TW201400122A - 包含抗－ｐｄｇｆ適體及ｖｅｇｆ拮抗劑之組合物 - Google Patents

Abstract

本發明係關於包含抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑的組合物。在某些實施例中，本發明組合物適用於治療或預防眼科疾病。

Description

包含抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑之組合物 相關申請案之交叉參考

本申請案主張2012年6月1日申請之美國臨時申請案第61/654,672號及2013年3月12日申請之美國臨時申請案第61/778,208號之權益，該等案各以全文引用的方式併入本文中。

序列表

與本申請案相關之序列表係以正文格式替代紙印複本提供且以引用的方式併入本說明書中。含有序列表之正文檔案之名稱為OPHT_010_02WO_ST25.txt。正文檔案為約35KB，創建於2013年5月29日，且正經由EFS網以電子方式提交。

本發明係關於包含抗血小板衍生生長因子(抗-PDGF)適體及血管內皮生長因子(VEGF)拮抗劑的組合物。本發明亦關於抑制細胞過度增殖或異常血管生成的方法，以及治療或預防眼科疾病的方法，包含投與含有抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑的組合物。此外，本發明係關於提供抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑之延長遞送的組合物及藥物遞送裝置。

多種眼部病症之特徵在於、起因於或引起脈絡膜、視網膜或虹膜新血管生成或視網膜水腫。此等病症包括黃斑部變性、糖尿病性視 網膜病變、高血壓性視網膜病變、中心性漿液性脈絡膜視網膜病變、囊樣黃斑部水腫、柯氏症(Coats disease)，及眼或附件贅生物，諸如脈絡膜血管瘤、視網膜色素上皮癌及眼內淋巴瘤。年齡相關性黃斑部變性(AMD)為影響超過65歲的十分之一美國人的一種疾病。一種類型之AMD，「濕性AMD」(亦稱為「新生血管性AMD」及「滲出性AMD」)僅佔AMD病例之10%，但導致了老年人中因黃斑部變性所致之法定失明病例之90%。患糖尿病10年或10年以上之所有患者中高達80%可受糖尿病性視網膜病變影響，且糖尿病性視網膜病變為成人失明之第三大病因，在美國造成約7%的失明。

在瞭解伴隨或導致眼新血管生成之分子事件上已取得進展，包括諸如血小板衍生生長因子(PDGF)及血管內皮生長因子(VEGF)之生長因子之作用。抑制此等生長因子活性的治療劑(包括由合成寡核苷酸構成的適體)已顯示可向罹患眼部血管病症(諸如AMD及糖尿病性視網膜病變)之患者提供治療益處。最近，正探究靶向PDGF或VEGF之治療劑的組合使用。

對PDGF與VEGF之組合抑制可在治療多種眼部病症方面產生更大益處，此等眼部病症之特徵在於、起因於或引起脈絡膜、視網膜或虹膜新血管生成或視網膜水腫。對各種生長因子具特異性之個別藥劑對PDGF與VEGF之組合抑制可藉由同時共投與兩種藥劑來實現。

遺憾的是，多肽治療劑易發生物理及化學降解。多肽治療劑之穩定性可受多種因素影響，包括多肽本身，例如其胺基酸序列。因此，開發包含多肽治療劑的穩定醫藥組合物面臨巨大挑戰。開發包含多肽治療劑及另一種治療劑(諸如聚核苷酸治療劑)之組合物面臨的挑戰甚至更大，原因在於需要鑑別使相容性可接受之兩種不同治療劑穩定化的賦形劑及條件。

此項技術中無疑需要包含多種治療劑的穩定組合物，包括包含 抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑的穩定組合物。

本發明提供一種組合物，其包含有效量之：(a)抗-PDGF適體或其醫藥學上可接受之鹽；及(b)VEGF拮抗劑或其醫藥學上可接受之鹽。包含有效量之(a)抗-PDGF適體或其醫藥學上可接受之鹽及(b)VEGF拮抗劑或其醫藥學上可接受之鹽的組合物為「本發明組合物」。

在某些實施例中，本發明組合物包含有效量之：(a)約0.3mg/mL至約30mg/mL拮抗劑A或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約0.5mg/mL至約20mg/mL蘭尼單抗(ranibizumab)或其醫藥學上可接受之鹽；及以下一或兩者：(c)能夠使組合物之pH值達成或維持在約pH 5.0至約pH 8.0之緩衝液；及(d)張力調節劑。在某些實施例中，緩衝液為約1mM至約20mM L-組胺酸或約1mM至約20mM磷酸鈉，且張力調節劑為約10mM至約200mM NaCl、約1%至約20%(w/v)山梨糖醇或約1%至約20%(w/v)海藻糖。在特定實施例中，本發明組合物進一步包含：(e)約0.001%(w/v)至約0.05%(w/v)界面活性劑。

在某些實施例中，本發明組合物包含有效量之：(a)約0.3mg/mL至約30mg/mL拮抗劑A或其醫藥學上可接受之鹽；及(b)約0.5mg/mL至約25mg/mL貝伐單抗(bevacizumab)或其醫藥學上可接受之鹽；及以下一或兩者：(c)能夠使組合物之pH值達成或維持在約pH 5.0至約pH 8.0之緩衝液；及(d)張力調節劑。在某些實施例中，緩衝液為約5mM至約200mM磷酸鈉或約5mM至約200mM Tris.HCl，且張力調節劑為約10mM至約200mM NaCl、約1%至約20%(w/v)山梨糖醇或約1%至約20%(w/v)海藻糖。在特定實施例中，本發明組合物進一步包含：(e)約0.001%(w/v)至約0.05%(w/v)界面活性劑。

在某些實施例中，本發明組合物包含有效量之：(a)約0.3mg/mL至約30mg/mL拮抗劑A或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約5mg/mL至約 40mg/mL阿柏西普(aflibercept)或其醫藥學上可接受之鹽；及以下一或多者：(c)能夠使組合物之pH值達成或維持在約pH 5.0至約pH 8.0之緩衝液；(d)張力調節劑；及(e)0至約10%(w/v)蔗糖。在某些實施例中，緩衝液為約5mM至約50mM磷酸鹽，且張力調節劑為約10mM至約200mM NaCl。在特定實施例中，本發明組合物進一步包含：(f)約0.001%(w/v)至約0.05%(w/v)界面活性劑。

在某些實施例中，本發明組合物包含有效量之：(a)約3mg/mL至約90mg/mL拮抗劑A或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約1.0mg/mL至約30mg/mL蘭尼單抗或其醫藥學上可接受之鹽；及以下一或兩者：(c)能夠使組合物之pH值達成或維持在約PH 5.0至約pH 8.0之緩衝液；及(d)張力調節劑。在某些實施例中，緩衝液包含約1mM至約100mM磷酸鈉或約1.0mM至約10mM組胺酸鹽酸鹽，且張力調節劑為約0.5%(w/v)至約10%(w/v)海藻糖。

本發明進一步提供治療或預防眼科疾病之方法，包含向有需要之哺乳動物投與本發明組合物。

圖1顯示在37℃下儲存8週之本發明所選組合物的AEX-HPLC層析譜。

圖2顯示在37℃下儲存8週之本發明所選組合物的WCX-HPLC層析譜。

圖3顯示在37℃下儲存8週之本發明所選組合物的SE-HPLC層析譜。

圖4顯示在37℃下儲存之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的AEX-HPLC趨勢圖。

圖5顯示在37℃下儲存之本發明所選組合物中之蘭尼單抗穩定性的WCX-HPLC趨勢圖。

圖6顯示在37℃下儲存之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖7顯示在37℃下儲存之本發明所選組合物中之蘭尼單抗穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖8顯示在25℃下儲存之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的AEX-HPLC趨勢圖。

圖9顯示在25℃下儲存之本發明所選組合物中之蘭尼單抗穩定性的WCX-HPLC趨勢圖。

圖10顯示在25℃下儲存之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖11顯示在25℃下儲存之本發明所選組合物中之蘭尼單抗穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖12顯示在4℃下儲存之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的AEX-HPLC趨勢圖。

圖13顯示在4℃下儲存之本發明所選組合物中之蘭尼單抗穩定性的WCX-HPLC趨勢圖。

圖14顯示在4℃下儲存之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖15顯示在4℃下儲存之本發明所選組合物中之蘭尼單抗穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖16A及16B顯示在37℃下儲存之具有不同pH值之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的AEX-HPLC趨勢圖。圖16A顯示包含5%山梨糖醇之不同pH值組合物中之拮抗劑A隨時間變化之純度百分比，且圖16B顯示包含130mM NaCl之不同pH值組合物中之拮抗劑A隨時間變化之純度百分比。

圖17A及17B顯示在37℃下儲存之具有不同pH值之所選組合物中 之蘭尼單抗穩定性的WCX-HPLC趨勢圖。圖17A顯示包含5%山梨糖醇之不同pH值組合物中之蘭尼單抗隨時間變化之純度百分比，且圖17B顯示包含130mM NaCl之不同pH值組合物中之蘭尼單抗隨時間變化之純度百分比。

圖18顯示在37℃下儲存之具有不同pH值之所選組合物中之拮抗劑A穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖19A及19B顯示在37℃下儲存之具有不同pH值之本發明所選組合物中之蘭尼單抗穩定性的SE-HPLC趨勢圖。圖19A顯示包含5%山梨糖醇之組合物中之蘭尼單抗的純度百分比，且圖19B顯示包含130mMNaCl之組合物中之蘭尼單抗的純度百分比。

圖20顯示在37℃下儲存之具有不同pH值之包含各種張力調節劑之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的AEX-HPLC趨勢圖。

圖21顯示在37℃下儲存之包含各種張力調節劑之本發明所選組合物(pH 8.0)中之拮抗劑A穩定性的AEX-HPLC趨勢圖。

圖22顯示在37℃下儲存之具有不同pH值之包含各種張力調節劑之本發明所選組合物中之蘭尼單抗穩定性的WCX-HPLC趨勢圖。

圖23顯示在37℃下儲存之具有不同pH值之包含各種張力調節劑之本發明所選組合物中之蘭尼單抗穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖24顯示在37℃下儲存之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖25A及25B顯示在25℃(圖25A)及37℃(圖25B)下儲存之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的AEX-HPLC趨勢圖。

圖26A及26B顯示在25℃(圖26A)及37℃(圖26B)下儲存之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的WCX-HPLC趨勢圖。

圖27A、27B及27C顯示在37℃(圖27A)、25℃(圖27B)及4℃(圖27C)下儲存8週之本發明所選組合物的SE-HPLC層析譜。

圖28顯示在4℃、25℃及37℃下儲存之組合物F6中之拮抗劑A穩定性的AEX-HPLC趨勢圖。

圖29顯示在4℃、25℃及37℃下儲存之組合物F6中之蘭尼單抗穩定性的WCX-HPLC趨勢圖。

圖30顯示在4℃、25℃及37℃下儲存之組合物F6中之拮抗劑A穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖31顯示在4℃、25℃及37℃下儲存之本發明所選組合物中之蘭尼單抗穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖32顯示在37℃下儲存2週之本發明所選組合物的AEX-HPLC層析譜。

圖33顯示在25℃下儲存8週之本發明所選組合物的WCX-HPLC層析譜。

圖34顯示在37℃下儲存8週之本發明所選組合物的SE-HPLC層析譜。

圖35顯示在37℃下儲存之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的AEX-HPLC趨勢圖。

圖36顯示在37℃下儲存之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的AEX-HPLC趨勢圖。

圖37顯示在37℃下儲存之本發明所選組合物中之貝伐單抗穩定性的WCX-HPLC趨勢圖。

圖38顯示在37℃下儲存之本發明所選組合物中之貝伐單抗穩定性的WCX-HPLC趨勢圖。

圖39顯示在37℃下儲存之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖40顯示在37℃下儲存之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖41顯示在37℃下儲存之本發明所選組合物中之貝伐單抗穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖42顯示在37℃下儲存之本發明所選組合物中之貝伐單抗穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖43顯示在25℃下儲存之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的AEX-HPLC趨勢圖。

圖44顯示在25℃下儲存之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的AEX-HPLC趨勢圖。

圖45顯示在25℃下儲存之本發明所選組合物中之貝伐單抗穩定性的WCX-HPLC趨勢圖。

圖46顯示在25℃下儲存之本發明所選組合物中之貝伐單抗穩定性的WCX-HPLC趨勢圖。

圖47顯示在25℃下儲存之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖48顯示在25℃下儲存之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖49顯示在25℃下儲存之本發明所選組合物中之貝伐單抗穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖50顯示在25℃下儲存之本發明所選組合物中之貝伐單抗穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖51顯示在4℃下儲存之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的AEX-HPLC趨勢圖。

圖52顯示在4℃下儲存之本發明所選組合物中之貝伐單抗穩定性的WCX-HPLC趨勢圖。

圖53顯示在4℃下儲存之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖54顯示在4℃下儲存之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖55顯示在4℃下儲存之本發明所選組合物中之貝伐單抗穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖56顯示在37℃下儲存之具有不同pH值之本發明所選含山梨糖醇組合物中之拮抗劑A穩定性的AEX-HPLC趨勢圖。

圖57顯示在37℃下儲存之具有不同pH值之本發明所選含山梨糖醇組合物中之貝伐單抗A穩定性的WCX-HPLC趨勢圖。

圖58顯示在37℃下儲存之具有不同pH值之本發明所選含山梨糖醇組合物中之拮抗劑A穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖59顯示在37℃下儲存之具有不同pH值之本發明所選含山梨糖醇組合物中之貝伐單抗A穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖60A及60B顯示在37℃下儲存之具有不同pH值之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的AEX-HPLC趨勢圖。圖60A顯示包含5%山梨糖醇之不同pH值組合物中之拮抗劑A隨時間變化之純度百分比，且圖60B顯示包含130mM NaCl或150mM NaCl之不同pH值組合物中之拮抗劑A隨時間變化之純度百分比。

圖61A及61B顯示在37℃下儲存之具有不同pH值之本發明所選組合物中之貝伐單抗穩定性的WCX-HPLC趨勢圖。圖61A顯示包含5%山梨糖醇之組合物中之貝伐單抗隨時間變化之純度百分比，且圖61B顯示包含130mM NaCl或150mM NaCl之不同pH值組合物中之貝伐單抗隨時間變化之純度百分比。

圖62A及62B顯示在37℃下儲存之具有不同pH值之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的SE-HPLC趨勢圖。圖62A顯示包含5%山梨糖醇之組合物中之拮抗劑A的純度百分比，且圖62B顯示包含130mM NaCl或150mM NaCl之不同pH值組合物中之拮抗劑A隨時間變化之純 度百分比。

圖63A及63B顯示在37℃下儲存之具有不同pH值之本發明所選組合物中之貝伐單抗穩定性的SE-HPLC趨勢圖。圖63A顯示包含5%山梨糖醇之組合物中之拮抗劑A的純度百分比，且圖63B顯示包含130mM NaCl或150mM NaCl之不同pH值組合物中之拮抗劑A隨時間變化之純度百分比。

圖64顯示在37℃下儲存8週之包含各種濃度之拮抗劑A之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的AEX-HPLC趨勢圖。

圖65顯示在37℃下儲存8週之包含各種濃度之拮抗劑A之本發明所選組合物中之貝伐單抗穩定性的WCX-HPLC趨勢圖。

圖66顯示在37℃下儲存之包含各種濃度之拮抗劑A之本發明所選組合物中之拮抗劑A穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖67顯示在37℃下儲存8週之包含各種濃度之拮抗劑A之本發明所選組合物中之貝伐單抗穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖68顯示在不同儲存溫度下組合物F19中之拮抗劑A穩定性的AEX-HPLC趨勢圖。

圖69顯示在不同儲存溫度下組合物F19中之貝伐單抗穩定性的WCX-HPLC趨勢圖。

圖70顯示在不同儲存溫度下組合物F19中之拮抗劑A穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖71顯示在不同儲存溫度下組合物F19中之貝伐單抗穩定性的SE-HPLC趨勢圖。

圖72顯示在不同儲存溫度下組合物F19與組合物F25中之拮抗劑A穩定性的AEX-HPLC趨勢圖比較。

圖73顯示在不同儲存條件下組合物F19與組合物F25中之拮抗劑A穩定性的SE-HPLC趨勢圖比較。

圖74顯示在不同儲存溫度下組合物F19與組合物F18中之貝伐單抗穩定性的WCX-HPLC趨勢圖比較。

圖75顯示在不同儲存條件下組合物F19與組合物F18中之貝伐單抗穩定性的SE-HPLC趨勢圖比較。

圖76顯示的圖描繪本發明之各種組合物對VEGF誘導之TF表現的抑制情況。

圖77顯示的圖描繪本發明之各種組合物對PDGF誘導之BTG2表現的抑制情況。

圖78顯示拮抗劑A之結構(畫面A至F)，其中符號-表示接續前一畫面。

圖79A及79B顯示的圖描繪組合物F27在不同儲存條件下的減除微血流成像(micro-flow imaging，MFI)結果。該等圖提供的粒子計數(每毫升粒子數)係在5℃或30℃下在小瓶或注射器中儲存時針對所列的各等效圓直徑範圍確定。圖79A提供1μm至100μm等效圓直徑之不同範圍內的粒子計數，且圖79B提供10μm至100μm等效圓直徑之選定範圍內的粒子計數。自上而下之圖例對應於各粒子直徑範圍自左往右之條形圖。

圖80A及80B顯示的圖描繪組合物F28在不同儲存條件下之減除MFI結果。該等圖提供的粒子計數(每毫升粒子數)係在5℃或30℃下在小瓶或注射器中儲存時針對所列的各等效圓直徑範圍確定。圖80A提供1μm至100μm等效圓直徑之不同範圍內的粒子計數，且圖80B提供10μm至100μm等效圓直徑之選定範圍內的粒子計數。自上而下之圖例對應於各粒子直徑範圍自左往右之條形圖。

圖81A及81B顯示的圖描繪組合物F29在不同儲存條件下之減除MFI結果。該等圖提供的粒子計數(每毫升粒子數)係在5℃或30℃下在小瓶或注射器中儲存時針對所列的各等效圓直徑範圍確定。圖81A提 供1μm至100μm等效圓直徑之不同範圍內的粒子計數，且圖81B提供10μm至100μm等效圓直徑之選定範圍內的粒子計數。自上而下之圖例對應於各粒子直徑範圍自左往右之條形圖。

圖82A及82B顯示的圖描繪組合物F30在不同儲存條件下之減除MFI結果。該等圖提供的粒子計數(每毫升粒子數)係在5℃或30℃下在小瓶或注射器中儲存時針對所列的各等效圓直徑範圍確定。圖82A提供1μm至100μm等效圓直徑之不同範圍內的粒子計數，且圖82B提供10μm至100μm等效圓直徑之選定範圍內的粒子計數。自上而下之圖例對應於各粒子直徑範圍自左往右之條形圖。

圖83A及83B顯示的圖描繪組合物F31在不同儲存條件下之減除MFI結果。該等圖提供的粒子計數(每毫升粒子數)係在5℃或30℃下在小瓶或注射器中儲存時針對所列的各等效圓直徑範圍確定。圖83A提供1μm至100μm等效圓直徑之不同範圍內的粒子計數，且圖83B提供10μm至100μm等效圓直徑之選定範圍內的粒子計數。自上而下之圖例對應於各粒子直徑範圍自左往右之條形圖。

圖84A及84B顯示組合物F27至F31在不同儲存條件下之減除MFI結果的比較圖。該等圖提供的粒子計數(每毫升粒子數)係在5℃或30℃下在小瓶或注射器中儲存時針對所列的各等效圓直徑範圍確定。圖84A提供1μm至100μm等效圓直徑之不同範圍內的粒子計數，且圖84B提供10μm至75μm等效圓直徑之選定範圍內的粒子計數。圖84A中，針對在30℃下在小瓶中儲存之組合物F31所獲得之<1μm至<2μm等效圓直徑範圍內的粒子計數為217,404，其超過圖y軸中所繪之值，因此此值經指示為高於對應條形圖。圖84B中，針對在30℃下在小瓶中儲存之組合物F31所獲得之<10μm至<25μm等效圓直徑範圍內的粒子計數為3,044，其超過圖y軸中所繪之值，因此此值經指示為高於對應條形圖。自上而下之圖例對應於各粒子直徑範圍自左往右之條形 圖。

圖85顯示的圖描繪經1.65nM PDGF-BB及所指示濃度之拮抗劑A(F32)處理之NIH 3T3細胞的相對BTG2基因表現。

圖86顯示的圖描繪經1.65nM PDGF-BB及所指示濃度之拮抗劑A與阿柏西普組合(F33)或單獨拮抗劑A(F34)處理之NIH 3T3細胞的相對BTG2基因表現。

定義及縮寫

如本文所用，以下術語及片語具有本文所述含義。

術語「約」當結合所提及之指示數值使用時，意謂所提及之指示數值加上或減去該所提及指示數值之至多10%。舉例而言，「約100」意謂90至110。

術語「拮抗劑」係指部分或完全抑制靶分子活性或產生的藥劑。詳言之，如本文中選擇性應用之術語「拮抗劑」意謂能夠降低靶分子之基因表現量、mRNA含量、蛋白質含量或蛋白質活性的藥劑。拮抗劑之說明性形式包括例如蛋白質、多肽、肽(諸如環肽)、抗體或抗體片段、肽模擬劑、核酸分子、反義分子、核糖酶、適體、RNAi分子及有機小分子。拮抗劑抑制作用之說明性非限制性機制包括抑制配位體合成及穩定性中之一或兩者(例如使用靶向配位體基因/核酸之反義分子、核糖酶或RNAi組合物)；阻斷配位體與其同源受體之結合(例如使用抗配位體適體、抗體、抗受體抗體或可溶性誘餌同源受體或其片段)；抑制受體合成及穩定性中之一或兩者(例如使用靶向配位體受體基因/核酸之反義分子、核糖酶或RNAi組合物)；阻斷受體與其同源反應元件之結合(例如使用抗受體抗體)及阻斷受體同源配位體對該受體之活化(例如使用受體酪胺酸激酶抑制劑)。另外，拮抗劑可直接或間接地抑制靶分子。

如本文所用，「抗體」包括完整抗體及其任何抗原結合片段或單鏈。因此，術語「抗體」包括所含分子包含具有結合至抗原之生物活性之免疫球蛋白分子之至少一部分的任何蛋白質或肽。此分子之實例可包含重鏈或輕鏈之互補決定區(CDR)或其配位體結合部分、重鏈或輕鏈可變區、重鏈或輕鏈恆定區、構架區(FR)或其任何部分，或結合蛋白之至少一部分。抗體包括單株抗體及多株抗體。

術語「抗體片段」包括抗體之一部分，此部分為抗體之抗原結合片段或單鏈。抗體片段可為以合成或遺傳方式工程改造之多肽。術語抗體之「抗原結合部分」所涵蓋之結合片段之實例包括：(i)Fab片段：由V_L、V_H、C_L及C_H1域組成之單價片段；(ii)F(ab')₂片段：包含由位於鉸鏈區之二硫橋連接之兩個Fab片段之二價片段；(iii)由V_H及C_H1域組成之Fd片段；(iv)由抗體單臂之V_L及V_H域組成之Fv片段；(v)由V_H域組成之dAb片段(Ward等人，(1989)Nature 341 544-546)及(vi)經分離之互補決定區(CDR)。此外，儘管Fv片段之兩個域(V_L及V_H)係由各別基因編碼，但其可使用重組方法，由合成連接子連接，此連接子使其能夠經製成蛋白質單鏈，其中V_L區與V_H區配對而形成單價分子(稱為單鏈Fv(scFv)，參看例如Bird等人，(1988)Science 242 423-426；及Huston等人，(1988)Proc Natl Acad Sci USA 85 5879-5883)。該等單鏈抗體亦意欲涵蓋於術語抗體之「抗原結合片段」內。此等抗體片段係使用熟習此項技術者已知之習知技術獲得，且此等片段可利用與完整抗體相同的方式篩檢以供利用。

術語「適體」係指對標靶具有抑制作用的肽或核酸。適體對標靶之抑制可如下發生：結合標靶、以催化方式改變標靶、以修飾標靶或標靶之功能活性的方式與標靶反應、以離子或共價方式連接至標靶(如自殺抑制劑)或促進標靶與另一分子之間的反應。適體可為肽、核糖核苷酸、脫氧核糖核苷酸、其他核酸或不同類型核酸之混合物。適 體可包含一或多種經修飾之胺基酸、鹼基、糖、聚乙二醇間隔子或磷酸酯主鏈單元，如本文中進一步詳述。適體可為聚乙二醇化或未聚乙二醇化適體。舉例而言，一或多條聚乙二醇鏈可經由連接子連接至核酸適體之5'端。

「組合物」可包含活性劑及惰性或活性載劑。組合物適用於活體外、活體內或離體診斷性或治療性用途。在特定實施例中，組合物為無菌的，實質上不含內毒素或在所用劑量或濃度下對接受者無毒。

術語「標記」包括(但不限於)放射性同位素、螢光團、化學發光部分、酶、酶受質、酶輔因子、酶抑制劑、染料、金屬離子、配位體(例如生物素或半抗原)及其類似物。螢光團標記之實例包括螢光素、若丹明(rhodamine)、丹磺醯、繖酮(umbelliferone)、得克薩斯紅(Texas red)及魯米諾(luminol)。標記之其他實例包括NADPH、α-β-半乳糖苷酶及辣根過氧化物酶。

術語「核酸」係指聚核苷酸，諸如脫氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)。該術語亦包括由核苷酸類似物製得的RNA或DNA類似物，及如適合於所述實施例之單股(有義或反義)及雙股聚核苷酸、所表現之序列標籤(EST)、染色體、cDNA、mRNA及rRNA。核酸包括核酸之經修飾形式，根據標準建構單元(腺苷、胞苷、鳥苷、胸苷及尿苷)，其在結構上有別於天然存在之核酸結構。修飾可針對主鏈、糖或核鹼基且可天然存在或人工引入。舉例而言，核酸可在其主鏈內加以修飾。說明性修飾揭示於本文中。核酸可包括核酸適體及對映異構適體(spiegelmer)。

在一些實施例中，拮抗劑A以經修飾形式存在。拮抗劑A之經修飾形式在於其所含的核苷酸呈如本文所述之修飾形式，其中該核苷酸在拮抗劑A中以未修飾形式存在。

術語「RNA干擾」、「RNAi」、「miRNA」及「siRNA」係指藉以 降低基因或基因產物之表現的任何方法，此降低係藉由將一或多個與所關注基因(尤其與所關注基因之信使RNA，例如PDGF或VEGF)同源的雙股RNA引入靶細胞內來達成。

術語「新血管生成」係指異常組織或異常位置中之新血管形成。

術語「血管生成」係指正常或異常組織或位置中之新血管形成。

術語「眼科疾病」包括眼疾病及眼附件疾病。

術語「眼新生血管性病症」係指以新血管生成為特徵之眼部病症。某些癌症為眼新生血管性病症。在一個實施例中，眼新生血管性病症為不同於癌症之病症。不同於癌症之眼新生血管性病症之實例包括糖尿病性視網膜病變及年齡相關性黃斑部變性。

術語「哺乳動物」包括人類及非人類哺乳動物，諸如人類、小鼠、大鼠、兔、猴、牛、豬、綿羊、馬、犬及貓。

術語「蛋白質」與「多肽」可互換使用且在其最寬廣之意義上係指具有兩個或兩個以上次單元胺基酸、胺基酸類似物或肽模擬物之化合物。此等次單元可經肽鍵連接。在另一個實施例中，次單元可經其他鍵連接，例如酯、醚等。可構成蛋白質序列或肽序列之最大胺基酸數不受限制。

