TW201605468A - 長效人類生長激素接合物之製劑 - Google Patents

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金尙允
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Abstract

本發明係關於一種長效人類生長激素(hGH)接合物之製劑，其包含：長效人類生長激素接合物，其中，該人類生長激素作為生理活性胜肽係連結至免疫球蛋白Fc區域；緩衝液；非離子性界面活性劑及糖醇，具體而言為長效人類生長激素接合物之凍乾製劑及液態製劑；一種用於製備該凍乾製劑的方法；一種用於將該凍乾製劑再製的方法；以及一種套組，其包含該凍乾製劑及再製用溶液。

Description

長效人類生長激素接合物之製劑
本發明係關於一種長效人類生長激素接合物之製劑，其包含：長效人類生長激素(hGH)接合物，其中，該人類生長激素作為生理活性胜肽係連結至免疫球蛋白Fc區域；緩衝液；非離子性界面活性劑及糖醇，具體而言為長效人類生長激素接合物之凍乾製劑及液態製劑；一種用於製備該凍乾製劑的方法；一種用於將該凍乾製劑再製(reconstitution)的方法；以及一種套組，其包含該凍乾製劑及再製用溶液。
人類生長激素(下文中稱為"hGH")係由191個胺基酸所組成且具有約22,000的分子量之多肽激素，其係由腦下腺前葉所分泌。人類生長激素已大多數用於治療小兒腦下垂體性侏儒症。習知地，已使用萃取自人類腦下腺之hGH，但因其有限量的供應，僅有極少數人受到治療。又，由於在某些經萃取自腦下腺之hGH治療的患者中發現庫賈氏症(Creutzfeldt-Jacob disease)(一種退化性神經疾患)之報導，萃取自腦下腺之hGH的使用係受到禁止。目前， 基因工程技術的發展已能夠在大腸桿菌(E.coli)及酵母菌中製造hGH，且由此所製造之生物合成性hGH藥品自1985年以來已在數個國家受到核准並在通過毒理學試驗及臨床試驗後成為市售可得。
一般而言，諸如hGH之多肽具有較低的安定性，故而容易發生變性。又，其易於受到血清蛋白酶所降解且由腎臟或肝臟所去除。故而，含有多肽作為醫藥成分之蛋白質藥物必須頻繁地投予至患者以維持其血中濃度及效價。然而，由於蛋白質藥物通常係以注射形式投予，頻繁注射蛋白質藥物以維持活性多肽之最佳血中濃度對患者造成大量的疼痛。為了解決此等問題，已有許多嘗試來增加血中蛋白質藥物的安定性並將其血中濃度長時間維持在高濃度以使藥品之治療效果達到最大化。
近來，韓國專利第10-0567902號(具有增進的活體內持久性之生理活性多肽接合物)及韓國專利第10-0725315號(使用免疫球蛋白片段之蛋白質複合體以及其製備方法)係揭示藉由將生理活性多肽與免疫球蛋白Fc區域及非肽基聚合物進行連結所製備之接合物作為長效蛋白質藥物之製劑能夠同時最小限度降低蛋白質活性及增加蛋白質安定性。根據此等方法，可將hGH用作生理活性多肽來製備長效hGH接合物。為了使含有長效hGH接合物之藥物商品化，有必要在保存及運送過程期間防止物理化學變化，諸如變性、凝集、吸附、或因光、熱或添加劑中之雜質引發的降解所造成之水解，同時保有hGH之活體內 活性。由於相較於hGH多肽而言，長效hGH接合物具有較大的尺寸及增加的分子量，故難以使該接合物安定化。
凍乾(lyophilization)(冷凍乾燥)係藉由自感興趣的蛋白質製備物中去除水分而常用於保存蛋白質。凍乾係藉以首先將欲乾燥之材料進行冷凍並接著藉由昇華去除冰或冷凍溶劑之過程。賦形劑可含括在凍乾前之製劑內以在凍乾過程期間維持或提升蛋白質安定性或在保存期間增進經凍乾之產物的安定性。然而，可應用於一種蛋白質之凍乾製劑的組成通常係因所欲保存之蛋白質的特性上之差異而不可應用於其他蛋白質。具體而言，不同的蛋白質可因其不同的化學特性而在保存、凍乾及再製過程期間於不同條件下失去活性。即，藉由用於達成安定化的材料所提供之安定性上之提升對於不同的蛋白質而言並不相同，故，在保存、凍乾及再製過程期間用於提供安定性之安定劑的適當比例、濃度及種類係取決於蛋白質的物理化學特性而有所不同。當組合使用不同的安定劑時，在凍乾或保存過程期間因其競爭作用或不良反應可能會衍生出不希望的負面效果，且因蛋白質的本質或濃度上之變化可能會出現非預期的效果。因此，蛋白質安定化需要大量的努力及預防措施。
特定而言，由於具有增進的活體內持久性及安定性之長效hGH接合物具有其中人類生長激素作為生理活性胜肽係連結至免疫球蛋白Fc區域之形式，其分子量及體積與人類生長激素係大為不同。因此，需要特別的 組成用以使該蛋白質安定化。又，由於生理活性胜肽hGH及免疫球蛋白Fc區域各自具有不同的物理化學特性，應同時使該等安定化。然而，如上所述，不同的胜肽或蛋白質可能因其物理化學特性上之差異而於不同的比例及條件下逐漸失去活性。又，當同時使用適用於各胜肽或蛋白質之安定劑時，其可能因該等間之競爭交互作用及副作用而造成不良結果。再者，因所保存之蛋白質的特性及濃度可能在其保存期間改變，安定劑可能會顯現出非預期的副作用。因此，就長效hGH接合物而言，係難以找到適用於能夠同時使生理活性胜肽hGH及免疫球蛋白Fc區域兩者皆安定化之安定劑的組成。此外，就凍乾製劑而言，應以各種方式控制凍乾及再製的方法以在再製後維持蛋白質安定性及活性。此等方法亦可取決於製劑的組成及其所使用之蛋白質而有所不同。
除此以外，當凍乾製劑以高濃度包含蛋白質時，蛋白質可能會因高濃度而在凍乾期間發生凝集，而其操作處理亦將變得困難。因此，呈高濃度的蛋白質係習知地藉由製備以低濃度包含蛋白質的凍乾製劑並接著以少量體積將其再製而獲得，而並非是藉由施行凍乾並隨後進行高濃度蛋白質之再製而獲得。然而，若將蛋白質以少量體積再製，則不僅是蛋白質，含括於其中之其他成分對於欲直接應用於患者之製劑而言亦會變得過濃且過於高張。故，對於容許將高濃度蛋白質依其原有形式進行凍乾之製劑的開發係有所需求。
近來，已開發出為了患者的便利性可重複使用的蛋白質及胜肽之製劑。然而，此等多次使用型製劑應含有防腐劑以在重複投予後及丟棄前防止微生物污染。含有防腐劑之多次使用型製劑相較於單次使用型製劑而言具有數個優點。例如，就單次使用型製劑而言，取決於劑型可能會浪費掉大量藥物，當使用多次使用型製劑時可降低此種情況。再者，多次使用型製劑可在規定的期間使用數次而無須擔心微生物生長，此乃由於其能夠以單一容器之形式供應，可將包裝最小化，達到經濟效益。然而，防腐劑的使用可能會影響蛋白質安定性。與防腐劑的使用相關之最為人知的問題係沉澱物之形成。蛋白質的沉澱可能會降低藥物之治療效果以及在投予至體內時引發非預期的免疫反應。因此，選擇維持避免微生物污染的能力而不影響蛋白質安定性之適當類型及濃度的防腐劑係極為重要。
一般而言，呈溶液狀態之製劑係以注射器形式進行開發。最常用的類型為經預先填充之注射器，而更便利的自動注射器亦經常使用。此外，容許對患者自動注射所需劑量之筆型注射器係主要用於生長激素、胰島素等。儘管此等注射裝置便於進行呈溶液狀態之製劑的投予，但無法用於因較低的安定性而必須凍乾之藥物。
一般而言，凍乾製劑係與溶解用溶劑分開地製備於強化玻璃小瓶中。兩者係在即將使用注射器進行注射前混合以使凍乾製劑溶解。為了患者的便利性，目前的趨勢係由經凍乾之小瓶(例如，強化玻璃小瓶)朝向單次 使用型或多次使用型注射器。實例包括Vetter(德國)之雙腔室筒匣。
在此背景下，本發明之發明人已努力開發能夠在凍乾過程期間維持長效人類生長激素接合物的安定性且能夠長期保存該長效人類生長激素接合物之凍乾製劑，以及能夠安定地保存長效人類生長激素接合物之液態製劑。結果，本發明之發明人發現當使用包含緩衝液、糖醇及非離子性界面活性劑之安定劑時，在凍乾及保存期間長效hGH接合物的安定性係增加，故而可製備符合成本效益且安定的液態製劑。又，已證實當長效hGH接合物的濃度為10至58.5mg/mL時，可提供具有優異的安定性之不含氯化鈉之液態製劑。再者，已證實本發明之凍乾製劑不僅在保存及運送期間安定，其在再製時亦具有對皮下注射而言適當的滲透壓及安定性。此外，已證實該凍乾製劑可用作多次使用型製劑，此乃由於其即便含括防腐劑在內仍維持安定性。
本發明之目的在於提供一種長效人類生長激素接合物之製劑，其包含：長效人類生長激素(hGH)接合物，其中，該人類生長激素(hGH)作為生理活性胜肽係連結至免疫球蛋白Fc區域；緩衝液；非離子性界面活性劑及糖醇。
本發明之目的亦在於提供一種經凍乾之長 效hGH接合物之製劑，其包含經凍乾之水溶液混合物，該水溶液混合物包含：長效人類生長激素接合物，其中，該hGH作為生理活性胜肽係連結至免疫球蛋白Fc區域；以及不含白蛋白之溶液，其包含緩衝液、非離子性界面活性劑及糖醇。
