KR100309902B1 - 디히드로피리딘유도체의신규의약용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 PGI₂생산 증대용 및 고지혈, 동맥경화증 및 뇌질환의 예방 치료용의 하기 식 (Ⅰ) 의 디히드로피리딘 유도체 또는 그의 산 부가염의 신규 약제학적 용도에 관한 것이다 :

[식중,

R₁, R₂및 R₃는 동일 또는 상이하고, 각각은 알킬등이며, R₄는 수소원자등이고 ; R₅는 니트로, 할로겐화 알킬, 시아노등이며 ; X 는 비닐렌 또는 아조메틴이고 : A 는 알킬렌이며, 및 B 는 - N (R₆)(R₇) 또는이다 (이때, R₆및 R₇은 동일 또는 상이하고, 각각은 알킬, 아르알킬, 아릴등이고,: R₈및 Ar 은 아릴등이며 : 및 n 은 0, 1 또는 2 이다)].

Description

디히드로피리딘 유도체의 신규 의약 용도

PGI₂(프로스타시클린) 은 아라키돈산 다단법 (cascade) 에 의해 합성되는 물질 중 하나이며, 혈소판 응고 - 억제작용, 평활근 이완작용, 위산 분비 - 억제 작용, 위점막-보호작용, 기관 혈류 - 증대작용 및 종양 전이 - 억제작용등 많은 생리작용을 가지는 것으로 확인되었다.

PGI₂신타아체 (synthase) 는 특히 혈관 내피세포와 혈관 평활근 세포에 다량 존재하며, 각종 생산 - 증대 물질들이 PGI₂의 생산을 증대시킨다.

PGI₂에 관하여 행해진 지금까지의 연구로 부터, 아라키돈산, 브래디키닌, 히스타민, 세로토닌, 트롬빈, 칼슘 이온 투과 항체 A23187, α - 독소, 류코트리엔 C₄와 D₄, PDGF (혈소판 유도 생장인자), HDL - 콜레스테롤, 인간 혈청, 니트로글리세린, 안지오텐신 Ⅰ과 Ⅱ 및 비타민 C 와 같은 물질이 PGI₂생산 증대작용을 가지고 있음이 알려졌다. PGI₂생산을 증대시키는 물질은 혈관 확장작용, 기관지 확장작용, 위산 분비 - 억제작용 및 종양 전이 - 억제작용등 PGI₂의 작용이 개진을 위한 목적하는 효과를 부여하는, 질병에 유용한 약제라고 기대되고 있다.

고지혈, 동맥경화증 및 뇌질환 (예 : 뇌졸증, 뇌부종, 뇌연화, 뇌출혈과 뇌경색) 은 노화 사회에 따라 최근에 발생한 전형적인 성인병으로, 이병의 예방 및 치료에 효과적인 약제 개발이 요망되고 있다.

고지혈은 콜레스테롤, 트리글리세리드 및 인지질등 혈청 지질의 비정상증가를 수반하는 상태이다. 이 지질은 아포단백질과 함께 혈장에 리포단백질이라고 하는 거대분자 복합물을 형성한다. 리포단백질은 밀도에 따라 유미립자, 초저밀도 리포단백질 (VLDL), 저밀도 리포단백질 (LDL), 중간밀도 리포단백질 (IDL) 및 고밀도 리포단백질 (HDL) 의 5 가지로 분류된다. 고지혈은 편의상 혈청에서 증대된 리포단백질의 종류에 따라 Ⅰ - 형 (유미립자 증대, Ⅱa - 형 (LDL 증대), Ⅱb - 형 (LDL 및 VLDL 증대), Ⅲ -형 (β - VLDL 증대), Ⅳ - 형 (VLDL 증대) 및 Ⅴ - 형 (유미립자 및 VLDL 증대) 의 표현형으로 분류한다.

임상 및 실무관점에서, 질병을 고콜레스테롤혈중과 과트리글리세리드혈중으로 서브 분할함으로써 고지혈을 다루는 것이 유익하다고 생각된다. 양질병의 근본적 치료 방법은 식이 요법과 적절한 운동이다. 증세가 개진되지 않을 때, 약물요법을 도입한다. 현재 고지혈에 사용되는 치료제는 음이온 교환 수지이며, 고콜레스테롤혈중용으로는 콜레스테롤 합성 저해제(HMG - CoA 환원 효소 저해제) 와 프로부콜이, 과트리글리세리드 혈중용으로는 클로피브레이트 제제와 니코틴산 제제가 사용된다.

동맥경화증은 동맥 벽이 두꺼위지거나 경화되어 발생하는 국부 질병으로, 고혈압, 고지혈 및 당뇨병을 일으킨다. 일본국에서 성인중 약 15 % 가 고콜레스테롤 혈중을 가지고 있는 것으로 생각되며, 많은 환자가 고콜레스테롤 혈중 때문에 발생한 동맥경화증으로 고통받고 있다.

후술하는 디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 은 칼슘 채널 길항착용을 가지며, 혈압 강하제, 말초 및 뇌 혈관 확장제와 관상 동맥 장애 치료제 (협심증 치료제) 로서 유용하다 (일본국 특허 출원 공개공보 제 225356 / 1988 호, 미합중국 특허 제 4886819호, EP - A 제 257616 호).

본 발명자들은 디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 에 관한 다양한 연구를 한 결과, 이 화합물이 뇌 혈류 - 상승제 (일본국 특허출원 공개공보 제 62824 / 1990 호, EP-A 제 342577 호), 혈관 경련 치료제 (일본국 특허출원 공개공보 제 180826 / 1990 로, EP - A 제 379737 로) 및 심장 자극제 (일본국 특허출원 공개공보 제 235168 / 1992 호, EP - A 제 463407 호) 로서 매우 유용하다는 사실을 발견하였다.

발명의 개시

본 발명자들은 디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 및 그의 산 부가염이 지금까지확인된 상기 작용과는 다른 예기치 못한 작용, 즉 혈관 내피세포내 PGI₂생산 증대 작용을 가지며, PGI₂생산 증대제로서 유용하다는 사실을 이번에 발견하였다.

또한, 본 발명자들은 디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 및 그의 산 부가염이 혈액중 지질 증대의 억제작용을 가지며, 고지혈과 동맥경화증의 예방 치료제로서 유용하다는 사실을 발견하였다.

본 발명자들은 디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 및 그의 산 부가염이 베니디핀, 니카르디핀 및 히드랄라진과 비교할 때, 뇌질환의 예방 및 / 또는 치료제로서 현저한 작용이 있다는 사실을 추가로 발견하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 의 신규 약제학적 용도를 제공하는 것이다.

보다 구체적으로, 본 발명의 목적을 PGI₂생산을 증대시키기 위한 디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 의 용도를 제공하는 것이다.

또한 본 발명의 목적은 고지혈 및 동맥경화증의 예방 및 치료를 위한 디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 의 용도를 제공하는 것이다.

또한 본 발명의 목적은 뇌질환의 예방 및 치료를 위한 디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 의 용도를 제공하는 것이다.