如本文所用，術語「胺基酸」係指天然或非天然或合成胺基酸，包括甘胺酸及D光學異構體與L光學異構體、胺基酸類似物及肽模擬物。

術語「PDGF」係指調節細胞生長或分裂的血小板衍生生長因子。如本文所用，術語「PDGF」包括PDGF之各種亞型，包括PDGF-B(例如GenBank寄存編號X02811及CAA26579)、PDGF-A(GenBank寄存編號X06374及CAA29677)、PDGF-C(GenBank寄存編號NM 016205 及NP 057289)、PDGF-D變異體1及2(GenBank寄存編號NM 025208、NP 079484、NM 033135、NP 149126)，及其二聚形式，包括PDGF-AA、PDGF-AB、PDGF-BB、PDGF-CC及PDGF-DD。血小板衍生生長因子包括A鏈(PDGF-A)及B鏈(PDGF-B)之均二聚物或雜二聚物，其經由結合至兩種相關受體酪胺酸激酶血小板衍生生長因子細胞表面受體(亦即PDGFR)PDGFR-α(參見GenBank寄存編號NM 006206及NP 006197)及PDGFR-β(參見GenBank寄存編號NM002609及NP002600)及此兩種細胞表面受體之二聚來發揮其作用。關於PDGF序列，亦參見PCT申請公開案第WO2010/127029號，該案以全文引用的方式併入本文中。另外，已鑑別PDGFR複合物之另外兩種蛋白酶活化配位體PDGF-C及PDGF-D(Li等人，(2000)Nat.Cell.Biol.2：302-9；Bergsten等人，(2001)Nat.Cell.Biol.3：512-6；及Uutele等人，(2001)Circulation 103：2242-47)。由於PDGFR之配位體結合特異性不同，因此已知PDGFR-α/α結合PDGF-AA、PDGF-BB、PDGF-AB及PDGF-CC；PDGFR-β/β結合PDGF-BB及PDGF-DD；而PDGFR-α/β結合PDGF-AB、PDGF-BB、PDGF-CC及PDGF-DD(Betsholtz等人，(2001)BioEssavs 23：494-507)。如本文所用，術語「PDGF」亦指經由反應性細胞類型上PDGFR之結合及活化來誘導DNA合成及有絲分裂發生的生長因子類別之彼等成員。PDGF可實現例如：定向細胞遷移(趨化性)及細胞活化；磷脂酶活化；增強之磷脂醯肌醇轉換及前列腺素代謝；刺激反應性細胞合成膠原與膠原酶；改變細胞代謝活性，包括基質合成、細胞激素產生及脂蛋白吸收；間接地誘導缺乏PDGF受體之細胞之增殖反應；及強血管收縮活性。術語「PDGF」可用於指「PDGF」多肽、「PDGF」編碼基因或核酸，或其二聚形式。術語「PDGF-A」係指PDGF之A鏈多肽或其對應編碼基因或核酸。術語「PDGF-B」係指PDGF之B鏈多肽或其對應編碼基因或核酸。術語 「PDGF-C」係指PDGF之C鏈多肽或其對應編碼基因或核酸。術語「PDGF-D」係指PDGF之D鏈多肽或其對應編碼基因或核酸，包括PDGF之D鏈多肽之變異體1及2。術語「PDGF-AA」係指具有兩個PDGF-A鏈多肽之二聚物。術語「PDGF-AB」係指具有一個PDGF-A鏈多肽及一個PDGF-B鏈多肽之二聚物。術語「PDGF-BB」係指具有兩個PDGF-B鏈多肽之二聚物。術語「PDGF-CC」係指具有兩個PDGF-C鏈多肽之二聚物。術語「PDGF-DD」係指具有兩個PDGF-D鏈多肽之二聚物。

術語「VEGF」係指誘導血管生成或血管生成過程的血管內皮生長因子。如本文所用，術語「VEGF」包括VEGF(亦稱為血管通透因子(VPF)及VEGF-A)(參見GenBank寄存編號NM 003376及NP 003367)之各種亞型，此等亞型藉由例如VEGF-A/VPF基因之替代性拼接所產生，包括VEGF₁₂₁、VEGF₁₆₅及VEGF₁₈₉。關於VEGF序列，亦參見PCT申請公開案第WO2010/127029號，該案以全文引用的方式併入本文中。此外，如本文所用，術語「VEGF」包括VEGF相關血管生成因子，諸如PIGF(胎盤生長因子)、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D及VEGF-E，其經由同源VEFG受體(亦即VEGFR)起作用以誘導血管生成或血管生成過程。術語「VEGF」包括結合至VEGF受體之生長因子類別之任何成員，VEGF受體諸如VEGFR-I(FIt-I)(參見GenBank寄存編號AF063657及PCT申請公開案第WO 2010/127029號之SID NO：8)、VEGFR-2(KDR/Flk-1)(參見GenBank寄存編號AF035121及AAB88005)或VEGFR-3(FLT-4)。術語「VEGF」可用於指「VEGF」多肽或「VEGF」編碼基因或核酸。

術語「PDGF拮抗劑」通常係指部分或完全降低或抑制PDGF活性或產生的藥劑。PDGF拮抗劑可直接或間接地降低或抑制特定PDGF(PDGF-B)之活性或產生。此外，與「拮抗劑」之上述定義一致， 「PDGF拮抗劑」包括作用於PDGF配位體或其同源受體以便降低或抑制PDGF相關受體信號的藥劑。「PDGF拮抗劑」之實例包括靶向PDGF核酸之反義分子、核糖酶或RNAi；針對PDGF自身或其受體或可溶性PDGF受體誘餌(阻止PDGF與其同源受體結合)的抗-PDGF適體、抗-PDGF抗體；靶向同源PDGF受體(PDGFR)核酸的反義分子、核糖酶或RNAi；結合至同源PDGFR受體的抗-PDGFR適體或抗-PDGFR抗體；及PDGFR酪胺酸激酶抑制劑。

術語「VEGF拮抗劑」通常係指部分或完全降低或抑制VEGF活性或產生的藥劑。VEGF拮抗劑可直接或間接地降低或抑制特定VEGF(VEGF₁₆₅)之活性或產生。此外，與「拮抗劑」之上述定義一致，「VEGF拮抗劑」包括作用於VEGF配位體或其同源受體以便降低或抑制VEGF相關受體信號的藥劑。「VEGF拮抗劑」之實例包括靶向VEGF核酸之反義分子、核糖酶或RNAi；針對VEGF自身或其受體或可溶性VEGF受體誘餌(阻止VEGF與其同源受體結合)的抗-VEGF適體、抗-VEGF抗體；靶向同源VEGF受體(VEGFR)核酸的反義分子、核糖酶或RNAi；結合至同源VEGFR受體的抗-VEGFR適體或抗-VEGFR抗體；及VEGFR酪胺酸激酶抑制劑。如本文所用，術語「VEGF拮抗劑」用於統稱蘭尼單抗、貝伐單抗及阿柏西普。

「醫藥學上可接受之鹽」包括硫酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異菸鹼酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、丹寧酸鹽(tannate)、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、丁二酸鹽、順丁烯二酸鹽、龍膽酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡糖酸鹽、葡萄糖醛酸鹽、葡萄糖二酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、麩胺酸鹽、甲烷磺酸鹽、乙烷磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、樟腦磺酸鹽、雙羥萘酸鹽、苯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙烯酸鹽、氯苯甲酸鹽、二硝 基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、鄰乙醯氧基苯甲酸鹽、萘-2-苯甲酸鹽、異丁酸鹽、苯基丁酸鹽、α-羥基丁酸鹽、丁炔-1,4-二甲酸鹽、己炔-1,4-二甲酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、肉桂酸鹽、乙醇酸鹽、庚酸鹽、馬尿酸鹽、蘋果酸鹽、羥基順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、苦杏仁酸鹽、甲磺酸鹽、菸鹼酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、對苯二甲酸鹽、丙炔酸鹽、丙酸鹽、苯基丙酸鹽、癸二酸鹽、辛二酸鹽、對溴苯磺酸鹽、氯苯磺酸鹽、乙基磺酸鹽、2-羥基乙基磺酸鹽、甲基磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、萘-1,5-磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽及酒石酸鹽。術語「醫藥學上可接受之鹽」亦指具有酸性官能基(諸如羧酸官能基)之本發明拮抗劑與鹼之鹽。適合鹼包括(但不限於)鹼金屬(諸如鈉、鉀及鋰)之氫氧化物；鹼土金屬(諸如鈣及鎂)之氫氧化物；其他金屬(諸如鋁及鋅)之氫氧化物；氨，及有機胺，諸如未經取代或經羥基取代之單烷基胺、二烷基胺或三烷基胺、二環己基胺、三丁基胺、吡啶、N-甲基、N-乙基胺、二乙基胺、三乙基胺；單-、雙-或參-(2-OH-低碳烷基胺)，諸如單-、雙-或參-(2-羥基乙基)胺；2-羥基-第三丁基胺或參-(羥甲基)甲胺；N,N-二-低碳烷基-N-(羥基-低碳烷基)-胺，諸如N,N-二甲基-N-(2-羥基乙基)胺或三-(2-羥基乙基)胺、N-甲基-D-葡糖胺；及胺基酸，諸如精胺酸、賴胺酸及其類似物。術語「醫藥學上可接受之鹽」亦包括本發明化合物之水合物。

術語「有效量」當結合本發明組合物或眼科疾病之治療或預防使用時，係指適用於治療或預防眼科疾病之PDGF拮抗劑與VEGF拮抗劑之組合量。「有效量」可視投藥方式、眼科疾病之具體位置、哺乳動物之年齡、體重及一般健康狀況而不同。本發明組合物中各拮抗劑之有效量為適用於用組合物治療或預防眼科疾病的各拮抗劑之量，即使在VEGF拮抗劑不存在時PDGF拮抗劑之量或在PDGF拮抗劑不存在時VEGF拮抗劑之量對於治療或預防眼科疾病無效。

多肽X之「變異體」係指多肽X之胺基酸序列在一或多個胺基酸殘基處發生變化的多肽。變異體可具有「保守」變化，其中經取代之胺基酸具有相似結構或化學性質(例如異白胺酸置換白胺酸)。變異體很少會具有「非保守」變化(例如色胺酸置換甘胺酸)。類似的較少變異亦可包括胺基酸缺失或插入，或兩者。判定哪些胺基酸殘基可經取代、插入或缺失而不消除生物或免疫活性之導則可利用此項技術中熟知之電腦程式確定，例如LASERGENE軟體(DNASTAR)。

術語「變異體」在聚核苷酸序列之上下文中使用時，可涵蓋與基因、其編碼序列、適體或其他聚核苷酸序列之變異體有關的聚核苷酸序列。與參考基因、編碼序列、適體或其他聚核苷酸序列相比，變異體可包括一或多個核苷酸或核苷取代、添加或插入。此定義亦包括例如「對偶基因」、「拼接」、「物種」或「多形性」變異體。拼接變異體可與參考分子具有顯著一致性，但因mRNA加工期間外顯子之替代性拼接而通常具有較多或較少數目之聚核苷酸。物種變異體為因物種而異之聚核苷酸序列。多形性變異體為指定物種之個體之間特定基因之聚核苷酸序列之變異。

如本文所用，術語「賦形劑」係指常用作稀釋劑、媒劑、防腐劑、黏合劑或用於活性劑之穩定劑的通常為惰性的物質且包括(但不限於)蛋白質(例如血清白蛋白等)、胺基酸(例如天冬胺酸、麩胺酸、賴胺酸、精胺酸、甘胺酸、組胺酸、丙胺酸等)、脂肪酸及磷脂(例如烷基磺酸鹽、辛酸鹽等)、界面活性劑(例如SDS、聚山梨醇酯、非離子界面活性劑等)、醣類(例如蔗糖、麥芽糖、海藻糖等)及多元醇(例如甘露糖醇、山梨糖醇等)。亦參見Remington's Pharmaceutical Sciences(Joseph P.Remington，第18版，Mack Publishing Co.,Easton,Pa.)及Handbook of Pharmaceutical Excipients(Raymond C.Rowe，第5版，APhA Publications,Washington,D.C.)，該等文獻以全文引用的方 式併入本文中。在某些實施例中，賦形劑賦予組合物以有益的物理性質，諸如蛋白質、聚核苷酸、適體或小分子穩定性增強，蛋白質、聚核苷酸、適體或小分子溶解度提高，或黏度降低。在一些實施例中，組合物包含複數種活性劑，且賦形劑有助於使活性劑穩定。

如本文所用之術語「緩衝液」意指使醫藥製劑之pH值穩定的醫藥學上可接受之賦形劑。適合緩衝液在此項技術中已熟知。醫藥學上可接受之適合緩衝液包括(但不限於)乙酸鹽緩衝液、組胺酸緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液、丁二酸鹽緩衝液、tris緩衝液及磷酸鹽緩衝液。製備此等緩衝液之方法在此項技術中已知。不依賴於所用緩衝液，可使用此項技術中已知之酸或鹼(例如丁二酸、鹽酸、乙酸、磷酸、硫酸及檸檬酸、氫氧化鈉及氫氧化鉀)將pH值調整至約4.5至約7.0，或約5.5至約6.5或約6.0的值。適合緩衝液包括(不限於)組胺酸緩衝液、2-嗎啉基乙烷磺酸(MES)、二甲基胂酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、丁二酸鹽及檸檬酸鹽緩衝液。磷酸鹽緩衝液之其他實例亦包括(不限於)磷酸鈉緩衝液及磷酸鉀緩衝液。磷酸鈉緩衝液可如下製備：例如將NaH₂PO₄(一鹼價)溶液與Na₂HPO₄(二鹼價)溶液合併，接著用磷酸或氫氧化鈉調整所合併溶液之pH值以達成所要pH值。2-胺基-2-羥基甲基-丙烷-1,3-二醇(Tris)緩衝液可如下製備：例如使用HCl調整Tris溶液之pH值以達成所要pH值，例如約pH 7.0至約pH 9.0範圍內之pH值。L-組胺酸亦可用作本發明之緩衝液。在某些實施例中，緩衝液能夠使本發明組合物之pH值達成或維持在所要範圍內或所要pH值或接近所要pH值，例如在儲存期間，例如在室溫或4℃下儲存至少一週、至少一個月、至少兩個月、至少四個月、至少六個月、至少一年或至少兩年期間。在某些實施例中，緩衝液濃度為約0.01mM至約1000mM、約0.1mM至約1000mM、約0.1mM至約500mM、約0.1至約200mM、約0.1至約100mM、約1mM至約1000mM、約1mM至約500mM、約1mM至 約200mM、約1mM至約100mM、約1mM至約50mM、約2mM至約60mM、約4mM至約60mM、或約4mM至約40mM、約5mM至約20mM、或約5mM至約25mM。

醫藥學上可接受之「低溫防護劑」在此項技術中已知且包括(不限於)例如蔗糖、海藻糖及甘油。醫藥學上可接受之低溫防護劑向組合物或其中之一或多種活性成分提供穩定性保護以免受冷凍或凍乾影響。

如本文所用之術語「張力劑」或「張力調節劑」意指醫藥學上可接受之用於調節組合物之張力的藥劑。適合張力劑包括(但不限於)氯化鈉、山梨糖醇、海藻糖、氯化鉀、甘油及選自如本文所定義之胺基酸、糖之群之任何組分，以及其組合。在某些實施例中，張力劑的使用量可為約1mM至約1000mM、約1mM至約500mM、約5mM至約500mM、約10mM至約450mM、約20mM至約400mM、約50mM至約300mM、約100mM至約200mM、或約125mM至約175mM。在某些實施例中，張力劑包含以約5mM至約500mM存在於組合物中的胺基酸。

術語「穩定劑」表示醫藥學上可接受之賦形劑，其保護活性醫藥成分或藥劑或組合物以免在製造、儲存及應用期間發生化學或物理降解。穩定劑包括(但不限於)糖、胺基酸、多元醇、界面活性劑、抗氧化劑、防腐劑、環糊精(例如羥基丙基-β-環糊精、磺酸基丁基乙基-β-環糊精、β-環糊精)、聚乙二醇(例如PEG 3000、PEG 3350、PEG 4000、PEG 6000)、白蛋白(例如人類血清白蛋白(HSA)、牛血清白蛋白(BSA))、鹽(例如氯化鈉、氯化鎂、氯化鈣)及螯合劑(例如EDTA)。穩定劑存在於組合物中的量可為約0.1mM至約1000mM、約1mM至約500mM、約10至約300mM，或約100mM至約300mM。

如本文所用，術語「界面活性劑」係指具有兩性結構的醫藥學 上可接受之有機物質；亦即，其由溶解性傾向相反之基團(通常為油溶性烴鏈及水溶性離子基)組成。界面活性劑可根據表面活性部分之電荷分類成陰離子性、陽離子性及非離子性界面活性劑。界面活性劑可用作醫藥組合物及生物材料製劑之濕潤劑、乳化劑、增溶劑及分散劑。在本文所述組合物之一些實施例中，界面活性劑之含量描述為以重量/體積百分比(w/v%)表示之百分比。適合之醫藥學上可接受之界面活性劑包括(但不限於)以下群組：聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯(Tween)、聚氧乙烯烷基醚(Brij)、烷基苯基聚氧乙烯醚(Triton-X)、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物(Poloxamer、Pluronic)或十二烷基硫酸鈉(SDS)。聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯包括聚山梨醇酯20(以商標Tween 20^TM出售)及聚山梨醇酯80(以商標Tween 80^TM出售)。聚乙烯-聚丙烯共聚物包括以名稱Pluronic® F68或Poloxamer 188^TM出售者。聚氧乙烯烷基醚包括以商標Brij^TM出售者。烷基苯酚聚氧乙烯醚包括以商品名Triton-X出售者。聚山梨醇酯20(Tween 20^TM)及聚山梨醇酯80(Tween 80^TM)的使用濃度範圍通常為組合物總體積之約0.001% w/v至約1% w/v或約0.002% w/v至約0.1% w/v，或約0.003% w/v至約0.007% w/v。在一些實施例中，Tween 80^TM的使用濃度為約0.003% w/v、約0.004% w/v、約0.0045% w/v、約0.005% w/v、約0.0055% w/v、約0.006% w/v或約0.007% w/v。在一些實施例中，Tween 80^TM以約0.005% w/v使用。在此態樣中，「w/v」意指界面活性劑重量/組合物總體積。

「低溫保護劑」係指使蛋白質、核酸或其他活性醫藥成分或藥劑在凍乾期間穩定的醫藥學上可接受之物質。低溫保護劑之實例包括(不限於)蔗糖、海藻糖或甘露糖醇。

「多元醇」係指含有多個羥基的醇，或糖醇。糖醇為碳水化合物之氫化形式，其羰基(醛或酮，還原糖)已還原為第一或第二羥基(因 此為醇)。糖醇具有通式H(HCHO)_n+1H，而糖具有H(HCHO)_nHCO。

「抗氧化劑」係指能夠減緩或防止其他分子氧化的分子。抗氧化劑通常為還原劑、螯合劑及除氧劑，諸如硫醇、抗壞血酸或多酚。抗氧化劑之非限制性實例包括抗壞血酸(AA，E300)、硫代硫酸鹽、甲硫胺酸、生育酚(E306)、沒食子酸丙酯(PG，E310)、第三丁基對苯二酚(TBHQ)、丁基化羥基甲氧苯(BHA，E320)及丁基化羥基甲苯(BHT，E321)。

「防腐劑」為天然或合成化學物，其添加至諸如食物、醫藥組合物、油漆、生物樣品、木材等產品中以防止因微生物生長或非所要化學變化而發生分解。防腐劑添加劑可單獨使用或結合其他防腐方法使用。防腐劑可為抑制細菌及真菌生長之抗微生物防腐劑；或抑制組分氧化之抗氧化劑，諸如氧吸收劑。抗微生物防腐劑之實例包括氯化苯甲烴銨、苯甲酸、氯己定(cholorohexidine)、甘油、苯酚、山梨酸鉀、硫柳汞、亞硫酸鹽(二氧化硫、亞硫酸氫鈉、亞硫酸氫鉀等)及EDTA二鈉。其他防腐劑包括非經腸蛋白質組合物中常用者，諸如苯甲醇、苯酚、間甲酚、氯丁醇或對羥基苯甲酸甲酯。

本發明提供包含至少一種抗-PDGF適體及至少一種VEGF拮抗劑的組合物，以及其相關製造及使用方法。

在一個實施例中，本發明提供一種組合物，其包含有效量之：(a)抗-PDGF適體或其醫藥學上可接受之鹽；及(b)VEGF拮抗劑或其醫藥學上可接受之鹽。在特定實施例中，當組合物在約2.0℃至約8.0℃之溫度下儲存至少約12週時，抗-PDGF適體與VEGF拮抗劑中之一或兩者之至少約90%在化學上為穩定的。

在本發明之各種組合物及方法之特定實施例中，抗-PDGF適體為拮抗劑A或其經修飾形式。在本發明之各種組合物及方法之特定實施例中，VEGF拮抗劑為蘭尼單抗、貝伐單抗或阿柏西普，或其醫藥學 上可接受之鹽。

在另一個實施例中，本發明提供治療或預防眼科疾病之方法，包含向有需要之哺乳動物投與本發明組合物。組合物係以有效治療或預防眼科疾病的量投與。在各種實施例中，眼科疾病為年齡相關性黃斑部變性、息肉狀脈絡膜血管病變、脈絡膜新血管生成相關病狀、高血壓性視網膜病變、糖尿病性視網膜病變、鐮狀細胞性視網膜病變、周邊視網膜新血管生成相關病狀、早產兒視網膜病變、靜脈阻塞性疾病、動脈阻塞性疾病、中心性漿液性脈絡膜視網膜病變、囊樣黃斑部水腫、視網膜毛細血管擴張症、大動脈瘤、視網膜血管瘤病、輻射誘導性視網膜病變、虹膜紅變(rubeosis iridis)或贅生物。在特定實施例中，眼科疾病為年齡相關性黃斑部變性，且年齡相關性黃斑部變性為濕性年齡相關性黃斑部變性或乾性年齡相關性黃斑部變性。在某些實施例中，組合物存在於藥物遞送裝置中。在某些實施例中，組合物經眼內投與。在具體實施例中，眼內投藥為玻璃體內投藥或前房投藥。在其他實施例中，哺乳動物為人類。

PDGF適體及VEGF拮抗劑

本發明提供包含抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑的組合物，包括醫藥組合物。在特定實施例中，抗-PDGF適體為拮抗劑A或其經修飾形式(或其醫藥學上可接受之鹽)，且VEGF拮抗劑為蘭尼單抗、貝伐單抗或阿柏西普(或其醫藥學上可接受之鹽)。本發明進一步提供包含有效量之抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑的組合物。

抗-PDGF適體

在某些實施例中，抗-PDGF適體包括(但不限於)美國專利第8,039,443號中所述者，包括PDGF特異性適體與PDGF-VEGF特異性適體，該專利以全文引用的方式併入本文中。

抗-PDGF適體之實例包括寡核苷酸序列包含、主要由或由以下序 列之一組成的適體：ARC126：5'-(5'-NH₂-dC-dA-dG-dG-dC-fU-dA-fC-mG-3'[SEQ ID NO：1])-HEG-(5'-dC-dG-T-dA-mG-dA-mG-dC-dA-fU-fC-mA-3'[SEQ ID NO：2])-HEG-(5'-T-dG-dA-T-fC-fC-fU-mG-[3T]-3'[SEQ ID NO：3])-3'，其中「HEG」=六乙二醇間隔子，「m」表示2'-甲氧基取代之核苷酸，「f」表示2'-氟取代之核苷酸，「d」表示脫氧核苷酸，且「[3T]」係指在核糖之3'位置連接至寡核苷酸之3'端的倒位胸苷核苷酸；ARC127：5'-[40K PEG]-(5'-NH₂-dC-dA-dG-dG-dC-fU-dA-fC-mG-3'[SEQ ID NO：1])-HEG-(5'-dC-dG-T-dA-mG-dA-mG-dC-dA-fU-fC-mA-3'[SEQ ID NO：2])-HEG-(5'-T-dG-dA-T-fC-fC-fU-mG-[3T]-3'[SEQ ID NO：3])-3'，其中「HEG」=六乙二醇間隔子，「m」表示2'-甲氧基取代之核苷酸，「f」表示2'-氟取代之核苷酸，「d」表示脫氧核苷酸，且「[3T]」係指在核糖之3'位置連接至寡核苷酸之3'端的倒位胸苷核苷酸；ARC240：5'-[20K PEG]-(5'-NH₂-dC-dA-dG-dG-dC-fU-dA-fC-mG-3'[SEQ ID NO：1])-HEG-(5'-dC-dG-T-dA-mG-dA-mG-dC-dA-fU-fC-mA-3'[SEQ ID NO：2])-HEG-(5'-T-dG-dA-T-fC-fC-fU-mG-[3T]-3'[SEQ ID NO：3])-3'，其中「HEG」=六乙二醇間隔子，「m」表示2'-甲氧基取代之核苷酸，「f」表示2'-氟取代之核苷酸，「d」表示脫氧核苷酸，且「[3T]」係指在核糖之3'位置連接至寡核苷酸之3'端的倒位胸苷核苷酸；ARC308：5'-[30K PEG]-(5'-NH₂-dC-dA-dG-dG-dC-fU-dA-fC-mG-3'[SEQ ID NO：1])-HEG-(5'-dC-dG-T-dA-mG-dA-mG-dC-dA-fU-fC-mA-3[SEQ ID NO：2])-HEG-(5'-T-dG-dA-T-fC-fC-fU-mG-[3T]-3'[SEQ ID NO：3])-3'，其中「HEG」=六乙二醇間隔子，「m」表示2'-甲氧基取代之核苷酸，「f」表示2'-氟取代之核苷酸，「d」表示脫氧核苷酸，且 「[3T]」係指在核糖之3'位置連接至寡核苷酸之3'端的倒位胸苷核苷酸；脫氧ARC126：5'-dCdAdGdGdCdTdAdCdGdCdGdTdAdGdAdGdCdAdTdCdAdTdGdAdTdCdCdTdG-[3T]-3'(SEQ ID NO：75)，其中「d」表示未經修飾之脫氧核苷酸且「[3T]」係指在核糖之3'位置連接至寡核苷酸之3'端的倒位胸苷核苷酸；因此，寡核苷酸具有兩個5'端且因此對作用於3'羥基端的核酸酶有抗性；及ARC124：5'-CACAGGCTACGGCACGTAGAGCATCACCATGATCCTGTG[3T]-3'(SEQ ID NO：6)，其中「[3T]」係指在核糖之3'位置連接至寡核苷酸之3'端的倒位胸苷核苷酸。

PDGF-VEGF結合性多價適體之實例包括PDGF-B-VEGF適體嵌合體TK.131.12.A及TK.131.12.B，其可同時靶向PDGF-B與VEGF。此等適體嵌合體描述於PCT專利申請公開案第WO2006/050498號及第WO2004/094614號中。

TK.131.012.A之序列為：5'dCdAdGdGdCdTdAdCdGmAmUmGmCmAmGmUmUmUmGmAmGmAmAmGmUmCmGmCmGmCmAmUdCdGdTdAdGdAdGdCdAdTdCdAdGdAdAdAdTdGdAdTdCdCdTdG[3T]-3'(SEQ ID NO：4)，其中「m」表示2'-OMe核苷酸，且「d」及「[3T]」如上文定義；且TK.131.012.B之序列為：5'dCdAdGdGdCdTdAdCdGmUmGmCmAmGmUmUmUmGmAmGmAmAmGmUmCmGmCmGmCmAdCdGdTdAdGdAdGdCdAdTdCdAdGdAdAdAdTdGdAdTdCdCdTdG-[3T](SEQ ID NO：5)，其中「m」、「d」及「[3T]」如上文定義。

