KR890002774B1

KR890002774B1 - 헨테트라콘타펩티드 crf 및 그 동족체와 관련된 펩티드류의 제조방법

Info

Publication number: KR890002774B1
Application number: KR8202541A
Authority: KR
Inventors: 워어커 베일 쥬니어 윌리; 스피이스 죠우아킴; 로오라 리비어 캐서린; 에드워어드 프레드릭 리비어 지인
Original assignee: 델버어트 어어니스트 그란쯔; 더 솔크 인스티튜트 훠 바이올로지칼 스터디이즈
Priority date: 1981-06-08
Filing date: 1982-06-07
Publication date: 1989-07-28
Also published as: CA1243301A; NZ200711A; DK156957C; GR75679B; ES8401446A1; DK254982A; AU8445582A; IE53488B1; ATE6505T1; IE821330L; IL65937A0; KR840000477A; IL65937A; EP0067608A1; DK156957B; PH20364A; JPS642600B2; JPS57212149A; EP0067608B1; AU554676B2

Abstract

내용 없음.

Description

[발명의 명칭]

헨테트라콘타펩티드 CRF 및 그 동족체와 관련된 펩티드류의 제조방법

[발명의 상세한 설명]

본 발명은 헨테트라콘타펩티드 CRF와 관련된 펩티류 및 그런 펩티드를 이용한 포유동물의 약제처치법에 관한 것이다. 좀더 특히 본 발명은 CRF와 CRF의 동족체 및 CRF 또는 그 동족체를 함유하는 약제조성물 및 CRF 또는 그 동족체를 사용하는 포유동물의 처치법에 관한 것이다.

시상하부가 뇌하수체전영코르티코트로핀 세포 분비 기능의 조절에 핵심적 역할을 한다는 개념이 실험 및 임상조사에 의해 지지를 받고 있다. 25년 이전부터 이미 길러민, 로젠베르그, 사프란, 쉘리가 각기 시상하부내에 생체외 또는 장기배양물 중의 뇌하수체의 ACTH 분비율을 증가시키는 인자가 존재 한다는 것을 밝혀냈다. 현재까지 어떤 분지촉진제도, 생리적 코르티코트로핀유리 인자인 CRF에 미치는 것이 없다.

따라서 거대 CRF의 정제법이 추구되어 왔다.

정제의 출발물질은 솔크연구소의 신경내분비 연구실에서 새롭게 추출한 490,000 미리양의 사상하부의 초기부수분획물로서 문헌(Burgus et al. Hypothalamus and Endocrine Functions(F. Labrie et al eds) Plenum, New York, 1976, P355)에 기재되어 있다. 과거의 어떤 정제의 시도에서도 이 거대분자량 CRF가 약 1% 이상의 순도로 얻어진바 없었다.

사우바진(Sauvagime)은 남미 개구리 휠로메두사 사우바게이(Phyllomedusa sauvagei)의 피부로부터 분리한 40-잔기위 아미드화된 통상의 유사 펩티드로서 에르스파머등에 의해 그 특성이 연구되었으며 문헌(Regulatory Peptides vol 2(1981), PP. 1-13)에 기재되어 있다. 사우바진의 구조는 다음과 같다.

pGlu-Gly-Pro-Pro-Ile-Ser-Ile-Asp-Leu_Ser-Leu-Glu-Leu-Leu-Arg-Lys-Met-Ile-Glu-Ile-Glu-Lys-Gln-Glu-Lys-Glu-Lys-Gln-Gln-Ala-Ala-Asn-Asn-Arg-Leu-Leu-Leu-Asp-Thr-Ile-NH₂.

사우바진은 포유동물의 혈압을 강하시키며 ACTH 및 β-엔도르핀의 분비를 자극하는 생물학적 활성을 가진것으로 보고되어 있다.

CRF는 이제 분리 정제되어 하기구조의 헨테트라콘타펩티드로서 그 특성을 나타내고 있다.

H-Ser-Gln-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Thr-Lys-Ala-Asp-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Asg-Lys-Leu-Leu-Asp-Ile-Ala-NH₂

또한 아뮤닌(Amunine)으로 불리우기도 한다. 41-잔기펩티드의 합성이 완결되었으며 합성 CRF 및 분리된 CRF 모두 생체내 및 생체외에서 ACTH와 β-엔도로핀활성을 자극하는 것으로 밝혀졌다. 합성 CRF는 장기간 혈압을 저하시키는 것으로 나타났다. 그 결과 CRF는 거의 순수한 형태(즉 거의 불순한 생물학적 추출물이나 그와 관련된 합성복제물의 찌꺼기가 거의 없는)로 이용가능하게 되었으며 적어도 약 93% 이상의 순도가 실지로 얻어져서 임상시험에 이용할 수 있게 되었다.

하기 구조의 41-잔기펩티드 CRF의 동족체는 적어도 거의 동정도의 생물학적 활성을 갖는다.

Z-R₁-Pro-Pro-Ile-Ser-R₈-Asp-Leu-R₁₁-R₁₂-R₁₃-Leu-Leu-Arg-R₁₇-R₁₈-R₁₉-Glu-R₂₁-R₂₂-Lys-R₂₄-R₂₅-R₂₆-R₂₇-R₂₈-Gln-Gln-Ala-R₃₂-R₃₃-Asn-Arg-R₃₆-Leu-Leu-Asp-R_40-R₄₁-NH₂.