本發明之目的亦在於提供一種長效hGH接合物之液態製劑，其包含：醫藥有效量的長效hGH接合物，其中，該hGH作為生理活性胜肽係連結至免疫球蛋白Fc區域；以及不含白蛋白之安定劑，其中，該安定劑包含緩衝液、非離子性界面活性劑及糖醇。
本發明之目的亦在於提供一種用於製備該製劑的方法。
本發明之目的亦在於提供一種用於將該凍乾製劑再製的方法，其包含將再製用溶液添加至該經凍乾之水溶液混合物中，該水溶液混合物包含：長效人類生長激素接合物，其中，該人類生長激素作為生理活性胜肽係連結至免疫球蛋白Fc區域；以及不含白蛋白之溶液，其包含緩衝液、非離子性界面活性劑及糖醇。
本發明之目的亦在於提供一種套組，其包含該經凍乾之長效hGH接合物之製劑。
在一態樣中，本發明係提供一種長效人類生長激素接合物之製劑，其包含：長效人類生長激素(hGH)接合物，其中，該人類生長激素(hGH)作為生理活性胜肽係 連結至免疫球蛋白Fc區域；緩衝液；非離子性界面活性劑及糖醇。
在另一態樣中，本發明係提供一種長效人類生長激素接合物之凍乾製劑，其包含經凍乾之水溶液混合物，該水溶液混合物包含：長效hGH接合物，其中，該hGH作為生理活性胜肽係連結至免疫球蛋白Fc區域；以及不含白蛋白之溶液，其包含緩衝液、非離子性界面活性劑及糖醇。
在一例示性具體例中，該緩衝液為醋酸鹽緩衝液、組胺酸緩衝液或檸檬酸鹽緩衝液。
在另一例示性具體例中，該緩衝液為醋酸鹽緩衝液。
在另一例示性具體例中，該醋酸鹽為醋酸鈉，且該檸檬酸鹽為檸檬酸鈉。
在另一例示性具體例中，該緩衝液之pH係介於5.0至6.0之範圍。
在另一例示性具體例中，該糖醇為甘露糖醇或山梨糖醇。
在另一例示性具體例中，該糖醇係以介於該水溶液的總體積之1%(w/v)至10%(w/v)之範圍的濃度被含括。
在另一例示性具體例中，該糖醇係以介於2.5%(w/v)至5%(w/v)之範圍的濃度被含括。
在另一例示性具體例中，該非離子性界面 活性劑為聚山梨糖醇酯80。
在另一例示性具體例中，該非離子性界面活性劑的濃度係介於該水溶液的總體積之0.001%(w/v)至0.05%(w/v)之範圍。
在另一例示性具體例中，該不含白蛋白之溶液進一步包含選自糖、多元醇及胺基酸所組成之群組之至少一者。
在另一例示性具體例中，該胺基酸為組胺酸或甘胺酸。
在另一例示性具體例中，該組胺酸的濃度係介於1至10mM之範圍。
在另一例示性具體例中，該長效hGH接合物的濃度係介於10至100mg/mL之範圍。
在另一例示性具體例中，該不含白蛋白之溶液進一步包含等張劑。
在另一例示性具體例中，該等張劑為氯化鈉。
在另一例示性具體例中，該氯化鈉的濃度係介於0至200mM之範圍。
在另一例示性具體例中，該凍乾製劑的容器為小瓶、雙腔室筒匣或雙腔室注射器。
在另一態樣中，本發明係提供一種長效hGH接合物之液態製劑，其包含：醫藥有效量的長效hGH接合物，其中，該hGH作為生理活性胜肽係連結至免疫球蛋白 Fc區域；以及不含白蛋白之安定劑，其中，該安定劑包含緩衝液、非離子性界面活性劑及糖醇。
在一例示性具體例中，該液態製劑不包含等張劑。
在另一例示性具體例中，該緩衝液為檸檬酸鹽緩衝液、醋酸鹽緩衝液或組胺酸緩衝液。
在另一例示性具體例中，該糖醇為甘露糖醇或山梨糖醇。
在另一例示性具體例中，該糖醇係以介於2%(w/v)至4.5%(w/v)之範圍的濃度被含括。
在另一例示性具體例中，該糖醇係以4%(w/v)的濃度被含括。
在另一例示性具體例中，該緩衝液之pH係介於5.0至6.0之範圍。
在另一例示性具體例中，該緩衝液之pH為5.2。
在另一例示性具體例中，該非離子性界面活性劑為聚山梨糖醇酯80。
在另一例示性具體例中，該非離子性界面活性劑的濃度係介於該製劑的總體積之0.001%(w/v)至0.05%(w/v)之範圍。
在另一例示性具體例中，該長效hGH接合物係以介於5.0mg/mL至60.0mg/mL之範圍的濃度含括在該製劑內。
在另一例示性具體例中，該hGH具有與野生型hGH相同的胺基酸序列。
在另一例示性具體例中，該免疫球蛋白Fc區域為衍生自IgG、IgA、IgD、IgE或IgM之Fc區域。
在另一例示性具體例中，該免疫球蛋白Fc區域之各結構域為具有不同來源的結構域之雜合體，該具有不同來源的結構域係衍生自選自IgG、IgA、IgD、IgE及IgM所組成之群組之免疫球蛋白。
在另一例示性具體例中，該免疫球蛋白Fc區域為單鏈免疫球蛋白所構成之二聚體或多聚體，該單鏈免疫球蛋白係由具有相同來源的結構域所組成。
在另一例示性具體例中，該免疫球蛋白Fc區域為IgG4 Fc區域。
在另一例示性具體例中，該免疫球蛋白Fc區域為無糖基化之人類IgG4 Fc區域。
在另一例示性具體例中，該接合物係呈下列此種形式：該hGH係經由非肽基聚合物作為連結子或經由基因重組而連結至該免疫球蛋白Fc。
在另一例示性具體例中，該非肽基聚合物係選自下列者所組成之群組：生物可降解性聚合物，諸如聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇與丙二醇之共聚物、聚氧乙基化多元醇、聚乙烯醇、多醣、葡聚糖、聚乙烯基乙基醚、聚乳酸(polylactic acid,PLA)及聚乳酸-乙醇酸(polylactic-glycolic acid,PLGA)、脂質聚合物、甲殼素、透 明質酸及其組合。
在另一例示性具體例中，該非肽基聚合物為聚乙二醇。
在另一例示性具體例中，該製劑係用於治療腦下垂體性侏儒症、生長激素缺乏症、普瑞德威利症候群(Prader-Willi syndrome)或自發性身材矮小。
在另一態樣中，本發明係提供一種經凍乾之長效hGH接合物之製劑，其包含經凍乾之水溶液混合物，該水溶液混合物包含：長效hGH接合物，其中，該hGH作為生理活性胜肽係連結至免疫球蛋白Fc區域；以及不含白蛋白之溶液，其包含醋酸鹽緩衝液、聚山梨糖醇酯80及甘露糖醇。
在另一態樣中，本發明係提供一種長效hGH接合物之液態製劑，其包含：醫藥有效量的長效hGH接合物，其中，該hGH作為生理活性胜肽係連結至免疫球蛋白Fc區域；以及不含白蛋白之安定劑，其包含檸檬酸鹽緩衝液、聚山梨糖醇酯80及甘露糖醇，該安定劑不包含等張劑。
在另一態樣中，本發明係提供一種用於製備該凍乾製劑的方法，其包含對長效hGH接合物以及不含白蛋白之溶液進行凍乾，其中，該人類生長激素作為生理活性胜肽係連結至免疫球蛋白Fc區域；該不含白蛋白之溶液包含緩衝液、非離子性界面活性劑及糖醇。
在另一態樣中，本發明係提供一種用於將該凍乾製劑再製的方法，其包含將再製用溶液添加至包含 在該凍乾製劑內的該經凍乾之水溶液混合物中，該水溶液混合物包含：長效hGH接合物，其中，該人類生長激素(hGH)作為生理活性胜肽係連結至免疫球蛋白Fc區域；以及不含白蛋白之溶液，其包含緩衝液、非離子性界面活性劑及糖醇。
在一例示性具體例中，該再製用溶液為注射用水。
在另一例示性具體例中，該再製用溶液進一步包含防腐劑。
在另一例示性具體例中，該防腐劑為苄醇、間甲酚或苯酚。
在另一例示性具體例中，藉由該方法所再製之該製劑以介於10至100mg/mL之範圍的濃度包含該長效hGH接合物。
在另一態樣中，本發明係提供一種套組，其包含該經凍乾之長效hGH接合物之製劑。
由於本發明之長效hGH接合物之製劑不包含人類血清白蛋白或任何潛在性有害因子，故無須擔心病毒污染。此外，該製劑容許高安定性的長效hGH接合物，其係藉由將hGH多肽連結至免疫球蛋白Fc區域而製備，故而相較於野生型時具有較大的分子量以及增加的活體內持久性。特定而言，該凍乾製劑不僅在凍乾期間亦在再製後提供優異的安定性，且即便其含有防腐劑亦維持安定 性，故而有用於作為用於多次投予之製劑。
第1圖係顯示本發明之凍乾過程中所使用之溫度梯度。
第2圖係顯示本發明之凍乾過程中所使用之溫度梯度，其中，初級乾燥係分成二個階段。
第3a圖係顯示本發明中所使用之強化玻璃小瓶。
第3b圖係顯示Vetter之雙腔室筒匣。
在一態樣中，本發明係提供一種長效人類生長激素接合物之製劑，其包含：長效人類生長激素(hGH)接合物，其中，該hGH作為生理活性胜肽係連結至免疫球蛋白Fc區域；緩衝液；非離子性界面活性劑及糖醇。
在本文中使用時，術語"長效人類生長激素(hGH)接合物"係指其中生理活性胜肽人類生長激素係連結至免疫球蛋白Fc區域且相較於野生型hGH時其生理活性具有增加的活體內持久度之接合物。術語"長效"在本文中使用時意指生理活性相較於野生型hGH而言具有更長的持久度。在本文中使用時，術語"接合物"係指其中人類生長激素係耦接至免疫球蛋白Fc區域之形式。
