PL179240B1 - Stabilny, liofilizowany srodek dopuszczalny farmaceutycznieoraz roztwór do iniekcji podskórnych, dozylnych lub domiesniowych PL PL PL - Google Patents

Stabilny, liofilizowany srodek dopuszczalny farmaceutycznieoraz roztwór do iniekcji podskórnych, dozylnych lub domiesniowych PL PL PL

Info

Publication number
PL179240B1
PL179240B1 PL95308416A PL30841695A PL179240B1 PL 179240 B1 PL179240 B1 PL 179240B1 PL 95308416 A PL95308416 A PL 95308416A PL 30841695 A PL30841695 A PL 30841695A PL 179240 B1 PL179240 B1 PL 179240B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
mannitol
protein
alanine
lyophilisate
amorphous
Prior art date
Application number
PL95308416A
Other languages
English (en)
Other versions
PL308416A1 (en
Inventor
Alain Bayol
Thierry Breul
Patrice Dupin
Philippe Faure
Original Assignee
Sanofi Sa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sanofi Sa filed Critical Sanofi Sa
Publication of PL308416A1 publication Critical patent/PL308416A1/xx
Publication of PL179240B1 publication Critical patent/PL179240B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/81—Packaged device or kit

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

1. Stabilny, liofilizowany srodek dopuszczalny farmaceutycznie, zawierajacy proteine, bufor, mannit i aminokwasy, znamienny tym, ze zawiera alanine i mannit w stosunku R = masa mannitu/masa alaniny zawartym pomiedzy 0,1 a 1. 9. Roztwór do iniekcji podskórnych, dozylnych lub domiesniowych, dla ludzi lub zwierzat, zawie- rajacy jalowy, dopuszczalny farmaceutycznie roz- puszczalnik, przeciwbakteryjny srodek konserwujacy oraz liofilizat proteiny zawierajacy bufor, mannit i aminokwas, znamienny tym, ze zawiera alanine i mannit w stosunku R=masa alaniny/masa mannitu za- wartym pomiedzy 0,1 a 1. FIG. 2 PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazkujest także roztwór do iniekcji podskórnych, dożylnych lub domięśniowych, dla ludzi lub zwierząt, zawierający jałowy, dopuszczalny farmaceutycznie rozpuszczalnik, przeciwbakteryjny środek konserwujący oraz liofilizat proteiny zawierający bufor, mannit i aminokwas, charakteryzujący się tym, że zawiera alaninę i mannit w stosunku R=masa alaniny/masa mannitu zawartym pomiędzy 0,1 a 1.
Roztwór ten może zawierać inne dopuszczalne farmaceutycznie zaróbki, znane z techniki, jak na przykład korozpuszczalniki, środki konserwujące, antyutleniacze lub czynniki chelatujące.
Korzystnie roztwórjako proteinę zawiera hormon, zwłaszcza ludzki hormon wzrostu hGH (hormon wzrostu człowieka), enzym, zwłaszcza moczan oksydazy lub cytokinę, zwłaszcza interleukinę-13, zaś jako bufor korzystnie zawiera bufor fosforanowy.
Korzystny jest rozpuszczalnik wybrany z wody destylowanej, 0,9% wodnego roztworu chlorku sodu i 5% roztworu wodnego glukozy.
Proteina bilogicznie aktywna (lub bioaktywna), o której mowa w niniejszym wynalazku, może być polipeptydem glukozowanym lub nie, naturalnym, syntetycznym, półsyntetycznym lub kombinacją takąjak stosowana w praktyce klinicznej lub laboratoryjnej. W szczególności omawiana proteina może być na przykład hormonem jak hormon wzrostu, korzystnie hormon wzrostu człowieka (hGH), hormon luteinowym (LH-RH), gonadotropiną. Proteina może być również enzymem, na przykład enzymem trombolitycznym takimjak urokinaza, pro-urokinaza, streptokinaza, stafilokinaza, aktywatorem tkankowym plazminogenu (tPA) lub enzymem takim jak fosfataza, sulfataza, acylo-transferaza, mono-aminooksydaza, moczan oksydazy. Także, proteina o której mowa według wynalazku może być cytokiną, jak na przykład interleukina-2 (IL-2), interleukina -4 (IL-4) interleukina-6 (IL-6) lub interleukina-13 (IL-13). Inną klasą protein objętych wynalazkiem są na przykład antyciała, imunoglobuliny, imunotoksyny. Peptydy takie jak cholecystokinia (CCK), substancja P, neurokinina A, neurokinia B, neurotensina, neuropeptyd Y, eledoizyna, bombezyna mogą stanowić składniki według wynalazku.
Proteinąbiologicznie aktywnąjest korzystnie hGH (ludzki hormon wzrostu), moczan oksydazy lub interleu.kina-13.
Hormon wzrostu człowieka jest proteiną złożoną z jednego łańcucha polipeptydowego o 191 aminokwasach z dwoma mostkami disiarczkowymi pomiędzy pozostałościami cysteiny 53 i 165, a pozostałościami cysteiny 182 i 189.
Moczan oksydazy jest enzymem, który utlenia kwas moczowy do alantoiny i jest ekstrahowany z biomasy Aspergillus flavus (Labourer etal., Bull. Soc. Chimj. Biol. 1968,50, 811-825). Od ponad 20 lat jest używany również do leczenia hiperurycemii.
ANDc kodujący dla tej proteiny został niedawno klonowany i poddawany ekspresji w E. coli (Legoux R et al., J. ofBiol. Chem., 1992-267,12,8565-8570) Aspergillus flavus et Saccharomyces cerevisiae. Enzym jest tetramerem posiadającym identyczne grupy o masie molekularnej rzędu 32000. Monomer, złożony zjednego łańcucha polipeptydowego o 301 aminokwasach, nie posiada mostków disiarczkowych i jest acetylowany na grupie N-końcowej.
Interleukina-13 jest cytokiną złożoną z jednego łańcucha polipeptydowego o 112 aminokwasach z dwoma mostkami disiarczkowymi (Minty i inni, Nature, 1993, 362, 248-250).
Uzyskanie współistnienia fazy amorficznej (mannit+proteina) z faząalaniny krystalicznej jest niezależne od obecności i stężenia roztworu buforowego korygującego pH roztworu, ale zależy od poprzednio zdefiniowanego stosunku R.
W celu zaproponowania środka proteinowego powszechnie dostępnego jako czynnik terapeutyczny, niezbędne jest przygotowanie go w formie wystarczająco stabilnej, aby utrzymać jego aktywność biologiczną pomiędzy momentem wytworzenia a czasem zastosowania. Na przykład, hGH został spreparowany na bardzo liczne sposoby, takiejak przedstawiono w opisach
179 240 lub następujących zgoszeniach patentowych: US 5,096,885; WO 89/09614; WO 92/17200·
Au-30771/89; WO 93/19773; WO 93/19776. ’
