FI117321B

FI117321B - Stabiili pakastekuivattu koostumus, joka sisältää proteiinia ja testipakkaus

Info

Publication number: FI117321B
Application number: FI952119A
Authority: FI
Inventors: Alain Bayol; Thierry Breul; Patrice Dupin; Philippe Faure
Original assignee: Sanofi Aventis
Priority date: 1994-05-04
Filing date: 1995-05-03
Publication date: 2006-09-15
Also published as: DE69508837T2; AU1777495A; NZ272045A; AU694763B2; NO951724L; TW397687B; DE69508837D1; CZ108195A3; PL179240B1; KR950031103A; FR2719479A1; RU2136306C1; DK0682944T3; FI952119A; CA2148537C; CN1088583C; EP0682944A1; MX9502034A; GR3030146T3; NO320364B1

Description

117321

Stabiili pakastekuivattu koostumus, joka sisältää proteiinia ja testipakkaus Tämä keksintö koskee farmaseuttisesti hyväksyttävää 5 valmistetta, joka on tuotettu kylmäkuivatun tuotteen muodossa ja sisältää proteiinin aktiivisena aineena. Tämä valmiste on stabiili 25 °C:n lämpötilassa ja se voidaan palauttaa uudelleen nestemäiseen muotoon lisäämällä liuotin. Se voidaan antaa ihmiselle tai eläimille ruuansulatus-10 kanavan ulkopuolisesta tai sitä voidaan käyttää analyysi-pakkauksessa.

On tunnettua, että valmisteella on huomattava vaikutus proteiinien hajoamiseen kylmäkuivauksen aikana sekä suuri vaikutus niiden stabiilisuuteen kylmäkuivatussa muo-15 dossa. Erilaisia valmisteen muuttujia, jotka vaikuttavat näihin parametreihin, ovat pääasiassa pH-arvo, läsnä olevien suolojen määrä, täyteaineiden tyyppi ja määrä, valitun kylmäsuojauksen tyyppi sekä lämpötilat, paine ja aika, jotka on valittu pakastus-, sublimointi- ja kuivausvaiheita 20 varten. Nämä erilaiset muuttujat vaikuttavat saadun kylmäkuivatun tuotteen fysikaaliseen tilaan, nimittäin lasi- #·;·β maiseen amorfiseen, pehmeään amorfiseen, kiteiseen tilaan • « · tai näiden tilojen yhdistelmään.

• · . Kaikkien näiden muuttujen merkitys on tutkittu [ ] 25 erikseen, mutta niiden yhteisvaikutus on yhä huonosti selvitetty (Pikal MJ., Dellerman KM., Roy ML., Riggin MN., • · :.i : The effects of formulation variables on the stability of • * * : freeze-dried Human Growth Hormone, Pharm. Research, 1991, 8

No. 4, 427 - 436).

30 Kirjallisuuskatsaus, joka koskee aminohappojen ja ·*’*· polyolien vaikutusta kylmäkuivattavien liuosten tai kylmä- * * * \ kuivattujen tuotteiden ominaisuuksiin, mahdollistaa seuraa- • * * vien johtopäätösten tekemisen.

• » • · 9 9 9 • #« 9 9 9 m 117321 2

Aminohappojen läsnäoloon kytkeytyvät edut

On osoitettu, että glysiinin läsnäolo kylmäkuivatussa tuotteessa aiheuttaa läsnä olevien molekyylien kiteytymisen liuoksessa kylmäkuivauksen pakastusvaiheessa 5 {Korey DJ., Schwartz JB., Effects of excipients on the crystallization of pharmaceutical compounds during lyo-philization, J. Parenteral Sei. Tech., 1989, 43, 2, 80 -83) . Tämä aktiivisen aineen kiteytyminen, joka ei kuitenkaan ole kovin todennäköistä proteiinien tapauksessa, tekee 10 mahdolliseksi sen stabiilisuuden lisääntymisen.

Kiteytyneessä muodossa alaniililla on se etu, että se estää kylmäkuivatun tuotteen luhistumisen kasaan subli-moinnin ja kuivauksen aikana ja mahdollistaa suuremman ominaispinta-alan omaavan kylmäkuivatun tuotteen tuotannon 15 ja siten nopeamman kuivaamisen (Pikal MJ., Freeze-drying of proteins, Biopharm., 26 - 30 October 1990).

Aminohappojen läsnäoloon kytkeytyvät haitat Aminohapon lisäämisellä sokeriin tai polyoliin pa-kastekuivattavassa liuoksessa on yleensä se vaikutus, että 20 se alentaa sokerin lasittumislämpötilaa (te Booy MPWM de Ruiter RA., de Meere ALJ., Evaluation of the physical stability of freeze-dried sucrose containing formulations • · · by differential scanning calorimetry, Pharm. Research., * * Ϊ . 1992, 9, 109 - 114). Lasittumislämpötilan aleneminen mer- [ [ 25 kitsee yleensä kylmäkuivatun tuotteen vähäisempää stabiili- • · · *« suutta (Franks F., Freeze-drying; from empiricism to • · ί.ί : predictability, Cryo-letters, 1990, 11, 93 - 110) .

# * · V ; Manni tolin läsnäoloon kytkeytyvät edut

Mannitolin läsnäolo amorfisessa muodossa ympäröiden : :*· 30 proteiinia takaa proteiiniin kytkeytyvän kiteytymättömän ·**·· veden läsnäolon pakastuksen aikana ja siten estää proteii- *. nin denaturoitumisen. Lisäksi polyolien läsnäolo stabiloi • · · proteiinit lämmöstä johtuvaa hajoamista vastaan hydrofobis- » · **··* ten vuorovaikutusten kautta (Back JF., Oakenfull D., Smith 35 MB., Increased thermal stability of proteins in the • 9 m • « 117321 3 presence of sugars and polyols, Biochemistry, 1979, 18, 23, 5191 - 96}.

Mannitolin läsnäoloon kytkeytyvät haitat

On raportoitu, että mannitoli ei tee mahdolliseksi 5 entsyymin aktiivisuuden säilymistä 37 °C:n lämpötilassa vastakohtana laktoosille (Ford AW., Dawson PJ., The Effect of carbohydrate additives in the freeze-drying of alkaline phosphatase, J. Pharm. Pharmacol., 1993, 45 (2), 86 - 93). Kiteisen faasin läsnäoloon kytkeytyvät edut 10 Kiteisen liuenneen aineen läsnäolo pakastetussa li uoksessa on keino stabiloida proteiinit kuivauksen aikana (Carpenter JF. & Crowe JH., Modes of stabilization of a protein by organic solutes during desiccation, Cryobiology, 1988, 25, 459 - 470).

15 Kiteisen faasin läsnäoloon kytkeytyvät haitat

On osoitettu, että kylmäkuivatun proteiinin aktiivisuuden häviö kytkeytyy suoraan kylmäsuojaavan molekyylin kiteisyyden asteeseen (Izutsu KL., Yoshioka S., Terao T., Decreased protein-stabilizing effects of cryoprotectants 20 due to crystallization., Pharm. Research. 1993, 10, nro. 8. 1232 - 1237).

Proteiineja sisältävien lääketuotteiden valmistees- * * * ; sa täyteaineiden kiteytymistä pitäisi välttää seuraavan ] julkaisun mukaan: Hermansky M., Pesak M., Lyophilization of [ \ 25 drugs. VI Amorphous and Crystalline forms Cesk. Farm., 1993, 42, (2) , 95 - 98.

* :.: : Amorfisen faasin läsnäoloon kytkeytyvät edut »·» : Lisäaineiden läsnäolo amorfisessa tilassa stabiloi tiettyjen entsyymien aktiivisuutta suhteessa lisäaineen : 30 konsentraatioon seuraavan julkaisun mukaan: Izutsu KL., ···

Yoshioka S., Terao T., Decreased protein-stabilizing • * · \ effects of cryoprotectants due to crystallization, Pharm.

* * # *l\l Research. 1993, 10, No 8, 1232 - 1237).

* » Täyteaineiden kylmäsuojaava vaikutus luetaan gly-35 siinin amorfisen tilan ansioksi saadussa kylmäkuivatussa ·;··: tuotteessa (Pikal MJ., Dellermann KM., Roy ML., Riggin MN., 4 117521

The effects of formulation variables on the stability of freeze-dried Human Growth Hormone, Pharm. Research., 1991, 8, No 4, 427 - 436).

Amorfisen faasin läsnäoloon kytkeytyvät haitat 5 Pelkästään jähmeän amorfisen faasin läsnäollessa kylmäkuivattu tuote luhistuu kasaan lämpötilassa, joka on suurempi kuin lasittumislämpötila pakastamisen aikana.

Pehmeässä amorfisessa faasissa kemiallisilla hajoa-misreaktioilla on paljon suurempi kinetiikka kuin kitei-10 sessä faasissa.

Lopuksi tieteellisen kirjallisuuden perusteellinen katsaus, joka koskee täyteaineiden vaikutusta proteiinien stabiilisuuteen, mahdollistaa niiden ominaisuuksia koskevan ristiriitaisen tiedon havaitsemisen. Mikään teoria kylmä -15 kuivatun tuotteen rakenteen ja sen stabiilisuuden välisistä suhteista ei ole yleisesti hyväksytty. Samoin polyolien ja aminohappojen merkitystä yksin tai yhdistelmässä ei ole kuvattu yleistettävien ominaisuuksien yhdistelmän saamiseksi, vaan on havaittu ristiriitaisia tuloksia tutkittujen 20 proteiinien ja käytettyjen täyteaineiden ominaisuuksien mu kaisesti.