具體而言，該製劑可為經凍乾之長效hGH接合物之製劑，其包含經凍乾之水溶液混合物，該水溶液混合物包含：長效hGH接合物，其中，該hGH作為生理 活性胜肽係連結至免疫球蛋白Fc區域；以及不含白蛋白之溶液，其包含緩衝液、非離子性界面活性劑及糖醇。
在本文中使用時，術語"經凍乾之長效hGH接合物之製劑"係指包含長效hGH接合物之凍乾製劑。其包括：包含以固態存在的材料之製劑，該以固態存在的材料係藉由將長效hGH接合物及用以使該長效hGH接合物安定化之物質(諸如賦形劑)進行凍乾而獲得。在本發明中，凍乾製劑包括經凍乾之物質本身。經凍乾之物質亦可稱為經凍乾之塊狀物。
凍乾製劑係藉由使水自預備製劑中昇華之凍乾過程所製備，該預備製劑包含長效hGH接合物及用以使該長效hGH接合物安定化之賦形劑。在本發明中，經凍乾之長效hGH接合物之製劑可包含治療有效量的長效hGH接合物，且治療有效量的hGH可含納於單次使用型容器或多次使用型容器內，儘管不限定於此。
凍乾製劑可含納於小瓶(例如，強化玻璃小瓶)、雙腔室筒匣或雙腔室注射器內，儘管不限定於此。
本發明之凍乾製劑具有能夠在凍乾過程期間使長效hGH接合物安定化且在保存後將其再製時能夠維持製劑的安定性之組成。特定而言，即便長效hGH接合物係以介於10mg/mL至100mg/mL之範圍的高濃度含括在內，本發明之凍乾製劑仍能夠提供安定性。
經凍乾之長效hGH接合物之製劑可保存於容器中且在投予至有需要的對象時予以再製。
在本文中使用時，術語"再製"意指使呈固態的經凍乾之物質液化以容許投予hGH接合物。在再製後，含括在本發明之凍乾製劑內的長效hGH接合物的濃度係介於1mg/mL至150mg/mL之範圍，具體而言，介於10mg/mL至120mg/mL之範圍，更具體而言，介於10mg/mL至100mg/mL之範圍，儘管不限定於此。
可將溶劑添加至含有經凍乾之物質的小瓶中或將溶劑添加至含納於單次使用型注射器或多次使用型注射器內的經凍乾之物質中而使經凍乾之物質溶解，藉此實施再製，但不特別限定於此。
本發明之經凍乾之長效hGH接合物之製劑相較於現有的液態製劑而言有利之處係在於可安定地保存hGH接合物且可控制該接合物之有效濃度。再製後的濃度可與凍乾前之製劑在凍乾過程期間的濃度相同或不同。
本發明之凍乾製劑包含經凍乾之水溶液混合物，該水溶液混合物包含：長效hGH接合物；以及不含白蛋白之溶液，其包含緩衝液、非離子性界面活性劑及糖醇。
在本文中使用時，術語"不含白蛋白之溶液"係指能夠容許在凍乾及再製過程期間安定地保存長效hGH接合物並維持其安定性之物質。特定而言，不含白蛋白之溶液係指包含長效hGH接合物及使該長效hGH接合物安定化之賦形劑的水溶液，故而其在凍乾過程期間提供長效hGH接合物的安定性並容許製備具有保存安定性的凍乾製 劑。具體而言，該水溶液包含緩衝液、糖醇及非離子性界面活性劑。另外，等張劑可含括在內以調整滲透壓。就蛋白質(諸如長效hGH接合物)而言，保存安定性不僅對確保精確的投予劑量而言很重要，對抑制抗長效hGH接合物的抗原物質之潛在形成而言亦很重要。在本發明中，術語"不含白蛋白之溶液"可與"預製劑(preformulation)"交換使用。
由於長效hGH接合物的濃度可藉由調整添加至凍乾製劑中之再製用溶液的體積而進行控制，故長效hGH接合物在不含白蛋白之溶液中的濃度並未特別限定。然而，本發明之製劑有利之處係在於即便是以10至100mg/mL或更高的高濃度包含長效hGH接合物之不含白蛋白之溶液仍可安定地進行凍乾，所製備的凍乾製劑可在3分鐘內迅速地溶解且在經再製之溶液中可維持長效hGH接合物的安定性。
該水溶液不含人類血清白蛋白。由於可用作蛋白質安定劑之人類血清白蛋白係由人類血清所製造，故有受到衍生自人類的致病性病毒污染之風險。此外，明膠或牛血清白蛋白可能會造成疾病或可能會在某些患者中引發過敏反應。由於本發明之不含白蛋白之溶液蛋白質不含異源性蛋白質，諸如衍生自人類或動物的血清白蛋白或經純化之明膠，故不會有病毒感染之風險。
在本文中使用時，術語"緩衝液"係指包含在本發明之不含白蛋白之溶液中且作用於在凍乾或再製過程後維持製劑之安定的pH水平以便防止製劑pH之急劇變化 而使長效hGH接合物的活性保持安定之溶液。緩衝液可包括鹼性鹽(例如，磷酸鈉或磷酸鉀、或其單鹼式鹽或二鹼式鹽)、檸檬酸鹽(例如，檸檬酸鈉或檸檬酸)、醋酸鹽(例如，醋酸鈉或醋酸)、組胺酸、該項技術中已知的任何其他醫藥上可接受之pH緩衝劑、或其組合。具體而言，緩衝液可為醋酸鹽緩衝液、組胺酸緩衝液或檸檬酸鹽緩衝液，更具體而言，醋酸鹽緩衝液或檸檬酸鹽緩衝液，儘管不限定於此。
具體而言，構成緩衝液之檸檬酸鹽或醋酸鹽的濃度係介於5至100mM之範圍，更具體而言，介於10至50mM之範圍，儘管不限定於此。具體而言，緩衝液之pH係介於4.0至7.0之範圍，更具體而言，介於5.0至6.0之範圍，再更具體而言，介於5.2至6.0之範圍，儘管不限定於此。
在本文中使用時，術語"糖醇"係指包含在本發明之凍乾製劑中且作用於在凍乾過程期間保護長效hGH接合物之蛋白質並在再製後增進長效hGH接合物的安定性之氫化碳水化合物。本發明中所使用之糖醇的濃度可介於製劑的總體積之1至10%(w/v)之範圍，儘管不限定於此。具體而言，糖醇的濃度可介於2.5至5%(w/v)之範圍。當糖醇的濃度係在此範圍內時，藉由使用與預製劑相同體積的再製用溶液進行再製所獲得之經再製之製劑可具有對應於等張溶液之滲透壓，儘管不限定於此。
本發明中所使用之糖醇可為選自甘露糖醇 及山梨糖醇所組成之群組之至少一者，具體而言，甘露糖醇，但不特別限定於此。含括在本發明之製劑內，糖醇(諸如甘露糖醇)可有助於調整滲透壓。具體而言，藉由將本發明之凍乾製劑進行再製所獲得之製劑可為等張性。然而，高張性或低張性製劑亦適用於本發明。
在本文中使用時，術語"非離子性界面活性劑"係指降低蛋白質溶液之界面張力以防止蛋白質被吸附至疏水界面上或在再製後發生凝集之物質。本發明中可使用之非離子性界面活性劑之具體實例包括聚山梨糖醇酯型非離子性界面活性劑、泊洛沙姆(poloxamer)型非離子性界面活性劑及其組合。更具體而言，可使用聚山梨糖醇酯型非離子性界面活性劑。聚山梨糖醇酯型非離子性界面活性劑之實例包括聚山梨糖醇酯20、聚山梨糖醇酯40、聚山梨糖醇酯60及聚山梨糖醇酯80，且該等之中，聚山梨糖醇酯80係較佳，儘管不限定於此。將非離子性界面活性劑以高濃度添加至製劑中可能並不恰當，此乃由於當經由諸如UV光譜法或等電聚焦(isoelectric focusing，IEF)之分析方法對蛋白質進行分析以測定蛋白質濃度或安定性時，呈高濃度的非離子性界面活性劑可能會造成干擾效應，故而難以精確地測定蛋白質安定性。因此，具體而言，本發明之凍乾製劑可以0.1%(w/v)或更低的低濃度包含非離子性界面活性劑，更具體而言，介於0.001至0.1%(w/v)之範圍，再更具體而言，介於0.001至0.05%(w/v)之範圍，儘管不限定於此。
具體而言，不含白蛋白之溶液可進一步包含選自糖、多元醇及胺基酸所組成之群組之至少一者。本發明之發明人已證實，當進一步添加組胺酸作為胺基酸時，可增進溶解速率且可在不發生起泡之情況下達成再製。
可進一步含括在內以增加長效hGH接合物的保存安定性之糖之具體實例包括單醣，諸如甘露糖、葡萄糖、海藻糖及木糖；以及多醣，諸如乳糖、麥芽糖、蔗糖、棉籽糖及葡聚糖。多元醇之具體實例包括丙二醇、低分子量聚乙二醇、甘油、低分子量聚丙二醇及其組合。胺基酸之實例包括組胺酸或甘胺酸，儘管不限定於此。組胺酸等可在水溶液中以介於1至10mM之範圍的濃度存在，儘管不限定於此。
不含白蛋白之溶液可進一步包含用於控制滲透壓之等張劑。
在本文中使用時，術語"等張劑"係指當進行再製後將長效hGH接合物投予至體內時維持恰當的滲透壓之試劑。等張劑可具有進一步使溶液中之長效hGH接合物安定化之效果。例如，等張劑可為水溶性無機鹽，具體而言，氯化鈉，儘管不限定於此。具體而言，本發明中所使用之氯化鈉的濃度係介於0至200mM之範圍，儘管不限定於此。又，取決於製劑中所包含之物質的類型及量，可調整含括在內之等張劑的量，以便使包含所有成分之溶液製劑成為等張性。
不含白蛋白之溶液可在稀釋1/2倍、1/4倍 或更進一步後進行凍乾。本發明之發明人已證實當不含白蛋白之溶液係在稀釋1/2倍或1/4倍後進行凍乾時，可減少溶解時間(試驗例1-(5))。