在特定實施例中，抗-PDGF適體結合PDGF。在特定實施例中，抗-PDGF適體結合至PDGF-A或PDGF-B。抗-PDGF適體之實例包括長度為31至35個核苷酸之一系列核酸適體(美國專利第8,039,443號中之SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4至SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31至SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：69，及SEQ ID NO：70至SEQ ID NO：74)，其活體外特異性結合至PDGF-B蛋白且在活體內及基於細胞之分析中在功能上阻斷PDGF-BB之活性。在特定實施例中，抗-PDGF-B適體來源於母體分子ARC126，5'-(5'-NH₂-dC-dA-dG-dG-dC-fU-dA-fC-mG-3'[SEQ ID NO：1])-HEG-(5'-dC-dG-T-dA-mG-dA-mG-dC-dA-fU-fC-mA-3'[SEQ ID NO：2])-HEG-(5'-T-dG-dA-T-fC-fC-fU-mG-[3T]-3'[SEQ ID NO：3])-3'，其含有七個個別的含2'F殘基，且其中HEG=六乙二醇間隔子，且[3T]係指在核糖之3'位置連接至寡核苷酸之3'端的倒位胸苷核苷酸。含2'F殘基可藉由阻斷血清核酸內切酶或核酸外切酶引起的適體降解來增強適體之活體外血清穩定性及活體內穩定性。在特定實施例中，抗-PDGF適體為完全不含2'F的適體，其保持強活體外結合及抗增殖活性且含有天然存在之2'脫氧基或2'OMe取代之核苷酸。另外，在特定實施例中，此等適體保持實質性血清穩定性，如經由活體外穩定性分析中針對核酸酶降解之抗性所確定。

在某些實施例中，抗-PDGF適體為拮抗劑A或其醫藥學上可接受之鹽。拮抗劑A之化學名稱為[(單甲氧基20K聚乙二醇胺甲醯基-N2-)(單甲氧基20K聚乙二醇胺甲醯基-N6-)]-賴胺酸-醯胺基-6-己二基-(1-5')-2'-脫氧胞苷醯基-(3'-5')-2'-脫氧腺苷醯基-(3'-5')-2'-脫氧鳥苷醯基-(3'-5')-2'-脫氧鳥苷醯基-(3'-5')-2'-脫氧胞苷醯基-(3'-5')-2'-脫氧-2'-氟尿苷醯基-(3'-5')-2'-脫氧腺苷醯基-(3'-5')-2'-脫氧-2'-氟胞苷醯基-(3'-5')-2'-脫氧-2'-甲氧基鳥苷醯基-(3'-1)-PO₃-六(乙氧基)-(18-5')-2'-脫氧胞苷醯基-(3'-5')-2'-脫氧鳥苷醯基-(3'-5')-胸苷醯基-(3'-5')-2'-脫氧腺苷醯 基-(3'-5')-2'-脫氧-2'-甲氧基鳥苷醯基-(3'-5')-2'-脫氧腺苷醯基-(3'-5')-2'-脫氧-2'-甲氧基鳥苷醯基-(3'-5')-2'-脫氧胞苷醯基-(3'-5')-2'-脫氧腺苷醯基-(3'-5')-2'-脫氧-2'-氟尿苷醯基-(3'-5')-2'-脫氧-2'-氟胞苷醯基-(3'-5')-2'-脫氧-2'-甲氧基腺苷醯基-(3'-1)-PO₃-六(乙氧基)-(18-5')-胸苷醯基-(3'-5')-2'-脫氧鳥苷醯基-(3'-5')-2'-脫氧腺苷醯基-(3'-5')-胸苷醯基-(3'-5')-2'-脫氧-2'-氟胞苷醯基-(3'-5')-2'-脫氧-2'-氟胞苷醯基-(3'-5')-2'-脫氧-2'-氟尿苷醯基-(3'-5')-2'-脫氧-2'-甲氧基鳥苷醯基-(3'-3')-胸苷。

拮抗劑A之結構顯示於圖78A至78F中，且其亦描述於PCT申請公開案第WO 2010/127029號之圖7中，該案以全文引用的方式併入本文中。

拮抗劑A之序列為：5'-[mPEG2 40kD]-[HN-(CH₂)₆O]CAGGCU_fAC_fG_m(SEQ ID NO：1)[PO₃(CH₂CH₂O)₆]CGTAG_mAG_mCAU_fC_fA_m(SEQ ID NO：2)[PO₃(CH₂CH₂O)₆]TGATC_fC_fU_fG_m[3T](SEQ ID NO：3)-3'，其中[3T]係指在核糖之3'位置連接至寡核苷酸之3'端的倒位胸苷核苷酸，且[mPEG2 40kD]表示兩個20kD聚乙二醇(PEG)聚合物鏈，在一個實施例中，表示兩個約20kD PEG聚合物鏈，此兩條鏈經由胺基甲酸酯鍵聯以共價方式連接至賴胺酸殘基之兩個胺基。此部分又經由下述胺基連接子與寡核苷酸連接。

[HN-(CH₂)₆O]表示雙官能性α-羥基-ω-胺基連接子，其經由醯胺鍵以共價方式連接至PEG聚合物。連接子在拮抗劑A之5'端經磷酸二酯鍵聯連接至寡核苷酸。

[PO₃(CH₂CH₂O)₆]表示使寡核苷酸之各區段經由磷酸二酯鍵聯接合的六乙二醇(HEX)部分。拮抗劑A具有兩個HEX鍵聯，此兩個HEX鍵聯使第9核苷酸與第10核苷酸及第21核苷酸與第22核苷酸經由連接子與個別核苷酸之間的磷酸二酯鍵聯接合在一起。

C、A、G及T分別表示胞嘧啶、腺苷、鳥苷及胸苷核酸之2'-脫氧衍生物之單字母碼。拮抗劑A具有四個2'-脫氧核糖胞嘧啶、六個2'-脫氧核糖腺苷、四個2'-脫氧核糖鳥苷及四個2'-脫氧核糖胸苷。

G_m及A_m分別表示鳥苷及腺苷之2'-甲氧基取代形式。拮抗劑A具有四個2'-甲氧基鳥苷及一個2'-甲氧基腺苷。C_f及U_f分別表示胞嘧啶及尿苷之2'-氟取代形式。拮抗劑A具有四個2'-氟胞嘧啶及三個2'-氟尿苷。

除3'末端之外，寡核苷酸中之磷酸二酯鍵聯使核糖環之5'-氧及3'-氧與標準核苷或核苷酸磷酸二酯鍵聯連接。3'-末端胸苷與倒數第二個G_m之間的磷酸二酯鍵聯連接其各別3'-氧，稱為3',3'-帽端。

拮抗劑A之整個分子(包括核酸、胺基連接子及聚乙二醇部分)的分子量為約40,000至約60,000道爾頓(Dalton)，在一個實施例中為40,000至60,000道爾頓，且其溶液可呈無色至淡黃色。在某些實施例中，拮抗劑A可存在於單水合磷酸二氫鈉及七水合磷酸氫二鈉(作為緩衝劑)及氯化鈉(作為張力調節劑)之溶液中。拮抗劑A為親水性聚合物。拮抗劑A鈉鹽溶於水中及磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中，如藉由目視檢查所評估，得到至少約50mg(以寡核苷酸重量計)/mL溶液。

在一個實施例中，拮抗劑A係利用反覆化學合成程序產生寡核苷酸部分及胺基連接子，接著以共價方式鍵結至聚乙二醇化試劑來製造，如PCT申請公開案第WO 2010/127029號之實例5中所述及實例4中所述，該案以全文引用的方式併入本文中。

拮抗劑A可具有足夠鹼性的官能基，其可與多種無機酸及有機酸中之任一者反應從而形成醫藥學上可接受之鹽。醫藥學上可接受之酸加成鹽係由醫藥學上可接受之酸形成，如此項技術中所熟知。此等鹽包括本文中所述者及以下文獻中所列之醫藥學上可接受之鹽：Journal of Pharmaceutical Science,66,2-19(1977)及The Handbook of Pharmaceutical Salts,Properties,Selection,and Use,P H Stahl及C G Wermuth(編者)，Verlag,Zurich(Switzerland)2002，此等文獻以全文引用的方式併入本文中。

在其他實施例中，抗-PDGF適體為適體(諸如拮抗劑A，或本文中所述之其他適體)之經修飾形式，其可包括本文中所述之一或多種修飾。雖然具體地針對拮抗劑A論述，但應瞭解本文所述之任何修飾可存在於本文所述之任何其他抗-PDGF適體之經修飾形式中，其每一者可適用於本發明。在特定實施例中，適體之經修飾形式(例如拮抗劑A之經修飾形式)不僅包含與適體相同的核苷酸序列及核酸或由其組成，而且包含一或多條與適體不同的聚乙二醇聚合物鏈，或包含一或多個不同連接子，此等連接子使一或多條聚乙二醇聚合物鏈與適體之核酸部分偶合。

在一些實施例中，與適體相比，適體之經修飾形式(例如拮抗劑A之經修飾形式)可具有經化學修飾之核苷酸，包括嘧啶鹼基中之5-X或2'-Y取代及嘌呤鹼基中之8-X或2'-Y取代。可利用2'-修飾(諸如2'-氟及2'-O-Me)達成針對核酸酶之穩定化作用而不減弱適體與標靶之結合相互作用。參見例如Lin等人，Nucleic Acids Res.,22,5229-5234(1994)；Jellinek等人，Biochemistry,34,11363-1137(1995)；Lin等人，Nucleic Acids Res.,22,5229-5234(1994)；Kubik等人，J.Immunol.,159(1),259-267(1997)；Pagratis等人，Nat.Biotechnol.,1,68-73(1997)；及Wilson等人，Curr Opin Chem Biol,10(6),607-614(2006)。在一些實施例中，化學取代可為糖位置上之化學取代、鹼位置上之化學取代或磷酸酯位置上之化學取代。

可存在於適體(例如拮抗劑A)之經修飾形式中的修飾包括(但不限於)提供其他化學基團的彼等修飾，此等化學基團將其他電荷、極化性、疏水性、氫鍵結合、靜電相互作用或流變性併入適體鹼基或整個 適體。此等修飾包括(但不限於)2'-位置糖修飾、5-位置嘧啶修飾、8-位置嘌呤修飾、環外胺上之修飾、4-硫尿苷之取代、5-溴或5-碘-尿嘧啶之取代；主鏈修飾、硫代磷酸酯或磷酸烷酯修飾、甲基化、稀有鹼基配對組合(諸如異鹼基異胞啶與異胍)及其類似修飾。修飾亦可包括3'及5'修飾，諸如用糖部分封端或修飾。在本發明之一些實施例中，適體之經修飾形式(例如拮抗劑A之經修飾形式)為在嘧啶殘基之糖部分上經2'-氟(2'-F)修飾的RNA分子。可存在於適體之經修飾形式(例如拮抗劑A之經修飾形式)中之修飾實例以及可根據本發明使用之穩定化適體描述於美國專利第8,039,443號中，該專利藉此以全文引用的方式併入本文中。在某些實施例中，抗-PDGF適體為抗-PDGF-B適體，包括(但不限於)美國專利第8,039,443號中所述者。

在一些實施例中，適體穩定性可藉由引入此等修飾以及藉由沿著RNA之磷酸酯主鏈進行修飾及取代來增強，此RNA之磷酸酯主鏈亦可存在於適體之經修飾形式(例如拮抗劑A之經修飾形式)中。另外，可對核鹼基自身進行多種修飾，該等修飾抑制降解且可增加所要核苷酸相互作用或減少非所要核苷酸相互作用。因此，一旦獲知適體之序列，則可藉由下述合成程序或藉由熟習此項技術者已知的程序進行修飾或取代。任何此等修飾可存在於拮抗劑A之經修飾形式中。

可存在於適體之經修飾形式(例如拮抗劑A之經修飾形式)中的其他修飾包括合併經修飾鹼基(或經修飾核苷或經修飾核苷酸)，其為核糖核酸(亦即A、C、G及U)及脫氧核糖核酸(亦即A、C、G及T)中存在之標準鹼基、糖或磷酸酯主鏈化學結構之變異。此範圍內包括例如：Gm(2'-甲氧基鳥苷酸)、Am(2'-甲氧基腺苷酸)、Cf(2'-氟胞苷酸)、Uf(2'-氟尿苷酸)、Ar(核糖腺苷酸)。拮抗劑A之經修飾形式可包括胞嘧啶或任何胞嘧啶相關鹼基，包括5-甲基胞嘧啶、4-乙醯基胞嘧啶、3-甲基胞嘧啶、5-羥甲基胞嘧啶、2-硫胞嘧啶、5-鹵基胞嘧啶(例如5-氟 胞嘧啶、5-溴胞嘧啶、5-氯胞嘧啶及5-碘胞嘧啶)、5-丙炔基胞嘧啶、6-氮雜胞嘧啶、5-三氟甲基胞嘧啶、N4,N4-乙橋胞嘧啶、啡噁嗪胞苷、啡噻嗪胞苷、咔唑胞苷或吡啶并吲哚胞苷。拮抗劑A之經修飾形式可包括鳥嘌呤或任何鳥嘌呤相關鹼基，包括6-甲基鳥嘌呤、1-甲基鳥嘌呤、2,2-二甲基鳥嘌呤、2-甲基鳥嘌呤、7-甲基鳥嘌呤、2-丙基鳥嘌呤、6-丙基鳥嘌呤、8-鹵基鳥嘌呤(例如8-氟鳥嘌呤、8-溴鳥嘌呤、8-氯鳥嘌呤及8-碘鳥嘌呤)、8-胺基鳥嘌呤、8-氫硫基鳥嘌呤、8-硫烷基鳥嘌呤、8-羥基鳥嘌呤、7-甲基鳥嘌呤、8-氮雜鳥嘌呤、7-脫氮鳥嘌呤或3-脫氮鳥嘌呤。適體之經修飾形式(例如拮抗劑A之經修飾形式)可包括腺嘌呤或任何腺嘌呤相關鹼基，包括6-甲基腺嘌呤、N6-異戊烯基腺嘌呤、N6-甲基腺嘌呤、1-甲基腺嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲硫基-N6-異戊烯基腺嘌呤、8-鹵基腺嘌呤(例如8-氟腺嘌呤、8-溴腺嘌呤、8-氯腺嘌呤及8-碘腺嘌呤)、8-胺基腺嘌呤、8-氫硫基腺嘌呤、8-硫烷基腺嘌呤、8-羥基腺嘌呤、7-甲基腺嘌呤、2-鹵基腺嘌呤(例如2-氟腺嘌呤、2-溴腺嘌呤、2-氯腺嘌呤及2-碘腺嘌呤)、2-胺基腺嘌呤、8-氮雜腺嘌呤、7-脫氮腺嘌呤或3-脫氮腺嘌呤。亦包括尿嘧啶或任何尿嘧啶相關鹼基，包括5-鹵基尿嘧啶(例如5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶)、5-(羧基羥基甲基)尿嘧啶、5-羧甲基胺基甲基-2-硫尿嘧啶、5-羧甲基胺基甲基尿嘧啶、二氫尿嘧啶、1-甲基假尿嘧啶、5-甲氧基胺基甲基-2-硫尿嘧啶、5'-甲氧基羰基甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧基乙酸甲酯、尿嘧啶-5-氧基乙酸、假尿嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、3-(3-胺基-3-N-2-羧丙基)尿嘧啶、5-甲基胺基甲基尿嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶、6-氮雜尿嘧啶或4-硫尿嘧啶。

此項技術中已知之可存在於適體之經修飾形式(例如拮抗劑A之 經修飾形式)中之其他經修飾鹼基變異體之實例包括(不限於)4-乙醯基胞苷、5-(羧基羥基甲基)尿苷、2'-甲氧基胞苷、5-羧甲基胺基甲基-2-硫尿苷、5-羧甲基胺基甲基尿苷、二氫尿苷、2'-O-甲基假尿苷、b-D-半乳糖基Q核苷、肌苷、N6-異戊烯基腺苷、1-甲基腺苷、1-甲基假尿苷、1-甲基鳥苷、1-甲基肌苷、2,2-二甲基鳥苷、2-甲基腺苷、2-甲基鳥苷、3-甲基胞苷、5-甲基胞苷、N6-甲基腺苷、7-甲基鳥苷、5-甲基胺基甲基尿苷、5-甲氧基胺基甲基-2-硫尿苷、b-D-甘露糖基Q核苷、5-甲氧基羰基甲基尿苷、5-甲氧基尿苷、2-甲硫基-N6-異戊烯基腺苷、N-((9-b-D-呋喃核糖基-2-甲基硫嘌呤-6-基)胺甲醯基)蘇胺酸、N-((9-b-D-呋喃核糖基嘌呤-6-基)N-甲基-胺甲醯基)蘇胺酸、尿苷-5-氧基乙酸甲酯、尿苷-5-氧基乙酸、懷丁氧苷(wybutoxosine)、假尿苷、Q核苷、2-硫胞苷、5-甲基-2-硫尿苷、2-硫尿苷、4-硫尿苷、5-甲基尿苷、N-((9-b-D-呋喃核糖基嘌呤-6-基)胺甲醯基)蘇胺酸、2'-O-甲基-5-甲基尿苷、2'-O-甲基尿苷、懷丁苷(wybutosine)、3-(3-胺基-3-羧丙基)尿苷。

此項技術中已知之經修飾核苷及核苷酸糖主鏈變異體之實例包括(不限於)具有例如2'-核糖基取代基之彼等變異體，2'-核糖基取代基諸如F、SH、SCH₃、OCN、Cl、Br、CN、CF₃、OCF₃、SOCH₃、SO₂、CH₃、ONO₂、NO₂、N₃、NH₂、OCH₂CH₂OCH₃、O(CH₂)₂ON(CH₃)₂、OCH₂OCH₂N(CH₃)₂、O(C_1-10烷基)、O(C_2-10烯基)、O(C_2-10炔基)、S(C_1-10烷基)、S(C_2-10烯基)、S(C_2-10炔基)、NH(C_1-10烷基)、NH(C_2-10烯基)、NH(C_2-10炔基)及O-烷基-O-烷基。所要2'-核糖基取代基包括2'-甲氧基(2'-OCH₃)、2'-胺基丙氧基(2'-OCH₂CH₂CH₂NH₂)、2'-烯丙基(2'-CH₂-CH=CH₂)、2'-O-烯丙基(2'-O-CH₂-CH=CH₂)、2'-胺基(2'-NH₂)及2'-氟(2'-F)。2'-取代基可位於阿拉伯糖(上)位置或核糖(下)位置。此等變異體可存在於拮抗劑A之經修飾形 式中。

修飾之實例包括：嘌呤取代嘧啶；2'-脫氧二氫尿苷取代尿苷；2'-脫氧-5-甲基胞苷取代胞苷；2-胺基嘌呤取代嘌呤；硫代磷酸酯取代磷酸二酯；二硫代磷酸酯取代磷酸二酯；脫氧核苷酸取代2'-OH核苷酸；2'-OMe核苷酸、2'-氟核苷酸或2'-O-甲氧基乙基核苷酸取代2'-OH或脫氧核苷酸；添加PEG或PAG聚合物；添加大型空間位阻分子；添加3'帽端；或已知可阻斷核酸酶降解的任何其他修飾。參見例如美國專利公開案第20090075342號，該案以全文引用的方式併入本文中。

適體之經修飾形式(例如拮抗劑A之經修飾形式)可由核苷酸或核苷酸類似物(諸如本文所述)或兩者之組合組成，或為寡核苷酸類似物。適體之經修飾形式(例如拮抗劑A之經修飾形式)可在不影響寡聚物之功能(例如結合PDGF)的位置含有核苷酸類似物。

本文所述之抗-PDGF適體可與一或多個無生理活性基團(諸如親脂性化合物(例如膽固醇))連接；與一或多個無免疫原性高分子量化合物(例如聚烷二醇)連接；或連接至或囊封於包含親脂性組分之複合物(例如脂質體)中。在一個實施例中，經連接之適體增強細胞對適體之細胞吸收以便將適體遞送至細胞內標靶。以全文引用的方式併入本文中之美國專利第6,011,020號描述用於製備與一或多個親脂性化合物或無免疫原性高分子量化合物連接之適體的方法。

在如美國專利第6,011,020號所述之診斷或治療性複合物中，本文所述之抗-PDGF適體可經由連接子連接至一或多個無生理活性基團，諸如親脂性或無免疫原性高分子量化合物。診斷或治療性複合物中經由連接子連接至親脂性化合物(諸如二醯基甘油或二烷基甘油)的適體描述於美國專利第5,859,228號中。經由連接子連接至親脂性化合物(諸如甘油脂質)或連接至無免疫原性高分子量化合物(諸如聚烷二 醇)的適體進一步描述於美國專利第6,051,698號中。經由連接子連接至無免疫原性高分子量化合物或連接至親脂性化合物的適體亦進一步描述於1997年10月17日申請之名稱為「Vascular Endothelial Growth Factor(VEGF)Nucleic Acid Ligand Complexes」的PCT/US97/18944中。本文所述專利及專利申請案各自以全文引用的方式明確併入本文。

一或多個適體(例如拮抗劑A)可經由連接子連接至無免疫原性高分子量化合物或親脂性化合物。無免疫原性高分子量化合物可為通常不產生免疫原性反應的線性或分支化合物，其分子量為約100Da至1,000,000Da、約1000Da至500,000Da、或約1000Da至200,000Da。在一個實施例中，無免疫原性高分子量化合物可為聚烷二醇。在一個實施例中，無免疫原性高分子量化合物包含聚烷二醇。在一個實施例中，無免疫原性高分子量化合物包含複數個聚烷二醇。在一個實施例中，無免疫原性高分子量化合物包含兩個聚烷二醇。在另一個實施例中，聚烷二醇可為聚乙二醇(PEG)。在一些實施例中，PEG具有約10至約80kDa之分子量或約20至約45kDa之分子量。在一些實施例中，複數個PEG具有約10至約80kDa之組合分子量或約20至約45kDa之分子量。在其他實施例中，無免疫原性高分子量化合物包含兩個各具有約20kDa分子量之聚烷二醇。

適體(例如拮抗劑A)可經由連接子連接至一或多個親脂性化合物。親脂性化合物為傾向於結合或分配於脂質或具有低介電常數之其他材料或相中的化合物，包括主要基於親脂性組分之化合物。親脂性化合物包括脂質以及傾向於結合脂質(或具有低介電常數的其他材料或相)之不含脂質的化合物。膽固醇、磷脂及甘油脂質(諸如二烷基甘油、二醯基甘油及甘油醯胺脂質)為親脂性化合物之其他實例。在一個實施例中，親脂性化合物為甘油脂質。

非免疫原性高分子量化合物或親脂性化合物可經由連接子共價結合至適體上之多個位置，諸如結合至核苷酸鹼基上之環外胺基、嘧啶核苷酸之5-位置、嘌呤核苷酸之8-位置、核苷酸磷酸酯之羥基、或位於適體之5'末端或3'末端的羥基或其他基團。在親脂性化合物為甘油脂質或非免疫原性高分子量化合物為聚烷二醇或聚乙二醇的一些實施例中，非免疫原性高分子量化合物可經由連接子鍵結至其磷酸酯基之5'或3'羥基。在一個實施例中，親脂性化合物或非免疫原性高分子量化合物經由連接子鍵結至適體之5'磷酸酯基。非免疫原性高分子量化合物或親脂性化合物連接至適體可直接進行或利用一或多個插入適體與親脂性化合物或非免疫原性高分子量化合物之間的連接子進行。在一些實施例中，當直接進行連接時，不存在連接子。

連接子為一種分子實體，其使兩個或兩個以上分子實體經由共價鍵或非共價相互作用連接，且可允許該等分子實體以保持一或多個分子實體之功能性的方式空間隔離。

在本發明之一個實施例中，非免疫原性高分子量化合物為聚烷二醇且具有結構R(O(CH₂)_x)_nO-，其中R獨立地為H或CH₃，x=2至5，且n約為聚烷二醇之MW/(16+14x)。在本發明之一個實施例中，聚烷二醇之分子量為約10kDa至80kDa。在另一個實施例中，聚烷二醇之分子量為約20kDa至45kDa。在又一個實施例中，x=2且n=9×10²。可存在一或多個聚烷二醇經由連接子連接至同一適體。在一個實施例中，複數個聚烷二醇經由連接子連接至同一適體。在另一個實施例中，兩個聚烷二醇經由連接子連接至同一適體。在另一個實施例中，聚烷二醇為具有約40kDa分子量之聚乙二醇。

在一個實施例中，抗-PDGF適體經由連接子連接至非免疫原性高分子量化合物，諸如聚烷二醇或PEG，或連接至複數個非免疫原性高分子量化合物。在此實施例中，相對於單獨抗-PDGF適體，經連接之 PDGF適體之藥物動力學性質得以改良。聚烷二醇或PEG可經由連接子共價結合至PDGF適體上之多個位置。在使用聚烷二醇或PEG的實施例中，抗-PDGF適體可經由連接子、經由5'羥基、經由磷酸二酯鍵聯鍵結。

在一些實施例中，複數個適體可與單一非免疫原性高分子量化合物(諸如聚烷二醇或PEG)或親脂性化合物(諸如甘油脂質)結合。適體可皆針對一個標靶或針對不同標靶。在化合物包含超過一個抗-PDGF適體的實施例中，親合力可因與標靶PDGF之多重結合相互作用而增大。在又其他實施例中，複數個聚烷二醇、PEG及甘油脂質分子中之一或多者可彼此連接、連接至同一個連接子或連接至複數個連接子。在此等實施例中，一或多個適體可與各聚烷二醇、PEG或甘油脂質結合。由此引起各適體對其標靶之親合力增大。另外，在針對PDGF之適體或針對PDGF及不同標靶之適體與聚烷二醇、PEG或甘油脂質結合的實施例中，藥物亦可與聚烷二醇、PEG或甘油脂質結合，例如共價鍵結。因此，化合物可在聚烷二醇、PEG或甘油脂質充當連接子，視情況在一或多個其他連接子下實現藥物之靶向遞送。

在特定實施例中，適體可在5'端用5'-5'倒位核苷酸帽端結構進行5'-封端及/或在3'端用3'-3'倒位核苷酸帽端結構進行3'-封端。在某些實施例中，拮抗劑A(或拮抗劑A之經修飾形式)經5'或3'端封端。在其他實施例中，核苷酸帽端為倒位胸苷。

VEGF拮抗劑

適用於本發明組合物中之VEGF拮抗劑包括(但不限於)蘭尼單抗、貝伐單抗、阿柏西普及其醫藥學上可接受之鹽。

在某些實施例中，VEGF拮抗劑為結合人類VEGF之抗體或其片段，其可為人類化或人類抗-VEGF抗體。在特定實施例中，抗-VEGF抗體重鏈可變域包含胺基酸序列： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYX₁FTX₂YGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPX₃YYGX₄SHWYFDVWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：76)，其中X₁為T或D；X₂為N或H；X₃為Y或H；且X₄為S或T。在一個特定實施例中，重鏈可變域包含胺基酸序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTL(SEQ ID NO：77)。此等重鏈可變域序列可與以下輕鏈可變域序列或與其他輕鏈可變域序列組合，限制條件為如此產生之抗體結合人類VEGF。

在某些實施例中，抗-VEGF抗體輕鏈可變域包含具有以下胺基酸序列之高變區：CDRL1(SASQDISNYLN[SEQ ID NO：78])、CDRL2(FTSSLHS[SEQ ID NO：79])及CDRL3(QQYSTVPWT[SEQ ID NO：80])。在特定實施例中，三個輕鏈高變區例如以由下式所示之連續序列提供於人類構架區中：FR1-CDRL1-FR2-CDRL2-FR3-CDRL3-FR4。在一個實施例中，抗-VEGF抗體輕鏈可變域包含胺基酸序列：DIQX₁TQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO：81)，其中X₁為M或L。在特定實施例中，輕鏈可變域包含胺基酸序列：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTV(SEQ ID NO：82)。此等輕鏈可變域序列可與上文所鑑別之重鏈可變域序列或與其他重鏈可變域序列組合，限制條件為如此產生之抗體保持結合至人類VEGF的能力。