상기구조에서 Z은 수소 또는 C₇이하의 아실기이거나 10 잔기까지의 펩티드이며 ; R₁은 Ser-Gln-Glu 또는 pGlu-Gly 또는 Gln-Glu 또는 Glu 또는 D-Ser-Gln-Glu 또는 D-pGlu-Gly 또는 desR₁이며 ; R₈, R₁₂, R₁₉, 및 R₂₄는 Leu, Ile, Ala, Gly, Val, Nle, Phe 및 Gln으로 구성된 군으로부터 선택되며 ; R₁₁은 Thr 또는 Ser이며 ; R₁₃은 His, Tyr 또는 Glu이며 ; R₁₇은 Glu 또는 Lys이며 R₁₈은 Val 또는 Met이며 R₂₁은 Met, Met(0), Ile, Ala, Leu, Gly, Nle, Val, Phe 또는 Gln이며 ; R₂₂는 Thr 또는 Glu이며 ; R₂₅는 Asp 또는 Glu이며 ; R₂₆는 Gln 또는 Lys이며 R₂₇은 Leu, Ile, Ala, Gly, Val, Nle, Phe, Asp, Asn, Gln 또는 Glu 이며 ; R₂₈은 Ala 또는 Lys이며 ; R₃₂는 His, Tyr 또는 Ala이며 ; R₃₃은 Ser, Asn, Thr 또는 Ala이며 ; R₃₆은 Lys 또는 Leu이며 ; R₄₀은 Leu, Ile, Ala, Gly, Val, Nle, Phe, Gln또는 Thr이며 ; R₄₁은 Ala, Ile, Gly, Val, Leu, Nle, Phe, Gln 또는 desR₄₁이며 단 R₁₃이 His일때 R₁₇은 Glu, R₁₈은 Val, R₂₂는 Thr, R₂₆은 Gln, R₂₈은 Ala, R₃₆은 Lys이며 R₁₃이 Glu이고 R₁₇이 Lys, R₁₈이 Met, R₂₂가 Glu, R₂₆이 Lys, R₂₈이 Lys, R₃₂가 Ala, R₃₆가 Leu일때 이때 R₁, PGlu-Gly이 아니거나, R₈이 Ile이 아니거나 R₁₁이 Thr이거나 R₁₂가 Leu이 아니거나 R₁₉가 Ile이 아니거나 R₂₁이 Ile이 아니거나 R₂₄이 Gln이 아니거나 R₂₇이 Glu이 아니거나 R₃₃이 Asn이 아니거나 R₄₀이 Thr이 아니거나 R₄₁이 Ile이 아니어야 한다.

본 발명에 따른 약제조성물에는 CRF 및 그 동족체 또는 이를 제약상 허용되는 액체나 고체담체에 분산시킨 그의 무독성부가염이 포함된다.

이런 펩티드 및 그의 제약상 허용되는 부가염을 본 발명에 따라 포유동물에 투여함으로써 ACTH, β-엔도르핀, β-리포트로핀 및 코르티코스테론의 분비조절 또는 혈압강하 작용 또는 기분, 행동 및 위장관기능에 영향을 미칠 수 있다.

CRF는 양의 시상하부 추출물로부터 분리되어 정제된후 특성지워진다. 펩티드를 정의하는데, 사용되는 명칭은 아미노기를 좌측, 카복실기를 우측에 표시하는 종래의 표시법에 따랐으며 문헌(Schroder & Lubke, "The Peptides", Academic Press(1965))에 기재되어 있다. 아미노산잔기가 이성체를 가질때는 특별히 따로 병시하지 않은한 아미노기는 L체이다.

본 발명은 하기 구조의 CRF 및 그의 동족체를 제공한다.

Z-R₁-Pro-Pro-Ile-Ser-R₈-Asp-Leu-R₁₁-R₁₂-R₁₃-Leu-Leu-Arg-R₁₇-R₁₈-R₁₉-Glu-R₂₁-R₂₂-Lys-R₂₄-R₂₅-R₂₆-R₂₇-R₂₈-Gln-Gln-Ala-R₃₂-R₃₃-Asn-Arg-R₃₆-Leu-Leu-Asp-R₄₀-R₄₁-NH₂.

상기 구조에서 Z은 수소 또는 C₇이하의 아실기 이거나 10 잔기 까지의 펩티드이며 ; R₁은 Ser-Gln-Glu 또는 pGlu-Gly 또는 Gln-Glu 또는 Glu 또는 D-Ser-Gln-Glu 또는 D-pGlu-Gly 또는 desR₁이며 ; R₈, R₁₂, R₁₉, R₂₄및 R₄₀은 Leu, Ile, Ala, Gly, Val, Nle, Phe 및 Gln으로 구성된 군으로부터 선택되며 ; R₁₁은 Thr 또는 Ser이며 R₁₃은 His, Tyr 또는 Glu이며 ; R₁₇은 Glu 또는 Lys이며 R₁₈은 Val 또는 Met이며 R₂₁은 Met, Met(0), Ile, Ala, Leu, Gly, Nle, Val, Phe 또는 Gln이며 ; R₂₂는 Thr 또는 Glu이며 ; R₂₅는 Asp 또는 Glu이며 ; R₂₆는 Gln 또는 Lys이며 R₂₉은 Leu, Ile, Ala, Gly, Val, Nle, Phe, Asp, Asn, Gln 또는 Glu이며 ; R₂₈은 Ala 또는 Lys이며 ; R₃₂는 His, Tyr 또는 Ala이며 ; R₃₃은 Ser, Asn, Thr 또는 Ala이며 ; R₃₆은 Lys 또는 Leu이며 ; R₄₁은 Ala, Ile, Gly, Val,^sLeu, Nle, Phe, Gln 또는 desR₄₁이며 ; R₄₀은 Leu, Ile, Ala, Glu, Val, Nle, Phe, Gln 또는 Thr이며 ; 단 R₁₃이 His일때 R₁₇은 Glu, R₁₈은 Val, R₂₂는 Thr, R₂₆은 Gln, R₂₈은 Ala, R₃₆은 Lys이며 R₁₃이 Glu이고 R₁₇이 Lys, R₁₈이 Met, R₂₂가 Glu, R₂₆이 Lys, R₂₈이 Lys, R₃₂가 Ala, R₃₆가 Leu일때 R₁, PGlu-Gly이 아니거나, R₈이 Ile이 아니거나 R₁₁이 Thr이거나 R₁₂가 Leu이 아니거나, R₁₉가 Ile이 아니거나, R₂₁이 Ile이 아니거나, R₂₄가 Gln이 아니거나, R₂₇이 Glu이 아니거나 R₃₃가 Asn이 아니거나 R₄₀이 Thr이 아니거나 R₄₁이 ILe이 아니어야 한다. 펩티드는 고상법(固相法) 부분적 고상법, 또는 분절축합 또는 용액첨가법등 적당한 방법으로 합성된다. CRF 및 특정동족체는 또한 근래 개발된 재조합 DNA법에 의해서도 합성될 수 있다.

펩티드의 화학합성은 각종 아미노산부분의 가변성측쇄기를 적당한 보호기로 보호하는 것이 보통이며 이는 이 기가 완전히 제거될때까지 그 부위에서 일어나는 화학반응을 방지하기 위한 것이다. 물질이 카복실기에서 반응하는 동안 아미노산이나 또는 하나의 분절상의 α-아민기를 보호한후 이어 그 부위에 종속반응이 일어나게끔 α-아미노 보호기를 선택적으로 제거하는 것이 통례이다.

따라서 통상 합성의 한단계로서 펩티드쇄내의 바라는 서열에 있으며 측쇄보호기를 가지고 있는 아미노산잔기들이 중간화합물로서 생성된다. 또한 하기 구조의 중간체도 본 발명의 범주에 포함된다.

