JP2023535985A - 安定した薬剤学的製剤 - Google Patents

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Abstract

本発明による安定した薬剤学的製剤は、組換え融合タンパク質；界面活性剤；糖またはその誘導体；および緩衝剤を含む。本発明による安定した薬剤学的製剤は、組換え融合タンパク質を含みかつ、低い粘度を有し、長期保管条件、加速条件および苛酷条件で優れた安定性を維持し、眼内投与可能である。

Description

本発明は、血管内皮成長因子（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ、ＶＥＧＦ）を抑制可能な薬剤を安定して保存することができ、眼内（ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ）投与可能な薬学調製物に関する。
血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）の放出は、眼の増加した血管透過性および不適切な新しい血管成長に寄与するので、新生血管性（濕性）加齢黄斑変性、網膜静脈閉塞性（網膜中心静脈閉塞または網膜分枝静脈閉塞）黄斑浮腫による視力損傷、糖尿病性黄斑浮腫による視力損傷、そして病的近視による脈絡膜の新生血管形成による視力損傷を引き起こすことがある。したがって、ＶＥＧＦを抑制することは、血管新生に関わる眼科疾患を治療するための効果的な方法である。
ＶＥＧＦ抑制薬剤の成分名はアフリベルセプト（Ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ）であり、Ｔｙｐｅ ＡとＴｙｐｅ Ｂ ＶＥＧＦおよびＰＩＧＦ（Ｐｌａｃｅｎｔａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）を抑制させることができる組換え融合タンパク質の一種である。この薬剤を含む薬剤学的製剤は眼球内注射で投与されなければならず、資格を持った眼内投与経験がある医師によって直接行われなければならない。
ＶＥＧＦ抑制薬剤を長期保管するために、安定化剤として、ヒスチジン、トレハロース、ポリソルベート２０を含む製剤を開発し、投与時の苦痛を低減するための目的で眼球内部と類似の浸透圧を有するように、等張化剤として、塩化ナトリウムを追加した。しかし、等張化剤の塩化ナトリウムが存在する時、薬剤の安定性が減少することを確認し、これを改善するために、塩化ナトリウムの濃度は適正な浸透圧を維持できる濃度で適用した。
本発明の製剤は、韓国公開特許公報第１０－２００９－００１８８０７号のアフリベルセプト液状製剤より薬剤の安定化の面で改良された結果を導出し、実験例により改良した水準を直接的に比較評価した（実験例１）。
したがって、本発明の製剤であるＶＥＧＦ抑制薬剤のアフリベルセプトを含む安定した薬剤学的製剤の優秀性を最終的に確認した。
そこで、本発明が解決しようとする課題は、ＶＥＧＦ抑制薬剤のアフリベルセプトを含みかつ、長期保管に安定した薬剤学的製剤を提供することである。
また、本発明が解決しようとする他の課題は、加速条件および苛酷条件での優れた安定性に基づいて長期間保管安定性に優れた薬剤学的製剤を提供することである。
さらに、本発明が解決しようとする他の課題は、眼内投与可能な安定した薬剤学的製剤を提供することである。
本発明の一実施形態による安定した薬剤学的製剤は、（Ａ）組換え融合タンパク質、（Ｂ）界面活性剤、（Ｃ）糖またはその誘導体、および（Ｄ）緩衝剤を含む。
本発明の一実施形態において、前記薬剤学的製剤は、液状であってもよい。
本発明の一実施形態において、（Ａ）組換え融合タンパク質は、ＶＥＧＦ（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）拮抗剤を含むことがで
きる。
本発明の一実施形態において、（Ａ）組換え融合タンパク質は、ヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域を含むことができる。
本発明の一実施形態において、（Ａ）組換え融合タンパク質は、ヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１、２、またはこれらの混合物を含むことができる。
本発明の一実施形態において、（Ａ）組換え融合タンパク質は、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）のＦｃ部位、好ましくは、ヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）のＦｃ部位を含むことができる。
本発明の一実施形態において、（Ａ）組換え融合タンパク質は、（１）配列番号２のアミノ酸２７～１２９を含むＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１要素、（２）配列番号２のアミノ酸１３０～２３１を含むＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２要素、および（３）配列番号２のアミノ酸２３２～４５７を含むＦｃ部位要素を含むことができる。配列番号２のアミノ酸は、配列番号１のポリヌクレオチドに暗号化される。
本発明の一実施形態において、（Ａ）組換え融合タンパク質は、アフリベルセプト（Ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ）を含むことができる。
本発明の一実施形態において、（Ａ）組換え融合タンパク質の濃度は、５～１００ｍｇ／ｍｌであってもよい。
本発明の一実施形態において、（Ｂ）界面活性剤は、ポリソルベート、ポロキサマー、またはこれらの混合物を含むことができる。
本発明の一実施形態において、（Ｂ）界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、またはこれらの２以上の混合物を含むことができる。
本発明の一実施形態において、（Ｂ）界面活性剤は、ポリソルベート２０を含むことができる。
本発明の一実施形態において、（Ｂ）界面活性剤の濃度は、０．０１～０．１％（ｗ／ｖ）であってもよい。
本発明の一実施形態において、（Ｃ）糖は、単糖類、二糖類、オリゴ糖、多糖類、またはこれらの２以上の混合物を含み、（Ｃ）糖の誘導体は、糖アルコール、糖酸、またはこれらの混合物を含むことができる。
本発明の一実施形態において、（Ｃ）糖またはその誘導体は、ソルビトール、マンニトール、トレハロース、スクロース、またはこれらの２以上の混合物を含むことができる。
本発明の一実施形態において、（Ｃ）糖またはその誘導体は、トレハロースを含むことができる。
本発明の一実施形態において、（Ｃ）糖またはその誘導体の濃度は、１～２０％（ｗ／ｖ）であってもよい。
本発明の一実施形態において、（Ｄ）緩衝剤は、アミノ酸を含むことができる。
本発明の一実施形態において、（Ｄ）緩衝剤は、遊離アミノ酸、アミノ酸塩、またはこれらの混合物を含むことができる。
本発明の一実施形態において、（Ｄ）緩衝剤は、ヒスチジン、ヒスチジン塩、またはこれらの混合物を含むことができる。
本発明の一実施形態において、（Ｄ）緩衝剤の含有量は、１～２０ｍＭであってもよい。
本発明の一実施形態において、本発明の安定した薬剤学的製剤は、酢酸、クエン酸、リン酸、またはこれらの混合物を含まなくてもよい。
本発明の一実施形態において、本発明の安定した薬剤学的製剤は、（Ｅ）等張化剤を追
加的に含むことができる。
本発明の一実施形態において、（Ｅ）等張化剤は、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、塩化カリウム（ＫＣｌ）、塩化カルシウム（ＣａＣｌ）、またはこれらの２以上の混合物を含むことができる。
本発明の一実施形態において、（Ｅ）等張化剤の含有量は、３０ｍＭ以下であってもよい。
本発明の一実施形態において、本発明の製剤は、ｐＨが５．０～７．０であってもよい。
本発明の一実施形態において、本発明の製剤は、ＮａＦ、ＫＢｒ、ＮａＢｒ、Ｎａ２ＳＯ４、ＮａＳＣＮ、Ｋ２ＳＯ４、またはこれらの混合物を含まないものであってもよい。
本発明の一実施形態において、本発明の製剤は、キレート剤を含まないものであってもよい。
本発明の一実施形態による安定した薬剤学的製剤は、（Ａ）（１）配列番号２のアミノ酸２７～１２９を含むＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１要素、（２）配列番号２のアミノ酸１３０～２３１を含むＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２要素、および（３）配列番号２のアミノ酸２３２～４５７を含むＦｃ部位要素を含む組換え融合タンパク質５～１００ｍｇ／ｍｌ、（Ｂ）界面活性剤０．０１～０．１％（ｗ／ｖ）、（Ｃ）糖またはその誘導体１～２０％（ｗ／ｖ）、（Ｄ）緩衝剤１～２０ｍＭ、および（Ｅ）等張化剤３０ｍＭ以下を含むことができる。配列番号２のアミノ酸は、配列番号１のポリヌクレオチドに暗号化される。
本発明の一実施形態による安定した薬剤学的製剤は、（Ａ）ＶＥＧＦ（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）拮抗剤；（Ｂ）ポリソルベート；（Ｃ）糖またはその誘導体；および（Ｄ）ヒスチジンを含むことができる。
本発明の一実施形態による安定した薬剤学的製剤は、（Ｅ）塩化ナトリウムを追加的に含むことができる。
本発明の一実施形態による安定した薬剤学的製剤は、（Ａ）（１）配列番号２のアミノ酸２７～１２９を含むＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１要素、（２）配列番号２のアミノ酸１３０～２３１を含むＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２要素、および（３）配列番号２のアミノ酸２３２～４５７を含むＦｃ部位要素を含む組換え融合タンパク質５～１００ｍｇ／ｍｌ；（Ｂ）ポリソルベート０．０１～０．１％（ｗ／ｖ）；（Ｃ）糖またはその誘導体１～２０％（ｗ／ｖ）；および（Ｄ）ヒスチジン１～２０ｍＭを含むことができる。
本発明の一実施形態による安定した薬剤学的製剤は、（Ｅ）塩化ナトリウム３０ｍＭ以下を追加的に含むことができる。
本発明の一実施形態において、前記安定した薬剤学的製剤は、５±３℃９ヶ月保管時、ＨＩＡＣで測定した、１０．００μｍ以上４００．００μｍ未満の不溶性異物粒子の数が５０個以下であってもよい。
本発明の一実施形態において、前記安定した薬剤学的製剤は、５±３℃保管１０日後、９８％以上の主成分の含有量を示すことができる。
本発明の一実施形態において、前記安定した薬剤学的製剤は、５±３℃保管１０日後、
１％以下の高分子量成分の含有量を示すことができる。
本発明の一実施形態において、前記安定した薬剤学的製剤は、５±３℃保管１０日後、０．０５％以下の低分子量成分の含有量を示すことができる。
本発明の一実施形態において、前記安定した薬剤学的製剤は、５±３℃９ヶ月保管時、８７％以上の電荷変形体の含有量を示すことができる。
本発明の一実施形態において、前記安定した薬剤学的製剤は、５±３℃９ヶ月保管時、９０％以上のＶＥＧＦ結合親和度を示すことができる。
本発明の一実施形態において、前記安定した薬剤学的製剤は、眼内（ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ）投与用、好ましくは、硝子体内（ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ）投与用であってもよい。
本発明の一実施形態において、前記安定した薬剤学的製剤は、使用前に、再溶解（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）ステップ、希釈（ｄｉｌｕｔｉｏｎ）ステップ、またはこれらの両方を経由しないものであってもよい。
本発明の一実施形態によるガラスバイアル（ｖｉａｌ）は、前記安定した薬剤学的製剤が充填される。
本発明の一実施形態によるプレフィルドシリンジ（ｐｒｅ－ｆｉｌｌｅｄ ｓｙｒｉｎｇｅ）は、前記安定した薬剤学的製剤が充填される。
本発明による安定した薬剤学的製剤は、組換え融合タンパク質を含みかつ、低い粘度を有し、長期保管条件、加速条件および苛酷条件で優れた安定性を維持し、眼内投与可能である。
［安定した薬剤学的製剤］
本発明による安定した薬剤学的製剤は、（Ａ）組換え融合タンパク質；（Ｂ）界面活性剤；（Ｃ）糖またはその誘導体；および（Ｄ）緩衝剤を含む。
本出願の明細書において、用語「含まない」は、当該成分を全く含まないことを意味する。また、当該用語は、当該成分を実質的に含まないこと、すなわち融合タンパク質の活性、薬剤学的製剤の安定性および粘度に影響を与えない範囲で含むこと、例えば、薬剤学的製剤の全体重量を基準として０～１％（ｗ／ｖ）、０～１ｐｐｍ（ｗ／ｖ）、または０～１ｐｐｂ（ｗ／ｖ）含むことを意味する。前記薬剤学的製剤は、液状であってもよいが、これに限定されるものではない。
（Ａ）組換え融合タンパク質
