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Nouveaux aminoacylates d'acétal du glycerol, un procédé pour teur preparation et compositions therapeutiques en contenant.
La présente invention concerne de nouveaux aminoacylates d'acetal du glycérol, un procédé pour leur préparation ainsi que des compositions thérapeutiques en contenant.
La presente invention concerne les aminoacylates
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d'acetal du glycérol de formule genérale
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CH-0 I'-C/Rl !/\ CH-O R I CHLO ) 'H . 20 Co (CH 2) ¯NOP x dans laquelle
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Rl represente un groupement phdnyle substitué ou un groupe de
R.formule CmH2m + l m étant un entier de 9 à 25, R2 représente un atome d'hydrogène, un groupement phenyle ou un groupe de formule CnH2n + l'n étant un entier de 1 ä 10,
EMI1.4
p entier de 3 ä 10,
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\ - N') un groupement hétérocyclique contenant un
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atome d'azote tel que le pyridinium, le thiazolinium-3, le est unquinolinium, l'isoquinolinium, l'imidazolium et le pyrazinium, et X représente l'anion pharmaceutiquement acceptable d'un acide mineral ou organique, un ion halogène tel que le chlore, le brome,
l'iode ou les anions des acides benzoique, acetique, methanesulfonique, ou tartrique, sous la forme de leurs diastereoisomères isoles ou de tout melange de ceux-ci.
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Les composes selon l'invention sont interessants en tant qu'agents anti-PAF (PAF signifie Facteur d'Agregation Plaquettaire), avec l'activité correspondante comme anti-anaphylactiques, anti-thrombotiques, anti-coagulants, anti-bronconstricteurs, anti-ischemiques, normotenseurs, immunodépresseurs et ils agissent contre- l'altération des reins, contre différents chocs, contre les allergies de la peau et les ulcères intestinaux provoques, par exemple, par l'endotoxine.
L'invention concerne, régalement, un procédé pour la préparation des composes de formule I, tels que définis plus haut, ce procédé consistant à faire réagir un léger excès, par rapport aux proportions stoechiomdtriques, d'un aldéhyde ou
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d'une de formule RCOR, dans laquelle Rl et R2 sont tels que definis plus haut, sur le glycérol, dans un solvant non polaire, en présence d'acide p-toluènesulfonique et dans des conditions de reflux, puis ä faire réagir, ä température ambiante, le dérivé hydroxyméthyle-4 dioxolane-l, 3 ainsi obtenu sur un chlorure de w-haloalcane de formule ClCO(CH2)pX, dans laquelle p et X sont tels que definis precddemment, en präsence d'une base organique telle que la triethylamine et, enfin, à faire reagir,
entre 50 et 80 C, sous circulation d'azote, le composé résultant, de formule
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sur un composé hétérocyclique contenant un atome d'azote de formule
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Les composés selon l'invention sont obtenus sous forme dlun ma-lange non-separd de leurs diastéreoisomeres, mais ils peuvent être séparés par les methodes habituelles.
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Ce procédé de preparation peut être illustré par la séquence de réactions suivante :
Etapes
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L'invention concerne dgalement une composition thérapeutique comprenant un compose de formule générale I tel que defini plus haut, associé ä un excipient pharmaceutiquement acceptable.
L'invention sera mieux comprise gräce ä la description des exemples qui suivent. L'exemple lest décrit en détail dans les exemples suivants, seules sont donnees les caracteristiques des substituants et des composes obtenus (la chromatographie en couche mince est realisee sur plaques au gel de silice, sauf indication contraire).
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EXEMPLE 1 Chlorure d'heptadécyle-2 méthyle-2 [ (N-pyridinium)-4' butyryl- oxyméthyle] -4dioxolane-1,3
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0 Rl 1735'2 '') pyridinium, X= 3.
R, = C17H35, R2 = CH3 f N % %) M
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Etape a : de l'heptadecyle-2 méthyle-2 hydroxymethyle-4 dioxolane-1, 3. a
Dans un réacteur approprié, on verse 11, 1 g (40 mmole) de nonadécanone-2, 6 g de glycérol bidistille-ce qui représente un léger exces par rapport aux proportions
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stoechiométriques 6 g d'acide dissous dans 120 ml de toluene sec. Le mélange reactionnel est porte au reflux sous agitation pendant 12 heures et l'eau obtenue est éliminée au moyen d'un appareil Dean Stark. Apres refroidissement, la phase organique est lavée avec 30 ml, ä 5 % en poids, d'une solution aqueuse de potasse, puis ä nouveau trois fois avec la quantite minimale d'eau. Après séchage sur sulfate de soude anhydre, le solvant est éliminé sous pression reduite.
Le résidu est ensuite purifié par chromatographie sur colonne au gel de silice. On separe la fraction de cétone qui n'a pas reagi (ether de pétrole : éther éthylique, 95 : 5 en volumes), et enfin le dioxolane a (éther de pétrole : ether éthylique, 85 : 15 en volumes). Le dioxolane est un produit visqueux, partiellement cristallise.
Rendement : 11 g (78 %) rf : 0, 18 (äther de pétrole : éther éthylique, 70 : 30 en volumes).
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IR 3500 cm-l (OH) 1100
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Etape b : Heptadécyle-2 méthyle-2 (chlorobutyryloxy- méthyle-4') -4dioxolane-1,3.b
Un melange de 6, 4 g (18 mmole) d'heptaddcyle-2 methyle-2 hydroxyméthyle-4 dioxolane-l, 3, préparé comme décrit ä l'étape (a) ci-dessus, et de 6 ml (45 mmole) de triethylamine dans 15 ml de chloroforme sec est ajouté goutte ä goutte à une solution de 6, 25 g (22 mmole) de chlorure de chlorobutyryle-4 dans 10 ml de-chloroforme sec ä 0 C. Le mélange est agité pendant 12 heures ä temperature ambiante. Apres avoir ajoute 20 ml de chloroforme, le melange est lave avec une solution aqueuse de soude IN, puis avec de lleau jusqulä neutralitd.
L'elimination du solvant donne un résidu que l'on chromatographie sur colonne de gel de silice avec, comme éluant, des melanges éther de pétrole : ether éthylique successivement 95 : 5, 90 : 10 et finalement 80 : 20 en volumes. On obtient ainsi 7, 6 g (rendement : 82 %) d'un produit huileux qui cristallise ; point de fusion : 39-40. C. Ce produit est un melange de deux isomères cis et trans, difficilement séparables. rf : 0, 45 at 0, 37 (éther de pétrole : éther éthylique, 80 : 20 en volumes).
IR : 1740 cm-1 (C=O)
1180 - 1160 cm-l (C-O-C éther et ester) RMN : 60 MHz, CDClg, (TMS.) 6 : 0, 9 (triplet, 3H, CH3 de la chaine)
1,3 (mult., 35H, 32H + CH3)
2,1 (mult., 2H, CO-CH2-CH2)
EMI5.1
2, 5 (triplet, 2H, CO-CH) 3, 6 (mult., 4H, CH2-0 et CH2C1) 4, 2 (mult., 3H, CHOCO et CH-0).
