FI75676B - Foerfarande och anordning foer identifiering och raekning av bestaemda blodcellunderklasser. - Google Patents

Foerfarande och anordning foer identifiering och raekning av bestaemda blodcellunderklasser. Download PDF

Info

Publication number
FI75676B
FI75676B FI802224A FI802224A FI75676B FI 75676 B FI75676 B FI 75676B FI 802224 A FI802224 A FI 802224A FI 802224 A FI802224 A FI 802224A FI 75676 B FI75676 B FI 75676B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
cells
light
sample
antibody
lymphocytes
Prior art date
Application number
FI802224A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI802224A (fi
FI75676C (fi
Inventor
W Peter Hansen
Robert A Hoffman
Original Assignee
Ortho Diagnostics
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=22010834&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=FI75676(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ortho Diagnostics filed Critical Ortho Diagnostics
Publication of FI802224A publication Critical patent/FI802224A/fi
Publication of FI75676B publication Critical patent/FI75676B/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI75676C publication Critical patent/FI75676C/fi

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56966—Animal cells
    • G01N33/56972—White blood cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/10—Investigating individual particles
    • G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
    • G01N15/1456—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry without spatial resolution of the texture or inner structure of the particle, e.g. processing of pulse signals
    • G01N15/1459—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry without spatial resolution of the texture or inner structure of the particle, e.g. processing of pulse signals the analysis being performed on a sample stream
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/04—Investigating sedimentation of particle suspensions
    • G01N15/042—Investigating sedimentation of particle suspensions by centrifuging and investigating centrifugates
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/04—Investigating sedimentation of particle suspensions
    • G01N15/05—Investigating sedimentation of particle suspensions in blood
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/01—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials specially adapted for biological cells, e.g. blood cells
    • G01N2015/011—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials specially adapted for biological cells, e.g. blood cells with lysing, e.g. of erythrocytes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/01—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials specially adapted for biological cells, e.g. blood cells
    • G01N2015/016—White blood cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/10—Investigating individual particles
    • G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
    • G01N2015/1486—Counting the particles
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/805—Optical property
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/807—Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
    • Y10S436/808—Automated or kit

