dimetil-formamida. Arrefeceu-se a solução atê -209C. Adicionaram-se 0,219 ml de N-metil-morfolina e 0,190 ml de cloro-carbonato de etilo ã solução. Depois de 5 minutos, adicionou-se uma so lução de 1,68 g de HCl.H-Leu-ArgOTosi-CH^ArgíTos)-D-Ala-OBu^t, preparada por meio de redução catalítica de Z-Leu-Arg(Tos)-CH₃Arg(Tos) -D-Ala-OBu^" em presença de Pd/C, e 0,299 ml de N-metilmorfolina em 15 ml de dimetil-formamida, â solução, e manteve-se a mistura em agitação a cerca de -59C durante 2 ho ras. Depois de concentração, dissolveu-se o redíduo em acetato de etilo e lavou-se a solução em acetato de etilo com uma solução aquosa de NaHCO^ e ãgua, sucessivamente. Separou-se o dissolvente por destilação e adicionou-se êter ao resíduo. Depois de decantação, seguida por concentração até â secura

obtiveram-se 1,87 g de Z-Phe-Leu-Arg(Tos)-CH_Arg(Tos)-D-Alat 3

-OBu vítreo.

CCD: Valor Rf 0,61 (metanol/clorofórmio, 1:7).

rotação óptica: CpÚ_d = “34.79 (C = 1, metanol)

anãlise elementar para C_cnH__nN. .0. „S_ .C-H^OC-H,.:

^c 57 79 11 12 2 25 25

calculado (%) encontrado C%)

C

58.68

58.66

H

7.19

6.83

N

12.34

12.42

5) Síntese de Boc-CH^Tir (C^Bzl)-Gli-Gli-Phe-Leu-Arg (Tos)-CH^Arg(Tos)-D-Ala-OBu^

Dissolveram-se 969 mg de Boc-CH^Tir(C^Bzl)-Gli-Gli-OH em 12 ml de dimetil-formamida. Arrefeceu-se a solução atê -209C. Adicionaram-se 0,188 ml de N-metil-morfolina e 0,163 ml de cloro-carbonato de etilo à solução. Decorridos 5 minutos, adicionou-se uma solução de 1,67 g de HCl-H-Phe-Leu-Arg (Tos)-CH^ArgíTos)-D-Ala-OBu^t, preparada por meio de redução catali

-54-

56740

385263

tica de Z-Phe-Leu-Arg(Tos)-CH^Arg(Tos)-D-Ala-0bu^t em presença de Pd/C, e o,256 ml de N-metil-morfolina em 15 ml de dimetil-formamida, à solução, e manteve-se a mistura em agitação atê cerca de -59C durante 2 horas. Depois de concentração,dissolveu-se o resíduo em acetato de etilo e lavou-se a solução com uma solução aquosa de NaHCO^ e água, sucessivamente. Separou-se o dissolvente por destilação sob pressão reduzida e solidificou-se o resíduo com metanol/éter para obter 2,196 g de Boc-CH^Tir(Cl₂Bzl)-Gli-Gli-Phe-Leu-Arg(Tos)-CH₃Arg(Tos)-D-Ala-0bu^t.

p.f.: 130 - 1359C (dec.)

CCD: Valor Rf 0,61 (metanol/clorofórmio, 1:7)

rotação óptica: = “40.79 (C = 1, metanol)

análise elementar para C__cH., „_ηΝ_Ί .Ο_Ί ..S_C1_ .2CH-OH:

75 102 14 16 2 2 3

calculado (%) encontrado (%)