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Etape c : Chlorure d'heptadéeyle-2 méthyle-2 [ butyryloxyméthyle]-4
5 g du compose obtenu ä l'etape (b) precedente sont dissous dans 30 ml de pyridine, le mélange est agité ä 80 C, sous circulation d'azote, pendant 24 heures. L'excès de pyridine est ensuite éliminé sous pression réduite et le residu est purifié par chromatographie sur gel de silice.
On elue avec du chloroforme (pour recueillir le materiau de depart qui n'a pas réagi), puis avec des mélanges chloroforme : méthanol, tout d'abord ä 90 : 10, puis ä 80 : 20 en volumes ; on obtient 3, 80 g du compose recherché. Ce produit est un mélange des deux isomères cis et trans difficilement separables.
Rendement : 40 % sur l'ensemble de l'exemple (65 % pour cette etape).
Point de fusion : 84-85'C. rf : 0, 28 (CHCl) : MeOH, 70 : 30 en volumes) IR (nujol) : 1740 cm-1
1630 cm-l (pyridine)
1200, 1180 cm-l (C-O-C).
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RMN : 250MHz, CDC13.
< : 0, 9 (triplet, 3H, CH3) 1, 2 (sing. large 30H)
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- 1, (doublet, 3H,-OcH3) des deux diasterdoisomeres) - 1, 55 (mult.,
EMI6.4
2, 2H, CO CH2-CH2) 2, 6 (triplet, 2H, CO CH2) 03, 9 (mult., 1H, CH-O) 4 (mult., 2H, CH2O CO)
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4, 2-3, 6 (2 mult., 2H, CH20) (des deux diastereoisomeres) (D 5, 10 (mult., 2H, CH2N)
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8 (mult., 2H, Hss) pyridinium 8, 4 (mult., 1H, H) 9, 6 (doublet, 23Ha) Spectre de masse :
EMI7.2
EXEMPLE 2 Chlorure d'heptadécyle-2 méthyle-2 [(quinolinium-N)-4' butyryl-
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oxymethylel-4 dioxolane-1, 3.
Etape c : 5 g du compose obtenu dans l'exemple b) sont dissous dans un mélange de 20 ml de quinoléine et de 20 ml de DMSO, puis chauffé ä 80 C sous circulation d'azote, pendant 4 jours. La quinoléine et le DMSO sont distilles sous pression
EMI7.4
reduite et le résidu est chromatographié . ographid sur colonne de gel de silice (Eluants successifs : CHClg, puls CHCl : MeOH, 95 : 5 en volumes). On obtient 2,5 g du produit recherché sous forme d'un mélange de ses deux diastéréoisomères. rf : 0, 58 (CHCl3 : MeOH, 70 : 30 en volumes) IR v quinoleine 1650,1630 et 1600 cm" Spectre de masse :
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RMN : quinolinium au lieu de pyridinium.
# ppm : 7,90 - 8,10 (4H),
8, 70 (lH),
8,90 (1H),
10, 90 (lHa).
EXEMPLE 3
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Chlorure d'heptadecyle-2 butyryl oxymethylel-4 dioxolane-l 3.
Etape c : 850 g du produit obtenu dans l'exemple méthyle-2 [ (N-thiazolinium))-4'mélangés avec 4 ml de thiazole et 6 ml de DMSO sont chauffes ä 80 C pendant 24 heures. Le melange réactionnel est évaporé sous vide et le résidu est Chromatographie sur colonne de gel de silice, éluant : CHCl3 : MeOH, 50 : 50 en volumes. On obtient un produit visqueux.
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rf : : MeOH, 70 : 30 en volumes).
RMN : au lieu pyridinium.
6 ppm : (d : lH), 8, 4 (d :
10,90 (sing. 1H).
Spectre de masse : M - Cl : 510 m/z.
EXEMPLE 4
EMI8.3
Chlorure d'heptadecyle-2 butyryloxyrnéthyle]-4 dioxolane-1,
EMI8.4
R1 yHg, Cl, p = 3.
- C17H35, R2 = H,-Ng
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b rf : 0, de petrole : éther éthylique, 30 : 70 en volumes) 3 b rf : 0, 37 (éther de petrole : ether éthylique, 70 : 30 en volumes) Ib rf : 0, 16 (chloroforme : méthanol, 70 : 30 en volumes)
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EMI9.1
- Ib RMN au lieu de CH3 ä 1, -cH3) - 2 multiplets centrés sur 4, 9 ppm (-ox
0Spectre de masse : M-Cl : 490 m/z.
EXEMPLE 5
EMI9.2
Chlorure d'heptadécyle-2 F methyle]-4
EMI9.3
Rl = R2 = H, ) Cl, p = 3.
EMI9.4
rf : 0, (chloroforme : méthanol, 70 : 30 en volumes).
EXEMPLE 6 Chlorure d'heptadécyle-2 (n-propyle)-2 butyryloxyméthYle]-4
EMI9.5
" Rl = = pyridinium, X = Cl, P = 3.
EMI9.6
c rf : 0, de petrole : ether ethylique, 70 : 30 en (N'-qm.inolinium)-4' butyryloxy-volumes) 3 c rf : 0, 38 (éther de pétrole : éther éthylique, 80 : 20 en volumes) Ie rf : 0, 20 (chloroforme : méthanol, 73 : 30 en volumes) ICRMNaulieudeCH3à1,4
EMI9.7
- 1, XCH2-)
0 CH2-1, 2 (32H)
0, 9 (triplet, 6H, 2CH3) Spectre de masse : M-Cl : 532 m/z.
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EXEMPLE 7
EMI10.1
Chlorure d'heptadécyle-2 pentanoyloxyméthylel-4 dioxolane-l, 3.
EMI10.2
e Rl = CH,-N) X = Cl, P = 4. rf : 0, 23 (chloroforme : méthanol, 70 : 30 en volumes).
EXEMPLE 8
EMI10.3
Chlorure de (trimthoxyphenyle-3, -2 [N-pyridinium)
EMI10.4
OCH.
R1 " '"3' = CH3,-N) = Cl, p = OCH3
EMI10.5
2 d rf : 0, (chloroforme : méthanol, 98 : 2 en volumes) 1 d rf 61 (chloroforme : 2 en volumes) Id rf : 60 : 40 en IR 1735 (C=O)
1610 (pyridine)
EMI10.6
1590 (benzène) 2740 (OCH3) Id RMN au lieu de la chaine
EMI10.7
- 1, -'cH3)
EMI10.8
3, 9H, OCH3)
Rl6, 8 (2H arom.) Spectre de masse : M-Cl : 432 m/z.
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EXEMPLE 9
EMI11.1
Bromure oxymethyle]-4
EMI11.2
ffi Rl = C17H35, = CH,-N) = pyridinium, x = Br, p = 5.
EMI11.3
Etape b : Bromure d'heptadécyle-2 d'heptadecyle-2 méthyle-2 [ (N-pyridinium)-6' hexanoyl-méthyle-6')-4 dioxolane-1,3.
En suivant le procédé decrit dans l'exemple 1 et en utilisant du chlorure de bromohexanoyl-6, on obtient le produit recherché sous forme de produit visqueux (rendement : 82 %). rf : 0,57 (éther de pétrole : ether, 80 : 20).