본 발명은 하기와 같다 :

(1) 유효 성분으로서 하기 식 (Ⅰ) 의 디히드로피리딘 유도체 또는 그의 산부가염 (통상 약리학적 허용가능한 산 부가염) 을 포함하는 PGI₂생산 증대용약제 :상기 화합물의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 PGI₂생산 증대 방법 : 및 PGI₂생산 증대용 약제를 제조하기 위한 상기 화합물의 용도 :

[식중,

R₁, R₂및 R₃은 동일 또는 상이하고, 각각은 알킬, 시클로알킬 또는 알콕시알킬이며 ;

R₄및 R₅는 동일 또는 상이하고, 각각은 R₄와 R₅가 동시에 수소 원자가 아니라는 조건하에, 수소원자, 할로겐, 니트로, 할로겐화 알킬, 알킬 술포닐, 할로겐화 알콕시, 알킬술피닐, 알킬, 시클로알킬, 알콕시, 시아노, 알콕시카르보닐 또는 알킬티오이고:

N 는 비닐렌 또는 아조메틴이며 :

A 는 알킬렌이고 : 및

B 는 - N (R₆) (R₇) 또는 일반식

(식중 R₆, R₇및 R₈은 동일 또는 상이하고, 각각은 수소원자, 알킬, 시클로알킬, 아르알킬, 아릴 또는 피리딜이고, Ar 은 아릴 또는 피리딜이며, n 은 0, 1 또는 2 임) (이하 디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 이라 함)].

(2) 유효 성분으로서 디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 또는 그의 산 부가염을 포함하는 고지혈 예방 및 치료용 약제 : 이 화합물의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 고지혈 에방 및 치료 방법 : 및 고지혈 에방 및 치료용 약제를 제조하기 위한 이 화합물의 용도.

(3) 유효 성분으로서 디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 또는 그의 산 부가염을 포함하는, 동맥경화증의 에방 및 치료용 약제 : 이 화합물의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 동맥경화증의 예방 및 치료방법 : 및 동맥경화증의 예방 및 치료용 약제를 제조하기 위한 이 화합물의 용도.

(4) 유효 성분으로서 디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 또는 그의 산 부가염을 포함하는 뇌질환의 에방 및 치료용 약제 : 이 화합물의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 뇌질환의 예방 및 치료방법 : 및 뇌질환의 예방 및 치료용 약제를 제조하기 위한 이화합물의 용도.

상기 화합물들중 특히 바람직한 화합물은 R₁, R₂및 R₃가 동일 또는 상이하고, 각각은 알킬이며, R₄는 수소원자이고, R₅는 니트로, 할로겐화 알킬 또는 시아노이며, R₆및 R₇은 동일 또는 상이하고, 각각은 알킬, 아르알킬 또는 아릴이며, R₈은 아릴이고, Ar 은 아릴이며, n 은 1 인 경우이다.

본 발명에서 사용된 디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 및 그의 산 부가염은 특히저독성 및 지속적인 효과를 나타낸다. 따라서, 이들은 매우 효과적이고 매우 안전하다.

본 명세서에서 사용된 기호가 하기에 설명되어 있다.

R₁, R₂또는 R₃로 나타내는 알킬은 직쇄 또는 측쇄이며 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, sec - 부틸, t - 부틸, 펜틸, 이소펜틸, 네오펜틸 및 헥실로 예시되는 탄소수 1 ~ 6 의 저급알킬이 바람직하며, 더욱 바람직한 것은 탄소수 1 ~ 4 의 알킬이다. 알킬은 알킬 말단에 탄소수 3 ~ 6 의 저급 시클로알킬알킬, 예컨대 시클로프로필메틸, 시클로부틸에틸 및 시클로펜틸메틸을 가질 수 있다.

R₁, R₂또는 R₃로 나타내는 시클로알킬로서, 바람직한 것은 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 및 시클로헥실과 같은 탄소수 3 ~ 6 의 저급 시클로알킬이다.

R₁, R₂또는 R₃로 나타내는 알콕시 알킬로서, 바람직한 것은 메톡시에틸, 에톡시에틸, 프로폭시에틸, 이소프로폭시에틸, 부톡시에틸, 메톡시프로필, 2 - 메톡시 - 1 - 메틸에틸 및 2 - 에톡시 - 1 - 메틸에틸과 같은 탄소수 3 ~ 7 의 알콕시알킬이다.

R₄또는 R₅로 나타내는 치환체는 동일하거나 상이할 수 있으며, 고리의 어느 위치에서나 결합될 수 있으며, 디히드로피리딘 고리의 결합 위치에 대하여 2 - 및 / 또는 3 - 위치인 것이 바람직하다.

R₄또는 R₅에서 할로겐으로서, 불소원자. 염소원자, 브롬원자 및 요오드원자를 예시할 수 있으며, 특히 바람직한 것은 불소원자와 염소원자이다.

알킬 및 시클로알킬로서, R₁내지 R₃에서 언급한 것이 바람직하다.

R₄및 R₅로 나타내는 알콕시는 탄소수 1 ~ 3 의 저급알킬이 바람직하며, 이들의 예로서 각각 메톡시, 에톡시, 프로폭시 및 이소프로폭시가 있다.

R⁴및 R⁵로 나타내는 알킬티오는 탄소수 1 ~ 3 의 저급 알킬이 바람직하며, 메틸티오, 에틸티오, 프로필티오 및 이소프로필티오를 예시할 수 있다.

R₄및 R₅로 나타내는 알콕시카르보닐로서, 메톡시카르보닐, 에톡시카르보닐 및 프로폭시카르보닐과 같이 탄소수 2 ∼ 4 인 것을 언급할 수 있다.

할로겐화 화합물의 할로겐으로는 상기에 언급한 것을 예시할 수 있으며, 할호겐화 알킬은 수소원자 중 몇개가 할로겐 원자로 치환된 것 [예: (CF₃)₂CHCH₂- CF₃CH₂-] 또는 트리플루오로메틸과 같이 수소원자가 모두 할로겐 윈자로 치환된 것일 수 있다. 또한, 할로겐화 알콕시는 수소원자의 몇개가 할로겐원자로 치환된 것 또는 또는 수소원자가 할로겐원자로 치환된 것일 수 있다. 할로겐화 알킬 및 할로겐화 알콕시의 탄소수는 1 ∼ 6, 바람직하게는 1 ∼ 4 이다.

알킬술포닐 및 알킬술피닐 내의 알킬의 예로는 R₁내지 R₃에서 예시한 것이 있으며, 1 ∼ 6개 바람직하게는 1 ∼ 4 개의 탄소수를 가진다.

R₄는 수소원자가 바람직하고, R₅로서 바람직한 것은 시아노, 니트로 또는 할로겐화 알킬 (특히, 트리플루오로메틸) 이다.

R₆, R₇및 R₈로 나타내는 알킬과 시클로알킬은 R₁내지 R₃에서 예시한 것이 있다.

아르알킬로서, 바람직한 것은 벤질, α - 페틸에틸, β -페닐에틸 및 r - 페닐프로필과 같은 페닐 C₁-₃알킬이다.

아릴로는 페닐과 나프틸을 언급할 수 있다.