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

TTgä^Tl KUULUTUSJULKAISU
•sSFif [β] (11> UTLÄGQNINGSSKRIFT (DO f O
1 (51) Kv.ik.Vint.Ci1 G 01 N 33/50, A 61 B 5/1A
SUO MI-FI N LAN D
(Fl) (21) Patenttihakemus-Patentansökning 80222A
(22) Hakemispäivä-Ansökningsdag 11.07.80
Patentti- ja rekisterihallitus (23) Alkupäivä - Giltighetsdag 11 .0 7 .8 0
Patent- och registerstyrelsen (41) Tullut julkiseksi-Biivit offentiig 1A.01.8i (44) Nähtäväksipanon ja kuul.julkaisun pvm. - ti g-j oq
Ansokan utlagd och utl.skriften publicerad j · j · (86) Kv. hakemus - Int. ansökan (32)(33)(31) Pyydetty etuoikeus - Begärd prioritet 13-07-79 USA(US) 057A82 Toteennäytetty-Styrkt (71) Ortho Diagnostics, Inc., U.S. Route 202, Raritan, New Jersey, USA(US) (72) W. Peter Hansen, Middleboro, Massachusetts,
Robert A. Hoffman, Mansfield, Massachusetts, USA(US) (7A) Oy Koi ster Ab (5A) Menetelmä ja laitteisto verisolujen määrättyjen alaluokkien tunnistamiseksi ja laskemiseksi - Förfarande och anordning för identifiering och räkning av bestämda blodcellunderklasser Tämä keksintö kohdistuu automaattisiin hematologisiin laitteisiin ja menetelmiin ja tarkemmin sanottuna verisolujen määrättyjen alaluokkien, kuten lymfosyyttien määrättyjen tyyppien tunnistamiseen ja laskemiseen.
Lymfosyyttikannan veressä määräävät useat alaluokat, joiden vaikutus immuniteettiin on merkittävä. Esimerkiksi lymfosyyttien suhteelliset määrät eri alaluokissa yleensä muuttuvat eri tautitiloissa. Täten eri alaryhmien solujen laskenta ja tunnistaminen antaa tiedon ei vain erikoisesti veren koostumuksesta vaan yleisesti elimen suhteellisesta hyvinvoinnista.
On tunnettua, että ainakin useita toiminnallisesti erilaisten lymfosyyttien määrättyjä alaluokkia voidaan tunnistaa antigeenisten determinanttien perusteella solujen pinnalla. Erikoisesti huomattavaa akateemista ja kliinistä mielenkiintoa on esiintynyt T-lymfosyyttien suhteen. Muun muassa T-lymfosyyteille ovat tun- 2 75676 nusomaisia määrätyt, tunnistettavat antigeeni-determinantit niiden pinnalla, jotka erottavat tämän alaluokan solut muista verisoluista ja muiden lymfosyyttien alaluokkien soluista. Täten esiintyy suurta mielenkiintoa reagenssien löytämiseksi ja valmistamiseksi, joihin kuuluvat vasta-aineet ja jotka reagoivat selektiivisesti tutkittavien lymfosyyttien alauokkien suhteen.
On todettava, että ihmisten ja eläinten immuunijärjestelmään kuuluu kaksi lymfosyyttien pääluokkaa. Ensimmäinen niistä (kateen-korvaperusteinen tai T-solu) erikoistuu kateenkorvassa hematopo-eettisista perussoluista. Kateenkorvassa ollessaan erikoistuvia soluja kutsutaan "tymosyyteiksi". Kypsät T-solut poistuvat kateen-korvasta ja kiertävät kudosten, imusuoniston ja verenkierron välillä. Nämä T-solut muodostavat suuren osan kiertävien pienten lymfosyyttien kokonaismäärästä. Ne ovat immunologisesti spesifisiä ja vaikuttavat suoraan solujen välittämiin immuunireaktioihin (kuten hylkimisreaktioihin) efektorisoluina. Vaikkakaan T-solut eivät eritä humoraalisia vasta-aineita, tarvitaan niitä joskus näiden vasta-aineiden erittymistä varten seuraavassa esitettävän lymfosyyttien toisen luokan avulla. Eräät T-solutyypit vaikuttavat säätävästi immuunijärjestelmän toisiin kohtiin. Tämän prosessin solujen yhteistoiminnan mekanismia ei vielä täysin tiedetä.
Lymfosyyttien toinen ryhmä (luuytimestä peräisin olevat solut tai B-solut) ovat niitä, jotka erittävät vasta-aineita. Ne kehittyvät myös hemapoeettisista perussoluista, mutta kateenkorva ei aiheuta niiden erikoistumista. Linnuilla ne erikoistuvat ka-teenkorvan tapaisessa elimessä, jota kutsutaan nimellä Bursa Fabricii. Imettäväisillä ei kuitenkaan ole havaittu vastaavaa elintä ja oletetaan, että nämä B-solut erikoistuvat luuytimessä.
Nyt on havaittu, että T-solut jakaantuvat useisiin alatyyp-peihin, joita kutsutaan "avustaja"-, "valmentaja"- ja "tappaja"-T-soluiksi ja joiden tehtävinä vastaavasti on reaktion edistäminen, reaktion vaimentaminen tai vieraiden solujen tuhoaminen (liuottaminen) . Rotilla ja hiirillä nämä alalajit tunnetaan hyvin, mutta vasta äskettäin ne on esitetty ihmisille. Katso esimerkiksi R.L. Evans, et ai., Journal of Experimental Medicine, Volume 145, 221-232, 1977; ja L. Chess ja S.F. Schlossman, "Functional Analysis 3 75676 of Distinct Human T Cell Subsets Bearing Unique Differentation Antigens", julkaisussa Contemporary Topics in Immunobiology", O. Stutman, toimittaja, Plenum Press, 1977, Volume 7, sivut 363-379.
Mahdollisuus tunnistaa tai vaimentaa T-solujen luokkia tai alaluokkia on tärkeää erilaisten immunoregulatiivisten sairauksien tai tautitilojen diagnoosia tai hoitoa varten.
Esimerkiksi määrättyjen leukemioiden ja lymfoomien ennuste on erilainen siitä riippuen ovatko ne peräisin B- tai T-soluista. Täten tautiennusteiden arviointi riippuu näiden kahden lymfosyytti-luokan erottamisesta toisistaan, katso esimerkiksi A.C. Aisenberg ja J.C. Long, The American Journal of Medicine, 58:300 (maaliskuu 1975); D. Belpomme, et ai., "Immunological Diagnosis of Leukemias and Lymphomas", S. Thierfelder, et al., toim. Springer, Heidelberg, 1977, 33-45 ja D. Belpomme et al., British Journal of Haematology, 38 (1978) 85. Määrättyihin tautitiloihin (esim. lasten reumaattinen niveltulehdus ja määrätyt leukemiat) liittyy T-solujen alaluokkien epätasapaino. On esitetty, että autoimmuunisiin tauteihin yleensä liittyy "avustaja"-T-solujen ylimäärä tai määrättyjen "valmentaja"-T-solujen puute, kun taas pahanlaatuisiin kasvaimiin yleensä liittyy "vaimentaja"-T-solujen ylimäärä. Määrätyissä leukemioissa kehittyy ylimäärä T-soluja taudin kehittymisen ollessa keskeytyneenä. Ennuste voi siten riippua mahdollisuudesta havaita tämä epätasapaino tai ylimäärä. Katso esimerkiksi J. Kersey, et al., "Surface Markers Define Human Lymphoid Malignancies with Differing Prognoses", Haematology and Blood Transfusion, Volume 29, Springer-Verlag, 1977, 17-24 ja siinä mainitut viitteet.
Viime aikoina on käytetty monoklonaalisia vasta-ainemenet-telyjä suurten määrien erittäin hyvin puhdistettujen vasta-aineiden valmistamiseksi eri lymfosyyttialaluokille. Näitä vasta-aineita käyttäen on osoitettu mahdolliseksi analysoida yksilön lymfosyytit eri alaluokkien solujen suhteellisten lukumäärien määräämiseksi. Edelleen suoria tai epäsuoria menettelyjä käyttäen voidaan vasta-aineet merkitä fluoresoivasti, jolloin tutkittaville näytteille voidaan suorittaa virtaussytometrinen analyysi.
Nykyisin käytettyihin tavanomaisiin immunofluoresenssimene-telmiin kuuluu lymfosyyttien eristäminen muista leukosyyteistä 4 75676 esivaiheena. Tämä vaihe poistaa mahdollisuuden, että ei-spesifi-sesti värjätyt monosyytit tai granulosyytit voidaan laskea erikoisesti värjätyiksi lymfosyyteiksi. Tämä alussa suoritettu lymfosyyttien eristysvaihe on pitkä ja työläs, itse asiassa paljon pitempi kuin verrattain yksinkertaiset lymfosyyttien värjäys- ja analysointivaiheet. Selvästi kliinisessä käytössä, jossa esiintyy tarvetta nopeisiin, toistettaviin analyyseihin, välttämättömyys lymfosyyttien eristämiseen leukosyyteistä on itse asiassa voittamaton este. Lisäksi myös niissä tutkimussovellutuksissa, joissa aika ei ole aivan niin tärkeä, ensin suoritettavassa lymfosyyttien eristysvaiheessa esiintyy vaara joidenkin lymfosyyttien häviämiseksi monosyyttejä ja granulosyyttejä poistettaessa, mikä aiheuttaa epävarmuutta ja epätarkkuutta seuraaviin analyyseihin. Vastaavasti jos ei täysin pystytä poistamaan muita verisoluja eristettävistä lymfosyyteistä, esiintyy huomattava virhemahdollisuus ja näiden muiden solujen läsnäolo voi hyvin aiheuttaa virheitä seuraaviin analyyseihin.
Keksinnön kohteena on automaattinen menetelmä veren lymfosyyttien valitun alaluokan tunnistamiseksi ja laskemiseksi, jolloin ei vaadita lymfosyyttien eristämistä etukäteen muista verisoluista. Lisäksi keksinnön kohteena on laite määrättyjen T-lym-fosyyttien tai samankaltaiset antigeeniset ominaispiirteet omaa-vien muuntyyppisten verisolujen tunnistamiseksi ja niiden lukumäärän laskemiseksi näytteestä.
Keksinnön mukaiselle menetelmälle ja laitteelle on tunnusomaista, mitä on esitetty patenttivaatimusten tunnusmerkkiosissa.
Keksinnön kohteina olevat menetelmä ja laite ovat huomattavasti nopeampia kuin nykyisin käytetyt menettelyt ja lisäksi niiden avulla saadaan merkittävästi aikaisempaa vähemmin virheellisiä analyysituloksia, jotka joutuvat muiden solujen antamista virheellisistä arvoista tai näytteessä ilmenevien lymfosyyttien häviöiden aiheuttamista virheellisistä lukemista. Keksinnön mukaiset menetelmä ja laite toimivat nopeutensa ja suhteellisen yksinkertaisuutensa vuoksi käyttökelpoisena kliinisenä työkaluna lymfosyyttien alaluokkien tunnistamiseksi ja solujen laskemisessa.
Esiteltävässä keksinnössä käytetään määrätyllä tavalla 5 75676 optiikan ja signaalinkäsittelyn suhteen modifioitua tavanomaista virtaussytofluorimetristä laitetta, jolloin käytetään tutkittavan alaluokan selektiivistä immunofluoresoivaa värjäystä (suoraa tai epäsuoraa ja jolloin verinäyte kokonaisuudessaan (haluttaessa joko soluosuutta tai antikoaguloitua täysverta) analysoidaan solu kerrallaan.
Suositellussa toteutuksessa yksi virtaussytometrisen laitteen suorakulma-fluoresenssikanavista on sovitettu toimimaan aallonpituudelle herkkänä tunnistajana suorakulmasäteilyä varten. Täysverta tai soluosuutta oleva näyte inkuboidaan niin, että tutkittavan lymfosyyttien alaluokan pinnalla olevat määrätyt antigeenit voivat yhdistyä vasta-aineen kanssa, jolla on etukäteen määrätty fluoresoiva vaste annettuun valotukseen (esimerkiksi ar-gonionilaserista tulevaan fokusoituun, koherenttiin valoon), jolloin tutkittavan alaluokan solut itse tulevat fluoresoiviksi tällaisen saapuvan valon vaikutuksesta. Näytteen solut johdetaan sitten virtauskanavan lävitse virtaussytometrissä, jossa voidaan tarkkailla suoraan etenevän valon sirontaa sekä suorakulmasiron-taa ja fluoresenssiä. Määrättyjä eteenpäin suuntautuneita siron-tatiloja, kuten mainittiin, käytetään yhdessä valon suorakulmaisen sironnan kanssa fluoresenssin havaitsemiseksi. Havaittaessa määrätyn värinen (esim. vihreä) ominaisfluoresenssi muodostetaan antosignaali annetun alaluokan lymfosyytin esiintymisen osoittamiseksi. Tämä tieto voidaan sitten asianmukaisesti taltioida ja/ tai esittää (esim. histogrammin muodossa). Lisäksi, kuten alalla tiedetään, solujen lajittelumenetelmiä voidaan käyttää annetun alaluokan lymfosyyttisolujen eristämiseksi fysikaalisesti.
Kuviossa 1 on esitetty kaaviollisesti kaupallisesti saatava virtaussytofluorometrinen laite.
Kuviossa 2 on esitetty kaaviollisesti signaalinkäsittely-laite, jolloin kuviossa 1 esitettyä tyyppiä olevaa laitetta voidaan käyttää yhdessä esiteltävän keksinnön periaatteiden mukaan lymfosyyttien määrättyjen alaluokkien tunnistamiseksi ja solujen laskemiseksi.
Kuviossa 3A - 3F on esitetty histogrammeja, jotka esittävät tämän keksinnön periaatteiden soveltamista.
6 75676
Keksinnön paras toteutustapa
Tarkasteltaessa kuviota 1 voidaan siinä havaita kaaviollinen toiminnallinen ja rakenteellinen esitys laitteesta, jota voidaan käyttää esiteltävän keksinnön periaatteiden mukaan. Itse asiassa kuviossa 1 on esitetty määrätty järjestelmä, joka on saatavissa p kaupallisesti kauppanimellä CYTOFLUOROGRAPH ja jota myy Ortho Instruments, 410 University Avenue, Westwood, Massachusetts 02090. Kuvion 1 mukaisessa laitteessa käytetään virtaussytometrian periaatteita soluanalyysiä varten ja siinä on mahdollisuus solun fluo-resenssivasteen havaitsemiseksi määrättyihin valaisutyyppeihin. Fokaalisesti kuvion 1 laitteessa on virtauskanava 106, johon solut johdetaan nestesuspensiona yhtenä jonona ja suurella nopeudella (esim. 2500 solua sekunnissa) havaitsemisalueen lävitse. Havaitse-misalueen muodostaa soluvirtauksen ja tyypillisesti kaasulaseris-ta saatavan fokusoidun, koherentin valonsäteen leikkauskohta. Solun kulkiessa havaitsemisalueen lävitse tapahtuu useilla tavoin vuorovaikutusta sen ja saapuvan valon välillä. Solut absorboivat luonnollisesti hieman valoa, muuta valoa siroaa verrattain pienissä kulmissa saapuvan valon akselin suhteen ja vielä muuta valoa siroaa kulmissa, jotka poikkeavat huomattavasti saapuvasta valosta, esimerkiksi suorassa kulmassa saapuvan valon suhteen. Lisäksi solun luonteesta riippuen ja myös siitä värjäyksestä riippuen, joka soluun mahdollisesti on etukäteen tehty, voi myös esiintyä fluoresoivaa emissiota.
Vastaavasti valoilmaisimet sijoitettuina eri kohtiin solu-virran ja saapuvan laser-valon suhteen havaitsevat jokaiselle solu-tyypille ominaisen vasteen. Täten kuviossa 1 on argonionilaser 101 ja heliumionilaser 102 ja molempien emittoiva koherentti valo taittuu eri tavoin peilien 103 ja 104 sekä linssin 105 kautta virtaus-kanavan 106 ilmaisutilaan. Kuten alalla tiedetään, solunäytteen annetaan virrata laminaarisesti nestevaipassa sen takaamiseksi, että jokainen yksittäinen solu valaistaan ilmaisualueessa annettuna aikana. Täten koska jokaista solua valaistaan linssistä tulevalla valolla, solun ja valon välinen vuorovaikutus voidaan havaita.
Kuten kuviossa 1 on esitetty, sammumisilmaisin 108 ilmaisee solun estämän valon ja eteenpäin suuntautuva valonsironta ilmaistaan valoilmaisimien 109 ja 110 avulla kartiomaisella alueella, jonka 75676 puolikulma on 20°. Ilmaisimien 108, 109 ja 110 muodostamat sähkö-signaalit johdetaan vahvistimiin 120 ja 121, jotka antavat amplitudiltaan ja muuten sopivat sähkösginaalit seuraavaa analyysiä ja/tai näyttöä varten.
Kuvion 1 laitteessa valo, jonka solu emittoi fluoresoides-saan, ilmaistaan suorassa kulmassa sekä soluvirtauksen että saapuvan valon akselin suhteen. Pallopeili 125 ja kondensorilinssi 107 keräävät tätä valoa kartiossa, jonka kärkikulman puolisko on noin 20° ja johtavat tämän valon aukon 111 kautta peräkkäin dikroiseen peiliin 112 ja toiseen peiliin 113. Ensimmäinen värisuodin 114 (joka esimerkiksi läpäisee verrattain pitkäaaltoista valoa) johtaa valitun valon dikroisesta peilistä 112 valoilmaisimeen 115 (esim. valo-monistinputki). Toinen suodin 115 läpäisee selektiivisesti toisen-väristä valoa (esim. verrattain lyhytaaltoista valoa) toisesta peilistä 113 toiseen valoilmaisimeen 116. Sähkösignaalit ilmaisimista 116 ja 117 muodoltaan vastaavista soluista tulevaa valoa vastaavina pulsseina johdetaan vahvistimiin 118 ja 119, jotka myös muodostavat sopivaan käsittelyyn sopivat signaalit.
Kuten kuvion 1 toteutuksessa on osoitettu, ilmaisinvalitsija 122 muodostaa histogrammin käyttäen vahvistimien 118-121 antosignaa-leja. Eräs käyttökelpoinen esitystapa on esimerkiksi esittää punaisen fluoresenssin amplitudi ilmaisimesta 117 ilmaisimesta 116 saadun vihreän fluoresenssin amplitudin suhteen. Tällainen histogrammi on esitetty näytössä 123, jolloin jokainen histogrammin piste vastaa yksittäistä solua. Merkkiryhmät tai -kasaumat histogrammissa vastaavat samantyyppisten solujen ryhmiä. Aivan ilmeisesti alan asiantuntijat tietävät olevan edullista muodostaa vaihtelevasti histogrammeja eteenpäinsuuntautuneesta kapean kulman sironnasta vihreän fluoresenssin voimakkuuden suhteen, eteenpäinsuuntautuneesta kapeakulmaisesta sironnasta aksiaalisen valon sammumisen suhteen ja niin edelleen.