本発明の組換え融合タンパク質は、ＶＥＧＦ（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）拮抗剤であってもよい。また、本発明の組換え融合タンパク質は、（１）配列番号２のアミノ酸２７～１２９を含むＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１要素、（２）配列番号２のアミノ酸１３０～２３１を含むＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２要素、および（３）配列番号２のアミノ酸２３２～４５７を含むＦｃ部位要素を含むことができる。配列番号２のアミノ酸は、配列番号１のポリヌクレオチドに暗号化される。
本発明の組換え融合タンパク質は、ヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域を含むことができ、より具体的には、ヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１、２、またはこれらの混合物を含むことができるが、これに限定されるものではない。
前記組換え融合タンパク質は、ヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）のＦｃ部位を含むこともできるが、これに限定されるものではない。
前記組換え融合タンパク質は、アフリベルセプト（Ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ）を含むことができるが、これに限定されるものではない。
本発明の組換え融合タンパク質の濃度は、本発明による安定した薬剤学的製剤の安定性および粘度に悪影響を実質的に及ぼさない範囲内で自由に調整可能である。本発明の一実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、５～１００ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明の他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、５～９５ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、５～９０ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、５～８５ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、５～８０ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、５～７５ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、５～７０ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、５～６５ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、５～６０ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、５～５５ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、５～５０ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、５～４５ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、５～４０ｍｇ／ｍｌであってもよい。
また、本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、１０～１００ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、１０～９０ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、１０～８０ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、１０～７０ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、１０～６０ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、１０～５０ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、１０～４０ｍｇ／ｍｌであってもよい。
さらに、本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、２０～１００ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、２０～９０ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、２０～８０ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、２０～７０ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、２０～６０ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、２０～５０ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、２０～４０ｍｇ／ｍｌであってもよい。
これとともに、本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、３０～１００ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、３０～９０ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、３０～８０ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、３０～７０ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、３０～６０ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、３０～５０ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のさらに他の実施形態において、組換え融合タンパク質の濃度は、３０～４０ｍｇ／ｍｌであってもよい。
（Ｂ）界面活性剤
界面活性剤の例は、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ポリソルベート）、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（例えば、Ｂｒｉｊ）、アルキルフェニルポリオキシエチレンエーテル（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ）、ポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレンコポリマー（例えば、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）、ナトリウムドデシルスルフェート（ＳＤＳ）、ポロキサマー、およびこれらの混合物などを含むが、これらに限定されるものではない。
本発明の一実施形態において、前記界面活性剤は、ポリソルベート、ポロキサマー、またはこれらの混合物を含むことができ、具体的には、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（ポリソルベート）、ポロキサマー、またはこれらの混合物を含むことができる。さらに具体的には、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、またはこれらの２以上の混合物を含むことができるが、これに限定されるものではない。本発明の他の実施形態において、ポリソルベートは、ポリソルベート２０を含むこともできるが、これに限定されるものではない。
本発明の一実施形態において、前記界面活性剤の濃度は、本発明による安定した薬剤学的製剤の安定性および粘度に悪影響を及ぼさない範囲内で自由に調整可能である。例えば、界面活性剤の濃度は、０．００１～５％（ｗ／ｖ）、０．００５～２％（ｗ／ｖ）が好ましく、さらに好ましくは０．０１～１％（ｗ／ｖ）、０．０１～０．５％（ｗ／ｖ）、０．０１～０．１％（ｗ／ｖ）、または０．０１～０．０５％（ｗ／ｖ）であってもよいが、これに限定されるものではない。
（Ｃ）糖または糖の誘導体
糖は、単糖類、二糖類、オリゴ糖、多糖類、またはこれらの２以上の混合物を含むことができる。単糖類の例としては、グルコース、フルクトース、ガラクトースなどがあり、これらに限定されない。二糖類の例としては、スクロース、ラクトース、マルトース、トレハロースなどがあり、これらに限定されない。オリゴ糖の例としては、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、マンナンオリゴ糖などがあり、これらに限定されない。多糖類の例としては、デンプン、グリコーゲン、セルロース、キチン、ペクチンなどがあり、これらに限定されない。
糖の誘導体は、糖アルコール、糖酸、またはこれらの混合物を含むことができる。糖アルコールの例としては、グリセロール、エリスリトール、トレイトール、アラビトール、キシリトール、リビトール、マンニトール、ソルビトール、ガラクチトール、フシトール、イジトール、イノシトール、ボレミトール、イソマルト、マルチトール、ラクチトール、マルトトリイトール、マルトテトライトール、ポリグリシトールなどがあり、これらに限定されない。糖酸の例としては、アルドン酸（グリセリン酸など）、ウロソン酸（ノイラミン酸など）、ウロン酸（グルクロン酸など）、アルダル酸（酒石酸など）などがあり
、これらに限定されない。
本発明の一実施形態において、糖またはその誘導体として、ソルビトール、マンニトール、トレハロース、スクロース、またはこれらの２以上の混合物を含むことができる。本発明の他の実施形態において、糖またはその誘導体として、トレハロースを含むこともできるが、これに限定されるものではない。
本発明の一実施形態において、糖またはその誘導体の濃度は、本発明による薬剤学的製剤の安定性および粘度に悪影響を実質的に及ぼさない範囲内で自由に調整可能である。例えば、糖またはその誘導体の濃度は、０．１～３０％（ｗ／ｖ）、０．５～２５％（ｗ／ｖ）であってもよいし、さらに好ましくは１～２０％（ｗ／ｖ）であってもよい。本発明の一実施形態によれば、０．５～２０％（ｗ／ｖ）または１～２５％（ｗ／ｖ）であってもよい。本発明の一実施形態によれば、１～２０％（ｗ／ｖ）、２～１５％（ｗ／ｖ）、４～１３％（ｗ／ｖ）、または８～１２％（ｗ／ｖ）であってもよい。
（Ｄ）緩衝剤
緩衝剤は、酸やアルカリによるｐＨの変化を最小化させる中和性物質であり、緩衝剤の例としては、ホスフェート（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、アセテート（ａｃｅｔａｔｅ）、スクシナート（ｓｕｃｃｉｎａｔｅ）、グルコネート（ｇｌｕｃｏｎａｔｅ）、シトレート（ｃｉｔｒａｔｅ）だけでなく、アミノ酸の種類であるグルタメート（ｇｌｕｔａｍａｔｅ）、ヒスチジン（ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ）などがある。
本発明の一実施形態において、緩衝剤として、アミノ酸を含むことができ、より具体的には、遊離アミノ酸、アミノ酸塩、またはこれらの混合物を含むことができるが、これに限定されるものではない。本発明の一実施形態において、緩衝剤は、ヒスチジン、ヒスチジン塩、またはこれらの混合物を含むことができるが、これに限定されるものではない。
緩衝剤としてヒスチジン塩を使用する場合、例えば、ヒスチジンクロライド、ヒスチジンアセテート、ヒスチジンホスフェート、ヒスチジンスルフェートなどが含まれる。緩衝剤としてヒスチジンを含む方が、ｐＨ調整および安定性の面で好ましいが、これに限定されるものではない。また、ｐＨ調整のためにその他の種類の酸などを含んでもよいが、本発明の一実施形態によれば、酢酸、クエン酸、リン酸、またはこれらの混合物を含まないものでもよいし、これに限定されるものではない。
本発明の一実施形態において、緩衝剤の含有量は、本発明による薬剤学的製剤の安定性および粘度に悪影響を実質的に及ぼさない範囲内で自由に調整可能である。本発明の一実施形態において、緩衝剤の含有量は、１～２０ｍＭまたは１～１０ｍＭであってもよい。本発明の一実施形態において、緩衝剤の含有量は、２～２０ｍＭまたは２～１０ｍＭであってもよい。本発明の一実施形態において、緩衝剤の含有量は、３～２０ｍＭまたは３～１０ｍＭであってもよい。本発明の一実施形態において、緩衝剤の含有量は、４～２０ｍＭまたは４～１０ｍＭであってもよい。本発明の一実施形態において、緩衝剤の含有量は、５～２０ｍＭまたは５～１０ｍＭであってもよい。本発明の一実施形態において、緩衝剤の含有量は、６～２０ｍＭまたは６～１０ｍＭであってもよい。本発明の一実施形態において、緩衝剤の含有量は、１～２０ｍＭであってもよい。本発明の一実施形態において、緩衝剤の含有量は、６．４～９．６ｍＭであってもよいが、これに限定されるものではない。
（Ｅ）等張化剤
本発明の一実施形態において、（Ｅ）等張化剤を追加的に含むことができる。