Środki, według wynalazku, mogąbyć przechowywane w temperaturze otoczenia, podczas gdy środki zawierające te proteiny, obecnie dostępne handlowo, muszą być przechowywane w temperaturze od 2°C do 8°C.
Dla większości przypadków postać farmaceutyczna jest liofilizowana, zamrożoną lub w roztworze. Zawiera proteinę, roztwór buforowy, glicynę, argininę, mannit, cynk, środki powierzchniowo czynne, dekstran, EDTA lub inne zarobki, ale nigdy połączenie alanina/mannit o stosunku masowym R zawartym pomiędzy 0,1 a 1. Formy liofilizowane lub zamrożone są stosowane dla utrzymania integralności biochemicznej i aktywności biologicznej cząsteczki. Środki liofilizowane powinny być odtworzone przed zastosowaniem przez dodanie sterylnego, farmaceutycznie dopuszczalnego rozpuszczalnika, jak woda destylowana, roztwory wodne chlorku sodu o stężeniu, 0,9% lub glukoza o stężeniu 5% lub wszystkie inne rozpuszczalniki fizjologicznie dopuszczalne, zawierające lub nie środki konserwujące antybakteryjne, takie jak alkohol benzylowy, fenol lub metakrezol.
Środek stabilny w temperaturze otoczenia, aż do jego odtworzeniajest szczególnie korzystny do podawania ambulatoryjnego jak w przypadku hGH w postaci fiolek lub w postaci dawek wielokrotnych.
Środek w ten sposób przygotowany może być również dołączony do zestawu dozującego.
Kompozycjąkorzystną, według wynalazku, jest więc liofilizat. Liofilizat tenjest otrzymywany przez liofilizację z roztworu.
Procedura otrzymywania tego środka obejmuje etapy mieszania, rozpuszczania, filtracji i liofilizacji.
Skład roztworu poddawanego liofilizacji jest następujący:
Proteina, roztwór buforowy farmaceutycznie dopuszczalny dla uregulowania pH, alanina, mannit o stosunku masowym R=masa mannitu/masy alaniny, zawartym pomiędzy 0,1 a 1, woda dla przygotowania roztworu do wstrzyknięć.
Roztwór do liofilizowania przygotowuje się w sposób następujący:
Roztwór proteinyjest otrzymywany na kolumnie żelowo-filtracyjnej i zawiera roztwór buforowy utrzymujący pH na poziomie równoważnym ze stabilnością proteiny. Do roztworu tego dodaje się żądaną ilość buforu, alaniny, mannitu i wody w taki sposób, aby rozpuścić wszystkie składniki. Roztwór jest filtrowany w sposób sterylny i przenoszony do pojemników, korzystnie fiolek lub kapsułek. Liofilizację roztworu prowadzi się następująco:
Roztwór przechodzi cykl zamrażania, następnie sublimacji i suszenia, przystosowany do objętości poddawanej liofilizacji oraz do zbiornika zawierającego roztwór. Korzystnie wybiera się szybkość zamrażania około -2°C/mn w liofilizatorze Usifroid(France) typu SMH15 lub SMJ100 lub SMH2000.
Czas, temperatura i ciśnienie suszenia liofilizatu sądostosowane do objętości roztworu liofilizowanego i ilości wody pozostającej w liofilizacie.
Wyczerpujące informacje na temat techniki otrzymywania środków gotowych do wstrzyknięć sądo dyspozycji techników w Pharmaceutical Sciences, 1985,17- te wydanie lub w William Na & Poili GP, The lyophilization of pharmaceuticals : przeglądzie literatury, J. Parenteral Sci. Tech., 19^^^, 38, (2), 48-59 lub w Franks F., Freeze-diying: from enpiricism to predictability, Cryo-letters, 1990,11, 93-110.
Otrzymuje się więc liofilizat, w którym alanina znajduje się wpostaci krystalicznej, a mannit w amorficznej postaci. Liofilizat może być przechowywany w temperaturze 25°C bez utraty aktywności biologicznej proteiny, którą zawiera.
Dla zilustrowania niniejszego wynalazku, oceniono wybrane przykładowo proteiny hGH lub moczanu oksydazy. Tak więc kilka roztworów zawierających hGH lub moczan oksydazy jako proteiny biologicznie aktywne, bufor fosforanowy o różnych stężeniach, o pH = 7 dla roztworów zawierających hGH (o 4 UI/0,5 ml) i pH = 8 dla tych, które zawierały moczan oksydazy
179 240 (o 30 UAE/ml, samego mannitu, samej alaniny lub mieszaniny alanina/ mannit) zostało przygotowanych, zliofilizowanych i zanalizowanych.
Kompozycje są opisane szczegółowo w przykładach tabeli 1 i 2 poniżej. Metody analizy, jak również czasy i temperatury uzyskiwania stabilności są również podane poniżej.
Tabela 1
W tabeli 1, poniżej podano badane kompozycje zawierające moczan oksydazy.
Nr zestawu mg Mannitu mg Alaniny R Bufor fosforanowy pH=8; mM Moczan oksydazy UAE(1)
1 33,0 0,0 +^ 50 30
2 27,7 6,9 4 30 30
3 20,8 10,4 2 30 30
4 13,6 13,6 1,000 40 30
5 10,2 15,3 0,67 40 30
6 7,3 16,0 0,46 40 30
7 7,3 16,2 0,45 30 30
8 9,5 21,0 0,45 50 30
9 4,6 18,3 0,25 40 30
10 2,5 20,0 0,125 40 30
11 0,0 16,0 0 50 30
(1) : UAE oznacza jednostkę aktywności enzymatycznej
Tabela 2
W tabeli 2 poniżej, podano badane kompozycje zawierające hGH.
Nr zestawu mg Mannitu mg Alaniny R Bufor fosforanowy pH=7;mM hGH UI’
12 12,5 0,0 +00 2,50 4
13 20,0 2,5 8 1,95 4
14 12,5 6,5 2 0,00 4
15 12,5 6,5 2 2,50 4
16 12,5 13,0 1 2,50 4
17 4,7 10,5 0,45 1,95 4
18 0,0 6,5 0 2,50 4
(’); UI Jednostka Międzynarodowa
Dla określenia różnych parametrów stosowano następujące metody analityczne:
Zawartość dimerów i substancji pokrewnych o wyższej masie cząsteczkowej:
Zawartość dimerów i substancji pokrewnych o wyższej masie cząsteczkowej była określana chromatograficznie (SEC-HPLC) przy zastosowaniu kolumny Superose 12 (Pharmacia, Ref.
17-0538-01). Produkt był eluowany roztworem buforowym fosforanu amonu o pH = 7,0 (1,38 g
179 240 diwodorofosforanu amonu w 1 litrze wody, korekta pH roztworu na wartość pH=7,0' za pomocą stężonego amoniaku 0,4 ml/minutę). Detekcję prowadzono przy 220 nm. (Zawartość tę podano w wynikach analitycznych jako procent oligomerów + polimerów).
Zawartość dimerów i substancji o wyższej masie cząsteczkowej można również oznaczać metodą opisanąw monografii Farmakopea Europejska „Somatropine pour preparation injectable” ze stycznia 1994.
Oznaczanie miana proteiny metodą chromatograficzną z odwróconą fazą.
