FI90421C

FI90421C - Glyseroliasetaalin farmakologisesti käyttökelpoisten aminoasylaattien valmistusmenetelmä

Info

Publication number: FI90421C
Application number: FI882705A
Authority: FI
Inventors: Pierre Braquet; Colette Broquet
Original assignee: Sod Conseils Rech Applic
Priority date: 1987-06-12
Filing date: 1988-06-08
Publication date: 1994-02-10
Also published as: HK77191A; FR2616326B1; DZ1215A1; AU621298B2; FI882705A; PT87689B; IN172782B; SE8802162D0; DK319188A; ES2009283A6; NZ224936A; FI90421B; GR1000889B; KR960005153B1; KR890000471A; SG73191G; NL192521B; CH674516A5; FR2616432B1; DK319188D0

Description

1 90421

Glyseroliasetaalin farmakologisesti kåyttokelpoisten aminoasy-laattien valmistusmenetelmå - Forfarande for framstållning av farmakologiskt anvåndbara aminoacylater av giycerolacetal

Keksinnon kohteena on glyseroliasetaalin uusien aminoasylaat-tien valmistusmenetelmå. Esillå olevan keksinnon mukaisella menetelmållå valmistetut yhdisteet ovat yleiskaavan I mukaisia glyseroliasetaalin aminoasylaatte ja I 2 \ / 1

I C

CH — θ'' XR2 I

I Θ ch2o co(cn2)p-n ) x jossa R^ on substituoitu fenyyliryhmå tai kaavan Cn^2m + 1 mukainen ryhmå, jol loin m on kokonaisluku 9-25, R2 on vetyatomi, fenyyliryhmå tai kaavan CnH2n + ± mukainen ryhmå, jol loin n on kokonaisluku 1-10, p on kokonaisluku 3-10, -N ) on pyndxum, 3-tiatsclinium, kinolinium ja isokinolinium, ja X^ tarkoittaa halogeeni-ioneja, kuten klooria, bromia tai jodia.

2 90421

Keksinnon mukaisesti saadut yhdisteet ovat mielenkiintoisia PAF:in vastaisina aineina (PAF, Platelets Activating Factor), jolloin niillå on vastaava aktiivisuus anti-anafylaktisina, antitromboottisina, verihiutaleiden kasautumista estavinå, keuhkoputken supistumista eståvånå, normo-tensiivisinå ja anti-iskeemisinå aineina, immunodepressoreina. Lisåksi ne ovat aktiivisia esimerkiksi munuaisten irranuunimuutoksia vastaan, erilaisia shokkeja vastaan. ihoal1ergioita vastaan ja endotok-siinin indusoimia suolistohaavaumia vastaan.

Keksinnon mukaisessa menetelmåsså saatetaan reagoimaan pieni stokiometrinen ylimåårå kaavan R^COR2 mukaista aldehydiå tai ketonia, joissa R^ ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellå, glyserolin kanssa polaarittomassa liuottimessa p-tolueenisul-fonihapon låsnåollessa ja ref 1uksointiolosuhteissa, saatu 4-hydroksimetyy1 i-1,3-dioksolaanijohdos saatetaan reagoimaan huoneen 1 ampdti 1 assa kaavan ClCO(CH2)pX mukaisen «»-halo-geenialkanoyylikloridin kanssa, jossa p ja X tarkoittavat samaa kuin edellå, orgaanisen emåksen, kuten trietyyliamiinin låsnaollessa ja saatu yhdiste, jonka kaava on EO R, X 1 o R2

OCO(CH2)p-X

saatetaan reagoimaan typpikierron alla 50 - 80°C:ssa kaavan ”0 mukaisen typpipitoisen heterosyklisen yhdisteen kanssa.

_* . Tåtå menetelmåå on havainnol1istettu seuraavan reaktiokaavion avul1 a.

3 90421

Vaiheet

Eo R, x 1 OR- a w 2 t_0 R.

N E1: Γ X

+ Cl CO(CH_) X -La Lo R- b 2 P CHClT7 Γ 2

J Loco(CH2)p X

3 r—O R.

X e

+ N^) _\ -0 R_ ^ S

N' * 2 φ Θ

L-OCO (CH2) p “ NX I

• · * · ·

Keksinnon mukaista menetelmåå on havainnollistettu seuraa-vien esimerkkien avulla. Esimerkki 1 on esitetty kokonai-suudessaan; seuraavissa esimerkeissa on annettu vain substi-*'·* tuenttien ja saatujen yhdisteiden tunnusmerkit (ellei toisin ole mainittu, TLC on suoritettu silikageelilevyilla).

4 90421 ESIMERKKI 1 2-heptadekyyli 2-metwli 4-/4 1 -(N-pyridinium)butyrwlioksime-twli/-l. 3-dioksolaanikloridi © .

R1 “ C17H35 ' R2 * CHo ' “N\)a Pyridinyyli, X " C1' p " 3*

Vaihe a: 2-heptadekvvli 2-metwli· 4-hvdroksimetwli-l.3-_ dioksolaanin valmistaminen. a

Sopivaan reaktoriin kaadetiin 11,1 g (40 millimoolia) 2-nonadekanonia, 6 g - mika on enenunan kuin stokiometrinen måarå - kahdesti tislattua glyserolia ja 0,6 g p-tolueeni-sulfonihappoa liuotettuna 120 ml:aan kuivaa tolueenia. Reaktioseosta refluksoitiin sekoittaen 12 tuntia ja saatu vesi poi.stettiin Dean'in ja Stark'in laitteen avulla. Jaahdyttamisen jalkeen pestiin orgaaninen faasi 30 ml:11a kaliumhydroksidin 5-painoprosenttista vesiliuosta ja sen jalkeen kolme kertaa minimimaaralla vetta. Vedettomalla natriumsulfaatilla kuivaamisen jalkeen poistettiin liuotin alipaineessa. Jåannos puhdistettiin tarnan jalkeen kromato-graafisesti silikageelipylvåassa. Perakkain eluoituivat reagoimattoman ketonin jae (petrolieetteri:dietyylieetteri, 95:5 tilavuudesta laskettuna) ja sen jalkeen dioksolaani a (petrolieetteri/dietyylieeteri 85:15 til.). Dioksolaani on viskoosinen tuote, joka osittain on kiteytynyt.

Saanto: 11 g (78 %) RF: 0,18 (petrolieetteri/dietyylieetteri 70:30 til.) IR: 3500 cm-1 (OH) 1100 - 1060 cm'1 (C-0-).