包含經凍乾之混合物的本發明之凍乾製劑係顯現出優異的溶解時間。溶解時間係經凍乾之物質的其中一項重要特性。若溶解時間長，則蛋白質必須長時間暴露於濃縮溶液，在此期間其可能會發生變性。又，由於不完全溶解的產物無法進行投予，故短溶解時間對患者及醫師雙方而言可提供便利性。然而，溶解時間係不可避免地會隨著蛋白質濃度增加而增加。故，具有短溶解時間的製劑之開發對高濃度的凍乾製劑而言可為重要的議題。
本發明之發明人已證實本發明之凍乾製劑係在短至10秒且長至3分鐘內溶解，即便其係以10mg/mL或更高的高濃度包含長效hGH接合物。
凍乾產物的所欲劑量可藉由將具有所欲濃度的目標蛋白質進行凍乾並接著將其以某體積的預製劑進行再製而達成，儘管不特別限定於此。或者，可經由稀釋而將預製劑以增加的體積進行凍乾並接著使用具有較少量體積的再製用溶液進行再製。然而，若預製劑係過度稀釋，則凍乾週期(特定而言，初級乾燥時間)可能會延長，故而可能增加製造成本。故，本發明之製劑就成本而言亦有利之處係在於即便是高濃度的長效hGH接合物仍可在不過度稀釋之情況下進行凍乾。
此外，除了上述緩衝液、等張劑、糖醇、 非離子性界面活性劑及含括在再製用溶液內之防腐劑以外，除非其會減弱本發明之效果，否則本發明之凍乾製劑可進一步包含該項技術中已知的其他成分或材料。
作為預製劑，本發明之發明人係製備凍乾製劑，其包含：長效hGH接合物；以及不含白蛋白之溶液，其包含緩衝液、糖醇及界面活性劑，並評估其安定性及溶解速率。具體而言，長效hGH接合物係使用包含pH 5.2或pH 5.6的20mM檸檬酸鹽緩衝液、150mM氯化鈉、5%甘露糖醇及0.005%聚山梨糖醇酯80之凍乾前之製劑以19.5mg/mL或78.0mg/mL的濃度進行凍乾並接著使用蒸餾水進行再製。優異的安定性係以上述濃度較優。特定而言，安定性係以78.0mg/mL的較高濃度較佳。又，良好的安定性係於pH 5.2及5.6兩者達成(試驗例1-(1))。此外，當將長效hGH接合物溶解於包含pH 5.2或pH 5.6的20mM醋酸鹽緩衝液、150mM NaCl、5%甘露糖醇及0.005%聚山梨糖醇酯80之凍乾前之製劑中並接著使用包含間甲酚、苄醇或苯酚作為防腐劑之再製用溶液進行再製時，安定性係受到維持。此結果證實具有受保存之活性的經再製之製劑可藉由將經凍乾之物質以包含防腐劑之再製用溶液進行再製而製備。特定而言，當使用醋酸鹽水溶液時，即便再製係使用包含防腐劑之再製用溶液實施，仍可在不產生沉澱之情況下達成優異的安定性(試驗例1-(2))。再者，已證實所製備的凍乾製劑的溶解時間係隨著接合物的濃度自19.5mg/mL增加至39.0mg/mL、至58.5mg/mL、以及至70.0 mg/mL而增加(試驗例1-(3))。此外，即便不含白蛋白之溶液不含鹽仍達成優異的溶解時間及安定性，且溶解速率可藉由增加甘露糖醇的濃度而增加。以及，當添加組胺酸時，有可能在不增加甘露糖醇的濃度之情況下減少溶解時間(試驗例1-(4))。另外，本發明人發現當將預製劑進行稀釋以減低密度時，溶解速率係進一步增進(試驗例1-(5))，並已建立最佳化的乾燥條件，在此條件下經凍乾之物質可完全乾燥(試驗例1-(6))。亦已證明甘露糖醇的存在大為影響溶解時間(試驗例1-(7))，以及即便是針對58.5mg/mL之高濃度的長效hGH接合物，當甘露糖醇係濃度4至4.5%時，仍能夠以30秒或更少的溶解時間達成等張滲透壓(試驗例1-(8))。此外，即便在將所製備的凍乾製劑於4℃或25℃保存6個月後，安定性仍維持幾乎不變。又，即便在再製後將凍乾製劑於25℃保存2週後，安定性仍受到維持(試驗例1-(9))。
具體而言，該製劑可為長效hGH接合物之液態製劑，其包含：長效hGH接合物，其中，該hGH作為生理活性胜肽係連結至免疫球蛋白Fc區域；以及不含白蛋白之安定劑，其中，該安定劑包含緩衝液、非離子性界面活性劑及糖醇。
該長效hGH接合物係與以上所述者相同。
在本文中使用時，術語"長效hGH接合物之液態製劑"係指包含長效hGH接合物之液態製劑。液態製劑包括供內部及外部施用之液態製劑兩者。在本發明中， 長效hGH接合物之液態製劑可包含醫藥有效量的長效hGH接合物。一般而言，醫藥有效量的hGH係對應於單次使用型小瓶中之約1至3mg，但不限定於此。
以及，具體而言，本發明之液態製劑中所包含之長效hGH接合物的濃度係介於5.0至60.0mg/mL之範圍，儘管不限定於此。
長效hGH接合物之液態製劑包含醫藥有效量的長效hGH接合物及不含白蛋白之安定劑。
在本文中使用時，術語"安定劑"係指容許長效hGH接合物被安定地保存之物質。具體而言，安定劑包含緩衝液、糖醇及非離子性界面活性劑。關於諸如長效hGH接合物之蛋白質，保存安定性對確保劑量精確性及抑制抗長效hGH接合物的潛在抗原之形成而言很重要。
在本文中使用時，術語"緩衝液"係指包含在本發明之安定劑中且作用於維持製劑之安定pH水平，藉此防止pH之急劇變化以使長效hGH接合物的活性維持安定之溶液。以上關於凍乾製劑所陳述之對緩衝液的說明亦適用於此。
緩衝液可為檸檬酸鹽緩衝液、醋酸鹽緩衝液或組胺酸緩衝液，具體而言為檸檬酸鹽緩衝液，儘管不限定於此。具體而言，構成緩衝液之鹽的濃度係介於5至100mM之範圍，更具體而言，介於10至50mM之範圍，儘管不限定於此。緩衝液之pH係介於4.0至7.0之範圍，更具體而言，介於5.0至6.0之範圍，再更具體而言，介於 5.2至6.0之範圍，最具體而言為5.2，儘管不限定於此。
在本文中使用時，術語"糖醇"係指包含在本發明之液態製劑中且作用於增進長效hGH接合物的安定性之氫化碳水化合物。具體而言，本發明中所使用之糖醇的濃度係介於製劑的總體積之1至10%(w/v)之範圍，更具體而言，介於2%(w/v)至4.5%(w/v)之範圍，再更具體而言，4%(w/v)，儘管不限定於此。本發明中所使用之糖醇可為選自甘露糖醇及山梨糖醇所組成之群組之至少一者，具體而言為甘露糖醇，儘管不特別限定於此。
在本文中使用時，術語"非離子性界面活性劑"係指降低蛋白質溶液之界面張力以防止蛋白質被吸附至疏水界面上或發生凝集之物質。本發明中可使用之非離子性界面活性劑之具體實例係與以上所述者相同。
本發明之該製劑可為不含等張劑者。
該等張劑係與以上所述者相同。
本發明之發明人發現包含pH 5.2的醋酸鹽或檸檬酸鹽水溶液作為緩衝液且包含4%(w/v)甘露糖醇但不包含等張劑之製劑係顯現出優異的安定性。特定而言，包含pH 5.2的檸檬酸鹽水溶液作為緩衝液且包含4%(w/v)甘露糖醇但不包含等張劑之製劑係於10.0mg/mL的長效hGH接合物濃度顯現出最高的安定性。
可進一步含括在內以增加長效hGH接合物的保存安定性之糖之具體實例係與以上所述者相同。此外，除了上述緩衝液、糖醇及非離子性界面活性劑以外， 除非其會減弱本發明之效果，否則本發明之液態製劑可進一步包含該項技術中已知的其他成分或材料。
特定而言，本發明之液態製劑可進一步包含防腐劑。
已發現當其包含4%甘露糖醇(w/v)時，不含等張劑之長效hGH接合物之製劑係在pH 5.2的緩衝液中顯現出長效hGH接合物的最佳安定性。特定而言，當使用醋酸鹽緩衝液時，係於10.0mg/mL的長效hGH接合物濃度達成最佳安定性(試驗例2)。
本發明之製劑可用於治療腦下垂體性侏儒症、生長激素缺乏症、普瑞德威利症候群或自發性身材矮小，且可在將其再製後進行注射以治療該等疾病。
下文中，係詳細說明長效hGH接合物。
在本文中使用時，術語"人類生長激素(hGH)"係指在人類中刺激生長、細胞增殖及再生之胜肽激素。hGH的序列之資訊可得自公共資料庫，諸如NCBI GenBank。此外，本發明中之hGH的範疇包括：擁有對野生型hGH之胺基酸序列具有70%或更高，具體而言，80%或更高，更具體而言，90%或更高，再更具體而言，95%或更高，最具體而言，98%或更高之序列同源性的胺基酸序列之蛋白質，只要其具有hGH活性即可。又，只要其生物活性不顯著地改變，藉由胺基酸殘基之取代、缺失、或插入而衍生自野生型hGH之任何突變體皆可用於本發明中。
有用於本發明之hGH可具有野生型hGH、 其變體、其衍生物之胺基酸序列、或其片段。
在本文中使用時，術語"hGH變體"係指具有至少一個胺基酸序列與野生型hGH不同並同時展現出hGH活性之胜肽。hGH變體可藉由進行野生型hGH的某些胺基酸之取代、添加、缺失、或修飾或其組合而製備。
在本文中使用時，術語"hGH衍生物"係指對野生型hGH具有至少80%胺基酸序列同源性且顯現出hGH活性之胜肽，其中，某些群組的胺基酸殘基係經化學取代(例如，α-甲基化、α-羥基化)、缺失(例如，去胺化)、或修飾(例如，N-甲基化)。