等張化剤は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、またはこれらの２以上
の混合物を含むことができる。
本発明の一実施形態において、等張化剤の含有量は、本発明による薬剤学的製剤の安定性および粘度に悪影響を実質的に及ぼさない範囲内で自由に調整可能である。本発明の一実施形態において、等張化剤の含有量は、３０ｍＭ以下であってもよい。本発明の一実施形態において、等張化剤の含有量は、０．００００１～３０ｍＭ、０．０００１～３０ｍＭ、０．００１～３０ｍＭ、０．０１～３０ｍＭ、０．１～３０ｍＭ、または１～３０ｍＭであってもよい。本発明の一実施形態において、等張化剤の含有量は、０．００００１～３０ｍＭ、０．００００１～２５ｍＭ、または０．００００１～２０ｍＭであってもよい。本発明の一実施形態において、等張化剤の含有量は、０．０００１～３０ｍＭ、０．０００１～２５ｍＭ、または０．０００１～２０ｍＭであってもよい。本発明の一実施形態において、等張化剤の含有量は、０．００１～３０ｍＭ、０．００１～２５ｍＭ、または０．００１～２０ｍＭであってもよい。本発明の一実施形態において、等張化剤の含有量は、０．０１～３０ｍＭ、０．０１～２５ｍＭ、または０．０１～２０ｍＭであってもよい。本発明の一実施形態において、等張化剤の含有量は、０．１～３０ｍＭ、０．１～２５ｍＭ、または０．１～２０ｍＭであってもよい。本発明の一実施形態において、等張化剤の含有量は、１～３０ｍＭ、１～２５ｍＭ、または１～２０ｍＭであってもよい。本発明の一実施形態において、等張化剤の含有量は、２～３０ｍＭ、２～２５ｍＭ、または２～２０ｍＭであってもよい。本発明の一実施形態において、等張化剤の含有量は、３～３０ｍＭ、３～２５ｍＭ、または３～２０ｍＭであってもよい。本発明の一実施形態において、等張化剤の含有量は、５～１８ｍＭ、６～１７ｍＭ、または７．２～１５．６ｍＭであってもよいが、これに限定されるものではない。
（Ｆ）ｐＨ
本発明の一実施形態において、安定した薬剤学的組成物のｐＨは、５．０～７．０、５．０～６．５、５．５～７．０、または５．５～６．５であってもよい。ｐＨがこの範囲内の場合、長期間安定性および低粘度に優れることができる。ｐＨは、緩衝剤を用いて調整することができる。言い替えれば、緩衝剤を所定の含有量で含む場合、別のｐＨ調整剤がなくても前記範囲のｐＨを示すことができる。本発明の一実施形態において、前記組成物は、酢酸、クエン酸、リン酸、またはこれらの混合物を含まないものであってもよい。酢酸（アセテート）、クエン酸（シトレート）、リン酸、またはこれらの混合物を緩衝剤として用いる場合、前記範囲のｐＨを示しにくいこともある。別のｐＨ調整剤として、酸（例えば、塩酸）または塩基（例えば、水酸化ナトリウム）を追加的に含む場合、目標とする組換え融合タンパク質の安定性が低下しうる。
（Ｇ）その他の成分
本発明の一実施形態において、安定した薬剤学的製剤は、保存剤を含まなくてもよい。保存剤の例としては、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロライド、ヘキサメトニウムクロライド、ベンザルコニウムクロライド、ベンゼトニウムクロライド、フェノール、ブチルアルコール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、ｍ－クレゾールなどがある。保存剤を含む場合、安定性の改善に役立たないことがある。
また、本発明の一実施形態において、安定した薬剤学的製剤は、ＮａＦ、ＫＢｒ、ＮａＢｒ、Ｎａ２ＳＯ４、ＮａＳＣＮ、Ｋ２ＳＯ４、またはこれらの混合物を含まなくてもよく、キレート剤を含まないものでもよいが、これに限定されるものではない。
（Ｈ）「安定した」薬剤学的製剤
本発明の「安定した」薬剤学的製剤において、用語「安定した」は、本発明による組換え融合タンパク質が製造工程中および／または保管／保存時にその物理的安定性および／
または化学的安定性および／または生物学的活性を実質的に保持することを意味する。抗体の安定性を測定する多様な分析学的技術は、当該技術分野にて容易に利用可能である。安定性は、選択された温度で、選択された期間に対して測定される。
物理的安定性は、当該技術分野にて公知の方法で評価することができ、このような方法は、光（吸光または光学密度）のサンプルの見掛け減衰測定を含む。このような光の減衰測定は、製剤の濁度に関わる。また、物理的安定性に対して高分子量成分の含有量、低分子量成分の含有量、完全なタンパク質の量、不溶性異物粒子の数などを測定することができる。
化学的安定性は、例えば、化学的に変化した形態の組換え融合タンパク質を検出し定量することにより評価することができる。化学的安定性は、例えば、イオン交換クロマトグラフィーによって評価可能な荷電変化（例：脱アミド化または酸化の結果として発生）を含む。化学的安定性に対して電荷変形体（酸性または塩基性ピーク）などを測定することができる。
生物学的活性は、当該技術分野にて公知の方法で評価することができ、例えば、ＥＬＩＳＡにより抗原結合親和度を測定することができる。
本発明の一実施形態において、用語「安定した」薬剤学的製剤は、次の１つ以上を満足する薬剤学的製剤を意味する。
（Ｈ）－１濁度
－温度５±３℃の条件で４週間保管した後、分光光度計で測定した吸光度Ａ６００が０～０．０７００または０～０．０４００である薬剤学的製剤；
－温度１０℃、１５℃、２０℃、２５℃、３０℃、または３５℃、密閉条件で４週間保管した後、分光光度計で測定した吸光度Ａ６００が０～０．０７００または０～０．０４００である薬剤学的製剤；
－温度４０±２℃、相対湿度７５±５％、および密閉条件で４週間保管した後、分光光度計で測定した吸光度Ａ６００が０～０．０７００または０～０．０４００である薬剤学的製剤；
（Ｈ）－２主成分の含有量（メインピーク）
－温度５±３℃の条件で９ヶ月間保管した後、ＳＥ－ＨＰＬＣで測定した主成分が９８～９９％である薬剤学的製剤；
－温度４０±２℃、相対湿度７５±５％、および密閉条件で４週間保管した後、ＳＥ－ＨＰＬＣで測定した主成分が８９～９２％である薬剤学的製剤；
（Ｈ）－３高分子量成分（メインピーク（完全な組換え融合タンパク質）を基準として滞留時間（ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｔｉｍｅ）が前方であるピーク）
－温度５±３℃の条件で９ヶ月間保管した後、ＳＥ－ＨＰＬＣで測定した高分子量成分が９８～１００％である薬剤学的製剤；
－温度４０±２℃、相対湿度７５±５％、および密閉条件で４週間保管した後、ＳＥ－ＨＰＬＣで測定した高分子量成分が７～１０％である薬剤学的製剤；
（Ｈ）－４低分子量成分（メインピーク（完全な組換え融合タンパク質）を基準として滞留時間（ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｔｉｍｅ）が後方であるピーク）
－温度５±３℃の条件で９ヶ月間保管した後、ＳＥ－ＨＰＬＣで測定した低分子量成分が０．０～０．１％である薬剤学的製剤；
－温度４０±２℃、相対湿度７５±５％、および密閉条件で４週間保管した後、ＳＥ－
ＨＰＬＣで測定した低分子量成分が０．０～１．２％である薬剤学的製剤；
（Ｈ）－５完全な１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１、１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２、および組換えられたヒトＩｇＧのＦｃの一部（１ＶＥＧＦ１＋１ＶＥＧＦ２＋Ｆｃ）の含有量
－温度５±３℃の条件で９ヶ月間保管した後、還元ＣＥ－ＳＤＳで測定した完全な１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１、１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２、および組換えられたヒトＩｇＧのＦｃの一部（１ＶＥＧＦ１＋１ＶＥＧＦ２＋Ｆｃ）の含有量が９６～９８％である薬剤学的製剤；
－温度４０±２℃、相対湿度７５±５％、および密閉条件で４週間保管した後、還元ＣＥ－ＳＤＳで測定した完全な１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１、１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２、および組換えられたヒトＩｇＧのＦｃの一部（１ＶＥＧＦ１＋１ＶＥＧＦ２＋Ｆｃ）の含有量が９０～９６％である薬剤学的製剤；
（Ｈ）－６不溶性異物粒子の数
－温度５±３℃で９ヶ月間保管後、ＨＩＡＣで測定した不溶性異物粒子（２．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）の個数は０～１００個である薬剤学的製剤；
－温度５±３℃で９ヶ月間保管後、ＨＩＡＣで測定した不溶性異物粒子（１０．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）の個数は０～５０個である薬剤学的製剤；
－温度５±３℃で９ヶ月間保管後、ＨＩＡＣで測定した不溶性異物粒子（２５．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）の個数は０～５個である薬剤学的製剤；
－温度４０±２℃、相対湿度７５±５％、および密閉条件で４週間保管した後、ＨＩＡＣで測定した不溶性異物粒子（２．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）の個数は０～１００個である薬剤学的製剤；
－温度４０±２℃、相対湿度７５±５％、および密閉条件で４週間保管した後、ＨＩＡＣで測定した不溶性異物粒子（１０．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）の個数は０～５０個である薬剤学的製剤；
－温度４０±２℃、相対湿度７５±５％、および密閉条件で４週間保管した後、ＨＩＡＣで測定した不溶性異物粒子（２５．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）の個数は０～５個である薬剤学的製剤；
－温度５±３℃で９ヶ月間保管後、ＭＦＩで測定した不溶性異物粒子（１．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）の個数は０～５，０００個である薬剤学的製剤；
－温度５±３℃で９ヶ月間保管後、ＭＦＩで測定した不溶性異物粒子（１０．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）の個数は０～１００個である薬剤学的製剤；
－温度５±３℃で９ヶ月間保管後、ＭＦＩで測定した不溶性異物粒子（２５．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）の個数は０～１５個である薬剤学的製剤；
－温度５±３℃で４週間保管後、ＭＦＩで測定した不溶性異物粒子（１０．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）の個数は０～１，０００個である薬剤学的製剤；
－温度５±３℃で４週間保管後、ＭＦＩで測定した不溶性異物粒子（１０．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）の個数は０～１００個である薬剤学的製剤；
－温度５±３℃で４週間保管後、ＭＦＩで測定した不溶性異物粒子（２５．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）の個数は０～１００個である薬剤学的製剤；
－温度５±３℃で４週間保管後、ＭＦＩで測定した不溶性異物粒子（２５．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）の個数は０～１０個である薬剤学的製剤；
－温度４０±２℃で４週間保管後、ＭＦＩで測定した不溶性異物粒子（１．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）の個数は０～５，０００個である薬剤学的製剤；
－温度４０±２℃で４週間保管後、ＭＦＩで測定した不溶性異物粒子（１．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）の個数は０～２，５００個である薬剤学的製剤；
－温度４０±２℃で４週間保管後、ＭＦＩで測定した不溶性異物粒子（１０．００μｍ
≦、＜１００．００μｍ）の個数は０～１，０００個である薬剤学的製剤；
－温度４０±２℃で４週間保管後、ＭＦＩで測定した不溶性異物粒子（１０．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）の個数は０～１００個である薬剤学的製剤；
－温度４０±２℃で４週間保管後、ＭＦＩで測定した不溶性異物粒子（２５．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）の個数は０～１００個である薬剤学的製剤；
－温度４０±２℃で４週間保管後、ＭＦＩで測定した不溶性異物粒子（２５．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）の個数は０～１０個である薬剤学的製剤；