Kuviossa 1 esitetyn laitteen tunnettujen sovellutusten mukaisesti niinsanottua ensimmäistä fluoresenssikanavaa 119 ilmaisimesta 117, jolloin sitä pääasiassa käytetään pitkäaaltoisen fluoresenssin mittaamiseen, voidaan määrätyissä olosuhteissa käyttää myös laajakulmaisen sironnan ilmaisuun. Näin on laita esiteltävän keksinnön periaatteita käytettäessä ja tämän tekijän korostamiseksi on edullis- 7567 6 ta, jos tavanomainen punainen suodatinlohko 114 korvataan suotimilla, jotka soveltuvat laserista 101 saadun sinisen laser-valon johtamiseen ilmaisimeen 117, joka valo siroaa suorissa kulmissa saapuvan valon akselin suhteen linssistä 105. Valomonistimen 117 ja vahvistimen 119 suunnitteluparametrejä voidaan vastaavasti muuttaa alan asiantuntijoiden mahdollisuuksien mukaan sopivat ominaisuudet omaavien signaalien saamiseksi seuraavaa käsittelyä varten.
Kuviossa 2 on esitetty lohkokaavio suositeltavista signaalin-käsittelykohteista esiteltävän keksinnön periaatteiden mukaisesti, mutta tätä laitteistoa voidaan ehkä ymmärtää paremmin seuraavien yksityiskohtaisten esiteltävän keksinnön teoreettisten ja menetel-mänäkökohtien tarkastelujen avulla.
Verinäytteen asianmukainen käsittely esiteltävän keksinnön periaatteiden mukaan käsittää pääasiallisesti näytteen inkuboinnin vasta-aineella tarkasteltavaa alaluokkaa varten, millä vasta-aineella on tarvittavat ominaisuudet fluoresoivan valon emittoimiseksi valaistaessa tulevalla laser-valolla.
Eräässä toteutuksessa ihmisen luovuttamaa täysverta anti-koaguloidaan (esim. EDTA:n avulla), lingotaan ja leukosyytit eristetään. Vaihtoehtoisesti käytetään antikoaguloitua täysverta. Inku-bointi suoritetaan sopivalla vasta-aineella, minkä jälkeen punaiset solut poistetaan näytteestä liuottamalla tavallisella tavalla.
Tämän jälkeen, olettaen että käytetty vasta-aine oli sopivasti fluore-soivasti aktiivinen, näyte on valmis laimennettavaksi ja analysoitavaksi virtaussytofluorometrisesti. Tapauksessa, jolloin käytetään epäsuoraa immunofluoresenssivärjäystä, suoritetaan toinen inkubointi ensimmäisen vasta-aineen suhteen toisella vasta-aineella, jolla vuorostaan on vaadittavat fluoresoivat ominaisuudet.
Näytteen kulkiessa virtauskanavan lävitse ja sitä valaistaessa sammumisen, eteenpäin suuntautuneen valonsironnan, suorakulmasiron-nan ja fluoresenssin optiset parametrit ilmaistaan samanaikaisesti, mutta signaalinkäsittelyn suhteen eri parametrien merkitystä tarkastellaan suhteellisen tärkeyden mukaan. Tämä tarkoittaa, että sekä eteenpäinsuunnatun kapeakulmapulssin (johon haluttaessa mutta ei välttämättä kuulu myös ammumissignaali) ja suorakulmaisen sironta-pulssin täytyy olla asianmukaisilla alueilla käytettäväksi vihreää 9 75676 fluoresoivaa signaalia varten. Sitten yhdistymättömistä vasta-aineista tai muuten muodostuneen virhefluoresenssisäteilyn korjauksen jälkeen vihreän fluoresenssipulssin esiintyminen osoittaa määrätyn alaluokan lymfosyyttisolun läsnäolon. Tämä menettely toimii, koska "ikkuna" eteenpäinsuunnattua sirontaa varten erottelee leukosyytit verihiutaleista, osaksi sulaneista punasoluista ja liuoksessa olevista jäänteistä ja "ikkuna" suorakulmasirontaa varten erottelee lymfosyytit monosyyteistä ja granulosyyteistä. Havaittaessa solu, jonka yhteydessä esiintyy pienikulmasirontaa ja suorakulmasirontaa vastaavat pulssit vastaavissa ikkunoissa, voidaan tehokkaasti ilmaista lymfosyytin läsnäolo.
Lymfosyyttien halutun alaluokan pääosoitin on määrätyn värin fluoresenssi. Luonnollisesti jos näytteestä saadaan jäännösmerkkejä, on välttämätöntä tutkia näiden merkkien vaikutus. Eräs tällainen merkki käsittää fluoresoivat molekyylit liuoksessa ja se voidaan poistaa pesemällä näyte ennen virtaussytometristä analyysiä. Toinen jäännösmerkkien luokka muodostuu fluoresoivien vasta-aineiden epämääräisen sitoutumisen vuoksi soluihin. Eräs tapa toisen (tai molempien) merkkityyppien käsittelemiseksi on vertailumateriaalin käyttäminen, joka vastaa virheellisiä tai keinotekoisia fluoresenssi-arvoja. Toinen tapa on käyttää laitteessa arvoja, jotka vastaavat tätä vertailumateriaalia. Ilmeisesti oikea lukema voidaan saada kompensoimalla varsinaisesti havaitut signaalit korjaustekijällä tyypillisesti yhdistämällä (esim. vähentämällä tai dekonvoluution avulla) korjaussignaali todella havaitun fluoresenssisignaalin kanssa. Samalla tavalla vertailunäytteitä tai vertailutietoa voidaan käyttää erilaisten havaittujen ilmiöiden korjaukseen, kuten alan asiantuntijat hyvin tietävät.
Tarkasteltaessa kuviota 2 on siinä esitetty toimintalohko-kaavio sovellettaessa esiteltävän keksinnön periaatteiden mukaisia menettelyjä. Kuviossa 2 eteenpäin suunnatun sironnan vertailu-"ikkuna" on kohdassa 201 ja suorakulmasironnan vertailu-"ikkuna" kohdassa 204. Nämä vertailuarvot voidaan muodostaa yksinkertaisesti kiinteiden tai säädettävien potentiometrien avulla tai käyttäen huolellisesti laadittua ja esoteeristä ohjelmoitua säätöä, jolloin otetaan huomioon eri ympäristötekijät, tekijät, jotka liittyvät tutkittavan veren määrään tai käsittelytapaan ja niin edelleen. Jokaisessa tapa- 10 75676 uksessa "ikkunat" 210 ja 204 vastaavasti määrittävät amplitudi-alueet, joilla vastaavat eteenpäinsuunnatut sironta- tai suora-kulmasirontapulssit määrittävät mahdolliset leukosyytit. Eteenpäin suuntautunut sirontapulssi 202, joka voi muodostua kuvion 1 vahvistimessa 120 kapean kulman valoilmaisimista 109 ja 110, johdetaan vertailuyksikköön 203, joka antaa ohjaussignaalin JA-porttiin 207, kun vastaava pulssi kohdassa 202 osuu kohdassa 201 määritettyyn ikkunaan. Samoin suorakulmasirontapulssi kohdassa 205 johdetaan toiseen vertailyyksikköön 206, jonka toisen oton antaa vertailu-"ikkuna" suorakulmasirontaa varten kohdasta 204. Jälleen jos suorakulmasirontapulssi 205 on suorakulmasirontaikkunan alueella, saadaan ohjaussignaali vertailuyksiköstä 206 JA-porttiin 207. Täten eteenpäin suunnatun sirontapulssin esiintyessä eteenpäin suunnatun sironnan vertailuikkunassa suorakulmapulssin kanssa suorakulmasironta-ikkunassa JA-portti 207 sallii määrityksen kohdassa 208 vihreän fluo-resenssipulssin esiintymisestä vihreästä fluoresenssikanavasta 209 saatuna (esim. kuvion 1 laitteen vahvistimesta 118).
Seuraavaksi on esitetty pulssinkorkeusanalysaattori 221, joka muuttuvasti kompensoi vihreästä fluoresenssikanavasta saadut arvot ja muodostaa näyttö- ja tulostustiedot. Kuten edellä on esitetty, kompensointi voi olla niinkin yksinkertainen kuin määrätyn intensi-teettimäärän vähentäminen virheellisten mutta vastaanotettujen fluo-resenssisignaalien vuoksi tai se voi olla niinkin yksityiskohtainen kuin korjausarvojen muodostaminen ennen vertailynäytteen analyysiä tai sen jälkeen. Yleensä pulssinkorkeusanalyysissä 211 suoritetaan sopiva vahvistus, suodatus ja signaalinkäsittely tavanomaisten menettelyjen avulla, jotka alan asiantuntijat hyvin tuntevat. Näyttö tai tulostusarvojen muodostus kohdassa 212 käsittää sopivien histogrammien tai vastaavien muodostamisen, minkä alan asiantuntijat myös tuntevat.
Tässä käytettynä termillä "fluoresoiva vasta-aine" tarkoitetaan vasta-aineita, jotka joko itse fluoresoivat tai jotka saadaan fluoresoimaan määrätyn ärsykkeen avulla.
On huomattava, että kuvion 2 kaavioesitys on pelkästään kuvaava esiteltävän keksinnön periaatteiden toiminnallisten näkökohtien suhteen ja niitä voidaan toteuttaa lukuisilla eri tavoilla alan asiantuntijoiden tuntemien menettelyjen avulla. Samoin on otettava huomioon, 11 75676 että tässä esitetyt menetelmät ja laitteet muodostavat esiteltävän keksinnön periaatteiden suositeltavista ja niitä esittelevistä toteutuksista, mutta että useita vaihtoehtoja voidaan käyttää alan asiantuntijoiden toimesta poikkeamatta esiteltävän keksinnön hengestä ja alueesta.
Esimerkki
Materiaalit ja menetelmät A. Solujen esikäsittely
Normaalia ihmisen luovuttamaa täysverta antikoaguloitiin EDTArlla. Solujen muodostama osuus erotettiin ja leukosyyttien pitoisuus siinä määrättiin. Lymfosyyttien prosenttimäärä arvioitiin modifioidun sytofluorografin (Ortho Instruments Westwood, MA) avulla, kuten seuraavassa esitetään. Jos lymfosyyttien pitoisuus oli suurempi kuin 10 000/mm , solujen muodostamaa osuutta laimennettiin fosfaatilla puskuroidulla suolaliuoksella (esim. "PBS") (Dulbeco) 3 pitoisuuteen 10 000 lymfosyyttiä/mm .
B. Epäsuora immunofluoresoiva värjäys.
100 μΐ soluliuosta inkuboitiin 100 ^.litralla sopivasti laimennettua monoklonaalista vasta-aineita (hiiri-antilymfosyyttinen alaluokka) 4°C:ssa 30 minuuttia. Tämän inkuboinnin päätteeksi soluja käsiteltiin 2-4 millilitralla puskuroitua, isotoonista ammoniumklo-ridiliuosta (NH^Cl 16,58 g/1, dinatrium-EDTA 0,074 g/1, kaliumbi-karbonaattia 2,00 g/1, pH-arvo 7,3). Viiden minuutin kuluttua punaiset verisolut poistettiin liuottamalla ja suspensiota lingottiin arvolla 200 x g viiden minuutin ajan. Yläpuolinen neste poistettiin ja jäljelle jäänyttä sakkaa, joka sisälsi leukosyyttejä ja verihiutaleiden sekä punaisten verisolujen jäänteet, pestiin kerran PBS:llä. Sakka dispergoitiin varovasti ja sitä inkuboitiin 4°C:ssa 30 minuuttia 100 plitralla 40:1 laimennuksella fluoresoivaksi tehtyä vuohi-anti-hiiri 7S (Meloy Laboratories, Springfield, VA) F/p = 2,5. Tämän inkuboinnin ja mahdollisen PBS-pesun jälkeen laimennettiin solut lopulliseen 1 millilitran tilavuuteen ja olivat ne valmiit analyysia varten virtaussytometrissä.
C. Virtaussytometrinen analyysi
Sytofluorografia FC2QQ/4800A (Ortho Instruments, Westwood, MA) käytettiin mittaamaan samanaikaisesti eteenpäin suuntautunut ja suorakulmainen valonsironta ja vihreä fluoresenssi jokaiselle näyt- 12 75676 teen solulle. Laitetta oli muutettu korvaamaan "punainen" suodinlohko suotimilla, jotka sopivat suuntaamaan saapuvan säteen suhteen suorassa kulmassa sironneen sinisen laser-valon valomonistimeen, jota tavallisesti käytetään punaisen fluoresenssin ilmaisemiseen.
Vihreä suodinlohko sisälsi FITC-suotimen. Suorakulmasironnan signaali yhdessä normaalisti saatavan eteenpäin suuntautuneen sironnan signaalin kanssa esitettiin sytogrammina 48Q0A analysaattorissa. Laitteen säätöjä käyttäen muodostettiin porttipulssi soluja varten, joissa esiintyi erikoisia eteenpäin suuntautuneen ja suorakulmaisen sironnan yhdistelmiä. Vihreät fluoresenssipulssit integroitiin sähköisesti erillisessä yksikössä, joka oli lisätty 4800A analysaattoriin ja integroidut fluoresenssipulssit taltioitiin pulssinkorkeusanaly-saattoriin (malli 2102, Ortho Instruments, Westwood, MA). Käyttäen 4800A analysaattorista saatua porttipulssia oli mahdollista taltioida fluoresenssipulssit vain niistä soluista, joilla oli määrättyjä valonsirontaominaisuuksia.
D. Tulokset
Leukosyyttien tunnistusmenettely on esitetty sytogrammeissa kuvioissa 3A ja 3B. Tässä käytettynä "sytogrammi" on lukujen esitystapa, jolloin jokainen piste tarkoittaa yhtä solua ja pisteen paikka annetaan koordinaateilla, jotka ovat verranollisia valittuihin parametreihin, esimerkiksi suorakulmaisen ja eteenpäin suunnatun valon-sironnan voimakkuuksiin solun muodostamina sytofluorografissa.
Kuvion 3A mukainen näyte oli täysverta laimennettuna ammoniumkloridia olevalla liuottavalla aineella. Voidaan erottaa neljä piste- tai soluryhmää. Ryhmä 1 aiheutuu verihiutaleiden tai punaisten verisolujen jäänteiden muodostamista kasaumista tai ryhmistä. Ryhmät 2-4 muodostuvat lymfosyyteistä, monosyyteistä ja granulosyyteistä vastaavasti. Leukosyyttiryhmän tunnistelminen perustuu jokaisen ryhmän suhteellisen lukumäärän vertailuun käsin suoritettujen eri leukosyyttien lukumäärän laskun kanssa. Samanlaisia ryhmiä havaittiin punaista (HeNe) laseria käytettäessä prototyyppisolulajittelijaan. Solujen lajittelu vastaavissa ryhmissä, solujen värjäys akridiinioranssilla ja solujen tarkastelu fluoresenssimikroskoopin alla antoi lisätodisteen sille, että solut olivat oikein tunnistetut. Kuvio 3B on sytogrammi "mono-nukleaaristen solujen" näytteestä valmistettuna suorittamalla gradient- 13 75676 tierottelu täysverelle..Verihiutalekasaumat, lymfosyyttien ja monosyyttien ryhmät ovat samanlaiset kuin kuviossa 3A, kun taas granolosyyttiryhmä puuttuu, kuten oli odotettavissa. Kuvioiden 3A ja 3B perusteella on ilmeistä, että lymfosyytit voidaan helposti erottaa granulosyyteistä. Pieni lymfosyyttien ja monosyyttien peitto voi esiintyä ryhmissä 2 ja 3, mutta tätä tarkoitusta varten on osoittautunut riittäväksi olettaa, että ryhmä 2 sisältää vain lymfosyyttejä ja ryhmä 3 sisältää vain monosyyttejä.
Kuvioiden 3A ja 3B perusteella voidaan havaita, että eteenpäin suuntautuva valonsironta on erikoisen käyttökelpoinen erotettaessa leukosyyttejä verihiutaleista ja punaisten verisolujen jäännöksistä. Laitteen havaitsemisraja asetettiin tavallisesti siten, että näitä pieniä soluja ei havaittu, joten vain leukosyytit laskettiin. Suoritettaessa tämä pelkästään suorakulmaisen valonsironnan parametrien suhteen saavutetaan erinomainen leukosyyttityyppien erottelu. Histogrammit "A" ja "B" kuviossa 3C vastaavat kuvioiden 3A ja 3B syto-grammeja. Huiput 1-3 vastaavat vastaavasti lymfosyyttejä, monosyyttejä ja granulosyyttejä.
Jos immunofluoresoiva värjäysmenettely suoritetaan verestä erotetulle soluosuudelle, lopullinen soluesikäsittely antaa valon-sirontakasaumia, jotka ovat oleellisesti samoja kuin kuviossa 3A esitetyt. Koska lymfosyytit, monosyytit ja granulosyytit voidaan erottaa toisistaan suorakulmaisen valonsironnan avulla, sytogrammi vihreästä fluoresenssista suorakulmaisen sironnan suhteen osoittaa, mitkä näistä leukosyyttityypeistä ovat värittyneet. Kuviot 3D ja 3E esittävät tällaisia sytogrammeja verinäytteille, jotka on inkuboitu vertailu- (kuvio 3D)tai anti-T-solu- (kuvio 3E) vasta-aineella. Vertailu oli yläpuolinen neste saatuna vasta-ainetta muodostamattomasta kloonista, kun taas anti-T-solu-vasta-aine oli monokloonista vasta-ainetta. Vertailutapauksessa vain granulosyytit osoittivat merkittävää fluoresenssiä.
Anti-T-vasta-aineella värjätty veri osoitti kuitenkin selvän lymfosyyttiryhmän, jonka fluoresenssi oli verrattain voimakas. Tämä "T"-ryhmä sisälsi 77 % lymfosyyteistä (valonsironnan avulla määrättynä) ja sisälsi ilmeisesti ainoastaan T-lymfosyyttejä.
Kuvio 3F esittää vihreän fluoresenssin histogrammeja lymfo-syyttiryhmistä (ryhmä 2 kuviossa 3A). Kuvion 3F histogrammi A on näy- 14 75676 te vertailuvasta-aineen kanssa ja histogrammi B kuviossa 3F on näytteelle anti-T-vasta-aineen kanssa. T-solut muodostavat selvän huipun. Kaikista leukosyyteistä saadun vihreän fluoresenssin histo-grammissa on huippu, joka aiheutuu granulosyyteistä, mikä osittain peittää T-lymfosyyttihuipun.
Useilla erilaisilla lymfosyyttien alaluokille ominaisilla vasta-aineilla suoritetut kokeet ovat antaneet laadultaan edellä-esitettyjä vastaavia tuloksia käyttäen useiden ihmisten luovuttamaa verta. Veri tutkittuna anti-T-solulle ominaisilla vasta-aineilla ja jolloin tavallisesti noin 70-80 % soluista oli lymfosyyttiryh-mässä fluoresoi huomattavasti. Veri tutkittuna anti-B-soluille tyypillisillä vasta-aineilla ja jolloin 20 % soluista oli lymfosyytti-ryhmässä fluoresoi myös huomattavasti. Nämä tulokset ovat T-solujen ja B-solujen prosenttiosuuksien normaaleilla alueilla.