이러한 방향족 고리는 임의의 위치에 동일하거나 상이한 치환체를 가질 수 있다. 방향족 고리상의 치환체로서는 R₄및 R₅에서 언급한 것이 있다.

피리딜은 2 -피리딜, 3 -피리딜 및 4 -피리딜을 포함하며, R₄및 R₅로서 상기에서 언급한 치환체를 가질 수 있다.

A 로서 나타낸 알킬렌은 탄소수 2 ∼ 4 의 직쇄 또는 측쇄일 수 있으며, 에틸렌, 트리메틸렌, 테트라메틸렌 및 1, 2 - 디메틸에틸렌을 예시할 수 있다.

Ar 로 나타낸 아릴과 피리딜로서, R₆, R₇및 R₈에서 예시한 것을 포함하며 동일한 치환체를 가질 수 있다.

디히드로피리딘의 4 - 위치 치환체인로 나타낸 고리는 X 가 비닐렌 (-CH = CH-) 인 경우에는 벤젠고리를, X 가 아조메틴 (-CH=N-) 인 경우에는피리딘을 의미한다. 임의의 위치에서 고리는 디히드로피리딘의 4 - 위치에 결합할 수 있다.

치환체 R₄및 R₅는 디히드로피리딘의 4 - 위치에 결합하는 탄소원자에 대하여 오르토 - , 메타 - 및 파라 - 위치의 어느 위치에서도 치환될 수 있으며, 바람직한 것은 오르토 - 및 / 또는 메타 - 위치이다.

디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 및 그의 산 부가염의 예가 표 1 에 기재되어있다.

[표 1]

주 : Me 는 메틸이다.

바람직한 디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 및 그의 산 부가염으로서, 예를들면, 2 - [p - (4 - 벤즈히드릴피페라지노) 페닐] 에틸 메틸 2, 6 - 디메틸 - 4 - (3 - 니트로페닐) - 1, 4 - 디히드로피리딘 - 3, 5 - 디카르복실레이트, 2 - [p - (4 - 벤즈히드릴피페라지노) 페닐] 에틸 메틸 2, 6 - 디메틸 - 4 - (4 - 시아노 - 2 - 피리딜) - 1, 4 - 디히드로피리딘 - 3, 5 - 디카르복실레이트 및 그의 산 부가염이있다.

디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 은 디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 을 구성하고 있는 임의의 부분과 잔류의 부분을, 공지의 방법에 의해, 특히 탈수고리화 반응에 의해 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

구체적으로, 일본국 특허출원 공개공보 제 107975 / 1988 호 (미합중국 특허 제 4849429 호), 일본국 특허출원 공개공보 제 112560 / 1988 호 (미합중국 특허 제 4910195 호), 일본국 특허출원 공개 공보 제 225356 / 1988 호(미합중국 특허 제 488619 호, EP - A 제 257616 호), 일본국 특허출원 공개 공보 제 201765 / 1983 호 (미합중국 특허 제 4892875 호), 일본국 특허출원 공개 공보 제 99042 / 1988 호 (미합중국 특허 4886819 호, EP - A 제257616 호), 일본국 특허출원 공개 공보 제 152351 / 1988 호 (미합중국 특허 제 4910195 호) 및 일본국 특허출원 공개 공보 제 260064 / 1986 호에 재된 방법에 의해 제조될 수 있다.

상기와 같이 제조된 디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ)은 농축, 추출, 크로마토그래피, 재침전 및 재결정화와 같은 공지의 분지 및 정제법에 의해 임의의 순도로 수득될 수 있다.

디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 은 염기성기를 가지고 있으므로, 공지의 방법에 의해 산 부가염으로 전환될 수 있다. 이러한 염은, 약리학적으로 허용 가능한 한 특별한 제한은 없다. 염의 예로서 히드로클로라이드, 히드로브로마이드, 포스페이트 및 술페이트와 같은 무기산과의 염 ; 및 아세테이트, 숙시네이트, 말레에이트, 푸마레이트, 말레이트 및 타르트레이트와 같은 유기산과의 염이 있다.

본 발명에서 유효 성분인 디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 및 그의 산 부가염은 PGI₂가 효과적으로 작용하는 질병의 예방 및 치료에 유용하다. 디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 및 그의 산 부가염은 포유 동물의 혈관 내피세포에서 PGI₂의 생산을 증대하여 혈관 확장작용, 기관지 확장작용, 위산분비 - 억제작용 및 종양 전이 - 억제작용등 PGI₂의 작용이 있도록 한다. 따라서 이들은 종양 전이 억제작용은 물론 고혈압, 기관지 천식 및 위궤양의 예방 및 / 또는 치료에도 유용할 것으로 기대되고 있다. 또한, 이들 화합물은 동맥경화증, 심장병 및 혈전증 등 PGI₂의 결핍 또는 결합으로 인해 야기되는 각종 질병의 예방 및 / 치료용으로도 유용하다. 또한, PGI₂생산 증대는 PGI₂에 의한 기관 혈류 - 상승작용을 초래하며, 이는 이 화합물들이 신증(에 : 신장증세, 사구체 신증 및 당뇨병 신증) 과 같은 기관 순환계 장애의 예방 및 / 또는 치료용에 유용하게 한다.

디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 및 그의 산 부가염은 혈액중 지질의 증가를 억제하여, 포유동물에서 지질대사의 개진과 고지혈의 예방 및 / 또는 치료용으로 유용하다. 이들은 또한 고지혈에 의해 야기된 동맥경화증의 예방 및 / 또는 치료용으로도 유용하다.

디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 및 그의 산 부가염은 뇌졸증, 뇌부종, 뇌연화, 뇌출혈 및 뇌경색과 같은 포유 동물에서의 뇌질환의 예방 및 / 또는 치료용으로 유용하다.

포유 동물의 예로서 생쥐, 들쥐, 토끼, 개, 고양이 및 인간이 있다.

디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 및 그의 산 부가염은 매우 저독성이며, 매우 안전하다.

디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 또는 그의 산 부가염을 상기의 약제로서 사용할 때, 담체, 부형제, 희석액등의 약리학상 허용가능한 부가물질을 약학적으로 요구되는 성분들과 적절히 혼합하여 분말, 과립, 정제, 캡슐, 시럽 또는 주사액의 형태를 가진 약학적 조성물로 제조하며, 이를 경구적 또는 비경구적으로 투여할 수 있다.

디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 또는 그의 산 부가염은 상술한 약학적 조성물에 유효량이 포함되어 있다. 투여량은 투여 경로, 중세, 환자의 체중과 연령에 따라 달라지지만, 디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 또는 그의 산 부가염을 성인 환자에게 투여할 때, 0.1 ∼ 100 mg / 사람 / 일, 바람직하게는 1 ∼ 20 mg / 사람 / 일의 양을 1 내지 수회 분할하여 투여하는 것이 바람직하다. 정맥내 투여시, 디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 또는그의 산 부가염의 바람직한 투여량은 0.1 내지 300, 바람직하게는 5 내지 100 ㎍ / 사람 / 일을 하루에 1 내지 수회 분할하여 투여한다.

본 발명은 하기의 실험예, 실시예 및 참조예에 보다 상세하게 기재되어있으며, 이는 본 발명을 제한하는 것이 아니다.