5 90421

Vaihe b: 2-heptadekyyli-2-metwli-4- ( 4 1 -kloorlbutvrwlioksi-metyyli) 1,3-dioksQlaani. b

Seos, joka sisalsi 6,4 g (18 millimoolia) edella vaiheessa (a) kuvatulla tavalla valmistettua 2-heptadekyyli 2-metyyli- 4-hydroksimetyyli-l,3-dioksolaania ja 6 ml (45 millimoolia) trietyyliamiinia 15 mltssa kuivaa kloroformia, lisattiin tipottain 0°C:ssa liiCkseen, joka sisalsi 6,25 g (22 millimoolia) 4-klooributyryylikloridia 10 ml:ssa kuivaa kloroformia. Seosta sekoitettiin 12 tuntia huoneen lampotilassa. Seokseenl isattiin 20 ml kloroformia, minkajalkeen seos pestiin natriumhydroksidin IN vesiliuoksella ja sen jalkeen vedella, kunnes pH oli 7. Poistamalla liuotin saatiin jaannos, joka kromatografoitiin silikageelipylvåasså kåyttå-mallå eluointiaineena petrolieetteri:dietyylieetteri-:.: * seosta, aluksi 95:5, sen jalkeen 90:10 ja lopuksi 80:20 til. Nain saatiin 7,6 g (saanto 82 %) dljymåistå tuotetta, joka kiteytyi; sulamispiste 39-40°C. Tåmå tuote on kahden :\· cis- ja trans-isomeerin seos (naiden erottamienn on vaikeaa).

RF: 0,45 ja 0,37 (petrolieetetri/dietyylieetteri 80:20 til.) IR: 1740 cm'1 (C=0) 1180 - 1160 cm'1 (C-O-C_eetteri ja esteri) NMR 60 mHz, CDCl-j, (TMS.) δ: 0,9 (tripletti, 3H, ketjun CH3) 1,3 (mult., 35.H, 32H + CH3) 2.1 (mult., 2H, CO-CH2-CH2) 2.5 (tripletti, 2H CO-CH2) 3.6 (mult., 4H, CH2-0 ja CH2Cl) 4.2 (mult., 3H, CH2OCO ja CH-0) .

:Λ: Vaihe c: 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/41-(N-pyridinium)- butyryvlioksierntwli/-! . 3-dioksolaanikloridi. I.

5 g edellisesså vaiheessa (b) saatua yhdistetta, joka oli liuotettu 30 ml:aan pyridiiniå, sekoitettiin 24 tuntia typen alia 80°C:ssa. Taman jalkeen ylimaSrainen pyridiini 6 90421 positettiin alipaineessa ja jåannos puhdistettiin kroraato-graafisesti silikageelilla. Eluoiraalla kloroformilla (jotta saataisiin talteen reagoimaton låhtoaine) ja sen jalkeen kloroformi/metanolilla, ensin 90:10, sen jalkeen 80:20 til. saatiin 3,80 g otsikkoyhdistettå. Tama tuote on kahden cis- ja trans-isomeerin seos (naiden erottaminen on vaikeaa), kokonaissaanto 40 % (tåsså vaiheessa 65 %).

Sulamispiste: 84-85°C

Rf: 0,28 (CHCl3/MeOH 70:30, til.) IR (Nujol) 1740 cm-1 1630 cm 1 (pyridiini) 120Oj 1180 cm"1 (C-O-C) NMR, 250 MHZ, CDC13 6: 0,9 (tripletti, 3H, CHj) 1,2 (sing, suuri 30H) : 1,55 (mult., 2H, 2,35 (mult., 2H, CO CH2-CH2) : 2,6 (tripletti, 2H, CO CH2) 3.9 (mult., IH, CH-O) 4 (mult., 2H, CH20 CO) 4,2-3,6 (2 mult., 2H, CH20) (kahden diastereoisomeerin)

5.10 (mult., 2H, CH2N

8 (mult., 2H, H„) ) P ) 8,4 (mult., IH, Ηγ) j pyridinium 9,6 (dub., 2H ) α

Massaspektri: M - Cl m/z : 504 <o* —(CH2)3—C02H : 166 7 90421 ESIMERKKI 2 2-heptadekyyli 2-metwli 4-/41 (N-kinolinium)butyryylioksi-metyyli-1, 3-dioksolaanikloridi

Vaihe c: 5 g esimerkissa 1 (vaihe b) saatua yhdistettå liuotettiin seokseen, jossa oli 20 ml kinoliinia ja 20 ml dimetyylisulfoksidia, kuumennettiin 4 paivåa typen alia 80°C:ssa. Kinoliini ja DMSO tislattiin pois alipaineessa ja jaannos kromatografoitiin silikageelipylvåassa (eluoitiin perakkain kloroformilla ja sen jålkeen CHCl^/MeOH 95:5-seoksella). Haluttua tuotetta saatiin 2,5 g kahden diaste-reomeerin seoksena.

Rf: 0,58 (CHCl^/MeOH, 70:30) -3 _i IRv kinoliini 1650, 1630 ja 1600 cm Massaspektri: i.—* M - Cl m/2 . 554 1„ (CH2)3 — COgH : 216.

NMR kinolinium pyridiniumin asemesta.

δ ppm: 7,90 - 8,10 (4H, 8,70 (1H), 8,90 (1H), 10,90 (1HJ.

:A: ESIMERKKI 3 2-heptadekwli 2-metyyli 4-/4 1-(N-tiatsolinium)butyryyli-.*·. oksimetyyli/-l, 3-dioksolaanikloridi

Vaihe c: 850 mg esimerkissa (vaihe b) saatua tuotetta :.A kuumennettiin 24 tuntia 80°C:ssa tiatsolin (4 ml) ja di- metyylisulfoksidin (6 ml) seoksessa. Seos haihdutettiin tyhjosså ja jaannos kromatografoitiin silikageelipylvåassa, eluointiaineena CHCl^/MeOH 50:50, jolloin saatiin viskoosinen tuote.

8 90421

RfT 0,34 (CHCl3/MeOH 70:30) NMR tiatsoliniumin asemesta pyridinium δ ppm: 8,19 (d : IH), 8,4 (d : IH), 10,90 (sing. IH)

Massaspektri: M - Cl; 510 m/z.

ESIMERKKI 4 2-heptadekyyli 4-/41 -(N-pyridiniuro) butyryylioksimetwli- 1.3- dioksolaanikloridi 0 R1 = ci7H35* R2 = H' = pyridinyyli, X = Cl, p = 3._ 2b Rf: 0,17 (petrolieetteri/dietyylieetteri 30:70 til.) 2b Rf; o,37 (petrolieetteri/dietyylieeetteri 70:30 til.) 1^ Rf: 0,16 (kloroformi/metanoli 70:30 til.) NMR CH^.-n asemesta kohdassa 1,4 _ ~o j 2 multiplettia, joiden keskus 4,9 ppm ^

Massaspektri: M - Cl: 490 m/z.

ESIMERKKI 5 2-heptadekyyli 4-/41 -(N-kinolinium)butyryylioksimetyyli/- 1.3- dioksolaani-kloridi Θ R1 * c17H35 / *2 - H, . . , . .

Γ ) = kinolimum, χ » cl , p - 3.