C	H	N
55.89	6.70	11.85
55.95	6.42	11.78

6) Síntese de CE^Tir-Gli-Gli-Phe-Leu-Arg-CH^Arg-D-Ala-OH

Dissolveram-se 200 mg de Boc-CH₃Tir (C^Bzl)-Gli-Gli-Phe-Leu-Arg(Tos)-CH^Arg(Tos)-D-Ala-Obu^ em 10 ml de HF a -59C em presença de 0,2 ml de anisol num dispositivo fechado de reacção de fluoreto de hidrogénio (HF). Manteve-se a solução em agitação durante 1 hora e separou-se o HF por destilação do sistema de reacção. Lavou-se o resíduo com éter e em segui da dissolveu-se em âgua. Tratou-se a solução com Amberlite IRA-93 (tipo ácido acético) e em seguida congelou-se. Purificaram-se 120 mg do péptido impuro assim obtido por meio de cromatografia líquida de grande realização jjSIucleosil 5 C 18, 2 0 x 25 cm, eluído com HCl 0,05% (^O/CH^CN, 92:8)/ e conge laram-se para obter 60 mg de CH^Tir-Gli-Gli-Phe-Leu-ArgCH₃Arg-D-Ala-OH.

-5556740

385263

CCD: Valor Rf 0,54 (butanol/ácido acético/piridina/ãgua, 15:5:5:8)

rotação óptica: [/Op = “35.19 (C = 0.4,0 ,ΟΐΝ-HCl)

E.M. (FAB) : 9567 ( Im+H^) anãlise aminoácido:

Gli 1.95(2), Leu 1.00(1), Phe 1.00(1), Arg 0.99(1),

Ala 1.01(1)

(não se calcularam máximos devidos a CH^Tir e CH^ Arg) Exemplo 31

Síntese de CH₃Tir-Gli-Gli.-Phe-Leu-Arg-CH₃Arg-CH₃Ala-OH:

1) Síntese de Z-CH^ArgCTos) -CH^Ala-Obu¹"

Dissolveram-se 4,508 g de Z-CH_Arg(Tos)OH, 1,683 g de t

HCl.CH^Ala-OBu , 1,533 g de N-hidroxibenzotriazol e 1,04 ml de N-metilmorfolina em 10 ml de dimetilformairida. Adicionaram-se 2,144 g de diciclo-hexil-carbodiimida à solução em arrefe cimento com gelo e manteve-se a mistura em agitação num frige rífico atê ao dia seguinte. Separou-se por filtração o precipitado assim formado e concentrou-se o filtrado.Dissolveu-se o resíduo em acetato de etilo e lavou-se a solução com uma so lução aquosa de ãcido cítrico, solução aquosa de NaHCOg e água,sucessivamente. Depois de concentração até à secura, obtiveram-se 4,25 g de Z-CH^ArgCTos)-CH^Ala-Obu vítreo.

CCD: Valor Rf 0,61 (metanol/cloroférmio, 1:7) rotação óptica: [£]_D = -57.89 (C = 1, metanol) anãlise elementar para C^H^N^O^S:

calculado (%) encontrado (%)

58.33

58.11

7.02

6.88

11.33

11.41

2) Síntese de Ζ-Arg (Tos) -CH^Arg (Tos) -CH^Ala-OBu¹'

Dissolveram-se 2,90 g de CH₃Arg(Tos)-Cí^Ala-OBu¹', obti

-56-

56740

385263

dos por meio de redução catalítica de Z-CH₃Arg(Tos)-CH^Ala-OBu*' em presença de Pd/C. Dissolveram-se 3,329 g de

Z-Arg(Tos)OH e 1,166 g de N-hidroxi-benzo-triazol em 10 ml

de dimetil-formamida. Adicionaram-se 1,359 g de diciclo-hexil-carbodiimida â solução arrefecendo com gelo e agitou-se a

mistura num frigorifico durante 2 dias. Separou-se por filtra

ção o precipitado assim formado e concentrou-se o filtrado.

Purificou-se o resíduo por meio de cromatografia em coluna de

sílica gel (eluente: MeOH/CHCl, = 1/15) para obter 2,1 g de ³ t

Z-Arg(Tos)-CH₃Arg(Tos)-CH₃Ala-0Bu vitreo.