－温度４０±２℃、相対湿度７５±５％、および密閉条件で４週間保管した後、ＭＦＩで測定した不溶性異物粒子（１．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）の個数は０～２０，０００個である薬剤学的製剤；
－温度４０±２℃、相対湿度７５±５％、および密閉条件で４週間保管した後、ＭＦＩで測定した不溶性異物粒子（１０．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）の個数は０～７０個である薬剤学的製剤；
－温度４０±２℃、相対湿度７５±５％、および密閉条件で４週間保管した後、ＭＦＩで測定した不溶性異物粒子（２５．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）の個数は０～１５個である薬剤学的製剤；
（Ｈ）－７酸化率
－温度５±３℃で４週間保管した後、ＬＣ－ＭＳで測定した重鎖Ｍｅｔ１９２の酸化率が０～７％である薬剤学的製剤；
－温度４０±２℃、相対湿度７５±５％、および密閉条件で４週間保管した後、ＬＣ－ＭＳで測定した重鎖Ｍｅｔ１９２の酸化率が０～６％である薬剤学的製剤；
（Ｈ）－８電荷変形体
－温度５±３℃で４週間保管した後、ｃＩＥＦで測定した理論的なピーク４におけるピーク１１の相対的な含有量が８９～９１％である薬剤学的製剤
－温度５±３℃で９ヶ月間保管した後、ｃＩＥＦで測定した理論的なピーク４におけるピーク１１の合計が８６～８８％である薬剤学的製剤；
－温度４０±２℃、相対湿度７５±５％、および密閉条件で４週間保管した後、ｃＩＥＦで測定した理論的なピーク４におけるピーク１１の合計が８６～８８％である薬剤学的製剤；
－温度４０±２℃、相対湿度７５±５％、および密閉条件で４週間保管した後、ｃＩＥＦで測定した理論的なピーク４におけるピーク１１の相対的な含有量が８６～８８％である薬剤学的製剤
（Ｈ）－９ＶＥＧＦ結合親和度
－温度５±３℃で９ヶ月間保管した後、ＥＬＩＳＡで測定したＶＥＧＦ結合親和度が７５～９５％である薬剤学的製剤；
－温度４０±２℃、相対湿度７５±５％、および密閉条件で４週間保管した後、ＥＬＩＳＡで測定したＶＥＧＦ結合親和度が６０～７５％である薬剤学的製剤；
［安定した薬剤学的製剤の製造方法］
本発明の安定した薬剤学的製剤は、公知の方法を用いて製造することができ、特定の方法に限定されない。例えば、界面活性剤、糖またはその誘導体および等張化剤を含む溶液に緩衝剤を添加しながらｐＨを調整した後、この混合溶液に組換え融合タンパク質を入れて薬剤学的製剤を製造することができる。また、精製工程の最終ステップでいくつかの賦形剤を含む溶液を製造した後、残りの成分を添加して薬剤学的製剤を製造することができる。例えば、精製工程の最終ステップで組換え融合タンパク質、緩衝剤、糖またはその誘導体、等張化剤を含む溶液を製造した後、この溶液に界面活性剤を添加して薬剤学的製剤を製造することができる。
また、前記製剤は、製造時に凍結乾燥工程を含まなくてもよい。
凍結乾燥工程を含まない場合、例えば、本発明の薬剤学的製剤を製造し、滅菌などの処理後、直に１次包装材であるガラスバイアルやプレフィルドシリンジのような密閉容器に入れることができる。
［安定した薬剤学的製剤の使用方法］
本発明による安定した薬剤学的製剤は、ＶＥＧＦの漏出による疾病を治療するのに使用できる。ＶＥＧＦの漏出による疾病の例としては、新生血管性（濕性）加齢黄斑変性、網膜静脈閉塞性（網膜中心静脈閉塞または網膜分枝静脈閉塞）黄斑浮腫による視力損傷、糖尿病性黄斑浮腫による視力損傷、病的近視による脈絡膜の新生血管形成による視力損傷などがあり、これらに限定されない。
本発明による安定した薬剤学的製剤は、１回または数回使用可能であり、投与時には、資格を持った眼内投与（注射）経験がある医師によって投与されなければならない。
前記薬剤学的製剤中の組換え融合タンパク質をはじめとする他の成分の濃度は、上述した通りであり、薬剤学的製剤の全体体積は、０．０５～０．３ｍｌであってもよい。
前記薬剤学的製剤の投与量および投与時期は、疾病の種類、疾病の重症度および経過状態、患者の健康および治療に対する反応、および治療する医師の判断によって異なり、推奨投与量は２ｍｇ（約５０マイクロリットルと同一）に制限されているが、投与間隔および投与時期は制限されない。例えば、前記薬剤学的製剤を含む１つの製品で組換え融合タンパク質の濃度を基準として２ｍｇを片眼内投与後、同一の投与量を短くて２週、長くて２ヶ月ごとに投与することができる。１６週より長い投与間隔は研究されていない。
本発明の一実施形態において、前記安定した薬剤学的製剤は、使用前に、再溶解（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）ステップ、希釈（ｄｉｌｕｔｉｏｎ）ステップ、またはこれらの両方を経由しなくてもよい。
［治療方法および安定化方法］
本発明はまた、ＶＥＧＦの漏出による疾病を有する患者に、（Ａ）組換え融合タンパク質；（Ｂ）界面活性剤；（Ｃ）糖またはその誘導体；および（Ｄ）緩衝剤を含む安定した薬剤学的製剤を用いた治療方法を提供する。
本発明はさらに、組換え融合タンパク質を安定化する薬剤学的製剤の条件を提供することにより、（Ａ）組換え融合タンパク質；（Ｂ）界面活性剤；（Ｃ）糖またはその誘導体；および（Ｄ）緩衝剤を含む安定した薬剤学的製剤の安定化方法を提供する。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、前記薬剤学的製剤は、液状であってもよい。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ａ）組換え融合タンパク質は、ＶＥＧＦ（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）拮抗剤を含むことができる。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ａ）組換え融合タンパク質は、ヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域を含むことができる。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ａ）組換え融合タンパク質は、ヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１、２、またはこれらの混合物を含むことができる。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ａ）組換え融合タンパク質は、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）のＦｃ部位、好ましくは、ヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）のＦｃ部位を含むことができる。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ａ）組換え融合タンパク質は、（１）配列番号２のアミノ酸２７～１２９を含むＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１要素、（２）配列番号２のアミノ酸１３０～２３１を含むＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２要素、および（３）配列番号２のアミノ酸２３２～４５７を含むＦｃ部位要素を含むことができる。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ａ）組換え融合タンパク質は、アフリベルセプト（Ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ）を含むことができる。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ａ）組換え融合タンパク質の濃度は、５～１００ｍｇ／ｍｌであってもよい。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ｂ）界面活性剤は、ポリソルベート、ポロキサマー、またはこれらの混合物を含むことができる。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ｂ）界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、またはこれらの２以上の混合物を含むことができる。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ｂ）界面活性剤は、ポリソルベート２０を含むことができる。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ｂ）界面活性剤の濃度は、０．０１～０．１％（ｗ／ｖ）であってもよい。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ｃ）糖は、単糖類、二糖類、オリゴ糖、多糖類、またはこれらの２以上の混合物を含み、（Ｃ）糖の誘導体は、糖アルコール、糖酸、またはこれらの混合物を含むことができる。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ｃ）糖またはその誘導体は、ソルビトール、マンニトール、トレハロース、スクロース、またはこれらの２以上の混合物を含むことができる。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ｃ）糖またはその誘導体は、トレハロースを含むことができる。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ｃ）糖またはその誘導体の濃度は、１～２０％（ｗ／ｖ）であってもよい。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ｄ）緩衝剤は、アミノ酸を含むことができる。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ｄ）緩衝剤は、遊離アミノ酸、アミノ酸塩、またはこれらの混合物を含むことができる。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ｄ）緩衝剤は、ヒスチジン、ヒスチジン塩、またはこれらの混合物を含むことができる。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ｄ）緩衝剤の含有量は、１～２０ｍＭであってもよい。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、本発明の安定した薬剤学的製剤は、酢酸、クエン酸、リン酸、またはこれらの混合物を含まないものであってもよい。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ｅ）等張化剤を追加的に含むことができる。
（Ｅ）等張化剤は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、またはこれらの２以上の混合物を含むことができる。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ｅ）等張化剤の含有量は、３０ｍＭ以下であってもよい。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、本発明の製剤は、ｐＨが５．０～７．０であってもよい。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、本発明の製剤は、ＮａＦ、ＫＢｒ、ＮａＢｒ、Ｎａ２ＳＯ４、ＮａＳＣＮ、Ｋ２ＳＯ４、またはこれらの混合物を含まないものであってもよい。