X¹-R₁-Pro-Pro-Ile-Ser(X²)-R₈-Asp(X⁵)-Leu-R₁₁(X²)-R₁₂-R₁₃-Leu-Leu-Arg(X³)-R₁₇-R₁₈-R₁₉-Glu(X⁵)-R₂₁-R₂₂-Lys(X⁶)-R₂₄-R₂₅-R₂₆-R₂₇-R₂₈-Glu(X⁴)-Ala-R₃₂-R₃₃-Asn(X⁴)-Arg-(X³)-R₃₆-Leu-Leu-Asp(X⁵)-R₄₀-R₄₁-X⁷.

상기 구조에서 R군은 상기 정의한 바와 같으며 X¹은 수소이거나 α-아미노보호기이다.

X¹으로 표시되는 α-아미노보호기는 폴리펩티드의 단계적 합성분야에서 사용되어온 기지의 것들이다.

α-아미노보호기 중에서 (1) 아실형보호기 : 예컨대 N-말단에서만 사용하는 것이 바람직한 포르밀, 아크릴일(Acr) 벤조일(Bz) 및 아세틸 : (Ac), (2) 방향족 우레탄형 보호기 : 예컨데 벤질옥시카보닐(z) 및 P-클로로벤질옥시카보닐, P-니트로벤질옥시카보닐, P-브로모벤질옥시카보닐, P-메톡시벤질옥시카보닐과 같은 치완된 벤질옥시카보닐, (3) 지방족 우레탄 보호기 : t-부틸옥시카보닐(BOC) 디이소프로필메톡시카보닐, 이소프로필옥시카보닐, 에톡시카보닐 알릴옥시카보닐, (4) 시클로알킬 우레탄 보호기 : 예컨대 시클로헥실옥시카보닐 아다만틸옥시카보닐 및 시클로헥실옥시카보닐, (5) 티오우레탄형 보호기 : 예컨대 페닐티오카보닐 바람직한 α-아미노보호기는 BOC이다.

X²는 트레오닌 및 세린의 히드록실 보호기로서 아세틸(Ac), 벤조일(Bz), 테트라부틸, 트리페닐메틸(trityl), 테트라히드로피라닐, 벤질에테르(Bzl) 및 2,6-디클로로벤질(DCB)로 부터 선택하는 것이 바람직하다. 가장 바람직한 보호기는 벤질 에테르이다. X²는 수소일 수 있으며 이는 히드록실기상에 보호기가 없다는 것을 뜻한다.

X³는 알기닌의 구아니디노기의 보호기로서 니트로 P-톨루엔설포닐(Tos), Z, 아다만틸옥시카보닐 및 t-부틸옥시카보닐 또는 수소로부터 선택하는 것이 바람직하며 P-톨루엔설포닐 가장 바람직하다.

X⁴는 수소 또는 아스파르긴 또는 글루타민의 아미노기의 보호기로서 크산틸(Xan)이 바람직하다.

X⁵는 또는 아스파르긴산 또는 글루타민산의 β-또는 α-카복실기의 에스테르형성보호기로서 벤질, 2, 6-디클로로벤질, 메틸, 에틸 및 t-부틸에스테르로 구성된 군으로부터 선택하는 것이 바람직하며 OBzl이 가장 바람직하다.

X⁶는 수소 또는 라이신의 측쇄아미노치환을 위한 보호기이다. 적당한 측쇄아미노보호기는 z, z-클로로벤질옥시카보닐(2-cl-z), P-톨루엔설포닐, t-아밀옥시카보닐(Aoc) 및 부틸옥시카보닐 또는 상술한 바와같은 방향족 또는 지방족 우레탄형 보호기이다.

메치오닌이 존재할 경우 유황은 원한다면 산소로 보호할 수 있다. 히스티딘이 존재할 경우 이미다졸 질소는 P-톨루엔설포닐, 또는 2,4-디니트로페닐(DNP)에 의해 보호될 수 있다. 티로신이 존재할 경우 히드록실기는 2,6-디클로로 벤질에 의해 보호될 수 있다.

측쇄 아미노 보호기는 합성중 α-아미노기의 탈보호과정에서 제거되지 않는 것이면 된다. 따라서 α-아미노보호기와 측쇄아미노 보호기는 동일할 수 없다.

X⁷은 OH, OCH₃, 아미드류, 히드라지드류, 에테르류 및 하기 구조로 표시되는 고형수지 지지체에 결합시키기 위해 고상 합성에서 사용되는 아미드 고정 결합으로 구성된 군으로부터 선택된다.

-OCH₂-벤질-폴리아미드 수지 지지체

-NH-벤즈히드릴아민(BHA) 수지 지지체 및

-NH-파라메틸 벤즈히드릴아민(MBHA) 수지 지지체

폴리아미드 중합체는 시판되는 것이 이용가능하며 문헌에 상세히 수록되어 있다(Bioorganic Chemistry 8, 351-370, (1979)).

BHA 또는 MBHA 수지를 사용하는 것이 바람직하며 이것은 분배되어 CRF 아미드 또는 CRF 동족체아미드를 생성한다.

중간체의 구조중 X¹, X², X³, X⁴, X⁵및 X⁶중 적어도 하나는 보호기이다. 특정아미노산에 따라 R군으로 선택된 특정 아미노산은 상기 서술한 바 있는 기지의 보호기가 부착되어 있을 수 있다.

펩티드합성에 사용되는 특정 측쇄 보호기를 선택하는 데는 따라야 할 하기 원칙이 있다.

(a) 보호기는 각 합성단계에서 시양 및 α-아미노보호기 제거시 선택된 반응조건하에서 안정 해야 한다.

(b) 보호기는 그 보호 특성을 유지해야하며 커플링 반응하에서 제거되어선 안된다.

(c) 측쇄보호기는 바라는 아미노산 서열을 함유하는 합성이 완결되었을때 펩티드쇄에 변화를 주지않는 반응조건하에서 제거가능해야 한다.

z으로 표시되는 아실기로는 아세틸, 포밀, 아크릴일, 벤조일이 바람직하다. 1-10 아미노산의 역가에 나쁜 영향을 미침이 없이 임의로 포함된 1-10 아미노산 펩티드에서 어떤 아미노산도 사용할 수 있으나 통상 천연산 아미노산의 L- 또는 D체가 사용된다.

펩티드는 문헌(J. Am, Chem. Soc, 85, P2141(1964), Merrifield)에 기재된 바와 같이 고상법(固相法)에 의해 제조하는 것이 바람직하나, 앞서 언급한 바와 같이 이 분야에 알려진 대등한 다른 합성법도 사용될 수 있다.

