HU220220B - Fehérjét tartalmazó stabil liofilizált készítmény és adagolásra alkalmas készlet - Google Patents

Fehérjét tartalmazó stabil liofilizált készítmény és adagolásra alkalmas készlet Download PDF

Info

Publication number
HU220220B
HU220220B HU9501276A HU9501276A HU220220B HU 220220 B HU220220 B HU 220220B HU 9501276 A HU9501276 A HU 9501276A HU 9501276 A HU9501276 A HU 9501276A HU 220220 B HU220220 B HU 220220B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
mannitol
alanine
composition
protein
solution
Prior art date
Application number
HU9501276A
Other languages
English (en)
Other versions
HU9501276D0 (en
HUT72325A (en
Inventor
Alain Bayol
Thierry Breul
Patrice Dupin
Philippe Faure
Original Assignee
Sanofi-Synthelabo
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sanofi-Synthelabo filed Critical Sanofi-Synthelabo
Publication of HU9501276D0 publication Critical patent/HU9501276D0/hu
Publication of HUT72325A publication Critical patent/HUT72325A/hu
Publication of HU220220B publication Critical patent/HU220220B/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/81—Packaged device or kit

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Description

A találmány gyógyszerészetileg alkalmazható készítményre vonatkozik, amely liofilizátum formájú és hatóanyagként egy fehérjét tartalmaz. Ez a készítmény 25 °C-on stabil és oldószer hozzáadásával újra folyékony állapotba alakítható. A készítmény embernek vagy állatnak parenterális úton adagolható vagy adagolókészletben alkalmazható.
Ismert, hogy a formálásnak nagy hatása van a fehérjék elbomlására a Iiofilizálás során továbbá jelentős befolyással rendelkezik a fehéij ék stabilitására liofilizált formában. A formálás különféle változói, amelyek ezen paraméterekre hatnak, elsősorban a pH, a jelenlévő sók mennyisége, a vivőanyagok fajtája és mennyisége, a választott fagyásvédelem típusa továbbá a fagyasztás, szublimálás és szárítás műveleteinek választott hőmérséklete, nyomása és időtartama. Az említett különféle változók befolyásolják a kapott liofilizátum fizikai állapotát, vagyis az lehet üvegszerű amorf, puha amorf, kristályos vagy az említett állapotok valamely kombinációja.
Az egyes változók szerepét külön-külön már vizsgálták, szinergetikus hatásuk azonban még kevéssé tisztázott (lásd Pikal M. J., Dellermann K. M., Roy M. L., Riggin Μ. N., The effects of formulation variables on the stability of freeze-dried Humán Growth Hormoné, Pharm. Research, 1991, 8, N°4, 427-436).
Az aminosavak és a poliolok liofilizálandó oldatok vagy liofilizátumok tulajdonságaira gyakorolt hatásának bibliográfiai tanulmányozása után az alábbi következtetések vonhatók le:
A következőkben felsoroljuk az aminosavak, a kristályos fázisú vagy amorf fázisú mannit jelenlétével kapcsolatos előnyöket és hátrányokat:
Az aminosavak jelenlétével kapcsolatos előnyök:
Kimutatták, hogy ha egy liofilizátumban glicin van jelen, az az oldatban lévő molekulák kristályosodását indukálja a Iiofilizálás fagyasztásos állapotában (lásd Korey D. J., Schwartz J. B., Effects of excipients on the cristallization of pharmaceutical compounds during lyophylization, J. Parenteral Sci. Tech., 1989, 43, 2, 80-83). A hatóanyagnak ez a kristályosodása, amely mindazonáltal kevéssé valószínű fehérjék esetében, hozzájárul a stabilitás javításához.
Az alaninnak kristályos formában az az előnye, hogy megakadályozza a liofilizátum összeesését a szublimálás és a száradás alatt, és így nagyobb fajlagos felületű liofilizátum előállítását teszi lehetővé, tehát egy gyorsabb szárítást is elősegít (lásd Pikal M. J., Freeze-drying of proteins, Bioharm. 26-30,1990. október).
Az aminosavak jelenlétével kapcsolatos hátrányok:
Egy aminosav hozzáadásának egy cukorhoz vagy poliolhoz liofilizálandó oldatban általában az a hatása, hogy csökkenti a cukor üvegátalakulási hőmérsékletét (lásd te Booy MPWM de Ruiter R. A., de Meere A. L. J., Evaluation of the physical stability of freeze-dried sucrose containing formulations by differential scanning calorimetry, Pharm. Research., 1992, 9, 109-114). Az üvegátalakulási hőmérséklet csökkenése azonban általában szinonimája a liofilizátum kisebb stabilitásának (lásd Franks F., Freeze-drying; from empiricism to predictability, Cryo-letters, 1990,11, 93-110).
A mannit jelenlétével kapcsolatos előnyök:
A fehérjét körülvevő amorf alakú mannit jelenléte garantálja a fehérjéhez kapcsolódó nem kristályvíz jelenlétét a fagyasztás során, ezáltal meggátolja a fehérje denaturálódását. Ezenkívül a poliolok jelenléte stabilizálja a fehérjéket a hő hatására bekövetkező bomlással szemben is, hidrofób kölcsönhatások következtében (lásd Back J. F., Oakenful D., Smith Μ. B., Increased thermal stability of proteins in the presence of sugars and polyols, Biochemistry, 1979,18, 23, 5191-96.
A mannit jelenlétével kapcsolatos hátrányok:
Ismert, hogy a mannit nem teszi lehetővé az enzimaktivitás 37 °C-on történő megőrzését, ellentétben a laktózzal (lásd Ford A. W., Dawson P. J., The effect of carbohydrate additives in the freeze-drying of alkaline phosphatase, J. Pharm. Pharmacol., 1993, 45(2), 86-93).
Kristályfázis jelenlétével kapcsolatos előnyök:
Egy kristályos oldott anyag jelenléte fagyasztott oldatban egy eszköz a fehéijék stabilizálására szárítás során (lásd Carpenter J. F. & Crowe J. H., Modes of stabilization of a protein by organic solutes füring dessiccation, Cryobiology, 1988,25, 459-470).
Kristályos fázis jelenlétével kapcsolatos hátrányok:
Ismert, hogy egy liofilizált fehérje aktivitásának csökkenése közvetlen összefüggésben van a fagyasztás ellen védő molekula kristályosodási mértékével (lásd Izutsu K. L., Yoshioka S., Terao T., Decreased proteinstabilizing effects of cryoprotectants due to crystallization, Pharm. Research. 1993, 10, N°8, 1232-1237).
A fehérjetartalmú gyógyszerek formálásánál a vivőanyagok kristályosítása elkerülendő (lásd Hermansky M., Mesak M., Lyophilization of drugs VI morphous and Crystalline forms Cesk. Farm., 1993, 42(2), 95-98).
Amorf fázis jelenlétével kapcsolatos előnyök:
Az Izutsu K. L., Yoshioka S., Terao T., Decreased proteinstabilizing effects of cryoprotectants due to crystallization, Pharm. Research. 1993, 10, N°8, 1232-1237 irodalmi hely szerint ha az adalékok amorf állapotban vannak jelen, ez az adalék koncentrációjával arányos mértékben stabilizálja bizonyos enzimek aktivitását.
A vivőanyagok fagyasztásvédő hatása a kapott liofilizátumban lévő glicin amorf állapotához kötődik (lásd Pikal M. J., Dellermann K. M., Roy M. L., Riggin Μ. N., The effects of formulation variables on the stability of freeze-dried Humán Growth Hormoné, Pharm. Research, 1991, 8, N°4,427-436).
Amorf fázis jelenlétével kapcsolatos hátrányok:
Ha egy amorf szilárd fázis egyedül van jelen, a liofilizátum összeesik a fagyasztás során az üvegátmeneti hőmérsékletnél magasabb hőmérsékleteken.
Lágy amorf fázison belül a bomlásos kémiai reakcióknak a kinetikája sokkal gyorsabb, mint ugyanaz kristályos fázison belül.
Következésképpen a vivőanyagok fehérjék stabilizálására gyakorolt hatására vonatkozó tudományos szakirodalom alapos átvizsgálása után ellentmondásos információkat találunk a vivőanyagok tulajdonságával kap2
HU 220 220 Β csolatban. Nincs egységes elmélet a lioíilizátum szerkezete és stabilitása közötti összefüggésre vonatkozóan. Ugyanígy a poliolok és az aminosavak külön-külön vagy együtt kifejtett hatását sem ismertetik általánosítható tulajdonságok szerint, csupán a vizsgált fehéijék és az alkalmazott vivóanyagok mennyisége függvényében az egyes esetekben ellentmondásos eredményekkel vizsgálták ezeket.
A JP-0-2096536 számú szabadalmi bejelentésből ismertek bizonyos plazminogént tartalmazó liofilizált készítmények, amelyek vivőanyagként valamely szacharidot, aminosavat, előnyösen arginint és albumint tartalmaznak. A készítmények oldódás után néhány órán keresztül stabilak maradnak.