Claims (13)

1. Automaattinen menetelmä veren lymfosyyttien valitun alaluokan solujen tunnistamiseksi ja laskemiseksi, tunnet-t u siitä, että se käsittää a) näytteen muodostamisen tutkittavasta verestä; b) mainitun alaryhmän solujen selektiivisen merkitsemisen inkuboimalla näytettä vasta-aineella, joka reagoi selektiivisesti mainitun alaluokan solujen pinnalla olevien spesifisten antigeenisten determinanttien kanssa ja jolla vasta-aineella on etukäteen määrätty fluoresenssivaste annetulle optiselle ärsytykselle ; c) punaisten verisolujen liuottamisen näytteestä; d) näytteen johtamisen oleellisesti solu kerällään alueen lävitse, johon on kohdistettu mainittua annettua tyyppiä oleva fokusoitu optinen ärsyke, ja soluista siroavan ja emittoituvan valon ilmaisemisen; ja e) mainitun alaluokan solujen erottelemisen perustuen ainakin osaksi mainitun etukäteen määrätyn fluoresenssivasteen esiintymiseen ilmaistussa valossa.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että näytteen muodostamisvaihe a) käsittää antikoa-guloidun mutta muutoin oleellisesti käsittelemättömän täysveri-näytteen muodostamisen.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että näytteen muodostamisvaihe a) käsittää täysveri-näytteen ottamisen, näytteen linkoamisen etukäteen määrätyn ajan, nahanvärisen päällyskerroksen eristämisen näytteestä ja eristetyn päällyskerroksen käyttämisen näytteenä.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, joka on sovitettu T-tyyppisten lymfosyyttien määrättyjen alaluokkien tunnistamiseen ja solujen lukumäärän laskemiseen, tunnettu siitä, että merkitsemisvaihe b) suoritetaan inkuboimalla näytettä mainitun alaluokan vasta-aineen kanssa, joka fluoresoi tunnetulla voimakkuudella ja taajuusalueella, kun siihen kohdistetaan määrätyn aallonpituuden omaava optinen ärsytys. 16 75676
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että siirtovaiheeseen d) kuuluu argon-laserin fokusoiminen mainittuun alueeseen.
6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että siirtovaiheeseen d) kuuluu lisäksi: vastaavien vertailualueiden muodostaminen eteenpäin suuntautunutta valon sirontaa ja suorakulmaisesti sironnutta valoa varten; eteenpäin suuntautuneen ja suorassa kulmassa poikenneen sironnan pulssien havaitseminen kustakin solusta; ilmaistujen pulssien vertaaminen vastaaviin asianmukaisiin vertailuarvoihin; ja kummankin pulssin sattuessa mainitulle asianmukaiselle vertailualueelleen ilmaistaan etukäteen määrätyn ärsykkeen aiheuttama suorakulmainen fluoresenssi.
7. Patenttivaatimuksen 1 tai 4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että merkitsemisvaihe b) suoritetaan inkuboimalla näytettä vasta-aineen kanssa, johon on etukäteen yhdistetty fluoresoivaa väriainetta.
8. Patenttivaatimuksen 1 tai 4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että merkitsemisvaihe b) suoritetaan in-kubomalla ensin näytettä fluoresoimattomasti reagoivalla vasta-aineella ja sen jälkeen inkuboimalla näytettä vasta-ainerea-genssilla, jolla on mainittu etukäteen määrätty fluoresenssivas-te ja joka reagoi fluoresoimattomasti reagoivan vasta-aineen kanssa.
9. Laite määrättyjen T-lymfosyyttien tai samankaltaiset antigeeniset ominaispiirteet omaavien muuntyyppisten verisolujen tunnistamiseksi ja niiden lukumäärän laskemiseksi näytteestä, jota on inkuboitu fluoresoivasti reagoivan vasta-aineen kanssa, joka reagoi antigeenisen determinantin kanssa mainittujen määrättyjen T-lymfosyyttien tai muuntyyppisten verisolujen pinnalla; joka laite käsittää virtauskennon (106) virtaussytometriaa varten näytteen solujen siirtämiseksi nopeasti ja oleellisesti yksi kerrallaan annetun alueen lävitse; valolähteen (101,102), joka aiheuttaa fluoresenssin vasta-aineessa; välineet (103,104,105) valon 17 75676 kytkemiseksi ja fokusoimiseksi valolähteestä soluihin, jotka vir-taavat annetun alueen läpi; ensimmäiset valonilmaisuvälineet (109,110), jotka on järjestetty ilmaisemaan eteenpäin suuntautunut valonsironta, joka siroaa mainitusta alueesta solujen siirtyessä sen lävitse; kolmannet valonilmaisuvälineet (115,116), jotka on järjestetty ilmaisemaan mainituista soluista tulevat fluoresoivat valopulssit; tunnettu siitä, että siinä on a) toiset valonilmaisuvälineet (114,117), jotka on järjestetty akselille, joka on oleellisesti suorassa kulmassa solu-virtauksen akseliin nähden, ilmaisemaan valo, joka on sironnut oleellisesti suorassa kulmassa soluvirtauksen akseliin nähden mainitulta alueelta solujen siirtyessä sen lävitse; b) välineet (201,204) vastaavien vertailualueiden muodostamiseksi eteenpäin suuntautunutta valon sirontaa ja suorassa kulmassa sironnutta valoa varten; c) välineet (203,206) ensimmäisten ja toisten valoilmai-suvälineiden ilmaisemien valopulssien vertaamiseksi välineiden (201,204) muodostamiin vastaaviin vertailualueisiin; d) vertailualueet muodostaville välineille (201,204) herkät välineet (207,208) mahdollistamaan kolmansilta valonilmaisu-välineiltä tulevan ennaltamäärätyn vasteen ilmaisemisen silloin kun kolmansien valonilmaisuelimien ilmaisemat valopulssit osuvat vastaaville vertailualueille; ja e) välineet (212) mainituista soluista tulevien fluoresoivan valon pulssien ilmaisemiseksi, jotka pulssit ovat merkki mainittujen määrättyjen T-lymfosyyttien tai muuntyyppisten verisolujen esiintymisestä mainitulla alueella.
10. Patenttivaatimuksen 9 mukainen laite, tunnet-t u siitä, että siinä lisäksi on välineille (207,208). herkät välineet kompensoimaan kolmansien valonilmaisuvälineiden havaitsemat signaalit vastaten etukäteen valittua häiriöfluoresens-sivaikutusta, välineiden (212) vuorostaan seuratessa kompensoin-tivälineitä.
11. Patenttivaatimuksen 9 mukainen laite, tunnet-t u siitä, että välineet valon kytkemiseksi ja fokusoimiseksi on järjestetty siten, että valolähteestä kohdistuu valo oleelli- 18 75676 sesti kohtisuoraan soluvirtaukseen mainitulla alueella.
12. Patenttivaatimuksen 9 mukainen laite, tunnet-t u siitä, että valolähde muodostuu argonionilaserista ja kolmannet valonilmaisuvälineet käsittävät välineet vihreiden fluo-resenssipulssien ilmaisemiseksi.
13. Patenttivaatimuksen 12 mukainen laite, tunnet-t u siitä, että kolmannet valonilmaisuvälineet on sovitettu ilmaisemaan mainitut vihreät pulssit pitkin kohtisuoraa akselia. 75676 19
FI802224A 1979-07-13 1980-07-11 Foerfarande och anordning foer identifiering och raekning av bestaemda blodcellunderklasser. FI75676C (fi)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US5748279 1979-07-13
US06/057,482 US4284412A (en) 1979-07-13 1979-07-13 Method and apparatus for automated identification and enumeration of specified blood cell subclasses