在一個特定實施例中，VEGF拮抗劑為抗體貝伐單抗或其醫藥學上可接受之鹽，其包括以下重鏈及輕鏈可變域序列(對應地)：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTL(SEQ ID NO：77)；及DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTV(SEQ ID NO：82)。貝伐單抗在市面上以商標Avastin®(Genentech,S.San Francisco,CA)出售且亦描述於美國專利第6,054,297號中。

在某些實施例中，VEGF拮抗劑為親本抗-VEGF抗體(該親本視情況為人類化或人類抗-VEGF抗體)之變異體，其中該變異體結合人類VEGF且在親本抗-VEGF抗體之重鏈或輕鏈可變域之高變區中包含胺基酸取代。在特定實施例中，該變異體在抗-VEGF抗體之一或多個高變區中具有一或多個取代。在更特定實施例中，取代發生於親本抗體之重鏈可變域中。舉例而言，胺基酸取代可發生於重鏈可變域之CDRH1或CDRH3中，或兩個此等高變區中均可存在取代。在某些實施例中，此等「親和力成熟」變異體與人類VEGF的結合比產生其之親本抗-VEGF抗體與人類VEGF的結合，亦即，其K_d值顯著小於親本抗-VEGF抗體之K_d值。在某些實施例中，變異體活體外抑制VEGF誘導之內皮細胞增殖的ED50值為親本抗-VEGF抗體ED50值之至少約10分之一、至少約20分之一或至少約50分之一。在一個實施例中，變異體具有包含以下胺基酸序列之CDRH1：GYDFTHYGMN(SEQ ID NO：83)及包含以下胺基酸序列之CDRH3：YPYYYGTSHWYFDV(SEQ ID NO：84)。此等高變區及CDRH2可提供於例如人類構架區中，產生包含以下胺基酸序列之重鏈可變域： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYDFTHYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPYYYGTSHWYFDVWGQGTL(SEQ ID NO：77)。此等重鏈可變域序列視情況與包含有含以下胺基酸序列之胺基酸域之輕鏈可變域組合：DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTV(SEQ ID NO：82)。

在一個實施例中，VEGF拮抗劑為抗體片段蘭尼單抗或其醫藥學上可接受之鹽，其包括以下重鏈及輕鏈可變域序列(對應地)：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYDFTHYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPYYYGTSHWYFDVWGQGTL(SEQ ID NO：77)；及DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTV(SEQ ID NO：82)。蘭尼單抗在市面上以商標Lucentis®(其中其經調配用於玻璃體內投藥)(Genentech,S.San Francisco,CA)出售，且亦描述於美國專利第7,060,269號中。

在另一個實施例中，VEGF拮抗劑為VEGF-Trap^TM，諸如阿柏西普或其醫藥學上可接受之鹽(參見Do等人(2009)Br J Ophthalmol.93：144-9，該文獻以全文引用的方式併入本文中)。阿柏西普亦以名稱VEGF-Trap-Eye^TM為人所知且在市面上以商標Eylea^TM(Regeneron Pharmaceuticals,Tarrytown,NY)出售。在特定實施例中，VEGF-Trap^TM包含有含兩種融合多肽的二聚合融合多肽，各融合多肽包含由以下組成之VEGF受體組分：第一VEGF受體人類Flt1之免疫球蛋白樣(Ig)域2及第二VEGF受體人類Flk1或人類Flt4之Ig域3。阿柏西普為結 合VEGF-A與胎盤生長因子(PlGF)之融合蛋白，其包含IgG之Fc片段與VEGF受體1域2及VEGF受體2域3融合。阿柏西普為蛋白質分子量為97千道爾頓(kDa)之二聚合醣蛋白且含有糖基化部分，構成總分子質量之額外15%，產生115kDa之總分子量。說明性VEGF-Traps(包括阿柏西普)及其製造方法描述於美國專利第7,306,799號、第7,531,173號、第7,608,261號、第7,070,959號、第7,374,757號及第7,374,758號中。在特定實施例中，VEGF-Trap^TM為包含或由以下胺基酸序列組成之多肽：MVSYWDTGVLLCALLSCLLLTGSSSGSDTGRPFVEMYSEIPEIIHMTEGRELVIPCRVTSPNITVTLKKFPLDTLIPDGKRIIWDSRKGFIISNATYKEIGLLTCEATVNGHLYKTNYLTHRQTNTIIDVVLSPSHGIELSVGEKLVLNCTARTELNVGIDFNWEYPSSKHQHKKLVNRDLKTQSGSEMKKFLSTLTIDGVTRSDQGLYTCAASSGLMTKKNSTFVRVHEKDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：85)。

組合物

本發明提供包含抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑的組合物，包括醫藥組合物。在一些實施例中，組合物提供抗-PDGF適體或VEGF拮抗劑或抗-PDGF適體與VEGF拮抗劑(包括適用於治療或預防眼科疾病者)兩者之穩定性。在某些實施例中，抗-PDGF適體對VEGF拮抗劑活性無不利影響。在某些實施例中，VEGF拮抗劑對抗-PDGF適體活性無不利影響。在某些實施例中，抗-PDGF適體增強VEGF拮抗劑之活性。在某些實施例中，VEGF拮抗劑增強抗-PDGF適體之活性。在某 些實施例中，抗-PDGF適體沒有對VEGF拮抗劑活性出現統計顯著範圍內之不利影響。在某些實施例中，VEGF拮抗劑沒有對抗-PDGF適體活性出現統計顯著範圍內之不利影響。在某些實施例中，抗-PDGF適體在統計上顯著增強VEGF拮抗劑活性。在其他實施例中，VEGF拮抗劑在統計上顯著增強抗-PDGF適體活性。在特定實施例中，組合物中存在的一或多種抗-PDGF適體為適體拮抗劑A或其經修飾形式。在特定實施例中，組合物中存在的一或多種VEGF拮抗劑為蘭尼單抗、貝伐單抗及阿柏西普中之一或多者。在特定實施例中，本發明組合物包含：(i)拮抗劑A(或其經修飾形式)及蘭尼單抗；(ii)拮抗劑A(或其經修飾形式)及貝伐單抗；或(iii)拮抗劑A(或其經修飾形式)及阿柏西普。在某些實施例中，組合物包含抗-PDGF適體或VEGF拮抗劑中任一者之醫藥學上可接受之鹽。在特定實施例中，組合物在約2.0℃至約8.0℃之溫度下儲存至少約12週時，抗-PDGF適體或VEGF拮抗劑中至少約90%保持化學穩定性。

本發明組合物中存在之抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑的相對濃度可根據此等拮抗劑之強度及特異性以及其結合標靶之類型及濃度決定。在一個實施例中，抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑以實質上相等的濃度存在於組合物中。在另一個實施例中，抗-PDGF適體或VEGF拮抗劑以實質上高於另一者之濃度存在，例如組合物中抗-PDGF適體：VEGF拮抗劑濃度之比率為約1.5：1、約2：1、約2.5：1、約3：1、約4：1或約5：1，或組合物中VEGF拮抗劑：抗-PDGF適體濃度之比率為約1.5：1、約2：1、約2.5：1、約3：1、約4：1或約5：1。在某些實施例中，組合物中抗-PDGF適體：VEGF拮抗劑濃度之比率在約1：1至約5：1、約1.5：1至約5：1或約2.0：1至約5：1範圍內；在其他實施例中，組合物中VEGF拮抗劑：抗-PDGF適體濃度之比率在約1：1至約5：1、約1.5：1至約5：1或約2.0：1至約5：1範圍內。除非另外指明，適體濃度完全依據適體 之核酸部分之分子量，該核酸部分視情況可包含短鏈聚乙二醇。在核酸部分包含短鏈聚乙二醇的情況下，核酸部分之分子量包括所有短鏈聚乙二醇殘基之分子量。

在一些實施例中，抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑各自存在於本發明組合物中的濃度為約0.1mg/mL至約200mg/mL、約1mg/mL至約150mg/mL、約2mg/mL至約100mg/mL、約3mg/mL至約80mg/mL、約4mg/mL至約50mg/mL、約4mg/mL至約30mg/mL、約5mg/mL至約25mg/mL或約5mg/mL至約20mg/mL。在一些實施例中，抗-PDGF適體存在於組合物中的濃度為約0.1mg/mL至約200mg/mL、約1mg/mL至約150mg/mL、約2mg/mL至約100mg/mL、約3mg/mL至約80mg/mL、約4mg/mL至約50mg/mL、約4mg/mL至約30mg/mL、約5mg/mL至約25mg/mL或約5mg/mL至約20mg/mL。在一些實施例中，VEGF拮抗劑存在於組合物中的濃度為約0.1mg/mL至約200mg/mL、約1mg/mL至約150mg/mL、約2mg/mL至約100mg/mL、約3mg/mL至約80mg/mL、約4mg/mL至約50mg/mL、約4mg/mL至約30mg/mL、約5mg/mL至約25mg/mL、約10mg/mL至約25mg/mL或約5mg/mL至約20mg/mL。在一些實施例中，抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑各自存在的濃度為至少約0.1mg/mL、至少約1mg/mL、至少約2mg/mL、至少約3mg/mL、至少約4mg/mL、至少約5mg/mL、至少約6mg/mL、至少約7mg/mL、至少約8mg/mL、至少約9mg/mL、至少約10mg/mL、至少約15mg/mL、至少約20mg/mL、至少約30mg/mL、至少約40mg/mL、至少約50mg/mL、至少約60mg/mL、至少約70mg/mL、至少約80mg/mL、至少約90mg/mL、至少約100mg/mL、至少約120mg/mL、至少約150mg/mL或至少約200mg/mL。在一些實施例中，抗-PDGF適體或VEGF拮抗劑中至少一者存在的濃度為至少約0.1mg/mL、至少約1mg/mL、至少約2mg/mL、至少約3 mg/mL、至少約4mg/mL、至少約5mg/mL、至少約6mg/mL、至少約7mg/mL、至少約8mg/mL、至少約9mg/mL、至少約10mg/mL、至少約15mg/mL、至少約20mg/mL、至少約30mg/mL、至少約40mg/mL、至少約50mg/mL、至少約60mg/mL、至少約70mg/mL、至少約80mg/mL、至少約90mg/mL、至少約100mg/mL、至少約120mg/mL、至少約150mg/mL或至少約200mg/mL。

本發明組合物亦可包含一或多種賦形劑、緩衝液(亦即緩衝劑)、低溫防護劑、張力劑(亦即張力調節劑)、液體、穩定劑、界面活性劑(例如非離子性界面活性劑)、凍乾保護劑(lyoprotectant)、抗氧化劑、胺基酸、pH值調節劑或防腐劑，諸如本文所述之任一者。適合緩衝劑包括(但不限於)磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、參(羥甲基)胺基甲烷(Tris)及乙酸鈉。在某些實施例中，緩衝液能夠將組合物之pH值調節至所要pH值或所要pH值範圍內，及/或能夠使組合物之pH值達成或維持在所要pH值或所要pH值範圍內。適合的非離子性界面活性劑包括(但不限於)聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯，諸如聚山梨醇酯20及聚山梨醇酯80。適合防腐劑包括(但不限於)苯甲醇。適合張力劑包括(但不限於)氯化鈉、甘露糖醇及山梨糖醇。適合凍乾保護劑包括(但不限於)蔗糖、海藻糖及甘露糖醇。適合胺基酸包括(但不限於)甘胺酸及組胺酸。適合pH值調節劑(或能夠達成或維持所要pH值或pH值範圍的試劑)包括(但不限於)鹽酸、乙酸及氫氧化鈉。在一個實施例中，pH值調節劑(或能夠達成或維持所要pH值或PH值範圍的試劑)係以有效地使組合物達成以下pH值之量存在：約3至約8、約4.0至約8.0、約4至約7、約5至約6、約6至約7、約6至約8或約7至約7.5。組合物之適合賦形劑亦包括美國專利第7,365,166號中所述者，該專利之全部內容以引用的方式併入本文中。

在特定實施例中，本發明組合物包含以下各者：(1)抗-PDGF適 體；(2)VEGF拮抗劑；(3)緩衝液；(4)視情況存在之張力調節劑；及(5)視情況存在之界面活性劑。在特定實施例中，本發明組合物包含以下各者：(1)抗-PDGF適體；(2)VEGF拮抗劑；(3)張力調節劑；(4)視情況存在之緩衝液；及(5)視情況存在之界面活性劑。在特定實施例中，本發明組合物包含以下各者：(1)抗-PDGF適體；(2)VEGF拮抗劑；(3)緩衝液；(4)張力調節劑；及(5)視情況存在之界面活性劑。在此等組合物之具體實施例中，緩衝液為乙酸鹽、磷酸鹽、Tris或組胺酸緩衝液，或其混合物；張力調節劑為氯化鈉、甘露糖醇、山梨糖醇或海藻糖，或其混合物；且界面活性劑為聚山梨醇酯20。在各種實施例中，抗-PDGF適體存在於本發明組合物中的濃度為約0.1mg/mL至約200mg/mL；VEGF拮抗劑存在的濃度為約0.1mg/mL至約200mg/mL；緩衝液存在的濃度為約1mM至約200mM；張力調節劑存在的濃度為約10mM至約200mM(氯化鈉)、約1%至約10%(w/v)(山梨糖醇)，或約1%至約20%(w/v)(海藻糖)；且界面活性劑存在時存在的濃度為約0.005%至約0.05%或約0.001%至約0.05%。

在一個有用態樣中，本發明組合物係非經腸(例如藉由肌肉內、腹膜內、靜脈內、眼內、玻璃體內、眼球後、結膜下、眼筋膜囊下(subtenon)或皮下注射或植入)或全身性投與。供非經腸或全身性投與之組合物可包括無菌水溶液或非水溶液、懸浮液或乳液。可使用多種水性載劑，例如水、緩衝水、鹽水及其類似物。其他適合媒劑之實例包括聚丙二醇、聚乙二醇、植物油、明膠、水凝膠、氫化萘及可注射有機酯，諸如油酸乙酯。此等組合物亦可含有助劑，諸如防腐劑、濕潤劑、緩衝劑、乳化劑或分散劑。可使用生物相容性、生物降解性交酯聚合物、丙交酯/乙交酯共聚物、或聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物來控制活性成分之釋放。在一個實施例中，包含抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑之組合物係呈適用於注射之水溶液形式。在一個實施例中，組合 物包含抗-PDGF適體、VEGF拮抗劑、緩衝劑、pH值調節劑(或能夠達成或維持所要pH值或pH值範圍的試劑)及注射用水。

在一些實例中，本發明組合物亦可局部投與，例如藉由貼片或藉由直接塗覆於諸如易患新生血管性病症或受新生血管性病症影響之表皮或眼之區域，或藉由離子導入療法投與。

本發明組合物可眼內投與，此係藉由玻璃體內注射至眼內以及藉由結膜下及眼筋膜囊下注射來達成。其他投藥途徑包括經鞏膜、眼球後、腹膜內、肌肉內及靜脈內。或者，組合物可利用藥物遞送裝置或眼內植入物來投與。適用於眼科用途的組合物包括包含抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑與醫藥學上可接受之賦形劑的混合物之醫藥組合物，包括本文所述者。此等賦形劑可為例如緩衝液、惰性稀釋劑或填充劑(例如蔗糖及山梨糖醇)、潤滑劑、滑動劑及抗黏劑(例如硬脂酸鎂、硬脂酸鋅、硬脂酸、二氧化矽、氫化植物油或滑石)。

在特定實施例中，本發明組合物將向該組合物中所存在之抗-PDGF適體或VEGF拮抗劑中之一或多者賦予物理或化學穩定性。在此等實施例中，本發明組合物為物理上或化學上穩定的組合物。舉例而言，本發明組合物可使組合物中存在之抗-PDGF適體或VEGF拮抗劑在儲存期間物理上或化學上穩定性。適用於評估抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑之穩定性的各種分析技術在此項技術中可獲得，包括隨附實例中所述者，及Reubsaet等人(1998)J.Pharm.Biomed.Anal.17(6-7)：955-78及Wang(1999)Int.J.Pharm.185(2)：129-88中所評述者，包括目視檢查、SDS-PAGE、IEF、(高壓)尺寸排阻層析法(HPSEC)、RFFIT、κ/λ ELISA。隨附實例中所述之方法包括SE-HPLC、AEX-HPLC及WCX-HPLC。

本發明組合物中抗-PDGF適體或VEGF拮抗劑之物理穩定性可藉由(但不限於)以下方式確定：量測適體或拮抗劑物理完整性狀態；目 視檢驗顏色或澄清度時，確定其是否顯示聚集、沈澱或變性之任何跡象；或執行紫外光散射或尺寸排阻層析法(SEC)或差示掃描量熱法(DSC)。舉例而言，可利用微血流分析來量測組合物中不用顯微鏡不可見粒子之存在及尺寸，例如實例4中所述。

本發明組合物中抗-PDGF適體或VEGF拮抗劑之化學穩定性可藉由但不限於)以下方式確定：量測其化學完整性狀態或確定其是否顯示會導致新化學實體形成之分解或修飾之任何跡象。化學完整性可藉由偵測及定量適體或拮抗劑之化學變化形式來評估。化學改變可涉及尺寸修飾(例如修剪)，此可利用例如以下來評估：尺寸排阻層析法、SDS-PAGE、尺寸排阻層析法聯合HPLC(確定LMW及HMW物質之存在)或矩陣輔助雷射解吸附電離/飛行時間質譜法(MALDI/TOF MS)。適用於進行此等量測的系統在此項技術中已知，例如HPLC系統(Waters,Milford,Mass)及陽離子交換-HPLC(CEX-HPLC，偵測變異體及監測表面電荷)。另外，可利用隨附實例中所述之適用於量測抗-PDGF適體或VEGF拮抗劑穩定性的方法。此等方法包括SE-HPLC、WCX-HPLC及AEX-HPLC。其他類型的化學改變包括電荷改變(例如因脫醯胺作用而發生)，此可藉由例如離子交換層析法評估。氧化為另一種化學修飾，其可利用本文所揭示之方法或熟習此項技術者已知之方法偵測。

在特定實施例中，在目視檢驗顏色或澄清度時，或如藉由紫外光散射或藉由尺寸排阻層析法(SEC)或差示掃描量熱法(DSC)所量測，若本發明組合物中存在之抗-PDGF適體或VEGF拮抗劑之至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%或至少約99%未顯示聚集、沈澱或變性之跡象，則該組合物在物理上穩定。在特定實施例中，在目視檢驗顏色或澄清度時，或如藉由紫外光散射或尺寸排阻層析法(SEC)或差示掃描量熱法(DSC)所量測， 若組合物中存在之抗-PDGF適體與VEGF拮抗劑之至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%或至少約99%未顯示聚集、沈澱或變性之跡象，則該組合物在物理上穩定。

在某些實施例中，物理穩定性可藉由微血流成像來確定，其中所偵測到之粒子數較大或粒度較大通常與物理穩定性降低相關。在特定實施例中，若本發明組合物之粒子計數如藉由微血流成像所測定(例如實例4中所述)，例如小於約500,000、小於約100,000或小於約50,000個總粒子/毫升，其中粒子之等效圓直徑在0μm至約100μm範圍內或在另一個實施例中，在0μm至約25μm範圍內，則本發明組合物在物理上穩定。在另一個實施例中，若本發明組合物之粒子計數如藉由微血流成像所測定(例如實例4中所述)，例如小於約100,000、小於約50,000、小於約20,000、小於約10,000、小於約5,000、小於約2,500、小於約1,000或小於約500個粒子/毫升，其中粒子之等效圓直徑在約1μm至約2μm範圍內或在另一個實施例中，在1μm至約5μm範圍內，則本發明組合物被視為在物理上穩定。

在特定實施例中，若本發明組合物中存在之抗-PDGF適體或VEGF拮抗劑中之至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%或至少約99%未顯示導致新化學實體形成之分解或修飾，則該組合物在化學上穩定。

在特定實施例中，若抗-PDGF適體或VEGF拮抗劑中之至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%或至少約99%未顯示導致新化學實體形成之分解或修飾，則抗-PDGF適體或VEGF拮抗劑在化學上穩定。在特定實施例中，若本發明組合物中存在之抗-PDGF適體與VEGF拮抗劑之至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%或至少約99%均未顯示導致新化學實體形成之分解或修飾，則該組合物在化學 上穩定。在某些實施例中，分解或修飾為導致新化學實體形成之分解或修飾，例如藉由化學鍵分裂。

在特定實施例中，若本發明組合物在約室溫下儲存至少5天、至少7天、至少10天、至少14天、至少20天、至少30天、至少2週、至少4週、至少8週、至少12週、至少16週或至少24週、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少6個月或至少約1年或至少約2年或至少約3年或至少約4年或至少約5年時；或者在2.0℃至約8.0℃之溫度下儲存至少5天、至少7天、至少10天、至少14天、至少20天、至少30天、至少2週、至少4週、至少8週、至少12週、至少16週、至少24週、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少6個月或至少約1年或至少約2年或至少約3年或至少約4年或至少約5年時；或者在約5.0℃之溫度下儲存至少2週、至少4週、至少8週、至少12週、至少16週、至少24週、至少約1年或至少約2年或至少約3年或至少約4年或至少約5年時，該組合物中之抗-PDGF適體或VEGF拮抗劑中之一或多者之至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%或至少約99%未顯示導致新化學實體形成之分解或修飾，則該組合物在化學上穩定。在特定實施例中，若組合物中存在之抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑在化學上穩定，則組合物在物理上或化學上穩定。在一些實施例中，本發明組合物在約40℃下穩定(亦即物理上或化學上穩定)長達或至少1週、長達或至少2週，或長達或至少1個月。在一些實施例中，組合物在約-20℃下穩定長達或至少1年，或者長達或至少2年、3年、4年或5年。在一些實施例中，組合物在約-80℃下穩定長達或至少1年，或者長達或至少2年、3年、4年或5年。在某些實施例中，本發明組合物在約5℃或約30℃下儲存約4小時之後，若其粒子計數如藉由微血流成像所測定(例如實例4中所述)，例如小於約500,000、小於約100,000或小於約50,000個總粒子/毫升，其中粒子之 等效圓直徑在0μm至約100μm範圍內或在另一個實施例中，在0μm至約25μm範圍內；或小於約100,000、小於約50,000、小於約20,000、小於約10,000、小於約5,000、小於約2,500、小於約1,000或小於約500個粒子/毫升，其中粒子之等效圓直徑在1μm至2μm範圍內或在另一個實施例中，在1μm至5μm範圍內，則該組合物在物理上或化學上穩定。

在特定實施例中，若本發明組合物在儲存後所偵測到之平均粒子數不超過約50個粒子/毫升(其中粒子直徑>約10μm)及不超過5個粒子/毫升(其中粒子直徑>25μm)，如(788)Particulate Matter in Injections(2011年10月1日正式公告修訂版，美國藥典委員會(The United States Pharmacopeial Convention))中所述之遮光粒子計數測試所量測，則本發明組合物被視為在物理上或化學上穩定。如其中所述，此測試係使用適合裝置，根據光阻原理進行，可自動測定粒子尺寸及根據尺寸確定粒子數。該裝置係使用10μm至25μm已知尺寸之球粒分散液來校準。此等標準粒子分散於不含粒子之水中。在分散期間，注意避免粒子聚集。測試係在限制暴露於外來微粒物質的條件下進行，例如在層流櫃中進行。除膜濾器外，所用玻璃器皿及過濾設備用溫清潔劑溶液小心洗滌且用大量水沖洗以移除所有痕量清潔劑。臨用前，設備用不含粒子的水自上而下沖洗，先沖洗外部接著沖洗內部。注意不可將氣泡引入待測樣品中，特別是當一部分製劑正轉移至其中將進行量測之容器中時。為了檢驗環境適合於測試、玻璃器皿被完全清潔及待用水不含粒子，如緊接著下文所述測定不含粒子之水之5個樣品(每個5mL)中的微粒物質。若在合併之25mL中，10μm或大於10μm粒子之數目超過25個，則針對測試所採取之預防措施不充分。接著重複準備步驟，直至環境、玻璃器皿及水適合為止。

一旦環境、玻璃器皿及水適合於測試，則對試樣進行測試。藉 由將樣品容器連續緩慢倒置20次來使樣品內含物混合。必要時，小心移除容器密封蓋(若有)。使用不含粒子之水之噴流來清潔容器外表面且移除容器密封蓋(若有)，避免內含物受到任何污染。藉由適當措施(諸如使容器靜置2分鐘或超音處理)來排除氣泡。

對於大體積樣品(體積大於25mL)，測試單一單元。對於小體積樣品(體積小於25mL)，在清潔容器中合併10或10個以上單元之內含物以獲得不小於25mL之大體積；測試溶液可如下製備：將適合數目個小瓶之內含物混合且用不含粒子之水或當不含粒子之水不適合時用不含粒子之適當溶劑將所得混合物稀釋至25mL。體積為25mL或25mL以上之小體積非經腸溶液可個別地測試。粉末用不含粒子之水或當不含粒子之水不適合時用不含粒子之適當溶劑復原。試樣數應足以提供統計顯著的評估。對於大體積樣品或小體積樣品(體積為25mL或25mL以上)，可利用適當取樣計劃測試少於10個單元。

自各樣品移出四個部分(各不少於5mL)，且對等於或大於10μm或25μm之粒子數進行計數。針對第一部分所獲得的結果不予處理，且計算所檢製劑之平均粒子數。

對於標稱體積超過100mL之容器中之樣品，應考慮本文所述之測試1.A之準則。

對於標稱體積為100mL或小於100mL之容器中之樣品，應考慮本文所述之測試1.B之準則。

若平均粒子數超過測試極限，則應利用顯微鏡法粒子計數測試法來測試樣品。

測試1.A. 若樣品容器中存在之平均粒子數不超過每毫升25個，其中粒子直徑等於或大於10μm，或若樣品容器中存在之平均粒子數不超過每毫升3個，其中粒子直徑等於或大於25μm，則樣品符合測試極限。

測試1.B. 若樣品容器中存在之平均粒子數不超過每個容器6000個，其中粒子直徑等於或大於10μm，或若樣品容器中存在之平均粒子數不超過每個容器600個，其中粒子直徑等於或大於25μm，則樣品符合測試極限。

在特定實施例中，若組合物在儲存後所偵測到之平均粒子數不超過約50個粒子/毫升(其中粒子直徑>約10μm)；不超過5個粒子/毫升(其中粒子直徑>25μm)；及不超過2個粒子/毫升(其中粒子直徑>50μm)，如(788)Particulate Matter in Injections(2011年10月1日正式公告修訂版，美國藥典委員會)中所述之顯微鏡法粒子計數測試所量測，則本發明組合物被視為在物理上或化學上穩定。

顯微鏡法粒子計數測試係使用適合雙目顯微鏡、持留微粒物質之過濾器總成及膜濾器進行檢驗來執行。顯微鏡經調節至100±10倍放大倍數且配備有用物鏡測微計校準之目鏡測微計、能夠固持及橫越膜濾器之整個過濾區域之機械台，及除斜射照明之外亦提供反射照明的兩個適合照明器。目鏡測微計為圓直徑格子線且由以下組成：經十字線分成象限之大圓；100倍放大倍數下10μm及25μm直徑之透明及黑色參考圓；及以10μm增量為刻度之線性標度。其使用國內或國際標準機構認證之載物台測微計校準。格子線之線性標度之相對誤差在±2%內為可接受。大圓指定為格子線視野(GFOV)。使用兩個照明器。一個為顯微鏡內部之反射明視野照明器，另一個為外部可聚焦輔助照明器，其可經調節以得到10°至20°角度之反射斜射照明。用於持留微粒物質之過濾器總成係由玻璃或其他適合材料製成之過濾器支架組成，且配備有真空源及適合膜濾器。膜濾器具有適合尺寸、黑色或暗灰色顏色、呈非網格狀或網格狀，及1.0μm或小於1.0μm之標稱孔徑。