Wyrażono w mgfiolkę i oznaczono metodą chromatograficzną z odwróconą fazą na kolumnie C18-300A - 25 cm, średnicy 4,6 mm (Synchrom, Ref. CR 103-25). Produkt eluowano 35 minut w sposób stopniowy, stosując fazę ruchomą, przechodząc od 75 części objętościowych wody do 0,1% kwasu trifluorooctowego (obj./obj.) (TFA) i 25 objętości acetonitrylu do 0,08% TFA (obj./obj.) do 30 objętości wody do 0,1%o TfA i 70 objętości acetonitrylu do 0,08% TFA. Przy przepływie 1 ml na minutę oznaczenie wykonuje się przy 220 nm.
Oznaczanie aktywności enzymatycznej moczanu oksydazy.
Aktywność enzymatyczną moczanu oksydazy, wyrażoną w UAE, oznaczano spektrofotometrycznie w zbiorniku termostatowanym w temperaturze 30°C śledząc znikanie kwasu moczowego przy 292 nm według Legoux R, Delpech Bruno, Dumont X, Guillemont JC, Ramond P, Shire D, Caput D, Ferrara P, Loison G, J. Biol. Chem., 1992,267 (12), 8565-8570.
Zmętnienie odtworzonych roztworów składników rozpuszczonych
Zmętnienie liofilizatów zawierających hGH w roztworze oznaczano spektrofotometrycznie (Ph.Eur.2(I)V. 619) przy 500 nm na spektrofotometrze Perkin Elmer 554. Wyniki sapodane w Jednostkach Absorbancji x 1000.
Zmętnienie liofilizatów zawierających moczan oksydazy w roztworze jest oznaczane turbidymetrem Ratio Hach 18900-00. Wyniki zmętnienia podano w Nefelometrycznych Jednostkach Zmętnienia (NTU) zdefiniowanych w: Standard Methods for examination of water and waste water wydane przez American Public Health Association.
Stopień opalescencji jest również oznaczany według metody Farmakopea Europejska (II) V. 6, porównując próbkę badaną z zawiesiną wzorcową.
Badania organoleptyczne liofilizatów
Badanie prowadzono wzrokowo, biorąc pod uwagę zabarwienie liofilizatu, jego strukturę (zapadniętąlub nie), oraz ewentualne przesunięcie pomiędzy skorupką a miąszem liofilizatu.
Dyfraktometria Promieni X na proszku
Analiza dyfraktometryczna Promieni X na lioflizatach jest wykonywana na dyfraktometrze Siemens^ D500 TT; źródło: CuKa l; Generator: 40 KV, 25 mA; Monochromator tylny; szczeliny: 1/1/1/0,16/0,6; próbki na podłożu pyreksowym; Zakres zamiatania: od 4° do 40° na minutę 2 teta Bragga.
Analiza termiczna różnicowa
Badania liofilizatów metodą analizy termicznej różnicowej wykonuje się w następujących warunkach:
Aparat: DSC 7 Perkin Elmer; cechowanie Ind i Ołów; pobieranie próbki: od 5 mg do 10 mg w kapsułkach 50 μ; temperatura początkowa: 10°C; szybkość grzania: 10°C/min; temperatura końcowa: 300°C.
Formy hGH zdezamidowane
Procentową zawartość form zdezamidowancyh oznacza się metodą chromatografii amonitowej (AEX-HPLC) stosując kolumnę amonitową (Pharmacia mono-Q HR 5/5, ref. 17-0546-01). Elucję prowadzi się roztworem A (13,8 g) diwodorofosforanu amonu w 1000 ml wody; pH=7 korygowane stężonym amoniakiem i wodąjako roztworem B, stosując następujący program: 5% roztworem A przez 2 minuty, następnie 15% roztworem A przez 5 minut, następnie 5 0% roztworem A przez 20 minut i na zakończenie 100% roztworem A przez 5 minut i utrzymuje się ten ostatni roztwór przez 5 minut. Elucja hGH (ok. 15 minut) i form zdezamidowanych badana jest przy 220 nm. Przepływ wynosi 1 ml na minutę.
Uzyskane tymi różnymi metodami wyniki analityczne są opisane poniżej.
179 240
Zawartość dimerów i substancji pokrewnych o wyższym ciężarze cząsteczkowym
Zawartość oligomerów plus polimerów w liofilizatach zawierających 4 UI hGH odtworzonych w 0,5 ml wody, została oznaczona w funkcji stosunku R (wykres 1). Wykres 1 wykazuje, że minimalnązawartość oligomerów plus polimerów w roztworach uzyskuje się, gdy Rjest zawarte pomiędzy 0,1 a 1, z tym, że wartość 0,1 została interpolowana z krzywej.
Tytułem przykładu uzupełniającego zbadano stabilność w temperaturze 25°C i 35°C dwóch zestawów hGH o 4UI i 8UI. Po sześciu miesiącach przechowywania ich stabilność jest doskonała.
W tabelach 3 i 4 poniżej, przedstawiono zawartość procentową oligomerów i polimerów i form zdezamidowanych po różnym czasie i różnych temperaturach w porównaniu z normami Farmakopea Europejska. W tych tabelach R = 0,45.
Tabela 3
Zestaw 4UI/fiolkę
Norma Pharmacopee Europeenne Czas 0 Przy 25°C Przy 35°C
3 miesiące 3 miesiące 6 miesięcy
Oligomery i polimery % 6,0 1,0 1,9 3 3,3
Formy zdezamidowane % 6,6 1,3 1,9 2,8 3,9
Oznaczenie w mg/fiolkę - 1,58(*) 1,61(*) 1,540 1,550
(*): Miano zmienia się nieznacznie w czasie ze względu na dokładność metody oznaczania (± 5%).
Tabela 4
Zestaw 8UI/fiolkę
Norma Pharmacopee Europeenne Czas 0 Przy 25°C Przy 35°C
3 miesiące 6 miesięcy 3 miesiące 6 miesięcy
Oligomery i polimery % 6,0 1,0 1,5 1,2 1,7 2,2
Formy zdezamidowane % 6,6 1,0 1,5 1,95 2,2 3,3
Oznaczenie w mg/fiolkę - 3,0(*) 3,00 2,93(*) 2,950 2,940
(*): Miano zmienia się nieznacznie w czasie ze względu na dokładność metody oznaczania (± 5%).
Oznaczanie aktywności enzymatycznej moczanu oksydazy
Aktywność enzymatycaiąliofilizatów zawierających 30 UAE moczanu oksydazy odtworzonego w 1 ml wody określano w funkcji stosunku R po 1 miesiącu w temperaturze 35°C (Wykres 2). Wykres 2 wskazuje, że początkowa aktywność enzymatyczna moczanu oksydazy jest zachowana po 1 miesiącu w temperaturze 35°C, dla R zawartego pomiędzy 0,4 a 1.
Tytułem przykładu uzupełniającego, środek dla którego R=0,45 lub R = 0,67 jest doskonale stabilny po 3 miesiącach w temperaturze 25°C (Aktywność końcowa bliska 100% tej o czasie zero).
Zmętnienie odtworzonych roztworów składników rozpuszczonych
Zmętnienie liofilizatów zawierających 4 UI hGH odtworzonych w 0,5 ml wody zostało oznaczone w funkcji stosunku R (Wykres 3). Wykres 3 wskazuje, ze zmętnienie minimalne roztworów uzyskuje się dla R zawartego pomiędzy wartością 0 a 1,5.
Zmętnienie liofilizatów zawierających 30 UAE moczanu oksydazy odtworzonego w 1ml wody, zostało oznaczone w funkcji stosunku R (Wykres 4). Wykres 4 wskazuje, że zmętnienie minimalne roztworów uzyskuje się dla R zawartego pomiędzy 0,2 a 1.
Badania organoleptyczne liofilizatów
Badania organoleptyczne każdego liofilizatu zawierającego 4 UI hGH lub 30 UAE moczanu oksydazy lub żadnej proteiny i zmienne ilości buforu fosforanowego, zostały przeprowadzone w funkcji stosunku R i są zebrane w tabeli 5. Tabela 5 wskazuje, że liofilizaty posiadaj ą zadawalające własności organoleptyczne dla R zawartego pomiędzy 0,125 a 1,7. Własności te nie zmieniają się w czasie.