고상법은, 특허에도 나타난 바와 같이 (U.S Patent No. 4244, 946, Jan 21, 1981, Rivier et al) 보호된 α-아미노산을 적당한 수지와 커플링시킴으로써 펩티드의 C-말단으로부터 개시된다.

이런 CRF의 출발물질은 α-아미노-보호 알라닌을 BHA수지에 결합시켜 제조할 수 있다. Boc에 의해 보호된 알라닌은 염화메틸렌 및 디메틸 포름아미드(DMF)를 사용하여 BHA수지에 커플링된다. BOC-Ala을 수지지지체에 커플링시킨 뒤 염화메틸렌층 트리플로로아세트산(TFA)을 사용하거나 또는 TFA 단독 또는 디옥산중염산과 함께 사용하여 아미노보호기를 제거한다. 염화메틸렌중 TFA 50중량%를 1,2-에탄디티올 0-5중량%와 함께 사용하는 것이 바람직하다. 탈보호기는 0°-실온사이의 온도에서 수행된다. 특정α-아미노보호기를 제거하는데 있어 그밖의 표준분해시약 및 조건은 문헌에 기재된 바를 이용할 수 있다(Schroder & Lubke, "The Peptides", 1. PP 72-75(Academic Press 1965)).

알라닌의 α-아미노보호기를 제거한 후 남은 α-아미노 및 측쇄 보호아미노산을 바라는 순서로 단계적으로 커플링시켜 상술한 바 있는 중간화합물을 얻는다.

합성중 각 아미노산을 각기 따로 첨가하는 것 외에 다른 방법으로서 이들중 몇몇이 고상반응기에 첨가되기 전에 서로 커플링 될 수 있다. 적당한 커플링시약은 통상의 지식에 따라 선택될 수 있다. 특히 적합한 커플링 시약은 N,N'-디시클로 헥실 카보디이미드(DCCI)이다.

고상펩티드합성에서 사용되는 활성 시약은 펩티드 분야에 이미 잘 알려져 있다.

적당한 활성 시약으로 예컨대 N,N'-디이소프로필카보디이미드 및 N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 같은 카보디이미드류가 있다. 기타 활성시약 및 펩티드커플링에 있어서의 그들의 사용법이 문헌에 기재되어 있다(Schroder & Lubke, Supra, in Chapter Ⅲ, Kapoor, J. Phar, Sci, 59. PP 1-27(1970)).

보호된 아미노산 또는 아미노산서열 각각이 약4배 과량으로 고상반응용기에 도입되며 디메틸포름아미드(DMF) : CH₂Cl₂(1:1)매제중에서 또는 DMF 나 CH₂Cl₂단독 매제중에서 커플링이 이루어진다. 커플링이 수동적으로 수행되는 경우 각 합성단계에서 커플링 반응의 성취여부는 문헌에 기재된 바와 같이 (E. Kaiser et al., Anal, Biochem, 34,595,1970)닌히드린 반응에 의해 감식된다. 불완전한 커플링이 일어난 경우 α-아미노보호기를 제거하기전에 다음 아미노산의 커플링에 앞서 커플링을 반복한다. 커플링반응은 베크만 990 자동합성기에서 문헌에 보고된 바와같은 (Rivier et al., Biopolymers, 1978, 17. PP 1927-1938) 프로그램을 사용하여 자동적으로 수행될 수 있다. 바라는 아미노산 서열이 이루어진 후 중간체 펩티드를 제거하는데 있어 시약으로 수지로부터 펩티드를 분해할 뿐 아니라 모든 남은 측쇄 보호기 X², X³, X⁴, X⁵및 X⁶와 α-아미노보호기 X¹(단 이것이 최종 펩티드에 존재하고자 하는 아실기가 아닌 경우)를 분해하는 액체 불화수소 같은 시약으로 처리하여 수지 지지체로부터 중간체 펩티드를 제거한다. 불화수소를 분해에 사용할 경우 아니솔, 메틸에틸설피드와 같은 것을 청정제로서 반응용기에 첨가한다. 메티오닌이 서열에 존재할 경우 BOC 보호기는 트리플루오로아세트산(TFA)/에탄디티올을 사용하여 수지로부터 펩티드를 분해해 내기에 앞서 분해시켜 S-알킬화를 막게 할수 있다. 하기 실시예는 CRF 동족체를 고상법(固相法)으로 합성하는데 있어 바람직한 방법을 예시해 준다.

[실시예 I]

구조가 H-Ser-Gln-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Thr-Lys-Ala-Asp-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-Leu-Asp-Ile-Ala-NH₂이고 분자량이 4666인 CRF의 합성은 수지g당 약 0.1-0.5미리몰의 치환범위를 갖는 벤즈히드릴아민 염산염 수지상에서(Bachem inc으로부터 사용이 가능함) 단계적 방법으로 수행된다. 합성은 자동 배크만 990A 펩티드합성기에서 이루어진다.

BOC-Ala의 커플링결과 수지 g당 약 0.35미리몰의 알라닌이 치환된다. 사용되는 모든 용매는 바람직하게는 예컨대 헬륨이나 질소와 같은 비활성기체를 살포하여 유의하여 기체를 제거해야하며 따라서 메치오닌잔기의 유황을 산화시킬지도 모른 산소가 없도록 해야한다. 탈보호와 중화후 펩티드쇄가 수지상에 단계적으로 형성된다. 일반적으로 수지 g당 염화메틸렌중의 BOC-보호된 아미노산이 1-2미리몰 사용되며 그와 함께 염화 메틸렌중 2몰 DCCI 1당량이 2시간동안 사용된다. BOC-Arg(Tos)이 커플링될때 DMF와 염화메틸렌의 50% 혼합물이 사용된다. 세린과 트리오닌의 히드록실 측쇄보호기로서 Bzl이 사용된다. P-니트로페닐에스테르(ONP)가 아스파르긴 및 글루타민의 카복실말단을 활성화시키는데 사용되며 HOBt를 DMF와 염화메틸렌 50% 혼합물중 1당량을 사용하여 하룻밤 커플링시킨다. 아스파르긴 및 글루타민의 아미노기는 활성에스테르법 대신 DCC 커플링이 사용될 경우 Xan에 의해 보호된다. 라이신 측쇄의 보호기로서 2-cl-z이 사용된다. Tos는 알기닌의 구아니디노기 및 히스틴의 이미다졸기를 보호하는데 사용되며 글루타민산 또는 아스파르긴산의 측쇄 카복실기는 OBzl에 의해 보호된다. 합성 마지막단계에서 하기 조성 물질이 얻어진다.