¹H - NMR 에 관하여 다른 것이 특정되지 않는 한 CDCl₃를 사용하였다.

실험예 : PGI₂생산의 증대

디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 및 그의 산 부가염에 의한 PGI₂생산의 증대에관한 실험을 하기와 같이 진행하였다. 결과는 표 2 에 기재되어 있다.

(1) 세포

6 주생 들쥐의 동맬에서 분리해낸 혈관 내피세포

(2) 배지

배치는 FCS (최종농도 3 %), 헤파린 (최종농도 5 IU / ml), ECGF (혈관내 세포 생장인자, 최종농도 50 ㎍ / ml), 페니실린 (최종농도 100 IU / ml ) 및 스트렙토마이신 (최종농도 100 ㎍ / ml) 이 보충된 D-MEM 배지이다.

분석 배지는 BSA (최종농도 0.01 %), 헤파린 (최종농도 5 IU / ml), ECGF (최종농도 50 ㎍ / ml), 페니실린 (최종농도 100 IU / ml) 및 스트렙토마이신 (최종농도 100 ug / ml) 이 보충된 CpTi - MEM 배지이다.

(3) 배양 용기

콜라겐 - 코팅 10 cm 접시와 콜라겐 - 코팅 24 웰 플레이트

(4) 배양

혈관 내피세포의 배양은 콜라겐 - 코팅 접시를 사용하여 진행하였다.

배양 조건은 95 % 공기 - 5 % CO₂에서 37 ℃ 온도였다. 트립신 / 에틸렌 디아민테트라아세트산 용액 (스플리트 비율 = 1 : 2 ) 을 사용한 종래의 방법으로 서브배양을 행하였다. 실험하기 전에, 콜라겐 - 코팅 24 웰 플레이트에 1 × 10⁴세포 / 웰의 세포를 접종시키고, 배지에서 7 일간 배양하였다. 그후, 배지를 분석 배지로 바꾸고, 세포를 2 시간 예비배양 하였다. 배지를 시험약물이 보충된 분석 배지로 대체시키고, 1 시간 동안 세포를 배양하였다. 배양액을 희수하여 -20℃ 에서 저장하였다. 각 웰에서 세포수를 계수하였다.

(5) PGI₂함량의 측정

각 시료의 PGI₂를 BIOTRAK 6 - 케토 - PGI₁αEIA 시스템 (아메르샴 (Amers'nam)) 을 사용한 EIA (효소면역분석법) 으로 분석하였다.

(6) 시험 약물

본 발명의 화합물 (디메틸 술폭시드에 용해되는 하기의 화합물 2), 니카르디핀 (디메틸술폭시드에 용해됨) 및 인간의 트롬빈을 사용하였다.

[표 2]

주 : 시로수 = 4

실험예 1의 결과가 보여주듯이, 본 발명의 화합물은 PGI₂생산 - 증대작용 및 공지된 PGI₂생산 - 증대제인 트롬빈의 경우와 동일하거나 더 큰 작용 및 효과를 나타내고 있다. 본 발명의 디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 과 구조적으로 유사한 니카르디핀은 PGI₂생산 - 증대 작용은 하지 않는다는 사실도 공지되어 있다.

고지혈 및 동맥경화증에 대한 디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 및 그의 산 부가염의 효과는 하기의 실험예 2 - 4 에 의해 검사되었다.

실험예 2

고 콜레스테롤 음식 [2 % 콜레스테롤, 1 % 콜산 및 5 % 리놀레산이 부가된 정상 음식 (상표명 CE - 2), Japan Clare Corp, 제조] 을 C57BL / 6Cr 수컷 생쥐 (체중 약 20 g) 에 제공하고, 1 % 트윈 80 에 용해된 시험 약물은 9 주동안 1 일 1 회 소정량을 생쥐에 경구 투여하였다. 투여량은 본 발명의 화합물 (하기의 화합물 (2)) 10 mg / kg 체중 또는 대조용 약물인 닐바디핀 (10mg/kg 체중) 이나 클로피브레이트 (100 mg / kg 체중) 를 포함하였다.

9 주째, 혈청중 각종 지질의 양을 Wako Pure Chemicals Co., Ltd 제 측정키트를 사용하여 측정하였다. 그 결과는 표 3 에 기재되어 있다.

[표 3]

고 콜레스테롤 음식을 제공하지만 약물을 투여하지 않은 군과 부형제만을 투여한 군은 유리된 콜레스테롤이 증가를 보였고, HDL 과 트리글리세리드는 감소를보였다. HDL 은 콜레스테롤의 제거작용을 가진다. 따라서, 그의 감소는 콜레스테롤의 상승을 일으킨다. 본 발명의 화합물이 투여된 군은 콜레스테롤의 증가를 억제하였고, HDL 과 트리글리세리드 값은 정상적인 음식이 제공된 군의 경우와 대략 동일하였다.

실험예 3

고 콜레스테롤 음식 [2 % 콜레스테롤 및 1 % 콜산이 부가된 정상 음식(상표명 CR - 3), Japan Clare Corp. 제조] 을 뉴질 알비노 수컷 토끼 (체중 약 2 kg) 에 제공하고, 1 % 트윈 80 에 용해된 시험 약물은 5 주동안 1 일 1 회 소정량을 토끼에 경구 투여하였다. 투여량은 본 발명의 화합물 (하기의 화합물 (2)) 10 mg / kg 체중 및 대조용 약물인 닐바디핀 (10mg/kg 체중) 이나 클로피브레이트 (100 mg / kg 체중)를 포함하였다. 5 주째, 혈청중 각종 지질의 양을 측정하였다. 효소 방법에 의해 총 콜레스테롤, 트리글리세이드 및 인지질을 측정하였다. 혈청중 리포단백질 부분을 헤파린 - Ca 비탁법으로 측정하였다. 그 결과는 표 4 에 기재되어 있다.

[표 4]

본 발명의 화합물이 투여된 군은 부형제만을 투여한 군과 비교할 때, 총 콜레스테콜, LDL, VLDL, 트리글리세리드 및 인지질의 감소를 나타내었다. 본 발명의 화합물의 작용은 공지된 고지혈 치료제인 클로피브레이트의 경우와 대략 동일하거나 더 컸다.

실험예 4

고 콜헤스테롤 음식 [2 % 콜레스테롤 및 1 % 콜산이 부가된 정상 음식(상표명 CR - 3), Japan Clare Corp. 제조] 을 뉴질 알비노 수컷 토끼 (체중 약 2 kg) 에 제공하고, 1 % 트윈 80 에 용해된 시험 약물은 7 주동안 1 일 1 회 소정량을 토끼에 경구 투여하였다. 투여량은 본 발명의 화합물 (하기의 화합물 (2)) 10 mg / kg 체중 및 대조용 약물인 닐바디핀 (10mg/kg 제중) 이나 클로피브리이트 (100 mg / kg 체중) 를 포함하였다. 7 주째 동맥을 제거하고, 동맥 중 각종 지질의 양, Ca 함량 및 동맥경화증 영역의 각종 지질의 양을 측정하였다. 결과는 표 5에 기재되어 있다. 측정방법은 하기와 같다.