,···« Nyt on havaittu aivan yllättäen yhteisvaikutus man- * ♦ Λ ^ ; nitolin ja alaniinin välillä koskien kylmäkuivattujen pro- . teiinien stabiilisuutta. On osoitettu, että tämä yhteis- ll 25 vaikutus esiintyy vain näiden kummankin kahden täyteaineen • · · “· *· suhteellisten konsentraatioiden alueella. Optimaalisen vai- : kutuksen rajat määrää suhde R, jolloin R edustaa kylmä- m » · : kuivatussa tuotteessa läsnäolevan mannitolin massan ja ala- niinin massan suhdetta, joka on 0,1 - 1, erityisesti 0,2 -30 0,8.

• * · ;***: Lisäksi on osoitettu, että R-suhteen ollessa 0,1 - 1.

• « m *”·* Kylmäkuivattu tuote koostuu amorfisesta faasista ja • * '·;·* kiteisestä faasista. Amorfinen faasi koostuu pääasialli- 35 sesti mannitolista ja proteiinista. Kiteinen faasi koostuu ····· pääasiallisesti alaniinista.

117321 5

Tarkastellut olettamukset, kun R on 0,1 - 1, ovat:

Muodostunut amorfinen faasi kylmäsuojaa proteiinia pakastamisen aikana. Kiteinen faasi kovettaa kylmäkuivatun tuotteen rakenteen ja välttää sen painumisen kasaan.

5 Juuri tämä yllättävä yhteisvaikutus amorfisen faa sin ja kiteisen faasin samanaikaisen ilmenemisen välillä stabiloi kylmäkuivatun tuotteen. Siten tämä keksintö kuvaa tämän vaikutuksen tuottamisen edullisten R-suhteiden vallitessa .

10 Siten tämä keksintö koskee kylmäkuivattuja farma seuttisia annostusmuotoja, jotka koostuvat tehokkaasta määrästä biologisesti aktiivista proteiinia, proteiinin sta-biilisuuden kannalta optimaaliseen pH-arvoon säädetystä puskurista, alaniinista ja mannitolista, jolloin kaksi vii-15 meksi mainittua täyteainetta esiintyy massasuhteessa R = mannitolin massa/alaniinin massa = 0,1 - 1. Mainittuun valmisteeseen sisältyvä proteiini pysyy stabiilina kylmäkuivatussa muodossa. Saadun kylmäkuivatun tuotteen liukeneminen on nopeata ja täydellistä. Kylmäkuivatun tuotteen 20 rakenne ei rikkoudu tai luhistu kasaan ja sen vesipitoisuus on yhteensopiva proteiinin aktiivisuuden yllä pitämisen kanssa.

• · t

Siten tämän keksinnön kohde käsittää stabiilien ««« * ♦ * m , kylmäkuivattujen tuotteiden saamisen, jolloin mainitut * * 25 tuotteet sisältävät proteiinin, joka on kylmäsuojattu pa- • · · *· *2 kastamisen aikana amorfisella jähmeällä faasilla, joka : koostuu oleellisesti proteiinista ja mannitolista, jolloin V · tämä amorfinen faasi on olemassa samanaikaisesti oleelli sesti alaniinista kootuvan kiteisen faasin kanssa pakas- : 30 tetun liuoksen sublimoinnin ja kuivaamisen jälkeen saadussa ***· kylmäkuivatussa tuotteessa.

«M

*. Biologisesti aktiivinen (tai bioaktiivinen) prote- • * * iini, joka formuloidaan tämän keksinnön mukaisesti, voi • · “··** olla glykosyloitunut tai ei-glykosyloitunut, luonnollinen, 35 synteettinen, semisynteettinen tai rekombinantti polypep- * · ·;*·* tidi, kuten sitä käytetään kliinisessä käytännössä tai 117321 6 laboratoriossa. Tarkemmin sanottuna mainittu proteiini voi olla esimerkiksi hormoni, kuten kasvuhormoni, edullisesti ihmisen kasvuhormoni (hGH), luteinisoiva hormoni (LH-RH), gonadotropiini. Proteiini voi olla myös entsyymi, esimer-5 kiksi trombolyyttinen entsyymi, kuten urokinaasi, prouro-kinaasi, streptokinaasi, stafilokinaasi, kudosplasminogee-niaktivaattori (tPA), tai entsyymi, kuten fosfataasi, sul-fataasi, asyylitransferaasi, monoamiinioksidaasi, uraatti-oksidaasi. Samoin proteiini, joka formuloidaan tämän kek-10 sinnön mukaisesti, voi olla sytokiini, kuten esimerkiksi interleukiini-2 (IL-2), interleukiini-4 (IL-4), interleu-kiini-6 (IL— 6) tai interleukiini-13 (IL—13) . Toinen proteiinien luokka tämän keksinnön mukaisesti sisältää esimerkiksi vasta-aineet, immunoglobuliinit, immunotoksiinit. 15 Peptidit, kuten kolekystokiniini (CCK), substanssi P, neu-rokiniini A, neurokiniini B, neurotensiini, neuropeptidi Y, eledoisiini, bombesiini, voidaan formuloida tämän keksinnön mukaisesti.

Biologisesti aktiivinen proteiini on edullisesti 20 hGH (eli ihmisen kasvuhormoni), uraattioksidaasi tai interleukiini-13.

Ihmisen kasvuhormoni on proteiini, joka koostuu yh-•#1 destä polypeptidiketjusta, jossa on 191 aminohappoa ja 2 ] disulfidisiltaa kysteiinijäännösten 53 ja 165 välillä ja * * 25 kysteiinijäännösten 182 ja 189 välillä.

• * ·.*·: Uraattioksidaasi on entsyymi, joka hapettaa virtsa- ; hapon allantoiniiksi ja se on uutettu Aspergillus flavus- organismin biomassasta (Laboureur et ai., Bull. Soc. Chim.

Biol., 1968, 50, 811 - 825). Sitä on käytetty veressä : 30 olevan liiallisen virtsahapon määrän hoitamiseksi yli 20 • > · vuoden ajan.

\ Tämän proteiinin koodattava cDNA on kloonattu äs- 9 9 9 kettään ja ekspressoitu organismeissa E. coli (LEGOUX R. et • ·· !...: ai., J. of Biol. Chem., 1992, 267, 12, 8565 - 8570), 9 ;*.e: 35 Aspergillus flavus ja Saccharomyces cerevisiae. Entsyymi on * * tetrameeri, jolla on samanlaiset molekyylimassan alayksiköt 117321 7 alueella 32 000. Monomeerilla, joka koostuu yhdestä 301 aminohappoa käsittävästä polypeptidiketjusta, ei ole disul-fidisiltoja ja se on asetyloitu N-päätteeseen liittyen.

Interleukiini-13 on sytokiini, joka koostuu yhdestä 5 112 aminohappoa käsittävästä polypeptidiketjusta, jolla on kaksi disulfidisiltaa (Minty et ai., Nature, 1993, 362, 248 - 250).

Amorfisen faasin (mannitoli + proteiini) saaminen ilmenemään yhdessä kiteisen alaniinifaasin kanssa on riip-10 pumaton puskurin läsnäolosta ja konsentraatiosta liuoksen pH-arvon säätämiseksi, mutta se riippuu edellä määritellystä R-suhteesta.

Proteiinivalmisteiden ehdottamiseksi, jotka ovat yleisön saatavissa hoidollisina aineina, on oleellisesta, 15 että ne formuloidaan riittävän stabiiliin muotoon siten, että ne säilyttävät biologisen aktiivisuutensa formuloinnin ja käytön välisenä aikana. Esimerkiksi hGH on formuloitu eri tavoin, kuten esimerkiksi on kuvattu seuraavissa patenteissa ja patenttihakemuksissa: US 5 096 885; W0 89/09 614; 20 WO 92/17 200; AU-30 771/89; WO 93/19 773; WO 93/19 776.

Keksinnön mukaisia valmisteita voidaan säilyttää ... huoneenlämpötilassa, kun taas tällä hetkellä myynnissä ole- * · t * . via valmisteita, jotka sisältävät näitä proteiineja, täytyy ] säilyttää 2 - 8 °C:n lämpötilassa.

* 25 Useimmissa tapauksissa farmaseuttinen annostusmuoto on kylmäkuivattu, pakastettu tai liuoksessa. Se sisältää • 9 ·.: ; proteiinia, puskuria, glysiiniä, arginiinia, mannitolia, ί#Γ: sinkkiä, pinta-aktiivisia aineita, dekstraania, EDTA:a tai muita täyteaineita, mutta ei koskaan alaniinin/mannitolin . 30 yhdistelmää massasuhteessa R, joka on 0,1-1. Kylmäkui- vattuja tai pakastettuja muotoja käytetään molekyylin \ biokemiallisen yhtenäisyyden ja biologisen aktiivisuuden • · · *·:·* yllä pitämiseksi. Kylmäkuivatut valmisteet pitäisi liuottaa uudelleen ennen käyttöä lisäämällä farmaseuttisesti hyväk- • \· 35 syttäviä steriilejä liuottimia, kuten tislattua vettä, nat- 9 riumkloridin vesiliuosta konsentraation ollessa 0,9 % tai * · ' δ 117321 glukoosin vesiliuosta konsentraation ollessa 5 % tai mitä tahansa muuta fysiologisesti hyväksyttävää liuotinta, joka sisältää tai johon liittyy muulla tavoin antibakteerisia säilöntäaineita, kuten bentsyylialkoholia, fenolia tai me-5 takresolia.

Valmiste, joka on stabiili huoneenlämpötilassa, kunnes se liuotetaan uudelleen, on erityisen edullinen muutettavissa olevaan hoitoon, kuten hGH:n tapauksessa pullon muodossa, tai mukautettuna moniannospatruunamuotoon, 10 Näin valmistettu valmiste voidaan myös lisätä ana- lyysipakkaukseen.

Siten tämä keksintö on edullinen kylmäkuivatun tuotteen koostumus. Tämä kylmäkuivattu tuote saadaan kylmä-kuivaamalla lähtien liuoksesta.

