FI64797C - Foerfarande foer framstaellning av nya blodtrycknedsaettande peptider - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av nya blodtrycknedsaettande peptider Download PDFInfo
- Publication number
- FI64797C FI64797C FI782216A FI782216A FI64797C FI 64797 C FI64797 C FI 64797C FI 782216 A FI782216 A FI 782216A FI 782216 A FI782216 A FI 782216A FI 64797 C FI64797 C FI 64797C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- group
- solution
- ile
- pro
- val
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 30
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 23
- -1 L- leucyl Chemical group 0.000 claims description 20
- 125000000350 glycoloyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])O[H] 0.000 claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 12
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 9
- 108010009962 valyltyrosine Proteins 0.000 claims description 7
- 125000003412 L-alanyl group Chemical group [H]N([H])[C@@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 claims description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 6
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 5
- 230000003276 anti-hypertensive effect Effects 0.000 claims description 4
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 claims description 4
- 125000002061 L-isoleucyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 3
- JTXJZBMXQMTSQN-UHFFFAOYSA-N amino hydrogen carbonate Chemical class NOC(O)=O JTXJZBMXQMTSQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 3
- 125000006502 nitrobenzyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 3
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 claims description 3
- 125000003440 L-leucyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 125000000852 azido group Chemical group *N=[N+]=[N-] 0.000 claims description 2
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 claims description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 2
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- RYXPMWYHEBGTRV-UHFFFAOYSA-N Omeprazole sodium Chemical compound [Na+].N=1C2=CC(OC)=CC=C2[N-]C=1S(=O)CC1=NC=C(C)C(OC)=C1C RYXPMWYHEBGTRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N azide group Chemical group [N-]=[N+]=[N-] IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 141
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 118
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 98
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 81
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 79
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 66
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 66
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 61
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 51
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 48
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 46
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 38
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 29
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 229950006323 angiotensin ii Drugs 0.000 description 21
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 21
- CZGUSIXMZVURDU-JZXHSEFVSA-N Ile(5)-angiotensin II Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C([O-])=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=[NH2+])NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC([O-])=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 CZGUSIXMZVURDU-JZXHSEFVSA-N 0.000 description 18
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 15
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 15
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 14
- 102400000345 Angiotensin-2 Human genes 0.000 description 13
- 101800000733 Angiotensin-2 Proteins 0.000 description 13
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 12
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 10
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 10
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 9
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 8
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 8
- AYMLQYFMYHISQO-QMMMGPOBSA-N (2s)-3-(1h-imidazol-3-ium-5-yl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 AYMLQYFMYHISQO-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 7
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 7
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 7
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 7
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 7
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 6
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 6
- CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N 0.000 description 5
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N hexane Substances CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- NYIODHFKZFKMSU-UHFFFAOYSA-N n,n-bis(methylamino)ethanamine Chemical compound CCN(NC)NC NYIODHFKZFKMSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- LHMQOAPYTSAHML-LBPRGKRZSA-N (2,3,4,5,6-pentafluorophenyl) (2s)-3-methyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]butanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)OC1=C(F)C(F)=C(F)C(F)=C1F LHMQOAPYTSAHML-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 4
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 4
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VEYJKJORLPYVLO-RYUDHWBXSA-N Val-Tyr Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 VEYJKJORLPYVLO-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 4
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 4
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 4
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 3
- 102100028255 Renin Human genes 0.000 description 3
- 108090000783 Renin Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 3
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 3
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 3
- QFYBYZLHPIALCZ-ZETCQYMHSA-N eglu Chemical compound CC[C@@](N)(C(O)=O)CCC(O)=O QFYBYZLHPIALCZ-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 3
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 125000006503 p-nitrobenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1[N+]([O-])=O)C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 2
- 239000012258 stirred mixture Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- LDWBQGACJJOIKA-RHEFHGCGSA-N (2s)-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s,3r)-2-[[(2s,3r)-2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-hydroxypropanoic acid Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LDWBQGACJJOIKA-RHEFHGCGSA-N 0.000 description 1
- NQRKYASMKDDGHT-UHFFFAOYSA-N (aminooxy)acetic acid Chemical compound NOCC(O)=O NQRKYASMKDDGHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HMUNWXXNJPVALC-UHFFFAOYSA-N 1-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)C(CN1CC2=C(CC1)NN=N2)=O HMUNWXXNJPVALC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YBOOTEPRBQZLHP-UHFFFAOYSA-N 1-hydrazinylethanamine Chemical compound CC(N)NN YBOOTEPRBQZLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5-hydroxy-7-methoxychromen-4-one Chemical compound C=1C(OC)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=C(OC)C(OC)=C1 HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YJLUBHOZZTYQIP-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-1,3,4-oxadiazol-2-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1=NN=C(O1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 YJLUBHOZZTYQIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JHUUPUMBZGWODW-UHFFFAOYSA-N 3,6-dihydro-1,2-dioxine Chemical compound C1OOCC=C1 JHUUPUMBZGWODW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CONKBQPVFMXDOV-QHCPKHFHSA-N 6-[(5S)-5-[[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]methyl]-2-oxo-1,3-oxazolidin-3-yl]-3H-1,3-benzoxazol-2-one Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)C[C@H]1CN(C(O1)=O)C1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1 CONKBQPVFMXDOV-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 1
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940123413 Angiotensin II antagonist Drugs 0.000 description 1
- 102400000344 Angiotensin-1 Human genes 0.000 description 1
- 101800000734 Angiotensin-1 Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 238000012935 Averaging Methods 0.000 description 1
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N Butanol Natural products CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N Butyl acetate Natural products CCCCOC(C)=O DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MVORZMQFXBLMHM-QWRGUYRKSA-N Gly-His-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CN=CN1 MVORZMQFXBLMHM-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- SOWBFZRMHSNYGE-UHFFFAOYSA-N Monoamide-Oxalic acid Natural products NC(=O)C(O)=O SOWBFZRMHSNYGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000008950 Spondyloenchondrodysplasia Diseases 0.000 description 1
- 208000026246 Spondyloenchondrodysplasia with immune dysregulation Diseases 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- ORWYRWWVDCYOMK-HBZPZAIKSA-N angiotensin I Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 ORWYRWWVDCYOMK-HBZPZAIKSA-N 0.000 description 1
- 239000002333 angiotensin II receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004872 arterial blood pressure Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical compound OC(O)=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 1
- 238000009903 catalytic hydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005660 chlorination reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N guanidine group Chemical group NC(=N)N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 125000000538 pentafluorophenyl group Chemical group FC1=C(F)C(F)=C(*)C(F)=C1F 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000001501 propionyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- 206010038464 renal hypertension Diseases 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008279 sol Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/14—Angiotensins: Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/12—Antihypertensives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
} Γοΐ kuulutusjOlkaisu sAnc\n jgfä [B] (11) UTLAGG N I N (SSSKRI FT 64797 ]RpJö C (45) F-tcnUi 10 01 1931 ^ ^ (51) K*.«k.3/im.ci.3 C 07 C Λ 03/52 SUOM I —FI N LAN D (21) P*tenttlh*k«mui —p*t«m»n*öknlnj 782216 (22) H»keml*pUvt — AntOknlnfidig 11.07.78 W (23) AlkupSIvi —Glltlghetsdaf 11.07.78 (41) Tullut julkiseksi — Bllvlt offentllg 19.01.79
Patentti- ja rekisterihallit» N*ht*vtk.lp«on j. kuulaiksi™ pvm— ’’o.
Patent- OCh registerstyrelsen Artsöksn utlsgd och utl.skrtften publtcsrsd ju.uy.uj (32)(33)(31) Pyydetty etuoikeus —Begird prlorltet l8.07 · 77
Unkari-Ungern(HU) RI-6^1 (71) Richter Gedeon Vegyeszeti Gyär R.T., 21, Gyömröi ut., Budapest X,
Unkari-Ungern(HU) (72) Lajos Kisfaludy, Budapest, György Nyeki, Budapest, Läszlo Szirmai, Budapest, Egon Karpati, Budapest,
Katalin Gidai, Budapest, Laszlo Szporny, Budapest,
Unkari-Ungern(HU) (7^) Oy Kolster Ab (5M Menetelmä uusien verenpainetta aientavien peptidien valmistamiseksi -Förfarande för framstalining av nya hlodtrycknedsättande peptider
Keksinnön kohteena on menetelmä kaavan I mukaisten verenpainetta alentavien peptidien ja niiden happoadditiosuolojen valmistamiseksi, X-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-V (I) jossa X on hydroksiasetyyli tai L- 04-hydroksipropionyyli, ja Y on L-leusyyli, L-isoleusyyli, L-alanyyli tai 0-metyyli-treonyyli .
Kaavan I mukaiset yhdisteet ovat angiotensiini II-analogeja. Angiotensiini II on oktapeptidi, jolla on hyperteosiivinen vaikutus. Elimistössä valmistuu angiotensiini I globu1iinista, jota maksa tuottaa reniiniksi nimitetyn entsyymin avulla, jota erittyy munuaisista. Elimistössä tämä yhdiste muuttuu angiotensiini II:ksi.
z 64797
Ensimmäinen angiotensiini II-analogi kuvattiin ensimmäisen kerran vuonna 1970- Havaittiin, että tämä yhdiste toimi angiotensiinin II spesifisenä kilpailevana inhibiittorina j_n vivo- sekä myös in vitro-testeissa (G.R. Marshall et ai: Proc. Natl . Acad. Sei. USA 67_, 1624 ( 19 7 0 ) ; P.A. Khairallah et ai.: 0. Med. Chem. _13 1B1 (1970)). Tämä havainto sai aikaan laajalle levinnyttä mielenkiintoa ja herätti lukuisat laboratoriot syntetisoimaan ja tarkkailemaan uusia angiotensiini II-analogeja, joilla on antagonistisia ominaisuuksia ja joita siten voidaan käyttää diagnostisoimaan tai jopa hoitamaan hypertensioita, jotka ovat reniinistä riippuvaisia. Oo tutkimustyön alkuvaiheissa kävi ilmi, että analogit, joissa 8-Phe-ryhmä oli substituoitu aminohapolla, jossa oli alifaattinen sivuketju, olivat kaikkein lupaavimpia yhdisteitä tätä tarkoitusta varten. Tämä muutos angiotensiini II:n molekyylin rakenteessa tarkoittaa nimittäin käytännöllisesti agonis-tisen vaikutuksen katoamista ja voimakkaan antagonistisen aktiivisuuden ilmestymistä. (D. Gagnon et ai.: Br. 3. Pharmacol., £3, 409 (1971); D.T. Palst et ai.: Circ. Res., 29_, 664 (1971)). Antagonisitista vaikutusta voidaan huomattavasti lisätä, kun θ-asemassa suoritetun modifioinnin lisäksi 1-Asp-ryhmä korvataan Sar-ryhmällä (D.T. Pals et ai.:
1 R
Circ., 2_9, 673 ( 1971)). Tällä tavalla valmistettu (Sar , Ala )-angio-tensiini II on jo laskettu liikkeelle. Tämän yhdisteen edullisten \ra\-kutusten katsotaan aiheutuvan entsymaattisen hajoamisen ijn vivo vähentymisestä ja sen suuresta affiniteetista reseptoriasemiin.
