ES2406764T3

ES2406764T3 - Formulaciones que comprenden antagonistas de VEGF para administración intravítrea

Info

Publication number: ES2406764T3
Application number: ES11157965T
Authority: ES
Inventors: Eric Furfine; Daniel Dix; Kenneth S. Graham; Kelly Frye
Original assignee: Regeneron Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Regeneron Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2006-06-16
Filing date: 2007-06-14
Publication date: 2013-06-10
Anticipated expiration: 2027-06-14
Also published as: EP3753548A1; KR101406811B1; JP2009540001A; PT2364691E; EP2364691A1; US20190031735A1; US20180155408A1; US9914763B2; US9580489B2; US20130274189A1; AU2007261536A1; CY1124265T1; KR20090018807A; US20140323983A1; JP5216002B2; CA2654510C; PT2944306T; JP5597271B2; CN101478949A; DK2944306T3

Abstract

Una formulación oftálmica de un antagonista del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), quecomprende: (a) 1-100 mg/ml de un antagonista de VEGF que consiste en los aminoácidos 27-457 del SEQ ID NO: 4, que estáglicosilado en los residuos de Asn 62, 94, 149, 222 y 308; (b) 0,01-5%de uno o más co-disolventes orgánicos que son uno o más de polisorbato, polietilenglicol (PEG), ypropilenglicol; (c) 30-150 mM de un agente de tonicidad seleccionado entre cloruro de sodio o cloruro de potasio; (d) 5-40 mM de tampón fosfato de sodio; y (e) 1,0-7,5% de un agente estabilizante seleccionado del grupo que consiste en sacarosa, sorbitol, glicerol,trehalosa, y manitol, pH entre aproximadamente 5,8-7,0, en donde la formulación es adecuada para laadministración intravítrea.

Description

Formulaciones que comprenden antagonistas de VEGF para administración intravítrea

5 Antecedentes de la Invención

Campo de la Invención

La presente invención está dirigida a formulaciones farmacéuticas adecuadas para la administración intravítrea, que

10 comprenden agentes capaces de inhibir el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), y a los métodos para elaborar y utilizar tales formulaciones. La invención incluye formulaciones farmacéuticas líquidas que tienen una estabilidad incrementada, así como formulaciones que se pueden liofilizar y reconstituir para la administración intravítrea.

15 Estado de la Técnica Relacionada

La expresión del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) es casi ubicua en el cáncer humano, en consonancia con su papel como mediador clave de la neoangiogénesis tumoral. El bloqueo de la función de VEGF, por medio de la unión a la molécula o su receptor VEGFR-2, inhibe el crecimiento de las células tumorales

20 implantadas en múltiples modelos de xenoinjerto diferentes (véase, por ejemplo, Gerber et al. (2000) Cancer Res. 60:6253-6258). Se ha descrito un antagonista de la proteína de fusión específica de VEGF soluble, denominado "trampa de VEGF" (Kim et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99:11399-404; Holash et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99: 11393-8).

25 Se conocen formulaciones oftálmicas, véanse por ejemplo, las Patentes de los Estados Unidos Núms.

7.033.604 y 6.777.429. Se describe una formulación oftálmica de un anticuerpo para VEGF en la Patente de los Estados Unidos Núm. 6.676.941.

Comúnmente se utiliza la liofilización (secado por congelación en condiciones controladas) para el almacenamiento

30 de proteínas a largo plazo. La proteína liofilizada es sustancialmente resistente a la degradación, agregación, oxidación, y otros procesos degenerativos mientras se encuentra en estado secado por congelación (véase, por ejemplo, la Patente de los Estados Unidos Núm. 6.436.897).

El documento WO 2006/047325 está relacionado con un método para tratar enfermedades neovasculares

35 intraoculares. El documento WO 2005/020972 está relacionado con la terapia combinada para el tratamiento de los trastornos neovasculares oculares. El documento WO 2006/104852 y la Patente de los Estados Unidos 2006/0217311 A1 están relacionados con formulaciones antagonistas de VEGF.

Breve Resumen de la Invención

40 Se proporcionan formulaciones estables de un antagonista de una proteína de fusión específica de VEGF. Se proporcionan formulaciones farmacéuticamente aceptables que comprenden un antagonista "trampa" de VEGF con un portador farmacéuticamente aceptable. En realizaciones específicas, se proporcionan formulaciones líquidas y liofilizadas.

45 En un primer aspecto, se proporciona una formulación oftálmica líquida estable de un antagonista de una proteína de fusión específica de VEGF, que comprende una proteína de fusión que comprende un componente receptor que consiste esencialmente en un dominio 2 de tipo inmunoglobulina (Ig) de un primer receptor de VEGF y un dominio 3 de Ig de un segundo receptor de VEGF, y un componente multimerizante (también denominado "trampa de VEGF").

50 El antagonista de la proteína de fusión específica de VEGF consiste en los aminoácidos 27-457 del SEQ ID NO: 4 que está glicosilado en los residuos de Asn 62, 94, 149, 222 y 308.

En un aspecto, la invención proporciona una formulación oftálmica de un antagonista del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), que comprende:

55 1. (a) 1-100 mg/ml de un antagonista de VEGF que consiste en los aminoácidos 27-457 del SEQ ID NO: 4, que está glicosilado en los residuos de Asn 62, 94, 149, 222 y 308;

2. (b) 0,01-5% de uno o más co-disolventes orgánicos que son uno o más de polisorbato, polietilenglicol (PEG), y propilenglicol;

3. (c) 30-150 mM de un agente de tonicidad seleccionado entre seleccionado entre cloruro de sodio o cloruro 60 de potasio;

4.: (d) 5-40 mM de tampón fosfato de sodio; y

5.: (e) 1,0-7,5% de un agente estabilizante seleccionado del grupo que consiste en sacarosa, sorbitol, glicerol, trehalosa, y manitol, pH entre aproximadamente 5,8-7,0, en donde la formulación es adecuada para la administración intravítrea.

En una o más realizaciones específicas, el co-disolvente orgánico puede ser polisorbato, por ejemplo, polisorbato 20

o polisorbato 80, polietilenglicol (PEG), por ejemplo, PEG 3350, o propilenglicol, o una combinación de los mismos; el agente de tonicidad puede ser cloruro de sodio o cloruro de potasio; el agente estabilizante puede ser sacarosa, sorbitol, glicerol, trehalosa, o manitol; y el agente tamponador comprende tampón fosfato de sodio 5-40 mM.