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI802224A FI802224A (fi) 1981-01-14
FI75676B true FI75676B (fi) 1988-03-31
FI75676C FI75676C (fi) 1988-07-11

Family

ID=22010834

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI802224A FI75676C (fi) 1979-07-13 1980-07-11 Foerfarande och anordning foer identifiering och raekning av bestaemda blodcellunderklasser.

Country Status (11)

Country Link
US (1) US4284412A (fi)
EP (1) EP0022670B1 (fi)
JP (2) JPS5616872A (fi)
CA (1) CA1133274A (fi)
DE (1) DE3070102D1 (fi)
DK (1) DK153588C (fi)
EG (1) EG14015A (fi)
FI (1) FI75676C (fi)
IE (1) IE50065B1 (fi)
IL (1) IL60553A (fi)
NO (1) NO157314C (fi)

Families Citing this family (219)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4657760A (en) * 1979-03-20 1987-04-14 Ortho Pharmaceutical Corporation Methods and compositions using monoclonal antibody to human T cells
US4363799A (en) * 1979-03-20 1982-12-14 Ortho Pharmaceutical Corporation Monoclonal antibody to human T cells, and methods for preparing same
US4515894A (en) * 1979-03-20 1985-05-07 Ortho Pharmaceutical Corporation Hybrid cell line for producing monoclonal antibody to human T cells
US4680383A (en) * 1979-03-20 1987-07-14 Ortho Pharmaceutical Monoclonal antibody to human T cells
US4652447A (en) * 1979-04-26 1987-03-24 Ortho Pharmaceutical Corporation Methods and compositions using monoclonal antibody to human helper T cells
US4515893A (en) * 1979-04-26 1985-05-07 Ortho Pharmaceutical Corporation Hybrid cell line for producing complement-fixing monoclonal antibody to human T cells
US4654210A (en) * 1979-04-26 1987-03-31 Ortho Pharmaceutical Corporation Methods and compositions using complement fixing monoclonal antibody to human T cells
US4515895A (en) * 1979-04-26 1985-05-07 Ortho Pharmaceutical Corporation Hybrid cell line for producing monoclonal antibody to human helper T cells
US4361549A (en) * 1979-04-26 1982-11-30 Ortho Pharmaceutical Corporation Complement-fixing monoclonal antibody to human T cells, and methods of preparing same
US4658019A (en) * 1979-04-26 1987-04-14 Ortho Pharmaceutical Corporation Complement-fixing monoclonal antibody to human T cells
US4658020A (en) * 1979-04-26 1987-04-14 Ortho Pharmaceutical Corporation Monoclonal antibody to human helper T cells
US4364932A (en) * 1979-09-18 1982-12-21 Ortho Pharmaceutical Corporation Monoclonal antibody to human cytotoxic and suppressor T cells and methods of preparing same
US4675386A (en) * 1979-11-27 1987-06-23 Regents Of The University Of California Monoclonal antibody methods and compositions specific for single antigens in antigen aggregates
US4806629A (en) * 1979-12-04 1989-02-21 Ortho Pharmaceutical Corporation Monoclonal antibody to a human thymocyte antigen
US4364934A (en) * 1979-12-04 1982-12-21 Ortho Pharmaceutical Corporation Monoclonal antibody to a human early thymocyte antigen and methods for preparing same
US4828995A (en) * 1979-12-04 1989-05-09 Ortho Pharmaceutical Corporation Hybrid cell line for producing monoclonal antibody to a human thymocyte antigen, antibody, and methods
US4364935A (en) * 1979-12-04 1982-12-21 Ortho Pharmaceutical Corporation Monoclonal antibody to a human prothymocyte antigen and methods of preparing same
US4361550A (en) * 1979-12-04 1982-11-30 Ortho Pharmaceutical Corporation Complement-fixing monoclonal antibody to human suppressor T cells and methods of preparing same
NL8000173A (nl) * 1980-01-11 1981-08-03 Akzo Nv Toepassing van in water dispergeerbare, hydrofobe kleurstoffen als label in immunochemische testen.
US4510244A (en) * 1980-04-17 1985-04-09 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Jr. University Cell labeling with antigen-coupled microspheres
US4407964A (en) * 1980-10-07 1983-10-04 The Regents Of The University Of California Homogeneous fluoroimmunoassay involving sensing radiation for forward and back directions
US4474893A (en) * 1981-07-01 1984-10-02 The University of Texas System Cancer Center Recombinant monoclonal antibodies
CA1197186A (en) * 1982-03-19 1985-11-26 Robert A. Hoffman Method of enumerating serologically selected cell populations
US4482247A (en) * 1982-05-10 1984-11-13 United Technologies Corporation Forward scattering laser particulate sensor
US4511662A (en) * 1982-06-18 1985-04-16 Bio-Rad Laboratories, Inc. Simultaneous assay for T and B lymphocyte populations and subpopulations
US4548500A (en) * 1982-06-22 1985-10-22 Wyatt Philip J Process and apparatus for identifying or characterizing small particles
EP0126085A1 (en) * 1982-08-05 1984-11-28 Massachusetts Institute Of Technology Cell differentiation based upon particle uptake
US4529700A (en) * 1982-08-20 1985-07-16 University Of Miami Hybridoma cells secreting a monoclonal antibody specific for 5-bromo and 5-iodoeoxyuridine and reagents for measuring cellular proliferation
US4499052A (en) * 1982-08-30 1985-02-12 Becton, Dickinson And Company Apparatus for distinguishing multiple subpopulations of cells
US4717655A (en) * 1982-08-30 1988-01-05 Becton, Dickinson And Company Method and apparatus for distinguishing multiple subpopulations of cells
DE3238353A1 (de) * 1982-10-15 1984-04-19 Max Planck Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V., 3400 Göttingen Verfahren zur simultanen quantitativen bestimmung der blutzellen und reagenz hierfuer
US4532203A (en) * 1982-10-26 1985-07-30 Syva Company Fluorescent determination of microlymphocytotoxicity
JPS5946539A (ja) * 1983-01-31 1984-03-15 Jeol Ltd 血清情報判定方法
JPS59184862A (ja) * 1983-04-05 1984-10-20 ベクトン・ディッキンソン・アンド・カンパニ− 試料内細胞の複数副次集団を識別する方法と装置
JPS59184841A (ja) * 1983-04-05 1984-10-20 ベクトン・デイツキンソン・アンド・カンパニ− サンプル中の白血球のサブクラスを識別する方法および装置
US4607007A (en) * 1983-04-07 1986-08-19 Becton, Dickinson And Company Differentiation of natural killer cell subpopulations of cells
US4610878A (en) * 1983-06-16 1986-09-09 Medical University Of South Carolina Use of in vitro assay techniques to measure parameters related to clinical applications of transfer factor therapy
US4596035A (en) * 1983-06-27 1986-06-17 Ortho Diagnostic Systems Inc. Methods for enumerating 3-part white cell differential clusters
US4599307A (en) * 1983-07-18 1986-07-08 Becton, Dickinson And Company Method for elimination of selected cell populations in analytic cytology
US4743540A (en) * 1983-09-27 1988-05-10 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Method for diagnosis of subclassifications of common varied immunodeficiency disease group
US4599304A (en) * 1983-10-07 1986-07-08 Becton, Dickinson And Company Method for monitoring activated cell subpopulations
CA1254134A (en) * 1984-03-28 1989-05-16 Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York Specific binding flow cytometry method
US4665553A (en) * 1984-05-01 1987-05-12 Ortho Diagnostics Systems Inc. Methods and apparatus for analysis of particles and cells
US4654312A (en) * 1984-05-14 1987-03-31 Becton, Dickinson And Company Lysing agent for analysis of peripheral blood cells
US5188935A (en) * 1984-05-31 1993-02-23 Coulter Electronics, Inc. Reagent system and method for identification, enumeration and examination of classes and subclasses of blood leukocytes
US4661913A (en) * 1984-09-11 1987-04-28 Becton, Dickinson And Company Apparatus and method for the detection and classification of articles using flow cytometry techniques
JPS61132870A (ja) * 1984-12-03 1986-06-20 Olympus Optical Co Ltd 免疫学的分析方法
JPS61132868A (ja) * 1984-12-03 1986-06-20 Olympus Optical Co Ltd 免疫学的分析方法
JPH0665989B2 (ja) * 1984-12-03 1994-08-24 オリンパス光学工業株式会社 免疫学的分析方法
EP0245275A1 (en) * 1985-02-20 1987-11-19 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Fluorimetric arrangement
US4727020A (en) * 1985-02-25 1988-02-23 Becton, Dickinson And Company Method for analysis of subpopulations of blood cells
JPS61280565A (ja) * 1985-06-06 1986-12-11 Toa Medical Electronics Co Ltd フロ−サイトメトリ−用網状血球測定試薬
JPH06100599B2 (ja) * 1985-06-27 1994-12-12 東亜医用電子株式会社 体液成分の測定方法
ZA867698B (en) * 1985-10-11 1987-07-29 Smithkline Beckman Corp Methods and reagents for performing subset analysis
CA1279008C (en) * 1985-10-11 1991-01-15 Smith Kline & French Canada Ltd. Methods and reagents for performing subset analysis
GB8526355D0 (en) * 1985-10-25 1985-11-27 Alta Diagnostic Machines Ltd Determination of antibody content of blood
US5206143A (en) * 1985-11-01 1993-04-27 Smithkline Beecham Corporation Method and reagents for performing subset analysis using quantitative differences in fluorescence intensity
DE3541033A1 (de) * 1985-11-19 1987-05-21 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur quantifizierung von zellpopulationen bzw. subpopulationen sowie hierfuer geeignetes reagenz
US4701664A (en) * 1986-01-09 1987-10-20 Becton, Dickinson And Company Mercury arc lamp suitable for inclusion in a flow cytometry apparatus
US4710635A (en) * 1986-04-14 1987-12-01 Becton, Dickinson And Company Dual laser excitation from single laser source
NL8601000A (nl) * 1986-04-21 1987-11-16 Jan Greve T H Twente Afdeling Het gebruik van gepolariseerd licht in stromingscytometrie.
US5166052A (en) * 1986-05-27 1992-11-24 Boris Cercek Method for measuring polarization of bathochromically shifted fluorescence
US20020115122A1 (en) * 1998-09-10 2002-08-22 Anderson Jeffrey E. Method and apparatus for automated assessment of the immunoregulatory status of the mononuclear leukocyte immune system
CA1296622C (en) * 1986-08-12 1992-03-03 Jeffrey E. Anderson Method and apparatus for automated assessment of the immunoregulatory status of the mononuclear leukocyte immune system
JPH06100596B2 (ja) * 1986-09-10 1994-12-12 東亜医用電子株式会社 フロ−サイトメトリ−による白血球の分類方法
JPS6378047A (ja) * 1986-09-20 1988-04-08 Canon Inc 粒子解析装置
JPS6384554U (fi) * 1986-11-21 1988-06-02
JPS63196854A (ja) * 1987-02-10 1988-08-15 Toa Medical Electronics Co Ltd リンパ球亜群の測定方法およびその装置
CA1311404C (en) * 1987-03-13 1992-12-15 Kenneth H. Kortright Automated analyzer and method for screening cells or formed bodies for enumeration of populations expressing selected characteristics
US5223398A (en) * 1987-03-13 1993-06-29 Coulter Corporation Method for screening cells or formed bodies for enumeration of populations expressing selected characteristics
KR970007077B1 (ko) * 1987-03-13 1997-05-02 코울터 일렉트로닉스 인커퍼레이티드 광산란 기술을 이용한 다중-부분식별 분석 방법
US5041733A (en) * 1987-03-20 1991-08-20 Agency Of Industrial Science & Technology Method and apparatus for identifying chromosomes or cells
US5064616A (en) * 1987-11-30 1991-11-12 Becton Dickinson And Company Kit for analysis of subsets of subpopulations of leukocytes
US4987086A (en) * 1987-11-30 1991-01-22 Becton, Dickinson And Company Method for analysis of subpopulations of cells
US5030554A (en) * 1987-12-04 1991-07-09 Coulter Corporation Conservative whole blood sample preparation technique
US4895796A (en) * 1988-01-06 1990-01-23 Becton Dickinson And Company Identification of NK cells and cytotoxic T lymphocytes
US5123731A (en) * 1988-02-01 1992-06-23 Canon Kabushiki Kaisha Particle measuring device
JPH0731114B2 (ja) * 1988-04-22 1995-04-10 キヤノン株式会社 検体検査方法
US5385822A (en) * 1988-05-02 1995-01-31 Zynaxis, Inc. Methods for detection and quantification of cell subsets within subpopulations of a mixed cell population
US5256532A (en) * 1988-05-02 1993-10-26 Zynaxis Technologies, Inc. Methods, reagents and test kits for determination of subpopulations of biological entities
JP2674704B2 (ja) * 1988-06-07 1997-11-12 東亜医用電子株式会社 二次元分布分画方法
US5057413A (en) * 1988-06-13 1991-10-15 Becton, Dickinson And Company Method for discriminating between intact and damaged cells in a sample
US5047321A (en) * 1988-06-15 1991-09-10 Becton Dickinson & Co. Method for analysis of cellular components of a fluid
US5098849A (en) * 1988-07-13 1992-03-24 Becton Dickinson And Company Material and method to reduce non-specific binding of a labelled material
WO1990005044A1 (en) * 1988-11-02 1990-05-17 Extrude Hone Corporation Orbital and/or reciprocal machining with a viscous plastic medium
US5089384A (en) * 1988-11-04 1992-02-18 Amoco Corporation Method and apparatus for selective cell destruction using amplified immunofluorescence
US5040112A (en) * 1988-12-07 1991-08-13 Serono-Baker Diagnostics, Inc. Method of separating the three major types of blood cells from a white blood cell histogram
CA1339840C (en) * 1988-12-16 1998-04-28 Kenneth Kortright Method and apparatus for screening cells or formed bodies with populations expressing selected characteristics
CA2016699C (en) * 1989-05-15 2003-11-18 Paul N. Marshall Lytic agents and uses thereof
US5156951A (en) * 1989-07-13 1992-10-20 Becton Dickinson And Company Detecting immunological changes in HIV infected patient samples
US5107422A (en) * 1989-10-02 1992-04-21 Kamentsky Louis A Method and apparatus for measuring multiple optical properties of biological specimens
US5072382A (en) * 1989-10-02 1991-12-10 Kamentsky Louis A Methods and apparatus for measuring multiple optical properties of biological specimens
JP3049254B2 (ja) * 1990-02-08 2000-06-05 シスメックス株式会社 ２種類の光源を備えた光学式粒子分析装置
US5093866A (en) * 1990-02-09 1992-03-03 Hamilton Equine Associates Limited Fluorescence and motility characterization system for cells, bacteria, and particles in fluids
US5108904A (en) * 1990-03-26 1992-04-28 Alan Landay CD44 as a marker for HIV infection
US5224058A (en) * 1990-05-01 1993-06-29 Becton, Dickinson And Company Method for data transformation
US5087295A (en) * 1990-06-13 1992-02-11 Becton Dickinson And Company Cleaning cycle for flow cytometers
US5202230A (en) * 1990-09-07 1993-04-13 Kamentsky Louis A Methods of detecting cut cells in a tissue section
CA2070244A1 (en) * 1991-08-07 1993-02-08 Young Ran Kim Method and reagent composition for subtyping lymphocytes in peripheral blood
US5776709A (en) * 1991-08-28 1998-07-07 Becton Dickinson And Company Method for preparation and analysis of leukocytes in whole blood
CA2087086A1 (en) 1992-01-22 1993-07-23 Leon Wmm Terstappen Multidimensional cell differential analysis
JP3130628B2 (ja) * 1992-01-30 2001-01-31 シスメックス株式会社 粒子判定装置
ES2051651B1 (es) * 1992-12-10 1995-01-01 Univ Salamanca Procedimiento para la cuantificacion simultanea, en una sola medicion, de los principales tipos de linfocitos humanos y sus subpoblaciones.