A találmányunk szerinti készítmény albumint nem tartalmaz.
Találmányunk azon a meglepő felismerésen alapul, hogy a mannit és az alanin liofilizált fehéijék stabilizálására gyakorolt hatása szinergetikus. Azt tapasztaltuk, hogy ez a szinergetikus hatás csak egy bizonyos koncentráció-tartományban tapasztalható. Az optimális hatást olyan R arány esetén tapasztaljuk (R jelentése a liofilizátumban jelenlévő mannit és alanin tömegaránya), amely 0,1 és 1 közötti, előnyösen 0,2 és 0,8 közötti.
Kimutattuk továbbá, hogy amikor R értéke 0,1 és 1 közötti, akkor a liofilizátum egy amorf és egy kristályos fázisból áll.
Az amorf fázis főként mannitból és fehérjéből áll.
A kristályos fázis főként alaninból áll.
Abban az esetben, amikor R értéke 0,1 és 1 közötti, feltételezéseink szerint:
a képződött amorf fázis védi a fehérjét a fagyás ellen a fagyasztás során.
A kristályos fázis a liofilizátum szerkezetéhez kötődik és így megakadályozza annak összeesését.
Ez a meglepő szinergetikus hatás az amorf fázis és a kristályos fázis egyidejű megléte között stabilizálja a liofilizált fehéijét. Az alábbiakban részletesen ismertetjük ennek a hatásnak az elérését az előnyös R tömegarányok esetén.
A találmány tehát liofilizált gyógyszerformákra vonatkozik, amelyek hatékony mennyiségű biológiailag aktív fehérjét, a fehéije stabilitása szempontjából optimális pH-ra beállított puffért, alanint és mannitot tartalmaznak, ahol e két utóbbi komponens tömegaránya R=mannit tömege/alanin tömege, amelynek értéke 0,1 és 1 közötti. Az említett készítményben lévő fehérje liofilizált formában stabil marad. A kapott liofilizátum oldódása gyors és tökéletes. A liofilizátum külleme szempontjából nincs összeesve, víztartalma kompatibilis a fehéijeaktivitás megtartásával.
A készítmény tartalmazhat egyéb, szakember számára jól ismert, gyógyászatilag alkalmazható komponenseket is, például segédoldószereket, konzerválószereket, antioxidánsokat és kelátképző szereket.
A találmány célja tehát olyan stabil liofilizátumok előállítása, amelyek fehérjetartalmát a fagyasztás során egy amorf szilárd fázissal védjük a fagyás ellen, amely fázis lényegében fehérjéből és mannitból áll, és ez az amorf fázis a kapott liofilizátumban egyidejűleg fennmarad a fagyasztott oldat szublimálása és szárítása után egy lényegében alaninból álló kristályos fázissal együtt.
A találmány szerint formált biológiailag aktív fehérje (vagy bioaktív anyag) lehet valamely adott esetben glikozilezett természetes, szintetikus, félszintetikus vagy rekombináns polipeptid, amelyet a klinikai gyakorlatban vagy a laboratóriumi gyakorlatban alkalmaznak. Közelebbről ez a fehérje lehet például egy hormon, például növekedési hormon, előnyösen emberi növekedési hormon (hGH), luteinizáló hormon (LH-RH) vagy gonadotropin. A fehérje lehet ezenkívül enzim, például trombolitikus enzim, például urokináz, prourokináz, sztreptokroáz, sztafilokináz, plazminogén szövetaktivátor (tPa) vagy más enzim, például foszfatáz, szulfatáz, acil-transzferáz, monoamino-oxidáz, urátoxidáz. Ezenkívül a találmány szerint formált fehéije lehet még valamely citokin, például interleukin-2 (IL-2), interleukin-4 (IL-4), interleukin-6 (IL-6) vagy interleukin-13 (IL—13). A találmány szerinti fehérjék másik csoportja például az antitestek, az immunglobulinok, az immuntoxinok. Peptidek, például kolecisztokinin (CCK), a P anyag, az A neurokinin, a B neurokinin, a neurotenzin, az Y neuropeptid, az eledoizin, a bombezin ugyancsak formálható a találmány szerint.
A biológiailag aktív fehéqe előnyösen a hGH (vagy emberi növekedési hormon), az urátoxidáz és az interleukin-13.
Az emberi növekedési hormon egy olyan fehérje, amely egyetlen 191 aminosavból álló polipeptidláncból áll, amely két diszulfidhíddal rendelkezik az 53-as és 165-ös ciszteincsoport és a 182-es és 189-es ciszteincsoport között.
Az urátoxidáz olyan enzim, amely a húgysavat allantoinná oxidálja és amelyet az Aspergillus flavus biomasszából extrahálnak (lásd Laboureur és munkatársai, Bull. Soc. Chim. Bioi., 1968, 50, 811-825). Ezt az enzimet húgyvérség kezelésére több, mint 20 éve használják.
Az ezt a fehérjét kódoló DNS-t nemrégiben klónozták és E. coliba (Legoux R. és munkatársai, J. of Bioi. Chem., 1992, 267, 12, 8565-8570), Aspergillus fluavusba és Saccharomyces cerevisiae-ba vitték át. Az enzim egy tetramer, amely azonos alegységekkel rendelkezik, molekulatömege 32 000 körüli. A monomer, amely egyetlen 301 aminosavból álló polipeptidláncból áll, nem rendelkezik diszulfidhíddal és az N-terminális végén acetilezve van.
Az interleukin-13 egy olyan citokin, amely egyetlen 112 aminosavból álló polipeptidláncból áll, két diszulfidhíddal (lásd Minty és munkatársai, Natúré, 1993, 362, 248-250).
Az amorf fázis (mannit+fehérje) és a kristályos alaninfázis együttes létezésének kialakítása független az oldat pH-ja beállítására szolgáló puffer jelenlététől és koncentrációjától, viszont függ az előzőekben meghatározott R tömegaránytól.
Annak érdekében, hogy a köz számára használható fehérjekészítményt, mint gyógyászati készítményt állítsunk elő, elengedhetetlenül szükséges, hogy a fehérjét megfelelően stabil formában szereljük ki annak érdeké3
HU 220 220 Β ben, hogy a fehéije biológiai aktivitása a formálás és alkalmazás között megmaradjon. A hGH-t például rendkívül sokféle módon formálták már, lásd például a következő szabadalmi leírásokat vagy szabadalmi bejelentéseket: US-5,096,885; WO 89/09614; WO 92/17200; AU-30771/89; WO 93/19773 és WO 93/19776.
A találmány szerinti készítmények szobahőmérsékleten tárolhatók, míg a jelenleg forgalomba kerülő fehérjetartalmú készítményeket 2-8 °C közötti hőmérsékleten kell tárolni.
A legtöbb esetben a gyógyszerforma liofilizált, fagyasztott vagy oldatban lévő. Tartalmaz fehérjét, puffért, glicint, arginint, mannitot, cinket, felületaktív anyagokat, dextránt, EDTA-t vagy egyéb komponenseket, de sohasem tartalmazza az alanin-mannit kombinációt 0,1 és 1 közötti R tömegarányban. A liofilizált vagy fagyasztott formákat azért használják, hogy megtartsák a molekula biokémiai intenzitását és biológiai aktivitását. A liofilizált készítményeket felhasználás előtt újra oldattá kell alakítani gyógyászatilag alkalmazható steril oldószerek hozzáadásával, ilyen oldószer lehet például a desztillált víz, a 0,9%-os vizes nátrium-klorid oldat, az 5%-os vizes glikózoldat vagy bármely egyéb fiziológiailag elfogadható oldat, amely adott esetben tartalmazhat baktériumellenes konzerválószereket, például benzil-alkoholt, fenolt vagy metakrezolt is.
Az olyan készítmény, amely szobahőmérsékleten stabil egészen az újra oldattá alakításig, különösen előnyös ambuláns kezeléshez, mint amilyent például a hGH esetében flakonformában vagy több dózist tartalmazó csőformában végeznek. Az így elkészített összetételt be lehet helyezni egy adagolásra alkalmas készletbe is.
A találmány tehát egy előnyös liofilizátumkészítmény. Ezt a liofilizátumot oldat liofilizálásával állítjuk elő.
A készítmény előállítására szolgáló eljárás az összekeverés, oldás, szűrés és liofilizálás lépéseiből áll.
A liofilizálandó oldat összetétele a következő:
Egy fehérje, egy a pH szabályozására alkalmas, gyógyászatilag alkalmazható puffer, alanin, mannit, ahol az R tömegarány, vagyis a mannit tömege/az alanin tömege=0,l és 1 közötti, továbbá injektálható készítmények számára megfelelő minőségű víz.
A liofilizálandó oldatot a következőképpen állítjuk elő:
A fehérjeoldatot gélszűrő kolonnán kapjuk, ez tartalmaz egy olyan puffért, amely pH-ját a fehérjestabilitásnak megfelelő tartományban tartja.