Tabela 5
Badania organoleptyczne liofilizatów i zaróbek krystalicznych w funkcji R = masa mannitu/masa alaniny
R Badania organoleptyczne Zaróbki krystaliczne Dyfrakcja promieni X
+00 Zapadnięty Mannit
10 Zapadnięty Mannit + Alanina
6,469 Zapadnięty Mannit + Alanina
5 Zapadnięty Mannit + Alanina
4,014 Zapadnięty Mannit + Alanina
2 Zapadnięty Mannit + Alanina
1,705 dobry Mannit + Alanina
1,-402 dobry Mannit + Alanina
1,25 dobry Mannit + Alanina
1,097 dobry Mannit + Alanina
1 dobry Alanina
0,667 dobry Alanina
0,456 dobry Alanina
0,456 dobry Alanina
0,451 dobry Alanina
0,452 dobry Alanina
0,251 dobry Alanina
0,125 dobry Alanina
0 Przesunięcie faz Alanina
Dyfrakcja promieni X
Wyniki analizy dyfrakcyjnej promieni X na uzyskanych proszkach liofilizatów zawierających mieszaniny Alanina/Mannit w stosunkach od 0 do + to są podane w tabeli 5.
Uzyskane dyfraktogramy wykazują, że dla R zawartego pomiędzy 0 a 1, pojawiiająsię tylko prążki sieci krystalicznej alaniny, poza tym odchylenie linii bazowej dyfraktogramu wskazuje
179 240 na obecność fazy amorficznej utworzonej przez mannit. Przy wzroście R wzrasta ilość fazy amorficznej wynikającej z obecności mannitu. Dla R> 1 mannit także krystalizuje.
Dla R zawartego pomiędzy 0 a 1, uzyskuje się fazę amorficzną utworzoną przez mannit i fazę krystaliczną utworzoną przez alaninę.
Analiza termiczna różnicowa
Temperatura zeszklenia liofilizatów zawierających 4 UI hGH lub 30 UAE moczanu oksydazy łub żadnej proteiny i zmienne ilości buforu fosforanowego, określono w funkcji odwrotności stosunku R(Wykres 5). Wykres 5 wskazuje, że maksymalna uzyskana temperatura zeszklenia dla liofilizatów zawierających mieszaniny alaniny i mannitu jest uzyskiwana dla wartości (1/R)>1, to znaczy dla R zawartego pomiędzy 0 a 1.
To temperatura zeszklenia liofilizatu wskazuje na maksymalnątemperaturę stabilności liofilizatu. Maksymalnątemperaturę stabilności liofilizatu otrzymano dla R zawartego pomiędzy 0 a 1.
Formy zdezamidowane
Uzyskane wyniki na zestawach 4UI i 8UI wykazują słabą ewolucję, którajest dopuszczalna w porównaniu z normami z monografii somatropiny Pharmacopee Europeenne, co pozwala przypuszczać, że środek ten będzie wystarczająco stabilny w temperaturze 25°C.
W konkluzji dowiedziono, że każda oceniana własność liofilizatu posiada wartość optymalną dla pewnego zakresu wartości R, co zostało podsumowane poniżej:
% Oligomerów+Polimerów (stabilność hGH) R pomiędzy 0,1 a 1
Aktywność enzymatyczna moczanu oksydazy po 1 mies. przy temp. 35°C R pomiędzy 0,4 a 1
Zmętnienie roztworów hGH R pomiędzy 0 a 1,5
Zmętnienie roztworów moczanu oksydazy R pomiędzy 0,2 a 1
Wygląd liofilizatów R pomiędzy 0,125 a 1,7
Sama alanina krystaliczna R pomiędzy 0 a 1
Maks. temp. zeszklenia R pomiędzy 0 a 1
Każde kryterium analityczne (% oligomerów + polimerów, stabilność hGH, aktywność enzymatyczna moczanu oksydazy po 1 miesiącu przy temp. 35°C, zmętnienie roztworów hGH zmętnienie roztworów moczanu oksydazy, wygląd liofilizatów, sama alanina krystaliczna, maksymalna temperatura zeszklenia) definiuje optymalny zakres szczególny dla każdej własności. Aby otrzymać odpowiedni środek określa się korzystny zakres R, to znaczy 0,1 <R< 1. Następujące przykłady ilustrują wynalazek nie ograniczając jego zakresu.
Przykładl i Konfekcjonowanie kompozycji liofilizatu hGH o 4UI do odtworzenia w 0,5 ml wody PPI.
Składniki Skład jednostkowy (mg)
hGH 4 UI
Alanina 10,5 mg
Mannit 4,77 mg
12. hydrat fosforan disodowy 0,7 mg
Woda do przygotowania wstrzyknięć 0,5 ml QSP
Fiolka z białego szkła typ 1 - 3 ml 1
Zamknięcie z szarego chlorobutylu 1
Kapsel aluminiowy niebieski typu Flip-off o średnicy 13 mm 1
179 240
Przykład II: Konfekcjonowanie kompozycji liofilizatu hGH o 8UI do odtworzenia w 1 ml wody PPI.
Składniki Skład jednostkowy (mg)
hGH 8 UI
Alanina 21 mg
Mannit 9,54 mg
12. hydrat fosforan disodowy 1,4 mg
Woda do przygotowania wstrzyknięć 1 ml QSP
Fiolka z białego szkła typ 1 - 3 ml 1
Zamknięcie z szarego chlorobutylu 1
Kapsel aluminowy niebieski typu Flip-off o średnicy 13 mm 1
Przykład III: Konfekcjonowanie kompozycji liofilizatu hGH o 18 UI do odtworzenia w 1 ml wody PPI.
Składniki Skład jednostkowy (mg)
hGH 18 UI
Alanina 21 mg
Mannit 9,54 mg
12. hydrat fosforan disodowy 1,4 mg
Woda do przygotowania wstrzyknięć 1,0 ml QSP
Fiolka z białego szkła typ 1 - 3 ml 1
Zamknięcie z szarego chlorobutylu o średnicy 13 mm 1
Kapsel aluminiowy z wieczkiem o średnicy 13 mm 1
Przykład IV: Liofilizaty hGH dla preparatu do wstrzyknięcia o 8 UI w 1 ml
TEMPERATURA °C X 5 25 35 5 25 35
CZAS W DNIACH 0 90 90 90 180 180 180
Rodzaj kontroli Stosowane metody Normy Wyniki Wyniki Wyniki Wyniki Wyniki Wyniki Wyniki
CHARAKTERYSTYKA
Wygląd Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna | Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna
179 240
IDENTYFIKACJA
hGH Faza odwrócona Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna
Chromatografia ekskluzyjna Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna
PRÓBY
Formy zdeamidowane Wymiana amonitowa <6,5% 1,0% 1,0% 1,5% 2,2% 1,5% 1,95% 3,3%
Dimery i substancje pokrewne Chromato- grafia ekskluzyjna <6,0% 1,0% 0,75% 1,5% 1,7% 0,8% 12% 2,2%
Formy obcięte Elektrofo- reza <2,0% <2,0% <2,0% <2,0% <2,0% <2,0% <2,0% <2,0%
Proteiny pokrewne Elektrofo- reza Zgodna(1) Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna
Zawartość wody <1,5% 0,45 0,41 0,68 0,73 0,47 n.b.(2) n.b.(2
Oznaczanie Faza 2,93 do 3,0 3,1 3,0 2,95 2,96 2,93 2,94
w mg/fiolkę odwrócona 3,24
Badanie Wygląd Farmakopea Europejska <zaw. II <zaw. U <zaw.II <zaw. II <zaw. II
Farmakopea Europejska Bezbarwny Bezbarw- ny Bezbarw- ny Bezbarw- ny Bezbarw- ny
Oznaczanie pH 6,5 do 7,5 6,94 7,02 7,03 7,01
Rozpuszczanie <przy 1 mn <przy 1 mn <przy 1 mn <przy 1 mn <przy 1 mn