US5547849A (en) * 1993-02-17 1996-08-20 Biometric Imaging, Inc. Apparatus and method for volumetric capillary cytometry
US5585246A (en) * 1993-02-17 1996-12-17 Biometric Imaging, Inc. Method for preparing a sample in a scan capillary for immunofluorescent interrogation
ES2284160T3 (es) * 1993-02-25 2007-11-01 Abbott Laboratories Sistema reactivo multiuso capaz de lisar rapidamente muestras de sangre completa.
FR2705360B1 (fr) * 1993-05-19 1995-08-18 Immunotech Sa Méthode et composition pour la lyse des érythrocytes, composition de sang, et méthode d'analyse leucocytaire.
FR2705359B1 (fr) * 1993-05-19 1995-08-18 Immunotech Sa Méthode de protection des cellules leucocytaires, composition protectrice, composition de sang protégée, et méthode d'analyse sanguine.
CA2125228A1 (en) * 1993-06-08 1994-12-09 Thomas J. Mercolino Three-color flow cytometry with automatic gating function
US5538613A (en) * 1993-10-26 1996-07-23 Genesys Technologies, Inc. Electrophoresis analyzer
US5631165A (en) * 1994-08-01 1997-05-20 Abbott Laboratories Method for performing automated hematology and cytometry analysis
US5656499A (en) * 1994-08-01 1997-08-12 Abbott Laboratories Method for performing automated hematology and cytometry analysis
US5891734A (en) * 1994-08-01 1999-04-06 Abbott Laboratories Method for performing automated analysis
US5879900A (en) * 1994-12-15 1999-03-09 Abbott Laboratories Method for simultaneous analysis of cell viability, nucleated red blood cells and white blood cell differentials
US5559037A (en) * 1994-12-15 1996-09-24 Abbott Laboratories Method for rapid and simultaneous analysis of nucleated red blood cells
US5675517A (en) * 1995-04-25 1997-10-07 Systemix Fluorescence spectral overlap compensation for high speed flow cytometry systems
US6043871A (en) * 1997-03-03 2000-03-28 Brigham Young University System and method for measuring blood platelet function
US6139800A (en) * 1997-06-23 2000-10-31 Luminex Corporation Interlaced lasers for multiple fluorescence measurement
US5874310A (en) * 1997-11-21 1999-02-23 Coulter International Corp. Method for differentiation of nucleated red blood cells
US5917584A (en) * 1997-11-21 1999-06-29 Coulter International Corp. Method for differentiation of nucleated red blood cells
WO1999044064A1 (en) * 1998-02-27 1999-09-02 Cli Oncology, Inc. Method and compositions for differential detection of primary tumor cells and metastatic cells
FR2778413B1 (fr) * 1998-05-07 2000-08-04 Immunotech Sa Nouveaux reactifs et methode de lyse des erythrocytes
AU3897999A (en) * 1998-05-14 1999-11-29 Luminex Corporation Multi-analyte diagnostic system and computer implemented process for same
JP4471494B2 (ja) * 1998-05-14 2010-06-02 ルミネックス コーポレイション ダイオードレーザをベースとした測定装置
US6178382B1 (en) * 1998-06-23 2001-01-23 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods for analysis of large sets of multiparameter data
WO2000011449A1 (en) 1998-08-21 2000-03-02 Union Biometrica, Inc. Instrument for selecting and depositing multicellular organisms and other large objects
US7116407B2 (en) * 1998-12-15 2006-10-03 Union Biometrica, Inc. System for axial pattern analysis of multicellular organisms
US6507400B1 (en) 1999-02-27 2003-01-14 Mwi, Inc. Optical system for multi-part differential particle discrimination and an apparatus using the same
FR2792725B1 (fr) * 1999-04-23 2001-12-07 Junior Instruments Procede et dispositif pour la detection de variations de proprietes optiques d'un echantillon liquide dans un processus d'analyse
US6618143B2 (en) * 2000-02-18 2003-09-09 Idexx Laboratories, Inc. High numerical aperture flow cytometer and method of using same
US6646742B1 (en) 2000-02-19 2003-11-11 Mwi, Inc. Optical device and method for multi-angle laser light scatter
US7420659B1 (en) 2000-06-02 2008-09-02 Honeywell Interantional Inc. Flow control system of a cartridge
US8329118B2 (en) 2004-09-02 2012-12-11 Honeywell International Inc. Method and apparatus for determining one or more operating parameters for a microfluidic circuit
US7978329B2 (en) * 2000-08-02 2011-07-12 Honeywell International Inc. Portable scattering and fluorescence cytometer
US7242474B2 (en) * 2004-07-27 2007-07-10 Cox James A Cytometer having fluid core stream position control
US7641856B2 (en) * 2004-05-14 2010-01-05 Honeywell International Inc. Portable sample analyzer with removable cartridge
US20060263888A1 (en) * 2000-06-02 2006-11-23 Honeywell International Inc. Differential white blood count on a disposable card
US7553453B2 (en) * 2000-06-02 2009-06-30 Honeywell International Inc. Assay implementation in a microfluidic format
US8071051B2 (en) * 2004-05-14 2011-12-06 Honeywell International Inc. Portable sample analyzer cartridge
US7471394B2 (en) * 2000-08-02 2008-12-30 Honeywell International Inc. Optical detection system with polarizing beamsplitter
US7630063B2 (en) * 2000-08-02 2009-12-08 Honeywell International Inc. Miniaturized cytometer for detecting multiple species in a sample
US6784981B1 (en) * 2000-06-02 2004-08-31 Idexx Laboratories, Inc. Flow cytometry-based hematology system
US7277166B2 (en) * 2000-08-02 2007-10-02 Honeywell International Inc. Cytometer analysis cartridge optical configuration
US7061595B2 (en) * 2000-08-02 2006-06-13 Honeywell International Inc. Miniaturized flow controller with closed loop regulation
US7049093B2 (en) * 2000-11-08 2006-05-23 Sysmex Corporation Method of classifying and counting nucleated bone marrow cells
FR2820828B1 (fr) * 2001-02-09 2003-05-02 Commissariat Energie Atomique Dispositif d'observation d'echantillons par fluorescence, notamment de facon sequentielle
WO2002072766A2 (en) 2001-03-09 2002-09-19 Board Of Regents, Universitx Of Texas System Induction of tumor immunity by variants of folate binding protein
DK1363126T3 (da) * 2002-05-14 2006-04-18 Univ Salamanca Flerdimensionel differentiel analyse af leukocyter
JP4570565B2 (ja) 2002-07-15 2010-10-27 ボード・オブ・リージエンツ，ザ・ユニバーシテイ・オブ・テキサス・システム ペリプラズム発現によるコンビナトリアルタンパク質ライブラリーのスクリーニング
JP4299597B2 (ja) * 2002-07-29 2009-07-22 シスメックス株式会社 血液分析装置及び方法
US6798508B2 (en) * 2002-08-23 2004-09-28 Coulter International Corp. Fiber optic apparatus for detecting light scatter to differentiate blood cells and the like
AU2003277517A1 (en) * 2002-10-25 2004-05-13 Arkray, Inc. Light source unit, light-receiving unit, and multichannel optical sensing apparatus using those
US7507548B2 (en) 2003-03-04 2009-03-24 University Of Salamanca Multidimensional detection of aberrant phenotypes in neoplastic cells to be used to monitor minimal disease levels using flow cytometry measurements
US7611849B2 (en) * 2003-05-27 2009-11-03 Point Care Technologies Enhanced cellular assay method for use in flow cytometry or similar instruments using optically resonant particles
CA2949524C (en) * 2003-07-18 2017-07-04 Bio-Rad Laboratories, Inc. System and method for multi-analyte detection
JP4371755B2 (ja) * 2003-09-26 2009-11-25 シスメックス株式会社 Ｂリンパ球の分類方法
JP4435581B2 (ja) * 2004-01-07 2010-03-17 シスメックス株式会社 免疫測定装置および方法
US7440101B2 (en) * 2004-01-23 2008-10-21 Beckman Coulter, Inc. System and method for multiple laser triggering
US7706590B2 (en) * 2004-01-28 2010-04-27 Compucyte Corporation Method and device for interrogating samples using laser scanning cytometry and other techniques
JP2006258776A (ja) * 2004-04-08 2006-09-28 Nippon Koden Corp 粒子分類装置
US7477363B2 (en) * 2004-04-08 2009-01-13 Nihon Kohden Corporation Flow cytometer
US7630075B2 (en) * 2004-09-27 2009-12-08 Honeywell International Inc. Circular polarization illumination based analyzer system
WO2006119106A1 (en) 2005-04-29 2006-11-09 Honeywell International Inc. Cytometer cell counting and size measurement method
US8361410B2 (en) * 2005-07-01 2013-01-29 Honeywell International Inc. Flow metered analyzer
EP1901847B1 (en) * 2005-07-01 2015-04-08 Honeywell International Inc. Microfluidic hematology analyzer
EP1902298B1 (en) * 2005-07-01 2012-01-18 Honeywell International Inc. A molded cartridge with 3-d hydrodynamic focusing
US7843563B2 (en) * 2005-08-16 2010-11-30 Honeywell International Inc. Light scattering and imaging optical system
US7806604B2 (en) * 2005-10-20 2010-10-05 Honeywell International Inc. Face detection and tracking in a wide field of view
EP1963817A2 (en) * 2005-12-22 2008-09-03 Honeywell International Inc. Portable sample analyzer cartridge
EP1963819A2 (en) * 2005-12-22 2008-09-03 Honeywell International, Inc. Portable sample analyzer system
WO2007075920A2 (en) * 2005-12-22 2007-07-05 Honeywell International Inc. Hematological analyzer system with removable cartridge
JP2008039539A (ja) * 2006-08-04 2008-02-21 Shimadzu Corp 光散乱検出装置
WO2008057537A2 (en) * 2006-11-08 2008-05-15 Maine Medical Center Research System and method for identifying erythropoietin-responsive genes
CA2671264C (en) 2006-11-30 2015-11-24 Research Development Foundation Improved immunoglobulin libraries
US7674622B2 (en) * 2006-12-22 2010-03-09 Abbott Laboratories, Inc. Method for determination of nucleated red blood cells and leukocytes in a whole blood sample in an automated hematology analyzer
US8629245B2 (en) 2007-05-01 2014-01-14 Research Development Foundation Immunoglobulin Fc libraries
JP5991796B2 (ja) 2007-06-29 2016-09-14 セルラー ダイナミクス インターナショナル， インコーポレイテッド 胚性幹細胞培養のための自動化された方法および装置
US8289514B2 (en) * 2008-03-05 2012-10-16 Aggredyne, Inc. Systems for measuring properties of a physiological fluid suspension
US20100034704A1 (en) * 2008-08-06 2010-02-11 Honeywell International Inc. Microfluidic cartridge channel with reduced bubble formation
US8037354B2 (en) 2008-09-18 2011-10-11 Honeywell International Inc. Apparatus and method for operating a computing platform without a battery pack
US10114012B2 (en) * 2008-10-31 2018-10-30 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and assays for detecting and quantifying pure subpopulations of white blood cells in immune system disorders
US7973923B2 (en) * 2009-04-27 2011-07-05 Endress+Hauser Conducta Inc. Multi-port inline flow cell for use in monitoring multiple parameters in a sanitary process line
EP2789689B1 (en) 2009-06-29 2016-04-27 Luminex Corporation Chimeric primers with hairpin conformations and methods of using same
CN102472738B (zh) 2009-07-03 2014-08-06 希森美康株式会社 血液分析装置及血液分析方法
WO2011068764A2 (en) * 2009-12-04 2011-06-09 Life Technologies Corporation Apparatuses, systems, methods, and computer readable media for acoustic flow cytometry
US8373140B2 (en) * 2010-03-31 2013-02-12 Ecolab Usa Inc. Fluorometric sensor
US20120065092A1 (en) 2010-09-14 2012-03-15 Wai Hobert Fusion analyte cytometric bead assay, and systems and kits for performing the same
WO2012059784A1 (en) 2010-11-03 2012-05-10 Reametrix Inc Method and device for fluorescent measurement of samples
JP6228014B2 (ja) 2011-02-07 2017-11-08 リサーチ ディベロップメント ファウンデーション 操作された免疫グロブリンＦｃポリペプチド
CN103430009A (zh) * 2011-04-26 2013-12-04 贝克顿·迪金森公司 用于流式细胞术的轴向光损失传感器系统
CA2837367A1 (en) 2011-04-29 2012-11-01 Baylor College Of Medicine Ureaplasma vaccine and antibody for prevention and treatment of human, animal and cell culture infection
US8605283B2 (en) 2011-05-05 2013-12-10 Emd Millipore Corporation Apparatus and method for increasing collection efficiency in capillary based flowcytometry
EP2761032B1 (en) 2011-09-29 2017-07-19 Luminex Corporation Hydrolysis probes
US8741233B2 (en) 2011-12-27 2014-06-03 Honeywell International Inc. Disposable cartridge for fluid analysis
US8741234B2 (en) 2011-12-27 2014-06-03 Honeywell International Inc. Disposable cartridge for fluid analysis
US8663583B2 (en) 2011-12-27 2014-03-04 Honeywell International Inc. Disposable cartridge for fluid analysis
US8741235B2 (en) 2011-12-27 2014-06-03 Honeywell International Inc. Two step sample loading of a fluid analysis cartridge
WO2013116698A2 (en) 2012-02-02 2013-08-08 Invenra, Inc. High throughput screen for biologically active polypeptides
US20140378327A1 (en) 2013-06-19 2014-12-25 Luminex Corporation Real-time multiplexed hydrolysis probe assay using spectrally identifiable microspheres
KR102398399B1 (ko) 2013-08-09 2022-05-16 루미넥스 코포레이션 핵산 에세이에서의 향상된 용융 식별 및 복합화를 위한 프로브
CN106715720B (zh) 2014-08-11 2021-08-13 卢米耐克斯公司 用于在核酸测定中改善解链分辨和多重性的探针
WO2016061199A2 (en) 2014-10-14 2016-04-21 Research Development Foundation Methods for generating engineered enzymes
CN107003225B (zh) 2014-12-04 2020-08-18 贝克顿·迪金森公司 流式细胞术细胞分选系统及其使用方法
WO2016130516A1 (en) 2015-02-09 2016-08-18 Research Development Foundation Engineered immunoglobulin fc polypeptides displaying improved complement activation
JP6661278B2 (ja) * 2015-03-27 2020-03-11 シスメックス株式会社 血液分析装置および血液分析方法
WO2017040380A2 (en) 2015-08-28 2017-03-09 Research Development Foundation Engineered antibody fc variants
CN109374511B (zh) * 2015-10-14 2021-07-23 北京信息科技大学 一种流式细胞仪无液路情况的光路调整装置
US10215683B2 (en) * 2015-11-02 2019-02-26 Chiranjit Deka Light scatter based apparatus and methods for hematology analysis using only three detectors
CN109196331A (zh) 2016-04-15 2019-01-11 贝克顿·迪金森公司 封闭式小滴分选器以及其使用方法
JP7191975B2 (ja) 2018-03-30 2022-12-19 アイデックス ラボラトリーズ インコーポレイテッド フローサイトメータ、そのレーザ光学アセンブリ、およびレーザ光学アセンブリの組立方法
JP7374124B2 (ja) 2018-04-27 2023-11-06 ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニー フローサイトメトリで選別された試料のための収集システムおよびそれを使用する方法
JP7366931B2 (ja) 2018-04-27 2023-10-23 ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニー 制御されたエアロゾル含有量を有する密閉された液滴ソータを有するフローサイトメータおよびそれを使用する方法
CA3110946A1 (en) 2018-08-31 2020-03-05 Invectys SA Method to assess car functionality
US11733170B2 (en) * 2019-08-07 2023-08-22 International Business Machines Corporation Optical sensor system for quantitative colorimetric liquid analysis
US11865270B2 (en) * 2020-01-16 2024-01-09 Starling Medical, Inc. Bodily fluid management system
US11376320B2 (en) 2020-03-05 2022-07-05 Iowa State University Research Foundation, Inc. Immunogenic and vaccine compositions against SARS-CoV-2
EP4425235A2 (en) 2020-06-17 2024-09-04 IDEXX Laboratories, Inc. Flow cytometer and laser optics assembly thereof
AU2021401984A1 (en) 2020-12-16 2023-07-06 Juno Therapeutics, Inc. Threshold gating for flow cytometry methods
WO2023239940A1 (en) 2022-06-10 2023-12-14 Research Development Foundation Engineered fcriib selective igg1 fc variants and uses thereof