CCD: Valor Rf o,46 (metanol/clorofõrmio, 1:7) rotação óptica: L°O_D = “57.1? (C = 1, metanol) análise elementar para . 3/2H₂O:

calculado (%) encontrado (%)

C

54.07

54.10

H

6.75

6.35

N

13.20

13.18

3) Síntese de Z-Leu-Arg(Tos)-CH₃Arg(Tos)-C^Ala-OBu'

Dissolveram-se 247 g de Z-Leu-OH em 10 ml de dimetil-formamida. Arrefeceu-se a solução atê -209C. Adicionaram-se

0,102 ml de N-metil-morfolina e 0,089 ml de cloro-carbonato

de etilo à solução. Depois de 5 minutos, adicionou-se uma so

lução de 700 mg de HCl.H-Arg(Tos)-CH₃Arg(Tos)-CH₃Ala-0Bu¹',

obtidos por meio de redução catalítica de Z-Arg (Tos) '•CH.Argt 3

- (Tos)-CH^la-OBu em presença de Pd/C, e 0,139 ml de N-metil·

-morfolina em 10 ml de dimetil-formamida, ã solução, e a mis tura foi mantida em agitação até cerca de -59C durante 2 horas. Depois de concentração, o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo e a solução foi lavada com uma solução aquosa de NaHCO₃ e ãgua, sucessivamente. Separou-se o dissolvente por destilação e juntou-se oeter ao resíduo. Depois de decantação, seguida por concentração até â secura, obtiveram-se

-57-

56740

385263

0,86 g de Z-Leu-Arg(Tos)-CH^Arg(Tos)-CH^Ala-Obu vítreo.

CCD: Valor Rf 0,48 (metanol/clorofôrmio, 1:7)

rotação óptica: C°Ú_D = -60.39 (C = 1, metanol)

análise elementar para C _AnH__N- _O. . S„ .C_nH_rOC„H_[.:

49 72 10 11 2 25 25

calculado (%) encontrado (%)

c	H	N
57.07	7.41	12.55
56.83	7.02	12.64

4) Síntese de Z-Phe-Leu-Arg(Tos) -CHgArgíTos) -CUgAla-OBu**

Dissolveram-se 224 mg de Z-Phe-OH em 7 ml de dimetil-foi mamida. Arrefeceu-se a solução atê -209C. Adicionaram-se 0,082 ml de N-metil-morfolina e 0,071 ml de cloro-carbonato de etilo à solução. Decorridos 5 minutos, uma solução de 640 mg de HCl.H-Leu-Arg(Tos)-CHgArgCTos)-CHgAla-Obut, preparado por redução catalítica de Z-Leu-Arg(Tos)-CH^-Arg(Tos)-CH^Ala-OBu^ em presença de Pd-C, e o,112 ml de N-metilmorfolino em 7 ml de dimetilformamida foram adicionados ã solução e a mistura foi mantida em agitação até cerca de -59C durante 2 horas.Depois de concentração, dissolveu-se o resíduo em acetato de eti lo e lavou-se a solução com uma solução aquosa de NaHCOg e água, sucessivamente. Separou-se o dissolvente por destilação e adicionou-se éter ao resíduo. Depois de decantação seguida por concentração até â secura, obtiveram-se 770 mg de Z-Phe-Leu-Arg(Tos)-CH^Arg(Tos)-CH^Ala-Obu^ vítreo.

CCD: Valor Rf 0,54 (metanol/clorofôrmio, 1:7) rotação óptica: ⁼ "59,69 (C=l, metanol)

análise elementar para ^C5g^Hg]_^N]_i°2_2^S2*^C2^H5^OC2^H5^:

calculado (%) 58,98 7,26 12,20

encontrado (%) 58,68 6,91 12,24

-585) Síntese de Boc-CH^Tir (C^Bzl)-Gli-Gli-Phe-Leu-Arg (Tos)56740

385263

-CH₃Arg(Tos)-CH₃Ala-Obu^t

Dissolveram-se 350 mg de Boc-CH₃Tir(Cl^Bzl)-Gli-OH em 5 ml de dimetil-formamida. Arrefeceu-se a solução até -209C. Adicionaram-se 0,068 ml de N-metil-morfolina e 0,059 ml de clorocarbonato de etilo à solução. Decorridos 5 minutos, uma