(1) : Brak pasm dodatkowych innych niż śladowe występujące we wzorcu lub ślady oligomerów hGH.
(2) : n.b. = niebadano
Przykład V: Liofilizat hGH dla preparatu do wstrzyknięcia o 4 UI w 0,5 ml
Temperatura °C X 5 25 35 5 35
Czas w dniach 0 90 90 90 180 180
Rodzaj kontroli Stosowane metody Normy Wyniki Wyniki Wyniki Wyniki Wyniki Wyniki
CHARAKTERYSTYKA
Wygląd Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna J Zgodna | Zgodna
179 240
IDENTYFIKACJA
hGH Faza odwrócona Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna
Chromatografia ekskluzyjna Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna
PRÓBY
Formy dezamidowane Wymiana amonitowa <6,5% 1,3% 1,0% 1,9% 2,8% 1,3% 3,9%
Dimery i substancje pokrewne Chromatografia ekskluzyjna < 6,0% 1,0% 0,6% 1,9% 3,0% 1,0% 3,3%
Formy obcięte Elektroforeza < 2,0% <2,0% < 2,0% < 2,0% <2,0% <2,0% < 2,0%
Proteiny pokrewne Elektroforeza Zgodna 0) Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna Zgodna
Zawartość wody < 15% 0.65 0,58 0,97 0,93 0,81 . n.b.(2)
Oznaczanie Faza 1,50 do 1,58 1,57 1,61 1,54 1,56 1,55
w mg/fiolkę odwrócona 1,70
OD' TWORZONY SKŁADN IK ROZPUSZCZONY
Badanie Farmakopea Europejska <zaw. Π <zaw. II <zaw. II <zaw. II <zaw. II <zaw. Π <zaw. II
Wygląd Farmakopea Europejska Bezbarwny Bezbarwny Bezbarwny Bezbarwny Bezbarwny Bezbarwny Bezbarwny
Oznaczanie pH 6,5 do 7,5 7,01 7,22 6,96 6,99 7,06 7,00
Rozpuszczanie <przy 1 mn <przy 1 mn <przy 1 mn <przy 1 mn <pizy 1 mn <przy 1 mn <przy 1 mn
(1) : Brak pasm dodatkowych innych niż śladowe występujące we wzorcu lub ślady oligomerów hGH.
(2) : n.b. = nie badano
Przykład VI: Wyniki analityczne po rocznej stabilizacji w temperaturze 5°C hGH'o 18UI
Opalescencja (UA..xl0'3) pH Zawartość wody Formy zdezamidowane Oligomery + Polimery
Normy <20 < 1,5% <5% <6%
t = 0 1 7,9 0,33% 1,36% 0,63%
1 mies. 1 S 0,29% - -
3 mies. 3 7,83 0,32% 1,25% 0,45%
6 mies. 4 - 1,03% 1,4% 0,5%
12 mies. 7 - 1,19% 1,15% 1,11%
Dla zestawionych wyników, R = 0,45
179 240
Przykład VII: Wyniki analityczne po 3 miesiącach stabilizacji w temperaturze 25°C hGH o 18UI
Opalescencja (U.A.xł0‘O pH Zawartość wody Formy zdezamidowane Oligomery + Polimery
Normy <20 <1,5% <5% <6%
t = 0 1 7,9 0,33% 1,36% 0,63%
1 mies. 3 7,72 0,35% - -
3 mies. 9 7,65 0,54% 1,37% 0,85%
Dla zestawionych wyników, R = 0,45
Przykład VIII: Skład liofilizatów mocznika oksydazy przy 30 UAE/fiolkę
Kompozycja Odtworzone roztwory składników rozpuszczonych
Przezroczystość Farmakopea Europejska Zabarwienie Farmakopea Europejska
t=0 1 miesiąc 35°C 3 miesiące t=0 1 miesiąc 35°C 3 miesiące
5°C 25°C 5°C 25°C
Mannit 7,3 mg + L Alanina 16,2 mg Na2HPO4 30 mM <=i <=I I-H I-III bezbarwne bezbarwne bezbarwne bezbarwne
Mannit 20, 8 mg + L Alanina 10,4 mg Na2HPO4 30 mM <I >=m <n II-I bezbarwne bezbarwne bezbarwne bezbarwne
Mannit 27,7 mg + L Alanina 6,9 mg Na2HPO421 mM <m >IV = III >IV bezbarwne bezbarwne bezbarwne bezbarwne
Przykład VIII (c.d. 1):
Kompozycja pH odtworzonego roztworu składnika rozpuszczonego Aktywność enzymatyczna UAE/fiolkę Zawar- tość wody %
t=0 1 miesiąc 35°C 3 miesiące t=0 1 miesiąc 35°C 3 miesiące
5°C 25°C 5°C 25°C
Mannit 7,3 mg + L Alanina 16,2 mg Na2HPO4 30 mM 7,96 7,96 7,91 7,93 32,9(*) 30,0(*) 30,2(*) 33,3(*) 3,2
Mannit 20,8 mg + L Alanina 10,4 mg Na2HPO4 30 mM 8,03 8,05 8,01 8,01 28,1(*) 22,5 32,0(*) 22,7 2,8
Mannit 27,7 mg + L Alanina 6,9 mg Na2HPO4 21 mM 8,04 8,06 8,00 8,03 28,7(*) 23,0 31,2(*) 20,5 2,1
(*) Miano nie zmienia się znacznie, ze względu na dokładność metody oznaczania (±10%)
179 240
Przykład IX: Wyniki stabilności liofilizatów moczanu oksydazy o 30UAE/fiolkę po czasie 1 miesiąca w temperaturze 35°C i po 3 miesiącach w temperaturze 5°C, 25°C i 35°C
Kompozycja Odtworzony roztwór składnika rozpuszczonego
Przezroczystość Farmakopea Europejska Zabarwienie Farmakopea Europejska
t =0 1 miesiąc 35°C 3 miesiące t=0 1 miesiąc 35°C 3 miesiące
5°C 25°C 5°C 25°C 35°C
Na2HPO4 40 mM Alanina 14,15 mg Mannit 14,15 mg I-II = IV I-U =n bezbar- wne bezbar- wne bezbar- wne bezbar- wne bezbar- wne
Na2HPO4 40 mM Alanina 15,9 mg Mannit 10,6 mg I-II II-UI <I = I bezbar- wne bezbar- wne bezbar- wne bezbar- wne bezbar- wne
Na2HPO4 40 mM Alanina 16 mg Mannit, 7,3 mg I-II IU-IV = I <I bezbar- wne bezbar- wne bezbar- wne bezbar- wne bezbar- wne
Na2HPO4 40 mM Alanina 18,9 mg Mannit 4,72 mg I-n <IV <I i-n bezbar- wne bezbar- wne bezbar- wne bezbar- wne bezbar- wne
Na2HPO4 40 mM Alanian 20 mg Mannit 2,5 mg U-Π <IV n-ni >IV bezbar- wne bezbar- wne bezbar- wne bezbar- wne bezbar- wne
Przykład IX (c.d. 1)
Kompozycja pH odtworzonego roztworu składnika rozpuszczonego Zawartość wody
t = 0 1 miesiąc 35°C 3 miesiące
5°C 25°C
Na2HPO4 40 mM Alanina 14,15 mg Mannit 14,15 mg 8,01 8,01 8,04 8,02 -
Na2HPO4 40 mM Alanina 15,9 mg Mannit 10,6 mg 8,00 7,97 8,02 8,01 -
Na2HPO4 40 mM Alanina 16 mg Mannit 7,3 mg 7,99 7,98 8,02 8,00 2,0%
Na2HPO4 40 mM Alanina 18,9 mg Mannit 4,72 mg 7,96 7,94 7,97 7,96 -
Na2HPO4 40 mM Alanina 20 mg Mannit 2,5 mg 7,96 7,93 7,96 7,95 -
179 240
Przykład IX (c.d. 2)
Kompozycja Aktywność enzymatyczna UAE/fiolkę
t = 0 1 miesiąc 35°C 3 miesiące
5°C 25°C
Na2HPO4 40 mM Alanina 14,15 mg Mannit 14,15 mg 30,3 (*) 23,2 29.8 (*) 30,5 ()
Na2HPO4 40 mM Alanina 15,9 mg Mannit 10,6 mg 29,7(() 28,9 (*) 30,9 (*) 29,8 (*)
Na2HPO4 40 mM Alanina 16 mg Mannit 7,3 mg 29,2 (*) 26,8 (*) 30,3 (*) 30,0 (*)
Na2HPO4 40 mM Alanina 18,9 mg Mannit 4,7 2 mg 30,1 (*) 20,5 30,1 (♦) 30,5 (()
Na2HPO4 40 mM Alanina 20 mg Mannit 2,5 mg 29,4 0) 17,9 29,4 (() 25,7
(*) : Miano zmienia się nieznacznie z czasem ze względu na dokładność metody oznaczania (± 10%)
179 240
Aktywność enzymatyczna (UAE)
R=Mannit / Alanina (wag/wag)
FIG.2
179 240
R= Mannit / Alanina (wag/wag)
179 240
Zmętnienie (NTU)
R- Mannit / Alanina (wag/wag)
FIG. 4
179 240
/R ^alanina / mannit
179 240
R=Mannit/Alanina (wag/wag)
FIG. 1
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 70 egz.
Cena 4,00 zł.