En diferentes realizaciones, el co-disolvente es polisorbato y/o PEG, el agente estabilizante es sacarosa, el agente tamponador es tampón fosfato de sodio, y el agente de tonicidad es cloruro de sodio.

Más específicamente, la formulación oftálmica líquida estable comprende aproximadamente 40-50 mg/ml del antagonista de VEGF, tampón fosfato aproximadamente 10 mM, polisorbato y/o PEG al 0,01-3%, cloruro de sodio 40-135 mM, y sacarosa al 5,0%, pH aproximadamente 6,2-6,3.

En una realización preferida específica, la formulación oftálmica líquida estable comprende aproximadamente 50 mg/ml del antagonista de VEGF, tampón fosfato de sodio 10 mM, cloruro de sodio 50 mM, polisorbato al 0,1%, y sacarosa al 5%, pH aproximadamente 6,2-6,3.

En una realización preferida específica, la formulación oftálmica líquida estable comprende aproximadamente 50 mg/ml del antagonista de VEGF, tampón fosfato de sodio 10 mM, cloruro de sodio 50 mM, PEG al 3%, y sacarosa al 5%, pH aproximadamente 6,2-6,3.

En una realización preferida específica, la formulación oftálmica líquida estable comprende aproximadamente 40 mg/ml del antagonista de VEGF, tampón fosfato de sodio 10 mM, cloruro de sodio 40 mM, polisorbato al 0,03%, y sacarosa al 5%, pH aproximadamente 6,2-6,3.

En una realización preferida específica, la formulación oftálmica líquida estable comprende aproximadamente 40 mg/ml del antagonista de VEGF, tampón fosfato de sodio 10 mM, cloruro de sodio 135 mM, y polisorbato al 0,03%, pH aproximadamente 6,2-6,3.

En otro aspecto, se proporciona una formulación oftálmica líquida estable que comprende un antagonista de una proteína de fusión específica de VEGF de 1-100 mg/ml; uno o más co-disolventes orgánicos al 0,01-5% seleccionados entre polisorbato, polietilenglicol (PEG), y propilenglicol; 5-40 mM de tampón fosfato de sodio: y 30150 mM de uno o más agentes de tonicidad seleccionados entre cloruro de sodio y cloruro de potasio y/o 1,0-7,5% de un agente estabilizante seleccionado del grupo que consiste en sacarosa, sorbitol, glicerol, trehalosa, o manitol; teniendo un pH entre aproximadamente 5,8-7,0.

En diversas realizaciones, el antagonista de VEGF está presente a una concentración de aproximadamente 10 a aproximadamente 80 mg/ml. En diversas realizaciones, el antagonista de VEGF está presente a una concentración de aproximadamente 10, aproximadamente 20, aproximadamente 30, aproximadamente 40, aproximadamente 50, aproximadamente 60, aproximadamente 70, o aproximadamente 80 mg/ml. En una realización preferida, el antagonista de VEGF está presente a una concentración de aproximadamente 40 mg/ml.

El agente estabilizante se selecciona entre uno o más de sacarosa, sorbitol, glicerol, trehalosa, y manitol.

El co-disolvente orgánico se selecciona entre uno o más de polisorbato, por ejemplo, polisorbato 20 o polisorbato 80, polietilenglicol (PEG), por ejemplo, PEG 3350, y propilenglicol.

El tampón comprende 5-40 mM del tampón fosfato de sodio.

El agente de tonicidad es una sal seleccionada entre cloruro de sodio o cloruro de potasio, por ejemplo el agente es cloruro de sodio.

En una realización, la formulación oftálmica líquida estable comprende tampón fosfato de sodio 10 mM, polisorbato de aproximadamente 0,03 a aproximadamente 0,1% y/o PEG o propilenglicol a aproximadamente 3%, cloruro de sodio aproximadamente 40 mM, y sacarosa aproximadamente al 5%. En una realización específica, la formulación oftálmica líquida estable comprende tampón fosfato de sodio 10 mM, polisorbato aproximadamente al 0,03%, cloruro de sodio aproximadamente 40 mM, y sacarosa aproximadamente al 5%. En otra realización específica, el pH de la formulación es de aproximadamente 6,2 a aproximadamente 6,3. En otra realización específica, el pH se logra mezclando fosfato de sodio mono-y di-básico al pH deseado sin titulación ácido/base.

En una realización específica, la formulación oftálmica líquida estable consiste esencialmente en un antagonista de VEGF a 40 mg/ml, tampón fosfato de sodio 10 mM, polisorbato al 0,03%, cloruro de sodio 40 mM, y sacarosa al 5%, pH 6,2-6,3.+++

En otro aspecto, se proporciona una formulación oftálmica líquida estable que comprende un antagonista de VEGF de aproximadamente 10 a aproximadamente 80 mg/ml, tampón fosfato de sodio aproximadamente 10 mM, polisorbato aproximadamente al 0,03%, y cloruro de sodio aproximadamente 135 mM, pH de 6,2 a 6,3.

En diversas realizaciones, el antagonista de VEGF está presente a una concentración de aproximadamente 10 a aproximadamente 80 mg/ml. En diversas realizaciones, el antagonista de VEGF está presente a una concentración de aproximadamente 10, aproximadamente 20, aproximadamente 30, aproximadamente 40, aproximadamente 50, aproximadamente 60, aproximadamente 70, o aproximadamente 80 mg/ml. En una realización específica, el antagonista de VEGF está presente a una concentración de aproximadamente 40 mg/ml.

En una realización, la formulación oftálmica líquida estable comprende 40 mg/ml de un antagonista de VEGF, tampón fosfato de sodio 10 mM, polisorbato al 0,03%, y cloruro de sodio 135 mM a pH 6,2-6,3. En una realización específica, la formulación oftálmica líquida estable consiste esencialmente en 40 mg/ml de un antagonista de VEGF, tampón fosfato de sodio 10 mM, polisorbato al 0,03%, y cloruro de sodio 135 mM a pH 6,2-6,3.

En otro aspecto, se proporciona una formulación liofilizable de un antagonista de VEGF, en donde tras la liofilización seguida de reconstitución, se obtiene una formulación oftálmica líquida estable como se describe en la presente memoria.