在本文中使用時，術語"hGH片段"係指其中在hGH的N終端或C終端添加或缺失至少一個胺基酸並同時保有hGH活性之胜肽。所添加的胺基酸係並非天然存在者(例如，D-胺基酸)。
此外，本發明中所使用之hGH可得自天然或重組蛋白質。具體而言，其係藉由使用大腸桿菌作為宿主細胞所製備之重組hGH，儘管不限定於此。
在本文中使用時，術語"免疫球蛋白Fc區域"係指排除免疫球蛋白之重鏈及輕鏈的可變區、重鏈恒定區1(CH1)及輕鏈恒定區1(CL1)的免疫球蛋白之部分。免疫球蛋白Fc區域可為免疫球蛋白之重鏈恒定區2(CH2)及重鏈恒定區3(CH3)，且可進一步包含在重鏈恒定區之鉸鏈區，儘管不限定於此。又，只要其具有相較於野生型蛋白質而言實質上相同或增進的效果，本發明之免疫球蛋白Fc區域 可為經延長之Fc區域，其包含除了免疫球蛋白之重鏈及輕鏈的可變區以外之重鏈恒定區1(CH1)及/或輕鏈恒定區1(CL1)之一部分或全部。又，免疫球蛋白Fc區域可為其中對應於CH2及/或CH3之胺基酸序列之相當長的部分係缺失之片段。即，本發明之免疫球蛋白Fc區域可包含：1)CH1結構域、CH2結構域、CH3結構域及CH4結構域；2)CH1結構域及CH2結構域；3)CH1結構域及CH3結構域；4)CH2結構域及CH3結構域；5)至少一個結構域及免疫球蛋白鉸鏈區(或鉸鏈區之一部分)之組合；以及6)重鏈恒定區及輕鏈恒定區的結構域之二聚體，儘管不限定於此。
本發明之免疫球蛋白Fc區域包含天然胺基酸序列及其胺基酸序列衍生物(突變體)。胺基酸序列衍生物係指藉由天然胺基酸序列的至少一個胺基酸殘基之缺失、插入、非保守性或保守性取代、或其組合而具有與天然序列不同的序列之序列。例如，在IgG Fc中，於已知對蛋白質結合而言很重要的位置214至238、297至299、318至322、或327至331之胺基酸殘基可為用於進行修飾之適當目標。
又，可使用其他類型的衍生物，包括其中能夠形成雙硫鍵的區域係缺失、在天然Fc的N終端消除數個胺基酸殘基、或在天然Fc的N終端添加甲硫胺酸殘基之衍生物。另外，為了消除效應子(effector)之功能，可缺失補體結合部位，例如C1q結合部位或抗體依賴性細胞媒介的細胞毒殺作用(antibody dependent cell mediated cytotoxicity, ADCC)部位。用於製備該等免疫球蛋白Fc區域之序列衍生物的技術係揭示於WO 97/34631及WO 96/32478中。
不會改變整體蛋白質活性的在蛋白質及胜肽中之胺基酸之取代係該項技術中已知者(H.Neurath,R.L.Hill,The Proteins,Academic Press,New York,1979)。最常發生的轉換係朝雙向之Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Thy/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu及Asp/Gly。在某些情形中，Fc區域可藉由磷酸化、硫酸化、丙烯醯化、糖基化、甲基化、法尼基化(farnesylation)、乙醯化、醯胺化等進行修飾。前述Fc衍生物係展現出與本發明之Fc區域相同的生物活性，且其具有耐熱、pH等之提升的結構安定性。
此外，此等Fc區域可得自單離自人類或其他動物(包括牛、羊、豬、小鼠、兔、倉鼠、大鼠及天竺鼠)之天然蛋白質，或可為得自經轉形之動物細胞或微生物或其衍生物之重組體。此處，自天然免疫球蛋白獲得Fc區域之方法可包括自人類或動物體內將整個免疫球蛋白單離並以蛋白酶對其進行處理。當使用木瓜蛋白酶來消化免疫球蛋白時，其係被切成Fab及Fc區域，而當使用胃蛋白酶時，免疫球蛋白則被切成pF'c及F(ab)2。可藉由尺寸排除層析分離此等片段以單離出Fc或pF'c。具體而言，人類衍生之Fc區域係得自微生物之重組免疫球蛋白Fc區域。
此外，本發明之免疫球蛋白Fc區域可呈天 然糖鏈、相較於天然型而言更長的糖鏈、相較於天然型而言更短的糖鏈之形式、或去糖基化形式。免疫球蛋白Fc糖鏈之延長或去除可藉由使用該項技術中常用的方法(包括化學法、酵素法、及使用微生物之基因工程法)來完成。自免疫球蛋白Fc區域去除糖鏈會導致其對第一補體成分C1的C1q之結合親和性急劇減低，故而降低或去除抗體依賴性細胞媒介的細胞毒殺作用或補體依賴性細胞毒殺作用，而可避免在活體內發生不必要的免疫反應。就此而言，作為用於本發明之目的之藥物載體，去糖基化或無糖基化之免疫球蛋白Fc區域係更佳的形式。
此外，免疫球蛋白Fc區域可為衍生自IgG、IgA、IgD、IgE及IgM者，或藉由其組合或雜合體所製備者。具體而言，免疫球蛋白Fc區域係衍生自IgG或IgM，其係在人類血液中最富含的蛋白質，最具體而言，衍生自IgG，其係已知會提升配體結合型蛋白質之半衰期。免疫球蛋白Fc可藉由以特定蛋白酶對天然IgG進行處理而產生，或使用基因重組技術藉由經轉形之細胞而產生。具體而言，免疫球蛋白Fc係在大腸桿菌中所製造之重組人類免疫球蛋白Fc。
同時，在本文中使用時，術語"組合"係指當形成二聚體或多聚體時，編碼出相同來源的單鏈免疫球蛋白Fc區域之多肽與不同來源的單鏈多肽間之接合。即，二聚體或多聚體可由選自IgG Fc、IgA Fc、IgM Fc、IgD Fc及IgE Fc片段所組成之群組之二或更多個片段所形成。
在本文中使用時，術語"雜合體"係指對應於不同來源的免疫球蛋白Fc片段之至少二個序列存在於單鏈免疫球蛋白Fc區域中。在本發明中，可使用各種類型的雜合體。即，結構域的雜合體可由選自IgG Fc、IgM Fc、IgA Fc、IgE Fc及IgD Fc的CH1、CH2、CH3及CH4所組成之群組之一至四個結構域所構成，且可包含鉸鏈區。
同時，IgG亦可分成亞群IgG1、IgG2、IgG3及IgG4，且其組合或雜合體亦合適於本發明，具體而言，IgG2及IgG4亞群，最具體而言，缺少效應子功能(諸如補體依賴性細胞毒殺作用)之IgG4的Fc區域。換言之，本發明中之接合物之最佳免疫球蛋白Fc區域係人類IgG4衍生之非糖基化Fc區域。人類衍生之Fc區域係優於非人類衍生之Fc區域，非人類衍生之Fc區域可能會在人體內作用為抗原且造成不期望的免疫反應，諸如抗該抗原的新抗體之製造。
將藉由任何方法自天然或重組型製備之hGH、與藉由以特定蛋白酶對野生型IgG進行處理所製備或藉由使用重組技術自經轉形之細胞所製造之免疫球蛋白Fc區域進行組合，藉此可製備本發明之長效hGH接合物。
作為用於此目的之組合方法，接合物係可藉由使用非肽基聚合物將hGH及免疫球蛋白Fc區域進行交聯而製備，或可以其中hGH及免疫球蛋白Fc區域係使用重組技術進行連結之融合蛋白形式製造。即，接合物可以其中hGH與免疫球蛋白Fc係經由非肽基連結子進行連 結之形式、或以hGH及免疫球蛋白Fc的融合蛋白之形式製造。融合蛋白包含其中hGH及免疫球蛋白Fc係經由肽基連結子進行組合之形式，儘管不限定於此。
在本文中使用時，術語"非肽基聚合物"係指其中二或更多個重複單元係進行結合且該重複單元係藉由除了胜肽鍵結以外之任何共價鍵結彼此連接之生物相容性聚合物。在本發明中，術語"非肽基聚合物"可與術語"非肽基連結子"交換使用。
用於進行交聯之非肽基聚合物可選自下列者所組成之群組：生物可降解性聚合物，包括聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇-丙二醇共聚物、聚氧乙基化多元醇、聚乙烯醇、多醣、葡聚糖、聚乙烯基乙基醚、聚乳酸(PLA)或聚乳酸-乙醇酸(PLGA)、脂質聚合物、甲殼素、透明質酸及其組合。具體而言，可使用聚乙二醇(PEG)，儘管不限定於此。此外，此項技術中已知的其衍生物及可藉由此項技術中已知的方法輕易製備之其衍生物可含括在本發明之範疇內。
就本發明之長效hGH接合物之製備而言，諸如韓國專利第0725315號之參考資料係揭示於本發明中作為引用參考資料。熟習該項技術者可藉由查閱該等參考資料而製造本發明之長效hGH接合物，儘管不限定於此。
在另一態樣中，本發明係提供一種經凍乾之長效hGH接合物之製劑，其包含經凍乾之水溶液混合物，該水溶液混合物包含：長效hGH接合物，其中，該hGH 作為生理活性胜肽係連結至免疫球蛋白Fc區域；以及不含白蛋白之溶液，其包含醋酸鹽緩衝液、聚山梨糖醇酯80及甘露糖醇。
該hGH、該免疫球蛋白Fc區域、該長效hGH接合物、該不含白蛋白之溶液、該凍乾及該凍乾製劑係與以上所述者相同。
在另一態樣中，本發明係提供一種長效hGH接合物之液態製劑，其包含：醫藥有效量的長效hGH接合物，其中，該hGH作為生理活性胜肽係連結至免疫球蛋白Fc區域；以及不含白蛋白之安定劑，其包含檸檬酸鹽緩衝液、聚山梨糖醇酯80及甘露糖醇，該安定劑不包含等張劑。