Claims (14)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Stabilny, liofilizowany środek dopuszczalny farmaceutycznie, zawierający proteinę, bufor, mannit i aminokwasy, znamienny tym, że zawiera alaninę i mannit w stosunku R=masa mannitu/masa alaniny zawartym pomiędzy 0,1 a 1.
  2. 2. Środek według zastrz. 1, znamienny tym, że jako proteinę zawiera hormon, enzym lub cytokinę. ,
  3. 3. Środek według zastrz. 2, znamienny tym, że jako hormon zawiera ludzki hormon wzrostu hGH.
  4. 4. Środek według zastrz. 2, znamienny tym, że jako enzym zawiera moczan oksydazy.
  5. 5. Środek według zastrz. 2, znamienny tym, że jako cytokinę zawiera interleukinę-13.
  6. 6. Środek według zastrz. 1, znamienny tym, że zawiera alaninę w postaci krystalicznej, a mannit w postaci amorficznej.
  7. 7. Środek według zastrz. 1, znamienny tym, że liofilizat składa się z fazy amorficznej i fazy krystalicznej, faza amorficzna w większości jest utworzona z mannitu i proteiny, faza krystaliczna w większości jest utworzona z alaniny.
  8. 8. Środek według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że jako bufor zawiera bufor fosforanowy.
  9. 9. Roztwór do iniekcji podskórnych, dożylnych lub domięśniowych, dla ludzi lub zwierząt, zawierający jałowy, dopuszczalny farmaceutycznie rozpuszczalnik, przeciwbakteryjny środek konserwujący oraz liofilizat proteiny zawierający bufor, mannit i aminokwas, znamienny tym, że zawiera alaninę i mannit w stosunku R=masa alaniny/masa mannitu zawartym pomiędzy 0,1 a 1.
  10. 10. Roztwór według zastrz. 9, znamienny tym, że proteinę stanowi hormon, enzym lub cytokina.
  11. 11. Roztwór według zastrz. 10, znamienny tym, że jako hormon zawiera ludzki hormon wzrostu hGH.
  12. 12. Roztwór według zastrz. 10, znamienny tym, żejako enzym zawiera moczan oksydazy.
  13. 13. Roztwór według zastrz. 10, znamienny tym, żejako cytokinę zawiera interleukinę-13.
  14. 14. Roztwór według zastrz. 10, znamienny tym, że zawiera rozpuszczalnik wybrany z wody destylowanej, 0,9% wodnego roztworu chlorku sodu i 5% roztworu wodnego glukozy.
    Wynalazek niniejszy dotyczy środka farmaceutycznie dopuszczalnego, występującego w formie liofilizatu i zawierającego proteinę jako składnik aktywny. Środek ten jest stabilny w temperaturze 25°C i może być odtworzony w formie ciekłej przez dodanie rozpuszczalnika. Może być podawany doustnie ludziom lub zwierzętom lub stosowany w zestawie do dozowania. Wynalazek dotyczy także roztworu do iniekcji podskórnych, dożylnych i domięśniowych, zawierającego proteinę jako składnik aktywny.
    Wiadomo, że sposób wytwarzania ma znaczący wpływ na degradację protein w trakcie liofilizacjijak również bardzo silny wpływ na ich stabilność w formie liofilizowanej. Różne zmienne sposobu wytwarzania, które mają wpływ na te parametry to głównie pH, ilość występujących soli, rodzaj i ilość zarobek, typ wybranej krioprotekcji jak również temperatura, ciśnienie i czas operacji zamrażania, sublimacji i wybranego suszenia. Te różne zmienne wpływająna stan fizy179 240 czny otrzymanego liofilizatu, to znaczy: amorficzny szklisty, amorficzny miękki, krystaliczny lub kombinację tych stanów.
    Rola każdej z tych zmiennych była badana niezależnie, ale ich efekt synergetycznyjest wciąż niejasny (Pikal MJ., Dellermann KM., Roy ML. Riggin MN., The effects of formulation variables on the stability of freeze-dried Human Growth Hormone, Pharm. Research., 1991,8, Nr 4,427-436).
    Przegląd bibliografi dotyczącej wpływu aminokwasów i polioli na własności roztworów do liofilizowania lub liofilizatów prowadzi do następujących wniosków:
    Zalety i wady wynikające z obecności aminokwasów; mannitu w fazie krystalicznej lub fazie amorficznej są zebrane poniżej;
    Zalety związane z obecnością aminokwasów
    Wykazano, że obecność glicyny w liofilizacie pobudza krystalizację cząstek obecnych w roztworze na etapie zamrażania procesu liofilizacji (Korey DJ., Schwartz JB, Effects of excipients on the cristallization of pharmaceutical compounds during lyophylization, J. Parenteral Sci. Tech., 1989,43,2,80-83). Krystalizacja składnika aktywnego, mimo że mało prawdopodobna w przypadku protein zwiększa ich stabilność.
    Alanina w formie krystalicznej powstrzymuje opadanie liofilizatu w trakcie sublimacji i suszenia i pozwala na otrzymanie liofilizatu o dużej powierzchni właściwej i w ten sposób pozwala na szybsze wysuszenie(Pikal MJ., Freeze-drying of proteins, Biopharm. 26-30 październik 1990).
    Wady związane z obecnością aminokwasów
    Dodatek aminokwasu do cukru lub poliolu z roztworu poddawanego liofilizacji ma na ogół wpływ na obniżenie temperatury zeszklenia cukru. (Booy MPWM Ruiter RA., Meere ALJ., Evaluation of the phisical stability of freeze-dried sucrose containing formulations by differential scanning calorimetry, Pharm. Research., 1992,9,109-114). Otóż, obniżenie temperatury zeszklenia jest na ogół synonimem zmniejszenia stabilności liofilizatu (Franks F., Freezedrying; from empiricism to predictability, Cryo-letters, 1990.77,93-110).
    Korzyści związane z obecnością mannitu
    Obecność mannitu w formie amorficznej zawierającej proteinę zapewnia obecność wody niekrystalicznej związanej z proteiną w trakcie zamarzania i powstrzymuje denaturację białka. Ponadto obecność polioli chroni proteiny przed degradacją termiczną przez oddziaływanie hydrofobowe (Back JF, Oakenfull D., Smith MB., Increased thermal stability of proteins in the presence of sugars and polyols, Biochemistry, 197S^, 18,23,5191-96).
    Wady związane z obecnością mannitu
    Stwierdzono, że mannit nie pozwala na zachowanie aktywności enzymu w temperaturze 37°C w przeciwieństwie do laktozy. (Ford AW, Dawson PJ., The effect of carbohydrate additives in the freeze-drying of alkaline phosphatase, J. Pharm. Pharmacol., 1993, 45 (2), 86-93).
    Korzyści związane z obecnościąfazy krystalicznej
    Obecność wykrystalizowanego składnika rozpuszczalnego w roztworze zamrożonym jest sposobem stabilizacji protein podczas suszenia (Carpenter JF. &Crowe JH., Modes of stabilization of protein by organic solutes during dessiccation, Cryobiology, 1988,25, 459-470).
    Wady związane z obecnościąfazy krystalicznej
    Wykazano, że utrata aktywności proteiny liofilizowanej jest bezpośrednio związana ze stopniem krystaliczności cząstki krioprotekcyjnej(Izutsu KL, Yoshioka S., Terao T., Decreased protein-stabilizing effects of cryoprotectants due to crystllization., Pharm. Research. 1993,10, Nr 8, 1232-1237).
    W preparatach medycznych zawierających proteiny powinno unikać się krystalizacji zarobek, według: (Hermansky M., Pesak M., Lyophilization of drugs. VI Amorphous and Cristalline forms Cesk. Farm., 17^7^:^, 42, (2), 95-98).
    179 240
    Korzyści związane z obecnościąfazy amorficznej
    Obecność dodatków w stanie amorficznym stabilizuje aktywność pewnych enzymów proporcjonalnie do stężenia dodatków, według (Izutsu KL, Yoshioka S., Terao T., Pharm. Research
    1993,10, Nr 8,1232-1237).
    Krioprotekcyjny efekt zarobek przypisuje się amorficznemu stanowi glicyny w otrzymanym liofilizacje (Pikal MJ., Dellermann KM., Roy ML. RigginMN., The effects offormulation variables on the stability of freeze-dried Human Growth Hormone, Pharm. Research., 1991,8, Nr 4,427-436).
    Wady związane z obecnościąfazy amorficznej
    W obecności tylko samej, stałej fazy amorficznej liofilizat zapada się w trakcie zamrażania w temperaturach wyższych od temperatury zeszklenia.
    Wewnątrz miękkiej fazy amorficznej reakcje chemicznej degradacji są kinetycznie dużo szybsze niż wewnątrz fazy krystalicznej.
    Podsumowując, wyczerpujący przegląd literatury naukowej dotyczącej wpływu zarobek na stabilizację protein, pozwala znaleźć informacje sprzeczne o ich właściwościach. W żadnej teorii na temat relacji pomiędzy strukturą liofilizatu a jego stabilnością nie ma jednomyślności. Także rola polioli i aminokwasów pojedynczych lub połączonych, nie została opisana według zestawu ogótóych własności, ale została opisana ze sprzecznymi wynikami w zależności od badanych protein i stosowanych ilości zaróbek.
    I tak teraz, w sposób nieoczekiwany odkryto efekt synergetyczny mannitu i alaniny na stabilizację liofilizowanych protein. Wykazano, że ten efekt synergetyczny występuje tylko w zakresie względnych stężeń każdego z nich. Efekt optymalny jest ograniczony stosunkiem R, który oznacza stosunek masa maninitu/masy alaniny obecnych w liofilizacie, zawarty pomiędzy 0,1 a 1, zwłaszcza pomiędzy 0,2 a 0,8.
    Ponadto wykazano, że dla R zawartego pomiędzy 0,1 a 1:
    Liofilizat składa się fazy amorficznej i fazy krystalicznej.
    Faza amorficzna jest w większości utworzona z mannitu i proteiny.
    Faza krystaliczna składa się w większości z alaniny.
    Przyjmuje się hipotezy, że dla R zawartego pomiędzy 0,1 a 1:
    Wytworzona faza amorficzna kriochroni proteiny podczas zamrażania.
    Faza krystaliczna utrwala strukturę liofilizatu i zapobiega jego zapadaniu.
    To ten nieoczekiwany efekt synergetyczny pomiędzy współistniejącymi fazami amorficzną i krystaliczną stabilizuje liofilizowaną proteinę. Niniejszy wynalazek wykorzystuje uzyskiwanie tego efektu dla korzystnych stosunków R.
    Tak więc przedmiotem wynalazku jest stabilny, lifilizowany środek dopuszczalny farmaceutycznie, zawierający skuteczne ilości proteiny aktywnej biologicznie, bufor o pH optymalnym dla stabilizacji proteiny, manniti aminokwasy. Środek zgodnie z wynalazkiem charakteryzuje się tym, że zawiera alaninę i mannit w stosunku R = masa mannitu/masa alaniny zawartym pomiędzy 0,1 a 1.
    Proteina zawarta w środku pozostaje stabilna w formie liofilizowanej. Rozpuszczanie uzyskanego liofilizatujest szybkie i całkowite. Liofilizat nie ma wyglądu zapadniętego, a ilość zawartej w nim wody jest taka, że nie wpływa na obniżenie aktywności proteiny.
    Środek ten może zawierać inne dopuszczalne farmaceutycznie zarobki, znane z techniki, jak na przykład korozpuszczalniki, środki konserwujące, antyutleniacze lub czynniki chelatujące.
    Korzystnie środek jako proteinę zawiera hormon, zwłaszcza ludzki hormon wzrostu hGH (hormon wzrostu człowieka), enzym, zwłaszcza moczan oksydazy lub cytokinę, zwłaszcza interleukinę-13, zaś jako bufor korzystnie zawiera bufor fosforanowy.
    Środek korzystnie zawiera alaninę wpostaci krystalicznej, a mannit w postaci amorficznej.
    Korzystnie liofilizat składa się z fazy amorficznej i fazy krystalicznej, faza amorficzna w większości jest utworzona z mannitu i proteiny, faza krystaliczna w większości jest utworzona z alaniny.
    179 240
    Środek ma więc postać stałego liofilizatu, zawierającego proteinę kriochronionąw trakcie zamrażania przez stałąfazę amorficzną utworzonązasadniczo z proteiny i mannitu, która to faza amorficzna współistnieje wewnątrz liofilizatu uzyskanego po sublimacji i wysuszeniu roztworu zamrożonego z fazą krystaliczną utworzoną głównie przez alaninę.
PL95308416A 1994-05-04 1995-04-28 Stabilny, liofilizowany srodek dopuszczalny farmaceutycznieoraz roztwór do iniekcji podskórnych, dozylnych lub domiesniowych PL PL PL PL179240B1 (pl)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9405486A FR2719479B1 (fr) 1994-05-04 1994-05-04 Formulation stable lyophilisée comprenant une protéine: kit de dosage.