Boc-Ser(Bzl)-Gln(Xan)-Glu(oBzl)-Pro-Pro-Ile-Ser(Bzl)-Leu-Asp(oBzl)-Leu-Thr(Bzl)-Phe-His(Tos)-Leu-Leu-Arg(Tos)-Glu(oBzl)-Val-Leu-Glu(oBzl)-Met-Thr(Bzl)-Lys(2cl-z)-Ala-Asp(oBzl)-Gln(Xan)-Leu-Ala-Gln(Xan)-Gln(Xan)-Ala-His(Tos)-Ser(Bzl)-Asn(Xan)-Arg(Tos)-Lys(z-cl-z)-Leu-Leu-Asp(oBzl)-Ile-Ala-resin support.

Xan은 α-아미노보호기를 탈락시키기 위해 사용한 TFA처리에 의해 부분적 또는 전체적으로 제거된다.

결과 보호된 펩티드-수지를 분해하고 탈보호하기 위해 이것을 펩티드-수지 g당 1.5ml 아니솔 0.5ml 메틸에틸설피드 및 15ml의 불화수소로 우선 -20℃에서 20분간 이어 0℃에서 30분간 처리한다. 고진공하에서 HF를 제거한후 수지-펩티드를 무수 디메틸에테르 및 클로로포름으로 교대로 세척한후 펩티드를 가스가 제거된 2N 수성초산으로 추출한후 여과에 의해 수지로부터 분리한다.

펩티드는 문헌에 기재된 바와같이(Rivier. et al, peptides ; structure and Biological Function (1979) PP. 125-128.)겔 침투법에 이어 반 예비 HPLC법으로 정제한다. HPLC로 크로마토그라피 분획물을 유의하여 탐지하여 거의 순수한 분획물만을 모은다.

앞서 방법으로 합성하고 정제한 CRF 펩티드의 비선광도는 perkin Elmer 모델 141상에서 측정하였을때 [α]_D ^22°=-77.5°±1.0(C=1, 1% 초산중)(H₂O 및 TFA의 존재를 보정함이 없이)이며 약 96%순도를 가진다. 정확한 서열이 이루어지나 여부를 첵크하기 위해 CRF 펩티드를 4N 메탄설폰산과 0.2% 트립타민을 함유하는 밀폐된 관내에 110℃에서 24시간 동안 가수분해시킨다. 베크만 121MB 아미노산 분석기를 사용하여 가수분해물의 아미노산을 분석한 결과 하기와 같은 아미노산비를 나타냈으며 이로서 41-잔기펩티드 구조가 생성된 것이 확인되었다. ; Asp(4.02), Thr(1.85), Ser(2.76), Glu(7.0), Pro(1.58), Ala(4.03), Val(0.96), Met(0.95), Ile(1.93), Leu(8.15), Phe(1.00), Lys(2.00), His(1.95) 및 Arg(1.98).

[실시예 Ⅱ]

CRF를 하기 방법에 따라 추출 분리, 정제했다. 490,000마리양의 시상하부 부위를 에탄올-초산-클로로 포름중에서 추출하고 에틸에테르와 석유에테르 혼합물로 탈지한후 0.1% 초산 : n-부탄올 : 피리딘(11:5:3)으로 진탕추출을 반복한다. 모여진 수상(水相)은 ACTH 유리활성을 나타낸다.

2N HOAc로 투석후(Spectrapor 3)중량 약 15g에 해당하는 350,000마리분을 세파덱스 G-50상에서 겔여과시킨다. 이 물질괴를 2N HOAc를 용리액으로 하는 3.1×150cm G-50컬럼을 사용하여 9단계의 연속조작으로 냉한 실내 온도에서 크로마토그라피시킨다. 가장 유의할만한 ACTH-유리활성대역은 약 1.3 Ve/Vo에서 용출된다. 이 대역의 물질중 약 130,000분에 해당하는 것을 SP-세파덱스상에서 이온교환시킨다. 샘플을 pH 3.2의 0.01M 포름산암모늄완충액에 넣고 사용완충액이 1 : 5M 포름산암모늄 pH 7.0이 될때까지 용출시킨다.

ACTH 유리활성은 약하게 흡수된다. SP-세파덱스로부터의 ACTH 유리분획물과 세파덱스-G-50으로 부터의 잔여대역을 6M 구아니딘 HCI/HOAc, pH 2.5에 용해시킨후 90℃에서 5분간 가열하고 pH 2.5의 4M 구아니딘 HCI/HOAc를 사용하여 비오겔 P-10상에서 크로마토그라피한다. ACTH-유리 분획물을 모아 하기 단계로 구성된 연속 고압액체 크로마토그라피(HPLC)법으로 더 정제한다.

1) 트리에틸 암모늄포스페이트(TEAP)를 감소시키고 아세토니트릴을 증가시키는 비율로 Bondapak CN상에서 (물과 그 부수물) 역상(Reverse phase) HPLC를 하고, 2) TEAP/아세토니트릴로 Bondapak C₁₈(물 및 부수물)상에서 역상 HPLC를 하고, 3a) 트리에틸암모늄 포르메이트와 아세토니트릴로 Bondapak CN 상에서 역상(逆相) HPLC를 시키거나, 3b) 트리플로로아세트산과 아세토니트릴을 사용하여 C₁₈에서 역상 HPLC시킨다.

HPLC과정 3a 또는 3b로부터 얻은 유친액성활성대역을 조성 및 구조 분석하여 하기 서열을 얻었다.

H-Ser-Gln-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Thr-Lys-Ala-Asp-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-Leu-Asp-Ile-Ala-NH₂

[실시예 Ⅲ]

천연 및 합성 CRF의 ACTH 및 β-엔도르핀 분비에 대한 그들의 생체의 효과에 대해 검사하고 합성 CRF를 생체내에서 시험해봤다. 배양한 쥐의 놔하수체 세포의 ACTH 및 β-엔도르핀 분비를 자극하는 고역가의 합성 및 천연 CRF가 측정되었다. 각기 약 10피코몰 및 100피코몰의 합성 CRF에서 최소 및 1/2 최대반응이 얻어졌다. CRF최대농도(＞5nM)에서의 분비반응은 플래토레벨에 있었다. 30ng-3μ g/체중의 생체내 용량은 ACTH 및 β-엔도르핀 양(β-END-LI)분비를 5-20배나 급속히 상승시켜준다.