Olettamus, että angiotensiini II:n antagonistisille analogeille löytyy käyttöä reniinistä riippuvaisten hypertensioiden diangosoinnis-sa ja, joissakin tapauksissa, hoidossa (D. Ganten ja F. Gross: Med. Klin. 7_1, 2043 ( 1976); 3.L. Marx: Spencd jjT4, 821 (1976); P. Needleman ja G.R. Marshal: Fed. Proc. 3jj 2486 ( 1976)), on todistettu oikeaksi kliinisin testein (H.R. Brunner et ai.: Lancet, 1045 (1973); A.J.M. Conker et ai.: Lancet, 1535 (1974); T. Ogihara et ai.: Lancet, 219 (1974); 3.H. Laragh et ai.: New Engl. 3. Med., 292, 695 (1975); W.A. Pettinger et ai.: New Engl. 3. Med., 292 1214 (1975); Streeten et ai.: Circ. Res. 3_6, täyd. 1 ., 125 (1975); H.R. Brunner ja H. Gavras: Schweitz, Med. Wschr. 106, 1791 (1976)).
) 3 64797 Näihin asti valmistettujen angiotensiini II-analogien rakenteen ja biologisen aktiivisuuden vertailu on antanut jonkin verran hyvin tärkeää tietoa agonistis-antagonistisen aktiivisuuden tulkitsemiseksi (M.C. Khosla et ai.: "Handbook of Experimental Pharmacology" nide 37, I.H. Page ja F.H. Bumpus eds. 1974; G.R. Marshal: Fed. Proc., 35, 2494 (1976]).
Keskeisenä nykyisessä tutkimustyössä on uusien antagonistien valmistus, joilla ei ole ei-toivottuja sivuvaikutuksia ja joilla on pitempi biologinen puoliintumisaika CM.C. Khosla et ai.: J. Med. Chem., 19, 244 (1976); sama., 20, 253 (1977)).
Nyt on keksitty, että kun 8-fenyylialaniini-osa angiotensiini II:n molekyylissä korvataan a 1 ifaattise11a oc-amino-karboksyylihappo-radikaalilla ja samanaikaisesti liitetään alifaattinen oi-hydroksi-karboksyylihapporadikaali uuden angiotensiini II:n 1-asemaan» saadaan kilpailevia inhibiittoreita, jotka huomattavasti vähentävät angiotensiini II:lla jjn v_iv£-testeissä aiheutettua hypertensiota vieläpä ihonalaisesti annettuna.
Keksinnön mukaisesti valmistetaan yleisen kaavan I mukaisia yhdisteitä siten, että saatetaan reaktiivinen heptapeptidijohdannai-nen, jolla on yleinen kaava II
H-Arg(A)-Val-Tyr(B)-Ile-His(E)-Pro-Y-OG f II) jossa A on nitro- tai tosyyliryhmä, B on bentsyyli- tai substiuoitu bensyyliryhmä, E on dinitrofenyyliryhmä, ja G on nitrobensyy1iryhmä tai alempi alkoksiryhmä, ja Y tarkoittaa samaa kuin edellä,
reagoimaan reaktiivisen amino-oksikarboksyylihappo-johdannaisen kanssa, jolla on yleinen kaava III
W-X’-M (III) jossa X’ on amino-oksiasetyyli tai 'X-amino-oksipropionyyliryhmä, 4 64797 W on bentsyylioksikarbonyy1i- tai tert.butoksi-karbonyyiiryh- ΓΠ3 , j 3 m on hydroksyy 1 iryhrnä tai pivaloyy1ioksi-, n i trof eno ks i - , ?,'3,h-trikloorifenoksi-, pentakloorifenoksi-, pentafluorifenoksi-, N-sukkiini-imidioksi- tai atsidoryhmä,
lohkaistaan suojaryhmä E pois ja sen jälkeen muut sivuketjujen suoja-ryhmät ja päätesuojaryhmät saaduista yhdisteistä, joilla on yleinen kaava IV
W-X’-Arg(A)-Val-Tyr(Bl-Ile-His(El-Pro-Y-OG (IV) jossa B, W, X', Y, A, E ja G tarkoittavat samaa kuin edellä, ja haluttaessa muutetaan saatu yleisen kaavan I mukainen yhdiste happoaddi-t iosuoIäkseen.
E:llä merkitty suojaryhmä lohkaistaan edullisesti pois 2-mer-kaptoetanolin avulla, kun taas jäljelle jääneet sivuketju- ja pääte-suojaryhmät poistetaan katalyyttisesti hydraamalla. Tämä tarkoittaa myös, että kaikki sivuketju- ja päätesuojaryhmät - lukuun ottamatta suojaryhmää E - voidaan poistaa yhdessä ainoassa reaktiovaiheessa. Seurauksena aminoryhmän poistamisesta N-pääte--amino-oksihaposta ammoniakin muodossa saadaan oi.-hydroksi-happo. oi-hydroksihapporyhmän poistaminen tällä tavalla selostetaan tässä ensimmäistä kertaa kirjallisuudessa.
Keksinnön mukaisessa menetelmässä lähtöaineina käytettyjä yleisen kaavan II reaktiivisia heptapeptidi-johdannaisia voidaan valmistaa millä tahansa peptidikemiassa tunnetulla menetelmällä. Eräs sopiva menetelmä on kuvattu esimerkiksi unkarilaisessa patentissa n:o 16Θ 431. Tämän menetelmän mukaisesti sivuketjujen toiminnalliset ryhmät suojataan ryhmillä, jotka ovat pysyviä happolyysin olosuhteissa, joka hap-polyysi suoritetaan poistettaessa suojaryhmä liittämisen, jälkeen.
5 64797 Tämän keksinnön mukaisen menetelmän erään edullisen suoritusmuodon mukaisesti käytetään C-pääte-aminohapon tilapäistä suojaamista varten p-nitrobentsyy1iryhmää (NB) , arginiinin guanidiiniryhmä suojataan nitroryhmä1lä, kun taas tyrosiinin hydroksyyliryhmä suolataan ben-tsyyliryhmällä (Bzl) ja histidiinin imidatsolirenkaan suojaryhmä on dinitrafenyy1iryhmä (Dnp). Kaikki nämä suojaryhmät ovat pysyviä lievästi happamissa olosuhteissa, minkä seurauksena N-pääte-t-butoksikar-bonyyliryhmä (Boc) voidaan poistaa ilman minkäänlaista vaaraa, että nämä ryhmät lohkeaisivat. Tämä suojaryhmien erikoisyhdistelmä tekee mahdolliseksi poistaa dinitrofenyy1iryhmä ensisijassa ja sen jälkeen valmistaa yleisen kaavan I yhdisteitä yhdessä ainoassa reaktiovaihees-sa katalyyttisesti hydraamalla.
Yleisen kaavan I yhdiste voidaan puhdistaa sinänsä tunnetulla tavalla, edullisesti karboksimetyyliselluloosa-ioninvaihtokromatögrasiaa käyttäen. Tämän menetelmän tuloksena yhdisteet saadaan, yleensä lyofiloituina jauheina, jotka voidaan helposti muuttaa eri suoloiksi tai komplekseiksi.
Yleisen kaavan I yhdisteiden antagonistinen aktiivisuus testattiin uroSkissoilla. Verenpaine mitattiin kaulavaltimosta. Testit suoritettiin antamalla Hypertensin CCIBA)-ruis ke reiden ulkosivulle no-peudella 0,5 Aig/kg/min. Kun verenpaineen lisäys oli vakiintunut, tes- / tiyhdisteiden ja Saralasiinin (l-fieGly- S-L-Val-B-L-Alalangiotensiini II l· vesipitoiset, fysiologiset tai kantajan sisältävät liuokset annettijrT yhtenä ainoana annoksena, laskimon sisäisesti tai ihonalaisesti j-6' verenpaineen alenema mitattiin.
Taulukossa 1 on valtimoverenpaineen alenema esitetty testiyh-disteiden vaikutuksen alaisena laskimonsisäisesti annettuna. Vertailun vuoksi käytetään Saralasiinia. Taulukossa i esitetyt arvot saatiin laskemalla kuuden kokeen tulosten keskiarvo. Virhemarginaalit osoittavat pääarvon hajonnan.
6 64797
Taulukko 1
Eri angiotensiini II-analogien, jotka on annettu laskimonsisäisesti, vaikutus verenpaineeseen angiotensiinin II laskimonsisäi-sen ruiskeen vaikutuksen alaisena
Analogi Verenpaineen alenema (mm/
Hg) sen jälkeen, kun on annettu 10 jug/kg 20 jug/kg laskimonsisäiset annokset (hydroksiasetyyli'*', Leuö)-AngII -31-4,7 -42-2,8 (hydroksiasetyyli·*·, Ile®)-AngII -24-1,7 -30-2,3 (hydroksiasetyyli^, Thr(Me)®)-Angll -33-5,3 -38-4,1 ( L-ol -hydroksipropionyy 1 i ^ , Leu®)-AngII -32-3,7 -40-2,7 ( L- - hydroksipropionyy 1 i , Ile®)-AngII -31-3,3 -38-4,1
Sara lasiini -41-2,5 - '' /
Edellisessä taulukossa esitetyistä tiedoista voidaan selvästi nähdä, että jokaisella angiotensiini II-analogi1la, joka'on substituoitu ai ifaattisesta hydroksi-karboksyylihaposta johdetulla radikaalilla 1-asemassa, on merkittävä verenpainetta alentava vaikutus, Aktiivisuuden määrä on verrannollinen käytettyyn annokseen.
Testejä suoritettiin myös ihonalaisesti antaen. On huomattava, että tämä antotie angiotensiini II:lle tai sen analogeille ei ole aikaisemmin esitetty kirjallisuudessa. Ihonalaista antamista varten lisättiin testattavaa yhdistettä sisältävään fysiologiseen suolaliuokseen karboksimetyyliselluloosaa ja vastaavasti gelatiinia. Viiden erillisen testin keskiarvoa vastaavat tulokset on esitetty souraavassa taulukossa 2. Virherajat on esitetty pääarvon yhteydessä.