En otro aspecto, la invención proporciona una formulación liofilizable de un antagonista del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), que comprende:

1.: (a) 5-50 mg/ml del antagonista de VEGF, preferiblemente 5 mg/ml, 10 mg/ml, 20 mg/ml o 40 mg/ml, que consiste en los aminoácidos 27-457 del SEQ ID NO: 4, que está glicosilado en los residuos de Asn 62, 94, 149, 222 y 308;

2.: (b) 5-25 mM de tampón fosfato de sodio, pH aproximadamente 5,8-7,0;

3.: (c) 0,01-0,15% de un co-disolvente orgánico, seleccionado del grupo que consiste en polisorbato, polietilenglicol (PEG), propilenglicol, y una combinación de los mismos; y

4.: (d) 1-10% de un agente estabilizante seleccionado del grupo que consiste en sacarosa, sorbitol, glicerol, trehalosa, y manitol; o 20-150 mM de un agente de tonicidad, preferiblemente cloruro de sodio; o 1-10% de agente estabilizante y 20-150 mM de agente de tonicidad,

en donde la formulación se puede reconstituir de manera que sea adecuada para la administración intravítrea. En diversas realizaciones, el antagonista de VEGF está presente a aproximadamente 5, aproximadamente 10, aproximadamente 20, aproximadamente 30, o aproximadamente 40 mg/ml. En una realización específica, la formulación oftálmica liofilizable de la invención comprende 20 mg/ml del antagonista de VEGF, tampón fosfato de sodio 10 mM, polisorbato al 0,03%, PEG al 0,1%, y sacarosa al 2,5%, pH aproximadamente 6,2-6,3. En realizaciones adicionales, la formulación liofilizable comprende adicionalmente cloruro de sodio. En una realización específica, el cloruro de sodio está presente a una concentración de aproximadamente 20 mM. En otra realización específica, el cloruro de sodio está presente a una concentración de aproximadamente 67,5 mM.

En otra realización específica, la formulación oftálmica liofilizable de la invención comprende 20 mg/ml del antagonista de VEGF, tampón fosfato de sodio 5 mM, polisorbato al 0,015%, cloruro de sodio 20 mM, y sacarosa al 2,5%, pH aproximadamente 6,2-6,3.

En otra realización, la formulación oftálmica liofilizable comprende 5 mg/ml, 10 mg/ml, o 40 mg/ml de un antagonista de VEGF, tampón fosfato de sodio 5 mM, polisorbato al 0,015%, cloruro de sodio 20 mM, y sacarosa al 2,5%, a pH 6,2-6,3. En una realización específica, la formulación oftálmica liofilizable consiste esencialmente en 5 mg/ml, 10 mg/ml, o 40 mg/ml de antagonista de VEGF, tampón fosfato de sodio 5 mM, polisorbato al 0,015%, cloruro de sodio 20 mM, y sacarosa al 2,5%, a pH 6,2-6,3.

En otra realización específica, la formulación oftálmica liofilizable comprende 20 mg/ml del antagonista de VEGF, tampón fosfato de sodio 5 mM, polisorbato al 0,015%, y cloruro de sodio 67,5 mM, pH aproximadamente 6,2-6,3. En una realización más específica, la formulación oftálmica liofilizable consiste esencialmente en 20 mg/ml del antagonista de VEGF, tampón fosfato de sodio 5 mM, polisorbato al 0,015%, y cloruro de sodio 67,5 mM, pH 6,2-6,3.

En otra realización específica, la formulación oftálmica liofilizable comprende 5 mg/ml, 10 mg/ml, o 40 mg/ml de antagonista de VEGF, tampón fosfato de sodio 5 mM, polisorbato al 0,015%, y cloruro de sodio 67,5 mM, pH aproximadamente 6,2-6,3. En una realización más específica, la formulación oftálmica liofilizable consiste esencialmente en 5 mg/ml, 10 mg/ml, o 40 mg/ml del antagonista de VEGF, tampón fosfato de sodio 5 mM, polisorbato al 0,015%, y cloruro de sodio 67,5 mM, pH aproximadamente 6,2-6,3.

Generalmente, la formulación reconstituida tiene aproximadamente 2 veces la concentración de la formulación preliofilizada, p. ej., una formulación pre-liofilizada de 20 mg proteína de fusión/ml se reconstituye hasta una formulación final de 40 mg de proteína de fusión/ml.

Generalmente, la formulación liofilizada se reconstituye con agua estéril adecuada para inyectables. En una realización, el líquido de reconstitución es agua bacteriostática.

5 En otro aspecto, la invención ofrece un método para producir una formulación liofilizada de un antagonista de una proteína de fusión específica de VEGF, que comprende someter la formulación liofilizable de la invención a liofilización para generar una formulación liofilizada. La formulación liofilizada se puede liofilizar mediante cualquier método conocido en la técnica para liofilizar un líquido.

10 En otro aspecto relacionado, la invención ofrece un método para producir una formulación liofilizada reconstituida de un antagonista de VEGF, que comprende reconstituir la formulación liofilizada de la invención hasta una formulación reconstituida. En una realización, la formulación reconstituida tiene dos veces la concentración de la formulación preliofilizada, p. ej., el método de la invención comprende: (a) producir una formulación pre-liofilizada de un antagonista de una proteína de fusión específica de VEGF, (b) someter la formulación pre-liofilizada de la etapa (a) a liofilización;

15 y (c) reconstituir la formulación liofilizada de la etapa (b).

La invención ofrece adicionalmente formulaciones oftálmicas proporcionadas en una jeringa o vial previamente cargados, particularmente adecuados para la administración intravítrea.

20 Otros objetos y ventajas se harán evidentes a partir de una revisión de la siguiente descripción detallada.

Descripción Detallada de la Invención

La presente invención no se limita a métodos concretos, y las condiciones experimentales descritas, como tales

25 métodos y condiciones pueden variar. También se entiende que la terminología utilizada en la presente memoria tiene el propósito de describir realizaciones concretas solamente, y no está destinada a limitar a menos que se indique de otro modo, puesto que el alcance de la presente invención estará limitado solamente por las reivindicaciones adjuntas.

30 A menos que se establezca de otro modo, todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente memoria tienen el mismo significado comúnmente comprendido por un experto normal en la técnica a la cual pertenece la invención. Aunque se puede utilizar cualquier método y material similar o equivalente a los descritos en la presente memoria en la práctica o ensayo de la presente invención, se describen a continuación los métodos y materiales preferidos.