Etape c : Suivant le procédé décrit dans l'exemple 1, le produit recherche est obtenu sous forme d'un produit visqueux (rendement : 70 %). rf : 0, 36 (CHC13 : MeOH), 70 : 30) IR : 3450 cm-1 (eau résiduelle) YCO 1740, C-O-C 1180, #pyridine 1640 cm-1 RMN 500 MHz CDC13, S (TMS) 0, 85 (triplet, 3H, CH3) ; 1, 25 (sing. large 30H) ; - 0
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1, (d 3H,-OXCH3'Z E) ; 1, 2H, CH) 2, 2H, COCH2CH2) ; 2, (mult., 2H, COCH2) ; 2, et 4, (mult., 2H, CH20, Z + E) ; 4 3H, CH20CO et (D H-C-0) ; 5, (triplet, 2H, CH2N). pyridinium 8, (triplet, 2H, Hss) ; 8, (triplet, 1H, HI) 9, 2H, Hal.
U. (Ethanol) lOgE 3, Spectre de masse :
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EXEMPLE 10 Bromure d'heptaddcyle-2 hexanoyloxymthylel-4 dioxolane-1, rf 60 (CHC13 : MeOH, 70 : 30 en volumes) IR Quinolinium 1650, 1630, 1600 cm'l U. (Ethanol) loge 4, nm 2, nm RMN quinolinium au lieu de pyridinium.
C ó (2H, CH2N), 7, 90-8, Spectre de masse :
EMI12.2
EMI12.3
EXEMPLE 11 Bromure d'heptadécyle-2 methyl-2 [ hexanoyloxymethyle]-4 dioxolane-l, 3.
Etape c : On utilise de l'isoquinoleine au lieu de la quinoléine. rf : 0, 55 (CHC13 : MeOH, 70 : 30 en volumes) IR isoquinoldine 1650, 1610, 1590 cm-l.
RMN isoquinolinium au lieu de quinolinium.
0 < : (triplet, 2H, CH2N) ; 7, 95-8, (4H) ; 8, 11, 05 (lH).
Spectre de masse : M-Br : 582 m/z.
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EXEMPLE 12
EMI13.1
Bromure dtheptadécyle-2 noyloxyméthyle]-4
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Rl = C17H35, R2 = CH,-M = pyridinium, X = Br, p
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Etape b : Heptadecyl-2 methyle-2 (bromo-undécanoyloxy- En suivant le procédé ddcrit dans l'exemple 1 et en utilisant du chlorure de bromo-11 undécanoyle, on obtient le produit recherché.
Point de fusion : 52" C (rendement 60 %) rf : 0, 26 (éther de pétrole : éther éthylique, 85 : 15).
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Etape c Point de fusion : 92 C rf : 0,45 (CHCL3 : MeOH, 70 : 30 en volumes) Spectre de masse : M - Br : 602 m/z.
EXEMPLE 13
EMI13.5
Bromure d'heptadécyle-2 (n-propyle)-2 hexanoylméthyle]-4 dioxolane-l, 3.
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e Rl = C17H35, pyridinium, X = Br, p ;
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rf : 0, : MeOH, 70 : 30 en Point de fusion : 76'C Spectre de masse : M - Br : 560 m/z.
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EXEMPLE 14
EMI14.1
Bromure de nonyl-2 méthyle-2 [ (N-pyridinium)-6' méthYle1-4
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Rl = CgH19'R2 = CH3 N pyridinium, X = Br, p = 5.
Etape b rf : 0, 50 (éther de pétrole : ether éthylique, 80 : 20 en volumes) Etape c rf : 0,30 (CHCl3 : MeOH, 70 : 30 en volumes) Spectre de masse : M - Br : 420 m/z.
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TOXICOLOGIE
Les composes selon l'invention ont été administrés ä la souris pour determiner la valeur de la DL50. Pour tous les composes selon l'invention, la DLgo a été supérieure ä 300 mg/kg (IP ou SC) et ä 600 mg/kg (PO).
PHARMACOLOGIE
L'intérêt pharmaceutique des composés de l'invention a été mis en evidence par l'experimentation pharmaceutique suivante.
10) - Inhibition de l'agregation plaquettaire sur le lapin de
Nouvelle-Zélande.
L'experimentation a été conduite sur des plaquettes, ä partir de plasma de lapin de Nouvelle-Zélande. Les echantillons de sang ont été prélevés par l'artère auriculaire et mis dans une solution de tampon citrate (3, 8 % ; pH 7, 4) ; le sang a ensuite eté centrifugé pendant 15 mn ä 1200 t/mn. L'echantillon testé a été préparé dans le DMSO, puis verse sur des plaquettes riches en plasma avec lesquelles il a été laissé en contact pendant 1 mn, et une dose de 2, 5 nM de PAF a été ajoutée.
La détermination est faite sur un appareil Cronolog
Coultronics qui determine le pourcentage de transmission correspondant ä la valeur maximale du pic avant la désagrégation. Le pourcentage de variation de l'inhibition, en ce qui concerne le pourcentage de transmission, est calcule (témoin : DMSO pur).
Cette méthode est decrite en détail dans LABORATORY
INVESTIGATIONS, Vol. 41, No. 3, p. 275,1979, JEAN-PIERRE
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CAZENAVE, Dr. MED., JACQUES BENVENISTE, Dr. MED., et
J. FRASER MUSTARD, M. D., "Aggregation of Rabbits
Platelets by Platelet-Activating Factor is independent of the Release Reaction and the Arachidonate Pathway and inhibited by Membrane-Active drugs".
Les résultats demontrent que les composes inhibent l'agrégation induite par 2, 5 nM de PAF. Cinq tests, effectues sur des lots de chacun cinq lapins, ont permis de calculer la CI50 des divers composés en utilisant la méthode de regression linéaire.
Pour les composés des différents exemples, les valeurs suivantes de CI50 ont ete trouvees :
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<tb>
<tb> Exemple <SEP> No. <SEP> CI50 <SEP> PRP <SEP> (M)
<tb> No. <SEP> 1 <SEP> 2, <SEP> 2. <SEP> 10-6 <SEP>
<tb> No. <SEP> 2........................... <SEP> 1, <SEP> 2 <SEP> . <SEP> 10-6
<tb> No. <SEP> 3 <SEP> 2, <SEP> 15.. <SEP> 10-5 <SEP>
<tb> No. <SEP> 4.......................... <SEP> 7 <SEP> . <SEP> 10-6
<tb> No. <SEP> 5 <SEP> 3,1 <SEP> . <SEP> 10-6
<tb> No. <SEP> 6............................. <SEP> 3,04 <SEP> . <SEP> 10-6
<tb> No. <SEP> 7 <SEP> 5 <SEP> . <SEP> 10-6
<tb> No. <SEP> 8........................ <SEP> 1, <SEP> 13. <SEP> 10-5 <SEP>
<tb> No. <SEP> 9............................... <SEP> 4,04 <SEP> . <SEP> 10-7
<tb> No. <SEP> 10........................... <SEP> 3,03 <SEP> . <SEP> 10-7
<tb> No.