Rf: 0,48 (kloroformi/metanoli 70:30 til.) ESIMERKKI 6 2-heptadekyyli 2-(n-propvvli) 4-/4 * -(N-pyridinium)butvrwli-oksimetwli/-!. 3-dioksolaanikloridi 0

Ri = C17H35' R2 = η'ΡΣ'οΡΥΥ11» -N^N = pyridinyyli, C = Cl, p = 3.

9 90421 2 c Rf: 0,23 (petrolieetteri/dietyylieetteri 70:30 til.) 2c Rf: 0,38 (petrolieetteri/dietyylieetteri 80:20 til.) I Rf: 0,20 (kloroformi/metanoli 70:30 til.) v 1 NMR CH,:n asemesta kohdassa 1,4 c 3 -0 CH_ - y 2 1,55 (mult. 4H ) 1,2 (32H) 0,9 (tripletti, 6H, 2CH^)

Massaspektri: M - Cl: 532 m/z.

ESIMERKKI 7 2-heptadekyyli 2-metwli 4-/51 -(N-pyridinium)pentanoyyli-oksimetyyli-1,3-dioksolaanikloridi

Ri e c17h35 / r2 " ch3 · “ pyridinyyli, X - Cl, p - 4.

: Rf: 0,23 (kloroformi/metanoli 70:30).

ESIMERKKI 8 2-(3,4,5-trimetoksifenyyli) 2-metwli 4-/4 * -(N-pyridinium)-butyryvlioksimetwli/-!, 3-dioksolaanikloridi 0CH3 Θ R1 = q ^-och3 t r2 » ch3 , “N\y " pyridinyyli, x * Cl, p-3, -^och3 2 d Rf: 0,32 (kloroformi/metanoli 98:2 til.) 2d Rf: 0,61 (kloroformi/metanoli 98:2 til.)

Id Rf: 0,34 (kloroformi/metanoli 60:4 til.) 10 90421 IR 1735 (C=0) 1610 (pyridiini) 1590 (bentseeni) 2740 (OCH3) 1^ NMR ketjun asemesta

-O

1,5 ppm 3H' ”° ch3) R2:lle 3.7 (sing. , 9H, OCH-j) 6.8 (2H.arom.)

Massaspektri: M - Cl: 432 m/z.

ESIMERKKI 9 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/61 - (N-pyridinium)heksanowlioksi-metyyli-1,3-dioksolaanibromidi

Ri - C17H35 , R2 CH3, pytidinyyli, x * Br' ** " vaihe b: 2-heptadekwli 2-metwli 4-(61bromiheksanoyyli-oksimetyyli)-1,3-dioksolaanibromidi

Noudattamalla esimerkissa 1 kuvattua menettelya ja kåyttåmmålla 6-bromi-heksanoyylikloridia saatiin haluttu tuote viskoosi-sena tuotteena (saanto 82 %).

Rf: 0,57 (petrolieetteri/eetteri 80:20).

vaihe c: Noudattamalla esimerkissa 1 kuvattua menettelya saatiin haluttu tuote viskoosisena tuotteena (saanto 70 %).

RF: 0,36 (CHCL,/MEOH 70: 30) -1 3 IR 3450 CM (vesjaama) vCO 1740, vC-O-C 1180, pyridiini 1640 cm"1 NMR 500 MHZ CDC13, δ (TMS) 0,85 (tripletti, 3H, CH3); 1,25 (sing, suuri 30H); 11 90421 -°y 1,35 (d 3H, -0ACh3 Z + E); 1,45 (mult., 2H, CH^); 2,1 (mult., 2H, COCH2CH2)=; 2,35 (mult., 2H, COCH2); 3,70 ja 4,35 (mult., 2H, CH20, Z + E); 4 (mult. 3H, CH2OCO ja H-C-0); Θ 5,05 (tnpletti, 2H, CH2N).

pyridinium 8,1 (tripletti, 2H, Ηβ); 8,6 (tripletti, IH, Ηγ); 9,5 (d: 2H, Ha).

U.V. (etanoli) loge 3,65 λ 258,8 nm.

Massaspektri: M - Br τα/z . 532 <Of — (CH2)3 — C02H : 194.

ESIMERKKI 10 2-heptadekwli 2-metwli 4-/6 1-(N-kinolinium)heksanowli-oksimetyyli)-1,3-dioksolaanibromidi gf i 0,60 _.(CHCl^/MeOH 70:30) IR kinolinium 1650, 1630, 1600 cm-1 U.V. (etanoli) loge 4,53 λ 235,4 nm 2,18 λ 316,5 nm NMR kinolinium pyridiniumin asemesta.

Θ δ : 5,5 (2H, CH2N), 7,90 - 8,40 (5H), 9,10 (IH), 10,70 (IH, Ha).

12 90421

Massaspektri : Μ - Br m/z : 582 (CH2)3— C02H : 244; ESIMERKKI 11 2-heptadekyvli 2-metwli 4-/61 - (N-isokinolinium)heksanowli-oksimetyyli) -1,3-dioksolaanibromidi vaihe c: Kinoliinin asemesta kåytetaån isokinoliinia.

Rf: 0,55 (CHCl3/MeOH 73:30) IR isokinoliini 1650, 1610, 1590 cm NMR isokinolinium kinoliniumin asemesta.

e δ : 5,15 (tripletti, 2H, CH2N); 7,95 - 8,40 (4H); 8,80 (2H); 11,05 (IH).

Massaspektri: M - Br : 582 m/z.

ESIMERKKI 12 2-heptadekyyli 2-metwli 4-/11'-(N-pyridiniumundekanoyyli-oksimetyyli)-1,3-dioksolaanibromidi R1 3 C17H35/ «2 “ CH3, " PYridinyyli, X - Br, p - 10.

vaihe b: 2-heptadekwli 2-metyyli 4-(111 -bromiunde- kyylioksimetyyli)-I,3-dioksolaani

Haluttu tuote saatiin kayttåmalla 1-bromiundekanoyyli-kloridia ja noudattamalla esimerkissa 1 kuvattua menettelyå. Sulamispiste: 52°C (saanto 60 %) 13 90421

Rf: 0,26 (petrolieetteri/eetteri 85:15). vaihe c

Sulamispiste: 92°C

Rf: 0,45 (CHCl3/MeOH 70:30)

Massaspektri: M - Br: 602 m/z.

ESIMERKKI 13 2-heptadekyyli 2-(n-propwli) 4-/5' -(N-pvridinium)heksanowli-metwli-1,3-dioksolaanibromidi R1 = C!7H35' R2 = n-propyyli, = PYridiW11» ; X = Br, p = 5.

Rf: 0,44 (CHCl3/MeOH 70:30)

: Sulamispiste: 7 6°C

Massaspektri: M - Br : 560 m/z.