solução de 610 mg de HCl.H-Phe-Leu-Arg(Tos)-CH Arg-(Tos)t ~ <

-CH-Ala-Obu , preparados por meio de redução catalítica de

^J t

Z-Phe-Leu-Arg(Tos)-CH₃Arg(Tos)-CH₃Ala-Obu em presença de Pd/C, e 0,092 ml de N-metilmorfolina em 6 ml de dimetil-forma mida foi adicionada â solução e a mistura foi mantida em agitação até cerca de -59C durante 2 horas. Depois de concentração, dissolveu-se o resíduo em acetato de etilo e lavou-se a solução com uma solução aquosa de NaHCO₃ e água, sucessivamen te. Depois de concentração, seguida por solidificação com metanol/éter, obtiveram-se 760 mg de Boc-CH-Tir(Cl„Bzl)-Gli-Gli-Phe-Leu-Arg(Tos)-CH₃Arg(Tos)-CH₃Ala-Obu .

p.f. 125 - 1339 C (dec.)

CCD: Valor Rf 0,55 (.metanol/clorof <5 rmio, 1:7) rotação õptica: = -56.49C (C = 1, metanol)

análise elementar para C^gH^g^N^^O^gS₂Cl2.1/2C₂H₃OC₂H₃:

calculado (%) encontrado (%)

c	H	N
57.06	6.69	11.94
56.71	6.46	11.49

6) Síntese de CH₃Tir-Gli-Gl·i-Phe-Leu-Arg-CH₃Arg-CH₃Ala-OH

Dissolveram-se 210 ml de Boc-CH_Tir(Cl„Bzl)-Gli-Gli^J t ^z

-Phe-Leu-Arg(Tos)-CH₃Arg(Tos)-CH₃Ala-Obu em 10 ml de HF a temperatura de -59C em presença de 0,2 ml de anisol no dispositivo de reacção de HF de um sistema fechado. A solução foi mantida em agitação durante 1 hora e em seguida separou-se HF por destilação do sistema de reacção. Lavou-se o resíduo com eter e dissolveu-se em água. Tratou-se a solução com Amberlite

-59-

56740

385263

IRA-93 (tipo ácido acético) e em seguida congelou-se. Purificaram-se 130 mg do péptido impuro assim obtido por meio de cromatografia líquida de grande realização [Nucleosil 5 C 18,2 0 x 25 cm, eluído com HC1 0,05% (H₂O/CH₃CN, 91:9)] e congelaram-se para obter 50 mg de CH^Tir-Gli-Gli-Phe-Leu-Arg-CH^Arg-CH^-Ala-OH.

CCD: Valor Rf 0,54 (butanol/ãcido acêtico/piridina/ /ãgua, 15:5:5:8)

rotação õptica: = -64.79 (C = 0.4, 0.01N-HC1)

E.M. (FAB): 981 (|m + h| ⁺)

análise aminoãcido:

Gly 1.92(2), Leu 1.04(1), Phe 1.00(1), Arg 0.986 (1)

(Não se calcularam máximos devidos a CH^Tir, CH^Arg e CH₃Ala)