합성 CRF는 몇몇 쥐 재제에서 강력한 생체내 ACTH 및 β-END-LI의 자극제인 것으로 나타났다. CRF를 냄부탈마취 숫쥐에 또는 정맥내 카뉼레를 삽입한 정지상태의 숫쥐 또는 암쥐에 정맥내 투여했을때 적어도 5-20분내에 ACTH 및 β-END-LI의 혈장농도를 상승시켰다. 또한 CRF는 쥐 및 개의 혈압에 극적인 작용을 하는 것으로 밝혀졌다. 우레탄마취 쥐에서의 평균 카르토이드 혈압은 3μ g CRF/μ g에 해당하는 양을 주사했을때 87-72±2mmHg로 떨어져서 30분간 그 수준으로 남아 있으며 뒤이어 3.0μ g CRF/μg을 주사로 투여해올때 평균혈압을 42±3mmHg까지 2시간 이상 강하시켰다.

[실시예 Ⅳ]

하기 구조의 펩티드 [des Ser¹-Bln²-Glu³]-CRF가 합성된다.

H-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Thr-Lys-Ala-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-Leu-Asp-Ile-Ala-NH₂.

상기 실시예 Ⅲ에서와 같은 일반적 방법에 따라 검사했을때 ACTH 및 β-END-LI의 분비를 촉진시킥 매우 유의할만한 혈압강하를 야기했다.

[실시예 Ⅴ]

하기 구조의 펩티드 [des pGlu¹-Gly²]-사우바진이 합성된다.

H-Pro-Pro-Ile-Ser-Ile-Asp-Leu-Ser-Leu-Glu-Leu-Leu-Arg-Lys-Met-Ile-Glu-Ile-Glu-Lys-Gln-Gln-Lys-Glu-Lys-Gln-Gln-Ala-Ala-Asn-Asn-Arg-Arg-Leu-Leu-Leu-Asp-Thr-IlE-NH₂.

상기 실시예 Ⅲ에서와 같은 일반적 방법에 따라 검사했을때 ACTH 및 β-END-LI의 분비를 촉진시키고 매우 유의할만한 혈압강하를 야기했다.

[실시예 Ⅵ]

하기 구조의 펩티드[des Ala⁴¹]-CRF가 합성된다.

H-Ser-Gln-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Thr-Lys-Ala-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-Leu-Asp-Ile-NH₂.

[실시예 Ⅶ]

하기 구조의 펩티드[아세틸-Ala¹]-CRF가 합성된다.

Ac-Ala-Gln-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Thr-Lys-Ala-Asp-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-Leu-Asp-Ile-Ala-NH₂.

[실시예 Ⅷ]

하기 구조의 펩티드[Ile³⁹Glu²⁵]-CRF가 합성된다.

H-Ser-Gln-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Ile-Glu-Met-Thr-Lys-Ala-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-Leu-Asp-Ile-Ala-NH_2.

[실시예 Ⅸ]

하기 구조의 펩티드[Tyr¹³, Nle²¹]-CRF가 합성된다.

H-Ser-Gln-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-Tyr-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Nle-Thr-Lys-Ala-Asp-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-Leu-Asp-Ile-Ala-NH₂.

상기 실시예 Ⅲ에서와 같은 일반적 방법에 따라 검사했을때 ACTH 및 β-END-LI의 분비를 촉진시키고 CRF보다 큰 매우 유의할만한 혈압강하를 야기했다.

[실시예 Ⅹ]

하기 구조의 펩티드[Ile⁸, Ser¹¹, Asr³³]-CRF가 합성된다.

H-Ser-Gln-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Ile-Asp-Leu-Ser-Phe-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Thr-Lys-Ala-Asp-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Asn-Asn-Arg-Lys-Leu-Leu-Asp-Ile-Ala-NH₂.

[실시예 XI]

하기 구조의 펩티드[아크릴일-Phe-Gly-Ala¹, Ser²]-CRF가 합성된다.

Acr-Phe-Gly-Ala-Ser-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Thr-Lys-Ala-Asp-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-Leu-Asp-Ile-Ala-NH₂.

[실시예 XII]

하기 구조의 펩티드[벤조일-Ala¹, des Gln², Leu¹²]-CRF가 합성된다.

Bz-Ala-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Leu-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Thr-Lys-Ala-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-Leu-Asp-Ile-Ala-NH₂.

[실시예 XIII]

하기 구조의 펩티드[Ala²¹, Thr³³, Nle⁴¹]-CRF가 합성된다.

H-Ser-Gln-Gln-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Ala-Thr-Lys-Ala-Asp-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Thr-Asn-Arg-Lys-Leu-Leu-Asp-Ile-Nle-NH₂.

[실시예 XIV]

하기 구조의 펩티드[Ala³⁹, Ala⁴⁰]-사우바진이 합성된다.

pGlu-Gly-Pro-Pro-Ile-Ser-Ile-Asp-Leu-Ser-Leu-Glu-Leu-Leu-Arg-Lys-Met-Ile-Glu-Lys-Gln-Glu-Lys-Glu-Lys-Gln-Gln-Ala-Ala-Asn-Asn-Arg-Leu-Leu-Leu-Asp-Ala-Ala-NH₂.

[실시예 XV]

하기 구조의 펩티드[Gly²⁶]-사우바진이 합성된다.

pGlu-Gly-Pro-Pro-Ile-Ser-Ile-Asp-Leu-Ser-Leu-Glu-Leu-Leu-Arg-Lys-Met-Ile-Glu-Ile-Glu-Lys-Gln-Glu-Lys-Gly-Lys-Gln-Gln-Ala-Ala-Asn-Asn-Arg-Leu-Leu-Leu-Asp-Thr-Ile-NH₂.

[실시예 XVI]

하기 구조의 펩티드[아세틸-Pro⁴]-CRF가 합성된다.

Ac-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Thr-Lys-Ala-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-Asp-Ile-Ala-NH₂.

[실시예 XVII]

하기 구조의 펩티드[Nle²¹, Tyr³²]-CRF가 합성된다.

H-Ser-Gln-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Nle-Thr-Lys-Ala-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-Tyr-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-Leu-Asp-Ile-Ala-NH₂.

상기 실시예 Ⅲ에서와 같은 일반적 방법에 따라 검사했을때 ACTH와 β-END-LI의 분비를 촉진시키고 CRF보다 큰 매우 유의할만한 혈압강하를 야기했다.

[실시예 XVIII]

하기 구조의 펩티드[Met(0)²¹]-CRF가 합성된다.

H-Ser-Gln-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met(0)-Thr-Lys-Ala-Asp-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-Leu-Asp-Ile-Ala-NH₂.

상기 실시예 Ⅲ에서와 같은 일반적 방법에 따라 검사했을때 ACTH 및 β=END-LI의 분비를 촉진시키고 매우 유의할만한 혈압강하를 야기했다.