15 Tämä formulointimenetelmä sisältää sekoittamis-, liuottamis-, suodatus- ja kylmäkuivausvaiheet. Kylmäkui-vattavan liuoksen koostumus on seuraava:

Proteiini, farmaseuttisesti hyväksyttävä puskuri pH-arvon säätämiseksi, alaniini, mannitoli, jolloin massa-20 suhde R = mannitolin massa/alaniinin massa =0,1-1, vettä ruisketta varten.

β·..β Kylmä kuivattava liuos valmistetaan seuraavalla ta- * ] valla: ] Proteeiniliuos saadaan geelisuodatuspylväälle ja se * 25 sisältää puskurin, joka säilyttää vyöhykkeessä pH-arvonsa, \ *: joka on yhteensopiva proteiinin stabiilisuuden kanssa.

* * * Halutut määrät puskuria, alaniinia, mannitolia ja vettä lisätään tähän liuokseen siten, että kaikki täyteaineet solubilisoituvat. Liuos suodatetaan steriilisti ja : ·“· 30 jaetaan säiliöihin, edullisesti pieniin lasipulloihin tai ··· .**·. kapseleihin.

«9« \ Liuosten kylmäkuivaus toteutetaan seuraavasti: > 9 * *···* Liuos noudattaa sykliä, joka käsittää pakastamisen, sitten sublimoinnin ja kuivaamisen ja joka on sovitettu 35 kylmäkuivatun tuotteen tilavuuden ja liuoksen sisältävän * · säiliön mukaan. Edullisesti valitaan pakastusnopeus, joka 117321 9 on suunnilleen -2 °C/min Usifroid-kylmäkuivauslaitteessa (Ranska), joka on tyyppiä SMH15 tai SMJ100 tai SMH2000.

Kylmäkuivatun tuotteen kuivausaika, -lämpötila ja -paine säädetään kylmäkuivattavan liuoksen tilavuuden ja 5 halutun jäljelle jäävän vesipitoisuuden funktiona kylmäkuivatussa tuotteessa.

Täydelliset tiedot ruiskutettavien valmisteiden valmistustekniikasta on alan ammattimiehen saatavissa lähteestä Remington's Pharmaceutical Sciences, 1985, 17. pai- 10 nos, tai lähteestä William ΝΑ. & Pölli GP., The lyo-philization of pharmaceuticals: a literature review, J.

Parenteral Sei. Tech., 1984, 38, (2), 48 - 59 tai lähteestä

Franks F., Freeze-drying: from empiricism to predicta bility, Cryo-letters, 1990, 11, 93 - 110.

15 Näin saadaan kylmäkuivattu tuote, jossa alaniini on kiteytyneessä muodossa ja mannitoli on amorfisessa muodossa. Kylmäkuivattua tuotetta voidaan säilyttää 25 °C:n lämpötilassa heikentämättä siihen sisältyvän proteiinin biologista aktiivisuutta.

20 Tämän keksinnön kuvaamiseksi suoritettiin arvioin nit valiten hGH tai uraattioksidaasi proteiiniesimerkiksi.

,·;·# Siten valmistettiin useita liuoksia, jotka sisälsivät * « , hGH:ta tai uraattioksidaasia biologisesti aktiivisena pro- » 1 , teiinma, fosfaattipuskuria eri konsentraatioissa pH-arvon [ [ 25 ollessa 1 hGH:ta (4 IU/0,5 ml) sisältävien liuosten tapauk- *· 2· sessa ja 8 uraattioksidaasia (30 EAU/ml, mannitoli yksin, • · : alaniini yksin tai alaniini/mannitolin seokset) tapauk- * sessa, liuokset kylmäkuivattiin ja analysoitiin.

Koostumukset on kuvattu yksityiskohtaisesti seuraa- : 30 vien taulukoiden 1 ja 2 esimerkeissä. Analyysimenetelmät ;3; sekä stabilointia jät ja -lämpötilat on myös selostettu seu- *·· ·. raavassa.

• · · • · ♦ ·1» • « • 4 4 » 9 · ♦ 4 9 2 9 9 • 3 • « 117321 10

Taulukko 1.

Alla oleva taulukko 1 esittää tutkitut uraattioksi-daasia sisältävät koostumukset.

Erä Manni- Alani ini R Fos- Uraat- nro toli mg faat- tioksi- mg tipu s- daasu kuri EAU(i) _____mM__ 1 __33,0__0i_0__+0Q 50__30_ 2 __27,7__6^9__4__30__30 3 __20, 8__10,4__2__30__30_ 4 __13,6__13, 6__1,000 40__30_ 5 __10,2__15,3__0, 67 40__30_ 6 __7^3__16,0__0,46 40__30_ 7 __7^3__16,2__0,45 30 __30_ 8 __9^_5__21,0__0, 45 50__30_ 9 __4^6__18,3__0,25 40__30_ 10__2^5__20,0__0, 125 40__30_

Il 11 0,0_ 16,0 | 0_T50 | 30_ 5 (1) : EAU tarkoittaa entsyymin aktiivisuuden yksikköä.

* · * 1 * ♦ • « · * ·» • « • 9 9 9 9 * · 9 #·« 1 999 ♦ ♦ ♦ * · 9 9 9 Φ · · • · ·

Ml 9 1 1 • · • 9 999 • • » » * I 9

• M

1 m • 9 9 9 999 9 9 9 9 9 9 9 ·· • · 9 9 9 117321 11

Taulukko 2.

Alla oleva taulukko 2 esittää tutkitut hGH:ta sisältävät koostumukset.

Erä Manni- Alaniini R Fos- hGH

nro toli mg mg faatti- IUt;L) puskuri pH=7; _____eqM__ 12 __12,5__M)__+ oo 2,50__4_ 13 __20,0__2^5__8__1,95__4_ 14 __12,5__6^5__2__0,00__4_ 15 __12,5__6^5__2__2,50__4_] 16 __12,5__13^0__1__2,50 4_ 17 __12,5__10,5__0,45 1,95__4_

1 18 0, 0 6,5 To 2,50 U

5 (1): IU tarkoittaa kansainvälistä yksikköä.

Analyyttiset menetelmät, joita käytettiin erilaisten parametrien määrittämiseksi, olivat seuraavat.

Dimeerien ja niihin läheisesti liittyvien suuren il* . 10 molekyylimassan omaavien aineiden pitoisuus • * . Dimeerien ja niihin läheisesti liittyvien suuren * | molekyylimassan omaavien aineiden pitoisuus määritettiin • * *· " ekskluusiokromatografian (SEC-HPLC} avulla käyttäen • * : SUPEROSE 12 -pylvästä {Pharmacia, Ref. 17-0538-01). Tuote a*· •J · 15 eluoidaan ammoniumfosfaattipuskuriliuoksella, pH-arvo 7,0 (1,38 g ammoniumdivetyfosfaattia 1 l:ssa vettä, säädettynä s:*; pH-arvoon 7,0 väkevän ammonoiumhydroksidin avulla, virtaus- ;***; nopeus 0,4 ml/min) . Detektio tapahtuu aallonpituudella 220 ··# \ nm. (Tämä pitoisuus huomioidaan analyysituloksissa oligo- * · e 20 meerien + polymeerien prosenttiosuutena) .

• » *···* Dimeerien ja suuremman molekyylimassan omaavien ai- neiden pitoisuus voidaan myös määrittää käyttäen menetel- # * ····· mää, joka on kuvattu European Pharmacopoeia'n monografiassa 117321 12 "Somatropine pour preparation injectable" (Somat ropi ini ruiskutettavaa valmistetta varten), tammikuun 1994,

Pro teiini tii tter ianalyysi käänteisfaasikromatogra-fian avulla 5 Määritettiin ilmaistuna milligrammoina/lasipullo käänteisfaasikromatografian avulla käyttäen C18-300Ä-pyl-västä; 25 cm, halkaisija 4,6 mm {SYNCHROM, ref. CR103-25). Tuote eluoidaan 35 minuutissa gradienttimallilla, jolloin liikkuva faasi siirtyy 75 tilavuudesta vettä, jossa on 10 0,1 % trifluorietikkahappoa (tilavuus/tilavuus) {TFA), ja 25 tilavuudesta asetonitriiliä, jossa on 0,08 % TFA:ta {tilavuus/tilavuus), 30 tilavuuteen vettä, jossa on 0,1 % TFA:ta, ja 70 tilavuuteen asetonitriiliä, jossa 0,08 % TFA:ta. Virtausnopeus on 1 ml/min ja detektio tapahtuu 15 aallonpituudella 220 nm.

Uraattioksidaasin entsymaattisen aktiivisuuden määrittäminen

Uraattioksidaasin entsymaattinen aktiivisuus ilmaistuna EAU-yksiköinä määritetään spektrofotometrian avulla 20 termostaatilla varustetussa kyvetissä 30 °C:n lämpötilassa seuraamalla virtsahapon häviämistä aallonpituudella 292 nm β···# menetelmän mukaan, joka on kuvattu lähteessä Legoux R., • * *

Delpech Bruno, Dumont X., Guillemot JC., Ramond P., Shire ···-· ) D., Caput D., Ferrara P., Loison G., J. Biol. Chem., 1992, 25 267 (12), 8565 - 8570.

• · · *· *· Uudelleen muodostettujen liuosten sameus : Liuotettujen hGH:ta sisältävien kylmäkuivattujen m : tuotteiden sameus määritetään spektrofotometrian avulla {Ph. Eur. 2 (I) v.619) aallonpituudella 500 nm Perkin Elmer : :*j 30 554 -spektrofotometrillä. Tulokset esitetään absorbanssi- ··· ·**·. yksiköinä x 1 000.