Ehhez az oldathoz adjuk hozzá a kívánt mennyiségű puffért, alanint, mannitot és a vizet oly módon, hogy a komponensek feloldódjanak. Az oldatot sterilen leszűrjük és edényekbe, előnyösen flakonokba töltjük.
Az oldat liofilizálását a következőképpen végezzük:
Az oldatot először fagyasztásnak, majd szublimálásnak, végül szárításnak vetjük alá, a liofilizálandó térfogatnak és az oldatot tartalmazó edénynek megfelelően. Előnyösen a fagyasztási sebességet -2 °C/perc körüli értékre választjuk meg és a liofilizálást Usifroid (Franciaország) SMH15 vagy SMJ100 vagy SMH2000 típusú liofilizátorban végezzük.
A liofilizátum szárításának időtartamát, hőmérsékletét és nyomását a liofilizálandó oldat térfogata és a liofilizátumban kívánt visszamaradó víztartalom függvényében állítjuk be.
Az injektálható készítmények előállítási eljárásairól teljes információ áll a szakember rendelkezésére, lásd Remington’s Pharmaceutical Sciences, 1985, 17. kiadás; William N. A. & Polli G. P., The lyophilization of pharmaceuticals: a literature review, J. Parenteral Sci. Tech., 1984, 35(2), 48-59; Franks F., Freeze-drying: ffom enpiricism to predictability, Cryo-letters, 1990,11, 93-100.
Olyan liofilizátumot kapunk tehát, amelyben az alanin kristályos formában és a mannit amorf formában található. Ezt a liofilizátumot 25 °C-on lehet tárolni anélkül, hogy a benne lévő fehérje biológiai aktivitása megváltozna.
A találmány szerinti készítmények illusztrálására fehéreként a hGH-t és az urátoxidázt választottuk. Több oldatot készítettünk, amelyek biológiailag aktív fehérjeként hGH-t vagy urátoxidázt tartalmaztak, tartalmaztak továbbá különböző koncentrációjú foszfátpuffert, a hGH-t (4 UI/0,5 ml-es) tartalmazó oldat esetén ez pH=7-es, és az urátoxidázt tartalmazó oldat (30 UAE/ml-es), ez pH =8-as, valamint tartalmaztak csak mannitot, csak alanint vagy alanin-mannit keveréket. Ezeket az oldatokat azután liofilizáltuk és elemeztük.
Az előállítási eljárást az alábbi példában mutatjuk be:
Előállítási példa
0,04 mólos dinátrium-foszfát-oldatot állítunk elő oly módon, hogy dinátrium-foszfát-dodekahidrátot feloldunk + 15 és +30 °C közötti hőmérsékleten injekcióhoz alkalmas vízben.
A 0,04 mólos dinátrium-foszfát-oldatban keverés közben feloldjuk az alanint, majd a kapott oldathoz keverés közben hozzáadjuk a mannitot.
Az így előállított vivőanyagoldathoz gyengéd keverés közben hozzáadjuk az urátoxidázoldatot. A kapott oldatot sterilen leszűrjük és fiolába töltjük, majd liofilizáljuk.
A készítmények összetételére vonatkozó adatokat az 1. és 2. táblázatban adjuk meg. A későbbiekben ismertetjük az analízismódszereket továbbá a stabilitási vizsgálatot, annak időtartamát és a hőmérsékleteket, valamint a kapott eredményeket.
HU 220 220 Β
1. táblázat
Az 1. táblázatban urátoxidázt tartalmazó készítmények összetételét ismertetjük.
A kísérlet száma Mannit mg Alanin mg R Foszfátpuffer pH=8, mM Urátoxidáz (UAE)1
1. 33,0 0,0 + OO 50 30
2. 27,7 6,9 4 30 30
3. 20,8 10,4 2 30 30
4. 13,6 13,6 1,000 40 30
5. 10,2 15,3 0,67 40 30
6. 7,3 16,0 0,46 40 30
7. 7,3 16,2 0,45 30 30
8. 9,5 21,0 0,45 50 30
9. 4,6 18,3 0,25 40 30
10. 2,5 20,0 0,125 40 30
11. 0,0 16,0 0 50 30
(1): UAE jelentése=cnzimaktivitás-cgység
2. táblázat
A 2. táblázatban a hGH-t tartalmazó készítmények összetételét adjuk meg.
A kísérlet száma Mannit mg Alanin mg R Foszfátpuffer pH=8, mM hGH UI(10)
12. 12,5 0,0 + OO 2,50 4
13. 20,0 2,5 8 1,95 4
14. 12,5 6,5 2 0,00 4
15. 12,5 6,5 2 2,50 4
16. 12,5 13,0 1 2,50 4
17. 4,7 10,5 0,45 1,95 4
18. 0,0 6,5 0 2,50 4
(1): UI=nemzetközi egység
A különböző paraméterek meghatározására használt analitikai eljárások a következők:
Dimer és magasabb molekulatömegű anyagok kon- 40 centrációjának meghatározása:
A dimer és magasabb molekulatömegű anyagtartalmat kizárásos kromatográfiás eljárással (SEC-HPLC) határozzuk meg SUPEROSE 12 (Pharmacia, Réf. 17-0538-01) kolonna felhasználásával. A terméket am- 45 mónium-foszfát-pufferoldattal eluáljuk, amelynek pH-ja 7,0 (1,38 g ammónium-dihidrogén-foszfát 1 1 vízben, pH-ját 0,4 ml/perc áramlási sebességű koncentrált ammóniával állítjuk be 7-re). A detektálást 220 nm-nél végezzük. (Ezt a tartalmat az analitikai eredmények sorá- 50 bán oligomer+polimer %-nak jelöljük.)
A dimer és magasabb molekulatömegű anyagtartalmat az Európai Gyógyszerkönyv 1994. januári „Szomatropin injektálható készítmények számára” című monográfiájában ismertetett eljárással is meghatároz- 55 hatjuk.
A fehérjetartalom meghatározása inverz fázisú kromatográfiás eljárással.
A fehérjetartalmat inverz fázisú kromatográfiás eljárással 08-300 angström - 25 cm, 4,6 mm átmérőjű 60 (SYNCHROM, Réf. CR 103-25) kolonna felhasználásával határozzuk meg és mg/flakon egységben fejezzük ki. A terméket 35 perc alatt eluáljuk gradiens elúcióval úgy, hogy mobil fázisként először 75 térfogatrész 0,1% trifluor-ecetsavat tartalmazó vizet és 25 térfogatrész 0,08% trifluor-ecetsavat tartalmazó acetonitrilt használunk, majd végül 30 térfogatrész 0,1% trifluor-ecetsavat tartalmazó vizet és 70 térfogatrész 0,08 térfogat% trifluor-ecetsavat tartalmazó acetonitrilt használunk. Az áramlási sebesség 1 ml / perc, a detektálást 220 nmnél végezzük.
Urátoxidáz enzimaktivitásának meghatározása:
Az urátoxidáz enzimaktivitását UAE-ben fejezzük ki és spektrofotometriás eljárással határozzuk meg 30 °C-on termosztált kádban a húgysav eltűnését figyelve 292 nm-nél a Legoux R., Delpech Brúnó, Dumont X., Guillemot J. C., Rámond P., Shire D., Caput D., Ferrara P., Loison G.: J. Bioi. Chem., 1992, 267 (12) 8565-8570 irodalmi helyen ismertetett eljárás szerint.
Az újra előállított oldat zavarossága.
A hGH-t tartalmazó liofilizátumból újra előállított oldat zavarosságát spektrofotometriás eljárással [Ph. Eur. 2(1) V. 619] határozzuk meg 500 nm-nél Perkin El5
HU 220 220 Β mer 554 típusú spektrofotométerrel. Az eredményeket elnyelési egység/1000 egységben kapjuk meg.
Az újra oldatba vitt urátoxidáz-tartalmú liofilizátum zavarosságát Ratio Hach 18900-00 zavarosságmérő segítségével határozzuk meg. A zavarosságra vonatkozó eredményeket zavarossági nefelometriás egységekben (NTU) fejezzük ki, amelynek meghatározását lásd a „Standard methods fór the examination of water and wastewater of the American Public Health Association” irodalmi helyen.
Az opálosodási fokot ugyancsak a II Európai Gyógyszerkönyv V.6. pontja szerinti eljárással határozzuk meg, az analizálandó minta és egy összehasonlító szuszpenzió egybevetésével.
A liofilizátumok organoleptikus kritériumai.
Ezeket a kritériumokat vizuálisan vizsgáljuk, figyelembe vesszük a liofilizátum elszíneződését, a szerkezetét (össze van-e esve vagy sem) továbbá azt, hogy a liofilizátum széle és belseje között van-e fáziselválás.
Röntgen-diffraktometriás eljárás a porral.
A liofilizátum röntgen-difffaktométeres elemzését Siemens D500 TT difffaktométerrel végezzük; forrás: CuKal; generátor: 40 KV, 25 mA; hátsó monokromátor; rések: 1/1/1/0,16/0,6; mintavétel pirex edénybe; letapogatás tartománya: 4°-tól 40°-igpercenként 2 Bragg tetával.
Differenciális termálanalízis.
A liofilizátumok differenciális termálanalízis-vizsgálatát a következő körülmények között végezzük:
Készülék: DSC 7 Perkin Elmer; etalon: indén és ólom; mintavétel: 5 mg és 10 mg között 50 μΐ-es kapszulába; kezdeti hőmérséklet 10 °C; fűtési sebesség 10 °C/perc; véghőmérséklet: 300 °C.
A hGH dezamidált formái:
A dezamidált hormon koncentrációját anioncserélő kromatográfiás eljárással (AEX-HPLC) határoztuk meg anioncserélő kolonna (PHARMACIA mono-Q HR 5/5, Réf. 17-0546-01) felhasználásával. Az eluálást egy A oldattal és egy B oldattal valósítottuk meg, az A oldat 1000 ml vízben 13,8 g ammónium-dihidrogénfoszfátot tartalmaz, pH-ját koncentrált ammónium-hidroxiddal 7-re állítjuk be, a B oldat pedig víz. A következő elúciós programot használjuk: 2 percig 5% A oldat, majd 5 percig 15% A oldat, majd 20 percig 50% A oldat, végül 5 percig 100% A oldat. Ez utóbbi oldatot még 5 percig fenntartjuk. A hGH (körülbelül 15 perc) és a dezamidált alakok elúcióját 220 nm-en figyeljük. Az áramlási sebesség 1 ml/perc.