64797
Taulukko 2
Ihonalaisesti annettujen eri angiotensiini II-analogien vaikutus verenpaineeseen laskimonsisäisesti ruiskeena annetun angiotensiini II: n vaikutuksen alaisena
Verenpaineen alenema CmmHg)
Analogit Annos Liuotin 15 30 60 120 /ug/kg minuutin kuluttua (L-c* -hydroksi- 200 fysiologi- -28-3,1 -38-2,4 -25-1,5 -5-1,8 propionyyli, nen suola-
Leu^)-Ang II liuos CMC
(L- **·-hydroksi- propionyyli,
Ileö)-Ang II 200 gelatiini -28*10 -28*7,0 -25*6,0 -5*7,3^ CMC = karboksimetyyliselluloosa
Edellä annettujen arvojen mukaan tämän keksinnön mukaisesti valmistetut ihonalaisesti annetut uudet yhdisteet alentavat tahallisesti aiheutettua korkeaa verenpainetta merkittävällä tavalla, vieläpä 60 minuuttia antamisen jälkeen.
Keksinnön mukaisia peptidejä sekä myös niiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja käytetään farmakologisiin tarkoituksiin tavanomaisten farmaseuttisten yhdistelmien muodossa. Nämä farmaseuttiset yhdistelmät sisältävät keksinnön mukaisia yhdisteitä sekoitettuina orgaanisten tai epäorgaanisten kantajien kanssa, jotka sopivat annettaviksi suolensisäisesti tai ruoansulatuskanavan ulkopuoiisesti. Siten farmaseuttiset yhdistelmät voidaan muovata jähmeiksi lyofilaa-teiksi, joissa erilaisia inerttejä yhdisteitä, jotka eivät reagoi peptidien kanssa, esim. hiilivetyjä, voidaan käyttää kantajina. Kun farmaseuttiset yhdistelmät muodostetaan laimeiksi tai väkeviksi suspensioiksi tai emulsioiksi, ne sisältävät myös erilaisia säilöntä-ja stabiloimisaineita.
6 4 7 97
Farmaseuttisia yhdistelmiä, jotka sisältävät keksinnön yhdisteitä, voidaan käyttää renaalisten hypertensioiden differenti-oituun havaitsemiseen sekä myös lisääntyneen ranaalisen verenpaineen aiheuttamien oireiden hoitoon.
Enemmän keksinnön yksityiskohtia valaistaan seuraavin ei-ra-joittavin esimerkein. Esimerkeissä käytetyt lyhennykset vastaavat kirjallisuudessa yleensä käytettyjä lyhennyksiä (J. Biol. Chem.
247, 977 (1972)). ^-aminohappoja merkitään tavulla ”0", joka on symbolin edessä, joka vastaa kyseessä olevaa aminohappoa.
Miinpä esimerkiksi OGly tarkoittaa amino-oksietikkahappoaj OAla tarkoittaa Ot-ami no - o ksi prop ion i happoa jne. Muita lyhennyksiä ovat esimerkiksi: PFP = pentafluorifenyy1i ja Z = karbometoksi.
Keksinnön mukaisen menetelmän suorituksessa haihduttaminen suoritetaan aina Buchi Rotavapor -laitteistossa. Sulamispisteet määritettiin tri Tottolin laitteessa (valmistanut Buchi). Ohutlevykromatografia suoritettiin "Kieselgel G nach Stahl" -pii-happogeelilevyi1lä (E. Merck, Darmstadt). Kroma gramm t kehitettiin seuraavilla liuotinseoksilla: 1. etyyliasetaatti : (pyridiini/etikkahappo/vesi-seos, 2U:6:11 ) = 9 5 : 5 2. etyyliasetaatti : (pyridiini/etikkahappo/vesi-seos, 20:6:11) = 90 : 10, 3. etyyliasetaatti : (pyridiini/etikkahappo/vesi-seos, 20:6:11) = 00 : 20, 4. Etyyliasetaatti: (pyridiini/etikkahappo/vesi-seos, 20:6:11) = 70 : 30, 5. ri-butanol i/et i kkahappo/ves i - seos, 4:1:5, 6. n-butanoli/etikkahappo/pyridiini/vesi-seos, 30:6:20:24 ja 7. n-butanoli/etyy1 iasetaatti/etikkahappo/vesi-seos, 1 :1:1 :1.
Kun esimerkeissä esitetään R^-arvoja, viitataan edellä esitettyjen liuotinjärjestelmien järjestysnumeroihin.
Paperi-sähköforeesi suoritettiin LMIM-, keskijännitteisessä vaakasuorassa laitteistossa MN 214 -paperilla pH --- 1,9 puskuri-liuoksessa glutamiinihapon ohella. Jännite: 450 V, aika: kolme tun-t i a .
Dhutlevykrornatogrammat kehitettiin osittain ninhydriini- 9 64797 liuoksella, osittain tavanomaisella kloorausmenetelmällä, joka suoritettiin o-toluidiini-KJ-liuoksella.
Lopputuote puhdistettiin seuraavasti: 0,5 g vapaata peptidiä liuotettiin sen jälkeen 4 ml:aan 0,01 n ammoniumasetaattipuskuria. Saatu liuos kaadettiin 0,5 l:n karboksimetyy1iseiluloosalla (CMC 52) täytettyyn kolonniin. Kolon-ni oli sitä ennen saatettu tasapainotilaan edellä kuvatulla puskuriliuoksella. 1,5 1 0,01 Π ammoniumasetaatti1iuosta ja 1,5 1 0,4 M ammoniumasetaatti1iuosta sekoitettiin gradienttisekoittimella ja suoritettiin grad ien tt i e luo i nt i . Virtausnopeus säädettiin 25 ml: ks.i/ tunti ja koottiin 10 ml:n jakeita. Kolonnista poistuva eluaattiy' rekisteröitiin jatkuvasti LKB Uvicord-II -laitteella ja saadkäy- s rän perusteella pääjakeet lyofiloitiin Leybold-Hereus -lyofiloin-tilaitteessa. Tällä tavalla valmistettu lyofilaatti kromatografoltiin uudelleen samalla gradienttieluo imismenetelmä1lä ja eluaatti lyofiloitiin uudelleen.
Esimerkki 1 [Hydroksiasetyyli , Leu )-angiotensiini II Vaihe 1
Boc-ArgCN02)-Val-TyrCBzl)-Ile-His(Dnp)-Pro-Leu-0NB
Liuokseen, jossa on 4,2 g (12 mmoolia) Leu-ONB · HBr 5I4 ml:ssa kloroformia lisätään 1,68 ml trietyyliamidia ja 3,81 g (10 mmoolia) Boc-Pro-OPFP. Reaktioseosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 20 minuuttia, ravistellaan veden kanssa ja sen jälkeen 10-%:isen vesipitoisen sitruunahappoliuoksen kanssa ja kuivataan.
• 1 ' K lorof ormi 1 iuos haihdutetaan. Saatu suojattu dipeptidi (R^. = 0-> ö) liuotetaan 20 mlraan kloorivetyhapon 8 M liuosta dioksaanissa. 10 minuutin kuluttua liuos laimennetaan kuumalla eetterillä ja haih- Λ dutetaan. Tällä tavalla valmistettu d ipept idi - kloori hydraatt i (R^, = 0,56) liuotetaan 50 ml:aan kloroformia, liuoksen pH-arvo säädetään 8:aan trietyyliamiinilla ja lisätään 8,8 g (15 mmoolia) Boc-His(Dnp)-OPFP. Liuosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa yksi tunti huolehtien siitä, että liuoksen pH pidetään arvossa 8. Sen jälkeen lisätään liuokseen 1,65 ml Ν,ΙΜ-dimetyyli-aminoetyyliami inia aktiivisen esterin ylimäärän poistamiseksi ja 10 minuutin kuluttua reaktio-seosta ravistellaan sitruunahapon 10-%:isella vesipitoisella liuoksella, kloorivetyhapon 1 N vesipitoisella liuoksella ja natrium- 10 64797 vetykarbonaatin 5-%:isella vesipitoisella liuoksella. Kuivaamisen jälkeen liuos haihdutetaan. Jäljelle jäävä suojattu tripeptidi 1 (R_P = 0,65) liuotetaan 25 mitään kloorivetyhapon Θ M liuosta di-oksaanissa ja 15 minuutin kuluttua saatu tripeptidi (R^ = 0,47) saostetaan lisäämällä kuivaa eetteriä. Sakka suodatetaan erilleen ja liuotetaan välittömästi seokseen, jossa on 50 ml kloroformia ja 20 ml dimetyyliformamidia. pH säädetään arvoon 8 trietyyliamiinil-la ja lisätään 6,0 g (15 mmoolia) Boc-Ile-OPFP. 30 minuuttia myöhemmin reaktioseos haihdutetaan kuiviin ja jäännös liuotetaan 100 ml:aan etyyliasetaattia. Etyyliasetaattiliuos uutetaan vesipitoisella sitruunahappoliuoksella, 1 N vesipitoisella kloorivetyhappo-liuoksella ja lopuksi vedellä. Kuivaamisen jälkeen etyyliasetaatti poistetaan haihduttamalla ja jäännöstä käsitellään eetterin ja ni-heksaanin 1 :9-seoksella. Saatu suojattu tripeptidi (R^ = 0,64) eristetään ja liuotetaan 25 ml:aan kloorivetyhapon 8 M liuosta di-oksaanissa. 15 minuutin kuluttua tetrapeptidi (R^. = 0,40) saoste taan kuivalla eetterillä ja suodatetaan sen jälkeen erilleen. Saatu tetrapeptidi-kloorihydraatti liuotetaan seokseen, jossa on 50 ml kloroformia ja 30 ml dimetyyliformamidia, ja liuoksen pH säädetään arvoon B trietyy1iamiini1la. Lisätään 6,0 g (11,5 mmoolia) Boc-Tyr(Bz1)-0PFP. Liuos haihdutetaan 15 minuutin kuluttua, jäännös liuotetaan etyyliasetaattiin ja lisätään 0,66 ml N,N-dimetyyli-aminoetyy1iamiinia, 10 minuutin seisomisen jälkeen etyyliasetaat-tiliuosta ravistellaan sitruunahapon 10-%:isella vesipitoisella liuoksella, kloorivetyhapon 1 N vesipitoisella liuoksella ja lopuk- - si vedellä, kuivataan ja haihdutetaan. Hai hdutusjäännöstä käsitel- 2 lään kuivalla eetterillä ja suojattu pentapeptidi (R_p = 0,8) eristetään suodattamalla. Tuote liuotetaan 25 mitään kloorivetyhapon 8 M -liuosta dioksaanissa ja 15 minuutin kuluttua saatu pentapepti- 4 di (R_p = 0,8) saostetaan kuivalla eetterillä, suodatetaan ja pestään eetterillä. Sakka liuotetaan sitten välittömästi 50 mitään dimetyyliformamidia, pH säädetään arvoon 8 tri etyy1iamiini11 a ja lisätään 4,2 g (11 mmoolia) Boc-Val-OPFP. Yhden tunnin sekoittamisen jälkeen huoneen lämpötilassa liuos haihdutetaan, jäännös liuotetaan kloroformiin ja ravistellaan sitruunahapon 10-%tisen vesipitoisen liuoksen kanssa, sitten kloorivetyhapon 1 N vesipitoisen liuoksen kanssa ja lopuksi veden kanssa. Liuos kuivataan, haihdute- 11 64797 taan ja jäännöstä käsitellään eetterillä. Saatu suojattu heksapep-2 tidi (R_p = 0,82) eristetään suodattamalla. Tuote liuotetaan 25 ml:aan kloorivetyhapon 8 N liuosta dioksaanissa ja 15 minuutin ku -luttua saostetaan heksapeptidi (R_p = 0,55) kuivalla eetterillä, suodatetaan ja pestään eetterillä. Heksapeptidi liuotetaan välittömästi 50 ml:aan dimetyy1 iformamidia, pH säädetään arvoon 8 trietyy-liamiinilla ja lisätään 4,8 g (10 mmoolia) Boc-Arg(NC^)-OPFP. 30 minuutin kuluttua liuotin korvataan kloroformilla ja liuosta ravistellaan kloorivetyhapon 1 N vesipitoisen liuoksen kanssa ja sen jälkeen veden kanssa. Liuos kuivataan, haihdutetaan ja jäännös-ta käsitellään etanolilla. Suojattu heptapeptidi (R_p = 0,8) eristetään antamaan 7,6 g (53 % laskettuna lähtö-Boc-Pro-OPFP:ille). Sulamispiste: 192-195°C.