Exemlos 32 a 41

Efectuou-se a síntese dos compostos indicados no Quadro 7 pelo mesmo processo corrente da fase líquida que nos Exemplos 3o e 31. Nestas experiências, efectuaram-se as sínteses de de rivados dinorfina modificados nas posições 1 a 3 (Tir-Gli-Gli) nas posições 4 a 8 (Phe-Leu-Arg-Arg-Ile), nas posições 4 a 9 (Phe-Leu-Arg-Arg-Ile-Arg) e nas posições 4 a 10 (Phe-Leu-Arg-Arg-Ile-Arg-Pro) pelo processo de vários passos a partir do terminal C- em cada péptido. Seguidamente, condensaram-se os derivados nas posições 1 a 3 e os das posições 4 a 8, 4 a 9 ou 4 a 10 conjuntamente pelo método DCC-HOBt ou método do anidrido ácido misturado.Separadamente todos os grupos protectores com fluoreto de hidrogénio (HF) e purifiocu-se o produto por meio de cromatografia líquida de grande realização, utilizando um portador de fase invertido. Os passos da reacção na síntese dos péptidos protegidos respectivos estão indicados nas figuras 6 a 8. Os resultados da determinação de rotação õpticajc’²'] 70_f valor Rf de CCD e análise de aminoãcido dos péptidos pretendidos obtidos conforme atrás indicado estão indicados no Quadro 8.

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385263

QUADRO 7

Exemplo Composto

32 CH₃Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH₃Arg-Ile-OH

33 CH₃Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH₃Arg-Asp-OH

34 CH₃Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH₃Arg-D-Leu-OH

35 CH₃Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH₃Arg-D-Glu-OH

36 CH ₃Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH₃Arg-CH ₃1le-OH

37. CH₃Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH₃Arg-Sar-OH

3 8 CH₃Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg=CH₃Arg-p-Ala-OH

39 CH₃Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH₃Arg-D--Leu-Asp-OH

40 CH₃ Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu“Arg-CH₃Arg-D-Leu-Phe-OH

41 CH₃Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH₃Arg-D-Leu-Arg-DGlu-OH

-61-

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385263

Fig.6

Exemplos 32 a 38

CH3Tyr(Cl2Bzl) Gly Gly Phe Leu Arg(Tos)CH3Arg(Tos)R
						Z	OH H	OBuh
						Z		OBuh
					Z	OH H		OBut
					Z			OB^
				Z	OH H			OBufc
				Z				OBu1"
			Z	OH H				OBuh
			Z					OBut
Boc			OH H					OBufc
Boc								OBuh
								OBuh

R:Ile, Asp(OBu^), D-Leu, D-Glu(OBu^), CH^Ile, Sar, β-Ala

Fig. 7 Exemplos 39 e 40

CH^TyríClgBzl) Gly Gly Phe Leu Arg (Tos) CH^Arg (Tos) D-Leu R

							Z	OH H	OBuh
							Z		CBu1
						Z	OH H		OBu^
						Z			OBuh
					Z	OH H			OBu^
					Z				OBuh
				Z	OH H				OBu^
				Z					OB^
			Z	OH H					CBut
			Z						OB^
Boc			OH H						OBut
Boc									CBut

RzAspíOB^), Phe

-62-

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385263

Exemplo 41

Fig. 8

CH^TyríC^Bzl) Gly Gly Phe Leu Arg(Tos) CH^ArgÇTos) . D-Leu Arg(Tos) D-Glu(0Bu5

+> CQ O

+1 P CQ O

+) P CQ O

•P P CQ O

P P W O

+) P a o

-P P CQ O

•P P CQ O

+> P PQ O

-P P PQ O

-P P PQ O

+> P PQ O

+J P a o

+> P a o

tn a o

N

N

tn a o

N

N

a a o

N

N

a a o

N

N

a a o

C<3

a a o

N

N

a a o

0 0 a

o 0 a

-6356740

385263

Na análise do aminoácido, sõ se calcularam as proporções dos aminoácidos de Gli, Leu, Phe, Arg, Ile, Asp e Glu.

determinação QxJ C = 0,4, 0,01N-HCl

determinação valor Rf CCD; butanol/ãcido acético/piridina/ /água = 15:5:5:8

Alguns compostos obtidos nos exemplos foram experimentados de maneira igual â descrita anteriormente.