Descripción General

La manipulación y administración segura de las formulaciones que comprenden proteínas representan desafíos significativos para los formuladores farmacéuticos. Las proteínas poseen propiedades químicas y físicas únicas que

40 presentan problemas de estabilidad: existe una variedad de rutas de degradación para las proteínas, que afectan tanto a la inestabilidad química como física. La inestabilidad química incluye desaminación, agregación, corte de la cadena principal peptídica, y oxidación de residuos de metionina. La inestabilidad física incluye muchos fenómenos, incluyendo, por ejemplo, agregación y/o precipitación.

45 Se puede promover la estabilidad química y física eliminando agua de la proteína. La liofilización (secado por congelación en condiciones controladas) se utiliza comúnmente para el almacenamiento de proteínas a largo plazo. La proteína liofilizada es sustancialmente resistente a la degradación, la agregación, la oxidación, y otros procesos degenerativos mientras está en estado secado por congelación. La proteína liofilizada se puede reconstituir con agua que contiene opcionalmente un conservante bacteriostático (p. ej., alcohol bencílico) antes de la

50 administración.

Definiciones

El término "portador" incluye un diluyente, coadyuvante, excipiente, o vehículo con los cuales se administra una

55 composición. Los portadores pueden incluir líquidos estériles, tales como, por ejemplo, agua y aceites, incluyendo aceites de origen petrolífero, animal, vegetal o sintético, tal como, por ejemplo, aceite de coco, aceite de soja, aceite mineral, aceite de sésamo y similares.

El término "excipiente" incluye un agente no terapéutico añadido a una composición farmacéutica para proporcionar

60 la consistencia o el efecto estabilizante deseados. Los excipientes farmacéuticos adecuados incluyen, por ejemplo, almidón, glucosa, lactosa, sacarosa, gelatina, malta, arroz, harina, tiza, gel de sílice, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, talco, cloruro de sodio, leche desnatada en polvo, glicerol, propileno, glicol, agua, etanol y similares.

El término "liofilizado" o "secado por congelación" incluye el estado de una sustancia que se ha sometido a un procedimiento de secado tal como la liofilización, donde al menos se ha eliminado un 90% de humedad.

Antagonistas de VEGF

Un antagonista de VEGF es un compuesto capaz de bloquear o inhibir la acción biológica del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), e incluye proteínas de fusión capaces de atrapar el VEGF. El antagonista de VEGF utilizado en la invención consiste en los aminoácidos 27-457 del SEQ ID NO: 4 y está glicosilado en los residuos de Asn 62, 94, 149, 222 y 308. En realizaciones específicas, el antagonista de VEGF es expresado en una línea celular de mamífero tal como una célula CHO.

El antagonista de VEGF de los métodos y formulaciones de la invención se puede preparar mediante cualquier método adecuado conocido en la técnica, o que se descubra. El antagonista de VEGF está preferiblemente sustancialmente libre de proteínas contaminantes en el momento en el que se utiliza para preparar la formulación farmacéuticamente aceptable. Por "sustancialmente libre de proteínas contaminantes" se quiere significar, preferiblemente, que al menos el 90% del peso de proteína de la preparación del antagonista de una proteína de fusión específica de VEGF utilizada para elaborar una formulación es un antagonista de una proteína de fusión de VEGF, más preferiblemente al menos el 95%, muy preferiblemente al menos el 99%. La proteína de fusión está preferiblemente sustancialmente libre de agregados. "Sustancialmente libre de agregados" significa que al menos el 90% del peso de la proteína de fusión no está presente en un agregado en el momento en el que se utiliza la proteína de fusión para preparar la formulación farmacéuticamente eficaz. A menos que se establezca de otro modo, los fosfatos empleados son fosfatos de sodio y se logra un pH de tamponamiento deseado mezclando cantidades apropiadas de fosfato de sodio mono-y di-básico.

Formulaciones Oftálmicas Líquidas Estables

En un aspecto, la invención proporciona una formulación farmacéuticamente aceptable estable que comprende un antagonista de VEGF, en donde la formulación es una formulación líquida adecuada para uso oftálmico. Preferiblemente, la formulación líquida comprende una cantidad farmacéuticamente eficaz del antagonista de VEGF. La formulación también puede comprender uno o más portadores, tampones, agentes de tonicidad, estabilizadores, y/o excipientes farmacéuticamente aceptables. Un ejemplo de una formulación líquida farmacéuticamente aceptable comprende un antagonista de VEGF en una cantidad farmacéuticamente eficaz, un tampón, un co-disolvente orgánico tal como polisorbato, un agente de tonicidad tal como NaCl, y un estabilizador tal como sacarosa o trehalosa.

Por consiguiente, la invención proporciona una formulación oftálmica de un antagonista del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), que comprende:

1.: (a) 1-100 mg/ml de un antagonista de VEGF que consiste en los aminoácidos 27-457 del SEQ ID NO: 4, que está glicosilado en los residuos de Asn 62, 94, 149, 222 y 308;

2.: (b) 0,01-5% de uno o más co-disolventes orgánicos que son uno o más de polisorbato, polietilenglicol (PEG), y propilenglicol;

3.: (c) 30-150 mM de un agente de tonicidad seleccionado entre cloruro de sodio o cloruro de potasio;

4.: (d) 5-40 mM de tampón fosfato de sodio; y

La estabilidad se determina de numerosas maneras en momentos especificados, incluyendo determinación del pH, inspección visual del color y la apariencia, determinación del contenido de proteína total mediante métodos conocidos en la técnica, p. ej., espectroscopía de UV, y la pureza se determina, por ejemplo, mediante SDS-PAGE, HPLC de exclusión por tamaños, determinación de la actividad mediante bioanálisis, isoelectroenfoque, y cuantificación de isoaspartato. En un ejemplo de bioanálisis útil para determinar la actividad antagónica de VEGF, se utiliza una línea celular a BAF/3 VEGFR1/EPOR para determinar la unión a VEGF165 del antagonista de VEGF de la invención.

Las formulaciones líquidas se pueden almacenar en un entorno privado de oxígeno. Se pueden generar entornos privados de oxígeno almacenando las formulaciones en un gas inerte tal como, por ejemplo, nitrógeno o argon. Las formulaciones líquidas se almacenan preferiblemente a aproximadamente 5°C.