Vaihe 2
Z-0Gly-Arg(N02)_Val-Tyr(Bzl)-Ile-His(Dnp)-Pro-Leu-0NB
1,8 g (1,25 mmoolia) Boc-Arg(NO^)-Vai-Tyr(Bzl)-Ile-His(Dnp)-Pro-Leu-ONB liuotetaan 10 mitään kloorivetyhapon 8 M liuosta dioksaanissa. 15 minuutin kuluttua vapaa hehtapeptidikloorihydraat- ti saostetaan kuivalla eetterillä, suodatetaan ja pestään kuival- 3 la eetterillä (R_p = 0,36). Tuote liuotetaan välittömästi 20 mitään dimetyyliformamidia, pH asetetaan arvoon 8 trietyyliamiinilla ja lisätään 0,9 g (2,3 mmoolia) Z-OGly-OPFP. 15 minuutin kuluttua liuotin korvataan kloroformilla, liuosta ravistellaan kloorivetyhapon 1 IM vesipitoisen liuoksen kanssa ja veden kanssa. Kuivaamisen ja haihduttamisen jälkeen jäännöstä käsitellään etanolin ja eetterin 2:8-seoksella, tuote eristetään suodattamalla. Saadaan 1,6 g (85 %) ot si kkoy hd istettä. Sulamispiste: 1 65-174°C (R^.Z = 0,80).
Vaihe 3
Suojaryhmien poistaminen 1,6 g (1,0 mmoolia) Z-GGly-Arg(Νθ£)~Val-Tyr(Bzl)-Ile-His-(Dbp)-Pro-Leu-0NB liuotetaan 5 ml:aan dimetyyliformamidia ja lisätään 3,5 ml 2-merkaptoetanolia. Liuosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa yksi tunti. Sen jälkeen lisätään seokseen kuivaa eetteriä ja saostunut aine suodatetaan erilleen, pestään kahdella 10 ml:n erällä eetteriä ja puhdistetaan saostamalla metanoli/eetteristä. Saadaan 1,3 g (95 %) Z-OGly-Arg(N G ^)-Vai-Tyr(Bzl)-1le-Hi s-Pro-Leu-ONB, RfZ = 0,2.
12 64797
Edellä saatu peptidi liuotetaan 30 ml:aan metanolin, etikka-hapon ja veden 5:1 :1-seosta. Lisätään 0,5 g 10;%:ista pa 11adium/hiili -katalyyttiä ja johdetaan vetyä voimakkaan sekoituksen alaisen liuoksen läpi 20 tuntia. Reaktion kulkua tarkkaillaan käyttäen ohutlevykromatografiaa. Kun reaktio on päättynyt, suodatetaan katalyytti erilleen, pestään 20 ml:lla metanolin, etikkahapon ja veden 5:1:1-seosta ja liuos haihdutetaan kuiviin. Jäännös liuotetaan et ano 1i/vesi-seokseen ja haihdutetaan useampia kertoja etikkahapon paistamiseksi. Peptidi eristetään sitten käsittelemällä kuivalla etanolilla ja suodatetaan erilleen. Saadaan 0,fl g [67 %) hydroksi-1 8 asetyyli ,Leu /-angiotensiini II. Puhdistaminen suoritetaan, kuten edellä esitettiin. = 0,41; R_pR = 0,59; R^7 = 0,60; /pH = 1,9/ = 0,98.
Aminohappoanalyysi: Pro: 1,0/1/; Vai: 1,01/1/; Ile: 1,02/1/; Arg: 1,01/1/; His: 1,0/1/; Leu : 1,02/1/; Tyr: 0,73/1/.
Esimerkki 2 1—1 ' ~ ^ 0
( L-(X-hydroksipropionyy 1 i ,Leu )-angiotensiini II
Vaihe 1
Z-0Ala-Arg(N02)"Val-Tyr(Bzl)-Ile-His(Dnp)-Pro-Leu-0NB
1.8 g (1,25 mmoolia) esimerkin 1 vaiheessa 1 saatua Boc-Arg(NO^)“Val-Tyr(Bzl)-Ile-His(Dnp)-Pro-Leu-ONB liuotetaan 8 ml:aan kloorivetyhapon 8 M liuosta dioksaanissa. Vapaa heptapeptidi säestetään liuoksesta kuivalla eetterillä, suodatetaan sen jälkeen eroon 3 ja pestään kuivalla eetterillä (R-t, - 0,36). Yhdiste liuotetaan vä littömästi 20 ml:aan dimetyyliformamidia, pH säädetään arvoon Θ tri-etyyliamiinilla ja lisätään 0,93 g (2,3 mmoolia) Z · OAla-LlPFP. 15 minuutin kuluttua liuotin korvataan kloroformilla ja saatua liuosta ravistellaan kloorivetyhapon 1 N vesipitoisen liuoksen kanssa ja sen jälkeen veden kanssa. Uute kuivataan ja haihdutetaan. Jäännöstä käsitellään etanolin ja eetterin 4:1-seoksella, saadaan 1,75 g (93 %) otsikkoyhdistettä. Sulamispiste: 164-172°C; = 0,85.
Vaihe 2
Suojaryhmien poistaminen 1 ,6 g Z - Π A1 a 1 - A rg f N O 2 ) - Va 1 - T y r ( B z 1 ) ~11 e - H i s ( O n p ) - P ro - L o u -HUB liuotetaan 5 ml : aan dimetyyliformamidia, lisättään 3,5 ml 2-mei— kaptoetanolia ja seosta sekoitetaan yksi tunti huoneen lämpötilas- 13 64797 sa. Sen jälkeen lisätään kuivaa eetteriä ja saatu sakka suodatetaan erilleen ja puhdistetaan metanoli/eetteri-saostuksella. Saadaan 1,3 g (92 %) Z-OAla-Arg(NO-)-Val-Tyr(Bzl)-Ile-His-Pro-Leu-ONB; 2 .... ^ R^ = 0,27. Tama peptidi liuotetaan metanol in, etikkahapon ja veden 5:1 :1 - seokseen, lisätään 0,5 g 10-%:ista pa 11 adium/hii1i-katalyyttiä ja vetykaasua johdetaan voimakkaan sekoituksenalaisen liuoksen läpi 20 tuntia. Reaktion kulkua tarkkaillaan ohutlevykro-matografiaa käyttäen. Kun reaktio on loppuun edennyt, katalyytti suodatetaan erilleen, pestään ja liuos haihdutetaan kuiviin. Jäännöksen liuottaminen etano 1i/vesi-seokseen ja haihduttaminen toistetaan useita kertoja. Jäännöstä käsitellään sitten kuivalla eta-nolilla, saadaan (L- - hydro ks ipropyy 1 i -Lou ) - ang iotens i i ni II. Saanto: ϋ,B5 g (70 %). Saatu tuote puhdistetaan, kuten edellä kuvat tiin. Rf5 = 0,36; Rf6 = 0,57; Rf7 = 0,60; EGlu/pH = 1,0/ = 0,97.
Aminohappoanalyysi: Pro: 0,98/1/; Vai: 1,0/1/; Ile: 1,1/1/; Arg: 1,0/1/; His: 0,98/1/; Leu: 0,98; Tyr: 0,56/1/.
