CZ286195B6 - Stabilné lyofilizovaný přípravek s obsahem proteinu, dávkovací souprava - Google Patents

Stabilné lyofilizovaný přípravek s obsahem proteinu, dávkovací souprava Download PDF

Info

Publication number
CZ286195B6
CZ286195B6 CZ19951081A CZ108195A CZ286195B6 CZ 286195 B6 CZ286195 B6 CZ 286195B6 CZ 19951081 A CZ19951081 A CZ 19951081A CZ 108195 A CZ108195 A CZ 108195A CZ 286195 B6 CZ286195 B6 CZ 286195B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
alanine
mannitol
protein
solution
bezb
Prior art date
Application number
CZ19951081A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ108195A3 (en
Inventor
Alain Bayol
Thierry Breul
Partice Dupin
Philippe Faure
Original Assignee
Sanofi
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sanofi filed Critical Sanofi
Publication of CZ108195A3 publication Critical patent/CZ108195A3/cs
Publication of CZ286195B6 publication Critical patent/CZ286195B6/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/81—Packaged device or kit

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

Řešení se týká stabilní, lyofilizovatelné a farmaceuticky přijatelné kompozice s obsahem proteinu, pufru, mannitolu a alaninu, ve kterém je hmotnostní poměr mannitolu k alaninu v rozmezí od 0,1 do 1. Proteinem je pak zvláště protein s biologickou účinností, jako je některý z hormonů, zvláště růstový lidský, některý enzym nebo cytokin.ŕ