該hGH、該免疫球蛋白Fc區域、該長效hGH接合物、該不含白蛋白之安定劑及該液態製劑係與以上所述者相同。
在另一態樣中，本發明係提供一種用於製備該凍乾製劑的方法，其包含對下列者進行凍乾：長效hGH接合物；以及不含白蛋白之溶液，其包含緩衝液、非離子性界面活性劑及糖醇。
該長效hGH接合物、該緩衝液、該非離子性界面活性劑、該糖醇、該不含白蛋白之溶液、該凍乾及該凍乾製劑係與以上所述者相同。
在另一態樣中，本發明係提供一種用於將該凍乾製劑再製的方法，其包含將再製用溶液添加至該凍乾製劑中。
該凍乾製劑及該再製係與以上所述者相同。
在本文中使用時，術語"再製用溶液"係指添加至呈固態的經凍乾之物質中以將其再製之溶液。再製用溶液可為注射用水，例如，經殺菌之蒸餾水，但不特別限定於此。
又，再製用溶液可進一步包含防腐劑。
在本文中使用時，術語"防腐劑"係指實質上降低製劑中之細菌或真菌污染之物質。尤其，其係包含在製劑中以幫助用於多次投藥的製劑之製造。防腐劑之實例包括氯化十八基二甲基苄基銨、氯化六羥季銨(hexamethonium chloride)、氯化苄二甲烴銨(benzalkonium chloride)(具有長烷基鏈的氯化烷基苄基二甲基銨之混合物)、及氯化苄乙氧銨(benzethonium chloride)。其他類型的防腐劑包括：芳香族醇，諸如苯酚、丁醇及苄醇；對羥苄酸烷酯，諸如對羥苄酸甲酯或對羥苄酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚，但不限定於此。具體而言，本發明之液態製劑中之防腐劑為苄醇、間甲酚或苯酚，更具體而言為苄醇，儘管不限定於此。具體而言，防腐劑的濃度係介於0.001至0.9%(w/v)之範圍，更具體而言，介於0.1至0.9%(w/v)之範圍，儘管不限定於此。
如上所述般進行再製之本發明之製劑可以介於10至100mg/mL之範圍的濃度含有長效hGH接合物，儘管不限定於此。
在另一態樣中，本發明係提供一種套組， 其包含該凍乾製劑及再製用溶液。
該凍乾製劑係與以上所述者相同。
該套組包含該凍乾製劑及再製用溶液，且可進一步包含：包含有適用於進行再製的至少一種其他成分之組成物、溶液或裝置。
下文中，本發明係參照實施例予以更詳細說明。然而，此等實施例僅用於例示性目的，且本發明並不意圖受到此等實施例所侷限。
製備例：長效人類生長激素(hGH)接合物的製備
將ALD-PEG-ALD(其係具有約3.4kDa的分子量且在兩末終端具有醛基之聚乙二醇)與人類生長激素(hGH，分子量：22kDa)進行接合，並接著連結至人類IgG4衍生之無糖基化之Fc區域(約50kDa)的N終端。經此，製備作為本發明之代表性長效hGH接合物的最終產物hGH-PEG-Fc接合物(下文中，稱為"長效hGH接合物")並進行純化。
試驗例1：經凍乾之長效hGH接合物之製劑的評估
(1)經凍乾之長效hGH接合物之製劑取決於濃度及緩衝液的安定性之分析
在製備以表1所述之濃度包含長效hGH接合物之凍乾製劑後，在進行再製後分析安定性。亦分析緩衝液及pH對長效hGH接合物的安定性之效果。
如表1所述，長效hGH接合物係使用包含緩衝液、氯化鈉(NaCl)、甘露糖醇及聚山梨糖醇酯80之凍 乾前之製劑以規定的濃度進行凍乾，其係接著使用蒸餾水進行再製。凍乾係由初級乾燥及次級乾燥步驟所組成。凍乾的溫度梯度係設成進行冷凍並隨後進行初級乾燥(4℃)及次級乾燥(20℃)，如第1圖所顯示。再製係藉由將凍乾製劑以與進行凍乾前之製劑相同體積的蒸餾水進行溶解而實施。將經再製之液態製劑於40℃保存4週並藉由離子交換層析(IE-HPLC)分析安定性。結果係顯示於表2。在表2中，IE-HPLC(%)係表明長效hGH接合物在規定的時間之純度。
由表2可知，長效hGH接合物之液態製劑於40℃保存4週後並未根據濃度而顯示出安定性上之差異。故，已證實即便是對呈高濃度的長效hGH，仍可提供安定性。又，已證實當改變緩衝液及pH時，安定性係受到維持(將實施例2及3進行比較)。
(2)經凍乾之長效人類生長激素(hGH)接合物之製劑取決於防腐劑的安定性及溶解性之分析
使用試驗例1-(1)之實施例2之製劑(20mM檸檬酸鈉，pH 5.2、150mM氯化鈉、5%甘露糖醇、0.005%聚山梨糖醇酯80)及實施例3之製劑(20mM醋酸鈉，pH 5.6、150mM氯化鈉、5%甘露糖醇、0.005%聚山梨糖醇酯80)以及自實施例3之製劑(20mM醋酸鈉，pH 5.6、4%甘露糖醇、0.005%聚山梨糖醇酯80)所製備之等張製劑，如表3所述般將長效hGH接合物以68.25mg/mL及58.5mg/mL的濃度進行混合，接著將其進行凍乾。在使用表3所述包含防腐劑之再製用溶液進行再製後，測量溶解時間及安定性。以肉眼比較產物狀態。凍乾及再製係以與試驗例1-(1)中所述者相同的方式實施。將經再製之液態製劑於25℃保存4週並接著藉由離子交換層析(IE-HPLC)及目視檢測評估安定性。結果係顯示於表4。在表4中，IE-HPLC(%)係表明長效hGH接合物在規定的時間之純度。
由表4可知，相較於實施例4及5而言，實施例6及7中之長效hGH接合物的安定性係更良好地受到維持。然而，由實施例6至9之結果可知，長效hGH接合物的安定性並未取決於防腐劑的種類而有所差異。但，當使用含有間甲酚之再製用溶液時，所得液態製劑在溶解期間係呈混濁。
(3)經凍乾之長效hGH接合物之製劑取決於接合物濃度的溶解性之分析
製備以不同濃度包含長效hGH接合物之凍乾製劑並評估其在進行再製後之產物狀態及溶解性。使用試驗例1-(1)之實施例1之製劑(20mM檸檬酸鈉，pH 5.2、150mM氯化鈉、5%甘露糖醇、0.005%聚山梨糖醇酯80)，如表5所述般將長效hGH接合物以不同濃度進行混合，接著將其進行凍乾。在使用蒸餾水進行再製後，測量溶解時間。凍乾及再製係以與試驗例1-(1)中所述者相同的方式實施。以肉眼比較產物狀態。再製係使用設於60°及30rpm之自動振盪器施行。完全溶解所需的時間係呈於表6。
儘管無論濃度為何，經凍乾之物質的產物狀態皆安定，但在較高濃度可觀察到較多堅硬塊狀物。由表6可知，溶解時間係隨著濃度增加。
(4)經凍乾之長效人類生長激素(hGH)接合物之製劑取決於安定劑的安定性及溶解性之分析
使用不同的安定劑製備經凍乾之長效hGH接合物之製劑並評估其溶解時間、溶解狀態及長效hGH接合物安定性。以表7所述之成分製備預製劑，其係接著用於以78.0mg/mL將長效hGH接合物進行冷凍乾燥。在使用蒸餾水進行再製後，測量溶解時間。凍乾及再製係以與試驗例1-(1) 中所述者相同的方式實施。以肉眼比較產物狀態。再製係使用設於60°及30rpm之自動振盪器施行。完全溶解所需的時間係呈於表8。
又，在將經再製之液態製劑於40℃保存4週後，藉由離子交換層析(IE-HPLC)評估安定性。在表9中，IE-HPLC(%)係表明長效hGH接合物在規定的時間相對於初始值而言之殘留率。
由表8可知，當甘露糖醇的濃度高時，係獲得高溶解速率。又，已證實添加5mM組胺酸會導致增進的溶解速率。相較於實施例19之製劑而言，實施例15及17之製劑在再製期間係顯現出嚴重起泡。由表9可知，對各製劑而言，在溶解後之安定性係相似。但，當氯化鈉係含括在內作為安定劑時，長效hGH接合物的安定性係稍高一些。
(5)凍乾製劑取決於經凍乾之物質的密度及長效 hGH接合物的濃度的溶解性之分析
使用試驗例1-(4)之實施例19之製劑(20mM檸檬酸鈉，pH 5.2、5%(w/v)甘露糖醇、5mM組胺酸、0.005%(w/v)聚山梨糖醇酯80)，分析經凍乾之物質取決於長效hGH接合物濃度的溶解性。以表10所述之成分製備預製劑，並接著進行凍乾。在凍乾期間，使用蒸餾水將預製劑稀釋1倍、1/2倍及1/4倍。凍乾係由初級乾燥及次級乾燥步驟所組成。凍乾的溫度梯度係顯示於第1圖。再製係藉由將凍乾製劑以與進行凍乾前之製劑相同體積的蒸餾水進行溶解而實施。再製係使用設於60°及30rpm之自動振盪器施行。完全溶解所需的時間係呈於表11。
由表11可知，已證實當經凍乾之物質的密度係經由稀釋而減低時，溶解速率係增進。又，當製劑(20mM檸檬酸鈉、5%甘露糖醇、5mM組胺酸、0.005%聚山梨糖醇酯80)中之長效hGH接合物的濃度係自39.0mg/mL增加至48.8mg/mL及至58.5mg/mL時，溶解速率係同樣地增加。
(6)用於凍乾過程的溫度梯度之設定