(1) 지질량의 측정

CO₂흡입하에 동맥을 제거하였다. 복부 동맥 (5cm) 을 신장 동맥으로 부터 제거하여 클로로포름 : 메탄올 = 2 : 1 인 혼합 용액 (5ml) 에 위치시켰다. 동맥을 50 ℃ 에서 30 분간 방치하여 동맥내 지질을 방출하였다. 부유물중 지질의 양을 Wako Pure Chemical Industres, Ltd. 제 측정 키트를 사용하여 측정하였다.

(2) Ca 함량 측정

상기 단계에서 수득한 잔사물을 질산 : 황산 : 과염산 : 물 = 1 : 1 : 4 : 1 인 혼합용액 (1ml)에 놓고, 완전 용해시켰다. 용액중 Ca 농도를 Wako Pore Chemical Industries, Ltd. 제 측정 키트를 사용하여 측정하였다.

(3) 동맥경화증 부위의 측정

흉부 대동맥 (ca. 10cm)을 대동맥궁으로부터 제거하고, 그의 조직을 수단 II 유지 염색하였다. 동맥경화증 부위를 상 분석기를 사용하여 결정 하였다. 동맥경화증 부위는 대동맥의 전체 면적에 대한 백분율로 나타낸다.

[표 5]

본 발명의 화합물이 투여된 군은 부형제만을 투여한 군과 비교할 때, 동맥경화증의 억제는 물론 총 콜레스테롤, 유리 콜레스테롤, 에스테르화된 콜레스테롤 및 Ca 함량의 감소를 나타내었다. 본 발명의 화합물의 작용은 공지된 고지혈 치료제인 클로피브레이트의 경우와 대략 동일하거나 더 컸다.

실험예 2 - 4 의 결과로 부터, 디히드로피리딘 유도체 (I) 및 그의 산 부가염이 혈액중 지질, 특히 고지혈에 관한 문제점을 일으키는 콜레스테롤, LDL 및 VLDL 의 상승을 억제하며, 고지혈 치료체로서 유용하다는 것이 명백하다. 또한 이들은 혈액중 지질의 양을 감소시키며, 동맥경화증의 예방 및 치료에 유용하다.

뇌질환에 대한 디히드로피리딘 유도체 (Ⅰ) 및 그의 산 부가염 효과를 하기 실험예 5 - 8 에서 검사하였다.

실험예 5 : 뇌졸중 발발 억제

시험 약물

하기의 화합물 (2) (본 발명의 화합물) 와 베니디핀 (대초용 약물)

시험 방법

수컷 SHRSP (발작 - 성향의 자생 고혈압 들쥐, 10 주생) 을 각 케이지에 거주하게 하여 SP 먹이 (Funabashi Farm 제, 이하 동일) 상에서 12 주생이 될 때까지 길렀다. 13 주생 때 먹이를 4 % NaCl 을 포함하는 SP 먹이로 전환시킨 후, 동일 먹이상에서 들쥐를 계속 길렀다. 14 주생때 부터 약물을 투여하기 시작하여 8 주간 계속 투여하였다. 시험 약물 또는 부형제를 매일 10 ml / kg 씩 경구 투여하고, 들쥐를 시험 약물 0.3 mg / kg / 일, 1 mg / kg / 일 또는 3 mg / kg / 일이 투여된 군으로 분류하였다. 매주 약물을 투여하기 전과 투여 후 2 시간때 프로그램 가능한 혈압계 (PS-200A Riken Kaihatsu Corp, 제) 를 사용하여 수축기 혈압을 측정하였다. 뇌졸증 발생일과 사망시 사망일을 기록하였다. 뇌, 심장 및 신장을 제거하고, 가능한 뇌출혈 또는 뇌연화를 가시 관찰하고, 10 % 포르말린 - 포스페이트 완충용액 (pH 7.4) 로 고정화시켰다. 실험을 통해 생존한 동물들을 4 % 포르말린 - 포스페이트 완충용액 (pH 7.4) 250 ml 로 환류 - 고정화한 후, 상기 기관을 제거하였다. 동일 용액을 사용하여 4 ℃ 에서 포스트 - 고정화를 행하였다.

결과

각 군의 생존률과 제거된 뇌에 대한 가능한 손상을 하기 표 6 에 기재하였다.

[표 6]

1. 생존률

실험 개시후 2 주 부터 부형제 (대조용) 가 투여된 군 (대조군) 에서 사망하는 경우가 발견되었고, 평균 생존일수는 27 ± 5 일이었다. 이에 비해, 본 발명의 화합물 (2) 0.3 mg / kg / 일이 투여된 군은 다소 생존일수가 연장되었고, 평균 생존일수는 34 ± 5일이었다. 본 발명의 화합물 1 mg / kg / 일 또는 3 mg / kg / 일 이 투여된 모든 동물들은 실험내내 생종하였다.

2. 뇌의 가시적 관찰

부형체 군에서, 9 마리 동물중 7 마리는 뇌출혈, 뇌부종 또는 뇌연화가 있었다. 이에 비해, 본 발명의 화합물 (2) 0.3 mg / kg / 일이 투여된 9 마리중 5 마리가 뇌졸증을 일으켰다. 그러나. 화합물 (2) 를 1 mg / kg / 일 투여하였을 때에는 9 마리중 단지 1 마리만이 뇌 손상으로 고통을 받았고, 3 mg / kg / 일 투여하였을 때는 뇌졸증 발생은 발견할 수 없었다.

요약

상기 결과로 부터, NaCl 다량에 의해 발생한 심한 고혈압 중세로 고통받고 있는 SHRSP 에 본 발명의 화합물 (2) 를 1 mg / kg / 일 이상 투여하는 경우, 뇌졸증 발생 및 이에 의한 사망을 현저하게 억제한다는 사실이 명백하다. 본 발명의 화합물 (2) 1 mg / kg / 일 을 투여한 군은 이들이 실험 개시후 3 주때로 부터 250 mmHg 이상, 실험 종료시에는 270 mmHg 인 평균 수축기 혈압을 나타내기는 하지만, 9 마리중 오직 한자리만이 뇌졸증을 일으켰다. 이에 비해, 대조용 약물인 베니디핀은 본 발명의 화합물 (2)의 경우보다 SHRSP 에서 뇌졸증 발생의 억제가 더 약화됨을 보였다.

실험예 6 : 뇌졸증 발생 억제

시험 약물

후술하는 화합물 (2) (본 발명의 화합물), 니카르디핀과 히드랄라진 (양자 모두 대조용 약물임).

시험 방법

시험 기간을 12 주로 한 것을 제외하고는 상기 실험에 5 에 따라 시험하였다.

결과

생존율 (투여후 12 주) 을 하기 표 7 에 요약하였다.