本発明の一実施形態において、本発明の製剤は、キレート剤を含まないものであってもよい。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態による安定した薬剤学的製剤は、（Ａ）（１）配列番号２のアミノ酸２７～１２９を含むＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１要素、（２）配列番号２のアミノ酸１３０～２３１を含むＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２要素、および（３）配列番号２のアミノ酸２３２～４５７を含むＦｃ部位要素を含む組換え融合タンパク質５～１００ｍｇ／ｍｌ、（Ｂ）界面活性剤０．０１～０．１％（ｗ／ｖ）、（Ｃ）糖またはその誘導体１～２０％（ｗ／ｖ）、および（Ｄ）緩衝剤１～２０ｍＭを含むことができる。前記治療方法または安定化方法の一実施形態による薬剤学的製剤は、（Ｅ）等張化剤３０ｍＭ以下を追加的に含むことができる。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態による薬剤学的製剤は、（Ａ）ＶＥＧＦ（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）拮抗剤；（Ｂ）ポリソルベート；（Ｃ）糖またはその誘導体；および（Ｄ）ヒスチジンを含むことができる。前記治療方法または安定化方法の一実施形態による薬剤学的製剤は、（Ｅ）塩化ナトリウムを追加的に含むことができる。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態による薬剤学的製剤は、（Ａ）（１）配列番号２のアミノ酸２７～１２９を含むＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１要素、（２）配列番号２のアミノ酸１３０～２３１を含むＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２要素、および（３）配列番号２のアミノ酸２３２～４５７を含むＦｃ部位要素を含む組換え融合タンパク質５～１００ｍｇ／ｍｌ；（Ｂ）ポリソルベート０．０１～０．１％（ｗ／ｖ）；（Ｃ）糖またはその誘導体１～２０％（ｗ／ｖ）；および（Ｄ）ヒスチジン１～２０ｍＭを含むことができる。前記治療方法または安定化方法の一実施形態による薬剤学的製剤は、（Ｅ）塩化ナトリウム３０ｍＭ以下を追加的に含むことができる。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態による安定した薬剤学的製剤は、５±３℃９ヶ月保管時、ＨＩＡＣで測定した、１０．００μｍ以上４００．００μｍ未満の不溶性異物粒子の数が５０個以下であってもよい。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態による安定した薬剤学的製剤は、５±３℃保管１０日後、９８％以上の主成分の含有量を示すことができる。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態による安定した薬剤学的製剤は、５±３℃保管１０日後、１％以下の高分子量成分の含有量を示すことができる。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態による安定した薬剤学的製剤は、５±３℃保管１０日後、０．０５％以下の低分子量成分の含有量を示すことができる。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態による安定した薬剤学的製剤は、５±３℃９ヶ月保管時、８７．５％以上の電荷変形体の含有量を示すことができる。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態による安定した薬剤学的製剤は、５±３℃９ヶ月保管時、９０％以上のＶＥＧＦ結合親和度を示すことができる。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、前記安定した薬剤学的製剤は、眼内投与用、好ましくは、硝子体内投与用であってもよい。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、前記安定した薬剤学的製剤は、使用前に、再溶解（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）ステップ、希釈（ｄｉｌｕｔｉｏｎ）ステップ、またはこれらの両方を経由しないものであってもよい。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態によるガラスバイアル（ｖｉａｌ）は、前記安定した薬剤学的製剤が充填される。
前記治療方法または安定化方法の一実施形態によるプレフィルドシリンジ（ｐｒｅ－ｆｉｌｌｅｄ ｓｙｒｉｎｇｅ）は、前記安定した薬剤学的製剤が充填される。
［製品］
本発明はまた、前記安定した薬剤学的製剤；および前記安定した薬剤学的製剤を密閉された状態で収容する容器を含む製品を提供する。
前記安定した薬剤学的製剤は、上述した通りである。
本発明の一実施形態において、前記容器は、ガラス、ポリマー（プラスチック）、金属などの物質から形成されてもよいし、これに限定されない。本発明の一実施形態において、前記容器は、瓶、バイアル、カートリッジ、注射器（プレフィルドシリンジ）、またはチューブであり、これに限定されない。本発明の一実施形態において、前記容器は、ガラスまたはポリマーバイアル、またはガラスまたはポリマープレフィルドシリンジであってもよい。
前記バイアル、カートリッジ、プレフィルドシリンジなどの具体的な製品形態と前記安定した薬剤学的製剤を前記バイアル、カートリッジ、プレフィルドシリンジなどに充填する方法は、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者であれば、容易に入手または実施可能である。例えば、米国特許第４，８６１，３３５号、第６，３３１，１７４号などは、プレフィルドシリンジの具体的な製品形態および充填方法を開示する。前記バイアル、カートリッジ、プレフィルドシリンジなどとして商用化された製品をそのまま用いるか、前記安定した薬剤学的製剤の物性、投与部位、投与量などを考慮して別途に注文製作した製品を用いることができる。
本発明の一実施形態において、前記製品は、前記安定した薬剤学的製剤の使用方法、保管方法、またはこれらのすべてを提供する指示事項をさらに含むことができる。前記使用方法は、ＶＥＧＦの漏出による疾病の治療法を含み、投与経路、投与量および投与時期を含むことができる。
本発明の一実施形態において、前記製品は、商業的および使用者の観点から必要なその他のツール、例えば、針、注射器などを含むことができる。
以下、本発明を実施例により詳細に説明する。下記の実施例は本発明を例示するためのものに過ぎず、本発明の範囲が下記の実施例によって限定されるものではない。
実施例
以下の実験例で使用された組換え融合タンパク質に関連して、セルトリオン研究所で培養および精製されたアフリベルセプトを使用した。
以下の実験例で使用された薬剤学的製剤の物理的安定性、化学的安定性および生物学的活性の測定方法として次の方法を用いた。
－濁度（Ｔｕｒｂｉｄｉｔｙ）
ＵＶ－Ｖｉｓ分光光度計を用いて６００ｎｍでの吸光度を測定した。
－主成分の含有量
サイズ排除高性能液体クロマトグラフィー（Ｓｉｚｅ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ＨＰＬＣ）を用いて主成分の含有量（ｍａｉｎ ｐｅａｋ；％）を測定した。
－高分子量成分の含有量
サイズ排除高性能液体クロマトグラフィー（Ｓｉｚｅ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ＨＰＬＣ）を用いて高分子量成分の含有量（ｐｒｅ－ｐｅａｋ；％）を測定した。
－低分子量成分の含有量
サイズ排除高性能液体クロマトグラフィー（Ｓｉｚｅ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ＨＰＬＣ）を用いて低分子量成分の含有量（ｐｏｓｔ－ｐｅａｋ；％）を測定した。
－１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１、１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２、および組換えられたヒトＩｇＧのＦｃの一部（１ＶＥＧＦ１＋１ＶＥＧＦ２＋Ｆｃ）の含有量
還元毛細管電気泳動ナトリウムドデシルスルフェート（Ｒｅｄｕｃｅｄ Ｃａｐｉｌｌａｒｙ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ－Ｓｏｄｉｕｍ Ｄｏｄｅｃｙｌ Ｓｕｌｆａｔｅ；ＲＣＥ－ＳＤＳ）を用いて完全な１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１、１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２、および組換えられたヒトＩｇＧのＦｃの一部（１ＶＥＧＦ１＋１ＶＥＧＦ２＋Ｆｃ）の含有量（％）を測定した。
－不溶性異物粒子（Ｓｕｂ－ｖｉｓｉｂｌｅ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ）の数
マイクロフローイメージング（Ｍｉｃｒｏ Ｆｌｏｗ Ｉｍａｇｉｎｇ；ＭＦＩ）および光遮蔽型微粒子計数器（モデル名：ＨＩＡＣ９７０３）を用いて不溶性異物粒子の数を測定した。
－酸化率（Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ）
質量分析による液体クロマトグラフィー（ＬＣ－ＭＳ）でペプチドマッピング（Ｐｅｐｔｉｄｅ ｍａｐｐｉｎｇ）により重鎖Ｍｅｔ１９２の酸化率（％）を測定した。
－電荷変形体（全体１２個のピーク中の、ピーク４におけるピーク１１の占める相対含有量）
毛細管電気泳動フォーカシング（Ｃａｐｉｌｌａｒｙ Ｉｓｏ－Ｅｌｅｃｔｒｉｃ Ｆｏｃｕｓｉｎｇ、ｃＩＥＦ）で酸性および塩基性ピーク（％）を測定した。
－ＶＥＧＦ結合親和度
酵素結合免疫吸着分析法（Ｅｎｚｙｍｅ－Ｌｉｎｋｅｄ ＩｍｍｕｎｏＳｏｒｂｅｎｔ
Ａｓｓａｙ；ＥＬＩＳＡ）でＶＥＧＦ結合親和度（％）を測定した。
実験例１：ヒスチジン緩衝剤の濃度による比較；ｐＨ５．５－ｐＨ６．５の比較；塩化ナトリウム等張化剤の濃度による比較；トレハロースの濃度による比較；および本発明の製剤の優秀性の確認
実験例１で使用された薬剤学的製剤に関連して、各緩衝液を各ｐＨに合わせて製造した後、トレハロースと塩化ナトリウムを添加し、これに組換え融合タンパク質を添加し、界面活性剤を添加して、表１の試料を製造した。各成分の具体的な含有量は表１に記載された通りである。実施例１－９と比較例１はセルトリオン研究所で精製されたアフリベルセプトを添加し、比較例２はリジェネロン社のアイリーア製品で、比較例１と同一の薬剤学的製剤に他社で製造したアフリベルセプトが添加された試料である。各試料のガラスバイアル充填目標容量は０．２７８ｍｌであった。
実施例１－９および比較例１－２により製造された薬剤学的製剤を５±３℃の温度と４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度で保管し、５±３℃の温度で０週後、２週後
、４週後の安定性、そして４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度で２週後および４週後の安定性を測定した。結果は表２－１５に示した。
Figure 2023535985000001
Figure 2023535985000002
表２をみると、５±３℃の温度条件で４週後にも本発明の製剤の範囲を設定するすべての実施例１－９の濁度が非常に低くて透明な薬剤学的製剤であることが分かる。特に、４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度条件で４週後にも吸光度が０．０４００以下であることが分かる。既存の製剤（比較例１－２）の結果と類似していることが分かる。
Figure 2023535985000003
表３をみると、５±３℃の温度条件で４週後に本発明の製剤の範囲を設定するすべての実施例１－９の主成分の含有量が、比較例１－２の結果と類似の薬剤学的製剤であることが分かる。これに対し、４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度条件で４週後には、実施例１－９の主成分の含有量が、比較例１－２に比べて高いため、本発明の製剤が、目標組換え融合タンパク質がさらに安定して保管可能な、改良された薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000004
表４をみると、５±３℃の温度条件で４週後に、本発明の製剤の範囲を設定するすべての実施例１－９の高分子量成分の含有量が、比較例１－２の結果と類似の薬剤学的製剤であることが分かる。これに対し、４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度条件で４週後には、実施例１－９の高分子量成分の含有量が、比較例１－２に比べて低いため、本発明の製剤が、目標組換え融合タンパク質がさらに安定して保管可能な、改良された薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000005
表５をみると、５±３℃の温度条件で４週後に、本発明の製剤の範囲を設定するすべての実施例１－９の低分子量成分の含有量が、比較例１－２の結果と類似の薬剤学的製剤であることが分かる。また、４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度条件で４週後に、実施例２－９の低分子量成分の含有量が、比較例１と類似の水準である薬剤学的製剤であることが分かる。これに対し、実施例１を通して、ｐＨ５．５の条件は低分子量成分の
含有量の面で比較例１－２に比べてやや不利であることを確認したため、目標ｐＨおよびｐＨ範囲を少し高めて調整する必要があることを確認した。ｐＨ範囲を調整した実験の結果は実験例２に含まれている。
Figure 2023535985000006