測試係在限制暴露於外來微粒物質的條件下進行，例如在層流 櫃中進行。除膜濾器外，所用玻璃器皿及過濾器總成用溫清潔劑溶液小心洗滌且用大量水沖洗以移除所有微量清潔劑。臨用前，膜濾器與設備之兩面均用不含粒子的水自上而下沖洗，先沖洗外部接著沖洗內部。

為了檢驗環境適合於測試、玻璃器皿及膜濾器被完全清潔及待用水不含粒子，進行以下測試：根據下文緊接著描述的方法測定50mL體積之不含粒子之水中的微粒物質。若過濾區域內存在超過20個粒子的尺寸為10μm或大於10μm或若超過5個粒子之尺寸為25μm或大於25μm，則針對測試所採取的預防措施不充分。重複準備步驟，直至環境、玻璃器皿、膜濾器及水適用於測試為止。

藉由將樣品容器連續緩慢倒置20次來使樣品內含物混合。必要時，小心移除容器密封蓋(若有)。使用不含粒子之水之噴流來清潔容器開口之外表面且移除容器密封蓋(若有)，避免內含物受到任何污染。

對於大體積樣品，測試單一單元。對於體積小於25mL之小體積樣品，在清潔容器中合併10或10個以上樣品容器之內含物；測試溶液可如下製備：將適合數目個小瓶之內含物混合且用不含粒子之水或當不含粒子之水不適合時用不含粒子之適當溶劑稀釋至25mL。體積為25mL或25mL以上之小體積樣品可個別地測試。供非經腸使用之粉末係用不含粒子之水或當不含粒子之水不適合時用不含粒子之適當溶劑復原。試樣數應足以提供統計顯著的評估。對於大體積樣品或小體積樣品(體積為25mL或25mL以上)，可利用適當取樣計劃測試少於10個單元。

裝有膜濾器之過濾器支架之內部用幾毫升不含粒子之水濕潤。將溶液池或單一樣品容器之全部體積轉移至過濾漏斗中，且施加真空。需要時，逐步添加一部分樣品直至過濾整個體積。最後添加樣品 之後，使用不含粒子之水之噴流沖洗過濾器支架之內壁。維持真空直至膜濾器表面無液體。將膜濾器置於皮式培養皿(Petri dish)中，且在蓋稍微半開下使膜濾器風乾。膜濾器已乾燥之後，將皮式培養皿置於顯微鏡載物台上，整個膜濾器在照明裝置之反射光下掃描，且對等於或大於10μm之粒子數及等於或大於25μm之粒子數進行計數。或者，可進行部分膜濾器計數及藉由計算來確定過濾器總計數。確定所檢製劑中之平均粒子數。

利用圓直徑格子線之粒子尺寸確定方法係藉由與格子線上之10μm及25μm參考圓相比估算粒子之等效直徑來進行。藉此，使粒子在格子線視野內不移離其初始位置且不與參考圓重疊以便比較。透明格子線參考圓之內徑用於確定白色透明粒子之尺寸，而暗色粒子之尺寸係藉由使用黑色不透明格子線參考圓之外徑確定。

在膜濾器上具有染色或脫色外觀之非晶形、半液體或另外在形態上不確定的材料由於此等材料顯示很小或無表面浮凸且呈現凝膠狀或膜樣外觀而無法確定尺寸或計數。在此等情況下，藉由遮光粒子計數測試法測試溶液樣品可有助於闡明枚舉。

對於標稱體積超過100mL之容器中之樣品，應用測試2.A之準則。

對於標稱體積為100mL或小於100mL之容器中之樣品，應用測試2.B之準則。

測試2.A. 若樣品容器中存在之平均粒子數不超過每毫升12個且粒子直徑等於或大於10μm，或樣品容器中存在之平均粒子數不超過每毫升2個且粒子直徑等於或大於25μm，則樣品符合測試極限。

測試2.B. 若樣品容器中存在之平均粒子數不超過每個容器3000個且粒子直徑等於或大於10μm，或樣品容器中存在之粒子平均數不超過每個容器300個且粒子直徑等於或大於25μm，則樣品符合測試極 限。

在某些實施例中，本發明組合物呈凍乾形式。

包含拮抗劑A及蘭尼單抗之組合物

在某些實施例中，本發明組合物包含拮抗劑A或其經修飾形式及蘭尼單抗。在特定實施例中，組合物中存在之拮抗劑A或其經修飾形式之濃度(拮抗劑A之質量減去其-R基團之質量/組合物之體積)與蘭尼單抗之濃度(質量/組合物之體積)的比率小於25.0、小於10.0、小於9.0、小於8.0、小於7.0、小於6.0、小於5.0、小於4.0、小於3.0、小於2.0或小於1.0。在特定實施例中，組合物中存在之拮抗劑A或其經修飾形式之濃度(拮抗劑A之質量減去其-R基團之質量/組合物之體積)與蘭尼單抗之濃度(質量/組合物之體積)的比率小於或等於25.0、小於或等於10.0、小於或等於9.0、小於或等於8.0、小於或等於7.0、小於或等於6.0、小於或等於5.0、小於或等於4.0、小於或等於3.0、小於或等於2.0或小於或等於1.0。在特定實施例中，組合物中存在之拮抗劑A或其經修飾形式之濃度(拮抗劑A之質量減去其-R基團之質量/組合物之體積)與蘭尼單抗之濃度(質量/組合物之體積)的比率在約1至約10、約2至約5、約3至約4或約5範圍內。

拮抗劑A之-R基團描繪於圖78A中。

在特定實施例中，本發明組合物包含拮抗劑A或其經修飾形式及蘭尼單抗，且該組合物在特定pH值下或適於非經腸投藥之特定pH值下就兩種活性劑而言為穩定的。在某些實施例中，拮抗劑A或其經修飾形式對蘭尼單抗活性無不利影響。在某些實施例中，蘭尼單抗對拮抗劑A或其經修飾形式之活性無不利影響。在某些實施例中，拮抗劑A或其經修飾形式使蘭尼單抗活性增強。在某些實施例中，蘭尼單抗使拮抗劑A或其經修飾形式之活性增強。測定拮抗劑A及VEGF拮抗劑之活性的方法在此項技術中已知且包括量測拮抗劑A或VEGF拮抗劑 分別對PDGF或VEGF調節之基因表現的作用，如例如實例3及6中所述。

在某些實施例中，組合物包含以下一或多者：張力調節劑、界面活性劑及適於達成或維持特定pH值或適於非經腸投藥的緩衝液。適當緩衝液包括本文所述者以及此項技術中已知之其他緩衝液，諸如Good緩衝液，例如MES。

在某些實施例中，本發明組合物中之拮抗劑A或其經修飾形式的濃度小於約100mg/mL、小於約50mg/mL、小於約40mg/mL、小於約30mg/mL、小於約25mg/mL、小於約20mg/mL、小於約15mg/mL、小於約10mg/mL或小於約5mg/mL。在某些實施例中，拮抗劑A或其經修飾形式的濃度為約0.3mg/mL至約100mg/mL、約0.3mg/mL至約50mg/mL、約0.3mg/mL至約40mg/mL、約0.3mg/mL至約30mg/mL、約0.3至約25mg/mL、約0.3mg/mL至約20mg/mL、約0.3mg/mL至約15mg/mL、約0.3mg/mL至約10mg/mL、約1mg/mL至約100mg/mL、約1mg/mL至約50mg/mL、約1mg/mL至約40mg/mL、約1mg/mL至約30mg/mL、約1mg/mL至約25mg/mL、約1mg/mL至約20mg/mL、約1mg/mL至約15mg/mL、約1mg/mL至約10mg/mL、約1mg/mL至約5mg/mL、約5mg/mL至約100mg/mL、或約5mg/mL至約50mg/mL。在某些實施例中，拮抗劑A或其經修飾形式的濃度為約1mg/mL、約2mg/mL、約3mg/mL、約4mg/mL、約5mg/mL、約6mg/mL、約7mg/mL、約8mg/mL、約9mg/mL、約10mg/mL、約15mg/mL、約20mg/mL、約24mg/mL、約25mg/mL、約30mg/mL、約40mg/mL或約50mg/mL。

在某些實施例中，本發明組合物中蘭尼單抗之濃度為約0.5mg/mL至約50mg/mL、約0.5mg/mL至約20mg/mL、約1.0mg/mL至約50mg/mL、約1mg/mL至約20mg/mL、約2mg/mL至約10mg/mL、 或約4mg/mL、約5mg/mL、約6mg/mL、約7mg/mL、約8mg/mL、約9mg/mL、約10mg/mL、約11mg/mL或約12mg/mL。

在某些實施例中，本發明組合物中蘭尼單抗之濃度為約0.5mg/mL至約50mg/mL、約0.5mg/mL至約20mg/mL、約1.0mg/mL至約50mg/mL、約1mg/mL至約20mg/mL、約2mg/mL至約10mg/mL、或約4mg/mL、約5mg/mL、約6mg/mL、約7mg/mL、約8mg/mL、約9mg/mL、約10mg/mL、約11mg/mL、或約12mg/mL，且組合物中之拮抗劑A或其經修飾形式的濃度小於約100mg/mL、小於約50mg/mL、小於約40mg/mL、小於約30mg/mL、小於約25mg/mL、小於約20mg/mL、小於約15mg/mL、小於約10mg/mL或小於約5mg/mL。

在某些實施例中，本發明組合物中蘭尼單抗之濃度為約0.5mg/mL至約50mg/mL、約0.5mg/mL至約20mg/mL、約1mg/mL至約50mg/mL、約1mg/mL至約20mg/mL、約2mg/mL至約10mg/mL或約4mg/mL、約5mg/mL、約6mg/mL、約7mg/mL、約8mg/mL、約9mg/mL、約10mg/mL、約11mg/mL或約12mg/mL，且拮抗劑A或其經修飾形式之濃度為約0.3mg/mL至約100mg/mL、0.3mg/mL至約50mg/mL、約0.3mg/mL至約40mg/mL、約0.3mg/mL至約30mg/mL、約0.3至約25mg/mL、約0.3mg/mL至約20mg/mL、約0.3mg/mL至約15mg/mL、約0.3mg/mL至約10mg/mL、約1.0mg/mL至約100mg/mL、約1mg/mL至約50mg/mL、約1mg/mL至約40mg/mL、約1mg/mL至約30mg/mL、約1mg/mL至約25mg/mL、約1mg/mL至約20mg/mL、約1mg/mL至約15mg/mL、約1mg/mL至約10mg/mL、約1mg/mL至約5mg/mL、約5mg/mL至約100mg/mL或約5mg/mL至約50mg/mL。

在某些實施例中，本發明組合物中蘭尼單抗之濃度為約0.5 mg/mL至約50mg/mL、約0.5mg/mL至約20mg/mL、約1mg/mL至約50mg/mL、約1mg/mL至約20mg/mL、約2mg/mL至約50mg/mL、約2mg/mL至約10mg/mL或約4mg/mL、約5mg/mL、約6mg/mL、約7mg/mL、約8mg/mL、約9mg/mL或約10mg/mL，且拮抗劑A或其經修飾形式之濃度為約1mg/mL、約2mg/mL、約3mg/mL、約4mg/mL、約5mg/mL、約6mg/mL、約7mg/mL、約8mg/mL、約9mg/mL、約10mg/mL、約15mg/mL、約20mg/mL、約24mg/mL、約25mg/mL、約30mg/mL、約40mg/mL或約50mg/mL。在一個實施例中，拮抗劑A或其經修飾形式之濃度為約3mg/mL，且蘭尼單抗濃度為約5mg/mL。在一個實施例中，拮抗劑A或其經修飾形式之濃度為約6mg/mL，且蘭尼單抗濃度為約10mg/mL。在一個實施例中，拮抗劑A或其經修飾形式之濃度為約15mg/mL，且蘭尼單抗濃度為約5mg/mL。在一個實施例中，拮抗劑A或其經修飾形式之濃度為約24mg/mL，且蘭尼單抗濃度為約8mg/mL。

在包含拮抗劑A或其經修飾形式及蘭尼單抗之組合物的某些實施例中，該組合物進一步包含張力調節劑，此張力調節劑為山梨糖醇或氯化鈉，或其混合物。在特定實施例中，張力調節劑為山梨糖醇，且組合物之pH值為約5.0至約8.0、約5.0至約7.0、約6.0或約7.0。在特定實施例中，張力調節劑為氯化鈉，且組合物之pH值為約5.0至約8.0、約5.0至約7.0、約5.5至約7.5、約6.0至約8.0、約8.0、約7.0或約6.0。在某些實施例中，張力調節劑為約1%至約10%(w/v)、或約1%(w/v)、約2%(w/v)、約3%(w/v)、約4%(w/v)、約5%(w/v)、約6%(w/v)、約7%(w/v)、約8%(w/v)、約9%(w/v)或約10%(w/v)之山梨糖醇。在特定實施例中，張力調節劑為氯化鈉，其濃度為約10mM至約200mM、約50mM至200mM、約75mM至約200mM、約50mM至約150mM、約100mM、約110mM、約120mM、約130mM、約140 mM或約150mM。在一個實施例中，張力調節劑為約130mM濃度之氯化鈉。在其他實施例中，張力調節劑為約75mM或約120mM濃度之氯化鈉。就張力調節劑濃度而言，「mM」係指每公升組合物中張力調節劑之毫莫耳數。

在包含拮抗劑A或其經修飾形式及蘭尼單抗之本發明組合物的某些實施例中，該組合物進一步包含能夠使組合物之pH值達成或維持在所要範圍內的緩衝液。在某些實施例中，組合物包含組胺酸(例如L-組胺酸或其醫藥學上可接受之鹽)或磷酸鹽作為緩衝液，例如磷酸鈉或磷酸鉀(或組胺酸與磷酸鹽兩者)。在某些實施例中，緩衝液存在的濃度為約1mM至約200mM、約1mM至約150mM、約1mM至約20mM、約1mM至約10mM、約2mM至約100mM、約2mM至約20mM、約5mM至約20mM，或約10mM。在特定實施例中，經緩衝之組合物之pH值為約5.0至約8.0、約5.0至約7.0、約5.5至約7.5、約5.5至約7.0、或約6.0。在一個實施例中，經緩衝之組合物具有約5.5至約7.0之pH值。在某些實施例中，緩衝液包含約1mM至約200mM、約1mM至約150mM、約2mM至約100mM、約5mM至約20mM、或約10mM濃度之組胺酸，且經緩衝之組合物具有約5.5至約7.0、或約6.0之pH值。在一個特定實施例中，緩衝液包含約10mM濃度之組胺酸且經組胺酸緩衝之組合物的pH值為約6.0。就緩衝液濃度而言，「mM」係指每公升組合物中緩衝液(例如組胺酸)之毫莫耳數。

在包含拮抗劑A或其經修飾形式及蘭尼單抗之組合物的某些實施例中，緩衝液包含單獨或與組胺酸組合之磷酸鹽。磷酸鹽緩衝液可為例如磷酸鈉或磷酸鉀緩衝液。在某些實施例中，緩衝液包含約1mM至約200mM、約1mM至約50mM、約2mM至約200mM、約2mM至約50mM、約5mM至約200mM、約5mM至約100mM、約5mM至約50mM、約10mM至約150mM、約10mM至約100mM、約5mM、約 10mM、約25mM或約50mM濃度之磷酸鹽。在特定實施例中，經緩衝之組合物之pH值為約5.0至約8.0、約6.0至約8.0、約5.5至約7.5、約5.5至約7.0、約6.0、約7.0或約8.0。在一個實施例中，緩衝液包含磷酸鹽，且經緩衝之組合物具有約6.0至約8.0之pH值。在某些實施例中，緩衝液包含約5mM至約200mM、約5mM至約150mM、約5mM至約100mM、約5mM、約8mM、約10mM、約25mM或約50mM濃度之磷酸鹽，且經緩衝之組合物具有約5.5至約7.5、約5.5至約7.0或約6.0之pH值。在一個特定實施例中，緩衝液包含約10mM濃度之磷酸鹽，且經緩衝之組合物具有約6.2之pH值。

在包含拮抗劑A或其經修飾形式及蘭尼單抗之組合物的某些實施例中，該組合物進一步包含界面活性劑。在特定實施例中，界面活性劑為約0.001%(w/v)至約0.05%(w/v)、約0.002%(w/v)至約0.05%(w/v)、約0.005%(w/v)至約0.05%(w/v)、約0.01%(w/v)至約0.05%(w/v)、或約0.02%(w/v)濃度之聚山梨醇酯20。

在一個實施例中，組合物包含拮抗劑A或其經修飾形式、蘭尼單抗、組胺酸及NaCl。該組合物可進一步包含聚山梨醇酯。

在一個特定實施例中，本發明組合物包含拮抗劑A或其經修飾形式及蘭尼單抗；拮抗劑A(或其經修飾形式)濃度與蘭尼單抗濃度之比率小於2；且該組合物進一步包含約10mM至約200mM濃度之氯化鈉、約1mM至約100mM濃度之組胺酸，及約0.005%至約0.05%濃度之聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20)，其中組合物之pH值為約5.5至約7.0。

在某些實施例中，本發明提供包含拮抗劑A或其經修飾形式或其醫藥學上可接受之鹽及蘭尼單抗或其醫藥學上可接受之鹽的組合物。在某些實施例中，本發明組合物包含：(a)約0.3mg/mL至約30mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式，或其醫藥學上可接受之鹽；及(b)約0.5 mg/mL至約20mg/mL蘭尼單抗或其醫藥學上可接受之鹽。在其他實施例中，組合物進一步包含以下一或兩者：(c)約1mM至約20mM L-組胺酸；及(d)約10mM至約200mM NaCl。在其他實施例中，組合物進一步包含：(e)約0.001%(w/v)至約0.05%(w/v)界面活性劑，其視情況為聚山梨醇酯。在一特定實施例中，組合物包含：(a)約0.3mg/mL至約30mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式，或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約0.5mg/mL至約20mg/mL蘭尼單抗或其醫藥學上可接受之鹽；(c)約1mM至約20mM L-組胺酸；及(d)約10mM至約200mM NaCl，其中組合物之pH值為約pH 5.0至約pH 7.0。在另一實施例中，組合物包含：(a)約3mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式，或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約5mg/mL蘭尼單抗或其醫藥學上可接受之鹽；(c)約10mM L-組胺酸；及(d)約130mM NaCl，其中組合物之pH值為約pH 6.0。在某些實施例中，組合物進一步包含：(e)約0.01%(w/v)聚山梨醇酯20。

在某些實施例中，本發明組合物包含：(a)約1.0mg/mL至約100mg/mL，或約5.0mg/mL至約50mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式，或其醫藥學上可接受之鹽；及(b)約1.0mg/mL至約50mg/mL蘭尼單抗或其醫藥學上可接受之鹽。在其他實施例中，組合物進一步包含以下一或兩者：(c)約1mM至約20mM L-組胺酸；及(d)約10mM至約200mM NaCl。在其他實施例中，組合物進一步包含：(e)約0.001%(w/v)至約0.05%(w/v)界面活性劑，其視情況為聚山梨醇酯。在一特定實施例中，組合物包含：(a)約5.0mg/mL至約50mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式，或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約1.0mg/mL至約50mg/mL蘭尼單抗或其醫藥學上可接受之鹽；(c)約1mM至約20mM L-組胺酸；及(d)約10mM至約200mM NaCl，其中組合物之pH值為約pH 5.0至約pH 8.0，或約pH 5.5至約pH 7.5。在另一實施例中，組合物包含：(a)約15 mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式，或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約5mg/mL蘭尼單抗或其醫藥學上可接受之鹽；(c)約5mM L-組胺酸；及(d)約75mM NaCl，其中組合物之pH值為約pH 5.5至約pH 7.5或約pH 6.0。在某些實施例中，組合物進一步包含：(e)約0.005%(w/v)聚山梨醇酯20。在另一實施例中，組合物包含：(a)約24mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式，或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約8mg/mL蘭尼單抗或其醫藥學上可接受之鹽；(c)約2mM L-組胺酸；及(d)約120mM NaCl，其中組合物之pH值為約pH 5.5至約pH 7.5或約pH 6.0。在某些實施例中，組合物進一步包含：(e)約0.002%(w/v)聚山梨醇酯20。

在某些實施例中，本發明組合物包含：(a)約0.3mg/mL至約30mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式，或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約0.5mg/mL至約20mg/mL蘭尼單抗；及以下一或兩者：(c)能夠使組合物之pH值達成或維持在約pH 5.0至約pH 8.0之緩衝液；及(d)張力調節劑。在特定實施例中，緩衝劑存在時為約1mM至約20mM L-組胺酸或約1mM至約20mM磷酸鈉，且張力調節劑存在時為約10mM至約200mM NaCl、約1%至約20%(w/v)山梨糖醇或約1%至約20%(w/v)海藻糖。在某些實施例中，緩衝液為約1mM至約20mM L-組胺酸；且張力調節劑為約10mM至約200mM NaCl，其中組合物之pH值為約pH 5.0至約pH 7.0。

本發明之任何組合物亦可包含界面活性劑，例如約0.001%(w/v)至約0.05%(w/v)界面活性劑。

本發明組合物之實例包括表1、表3或表8中所述之組合物。在其他實施例中，本發明包括表1中所述之組合物但無聚山梨醇酯。

在一個實施例中，本發明組合物包含約3mg/mL濃度之拮抗劑A或其經修飾形式、約5mg/mL濃度之蘭尼單抗、約10mM濃度之組胺酸、約130mM濃度之氯化鈉及約0.02%(w/v)濃度之聚山梨醇酯20， 其中組合物之pH值為約6.0。

在一個實施例中，本發明組合物包含約3mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式、約5mg/mL蘭尼單抗、約10mM磷酸鈉、約5%(w/v)山梨糖醇及約0.01%(w/v)聚山梨醇酯20，其中組合物之pH值為約pH 7.0。

在一個實施例中，本發明組合物包含約3mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式、約5mg/mL蘭尼單抗、約10mM磷酸鈉、約130mM NaCl及約0.01%(w/v)聚山梨醇酯20，其中組合物之pH值為約pH 7.0。

在一個實施例中，本發明組合物包含約3mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式、約5mg/mL蘭尼單抗、約5mM磷酸鈉、約5mM組胺酸鹽酸鹽、約75mM NaCl、約5%(w/v)海藻糖及約0.005%(w/v)聚山梨醇酯20，其中組合物之pH值為約pH 6.5。

在某些實施例中，本發明組合物包含：(a)約3mg/mL至約90mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式；(b)約1.0mg/mL至約30mg/mL蘭尼單抗；及以下一或兩者：(c)能夠使組合物之pH值達成或維持在約pH 5.0至約pH 8.0之緩衝液；及(d)張力調節劑。在特定實施例中，緩衝液存在時包含約1mM至約100mM磷酸鈉或約1.0mM至約10mM組胺酸鹽酸鹽；且張力調節劑存在時為約0.5%(w/v)至約10%(w/v)海藻糖。

在一個實施例中，本發明組合物包含約15mg/mL濃度之拮抗劑A或其經修飾形式、約5mg/mL濃度之蘭尼單抗、約5mM濃度之組胺酸、約75mM濃度之氯化鈉及約0.005%(w/v)濃度之聚山梨醇酯20，其中組合物之pH值為約5.5至約7.5。

在一個實施例中，本發明組合物包含約24mg/mL濃度之拮抗劑A或其經修飾形式、約8mg/mL濃度之蘭尼單抗、約2mM濃度之組胺酸、約120mM濃度之氯化鈉及約0.002%(w/v)濃度之聚山梨醇酯20，其中組合物之pH值為約5.5至約7.5。

在特定實施例中，包含拮抗劑A或其經修飾形式及蘭尼單抗之組合物在25℃下在化學上穩定至少8週或至少12週或在4℃下在化學上穩定至少12週或至少16週或至少24週。在特定實施例中，拮抗劑A及蘭尼單抗中每一者之至少80%在此等條件中之至少一個條件下未顯示導致新化學實體形成之分解或修飾跡象。

包含拮抗劑A及貝伐單抗之組合物

在某些實施例中，本發明組合物包含拮抗劑A或其經修飾形式及貝伐單抗。在特定實施例中，組合物中存在之拮抗劑A(或其經修飾形式)之濃度(拮抗劑A之質量減去其-R基團之質量/組合物之體積)與貝伐單抗之濃度(質量/組合物之體積)的比率小於25.0、小於10.0、小於9.0、小於8.0、小於7.0、小於6.0、小於5.0、小於4.0、小於3.0、小於2.0、小於1.0或小於0.5。

拮抗劑A之-R基團描繪於圖78A中。

在特定實施例中，本發明組合物包含拮抗劑A或其經修飾形式及貝伐單抗，且該組合物在適於非經腸投藥的特定pH值下就兩種活性劑而言為穩定的。在某些實施例中，拮抗劑A或其經修飾形式對貝伐單抗活性無不利影響。在某些實施例中，貝伐單抗對拮抗劑A或其經修飾形式之活性無不利影響。在某些實施例中，拮抗劑A或其經修飾形式使貝伐單抗活性增強。在某些實施例中，貝伐單抗使拮抗劑A或其經修飾形式之活性增強。測定拮抗劑A及VEGF拮抗劑之活性的方法在此項技術中已知且包括量測拮抗劑A或VEGF拮抗劑分別對PDGF或VEGF調節之基因表現的作用，如例如實例3及6中所述。

在某些實施例中，組合物包含一或多種張力調節劑、界面活性劑及適於達成或維持特定pH值或適於非經腸投藥的緩衝液。適當緩衝液包括本文所述者以及此項技術中已知之其他緩衝液，諸如Good緩衝液，例如MES。

在某些實施例中，組合物中之拮抗劑A或其經修飾形式的濃度小於約50mg/mL、小於約40mg/mL、小於約30mg/mL、小於約25mg/mL、小於約20mg/mL、小於約15mg/mL、小於約10mg/mL或小於約5mg/mL。在某些實施例中，拮抗劑A或其經修飾形式之濃度為約0.3mg/mL至約50mg/mL、約0.3mg/mL至約40mg/mL、約0.3mg/mL至約30mg/mL、約0.3至約25mg/mL、約0.3mg/mL至約20mg/mL、約0.3mg/mL至約15mg/mL、約0.3mg/mL至約10mg/mL、約1mg/mL至約50mg/mL、約1mg/mL至約40mg/mL、約1mg/mL至約30mg/mL、約1mg/mL至約25mg/mL、約1mg/mL至約20mg/mL、約1mg/mL至約15mg/mL、約1mg/mL至約10mg/mL、或約1mg/mL至約5mg/mL。在某些實施例中，拮抗劑A或其經修飾形式之濃度為約1mg/mL、約2mg/mL、約3mg/mL、約4mg/mL、約5mg/mL、約6mg/mL、約7mg/mL、約8mg/mL、約9mg/mL、約10mg/mL、約15mg/mL、約20mg/mL、約25mg/mL、約30mg/mL、約40mg/mL或約50mg/mL。

在某些實施例中，貝伐單抗濃度為約0.5mg/mL至約50mg/mL、約0.5mg/mL至約25mg/mL、約1mg/mL至約50mg/mL、約1.0至約25mg/mL、約1.0至約20mg/mL、約5mg/mL至約50mg/mL、約5mg/mL至約25mg/mL、約5mg/mL至約25mg/mL、約5mg/mL至約20mg/mL、約12.5mg/mL、約25mg/mL或約50mg/mL。