<SEP> 12............................... <SEP> 3, <SEP> 12 <SEP> . <SEP> 10-5
<tb> No. <SEP> 13............................ <SEP> 1, <SEP> 73 <SEP> . <SEP> 10-6
<tb> No. <SEP> 14 <SEP> 1, <SEP> 46 <SEP> 10-6 <SEP>
<tb>
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2 - BINDING MATERIEL ET METHODE
Le PAF - [3H] synthétique tritié utilisé est une solution ethanolique présentant une activite specifique de 59, 5 ci/mmols. Le PAF non marqué et le PAF-lyso sont en solution dans l'methanol et stockes à -80 C. Les composes festes sont en solution dans le DMSO.
Préparations des plaquettes de membrane
On prélève du sang complet de lapin (6 volumes) par l'artere principale de l'oreille et on le verse dans 1 volume d'une solution d'ACD (1, 4 g d'acide citrique, 2, 5 g citrate de sodium, 2 g de dextrose pour 100 ml de H2O) et on le centrifuge ä 150 g pendant 15 minutes. Les plaquettes riches en plasma
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(PRP) sont retirees avec précaution et centrifugées pendant 15 minutes ä 1000 g. L'amas plaquettaire est ensuite lavé 3 fois deux fois ä l'aide de 10mM d'un tampon Tris-HCl, pH 7, contenant 150 mM NaCl, 5 mM MgClz, mM d'EDTA et une dernière fois par le meme tampon mais sans chlorure de sodium.
L'amas plaquettaire est remis en suspension dans ce dernier tampon, congele rapidement dans l'azote liquide et décongelé lentement ä temperature ambiante au moins 3 fois comme cela a été decrit par T. Y. Shen et al.. Les plaquettes
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lysees sont centrifugees à 100 000 g pendant 30 minutes dans une ultra centrifugeuse L8 55 modele BECKMAN (Rotor 50, Ti). Les plaquettes homogénéisées sont stockees à et utilisees sous deux semaines sans changements notables dans les caractéristiques du binding du PAF acether.
Le contenu en proteines est determine par la méthode Lowry utilisant de la serumalbumin bovine comme etalon.
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2Dosage du binding
On ajoute 60 ä 100 pg de protéines de la membrane sous un volume final dlun ml dans des tubes plastiques contenant 1 nM PAF [3H] dans lOnM d'un tampon de Tris-HCl de pH7 contenant 0,025 % serumalbumine bovine et incube avec ou sans PAF non marque ou d'antagonistes du PAF. L'incubation
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s'effectue pendant 1 h 30 ä O'C. Le PAF- H] est du PAF - [3H] par filtration immediate sous vide sur filtres en fibre de verre GF/C (systeme Brandel). Le réacteur et les filtres sont lavés 3 fois ä l'aide d'une solution de 5 ml de tampon glacé.
Les filtres sont ensuite placés dans des flacons en polyethylene remplis de 10 ml de fluide de scintillation liquide et on mesure la radioactivité avec un compteur LKB ss dont le rendement est de 45 %.
On determine le binding non specifique en présence de zo M de PAF non marque. On calcule le binding spécifique en soustrayant le binding non specifique du binding total. On détermine l'inhibition provoquée par les composes sur le binding PAF - [3H) spécifique en pourcentage d'inhibition par la formule suivante :
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(3H-PAF lie totalernent des descornposes % inhibition PAF-
Les valeurs trouvées pour les corps des differents exemples sont les suivantes :
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<tb>
<tb> Exemple <SEP> No. <SEP> IC
<tb> 50
<tb> No. <SEP> 1.................. <SEP> 4,5 <SEP> . <SEP> 10-7
<tb> No. <SEP> 9................. <SEP> 3,5 <SEP> . <SEP> 10-8
<tb> No. <SEP> 10................. <SEP> 3, <SEP> 5. <SEP> 10-8
<tb> No. <SEP> 14.............. <SEP> 6, <SEP> 1. <SEP> 10-7
<tb>
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EMI19.1
3 INDUITES - BRONCHOCONSTRICTION, LEUCOPENIE ET THROMBOCYTOPENlEMATERIAUX ET METHODES
On anesthesie des cochons d'Inde mäles (400 ä 500 g) avec de l'urethane (1, 5 g/kg, IP) avant de leur faire subir une trachéotomie et d'introduire une pompe respiratoire (UGO BASILE) (70 ä 80 inspirations par minute, 1 ml d'air/100 g/ inspiration), pour supprimer toute respiration spontanee, on effectue un pneumothorax.
La résistance ä l'insuflation est mesurée avec un transducteur de pression (UGO BASILE) par rapport ä une pression initiale de 10 cm H20 selon Konzett et Rossler. Les animaux sont repartis dans plusieurs groupes qui sont traites ou non avec les composes de l'invention (0, 05 ; 0, 1 ; 0, 5 ; 1 et 5 mg/kg). Les produits sont administres par intra-veineuse 1 heure avant le PAF.
Les animaux sont testés avec differentes doses de PAF (30 à 100 n/kg) administrées par intra-veineuse ; on enregistre les variations de la resistance ä l'insuflation.
Des échantillons de sang sont preleves avant administration du PAF puis 1, 5 et 10 minutes après administration. Quarante 1-11 de sang sont dilues dans 10 ml d'isoton (Coultronics, FRANCE) ; les érythrocytes sont dilués dans de la zapoglobine avant de compter les leucocytes avec un compteur Coulter. Pour determiner le nombre de plaquettes, 40 gel de sang sont dilués dans 2 ml d'isoton puis centrifuges ä 100 tours/minute pendant 30 secondes, on prélève 100 l de la couche de surface et on les dilue dans 10 ml d'isoton avant de compter les plaquettes avec un compteur Coulter.
<Desc/Clms Page number 20>
EMI20.1
Tableau n8 1 : du bromure d'heptadécyle-2 [ (N dioxolane-1, 3 sur la bronchoconstriction induite par PAF.
EMI20.2
<tb>
<tb>
Doses <SEP> Pourcentage <SEP> de <SEP> Pourcentage
<tb> mg/kg <SEP> n <SEP> Bronchoconstriction <SEP> de <SEP> Variation
<tb> IV
<tb> Témoin <SEP> - <SEP> 8 <SEP> 79, <SEP> 8 <SEP> +/-3, <SEP> 22 <SEP>
<tb> 5 <SEP> 3 <SEP> 3,5 <SEP> +/- <SEP> 1, <SEP> 53 <SEP> - <SEP> 95,6 <SEP> ***
<tb> Compose
<tb> 1 <SEP> 4 <SEP> 19,1 <SEP> +/- <SEP> 10,51 <SEP> - <SEP> 7,61 <SEP> ***
<tb> de
<tb> 0. <SEP> 5 <SEP> 6 <SEP> 23,6 <SEP> +/- <SEP> 7,15 <SEP> - <SEP> 70,4 <SEP> ***
<tb> l'exemple
<tb> 0.1 <SEP> 6 <SEP> 43,8 <SEP> +/- <SEP> 14,77 <SEP> - <SEP> 45,1 <SEP> **
<tb> No. <SEP> 9
<tb> 0. <SEP> 05 <SEP> 3 <SEP> 79, <SEP> 0 <SEP> +/- <SEP> 9,27 <SEP> - <SEP> 1,0 <SEP> NS
<tb>
LEGENDE DE TOUS LES TABLEAUX :
NS :
Non significatif * : p < 0, 05 J ** : p < 0, 01 *** : p < 0, 001
<Desc/Clms Page number 21>
Tableau No. 2 : Effets du bromure d'heptadécyle - 2 méthyle - 2 [ (N - pyridinium) - 6' hexanoyloxyméthyle] - 4 dioxolane-1, 3 sur la leucopénie induite par
PAF.