Esimerkki 3 1 8 (Hydroksiasetyyli ,Ile )-angiotensiini II Vaihe 1
Bac-Arg(N02)-Val-Tyr(Bzl)-Ile-His(Dnp)-Pro-Ile-GNB
/
Liuokseen, jossa on 4,15 g (15 mmoolia) Ile-GNB*HC1 5P ml:ssa kloroformia, lisätään 2,1 ml trietyy1iamiinia ja sen jälkeen lisätään 3,81 g (10 mmoolia) Boc-Pro-OPFP. Reaktioseosta sekoitetaan 20 minuuttia huoneen lämpötilassa. Sitä ravistellaan sitten veden kanssa ja sitruunahapon 10-%:isen vesipitoisen liuoksen kanssa, kuivataan ja haihdutetaan. Saatu suojattu dipeptidi (R^. = 0,9) liuotetaan 20 ml:aan kloorivetyhapon 8 M liuosta dioksaanissa ja 10 minuutin kuluttua reaktioseos laimennetaan kuivalla eetterillä . 4 ja haihdutetaan. Vapaa dipeptidi-hydrokloridi (R^ = 0,44) liuote taan 30 ml:aan kloroformia, pH säädetään arvoon 8 trietyyliamiinil-la ja lisätään 8,8 g (15 mmoolia) Boc-His(Dnp)-OPFP. Yhden tunnin kuluttua lisätään 1,65 ml N,N-dimetyyli-aminoetyy1iamiinia reaktio-seokseen, jota ravistellaan 15 minuutin kuluttua sitruunahapon 10-%:isella vesipitoisella liuoksella, kloorivetyhapon 1 N vesipitoisen liuoksen kanssa ja lopuksi veden kanssa.' Uute kuivataan ja hai hdutetaan. Suojattu tripeptidi (R_p = 0,50) liuotetaan 20 ml.-aan kloorivetyhapon 8 M liuosta dioksaanissa, eristämättä. 15 minuutin 4 14 64797 kuluttua tripeptidi (R^ = 0,25) saostetaan kuivalla eetterillä, suodatetaan ja pestään kuivalla eetterillä. Se liuotetaan sitten välittömästi seokseen, jossa on 50 ml kloroformia ja 20 ml dimetyy-1 iformamidia. Saadun liuoksen pH säädetään arvoon 8 trietyy1iamii-nilla ja lisätään 6,0 g (15 mmoolia) Boc-Ile-OPFP. Seoksen annetaan seistä 30 minuuttia ja liuotin korvataan etyyliasetaatilla ja liuosta ravistellaan sitruunahapon 10-%:isen vesipitoisen liuoksen kanssa, kloorivetyhapon 1 N vesipitoisen liuoksen kanssa ja lopuksi veden kanssa. Saatu uute kuivataan, haihdutetaan ja jäljelle jäänyt suojattu tetrapeptidi eristetään uuttamalla n_-heksaanin ja 7 eetterin 9:1 -seoksel la. Suojattu tetrapeptidi (R^, = 0,65) liuote taan 25 ml:aan kloorivetyhapon 8 M liuosta dioksaanissa. 30 minuutin jälkeen saatu tetrapeptidi (R^ = 0,41) saostetaan lisäämällä kuivaa eetteriä, suodatetaan erilleen ja pestään. Se liuotetaan välittömästi 70 ml:aan dimetyyliformamidin ja kloroformin 1:1-seok-sesta. Sen jälkeen liuoksen pH säädetään arvoon 8 ja lisätään 6,0 g (11,5 mmoolia) Boc-Tyr(Bzl)-0PFP. 15 minuutin kuluttua liuotin korvataan etyyliasetaatilla ja lisätään 0,66 ml N,N-dimetyyli-ami-noetyyliamiinia. 15 minuutin kuluttua sitä ravistellaan sitruuna-hapon 10-%:isen vesipitoisen liuoksen, kloorivetyhapon 1 N vesipitoisen liuoksen ja lopuksi veden kanssa. Kuivaamisen ja haihdutta- 2 misen jälkeen saatu suojattu pentapeptidi (Rf = 0,59) eristetään lisäämällä kuivaa eetteriä. Se liuotetaan sitten 20 ml:aan kloori- vetyhappoa dioksaanissa. 15 minuutin kuluttua pentapeptidi-hydro-4 kloridi (R^ = 0,4) saostetaan lisäämällä kuivaa eetteriä, suodatetaan ja pestään 20 mlrlla kuivaa eetteriä. Se liuotetaan välit-.
s tömästi 50 ml:aan dimetyy1 iformamidia, pH säädetään arvoon 8 tpi" etyyliamiinilla ja lisätään 4,62 g (12 mmoolia) Boc-Vai-OPFP. Yhden tunnin jälkeen liuotin korvataan kloroformilla ja liuosta ravistellaan sitruunahapon 10-%:isen vesipitoisen liuoksen, kloorivetyhapon 1 N vesipitoisen liuoksen ja lopuksi veden kanssa. Saatu uute kuivataan, haihdutetaan ja haihdutusjäännöstä käsitellään 2 kuivalla eetterillä suojatun heksapeptidin (R^, = 0,50) saostami- seksi. Se liuotetaan sitten 20 ml:aan kloorivetyhapon 8 M liuosta dioksaanissa ja 15 minuutin kuluttua saadusta liuoksesta saoste- 4 taan heksapeptidi (R^. = 0,47) lisäämällä kuivaa eetteriä. Heksa- peptidi suodatetaan erilleen ja pestään 20 ml:lla kuivaa eetteriä.
Se liuotetaan välittömästi 50 ml:aan dimetyyliformamidia, pH sää- 15 64797 detään arvoon 8 trietyyliamiinilla ja lisätään 5,38 g (12 mmoolia) Boc-Arg(NO2)-OPFP. Seoksen annetaan seistä 30 minuuttia. Sen jälkeen liuotin korvataan kloroformilla ja liuosta ravistellaan kloorivety hapon 1 N vesipitoisen liuoksen ja veden kanssa. Uute kuivataan, haihdutetaan ja suojattu heptapeptidi eristetään etanolin avulla. Saadaan 9,7 g (68 % laskettuna lähtö-Boc-Pro-DPFP:sta) ot-si kkoyhdistettä . = 0,67.
Vaihe 2 Z-OGly-ArgCNC^J-Val-ArgCNC^-Val-TyrtBzlJ-Ile-HistDnp)-
Pro-Ile-ONB
1,6 g (1,1 mmoolia) Boc-Arg ( N02) -Val-Tyr(Bzl) -1le-His (Dnp) -Pro-Ile-ONB liuotetaan 8 ml:aan kloorivetyhapon 8 M liuosta dioksaa-nissa. Liuoksen annetaan seistä 15 minuuttia, sitten saatu heptapeptidi - hydrok lori di (R_p4 = 0,45) seostetaan kuivalla eetterillä, suodatetaan ja pestään 20 ml:lla kuivaa eetteriä. Se liuotetaan välittömästi 10 ml:aan dimetyy1 iformamidia, pH säädetään arvoon 8 trietyyliamiinilla ja lisätään 0,6 g (1,5 mmoolia) Z-0Gly-0PFP.
30 minuutin kuluttua liuotin korvataan kloroformilla ja liuosta ravistellaan kloorivetyhapon 1 N vesipitoisen liuoksen ja veden kanssa. Uut kuivataan ja haihdutetaan ja suojattu peptidi eristetään kuivalla eetterillä. Saadaan 1,45 g (85 %) otsikkoyhdisteitä. Sulamispiste 151-158°C; = 0,68.
Vaihe 3
Suojaryhmien poistaminen 1,45 g (0,94 mmoolia) Z-OGly-Arg(NO2)-Val-Tyr(Bzl)-Ile-His (Dnp)-Pro-Ile-ONB liuotetaan 5 ml:aan dimetyyliformamidia. Lisätään 3,5 ml 2-merkaptoetanolia, sekoitetaan liuosta yksi tunti ja säestetään Z-0Gly-Arg(NO2)-Vai-Tyr(Bz1)-Ile-His-Pro-Ile-ONB kuivalla eetterillä. Saostamisen jälkeen metanoli/eetteri1lä saadaan 7 1,05 g (82 %) peptidiä (R_p = 0,10). Se liuotetaan 30 ml:aan meta-nolin etikkahapon ja veden 5:1:1-seosta, lisätään 0,5 g 10-%:ista pa 1ladium/hii1i-katalyy11iä ja johdetaan vetykaasua voimakkaan sekoituksenalaisen reaktioseoksen läpi 21 tuntia. Reaktion edistymistä tarkkaillaan käyttäen ohutlevykromatografiaa. Katalyytti suodatetaan erilleen, liuos haihdutetaan kuiviin ja saatu vapaa peptidi erotetaan kuivalla etanolilla. Saadaan 0,48 g (64,5 %) (hydr-1 8 oksiasetyyli 1,Ilea)-angiotensiini II. Tuote puhdistetaan sinänsä tunnetulla tavalla. R^ = 0,29; = 0,57; = 0,58; E^^CpH = 1,9) = 1,03.
1F5 6 4 7 97
Aminohappoanalyysi : Pro: 0,99/1/; Val: 1,19/1/; He: 2,06/ 1/; Tyr: 0,74/1/; His: 0,98/1/; Arg: 0,96.
Esimerkki 4 1 8 (l_-°i-hydroksipropionyyli ,Ile )-angiotensiini II Vaihe 1
Z-OAla-Arg(N02)-Val-Tyr(Bzl)-Ile-His(Dnp)-Pro-Ile-ONB
1,6 g (1,1 mmoolia) Boc-Arg(N02)~Va1-Tyr(Bz1]-Ile-His( Dap)-Pro-Ile-ONB liuotetaan 8 ml:aan kloorivetyhapon 8 N liuosta diok-saanissa. Liuoksen annetaan seistä 15 minuuttia ja heptapeptidi saostetaan lisäämällä kuivaa eetteriä (R^ = 9,45), suodatetaan ja pestään. Se liuotetaan välittömästi 10 mitään dimetyy1iformamidia, pH säädetään arvoon 8 trietyyliamiinilla ja lisätään 0,61 g (1,5 mmoolia) Z-OAla-OPFP. 30 minuutin kuluttua liuotin korvataan kloroformilla ja liuosta ravistellaan kloorivetyhapon 1 N vesipitoisen liuoksen kanssa ja veden kanssa. Kuivaamisen ja haihduttamisen jälkeen saatu suojattu peptidi (R^7 = 0,63) eristetään eetterillä,,-' Saadaan 1,4 g (83 %) otsikkoyhdistettä. Sulamispiste: 164-1 68°0'.
Vaihe 2
Suojaryhmien poistaminen 1,4 g (0,9 mmoolia) Z-OAla-Arg(N02)-Vai-Tyr(Bzl)-Ile-His-(Dnp)-Pro-Ile-ONB liuotetaan 5 ml-.aan dimetyy 1 iformamidia ja lisätään 3,5 ml 2-merkaptoetanolia. Liuoksen annetaan seistä yksi tunti ja sitten Z-OAla-Arg(N02)-Vai-Tyr(Bzl)-1le-His-Pro-11 e-ONB saostetaan eetterillä ja puhdistetaan metanoli/eetterisaostuksella. Saalis: 0,8 g (65 %); R^ = 0,13; R^/J = 0,27. Saatu suojattu peptidi liuotetaan 10 ml:aan metanolin, etikkahapon ja veden 5:1:1-seosta. Liuokseen lisätään 0,5 g 10-%:ista pal1adium/hii1i-katalyyt-tiä ja vetykaasua johdetaan sekoituksenalaisen seoksen läpi 16 tuntia. Kun reaktio päättyy, suodatetaan katalyytti erilleen, liuos haihdutetaan ja tuote eristetään kuivan etanolin avulla. Saadaan 1 8 0,4 g (0,65 %) ( L-CK-hydro ks i - propionyy li -Ile ) - angiotensi i ni II.
. . .. 5
Puhdistaminen suoritetaan edellä kuvatulla tavalla. - 0,30;
Rf6 - 0,58; Rf7 = 0,58; EG1 (pH = 1,9) = 1,07.
Aminohappoanalyysi: Pro: 1,04/1/; Vai: 0,98/1/; Ile: 1,98/ 2/; Tyr: 0,98/1/; Hi s: 1,05/1/; Arg: 1,0/1/.