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3497690A (en) * 1967-09-21 1970-02-24 Bausch & Lomb Method and apparatus for classifying biological cells by measuring the size and fluorescent response thereof
US3788744A (en) * 1970-01-14 1974-01-29 Bio Physics Systems Inc Method and apparatus for photoanalysis
US3684377A (en) * 1970-07-13 1972-08-15 Bio Physics Systems Inc Method for analysis of blood by optical analysis of living cells
US3896307A (en) * 1970-08-24 1975-07-22 Wheeler International Inc Method for automatic differential leukocyte count
US3661460A (en) * 1970-08-28 1972-05-09 Technicon Instr Method and apparatus for optical analysis of the contents of a sheathed stream
US3740143A (en) * 1970-10-30 1973-06-19 Technicon Instr Automatic apparatus for determining the percentage population of particulates in a medium
US3679312A (en) * 1971-06-16 1972-07-25 Technicon Instr Method and apparatus for measuring bioluminescence or chemiluminescence for quantitative analysis of samples
US4125828A (en) * 1972-08-04 1978-11-14 Med-El Inc. Method and apparatus for automated classification and analysis of cells
US3781112A (en) * 1972-12-15 1973-12-25 Technicon Instr Method and apparatus for analysis of leukocytes using light scattered by each leukocyte at absorbing and non-absorbing wavelength
US3918812A (en) * 1973-05-07 1975-11-11 Us Energy Diagnoses of disease states by fluorescent measurements utilizing scanning laser beams
US3916205A (en) * 1973-05-31 1975-10-28 Block Engineering Differential counting of leukocytes and other cells
US3824402A (en) * 1973-06-04 1974-07-16 Energy Commission Dual parameter flow photometric apparatus and method
US3883247A (en) * 1973-10-30 1975-05-13 Bio Physics Systems Inc Method for fluorescence analysis of white blood cells
US3905767A (en) * 1974-01-30 1975-09-16 Miles Lab Process for qualitative analysis or quantitation of antigens or antibodies
DE2409273A1 (de) * 1974-02-27 1975-09-04 Behringwerke Ag Verfahren und vorrichtung zum messen von antigen-antikoerper-reaktionen
US3996345A (en) * 1974-08-12 1976-12-07 Syva Company Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays
DE2523209A1 (de) * 1975-05-26 1976-12-16 Noeller Hans Guenter Dr Med Elektrooptische, substanzschonende erfassung von nicht zellgebundenen immunostoffen
US4036946A (en) * 1975-10-20 1977-07-19 Marcos Kleinerman Immunofluorometric method for measuring minute quantities of antigens, antibodies and other substances
US4070113A (en) * 1976-05-05 1978-01-24 California Institute Of Technology Coherent optics blood cell classification system
US4101276A (en) * 1976-06-02 1978-07-18 Beckman Instruments, Inc. Method and apparatus for signalling the introduction of chemical reaction components into a chemical analyzing system
NL180704C (nl) * 1976-06-14 Coulter Electronics Inrichting voor gelijktijdige optische meting van kenmerken van zich in een suspensie bevindende deeltjes.
US4072421A (en) * 1976-08-30 1978-02-07 Technicon Instruments Corporation Method and apparatus for optical discrimination of particles
US4100416A (en) * 1977-03-02 1978-07-11 Block Engineering, Inc. Serum fluorescence suppression
US4099917A (en) * 1977-07-21 1978-07-11 Technicon Instruments Corporation Process for preparing a cell suspension from blood for discrimination of white blood cells and platelets from other blood particles