A különféle említett eljárások felhasználásával kapott analitikai eredményeket a következőkben ismertetjük.
Dimer és nagyobb molekulatömegű anyagtartalom.
4UI hGH-t tartalmazó liofilizátumot 0,5 ml vízzel felveszünk és az R tömegarány függvényében meghatározzuk az oligomer és polimer együttes tartalmat. Az eredményeket az 1. ábrán tüntetjük fel. Az 1. ábrán látható, hogy az oldat minimális oligomer+polimer tartalmát R 0,1 és 1 közötti értékeinél kapjuk, a 0,1 értéket a görbéből interpolálva olvastuk le.
Kiegészítő példaként két, egyenként 4UI, illetve 8UI hGH-t tartalmazó minta stabilitását vizsgáltuk 25 és 35 °C-on. Megállapítottuk, hogy a stabilitás 6 hónapi tárolás után is kiváló.
A 3. és 4. táblázatban különböző időtartamok és hőmérsékletek esetén feltüntetjük a dezamidált alakok oligomer és polimer tartalmát összehasonlítva az Európai Gyógyszerkönyv előírásaival. A táblázatokban R értéke 0,45.
3. táblázat
Flakononként 4UI-t tartalmazó minta
Európai Gyógyszerkönyv előírása 0. időpont 25 °C-on 35 °C-on,
6 hónap 3 hónap 6 hónap
Oligomer és polimer % 6,0 1,0 1,9 3 3,3
Dezamidált alakok % 6,6 1,3 1,9 2,8 3,9
Flakononként! tartalom mg-ban - 1,58* 1,61* 1,54* 1,55*
*: A tartalom nem változik lényegesen időben, tekintettel a meghatározási módszer pontosságára (±5%)
4. táblázat
Flakononként 8UI-t tartalmazó minta
Európai Gyógyszerkö nyv előírása 0. időpont 25 °C-on 35 °C-on
3 hónap 6 hónap 3 hónap 6 hónap
Oligomer és polimer % 6,0 1,0 1,5 1,2 1,7 2,2
Dezamidált alakok % 6,6 1,0 1,5 1,95 2,2 3,3
Flakononként! tartalom mg-ban - 3,0* 3,0* 2,93* 2,95* 2,94*
*: A tartalom nem változik lényegesen időben, tekintettel a meghatározási módszer pontosságára (± 5%)
HU 220 220 Β
Urátoxidáz enzimaktivitásának meghatározása.
UAE urátoxidázt tartalmazó liofilizátumot 1 ml vízzel felveszünk és meghatározzuk az enzimaktivitását az R tömegarány függvényében 1 hónapos 35 °C-on végzett tárolás után. Az eredményeket a 2. ábrán tüntetjük fel. A 2. ábrán látható, hogy az urátoxidáz kezdeti enzimaktivitása 35 °C-on egy hónap elteltével R 0,4 és 1 közötti értékei esetén marad meg.
Kiegészítő példaként megvizsgáltunk két készítményt, az egyiknél R értéke 0,45, a másiknál R értéke 0,67, mindkettőt 3 hónapos 25 °C-on végzett tárolás után tökéletesen stabilnak találtuk (a visszamaradó aktivitás megközelíti a 0 időpontban mért aktivitás 100%-át).
Az újra előállított oldat zavarossága.
4UI hGH-t tartalmazó liofilizátumot 0,5 ml vízzel felveszünk és meghatározzuk a zavarosságát az R tömegarány függvényében. Az eredményeket a 3. ábrán mutatjuk be. A 3. ábrán látható, hogy az oldatok minimális zavarosságát R 0 és 1,5 közötti értékénél kapjuk.
UAE urátoxidáz-tartalmú liofilizátumot 1 ml vízzel felveszünk, és meghatározzuk a zavarosságát az R tömegarány függvényében (az eredményeket a 4. ábrán tüntetjük fel). A 4. ábrán látható, hogy a minimális zavarosságot olyan oldatokkal kapjuk, amelyeknél R értéke 0,2 és 1 közötti.
A liofilizátumok organoleptikus tulajdonságai.
A 4UI hGH-t vagy 30 UAE urátoxidázt és különböző mennyiségű foszfátpuffert tartalmazó liofilizátum organoleptikus tulajdonságait az R tömegarány függvényében meghatároztuk, és az eredményeket az 5. táblázatban tüntetjük fel. A 5. táblázatból látható, hogy a liofilizátumok organoleptikus tulajdonságai R 0,125 és 1,7 közötti értékei esetén kielégítőek. Ezek a tulajdonságok nem változnak az idő függvényében.
5. táblázat
A liofilizátum és kristályos vivőanyag organoleptikus tulajdonságai az R mannit tömeg/alanin tömeg arány függvényében
R Organoleptikus tulajdonságok Kristályos vivőanyagok (röntgendiffrakcióval)
+ oo összeesett mannit
10 összeesett mannit+alanin
6,469 összeesett mannit+alanin
5 összeesett mannit+alanin
4,014 összeesett mannit+alanin
2 összeesett mannit+alanin
1,705 jó mannit+alanin
1,402 jó mannit+alanin
1,25 jó mannit+alanin
1,097 jó mannit+alanin
1 jó alanin
0,667 jó alanin
0,456 jó alanin
R Organoleptikus tulajdonságok Kristályos vivőanyagok (röntgendiffrakcióval)
0,451 jó alanin
0,452 jó alanin
0,251 jó alanin
0,125 jó alanin
0 fázisszétválás alanin
Röntgendiffrakció:
Az alanint és mannitot tartalmazó kapott liofilizátumporokat, amelyeknél az R arány 0 és oo között változik, megvizsgáltuk röntgendiffrakciós eljárással. Az elemzés eredményeit az 5. táblázatban tüntetjük fel.
A kapott diffraktogrammokból látható, hogy R 0 és 1 közötti értékei esetén csak az alanin kristályrácsa sávjai jelennek meg, ezenkívül a diffraktogramm alapvonalától való eltérés jelzi a mannitból álló amorf fázis jelenlétét. Minél nagyobb az R értéke, annál nagyobb a mannitból származó amorf fázis aránya. Amikor R> 1, a mannit ugyancsak kristályosodik.
Amikor R értéke 0 és 1 közötti, akkor egy mannitból álló amorf fázist és egy alaninból álló kristályos fázist kapunk.
Differenciál termálanalízis:
4UI hHG-t vagy 30 UAE urátoxidázt tartalmazó vagy fehérjét nem tartalmazó és különböző foszfátpuffer koncentrációjú liofilizátumok üvegátalakulási hőmérsékletét az R arány fordítottjának függvényében határoztuk meg. Az eredményeket az 5. ábrán tüntetjük fel. Az 5. ábrán látható, hogy az alanint és mannitot tartalmazó liofilizátumokkal akkor kapunk maximális üvegátalakulási hőmérsékletet, amikor az 1/R értéke >1, vagyis amikor R értéke 0 és 1 közötti.
A liofilizátum üvegátalakulási hőmérséklete az a hőmérséklet, amely jelzi a liofilizátum stabilitásának maximális hőmérsékletét. A liofilizátum stabilitásának maximális hőmérséklete tehát R 0 és 1 közötti értékeinél érhető el.
Dezamidált alakok:
A 4UI és 8UI tartalmú mintákkal kapott eredmények csak nagyon kis változást mutatnak, amely nagyon elfogadható az Európai Gyógyszerkönyv szomatropinra vonatkozó monográfiája által előírtakhoz képest. Az eredményekből arra következtethetünk, hogy ez az összetétel 25 °C-on megfelelően stabil.
Összefoglalva kimutattuk, hogy az liofilizátumok valamennyi tulajdonsága optimális értéket mutat egy bizonyos R intervallumban. Ez a következőképpen foglalható össze:
Táblázat
Oligomer+polimer % (hGH stabilitás) R értéke 0,1 és 1 közötti
Urátoxidáz enzimaktivitása 1 hónapos 35 °C-on végzett tárolás után R értéke 0,4 és 1 közötti
hGH oldatok zavarossága R értéke 0 és 1,5 közötti
HU 220 220 Β
Táblázat(folytatás)
Urátoxidáz-oldatok zavarossága R értéke 0,2 és 1 közötti
A liofilizátumok külleme R értéke 0,125 és 1,7 közötti
Csak az alanin kristályos R értéke 0 és 1 közötti
Maximális üvegátalakulási hőmérséklet R értéke 0 és 1 közötti
Az egyes analitikai tulajdonságok (oligomer+polimer %, hGH-stabilitás, urátoxidáz enzimaktivitása egyhónapos 35 °C-os tárolás után, hHG-oldatok zavarossága, urátoxidázoldatok zavarossága, a liofilizátumok külleme, a csak az alanin kristályos volta, a maximális 15 üvegátalakulási hőmérséklet) esetén találunk egy bizonyos optimális intervallumot. Megfelelő összetétel előállításához egy előnyös R intervallumot definiálunk, vagyis O,1<R<1.
Találmányunkat a következőkben példákkal illuszt- 20 ráljuk, de nem kívánjuk azokra korlátozni.
1. példa
Adagolásra alkalmas készlet, amely 4UI hGH-t tartalmazó liofilizátumot és a visszaalakításhoz 0,5 ml in- 25 jekcióminőségű vizet tartalmaz.
Komponensek Kiszerelési egység összetétele
A hGH 4UI
alanin 10,5 mg
mannit 4,77 mg
dinátrium-foszfát-dodeka- hidrát 0,7 mg
(3 ml-es 1-es típusú fehér üvegflakonban,
szürke klór-butil hengeres dugóval és,
13 mm átmérőjű kék alumínium, flip-off kupakkal lezárva)
B injektálható készítményekhez alkalmas víz qsp 0,5 ml
2. példa