64797
Esimerkki 5 1 ö f Hydroksiasetyyli ,Ala )-angiotensiini II Vaihe 1
Boc-Ai'g(N02)-Val-Tyr(Bzl)-Ile-His(Dnp)-Pro-Ala-0NB
Liuokseen, jossa on 1,21 g (4 mmoolia) Ala-ONB'HBr 15 ml:ssa kloroformia lisätään 0,55 ml trietyyliamiinia ja 0,75 g (2 mmoolia) Boc-Pro-OPFP. Liuosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 10 minuuttia, uutetaan vedellä ja sitruunahapon 10-%risella vesipitoisella liuoksella, kuivataan ja haihdutetaan. Saatu suojattu dipeptidi 1 (R^ = 0,64) liuotetaan 4 mlraan kloorivetyhapon 8 M liuosta diok- saanissa, eristämättä. Liuoksen annetaan seistä 10 minuuttia, laimennetaan eetterillä ja haihdutetaan. Dipeptidi-hydrokloridi (R^ = 0,55) liuotetaan 15 mlraan kloroformia. pH säädetään arvoon 8 trietyy 1 iami i ni 1 la ja lisätään 1,76 g (3 mmoolia) Boc-His(Dnp)-OPFP.
30 minuutin kuluttua lisätään 0,44 ml IM, N-d imetyy 1 iaminoetyy 1 iami i -nia liuokseen. Sen annetaan seistä viisi minuuttia ravistellaan sitten sitruunahapon 10-%:isen vesiliuoksen kanssa, kloorivetyhapon 1 N vesipitoisen liuoksen kanssa ja 5-%:isen vesipitoisen natrium- vety karbonaatti 1iuoksen kanssa. Uute kuivataan, haihdutetaan ja 2 suojattu tripeptidi (R- = 0,57) liuotetaan 4 mlraan 8 M kloorive- ' 3 tyhappo 1 iuosta dioksaanissa . Tripeptidi (R^. = 0,28) saostetaan kuivalla eetterillä 10 minuutin kuluttua, suodatetaan ja pestään eetterillä. Se liuotetaan välittömästi 20 mlraan kloroformin ja dimetyy1 iformamidin 1:1-seosta. pH säädetään arvoon ö trietyyli-amiinilla ja lisätään 1,58 g (4 mmoolia) Boc-I le-0PFP. 20 minuutin kuluttua liuotin korvataan etyy1iasetaati1la ja etyy1iasetaat-tiliuosta ravistellaan sitruunahapon 10-%risen vesipitoisen liuoksen kanssa ja sen jälkeen veden kanssa. Kuivaamisen ja haihdutta-misen jälkeen suojattu tetrapeptidi (R_p = 0,57) sekoitetaan eetterin ja _n-heksaanin 1:9-seoksen kanssa ja suodatetaan erilleen.
Sen jälkeen se liuotetaan 4 mlraan kloorivetyhapon 3 M liuosta di~ -a oksaanissa, annetaan seistä 15 minuuttia ja tripeptidi (R^ - 0,38) saostetaan kuivalla eetterillä, suodatetaan ja pestään. Se liuotetaan välittömästi 15 mlraan kloroformin ja dimetyyliformarnidin 2r1-seosta, pH säädetään arvoon 8 trietyy1iamiini1la ja lisätään 1,66 g (3 mmoolia) Boc-TyrfBz1)-OPFP. 15 minuutin kuluttua liuotin korvataan etyyliasetaatilla ja lisätään 0,22 ml N,N-dimetyy1iami- 18 64797 noetyy1iamiin ia. Viisi minuuttia myöhemmin sitä ravistellaan sitruunahapon 10-%:isen vesipitoisen liuoksen kanssa, kloorivetyhapon 1;' vesipitoisen liuoksen kanssa ja lopuksi veden kanssa.
Kuivaamisen ja haihduttamisen jälkeen suojattu pentapeptidi 2 (R.p = 0,60) kootaan eetteriin, suodatetaan ja pestään eetterillä. Sen jälkeen se liuotetaan 4 mlzaan kloorivetyhapon 8 M liuosta 4 dloksaanissa. 10 minuutin kuluttua pentapeptidi (R^ = 0,62) seos tetaan eetterillä, suodatetaan ja pestään kuivalla eetterillä. Se liuotetaan välittömästi 20 mlzaan kloroformin ja dimetyy1 iformami-din 1:1-seosta, liuoksen pH säädetään arvoon 8 trietyy1iamiini1la ja lisätään 1,6 g (4 mmoolia) Boc-Val-OPFP. Seoksen annetaan seistä 20 minuuttia. Sen jälkeen liuotin korvataan etyyliasetaatilla, saatua liuosta ravistellaan veden kanssa ja sitruunahapon 10-%zisen vesipitoisen liuoksen kanssa. Uute kuivataan, haihdutetaan ja saa- 2 tu suojattu heksapeptidi (R^~ = 0,65) kootaan eetteriin, suodatetaan ja pestään eetterillä. Se liuotetaan välittömästi 20 mlzaan dimetyy1 iformamidia, pH säädetään arvoon 8 trietyy1iamiini1la ja lisätään 2,9 g (6 mmoolia) Boc-Arg(N02)-OPFP. 20 minuutin kuluttua liuotin korvataan kloroformilla ja liuosta ravistellaan sitruuna-hapon 10-%:isen vesiliuoksen kanssa ja veden kanssa. Kuivaamisen ja haihduttamisen jälkeen jäännös hierretään etyyliasetaatin ja eetterin 1z2-seoksella, suodatetaan ja pestään samalla liuotin-seoksella. Saadaan 2,0 g (72 %) vastaavaa suojattua heptapeptidiä. Sulamispiste: 185-187°C; = 0,70.
Vaihe 2
Z-OGly-Arg(NO2)-Val-Tyr(Bzl)-Ile-His(Dnp)-Pro-Ala-ONB
1,35 g (1 mmooli) Boc-Arg(NO2)-Va1-Tyr(Bzl)-Ile-His(Dnp)-
Pro-Ala-ONB liuotetaan 4 mlzaan kloorivetyhapon 8 N liuosta diok- saanissa. Liuoksen annetaan seistä 15 minuuttia, minkä jälkeen ' 4 heptapeptidi-hydrokloridi (R^ = 0,63) seostetaan ’ kuivalla eette rillä, suodatetaan ja pestään eetterillä. Se liuotetaan välittömästi 15 mlzaan dimetyy1 iformamidia, liuoksen pH säädetään arvoon 8 trietyyliarniinilla ja lisätään 0,96 g (2,5 mmoolia) Z-OGly-OPFP.
20 minuutin kuluttua liuotin korvataan kloroformilla ja liuosta ravistellaan veden kanssa. Vesipitoinen uute kuivataan, haihdutetaan ja suojattu peptidi eristetään käsittelemällä etanolilla. Saalis: 1,16 g (83 % ) ; sulamispiste 133-13ri°G; Rr^ ~ 0,72.
19 N
) 64797
Vaihe 3 '
Suojaryhmien poistaminen 1,5 g (1 mmooli) Z-OGly-Arg[Νϋ£)~Va1-Tyr(Bz1)-11e-His(Dnp)-Pro-Ala-ONB liuotetaan 5 ml:aan dimetyy1 iformamidia ja lisätään 2,95 ml 2-merkaptoetano1 ia. Liuoksen annetaan seistä yksi tunti, minkä jälkeen lisätään kuivaa eetteriä, saatu sakka suodatetaan erilleen ja pestään etanolilla. Saadaan 1,1 g (82 %) Z-QGly-Arg-(N02)-Val-Tyr(Bzl)-I1e-His-Pro-Ala-ONB. Rf2 = 0,15; Rf3 = 0,40.
Tämä suojattu peptidi liuotetaan metanolin, etikkahapon ja veden 5:1:1 -seokseen, lisätään 0,5 g 10-%:ista palladium/hiili-katalyyt-tiä ja johdetaan vetykaasua sekoituksenalaisen seoksen läpi 24 tuntia. Reaktion edistymistä tarkkaillaan käyttäen ohut levykroma-tografiaa. Kun reaktio päättyy, katalyytti suodatetaan erilleen, pestään 15 ml:lla metanolin, etikkahapon ja veden 5:1:1-seosta.
Liuos haihdutetaan sitten kuiviin, jäännös kootaan etanoli/vesi-seokseen ja haihdutetaan useita kertoja, eristetään sitten kuivan 1 s etanolin avulla. Saadaan 0,55 g (80 %) (hydroksiasetyyli ,Ala )-angiotensiini II, joka sitten puhdistetaan, kuten edellä kuvattiin. Rf5 = 0,28; Rf6 = 0,48; Rf7 = 0,50; EGlu(Ph = 1*9) = 1,0.
Aminohappoanalyysi: Pro: 0,95/1/; Ala: 1,1/1/; Vai: 1,0/ 1/; Ile: 1,0/1/; His: 1,0/1/; Arg: 1,0/1/; Tyr: 0,9/1/.