EMI21.1
<tb>
<tb>
Pourcentage <SEP> de
<tb> Doses <SEP> n <SEP> Temps <SEP> diminution <SEP> du <SEP> Pourcentage
<tb> mg/kg <SEP> (mn) <SEP> nombre <SEP> de <SEP> de <SEP> Variation
<tb> IV <SEP> leucocytes
<tb> 8 <SEP> 1 <SEP> 40, <SEP> 8 <SEP> +/-7, <SEP> 18 <SEP>
<tb> Témoin <SEP> - <SEP> 8 <SEP> 5 <SEP> 29,2 <SEP> +/- <SEP> 10,89
<tb> 8 <SEP> 10 <SEP> 33,5 <SEP> +/-5, <SEP> 04 <SEP>
<tb> 3 <SEP> 1 <SEP> 16,5 <SEP> +/- <SEP> 2,42 <SEP> - <SEP> 59,6 <SEP> *
<tb> 5 <SEP> 3 <SEP> 5 <SEP> 15, <SEP> 9 <SEP> +/- <SEP> 0, <SEP> 99 <SEP> - <SEP> 45, <SEP> 5 <SEP> NS
<tb> Composé <SEP> 3 <SEP> 10 <SEP> 18,7 <SEP> +/- <SEP> 5,08 <SEP> - <SEP> 44,2 <SEP> NS
<tb> 4 <SEP> 1 <SEP> 3,5 <SEP> +/- <SEP> 12,60 <SEP> - <SEP> 91,4 <SEP> **
<tb> de <SEP> 1 <SEP> 4 <SEP> 5 <SEP> 2,9 <SEP> +/- <SEP> 10,51 <SEP> - <SEP> 90,1 <SEP> *
<tb> 4 <SEP> 10 <SEP> 1,0 <SEP> +/-22, <SEP> 62-97,
<SEP> 0 <SEP> ** <SEP>
<tb> l'exemple <SEP> 6 <SEP> 1 <SEP> 34,6 <SEP> +/- <SEP> 6,35 <SEP> - <SEP> 15,2 <SEP> NS
<tb> 0, <SEP> 5 <SEP> 6 <SEP> 5 <SEP> 19, <SEP> 0 <SEP> +/-6, <SEP> 42-34, <SEP> 9 <SEP> NS
<tb> 6 <SEP> 10 <SEP> 14,6 <SEP> +/- <SEP> 5,36 <SEP> - <SEP> 56,4 <SEP> NS
<tb> No. <SEP> 9
<tb> 6 <SEP> 1 <SEP> 41,8 <SEP> +/- <SEP> 6,50 <SEP> + <SEP> 2, <SEP> 5 <SEP> NS
<tb> 0, <SEP> 1 <SEP> 6 <SEP> 5 <SEP> 31,9 <SEP> +/- <SEP> 4,88 <SEP> - <SEP> 9,2 <SEP> NS
<tb> 6 <SEP> 10 <SEP> 33,5 <SEP> +/- <SEP> 4,65 <SEP> 0,0 <SEP> NS
<tb> 3 <SEP> 1 <SEP> 45, <SEP> 3 <SEP> +/- <SEP> 5, <SEP> 70 <SEP> + <SEP> 11, <SEP> 0 <SEP> NS
<tb> 0, <SEP> 05 <SEP> 3 <SEP> 5 <SEP> 21,6 <SEP> +/- <SEP> 3,42 <SEP> - <SEP> 26,0 <SEP> NS
<tb> 3 <SEP> 10 <SEP> 14,2 <SEP> +/- <SEP> 17,30 <SEP> - <SEP> 57,6 <SEP> NS
<tb>
<Desc/Clms Page number 22>
Tableau No. 3 :
Effets du bromure d'heptadecyle-2 méthyle- ; [ (N - pyridinium) - 6' hexanoyloxyméthyle]- dioxolane-1, 3 sur la thrombocytopénie induite par PAF.
EMI22.1
<tb>
<tb>
Pourcentage <SEP> de <SEP> Pourcentage
<tb> Doses <SEP> Temps <SEP> diminution <SEP> du <SEP> de
<tb> mg/kg <SEP> n <SEP> (mn) <SEP> nombre <SEP> de <SEP> Variation
<tb> IV <SEP> leucocytes
<tb> 8 <SEP> 1 <SEP> 68,6 <SEP> +/- <SEP> 6,79
<tb> Témoin <SEP> 8 <SEP> 5 <SEP> 42,4 <SEP> +/-2, <SEP> 71 <SEP>
<tb> 8 <SEP> 10 <SEP> 42, <SEP> 5 <SEP> +/-3, <SEP> 14 <SEP>
<tb> 3 <SEP> 1 <SEP> 4,2 <SEP> +/- <SEP> 2,35 <SEP> - <SEP> 93,9 <SEP> ***
<tb> 5 <SEP> 3 <SEP> 5 <SEP> 5,6 <SEP> +/- <SEP> 1,84 <SEP> - <SEP> 86,8 <SEP> ***
<tb> Compose <SEP> . <SEP>
<tb>
3 <SEP> 10 <SEP> 1,1 <SEP> +/- <SEP> 1,15 <SEP> - <SEP> 97,4 <SEP> ***
<tb> 4 <SEP> 1 <SEP> 11,5 <SEP> +/- <SEP> 6,21 <SEP> - <SEP> 83,2 <SEP> ***
<tb> 1 <SEP> 4 <SEP> 5 <SEP> 22, <SEP> 5 <SEP> +/-3, <SEP> 27-46, <SEP> 9 <SEP> * <SEP>
<tb> de
<tb> 4 <SEP> 10 <SEP> 21,0 <SEP> +/- <SEP> 3,87 <SEP> - <SEP> 50,6 <SEP> *
<tb> 6 <SEP> 1 <SEP> 19,3 <SEP> +/- <SEP> 10,19 <SEP> - <SEP> 71,9 <SEP> ***
<tb> 0,5 <SEP> 6 <SEP> 5 <SEP> 9, <SEP> 6 <SEP> +/-12, <SEP> 15-77, <SEP> 4 <SEP> *** <SEP>
<tb> l'exemple
<tb> 6 <SEP> 10 <SEP> 10,9 <SEP> +/- <SEP> 9,94 <SEP> -74,4 <SEP> ***
<tb> 6 <SEP> 1 <SEP> 30,1 <SEP> +/- <SEP> 13,72 <SEP> - <SEP> 56,1 <SEP> **
<tb> 0, <SEP> 1 <SEP> 6 <SEP> 5 <SEP> 34, <SEP> 7 <SEP> +/-3, <SEP> 60-18, <SEP> 2 <SEP> NS <SEP>
<tb> No.