ESIMERKKI 14 2-nonyyli 2-metyYli 4-/61 -(N-pyridiniunUheksanowlioksimetw-li) -1, 3-dioksolaanibromidi *l - C*Hl9' "2 CH3' \) pyridlnyyli, X = Br, P = 5.

’. vaihe b

Rf: 0,50 (petrolieetteri/eetteri 80:20) vaihe c

Rf: 0,30 (CHCl3/MeOH 70:30)

Massaspektri: M - Br : 420 m/z.

14 90 421

TOKSILOGIA

Keksinnon mukaisia yhdisteitå on akuutin LD5Q-arvon maårit-tåmiseksi annettu hiirille. Kaikille keksinnon mukaisille yhdis-teille LD5Q oli yli 300 mg/kg (IP tai SC) ja 600 mg/kg (PO) .

FARMAKOLOGIA

Keksinnon mukaisten yhdisteiden farmaseuttinen mielenkiin-toisuus on osoitettu seuraavilla farmaseuttisilla kokeilla: 1°) - Verihiutaleiden kasautumisen estyminen New Zealand-kaniineilla

Koe suoritettiin New Zealand-kaniinien plasman verihiutaleilla. Ver.inaytteet otettiin korvavaltimosta ja laitettiin sitraat-tipuskuriin (3,8 %; pH 7,4); verta sentrifugoitiin edelleen 15 minuuttia nopeudella 1200 kierr./min. Testattava nayte valmistettiin dimetyylisulfoksidiin ja kaadettiin sen jalkeen minuutiksi runsasverihiutaleisen plasman paaile, minka jalkeen lisåttiin 2,5 nM PAF. Mååritys suoritettiin Cronolog Coultronics-laitteella, joka maarittaa transmissioprosentin, joka vastaa piikin suurinta korkeutta ennen kasautumien hajautumista. Transmissioprosentin suhteen lasketaan inhibii-tion prosentuaalinen vaihtelu (kontrolii: puhdas DMS09.

Tåma menetelma on kuvattu yksityiskohtaisesti julkaisussa: LABORATORY INVESTIGATIONS, Vol. 41, No. 3, s. 275, 1979, JEAN-PIERRE CAZENAVE, Dr.MED., JACQUES BENVENISTE, Dr. MED., AND J. FRASER MUSTARD, M.D., "Aggregation of rabbits Platelets by Platelet-Activating Factor Is Independent of the Release Reaction and the Arachidonate Pathway and Inhibited by Membrane-Active Drugs".

Tulokset osoittavat, etta narna yhdisteet inhiboivat kasau-tmista, joka on indusoitu lisaåmållå 2,5 nM PAF. Eri yhdisteiden IC^Q-arvot voitiin laskea lineaarisen regressioanalyy- is 90421 sin avulla kayttåmalla viittå testia, joissa oli viisi kaniinia.

PAF:n indusoiman verihiutaleiden kasautumisen inhibiitio kaniinien runsashiutaleisessa plasmassa.

Esimerkki n:o IC50 (M)

No. 1.................. 2,2 . 10”6

No. 2.................. 1,2 . 10"6

No. 3.................. 2,15 . 10"5

No. 4.................. 7 . 10"6

No. 5.................. 3,1 . 10”6

No. 6.................. 3,04 . 10-6

No. 7.................. 5 . 10"6

No. 8.................. 1,13 . 10“5 : No. 9.................. 4,04 . 10"7

No. 10.................. 3,03 . 10"7

No. 12.................. 3,12 . 10“5 • No. 13.................. 1,73 . 10"6

No. 14.................. 1.46 . 10"6

• - I

16 90421

2 - SITOUTUMINEN

MATERIAALIT JA MENETELMAT

3

Kaytetty synteettinen tritioitu / H/-PAF oli etanoliliuok-sena, jonka spesifinen aktiivisuus oli 59,5 ci/mmols. Leimaamaton PAF ja lyso-PAF liuennettiin etanoliliuokseen ja liuoksia såilytettiin -80°C:ssa. Yhdisteet liuennettiin dimetyylisulfoksidiin.

Verihiutaleiden membraanipreparaatit

Kaniinin kokoverta (6 tilavuusosaa) otettiin keskimmåisestå korvavaltimosta yhteen tilavuusosaan ACD-liuosta (sitruuna-happo 1,4 g, natriurasitraatti 2,5 g, dekstroosi 2 g per 100 ral vettå) ja sentrifugoitiin 15 minuuttia 150 g voimalla. Runsashiutaleinen plasma (PRP) poistettiin varovasti ja sitå sentrifugoitiin 15 minuuttia 1000 g voimalla. Sen jålkeen hiutalepelletti pestiin kolme kertaa: kaksi kertaa Tris-HCl-puskurissa, 10 mM, pH 7,4, jossa NaCl 150 mM,

MgCl2 5 mM, EDTA 2 mM, ja lopuksi samassa, mutta natriumia sisåltåmattomåssa puskurissa.

Hiutalepelletti suspendoitiin uudelleen tahån jålkimmåiseen puskuriin, pakastettiin nopeasti nestemaisessa typesså ja sulatettiin hitaasti huoneen låmpotilassa vahintaan kolme kertaa T. Y. Shen'in et al. kuvaamalla tavalla. Lyysat-tuja verihiutaleita sentrifugoitiin 30 minuuttia 100^000 g voimalla BECKAN model L8.55 ultrasentrifuugissa (roottori 50.2 Ti). Verihiutaleiden membraanihomogenaattia såilytettiin -80°C:ssa ja kåytettiin kahden viikon sisållå ilman, ettå PAF-aseteetteri-sitoutumisessa tapahtuu huomattavia muutoksia.

Proteiinipitoisuus mååritettiin Lowry-menetelmållå kåyttå-mållå standardina naudanseerumialbumiinia.

17 90421

Sitoutumismaaritys 60 - 100 jig membraaniproteiineja lisat.tiin 1 ml lopputila-, vuuteen muoviputkiin, jotka sisalsivat 1 nM /^H/-PAF Tris- HCl 10 mM pH 7 puskurissa, joka sisalsi 0,025 % naudan-seerumialbumiinia, ja inkuboitiin yhdesså leimaamattoman PAF:n tai PAF-antagonistien kanssa tai ilman naita. Inkuboin- ti tapahtui 1,5 tunnin aikana 0°C:ssa. Sitoutunut 3 3 / H/-PAF erotettiin vapaasta / H/-PAF:sta suodattamalla valittomåsti Whatman GF/C lasikuitusuodattimien lapi tyhjosså (Brandel'in systeemi). Reaktioseos ja suodattimet pestiin kolme kertaa 5 ml:11a jaåkylmaa puskuria. Sen jålkeen suodattim.e.£ laitettiin polyetyleeniputkiin, jotka oli taytetty 10 ml:11a nesteskintillaationestetta, ja radioaktiivisuus mitattiin LKB β-laskimen alla 45 % tehokkuudella.