[표 7]

각종 약물이 투여된 SHRSP 의 성존률

양성반응 동물의 수 / 전체 동물의 수

1. 생존률

부형제가 투여된 군(대조군)은 시험 개시후 2주 때부터 임모(piloerection) 와 마비등 뇌졸증 증세가 나타나기 시작하여 37 일 만에 동물 모두가 사망하였다. 이 대조군에서는 동물중 50 % 가 29 일만에 사망하였다. (D₅₀), 이에 비해, 본 발명의 화합물 (2) 가 0.3 mg / kg / 일 투여된 군은 시험 개시후 약 3 주 부터 뇌졸증 증세를 보여, 모든 동물이 NaCl 다량 사용한 때부터 68 일만에 사망하였다. 이 군의 D₅₀은 37 일로, 대조군과 비교할때 다소 연장된 생존 기간을 나타내었다. 본 발명의 화합물 (2) 을 1mg / kg / 일 또는 3 mg / kg / 일 만큼 투여하였을때, 12 주 투여하는 동안 뇌졸증 증세를 보인 동물은 전혀 없었으며, 모든 동물이 시험내내 생존해 있었다. 그러나, 니카르디핀 3 mg / kg / 일 이 투여된 군에서는, 2주후 뇌졸증이 발생하여 50 일 만에 모든 동물이 사망하였다. 이 군의 D₅₀은 35 일이었다. 니카르디핀 (10 mg / kg / 일) 이 투여된 군과 히드랄라진 (10 mg / kg / 일) 이 투여된 군은 NaCl 다량 사용후 3 주 부터 들쥐중 일부에서 뇌졸증을 일으켰다. 그러나, 들쥐중 절반이 12 주가 지날 때 까지 생존해 있었고 (D₅₀은 각각 68 일 및 78 일임), 뇌졸증 발생이 억제되었기 때문인 것으로 간주되는 명백한 수명 - 연장 효과를 발견하였다.

2. 뇌의 가시적 관찰

12 주 투여하여 생존한 들쥐의 뇌를 제거하여 가시 관찰하였다. 화합물 (2) 를 1 mg / kg / 일 투여한 군에서 단지 1 마리만이 뇌연화를 나타내었고, 다른 비정상은 전혀 발견할수 없었다. 화랄물 (2) 를 3 mg / kg / 일 투여한 군에서는, 어떠한 뇌연화 또는 뇌출혈도 발견하지 못하였다. 이에 비해 mg / kg / 일 의 니카르디핀이 투여된 군에서는 5 마리 중 4 마리가 명백한 좌우 뇌연화 현상을 나타내었고, 10 mg / kg / 일의 히드랄라진이 투여된 군은 5 마리중 1 마리만이 뇌연화 현상을 나타내었다. 그러나, 외형상으로는 어떤 동물도 뇌출혈 현상을 나타내지 않았다.

요약

상기 걸과로 부터, 본 발명의 화합물 (2) 을 1 mg / kg 이상 투여하는 경우 뇌졸증 증세를 완전 억제시켜 모든 동물들을 생존할 수 있게 함은 명백하다.

또한, 10 mg / kg 의 니카르디핀 또는 히드랄라진을 연속적으로 경구투여하던 뇌졸증 발생을 억제한다는 사실이 발견되었다. 히드랄라진 투여는 확실하게 저혈압을 유지하는 결과를 초래하기 때문에, 히드랄라진에 의한 뇌졸증 발생의 억제는 이 약물의 혈압 강하 작용에 기인하는 것으로 간주된다. 한편, 많은 양의 니카르디핀이 투여된 10 마리 동물중 5 마리는 생존하였다. 그러나, 5 마리중 4 마리는 좌우 뇌연화를 가지고 있음이 명백하다. 따라서, 니카르디핀은 뇌졸증을 방지하고 생존율을 증대시키는 것이라고 생각되며, 그의 작용은 본 발명의 화합물 (2) 의 경우보다 확실히 약하다.

실험예 7 : 뇌졸증 있는 들쥐의 치료

시험 약물

후술하는 화합물 (2) (본 발명의 화합물), 니카르디핀과 히드랄라진(둘다 대조용 약물).

시험 방법

SHRSP (9 주생) 에 4 % NaCl - 포함 SP 먹이를 제공하고, 뇌종증 발생이 외관상 변화, 즉 체중 감소와 신경계 증상이 확인된 동물을 선택하였다. 동물들을 실험 초기로 부터 각 케이지에 거주하게 하였고, 그 후 이들에게 SP 먹이를 제공하였다. 시험 약물 또는 부형제를 10 mg / kg 의 양으로 21 일 동안계속 강제로 경구 투여하였다. 외형, 종합상태 및 신경계 증상을 검사하고, 하기의 점수표에 따라 소정일과 소정시간에 측정한후, 생존률을 같이 체크하였다. 사망한 경우에 있어서, 동물의 뇌를 제거하여 가능한 뇌출혈과 뇌연화를 가시 관찰하고, 10 % 포르말린으로 고정화시켰다.

상태 평가 점수

1) 운동 장애

정상 : 0, 가벼운 장애 : 1. 심한 장애 : 2

2) 비정상 자세

정상 : 0. 가벼운 장애 ; 1, 심한 장애 : 2

3) 정위 반사

관찰 : 0, 관찰되지 않음 : 1

4) 힌드림 (hindlimb) 의 굴곡 반사

관찰 : 0, 관찰되지 않음 : 1

5) 시력 위치의 확인

정상 : 0, 가벼운 장애 : 1, 심한 장애 : 2

6) 악력 (테일 서스펜션하)

정상 : 0, 가벼운 손실 : 1, 심한 손실 : 2

7) 유연성 (접촉에 의함)

정상 : 0, 가벼운 경화증 : 1, 심한 경화증 : 2

8) 설사

관찰 : 0, 관찰되지 않음 : 1

심한 증상은 모든 평가 항목에서 득점하여 매우 큰 점수를 얻기 때문에, 심한 증상이 있는 동물이 얻을 수 있는 최대 전수는 5 이며, 점수가 5 를 넘는 동물도 5 로 표현한다. 사망한 경우는 점수를 6 으로 계산한다.

결과

1. 종합 상태 및 신경계 증상

표 8 에 각 군의 점수가 기재되어 있다.

[표 8]

뇌졸증이 있는 SHRSP 의 신경계 점수에 대한 화합물 (2) 의 효과

±SD를 의미함

¹⁾: P<0.05²⁾: P<0.01³⁾: P<0.001 (월콕슨 시험에 의해 부형제가 투여된 동물들과의 상당한 차이)

실험 개시때 각 군의 증상 점수는 2.3 ∼ 2.9 였고, 이는 각 군사이에 많은 차이가 없음을 보여주고 있다. 증상 점수는 부형제 군에서는 매주 악화되어 14 일 이후에는 4.6 이 되었다. 본 발명의 화합물 (2) 가 투여된 군은, 부형제 군과 비교할 때, 각각의 양이 투여된 군에서 실험 개시로 부터 7일후 놀라운 향상 효과를 보였다. 특히, 많은 투여량 군 (3 mg / kg / 일) 은 14 일 후에는 모든 동물에서 점수가 0 이었고, 이는 정상 상태로 회복되었음을 의미한다. 대조용 약물, 즉 니카르디핀 (10 mg / kg / 일) 또는 히드랄라진 (10 mg / kg / 일) 이 투여된 군을 비록 본 발명의 화합물 (2) 의 경우보다는 약하지만 증상이 호전되었다.