Description

Vynález se týká vhodné farmaceutické kompozice ve formě lyofilizátu s obsahem proteinu jako hlavní účinné složky. Kompozice je stálá za teploty 25 °C a může se upravit do formy kapalné, vhodné, přidáním ředidla. Může se podávat parenterálně lidem nebo zvířatům nebo se dá použít v sérii připravených dávek.
Dosavadní stav techniky
Tvrdí se, že během přípravy takové kompozice dochází ve značné míře během lyofilizování k degradaci proteinů, jakož i se projeví značný vliv na jejich stálost v lyofilizované formě. Různé proměnné vlivy, které ovlivňují takové skutečnosti, zahrnují hlavně hodnotu pH, množství přítomných solí, typ a množství dalších přidaných látek, typ zvolené kiyoskopické ochrany, jakož i teplotu, tlak i dobu při zmrazování, sublimaci a sušení. Tyto různé proměnné faktory ovlivňují fyzikální stav získaného lyofilizátu, který může být amorfní sklovitý, amorfní měkký, 20 krystalický nebo vyústit v kombinaci všech takových stavů.
Úloha každého z těchto proměnných vlivů byla studována odděleně, ale jejich synergický účinek je objasněn jen velmi málo, viz Pikal MJ, Dellermann KM, Roy ML, Rigmin NM „The effects of formulations variables on the stability of freeze-dried Human Growh Hormone“, Pharm.
Research, 8, č. 4, 427-436 (1991).
Z bibliografického přehledu vlivu aminokyselin a polyolů na vlastnosti roztoků, určených k lyofilizování nebo i lyofilizátů lze odvodit tyto uzávěiy:
Výhody a nevýhody, spojené s přítomností aminokyselin, mannitolu v krystalické nebo amorfní fází, jsou - jak je to uváděno - tyto:
Bylo dokázáno, že přítomnost glycinu v lyofilizátu vede ke krystalizaci molekul, přítomných v roztoku, v průběhu zmrazování při pochodu lyofilizování, viz Korey DJ, Schwartz JB „Effects 35 of excipients on the crystallization of pharmaceutical compounds during lyophylization“, J.
parenteral Sci.Tech., 43, č. 2, 80-83 (1989). Tato krystalizace aktivní složky může nicméně v případě proteinů pravděpodobně zlepšit stabilitu přípravku.
Alanin v krystalické formě může s výhodou zabránit sesouvání lyofilizátu během sublimování a 40 vysušování s možností získat tak lyofilizát s větším specifickým povrchem s možností rychlejšího vysušení (Pikal MJ, Freeze-drying of proteins, Biopharm, 26.-30.10.1990).
Nevýhody spojené s přítomností aminokyselin jsou tyto:
Po přidání aminokyselin k sacharidu nebo polyolu v roztoku, určeném k lyofilizování má obvykle za následek snížení teploty přechodu sklovitého stavu cukru, viz te Booy MPWM de Ruiter RA, de Meere ALJ, Evaluation of the physical stability of freeze-dried sucrose containing formulations by differential scanning calorimetry, Pharm. Research 9, 109-114 (1992). Nebo jinak řečeno snížení teploty přechodu sklovitého stavu je obvykle spojeno s menší stálostí lyofilizátu, viz Franks F., Freeze-diying; from empiricism to predistability, Cryo-letters 11, 93110(1990).
Výhody spojené s přítomností mannitolu:
-1 CZ 286195 B6
Přítomnost mannitolu v amorfní formě, obalující protein, zajišťuje přítomnost vody, nikoli krystalové, vázané na protein během zmrazování a znemožňuje tedy tímto způsobem denaturování proteinu. Navíc pak přítomnost polyolů stabilizuje proteiny proti možnosti tepelné degradace hydrofobními interakcemi, viz Back JF, Oakenfúll D, Smith MB, Increased thermal stability of proteins in the presence of sugars and polyols, Biochemistry 18, č. 23, 5191-96 (1979).
Nevýhody spojené s přítomností mannitolu:
Bylo popsáno, že mannitol nedovoluje zachovat účinnost enzymu za teploty 37 °C proti laktose, viz Ford AW, Dawson PJ, The effect of carbohydrate additives in the freeze-drying of alkaline phosphatase, J. Pharm. Pharmacol., 45, č. 2, 86-93 (1993).
Výhody spojené s přítomností krystalické fáze:
Přítomnost krystalické, původně rozpuštěné látky, ve zmrazovaném roztoku je jednou z možností, jak stabilizovat proteiny během vysušování, viz Carpenter JF a Crowe JH, Modes of stabilization of a protein by organic solutes during dessication, Cryobiology, 1988, 25, 459-470. Nevýhody spojené s přítomnosti krystalické fáze:
Bylo dokázáno, že ztráta účinnosti lyofilizovaného proteinu je přímo úměrná stupni krystalinity kryo-ochranné molekuly, viz Izutsu KL, Yoshioka S, Terao T., Decreased protein-stabilizing effects of cryoprotectants due to crystallization, Pharm. Research 10, č. 8, 1232-1237 (1993).
V lékových přípravcích s obsahem proteinů je třeba se vyvarovat kiy stalo vání přídatných složek, viz Heřmanský M., Pěšák M., Lyophilization of drugs, VI., Amorphous and Cristalline forms, Českosl. Farm. 42, č. 2, 95-98 (1993).
Výhody spojené s přítomností amorfní fáze:
Přítomnost přídatných látek v amorfním stavu stabilizuje aktivitu někteiých enzymů úměrně koncentraci vlastního přidaného činidla, viz Izutsu Kl, Yoshioka S., Terao T., Decreased protein-stabilizing effects of cryoprotectants de to crystallization, Pharm. Research 10, č. 8, 1232-1237(1993).
Kryoprotekční účinek přídatných látek je připisován amorfnímu stavu glycinu v získaném lyofilizátu, viz Pikal MJ, Dellermann KM, Roy ML, Riggin MN, The effects of formulation variables on the stability of freeze-dried Human Growth Hormone, Pharm. Research 8, č. 4, 427-436(1991).
Nevýhody spojené s přítomností amorfní fáze:
Za přítomnosti samotné pevné fáze se lyofílizát sesouvá za vyšších teplot, než je teplota přechodu sklovitého stavu během zmrazování.
V důsledku přítomnosti měkké amorfní fáze jsou chemické reakce při degradaci kineticky podstatně rychlejší, než jak je tomu v důsledku přítomnosti krystalické fáze.
Závěrem řečeno: při vyčerpávajícím přehledu vědecké literatury v souvislosti s přídatnými látkami ajejich účinkem na stabilizování proteinů lze nalézt, pokud se takových vlastností týká, informace zcela protichůdné. Žádná teorie o vztahu mezi strukturou lyofilizátu a jeho stálostí není jednoznačná. Právě tak úloha polyolů a aminokyselin, ať již jako takových, nebo společně, není popisována ve smyslu generalizovatelných vlastností, ale s protichůdnými výsledky podle studovaných proteinů i podle množství přídatných látek, používaných současně.
-2CZ 286195 B6
Podstata vynálezu
Nyní byl zjištěn a v každém případě je to překvapující, synergický účinek mannitolu a alaninu na stabilizování lyofilizovaných proteinů. A bylo dokázáno, že tento synergický účinek je funkční pouze v rozmezí určitých koncentrací každé z těchto látek. Nejvýhodnější účinek je omezen poměrem hmotnosti mannitolu k hmotnosti alaninu v lyofilizátu mezi 0,1 až 1, zvláště 0,2 až 0,8.
Navíc bylo zjištěno, že v případě poměru mezi 0,1 až 1:
Lyofilizát je dán jednou fází amorfní a jednou krystalickou, amorfní fáze je představována z větší míry monnitolem a proteinem, krystalickou fázi představuje hlavně alanin.
Předpokládané domněnky pro případ poměru mezi 0,1 až 1: amorfní fáze představuje kryoochranu proteinu během zmrazování krystalická fáze fixuje strukturu lyofilizátu a znemožňuje její zhroucení.
Je to právě tento překvapivý synergický účinek, totiž koexistence amorfní a krystalické fáze, kterým je stabilizován lyofilizovaný protein. Tento vynález popisuje využití tohoto účinku ve výhodných hmotnostních poměrech mannitolu a alaninu.
Vynález se právě tak týká farmaceutických lyofilizovaných kompozic, obsahujících účinné množství biologicky aktivního proteinu, pufr k úpravě nejvýhodnější hodnoty pH ke stabilizování proteinu, dále mannitol a alanin, přičemž obě posléze uvedená excipientia se použijí v hmotn. poměru tak, aby hmotn. poměr mannitolu k alaninu činil mezi 0,1 až 1. Protein, přidaný do takové kompozice, je v lyofilizované formě stálý, lyofilizát se rozpustí rychle a úplně. Vzhled lyofilizátu se nemění, třeba v důsledku smrštění a obsah vody je v souladu s potřebou uchovat aktivitu proteinu.
Do takovéto kompozice je možno přidat další, farmaceuticky vhodná excipientia, na tomto úseku dobře známá, jako jsou například pomocná rozpouštědla, konzervační látky, antioxidantia a chelatotvomá činidla.
Předmětem tohoto vynálezu je rovněž příprava stálých lyofilizátů, obsahujících kryo-ochranný protein v pevné amorfní fázi během zmrazování, přičemž tuto fázi tvoří v podstatě mannitol a protein, přičemž tato amorfní fáze koexistuje v získané lyofilizátu po sublimování a vysušení zmrazeného roztoku spolu s krystalickou fází, kterou představuje v podstatě hlavně alanin.