Adagolásra alkalmas készlet, amely 8UI hGH-t tartalmazó liofilizátumot és a visszaalakításhoz 1 ml injekcióminőségű vizet tartalmaz.
Komponensek Kiszerelési egység összetétele
A hGH 8UI
alanin 21 mg
mannit 9,54 mg
dinátrium-foszfát-dodekahidrát 1,4 mg
(3 ml-es 1-es típusú fehér üvegflakonban,
szürke klór-butil hengeres dugóval és,
13 mm átmérőjű kék alumínium flip-off kupakkal lezárva)
B injektálható készítményekhez alkalmas víz 1 ml
3. példa
Adagolásra alkalmas készlet, amely 18 UI hGH-t tartalmazó liofilizátumot és a visszaalakításhoz 1 ml injekcióminőségű vizet tartalmaz.
Komponensek Kiszerelési egység összetétele
A hGH 18UI
alanin 21 mg
mannit 9,54 mg
dinátrium-foszfát-dodeka- hidrát 1,4 mg
(3 ml-es 1-es típusú fehér üvegflakonban
13 mm átmérőjű szürke klórbutil hengeres dugóval és
13 mm átmérőjű fedeles alumínium kupakkal lezárva)
B injektálható készítményekhez alkalmas víz 1 ml
4. példa
8UI hGH-t tartalmazó liofilizátumok injektálható készítmények számára 1 ml-ben
Hőmérséklet °C-ban X 5 25 35 5 25 35
Időtartam napokban 0 90 90 180 180 180 180
Az ellenőrzés fajtája Alkalma- , , Előírások zott eljárás eredmé- nyek eredmé- nyek eredmé- nyek eredmé- nyek eredmé- nyek eredmé- nyek eredmé- nyek
Tulajdonságok
Küllem megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel
HU 220 220 Β
Azonosítás
hGH inverz fázis megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel
kizárásos kromatogr. megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel
Vizsgálat
Dezamidált alakok anioncsere <6,5% 1,0% 1,0% 1,5% 2,2% 1,5% 1,95% 3,3%
Dimerek és rokon vegyületek kizárosos kromatog- ráfia < 6,0% 1,0% 0,75% 1,5% 1,7% 0,8% 1,2% 2,2%
Levágott alakok elektrofo- rézis < 2,0% < 2,0% < 2,0% < 2,0% < 2,0% < 2,0% < 2,0% < 2,0%
Rokon fehérjék elektrofo- rézis megfelel1 megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel
Víztarta- lom <1,5% <0,45 <0,41 <0,68 <0,73 <0,47 <n.e.2 <n.e.2
Meghatározás mg/flakonban inverz fázis 2,93-3,24 3,0 3,1 3,0 2,95 2,96 2,93 2,94
Visszaalakított oldat
Kísérlet Küllem Európai Gyógyszer- könyv < susp II < susp II < susp II < susp II < susp II
Európai Gyógyszer- könyv színtelen színtelen színtelen színtelen színtelen
a pH meghatározása 6,5-7,5 6,94 7,02 7,03 7,01
oldódás < 1 perc <1 perc < 1 perc < 1 perc < 1 perc
1: nincs más egyéb sáv, mint az összehasonlító mintában jelen lévő nyomoké, illetve a hGH oligomer nyomoké 2: n.e. jelentése nem vizsgált
5. példa
4UI hGH-t tartalmazó liofilizátum injektálható készítményekhez 0,5 ml-hez
Hőmérséklet °C-ban X 55 25 35 5 35
Időtartam napokban 0 90 90 90 180 180
Az ellenőrzés fajtája Alkalmazott , y.,, Előírások eljárás eredmények eredmények eredmények eredmények eredmények eredmények
Tulajdonságok
Küllem megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel
Azonosítás
hGH inverz fázis megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel
kizárásos kromatogr. megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel
HU 220 220 Β
Vizsgálat
Dezamidált alakok anioncsere <6,5% 1,3% 1,0% 1,9% 2,8% 1,3% 3,9%
Dimerek és rokon vegyületek kizárosos kroma- tográffa < 6,0% 1,0% 0,6% 1,9% 3,0% 1,0% 3,3%
Levágott alakok elektrofo- rézis < 2,0% < 2,0% < 2,0% < 2,0% < 2,0% < 2,0% < 2,0%
Rokon fehérjék elektro- forézis megfelel1 megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel megfelel
Víztartalom <1,5% <0,65 <0,58 <0,97 <0,93 <0,81 <n.e.2
Meghatározás mg/flakonban inverz fázis 1,50-1,70 1,58 1,57 1,61 1,54 1,56 1,55
Visszaalakított oldat
Kísérlet Küllem Európai Gyógyszer- könyv <susp II <susp II <susp II <susp II <susp II <susp II <susp II
Európai Gyógyszer- könyv színtelen színtelen színtelen színtelen színtelen színtelen színtelen
a pH meghatározása 6,5-7,5 7,01 7,22 6,96 6,99 7,06 7,00
oldódás < 1 perc <1 perc <1 perc <1 perc < 1 perc <1 perc <1 perc
1: nincs más egyéb sáv, mint az összehasonlító mintában jelen lévő nyomoké, illetve a hGH oligomer nyomoké 2: n.e. jelentése nem vizsgált
6. példa
Analitikai eredmények 1 éves 5 °C-on végzett stabilitási vizsgálat után 18UI hGH esetén
Opálosodás (UAxlO-3) PH Víztartalom Dezamidált alakok Oligomerek+ polimerek
Előírások < 20 <1,5% < 5% < 6%
t=0 1 7,9 0,33% 1,36% 0,63%
1 hónap 1 8 0,29% - -
3 hónap 3 0,32% 1,25% 0,45%
6 hónap 4 7,83 1,03% 1,4% 0,5%
12 hónap 7 1,19% 1,15% 1,11%
Az eredményeket R=0,45 értékkel kaptuk.
7. példa
Analitikai eredmények 3 hónapos 25 °C-on végzett stabilitásvizsgálat után 18UI hGH-val:
Opálosodás (UAxlO3) pH Víztartalom Dezamidált alakok Oligomerek+ polimerek
Előírások < 20 <1,5% < 5% < 6%
t=0 1 7,9 0,33% 1,36% 0,63%
1 hónap 3 7,72 0,35% - -
3 hónap 9 7,65 0,32% 1,37% 0,85%
Az eredményeket R=0,45 értékkel kaptuk.
HU 220 220 Β
8. példa
UAE urátoxidáz/flakon tartalmú liofilizátumok
Összetétel Újra visszaalakított oldat
Átlátszóság Európai Gyógyszerkönyv Elszíneződés Európai Gyógyszerkönyv
t=0 1 hónap 3 hónap t=0 1 hónap 3 hónap
35 °C 5 °C 25 °C 35 °C 5 °C 25 °C
7,3 mg mannit+16,2 mg Lalanin 30 mmólos Na2HPO4 <=II <=II I-II Ildii színtelen színtelen színtelen színtelen
20,8 mg mannit+10,4 mg Lalanin 30 mmólos Na2HPO4 < I >=1II dl III-IV színtelen színtelen színtelen színtelen
27,7 mg mannit+6,9 mg Lalanin 21 mmólos Na2HPO4 <111 >IV =111 >IV színtelen színtelen színtelen színtelen
8. példa folytatása
Összetétel A visszaállított oldat pH-ja Enzimaktivitás UAE/flakon Víztarta lom %-ban
t=0 1 hónap 3 hónap t=0 1 hónap 1 hónap
35 °C 5 °C 25 °C 35 °C 5 °C 25 °C
7,3 mg mannit +16,2 mg Lalanin 30 mmólos Na2HPO4 7,96 7,96 7,91 7,93 32,9* 30,0* 30,2* 33,3* 3,2
20,8 mg mannit+10,4 mg Lalanin 30 mmólos Na2HPO4 8,03 8,05 8,01 8,01 28,1* 22,5 32,0* 22,7 2,8
27,7 mg mannit+6,9 mg Lalanin 21 mmólos Na2HPO4 8,04 8,06 8,00 8,03 28,7* 23,0 31,2* 20,5 2,1
*A tartalom nem változik lényegesen az időben tekintettel a mérési módszer pontosságára (± 10%).
9. példa
UAE/flakon urátoxidáz-tartalmú liofilizátum stabilitási eredményei egyhónapos 35 °C-on és 3 hónapos 5,25 és 35 °C-on végzett vizsgálat után
Összetétel Újra visszaalakított oldat
Átlátszóság Európai Gyógyszerkönyv Elszíneződés Európai Gyógyszerkönyv
t=0 1 hónap 3 hónap t=0 1 hónap 3 hónap
35 °C 5 °C 25 °C 35 °C 25 °C 25 °C 35 °C
40 mmol Na2HPO4,14,15 mg alanin, 14,15 mg mannit I-II =IV I-II =11 színte- len színte- len színte- len színte- len színte- len
40 mmol Na2HPO4,15,9 mg alanin, 10,6 mg mannit I-II II-III < I =1 színte- len színte- len színte- len színte- len színte- len
40 mmol Na2HPO4,14,15 mg alanin, 14,15 mg mannit I II III IV =1 < I színte- len színte- len színte- len színte- len színte- len
40 mmol Na2HPO4,16 mg alanin, 7,3 mg mannit I-II < IV < I I-II színte- len színte- len színte- len színte- len színte- len
40 mmol Na2HPO4, 18,9 mg alanin, 4,72 mg mannit II II < IV II-III > IV színte- len színte- len színte- len színte- len színte- len
HU 220 220 Β
9. példa folytatása
Összetétel A visszaállított oldat pH-ja Víztartalom
t=0 1 hónap 3 hónap
35 °C 5 °C 25 °C
40 mmol Na2HPO4, 14,15 mg alanin, 14,15 mg mannit 8,01 8,01 8,04 8,02 -
40 mmol Na2HPO4, 15,9 mg alanin, 10,6 mg mannit 8,00 7,97 8,02 8,01 -
40 mmol Na2HPO4,14,15 mg alanin, 14,15 mg mannit 7,99 7,98 8,02 8,00 2,0%
40 mmol Na2HPO4, 16 mg alanin, 7,3 mg mannit 7,96 7,94 7,97 7,96 -
40 mmol Na2HPO4, 18,9 mg alanin, 4,72 mg mannit 7,96 7,93 7,96 7,95 -
9. példa folytatása
Összetétel Enzimaktivitás UAE/flakon
t=0 1 hónap 3 hónap
35 °C 5 °C 25 °C
40 mmol Na2HPO4,14,15 mg alanin, 14,15 mg mannit 30,3* 23,2 29,8* 30,5*
40 mmol Na2HPO4,15,9 mg alanin, 10,6 mg mannit 29,7* 28,9* 30,9* 29,8*
40 mmol Na2HPO4,14,15 mg alanin, 14,15 mg mannit 29,2* 26,8* 30,3* 30,0
40 mmol Na2HPO4,16 mg alanin, 7,3 mg mannit 30,1* 20,5* 30,1* 30,5*
40 mmol Na2HPO4,18,9 mg alanin, 4,72 mg mannit 29,4* 17,9* 29,4* 25,7
*: A tartalom nem változik lényegesen az időben tekintettel a mérési módszer pontosságára (±10%).