*·· \ Liuotettujen uraattioksidaasia sisältävien kylmä- · · kuivattujen tuotteiden sameus määritetään Ratio Hach 18900- • * *··** 00-sameudenmittauslaitteen avulla. Sameutta koskevat tulok- 35 set ilmaistaan nefelometrisen sameuden yksiköinä (NTU), ····: jotka on määritetty julkaisussa: Standard methods for the 117321 13 examination of water and wastewater of the American Public Health Association.

Opalisointiaste määritetään myös European Pharmacopoeia' n (II) V. 6 menetelmän mukaan vertaamalla analysoi-5 tavaa näytettä kontrollisuspensioon.

Kylmäkuivattujen tuotteiden ai s tinvarai set kriteerit Nämä kriteerit tutkitaan silmävaraisesti ja niissä otetaan huomioon kylmäkuivatun tuotteen väri, sen rakenne 10 (luhistunut kasaan tai muuta) ja havainnot mahdollisesta faasin muutoksesta kylmäkuivatun tuotteen kuoren ja sisuksen välillä.

Röntgensädediffraktametria jauheesta

Kylmäkuivattujen tuotteiden röntgensädediffraktio-15 metrinen analyysi toteutetaan käyttäen SIEMENS D500 TT -diffraktometriä; lähde: CuKäl; generaattori: 40 kV, 25 mA; takamonokromaattori: rako: 1/1/1/0,16/0,6; näyte Pyrex- telineellä; pyyhkäisyalue: 4° 40°/min 2 Bragg-tetassa.

Differentiaalilämpöanalyysi 20 Kylmäkuivattujen tuotteiden tutkimus differentiaa- lilämpöanalyysin avulla toteutetaan seuraavissa olosuh- ,···β teissä: • · *

Laite: DSC 7 Perkin Elmer; kalibrointi: indium ja »M « » * . lyijy» näytteen koko: 5 - 10 mg 50 μ1:η maljassa; alkuläm- | ] 25 pötila: 10 °C; kuumennusnopeus: 10 °C/min; loppulämpötila: V*: 300 °c.

• « • · · : hGB:n daami doidut muodot : Deamidoitujen muotojen prosenttiosuus määritetään anioninvaihtokromatografian avulla (AEX-HPLC) käyttäen ani- : ;‘j 30 oninvaihtopylvästä (PHARMACIA mono-Q HR 5/5, ref. 17 - 0546-01). Eluointi toteutetaan liuoksella A (13,8 g ammo- \ niumdivetyfosfaattia 1 000 ml:ssa vettä; pH-arvo = 7 sää- * * · *;!;* dettynä väkevällä ammoniumhydroksidilla) ja vedellä liuok- « « *···* sena B käyttäen seuraavaa ohjelmaa: 5 % liuosta A 2 35 minuutin ajan, sitten siirtyminen 15 %:iin liuosta A 5 • * •••»f minuutin kuluessa, sitten siirtyminen 50 %:iin liuosta A 20 ιλ 1 1 7321 14 minuutin kuluessa, lopuksi siirtyminen 100 %:iin liuosta A 5 minuutin kuluessa ja viimeksi mainitun liuoksen ylläpitämisen 5 minuutin ajan. hGH:n (tR noin 15 min) ja deami-doitujen muotojen eluoitumista seurataan käyttäen aallon-5 pituutta 220 nm. Virtausnopeus on 1 ml/min.

Saadut analyysitulokset käyttäen näitä erilaisia menetelmiä on kuvattu seuraavassa.

Dimeerien ja niihin liittyvien suuremman molekyyli-massan amaavien aineiden pitoisuus 10 Määritettiin 0,5 ml:aan vettä liuotettuj en 4 IU

hGH:ta sisältävien kylmäkuivattujen tuotteiden oligomeerien plus polymeerien pitoisuus R-suhteen funktiona {kuva 1). Kuva 1 osoittaa, että liuosten oligomeerien plus polymeerien minimipitoisuus saavutetaan, kun R on 0,1 - 1, jol-15 loin arvo 0,1 on interpoloitu käyrästä.

Lisäesimerkkinä seurattiin kahden hGH-erän stabii-lisuutta, kun mainituissa erissä oli 4 IU hGH:ta ja 8 IU hGH:ta, 25 °C:n ja 35 °C:n lämpötilassa. Niiden stabiilisuus oli erinomainen 6 kuukauden säilytyksen jälkeen.

20 Seuraavassa taulukot 3 ja 4 osoittavat deamidoitu- jen muotojen oligomeerien ja polymeerien prosenttiosuuksia .···, eri aikoina ja eri lämpötiloissa verrattuna European Phar- * 1 · . macopoeian standardeihin. Näissä taulukoissa R = 0,45.

• · * « • · • n • · • 1 » · · • · · *·1 · * · · • 1 · • i « « • l « »·1 • · · • « * · ··· »

« » I

* t t ·2 « « « • » * · ♦ · « « 1 ♦ «· • 1

HM

2 • « 117321 15

Taulukko 3

Erä 4 IU/lasipullo

1 European I Aika 25 °C:ssa 35 °C:ssa II

Pharma- O

coposia

Standard _ ____3 kk_ 3 kk I 6 id~

Olikomeerit 6,0 1,0 1,9 3 3,3 ja polymee- rit, %______

Deamidoi- 6, 6 1,3 2,8 2,8 3,9 dut muodot, _%______ Määritys - 1,58 1,54 {1) 1,54 1,55 mg/lasi- (1) (1) (1) (1): Tiitteri ei vaihtele merkitsevästi ajan kulu-5 essa antaen analyysimenetelmän tarkkuuden (± 5 %).

Taulukko 4

Erä 8 IU/lasipullo I I European {Aika 25 °C:ssa 35 °C:ssa 1

Pharma- O

coposia :1Γ: Standard ____ ___3 kk I 6 kk 3 kk Ί 6 kk * 1 Olikomeerit 6 1,0 1,5 1,2 1,7 2,2 ja , | polymee- .ritf %_______ ; Deamidoi- 6,6 1,3 1,5 1,95 2,2 3,3

Mi dut muodot, :T: J_______ Määritys - 3,0 3, 0 2, 93 2,95 2,94 mg/lasi- (1) (1) (1) (1) (1) • .% Il pallo • ** - ^ • ·1 S · • 1

Ml ::: 10 (1): Tiitteri ei vaihtele merkitsevästi ajan kuluessa antaen analyysimenetelmän tarkkuuden (± 5 %) .

#1« m • 1 » 1 »

• M

• 9 a 16 117321

Uraattioksidaasin entsymaattisen aktiivisuuden määrittäminen Määritettiin kylmäkuivattujen tuotteiden entsymaat-tinen aktiivisuus, jolloin mainitut tuotteet sisälsivät 30 5 EAU uraattioksidaasia liuotettuna 1 ml:aan vettä, R-suhteen funktiona 1 kk:n kuluttua 35 °C:n lämpötilassa (katso kuva 2) . Kuva 2 osoittaa, että alussa oleva uraattioksidaasin entsymaattinen aktiivisuus on säilynyt 1 kk: n kuluttua 35 °C:n lämpötilassa, kun R-suhde on 0,4 - 1.

10 Lisäesimerkkinä tuote, jossa R = 0,45 tai R = 0,67, on täydellisesti stabiili 3 kk:n kuluttua 25 °C:n lämpötilassa (jäljellä oleva aktiivisuus lähes 100 % ajanhetken 0 aktiivisuudesta) .

Uudelleen muodostetun liuoksen sameus 15 Määritettiin kylmäkuivattujen tuotteiden sameus, kun mainitut tuotteet sisälsivät 4 IU hGH:ta liuotettuna 0,5 ml:aan vettä, R-suhteen funktiona (katso kuva 3). Kuva 3 osoittaa, että liuosten minimisameus saavutetaan, kun R on 0 - 1,5.

20 Määritettiin kylmäkuivattujen tuotteiden sameus, kun mainitut tuotteet sisälsivät 30 EAU uraattioksidaasia ... liuotettuna 1 ml:aan vettä, R-suhteen funktiona (katso kuva • t · • « « * . 4) . Kuva 4 osoittaa, että liuosten minimisameus saavute- | taan, kun R on 0,2 - 1.

| | 25 Kylmäkuivattujen tuotteiden aistinvaraiset kritee- « · ♦ . .

*. ·: nt * m * Jokaisen kylmäkuivatun tuotteen aistinvaraiset kri-

: teerit, kun tuotteet sisälsivät 4 IU hGH:ta tai 30 EAU

uraattioksidaasia tai ei lainkaan proteiinia ja eri pitoi- . 30 suuksia fosfaattipuskuria, määritettiin R-suhteen funktiona ·*♦ .···. ja ne esitetään taulukossa 5. Taulukko 5 osoittaa, että •e kylmäkuivatuilla tuotteilla on tyydyttävät aistinvaraiset • · « *···* kriteerit, kun R on 0,125 - 1,7. Nämä tunnusmerkit eivät • ·· muutu ajan funktiona.

« · • · · 9 99 9 9 9 • 9 17 117321

Taulukko 5

Kylmäkuivattujen tuotteiden ja kiteytyneiden täyteaineiden aistinvaraiset kriteerit R-suhteen (R = mannitolin massa/alaniinin massa) funktiona.