CRF와 그의 동족체가 극적인 혈압 강하작용을 나타낸다는 것은 주목할만한 일이다. 따라서 이들 펩티드류는 특히 고혈압치료나 특정유형의 수술을 받는 환자의 치료에도 특히 가치가 있을 수 있다. CRF가 뇌하수체-부신피질 척추를 상당히 자극함으로 CRF 또는 그의 동족체는 낮은 내인성글루코코르티코이드 생산 능력을 가진 몇몇 유형의 환자에게 이 척추를 자극하는데 유용하다. 예를들면 CRF는 부신피질기능이 저하되어 외인성 글루티코이드요법을 받고 있는 환자에서 뇌하수체-부신성기능을 회복하는데 유용하다.

다른 대부분의 펩티드류들도 CNS계 및 위장란에 대해 효과를 갖는 것으로 밝혀졌다. ACTH와 β-END 분비가 동물의 스트레스에 대한 반응의 요인이 되므로 CRF가 체내스트레스 반응의 중개자 또는 제한자로서 뇌에 상당한 효과를 나타내는 것 같다. 따라서 CRF는 정상적 및 정신이상인 사람들의 무드와 행동을 개선하는데 사용될 수 있다. CRF와 그 동족체가 ACTH, β-END, β-리포트로핀 및 코르티코스테론을 억제하므로 뇌 및 말초에 대한 그들의 작용에 의한 기억력, 무드, 통증의 감지 및 특히 기인성, 억울증 및 불안증의 치료에 이들을 투여할 수 있다.

상당히 다량의 CRF 또는 이들의 몇몇 강력한 동족체는 GnRH 수퍼애고니스트가 생산기능을 억제하는것과 유사한 식으로 작용할 수 있는 것으로 여겨지고 있다. 따라서 이들 펩티드는 CRF표적기관을 탈감작 시켜 쿠싱증후 및 유사질환의 치료에 가치가 있다. CRF, 이들의 동족체 및 약제조성물을 형성하기 위해 제약상 허용되는 담체와 결합된 그의 무독성 산부가염은 사람을 포함한 포유동물에 정맥내, 대하, 근육내, 비강내, 뇌척수 내주사 또는 경구투여할 수 있다. 이들 펩티드는 적어도 약 93% 바람직하게는 적어도 약 98%의 순도를 가져야 한다. 이 순도는 존재하는 모든 유사펩티드 및 펩티드부분에 대한 중량 퍼센트를 의미한다. 이들은 혈압을 저하시키거나 내인성 글루코코르티코이드 생산을 자주하기 위한 목적으로 의사에 의해 투여될 수 있다. 용량은 투여되는 환자의 특정조건 및 증상의 심한정도 바라는 투여기간에 따라 달라질수 있다.

이들 펩티드류는 때로는 예를들면 아연, 철, 칼슘, 바륨, 마그네슘, 알루미늄과 같은 것의 금속착화합물이나 산부가염과 같이 제약상 허용되는 무독성염의 형테로 투여된다. 이들 산부가염에는 예컨대 염산염, 불화수소염, 황산염, 인산염, 주석산염, 파모에이트, 옥살산염, 후말산염, 글루콘산염, 알킨산염, 말레인산염, 초산염, 구연산염, 벤조산염, 호박산염, 말린산염, 아스코르빈산염, 타타르산염등이 있다. 만약 활성성분이 정제로 투여되는 경우 정제는 트라가칸트, 옥수수전분, 또는 젤라틴과 같은 결합제 및 알긴산과 같은 붕해제, 스타아린산 마그네슘과 같은 윤활제를 함유할 수 있다. 만일 액체로 투여되는 경우 감미료와 방향제가 사용될 수 있으며 정맥내 투여의 경우 등장식염수, 인산염 완충용액 같은 것이 효과적으로 사용된다.

펩티드류는 의사의 지시하에 투여되어야만 하며 약제조성물은 펩티드와 함께 제약상 허용되는 통상의 담체를 보통 함유한다. 일반적으로 사용량은 펩티드 1-200mg/kg이다. 몇몇예에서 이들 펩티드를 예컨대 체중 kg당 10ng 정도의 낮은 용량으로 ACTH 또는 코르티코스테로이드 대신으로 사용하여 환자를 치료할 수 있다. 여기서 사용되는 모든 온도는 섭씨며 모든비는 용량비이며 약체물질의 퍼센트는 용량퍼센트이다.

비록 본 발명을 현재 발명자에게는 가장 최상으로 생각되는 양식으로 구성된 구체예로 설명하긴 했으나 하기 청구범위에서 나타난 본 발명의 범위에 벗어나지 않는한 본 분야에서 이해될 수 있는 변법이 이루어질수 있다는 것을 이해해야 한다. 예를들면 CRF 펩티드 쇄내 다른 위치에서의 치환 및 수정이 현재 또 미래 개발에 따라 본 발명의 범주내로 생각되는 펩티드나 동족체의 역가를 손상시킴이 없이 이루어질 수 있다. 본 발명의 각종 특징을 하기 청구범위에서 강조했다.

Claims

(a) 각각의 커플링후에 BOC-보호를 제거하면서 BOC-보호된 아미노산들을 적절한 용매내에서 고형수지 지지체에 계속적으로 커플링시켜서 사슬을 단계적으로 연장시킴으로 하기 구조의 펩티드 중간체 또는 적절히 그의 N-말단이 짧아진 것을 생성하고 ; X¹-Ser( X²)-Gln( X⁴)-Glu( X⁵)-Pro-Pro-Ile-Ser( X²)-Leu-Asp( X⁵)-Leu-Thr( X²)-Phe-R₁₃( X⁸)-Leu-Leu-Arg( X³)-Glu( X⁵)-Val-Leu-Glu( X⁵)-R₂₁-Thr( X²)-Lys( X⁶)-Ala-Asp( X⁵)-Gln( X⁴)-Leu-Ala-Gln( X⁴)-Gln( X⁴)-Ala-R₃₂( X⁸)-Ser( X²)-Asn( X⁴)-Arg( X³)-Lys( X⁶)-Leu-Leu-Asp( X⁵)-Ile-Ala- X⁷.

상기 구조의 X¹은 수소 또는 α-아미노 보호기이며 ; X²는 수소 또는 Ser 또는 Thr 잔기의 알콜성 히드록실기 보호기이며 ; ,X³는 수소 또는 Arg의 구아니디노기 보호기이며 ; X⁴는 수소 또는 Gln 또는 Asn의 아미도기 보호기이며 ; X⁵는 수소 또는 Asp 또는 Gln의 카복실기 보호기이며 ; X⁶는 수소 또는 Lys의 측쇄아미노기 보호기이며 ; X⁷은 -NH-BHA 수지 지지체이거나 -NH-MBHA 수지 지지체이며 ; X⁸은 수소 또는 His의 이미다졸 질소 또는 Thr의 페놀 히드록실기의 보호기이다.