Claims (11)

1. Stabil liofilizált, gyógyászatilag alkalmazható készítmény, amely egy hormon, egy enzim vagy egy citokin közül választott fehérjét, egy puffért, alanint és mannitot tartalmaz, amelyben az R arány, amely a mannit tömege/az alanin tömege, 0,1 és 1 közötti; kivéve az albumint is tartalmazó készítményeket.
2. Az 1. igénypont szerinti készítmény, amelyben a fehérje egy hormon vagy egy enzim.
3. Az 1. igénypont szerinti készítmény injektálható oldattá történő visszaalakításhoz.
4. Az 1. igénypont szerinti készítmény szubkután, intravénás vagy intramuszkuláris úton beadható injektálható oldattá történő visszaalakításhoz.
5. A 2. igénypont szerinti készítmény, ahol a hormon a hGH.
6. A 2. igénypont szerinti készítmény, ahol az en45 zim az urátoxidáz.
7. A 2. igénypont szerinti készítmény, ahol a citokin az interleukin-13.
8. Az 1. igénypont szerinti készítmény, ahol az alanin kristályos formában és a mannit amorf formában
50 van jelen.
9. Az 1. igénypont szerinti készítmény, ahol a liofilizátum egy amorf és egy kristályos fázisból áll, és amelyben az amorf fázis főként mannitból és fehérjéből, a kristályos fázis főként alaninból áll.
55
10. A 2. igénypont szerinti készítmény, ahol a puffer egy foszfátpuffer.
11. Adagolásra alkalmas készlet, amely egy, az 1. igénypont szerinti készítményt és valamely annak injektálható oldattá történő visszaállításához szükséges olda60 tót tartalmaz.
HU9501276A 1994-05-04 1995-05-03 Fehérjét tartalmazó stabil liofilizált készítmény és adagolásra alkalmas készlet HU220220B (hu)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9405486A FR2719479B1 (fr) 1994-05-04 1994-05-04 Formulation stable lyophilisée comprenant une protéine: kit de dosage.