5 Aistinvaraiset Kiteiset täyteaineet R kriteerit (Röntgensädediffrak tio) + oo Hajonnut (tai luhistunut) Mannitoli 10 Hajonnut " Mannitoli + alaniini 10 6,469 Hajonnut " Mannitoli + alaniini 5 Hajonnut M Mannitoli + alaniini 4,014 Hajonnut " Mannitoli + alaniini 2 Hajonnut " Mannitoli + alaniini 1,705 Hyvä Mannitoli + alaniini 15 1,402 Hyvä Mannitoli + alaniini 1,25 Hyvä Mannitoli + alaniini 1,097 Hyvä Mannitoli + alaniini 1 Hyvä Alaniini 0,667 Hyvä Alaniini 20 0,456 Hyvä Alaniini 0,456 Hyvä Alaniini ;*·*; 0,451 Hyvä Alaniini ....: 0,452 Hyvä Alaniini 0,251 Hyvä Alaniini • s β·β . 25 0,125 Hyvä Alaniini • mm .* / 0 Faasin muutos Alaniini mmm (tai erottuminen) • et • · t m Röntgensädediffraktio 30 Taulukossa 5 esitetään tulokset röntgensädediffrak- ··· tioanalyysistä, joka on tehty alaniinin ja mannitolin seok-. *·. siä R-suhteessa 0 - +oo sisältävien kylmäkuivattujen tuot- I I · teiden jauheesta.

• · '** Saadut diffraktogrammit osoittavat, että R-suhteen I 4 35 ollessa 0-1, vain alaniinin kidehilan viivat ilmenevät, ·ί*βί lisäksi hajonta diffraktogrammin peruslinjasta osoittaa 117321 18 mannitolista koostuvan amorfisen faasin läsnäoloa. Mitä suurempi R, sitä suurempi amorfinen faasi mannitolista johtuen. Kun R > 1, myös mannitoli kiteytyy.

Saadaan amorfinen faasi, joka koostuu mannitolista, 5 ja kiteinen faasi, joka koostuu alaniinista, kun R on 0 -1.

Differentiaalilämpöanalyysi 4 IU hGH:ta tai 30 EAU uraattioksidaasia tai ei lainkaan proteiinia ja eri pitoisuuksia fosfaattipuskuria 10 sisältävien kylmäkuivattujen tuotteiden lasittumislämpötila määritetiin R-suhteen käänteisarvon funktiona (vrt. kuva 5) . Kuva 5 osoittaa, että maksimaalinen 1 as ittumi s lämpötila, joka saadaan kylmäkuivatuista tuotteista, jotka sisältävät alaniinin ja mannitolin seoksia, saadaan, kun 15 (1/R) > 1, so. kun R on 0 - 1.

Kylmäkuivatun tuotteen lasittumislämpötila osoittaa nimenomaan kylmäkuivatun tuotteen stabiilisuuslämpötilan. Kylmäkuivatun tuotteen stabiilisuuden maksimilämpötila saavutetaan siten, kun R on 0 - 1.

2 0 Deaminoidut muodot 4 IU ja 8 IU -eristä saadut tulokset osoittavat vain hyvin pientä vaihtelua, joka on erittäin hyväksyttävää taa verrattuna European Pharmacopoeian somatropiinimonografian , standardeihin. Ne tekevät mahdolliseksi ajatella, että tämä ' ] 25 valmiste on riittävän stabiili 25 °C:n lämpötilassa.

• · a *· 1! Lopuksi on osoitettu, että kullakin arvioidulla • a : kylmäkuivattujen tuotteiden ominaisuudella on optimaalinen • aa V · R-arvon väli, josta esitetään yhteenveto seuraavalla taval la.

:30 • a a • a » • a a a a1· • • • a a • · a a a a a a a a a a aa a a a a a a a • aa a a a a a 117321 19

Oligomeerit + polymeerit, % (hGH:n stabiilisuus) H 0,1 - 1

Uraattioksidaasin entsyymiaktiivisuus 1 kk:n kuluttua 35 °C:ssa R 0,4 - 1 5 hGH-liuosten sameus R 0 - 1,5

Uraattioksidaasiliuosten sameus R 0,2 - 1

Kylmäkuivattujen tuotteiden ulkonäkö R 0,125 - 1,7

Alaniini pelkästään kiteinen R 0 - 1

Maksimilasittumislämpötila R 0 - 1 10

Kukin analyyttinen kriteeri (oligomeerit + polymeerit, %, hGH:n stabiilisuus, uraattioksidaasin entsymaatti-nen aktiivisuus 1 kk:n kuluttua 35 1C:n lämpötilassa, hGH-liuosten sameus, uraattioksidaasiliuosten sameus, kylmä-15 kuivattujen tuotteiden ulkonäkö, alaniini pelkästään kiteinen, maksimilasittumislämpötila) määrittää spesifisen optimaalisen välin ominaisuutta kohden. Hyväksyttävän valmisteen saamiseksi määritetään edullinen R-arvon väli, tarkoittaa sanoa 0,1 < R < 1.

20 Seuraavat esimerkit kuvaavat keksintöä rajoittamat ta kuitenkaan sitä.

Esimerkki 1 • · a \ Kylmäkuivatun tuotteen koostumus, joka sisältää 4 • 1 . 1U hGH:ta liuotettuna 0,5 ml:aan vettä ruisketta 25 varten • i » · » I1 |· Aineosat Yksikköannos (mg) : hGH 4 iu *.· 1 Alaniini 10,5 mg

Mannitoli 4,77 mg 30 Dinatriumfosfaattidodekahydraatti 0,7 mg

Vettä ruisketta varten qs 0,5 ml »ta \ Tyypin 1 3 ml:n valkoinen lasipullo 1 * 1 1

Harmaa kloori butyyli pylväs tulppa 1 • · *···1 Sininen reunaton alumalja, halkaisija 13 mm 1 • · • ♦ · • I· • · · 117321 20

Esimerkki 2

Kylmäkuivatun tuotteen koostumus, joka sisältää 8 IU hGH:ta liuotettuna 1 ml:aan vettä ruisketta varten 5 Aineosat Yksikköannos (mg)

hGH 8 IU

Alaniini 21 mg

Mannitoli 9,54 mg

Dinatriumfosfaattidodekahydraatti 1,4 mg 10 Vettä ruisketta varten qs 1 ml

Tyypin 1 3 ml:n valkoinen lasipullo 1

Harmaa klooributyylipylvästulppa 1

Sininen reunaton alumalja, halkaisija 13 mm 1

Esimerkki 3 15 Kylmäkuivatun tuotteen koostumus, joka sisältää 18 IU hGH:ta liuotettuna 1 ml:aan vettä ruisketta varten.

Aineosat Yksikköannos (mg)

hGH 18 IU

20 Alaniini 21 mg

Mannitoli 9,54 mg V:\ Dinatriumfosfaattidodekahydraatti 1,4 mg • · »

Vettä ruisketta varten qs 1 ml

* I

. Tyypin 1 3 ml:n valkoinen lasipullo 1 * * 25 Harmaa klooributyylipylvästulppa, halkaisija 13 mm 1 S Sininen reunaton alumalja, halkaisija 13 mm 1 ·*· • · « * ♦ · » * · » »* · • · « ·

IM

• « » * · ·

»•I

# · » • · • · • * I « I • M # · « * 21 117321

I li II

X G *H *rl G -H -H

O 0) G -P 01 G μ j o h -μ ϋ ji m ΰϋ m g in oo 3 0) ,C G 0) .G G 0) ^COrHEH» ><SW ίΗ S ö1 <0---- - μ

.. I II II

w X C -H -H G ‘H -H

o O 01 G μ Q)(0+J

ja o μ μ Όϋ ra ό ω in CO G0) .G G Φ .G G 0) o (SrHHtn >* ε ω >< ε « H____ _

00 I tl II

X G -h -H G -H -H

40 o a) to -μ cu to μ «ο o μ μ O^co τ) x ® μ CO G 0) .G G 0) G O Cl h m «h e-· m >< ε w sh ε ω 40____ _

M

•H I II II

M X G -H vH G μ M

o ai g μ a) g μ G μ μ ό λ: ω v x m X in O G 01 Λ G ai -GGO) O οοο^Εημ :* ε m ^ g in r>____ _

J" I II II

« X G -H -H G ·Η μ

® o ai g μ ai m 4J

f μμ GJi 01 O^CO

% LO O G ai J2G01 -GGO) g <s<^&hw >εο) >< ε w

jS I II II

Tj X G μ μ G μ μ t; o ai g μ ci <o μ S μμ Ό x Ui Ti x m -s o g ai .G g ai .c g ai “ inutEHöi :h ε w >< ε w 3---- -

• *"* I I I I I

jj x g μ μ c μ μ • * ω o ai g μ ai g μ . S h μ OJCffl Ό * to ·;·*: £ 301 ÄG01 .G G 0) S xoHto >< ε m >< ε m .·. ; o---- - • ·· 3 / * μ 1 μ : .·. Ci I i μ : μ g μ μ ι i g i μ m ... 3 μ G μ μ .G dl G G < v b x w > ° JA - 3 -

μ ° «0 I μ E

G *o μαιε μ ai μ μ g ω w ·.: · ^*40 ! ·Η >ιμβΗ ΛΌΜ β ΐΟτΙϋ ε G^so>,a)ai ^ g οι ή «ο φ g • · μ μ I μ α^μεμ φ >< w o s<: μ μ χ >1 I ‘Η _ 6_ μ_ • 3 j? I μ «· w- μ- . u S =0 Ο ι ι G ι μ ::: οβ &μμίΰΰ a o o g ··· ΒΪί εΐηΟμφΟ G XX αιχ .*·*. μ s *ο α) οο μ G0) 3 μ χο Όϋ

*,t(* β O J X ^ μ H G H D d H G

• W iG ö—-J-— • · 1 • · » • · ·

• B

« 117321 22

I I

C -H -H dp dp 3 3 4->

Ό Ä Ö) CO (M

.3 3 3

>h £ (0 CO (M

I I cifi

C *H *H OP

Oi (0 -p in

Ό X CO σι <N

£ 3 3 ^ £ M t-H 1—1

I I

C *H *H dp dP

Q) (0 -P

Ό ϋ to in co £ 3 O) in ε w h o I 1 C *H *H dP dp

3 3 -P

Ό W CS

£30

>* g m CM rH

I I

C ·Η Ή dp dp

Ο 3 -P

•ox ra in m £33

E W i"i I—I

I I dp C -H -H dp 0 (0 4-> in Ό X ω O ts £ 3 o

>-t E CO »-H O

··» • · · —^ I II IP·^— • · m • , 11

—-i C -H iH dP dP

• · 3 3 -P

. a a: m o o ·:··; £ a a)

> 6 CO ^ H

• « • ·· // -h m o : .·. c· I I +j :.:: 5 i c i *h m id id ... 8 £ o 3 co a) +3 >-· Ο E .* W vdp v dp * 3 _ .

n

~ I I II

1 3 (0 II I 3 3 ·.*. * I l E P I C £ ^ I I E k ·.;.· -h «300013 ή μ ή (0 3 O O O) 3

... £ X 3 -H h O -rH O C O 0 * 3 -H P O -H

:· UHCO^+Jm < O > -P U r-l (0 .* -P 4-1 ... CU .