-64-

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QUADRO 9

	Método do beliscão na cauda (ED50, mg/Kg)
I.V.	s.e.
Exemplo 30	0.7	1.9
31	0.5	1.2
34	2.1	0.9
36	0.2	0.4
38	1.7	0.6
Dinorfina (1-13)	25.0

QUADRO 10

	Método de Vas Deferens do coelho ICj-θ (nM)
Exemplo 30	17.8
31	24.5
36	11.2
Dinorfina A (1-17)	17.4

QUADRO 11

Composto em experiência	Método do beliscão na cauda DE5Q(mg/Kg)	Dose letal min. (mg/Kg)
Exemplo 30	1.9	> 100
Exemplo 31	1.2	>100
Exemplo 36	0.4	>100

-65-

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O Depósito do primeiro pedido para o invento acima descrito, foi efectuado no Japão em 9 de Novembro de 1984 sob ο N9236.076/84

Claims (2)

1. REIVINDICAÇÕES

   Processo para a preparação de polipeptideos da fórmula geral seguinte:

   L-Tyr-A-Gly-B-C-D-E-F

   1 2

   na qual R e R podem ser iguais ou diferentes e cada um representa um ãtomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior ou alcenilo inferior, A representa um D-aminoãcido, Gly ou Sar, desde que quando o D-aminoãcido fôr D-Cys esteja ligado com L-Cys ou D-Cys em posição 5 mediante uma ligação S-S para efectuar fecho de anel intramolecular, B representa L-Phe ou D-Phe em que o anel benzeno pode ser substituido ou umseu de rivado -N-alquilo, C representa um L-aminoãcido, D-Cys ou um seu derivadociL-N-alquilo, D e E representam, cada um, um

   aminoácido, L-ou D-bãsico ou um seu derivado N-alquilo, F _ 3 3 representa um grupo da formula: -OR (na qual R e H ou grupo alquilo inferior), um grupo da fórmula -N<S 5

   qual R⁴ e R⁵ são iguais ou diferentes e representa, cada um, H ou um grupo alquilo inferior), um grupo da fórmula -G-OR°(na

   um

   (na

   qual G é um ácido o¹—aminoácido ,B-alanina ãcido y-aminobutírico ou um seu derivado cA -N-alquilo e R⁶ representa H ou um grupo alquilo inferior), um grupo da fórmula:

   -G-N

   R'

   -667 8

   na qual (G ê conforme definido acima e R e R podem ser

   iguais ou diferentes e cada um representa H ou um grupo alqui

   - Q

   lo inferior), um grupo da formula: -G-L-Arg-OR^ ou

   o 9

   -G-D-Arg-OR (na qual G e conforme definido acima e R representa H ou um grupo alquilo inferior ou um grupo da fórmula:

   56740

   385263

   R¹⁰ R¹⁰

   X /

   -G-L-Arg-Nx ou -G-D-Arg-N<

   \_R11 \ll

   conforme definido acima e e R^^ podem ser iguais ou diferentes e cada um representa H ou um grupo alquilo inferior) um grupo da fórmula -G-H-OR12 na qual G é definido como acima ,H é um grupo aminoácido neutro ou um grupo aminoácido com fun ção ácida e R12 ê hidrogénio ou um grupo alquilo inferior;ou um grupo da fórmula: -G-Arg-I-OR13 na qual I é um grupo d-aminoãcido e R13 é hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, desde que todos os aminoácidos que constituem o polipeptideo da fórmula acima não representem ao mesmo tempo um L-aminoãcido da fórmula geral:

   R

   nh₂-Íh-cooh

   (na qual R representa um grupo correspondente a uma fórmula estrutural de um aminoácido destituído de um grupo da fórmula -CH-COOH

   I

   nh₂

   ou dos seus sais farmacòlogjcamente aceitáveis, processo esse caracterizado pelo facto de todos os aminoácidos estarem ligados, em sequência, com início no terminal -C, ou bem assim de se conduzir a condensação dos fragmentos â posição de Gly, independentemente de ser também possível conduzir a condensa ção dos fragmentos a qualquer posição que se deseje.