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU9501276D0 HU9501276D0 (en) 1995-06-28
HUT72325A HUT72325A (en) 1996-04-29
HU220220B true HU220220B (hu) 2001-11-28

Family

ID=9462880

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9501276A HU220220B (hu) 1994-05-04 1995-05-03 Fehérjét tartalmazó stabil liofilizált készítmény és adagolásra alkalmas készlet

Country Status (25)

Country Link
US (1) US5763409A (hu)
EP (1) EP0682944B1 (hu)
JP (1) JP2948125B2 (hu)
KR (1) KR100273053B1 (hu)
CN (1) CN1088583C (hu)
AT (1) ATE178484T1 (hu)
AU (1) AU694763B2 (hu)
CA (1) CA2148537C (hu)
CZ (1) CZ286195B6 (hu)
DE (1) DE69508837T2 (hu)
DK (1) DK0682944T3 (hu)
ES (1) ES2131781T3 (hu)
FI (1) FI117321B (hu)
FR (1) FR2719479B1 (hu)
GR (1) GR3030146T3 (hu)
HU (1) HU220220B (hu)
IL (1) IL113578A (hu)
MX (1) MX9502034A (hu)
NO (1) NO320364B1 (hu)
NZ (1) NZ272045A (hu)
PL (1) PL179240B1 (hu)
RU (1) RU2136306C1 (hu)
SI (1) SI0682944T1 (hu)
TW (1) TW397687B (hu)
ZA (1) ZA953596B (hu)

Families Citing this family (56)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US6685940B2 (en) 1995-07-27 2004-02-03 Genentech, Inc. Protein formulation
AU716785B2 (en) * 1995-07-27 2000-03-09 Genentech Inc. Stabile isotonic lyophilized protein formulation
DE19539574A1 (de) * 1995-10-25 1997-04-30 Boehringer Mannheim Gmbh Zubereitungen und Verfahren zur Stabilisierung biologischer Materialien mittels Trocknungsverfahren ohne Einfrieren
FR2740686B1 (fr) 1995-11-03 1998-01-16 Sanofi Sa Formulation pharmaceutique lyophilisee stable
EP0852951A1 (de) * 1996-11-19 1998-07-15 Roche Diagnostics GmbH Stabile lyophilisierte pharmazeutische Zubereitungen von mono- oder polyklonalen Antikörpern
FR2768341B1 (fr) 1997-09-18 2000-04-14 Lab Francais Du Fractionnement Composition pharmaceutique placebo lyophilisable destinee a imiter un medicament, notamment a base de proteines ou de polypeptides
EP0913177A1 (de) * 1997-11-03 1999-05-06 Roche Diagnostics GmbH Verfahren zur Herstellung trockener, amorpher Produkte enthaltend biologisch aktive Materialien mittels Konvektionstrocknung, insbesondere Sprühtrocknung
EP0913178A1 (en) * 1997-11-03 1999-05-06 Boehringer Mannheim Gmbh Process for the manufacture of dry, amorphous products comprising biologically active material by means of convection drying and products obtainable by the process
WO1999047174A1 (en) * 1998-03-18 1999-09-23 Cambridge Biostability Limited Amorphous glasses for stabilising sensitive products
DE60035260T2 (de) * 1999-02-22 2007-10-18 The University Of Connecticut, Farmington Neue albuminfreie faktor viii formulierungen
WO2001030373A1 (fr) * 1999-10-28 2001-05-03 Institut Neftekhimicheskogo Sinteza Imeni A.V.To Pchieva Rossiiskoi Akademii Nauk (Inkhs Ran) Composition polypeptidique
US6653062B1 (en) 2000-07-26 2003-11-25 Wisconsin Alumni Research Foundation Preservation and storage medium for biological materials
HU228583B1 (en) 2000-11-07 2013-04-29 Novartis Vaccines & Diagnostic Stabilized interferon compositions
US6887462B2 (en) * 2001-04-09 2005-05-03 Chiron Corporation HSA-free formulations of interferon-beta
RU2279292C2 (ru) * 2001-10-24 2006-07-10 Пари Гмбх Набор для приготовления фармацевтической композиции
MXPA04011129A (es) 2002-05-13 2005-02-17 Becton Dickinson Co Sistema de recoleccion de muestra de inhibidor de proteasa.
US6803046B2 (en) * 2002-08-16 2004-10-12 Bracco International B.V. Sincalide formulations
ATE404176T1 (de) * 2003-01-08 2008-08-15 Novartis Vaccines & Diagnostic Stabilisierte lyophilisierte zubereitungen mit gewebefaktor-inhibitor (tfpi) oder varianten des gewebefaktor-inhibitors
GB0304636D0 (en) * 2003-02-28 2003-04-02 Britannia Pharmaceuticals Ltd Pharmaceutical composition for nasal delivery
DE10333317A1 (de) * 2003-07-22 2005-02-17 Biotecon Therapeutics Gmbh Formulierung für Proteinarzneimittel ohne Zusatz von humanem Serumalbumin (HSA)
GB0404586D0 (en) * 2004-03-01 2004-04-07 Britannia Pharmaceuticals Ltd Improvements in or relating to organic materials
US11229746B2 (en) 2006-06-22 2022-01-25 Excelsior Medical Corporation Antiseptic cap
TWI417113B (zh) * 2006-11-07 2013-12-01 Acambis Inc 以凍乾法穩定疫苗
EP2170268A2 (en) * 2007-06-25 2010-04-07 Amgen, Inc. Compositions of specific binding agents to hepatocyte growth factor
GB0715285D0 (en) * 2007-08-06 2007-09-12 Britannia Pharmaceuticals Ltd Improvements in or relating to powdered medicaments for nasal delivery
US9078992B2 (en) 2008-10-27 2015-07-14 Pursuit Vascular, Inc. Medical device for applying antimicrobial to proximal end of catheter
NZ593190A (en) 2008-11-07 2013-01-25 Baxter Int Factor viii formulations
NZ592644A (en) * 2008-11-28 2013-09-27 Abbott Lab Stable antibody compositions and methods for stabilizing same
EP2496246B1 (en) * 2009-11-03 2018-06-27 Grifols Therapeutics LLC Composition, method, and kit for alpha-1 proteinase inhibitor
SG10201408505SA (en) * 2009-12-22 2015-02-27 Celldex Therapeutics Inc Vaccine compositions
RU2448156C1 (ru) * 2011-03-17 2012-04-20 Эспосито Трейдинг Лтд Способ получения лиофилизированной субстанции
RU2448158C1 (ru) * 2011-03-24 2012-04-20 Эспосито Трейдинг Лтд Способ получения препарата фортелизин, обладающего фибринолитическими свойствами, и его применение для лечения инфаркта миокарда
WO2013009998A2 (en) 2011-07-12 2013-01-17 Pursuit Vascular, Inc. Device for delivery of antimicrobial agent into trans-dermal catheter
DK2760998T3 (en) * 2011-11-22 2017-04-24 Siemens Healthcare Diagnostics Inc Devices with dried reagents for reconstitution as calibration and / or quality control solutions, and methods of preparation and use thereof
US20140017318A1 (en) * 2012-07-10 2014-01-16 Kevin O'Connell Method to produce a medicinal product comprising a biologically active protein and the resulting product
US9314519B2 (en) 2012-08-21 2016-04-19 Intervet Inc. Liquid stable virus vaccines
US9393298B2 (en) 2013-03-15 2016-07-19 Intervet Inc. Liquid stable bovine virus vaccines
US9480739B2 (en) 2013-03-15 2016-11-01 Intervet Inc. Bovine virus vaccines that are liquid stable
TW201605468A (zh) 2013-09-27 2016-02-16 韓美藥品股份有限公司 長效人類生長激素接合物之製劑
AR097762A1 (es) 2013-09-27 2016-04-13 Intervet Int Bv Formulaciones secas de vacunas que son estables a temperatura ambiente
AR099470A1 (es) 2014-02-17 2016-07-27 Intervet Int Bv Vacunas de virus de aves de corral líquidas
TWI670085B (zh) 2014-02-19 2019-09-01 荷蘭商英特威國際公司 液體穩定之豬病毒疫苗
ES2755352T3 (es) 2014-05-02 2020-04-22 Excelsior Medical Corp Paquete en tira para tapón antiséptico
EP3294404A4 (en) 2015-05-08 2018-11-14 ICU Medical, Inc. Medical connectors configured to receive emitters of therapeutic agents
JP2018524067A (ja) 2015-06-11 2018-08-30 アットウィル メディカル ソルーションズ インコーポレイテッド アンチトロンビン−ヘパリン組成物を利用する医療機器、システムおよび方法
EP4194043A1 (en) 2016-10-14 2023-06-14 ICU Medical, Inc. Sanitizing caps for medical connectors
WO2018204206A2 (en) 2017-05-01 2018-11-08 Icu Medical, Inc. Medical fluid connectors and methods for providing additives in medical fluid lines
US11110063B2 (en) 2017-08-25 2021-09-07 MAIA Pharmaceuticals, Inc. Storage stable sincalide formulations
US11541221B2 (en) 2018-11-07 2023-01-03 Icu Medical, Inc. Tubing set with antimicrobial properties
US11400195B2 (en) 2018-11-07 2022-08-02 Icu Medical, Inc. Peritoneal dialysis transfer set with antimicrobial properties
US11541220B2 (en) 2018-11-07 2023-01-03 Icu Medical, Inc. Needleless connector with antimicrobial properties
US11517732B2 (en) 2018-11-07 2022-12-06 Icu Medical, Inc. Syringe with antimicrobial properties
US11534595B2 (en) 2018-11-07 2022-12-27 Icu Medical, Inc. Device for delivering an antimicrobial composition into an infusion device
WO2020106985A1 (en) 2018-11-21 2020-05-28 Pursuit Vascular, Inc. Antimicrobial device comprising a cap with ring and insert
JP2024500319A (ja) 2020-12-07 2024-01-09 アイシーユー・メディカル・インコーポレーテッド 腹膜透析キャップ、システム、及び方法