Biologicky aktivním proteinem, který se takto upravuje podle tohoto vynálezu, může být glykosylovaný či neglykosylovaný polypeptid, přírodní, syntetický, polosyntetický či rekombinantní tak, jak se používají tyto látky v klinické či laboratorní praxi. Zvláště pak může být takovým proteinem některý z hormonů, jako je lidský růstový, hormon žlutého tělíska nebo gonadotropní. Proteinem může být rovněž některý z enzymů, třeba thrombolytický, jako je urokinosa, streptokinesa, staphylokinasa, tkáňový aktivátor plasminogenu nebo třeba z enzymů fosfotasa, sulfatasa, acyl-transferasa, monoaminooxidáza či uro-oxidáza. Dále pak proteinem, který se upravuje dle tohoto vynálezu, může být některý cytokin, třeba interleukin-2, interleukin-4, interleukin-6 nebo interleukin-13. Jiná skupina proteinů podle tohoto vynálezu zahrnuje například antilátky, imunoglobuliny a imunotoxiny. Také lze upravovat peptidy, jako je cholecystokinin, látka P, neurokinin, A, neurokinin B, neurotensin, neuropeptid Y, elédoisin, a bombesin.
-3CZ 286195 B6
Biologicky účinným proteinem je s výhodou lidský růstový hormon, uro-oxidáza nebo interleukin-13.
Růstový lidský hormon je protein, tvořený jediným polypeptidickým řetězcem 191 aminokyselin se dvěma můstky pomocí dvou atomů síry mezi cysteinovými částmi 53 a 165, jakož i 182 a 189.
Uro-oxidáza je enzym, který oxiduje kyselinu močovou na allantoin a dá se extrahovat zbiomasy Aspergillus flavus, viz Labourer a spol., Bull. Soc. chim. biol. 50, 811-825 (1968). Užívá se již déle než 20 let při léčbě hyperurikemi.
ADNc, což je kodové označení pro protein, nedávno klonovaný a exprimovaný v E. coli, viz Legoux R a spol., J. biol. Chem. 267, č. 12, 8565-8570 (1992), Aspergillus flavus a Saccharomyces cerevisiae. Enzym je tetramerem s podraženými totožnými jednotkami o mol. hmotnosti kolem 32.000. Monomer, který tvoří jeden polypeptidický řetězec 301 aminokyselin, nemá žádné můstky ze dvou atomů síry aje acetylován na nejzazším N-konci.
Interleukin-13 je cytokin představovaný jediným polypeptidickým řetězcem ze 112 aminokyselin se dvěma můstky po dvou atomech síry, Minty a spol., Nátuře 362, 248-250 (1993).
Dosažení koexistence amorfní fáze mannitol + protein s alaninovou krystalickou fází není závislé na přítomnosti a koncentraci pufru k úpravě pH roztoku, ale závisí na poměru mannitolu k alaninu, jak to zde již bylo definováno.
Aby bylo možno nabídnout veřejnosti formulaci s vhodnými proteiny ve formě terapeuticky použitelných kompozic, je třeba je upravit do takové formy, aby si kompozice uchovaly svou biologickou aktivitu od chvíle výroby do doby použití. Lidský růstový hormon byl například upravován četnými způsoby, jak je tomu například v popisech patentů či přihlášek: US 5 096 885, rak. 30 771/89, WO 89/09614, 92/17200, 93/19773 a 93/19776.
Kompozice dle tohoto vynálezu lze uchovávat za teploty obvyklé, zatím co přípravky s obsahem proteinů, jak bylo dosud dostupné, je třeba uchovávat za teploty od 2 °C do 8 °C.
Největší podíl farmaceutických kompozic tvoří kompozice lyofilizované, zmrazené nebo roztoky. Obsahují protein, pufr, glycin, arginin, mannitol, zinek, povrchově aktivní činidla, dextran a kyselinu ethylendiaintetraoctovou, případně další excipientia, nikdy však kombinaci mannitolu s alaninem v hmotn. poměru 0,1 až 1. Lyofilizované nebo zmrazené formy se používají k udržení biochemické integrity i k zachování biologické účinnosti molekuly. Lyofilizované kompozice je třeba uvést do použitelného stavu před podáváním přidáním sterilních rozpouštědel, vhodných z farmaceutického hlediska, jako je dest. voda, vodné roztoky chloridu sodného s obsahem 0,9 % hmotn. této soli nebo roztoky s obsahem 5% hmotn. glukosy či jakékoli jiné farmaceuticky vhodné rozpouštědlo, a mohou či nemusí zde být konzervačně antibakterielně účinné složky, jako je benzylalkohol, fenol nebo m-kresol.
Nadále všechny údaje v % jsou míněny hmotnostně.
Kompozice, pokud je stálá za teploty místnosti až do chvíle aplikace, je zvláště vhodná pro ambulantní použití, třeba v případě lidského růstového hormonu ve formě ampulí či forem, hodících se pro několikanásobné podávání dílčích dávek.
Přípravky takto připravené lze rovněž přidávat do jiných dávkovaných léků.
Přednostní formou podle tohoto vynálezu je však lyofilizát, který se připraví lyofilizováním odpovídajícího roztoku. Postup při přípravě zahrnuje stupně smíchávání, rozpouštění, filtrace a lyofilizování.
-4CZ 286195 B6
Složení roztoku, určeného k lyofilizování je toto:
Protein, pufr, vhodný z farmaceutického hlediska k úpravě hodnoty pH, alanin a mannitol s hmotnostním poměrem těchto dvou složek v rozsahu 0,1 až 1, a voda pro injekční účely.
Roztok, určený k lyofilizování se připraví takto:
Roztok proteinu se získá gelovou filtrací z kolony a obsahuje pufr k udržení hodnoty pH v rozsahu, který je vhodný pro zajištění stálosti proteinu. K tomuto roztoku se přidá další potřebné množství pufru, alaninu, mannitolu a vody tak, aby se všechny složky dokonale rozpustily. Roztok se sterilně filtruje a rozdělí se do vhodných zásobníčků, s výhodou skleněných lahviček či ampulek.
Lyofilizování roztoků se provádí takto:
Roztok projde cyklem zmrazení, dále sublimace a sušení, vždy za přizpůsobení lyofilizovanému objemu či objemu nádoby, jež obsahuje roztok. S výhodou se volí rychlost zmrazování kolem -2 °C/min v lyofilizačním zařízení Usifroid (franc. Výrobek) typ SMH15 nebo SMJ100 či SMH2000.
Doba, potřebná k sušení, teplota i tlak při zpracování lyofilizátu se zvolí se zřetelem k lyofilizovaným objemům a podílům vody v lyofilizátu, resp. obsahu vody, která má ve zbytku zůstat.
Dokonalý popis technologie přípravy injikovatelných přípravků je odborníkům přístupný v Reamington's Pharmaceutical Sciences, 1985, 17. vyd., nebo v William NA + Polli GP, The lyophilization of pharmaceuticals, přehled v J. Parenteral Sci. Těch. 38, 48-59 (1984), č. 2, nebo v Franks F., Freezedrying, from empiricism to predictability, Cryo-letters 11, 93-110 (1990).
Získá se takto lyofilizát, ve kterém je alanin ve formě krystalické a mannitol ve formě amorfní. Může se uchovávat za teploty až do 25 °C bez ztráty tamže obsaženého proteinu co do účinnosti.
Pro bližší popis vynálezu byly vyhodnoceny výsledky za volby proteinu lidského růstového hormonu a uro-oxidázy jako sledovaných proteinů. Takže byl připraven větší počet roztoků s obsahem lidského růstového hormonu nebo uro-oxidázy jako biologicky aktivních proteinů, fosfátového pufru o různých koncentracích s hodnotou pH = 7, ty byly lyofilizovány a analyzovány. Koncentrace lidského růstového hormonu: 4 mez. jedn./0,5 ml; hodnota pH = 8 byla zvolena pro roztoky uro-oxidázy, 30 UAE/ml, v obou případech za přítomnosti samotného aleninu či mannitolu, nebo směsí obou dvou.
Přípravky jsou podrobně uvedeny v příkladech Tabulky 1 a Tabulky 2 zde dále. Dále jsou pak uvedeny analytické postupy, jakož i použité doby i teploty vzhledem ke stálosti přípravku.
-5CZ 286195 B6
Tabulka 1
Uvedeny jsou přípravky s obsahem uro-oxidázy
č. mannitol mg alanin mg R Fosfátový pufr pH - 8, mM Uro-oxidáza UAE Unité ďactivité enzymatique, (jedn. enz. účinnosti)
1 33,0 0,8 + OO 50 30
2 27,7 6,9 4 30 30
3 20,8 10,4 2 30 30
4 13,6 13,6 1,000 40 30
5 10,2 15,3 0,67 40 30
6 7,3 16,0 0,46 40 30
7 7,3 16,2 0,45 30 30
8 9,5 21,0 0,45 50 30
9 4,6 16,3 0,25 40 30
10 2,5 20,0 0,125 40 30
11 0,0 16,0 0 50 30
Tabulka 2
Uvedeny jsou přípravky s obsahem lidského růstového hormonu
č. mannitol mg alanin mg R Fosfátový pufr pH = 7, mM Lidský růstový hormon Ul, Unité internát., Mez. jedn.
12 12,5 0,0 + oo 2,50 4
13 20,0 2,5 8 1,94 4
14 12,5 6,5 2 0,00 4
15 12,5 6,5 2 2,50 4
16 12,5 13,0 1 2,50 4
17 4,7 10,5 0,45 1,95 4
18 0,0 6,5 0 2,50 4
Analytické postupy, jež byly využity pro stanovení různých parametrů, jsou tyto:
Obsah dimerů a zřejmých látek s vyšší molekulární hmotností:
Obsah těchto složek se stanoví chromatograficky (SEC-HPLC) vysokotlakovou kapalinovou chromatografií za použití kolony SUPEROSE 12, Pharmacie, ref. 17-0538-01. Produkt se eluuje roztokem pufr s fosforečnanem amonným, pH = 7,0, 1,38 g dihydrogenfosforečnanu amonného na litr vody; úprava pH na hodnotu 7,0 se provede přidáváním koncentrovaného roztoku amoniaku v množství 0,4 ml/min, detekce při 220 nm.; (uvedený obsah je zaznamenán v analytických výsledcích jako % oligomerů + polymerů).
Obsah dimerů a látek s vyšší mol. hmotností se dá stanovit rovněž postupem, který je popsán v monografii „Pharmacopée Européenne „Somatropine pour préparation injectable“, leden, 1994.