在某些實施例中，貝伐單抗濃度為約0.5mg/mL至約50mg/mL、約0.5mg/mL至約25mg/mL、約1mg/mL至約50mg/mL、約1.0至約25mg/mL、約1.0至約20mg/mL、約5mg/mL至約50mg/mL、約5mg/mL至約25mg/mL、約5mg/mL至約25mg/mL、約5mg/mL至約20mg/mL、約12.5mg/mL、約25mg/mL、或約50mg/mL，且拮抗劑A或其經修飾形式之濃度為小於約50mg/mL、小於約40mg/mL、小於約 30mg/mL、小於約25mg/mL、小於約20mg/mL、小於約15mg/mL、小於約10mg/mL或小於約5mg/mL。

在某些實施例中，貝伐單抗濃度為約0.5mg/mL至約50mg/mL、約0.5mg/mL至約25mg/mL、約1mg/mL至約50mg/mL、約1.0至約25mg/mL、約1.0至約20mg/mL、約5mg/mL至約50mg/mL、約5mg/mL至約25mg/mL、約5mg/mL至約25mg/mL、約5mg/mL至約20mg/mL、約12.5mg/mL、約25mg/mL或約50mg/mL，且拮抗劑A或其經修飾形式之濃度為約0.3mg/mL至約50mg/mL、約0.3mg/mL至約40mg/mL、約0.3mg/mL至約30mg/mL、約0.3至約25mg/mL、約0.3mg/mL至約20mg/mL、約0.3mg/mL至約15mg/mL、約0.3mg/mL至約10mg/mL、約1mg/mL至約50mg/mL、約1mg/mL至約40mg/mL、約1mg/mL至約30mg/mL、約1mg/mL至約25mg/mL、約1mg/mL至約20mg/mL、約1mg/mL至約15mg/mL、約1mg/mL至約10mg/mL、或約1mg/mL至約5mg/mL。

在某些實施例中，貝伐單抗濃度為約0.5mg/mL至約50mg/mL、約0.5mg/mL至約25mg/mL、約1mg/mL至約50mg/mL、約1.0至約25mg/mL、約1.0至約20mg/mL、約5mg/mL至約50mg/mL、約5mg/mL至約25mg/mL、約5mg/mL至約25mg/mL、約5mg/mL至約20mg/mL、約12.5mg/mL、約25mg/mL或約50mg/mL，且拮抗劑A或其經修飾形式之濃度為約1mg/mL、約2mg/mL、約3mg/mL、約4mg/mL、約5mg/mL、約6mg/mL、約7mg/mL、約8mg/mL、約9mg/mL、約10mg/mL、約15mg/mL、約20mg/mL、約25mg/mL、約30mg/mL、約40mg/mL或約50mg/mL。在一個實施例中，拮抗劑A或其經修飾形式之濃度為約3mg/mL，且貝伐單抗濃度為約12.5mg/mL。在另一個實施例中，拮抗劑A或其經修飾形式之濃度為約6mg/mL，且貝伐單抗濃度為約25mg/mL或約50mg/mL。

在包含拮抗劑A或其經修飾形式及貝伐單抗之組合物的某些實施例中，組合物進一步包含選自山梨糖醇、氯化鈉及海藻糖之張力調節劑。在其他實施例中，組合物包含山梨糖醇與氯化鈉、氯化鈉與海藻糖，或山梨糖醇與海藻糖。在特定實施例中，組合物包含山梨糖醇，且組合物之pH值為約7.0至約8.0。在特定實施例中，組合物包含氯化鈉，且組合物之pH值為約6.0至約8.0。在某些實施例中，組合物包含海藻糖，且組合物之pH值為約6.0至約7.0。在某些實施例中，組合物包含約1%至約10%(w/v)、或約1%(w/v)、約2%(w/v)、約3%(w/v)、約4%(w/v)、約5%(w/v)、約6%(w/v)、約7%(w/v)、約8%(w/v)、約9%(w/v)或約10%(w/v)之山梨糖醇。在特定實施例中，組合物包含約10mM至約200mM、約50mM至200mM、約75mM至約200mM、約50mM至約150mM、約100mM、約110mM、約120mM、約130mM、約140mM或約150mM濃度之氯化鈉。在一個實施例中，組合物包含約130mM濃度之氯化鈉。在某些實施例中，組合物包含約1%至約10%(w/v)、或約1%(w/v)、約2%(w/v)、約3%(w/v)、約4%(w/v)、約5%(w/v)、約6%(w/v)、約7%(w/v)、約8%(w/v)、約9%(w/v)或約10%(w/v)之海藻糖。

在包含拮抗劑A或其經修飾形式及貝伐單抗之組合物的某些實施例中，該組合物進一步包含能夠使組合物之pH值達成或維持在所要範圍內的緩衝液。在某些實施例中，組合物包含乙酸鹽、磷酸鹽及Tris中之一或多者作為緩衝液。在某些實施例中，緩衝液包含約5mM至約200mM、約5mM至約100mM、約10mM至約150mM、約10mM至約100mM、約25mM至約100mM、或約50mM濃度之磷酸鹽。磷酸鹽緩衝液可為例如磷酸鈉緩衝液或磷酸鉀緩衝液。在特定實施例中，經緩衝之組合物之pH值為約5.0至約8.0、約6.0至約8.0、約5.5至約7.0、約6.0、約7.0或約8.0。在一個實施例中，緩衝液包含磷酸 鹽，且經緩衝之組合物之pH值為約5.5至約7.0。在某些實施例中，緩衝液包含約5mM至約200mM、約10mM至約150mM、約25mM至約100mM、或約50mM濃度之磷酸鹽，且經緩衝之組合物具有約5.5至約7.0、或約6.0之pH值。在一個特定實施例中，緩衝液包含約50mM濃度之磷酸鹽，且經緩衝之組合物具有約6.0之pH值。

在包含拮抗劑A或其經修飾形式及貝伐單抗之組合物的某些實施例中，該組合物進一步包含界面活性劑。在特定實施例中，界面活性劑為約0.005%(w/v)至約0.05%(w/v)、約0.01%(w/v)至約0.05%(w/v)、或約0.02%(w/v)濃度之聚山梨醇酯20。

在一個實施例中，包含拮抗劑A或其經修飾形式及貝伐單抗的組合物包含拮抗劑A、貝伐單抗、氯化鈉及磷酸鹽。組合物可進一步包含聚山梨醇酯。

在一個特定實施例中，組合物包含拮抗劑A或其經修飾形式及貝伐單抗；拮抗劑A(或其經修飾形式)濃度與貝伐單抗濃度之比率小於1.5、小於1.2或小於1；且該組合物進一步包含約10mM至約200mM濃度之氯化鈉、約5mM至約200mM濃度之組胺酸，及約0.005%至約0.05%濃度之聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20)，其中組合物之pH值為約5.5至約7.0。

在某些實施例中，本發明提供包含拮抗劑A或其經修飾形式或其醫藥學上可接受之鹽及貝伐單抗或其醫藥學上可接受之鹽的組合物。在某些實施例中，本發明組合物包含：(a)約0.3mg/mL至約30mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式，或其醫藥學上可接受之鹽；及(b)約0.5mg/mL至約25mg/mL貝伐單抗或其醫藥學上可接受之鹽。在其他實施例中，該組合物進一步包含以下一或兩者：(c)約5mM至約200mM磷酸鹽緩衝液；及(d)約10mM至約200mM NaCl。在其他實施例中，組合物包含：(a)約0.3mg/mL至約30mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式， 或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約0.5mg/mL至約25mg/mL貝伐單抗或其醫藥學上可接受之鹽；(c)約5mM至約200mM磷酸鹽緩衝液(例如約5mM至約200mM磷酸鈉)；及(d)約10mM至約200mM NaCl，其中組合物之pH值為約pH 5.0至約pH 7.0。在包含貝伐單抗之組合物之特定實施例中，組合物進一步包含：(e)約0.001%(w/v)至約0.05%(w/v)界面活性劑，其視情況為聚山梨醇酯。在一特定實施例中，組合物包含：(a)約3mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式，或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約12.5mg/mL貝伐單抗或其醫藥學上可接受之鹽；(c)約50mM磷酸鹽緩衝液；及(d)約130mM NaCl，其中組合物之pH值為約pH 6.0。在另一個實施例中，組合物進一步包含：(e)約0.01%(w/v)聚山梨醇酯20。

在某些實施例中，本發明組合物包含：(a)約0.3mg/mL至約30mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式；(b)約0.5mg/mL至約25mg/mL貝伐單抗；及以下一或兩者：(c)能夠使組合物之pH值達成或維持在約pH 5.0至約pH 8.0之緩衝液；及(d)張力調節劑。在特定實施例中，緩衝液為約5mM至約200mM磷酸鈉或約5mM至約200mM Tris.HCl，且張力調節劑為約10mM至約200mM NaCl、約1%至約20%(w/v)山梨糖醇或約1%至約20%(w/v)海藻糖。在某些實施例中，緩衝液為約5mM至約20mM磷酸鈉；且張力劑為約10mM至約200mM NaCl，其中組合物之pH值為約pH 5.0至約pH 7.0。在特定實施例中，本發明組合物包含界面活性劑，例如約0.001%(w/v)至約0.05%(w/v)界面活性劑。

本發明組合物之實例包括表3中所述之組合物，以及缺乏界面活性劑之此等組合物。

在一個實施例中，組合物包含約3mg/mL濃度之拮抗劑A或其經修飾形式、約12.5mg/mL濃度之貝伐單抗、約50mM濃度之磷酸鈉、 約130mM濃度之氯化鈉及約0.02%(w/v)濃度之聚山梨醇酯20，其中組合物之pH值為約6.0。

在一個實施例中，本發明組合物包含約3mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式、約12.5mg/mL貝伐單抗、約50mM磷酸鈉、約5%(w/v)山梨糖醇及約0.02%(w/v)聚山梨醇酯20，其中組合物之pH值為約pH 6.0。

在一個實施例中，本發明組合物包含約3mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式、約12.5mg/mL貝伐單抗、約50mM磷酸鈉、約5%(w/v)山梨糖醇及約0.02%(w/v)聚山梨醇酯20，其中組合物之pH值為約pH 7.0。

在一個實施例中，本發明組合物包含約3mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式、約12.5mg/mL貝伐單抗、約50mM磷酸鈉、約150mM NaCl及約0.02%(w/v)聚山梨醇酯20，其中組合物之pH值為約pH 7.0。

在一個實施例中，本發明組合物包含約3mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式、約12.5mg/mL貝伐單抗、約50mM Tris.HCl、約130mM NaCl及約0.02%(w/v)聚山梨醇酯20，其中組合物之pH值為約pH 8.0。

在一個實施例中，本發明組合物包含約15mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式、約12.5mg/mL貝伐單抗、約30mM磷酸鈉、約75mM NaCl、約3%(w/v)海藻糖及約0.02%(w/v)聚山梨醇酯20，其中組合物之pH值為約pH 6.3。

在一個實施例中，本發明組合物包含約3mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式、約12.5mg/mL貝伐單抗或其醫藥學上可接受之鹽、約30mM磷酸鈉、約75mM NaCl、約3%(w/v)海藻糖及約0.02%(w/v)聚山梨醇酯20，其中組合物之pH值為約pH 6.3。

在特定實施例中，包含拮抗劑A或其經修飾形式及貝伐單抗之組合物在25℃下在化學上穩定至少4週或至少8週或在4℃下在化學上穩 定至少12週或至少24週。在特定實施例中，拮抗劑A或其經修飾形式及貝伐單抗中每一者之至少70%在此等條件下未顯示導致新化學實體形成之分解或修飾跡象。

包含拮抗劑A及阿柏西普之組合物

在某些實施例中，組合物包含拮抗劑A或其經修飾形式及阿柏西普。在特定實施例中，組合物中存在之拮抗劑A之濃度(拮抗劑A之質量減去其-R基團之質量/組合物之體積)與阿柏西普之濃度(質量/組合物之體積)的比率小於25.0、小於10.0、小於9.0、小於8.0、小於7.0、小於6.0、小於5.0、小於4.0、小於3.0、小於2.0、小於1.0、小於0.5或小於0.25。

拮抗劑A之-R基團描繪於圖78A中。

在特定實施例中，本發明組合物包含拮抗劑A或其經修飾形式及阿柏西普，且該組合物在特定pH值下或適於非經腸投藥之特定pH值下就兩種活性劑而言為穩定的。在某些實施例中，拮抗劑A或其經修飾形式對阿柏西普活性無不利影響。在某些實施例中，阿柏西普對拮抗劑A或其經修飾形式之活性無不利影響。在某些實施例中，拮抗劑A或其經修飾形式使阿柏西普活性增強。在某些實施例中，阿柏西普使拮抗劑A或其經修飾形式之活性增強。測定拮抗劑A及VEGF拮抗劑之活性的方法在此項技術中已知且包括量測拮抗劑A或VEGF拮抗劑分別對PDGF或VEGF調節之基因表現的作用，如例如實例3及6中所述。

在某些實施例中，組合物包含一或多種張力調節劑、界面活性劑及適於達成或維持特定pH值或適於非經腸投藥的緩衝液。適當緩衝液包括本文所述者以及此項技術中已知之其他緩衝液，諸如Good緩衝液，例如MES。

在某些實施例中，組合物中之拮抗劑A或其經修飾形式的濃度小 於約50mg/mL、小於約40mg/mL、小於約30mg/mL、小於約25mg/mL、小於約20mg/mL、小於約15mg/mL、小於約10mg/mL或小於約5mg/mL。在某些實施例中，拮抗劑A或其經修飾形式之濃度為約0.3mg/mL至約50mg/mL、約0.3mg/mL至約40mg/mL、約0.3mg/mL至約30mg/mL、約0.3至約25mg/mL、約0.3mg/mL至約20mg/mL、約0.3mg/mL至約15mg/mL、約0.3mg/mL至約10mg/mL、約1mg/mL至約50mg/mL、約1mg/mL至約40mg/mL、約1mg/mL至約30mg/mL、約1mg/mL至約25mg/mL、約1mg/mL至約20mg/mL、約1mg/mL至約15mg/mL、約1mg/mL至約10mg/mL、或約1mg/mL至約5mg/mL。在某些實施例中，拮抗劑A或其經修飾形式之濃度為約1mg/mL、約2mg/mL、約3mg/mL、約4mg/mL、約5mg/mL、約6mg/mL、約7mg/mL、約8mg/mL、約9mg/mL、約10mg/mL、約15mg/mL、約20mg/mL、約25mg/mL、約30mg/mL、約40mg/mL、或約50mg/mL。

在某些實施例中，阿柏西普濃度為約5mg/mL至約100mg/mL、約5mg/mL至約50mg/mL、約5mg/mL至約40mg/mL、約10mg/mL至約100mg/mL、約10mg/mL至約50mg/mL、約10mg/mL至約40mg/mL、約20mg/mL至約40mg/mL、約30mg/mL、約50mg/mL或約40mg/mL。

在某些實施例中，阿柏西普濃度為約5mg/mL至約100mg/mL、約5mg/mL至約50mg/mL、約5mg/mL至約40mg/mL、約10mg/mL至約100mg/mL、約10mg/mL至約50mg/mL、約10mg/mL至約40mg/mL、約20mg/mL至約40mg/mL、約30mg/mL、約50mg/mL、或約40mg/mL，且拮抗劑A或其經修飾形式的濃度小於約50mg/mL、小於約40mg/mL、小於約30mg/mL、小於約25mg/mL、小於約20mg/mL、小於約15mg/mL、小於約10mg/mL或小於約5mg/mL。

在某些實施例中，阿柏西普濃度為約5mg/mL至約100mg/mL、約5mg/mL至約50mg/mL、約5mg/mL至約40mg/mL、約10mg/mL至約100mg/mL、約10mg/mL至約50mg/mL、約10mg/mL至約40mg/mL、約20mg/mL至約40mg/mL、約30mg/mL、約50mg/mL、或約40mg/mL、約1mg/mL至約10mg/mL、或約1mg/mL至約5mg/mL，且拮抗劑A或其經修飾形式之濃度為約0.3mg/mL至約50mg/mL、約0.3mg/mL至約40mg/mL、約0.3mg/mL至約30mg/mL、約0.3至約25mg/mL、約0.3mg/mL至約20mg/mL、約0.3mg/mL至約15mg/mL、約0.3mg/mL至約10mg/mL、約1mg/mL至約50mg/mL、約1mg/mL至約40mg/mL、約1mg/mL至約30mg/mL、約1mg/mL至約25mg/mL、約1mg/mL至約20mg/mL、約1mg/mL至約15mg/mL、約1mg/mL至約10mg/mL、或約1mg/mL至約5mg/mL。

在某些實施例中，阿柏西普濃度為約5mg/mL至約100mg/mL、約5mg/mL至約50mg/mL、約5mg/mL至約40mg/mL、約10mg/mL至約100mg/mL、約10mg/mL至約50mg/mL、約10mg/mL至約40mg/mL、約20mg/mL至約40mg/mL、約30mg/mL、約50mg/mL、或約40mg/mL、約1mg/mL至約10mg/mL、或約1mg/mL至約5mg/mL，且拮抗劑A或其經修飾形式之濃度為約1mg/mL、約2mg/mL、約3mg/mL、約4mg/mL、約5mg/mL、約6mg/mL、約7mg/mL、約8mg/mL、約9mg/mL、約10mg/mL、約15mg/mL、約20mg/mL、約25mg/mL、約30mg/mL、約40mg/mL或約50mg/mL。在一個實施例中，拮抗劑A之濃度為約3mg/mL，且阿柏西普濃度為約20mg/mL。在一個實施例中，拮抗劑A之濃度為約6mg/mL，且阿柏西普濃度為約40mg/mL。在另一個實施例中，拮抗劑A或其經修飾形式之濃度為約12mg/mL，且阿柏西普濃度為約80mg/mL。

在包含拮抗劑A或其經修飾形式及阿柏西普之組合物的某些實施 例中，該組合物進一步包含選自山梨糖醇及氯化鈉之一或多種張力調節劑。在特定實施例中，張力調節劑包含山梨糖醇，且組合物之pH值為約6.0至約8.0。在特定實施例中，張力調節劑包含氯化鈉，且組合物之pH值為約6.0至約8.0。在某些實施例中，張力調節劑包含約1%至約10%(w/v)、或約1%(w/v)、約2%(w/v)、約3%(w/v)、約4%(w/v)、約5%(w/v)、約6%(w/v)、約7%(w/v)、約8%(w/v)、約9%(w/v)或約10%(w/v)之山梨糖醇。在特定實施例中，張力調節劑為約10mM至約200mM、約50mM至200mM、約75mM至約200mM、約25mM至約150mM、約50mM至約150mM、約20mM、約30mM、約40mM、約50mM、約60mM、約70mM、約80mM、約90mM、約100mM、約110mM、約120mM、約130mM、約140mM或約150mM濃度之氯化鈉。在一個實施例中，張力調節劑為約40mM濃度之氯化鈉。

在包含拮抗劑A或其經修飾形式及阿柏西普之組合物的某些實施例中，該組合物進一步包含能夠使pH值達成或維持在所要範圍內的緩衝液。在某些實施例中，組合物包含選自乙酸鹽、磷酸鹽、組胺酸及Tris之一或多種緩衝液。在某些實施例中，緩衝液包含約1mM至約200mM、約1mM至約50mM、約5mM至約200mM、約5mM至約100mM、約5mM至約50mM、約10mM至約150mM、約10mM至約100mM、約5mM、約10mM、約25mM或約50mM濃度之磷酸鹽。在某些實施例中，磷酸鹽緩衝液為磷酸鈉或磷酸鉀。在特定實施例中，經緩衝之組合物之pH值為約5.0至約8.0、約6.0至約8.0、約5.5至約7.0、約6.0、約7.0或約8.0。在一個實施例中，緩衝液包含磷酸鹽，且經緩衝之組合物具有約6.0至約8.0之pH值。在某些實施例中，緩衝液包含約5mM至約200mM、約5mM至約150mM、約5mM至約100mM、約5mM、約10mM、約25mM或約50mM濃度之磷酸鹽， 且經緩衝之組合物具有約5.5至約7.0或約6.0之pH值。在一個特定實施例中，緩衝液包含約10mM濃度之磷酸鹽，且經緩衝之組合物具有約6.2之pH值。

在包含拮抗劑A或其經修飾形式及阿柏西普之組合物的某些實施例中，該組合物進一步包含蔗糖。在特定實施例中，蔗糖存在於組合物中的濃度為約0%(w/v)至約10%(w/v)、約1%(w/v)至約10%(w/v)、約2%(w/v)至約10%(w/v)、或約5%(w/v)。

在包含拮抗劑A或其經修飾形式及阿柏西普之組合物的某些實施例中，該組合物進一步包含界面活性劑。在特定實施例中，界面活性劑為約0.005%(w/v)至約0.05%(w/v)、約0.01%(w/v)至約0.05%(w/v)、約0.03%(w/v)或約0.02%(w/v)濃度之聚山梨醇酯20。

在一個實施例中，包含拮抗劑A或其經修飾形式及阿柏西普的組合物包含拮抗劑A或其經修飾形式、阿柏西普、氯化鈉及磷酸鹽。該組合物可進一步包含聚山梨醇酯或蔗糖(或兩者)。

在一個特定實施例中，組合物包含拮抗劑A或其經修飾形式及阿柏西普；拮抗劑A或其經修飾形式之濃度與阿柏西普濃度之比率小於1；且該組合物進一步包含約10mM至約200mM濃度之氯化鈉、約5mM至約50mM濃度之磷酸鹽、約0%(w/v)至約10%(w/v)濃度之蔗糖及約0.005%至約0.05%濃度之聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20)，其中組合物之pH值為約6.0至約8.0。

在某些實施例中，組合物包含：(a)約0.3mg/mL至約30mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式，或其醫藥學上可接受之鹽；及(b)約5mg/mL至約40mg/mL阿柏西普或其醫藥學上可接受之鹽。在特定實施例中，組合物進一步包含以下一或兩者：(c)約5mM至約50mM磷酸鹽緩衝液(例如約5mM至約50mM磷酸鈉)；及(d)約10mM至約200mM NaCl。在其他實施例中，組合物進一步包含：(e)0至約10%(w/v)蔗 糖。在某些實施例中，組合物包含：(a)約0.3mg/mL至約30mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式，或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約5mg/mL至約40mg/mL阿柏西普或其醫藥學上可接受之鹽；(c)約5mM至約50mM磷酸鹽緩衝液；(d)約10mM至約200mM NaCl；及(e)0至約10%(w/v)蔗糖，其中組合物之pH值為約pH 6.0至約pH 8.0。在另一個實施例中，組合物進一步包含：(f)約0.001%(w/v)至約0.05%(w/v)聚山梨醇酯。在一個特定實施例中，組合物包含：(a)約6mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約40mg/mL阿柏西普或其醫藥學上可接受之鹽；(c)約10mM磷酸鹽緩衝液；(d)約40mM NaCl；及(e)約5%(w/v)蔗糖，其中組合物之pH值為約pH 6.2。在另一個實施例中，組合物進一步包含：(f)約0.03%(w/v)聚山梨醇酯20。

在某些實施例中，本發明組合物包含：(a)約0.3mg/mL至約30mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式；(b)約5mg/mL至約40mg/mL阿柏西普；及以下一或多者：(c)能夠使組合物之pH值達成或維持在約pH 5.0至約pH 8.0之緩衝液；(d)張力調節劑；及(e)0至約10%(w/v)蔗糖。在特定實施例中，緩衝液存在時為約5mM至約50mM磷酸鹽，且張力調節劑存在時為約10mM至約200mM NaCl。

在特定實施例中，本發明組合物包含：(a)約0.3mg/mL至約30mg/mL拮抗劑A或其經修飾形式；(b)約5mg/mL至約40mg/mL阿柏西普；(c)約5mM至約50mM磷酸鹽；(d)約10mM至約200mM NaCl；及(e)0至約10%(w/v)蔗糖；及(f)約0.001%(w/v)至約0.05%(w/v)界面活性劑，其中組合物之pH值為約pH 6.0至約pH 8.0。

本發明組合物亦包括缺乏界面活性劑的本文所述任何組合物。

在一個實施例中，本發明組合物包含約6mg/mL濃度之拮抗劑A或其經修飾形式、約40mg/mL濃度之阿柏西普、約10mM濃度之磷酸鹽、約40mM濃度之氯化鈉及約0.03%(w/v)濃度之聚山梨醇酯20，且 組合物之pH值為約6.2。

在另一個實施例中，本發明組合物包含約3mg/mL濃度之拮抗劑A或其經修飾形式、約20mg/mL濃度之阿柏西普、約10mM濃度之磷酸鹽、約40mM濃度之氯化鈉及約0.03%(w/v)濃度之聚山梨醇酯20，且組合物之pH值為約6.2。

在特定實施例中，包含拮抗劑A及阿柏西普之組合物在25℃下在化學上穩定至少4週或至少8週或在4℃下在化學上穩定至少12週或至少24週。在特定實施例中，兩種拮抗劑中至少70%在此等條件下未顯示導致新化學實體形成之分解或修飾跡象。

製備本發明組合物之方法

本發明組合物(包括本文所述者)可藉由包含以下、主要由以下組成或由以下組成之方法製備：將拮抗劑(例如一或多種抗-PDGF適體及一或多種VEGF拮抗劑)與有效量之緩衝液(例如組胺酸、磷酸鹽、乙酸鹽或Tris緩衝液)混合，及視情況如本文所述調節所得混合物之pH值至約5.5至約8.0及其間變化之pH值。

在一些實施例中，該方法進一步包含以下、主要由以下組成或由以下組成：將抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑與有效量之張力劑混合。在一個特定態樣中，張力劑為氯化鈉或山梨糖醇。

在一些實施例中，方法進一步包含以下、主要由以下組成或由以下組成：將抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑與有效量之界面活性劑混合。在特定態樣中，界面活性劑為聚山梨醇酯，例如吐溫(Tween)20或吐溫80。

在一些實施例中，方法進一步包含以下、主要由以下組成或由以下組成：將抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑與有效量之穩定劑、低溫防護劑或凍乾保護劑混合。穩定劑可為以下至少一者：糖、胺基酸、多元醇、界面活性劑、抗氧化劑、防腐劑、環糊精、聚乙二醇、白蛋 白或鹽。

在該方法之特定態樣中，組合物(包括包含拮抗劑A或其經修飾形式與貝伐單抗、蘭尼單抗或阿柏西普組合的上述特定組合物)係藉由將抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑及本文所述各種組合物中存在之處於本文所述濃度範圍內之各種賦形劑混合來製備。

因此，在一個實施例中，本發明組合物係藉由混合以下來製備：最終濃度為約3mg/mL之拮抗劑A或其經修飾形式；最終濃度為約12.5mg/mL之貝伐單抗；最終濃度為約50mM之磷酸鹽；最終濃度為約130mM之氯化鈉；及最終濃度為約0.02%(w/v)之聚山梨醇酯20。在另一個實施例中，本發明組合物係藉由混合以下來製備：最終濃度為約6mg/mL之拮抗劑A或其經修飾形式；最終濃度為約25mg/mL之貝伐單抗；最終濃度為約50mM之磷酸鹽；最終濃度為約130mM之氯化鈉；及最終濃度為約0.02%(w/v)之聚山梨醇酯20。在某些實施例中，組合物之pH值係調節至約6.0。