試驗例1-(1)中之溫度梯度(第1圖)係藉由將初級乾燥時間自10小時增加至20小時並將初級乾燥步驟的溫度(4°C)細分成-20℃及-5℃之二個階段(第2圖)而加以改變。在先前的溫度梯度中，因殘留在經凍乾之物質中之3至5%的水之緣故而會發生經凍乾之物質的崩解。當將溫度梯度改變成第2圖所顯示者時，即便是以較大的體積(~5mL)仍可達成完全凍乾。
(7)經凍乾之長效hGH接合物之製劑考慮到滲透壓的溶解性之分析
使用試驗例1-(1)及(2)之製劑(20mM醋酸鈉，pH 5.6、5%(w/v)甘露糖醇、150mM氯化鈉、0.005%(w/v)聚山梨糖醇酯80)，考慮到滲透壓設定安定劑的濃度並分析經凍乾之物質的溶解性。如表12所述般製備預製劑並接著進行凍乾。
在凍乾期間，使用蒸餾水將預製劑稀釋1/2倍。凍乾係由初級乾燥及次級乾燥步驟所組成。如第2圖所顯示般設定凍乾的溫度梯度。再製係使用具有與進行稀 釋前之製劑相同體積的含有0.9%苄醇之蒸餾水實施。
再製係使用設於60°及30rpm之自動振盪器施行。完全溶解所需的時間及在再製後所測量的滲透壓係顯示於表13。
由表13可知，當去除甘露糖醇時，溶解時間係大為增加。當甘露糖醇的濃度為5%(w/v)時，滲透壓係高於280至320mOsm/Kg的等張範圍。
(8)經凍乾之長效hGH接合物之製劑取決於甘露糖醇濃度的溶解性及滲透壓之分析
使用試驗例1-(7)之製劑(20mM醋酸鈉，pH 5.6、5%(w/v)甘露糖醇、0.005%(w/v)聚山梨糖醇酯80)，分析經凍乾之物質取決於甘露糖醇濃度的溶解性及滲透壓。
如表14所述般製備預製劑並接著進行凍乾。凍乾及再製之方法及條件係與試驗例1-(7)中所述者相同。完全溶解所需的時間及在再製後所測量的滲透壓係顯示於表15。
由表15可知，當甘露糖醇的濃度係介於4至4.5%之範圍時，係觀察到等張滲透壓。儘管溶解時間係隨著甘露糖醇濃度降低而變長，相較於當氯化鈉係含括在內時而言，變化係較小。
(9)經凍乾之長效hGH接合物之製劑於4℃及25°C的保存安定性之分析
使用試驗例1-(8)之製劑(20mM醋酸鈉，pH 5.6、4%(w/v)甘露糖醇、0.005%(w/v)聚山梨糖醇酯80)，於4℃及25℃分析經凍乾之物質的保存安定性。在將凍乾製劑於4°C及25℃保存6個月後，在進行再製後藉由離子交換層析(IE-HPLC)評估安定性。將再製用初始溶液於25℃以液態保存4週並接著在進行再製後藉由離子交換層析(IE-HPLC)進行評估。在表16中，IE-HPLC(%)係表明經凍乾之物質中之長效hGH接合物在規定的時間之純度。在表17中，IE-HPLC(%)係表明經再製之液態製劑中之長效hGH接合物之純度。
由表16可知，即便於4℃及25℃保存6個月後，經凍乾之物質的安定性仍受到維持。又，即便於25℃保存2週後，經再製之製劑的安定性仍受到維持。
試驗例2：長效hGH接合物之液態製劑的評估
(1)長效hGH接合物之液態製劑取決於pH、緩衝液、等張劑及糖醇濃度的安定性之分析
針對緩衝液、等張劑及糖醇濃度對長效hGH接合物的安定性之效果進行試驗。將如表18所述般製備之製劑於25℃保存0至4週並接著藉由離子交換層析及尺寸排除層析進行分析。在表19及20中，IE-HPLC(%)及SE-HPLC(%)係分別表明長效hGH接合物相對於初始值而言之殘留率(面積%/起始面積%)。
IE-HPLC結果係顯示長效hGH接合物在20mM醋酸鈉(pH 5.2)之條件下顯現出良好的安定性。以及，SE-HPLC結果係顯示長效hGH接合物在20mM醋酸鈉(pH 5.2)及4%(w/v)甘露糖醇之條件下最安定。
(2)長效hGH接合物之液態製劑取決於緩衝液的安定性之分析
針對緩衝液作為安定劑對長效hGH接合物的安定性之效果進行試驗。使用試驗例2-(1)之製劑(pH 5.2、4%甘露糖醇、0.005%聚山梨糖醇酯80)，如表21所述般製備製劑。於25℃保存0至4週後，藉由IE-HPLC及SE-HPLC分析安定性。在表22及23中，IE-HPLC(%)及SE-HPLC(%)係分別表明長效hGH接合物相對於初始值而言之殘留率(面積%/起始面積%)。
IE-HPLC結果係顯示10.0mg/mL長效hGH接合物在檸檬酸鈉之條件下最安定。以及，SE-HPLC結果係顯示10.0mg/mL長效hGH接合物依組胺酸及檸檬酸鈉之順序顯現出良好的安定性。
IE-HPLC結果係顯示58.5mg/mL長效hGH接合物依醋酸鈉及檸檬酸鈉之順序顯現出良好的安定性。以及，SE-HPLC結果係顯示58.5mg/mL長效hGH接合物依組胺酸及檸檬酸鈉之順序顯現出良好的安定性。
當長效hGH接合物的濃度係介於10mg/mL至58.5mg/mL之範圍時，在20mM檸檬酸鈉(pH 5.2)、4%甘露糖醇及0.005%聚山梨糖醇酯80之條件下觀察到最佳安定性。
熟習該項技術者將清楚瞭解在不悖離本發明之範疇及精神下可進行各種修改及變更。因此，應瞭解 在所有態樣中，上述具體例並非為限制性，而是例示性。本發明之範疇係由所附申請專利範圍所界定，而並非由申請專利範圍之前的說明所界定，因此，落入申請專利範圍之界限及範圍內之所有變更及修改、或該等界限及範圍之均等物皆因而意圖由申請專利範圍所涵蓋。

Claims (49)

  1. 一種長效人類生長激素(hGH)接合物之製劑，其包含：長效人類生長激素(hGH)接合物，其中，該生理活性人類生長激素(hGH)係連結至免疫球蛋白Fc區域；緩衝液；非離子性界面活性劑及糖醇。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該製劑為長效人類生長激素接合物之凍乾製劑，其包含經凍乾之水溶液混合物，該水溶液混合物包含：長效人類生長激素(hGH)接合物，其中，該生理活性hGH係連結至免疫球蛋白Fc區域；以及不含白蛋白之溶液，其包含緩衝液、非離子性界面活性劑及糖醇。
  3. 如申請專利範圍第2項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該緩衝液為醋酸鹽緩衝液、組胺酸緩衝液或檸檬酸鹽緩衝液。
  4. 如申請專利範圍第3項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該緩衝液為醋酸鹽緩衝液。
  5. 如申請專利範圍第3項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該醋酸鹽為醋酸鈉，以及該檸檬酸鹽為檸檬酸鈉。
  6. 如申請專利範圍第2項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該緩衝液之pH係介於5.0至6.0之範圍。
  7. 如申請專利範圍第2項所述之長效人類生長激素接合 物之製劑，其中，該糖醇為甘露糖醇或山梨糖醇。
  8. 如申請專利範圍第2項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該糖醇係以介於該水溶液的總體積之1%(w/v)至10%(w/v)之範圍的濃度被含括。
  9. 如申請專利範圍第8項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該糖醇係以介於2.5%(w/v)至5%(w/v)之範圍的濃度被含括。
  10. 如申請專利範圍第2項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該非離子性界面活性劑為聚山梨糖醇酯80。
  11. 如申請專利範圍第2項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該非離子性界面活性劑的濃度係介於該水溶液的總體積之0.001%(w/v)至0.05%(w/v)之範圍。
  12. 如申請專利範圍第2項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該不含白蛋白之溶液進一步包含選自糖、多元醇及胺基酸所組成之群組之至少一者。
  13. 如申請專利範圍第12項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該胺基酸為組胺酸或甘胺酸。
  14. 如申請專利範圍第13項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該組胺酸的濃度係介於1至10mM之範圍。
  15. 如申請專利範圍第14項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該長效hGH接合物的濃度係介於10至100mg/mL之範圍。