Stanovení titru proteinu chromatografováním v inverzní fázi:
-6CZ 286195 B6
Za vyjádření v mg na ampulku se stanovení provede chromatografováním v inverzní fázi za použití kolony C18-300A, 25 cm, průměr 4,6 mm (SYNCHROM, CR 103-25). Produkt se eluuje za 35 minut gradientem použitím mobilní fáze 75 objemů vody s 0,1% kyseliny trifluoroctové a 25 objemů acetonitrilu s 0,08% kyseliny trifluoroctové až k poměru 30 objemů prvé a 70 objemů druhé kapalné složky. Výtok: 1 ml za minutu, detekce: 220 nm.
Stanovení enzymové aktivity uro-oxidázy:
Za vyjádření vjedn. enzymové účinnosti se stanovení provede spektrofotometricky vkyvetě v termostatu při 30 °C za sledování vymizení kyseliny močové při 292 nm dle metody, kterou popsali Legouw R, Deppech Bruno, Dumont X, Guillemot JC, Ramond P., Shire D, Caput D, Ferrara P, Loison G, J. Biol. Chem. 267, č. 12, 8565-8570 (1992).
Zakalení rekonstituovaných roztoků:
Zakalení po rozpuštění lyofilizátu s obsahem lidského růstového hormonu se stanovuje spektrofotometricky (Ph. Eur., 2 (I) V 619) při 500 nm za použití spektrofotometru Perkin Elmer 554. Výsledkyjsou uváděny v jednotkách absorbance x 1000.
Zakalení po rozpouštění lyofilizátu s obsahem uro-oxidázy se stanovuje na turbidimetru Ratio Hach 18900-00. Výsledky jsou vyjádřeny v nefelometrických jednotkách turbidity (NTU), jak byly definovány v Standard methods for the examination of water and wastewater, Američan Public Health Association.
Stupeň opalescence se rovněž stanoví dle postupu zPharmacopée Européenne (II) V, 6, srovnáním analyzovaného vzorku se standardní suspenzí.
Organoleptická kriteria lyofilizátů.
Tato kriteria se testují vizuálně a zahrnují zbarvení lyofilizátu, jeho strukturu (zborcení či nikoli), jakož i případné rozdělení fází mezi kůrou a střídou lyofilizátu.
Defraktometrická stanovení práŠkovitosti paprsky X.
Tato analýza se provádí na difraktometru SIEMENS D500 TT, zdroj CuKal, generátor: 40 KV, 25 mA. Monochromátor v pozadí: Fentes 1/1/1/0, 16/0,6, vzorky na pyrex-ové podložce, potřebná doba teplotního vzestupu 4 °C až 40 °C za minutu (2 theta, Bragg).
Diferenční termická analýza:
Studie lyofilizátu diferenční termickou analýzou se provádí za těchto podmínek:
Zařízení: DSC 7 Perkin-Elmer, vzorky Indium a olovo, testovaný vzorek 5 mg až 10 mg na kapsli 50 μΐ, počáteční teplota 10 °C, rychlost vyhřívání 10 °C/min, konečná teplota 300 °C.
Deamidované formy lidského růstového hormonu.
Procento deamidovaných forem se stanovuje aniontovou výměnnou chromatografií (AEXHPLC) za použití anexové kolony (PHARMACIA mono-Q HR 5/5, Réf. 17-0546-01). K vyluhování se použije roztok A (13,8 g dihydrogenfosforečnanu amonného v 1000 ml vody, hodnota pH se upraví na 7 přidáním konc. roztoku amoniaku), a voda jako podíl B za použití tohoto programu: 5% roztoku A během 2 minut, potom 15% roztoku A 5 minut, posléze 50% roztoku A po 20 minut a konečně 100% roztoku A v 5 minutách a tento posléze uvedený roztok
-7CZ 286195 B6 se udržuje ještě 5 minut. Eluování lidského růstového hormonu (po dobu asi 15 minut) a deamidovaných forem se sleduje při 220 nm. Výtok: 1 ml za minutu.
Analytické výsledky, dosažené za použití těchto různých metod, jsou popsány zde dále.
Obsah dimérů a látek se zvýšenou mol. hmotností:
Obsah oligomerů a polymerů v lyofilizátech s obsahem 4 mez. jedn. lidského růstového hormonu na 0,5 ml vody se stanoví ve funkci poměru mannitolu k alaninu (vyobr. 1). Z tohoto vyobr. lze odvodit jasně, že nejnižší obsah oligomerů a polymerů v roztoku se docílí v případ, kdy hmotn. poměr mannitolu k alaninu je v rozmezí 0,1 až 1, přičemž hodnota 0,1 je interpolována na počátku křivky.
Jako dodatečný příklad byla sledována stabilita dvou podílů lidského růstového hormonu, 4 a 8 mez. jedn. a to při 25 °C a 35 °C. Po šestiměsíčním uchovávání byla zjištěna vynikající stálost.
V tabulkách 3 a 4 zde dále jsou uvedena procenta oligomerů a polymerů deamidovaných forem za různé doby a za různých teploty ve srovnání s normami „Pharmacopée Européenne. V těchto tabulkách poměr mannitolu k alaninu je 0,45.
Tabulka 3
Dávka 4 mez. jedn. na ampulku 35 °C
Norma Pharm. Europ. Čas 0 25 °C
3 měsíce měsíců
3 6
Oligomery + polymery, % 6,0 1,0 1,9 3 3,3
Deamidované formy, % 6,6 1,3 1,9 2,8 3,9
Dávka mg na ampulku 1,58+ 1,61+ 1,54+ 1,55+
+) Titr se v podstatě nemění v průběhu doby, to za předpokladu přesnosti metody stanovování ± 5%.
Tabulka 4
Dávka 8 mez. jedn. na ampulku
Norm. Pharm. Europ Čas 0 25 °C 35 °C
3 měsíce 6 měsíců 3 měsíce 6 měsíců
Oligomery + polymery, % 6 1,0 1,5 1,2 1,7 2,2
Deamidované formy, % 6,6 1,0 1,5 1,95 2,2 3,3
Dávka mg na ampulku o + 3,0+ 2,93+ 2,95+ 2,94+
+) Titr se nemění v podstatě v průběhu doby, to za předpokladu přesnosti metody stanovování (+ 5%)
-8CZ 286195 B6
Stanovení enzymové účinnosti uro-oxidázy.
Aktivita enzymová lyofilizátu s obsahem 30 UAE uro-oxidázy na 1 ml vody byla stanovena ve funkci vztahu R po 1 měsíci při 35 °C (viz vyobr. 2). Z něj je patrné, že původní enzymová aktivita uro-oxidázy je zachována po měsíci při 35 °C pro R v rozsahu mezi 0,4 a 1.
Jako dodatkový příklad lze uvést, že přípravek s R = 0,45 nebo R = 0,67 je dokonale stálý po 3 měsících uchovávání při 25 °C. Zbylá účinnost odpovídá 100% ve vztahu k počátečnímu stavu, tedy doba: 0.
Zakalení nově získaného roztoku.
Zakalení lyofilizátů s obsahem 4 mez. jedn. lidského růstového hormonu po rozpuštění v 0,5 ml vody bylo stanovováno ve funkci R (viz vyobr. 3). Je patrné, že nejmenší zakalení se projeví v roztocích, kde poměr mannitolu k alaninu je mezi 0 až 1,5.
Zakalení lyofilizátů s obsahem 30 UAE uro-oxidázy na 1 ml vody byla sledováno ve funkci výše uvedeného poměru (viz V obr. 4). Je patrné, že k nejmenšímu zakalení dochází v případě, kdy poměr mannitolu k aleninu je mezi 0,2 až 1.
Organoleptická kriteria lyofilizátů.
Ta byla zjišťována po každý lyofilizát s obsahem 4 UI lidského růstového hormonu nebo 30 UAE urooxidázy nebo bez proteinu vůbec za měnících se obsahů fosforečnanového pufru ve funkci uvedeného poměru mannitolu k alaninu, což je patrné z tabulky 5. Podle tohoto organileptická kriteria lyofilizátů jsou uspokojující pro uvedený poměr v rozmezí 0,125 až 1,7. Tyto charakteristiky se nemění ve funkci času.
Tabulka 5
Organoleptická kriteria a krystalizace excipientií ve funkci poměru hmotnosti mannitolu k alaninu
Poměr Organoleptická kriteria Krysí. Excipientia (difr. paprsky X)
4- oo zhroucení mannitol
10 zhroucení mannitol + alanin
6,469 zhroucení mannitol alanin
5 zhroucení mannitol alanin
4,014 zhroucení mannitol alanin
1,705 dobré mannitol alanin
1,402 dobré mannitol alanin
1,25 dobré mannitol alanin
1,097 dobré mannitol alanin
1 dobré alanin
0,667 dobré alanin
0,456 dobré alanin
0,451 dobré alanin
0,452 dobré alanin
0,251 dobré alanin
0,125 dobré alanin
0 rozdělení fází alanin
-9CZ 286195 B6
Difrakce paprsků X
Výsledky analýz difrakcí pomocí paprsků X na práškované lyofilizáty s obsahem směsí mannitol/alanin v poměru od 0 až k + <x> jsou v tabulce 5.
Ze získaných difraktometrů lze vyčíst, že pokud rozsah je mezi 0 až 1, objevují se pouze linie kryst. mřížky alaninu a pauze z linie na nejnižší části difraktometrů lze vyčíst náznak amorfní fáze, kterou tvoří mannitol. Pouze amorfní fáze mannitolu má důležitost. Pokud je zmíněný poměr vyšší než 1, pak mannitol krystaluje také.
Pokud je poměr mannitolu k alaninu v rozmezí 0 až 1, získává se amorfní fáze, kterou tvoří mannitol a krystalická fáze, kterou představuje alanin.
Termická diferenční analýza
Teploty přechodu sklovitého stavu lyofilizátů obsahujících 4 UI lidského růstového hormonu nebo 30 UAE uro-oxidázy či bez proteinu, a obsahy fosforečnanových pufrů s obměnami se stanovují v inverzní funkci k hodnotě poměru mannitolu k alaninu (viz vyobr. 5). Je patrné, že nej vyšší hodnota přechodu sklovitého stavu platí pro lyofilizáty, obsahující směsi mannitolu a alaninu v hmotn. rozmezí 0 až 1.
Je to právě teplota přechodu sklovitého stavu lyofilizátů, jež znamená nejvyšší teploty stability lyofilizátů. A té se dosahuje v případě, kdy hmotn. poměr je mezi 0 až 1.
Deamidované formy
Výsledky, jak byly získány se vzorky s obsahem 4 UI a 8 UI jsou v souladu s jen velmi slabým vývojem v tomto smyslu, a to je velmi přijatelné ve srovnání s normami monografie „Somatropine de la Pharmacopée Européenne“. Lze uvažovat o zcela dostačující stálosti za teploty 25 °C.