<SEP> 9
<tb> 6 <SEP> 10 <SEP> 42,3 <SEP> +/- <SEP> 4,79 <SEP> - <SEP> 0,5 <SEP> NS
<tb> 3 <SEP> 1 <SEP> 45, <SEP> 2 <SEP> +/-1, <SEP> 20-34, <SEP> 1 <SEP> NS <SEP>
<tb> 0, <SEP> 05 <SEP> 3 <SEP> 5 <SEP> 43, <SEP> 0 <SEP> +/-4, <SEP> 80 <SEP> + <SEP> 1, <SEP> 4 <SEP> NS
<tb> 3 <SEP> 10 <SEP> 36,1 <SEP> +/- <SEP> 2,41 <SEP> - <SEP> 15,1 <SEP> NS
<tb>
<Desc/Clms Page number 23>
Tableau No. 4 : Effets du bromure d'heptadécyle - 2 méthyle -
EMI23.1
[ (N-quinolinium)-6'hexanoyloxymethyle] dioloxane-1, 3 sur la bronchoconstrictio] induite par PAF.
EMI23.2
<tb>
<tb>
Doses <SEP> Pourcentage <SEP> de <SEP> Pourcentage
<tb> mg/kg <SEP> IV <SEP> n <SEP> Broncho- <SEP> de <SEP>
<tb> constriction <SEP> Variation
<tb> Témoin <SEP> - <SEP> 6 <SEP> 90,8 <SEP> +/- <SEP> 0,95 <SEP> Compose <SEP> 1 <SEP> 5 <SEP> 8,1 <SEP> +/- <SEP> 2,91 <SEP> - <SEP> 91,1 <SEP> ***
<tb> de
<tb> 0, <SEP> 5 <SEP> 5 <SEP> 25,1 <SEP> +/- <SEP> 6,53 <SEP> - <SEP> 72,4 <SEP> ***
<tb> l'exemple
<tb> No. <SEP> 10 <SEP> 0, <SEP> 1 <SEP> 5 <SEP> 80, <SEP> 4 <SEP> +/-13, <SEP> 78-11, <SEP> 5 <SEP> NS
<tb>
<Desc/Clms Page number 24>
Tableau No. 5 : Effets du bromure d'heptadécyle - 2 méthyle - 2
EMI24.1
( (N-quinolinium)-6 dioloxane-1, 3 sur la leucopenie induite par hexanoyloxyméthyle]-4PAF.
EMI24.2
<tb>
<tb>
Pourcentage <SEP> de
<tb> Doses <SEP> Temps <SEP> diminution <SEP> du <SEP> Pourcentage
<tb> mg/kg <SEP> n <SEP> (mn) <SEP> nombre <SEP> de <SEP> de
<tb> IV <SEP> leucocytes <SEP> Variation
<tb> 6 <SEP> 1 <SEP> 41,4 <SEP> +/- <SEP> 8,0
<tb> Témoin <SEP> 6 <SEP> 5 <SEP> 28,7 <SEP> +/- <SEP> 6,9 <SEP> -
<tb> - <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 26,9 <SEP> +/- <SEP> 10,1
<tb> 5 <SEP> 1 <SEP> 24,1 <SEP> +/- <SEP> 6,8 <SEP> - <SEP> 41,0 <SEP> NS
<tb> 1 <SEP> 5 <SEP> 5 <SEP> 9,3 <SEP> +/- <SEP> 9,4 <SEP> - <SEP> 67,6 <SEP> **
<tb> Composé
<tb> 5 <SEP> 10 <SEP> 8,9 <SEP> +/- <SEP> 13,2 <SEP> - <SEP> 66,9 <SEP> **
<tb> de <SEP> 5 <SEP> 1 <SEP> 17,0 <SEP> +/- <SEP> 12,9 <SEP> - <SEP> 58,9 <SEP> *
<tb> 0,5 <SEP> 5 <SEP> 5 <SEP> 9,0 <SEP> +/- <SEP> 11,8 <SEP> - <SEP> 68,6 <SEP> **
<tb> l'exemple
<tb> 5 <SEP> 10-7, <SEP> 6 <SEP> +/-17, <SEP> 5 <SEP> + <SEP> 128, <SEP> 3 <SEP> NS
<tb> No.
<SEP> 10 <SEP> 5 <SEP> 1 <SEP> 38,8 <SEP> +/- <SEP> 6,3 <SEP> + <SEP> 6, <SEP> 3 <SEP> NS
<tb> 0, <SEP> 1 <SEP> 5 <SEP> 5 <SEP> 38,9 <SEP> +/- <SEP> 5,7 <SEP> + <SEP> 35, <SEP> 5 <SEP> NS
<tb> 5 <SEP> 10 <SEP> 41, <SEP> 2 <SEP> +/- <SEP> 6, <SEP> 5 <SEP> + <SEP> 53, <SEP> 2 <SEP> NS
<tb>
<Desc/Clms Page number 25>
Tableau No. 6 : Effets du bromure d'heptadécyle - 2 méthyle - 2 [ (N - quinolinium) - 6' hexanoyloxyméthyle] - dioloxane-1, 3 sur la thrombocytopenie induite par PAF.
EMI25.1
<tb>
<tb>
Pourcentage <SEP> de
<tb> Doses <SEP> Temps <SEP> diminution <SEP> du <SEP> Pourcentage
<tb> mg/kg <SEP> n <SEP> (mn) <SEP> nombre <SEP> de <SEP> de
<tb> IV <SEP> leucocytes <SEP> Variation
<tb> 6 <SEP> 1 <SEP> 65, <SEP> 3 <SEP> +/- <SEP> 8, <SEP> 5 <SEP>
<tb> Temoin-6 <SEP> 5 <SEP> 49, <SEP> 1 <SEP> +/-4, <SEP> 8 <SEP>
<tb> 6 <SEP> 10 <SEP> 48,5 <SEP> +/- <SEP> 0,5
<tb> 5 <SEP> 1 <SEP> 19,3 <SEP> +/- <SEP> 1,4 <SEP> - <SEP> 58,3 <SEP> ***
<tb> 1 <SEP> 5 <SEP> 5 <SEP> 22,1 <SEP> +/- <SEP> 2,5 <SEP> - <SEP> 55,0 <SEP> **
<tb> Composé
<tb> 5 <SEP> 10 <SEP> 19,4 <SEP> +/- <SEP> 3,6 <SEP> - <SEP> 60,0 <SEP> **
<tb> de <SEP> 5 <SEP> 1 <SEP> 26,2 <SEP> +/- <SEP> 6,3 <SEP> - <SEP> 59,9 <SEP> **
<tb> 0, <SEP> 5 <SEP> 5 <SEP> 5 <SEP> 29,8 <SEP> +/- <SEP> 1,7 <SEP> - <SEP> 39,3 <SEP> *
<tb> l'exemple
<tb> 5 <SEP> 10 <SEP> 32,1 <SEP> +/- <SEP> 5,8 <SEP> - <SEP> 33,8 <SEP> *
<tb> No.