表６をみると、５±３℃の温度条件で４週後に、本発明の製剤の範囲を設定するすべての実施例１－９の１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１、１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２、および組換えられたヒトＩｇＧのＦｃの一部（１ＶＥＧＦ１＋１ＶＥＧＦ２＋Ｆｃ）の含有量が、比較例１－２の結果と類似の薬剤学的製剤であることが分かる。また、４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度条件で４週後に、実施例２－９の１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１、１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２、および組換えられたヒトＩｇＧのＦｃの一部（１ＶＥＧＦ１＋１ＶＥＧＦ２＋Ｆｃ）の含有量が、比較例１－２と類似の水準である薬剤学的製剤であることが分かる。ただし、実施例１を通して、ｐＨ５．５の条件は１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１、１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２、および組換えられたヒトＩｇＧのＦｃの一部（１ＶＥＧＦ１＋１ＶＥＧＦ２＋Ｆｃ）の含有量の面で比較例１－２に比べてやや不利であるため、目標ｐＨおよびｐＨ範囲を少し高めて調整する必要があることを確認した。当該結果は実験例２に含まれている。
Figure 2023535985000007
表７をみると、５±３℃の温度条件で４週後に、本発明の製剤の範囲を設定するすべての実施例１－９のＨＩＡＣで測定した不溶性異物粒子の数（２．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）が、比較例１の結果と類似の、非常にクリーンな薬剤学的製剤であることが分かる。また、４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度条件で４週後にも、実施例１－９のＨＩＡＣで測定した不溶性異物粒子の数（２．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）が、比較例１と類似の水準である薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000008
表８をみると、５±３℃の温度条件で４週後に、本発明の製剤の範囲を設定するすべての実施例１－９のＨＩＡＣで測定した不溶性異物粒子の数（１０．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）が、比較例１の結果と類似の、非常にクリーンな薬剤学的製剤であることが分かる。また、４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度条件で４週後にも、実施例
１－９のＨＩＡＣで測定した不溶性異物粒子の数（１０．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）が、比較例１と類似の水準である薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000009
表９をみると、５±３℃の温度条件で４週後に、本発明の製剤の範囲を設定するすべての実施例１－９のＨＩＡＣで測定した不溶性異物粒子の数（２５．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）が、比較例１の結果と類似の、非常にクリーンな薬剤学的製剤であることが分かる。また、４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度条件で４週後にも、実施例１－９のＨＩＡＣで測定した不溶性異物粒子の数（２５．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）が、比較例１と類似の水準である薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000010
表１０をみると、５±３℃の温度条件で４週後に、本発明の製剤の範囲を設定するすべての実施例１－９のＭＦＩで測定した不溶性異物粒子の数（１．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）が、比較例１の結果と類似の、非常にクリーンな薬剤学的製剤であることが分かる。また、４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度条件で４週後にも、実施例１－９のＭＦＩで測定した不溶性異物粒子の数（１．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）が、比較例１と類似の水準である薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000011
表１１をみると、５±３℃の温度条件で４週後に、本発明の製剤の範囲を設定するすべての実施例１－９のＭＦＩで測定した不溶性異物粒子の数（１０．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）が、比較例１の結果と類似の、非常にクリーンな薬剤学的製剤であることが分かる。また、４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度条件で４週後にも、実施例１－９のＭＦＩで測定した不溶性異物粒子の数（１０．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）が、比較例１と類似の水準である薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000012
表１２をみると、５±３℃の温度条件で４週後に、本発明の製剤の範囲を設定するすべての実施例１－９のＭＦＩで測定した不溶性異物粒子の数（２５．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）が、比較例１の結果と類似の、非常にクリーンな薬剤学的製剤であることが分かる。また、４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度条件で４週後にも、実施例１－９のＭＦＩで測定した不溶性異物粒子の数（２５．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）が、比較例１と類似の水準である薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000013
表１３をみると、５±３℃の温度条件で４週後に、本発明の製剤の範囲を設定するすべての実施例１－９の酸化率（Ｍｅｔ１９２）が、比較例１－２の結果と類似の薬剤学的製剤であることが分かる。また、４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度条件で４週後にも、実施例１－９の酸化率（Ｍｅｔ１９２）が、比較例１－２と類似の水準である薬
剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000014
表１４をみると、５±３℃の温度条件で４週後に、本発明の製剤の範囲を設定するすべての実施例１－９の電荷変形体（全体１２個のピーク中の、ピーク４におけるピーク１１の相対的な含有量）が、比較例１－２の結果と類似の薬剤学的製剤であることが分かる。また、４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度条件で４週後にも、実施例１－９の電荷変形体（全体１２個のピーク中の、ピーク４におけるピーク１１の相対的な含有量）が、比較例１－２と類似の水準である薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000015
表１５をみると、５±３℃の温度条件で４週後に、本発明の製剤の範囲を設定するすべての実施例１－９のＶＥＧＦ結合親和度が、比較例１－２の結果と類似の薬剤学的製剤であることが分かる。また、４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度条件で４週後にも、実施例１－９のＶＥＧＦ結合親和度が、比較例１－２と類似の水準である薬剤学的製
剤であることが分かる。
実験例２：低分子量含有量の改善のための目標ｐＨおよびｐＨ範囲の調整
実験例２で使用された薬剤学的製剤に関連して、各緩衝液を各ｐＨに合わせて製造した後、トレハロースと塩化ナトリウムを添加し、これに組換え融合タンパク質を添加し、界面活性剤を添加して、下記表１６の試料を製造した。各成分の具体的な含有量は表１６に記載された通りである。下記の実施例はセルトリオン研究所で精製されたアフリベルセプトを添加し、比較例１はリジェネロン社のアイリーア製品で、他社で製造したアフリベルセプトが添加された試料である。実施例２と実施例１０の差異はタンパク質の濃度であり、実施例１０－１４の差異はｐＨである。各試料のガラスバイアル充填目標容量は０．２７８ｍｌであった。
実施例２、１０～１４および比較例１により製造された薬剤学的製剤を５±３℃の温度と５０±２℃の温度で保管し、５±３℃の温度で０日後、１０日後の安定性、そして５０±２℃の温度で５日後および１０日後の安定性を測定した。結果は表１７－３０に示した。
Figure 2023535985000016
Figure 2023535985000017
表１７をみると、５±３℃の温度条件で１０日後に本発明の製剤の範囲を設定する実施例２、１０～１４の主成分の含有量が、比較例１の結果と類似の薬剤学的製剤であることが分かる。これに対し、５０±２℃の温度条件で１０日後には、実施例２、１０～１４の主成分の含有量が、比較例１に比べて高いため、本発明の製剤が、目標組換え融合タンパク質がさらに安定して保管可能な、改良された薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000018
表１８をみると、５±３℃の温度条件で１０日後に、本発明の製剤の範囲を設定する実施例２、１０～１４の高分子量成分の含有量が、比較例１より低いことが分かる。また、５０±２℃の温度条件で１０日後にも、実施例２、１０～１４の高分子量成分の含有量が、比較例１に比べて低いため、本発明の製剤が、目標組換え融合タンパク質がさらに安定して保管可能な、改良された薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000019
表１９をみると、５±３℃の温度条件で１０日後に、本発明の製剤の範囲を設定する実施例２、１０～１４の低分子量成分の含有量が、比較例１の結果と類似の薬剤学的製剤であることが分かる。これに対し、５０±２℃の温度条件で１０日後には、実施例２、１０～１４の低分子量成分の含有量が、比較例１よりやや高いことが分かる。実施例１１～１４の低分子量成分の含有量をみると、ｐＨが低いほど低分子量含有量が高いことが分かり、実施例１１をみると、ｐＨ５．５の製剤では、目標ｐＨの薬剤学的製剤である実施例１３より分析法の変動水準を超えて約４％以上低分子量の含有量が急激に増加するという特徴を確認することができる。したがって、本発明の製剤のｐＨ範囲は５．９～６．５に設定する方が、より優れていることを確認することができる。
Figure 2023535985000020
表２０をみると、５±３℃の温度条件で１０日後に、本発明の製剤の範囲を設定する実施例２、１０～１４の１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１、１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２、および組換えられたヒトＩｇＧのＦｃの一部（１ＶＥＧＦ１＋１ＶＥＧＦ２＋Ｆｃ）の含有量が、比較例１の結果と類似の薬剤学的製剤であることが分かる。これに対し、５０±２℃の温度条件で１０日後には、実施例２、１０～１４の１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１、１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２、および組換えられたヒトＩｇＧのＦｃの一部（１ＶＥＧＦ１＋１ＶＥＧＦ２＋Ｆｃ）の含有量が、比較例１よりやや低いことが分かる。実施例１１～１４の１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１、１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２、および組換えられたヒトＩｇＧのＦｃの
一部（１ＶＥＧＦ１＋１ＶＥＧＦ２＋Ｆｃ）の含有量をみると、ｐＨが低いほど１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１、１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２、および組換えられたヒトＩｇＧのＦｃの一部（１ＶＥＧＦ１＋１ＶＥＧＦ２＋Ｆｃ）の含有量が低いことが分かり、実施例１１をみると、ｐＨ５．５の製剤では、目標ｐＨの薬剤学的製剤である実施例１３より分析法の変動水準を超えて約１０％以上低分子量の含有量が急激に増加するという特徴を確認することができる。したがって、本発明の製剤のｐＨ範囲は５．９～６．５に設定する方が、より優れていることを確認した。
Figure 2023535985000021