Závěrem je třeba říci, že bylo dokázáno, že každá vyhodnocená vlastnost představuje optimum pro rozsah hmotn. poměru mannitolu k alaninu, v souboru se to jeví takto
% Oligomerů a polymerů Rozsah mol. poměru
(stabilita lidského růstového hormonu) 0,1 až 1
Aktivita uro-oxidázy po 1 měsíci při
35 °C (enzymová) 0,4 až 1
Zakalení roztoku lidského růstového faktoru 0 až 1,5
Zakalení roztoků uro-oxidázy 0,2 až 1
Vzezření lyofilizátů 0,125 až 1,7
Pouze alanin kryst. 0 až 1
Nejvyšší teplota přechodu sklovitého stavu 0 až 1
Každá z analytických kriterií (% oligomerů + polymerů, stabilita lidského růstového hormonu, enzymová aktivita uro-oxidázy) po 3 měsících při 35 °C, zakalení roztoku jak lidského růstového hormonu, tak uro-oxidázy, vzhled lyofilizátů, sám alanin v kryst. stavu, nejvyšší teplota přechodu sklovitého stavu definuje optimální rozsah vlastností. Pro získání nej lepší kompozice je třeba definovat rozmezí poměru mannitolu k alaninu jako 0,1 až 1.
-10CZ 286195 B6
Příklady provedení vynálezu
Další příklady popisují blíže vynález bez jakéhokoli omezování jeho rozsahu.
Příklad 1 Složení lyofílizátu lidského růstového hormonu, 4 mez. jedn. (4 UI) na 0,5 ml vody
Složka pro jednu dávku v mg
Lidský růstový faktor 4UI
alanin 10,5 mg
mannitol 4,77 mg
dodekahydrát monohydrogenfosforečnanu
disodného 0,70 mg
voda pro injekční účely 0,5 ml
ampulka z bílého skla, 3 ml 1 kus
zátka 1 kus
hliníková kapsle, rozvírací, průměr 13 mm 1 kus
Příklad 2 Složení lyofílizátu lidského růstového hormonu, 8 mez. jedn. (8 UI) na 1 ml vody
Složka pro jednu dávku v mg
Lidský růstový faktor 8UI
alanin 21 mg
mannitol 9,54 mg
dodekahydrát monohydrogenfosforečnanu
sodného 1,4 mg
voda pro injekční účely 1 ml
ampulka z bílého skla, 3 ml zátka 1 kus
hliníková kapsle, zavírací, průměr 13 ml 1 kus
Příklad 3 Složení lyofílizátu lidského růstového hormonu 18 mez. jedn. (18 UI) na 1,0 ml vody
Složka pro jednu dávku v mg
Lidský růstový hormon 18 UI
alanin 21 mg
mannitol 9,54 mg
dodekahydrát monohydrogenfosforečnanu
sodného 1,4 mg
voda pro injekční účely 1,0 mg
ampulka z bílého skla, 3 ml 1 kus
zátka 1 kus
hliníková kapsle, průměr 13 mm 1 kus
Příklad 4 Lyofílizát lidského růstového hormonu pro přípravu injekcí, 8 UI/1 ml
Teplota °C X 5 25 35 5 25 35
Počet dnů 0 90 90 90 180 180 180
Sledovaný jev Použitá metoda Normy výsl. výsl výsl. výsl. výsl. výsl yý51·
-11CZ 286195 B6
Charakterizace
Vzhled vyhovuje vyhov, vyh. vyh. vyh vyh. vyh. vyh.
Identifikace
Lidský inv. fáze vyhovuje vyhov. vyh. vyh. vyh vyh. vyh. vyh.
růst. horm. chromatografie vyhovuje vyhov. vyh. vyh. vyh vyh. vyh. vyh.
Testy
Deamidované Formy anex pod 6,5% 1,0% 1,0% 1,5% 2,2% 1,5% 1,95% 3,3%
Dimery a látky nápadné chromatografie pod 6,0 1,0% 0,75% 1,5% 1,7% 0,8% 1,2% 2,2%
Formy Odbourané Proteiny elektroforéza elektroforéza pod 2,0 vyh.(1) pod 2,0% vyh. pod 2,0% vyh. pod2,0% vyh. pod 2,0% vyh. pod 2,0% vyh. pod 2,0% vyh. pod 2,0% vyh.
Obsah vody pod 1,5% 0,45 0,41 0,68 0,73 0,47 x(2)
Dávkováni mg/ampulka Inverzní fáze 2,93-3,24 3,0 3,1 3,0 2,95 2,96 2,93 2,94
Rekonst. roztoku
Vzhled Pharm. pod susp. II pod pod pod pod
Europ. susp.II susp.II susp. II susp. II
Europ. bez barvy bez bez bez bez
barvy barvy barvy barvy
PH 6,5-7,5 pod pod pod pod
rozpuštění pod 1 min. 1 min 1 min 1 min 1 min
(1) Nejsou zde žádné dodatečné pásy kromě stop artefaktů přítomných v kontrolním vzorku nebo stopy oligomerů lidského růstového faktoru x<2) nesledováno
Příklad 5 Lyofilizát lidského růstového hormonu pro přípravu injekcí, 4 Ul/lml
Teplota °C X 5 25 35 5 35
’očet dnů 0 90 90 90 180 180
Sledovaný jev Použitá metoda Normy výsledek výsledek výsledek výsledek výsledek výsledek
Charakterizace
Vzhled | | vyhovuje | vyhovuje | vyhovuje | vyhovuje | vyhovuje | vyhovuje | vyhovuji
Identifikace
Lidský růst, faktor Inv. fáze vyhovuje vyhovuje vyhovuje vyhovuje vyhovuje vyhovuje vyhovuje
chromá tografie vyhovuje vyhovuje vyhovuje vyhovuje vyhovuje vyhovuje vyhovuje
-12CZ 286195 B6
Testy
Deamidované formy anex pod 6,5% 1,3% 1,0% 1,9% 2,8% 1,3% 3,9%
Dimery a látky nápadné chromatografie pod 6,0% 1,0% 0,6% 1,9% 3,0% 1,0% 3,3%
Formy odbourané elektroforéza pod 2,0% pod 2,0% pod 2,0% pod 2,0% pod 2,0% pod 2,0% pod 2,0%
Proteiny elektroforéza vyhovuje1 vyh. vyh. vyh. vyh. vyh. vyh.
Obsah vody pod 1,5% 0,65 0,58 0,97 0,93 0,81 x(2)
Dávkování mg/ampulka Inverzní fáze 1,50-1,70 1,58 1,57 1,61 1,54 1,56 1,55
Rekonst. roztoku
Vzhled Pharm. europ. pod susp. II pod susp. II pod susp. II pod susp. H pod susp. II pod susp. Π pod susp. II
Pharm. europ. bez barvy bez barvy bez barvy bez barvy bezbarvý bezbarvý bez barvy
PH 6,5-7,5 7,01 7,22 6,96 6,99 7,06 7,00
Rozpouštěni pod 1 min pod 1 min pod 1 min pod 1 min pod 1 min pod 1 min pod 1 min
l) Nejsou zde žádné dodatečné pásy kromě stop artefaktů přítomných v kontrolním vzorku nebo stopy oligomerů lidského růstového faktoru.
x2) nesledováno
Příklad 6 Výsledky sledování stability za teploty 5 °C v případě lidského růstového hormonu
UI, po jednom roce
Opalescence PH Obsah Deamidované Oligomery +
U.A.. 10'3 vody sloučeniny polymery
Normy pod 20 pod 1,5% pod 5% pod 6%
čas = 0 1 7,9 0,33% 1,36% 0,63%
1 měsíc 1 8 0,29% — —
3 měsíce 3 7,83 0,32% 1,25% 0,45%
6 měsíců 4 - 1,03% 1,4% 0,5%
12 měsíců 7 - 1,19% 1,15% 1,11%
Ve všech případech R = 0,45
-13CZ 286195 B6
Příklad 7 Výsledky stability za teploty 25 °C v případě lidského růstového hormonu 18 UI, po 3 měsících
Opalescence U.A.. 10'3 PH Obsah vody Deamidované sloučeniny Oligomery + polymery
Normy pod 20 pod 1,5% pod 5% pod 6%
čas = 0 1 7,9 0,33% 1,36 0,63%
1 měsíc 3 7,72 0,35% — —
3 měsíce 9 7,65 0,54% 1,37% 0,85
Ve všech případech R = 0,45
Příklad 8 Složení lyofilizátů uro-oxidázy, 30 UAE/ampulku
Složení Rekonstituované roztoky
Čirost Pharm. europ. Zbarvení Pharm. europ.
čas = 0 měsíců čas = 0 měsíců
1 3 1 3
35 °C 5 °C 25 °C 35 °C 5 °C 25 °C
7,3 mg mannitolu + 16,2 mg L-alaninu 30mMNa2HPO4 podlí pod Π I-II Π-ΙΠ bezb. bezb. bezb. bezb.
20,8 mg mannitolu + 10,4 mg L-alaninu 30 mM Na2HPO4 pod I nad ΠΙ pod Π m-rv bezb. bezb. bezb. bezb.
27,7 mg mannitolu + 5,9 mg L-alaninu 21 mMNa2HPO4 pod ΙΠ nad IV ΙΠ nad IV bezb. bezb. bezb. bezb.
Příklad 8,1. pokračování
Složení pH rekonstituovaného roztoku Enzymová aktivita UAE/ampulku Voda, obsah v %
čas= 0 měsíců čas = 0 měsíců
1 1 3
35 °C 5 °C 25 °C 35 °C 5 °C 25 °C
7,3 mg mannitolu + 16,2 mg alaninu 30mMNa2HPO4 7,96 7,96 7,91 7,93 32,9+ 30,0+ 30,2+ 33,3+ 3,2
20,8 mg mannitolu + 10,4 mg L-alaninu 20mMNa2HPO4 8,03 8,05 8,01 8,01 28,Γ 22,5+ 32,0+ 22,7+ 2,8
27,7 mg mannitolu + 6,9 mg L-alaninu 21 mMNa2HPO4 8,04 8,06 8,00 8,03 28,7+ 23,0 31,2+ 20,5 2,1
+ Hodnota se příliš nemění v závislosti na čase za předpokladu přednosti + 10% postupu 15 stanovování
-14CZ 286195 B6
Příklad 9 Stabilita lyofilizátů uro-oxidázy, 30 UAE/ampulku od doby 1 měsíce při 35 °C až po dobu 3 měsíců při 5 °C, 25 °C a 35 °C.
Složení Rekonstituovaný roztok
Čirost (pharm. europ.) Zbarvení (Pharm. europ.)
čas = 0 měsíců čas = 0 měsíců
1 35 °C 3 1 35 °C 3
5 °C 25 °C 5 °C 25 °C 35 °C
vždy 40 mM Na2HPO4 I-II IV Ι-Π II bezb. bezb. bezb. bezb. bezb.
14,15 mg alaninu + 14,15 mg mannitolu
15,9 mg alaninu + 10,6 mg mannitolu I-II ΙΙ-ΠΙ pod I I bezb. bezb. bezb. bezb. bezb.
16 mg alaninu + 7,3 mg mannitolu I-II III-IV I pod I bezb. bezb. bezb. bezb. bezb.
18,9 mg alaninu + 4,72 mg mannitolu I-II pod IV pod I I-II bezb. bezb. bezb. bezb. bezb.
20 mg alaninu + 2,5 mannitolu II pod IV ii-m podIV bezb. bezb. bezb. bezb. bezb.
Příklad 9, 1. pokračování
Složení Vždy 40 mM Na2HPO4 Hodnota pH rekonstituovaného roztoku Obsah vody
čas = 0 měsíců
1 3
35 °C 5 °C 25 °C
14,15 mg alaninu + 14,15 mg mannitolu 8,01 8,01 8,04 8,02
15,9 mg alaninu + 10,6 mg mannitolu 8,00 7,97 8,02 8,01
16 mg alaninu + 7,3 mg mannitolu 7,99 7,98 8,02 8,00 2,0 %
18,0 mg alaninu + 4,72 mg alaninu 7,96 7,94 7,97 7,96
20 mg alaninu + 2,5 mg mannitolu 7,96 7,93 7,96 7,95
-15CZ 286195 B6
Příklad 9, 2. pokračování
Složení Vždy 40 mMNa2HPO4 Enzymová Aktivita UAE/ampulka
čas = 0 měsíců
1 3
35 °C 5 °C 25 °C
14,15 mg alaninu + 14,15 mg mannitolu 30,3+ 23,2 29,8+ 30,5+
15,9 mg alaninu+ 10,6 mg mannitolu 29,7+ 28,9+ 30,9+ 29,8+
16 mg alaninu + 7,3 mg mannitolu 29,2+ 26,8+ 30,3+ 30,0+
18,9 mg alaninu + 4,72 mg mannitolu 30,1+ 20,5 30,Γ 30,5+
20 mg alaninu 2,5 mg mannitolu 29,4+ 17,9 29,4+ 25,7
+ hodnota se podstatněji nemění s časem za předpokladu přesnosti postupu měření (± 10%)