   O processo, tanto de fase sólida, como de fase líquida ê caracterizado ainda pelo facto de se eliminarem os grupos protectores do peptídeo e deste último ser purificado mediante repetição das reacções das formulas seguintes para se obter a síntese do peptídeo, sendo as fases do referido processo ilustradas com referencia ao processo de fase líguida:
2. 2 2 11 x^z y^z χ γ^χ

   II |l

   R" - N - CHCOOH + HN - CHCOR’ condensação

   -67-

   56740

   385263

   eliminação do grupo

   amino

   R" X²

   J

   N 2 1 Y^Z Χ^Χ I i CHCON

   Y

   I

   CHCOR'

   R" f /

   CHCON

   Y¹

   I

   CHCOR'

   í

   HN

   Y X I I CHCON

   Y¹

   I

   CH COR'

   em que X^ e X^ representam, cada um, H ou um grupo alquilo, Ίο -Y e Y^z representam um cadeia lateral de aminoácido e R' e R" representam um grupo protector ou um resíduo de peptideo;

   2^a. Processo para a preparação de polipeptideos da fórmula ge ral seguinte:

   L-Tyr-A-Gly-B-C-D-E-F

   1 ?

   na qual R e R podem ser iguais ou diferentes e cada um representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior ou alcenilo inferior, A representa um D-aminoãcido, Gly ou Sar, desde que quando o D-aminoãcido for D-Cys, esteja ligado com L-Cys ou D-Cys na posição 5 mediante uma ligação S-S para efectuar fecho de anel intramolecular, B representa L-Phe ou D-Phe em que o anel benzeno pode ser substituído ou um seu derivado oG-N-alquilo, C representa um L-aminoãcido, D-Cys ou um seu derivado cG-N-alquilo, D e E representam, cada um,um

   aminoãcido L- ou D-bãsico ou um seu derivado-N-alquilo, F - 3 3 representa um grupo da formula: -OR (na qual R e H ou um grupo alquilo inferior) , um grupo da fórmula: -N<T ^5 (na qual R⁴ e R"⁵ são iguais ou diferentes e cada um representa H ou um

   g

   grupo alquilo inferior), um grupo da fórmula: -G-OR (na qual G ê um L- ou D-aminoãcido ou Gly ou um seu derivado e-A-N-alqui

   g

   lo e R representa H ou um grupo alquilo inferior), um grupo ,7

   da fórmula: -G-N

   (na qual G é conforme definido acima

   -6856740

   385263

   7 8

   e R e R podem ser iguais ou diferentes e cada um representa

   H ou um grupo alquilo inferior), um grupo da fórmula:-G-L9 9

   -Arg-OR ou -G-D-Arg-OR (na qual G é conforme definido acima 9

   e R representa H ou um grupo alquilo inferior ou um grupo da fórmula

   (na qual G ê conforme definido acima e

   _10 ,11 j

   R e R podem

   ser iguais ou diferentes e cada um representa H ou um grupo alquilo inferior), um grupo da fórmula: -G-H-OR12 na qual G e definido como acima, H ê um grupo aminoacido neutro ou um gru po aminoácido com função ácida e R12 é hidrogénio ou um grupo alquilo inferior; ou um grupo da fórmula: -G-Arg-I-OR13 na qual I ê um grupo D-aminoãcido e R13 é hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, desde que todos os aminoácidos que constituem o polipeptídeo da fórmula acima não representem, ao mesmo tempo, um L-aminoácido da fórmula geral:

   NH₂-CH-COOH

   (na qual R representa um grupo correspondente a uma fórmula estrutural de um aminoácido destituído de um grupo da fórmula -CH-COOH, ou dos seus sais farmacològicamente aceitáveis, caNH,

   racterizado pelo facto de se formar um polipeptídeo

   que tem uma estrutura da fórmula acima mas numa forma protegi da por um método apropriado, e se separarem em seguida os gru pos protectores para obter um polipeptídeo da fórmula acima, e, se fôr necessário, se transformar o polipeptídeo num seu sal farmacològicamente aceitável.