在另一個實施例中，組合物係藉由混合以下來製備：最終濃度為約3mg/mL之拮抗劑A或其經修飾形式；最終濃度為約5mg/mL之蘭尼單抗；最終濃度為約10mM之組胺酸；最終濃度為約130mM之氯化鈉；及最終濃度為約0.02%(w/v)之聚山梨醇酯20。在另一個實施例中，組合物係藉由混合以下來製備：最終濃度為約6mg/mL之拮抗劑A或其經修飾形式；最終濃度為約10mg/mL之蘭尼單抗；最終濃度為約10mM之組胺酸；最終濃度為約130mM之氯化鈉；及最終濃度為約0.02%(w/v)之聚山梨醇酯20。在某些實施例中，組合物之pH值係調節至約6.0。

在另一個實施例中，本發明組合物係藉由混合以下來製備：最終濃度為約6mg/mL之拮抗劑A或其經修飾形式；最終濃度為約40mg/mL之阿柏西普；最終濃度為約10mM之磷酸鹽；最終濃度為約40 mM之氯化鈉；最終濃度為約5%(w/v)之蔗糖；及最終濃度為約0.03%(w/v)之聚山梨醇酯20。在另一個實施例中，組合物係藉由混合以下來製備：最終濃度為約3mg/mL之拮抗劑A或其經修飾形式；最終濃度為約20mg/mL之阿柏西普；最終濃度為約10mM之磷酸鹽；最終濃度為約40mM之氯化鈉；最終濃度為約5%(w/v)之蔗糖；及最終濃度為約0.03%(w/v)之聚山梨醇酯20。在某些實施例中，組合物之pH值係調節至約6.2。

在某些實施例中，組合物係在玻璃小瓶或注射器中混合，或在玻璃小瓶或注射器中混合之後儲存。

治療或預防眼科疾病之方法

本發明組合物適用於治療或預防多種眼科疾病。在一些實施例中，眼科疾病為新生血管性病症。在其他實施例中，眼科疾病引起視網膜水腫。可藉由本發明治療或預防的說明性眼科疾病描述於本文中。

在某些實施例中，本發明提供治療或預防眼科疾病之方法，包含向有需要之哺乳動物投與本發明組合物。在特定實施例中，存在於組合物中的抗-PDGF適體為拮抗劑A或其經修飾形式。在特定實施例中，存在於組合物中的VEGF拮抗劑為蘭尼單抗、貝伐單抗或阿柏西普。在特定實施例中，存在於本發明組合物中的治療劑包含有效量之：(i)拮抗劑A(或其經修飾形式)及蘭尼單抗；(ii)拮抗劑A(或其經修飾形式)及貝伐單抗；或(iii)拮抗劑A(或其經修飾形式)及阿柏西普。

在一個實施例中，本發明組合物包含拮抗劑A或其經修飾形式、蘭尼單抗、組胺酸及氯化鈉。該組合物可進一步包含聚山梨醇酯。

在一個特定實施例中，本發明組合物包含拮抗劑A或其經修飾形式及蘭尼單抗，拮抗劑A(或其經修飾形式)濃度與貝伐單抗濃度之比 率小於2；約10mM至約200mM濃度之氯化鈉；約1mM至約100mM濃度之組胺酸，及約0.005%至約0.05%或0.001%至約0.05%濃度之聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20)，其中組合物之pH值為約5.5至約7.0。

在一個實施例中，本發明組合物包含約3mg/mL濃度之拮抗劑A或其經修飾形式、約5mg/mL濃度之蘭尼單抗、約10mM濃度之組胺酸、約130mM濃度之氯化鈉及約0.02%(w/v)濃度之聚山梨醇酯20，其中組合物之pH值為約6.0。在另一個實施例中，組合物包含約6mg/mL濃度之拮抗劑A或其經修飾形式、約10mg/mL濃度之蘭尼單抗、約10mM濃度之組胺酸、約130mM濃度之氯化鈉及約0.02%(w/v)濃度之聚山梨醇酯20，其中組合物之pH值為約6.0。

在一個實施例中，本發明組合物包含拮抗劑A或其經修飾形式、貝伐單抗、氯化鈉、磷酸鹽及聚山梨醇酯。組合物可進一步包含聚山梨醇酯。

在一個特定實施例中，本發明組合物包含拮抗劑A或其經修飾形式及貝伐單抗，拮抗劑A(或其經修飾形式)濃度與貝伐單抗濃度之比率小於1；約10mM至約200mM濃度之氯化鈉；約5mM至約200mM濃度之磷酸鹽，及約0.005%至約0.05%濃度之聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20)，其中組合物之pH值為約5.5至約7.0。

在一個實施例中，本發明組合物包含約3mg/mL濃度之拮抗劑A或其經修飾形式、約12.5mg/mL濃度之貝伐單抗、約50mM濃度之磷酸鹽、約130mM濃度之氯化鈉及約0.02%(w/v)濃度之聚山梨醇酯20，其中組合物之pH值為約6.0。在另一個實施例中，組合物包含約6mg/mL濃度之拮抗劑A或其經修飾形式、約25mg/mL濃度之貝伐單抗、約50mM濃度之磷酸鹽、約130mM濃度之氯化鈉及約0.02%(w/v)濃度之聚山梨醇酯20，其中組合物之pH值為約6.0。

在一個實施例中，本發明組合物包含拮抗劑A或其經修飾形式及 阿柏西普、氯化鈉及磷酸鹽。組合物可進一步包含聚山梨醇酯或蔗糖(或兩者)。

在一個特定實施例中，本發明組合物包含拮抗劑A或其經修飾形式及阿柏西普，拮抗劑A濃度與阿柏西普濃度之比率小於1；約10mM至約200mM濃度之氯化鈉；約5mM至約50mM濃度之磷酸鹽、約0%(w/v)至約10%(w/v)濃度之蔗糖及約0.005%至約0.05%濃度之聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20)，其中組合物之pH值為約6.0至約8.0。

在一個實施例中，本發明組合物包含約6mg/mL濃度之拮抗劑A或其經修飾形式、約40mg/mL濃度之阿柏西普、約10mM濃度之磷酸鹽、約40mM濃度之氯化鈉及約0.03%(w/v)濃度之聚山梨醇酯20，其中組合物之pH值為約6.2。

眼科疾病

在某些實施例中，眼科疾病為年齡相關性黃斑部變性。年齡相關性黃斑部變性之實例為非新生血管性(亦稱為「乾性」)及新生血管性(亦稱為「濕性」)黃斑部變性。在一個實施例中，乾性年齡相關性黃斑部變性與脈絡膜疣形成有關。在一些實施例中，治療或預防乾性黃斑部變性涵蓋治療或預防視網膜色素上皮之異常。視網膜色素上皮異常之實例包括地圖狀萎縮、非地圖狀萎縮、局部色素過少及局部色素過多。在一些實施例中，治療或預防濕性年齡相關性黃斑部變性涵蓋治療或預防脈絡膜新血管生成或色素上皮脫離。

在其他實施例中，眼科疾病為息肉狀脈絡膜血管病變。息肉狀脈絡膜血管病變之特徵為終止於動脈瘤隆丘或向外突出物的內部脈絡膜血管網路病變(Ciardella等人(2004)Surv Ophthalmol 49 25-37)。

在某些實施例中，眼科疾病為與脈絡膜新血管生成有關之病狀。脈絡膜新血管生成相關病狀之實例包括變性、發炎性、創傷性或特發性病狀。在一些實施例中，治療或預防與脈絡膜新血管生成有關 之變性病症涵蓋治療或預防遺傳性變性病症。遺傳性變性病症之實例包括卵黃狀黃斑營養不良、眼底黃色斑點症及視神經頭脈絡膜疣。脈絡膜新血管生成相關之變性病狀之實例包括近視性變性或血管樣紋。在其他實施例中，治療或預防與脈絡膜新血管生成有關之發炎性病症涵蓋治療或預防眼組織胞漿菌病症候群、多灶性脈絡膜炎、匐行性脈絡膜炎、弓蟲病、弓蛔蟲病、風疹、伏格特-小柳-原田症候群(Vogt-Koyanagi-Harada syndrome)、白塞氏症候群(Behcet syndrome)或交感性眼炎。在其他實施例中，治療或預防與脈絡膜新血管生成有關之創傷病症涵蓋治療或預防脈絡膜破裂或因強光凝引起之創傷病狀。

在其他實施例中，眼科疾病為高血壓性視網膜病變或鐮狀細胞視網膜病變。

在一個實施例中，眼科疾病為糖尿病性視網膜病變。糖尿病性視網膜病變可為非增生性或增生性糖尿病性視網膜病變。非增生性糖尿病性視網膜病變之實例包括黃斑水腫及黃斑缺血。

在特定實施例中，眼科疾病為周邊視網膜新血管生成相關病狀。周邊視網膜新血管生成相關病狀之實例包括缺血性血管病、可能伴有缺血之發炎性疾病、色素失調症、色素性視網膜炎、視網膜劈裂症或慢性視網膜脫離。缺血性血管病之實例包括增生性糖尿病性視網膜病變、視網膜分支靜脈阻塞、視網膜分支小動脈阻塞、頸動脈海綿竇瘺、鐮狀化血紅蛋白病、非鐮狀化血紅蛋白病、IRVAN症候群(以特發性視網膜血管炎、動脈瘤及視神經網膜炎為特徵之視網膜血管炎病症)、視網膜栓塞、早產兒視網膜病變、家族性滲出性玻璃體視網膜病變、高黏性血症候群、主動脈弓症候群或伊爾氏病(Eales disease)。鐮狀化血紅蛋白病之實例包括SS血紅蛋白病及SC血紅蛋白病。非鐮狀化血紅蛋白病之實例包括AC血紅蛋白病及AS血紅蛋白病。高黏性血症候群之實例包括白血病、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症 (Waldenstrom macroglobulinemia)、多發性骨髓瘤、紅血球增多症或骨髓增生性病症。

在一些實施例中，治療或預防可能伴有缺血之發炎性疾病涵蓋治療或預防與全身疾病有關之視網膜血管炎、與傳染媒介物有關之視網膜血管炎、葡萄膜炎或鳥槍彈樣視網膜病變。全身性疾病之實例包括全身性紅斑狼瘡、白塞氏病、發炎性腸病、類肉瘤病、多發性硬化、韋格納肉芽腫病(Wegener's granulomatosis)及結節性多動脈炎。傳染媒介物之實例包括細菌媒介物，其為梅毒、肺結核、萊姆病(Lyme disease)或貓咬病、病毒(諸如疱疹病毒)或寄生蟲(諸如犬弓蛔蟲(Toxocara canis)或弓漿蟲(Toxoplasma gondii))之病原體。葡萄膜炎之實例包括睫狀體平坦部炎(planitis)或富克氏葡萄膜炎症候群(Fuchs uveitis syndrome)。

在某些實施例中，眼科疾病為早產兒視網膜病變。早產兒視網膜病變可由支撐發育中之視網膜之血管床中血管之異常生長引起(Pollan C(2009)Neonatal Netw.28：93-101)。

在其他實施例中，眼科疾病為靜脈阻塞性疾病或動脈阻塞性疾病。靜脈阻塞性疾病之實例包括視網膜分支靜脈阻塞及視網膜中心靜脈阻塞。視網膜分支靜脈阻塞可為排出視網膜之血液的循環部分被阻斷。該阻斷會引起毛細血管中之壓力積聚，由此會引起出血且亦引起流體及血液之其他組分滲出。動脈阻塞性疾病之實例包括視網膜分支動脈阻塞、視網膜中心動脈阻塞或眼缺血性症候群。當向視網膜供血之動脈分支之一變得阻塞時，會發生視網膜分支動脈阻塞(BRAO)。

在特定實施例中，眼科疾病為中心性漿液性脈絡膜視網膜病變(CSC)。在一個實施例中，CSC之特徵為中心黃斑中之流體滲出。

在一個實施例中，眼科疾病為囊樣黃斑部水腫(CME)。在某些實施例中，CME影響中心視網膜或黃斑。在另一個實施例中，CME白 內障手術之後發生。

在其他實施例中，眼科疾病為視網膜毛細血管擴張症。在一個實施例中，視網膜毛細血管擴張症之特徵為視網膜血管之擴張及迂曲及形成多個動脈瘤。特發性JXT、雷伯氏栗粒狀動脈瘤(Leber's miliary aneurysm)及柯氏症為視網膜毛細血管擴張症之三種類型。

在一個實施例中，眼科疾病為大動脈瘤。

在一個實施例中，眼科疾病為視網膜血管瘤病。在一個實施例中，當眼血管形成多個血管瘤時，發生視網膜血管瘤病。

在一個實施例中，眼科疾病為輻射誘導性視網膜病變(RIRP)。在一個實施例中，RIRP可顯示諸如黃斑水腫及非增生性及增生性視網膜病變之症狀。

在某些實施例中，眼科疾病為虹膜紅變。在一個實施例中，虹膜紅變導致新生血管性青光眼形成。在另一個實施例中，虹膜紅變起因於糖尿病性視網膜病變、視網膜中心靜脈阻塞、眼缺血性症候群或慢性視網膜脫離。

在某些實施例中，眼科疾病為贅生物。贅生物之實例包括眼瞼腫瘤、結膜腫瘤、脈絡膜腫瘤、虹膜腫瘤、視神經腫瘤、視網膜腫瘤、浸潤性眼內腫瘤或眼眶腫瘤。眼瞼腫瘤之實例包括基底細胞癌、鱗狀癌、皮脂腺癌、惡性黑色素瘤、毛細血管瘤、汗腺囊瘤、痣或脂溢性角化病。結膜腫瘤之實例包括結膜卡波氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、鱗狀癌、結膜上皮內瘤形成、眼球上皮囊瘤、結膜淋巴瘤、黑色素瘤、瞼裂黃斑或翼狀胬肉。脈絡膜腫瘤之實例包括脈絡膜痣、脈絡膜血管瘤、轉移性脈絡膜腫瘤、脈絡膜骨瘤、脈絡膜黑色素瘤、睫狀體黑色素瘤或太田痣(nevus of Ota)。虹膜腫瘤之實例包括前葡萄膜轉移、虹膜囊腫、虹膜黑素細胞瘤、虹膜黑色素瘤，或虹膜珍珠狀囊腫。視神經腫瘤之實例包括視神經黑素細胞瘤、視神經鞘脊膜 瘤、影響視神經之脈絡膜黑色素瘤，或伴有視神經病變之視乳頭周圍轉移。視網膜腫瘤之實例包括視網膜色素上皮(RPE)肥大、RPE腺瘤、RPE癌瘤、視網膜母細胞瘤、RPE錯構瘤或範哈伯氏血管瘤(von Hippel angioma)。浸潤性眼內腫瘤之實例包括慢性淋巴細胞白血病、浸潤性脈絡膜病變或眼內淋巴瘤。眼眶腫瘤之實例包括淚腺之腺樣囊性癌、眼眶之海綿狀血管瘤、眼眶之淋巴管瘤、眶黏液囊腫、眶假性腫瘤、眶橫紋肌肉瘤、兒童期眼周血管瘤或硬化性眶假性腫瘤。

本發明組合物可單獨投與或聯合另一種療法投與且可在家、醫生辦公室、診所、醫院門診部或醫院提供。投藥持續時間可視以下而定：所治療或預防之眼科疾病類型、哺乳動物之年齡及狀況、哺乳動物疾病之階段及類型，以及哺乳動物對治療之反應如何。在特定實施例中，哺乳動物為人類。另外，發展成眼科疾病之風險較大之哺乳動物(例如糖尿病患者)可接受治療以抑制或延遲症狀發作。在一個實施例中，與單獨使用治療劑時所用劑量相比，本發明方法或組合物允許投與相對較低劑量之含在組合物中之抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑中之一或多者。

本發明組合物可藉由使得抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑之量有效治療或預防眼科疾病之任何適合方法投與。在一個實施例中，組合物係以有效治療或預防眼科疾病的量投與。

組合物之投藥劑量可視包括以下之多種因素而定：病狀之嚴重程度、病狀需治療抑或預防，所治療者之年齡、體重及健康。另外，有關特定患者之藥物基因組學(基因型對治療劑之藥物動力學、藥效或效力型態之影響)資訊可能影響所用劑量。此外，準確的個別劑量可根據包括以下之多種因素稍加調整：組合物中存在之治療劑之具體組合、投藥時間、投藥途徑、組合物性質、排泄速率、所治療之特定眼科疾病、病症嚴重程度、及病症之解剖學位置。與載劑材料混合以 產生單一劑量之各拮抗劑的量可視所治療之哺乳動物及特定投藥方式而變化。

對於藉由非經腸注射投與組合物，抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑各自之劑量通常為每天0.1mg至250mg、每天1mg至20mg或每天3mg至5mg。注射可每天給予多達四次。一般而言，非經腸投藥時，本發明使用之抗-PDGF適體或VEGF拮抗劑之劑量通常為每天0.1mg至1500mg，或每天0.5mg至10mg，或每天0.5mg至5mg。可投與每天至少多達3000mg之劑量。

當以眼科方式(例如玻璃體內)投與人類時，本發明組合物中存在之抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑各自之劑量通常為每次投藥每隻眼0.003mg至5.0mg，或每次投藥每隻眼0.03mg至3.0mg，或每次投藥每隻眼0.1mg至1.0mg。在一個實施例中，組合物中一或多種抗-PDGF適體之劑量為每隻眼0.03mg、0.3mg、1.5mg或3.0mg。在另一個實施例中，組合物中VEGF拮抗劑之劑量為每隻眼約0.5mg。劑量範圍可為每隻眼投與0.01mL至0.2mL，或每隻眼投與0.03mL至0.15mL，或每隻眼投與0.05mL至0.10mL。舉例而言，在某些實施例中，抗-PDGF適體拮抗劑A係以多達30mg/mL、以多達100μL之注射體積玻璃體內遞送。

本發明組合物可每天投與一至四次或每月投與一至四次或每年投與一至六次或每兩年、每三年、每四年或每五年投與一次。投藥可持續一天或一個月、兩個月、三個月、六個月、一年、兩年、三年且甚至可持續患者一生。在一個實施例中，投藥每月執行一次，為期三個月。在多數情況下，將指定長期投藥。劑量可以單次劑量或分成多次劑量投與。一般而言，所要劑量應持續較長時間(一般為至少數週或數月)以固定時間間隔投與，但可能需要數月或數年之更長投藥期。

除治療先前存在之眼科疾病之外，組合物可預防性投與以便預防或減緩此等病症之發作。在預防性應用中，組合物可投與易患特定眼科疾病或另外有患特定眼科疾病之風險的哺乳動物。

在一個實施例中，本發明組合物投與需要治療之哺乳動物，通常以可注射醫藥組合物之形式投與。投藥可藉由注射進行，例如藉由眼球內注射進行，或使用藥物遞送裝置進行。非經腸、全身性或經皮投藥亦在本發明範疇內。

組合物可調配成在投與時實質上立即釋放或在投與後之任何預定時段(使用控制釋放組合物)釋放抗-PDGF適體或VEGF拮抗劑。舉例而言，組合物可以持續釋放形式提供。立即釋放或持續釋放組合物之使用視所治療病狀之性質而定。舉例而言，若病狀由急性病症組成，則可使用立即釋放形式進行治療而非使用延長釋放組合物。對於某些預防性或長期治療，亦可使用持續釋放組合物。

可採取多種策略以獲得其中治療劑之釋放速率超過降解或代謝速率的控制釋放。舉例而言，控制釋放可藉由適當選擇組合物參數及成分(包括例如適當的控制釋放組合物及包衣)來獲得。實例包括油溶液、懸浮液、乳液、微膠囊、微球體、奈米粒子、貼片及脂質體。亦可使用儲槽式調配物，例如呈微粒子、植入物或當場形成之固體大丸劑之形式。儲槽式調配物可包含生物降解性聚合物賦形劑，其控制藥物釋放速率及藥物釋放期間或之後的再吸收。一類生物降解性聚合物為丙交酯/乙交酯聚合物。此等可再吸收聚合物具生物相容性且據信可藉由水解(最初水解為乳酸及乙醇酸，最後水解為二氧化碳及水)來再吸收。

本發明組合物亦可使用藥物遞送裝置(諸如植入物)遞送。此等植入物可具生物降解性或生物相容性，或可為非生物降解性的。植入物對於抗-PDGF適體或VEGF拮抗劑而言可為通透的，或藉由生物侵蝕 作用遞送藥劑。眼科藥物遞送裝置可嵌入眼之房室中，諸如前房或後房，或可植入鞏膜內或鞏膜上、脈絡膜空間或玻璃體外部之無血管區域中。在一個實施例中，植入物可定位於無血管區域，諸如鞏膜上，以便允許抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑經鞏膜擴散至所要治療位點，例如眼內空間及眼黃斑。此外，經鞏膜擴散之位點可接近新血管生成位點，諸如接近黃斑之位點。適合藥物遞送裝置描述於例如美國公開案第2008/0286334號；第2008/0145406號；第2007/0184089號；第2006/0233860號；第2005/0244500號；第2005/0244471號；及第2005/0244462號；及美國專利第6,808,719號及第5,322,691號，該等文獻各自之內容以全文引用的方式併入本文中。

在一個實施例中，植入物包含分散於生物降解性聚合物基質中之本發明組合物。基質可包含PLGA(聚乳酸-聚乙醇酸共聚物)、經酯封端之聚合物、經酸封端之聚合物或其混合物。在另一個實施例中，植入物包含有含抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑、界面活性劑及親脂性化合物的組合物。親脂性化合物的存在量可為植入物之約80-99% wt%。適合的親脂性化合物包括(但不限於)棕櫚基硬脂酸甘油酯、二乙二醇單硬脂酸酯、丙二醇單硬脂酸酯、單硬脂酸甘油酯、單亞麻油酸甘油酯、單油酸甘油酯、單棕櫚酸甘油酯、單月桂酸甘油酯、二月桂酸甘油酯、單肉豆蔻酸甘油酯、二豆蔻酸甘油酯、單棕櫚酸甘油酯、二棕櫚酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、單油酸甘油酯、二油酸甘油酯、單亞麻油酸甘油酯、二亞麻油酸甘油酯、單花生酸甘油酯、二花生酸甘油酯、單蘿酸甘油酯、二蘿酸甘油酯及其混合物。

在另一個實施例中，植入物包含容納於中空套管中之本發明組合物。藉由將套管插入眼中，使植入物自套管釋入眼中，接著自眼移除套管來使包含抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑之組合物遞送至眼中。 此遞送裝置之實例描述於美國公開案第2005/0244462號中，此案以全文引用的方式併入本文中。

在一個實施例中，植入物為可撓性眼插入裝置，其適於使抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑可控地持續釋放至眼中。在一個實施例中，該裝置包括呈棒或管形式之聚合物材料之細長體，其含有包含抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑之組合物且具有至少兩個錨定突出物自主體向外徑向延伸。裝置可具有至少8mm之長度且其包括突出物在內之主體部分之直徑不超過1.9mm。持續釋放機制可例如為藉由擴散或藉由滲透或生物侵蝕作用。根據穹窿解剖學，插入裝置可插入眼之上或下穹窿中以便獨立於眼之運動。突出物可具有各種形狀，諸如肋片、螺紋、凹座或凸起、截頂錐形區段或纏繞編織區段。在另一個實施例中，主體之聚合物材料選擇為在液體環境中膨脹之聚合物材料。因此可使用初始尺寸較小之裝置。插入裝置之尺寸及組態應使得裝置在插入上穹窿或下穹窿中時保持處於視野外以便良好地持留在適當位置且在較長使用期間內接受者不易覺察。裝置可在上或下穹窿中持留7至14天或長於14天。此裝置之實例描述於美國專利第5,322,691號中，此案以全文引用的方式併入本文中。

在某些實施例中，本發明組合物亦可使用藥物遞送裝置遞送，諸如外植物，例如鞏膜外層外植物，諸如Pontes de Carvalho,R.A.等人，Invest Ophthalmol Vis Sci.2006,47(1)：4532-9中所述者，該文獻以全文引用的方式併入本文中。此等外植物可具生物降解性或生物相容性，或可為非生物降解性的。

在其他實施例中，本發明組合物亦可使用諸如可再裝填式眼內儲槽之藥物遞送裝置遞送。

給藥通常視待治療病狀之嚴重程度及反應性而定，療程持續數日至數個月或直至實現治癒或達成疾病狀態之減弱。最佳給藥時程可 經由量測藥物在體內或在局部位點之積累來計算或根據患者之反應。熟習此項技術者可使劑量、給藥方法及重複率達到最佳。最佳劑量可視抗-PDGF促效劑及VEGF拮抗劑之效能而變化，且亦可根據活體外及活體內動物研究中之EC₅₀估算。

實例 實例1 包含拮抗劑A及蘭尼單抗之組合物之穩定性

在一系列條件下檢驗在各種組合物中拮抗劑A及蘭尼單抗(以Lucentis®購自Genentech(S.San Francisco,CA))之組合物穩定性。使用各種pH值(5.0-8.0)及張力調節劑(氯化鈉、山梨糖醇及海藻糖)使在不同儲存條件(4℃、25℃及37℃)下及在物理應力(攪拌)下的組合物穩定性達到最佳。拮抗劑A及蘭尼單抗之組合物穩定性係藉由目視觀測、pH值量測及各種HPLC方法(陰離子交換[AEX-HPLC]、弱陽離子交換[WCX-HPLC]及尺寸排阻[SE-HPLC])表徵。

在整個16週的研究中，已確定在所檢驗之組合物中，包含3mg/mL拮抗劑A及5mg/mL蘭尼單抗於10mM L-組胺酸(pH 6.0)、130mM NaCl、0.01%(w/v)聚山梨醇酯20中之組合物(F6)最穩定且最大程度地防止拮抗劑A及蘭尼單抗降解。所執行之實驗之更詳細說明提供於本文中。

組合物參數

檢驗以下組合物參數：

(1)pH值：4.0、5.0、6.0、6.5、7.0、7.3、8.0

(2)緩衝液：乙酸鹽、磷酸鹽、組胺酸及2-胺基-2-羥基甲基-丙烷-1,3-二醇(「Tris」)

(3)張力調節劑：氯化鈉、山梨糖醇及海藻糖

(4)界面活性劑：聚山梨醇酯20[0.01%及0.005%(% w/v)]。

確定以下參數：

(1)在Ophthotech Corp.提供之改良型3cc小瓶(獲自Mglas AG,Munnerstadt,Germany)中，填充體積為300μL

(2)蘭尼單抗之濃度為5mg/mL

(3)拮抗劑A之濃度確定為3mg/mL。

下表1彙總此研究中所用之組合物基質。

「Ant.A」為拮抗劑A；「ran.」為蘭尼單抗

樣品製備

為了使拮抗劑A在組合物中之濃度為3mg/mL，使用10mM磷酸鹽、150mM NaCl及pH 7.3製備6mg/mL拮抗劑A儲備溶液。所得儲備溶液與市購Lucentis®之經稀釋形式(10mg/mL)1：1混合，得到3 mg/mL拮抗劑A及5mg/mL蘭尼單抗之最終濃度(F11)。將組合物置放於10kDa分子量截斷透析卡匣中且相對於表1中所列之各種組合物緩衝液(組合物編號F2至F3、F5至F10)進行約1,000,000倍透析。

組合物研究

在以下條件下測試組合物(但某些組合物因在較早時間點降解而未在所有時間點測試)：

分析方法

為了量測各種組合物中在應力下所產生之任何降解產物的濃度，使用以下穩定性指示分析：

(1)SE-HPLC(分析拮抗劑A及蘭尼單抗)

‧移動相：50mM磷酸鹽緩衝液，100mM氯化鈉，pH 7.0

‧管柱：Tosoh TSKgel G3000SWXL 7.8mm×300mm，5μm粒子

‧柱溫：周圍溫度

‧流速：1.0mL/min

‧信號波長：280nm；參考波長：360nm

‧注射體積：5μL

‧樣品製備：不稀釋

‧純度百分比係根據所鑑別之拮抗劑A與蘭尼單抗之主峰之積分面積百分比報導

(2)WCX-HPLC(分析蘭尼單抗)