Epåspesifinen sitoutuminen mååritettiin, kun mukana oli 10-6 leimaamatonta PAF. Spesifinen sitoutuminen laskettiin våhentamallå epåspesifinen sitoutuminen kokonaissitoutumi- 3 sesta. Spesifiseen / H/-PAF:n sitoutumxseen kohdistuva yhdisteiden inhibiitiovaikutus mååritettiin seuraavan kaavan avulla inhibiitioprosenttina: 3 2 ( H-PAF, sitoutunut yhdis-) ( H-PAF. sitoutunut, (telden lasnaollessa >

Inhibiitio-% yht«"e,lsa)_ x 100 3 - H-PAF, spesifisesti sitoutunut

Esimerkki n:o IC50

No· 1................. 4,5 . 10”7

No. 9................. 3,5 . 10“8

No. 10................. 3,5 . 10”8

No. 14................. 6,1 . 10“7 is 90421

3 - PAF:N INDUSOIMA BRONKOKONSTRIKTIO, LEUKOPENIA JA TROMBOSYTOPENIA MARSULLA

MATERIAALIT JA MENETELMXT

Urosmarsut (400 - 500 g) anestetisoitiin uretaanilla (1,5 g/kg: IP) ennen henkitorven avaamista ja ventiloitiin hengi-tyspumpun avulla (UGO BASILE) (70 - 80 henkaysta minuutissa, 1 ml ilmaa/100 g/henkåys) spontaanin ilmarinnan eståmiseksi. Laajenemisvastus mitattiin painemuuntimella (UGO BASILE) Konzett'n ja Rossier'in mukaisesti 10 cm H20 alkupainetta vastaan. Elaimet jaettiin ryhmiin ja kasiteltiin keksinnon mukaisilla yhdisteillå tai kåsittelya ei suoritettu (0,05, 0,1, 0,5, 1 ja 5 mg/kg). Tuotteet annettiin i.v. 1 tunti ennen PAF:11a haastamista.

Elaimet haastettiin intravenoosisti annetuilla eri PAF-annoksilla (30 - 100 n/kg) ja laajenemisvastuksen muutokset rekisteroitiin.

Verinåytteet otettiin ennen PAF:11a haastamista ja 1,5 ja 10 minuuttia sen jålkeen. 40 pi verta laimennettiin 10 ml:aan isotonia (Coultronics, Ranska); erytrosyytit lyysattiin Zapoglobin-tuotteella (Ranska), ennenkuin leuko-syytit laskettiin coulter -laskimessa. Verihiutaleiden lukumaaran maårittamista vårten laimennettiin 40 ^ul verta 2 ml:aan isotonia ja sentrifugoitiin 30 minuuttia nopeudella 100 kierr./min., otettiin 100 pi supernatanttia ja laimennettiin edelleen 10 ml:aan isotonia ennen laskemista coul-ter-laskimessa.

19 90421

Taulukko η:o 1; 2-heptadekyyli 2-metyyli-4-/6'-(N- pyridinium)heksanoyylioksimetyyli/-l,3-dioksolaani-bromidin vaikutus PAF:n indusoimaan bronkokonstriktioon.

Annes Prosentuaalinen Prosentuaa- ’ mg/kg IV n bronkokonstriktio linen vai-htel i _ ^^ * „ . ,,. - 8 79,8 +/“ 3/22

Kontrolli f ' ' 5 3 3.5 +/“ 1t53 - 95,6 ***

Esimerkin 1 4 19,1 +/- 10,51 - 76,1 *** 0,5 6 23,6 +/” 7.15 - 70,4 *** n:o 9 0, 1 6 43,8 +/- 14,77 - 45,1 **

yhdiste o, 05 3 79^.0 +/~ 9,27 - 1^0 NS

Kaikkien taulukoiden selitykset: NS : ei merkitseva * : P < 0,05 ** ·’ P < 0,01 *** : p < 0,001

Taulukko n:o 2: 2-heptadekyyli 2-metyyli-4-/61 -(N-pyridinium)- heksanoyylioksimetyyli/-l,3-dioksolaanibromidin vaikutuk.set PAF:n indusoimaan leukopeniaan.

20 90 421 :Leukosyy-ttien Pr’osentuaa-Armos n Aika. maaran prosenr. linen mg/kg IV *(mnj tuaalinen lasku vaihtelu ,.

8 1 40,.8 +/- 7,18 -

Kontrolli ’ 5 29,2 +/- 10,89 8 10 33,.5 +/- 5,04 3 1 16,.5 +/- 2,42 - 59;6 *

5 3 5 15,9 +/- 0,99 - 45,5 NS

3 10 18,7 +/- 5,08 - 44,2 NS

4 1 3,5 +/- 12,60 - 91,4 **

Esimerkin 1 4 5 2,9+/-10,51 -90,1* 4 10 1,0 +/- 22,62 - 97,0 **

6 1 34,6 +/- 6,35 - 15,2 NS

n:o 9 ----------

0,5 6 5 19,0 +/- 6,42 - 34,9 NS

6 10 14,6 +/- 5,36 - 56,4 NS

6 1 41,8 +/- 6,50 + 2,5 NS

yhdiste --------

0,1 6 5 31,9 +/- 4,88 - 9,2 NS

6 10 33,5 +/- 4,65 0,0 NS

3 1 45,3 +/- 5,70 + 11,0 NS

0,05 3 5 21,6 +/- 3,42 - 26,0 NS

3 10 14,2 +/- 17,30 - 57,6 NS

Taulukko n:o 3: 2-heptadekyyli 2-rnetyyli 4-/6'-(N-pyridinium)- heksanoyylioksimetyyli/-l,3-dioksolaanibro- midin PAF; n indusoimaan trombosytopeniaan 21 90 421

Leukosyyttien Prosentuaali Annos Aika maaran pro- · -J

mg/Kg IV n (mn) sentuaalinen nen vaihte£u lasku 8 1 68,6 +/- 6,79

Kontrol'li _ 8 5 42 f 4 +/- 2,71 8 10 4 2,5 +/- 3,14 3 1 4,2 +/- 2,35 - 93,9 ***

Esimerkin 5 3 5 5,6 +/- 1,84 - 86,.8 *** 3 10 1,1 +/- 1,15 - 97,4 *** 4 1 11,5 +/- 6,21 - 83,2 *** 1 4 5 22,5 +/- 3 T27 - 46,9 * n:° 9 4 10 21,0 +/- 3,87 - 50,6 * ' 6 1 19,3 +/- 10,19 - 71,9 *** t .1— -- 0.5 6 5 9,6 +/- 12,15 - 77,4 *** 6 10 10,9 +/- 9,94 - 74,4 *** yhdiste _J__1 30,1 +/- 13,72 - 56,1 **