Formulaciones Liofilizadas Oftálmicas

En un aspecto de la invención, se proporciona una formulación oftálmicamente aceptable que comprende un antagonista de VEGF, en donde la formulación es una formulación liofilizable. Las formulaciones liofilizables se pueden reconstituir en disoluciones, suspensiones, emulsiones, o cualquier otra forma adecuada para su administración o uso. Las formulaciones liofilizables se preparan típicamente primero en forma de líquidos, después se congelan y liofilizan. El volumen líquido total antes de la liofilización puede ser menor, igual, o mayor que el volumen final reconstituido de la formulación liofilizada. El proceso de liofilización es bien conocido por los expertos normales en la técnica, e incluye típicamente la sublimación del agua de una formulación congelada en condiciones

5 controladas.

Por consiguiente, la invención proporciona una formulación liofilizable de un antagonista del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), que comprende:

1. (a) 5-50 mg/ml del antagonista de VEGF, preferiblemente 5 mg/ml, 10 mg/ml, 20 mg/ml o 40 mg/ml, que

10 consiste en los aminoácidos 27-457 del SEQ ID NO: 4, que está glicosilado en los residuos de Asn 62, 94, 149, 222 y 308;

2.: (b) 5-25 mM de tampón fosfato de sodio, pH aproximadamente 5,8-7,0;

15 4. (d) 1-10% de un agente estabilizante seleccionado del grupo que consiste en sacarosa, sorbitol, glicerol, trehalosa, y manitol; o 20-150 mM de un agente de tonicidad, preferiblemente cloruro de sodio; o 1-10% del agente estabilizante y 20-150 mM del agente de tonicidad, en donde la formulación puede ser reconstituida de modo que sea adecuada para la administración intravítrea.

20 Las formulaciones liofilizadas se pueden almacenar a un amplio intervalo de temperaturas. Las formulaciones liofilizadas se pueden almacenar por debajo de 25°C, por ejemplo, refrigeradas a 2-8°C, o a la temperatura ambiente

(p. ej., aproximadamente 25°C). Preferiblemente, las formulaciones liofilizadas se almacenan por debajo de aproximadamente 25°C, más preferiblemente, a aproximadamente 4-20°C; por debajo de aproximadamente 4°C; por debajo de aproximadamente -20°C; aproximadamente -40°C; aproximadamente -70°C, o aproximadamente

25 -80°C. La estabilidad de la formulación liofilizada se puede determinar de numerosas maneras conocidas en la técnica, por ejemplo, mediante la apariencia visual de la torta y/o mediante el contenido de humedad.

Las formulaciones liofilizadas se reconstituyen típicamente para su uso mediante la adición de una disolución acuosa para disolver la formulación liofilizada. Se puede utilizar una amplia variedad de disoluciones acuosas para

30 reconstituir una formulación liofilizada. Preferiblemente, las formulaciones liofilizadas se reconstituyen utilizando agua. Las formulaciones liofilizadas se reconstituyen preferiblemente con una disolución que consiste esencialmente en agua (p. ej., USP WFI, o agua para inyectables) o agua bacteriostática (p. ej., USP WFI con alcohol bencílico al 0,9%). Sin embargo, también se pueden utilizar disoluciones que comprenden tampones y/o excipientes y/o uno o más portadores farmacéuticamente aceptables.

35 Las formulaciones secadas por congelación o liofilizadas se preparan típicamente a partir de líquidos, esto es, a partir de disoluciones, suspensiones, emulsiones, y similares. De este modo, el líquido que va a experimentar el secado por congelación o la liofilización comprende preferiblemente todos los componentes deseados en una formulación líquida reconstituida final. Como resultado, cuando se reconstituya una formulación secada por

40 congelación o liofilizada dará una formulación líquida deseada tras la reconstitución.

Ejemplos

Antes de describir los presentes métodos, se debe entender que esta invención no se limita a métodos concretos, y

45 que las condiciones experimentales descritas, tales como los métodos y las condiciones pueden variar. También se debe entender que la terminología utilizada en la presente memoria tiene el propósito de describir solamente reacciones concretas, y no se pretende que sea limitante, puesto que el alcance de la presente invención solamente estará limitado por las reivindicaciones adjuntas.

50 A menos que se definan de otro modo, todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente memoria tienen el mismo significado comúnmente comprendido por un experto en la técnica a la cual pertenece esta invención. Aunque se puede utilizar cualquier método y material similar o equivalente a los descritos en la presente memoria en la práctica o ensayo de la presente invención, se descrien a continuación los métodos y materiales preferidos.

55 Ejemplo 1. Estabilidad de Formulación Líquida de Trampa de VEGF de 50 mg/ml Almacenada a 5°C en Viales de Vidrio de 3 ml.

Se almacenó una formulación líquida oftálmica que contenía Trampa de VEGF de 50 mg/ml (SEQ ID NO: 4), fosfato

60 10 mM, NaCl 50 mM, polisorbato 20 al 0,1%, sacarosa al 5%, y pH 6,25, a 5°C en viales de vidrio de 3 ml y se sometieron a ensayo las muestras a los 3, 6, 9, 12, 18 y 24 meses. Se determinó la estabilidad mediante SE-HPLC. Los resultados se muestran en la Tabla 1. Se midió la turbidez a una DO405 nm; y el porcentaje de proteína recuperada y la pureza mediante HPLC de exclusión por tamaños.

Tabla 1. Estabilidad de Proteína de Trampa de VEGF de 50 mg/ml (VGFT-SS065)

Meses: Apariencia Visual Turbidez (DO405 nm) pH % de Trampa de VEGF Recuperada % de Trampa de VEGF en Configuración Nativa

0: Pasa 0,00 6,2 100 98,8

3: Pasa 0,00 6,2 101 98,7

6: Pasa 0,01 6,3 100 98,3

9: Pasa 0,01 6,3 101 98,3

12: Pasa 0,01 6,3 104 98,4

18: Pasa 0,01 6,3 96 98,1

24: Pasa 0,01 6,3 105 98,1

Ejemplo 2. Estabilidad de Formulación Líquida de Trampa de VEGF de 50 mg/ml Almacenada a 6°C en Viales de Vidrio de 3 ml.