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5822445B2 (ja) * 1982-07-08 1983-05-09 株式会社 ミドリ十字 安定な固体の人血漿コリンエステラ−ゼ製剤の製法
US5037644A (en) * 1986-10-27 1991-08-06 Cetus Corporation Pharmaceutical compositions of recombinant interleukin-2 and formulation processes
US5096885A (en) * 1988-04-15 1992-03-17 Genentech, Inc. Human growth hormone formulation
JPH0296536A (ja) * 1988-09-29 1990-04-09 Green Cross Corp:The プラスミノゲン乾燥製剤
EP0437662B1 (de) * 1990-01-18 1994-09-14 Cereria Amos Sgarbi S.P.A. Grablicht
US5192743A (en) * 1992-01-16 1993-03-09 Genentech, Inc. Reconstitutable lyophilized protein formulation
SE9201073D0 (sv) * 1992-04-03 1992-04-03 Kabi Pharmacia Ab Protein formulation
DE4239877C1 (de) * 1992-11-27 1994-03-17 Boehringer Ingelheim Int Stabilisierte Superoxid-Dismutase (SOD)-Zusammensetzung

Also Published As

Publication number Publication date
DE69508837T2 (de) 1999-11-04
AU1777495A (en) 1995-11-16
NZ272045A (en) 1996-02-27
AU694763B2 (en) 1998-07-30
NO951724L (no) 1995-11-06
TW397687B (en) 2000-07-11
FI117321B (fi) 2006-09-15
DE69508837D1 (de) 1999-05-12
CZ108195A3 (en) 1996-02-14
PL179240B1 (pl) 2000-08-31
KR950031103A (ko) 1995-12-18
FR2719479A1 (fr) 1995-11-10
RU2136306C1 (ru) 1999-09-10
DK0682944T3 (da) 1999-10-18
FI952119A (fi) 1995-11-05
CA2148537C (en) 2002-07-16
CN1088583C (zh) 2002-08-07
EP0682944A1 (fr) 1995-11-22
MX9502034A (es) 1997-02-28
GR3030146T3 (en) 1999-08-31
NO320364B1 (no) 2005-11-28
PL308416A1 (en) 1995-11-13
CN1116522A (zh) 1996-02-14
FI952119A0 (fi) 1995-05-03
ATE178484T1 (de) 1999-04-15
CZ286195B6 (cs) 2000-02-16
SI0682944T1 (en) 1999-08-31
ZA953596B (en) 1996-11-04
HU9501276D0 (en) 1995-06-28
ES2131781T3 (es) 1999-08-01
KR100273053B1 (ko) 2000-12-01
FR2719479B1 (fr) 1996-07-26
EP0682944B1 (fr) 1999-04-07
JP2948125B2 (ja) 1999-09-13
US5763409A (en) 1998-06-09
IL113578A0 (en) 1995-08-31
HUT72325A (en) 1996-04-29
CA2148537A1 (en) 1995-11-05
NO951724D0 (no) 1995-05-03
JPH0853361A (ja) 1996-02-27
IL113578A (en) 1999-10-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU220220B (hu) Fehérjét tartalmazó stabil liofilizált készítmény és adagolásra alkalmas készlet
AU713383B2 (en) Stable freeze-dried pharmaceutical formulation
US4496537A (en) Biologically stable alpha-interferon formulations
EP0857060B1 (de) Zubereitungen und verfahren zur stabilisierung biologischer materialien mittels trocknungsverfahren ohne einfrieren
CA2169834C (en) Pharmaceutical formulations of nerve growth factor
US5919443A (en) Stable lyophilized pharmaceutical preparations of G-CSF
FI78236C (fi) Foerfarande foer framstaellning av en frystorkad doseringsenhet av cis-platina (ii) diamindiklorid.
BG61267B1 (en) Growth hormone crystals and method for production thereof
JPH05331071A (ja) カルシトニン遺伝子関連ペプチド類の凍結乾燥組成物および安定化法
US5635176A (en) Pharmaceutical compositions containing IL-6
US5489577A (en) Semi-solid pharmaceutical agent and process for producing the same
CA2288649A1 (en) Stable pharmaceutical administration forms of peptides, proteins and nucleic acids
US6152897A (en) Syringe
DE69101784T2 (de) Stabilisierte zusammensetzung enthaltend ein fibroblastwachstumsfaktor.
CA1289071C (en) Pharmaceutical compositions for parenteral use containing a calcitonin as the active ingredient
CN100376251C (zh) 含有甲基维生素b12的冻干制剂及其制备方法
HU218103B (hu) Nem-glikozilezett, rekombináns humán interleukin-2 redukált alakját tartalmazó, stabilizált gyógyászati készítmény és eljárás előállítására
KR20050079740A (ko) 산안정성 단백질의 주사용 용액 제형
MXPA99009550A (en) Stable pharmaceutical administration forms of peptides, proteins and nucleic acids

Legal Events

Date Code Title Description
DGB9 Succession in title of applicant

Owner name: SANOFI-SYNTHELABO, FR