0.1 6 5 34,7 +/- 3,60 - 18,2 NS

6 10 42,3 +/- 4,79 - 0,5 NS

3 1 45,2 +/- 1,20 - 34,1 NS

0.05 3 5 43,0 +/- 4,80 + 1,4 NS

3 10 36,1 +/- 2,41 - 15,.1 NS

22 90 421

Taulukko n:o 4: 2-heptadekyyli 2-metyyli-4-/6’ — (N— kinolinium)heksnaoyylioksimetyyli/-l, 3-dioksolaanibromidin vaikutukset PAF:n indusoi-maan konstriktioon

Annos Prosentuaalinen Prosentuaa- * ...

mg/kg IV n bronkokongtrik- linen tio vaihtelu 6 90,8 +/- 0*95

Kontrolli 1 5 8,1 +/- 2)91 - 91,1 ***

Esimerkin __ 0.5 5 25,1 +/- 6,53 - 72,4 *** n:o 10 _

0.1 5 80,4 +/- 13,78 - 11,.5 NS

yhdiste ___________

Taulukko n:o 5 2-heptadekwli 2-metyyli-4-/6 ' ~ (N-kinolinium) - heksanoyylioksimetyyli/-l,3-dioksolaanibromidin vaikutukset PAF:n indusoimaan leukopeniaan 23 90421

Anno ' Leukosyyttien- p^psentuaa,--

Annos Aika maaran-prosed .

m<?/kg IV n (am) tuaaiirié/> 13Sku linen _ _ _v· ·'''**__vaihtelu 6 1 i 41,4 +/~ 8*0 · a · - *

Kontrolli 6 5 28,7 +/- 6»9 > ** ' * __ 6 10 26;9 +/- 10»!

5 1 24,1 +/" 6/0 " 41,0 NS

. . Esimerkin l 5 5 9^3 +/- 9^4 - 67,6 ** 5 10 6,9 V 13»2 - 66,9 ** n:o 10 51 17,0 +/- 12,9 - 58,9 * 015 5 5 9,0 +/- 11,8 - 68,6 **

yhdiste —__J 10 -7/6+/-17,5 4» 128,3 NS

5 1 38,8 +/“ 6,3 + 6,3 NS

°/l 5 5 38,9 +/- 5,7 + 35,5 NS

_ 5 10 41,2 +/- 6,5 + 53,2 NS

24 90 421

Taulukko η:o 6: 2-heptadekyyli 2-metyyli-4-/6'-(N-kinolinium)-heksanoyylioksimetyyli/-l,3-dioksolaani-bromidin vaikutukset PAF:n indusoimaan trombosytopeniaan ... Leukosyyttien Prosen-

Annos. „ i a. prosen- tuaalinen"' rog/^ct, n (mn; tuaalinen lasku vaihtelu~' 6 1 65,3 +/“ 8,5

Kontroll: --- 6 5 49,1 +/" 4,8 6 10 48,5 +/“ 0,5 5 1 19,3 +/“ 1,4 - 58,3 ***

Esimerkin 1 5 5 22,1 +/— 2,5 - 55,0 ** 5 10 19,4 +/“ 3,6 - 60,0 ** 5 1 26,2 +/” 8,3 - 59,9 ** η:o 1Θ -- 0,5 5 5 2918 +/“ 1,7 - 39,3 * 5 10 32,1 +/” 5,8 - 33,8 *

yhdiste 5 1 51,1 +/" 12,1 - 21f7 NS

0,1 5 5 49,1 +/“ 8,8 0 NS

5 10 45,0 +/- 9,7 - 7,2 NS

25 90 421

TULOKSET

2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N-pyridinium)heksanoyyli- oksimetyyli/-l,3-dioksolaanibromidi (0,5, 1 ja 5 mg/kg i.v.) ja 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/61(N-kinolinium)heksanoyy- lioksimetyyli/-l,3-dioksolaanibromidi (0,5 ja I mg/kg i.v.) estavåt PAF:n indusoiman bronkokonstriktion ja PAF:n indusoiman trombosytopenian marsussa.

4 - ANTIGEENIN INDUSOIMA BRONKOKONSTRIKTIO, LEUKOPENIA JA TROMBOSYTOPENIA HETEROLOGISELLA SEERUMILLA PASSIIVISESTI HERKSITETYISSA MARSUISSA

Ovalbumiinin intravenoosi injisointi marsuihin, jotka on passiivisesti herkistetty kaniinin anti-ovalbumiini-: antiseerumilla, aiheuttaa bronkokonstriktion, johon .···. liittyy leukopeniaa ja trombosytopeniaa. Tamå anafylaktinen reaktio nåyttaa johtuvan histamiinin vapautumisesta \ . ja arakidonihappo-metaboliittien (prostaglandiinit, ; tromoboksaani A2 ja leukotrienit) muodostumisesta.

Naiden autakoidien vapautuminen marsussa valittyy påaasial-'·'* lisesti IgG-luokan immunoglobuliinien kautta.

MENETELMX

:V: - Elaimet:

Hartley-urosmarsut, Charles River (450 - 550 g) - Immunisointimenetelma: 18 tuntia ennen antigeenillå haastamista injisoidaan intravenoosisti 0,5 ml/kg kaniinin anti-kovalbumiini-antiseerumin 1/2-laimennusta.

26 90421 - Reaktio saadaan seuraavilla:

Ovalbumiini, 0,75 mg/kg,

Antigeenin intravenoosi injisointi 1 ml/kg lopputilavuudessa, Vålittajaaine, 0,15 M NaCl.

- Yhdisteet annetaan oraalisesti 2,5 ml/kg 1 tunti ennen antigeenilla haastamista. Anestesia saadaan injisoi-malla intraperitoneaalisesti etyylikarbamaattia (1,5 g/kg) 10 ml/kg. Seuratut parametrit ja tulosten ilmoitta-minen: a - Bronkokonstriktio

Antigeenin indusoima bronkokonstriktio mm:na (A), Maksimaalinen bronkokonstriktio mm: nå (B)

Prosentuaalinen bronkokosntriktio lasketaan seuraavasti:

A x 100 B

Neutrofiilit ja verihiutaleet laskettiin 1 minuutti ennen haastamista ja sen jålkeen 1,5 ja 10 minuutin kuluttua. Muutokset ilmoitettiin prosentteina arvoista, jotka saatiin 1 minuutti ennen haastamista.