表２１をみると、５±３℃の温度条件で１０日後に、本発明の製剤の範囲を設定する実施例２、１０～１４のＭＦＩで測定した不溶性異物粒子の数（１．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）が絶対的に低い、非常にクリーンな薬剤学的製剤であることが分かる。また、５０±２℃の温度条件で１０日後にも、実施例２、１０～１４のＭＦＩで測定した不溶性異物粒子の数（１．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）が絶対的に低い、非常にクリーンな薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000022
表２２をみると、５±３℃の温度条件で１０日後に、本発明の製剤の範囲を設定する実施例２、１０～１４のＭＦＩで測定した不溶性異物粒子の数（１０．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）が絶対的に低い、非常にクリーンな薬剤学的製剤であることが分かる。また、５０±２℃の温度および条件で１０日後にも、実施例２、１０～１４のＭＦＩで測定
した不溶性異物粒子の数（１０．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）が絶対的に低い、非常にクリーンな薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000023
表２３をみると、５±３℃の温度条件で１０日後に、本発明の製剤の範囲を設定する実施例２、１０～１４のＭＦＩで測定した不溶性異物粒子の数（２５．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）が絶対的に低い、非常にクリーンな薬剤学的製剤であることが分かる。また、５０±２℃の温度および条件で１０日後にも、実施例２、１０～１４のＭＦＩで測定した不溶性異物粒子の数（２５．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）が絶対的に低い、非常にクリーンな薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000024
表２４をみると、５±３℃の温度条件で１０日後に、本発明の製剤の範囲を設定する実施例２、１０～１４のＶＥＧＦ結合親和度が、比較例１の結果と類似の薬剤学的製剤であることが分かる。これに対し、５０±２℃の温度条件で１０日後には、実施例２、１０～１４のうち一部の実施例のＶＥＧＦ結合親和度が、比較例１よりやや高いことが分かる。実施例１１～１４のＶＥＧＦ結合親和度をみると、ｐＨが低いほどＶＥＧＦ結合親和度が低いことが分かり、実施例１１をみると、ｐＨ５．５の製剤では、目標ｐＨの薬剤学的製剤である実施例１３より分析法の変動水準を超えて約３８％以上ＶＥＧＦ結合親和度が急激に減少するという特徴を確認することができる。したがって、本発明の製剤のｐＨ範囲は５．９～６．５に設定する方が、より優れていることを確認することができる。
実験例３：塩化ナトリウム等張化剤の濃度範囲補強のためのさらなる比較および本発明
の製剤の優秀性の確認
実験例２で使用された薬剤学的製剤に関連して、各緩衝液を各塩化ナトリウムの濃度に合わせて製造した後、組換え融合タンパク質を添加し、界面活性剤を添加して、表２５の試料を製造した。各成分の具体的な含有量は表２５に記載された通りである。実施例１５－１６と比較例１はセルトリオン研究所で精製されたアフリベルセプトを添加した試料である。各試料のガラスバイアル充填目標容量は０．２７８ｍｌであった。
実施例１５－１６および比較例１により製造された薬剤学的製剤を５±３℃の温度と４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度で保管し、５±３℃の温度で４週後の安定性、そして４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度で２週後および４週後の安定性を測定した。結果は表２６－３１に示した。
Figure 2023535985000025
Figure 2023535985000026
表２６をみると、５±３℃の温度条件で４週後にも低濃度塩化ナトリウム条件の実施例１５－１６の濁度が非常に低くて透明な薬剤学的製剤であることが分かる。特に、４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度条件で４週後にも吸光度が０．０４００以下であることが分かる。既存の製剤（比較例１）の結果と類似していることが分かる。
Figure 2023535985000027
表２７をみると、５±３℃の温度条件で４週後に、低濃度塩化ナトリウム条件の実施例１５－１６の電荷変形体（全体１２個のピーク中の、ピーク４におけるピーク１１の相対的な含有量）が、比較例１の結果と類似の薬剤学的製剤であることが分かる。また、４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度条件で４週後にも、実施例１５－１６の電荷変形体（全体１２個のピーク中の、ピーク４におけるピーク１１の相対的な含有量）が、比較例１と類似の水準である薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000028
表２８をみると、５±３℃の温度条件で４週後に、低濃度塩化ナトリウム条件の実施例１５－１６のＭＦＩで測定した不溶性異物粒子の数（１．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）が、比較例１の結果と類似の、非常にクリーンな薬剤学的製剤であることが分かる。また、４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度条件で４週後にも、実施例１５－１６のＭＦＩで測定した不溶性異物粒子の数（１．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）が、比較例１より絶対的に低い、非常にクリーンな薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000029
表２９をみると、５±３℃の温度条件で４週後に、低濃度塩化ナトリウム条件の実施例１５－１６のＭＦＩで測定した不溶性異物粒子の数（１０．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）が、比較例１の結果と類似の、非常にクリーンな薬剤学的製剤であることが分かる。また、４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度条件で４週後にも、実施例１５－
１６のＭＦＩで測定した不溶性異物粒子の数（１０．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）が、比較例１より絶対的に低い、非常にクリーンな薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000030
表３０をみると、５±３℃の温度条件で４週後に、低濃度塩化ナトリウム条件の実施例１５－１６のＭＦＩで測定した不溶性異物粒子の数（２５．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）が、比較例１の結果と類似の、非常にクリーンな薬剤学的製剤であることが分かる。また、４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度条件で４週後にも、実施例１５－１６のＭＦＩで測定した不溶性異物粒子の数（２５．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）が、比較例１の結果と類似の、非常にクリーンな薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000031
表３１をみると、５±３℃の温度条件で４週後に、低濃度塩化ナトリウム条件の実施例１５－１６のＶＥＧＦ結合親和度が、比較例１の結果と類似の薬剤学的製剤であることが分かる。また、４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度条件で４週後にも、実施例１５－１６のＶＥＧＦ結合親和度が、比較例１と類似の薬剤学的製剤であることが分かる。
実験例４：実施例１３の長期間安定性評価による本発明の製剤の優秀性の確認
実施例１３の長期間安定性評価を、ＩＣＨ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ Ｈａｒｍｏｎｉｓａｔｉｏｎ）で提供したガイドライン（Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ Ｑ５Ｃ Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ：Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ Ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌまたはＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａｎｄ ＩＣＨ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ Ｑ１Ａ（Ｒ２）：Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ Ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ Ｎｅｗ Ｄｒｕｇ Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）に従って実施した。
前記実験例１の方法で製造した実施例１３の安定した液体薬剤学的製剤０．２７８ｍＬを、５±３℃／周辺相対湿度で密閉容器に保管した。前記温度および湿度で０ヶ月、３ヶ月、６ヶ月および９ヶ月後の安定性を確認した。ただし、タンパク質の濃度条件は４０ｍｇ／ｍＬで行った。
実施例１３の長期間安定性を確認するために、外観分析、ＳｏｌｏＶＰＥを用いたタン
パク質の濃度測定、ＳＥＣ－ＨＰＬＣを用いた主成分、高分子量、低分子量の含有量測定、還元ＣＥ－ＳＤＳを用いた１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１、１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２、および組換えられたヒトＩｇＧのＦｃの一部（１ＶＥＧＦ＋１ＶＥＧＦ２＋Ｆｃ）の含有量測定、ｃＩＥＦを用いた電荷変形体（全体１２個のピーク中の、ピーク４におけるピーク１１の占める相対含有量）測定、そしてＶＥＧＦ結合親和度、不溶性異物粒子（Ｓｕｂ－ｖｉｓｉｂｌｅ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ）の数を測定し、その結果を表３２から４１に示した。
Figure 2023535985000032
表３２をみると、実施例１３は、長期保管温度条件で９ヶ月後にも外観上の変化がなく安定した薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000033
表３３をみると、実施例１３は、長期保管温度条件で９ヶ月後にもタンパク質の濃度の変化がなく安定した薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000034
表３４をみると、実施例１３は、長期保管温度条件で９ヶ月後にも高分子量成分の含有量の変化がなく安定した薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000035
表３５をみると、実施例１３は、長期保管温度条件で９ヶ月後にも低分子量成分の含有量の変化がなく安定した薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000036
表３６をみると、実施例１３は、長期保管温度条件で９ヶ月後にも１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１、１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２、および組換えられたヒトＩｇＧのＦｃの一部（１ＶＥＧＦ１＋１ＶＥＧＦ２＋Ｆｃ）の含有量の変化がなく安定した薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000037
表３７をみると、実施例１３は、長期保管温度条件で９ヶ月後にも不溶性異物粒子の数（２．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）が低い、非常にクリーンな薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000038
表３８をみると、実施例１３は、長期保管温度条件で９ヶ月後にも不溶性異物粒子の数（１０．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）が低い、非常にクリーンな薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000039