5 Se almacenó una formulación líquida que contenía Trampa de VEGF de 50 mg/ml (SEQ ID NO: 4), fosfato 10 mM, NaCl 50 mM, polietilenglicol 3350 al 3%, sacarosa al 5%, y pH 6,25, a 5°C en viales de vidrio de 3 ml y se sometieron a ensayo las muestras a los 3, 6, 9, 12, 18 y 24 meses. Los resultados de estabilidad se muestran en la Tabla 2. Se determinaron la turbidez, el porcentaje de proteína recuperada y la pureza como se ha descrito

10 anteriormente.

Tabla 2. Estabilidad de Proteína de Trampa de VEGF de 50 mg/ml (VGFT-SS065)

Meses: Apariencia Visual Turbidez pH % de Trampa de VEGF Recuperada % de Trampa de VEGF en Configuración Nativa

0: Pasa 0,00 6,2 100 98,9

3: Pasa 0,00 6,1 104 98,5

6: Pasa 0,01 6,3 99 98,3

9: Pasa 0,00 6,3 102 97,6

12: Pasa 0,01 6,3 103 98,0

18: Pasa 0,00 6,3 113 97,7

24: Pasa 0,00 6,2 106 97,6

Ejemplo 3. Estabilidad de Formulación Líquida de Trampa de VEGF de 40 mg/ml Almacenada a 5°C en Viales 15 de Vidrio de 3 ml.

Se almacenó una formulación líquida que contenía Trampa de VEGF de 40 mg/ml (SEQ ID NO: 4), fosfato 10 mM, NaCl 40 mM, polisorbato 20 al 0,03%, sacarosa al 5%, y pH 6,3, a 5°C en viales de vidrio de 3 ml y se sometieron a ensayo las muestras a los 0,5, 1, 2, 3, y 4 meses. Los resultados de estabilidad se muestran en la Tabla 3. Se

20 determinaron la turbidez, el porcentaje de proteína recuperada y la pureza como se ha descrito anteriormente.

Tabla 3. Estabilidad de Proteína de Trampa de VEGF de 40 mg/ml (VGFT-SS207) Ejemplo 4. Estabilidad de Formulación Líquida de Trampa de VEGF de 40 mg/ml Almacenada a 5°C en una jeringa de Vidrio Pre-cargada.

0: Pasa 0,00 6,3 100 99,5

0,5: Pasa 0,00 6,3 99 99,4

1: Pasa 0,00 6,2 98 99,5

2: Pasa 0,00 6,2 95 99,2

3: Pasa 0,01 6,4

4: Pasa 0,01 6,3

Se almacenó una formulación líquida que contenía Trampa de VEGF de 40 mg/ml (SEQ ID NO: 4), fosfato 10 mM,

5 NaCl 40 mM, polisorbato 20 al 0,03%, sacarosa al 5%, y pH 6,3, a 5°C en una jeringa de vidrio tipo Luer pre-cargada con un émbolo recubierto con FluroTec 4023/50 y se sometieron a ensayo las muestras a los 0,5, 1, 2, 3, y 4 meses. Los resultados de estabilidad se muestran en la Tabla 4. Se determinaron la turbidez, el porcentaje de proteína recuperada y la pureza como se ha descrito anteriormente.

10 Tabla 4. Estabilidad de Proteína de Trampa de VEGF de 40 mg/ml (VGFT-SS207)

0: Pasa 0,00 6,3 100 99,4

0,5: Pasa 0,00 6,3 100 99,3

1: Pasa 0,00 6,3 100 99,4

2: Pasa 0,00 6,3 97 99,1

3: Pasa 0,01 6,4

4: Pasa 0,01 6,3

Ejemplo 5. Estabilidad de Formulación Líquida de Trampa de VEGF de 40 mg/ml Almacenada a 5°C en Viales de Vidrio de 3 ml.

15 Se almacenó una formulación líquida que contenía Trampa de VEGF de 40 mg/ml (SEQ ID NO: 4), fosfato 10 mM, NaCl 135 mM, polisorbato 20 al 0,03%, y pH 6,3, a 5°C en viales de vidrio de 3 ml y se sometieron a ensayo las muestras a los 0,5, 1, 2, 3, y 4 meses. Los resultados de estabilidad se muestran en la Tabla 5. Se determinaron la turbidez, el porcentaje de proteína recuperada y la pureza como se ha descrito anteriormente.

20 Tabla 5. Estabilidad de Proteína de Trampa de VEGF de 40 mg/ml (VGFT-SS203)

0: Pasa 0,00 6,3 100 99,3

0,5: Pasa 0,00 6,2 87 99,2

1: Pasa 0,00 6,2 88 99,1

2: Pasa 0,00 6,3 103 99,2

3: Pasa 0,00 6,3 88 99,0

4: Pasa 0,00 6,2 85 98,9

5: Pasa 0,00 6,3 84 99,0

Ejemplo 6. Estabilidad de Formulación Líquida de Trampa de VEGF de 40 mg/ml Almacenada a 5°C en una Jeringa de Vidrio Pre-cargada de 1 ml.

25 Se almacenó una formulación líquida que contenía Trampa de VEGF de 40 mg/ml (SEQ ID NO: 4), fosfato 10 mM, NaCl 135 mM, polisorbato 20 al 0,03%, y pH 6,3, a 5°C en una jeringa de tipo Luer de vidrio precargada de 1 ml con un émbolo recubierto con FluroTec 4023/50 y se sometieron a ensayo las muestras a los 0,5, 1, 2, 3, y 4 meses. Los resultados de estabilidad se muestran en la Tabla 6. Se determinaron la turbidez, el porcentaje de proteína recuperada y la pureza como se ha descrito anteriormente.

Tabla 6. Estabilidad de Proteína de Trampa de VEGF de 40 mg/ml (VGFT-SS203)

0: Pasa 0,00 6,3 100 99,2

0,5: Pasa 0,01 6,3 101 99,2

1: Pasa 0,00 6,3 101 99,2

2: Pasa 0,00 6,3 - -

3: Pasa 0,01 6,3 102 99,1

4: Pasa 0,01 6,3 103 98,8

5: Pasa 0,00 6,3 99 98,9

Ejemplo 7. Estabilidad de Formulación de Trampa de VEGF de 20 mg/ml Liofilizada Almacenada a 5° C en Viales de Vidrio de 3 ml y Reconstituida hasta 40 mg/ml.