Kåytetty laitteisto: - Ugo Basile, Comerio, Italia,

Jyrsijaiden ventilaattori ref. 7025 Bronkokospami-muunnin ref. 7020

Kaksikanava-piirturi "GEMINI" ref. 7070 27 90 421

- Coultronics, FRANCE Coulters Counter Z B I

Taulukko n:o 7; 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N— ....... pyridinium)heksanoyylioksimetyyli/- 1,J-dioksolaanibromidin vaikutukset antigeenin indusoiraaan bronkokonstriktioon . Λ ‘ Proserituaali-neit Prosentuaa-

Annos . .........

mg/kg IV n bronkokonstrik·· linen tio vaihtelu r 6 71,9 +/- 14»2

Kon-troll:. _ -- _ — s=s=s=sass>sssBss=ss3SSSS8aB i li ii a i i I..I .ts : Esimerkin

yh'diste 5 8 51,3 +/- 14,2 - 28,7 NS

28 90 421

Taulukko η:o 8: 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6 * -(N- pyridinium)heksanoyylioksimetyyli/- 1,3-dioksolaanibromidin vaikutukset antigeenin indusoimaan leukopeniaan

Annos Aika Leukosyyttien Pfosentuaa- - maaran prosen- linen ' mg/kg IV n (mn) tuaalinen lasku irthibiitio * 6 1 - 11,8 +/- 5,1 > **· ' ^

Kontrolli--- 6 5 39,6 +/- 9 f 5 6 10- 53,9 +/- 7.1

- - , ---- ·- ,:aa»aaasas i ji naa u in uiU-ί» HBSBBHBaOSB

Esimerkir 8 1 - 15,6 +/- 6.6 + 32.,0 NS

•n:o 9----— . . -------------- yhdiste 5 8 5 - 8,7 +/- 10,7 - 78,0 * 8 10 12,3 +/“ 14,1 - 77(.2 * 29 90421

Taulukko η:o 9; 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6-(N-pyridiniura)- heksanoyylioksimetyyli/-l,3-dioksolaanibro-midin vaikutukset antigeenin indusoimaan trombosytopeniaan ... Leukosyyttien Prosentuaali-

Annos Ai a_ pr0sen- nen inhibiitio rog/kg IV n (mn) tuaalinén lasku ·' 6 1-6,8 +/- 2,7

Kontrolli --- „ - 6 5 39,7 +/- 12,5 6 10 - 26,1 +/- 8,1

Esimerkin 8 1 +0,3 +/- 7.9 - 104,4 NS

n: o 9 “ yhdiste 5 8 5 - 3,5 +/— 3,1 — 91,2

8 10 15,7 +/- 6,2 - 39,.8 NS

: TULOKSET

J · 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N-pyridinium)heksanoyylioksi- metyyli/-l,3-dioksolaanibromidi (5 mg/kg i.v.) vaikuttaa antigeenin indusoiman leukopenian ja trombosytopenian vastaisesti alentamatta merkittåvasti antigeenin indusoimaa bronkokonstriktiota.

5 - VAIKUTUS PAF:N AIHEUTTAMAAN HYPOTENSIOON ANESTETISOIDULLA .·!·! ROTALLA

MATERIAALIT JA MENETELMX:

Sprague Dawlev-urosrotat (Charles River Breeding station) (250 - 300 g) anestetisoitiin etyylikarbamaatilla annoksella 1,2 g/kg i.p.

PAF:n intravenoosi injisointi aiheuttaa annoksesta so 90 421 riippuvan hypotension. Hoitotoimenpiteina selvitettiin 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N-pyridinium)heksanoyyli-oksimetyyli/-l,3-dioksalaanibromidin ja 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N-kinoliniumheksanoyylioksimetyyli/- 1,3-dioksalaanibromidin vaikutukset PAF:n indusoimaa hypotensiota vastaan. Hypotensio aiheutettiin injisoimalla intravenoosisti suoraan penislaskimoon yksi ainoa annos PAF (1 jug/kg) tilavuuden ollessa 0,1 ml/100 g. Låakkeet annettiin hypotension ollessa maksimaalinen, so. 3 minuuttia PAF:n injisoinnin jalkeen.

- Mitatut parametrit ja tulosten ilmoittaminen:

Mitattiin systolinen ja diastolinen valtimopaine (mmHg). Arvot on ilmoitettu keskiarvona +/- SEM seuraavissa kayrissa.

- Mittauslaite:

Gould PgQ-muunnin valtimopaineen mittaamiseksi,

Braun-perfuusiolaite,

Gould 8000 S polygraafinen piirturi 3i 90421 h™ Hg PAF:η anto 120- ...........................^^

110- I ? X

:j : z' /' kontrolli 1' i s' *3 ί- '1 Ί / SYSTOLlNEN VALTIMO-

;l Ί s PAINE/AIKA

1 \ Ί S

80- \ ';/

70- Y

Yhdisteiden anto i i i i i i n i i i—i—i—i—i—i—i—i—i—i—j—i — - ;—r 0 1 3 i 5 fa 10 15 20 30 mm nun Hg PAF : n anto 80- t i Exio*'' ..........1 ---------,T"— 70- l \ : kontrolli

50- i Ί X

\ ) DIASTOLINEN

L / / VALTIMOPAINE/LAITE

Yhdisteiden anto 30- —I 1 1—I 1 1 1 1 I I 1 I I I 1 I I I I i i i 013456 10 15 10 38 nun 32 90421

6 - PAF:N INDUSOIMAN LIUSKATUMAISTEN LEUKOSYYTTIEN KASAUTUMISEN VASTAVAIKUTUS

Liuskatumaiset leukosyytit (PMN, polymorphonuclear leukocytes) saatiin A. W. Ford-Hutchinson'in et al. kuvaamalla tavalla (Br - J. Pharmacol. 76, 367 - 371, 1982). Solususpensiot (< 90 % PMN-leukosyytteja) valmistet-tiin peritoneaalisista tulehdusnesteistå sen jålkeen, kun 300 g painaviin Wistar-urosrottiin oli ruiskutettu i.p. 5 ml 12-prosenttista (paino/tilavuus) natriumkaseinaat-tia.

Sentrifugoinnin jålkeen solut pestiin Hanks'in liuoksella ja suspendoitiin uudelleen MEM/Hepes 30 mM alustaan 7 (PM = 7,4) konsentraatiossa 10 solua/ml. PMN-leukosyyttien kasautumisen vahvistamiseksi lisåttiin sytokalasiini B (5 pg/ml) 10 minuuttia ennen kasautumisen laukaisemista.

Valon transmittanssi solususpension (400 ^il) låpi mitattiin kaksoissade-kasautumismittarilla (Chronolog Corp. Coultronics).

Kontrollikyvetti on solususpensio, joka on laimennettu MEM-alustalla 20 % solumååråstå. Ero vastaa 100 % transmit-tanssia. PAF lisåttåessa tapahtuva transmittanssin muutos rekisteroitiin jatkuvasti.

2 minuuttia ennen PAF:n lisååmistå lisåttiin PMN-suspensioon lååkeaineet, jotka oli liuennettu MEM/Hepes-puskuriin (4 μΐ).

TULOKSET - 8 10 M PAF indusoi tåmån PMN-suspension 55-70-prosenttisen kasautumsien.