  16. 如申請專利範圍第2項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該不含白蛋白之溶液進一步包含等張劑。
  17. 如申請專利範圍第16項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該等張劑為氯化鈉。
  18. 如申請專利範圍第17項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該氯化鈉的濃度係介於0至200mM之範圍。
  19. 如申請專利範圍第2項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該凍乾製劑的容器為小瓶、雙腔室筒匣或雙腔室注射器。
  20. 如申請專利範圍第1項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該製劑為長效人類生長激素接合物之液態製劑，其包含：醫藥有效量的長效人類生長激素接合物，其中，該生理活性人類生長激素係連結至免疫球蛋白Fc區域；以及不含白蛋白之安定劑，其中，該安定劑包含緩衝液、非離子性界面活性劑及糖醇。
  21. 如申請專利範圍第20項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該製劑不包含等張劑。
  22. 如申請專利範圍第20項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該緩衝液為檸檬酸鹽緩衝液、醋酸鹽緩衝液或組胺酸緩衝液。
  23. 如申請專利範圍第20項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該糖醇為甘露糖醇或山梨糖醇。
  24. 如申請專利範圍第20項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該糖醇係以介於2%(w/v)至4.5%(w/v)之範圍的濃度被含括。
  25. 如申請專利範圍第24項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該糖醇係以4%(w/v)的濃度被含括。
  26. 如申請專利範圍第20項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該緩衝液之pH係介於5.0至6.0之範圍。
  27. 如申請專利範圍第26項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該緩衝液之pH為5.2。
  28. 如申請專利範圍第20項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該非離子性界面活性劑為聚山梨糖醇酯80。
  29. 如申請專利範圍第20項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該非離子性界面活性劑的濃度係介於該製劑的總體積之0.001%(w/v)至0.05%(w/v)之範圍。
  30. 如申請專利範圍第20項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該長效hGH接合物係以介於5.0mg/mL至60.0mg/mL之範圍的濃度含括在該製劑內。
  31. 如申請專利範圍第1、2或20項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該人類生長激素(hGH)具有與野生型hGH相同的胺基酸序列。
  32. 如申請專利範圍第1、2或20項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該免疫球蛋白Fc區域為衍生 自IgG、IgA、IgD、IgE或IgM之Fc區域。
  33. 如申請專利範圍第32項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該免疫球蛋白Fc區域之各結構域為具有不同來源的結構域之雜合體，該具有不同來源的結構域係衍生自選自IgG、IgA、IgD、IgE及IgM所組成之群組之免疫球蛋白。
  34. 如申請專利範圍第32項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該免疫球蛋白Fc區域為單鏈免疫球蛋白所構成之二聚體或多聚體，該單鏈免疫球蛋白係由具有相同來源的結構域所組成。
  35. 如申請專利範圍第32項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該免疫球蛋白Fc區域為IgG4 Fc區域。
  36. 如申請專利範圍第32項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該免疫球蛋白Fc區域為無糖基化之人類IgG4 Fc區域。
  37. 如申請專利範圍第1、2或20項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該接合物係呈下列此種形式：該人類生長激素係經由非肽基聚合物作為連結子或經由基因重組而連結至該免疫球蛋白Fc。
  38. 如申請專利範圍第37項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該非肽基聚合物係選自下列者所組成之群組：生物可降解性聚合物，諸如聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇與丙二醇之共聚物、聚氧乙基化多元醇、聚 乙烯醇、多醣、葡聚糖、聚乙烯基乙基醚、聚乳酸(PLA)及聚乳酸-乙醇酸(PLGA)、脂質聚合物、甲殼素、透明質酸及其組合。
  39. 如申請專利範圍第38項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該非肽基聚合物為聚乙二醇。
  40. 如申請專利範圍第1、2或20項所述之長效人類生長激素接合物之製劑，其中，該製劑係有用於治療腦下垂體性侏儒症、生長激素缺乏症、普瑞德威利症候群(Prader-Willi syndrome)或自發性身材矮小(idiopathic short stature)。
  41. 一種長效人類生長激素接合物之凍乾製劑，其包含經凍乾之水溶液混合物，該水溶液混合物包含：長效人類生長激素接合物，其中，該生理活性人類生長激素係連結至免疫球蛋白Fc區域；以及不含白蛋白之溶液，其包含醋酸鹽緩衝液、聚山梨糖醇酯80及甘露糖醇。
  42. 一種長效人類生長激素接合物之液態製劑，其包含：醫藥有效量的長效人類生長激素(hGH)接合物，其中，該生理活性人類生長激素(hGH)係連結至免疫球蛋白Fc區域；以及不含白蛋白之安定劑，其包含檸檬酸鹽緩衝液、聚山梨糖醇酯80及甘露糖醇，其中，該安定劑不包含等張劑。
  43. 一種用於製備如申請專利範圍第2項所述之凍乾製劑的方法，其包含對長效人類生長激素接合物以及不含白蛋白之溶液進行凍乾，其中，該生理活性人類生長激素 係連結至免疫球蛋白Fc區域；該不含白蛋白之溶液包含緩衝液、非離子性界面活性劑及糖醇。
  44. 一種用於如將申請專利範圍第2項所述之凍乾製劑再製的方法，其包含將再製用溶液添加至包含在如申請專利範圍第2項所述之凍乾製劑內的該經凍乾之水溶液混合物中，該水溶液混合物包含：長效人類生長激素(hGH)接合物，其中，該生理活性人類生長激素(hGH)係連結至免疫球蛋白Fc區域；以及不含白蛋白之溶液，其包含緩衝液、非離子性界面活性劑及糖醇。
  45. 如申請專利範圍第44項所述之方法，其中，該再製用溶液為注射用水。
  46. 如申請專利範圍第44項所述之方法，其中，該再製用溶液進一步包含防腐劑。
  47. 如申請專利範圍第46項所述之方法，其中，該防腐劑為苄醇、間甲酚或苯酚。
  48. 如申請專利範圍第44項所述之方法，其中，藉由該方法所再製之該製劑以介於10至100mg/mL之範圍的濃度包含該長效hGH接合物。
  49. 一種套組，其包含如申請專利範圍第2項所述之凍乾製劑及再製用溶液。
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