5 Se liofilizaron 0,8 ml de una formulación líquida que contenía trampa de VEGF de 20 mg/ml (SEQ ID NO: 4), fosfato 5 mM, NaCl 20 mM, polisorbato 20 al 0,015%, sacarosa al 2,5%, y pH 6,3, en viales de vidrio de 3 ml. Las muestras se almacenaron a 5°C y se sometieron a ensayo a los 1, y 2 meses. La trampa de VEGF se reconstituyó a una concentración final de trampa de VEGF de 40 mg/ml (volumen final de 0,4 ml). Los resultados de estabilidad se

10 muestran en la Tabla 7 (t = tiempo en meses; * = apariencia visual; ** = tiempo de reconstitución). Se determinaron la turbidez, el porcentaje de proteína recuperada y la pureza como se ha descrito anteriormente.

Tabla 7. Estabilidad de Proteína de Trampa de VEGF de 20 mg/ml Liofilizada (VGFT-SS216)

t: Ap.* Vis.* Tiempo de Recons.** (min) Ap. Vis.* Líquido Reconstituido Turbidez pH % de Trampa de VEGF Recuperada % Trampa de VEGF en Configuración Nativa

0: Pasa 0,6 Pasa 0,00 6,3 100 99,5

1: Pasa 0,6 Pasa 0,01 6,3 106 99,4

2: Pasa 0,4 Pasa 0,01 6,2 103 99,3

15 Ejemplo 8. Estabilidad de Formulación de Trampa de VEGF de 20 mg/ml Liofilizada Almacenada a 5°C en Viales de Vidrio de 3 ml.

Se liofilizaron 0,8 ml de una formulación líquida que contenía trampa de VEGF de 20 mg/ml (SEQ ID NO: 4), fosfato 5 mM, NaCl 67,5 mM, polisorbato 20 al 0,015%, y pH 6,3, en viales de vidrio de 3 ml. Las muestras se almacenaron

20 a 5°C y se sometieron a ensayo a los 1, 2, y 3 meses. La trampa de VEGF se reconstituyó a una concentración final de trampa de VEGF de 40 mg/ml (volumen final de 0,4 ml). Los resultados de estabilidad se muestran en la Tabla 8 (t = tiempo en meses; * = apariencia visual; ** = tiempo de reconstitución).

Tabla 8. Estabilidad de Proteína de Trampa de VEGF de 20 mg/ml Liofilizada (VGFT-SS216)

t: Ap. Vis.* Tiempo de Recons.** (min) Ap. Vis. Líquido Reconstituido Turbidez pH % de Trampa de VEGF Recuperada % Trampa de VEGF en Configuración Nativa

0: Pasa 0,7 Pasa 0,00 6,3 100 99,0

1: Pasa 0,7 Pasa 0,01 6,2 105 98,9

2: Pasa 0,4 Pasa 0,01 6,2 103 98,9

Aspectos Comparativos de la Descripción

Los aspectos comparativos de la descripción son los siguientes. 30 (1) una formulación oftálmica de un antagonista del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), que comprende 10

(a) 1-100 mg/ml de un antagonista de VEGF que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 4;

(b) 0,01-5% de uno o más co-disolventes orgánicos que son uno o más de polisorbato, polietilenglicol (PEG), y propilenglicol;

5 (c) 30-150 mM de un agente de tonicidad seleccionado entre cloruro de sodio o cloruro de potasio; y,

(d) 5-40 mM de tampón fosfato de sodio; y que comprende opcionalmente de manera adicional 1,07,5% de un agente estabilizante seleccionado del grupo que consiste en sacarosa, sorbitol, glicerol, trehalosa, o manitol, pH entre aproximadamente 5,8-7,0.

10 (2) Una formulación oftálmica de acuerdo con el apartado (1), que comprende aproximadamente 1-100 mg/ml, preferiblemente 10-80 mg/ml, del antagonista de VEGF, tampón fosfato de sodio 10 mM, NaCl 40 mM, polisorbato al 0,03%, y sacarosa al 5%, pH aproximadamente 6,2-6,3.

(3) Una formulación oftálmica de acuerdo con el apartado (2), que comprende un antagonista de VEGF a una concentración seleccionada del grupo que consiste en 10 mg/ml, 20 mg/ml, 40 mg/ml, y 80 mg/ml.

15 (4) Una formulación oftálmica de acuerdo con uno cualquiera de los apartados (1) a (3), que comprende 1080 mg/ml de antagonista de VEGF, fosfato de sodio 10 mM, polisorbato al 0,03%, y cloruro de sodio 135 mM, pH aproximadamente 6,2-6,3.

(5) Una formulación liofilizable de un antagonista del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), que comprende

20 (a) 5-50 mg/ml del antagonista de VEGF, preferiblemente 5 mg/ml, 10 mg/ml, 20 mg/ml o 40 mg/ml que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 4;

(b) 5-25 mM de tampón fosfato de sodio, pH aproximadamente 5,8-7,0;

(c) 0,01-0,15% de un co-disolvente orgánico, seleccionado del grupo que consiste en polisorbato, polietilenglicol (PEG), propilenglicol, y una combinación de los mismos; y, opcionalmente

25 (d) 1-10% de un agente seleccionado del grupo que consiste en sacarosa, sorbitol, glicerol, trehalosa, y manitol; o 20-150 mM de un agente de tonicidad, preferiblemente cloruro de sodio; o 1 -10% del agente estabilizante y 20-150 mM del agente de tonicidad.

(6) Una formulación liofilizable de acuerdo con el apartado (5), que comprende aproximadamente 20 mg/ml

del antagonista de VEGF, tampón fosfato de sodio aproximadamente 10 mM, polisorbato aproximadamente al 30 0,03%, PEG aproximadamente al 0,1%, y sacarosa aproximadamente al 2,5%, pH aproximadamente 6,2-6,3.

(7) Una formulación liofilizable de acuerdo con el apartado (5), que comprende aproximadamente 20 mg/ml del antagonista de VEGF, tampón fosfato de sodio aproximadamente 5 mM, polisorbato aproximadamente al 0,015%, sacarosa aproximadamente al 2,5%, y que comprende adicionalmente cloruro de sodio aproximadamente 20 mM, pH aproximadamente 6,2-6,3.