2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N-pyridinium)heksanoyyli-oksimetyyli/-l,3-diosolaanibromidia 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N-kinolinium)heksanoyylioksimetyyli/-l, 3- 33 9D421 dioksolaanibromidi inhiboivat tåmån kasautumisen annoksesta riippuvalla tavalla, jolloin vastaavat IC^-arvot ovat:

2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N-pyridinium)heksanoyyli-oksimetyyli/-1,3-dioksolaanibromidi: 5 x 10~7 M

2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N-kinolinium)heksanoyyli-oksimetyyli)-l,3-dioksolaanibromidi: 10~^ M

7 - INHIBIITIOVAIKUTUS PAF:N INDUSOIMAAN VAPAAN KALSIUMIN INTRASYTOSOLISEEN MOBILISAATIOON PESTYISS& ΚΑΝΙININ VERIHIUTALEISSA

Kaniinin korvavaltimosta otettua verta laitettiin sitruuna-happo/natriumsitraatti/dekstroosiin ja antikoagulanttiin ja pestyt verihiutaleet valmistettiin . Ardlie'n et al. mukaisesti, Brit. J. Pharmacology, 19, 7-17, 1970. Tromboksaanin indusoiman kasautumisen valttamiseksi r " niita inkuboitiin asetyylisalisyylisuolan (100 μΜ, 30 minuuttia) kanssa. Sen jalkeen ne kuormitettiin fluoresoivan kalsiumindikaattorivarin quin 2 kanssa inkuboimalla quin 2 aseto-metyyliesterin kanssa (15 jiM dimetyylisulfoksidissa, 20 minuuttia huoneen lampotilassa), joka tunkeutuu solumembraanin lapi ja joka hydrolyysin jalkeen jaS verihiutaleeseen. Laakkeita esi-inkuboitiin verihiutaleiden kanssa 15 minuuttia samanaikaisesti CP/CPK-seoksen kanssa, joka tuhoaa erittyneen ADP:n.

Fluoresenssi mitattiin sen jalkeen, kun verihiutaleiden • suspensioon oli lisatty PAF (viritys λ = 339 nm, emissio λ = 492 nm). Fluoresenssin intensiteetti on 2+ verrannollinen solun vapaan kalsiumin mKaraan /Ca /i, joka voidaan kvantitatisoida Tsien'in et al. kuvaamalla tavalla;, J. Cell Biol., 94, 325 - 334, 1982.

34 9 0 4 21

TULOKSET

-9 2 x 10 M indusoima verihiutaleiden stimulaatio nosti 2+ /ca /i-pitoisuuden lepotilan arvosta noin 150 nM arvoon 400 - 600 nM.

2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N-pyridinium)heksanoyylioksi-metyyli/-l,3-dioksolaanibromidi ja 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N-kinolinium)heksanoyylioksimetyyli/- 1.3- dioksolaanibromidi eståvat konsentraatiossa -7 2+ 5 x 10 - M taydellisesti PAF:n indusoiman /Ca /i:n “ 8 mobilisaation. Konsentraatiossa 5 x 10 M on PAF:n vaikutuksen inhibiitio vastaavasti 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N-pyridniumheksanoyylioksimetyyli/- 1.3- dioksolaanibromidilla 44 % ja 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N-kinolinium)heksanoyylioksimetyyli/- 1.3- dioksolaanibromidilla 75 %.

POSOLOGIA

Ihmisterapiassa ja oraalisesti annettaessa ovat paivaannokset 0,1 - 0,5 mg tableteissa tai kapseleissa, joissa on enteerinen påållyste; i.v.-tavassa vastaavat paivaannokset ovat 0,01 - 0,05 mg. Hoito keståa yleensa 2-6 viikkoa.

Claims

35 90421 Patenttivaatimus Menetelmå valmistaa farmakologisesti kåyttokelpoisia yleiskaa-van I mukaisia glyseroliasetaalin aminoasylaatteja CH___0 R, 2 / N I CH — 0 R2 ± i Θ CH 0 CO(CH_)— N' ) X * p jossa on substituoitu fenyyliryhmå tai kaavan + 1 mukainen ryhmå, jolloin m on kokonaisluku 9-25, R2 on vetyatomi, fenyyliryhma tai kaavan CnH2n + χ mukainen ryhma, jolloin n on kokonaisluku 1-10, p on kokonaisluku 3-10, ®-ss=r\ -N___) on pyridium, 3- tiatsolinium, kinolinium ja isokinolinium, ja xO tarkoittaa halogeeni-ioneja, kuten klooria, bromia tai -- jodia, tunnettu siita, ettå kaavan RxCOR2, jossa R^ ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellå, mukaista aldehydia tai ketonia saatetaan reagoimaan pieni stokiometrinen ylimåårå glyserolin kanssa polaarittomassa liuottimessa p-tolueenisul-fonihapon låsnåollessa ja refluksointiolosuhteissa, saatu 4- hydroksimetyyli-l,3-dioksolaanijohdos saatetaan reagoimaan huoneen lampotilassa kaavan ClCO(CH2)pX, jossa p ja X tarkoittavat samaa kuin edellå mukaisen •-halogeenialkanoyylikloridin kanssa orgaanisen emaksen, kuten trietyleeniamiinin låsnåollessa ja saatu yhdiste, jonka kaava on 36 90421 _° R. X 1 _o r2 _OCO(CH2)p-X saatetaan reagoimaan typpikierron alla 50 - 80°C:ssa kaavan "O mukaisen typpipitoisen heterosyklisen yhdisteen kanssa.
37. D421 Forfarande for framstållning av farmakologiskt anvåndbara glycerolacetals aminoacylater med formeln I CH_— 0 R. I / \ CH _ 0 R_ I I θ CH20 CO(CH )—) x P dår R^ ar en substituerad fenylgrupp eller en grupp med formeln CmH2m + varvid m år heltalet 9 - 25, R2 år en våteatom, fenylgrupp eller en grupp med formeln CnH2n + 1/ varvid n år heltalet 1 - 10, p år heltalet 3 - 10, · -N___) ar pyndium, 3-tiazolinium, kinolinium och isokinolnium, och XØ avser hal ogen joner, såsom klor, brom eller jod, k å n -netecknat dårav, att en aldehyd eller keton med formeln R1COR2, dår R^ och R2 avser det samma som ovan, omsåtts med ett litet stokiometriskt overskott glycerol i ett opolårt 1osningsmedel i nårvaro av p-toluensulfonsyra och under refluxforhål1 anden, det erhållna 4-hydroximetyl-1,3-dioxolanderivatet omsåtts vid rumstemperatur med en -halo-.. . genalkanoylkloridi med formeln ClCO(CH2)pX, dår p och X avser det samma som ovan, i nårvaro av en organisk bas, såsom tri-etylenamin och den erhållna foreningen med formel 38 90 421 — O R, X 1 -O R2 _OCO(CH2)p-X omsatts under kvåvecirkulation vid en temperatur under 50 - 80°C med en kvåvehaltig heterocykl isk forening med forme 1 n N0