E

• -H v-l I -P

ä iii ι ι ι .μ -μ *o ·μ

**· w O3l*H-PO-Pl«-P*HCl*H(0-H>lO

.*··. O 3 Ή O 3 3 O -H 3 Ή 3 -H -H :3 O) <D -H >ί-Η 3

*...· X Q E O *0 E O Q E hnC£H£ »H+J 3 C

* ----- -L ----- « * • « · • ·· ♦ · ·*· « • « 117321

I I

O C Ή - <U (0 I -

(N T3 X

£ 3 0) -H

V dp >* g OT 4->

I I

O C *H

- <D (0 I - Ο) Ό Λ CfJw

ί 3 0)-H

v dp |h E m +>

I I

O C -H

- 0) (0 I ~ CM ΌΛ (D- x: 3 α) -h V dp >* E W +*

I I

o e ή - (D (0 I " cm ό λ: mi j: 3 a) ·η v >h ε w μ r:

O C -rH

- <υ to I — (N Ό X Oli Λ 3 a) -h

v *> ^ e ((1 P

I I

O Ch *h * 0) <0 I ~ cm ό mi £! 3 a) -H v dp ^ E m 4-> »»# I · * ...... II fl • f * ' . 11

* * * * O C

• * - <D (0 I ~ . (Μ Ό X to —

·:·*: A 3 <D M

v dp >< E (l)P

* * » » · " 1 ™ ' ' I « « * * o i ,·. v 1 II— :.: : Λ cm i c < μ mi ... To a a) 3 (o a) h ::: o vdp ό e .¾ «μ +j--

o I I

- 4-> I Ή -μ I -H

• .·· x o m ä o w ^ m m aj M-ι <u ... .h h o a) h o a) :: μ ω u u ω u μ •»· λ; —.

u . · g I μι ::: g λ: ι i t i i ro i ·η Π ··· M (0 0 0 μ -H C 3 > 0 *H μ

.*··. H M-H30 W <0 3 3 h Q) -H

·.„· in μ E Ό <(0^Ha^cH

. Us=ss4ss=sse=ssJ

« · • · » • f· • » ft • * 24 117321 ΙΟ σι UJ «ι ΜΙ Μ Μ η Μ *-1 1- 0 • >. 3 H 5Ö o -τι ·Η -, G M V Cfl Η > +> V g V g “ ------χ

O

M . I ·0 οο to ή I ή to σ» a^GHGrHG|(ö • ». 3 H ¢0 H -Hy+j C N ν CO Η > P vg ν g Π ____π ao Η ·Η * G G G £ (¾ Ο ·Η ·Η ΪΟ m -μ Ε ε *5

O VO G Vt C

** O* CO ^ H H .- * K H »0 2 O (N VH > V V *£ ------Φ G G G Q.

m o -h -h a 4J e ε to * 00 tn 3 Ή -H fi: C''· CT» trt M H i—( 0)¾

* *. H :t0 -h G

O <N VH> V V 0*2

^ E

------3 3 co £ yo o o r ° OO Ή 3 ______0) a

G

t - 5 Ä ° « % ° ------H w 12 o S e ° « S c ·:··: --m----h o)

O -H

...» <#> G * G G <0 > 5 5 i -H W O H (n m

m H Q. +J I E co H

«\ 5 00 ^ G H -HO

·.·: «h cr> es G CO M tn tn h . , m uo - - H 30 3

• · · V (N 00 +iVH> VO v O -H

5.5 5 CO--β----u ΐ £ ... O +* 4-> ifö Ij 555 -μ wercoGiro GGaov • Ä O(0ca-Ht0(0-H i ιφ O E ti to iin *o αειιι αεΦ h tue λ: ^ •ro GCOtO OoinOO^O μ Ji *h „ ao .μ

. w :(0 -H CO 2μ(00<μ<αα·*:(0<0 3Ε G.H

... JO HU) S G Ä O G Ä O K :(0 >1 -H 0) '2 G h *.5.* »* ^uaoidayOiE+JiJC Stum

... --G __u----- X -H

3 i to o S i i <3 α 11 . 3 -H G) IrHH+JIHO ^Gen , · ί &G m ion h παίΛ: 'dä.

555 3*HtOMHroa)^;(OOsO 3 % A

*.· S to-h ao tns a o +> > 3 e e s T] c -H φ O Λ >1 σΐ-Η G G (0 Ή QJ O ..0)..

m >-p e-pew ö^-phco* ~ Sd • w > 2 E ~ * · • « « • ·· * » • * 25 1 1 7321 <o U . . ..... I . . ... - 01 jj

h I

el i II II II

8 X G -H 1H G -H -H G -H -H

inl o dJ λ -μ cd to -μ α) to μ . 8 ΟΗ-μ Μ Ό ϋ) ΰΧ μ o I LO CO 3 0) £3(1) £3 0) £3 0) I ρ) η tn w >»em >< e w > £ μ <ο I______

μ I

S 1 I II il II

Ο I X C Ή -H G -H -H C ·Η -Η xs I o o) to μ α>Φ·μ <d λ μ ο η μ o a: m ό jd m ό χ; ω O CO 3 0) £30) £30) £3Q) h in rH w >< ε w >< E to ε ω

40 I II II II

40 x G -H M G -H -H G Ή Ή μ o α)(ΰμ α)(θμ α) <ο μ Ή Η μ Μ Ό X! CO OÄ Μ 40 10030) £30) £30) £30) μ coo'Ehw ε w >< ε ω >< ε ω Η____ ______ η S ι ιι ιι ιι -5 X G -η Ή G Ή 1Η G Ή -η ο ο θ)ΐομ α)(θμ ο) ιορ

Γ> Ημ Ό Λί CO Ό Μ Ό Χί W

10030) £30) £30) £30) j- n o [h n )h e η >< ε m >< ε w

N

0)------ μ m < ι· ι ι ιι

5 X G -H -H G -H -rl G -rl -H

p o ο)(ομ 1 £ tö ... s------ ::: -¾

• , I II II II

····« a X G -H -H G -rl -rl G ·Η -H

r o α>ίθμο)(ομ m kip . M H μ Ό 1 W Ό X! ϋ) 3X0) *:··: dl 30) £30) £3 0) £30) 4J X O &·< W ί1 g W >1 £ 10 Ϊη g ö) : ·.: 2------

// μ I Ή -H

* . 1 Cl I I μ I I μ I.: : 3 to μ μ t ι g ι ή to ι c ι ή to ... μ Ρ ΙΟ’Η -Η £0)3(00)£α)3ί0α) ::: μ cooo (Ο ϊμόεχιο ϊη^εχμ • (0 ,, - X-- > υ 3 η ° 40 ι μ ε ιι 3 40 Φ ι 40 μ G Ή ·Η ι ι -Η I (0 (0 ... χ >μοιε 1rj ο) μ μ g to α> χ: ι ι ε ^ «Ο -μ ^ρ CH X Ό « ö ΪΟΗΙΟ 50 3 O O OMÖ ... mg (04d40><d>o) £ ο) ·η so ο) to ä 3 -h h o -h :: H H & μ g μ g >< W O μ μ W H M X μ ... o >1 -H _ B _ μ__ . X s μ - m- -h - . · 3 o o ι ι 3 ι μ ::: 3 β & μ μ ι c c H o o c *** h»» ε ro g h o) o a x x qjk .·1·. 3B 40 Q) OO Ή 3 0) 3 H sö ΌΟ ·...· 5o J««MHHG^OG H £ • y £ 11 1 1 11 i-i • m • · ♦ • · · • ♦ « 26 117321

dP

dp dp O

ON 00 0Ί

oo" cn V

dP

dp dp O

00 O <N

* V

τΗ rH V

dP

dp dP O

CO O CN

(N CO V

dP

dP dP O

CTi (N

•w V

tH rH V

dP

dp dp O

O VO <N

»H o V

• * · ..........

• * · V · dp ·:··: dp dp o

; 00 O (N

* · * *

«H iH V

• · • * » .....