<SEP> 10 <SEP> 5 <SEP> 1 <SEP> 51, <SEP> 1 <SEP> +/-12, <SEP> 1-21, <SEP> 7 <SEP> NS <SEP>
<tb> 0, <SEP> 1 <SEP> 5 <SEP> 5 <SEP> 49, <SEP> 1 <SEP> +/-8, <SEP> 8 <SEP> 0 <SEP> NS <SEP>
<tb> 5 <SEP> 10 <SEP> 45,0 <SEP> +/- <SEP> 9,7 <SEP> - <SEP> 7,2 <SEP> NS
<tb>
<Desc/Clms Page number 26>
RESULTATS
EMI26.1
Le bromure d'heptadecyle-2 hexanoyloxyméthyle]-4 dioxolane-1, 3 (0, 5 ; 1 et 5 mg/kg, IV) et le bromure d'heptadécyle-2 hexanoyloxyméthyle]-4 dioxolane-1, et 1 mg/kg, IV) inhibent la bronchoconstriction et la thrombocytopénie induites par PAF chez le cochon d'Inde.
4 - BRONCHOCONSTRICTION, LEUCOPENIE ET THROMBOCYTOPENIE
INDUITES PAR ANTIGENE CHEZ LE COCHON D'INDE PASSIVEMENT SENSIBILISE PAR SERUM HETEROLOGUE.
Une injection intra-veineuse d'ovalbumine ä des cochons d'Inde passivement sensibilisés avec un serum anti-ovalbumine de lapin induit une bronchoconstriction associée ä une leucopenie et ä une thrombocytopenie. Cette reaction anaphylactique semble être due a la libération d'histamine et ä la génération de metabolites d'acide arachidonique (prostaglandines, thromboxane A2 et 1eucotriènes). Chez le cochon d'Inde, la libération d'autacoides est en principe déclenchée via les immunoglubulines de la classe IgG.
METHODE - Animaux : . Cochons d'Inde mäles, Charles River (450 ä 500 g)
EMI26.2
- Procede d'immunisation :. Injection intra-veineuse, 18 heures avant le test avec l'antigene, de 0, 5 ml/kg d'une dilution ä 1/2 d'antiserum d'anti-ovalbumine de lapin.
<Desc/Clms Page number 27>
- Le test est compose de : . Ovalbumine, 0, 75 g/kg, . Injection intra-veineuse de 1'antigène en dosage final de 1 ml/kg, . Agent vecteur : 0,15 M de NaCl.
- Les composes sont administrés par voie orale, dosés ä
1, 5 ml/kg, 1 heure avant le test avec l'antigène, après anesthesie par injection intrapéritonéale de carbamate
EMI27.1
d'éthyle (1, 5 g/kg) dose ä 10 ml/kg.
Paramètres contrôles et expression des données : a-Bronchoconstriction : . bronchoconstriction induite par antigène en mm (A), . bronchoconstriction maximale en mm (B).
Le pourcentage de bronchoconstriction est calculé comme suit :
EMI27.2
Le comptage des neutrophiles et des plaquettes est realise 1 minute avant le test puis 1, 5 et 10 minutes après le test. Les écarts sont exprimes en pourcentages calcules par rapport aux valeurs obtenues une minute avant le test.
<Desc/Clms Page number 28>
L'équipement suivant a ete utilisé : - Ugo Basile, Comerio ITALIE, . Respirateur Rodent réf. 7025 . Transducteur Bronchospasme ref. 7020 . Enregistreur Deux-Pistes "GEMINI" réf. 7070 - Coultronics, FRANCE, . Compteur Coulters Z B I
EMI28.1
Tableau No. du bromure d'heptadécyle méthyle [ (N- hexanoyloxyméthyle] sur la bronchoconstriction induite par antigène.
EMI28.2
<tb>
<tb>
Pourcentage
<tb> Dose <SEP> de <SEP> Broncho-Pourcentage
<tb> mg/kg <SEP> IV <SEP> n <SEP> constriction <SEP> de
<tb> Variation
<tb> Témoin-6 <SEP> 71,9 <SEP> +/- <SEP> 14,2
<tb> Compose
<tb> de
<tb> l'exemple <SEP> 5 <SEP> 8 <SEP> 51, <SEP> 3 <SEP> +/-14, <SEP> 2-28, <SEP> 7 <SEP> NS
<tb> No. <SEP> 9
<tb>
<Desc/Clms Page number 29>
EMI29.1
Tableau No. du bromure d'heptadécyle [ (N dioloxane-1, sur la leucopenie induite par
8 : Effetsantigene.
EMI29.2
<tb>
<tb>
Pourcentage <SEP> de
<tb> Dose <SEP> Temps <SEP> diminution <SEP> du <SEP> Pourcentage
<tb> mg/kg <SEP> n <SEP> (mn) <SEP> nombre <SEP> de <SEP> d'inhibition
<tb> IV <SEP> leucocytes
<tb> 6 <SEP> 1 <SEP> - <SEP> 11,8 <SEP> +/- <SEP> 5,1
<tb> Témoin <SEP> - <SEP> 6 <SEP> 5 <SEP> - <SEP> 39, <SEP> 6 <SEP> +/-9, <SEP> 5 <SEP>
<tb> 6 <SEP> 10 <SEP> - <SEP> 53,9 <SEP> +/- <SEP> 7,1
<tb> Compose <SEP> 8 <SEP> 1-15, <SEP> 6 <SEP> +/-6, <SEP> 6 <SEP> + <SEP> 32, <SEP> 0 <SEP> NS
<tb> de
<tb> l'exemple <SEP> 5 <SEP> 8 <SEP> 5 <SEP> - <SEP> 8,7 <SEP> +/- <SEP> 10,7 <SEP> - <SEP> 78,0 <SEP> *
<tb> No. <SEP> 9
<tb> 8 <SEP> 10 <SEP> - <SEP> 12,3 <SEP> +/- <SEP> 14,1 <SEP> - <SEP> 77,2 <SEP> *
<tb>
Tableau No. 9 :
Effets du bromure d'heptadécyle - 2 méthyle - 2
EMI29.3
[ (N-pyridinium)-6 dioloxane-1, 3 sur la thrombocytopenie induite par antigène.
EMI29.4
<tb>
<tb>
Pourcentage <SEP> de
<tb> Dose <SEP> Temps <SEP> diminution <SEP> du <SEP> Pourcentage
<tb> mg/kg <SEP> n <SEP> (mn) <SEP> nombre <SEP> de <SEP> d'Inhibition
<tb> IV <SEP> leucocytes
<tb> 6 <SEP> 1 <SEP> - <SEP> 6, <SEP> B <SEP> +/- <SEP> 2, <SEP> 7 <SEP>
<tb> Témoin <SEP> 5 <SEP> - <SEP> 39,7 <SEP> +/- <SEP> 12,5
<tb> 6 <SEP> 10 <SEP> - <SEP> 26,1 <SEP> +/- <SEP> 8,1
<tb> Composé <SEP> 8 <SEP> 1 <SEP> + <SEP> 0, <SEP> 3 <SEP> +/- <SEP> 7,9 <SEP> - <SEP> 104, <SEP> 4 <SEP> NS
<tb> de
<tb> l'exemple <SEP> 5 <SEP> 8 <SEP> 5-3, <SEP> 5 <SEP> +/- <SEP> 3, <SEP> 3, <SEP> 1 <SEP> - <SEP> 91, <SEP> 2 <SEP> ** <SEP>
<tb> No.