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL308416A1 PL308416A1 (en) 1995-11-13
PL179240B1 true PL179240B1 (pl) 2000-08-31

Family

ID=9462880

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL95308416A PL179240B1 (pl) 1994-05-04 1995-04-28 Stabilny, liofilizowany srodek dopuszczalny farmaceutycznieoraz roztwór do iniekcji podskórnych, dozylnych lub domiesniowych PL PL PL

Country Status (25)

Country Link
US (1) US5763409A (pl)
EP (1) EP0682944B1 (pl)
JP (1) JP2948125B2 (pl)
KR (1) KR100273053B1 (pl)
CN (1) CN1088583C (pl)
AT (1) ATE178484T1 (pl)
AU (1) AU694763B2 (pl)
CA (1) CA2148537C (pl)
CZ (1) CZ286195B6 (pl)
DE (1) DE69508837T2 (pl)
DK (1) DK0682944T3 (pl)
ES (1) ES2131781T3 (pl)
FI (1) FI117321B (pl)
FR (1) FR2719479B1 (pl)
GR (1) GR3030146T3 (pl)
HU (1) HU220220B (pl)
IL (1) IL113578A (pl)
MX (1) MX9502034A (pl)
NO (1) NO320364B1 (pl)
NZ (1) NZ272045A (pl)
PL (1) PL179240B1 (pl)
RU (1) RU2136306C1 (pl)
SI (1) SI0682944T1 (pl)
TW (1) TW397687B (pl)
ZA (1) ZA953596B (pl)

Families Citing this family (59)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
PT1516628E (pt) * 1995-07-27 2013-09-24 Genentech Inc Formulação de proteína liofilizada isotónica estável
US6685940B2 (en) 1995-07-27 2004-02-03 Genentech, Inc. Protein formulation
ZA966075B (en) * 1995-07-27 1998-01-19 Genentech Inc Protein formulation.
DE19539574A1 (de) * 1995-10-25 1997-04-30 Boehringer Mannheim Gmbh Zubereitungen und Verfahren zur Stabilisierung biologischer Materialien mittels Trocknungsverfahren ohne Einfrieren
FR2740686B1 (fr) 1995-11-03 1998-01-16 Sanofi Sa Formulation pharmaceutique lyophilisee stable
EP0852951A1 (de) * 1996-11-19 1998-07-15 Roche Diagnostics GmbH Stabile lyophilisierte pharmazeutische Zubereitungen von mono- oder polyklonalen Antikörpern
FR2768341B1 (fr) * 1997-09-18 2000-04-14 Lab Francais Du Fractionnement Composition pharmaceutique placebo lyophilisable destinee a imiter un medicament, notamment a base de proteines ou de polypeptides
EP0913178A1 (en) * 1997-11-03 1999-05-06 Boehringer Mannheim Gmbh Process for the manufacture of dry, amorphous products comprising biologically active material by means of convection drying and products obtainable by the process
EP0913177A1 (de) * 1997-11-03 1999-05-06 Roche Diagnostics GmbH Verfahren zur Herstellung trockener, amorpher Produkte enthaltend biologisch aktive Materialien mittels Konvektionstrocknung, insbesondere Sprühtrocknung
EP1071465A1 (en) * 1998-03-18 2001-01-31 Ronai, Peter Amorphous glasses for stabilising sensitive products
PT2193809E (pt) * 1999-02-22 2015-08-24 Baxter Int Formulações de fator viii livres de albumina
WO2001030373A1 (en) * 1999-10-28 2001-05-03 Institut Neftekhimicheskogo Sinteza Imeni A.V.To Pchieva Rossiiskoi Akademii Nauk (Inkhs Ran) Polypeptide composition
US6653062B1 (en) 2000-07-26 2003-11-25 Wisconsin Alumni Research Foundation Preservation and storage medium for biological materials
WO2002038170A2 (en) * 2000-11-07 2002-05-16 Chiron Corporation Stabilized inteferon compositions
US6887462B2 (en) * 2001-04-09 2005-05-03 Chiron Corporation HSA-free formulations of interferon-beta
JP2005508220A (ja) * 2001-10-24 2005-03-31 パーリ・ゲーエムベーハー 薬用組成物調製用具
MXPA04011129A (es) 2002-05-13 2005-02-17 Becton Dickinson Co Sistema de recoleccion de muestra de inhibidor de proteasa.
US6803046B2 (en) * 2002-08-16 2004-10-12 Bracco International B.V. Sincalide formulations
EP1589949B1 (en) * 2003-01-08 2008-08-13 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Stabilized lyophilized compositions comprising tissue factor pathway inhibitor or tissue factor pathway inhibitor variants
GB0304636D0 (en) * 2003-02-28 2003-04-02 Britannia Pharmaceuticals Ltd Pharmaceutical composition for nasal delivery
HRP20050934B1 (hr) * 2003-04-04 2014-09-26 Genentech, Inc. Formulacije s visokom koncentracijom antitijela i proteina
DE10333317A1 (de) * 2003-07-22 2005-02-17 Biotecon Therapeutics Gmbh Formulierung für Proteinarzneimittel ohne Zusatz von humanem Serumalbumin (HSA)
GB0404586D0 (en) * 2004-03-01 2004-04-07 Britannia Pharmaceuticals Ltd Improvements in or relating to organic materials
US11229746B2 (en) 2006-06-22 2022-01-25 Excelsior Medical Corporation Antiseptic cap
AU2007317847B2 (en) 2006-11-07 2013-10-31 Sanofi Pasteur Biologics, Llc Stabilization of vaccines by lyophilization
WO2009002521A2 (en) * 2007-06-25 2008-12-31 Amgen Inc. Compositions of specific binding agents to hepatocyte growth factor
GB0715285D0 (en) * 2007-08-06 2007-09-12 Britannia Pharmaceuticals Ltd Improvements in or relating to powdered medicaments for nasal delivery
US9078992B2 (en) 2008-10-27 2015-07-14 Pursuit Vascular, Inc. Medical device for applying antimicrobial to proximal end of catheter
BRPI0921429B1 (pt) 2008-11-07 2022-07-12 Takeda Pharmaceutical Company Limited Formulação farmacêutica liofilizada estável, e, método para preparar um fator liofilizado estável
AU2009319856A1 (en) * 2008-11-28 2010-06-03 Abbvie Inc. Stable antibody compositions and methods for stabilizing same
TR201809898T4 (tr) * 2009-11-03 2018-07-23 Grifols Therapeutics Llc Alfa-1 protei̇naz i̇nhi̇bi̇törüne yöneli̇k bi̇leşi̇m, yöntem ve ki̇t.
NZ629256A (en) * 2009-12-22 2016-02-26 Celldex Therapeutics Inc Vaccine compositions
RU2448156C1 (ru) * 2011-03-17 2012-04-20 Эспосито Трейдинг Лтд Способ получения лиофилизированной субстанции
RU2448158C1 (ru) * 2011-03-24 2012-04-20 Эспосито Трейдинг Лтд Способ получения препарата фортелизин, обладающего фибринолитическими свойствами, и его применение для лечения инфаркта миокарда
US10166381B2 (en) 2011-05-23 2019-01-01 Excelsior Medical Corporation Antiseptic cap
CA2841832C (en) 2011-07-12 2019-06-04 Icu Medical, Inc. Device for delivery of antimicrobial agent into a trans-dermal catheter
CA2856382C (en) * 2011-11-22 2020-07-14 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Devices containing dried reagents for reconstitution as calibration and/or quality control solutions, and methods of production and use thereof
US20140017318A1 (en) * 2012-07-10 2014-01-16 Kevin O'Connell Method to produce a medicinal product comprising a biologically active protein and the resulting product
US9314519B2 (en) 2012-08-21 2016-04-19 Intervet Inc. Liquid stable virus vaccines
US9393298B2 (en) 2013-03-15 2016-07-19 Intervet Inc. Liquid stable bovine virus vaccines
US9480739B2 (en) 2013-03-15 2016-11-01 Intervet Inc. Bovine virus vaccines that are liquid stable
AR097762A1 (es) 2013-09-27 2016-04-13 Intervet Int Bv Formulaciones secas de vacunas que son estables a temperatura ambiente
CN114288254A (zh) 2013-09-27 2022-04-08 韩美药品株式会社 长效人生长激素缀合物的制剂
AR099470A1 (es) 2014-02-17 2016-07-27 Intervet Int Bv Vacunas de virus de aves de corral líquidas
TWI670085B (zh) 2014-02-19 2019-09-01 荷蘭商英特威國際公司 液體穩定之豬病毒疫苗
CA2945406C (en) 2014-05-02 2022-10-18 Excelsior Medical Corporation Strip package for antiseptic cap
EP3294404B1 (en) 2015-05-08 2025-06-11 ICU Medical, Inc. Medical connectors configured to receive emitters of therapeutic agents
ES2671844B1 (es) 2015-06-11 2019-03-22 Attwill Medical Solutions Inc Dispositivos médicos, sistemas y métodos que utilizan composiciones de anti-trombina heparina.
CA3040277C (en) 2016-10-14 2025-08-12 Icu Medical, Inc. DISINFECTANT CAPS FOR MEDICAL FITTINGS
WO2018204206A2 (en) 2017-05-01 2018-11-08 Icu Medical, Inc. Medical fluid connectors and methods for providing additives in medical fluid lines
US11110063B2 (en) 2017-08-25 2021-09-07 MAIA Pharmaceuticals, Inc. Storage stable sincalide formulations
US11534595B2 (en) 2018-11-07 2022-12-27 Icu Medical, Inc. Device for delivering an antimicrobial composition into an infusion device
US11400195B2 (en) 2018-11-07 2022-08-02 Icu Medical, Inc. Peritoneal dialysis transfer set with antimicrobial properties
US11541221B2 (en) 2018-11-07 2023-01-03 Icu Medical, Inc. Tubing set with antimicrobial properties
US11517732B2 (en) 2018-11-07 2022-12-06 Icu Medical, Inc. Syringe with antimicrobial properties
US11541220B2 (en) 2018-11-07 2023-01-03 Icu Medical, Inc. Needleless connector with antimicrobial properties
AU2019384564B2 (en) 2018-11-21 2023-11-23 Icu Medical, Inc. Antimicrobial device comprising a cap with ring and insert
CA3204371A1 (en) 2020-12-07 2022-06-16 Icu Medical, Inc. Peritoneal dialysis caps, systems and methods