表３９をみると、実施例１３は、長期保管温度条件で９ヶ月後にも不溶性異物粒子の数（２５．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）が低い、非常にクリーンな薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000040
表４０をみると、実施例１３は、長期保管温度条件で９ヶ月後にも電荷変形体（全体１２個のピーク中の、ピーク４におけるピーク１１の相対的な含有量）の含有量の変化がなく安定した薬剤学的製剤であることが分かる。
Figure 2023535985000041
表４１をみると、実施例１３は、長期保管温度条件で９ヶ月後にもＶＥＧＦ結合親和度の変化がなく安定した薬剤学的製剤であることが分かる。
実験例２：低分子量含有量の改善のための目標ｐＨおよびｐＨ範囲の調整
実験例２で使用された薬剤学的製剤に関連して、各緩衝液を各ｐＨに合わせて製造した後、トレハロースと塩化ナトリウムを添加し、これに組換え融合タンパク質を添加し、界面活性剤を添加して、下記表１６の試料を製造した。各成分の具体的な含有量は表１６に記載された通りである。下記の実施例はセルトリオン研究所で精製されたアフリベルセプトを添加し、比較例１はリジェネロン社のアイリーア製品で、他社で製造したアフリベルセプトが添加された試料である。実施例２と実施例１０の差異はタンパク質の濃度であり、実施例１０－１４の差異はｐＨである。各試料のガラスバイアル充填目標容量は０．２７８ｍｌであった。
実施例２、１０～１４および比較例１により製造された薬剤学的製剤を５±３℃の温度と５０±２℃の温度で保管し、５±３℃の温度で０日後、１０日後の安定性、そして５０±２℃の温度で５日後および１０日後の安定性を測定した。結果は表１７－２４に示した。
表２０をみると、５±３℃の温度条件で１０日後に、本発明の製剤の範囲を設定する実施例２、１０～１４の１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１、１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２、および組換えられたヒトＩｇＧのＦｃの一部（１ＶＥＧＦ１＋１ＶＥＧＦ２＋Ｆｃ）の含有量が、比較例１の結果と類似の薬剤学的製剤であることが分かる。これに対し、５０±２℃の温度条件で１０日後には、実施例２、１０～１４の１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１、１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２、および組換えられたヒトＩｇＧのＦｃの一部（１ＶＥＧＦ１＋１ＶＥＧＦ２＋Ｆｃ）の含有量が、比較例１よりやや低いことが分かる。実施例１１～１４の１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１、１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２、および組換えられたヒトＩｇＧのＦｃの一部（１ＶＥＧＦ１＋１ＶＥＧＦ２＋Ｆｃ）の含有量をみると、ｐＨが低いほど１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１、１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２、および組換えられたヒトＩｇＧのＦｃの一部（１ＶＥＧＦ１＋１ＶＥＧＦ２＋Ｆｃ）の含有量が低いことが分かり、実施例１１をみると、ｐＨ５．５の製剤では、目標ｐＨの薬剤学的製剤である実施例１３より分析法の変動水準を超えて１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１、１つの組換えられたヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２、および組換えられたヒトＩｇＧのＦｃの一部（１ＶＥＧＦ１＋１ＶＥＧＦ２＋Ｆｃ）の含有量が約１０％以上急激に減少するという特徴を確認することができる。したがって、本発明の製剤のｐＨ範囲は５．９～６．５に設定する方が、より優れていることを確認した。

Claims (44)

  1. （Ａ）組換え融合タンパク質；
    （Ｂ）界面活性剤；
    （Ｃ）糖またはその誘導体；および
    （Ｄ）緩衝剤を含む、安定した薬剤学的製剤。
  2. 前記薬剤学的製剤は、液状であることを特徴とする、請求項１に記載の安定した薬剤学的製剤。
  3. （Ａ）組換え融合タンパク質は、ＶＥＧＦ（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）拮抗剤であることを特徴とする、請求項１に記載の安定した薬剤学的製剤。
  4. （Ａ）組換え融合タンパク質は、ヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域を含むことを特徴とする、請求項１に記載の安定した薬剤学的製剤。
  5. （Ａ）組換え融合タンパク質は、ヒトＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１、２、またはこれらの混合物を含むことを特徴とする、請求項１に記載の安定した薬剤学的製剤。
  6. （Ａ）組換え融合タンパク質は、ヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）のＦｃ部位を含むことを特徴とする、請求項４または５に記載の安定した薬剤学的製剤。
  7. （Ａ）組換え融合タンパク質は、
    （１）配列番号２のアミノ酸２７～１２９を含むＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１要素；
    （２）配列番号２のアミノ酸１３０～２３１を含むＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２要素；および
    （３）配列番号２のアミノ酸２３２～４５７を含むＦｃ部位要素を含むことを特徴とする、請求項１に記載の安定した薬剤学的製剤。
  8. （Ａ）組換え融合タンパク質は、アフリベルセプト（Ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ）を含むことを特徴とする、請求項１に記載の安定した薬剤学的製剤。
  9. （Ａ）組換え融合タンパク質の濃度は、５～１００ｍｇ／ｍｌであることを特徴とする、請求項１に記載の安定した薬剤学的製剤。
  10. （Ｂ）界面活性剤は、ポリソルベート、ポロキサマー、またはこれらの混合物を含むことを特徴とする、請求項１に記載の安定した薬剤学的製剤。
  11. （Ｂ）界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、またはこれらの２以上の混合物を含むことを特徴とする、請求項１０に記載の安定した薬剤学的製剤。
  12. （Ｂ）界面活性剤は、ポリソルベート２０を含むことを特徴とする、請求項１１に記載の安定した薬剤学的製剤。
  13. （Ｂ）界面活性剤の濃度は、０．０１～０．１％（ｗ／ｖ）であることを特徴とする、請求項１に記載の安定した薬剤学的製剤。
  14. （Ｃ）糖は、単糖類、二糖類、オリゴ糖、多糖類、またはこれらの２以上の混合物を含
    み、（Ｃ）糖の誘導体は、糖アルコール、糖酸、またはこれらの混合物を含むことを特徴とする、請求項１に記載の安定した薬剤学的製剤。
  15. （Ｃ）糖またはその誘導体は、ソルビトール、マンニトール、トレハロース、スクロース、またはこれらの２以上の混合物を含むことを特徴とする、請求項１に記載の安定した薬剤学的製剤。
  16. （Ｃ）糖またはその誘導体は、トレハロースを含むことを特徴とする、請求項１５に記載の安定した薬剤学的製剤。
  17. （Ｃ）糖またはその誘導体の濃度は、１～２０％（ｗ／ｖ）であることを特徴とする、請求項１に記載の安定した薬剤学的製剤。
  18. （Ｄ）緩衝剤は、アミノ酸を含むことを特徴とする、請求項１に記載の安定した薬剤学的製剤。
  19. （Ｄ）緩衝剤は、遊離アミノ酸、アミノ酸塩、またはこれらの混合物を含むことを特徴とする、請求項１に記載の安定した薬剤学的製剤。
  20. （Ｄ）緩衝剤は、ヒスチジン、ヒスチジン塩、またはこれらの混合物を含むことを特徴とする、請求項１９に記載の安定した薬剤学的製剤。
  21. （Ｄ）緩衝剤の含有量は、１～２０ｍＭであることを特徴とする、請求項１に記載の安定した薬剤学的製剤。
  22. 酢酸、クエン酸、リン酸、またはこれらの混合物を含まないことを特徴とする、請求項１に記載の安定した薬剤学的製剤。
  23. （Ｅ）等張化剤を追加的に含むことを特徴とする、請求項１に記載の安定した薬剤学的製剤。
  24. （Ｅ）等張化剤は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、またはこれらの２以上の混合物を含むことを特徴とする、請求項２３に記載の安定した薬剤学的製剤。
  25. （Ｅ）等張化剤の含有量は、３０ｍＭ以下であることを特徴とする、請求項２３に記載の安定した薬剤学的製剤。
  26. ｐＨが５．０～７．０であることを特徴とする、請求項１に記載の安定した薬剤学的製剤。
  27. ＮａＦ、ＫＢｒ、ＮａＢｒ、Ｎａ２ＳＯ４、ＮａＳＣＮ、Ｋ２ＳＯ４、またはこれらの混合物を含まないことを特徴とする、請求項１に記載の安定した薬剤学的製剤。
  28. キレート剤を含まないことを特徴とする、請求項１に記載の安定した薬剤学的製剤。
  29. （Ａ）（１）配列番号２のアミノ酸２７～１２９を含むＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１要素、（２）配列番号２のアミノ酸１３０～２３１を含むＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２要素、および（３）配列番号２のアミノ酸２３２～４５７を含むＦｃ部位要素を含む組換え融合タンパク質５～１００ｍｇ／ｍｌ；
    （Ｂ）界面活性剤０．０１～０．１％（ｗ／ｖ）；
    （Ｃ）糖またはその誘導体１～２０％（ｗ／ｖ）；および
    （Ｄ）緩衝剤１～２０ｍＭ
    を含む、安定した薬剤学的製剤。
  30. （Ｅ）等張化剤３０ｍＭ以下を追加的に含むことを特徴とする、請求項２９に記載の安定した薬剤学的製剤。
  31. （Ａ）ＶＥＧＦ（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）拮抗剤；
    （Ｂ）ポリソルベート；
    （Ｃ）糖またはその誘導体；および
    （Ｄ）ヒスチジン
    を含む、安定した薬剤学的製剤。
  32. （Ｅ）塩化ナトリウムを追加的に含むことを特徴とする、請求項３１に記載の安定した薬剤学的製剤。
  33. （Ａ）（１）配列番号２のアミノ酸２７～１２９を含むＶＥＧＦ受容体の細胞外領域１要素、（２）配列番号２のアミノ酸１３０～２３１を含むＶＥＧＦ受容体の細胞外領域２要素、および（３）配列番号２のアミノ酸２３２～４５７を含むＦｃ部位要素を含む組換え融合タンパク質５～１００ｍｇ／ｍｌ；
    （Ｂ）ポリソルベート０．０１～０．１％（ｗ／ｖ）；
    （Ｃ）糖またはその誘導体１～２０％（ｗ／ｖ）；および
    （Ｄ）ヒスチジン１～２０ｍＭ
    を含む、安定した薬剤学的製剤。
  34. （Ｅ）塩化ナトリウム３０ｍＭ以下を追加的に含むことを特徴とする、請求項３３に記載の安定した薬剤学的製剤。
  35. ５±３℃９ヶ月保管時、ＨＩＡＣで測定した、１０．００μｍ以上４００．００μｍ未満の不溶性異物粒子の数が５０個以下である、請求項１～３４のいずれか１項に記載の安定した薬剤学的製剤。
  36. ５±３℃保管１０日後、９８％以上の主成分の含有量を示す、請求項１～３４のいずれか１項に記載の安定した薬剤学的製剤。
  37. ５±３℃保管１０日後、１％以下の高分子量成分の含有量を示す、請求項１～３４のいずれか１項に記載の安定した薬剤学的製剤。
  38. ５±３℃保管１０日後、０．０５％以下の低分子量成分の含有量を示す、請求項１～３４のいずれか１項に記載の安定した薬剤学的製剤。
  39. ５±３℃９ヶ月保管時、８７％以上の電荷変形体の含有量を示す、請求項１～３４のいずれか１項に記載の安定した薬剤学的製剤。
  40. ５±３℃９ヶ月保管時、９０％以上のＶＥＧＦ結合親和度を示す、請求項１～３４のいずれか１項に記載の安定した薬剤学的製剤。
  41. 眼内（ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ）投与用であることを特徴とする、請求項１～３４のいずれか１項に記載の安定した薬剤学的製剤。
  42. 使用前に、再溶解（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）ステップ、希釈（ｄｉｌｕｔｉｏｎ）ステップ、またはこれらの両方を経由しないことを特徴とする、請求項１～３４のいずれか１項に記載の安定した薬剤学的製剤。
  43. 請求項１～３４のいずれか１項に記載の安定した薬剤学的製剤が充填されたガラスバイアル（ｖｉａｌ）。
  44. 請求項１～３４のいずれか１項に記載の安定した薬剤学的製剤が充填されたプレフィルドシリンジ（ｐｒｅ－ｆｉｌｌｅｄ ｓｙｒｉｎｇｅ）。
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