Esimerkki 6 1 8 (Hydroksiasetyyli ,Thr(Me))-angiotensiini II Vaihe 1
Boc-Arg(N02)“Val-Tyr(Bzl)-Ile-His(Dnp)-Pro-Thr(lv!e)-0lvle 0,69 g (3 mmoolia) Thr(Me)-OMe·HBr liuotetaan 30 ml:aan kloroformia, lisätään 0,42 ml trietyyliamiinia ja 1,7 g (4,5 mmoolia) Boc-Pro-OPFP. Liuoksen annetaan seistä kaksi tuntia, minkä jälkeen lisätään 0,33 ml Ν,Ν-dimetyyliaminoetyyliamiinia. 15 minuutin kuluttua liuotin korvataan etyyliasetaatilla ja saatua liuosta ravistellaan sitruunahapon 10-%:isen vesipitoisen liuoksen kanssa, kloorivetyhapon 1 N vesipitoisen liuoksen kanssa, veden kanssa ja lopuksi 5-%:isen vesipitoisen natriumvetykarbonaattiliuoksen kanssa. Kuivaamisen ja haihduttamisen jälkeen suojattu dipeptidi 1 (R_p = 0,76) liuotetaan 2 ml :aan kloorivetyhapon 8 M liuosta diok-saanissa eristämättä. 15 minuutin kuluttua liuos laimennetaan uet- 20 6 4 7 9 7 . . . . 3 terillä ja haihdutetaan. Jäljelle jäänyt dipeptidi (R^ = 0,16) liuotetaan 20 ml:aan kloroformia, pH säädetään arvoon 8 trietyyli-amiinilla ja lisätään 2,6 g (4,5 mmoolia) Boc-His(Dnp)-QPFP. Kahden tunnin sekoittamisen jälkeen huoneen lämpötilassa, lisätään 0,22 ml N,N-dimetyy1iaminoetyy1iamiinia liuokseen, jota ravistellaan 15 minuutin kuluttua sitruunahapon 10~%:isen vesipitoisen liuoksen kanssa, kloorivetyhapon 1 N vesipitoisen liuoksen kanssa ja veden kanssa. Kuivaamisen ja haihduttamisen jälkeen suojattu 1 tnpeptidi (R_p‘ = 0,5) liuotetaan 4 mitään kloorivetyhapon 8 N ve- sipitoista liuosta ilman eristämistä sitä ennen ja 15 minuutin ku- 3 luttua tri peptidi (R_p = 0,3) sa ostetaan kuivalla eetterillä, suodatetaan ja pestään eetterillä. Se liuotetaan välittömästi 20 mitään kloroformin ja dimetyy1 iformamidin 1i1-seosta, liuoksen pH säädetään arvoon 8 trietyy1iamiini1la ja lisätään 1,6 g (4 mmoolia) Boc-Ile-OPFP. 30 minuutin kuluttua liuotin korvataan etyyliasetaatilla ja etyy1iasetaatti1iuosta ravistellaan sitruunahapon 10-%tisen vesiliuoksen kanssa, kloorivetyhapon 1 N vesipitoisen liuoksen kanssa ja lopuksi veden kanssa. Kuivaamisen ja haihduttamisen jälkeen jäännöstä käsitellään eetterin ja ri-heksaanin 1:9-seoksella ja täten suojattu tetrapeptidi eristetään. Se liuotetaan sitten 7 mitään kloorivetyhapon 8 M liuosta dioksaanissa, liuok- .. . 4 sen annetaan seista 15 minuuttia, minkä jälkeen tetrapeptidi (R^. = 0,27) saostetaan kuivalla eetterillä. Se liuotetaan välittömästi 20 mitään kloroformin ja dimetyy1iformamidin 1:1~seosta, pH säädetään arvoon 8 trietyyliemiini 11a ja lisätään 1,6 g (3 mmoolia)
Boc-Tyr(Bz1)-0PFP. 30 minuutin kuluttua liuotin korvataan etyyliasetaatilla ja lisätään 0,22 ml N,N-dimetyy1iaminoetyy1iamiinia. Liuoksen annetaan seistä 15 minuuttia, minkä jälkeen sitä ravistellaan sitruunahapon 10-%:isen vesipitoisen liuoksen kanssa, kloorivetyhapon 1 M vesipitoisen liuoksen kanssa ja lapuksi veden kanssa. Uute kuivataan ja haihdutetaan ja suojattu pentapeptidi (R_pZ -0,63) eristetään eetterin avulla. Saadaan 0,4 g suojattua pentapeptidi ä . Saatu yhdiste liuotetaan 1 mitään kloorivetyhapon 8 M liuos- 4 ta dioksaanissa ja 15 minuutin kuluttua pentapeptidi (R _p - 0,4/) saostetaan kuivalla eetterillä, suodatetaan ja pestään eetterillä. Se liuotetaan välittömästi 10 mitään dimetyyiiFormamidia, liuoksen pH säädetään arvoon 8 tri etyyl i arni i nl 1 la ja lisätään 0,4 g (1 rnrnoo-11) Boc-Val-OPFP. Yhden tunnin kuluttua liuotin korvataan klorofor- 21 64 797 millä ja saatua liuosta ravistellaan sitruunahapon 10-%:isen vesipitoisen liuoksen kanssa, kloorivetyhapon 1 N vesipitoisen liuoksen kanssa ja veden kanssa. Kuivaamisen ja haihduttamisen jälkeen 2 suojattu heksapeptidi (R^, = 0,65) eristetään eetterin avulla. Sen jälkeen tuote liuotetaan 1,5 ml:aan kloorivetyhapon Θ N liuosta dioksaanissa, liuoksen annetaan seistä 15 minuuttia, minkä jälkeen 4 heksapeptidi (R^. = 0,48) seostetaan kuivalla eetterillä. Sakka suodatetaan erilleen, pestään eetterillä ja liuotetaan välittömästi 10 mitään dimetyyliformamidia. Liuoksen pH säädetään arvoon 8 trietyy1iamiini1la ja lisätään 0,45 g M mmoolia) Boo-Arg(NO2)-OPFP. Yhden tunnin kuluttua liuotin korvataan etyyliasetaatilla ja liuosta ravistellaan 10-%:isen sitruunahapon vesiliuoksen kanssa, kloorivetyhapon 1 N vesipitoisen liuoksen kanssa ja lopuksi veden kanssa. Saatu uute kuivataan, haihdutetaan ja käsitellään eetterin ja etanolin 9:1-seoksella antamaan 0,45 g (11,3 %) suojattua hepta-peptidiä. = 0,38; sulamispiste: 199-203°C (hajoaa).
Vaihe 2 Z-OGly-ArgfNO^I-Val-TyrfBzD-Ile-HisfDnpl-Pro-ThriMe)-OMe 0,45 g (0,34 mmoolia) Boc-Arg(N02)-Val-Tyr(Bzl)-Ile-His-(Dnp)-Pro-Thr(Me)-OMe liuotetaan 2 ml:aan kloorivetyhapon 8 M liuosta dioksaanissa. Liuoksen annetaan seistä 15 minuuttia, minkä jälkeen heptapeptidi eristetään lisäämällä kuivaa eetteriä 4 (R_P - 0,35). Se liuotetaan välittömästi 10 ml: aan dimetyylif ormamidia, liuoksen pH säädetään arvoon 8 trietyy1iamiini11 a ja lisätään 0,4 g (1 mmooli) Z-OGly-OPFP. Yhden tunnin kuluttua reaktio-seos laimennetaan 30 ml :11a kloroformia ja ravistellaan veden kanssa. Kuivaamisen ja haihduttamisen jälkeen suojattu peptidi eristetään eetterin ja etanolin 9:1-seoksen avulla. Saalis: 0,45 g (93 %); sulamispiste: 158-162°C; (R^ = 0,44).
Vaihe 3
Suojaryhmien poistaminen 0,45 g (0,31 mmoolia) Z-OGly-Arg(N02)-Vai-Tyr(Bz1)-11e-His(Dnp)-Pro-Thr(Me)-OMe liuotetaan 1,5 mlraan dimetyy1 iformami-dia ja lisätään 1 ml 2-merkaptoetanolia. Yhden tunnin kuluttua aine saostetaan kuivalla eetterillä, liuotetaan metanoliin, poistetaan väri pienellä määrällä tililtä ja (laihdutetaan lopuksi. Haiti- 22 64797
dutusjäännöstä hierretään eetterillä ja suodatetaan erilleen. Saadaan 0,38 g (98 %) Z-OGly-Arg(N0?)-Val-Tyr(Bzl)-Ile-His-Pro-Thr-3 4 Z
C Me) - OMe. R_p = 0,16; R^. = 0,52. Tuote suspendoidaan 5 ml; aan dioksaania ja lisätään 1,2 ml 1 N vesipitoista natriumhydroksidi-liuosta. Liuoksen annetaan seistä yksi tunti, minkä jälkeen sen pH säädetään arvoon 3 1 N vesipitoisella kloorivetyhappoliuoksella.
Saatu sakka liuotetaan kloroformin ja dimetyyliformamidin 3:1-seok-seen. Kuivaamisen ja haihduttamisen jälkeen peptidiä, joka on vapaa C-loppupäässä, käsitellään eetterillä. Saadaan 0,26 g (70 %) vapaata peptidiä; R_p = 0,25. Se liuotetaan sitten 10 ml:aan meta-nolin, etikkahapon ja veden 5;1 :1 - seosta, lisätään 0,1 g palladium/ hiili-katalyyttiä ja johdetaan vetykaasua sekoituksenalaisen liuoksen läpi 16 tuntia. Reaktion edistymistä tarkkaillaan käyttä- / en ohut levykromatografiaa. Kun reaktio päättyy, katalyytti suoda-tetaan pois ja liuos haihdutetaan kuiviin. Jäännös liuotetaan vesi/ / etanoli-seokseen ja haihdutetaan useampaan kertaan. Saadaan 0,16 g (80 %) (hydroksiasetyy1i ,Thr/Me/)-angiotensiini II, joka voidaan 5 6 7 puhdistaa, kuten edellä kuvattiin. R_p = 0,22; = 0,52; R^.
0,50; EGlu(pH = 1,9) = 0,98.
Aminohappoanalyysi; Thr; 0,6/1/; Pro: 1,0/1/; Vai: 1,0/1/;
Ile: 1,02/1/; Tyr; 0,85/1/; His: 1,0/1/; Arg: 0,96/1/.