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5822445B2 (ja) * 1982-07-08 1983-05-09 株式会社 ミドリ十字 安定な固体の人血漿コリンエステラ−ゼ製剤の製法
JPS6197229A (ja) * 1984-10-18 1986-05-15 Chugai Pharmaceut Co Ltd 安定なエリトロポエチン製剤
US5037644A (en) * 1986-10-27 1991-08-06 Cetus Corporation Pharmaceutical compositions of recombinant interleukin-2 and formulation processes
DE3729863A1 (de) * 1987-09-05 1989-03-16 Boehringer Mannheim Gmbh Stabilisierte erythropoietin-lyophilisate
US5266310A (en) * 1987-09-17 1993-11-30 Boehringer Ingelheim International Gmbh Stabilization of therapeutically active proteins in pharmaceutical preparations
US5096885A (en) * 1988-04-15 1992-03-17 Genentech, Inc. Human growth hormone formulation
JPH0296536A (ja) * 1988-09-29 1990-04-09 Green Cross Corp:The プラスミノゲン乾燥製剤
WO1990005535A1 (fr) * 1988-11-14 1990-05-31 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Preparation a base d'interferon pour administration nasale
DE59007142D1 (de) * 1990-01-18 1994-10-20 Cereria Amos Sgarbi Spa Grablicht.
US5192743A (en) * 1992-01-16 1993-03-09 Genentech, Inc. Reconstitutable lyophilized protein formulation
SE9201073D0 (sv) * 1992-04-03 1992-04-03 Kabi Pharmacia Ab Protein formulation
DE4239877C1 (de) * 1992-11-27 1994-03-17 Boehringer Ingelheim Int Stabilisierte Superoxid-Dismutase (SOD)-Zusammensetzung

Also Published As

Publication number Publication date
ATE178484T1 (de) 1999-04-15
CZ286195B6 (cs) 2000-02-16
FI117321B (fi) 2006-09-15
JP2948125B2 (ja) 1999-09-13
NO320364B1 (no) 2005-11-28
HUT72325A (en) 1996-04-29
FR2719479B1 (fr) 1996-07-26
FR2719479A1 (fr) 1995-11-10
DK0682944T3 (da) 1999-10-18
CN1116522A (zh) 1996-02-14
CN1088583C (zh) 2002-08-07
EP0682944B1 (fr) 1999-04-07
PL308416A1 (en) 1995-11-13
DE69508837T2 (de) 1999-11-04
EP0682944A1 (fr) 1995-11-22
IL113578A0 (en) 1995-08-31
SI0682944T1 (en) 1999-08-31
DE69508837D1 (de) 1999-05-12
AU1777495A (en) 1995-11-16
NZ272045A (en) 1996-02-27
RU2136306C1 (ru) 1999-09-10
IL113578A (en) 1999-10-28
FI952119A0 (fi) 1995-05-03
KR100273053B1 (ko) 2000-12-01
JPH0853361A (ja) 1996-02-27
ZA953596B (en) 1996-11-04
FI952119L (fi) 1995-11-05
GR3030146T3 (en) 1999-08-31
HU9501276D0 (en) 1995-06-28
CA2148537C (en) 2002-07-16
CZ108195A3 (en) 1996-02-14
NO951724L (no) 1995-11-06
AU694763B2 (en) 1998-07-30
CA2148537A1 (en) 1995-11-05
KR950031103A (ko) 1995-12-18
TW397687B (en) 2000-07-11
US5763409A (en) 1998-06-09
MX9502034A (es) 1997-02-28
NO951724D0 (no) 1995-05-03
ES2131781T3 (es) 1999-08-01
HU220220B (hu) 2001-11-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL179240B1 (pl) Stabilny, liofilizowany srodek dopuszczalny farmaceutycznieoraz roztwór do iniekcji podskórnych, dozylnych lub domiesniowych PL PL PL
US7074763B2 (en) Stable formulations of nerve growth factor
CA2037884C (en) Stabilized gonadotropin containing preparations
US7138114B2 (en) Pharmaceutical compositions of fibrinolytic agent
JPH05331071A (ja) カルシトニン遺伝子関連ペプチド類の凍結乾燥組成物および安定化法
US6152897A (en) Syringe
AU659997B2 (en) Stable pharmaceutical compositions containing a fibroblast growth factor
US5270057A (en) Stabilized gonadotropin containing preparations
HK1012990B (en) Pharmaceutical formulations of nerve growth factor