• *» // in o o * « · V ^ „

"a* a ___ Ό VO (S

• aa (rt ::: o vdp vdp v op • M_____ +J---- ,, , . ~ Il I (0 CO +J I -d ·:: rt i c ä jciig^ x o ® a:,· ^ -H-H-H m o o o oho <d <w -μ wh ibjchj'h muu *·· ^ ___ • U--

a a*. % -Ή I -P I

• · · .5 1 1 I I I I +j +> ao +» Ä I I

I* « aJ<0lTH4->O4->l<D+J-Hc:i-HMTH;>i(DiöOO4-> ·* w ο φ·η ο ο ο ο ·η (d-η dH*Kao m dri [ηή a) k-H3o \.a* K D 6 Ό Ό E Ό QgMT>CJ3H£C0H+*i0C h +J E Ό « I —. * ______ __ « « · • ·· • · • * 117321 27 O G ·Η -H $ * β) (O P · in cm Ό X tfl M in x g a) v rt» >1 E ÖJ G h I<#> i i

O G -H -H

. a) ia -μ h vo cm Ό X m co in X! G 0) v >i g Cf> O ή c#p i l

O G 1H -H

* Q) (0 -P CO

CM Ό X CO en in X G O)

v >tg (0 O M

&>

I I

O G -H -H

v Q) (Ö P N tH

CM Ό J1 M CT\ <£> X G 0)

v >i E (O O iH

c#>

I I

O G -H 1H

V 0) (0 P CD Γ-» cm Ό X to in in X G Φ

V S E to O <H

<1>

I I

O G -H -H

k Φ (0 p tn co . :1♦ (M Ό Λ to io in V 1 X G 0) 1 - v >i e to o ή . oV> <#>

ί ί I I I

O G 1H 1h in .·. : 1 o <a p - o o ·.·1 cm Ό Λί co rH tn [> . . x g a» • · · V kN E CO V i—I r~l « · · j1 ♦ ftft ♦ 1W ----- o • · ♦ u ft ft ft

• P I I

(0 P I ·Η P I ·Η I I ·Η O ÄOfil JtOM Gtoto W CD p d) a) m Q) fl) -rl Hj |r-to<Dr-ioa) iotuio ιη|ωρρωρμ t^pp *·· . .........

• · 1H

:· j§ +> , . . . .

. u 1 o P Q) P I -rl -H10H

::: o A:iT3iii(Op-H1HOtopHio ··· g tÖOO-HGG>OG(0PG«0t0^a .···. «H P-HG M(0GGP-H O) -H G «0 Ρί D)-H 0

• 1 M fcnPE < OJ<r| a-H > a to s P E IBH

**· M____ ft W ·< Ίί·ΐί.

ft ft ft « • ft« ft ft ft ft ft 117321 28

• I

ra -h o a p g o h c 3 H VO Ό “ -h

VOlM > V EN V E

* G G

ra o -h av ε

3 -H tO

ra p oh H 10

VH > E** V

* G G

m :0 Ή av ε 3 h σ' ra u en h

H KO

VH > <0 V

* e e ra o -h

av E

3 -H

ra p σ> h h aa

VH > U3 V

* G G

ra o m

av E

3 -H <M

m P CM H

h aa

VH > V

* G G

ra o v

av E

··· 3 ·Η H

... m pöh V · h aa * v H > e1 v .»»·· ra . . 0----

• 3 . e C

*:**: ή w o -h

Ha v i g ‘· 1 3 ·Η */·; 3 ra p tn tn h . . £ h «o

... £ VH > \0 V

• · · ai * · · jj —— ··» — T: : : : g »

* o O II

5 'S· 11(01 11(0 -H 0)1 lo 2 o e k 0 -H 0 G P 0 -H CP X ·Η

. ·π 3 P (0 (0 O 0) PtOiOUQJ ·· Xd Cl) 3 E G

... w e 3 4) Λ (0 O 3 Cl G n) O Ä aa >i -h Q) <l) ^ w a a e a ω a a e a aEv pj e e .1·1. .. §----

*...· m O

. M H I

• P H G X I

: : : g ra i i <a o o o ... ε d vv>3Cää

.1··. « 3 3 H (0 -H Ö) H aO

H D X V H (0 3 G

* 1 * 1 · • 1 · ft i 29 1 17321

Esimerkki 6

Analyysitulokset, jotka koskevat h6H:n stabiili-suutta 1 vuoden kuuttua 5 °C:n lämpötilassa hGH:n määrän ollessa 18 1U

5 Opali- pH Vesipi- Deami- Oligo- soinnit toisuus doidut meerit (A.U. x muodot + poly- __10lo~3_____meerit

Stan- <20 <1,5% <5% <6% dardit______ t = 0 1__7,9 0,33 % 1,36 % 0,63 % 1 kk 1__8 0,29 %__=__- 10 3 kk 3__7,83 0,32 % 1,25 % 0,45 % 6 kk 4__1,03 % 1,4 % 0,5 % 12 kk 7 - 1,19 % 1,15 % 1,11 %

Esimerkki 7 15 Analyysitulokset, jotka koskevat hGH:n stabiili-

suutta 3kk:N KULUTTUA 25 °C:n lämpötilassa hGH:n määrän ollessa 18 1U

Optisoin- pH Vesipi- Deami- Oligo- ,·*·. nit toisuus disoi- meerit *·· * (A.U. x dut + ····· 10‘3) muodot poly- .______meerit . . Stan- <20 <1,5% < 5 % <6% \*·· 20 dardit______

Lii t = 0 1__7,9 0,33 % 1,36 % 0,63 % V : 1 kk 3__7,72 0,35 %__I__- 3 kk 9 7,65 0,54 1,37 % 0,85 : Kaikkien tulosten tapauksessa R = 0,45 ··· • · • · ··· ♦ • · · ♦ · ♦ ·· · ··· • » • · • •9 9 • · • · ·

• M

• * a • · 3σ 117321 £3 ........

dl I I - τη 3

•μ o I

μ o -h rt p c

> X in *0 O

H x <n > 4-> 3__ Ä 00

*} C

E Ό

H -P

X op *0 ti in > H ___ n rt 3 rt o

Ό X u 4J

μ nj Λί o -H

w *H P

^ <0 h in »o O O 00 > μ Oi ____ μ o +J u c 5 nj o rt a o -μ h Pr*

3 (0 II P

£ *0 g » >_ > § ~T~ :(d jj φ

μ 0Ϊ Oi X O H

H ö) ·μ O X o h :rt j* p p h M O =rt 3 co in i μ o > w in h w -H ---

rt H

•μ +> co a uh

rt +j »H

V * rt a) i . Ό +j i in h ·:·: tJ m ro —--

(0 OB

-S -SE „ h • · o o rt u h μ 5 jd X o : ti i S * il • *' +* in . * rt e m 0 h co v : · · rt w o 3 ro rt__ : p 3 h « o : : : 3 o 3oo

• O -μ Ό P P Oi il H

•h to s ·μ 3 o h

HO DKMO+J VH

(0 o____

. O* X

Hl 00 w a “ 1 • * *H rt (L) 3 H + Ή *...· ähoS o ή o»

• 3 ^ -H 3 +J tn C E rT

• p D Q) μ HErOrTS

::: 5 < +> « chcnKo ··* g ω +> o c co co ^ n

Ή O O rt * I ·μ U3 O O

* * C0O3 W J CHgro . W CO +> ------ * m 1 · * « #· • · • m 117321 31

I I

u c

MO O MO O

>4-» > +J

C C

O O

μ -P

rl *rl

U U

*0 »0 > > G s o o μ -μ r| ·Η μ μ

MO MO

> > Ö c 0 =o μ -μ •H Ή μ μ

MO MO

> > >

H

1 >

H H

M

H Λ

H

H H

• · * ·:·: -- * # » >

.·. : Il M H

*. ·ί ä • · Λ t—I Λ * * « * 4 * -—. 1 " ·*· * m

• *» O IH

* · * ^ i « ^ m V v v * 00 ’··** -H + 1 + ( r-l .*·'· £ H *rt H *rl 04

·,,,· ώ o σι*Η o» o oi-H

. S +> e c ε -peetDcT

• s -h to g s *H(0Sg ::: h ccoh e c i> h & **· Ä c - (0 c - (0

···. (0 O I -H O (0 O (D I Ή '(OS

!>>(* SNJ Cd2r) EcM^lfivozg « « Ψ 9 * ♦ «« * * » • ft 32 117321

Il I ·' · j - :(0 c

i m S

•h 3 ft CU S g H ta ft W -H (N CO iH fl)

0) o .. 1 G

> Ή <#» CO (N CN Q> ε -—----ffl u 1 O CO [S ID I ft Λ in oom n o ft £ CN 00 — CN CN jg 3 3----e 1) ^ 5 o O CN O CN g dl H CO ° «·Λ ' ^ Φ H O 1 CN 1 rH 1 g cinj in co ^ oo —' co ^ ft «o.—L----g

•h n O

P to 0 o in o g

Lh ^ v v ω is in o1 es en g rtrtJrHCOrO'-·' CN CN g g, g----3 >. O 3 n » en i-ι is -1 P 3 il - — ^ v —

G G CN 1 co 1 co1 G

W M P OO'-' CN w CNw 10 n ------Λ

U

« 00 H 00 -H

en O O P

^ m v v .. ω gv CN S €0 CO 10 ____> * 00--s ai o h rH o g +j o σ> o o ft M 1 " ft *.1 · o n s co co -g • 10 - " " -- - I I ιι·ιι·" ΛΙ

···-· o SJ

' 1 § XV 6

* ΕΧ-1°ό m VO

*:1·: a en o o <u

Ö h in ». ^ rH

: fl) fi oo e1. CO CO # • · ♦ rtl Λ1 4-3 HU----g : 1 · ^ hä o ft qj a> o \d oo P ^ ... O Ό 3 n en O O ^ &> : : : x ? -h

• P Ö H P S· CO CO ft O

n» -L_----o h ~ 00 , S Σ -rl +| • · · 1 e e Vh s—^ \:.· °o ^ «m e -h cp ... M H < e-, I — + C rH +J <-

* ; Ή G HCOeD^j H iJ Ή (η H ·Η CN -P <U

··· X I O I H w o C Dl 1 O Dl Ή ^ -H $ , .·. M P -H H o' -H 1H 2 -H (0 E 2 H 3 ·.: 5 w e + e j ccoc^ft m *·· B O G-H'ftG-cU'^C-cOcn3^ ΐ .·1·. -H Q (0 Dl1H (0 tOOHOro (Otsi ,ιίΣ ^ i ·...1 W x SEGXECNIÖrHZSCNJUDlZEs 1 (0 * « · • 1 « • «· « « 117321 33 G <0 h|||| 0) 3