v
Claims (1)
- 23 64797 Patenttivaatimus Menetelmä kaavan I mukaisten verenpainetta alentavien peptidien ja niiden happoadditiosuolojen valmistamiseksi, X-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Y (I) · jossa X on hydroksiasetyyli tai L-^-hydroksipropionyyli, ja Y on L-leusyyli, L-isoleusyy1i, L-alanyyli tai O-metyyli-treonyyli, tunnettu siitä, että saatetaan reaktiivinen hepta-peptidijohdannainen, jolla on yleinen kaava II H-Arg(A)-Val-TyrCB)-Ile-His(E)-Pro-Y-OG (II) jossa A on nitro- tai tosyy1iryhmä, B on bentsyyli- tai substiuoitu bensyy1iryhmä, E on dinitrofenyyliryhmä, ja G on nitrobensyyliryhmä tai alempi alkoksiryhmä, ja Y tarkoittaa samaa kuin edellä, reagoimaan reaktiivisen amino-oksikarboksyy1ihappo-johdannaisen kanssa, jolla on yleinen kaava III W-X’-M (III) jossa X' on amino-oksiasetyyli tai -amino-oksipropionyyliryhmä, W on bentsyylioksikarbonyyli- tai tert.butoksi-karbonyyliryh- mä, ja M on hydroksyyliryhmä tai pivaloyylioksi-, nitrotenoksi-, 2,3,5-trikloorifenoksi-, pentakloorifenoksi-, pentafluorifenoksi-, N-sukkiini-imidioksi- tai atsidoryhmä, lohkaistaan suojaryhmä E pois ja sen jälkeen muut sivuketjujen suoja-ryhmät ja päätesuojaryhmät saaduista yhdisteistä, joilla on yleinen kaava IV 64797 24 W-X'-Ar£(A)-Val-Tyr(B)-Ile-His(E)-Pro-Y-OG (IV) jossa B, W, X’, Y, A, E ja G tarkoittavat samaa kuin edellä, ja haluttaessa muutetaan saatu yleisen kaavan I mukainen yhdiste happoaddi-tiosuolakseen. y 25 64797 Patent krav Förfarande för framstMl1 ning av blodtrycknedsöttande peptider med formeln I och deras syraadditionssaIter, X-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Y (I) väri X Mr hydroxiacetyl eller L-^-hydroxipropionyl, och Y Mr L-leucyl, l-isoleucyl, L-alanyl eller O-metyl-treonyl, kännetecknat därav, att man omsätter ett reaktivt heptapen-tidderrivat med den allmänna formeln II, H-Arg(A) - Val-Tyr(B)-Ile-His(E) -Pro-Y-OG (Ji) väri A Mr en nitro- eller tosylgrupp, B Mr en bensyl- eller substituerad bensylgrupp, E Mr en dinitrofenylgrupp, och G Mr en nitrobensylgrupp eller en IMgre alkoxigrupp, och Y har samma betydelse som ovan, med reaktivt aminooxikarboxylsyraderivat.med den allmMnna formeln III W-X'-M (III) väri X' Mr en aminooxiacetyl- eller ^-aminooxipropionylgrupp, W Mr en bensyloxikarbony1- eller en tert.butoxi-karbonylgrupp, och ΙΊ är en hydroxy lgrupp eller en pivaloyloxi-, nitrofenoxi-, 2,3,5-triklorfenoxi-, pentaklorfenoxI-, oentafluorfenoxi-, N-succinimidoxi-eller azidogrupp, man avspjälker skyddsgruppen E och dMrefter de andra skyddsgrupperna i sidokedjorna och den terminala skyddsgrupperna frMn de erhällna fo-reningarna med den allmMnna formeln IV
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU77RI641A HU177134B (en) | 1977-07-18 | 1977-07-18 | Process for preparing angiotensin ii analogues containing alpha-hydroxy-acid in position 1 with angiotensin ii antagonist activity |
| HURI000641 | 1977-07-18 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI782216A7 FI782216A7 (fi) | 1979-01-19 |
| FI64797B FI64797B (fi) | 1983-09-30 |
| FI64797C true FI64797C (fi) | 1984-01-10 |
Family
ID=11001038
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI782216A FI64797C (fi) | 1977-07-18 | 1978-07-11 | Foerfarande foer framstaellning av nya blodtrycknedsaettande peptider |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4209442A (fi) |
| JP (1) | JPS5831337B2 (fi) |
| AT (1) | AT360678B (fi) |
| AU (1) | AU520176B2 (fi) |
| BE (1) | BE869076A (fi) |
| CA (1) | CA1114810A (fi) |
| CH (1) | CH637916A5 (fi) |
| CS (1) | CS201013B2 (fi) |
| DD (1) | DD137221A5 (fi) |
| DE (1) | DE2831271C2 (fi) |
| DK (1) | DK319578A (fi) |
| ES (1) | ES471791A1 (fi) |
| FI (1) | FI64797C (fi) |
| FR (1) | FR2398049A1 (fi) |
| GB (1) | GB2002779B (fi) |
| HU (1) | HU177134B (fi) |
| IL (1) | IL55075A (fi) |
| IN (1) | IN149852B (fi) |
| NL (1) | NL7807627A (fi) |
| NO (1) | NO148070C (fi) |
| PL (1) | PL111964B1 (fi) |
| SE (1) | SE444439B (fi) |
| SU (1) | SU913940A3 (fi) |
| YU (1) | YU41315B (fi) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2905502C2 (de) * | 1979-02-14 | 1982-07-15 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | Verfahren zur Herstellung von LH-RH bzw. LH-RH-Analoga und Pyroglutamyl-N↑i↑m↑-dinitrophenyl-histidin |
| HU181009B (en) * | 1980-01-18 | 1983-05-30 | Richter Gedeon Vegyeszet | Process for preparing angiotensin-ii analogues with antagonictic activity containing in position 1 sarcosyl,hydroxyacetyl or l-alpha-aminoxy-propionyl group and in positiona 8 esteric group |
| HU181008B (en) * | 1980-01-18 | 1983-05-30 | Richter Gedeon Vegyeszet | Process for producing angiotenzin-ii analogues of antagonistic activity containing sarcosyl-group at the 1-positon,and an alpha-hydroxy-carboxylic acid at the 8-position |
| FR2546163B1 (fr) * | 1983-05-16 | 1987-10-09 | Centre Nat Rech Scient | Nouveaux derives acyles hydrosolubles de peptides ou d'amino-acides, leur preparation et leur application |
| HU191961B (en) * | 1984-08-02 | 1987-04-28 | Richter Gedeon Vegyeszet | Process for producing 1,5 and 8 substituted peptides of angiotenzin-ii antagonistic activity |
| US5182264A (en) * | 1986-03-07 | 1993-01-26 | Schering Corporation | Angiotensin II receptor blockers as antiglaucoma agents |
| US4772684A (en) * | 1987-01-20 | 1988-09-20 | Triton Biosciences, Inc. | Peptides affecting blood pressure regulation |
| MY139078A (en) | 2000-07-21 | 2009-08-28 | Schering Corp | Peptides as ns3-serine protease inhibitors of hepatitis c virus |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3886134A (en) * | 1970-03-09 | 1975-05-27 | Morton Norwich Products Inc | Analogues of angiotensin II |
| GB1320104A (en) * | 1971-05-20 | 1973-06-13 | Norwich Pharma Co | Hepta-and octapeptides |
| US3907762A (en) * | 1971-12-27 | 1975-09-23 | Univ Sherbrooke | Angiotensin{hd II {B position 8 analogs |
| DE2323322A1 (de) * | 1973-05-09 | 1974-11-28 | Hoechst Ag | Neue peptide mit blutdrucksenkender wirkung und verfahren zu ihrer herstellung |
| US3923771A (en) * | 1974-05-10 | 1975-12-02 | Francis Merlin Bumpus | N-Guanidylacetyl-{8 des-asp{hu 1{b -Ile{hu 8{b {9 {0 angiotensin II as an angiotensin antagonist |
-
1977
- 1977-07-18 HU HU77RI641A patent/HU177134B/hu not_active IP Right Cessation
-
1978
- 1978-07-04 IL IL55075A patent/IL55075A/xx unknown
- 1978-07-10 IN IN760/CAL/78A patent/IN149852B/en unknown
- 1978-07-11 US US05/923,663 patent/US4209442A/en not_active Expired - Lifetime
- 1978-07-11 FI FI782216A patent/FI64797C/fi not_active IP Right Cessation
- 1978-07-13 AU AU38009/78A patent/AU520176B2/en not_active Expired
- 1978-07-13 FR FR7821045A patent/FR2398049A1/fr active Granted
- 1978-07-13 SE SE7807824A patent/SE444439B/sv not_active IP Right Cessation
- 1978-07-17 DE DE2831271A patent/DE2831271C2/de not_active Expired
- 1978-07-17 GB GB7830046A patent/GB2002779B/en not_active Expired
- 1978-07-17 DK DK319578A patent/DK319578A/da not_active Application Discontinuation
- 1978-07-17 CS CS784757A patent/CS201013B2/cs unknown
- 1978-07-17 CH CH771878A patent/CH637916A5/de not_active IP Right Cessation
- 1978-07-17 YU YU1715/78A patent/YU41315B/xx unknown
- 1978-07-17 CA CA307,496A patent/CA1114810A/en not_active Expired
- 1978-07-17 SU SU782639848A patent/SU913940A3/ru active
- 1978-07-17 NO NO782464A patent/NO148070C/no unknown
- 1978-07-17 DD DD78206762A patent/DD137221A5/xx unknown
- 1978-07-17 NL NL7807627A patent/NL7807627A/xx not_active Application Discontinuation
- 1978-07-17 ES ES471791A patent/ES471791A1/es not_active Expired
- 1978-07-18 BE BE189342A patent/BE869076A/xx not_active IP Right Cessation
- 1978-07-18 JP JP53087646A patent/JPS5831337B2/ja not_active Expired
- 1978-07-18 PL PL1978208497A patent/PL111964B1/pl unknown
- 1978-07-18 AT AT518378A patent/AT360678B/de active
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4522752A (en) | Retro-inverso analogues of the bradykinin potentiating peptide BPP5a and methods for their preparation | |
| US3853837A (en) | Novel nonapeptide amide analogs of luteinizing hormone releasing factor | |
| US4388304A (en) | Angiotensin-II analogues with antagonizing effects, containing an ester group in position 8, and a process for the preparation thereof | |
| FI68246B (fi) | Analogifoerfarande foer framstaellning av nya cyklopeptider | |
| JPS62129297A (ja) | カルシトニン遺伝子関連ペプチド誘導体 | |
| EP0270376A2 (en) | Calcitonin gene-related peptide derivatives | |
| FI64797C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av nya blodtrycknedsaettande peptider | |
| FI89174C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara lh/rh antagonister | |
| HU181843B (en) | Process for producing acth derivatives of psichopharmacological activity | |
| FI64140C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara peptider | |
| DE2112553C3 (de) | 1 -alpha-Aminolsobuttersäurecorticotropinpeptide, deren Derivate, Säureadditionssalze und Komplexe sowie Arzneipräparate | |
| WO2006014429A2 (en) | Cidofovir peptide conjugates as prodrugs | |
| EP0101929B1 (en) | Polypeptide-diesters, their production and use | |
| FI73225B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt aktiva derivat av angiotensin-ii, vilka innehaoller i 8-staellningen -hydroxikarboxylsyragrupp. | |
| EP0227410A2 (en) | Peptide derivatives, their production and use | |
| RU2010799C1 (ru) | Производные пентапептидов | |
| EP0033976A2 (en) | Method for protecting guanidino group and restoring the same | |
| SCHOELKENS et al. | 1, 8-Disubstituted Analogues of [Ile5] and [Val5] Angiotensin II: Difference in Potency and Specificity of Angiotensin II-Antagonistic Activity | |
| SÜLI‐VARGHA et al. | Synthesis of N‐(2‐chloroethyl)‐N‐nitrosocarbamoyl derivatives of biologically active polypeptide hormone fragments | |
| EP0217804A1 (en) | ANALOGS OF SUBSTANCES P. | |
| Žertová et al. | Amino and deamino analogs of 8-D-homoarginin-vasopressin with modified tyrosine in position 2: synthesis and some biological properties | |
| JPS63225399A (ja) | ペプチド誘導体およびその製造法 | |
| Žertová et al. | The Analogs of 8-D-Homoarginin-vasopressin with O-Substituted Phenylalanine in Position 2: Synthesis and Some Biological Properties | |
| JPS63303999A (ja) | バソプレシン拮抗剤 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: RICHTER GEDEON VEGYESZETI GYOER R.T. |