Claims (5)

1. Stabilní, lyofilizovaná a farmaceuticky vhodná kompozice, obsahující protein, zvolený ze skupiny uro-oxidázy a lidského růstového hormonu, dále pufr, umožňující udržovat hodnotu pH v rozmezí 7 až 8, mannitol a alanin, vyznačující se tím, že hmotnostní poměr mannitolu k alaninu v kompozici je v rozmezí od 0,1 až do 1.
2. Injikovatelný roztok, vyznačující se tím, že obsahuje kompozici podle nároku 1 ve fyziologicky přijatelném rozpouštědle, ze skupiny, kterou tvoří voda, 0,9 % hmotn. roztok chloridu sodného, přepočteno na celkovou hmotnost vodného roztoku a 5 % hmotn. roztok glukosy, přepočteno na celkovou hmotnost roztoku.
3. Kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje alanin ve formě krystalické a mannitol ve formě amorfní.
4. Kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že lyofilizát je složen z fáze amorfní a krystalické, přičemž amorfní fázi představuje mannitol a protein, fázi krystalickou alanin.
5. Kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že se jako pufr použije fosforečnanový pufr.
CZ19951081A 1994-05-04 1995-04-26 Stabilné lyofilizovaný přípravek s obsahem proteinu, dávkovací souprava CZ286195B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9405486A FR2719479B1 (fr) 1994-05-04 1994-05-04 Formulation stable lyophilisée comprenant une protéine: kit de dosage.