2. 생존률

각 군의 생존율과 제거된 뇌의 가능성 있는 손상이 표 9 에 기재되어 있다.

[표 9] SHRSP 의 뇌손상

양성 반응 동물의 수 / 총 동물의 수

실험 개시후 약 7 일째로 부터 부형제 군에서 사망한 경우가 발견되었고, 실험 종료시 동물의 생존율은 42 % 였다. 이에 비해, 본 발명의 화합물 (2) 의 각 양이 투여된 군의 동물들은 모두 생존하였다. 대조용 약물, 즉 니카르디핀 (10 mg / kg / 일) 또는 히드랄라진 (10 mg / kg / 일) 이 투여된 군에서는 7 마리 중 2 마리가 사망하였고, 생존율은 71 % 였다.

3. 뇌의 병리 관찰 (가시적)

시험 종료후 또는 동물이 죽었을 때, 동물의 뇌를 제거하여 뇌출혈 또는 뇌부종의 현상을 가시 검사하였다. 부형제 군에서는 12 마리중 11 마리가 뇌출혈, 뇌부종 또는 뇌연화를 보였다. 본 발명의 화합물 (2) 를 1 mg / kg / 일 또는 3 mg / kg / 일 투여한 군에서는, 대개 뇌출혈의 흔적이 각각 9 마리중 8 마리, 8 마리중 7 마리에서 발견되었다. 그러나, 뇌부종과 뇌연화는 투여량 - 의존하여 억제된다. 니카즈디핀 또는 히드랄라진이 투여된 군은 두 군 도두 7 마리중 6 마리가 뇌장애를 가지고 있었으며, 뇌부종 및 뇌연화가 본 발명의 화합물 (2) 와 비교할 때 매우 자주 발생하였다.

4. 실험 종료시까지 생존한 동물로 부터 뇌의 병리 관찰 (가시적)

부형제 군에서 생존한 5 마리의 뇌를 현저하게 팽윤 시켜 뇌의 반대편쪽으로의 편위 (deviation) 를 관찰하였다. 또한 뇌출혈 장애 또는 그의 흔적은 5 마리 모두에서 발견되었다. 본 발명의 화합물 (2) 이 투여 (각각의 양) 된 동물은 단지 뇌출혈 흔적만 발견되었으며, 뇌의 팽윤은 발견되지 않았다. 한편, 니카르디핀 또는 히드랄라진이 투여된 모든 동물들은 생존하였고, 뇌출혈 흔적을 나타내었다. 또한, 일부 경우에는 괭윤에 의해 야기된, 뇌의 반대쪽으로의 편위도 발견되었다.

요약

상기 결과로 부터, 본 발명의 화합물 (2) 가 생존률 및 뇌졸증이 있는 SHRSP 의 신경계 증상을 크게 향상시켰으며, 뇌부증 또는 뇌연화로의 발전을 억제한다는 사실이 명백하다. 이에 비해, 니카르디핀 또는 히드랄라진이 투여된 군은 생존률 및 신경계 증상이 향상되는 경향을 보이는 동안, 뇌장애 악화의 억제는 본 발명의 화합물 (2) 보다 크게 약화되었다.

시험예 8 : 뇌졸증이 있는 들쥐의 조직 관찰 / 치료

시험 약물

후술하는 화합물 (2) (본 발명의 화합물), 니카르디핀과 히드랄라진 (둘다 대조용 약물임)

시험 방법

SHRSP (7 주생) 을 각 케이지에 거주하게 하고 SP 먹이를 제공하였다. 9 주생 때, 먹이를 4 % NaCl 을 포함하는 SP 먹이로 바꾸었다. 뇌졸증 증세의 출현을확인한 후, 들쥐 사육용 SP 먹이로 다시 먹이를 바꾸었다. 실험예 2 와 동일한 방법으로 시험 약물 또는 부형제를 투여하고, 최후까지 생존한 동물의 뇌를 제거하여 시료로 사용하였다. 각 시료를 10 % 중성 포르말린 완충 용액으로 고정화한 후, 건조, 세정 및 종래 방법에 의해 파라핀에 묻었다. 두께가 3㎛ 인 견본을 제조하여 차례로 HE 염색 PAS 염색 및 EGV 염색하고, 광학 현미경으로 조직 병리상 관찰을 하였다. 뇌졸증의 원인중 하나인 뇌출혈, 주변 조직의 일어날 수 있는 괴사현상, 부종 및 낭종장애를 치료 효과의 지표로 사용하였다.

결과

(1) 부형제 군

심한 뇌출혈 또는 이에 의해 일어난 증상이 5 마리 모두에서 발견되었다.

(2) 본 발명의 화합물 (2) 을 1 mg / kg / 일 투여한 군

중간 정도의 뇌출혈 또는 이에 의한 중상이 5 마리중 2 마리에서 발견되었다. 한 마리의 경우, 단지 뇌출혈 장애의 흔적만이 발견되었고, 나머지 두 마리에서는 어떠한 증상도 발견되지 아니하였다.

(3) 본 발명의 화합물 (3) 을 3mg / kg / 일 투여한 군

뇌출혈 때문에 일어난 경미한 정도의 증상이 5 중 1 의 경우에서 발견되었다. 나머지 4 마리 경우에서는, 뇌출혈 장애의 흔적만이 발견되었다.

(4) 니카르디핀 10 mg / kg / 일이 투여된 군

심각한 뇌출혈 또는 이에 의한 증상이 5 중 4 마리에서 발견되었다. 나머지 한 마리에서는 어떠한 증상도 발견되지 않았다.

(5) 히드랄라진 10 mg / kg / 일이 투여된 군

뇌출혈 때문에 일어난 중간 정도의 증상이 3 중 2 마리에서 발견되었다. 나머지 한 마리에서는 어떠한 증상도 발견되지 않았다.

하기 표 10 과 11 에 결과가 요약되어 있다.

[표 10]

각각의 약물 군에서의 뇌출혈 정도 또는 이에 수반된 증상

[표 11]

각각의 약물 군에서 일어날 수 있는 새로운 뇌출혈 장애

요 약

뇌졸증이 있는 SHPSP 에 대한 본 발명의 화합물 (2) 의 치료 효과를 조직병리상 검사하였다. 그 결과, 최대 정도의 뇌출혈 또는 이에 의한 증상이 부형제 군의 5 가지 경우 모두에서 발견된 반면, 본 발명의 화합물 (2) 가 1 mg / kg / 일 투여된 군의 5 마리중 2 마리에서는 뇌출혈 때문에 일어난 중간 정도의 증상이 발견되었고, 본 발명의 화합물 (2)가 3 mg / kg / 일 이 투여된 군의 5 마리중 1 마리에서는 뇌출혈 때문에 일어난 경미한 정도의 증상이 발견되었다. 또한 약물 투여후 발생되는 것으로 간주되는 새로운 출혈 장애현상은 본 발명의 화합물 (2) 를 투여한 군 (둘다) 에서 발견되지 아니하였다.