(b) 모든 보호기 및 공유 결합된 수지 지지체를 제거하여 펩티드 화합물을 형성하는 것으로 구성된 하기 구조의 펩티드 화합물의 제조방법.

Z-R₁-Pro-Pro-Ile-Ser-R₈-Asp-Leu-R_11-R₁₂-R₁₃-Leu-Leu-Arg-R₁₇-R₁₈-R₁₉-Glu-R₂₁-R₂₂-Lys-R₂₄-R₂₅-R₂₆-R₂₇-R₂₈-Gln-Gln-Ala-R₃₂-R₃₃-Asn-Arg-R₃₆-Leu-Leu-Asp-R₄₀-R₄₁-NH₂

상기구조에서 Z은 C₇이하의 아실기 또는 수소이고 ; R₁은 Ser-Gln-Glu 또는 pGlu-Gly 또는 Gln-Glu 또는 Glu 또는 D-Ser-Gln-Glu 또는 D-pGlu-Gly 또는 또는 직접 결합이며 ; R₈, R₁₂, R₁₉, 및 R₂₄는 Leu, Ile, Ala, Gly, Val, Nle, Phe 및 Gln으로 구성된 군으로부터 선택되며 ; R₁₁은 Thr 또는 Ser이며 ; R₁₃은 His, Tyr 또는 Glu이며 ; R₁₇은 Glu 또는 Lys이며 ; R₁₈은 Val 또는 Met이며 R₂₁은 Met, Met(0), Ile, Ala, Leu, Gly, Nle, Val, Phe 또는 Gln이며 ; R₂₂는 Thr 또는 Glu이며 ; R₂₅는 Asp 또는 Glu이며 ; R₂₆는 Gln 또는 Lys ; R₂₇은 Leu, Ile, Ala, Gly, Val, Nle, Phe, Asp, Asn, Gln 또는 Glu 이며 ; R₂₈은 Ala 또는 Lys이며 ; R₃₂는 His, Tyr 또는 Ala이며 ; R₃₃은 Ser, Asn, Thr 또는 Ala이며 ; R₃₆은 Lys 또는 Leu이며 ; R₄₀은 Leu, Ile, Ala, Glu, Val, Nle, Phe, Gln 또는 Thr이며 ; R₄₁은 Ala, Ile, Gly, Val, Leu, Nle, Phe, Gln 또는 직접 결합이며 ; 단 R₁₃이 His일때 R₁₇은 Glu, R₁₈은 Val, R₂₂는 Thr, R₂₆은 Gln, R₂₈Ala, R₃₆은 Lys이며 R₁₃이 Glu, R₁₇이 Lys, R₁₈이 Met, R₂₂가 Glu, R₂₆이 Lys, R₂₈이 Lys, R₃₂가 Ala, R₃₆가 Leu일때 이때 R₁이, pGlu-Gly이 아니거나, R₈이 Ile이 아니거나 R₁₁이 Thr이거나 R₁₂가 Leu 아니거나 R₁₃가 Ile이 아니거나 R₂₁이 Ile이 아니거나 R₂₄이 Gln이 아니거나 R₂₇이 Glu이 아니거나 R₃₃이 Asn이 아니거나 R₄₀이 Thr이 아니거나 또는 R₄₁이 Ile이 아니어야 한다.
하기 구조식의 화합물 또는 그의 비독성부 가염

Z-R₁-Pro-Pro-Ile-Ser-R₈-Asp-Leu-R₁₁-R₁₂-R₁₃-Leu-Leu-Arg-R₁₇-R₁₈-R₁₉-Glu-R₂₁-R₂₂-Lys-R₂₄-R₂₅-R₂₆-R₂₇-R₂₈-Gln-Gln-Ala-R₃₂-R₃₃-Asn-Arg-R₃₆-Leu-Leu-Asp-R₄₀-R₄₁-NH₂, 상기식에서, Z은 7이하의 탄소원자를 가지는 아실기 또는 수소이고 ; R₁은 Ser-Gln-Glu, pGlu-Gly, Gln-Glu, Glu, D-Ser-Gln-Glu, D-pGlu-Gly 또는 직접결합이고 R₈, R₁₂, R₁₉, 및 R₂₄는 Leu, Ile, Ala, Gly, Val, Nle, Phe 및 Gln으로 구성된 군으로부터 선택되며 ; R₁₁은 Thr 또는 Ser이며 ; R₁₃은 His, Tyr 또는 Glu이며 ; R₁₇은 Glu 또는 Lys ; R₁₈은 Val 또는 Met ; R₂₁은 Met, Met(0), Ile, Ala, Leu, Gly, Nle, Val, Phe 또는 Gln ; R₂₂는 Thr 또는 Glu ; R₂₅는 Asp 또는 Glu ; R₂₆는 Gln 또는 Lys ; R₂₇은 Leu, Ile, Ala, Gly, Val, Nle, Phe, Asp, Asn, Gln 또는 Glu ; R₂₈은 Ala 또는 Lys ; R₃₂는 His, Tyr 또는 Ala ; R₃₃은 Ser, Asn, Thr 또는 Ala ; R₃₆은 Lys 또는 Leu이며 ; R₄₀은 Leu, Ile, Ala, Gly, Val, Nle, Phe, Gln 또는 Thr ; R₄₁은 Ala, Ile, Gly, Val, Leu, Nle, Phe, Gln 또는 직접 결합이며, 단 R₁₃이 His이면, R₁₇은 Glu, R₁₈은 Val, R₂₂는 Thr, R₂₆은 Gln, R₂₈은 Ala, 그리고 R₃₆은 Lys이고 ; 그리고 R₁₃은 Glu이고 R₁₇이 Lys, R₁₈이 Met, R₂₂가 Glu, R₂₆은 Lys, R₂₈은 Lys, R₃₂가 Ala, 그리고 R₃₆가 Leu이면, R₁은, pGlu-Gly가 아니거나, 또는 R₈은 Ile가 아니고 또는 R₁₁은 Thr이거나 또는 R₁₂은 Leu가 아니고 또는 R₁₉은 Ile가 아니고 또는 R₂₁은 Ile 가 아니고 또는 R₂₄은 Gln 이 아니고 또는 R₂₇이 Glu가 아니고 또는 R₃₃은 Asn이 아니고 또는 R₄₀이 Thr이 아니고 또는 R₄₁이 Ile이 아니다.
제2항에 있어서 하기 구조식의 화합물.

H-Ser-Gln-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Thr-Lys-Ala-Asp-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-Leu-Asp-Ile-Ala-NH₂.