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ108195A3 CZ108195A3 (en) 1996-02-14
CZ286195B6 true CZ286195B6 (cs) 2000-02-16

Family

ID=9462880

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19951081A CZ286195B6 (cs) 1994-05-04 1995-04-26 Stabilné lyofilizovaný přípravek s obsahem proteinu, dávkovací souprava

Country Status (25)

Country Link
US (1) US5763409A (cs)
EP (1) EP0682944B1 (cs)
JP (1) JP2948125B2 (cs)
KR (1) KR100273053B1 (cs)
CN (1) CN1088583C (cs)
AT (1) ATE178484T1 (cs)
AU (1) AU694763B2 (cs)
CA (1) CA2148537C (cs)
CZ (1) CZ286195B6 (cs)
DE (1) DE69508837T2 (cs)
DK (1) DK0682944T3 (cs)
ES (1) ES2131781T3 (cs)
FI (1) FI117321B (cs)
FR (1) FR2719479B1 (cs)
GR (1) GR3030146T3 (cs)
HU (1) HU220220B (cs)
IL (1) IL113578A (cs)
MX (1) MX9502034A (cs)
NO (1) NO320364B1 (cs)
NZ (1) NZ272045A (cs)
PL (1) PL179240B1 (cs)
RU (1) RU2136306C1 (cs)
SI (1) SI0682944T1 (cs)
TW (1) TW397687B (cs)
ZA (1) ZA953596B (cs)

Families Citing this family (57)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
CN100360184C (zh) * 1995-07-27 2008-01-09 基因技术股份有限公司 稳定等渗的冻干蛋白质制剂
US6685940B2 (en) 1995-07-27 2004-02-03 Genentech, Inc. Protein formulation
DE19539574A1 (de) * 1995-10-25 1997-04-30 Boehringer Mannheim Gmbh Zubereitungen und Verfahren zur Stabilisierung biologischer Materialien mittels Trocknungsverfahren ohne Einfrieren
FR2740686B1 (fr) 1995-11-03 1998-01-16 Sanofi Sa Formulation pharmaceutique lyophilisee stable
EP0852951A1 (de) * 1996-11-19 1998-07-15 Roche Diagnostics GmbH Stabile lyophilisierte pharmazeutische Zubereitungen von mono- oder polyklonalen Antikörpern
FR2768341B1 (fr) * 1997-09-18 2000-04-14 Lab Francais Du Fractionnement Composition pharmaceutique placebo lyophilisable destinee a imiter un medicament, notamment a base de proteines ou de polypeptides
EP0913178A1 (en) * 1997-11-03 1999-05-06 Boehringer Mannheim Gmbh Process for the manufacture of dry, amorphous products comprising biologically active material by means of convection drying and products obtainable by the process
EP0913177A1 (de) * 1997-11-03 1999-05-06 Roche Diagnostics GmbH Verfahren zur Herstellung trockener, amorpher Produkte enthaltend biologisch aktive Materialien mittels Konvektionstrocknung, insbesondere Sprühtrocknung
AU2945199A (en) * 1998-03-18 1999-10-11 Ronai, Peter Amorphous glasses for stabilising sensitive products
JP5149470B2 (ja) 1999-02-22 2013-02-20 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド 新規のアルブミンを含有していない第ｖｉｉｉ因子処方物
DE10085144T1 (de) * 1999-10-28 2003-04-24 Inst Neftechimicheskogo Sintez Polypeptidkomposition
US6653062B1 (en) 2000-07-26 2003-11-25 Wisconsin Alumni Research Foundation Preservation and storage medium for biological materials
JP4129178B2 (ja) 2000-11-07 2008-08-06 ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド 安定化されたインターフェロン組成物
US6887462B2 (en) * 2001-04-09 2005-05-03 Chiron Corporation HSA-free formulations of interferon-beta
WO2003035030A1 (en) * 2001-10-24 2003-05-01 Pari Gmbh Kit for the preparation of a pharmaceutical composition
EP2260942A3 (en) 2002-05-13 2011-03-09 Becton, Dickinson and Company Protease Inhibitor Sample Collection System
US6803046B2 (en) * 2002-08-16 2004-10-12 Bracco International B.V. Sincalide formulations
JP2008500942A (ja) * 2003-01-08 2008-01-17 カイロン コーポレイション 組織因子経路インヒビターまたは組織因子経路インヒビター改変体を含有する安定化凍結乾燥組成物
GB0304636D0 (en) * 2003-02-28 2003-04-02 Britannia Pharmaceuticals Ltd Pharmaceutical composition for nasal delivery
DE10333317A1 (de) * 2003-07-22 2005-02-17 Biotecon Therapeutics Gmbh Formulierung für Proteinarzneimittel ohne Zusatz von humanem Serumalbumin (HSA)
GB0404586D0 (en) * 2004-03-01 2004-04-07 Britannia Pharmaceuticals Ltd Improvements in or relating to organic materials
US11229746B2 (en) 2006-06-22 2022-01-25 Excelsior Medical Corporation Antiseptic cap
EP2851087B1 (en) 2006-11-07 2017-04-19 Sanofi Pasteur Biologics, LLC Stabilization of vaccines by lyophilization
US7951368B2 (en) * 2007-06-25 2011-05-31 Amgen Inc. Compositions of specific binding agents to hepatocyte growth factor
GB0715285D0 (en) * 2007-08-06 2007-09-12 Britannia Pharmaceuticals Ltd Improvements in or relating to powdered medicaments for nasal delivery
US9078992B2 (en) 2008-10-27 2015-07-14 Pursuit Vascular, Inc. Medical device for applying antimicrobial to proximal end of catheter
NZ593190A (en) 2008-11-07 2013-01-25 Baxter Int Factor viii formulations
NZ606283A (en) * 2008-11-28 2014-08-29 Abbvie Inc Stable antibody compositions and methods for stabilizing same
EP2496246B1 (en) * 2009-11-03 2018-06-27 Grifols Therapeutics LLC Composition, method, and kit for alpha-1 proteinase inhibitor
EP3257525A3 (en) * 2009-12-22 2018-02-28 Celldex Therapeutics, Inc. Vaccine compositions
RU2448156C1 (ru) * 2011-03-17 2012-04-20 Эспосито Трейдинг Лтд Способ получения лиофилизированной субстанции
RU2448158C1 (ru) * 2011-03-24 2012-04-20 Эспосито Трейдинг Лтд Способ получения препарата фортелизин, обладающего фибринолитическими свойствами, и его применение для лечения инфаркта миокарда
US10166381B2 (en) 2011-05-23 2019-01-01 Excelsior Medical Corporation Antiseptic cap
WO2013009998A2 (en) 2011-07-12 2013-01-17 Pursuit Vascular, Inc. Device for delivery of antimicrobial agent into trans-dermal catheter
CN103917643B (zh) * 2011-11-22 2020-06-05 西门子医疗保健诊断公司 包含用于复原为校准和/或质量控制溶液的干燥试剂的设备，及其生产和使用方法
US20140017318A1 (en) * 2012-07-10 2014-01-16 Kevin O'Connell Method to produce a medicinal product comprising a biologically active protein and the resulting product
US9314519B2 (en) 2012-08-21 2016-04-19 Intervet Inc. Liquid stable virus vaccines
US9393298B2 (en) 2013-03-15 2016-07-19 Intervet Inc. Liquid stable bovine virus vaccines
US9480739B2 (en) 2013-03-15 2016-11-01 Intervet Inc. Bovine virus vaccines that are liquid stable
AR097762A1 (es) 2013-09-27 2016-04-13 Intervet Int Bv Formulaciones secas de vacunas que son estables a temperatura ambiente
MX2016003705A (es) 2013-09-27 2016-05-16 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Formulacion de un conjugado de hormona del crecimiento humana de accion prolongada.
AR099470A1 (es) 2014-02-17 2016-07-27 Intervet Int Bv Vacunas de virus de aves de corral líquidas
TWI670085B (zh) 2014-02-19 2019-09-01 荷蘭商英特威國際公司 液體穩定之豬病毒疫苗
AU2015252808B2 (en) 2014-05-02 2019-02-21 Excelsior Medical Corporation Strip package for antiseptic cap
WO2016182822A1 (en) 2015-05-08 2016-11-17 Icu Medical, Inc. Medical connectors configured to receive emitters of therapeutic agents
ES2671844B1 (es) 2015-06-11 2019-03-22 Attwill Medical Solutions Inc Dispositivos médicos, sistemas y métodos que utilizan composiciones de anti-trombina heparina.
SI3525865T1 (sl) 2016-10-14 2023-01-31 Icu Medical, Inc. Razkuževalni pokrovčki za medicinske konektorje
WO2018204206A2 (en) 2017-05-01 2018-11-08 Icu Medical, Inc. Medical fluid connectors and methods for providing additives in medical fluid lines
US11110063B2 (en) 2017-08-25 2021-09-07 MAIA Pharmaceuticals, Inc. Storage stable sincalide formulations
US11541221B2 (en) 2018-11-07 2023-01-03 Icu Medical, Inc. Tubing set with antimicrobial properties
US11400195B2 (en) 2018-11-07 2022-08-02 Icu Medical, Inc. Peritoneal dialysis transfer set with antimicrobial properties
US11517732B2 (en) 2018-11-07 2022-12-06 Icu Medical, Inc. Syringe with antimicrobial properties
US11534595B2 (en) 2018-11-07 2022-12-27 Icu Medical, Inc. Device for delivering an antimicrobial composition into an infusion device
US11541220B2 (en) 2018-11-07 2023-01-03 Icu Medical, Inc. Needleless connector with antimicrobial properties
JP2022513096A (ja) 2018-11-21 2022-02-07 アイシーユー・メディカル・インコーポレーテッド リング及びインサートを有するキャップを備える抗菌装置
AU2021396147A1 (en) 2020-12-07 2023-06-29 Icu Medical, Inc. Peritoneal dialysis caps, systems and methods