ϋ υ I I

s -μ ° Ή -rt

•P 3 U C U G

μ H in ¢:0 «0 O

jd 3 co > μ > μ > Λ___

H

g β Jtf a ** 3 o i i

=3 * ° -H -H

SS c0 μ C u G

Γ* in ¢0 «O O

^ (*} <N > μ > μ 0 fl rt S *n ti i i M 2 o .J Jj

J J §, « μ C JhC

1 ; o «o O aöo SS 8 ιη>μ >μ MH | ----

H S g ^ P ' JL

£ js* £ 3 U G u G

TJä m »o o :tO to

Sh G h co >μ > μ u g--- 3C ® Γ. a o i i fi O Ή O Ή ·Η

go m μ n u g h G

H 0) 3 =rt O MO

> m >ωμ >μ > μ :fl PO----- +j M n

5 S rt 3 ° tl H

2 μ M h in « 3 S H id * Μ +__Il_ « 3 h μ « H J* +J μ O 00 n o. 0) au Uh .·:·. rt e S μ o · h h ·.· · rt „ g m o 1 Ό jj 3 0 rt 10 H v ... . 3 ? g—1--- • ä e 3 rt u ^ \ *:··: o h ^ g Λ ^ o >

-H e> flu -¾ h l H

• : μ m o g h h

• ·· μ 3 φ M 3 H (0 II HH

.* .* rt 3 in rt 3 rt--- • * · rtM(r)Hld4i : u ** h s a o

... 3 H Λ 0) H H

: : : *h -n ό μ u » h h

• O -H 3 H 3 I I

πΛβη^ωμ h h h rt ** 3 μ u ---- . a « · • ♦ * m h 1 g 3 m *5 S Ξ h

• . -H rt a) <N 3 ^ -H 0)H ^ H H

·...* S , CEO® , COlOOi . 2 \ h < μ ομμε^πεμε . μ D a) c 3 ri ιΗΙΟτΙ η] ·η ·Η ::: 0)«!+»··« 5 c: h c 10 s g c* c \o ··· g ω +j cj o ,···. H o e O rt D)H to ^ rt OlH LO rt o

·...* «03 ^ 2E<HEH2g<HgH

• w M μ 1^11— I

• Φ • · · • Il • · * * * 117321 34

I I I

*H 1H 1H

I I I

Η -Η -H

μ c μα μα ao ο 30 Ό «0=0 > μ» > -μ > μ

I I I

*Η Ή 1Η μα μα μα 30 O 30:0 10 :0 > -μ > -μ > -μ

I I I

Ή Ή Ή μα μα μα 30 ο 30 ο :(0 =0 > -μ > μ> > μ

I I I

Ή ·γΗ ·Η μα μα μα 30 o 30 o 30 ο > +> > -μ > μ Η >

Η Η W

V Μ Λ H M I Η • · · Η Η , Il V ΜΗ ··" • » -----1 ------ " ·:·1: ι > > mmm : η >

·, ·; M M V V

• 1 ^—·—— ' * · » * · · ··· · ··· . Η Μ : ! : g η μ ι μ * g I ι Η Μ £ Η Μ Μ Μ rd-----

• V

• φ · σ1 Ο Μ Ο Μ ο Ή ·» . ^ 1Η ι—I ^ ·Η 1Η ·Η «Μ μ „ α o coioDi α ο . ft g ·η 0)·η ε g; ·μ -η δ η oi-η ε Σϊ! g S CSC tt ασΝβ[>= cec ··· .§ %^(0 α οι ^ ^ m ^ α μ τ, ν ιβ cm cn (0 0)Η VO (0 ν (0 ϋ>Η CO (0 1 (0 0>Η Ο (0 - ·...· w 2 ε <rH SN 26<ΗΕ^ £ £ < (N Ε <ν • » * · · • «1 • · 117321 35

W

3 II w <#> 0 o

II -μ I - I I

«•HI CM

I & 1 w I ·ϊ π >

U (N

o O ι-l o vo in v o O cn cn

u ^ CO

J (N CO 00 00 IN

X CO

a c <u

jj U CM CM tS VO

o o O o O eri σ> 3 s **·* * •h in co oo oo t-' Γ" H --—————— — I--

S

0) ti * o S X 0 .H IN 00 00 o ο σ\ σν σν σι x LO . κ . - y

... 2 H 00 CO

» . E

... B ^“ — - • * ... : ö • · dj . 0)

..... H

H O

• · Q) t-l O Oi VO VO

ϊ Ό il o o σ' σι σι • * 3 v * k * *

:,·. D +J 00 CD N- O IN

... ^ .... {0 -- 1 -— ... o : : · χ d> di d> σι • μ ε ε di ε ε di m m LD οι ε Di ε η _ν ή η " σι νο - g ·*σι cm —“ 6 w 5 - ξ - * ε οο 5 -cv ξ ιη ε^τρ Eino Ε(θ * Sco . Εο ‘

Oi ^ ^ η η _ -η ο» Λ ^ ^ (N <Ν ’** η ο ο ο ο ο — X I -C O C O CO „C O C Ο • 3 3 ο *Η -μ ηΓ-Η -μ ,-Γ-Η μ <-?·Η μ μ ··*· η. ·Η -Η ο|·μΉη,*Η*Ηη.Ή*Ηη,·^Ή

*. Q) W >£ d d tCC vCC

··* go Ä«io c ^ioc *M(oc ^ioc

.***. -h 0 (OHDiDDi ifl h to <oh bj (Ohio iö h <d II

\„· <o x ζ<εεε ζ<ε z; < ε z; < ε ζ;<εΒ

• M —I I B

• · t · *

* M

« « « • * 117321 36

G

30

E

i—I

a) -p 0) I | I I I I ^ I | i 01 >1 3 - - - s * * * ^ £ (O O ^ --- * 5 o in co O ^ is *2

v * < LO * fl B

in o en o - in

m co es* n co es G

o______0) H (0 H 4-> 3 c o. <0

® ***** CO

Γ1 W W - --✓ W co O co en ro tH 0)

" * ' " G

5 σι o O o en H

w in cm co co co es G

«—I------— * § g n Ό Ή *r> > _ _ «

-H

-H w M * * .H

+j X O w w j_, χ X ° es on co in en 0 id * *· k " * Λ) .h in co CO ND o Ν' s,

Ifl 00 CM (N CM NJ H m ai------co

G -P

*H *H

+> X

+J u ro d) ·:·*: g ^ ^ ^ e E ***** ... · >iO ^ w '— 'w^ w m : . « CO N- CM r-l jj -M li v * k *. . 7) : G O en on o en £ *, ·; U -P CO (N CN CO (N Jh • · —— — —— —~----- -Η ::: e* m <o ··· O Oi E Oi Oi m ::: χ ε O) ε a e» ε ο> .

• +j mg εε g 7 o

(5 NOO) N οι ® S

•o „Hw ON«. Eco«o»is Ein 5 ·Ό § sSv^.2 *. *h +1

. E^HEmHEvON-EcO^EocM P

ON _ H _ rH lH rH <N) Q) • *« 2 o -h o >h o ή 2 ή o "P e

: : >H 3 ^ -H H ^ -H rl ^ -rl H Ή rt ^ Ή H 4-> S

Λ E _GO GO _ G O «.GO „GO -H £ .λ I 1 8^5 SS;H7 S3? S3S s i

*”·* § o Jee Är,ec KN§§ Br.Sc Kt.Sc .. X

• β· »H o Ι5ΗΛ «JH(0 «hio ΛΗΙ0 (dH(0 * U

*...* w « fciösfctosziögzrtjeztoa *3

* ω f* , 1-1___J._____=$ ^ -P

• « II» • ft* • * ft ft ft

Claims

37 1 1 7321

1. Stabiili, kylmäkuivattu ja farmaseuttisesti hyväksyttävä valmiste, tunnettu siitä, että se koostuu 5 proteiinista, puskuriaineesta, alaniinista ja mannitolista, jolloin suhde R, joka on mannitolin massa/alaniinin massa, on 0,1 - 1.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen valmiste, tunnettu siitä, että proteiini on hormoni, entsyymi tai sy- 10 tokiini.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen valmiste ruiskutettavan liuoksen muodostamiseksi uudelleen.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen valmiste ruiskutettavan liuoksen muodostamiseksi uudelleen, tunnettu 15 siitä, että liuos voidaan ruiskuttaa ihmiseen tai eläimiin ihonalaisesti, laskimonsisäisesti tai lihaksensisäisesti.

5. Patenttivaatimuksen 2 mukainen valmiste, tunnettu siitä, että hormoni on hGH.

6. Patenttivaatimuksen 2 mukainen valmiste, tun- 20 nettu siitä, että entsyymi on uraattioksidaasi.

7. Patenttivaatimuksen 2 mukainen valmiste, tun-nettu siitä, että sytokiini on interleukiini-13. • « t .

8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen valmiste, tun tui * · . nettu siitä, että alaniini on kiteisessä muodossa ja man- 25 nitoli on amorfisessa muodossa. » » · *· 1ί

9. Patenttivaatimuksen 1 mukainen valmiste, tun- 4 · ί.: ί nettu siitä, että kylmäkuivattu tuote koostuu amorfisesta « 2« V: faasista ja kiteisestä faasista, jolloin amorfinen faasi koostuu pääasiallisesti mannitolista ja proteiinista ja ki-: 30 teinen faasi pääasiassa alaniinista. ;3;

10. Patenttivaatimuksen 2 mukainen valmiste, tun- *. nettu siitä, että puskuri on fosfaattipuskuri. i · ·

11. Analyysipakkaus, tunnettu siitä, että se * 1 ’···1 sisältää patenttivaatimuksen 1 mukaisen valmisteen. » > 2 ♦ M • » Ψ 3 • 1 117321