35 (8) Una formulación liofilizable de acuerdo con el apartado (6), que comprende aproximadamente 20 mg/ml del antagonista de VEGF, tampón fosfato de sodio aproximadamente 5 mM, polisorbato aproximadamente al 0,015%, y que comprende adicionalmente cloruro de sodio aproximadamente 67,5 mM, pH aproximadamente 6,26,3.

(9) Un método para producir una formulación liofilizada de un antagonista de VEGF, que comprende

40 someter la formulación pre-liofilizada de acuerdo con los apartados (5) a (8) a liofilización para generar una formulación liofilizada.

(10) Una jeringa pre-cargada adecuada para la administración intravítrea que comprende la formulación del apartado (1).

LISTA DE SECUENCIAS

<110> Regeneron Pharmaceuticals, Inc.

5: <120> Formulaciones Antagonistas de VEGF Adecuadas para la Administración Intravítrea

<130> 5050A-WO

10: <140> Pendiente de cesión <141> 2007-06-14

<150> 60/814,484 <151> 2006-06-16

15: <160> 4

<170> FastSEQ para Windows Versión 4.0

20: <210> 1 <211> 1453 <212> ADN <213> Secuencia Artificial

25: <220> <223> Sintética

<400>: 1

30 35: <210> 2 <211> 458 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220>

<223> Sintética

40: <400> 2

<210> 3 5 <211> 1377

<212> ADN

<213> Secuencia Artificial

<220> 10

<223> Sintética

<400> 3 <210> 4

<213> Secuencia Artificial

<220>

<223> Sintética 10

<400> 4

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una formulación oftálmica de un antagonista del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), que comprende:

(a)

1-100 mg/ml de un antagonista de VEGF que consiste en los aminoácidos 27-457 del SEQ ID NO: 4, que está glicosilado en los residuos de Asn 62, 94, 149, 222 y 308;

(b)

0,01-5%de uno o más co-disolventes orgánicos que son uno o más de polisorbato, polietilenglicol (PEG), y propilenglicol;

(c)

30-150 mM de un agente de tonicidad seleccionado entre cloruro de sodio o cloruro de potasio;

(d)

5-40 mM de tampón fosfato de sodio; y

(e)

1,0-7,5% de un agente estabilizante seleccionado del grupo que consiste en sacarosa, sorbitol, glicerol, trehalosa, y manitol, pH entre aproximadamente 5,8-7,0, en donde la formulación es adecuada para la administración intravítrea.
2.

Una formulación oftálmica de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende aproximadamente 1-100 mg/ml, preferiblemente 10-80 mg/ml, del antagonista de VEGF, tampón fosfato de sodio 10 mM, NaCl 40 mM, polisorbato al 0,03%, y sacarosa al 5%, pH aproximadamente 6,2-6,3.
3.

Una formulación oftálmica de acuerdo con la reivindicación 2, que comprende antagonista de VEGF a una concentración seleccionada del grupo que consiste en 10 mg/ml, 20 mg/ml, 40 mg/ml, y 80 mg/ml.
4.

Una formulación oftálmica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende 1080 mg/ml de un antagonista de VEGF, fosfato de sodio 10 mM, polisorbato al 0,03%, y cloruro de sodio 135 mM, pH aproximadamente 6,2-6,3.
5.

Una formulación oftálmica de acuerdo con la reivindicación 1 que comprende:

(a)

10 mg/ml o 40 mg/ml de un antagonista de VEGF que consiste en los aminoácidos 27-457 del SEQ ID NO: 4, que está glicosilado en los residuos de Asn 62, 94, 149, 222 y 308;

(b)

polisorbato 20 al 0,03%;

(c)

cloruro de sodio aproximadamente 40 mM;

(d)

tampón fosfato de sodio 10 mM; y

(e)

sacarosa al 5%, en donde el pH de la formulación es el pH 6,2-6,3.
6. Una formulación liofilizable de un antagonista del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), que comprende

(a)

5-50 mg/ml del antagonista de VEGF, preferiblemente 5 mg/ml, 10 mg/ml, 20 mg/ml o 40 mg/ml, que consiste en los aminoácidos 27-457 del SEQ ID NO: 4, que está glicosilado en los residuos de Asn 62, 94, 149, 222 y 308;

(b)

5-25 mM de tampón fosfato de sodio, pH aproximadamente 5,8-7,0;

(c)

0,01-0,15% de un co-disolvente orgánico, seleccionado del grupo que consiste en polisorbato, polietilenglicol (PEG), propilenglicol, y una combinación de los mismos; y

(d)

1-10% de un agente estabilizante seleccionado del grupo que consiste en sacarosa, sorbitol, glicerol, trehalosa, y manitol; 20-150 mM de un agente de tonicidad, preferiblemente cloruro de sodio; o 1-10% de agente estabilizante y 20-150 mM de agente de tonicidad, en donde la formulación puede ser reconstituida de manera que sea adecuada para la administración intravítrea.
7.

Una formulación liofilizable de acuerdo con la reivindicación 6, que comprende aproximadamente 20 mg/ml de antagonista de VEGF, tampón fosfato de sodio aproximadamente 10 mM, polisorbato aproximadamente al 0,03%, PEG aproximadamente al 0,1%, y sacarosa aproximadamente al 2,5%, pH aproximadamente 6,2-6,3.
8.

Una formulación liofilizable de acuerdo con la reivindicación 6, que comprende aproximadamente 20 mg/ml de antagonista de VEGF, tampón fosfato de sodio aproximadamente 5 mM, polisorbato aproximadamente al 0,015%, sacarosa aproximadamente al 2,5%, y que comprende adicionalmente cloruro de sodio aproximadamente 20 mM, pH aproximadamente 6,2-6,3.
9.

Una formulación liofilizable de acuerdo con la reivindicación 7, que comprende aproximadamente 20 mg/ml de antagonista de VEGF, tampón fosfato de sodio aproximadamente 5 mM, polisorbato aproximadamente al 0,015%, y que comprende adicionalmente cloruro de sodio aproximadamente 67,5 mM, pH aproximadamente 6,2-6,3.
10.

Un método para producir una formulación liofilizada de un antagonista de VEGF, que comprende someter la formulación pre-liofilizada de acuerdo con la reivindicación 6 a 9 a liofilización para generar una formulación liofilizada.
11.

Una jeringa pre-cargada adecuada para la administración intravítrea que comprende la formulación de una

cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.