위 결과를 토대로, 본 발명의 화합물 (2) 는 새로운 뇌출혈 발생을 억제함은 물론 뇌출혈에 의해 발생하는 주변 조직의 뇌사, 부종 및 낭종 장애의 발전을 투여량에 의존하여 억제함이 명백하다. 대조용 약물인 히드랄라진 (10 mg / kg / 일) 을 투여한 군이 본 발명의 화합물 (2) 1 mg / kg / 일을 투여함으로써 수득한 것과 동일한 정도의 효과를 보인 반면, 니카르디핀 (10 mg / kg / 일) 이 투여된 군은 거의 어떠한 효과도 나타내지 아니하였다.

참고예

2 - [p - (4 - 벤즈히드릴피페라지노) 페닐] 에틸 메틸 2, 6 - 디메틸 - 4 - (3 - 니트로페닐) - 1, 4 - 디히드로피리딘 - 3, 5 - 디카르복실레이트 (화합물 (1)) 및 그의 히드로클로라이드 (화합물 (2)) 의 합성 :

3 - 니트로벤즈알데히드 (1.144 g, 7.57 mmol), [p - (4 - 벤즈히드릴피페라지노) 페닐] 에틸 아세토아세테이트 (3.464 g, 7.59 mmol) 및 메틸 3 - 아미노크로토네이트 (873 mg, 7.58 mmol) 을 100 ml - 가지형 플라스크에 채워 넣었다. 여기에 이소프로판올 (12 ml)을 가하였다. 플라스크에 딤로트 응축기를 장착시키고. 16 시간 가열 환류하였다. 반응 용매를 감압하 증류제거하고, 잔사물을 컬럼 크로마토그래피 [실리카겔, 클로로포름 - 메탄올 (45 : 1)] 및 컬럼 크로마토그래피 [실리카겔, 에틸 아세테이트 - n - 헥산 (2 : 3)]에 의해 분리하고, 수득한 조 생성물을 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여 2.503 g 의 표제 화합물 (1) (수율 48 %) 을 수득하였다.

¹H - NMR δ

8.06 (1H, t, J = 2Hz), 7.97 (1H ddd, J = 8; 2; 1Hz), 7.1-7.6 (12H), 7.03 (2H, d, J = 8.6Hz), 6.80 (2H, d, J = 8.6Hz), 6.02 (1H, s), 5.07 (1H, s), 4.26 (1H, s), 4.22 (2H, t, J = 7Hz), 3.64 (3H, s), 3.15 (4H, dd, J = 5 : 4.7Hz), 2.81 (2H, t, J = 7Hz), 2.55 (4H, dd, J = 5 : 4.7Hz), 2.33, 2.28 (3H, s, 각각)

화합물 (1) (2.124g, 3.16mmol) 온 200 ml - 가지형 플라스크에 넣고, 플라스크를 고무 - 밀봉하였다. 여기에 염화 메틸렌 (100 ml) 을 가하고, 내용물을 용해시킨 후, 혼합물을 실온에서 30 분간 교반하면서 염화수소 기체를 도입하였다. 생성된 결정체를 여과 수집하여 약 2.22 g 의 표제 화합물 (2) 을 수득하였다.

¹H - NMR δ :

13.72 (1H, brs), 8.05 - 7.9 (6H), 7.82, 7.26 (4H, A₂B₂·q J = 8.6Hz), 7.6 - 7.3 (8H), 6.28 (1H, s), 5.2 - 5.05 (2H), 5.01 (2H, s), 4.27 (2H, t, J = 6.5Hz), 4.3 - 4.1 (2H), 3.66 (3H, s), 3.65 - 3.45 (4H), 2.95(2H, t, J = 6.5Hz), 2.36, 2.33 (3H, s,각각)

실시예 1

정제 :

(1), (3) 및 (4) 를 100 메쉬 - 체로 미리 걸렀다. (1), (3), (4) 및 (2) 를 각각 일정한 물 함량으로 건조시킨후, 혼합기에 의해 상기 중량비로 혼합물을 반죽하였다. (5) 을 균질 - 혼할 분말에 가하고, 단기간 (30 초) 혼합하였다. 혼합 분말을 각각 200 mg 인 정제로 압축시켰다.

정제를 폴리비닐아세틸 디에틸아미노아세테이트 등의 필름 코팅제로 위 - 코팅시키거나 식품 착색제로 코팅시킬 수 있다.

실시예 2

상기 성분의 무게를 달고 균질하게 혼합한 후, 혼합 분말을 각각이 200 mg 인 경화 젤라틴 캡슐에 채웠다.

실시예 3

상기의 혼합용액을 막 여과기를 통해 여과시킨 후, 여과 살균하였다. 여과물을 질소 가스로 채워진 유리병에 무균적으로 붓고 밀봉하여 정맥내 주사액을 제조하였다.

실시예 4

불포화 지방산 모노글리세리드 (엑셀 0 - 95 R. Kao Corp 제조) 와 폴리옥시에틸렌소르비탄 모노올레에이트 (TO - 10 M, Nikko Chemical Corp. 제조) 의 혼합물에 화합물 (2) (20.1 g) 를 가하고, 40 ℃ 에서 용해, 교반하여 비 - 미셀 용액을 제조하였다. 수득한 용액 (600 g) 과 마그네슘 알루미네이트 메타실리케이트 (370 g, 뉴실린 US₂, Fuji Kasaku Sangyo 제조) 를 회전형 과립기에서 혼합하였다.그후, 카르멜로스 나트륨 A (30 g)을 혼합하고, 정제수 (250 ml) 를 가하여 과립화하였다. 입자를 강제 - 공기 건조기로 40 ℃ 에서 17 시간 건조시키고, 42 - 200 메쉬 - 체를 통과시켜 캡슐내에 재워진 과립 550 g 을 제조하였다.

본 발명은 하기의 특수한 구조를 가지는 디히드로 피리딘 유도체의 신규 약제학적 용도에 관한 것이다. 보다구체적으로, 본 발명은 PGI₂생산을 증대시키고, 고지혈, 동맥경화증 및 뇌질환을 예방 치료하기 위한 디히드로피리딘 유도체의 신규 약제학적 용도에 관한 것이다.

Claims (3)

1. 유효성분으로서 2-[p-(4-벤즈히드릴피페라지노)페닐]에틸메틸 2,6-디메틸-4-(3-니트로페닐)-1,4-디히드로피리딘-3,5-디카르복실레이트 또는 그의 히드로클로라이드를 포함하는, 뇌졸증, 뇌부종, 뇌연화 및 뇌출혈에서 선택된 뇌질환 예방 치료제.
2. 유효성분으로서 제 1 항에 따른 2-[p-(4-벤즈히드릴피페라지노)페닐]에틸메틸2,6-디메틸-4-(3-니트로페닐)-1,4-디히드로피리딘-3,5-디카르복실레이트 또는 그의 히드로클로라이드를 포함하는 고지혈증 예방치료제.
3. 유효성분으로서 제 1 항에 따른 2-[p-(4-벤즈히드릴피페라지노)페닐]에틸메틸2,6-디메틸-4-(3-니트로페닐)-1,4-디히드로피리딘-3,5-디카르복실레이트 또는 그의 히드로클로라이드를 포함하는 동맥경화증 예방치료제.