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5822445B2 (ja) * 1982-07-08 1983-05-09 株式会社 ミドリ十字 安定な固体の人血漿コリンエステラ−ゼ製剤の製法
US5037644A (en) * 1986-10-27 1991-08-06 Cetus Corporation Pharmaceutical compositions of recombinant interleukin-2 and formulation processes
US5096885A (en) * 1988-04-15 1992-03-17 Genentech, Inc. Human growth hormone formulation
JPH0296536A (ja) * 1988-09-29 1990-04-09 Green Cross Corp:The プラスミノゲン乾燥製剤
ATE111585T1 (de) * 1990-01-18 1994-09-15 Cereria Amos Sgarbi Spa Grablicht.
US5192743A (en) * 1992-01-16 1993-03-09 Genentech, Inc. Reconstitutable lyophilized protein formulation
SE9201073D0 (sv) * 1992-04-03 1992-04-03 Kabi Pharmacia Ab Protein formulation
DE4239877C1 (de) * 1992-11-27 1994-03-17 Boehringer Ingelheim Int Stabilisierte Superoxid-Dismutase (SOD)-Zusammensetzung

Also Published As

Publication number Publication date
EP0682944A1 (fr) 1995-11-22
EP0682944B1 (fr) 1999-04-07
DK0682944T3 (da) 1999-10-18
PL179240B1 (pl) 2000-08-31
FI952119A (fi) 1995-11-05
HUT72325A (en) 1996-04-29
DE69508837T2 (de) 1999-11-04
ES2131781T3 (es) 1999-08-01
FI952119A0 (fi) 1995-05-03
SI0682944T1 (en) 1999-08-31
MX9502034A (es) 1997-02-28
NO951724L (no) 1995-11-06
TW397687B (en) 2000-07-11
JPH0853361A (ja) 1996-02-27
PL308416A1 (en) 1995-11-13
DE69508837D1 (de) 1999-05-12
JP2948125B2 (ja) 1999-09-13
US5763409A (en) 1998-06-09
AU694763B2 (en) 1998-07-30
IL113578A0 (en) 1995-08-31
CN1088583C (zh) 2002-08-07
NO951724D0 (no) 1995-05-03
HU9501276D0 (en) 1995-06-28
NO320364B1 (no) 2005-11-28
FI117321B (fi) 2006-09-15
FR2719479A1 (fr) 1995-11-10
ATE178484T1 (de) 1999-04-15
RU2136306C1 (ru) 1999-09-10
CA2148537A1 (en) 1995-11-05
ZA953596B (en) 1996-11-04
CZ108195A3 (en) 1996-02-14
KR100273053B1 (ko) 2000-12-01
FR2719479B1 (fr) 1996-07-26
GR3030146T3 (en) 1999-08-31
HU220220B (hu) 2001-11-28
NZ272045A (en) 1996-02-27
IL113578A (en) 1999-10-28
CN1116522A (zh) 1996-02-14
AU1777495A (en) 1995-11-16
CA2148537C (en) 2002-07-16
KR950031103A (ko) 1995-12-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ286195B6 (cs) Stabilné lyofilizovaný přípravek s obsahem proteinu, dávkovací souprava
US7074763B2 (en) Stable formulations of nerve growth factor
EP0857060B1 (de) Zubereitungen und verfahren zur stabilisierung biologischer materialien mittels trocknungsverfahren ohne einfrieren
ES2406764T3 (es) Formulaciones que comprenden antagonistas de VEGF para administración intravítrea
CA3228586A1 (en) Manufacture of degarelix
JPH05331071A (ja) カルシトニン遺伝子関連ペプチド類の凍結乾燥組成物および安定化法
US5635176A (en) Pharmaceutical compositions containing IL-6
DE69101784T2 (de) Stabilisierte zusammensetzung enthaltend ein fibroblastwachstumsfaktor.
US6152897A (en) Syringe
CA2016165A1 (en) Stabilization of organic compounds
CA2466641A1 (en) Lyophilized monoclonal antibody compositions
Lückel et al. A strategy for optimizing the lyophilization of biotechnological products
US20180133329A1 (en) Compositions and method for stabilizing a pharmaceutical formulation, and methods of making and using the same

Legal Events

Date Code Title Description
IF00 In force as of 2000-06-30 in czech republic
MK4A Patent expired

Effective date: 20150426

MK4A Patent expired

Effective date: 20160223