<SEP> 9
<tb> 8 <SEP> 10 <SEP> - <SEP> 15,7 <SEP> +/- <SEP> 6,2 <SEP> - <SEP> 39,8 <SEP> NS
<tb>
<Desc/Clms Page number 30>
RESULTATS
Le bromure d'heptadecyle-2 methyle-2 [ (N-pyridinium)-6' hexanoyloxymethyle]-4 dioxolane-1, 3 (5 mg/kg, IV) neutralise la leucopenie et la thrombocytopénie induites par l'antigène, sans reduire notablement la bronchoconstriction induite par l'antigene.
5 - ACTION SUR L'HYPOTENSION INDUITE PAR LE PAF CHEZ LE RAT
ANESTHESIE.
EMI30.1
MATERIAUX ET METHODES
Des rats Sprague Dawley mâles (Charles River) (250 à 300 g) sont anesthesies (IP) au carbamate d'ethyle dose à 1,2 g/kg.
Une injection intra-veineuse de PAF provoque une hypotension dose-dépendante. On recherche les effets du bromure
EMI30.2
d'heptadécyle-2 methyle-2 [ (N-pyridinium) -6' hexanoyloxy-méthyle]-4 dioxolane-1, 3 et du bromure d'heptadécyle-2 methyle-2 [ (N-quinolinium)-6' hexanoyloxymnéthyle]-4 dioxolane-1, 3 sur l'hypotension induite par le PAF, dans les traitements curatifs. L'hypotension est provoquee par une seule dose de PAF (l g/kg), 0,1 ml/100 g en volume, injectee IV, directement dans la veine du penis. On administre les composes quand le point d'hypotension maximum est atteint, c'est-ä-dire 3 minutes après l'injection de PAF.
- paramètres mesures et expression des resultats :
On mesure les pressions systolique et diastolique (mm Hg). Les valeurs sont exprimdes, sous la forme de leur moyenne +/-SEM, sur les courbes des figures 1 et 2 annexées.
- Appareils de mesures : . Transducteur Gould Pgo pour mesurer la pression arterielle, . Perfuseur Braun, . Enregistreur polygraphique Gould 8000 s.
<Desc/Clms Page number 31>
6 - ANTAGONISME DE L'AGREGATION DE LEUCOCYTES POLYMORPHO-
NUCLEAIRES INDUITE PAR LE PAF.
On obtient des leucocytes polymorphonucleaires (PMNs) selon la méthode décrite par A. W. Ford-Hutchinson & al. (Br-
EMI31.1
J. Pharmacol. 76, 367-371, Des suspensions cellulaires ( < % de PMNS) sont preparees ä partir d'exsudats obtenus apres avoir injecte, IP, 5 ml de caseinate de sodium ä 12 % ä des rats Wistar mäles, pesant 300 g.
Après centrifugation, les cellules sont lavees à la solution de Hanks et remises en suspension dans du MEM/Hepes ä 30mM en moyenne (PM = 7,4), la concentration étant de 107 cellules par ml. Dix minutes avant le début de l'agrégation, on ajoute de la cytochalasine B (5 /mol) de façon ä augmenter l'aggregation des PMNs. La transmission lumineuse ä travers la suspension cellulaire (400 l) est mesurée sous agitation magnétique ä 900 T/mn, ä l'aide d'un agrégomètre ä double faisceau (Chronolog Corp. Coultronics).
Le bac témoin contient la suspension cellulaire diluée ä 20 % du nombre de cellules avec le MEM et la différence represente 100 % de transmission. La variation de la transmission, lorsqu'on ajoute du PAF, est enregistree en continu.
4 gel des composés dissous dans le MEM/Hepes sont ajoutes à la suspension de PMNs, avant l'addition de PAF.
RESULTATS
Le PAF, dose ä 10-8 M, induit une agrégation de 55 ä 70 % dans cette suspension de PMNs.
Le bromure d'heptadécyle-2 méthyle-2 [ (N-pyridinium)-6' hexanoyloxymethyle]-4 dioxolane-l, 3 et le bromure
EMI31.2
d'heptadécyle-2 methyle-2 [ (N-quinolinium) methyle]-4 dioxolane-1, inhibent, en fonction de leur dose,
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cette agrégation avec les valeurs respectives de CIos suivantes :
EMI32.1
. bromure d'heptadecyle-2 methyle-2 ( hexanoyloxymethyle]-4 dioxolane-1, : 5 x 10-7 M, . bromure d'heptadecyle-2 methyle-2 ( hexanoyloxymethyle]-4 : 10-6 M.
7-INHIBITION DE (N-pyridinium) -61CALCIUM INDUITE PAR LE PAF DANS DES PLAQUETTES DE LAPIN
LAVEES.
On prélève du sang dans l'artère auriculaire du lapin, puis on le mélange avec de l'acide citrique, du citrate de sodium, de la dextrose et un anti-coagulant ; les plaquettes sont preparees selon Adlie & al., Brit. J. Pharmacology, 19, 7-17,1970. Elles sont incubees avec 100 pM de sel acetylsalicique pendant 30 minutes pour éviter une agrégation induite par le thromboxane. Ces plaquettes sont ensuite chargees avec un colorant quin 2, indicateur de calcium fluorescent, par incubation avec l'acéto-méthylester de quin 2 (15 pM dans le DMSO pendant 20 minutes, ä temperature ambiante), le colorant penetre dans la membrane de la cellule et, après hydrolyse, est piégé dans la plaquette. Les composés sont pre-incubes avec les plaquettes pendant 15 minutes en même temps qu'un melange de CP/CPK qui detruit l'ADP sécrétée.
Apres avoir ajoute le PAF ä la suspension plaquettaire, on effectue les mesures de fluorescence (excitation :
EMI32.2
A = 339 nm, emission = 492 nm). L'intensite de la : Afluorescence est proportionnelle au niveau cytosolique libre de calcium [Ca2+]i qui peut etre quantifie suivant la methode de Tsien & al., J. Cell Biol., 94, 325 - 334, 1982.
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RESULTATS
La stimulation plaquettaire induite par le PAF dosé ä 2 x 10-9 M augmente le niveau de [Ca2+] i qui passe d'environ 150 nM (au repos) ä 400 - 600 nM.
Le bromure d'heptadecyle-2 méthyle-2 ( (N-pyridinium) -6' hexanoyloxyméthyle]-4 dioxolane-l, 3 et le bromure
EMI33.1
d'heptadecyle-2 methyle]-4 3 doses ä 5 x 10-7 M inhibent totalement la mobilisation de [Ca+] induite par le PAF. A 5 x 10-8 M, 11 de l'effet du PAF est, respectivement, de 44 pour le bromure d'heptadecyle-2 méthyle-2 [ (N-quinolinium)-6' hexanoyloxy-hexanoyloxymethyle]-4 dioxolane-l, 3 et de 75 % pour le bromure d'heptadécyle-2méthyle-2 [(N-quinolinium)-6'$hexanoyloxy- methyle]-4 dioxolane-1, 3.
POSOLOGIE
Chez l'homme, en administration orale, les doses quotidiennes vont de 0, 1 ä 0, 5 mg en comprimes ou capsules ä enrobage enterique ; pour l'administration intra-veineuse, les doses quotidiennes correspondantes sont de 0, 01 à 0, 05 Mg.
La durée du traitement est de 2 ä 6 semaines.