Also Published As

Publication number Publication date
JPH0593724A (ja) 1993-04-16
IL60553A (en) 1984-12-31
JPS5616872A (en) 1981-02-18
CA1133274A (en) 1982-10-12
EP0022670A2 (en) 1981-01-21
EG14015A (en) 1982-09-30
DK153588C (da) 1988-12-12
IE50065B1 (en) 1986-02-05
EP0022670B1 (en) 1985-02-06
JPH0379666B2 (fi) 1991-12-19
FI802224A (fi) 1981-01-14
DK276280A (da) 1981-01-14
NO802096L (no) 1981-01-14
JP2572908B2 (ja) 1997-01-16
US4284412A (en) 1981-08-18
IL60553A0 (en) 1980-09-16
EP0022670A3 (en) 1981-05-20
NO157314C (no) 1988-02-24
FI75676C (fi) 1988-07-11
IE801446L (en) 1981-01-13
DK153588B (da) 1988-07-25
NO157314B (no) 1987-11-16
DE3070102D1 (en) 1985-03-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI75676B (fi) Foerfarande och anordning foer identifiering och raekning av bestaemda blodcellunderklasser.
JP2620810B2 (ja) サンプル中の損傷細胞及びインタクト細胞を識別するための方法
US4654312A (en) Lysing agent for analysis of peripheral blood cells
US4987086A (en) Method for analysis of subpopulations of cells
EP0132064B1 (en) Method for elimination of interference of selected cell populations in analytic cytology
US4902613A (en) Lysing agent for analysis of peripheral blood cells
US5879900A (en) Method for simultaneous analysis of cell viability, nucleated red blood cells and white blood cell differentials
EP0193356B1 (en) Method for analysis of subpopulations of blood cells
US5776709A (en) Method for preparation and analysis of leukocytes in whole blood
JPH07101218B2 (ja) 絶対カウントのための一段試験
Thompson et al. The optimal application of forward and ninety‐degree light scatter in flow cytometry for the gating of mononuclear cells
US6900023B1 (en) Method for classifying and counting leukocytes
JPH06100596B2 (ja) フロ−サイトメトリ−による白血球の分類方法
EP0559208B1 (en) Method for preparation and analysis of leukocytes in whole blood utilizing flow cytometry
JP4279900B2 (ja) 細胞生存率、有核赤血球、および白血球分類の同時分析方法
US5064616A (en) Kit for analysis of subsets of subpopulations of leukocytes
Neumüller et al. Demonstration by flow cytometry of the numbers of residual white blood cells and platelets in filtered red blood cell concentrates and plasma preparations
Ronot et al. Assessment of cell viability in mammalian cell lines
WO1997021994A9 (en) Method for simultaneous analysis of cell viability, nucleated red blood cells and white blood cell differential
MUIRHEAD XAVIER RONOT AND SYLVAIN PAILLASSON
Stewart Multiparameter flow cytometry for clinical applications
JP2002207036A (ja) 白血球腫瘍細胞検出方法
Ijagbone et al. Comparative application of antigen detection Enzyme-linked immunosorbent assay and buffy coat parasitological technique for diagnosis of bovine trypanosomosis in Nigeria
EP0690927A4 (en) DETECTING NON-LIVING CELLS BY FLUORESCENCE

Legal Events

Date Code Title Description
MA Patent expired

Owner name: ORTHO DIAGNOSTICS, INC.