‧移動相A：10mM磷酸鹽緩衝液，pH 7.0

‧移動相B：10mM磷酸鹽緩衝液，500mM氯化鈉，pH 7.0

‧管柱：Dionex ProPac WCX-10，4×250mm

‧柱溫：周圍溫度

‧流速：1.0mL/min

‧信號波長：214nm；參考波長：360nm

‧注射體積：5μL

‧樣品製備：不稀釋

‧純度百分比係根據所鑑別之拮抗劑A與蘭尼單抗之主峰之積分面積百分比報導

(3)AEX-HPLC(分析拮抗劑A)

‧移動相A：10mM磷酸鹽緩衝液，pH 7.0

‧移動相B：10mM磷酸鹽緩衝液，500mM氯化鈉，pH 7.0

‧管柱：Dionex DNA Pac PA-100，4×250mm

‧柱溫：40℃

‧流速：1.2mL/min

‧信號波長：258nm；參考波長：360nm

‧注射體積：5μL

‧樣品製備：不稀釋

‧純度百分比係根據所鑑別之拮抗劑A與蘭尼單抗之主峰之積分面積百分比報導

(4)pH

‧VWR symphony SB70P

(5)目視觀測

‧利用Sony Cyber-shot DSC-H9數位靜態相機(810萬像素)拍攝之相片

(6)容積莫耳滲透濃度

‧Advanced Instruments,Inc.高級滲透壓計型號3D3

穩定性概述

分析攪拌(4小時)及各種儲存溫度(4℃、25℃及37℃)對各種拮抗劑A與蘭尼單抗組合物的影響。在整個研究中，所測試之所有組合物在所有儲存及應力條件下皆能夠維持其目標pH值，亦即所滴定之初始pH值。

穩定性指示分析

組合物F2在37℃下儲存期間在兩週之後發生可見沈澱(數據未顯示)。未執行其他分析來定量量測沈澱。

AEX-HPLC可有效分析拮抗劑A在儲存期間之降解(圖1)。當樣品在高溫下培育時，觀測到前峰及後峰之形成(圖1)。在37℃下儲存8週期間，組合物F2中拮抗劑A之AEX-HPLC純度降低將近20%。

WCX-HPLC亦有效地表徵儲存期間蘭尼單抗之降解(圖2)。當蘭尼單抗在高溫下培育時，觀測到前峰與後峰之形成(圖2)。

SE-HPLC分析適用於表徵蘭尼單抗之可溶性聚集或片斷化(圖3)。根據SE-HPLC，拮抗劑A未顯示顯著變化，但其聚集形式之解析可能超出Tosoh TSKgel G3000SWXL管柱之能力。在37℃下儲存期間，組合物F3及組合物F5中之蘭尼單抗發生聚集或片斷化(圖3)。

攪拌對穩定性之影響

表1中所列之所有組合物經歷4小時攪拌，一組未攪拌組合物留置於室溫下。根據任何分析方法，對照樣品與經攪拌樣品之間未發現差異(數據未顯示)。

儲存溫度對穩定性之影響

在37℃下儲存使所研究之各種組合物中之拮抗劑A與蘭尼單抗均發生雖然程度不同但顯著的降解。兩週時，組合物F2發生沈澱(數據 未顯示)。所有其他組合物保持澄清長達八週，且若干組合物(組合物F1、F4、F6、F8及F11)保持澄清長達12週。

在37℃下兩週之後，根據AEX-HPLC，組合物F2中之拮抗劑A純度已降低將近20%。在相同儲存條件下儲存四週之後，組合物F3及F5亦顯示拮抗劑A降解增強(圖4)。八週時，組合物F8對拮抗劑A提供之保護作用似乎大於F6及F7。12週時，F8繼續顯示較高之拮抗劑A純度(圖4)。

組合物F2亦不能防止蘭尼單抗降解，如WCX-HPLC偵測，2週時純度降低將近20%(圖5)。第四週時，與F6相比，許多組合物(F3、F5、F7、F8、F9及F10)展現顯著的蘭尼單抗降解(圖5)。組合物F6維持蘭尼單抗之最佳純度長達12週(圖5)。

根據在4℃下儲存2週、8週及12週之結果(其顯示蘭尼單抗之原生形式之單峰)，依據SE-HPLC，所有組合物展現類似之拮抗劑A及蘭尼單抗純度概況長達4週(圖14及圖15)。在所有儲存條件(包括在37℃下儲存12週)下未觀測到拮抗劑A發生顯著變化(圖6)。然而，在25℃及37℃下儲存期間，蘭尼單抗發生聚集。在相同儲存條件下，未觀測到市購Lucentis®之經稀釋形式(F4)發生顯著聚集(圖7)。

所有組合物在25℃下儲存期間顯示的目視穩定性優於37℃。所有組合物在8週內皆保持澄清。兩種組合物(F6及F8)在另外12週時間點保持澄清。

對於在25℃下的前四週，所有組合物維持類似之拮抗劑A純度，如藉由AEX-HPLC所表徵(圖8)。8週時，組合物F2中之拮抗劑A降解顯著增加(圖8)。此外，組合物F3及F5在相同時段內顯示純度大幅降低(圖8)。組合物F6、F7及F8能夠維持拮抗劑A純度長達12週(圖8)。

蘭尼單抗之WCX-HPLC分析顯示，各組合物之間在純度概況方面存在微妙但有特點的變化。在25℃下儲存兩週之後，組合物F2中之 蘭尼單抗發生顯著降解(圖9)。當pH 8.0組合物(F9及F10)顯示蘭尼單抗純度大幅降低時，其餘組合物維持相似之蘭尼單抗純度直至八週(圖9)。組合物F6能夠防止蘭尼單抗在25℃下發生降解，如藉由WCX-HPLC分析所測定(圖9)。

除固有可變性外，SE-HPLC分析顯示在25℃下儲存期間，拮抗劑A概況無顯著變化(圖10)。一般而言，所有組合物似乎皆可防止拮抗劑A在八週內聚集或片斷化，且組合物F6及F8可防止拮抗劑A在十二週內發生聚集或片斷化(圖10)。組合物F8及F6在25℃下維持良好蘭尼單抗純度持續十二週(圖11)。

在4℃下，大多數組合物中之拮抗劑A及蘭尼單抗保持穩定。經目視檢查，所有組合物皆保持澄清。此外，根據所有HPLC方法，大多數組合物維持與起始物質類似的純度(圖12至15)，例外為F2、F3及F5，其產生大量的蘭尼單抗可溶性聚集物(圖15)。

組合物特徵/組分對穩定性之影響

為了確定pH值及不同組合物組分對拮抗劑A及蘭尼單抗之穩定性的影響，在不同PH值位準(5.0至8.0)下且用不同張力調節劑(氯化鈉及山梨糖醇)共調配拮抗劑A及蘭尼單抗。本節描述在各種溫度下儲存時，pH值及組合物組分對拮抗劑A與蘭尼單抗中之一或兩者之穩定性的影響。

pH值對穩定性之影響

在含有山梨糖醇與含有NaCl之組合物中，pH值對拮抗劑A及蘭尼單抗之穩定性之影響藉由在37℃下儲存而得以最佳地區分(圖16)。根據AEX-HPLC，拮抗劑A之降解與pH值逆相關，其中在pH 5.0下發生最大降解(圖16)。pH值變化使含有山梨糖醇之組合物中之蘭尼單抗純度概況發生較不顯著的變化。根據WCX-HPLC，在pH 5.0下調配使蘭尼單抗在37℃下儲存四週之後發生較快降解，但pH 6.0組合物在37℃ 下儲存八週之後產生的降解相似(圖17)。在含有NaCl之組合物中，蘭尼單抗在pH 6.0下降解最少，而在含有山梨糖醇之組合物中，pH 7.0為最佳。使用SE-HPLC評估拮抗劑A(圖18)與蘭尼單抗(圖19)，pH 7.0組合物中之蘭尼單抗之聚集速率最慢，同時未觀測到拮抗劑A降解發生變化。

張力調節劑對穩定性之影響

張力調節劑對拮抗劑A與蘭尼單抗之穩定性的影響係藉由比較在37℃下儲存所產生之結果來區分。如藉由AEX-HPLC所表徵，在pH 5.0至7.0下，含NaCl組合物中之拮抗劑A在8週內的穩定性比含山梨糖醇組合物強(圖20)。在pH 8.0下，在4週內，含氯化鈉或山梨糖醇組合物之間無可覺察的差異(圖21)。對於蘭尼單抗組合物，如藉由WCX-HPLC所表徵，含氯化鈉組合物在所測試之整個pH值範圍(pH 5.0至8.0)內優於含山梨糖醇組合物(圖22)。SE-HPLC亦顯示含氯化鈉組合物使蘭尼單抗穩定的優良效能(圖23)。對於使用兩種張力調節劑的組合物，可溶性聚集程度在pH 7.0下最低且在pH 5.0下最高(圖23)。

拮抗劑A與Lucentis®之1：1混合物之穩定性

研究之另一態樣涉及表徵拮抗劑A與市購Lucentis®混合之影響。為此，拮抗劑A自其30mg/mL之最初濃度於10mM磷酸鈉及150mM NaCl(pH 7.3)之組合物中稀釋至6mg/mL，隨後將所得組合物與等體積(1：1)之市購Lucentis®(10mg/mL)組合。藉由在37℃下儲存來檢驗1：1混合物(F11)之穩定性，且與在類似的濃度及儲存溫度下的F1及F4相比較。

對於拮抗劑A，SE-HPLC分析指示，在37℃下，在12週內，1：1混合物(F11)中之拮抗劑A穩定性與單獨F1類似(圖24)。雖然AEX-HPLC顯示1：1混合物中之拮抗劑A在37℃下儲存期間在較早時間點發生較快降解，但F1與1：1混合物(F11)在12週時均顯示類似的純度(圖25)。當 樣品在25℃下儲存時，未觀測到AEX-HPLC純度概況有差異(圖25)。

在類似儲存條件下，1：1混合物中之蘭尼單抗遇到的穩定性問題比拮抗劑A多。在37℃下儲存長達4週內，F11中之蘭尼單抗維持與F4中之蘭尼單抗類似的WCX-HPLC概況，隨後，混合物(F11)中之蘭尼單抗發生較快降解(圖26)。然而，當樣品在25℃下儲存時，混合物中之蘭尼單抗保持相當穩定(圖26)。在25℃下，該混合物與F4之間在蘭尼單抗之WCX-HPLC純度概況方面未觀測到顯著差異。SE-HPLC顯示在37℃下儲存8週之後1：1混合物中之蘭尼單抗聚集物與F4相比明顯增加(圖27a)。在25℃下儲存時，混合物中之聚集實質上降低，且在4℃下未觀測到聚集(圖27b至27c)。

組合物F6之穩定性

拮抗劑A之AEX-HPLC分析指示，F6組合物在25℃下維持拮抗劑A純度長達12週，且在4℃下維持長達至少16週(所測試的最近時間點)(圖28)。在37℃下，早在兩週時即觀測到拮抗劑A降解(圖28)。與F6一起調配有助於防止蘭尼單抗在37℃下降解長達4週，隨後在8週時純度發生顯著降低(依據WCX-HPLC)(圖29)。然而，組合物F6中之蘭尼單抗在25℃下穩定長達至少12週，且在4℃下穩定長達至少16週，而純度無任何實質性降低(依據WCX-HPLC)(圖29)。

SE-HPLC結果指示，在所有儲存條件下，拮抗劑A在16週內保持穩定(圖30)。在37℃下培育12週時，未觀測到F6組合物中之蘭尼單抗發生顯著聚集(圖31)。在4℃或25℃下儲存時，F6組合物表現更佳，其中在兩種溫度下，純度在8週內類似。F6組合物中之蘭尼單抗在25℃及37℃下發生之聚集快於F4。

根據此等範圍研究，平均而言，組合物F6在所有儲存溫度下及此研究所用之分析方法中顯示最佳穩定性。

實例2 包含拮抗劑A及貝伐單抗之組合物之穩定性

在一系列條件下檢驗組合物中之拮抗劑A的穩定性，此組合物亦包括抗-VEGF單株抗體(mAb)貝伐單抗，以Avastin®市購自Genentech(S.San Francisco,CA)。使用各種pH值(4.0-8.0)及張力調節劑(氯化鈉、山梨糖醇及海藻糖)使拮抗劑A與貝伐單抗組合物在各種溫度(4℃、25℃及37℃)下及在物理性應力(攪拌)下儲存時的穩定性達到最佳。拮抗劑A及貝伐單抗之穩定性係藉由目視觀測、pH值量測及各種HPLC方法(陰離子交換[AEX-HPLC]、弱陽離子交換[WCX-HPLC]及尺寸排阻[SE-HPLC])表徵。

拮抗劑A可與貝伐單抗相容，當兩者在所測試之某些組合物中組合在一起時，無可覺察之穩定性問題。根據24週穩定性研究之結果，觀測到組合物F19具有最佳穩定性。F19組合物中之拮抗劑A與貝伐單抗在4℃下保持穩定長達24週，且在25℃下保持穩定長達至少4週。

組合物參數

檢驗以下組合物參數：

(1)pH值：4.0、5.0、6.0、6.2、6.3、7.0、7.3、8.0

(2)緩衝液：乙酸鹽、磷酸鹽及Tris

(3)張力調節劑：氯化鈉、山梨糖醇及海藻糖

(4)界面活性劑：聚山梨醇酯20

(5)拮抗劑A濃度：30mg/mL、15mg/mL及3mg/mL。

確定以下參數：

(1)在Ophthotech Corp.提供之改良型3cc小瓶(獲自Mglas AG,Munnerstadt,Germany)中，填充體積為300μL

(2)貝伐單抗之濃度為12.5mg/mL。

下表3彙總此研究中所用之組合物基質。

表3.拮抗劑A：貝伐單抗組合物之組合物基質

樣品製備

利用10mM磷酸鹽、150mM NaCl及pH 7.3製備6mg/mL拮抗劑A 儲備溶液。所得儲備溶液與市購Avastin®(25mg/mL)1：1混合，得到3mg/mL拮抗劑A及12.5mg/mL貝伐單抗之最終濃度(組合物F26)。將組合物置放於10kDa分子量截斷透析卡匣中且相對於表3中所列之各種組合物緩衝液(組合物編號F13至F17、F19至F23)進行約1,000,000倍透析。例外項包括以下：

‧組合物F12不需要另外的稀釋或透析。

‧市購Avastin®用含有6%(w/v)海藻糖及0.02%(w/v)聚山梨醇酯20之50mM磷酸鹽緩衝液(pH 6.2)1：1稀釋，得到組合物F18。

‧組合物F24係藉由將組合物F12與市購Avastin® 1：1混合而製得。

‧用含有150mM NaCl之10mM磷酸鹽緩衝液(pH 7.3)10倍稀釋組合物F12產生組合物F25。

應力研究

表3之組合物在以下應力條件下測試：

分析方法

為了分析在應力下所產生之降解產物，此研究中開發且使用以下穩定性指示分析。

(1)SE-HPLC(分析拮抗劑A及貝伐單抗)

‧移動相：50mM磷酸鹽緩衝液，100mM氯化鈉，pH 7.0

‧管柱：TOSOH TSKgel G3000SW_XL

‧柱溫：周圍溫度

‧流速：1.0mL/min

‧信號波長：214nm；參考波長：360nm

‧注射體積：1μL

‧樣品製備：

- 對於30mg/mL適體樣品，於Milli-Q水中稀釋10倍

- 其他樣品不稀釋

‧純度百分比係根據所鑑別之拮抗劑A與貝伐單抗之主峰之積分面積百分比報導

(2)WCX-HPLC(分析貝伐單抗)

‧移動相A：10mM磷酸鹽緩衝液，pH 7.0

‧移動相B：10mM磷酸鹽緩衝液，500mM氯化鈉，pH 7.0

‧管柱：Dionex ProPac WCX-10，4×250mm

‧柱溫：周圍溫度

‧流速：1.0mL/min

‧信號波長：214nm；參考波長：360nm

‧注射體積：10μL

‧樣品製備：於Milli-Q水中稀釋10倍

‧純度百分比係根據所鑑別之貝伐單抗主峰之積分面積百分比報導

(3)AEX-HPLC(分析拮抗劑A)

‧移動相A：10mM磷酸鹽緩衝液，pH 7.0

‧移動相B：10mM磷酸鹽緩衝液，500mM氯化鈉，pH 7.0

‧管柱：Dionex DNA Pac PA-100，4×250mm

‧柱溫：40℃

‧流速：1.2mL/min

‧信號波長：258nm；參考波長：360nm

‧注射體積：5μL

‧樣品製備：

- 對於3.0mg/mL適體樣品，於Milli-Q水中稀釋10倍

- 對於15mg/mL適體樣品，於Milli-Q水中稀釋50倍

- 對於30mg/mL適體樣品，於Milli-Q水中稀釋100倍

‧純度百分比係根據所鑑別之拮抗劑A主峰之積分面積百分比報導

(4)pH

‧VWR symphony SB70P

(5)目視觀測

‧利用Sony Cyber-shot DSC-H9數位靜態相機(810萬像素)拍攝之相片

(6)容積莫耳滲透濃度(在時間點零時)

‧Advanced Instruments,Inc.高級滲透壓計型號3D3

穩定性概述

本節描述攪拌(4小時)與在各種溫度(4℃、25℃及37℃)下儲存對拮抗劑A及貝伐單抗的影響。在整個研究中，各組合物在所有物理性應力下均能夠維持目標pH值。

穩定性指示分析

依據目視觀測，注意到組合物F15、F16及F24在37℃下儲存2週內發生沈澱(數據未顯示)。由於可供研究利用的體積有限，因此未執行其他分析來定量量測沈澱。

AEX-HPLC可有效地分析拮抗劑A在儲存期間之穩定性。當某些組合物中之拮抗劑A在37℃之高溫下培育時，觀測到前峰與後峰之形成。舉例而言，在37℃下儲存2週期間，組合物F14中拮抗劑A之AEX-HPLC純度已降低將近50%(圖32)。

WCX-HPLC亦可有效地表徵貝伐單抗之穩定性。當某些組合物中之貝伐單抗在25℃之溫度下培育時，觀測到前峰與後峰之形成。舉例而言，在25℃下儲存8週期間，組合物F22中之貝伐單抗純度降低將近30%(圖33)。

SE-HPLC證明適用於表徵貝伐單抗之可溶性聚集或片斷化。根據SE-HPLC，拮抗劑A未顯示顯著變化，但其聚集形式之解析因對穩定性之分析靈敏度而可能超出TSKgel G3000SWXL管柱之能力。在37℃下儲存8週之後，發現組合物F15中之貝伐單抗降解(圖34)。

攪拌對穩定性之影響

評估攪拌對拮抗劑A及貝伐單抗中之一或兩者的影響。表3中所列之組合物使用內部攪拌器攪拌4小時，而對照組組合物留置於室溫下而不攪拌。經攪拌樣品與對照樣品之間在目視觀測、pH、AEX-HPLC及WCX-HPLC方面未觀測到差異(數據未顯示)。然而，評估拮抗劑A與貝伐單抗之聚集或片段化的SE-HPLC顯示，F23及F24樣品之經攪拌樣品與對照樣品之間存在微小的變化(表5及表6)。攪拌4小時之後，F23樣品中及30mg/mL拮抗劑A與25mg/mL Avastin®之1：1直接混合物(F24)中形成更多可溶性聚集物(拮抗劑A前峰及貝伐單抗前峰)。此表明，在pH 8.0下用氯化鈉調配或將較高濃度之拮抗劑A與貝伐單抗共調配導致拮抗劑A或貝伐單抗在剪應力期間形成可溶性聚集物或片段。其他組合物似乎維持拮抗劑A及貝伐單抗之完整性，如藉由SE-HPLC所確定。此等結果表明，在上述條件下，攪拌未誘導共調配之拮抗劑A或貝伐單抗發生明顯降解。

「Ant.A」為拮抗劑A；「bev」為貝伐單抗；「NA」意謂不適用

「Ant.A」為拮抗劑A；「bev」為貝伐單抗；「NA」意謂不適用

儲存溫度對穩定性之影響

在24週研究期間，表3中所列之組合物置放於4℃、25℃及37℃穩定性室內以研究溫度對拮抗劑A與貝伐單抗中之一或兩者穩定性的影響。根據層析分析，隨著儲存溫度提高，拮抗劑A與貝伐單抗均展現較大降解。

在37℃下儲存誘導拮抗劑A及貝伐單抗之降解程度顯著提高。2週時，在F15、F16及F24中發現拮抗劑A或貝伐單抗沈澱(數據未顯示)。4週時，F14亦開始顯示拮抗劑A或貝伐單抗之不溶性聚集(數據未顯示)。所有其他組合物保持澄清長達12週。

AEX-HPLC顯示pH 4.0及5.0組合物樣品(F13、F14、F15及F16)中之拮抗劑A降解顯著，而F17之共調配樣品顯示較佳穩定性(圖35)。在37℃下儲存12週期間，拮抗劑A在pH 6.0-7.0下維持類似的純度，例外為F20及F26，其中在12週時觀測到拮抗劑A純度降低(圖36)。

在37℃下儲存2週之後，WCX-HPLC顯示pH 4.0組合物(F13及F14)中之貝伐單抗純度顯著降低，顯示較少甚至無完整貝伐單抗剩餘(圖37)。在37℃下儲存12週期間，觀測到除F19外之所有組合物中存在加速降解，F19始終顯示降解比其他組合物慢(圖38)。

SE-HPLC顯示經受應力之樣品中形成可溶性聚集物。對於拮抗劑A，在37℃下儲存2週促使pH 4.0-5.0組合物中快速形成可溶性聚集物(圖39)。F17中所調配之拮抗劑A亦顯示可溶性聚集，但聚集速率較低(圖39)。第4週時，大部分拮抗劑A組合物顯示較低拮抗劑A純度，例外為F19及兩種1：1混合物(F24及F26)，其能夠維持高拮抗劑A純度(圖40)。此傾向維持至第12週，此時F26顯示拮抗劑A純度稍微降低，留下F19為就穩定性而言首選之拮抗劑A組合物。對於貝伐單抗而言，在pH 6.0範圍之外調配導致mAb純度顯著降低(圖41)。在37℃下儲存12週期間，此傾向持續存在，留下F19為向貝伐單抗提供最大穩定性之組合物(圖42)。

一些組合物在25℃下儲存期間提供較佳穩定性。所有組合物在25℃下儲存24週之後保持澄清，例外為F14，在8週時觀測到其中出現沈澱(數據未顯示)。

根據AEX-HPLC，在pH 4.0下調配拮抗劑A(F13及F14)導致適體在儲存僅2週之後即發生降解(圖43)。F15顯示在25℃下儲存4週時發生降解；然而，F16長達8週展現改良穩定性(圖43)。在pH 6.0-8.0下調配拮抗劑A使得組合物F19、F20、F21及F23在25℃下儲存8週期間且在4℃長達至少24週儲存期間維持類似的穩定性(圖44)。

WCX-HPLC指示pH值對貝伐單抗穩定性的影響與拮抗劑A相反。在25℃下儲存2週之後，pH 8.0樣品顯示貝伐單抗發生實質性降解(圖45及圖46)。在25℃下儲存4週時，pH 4.0及pH 7.0組合物開始顯示貝伐單抗降解跡象(圖45及圖46)。pH 5.0-6.0組合物在25℃下長達12週提供類似的貝伐單抗穩定性，此時所有主要候選物顯示加速降解之跡象。然而，F19組合物在pH 6.0下、在25℃下儲存12週至24週期間未發生貝伐單抗之進一步加速降解(圖45及圖46)。

依據SE-HPLC，觀測到AEX-HPLC及WCX-HPLC中發現類似之降解傾向。在pH 4.0下調配之拮抗劑A在25℃下儲存時不能維持拮抗劑A純度(圖47)。8週時，在pH 5.0下調配之拮抗劑A發生顯著聚集或片段化(圖47)。在6.0-8.0之pH值範圍內調配拮抗劑A在25℃下儲存長達至少24週期間提供類似的純度(圖21)。貝伐單抗純度依賴於組合物之pH值及組合物中拮抗劑A之濃度。在25℃下儲存4週之後，在pH 4.0及pH 8.0下調配導致貝伐單抗純度加速降低(圖49及圖50)。在相同時間及儲存條件下，在15mg/mL共調配之拮抗劑A似乎對貝伐單抗純度產生不利影響(圖49)。pH 5.0-7.0組合物在25℃下在8週內提供較佳穩定性(圖49及圖50)。其他時間點顯示，主要組合物(pH 6.0及7.0)能夠維持類似純度(圖50)。

在此研究期間，大部分組合物在4℃下儲存得到最佳穩定性。目視觀測顯示組合物F19、F20、F21及F23在4℃下儲存長達至少24週期間未發生不溶性聚集。

依據AEX-HPLC，對於組合物F19、F20、F21及F23，所有組合物在4℃下儲存8週之後及在24週期間維持類似的拮抗劑A純度(圖51)。然而，如藉由WCX-HPLC所觀測，在pH 8.0下調配貝伐單抗導致在4℃下儲存8週之後的降解大幅增加，此傾向持續24週(圖52)。

SE-HPLC顯示幾種組合物中出現拮抗劑A之一些片段化或貝伐單抗之聚集。對於拮抗劑A，大多數組合物在4℃下維持其純度長達8週，而pH 4.0-5.0組合物顯示純度顯著降低(圖53)。組合物F19、F20、F21及F23在4℃下儲存時維持類似的拮抗劑A純度長達12週；然而12週及24週之後，F23中之拮抗劑A純度實質上降低，而其他三種所選組合物中之拮抗劑A純度保持類似地高(圖54)。在pH 8.0下調配導致貝伐單抗在初始透析期間形成可溶性聚集物；然而，在4℃下儲存維持貝伐單抗純度至少8週，類似於其他組合物(圖55)。一個例外為組合物F24，其中在8週儲存期間，15mg/mL之拮抗劑A濃度影響貝伐單抗純度(圖55)。

組合物特徵/組分對穩定性之影響

在不同pH值下且用不同張力調節劑共調配拮抗劑A及貝伐單抗以便確定此等因素對穩定性的影響。本節描述組成對拮抗劑A與貝伐單抗中之一或兩者之穩定性的影響。

pH值對穩定性之影響

pH值對拮抗劑A及貝伐單抗之穩定性的影響係藉由在37℃下儲存來區分。如藉由AEX-HPLC所觀測，pH 7.0及pH 8.0含山梨糖醇組合物F20及F22中之拮抗劑A在37℃下為穩定的，相比之下，pH 4.0-6.0含山梨糖醇組合物F13、F15及F17中發生加速降解(圖56)。對於貝伐 單抗，如藉由WCX-HPLC所觀測，pH 5.0-6.0範圍外之含山梨糖醇組合物(F13、F20及F22)在37℃下展現貝伐單抗之加速降解(圖57)。類似於AEX-HPLC結果，SE-HPLC顯示含山梨糖醇組合物F13及F15(pH 4.0-5.0)中之拮抗劑A在37℃下發生片段化或聚集(圖58)。然而，儘管藉由WCX-HPLC發現pH 5.0-6.0範圍外之含山梨糖醇組合物存在降解，但SE-HPLC顯示pH 5.0-8.0含山梨糖醇組合物在37℃下儲存時，貝伐單抗發生較慢的聚集或片段化(圖59)。在37℃下儲存之pH 4.0含山梨糖醇組合物F13之SE-HPLC顯示貝伐單抗實質性降解。在pH 6.0下調配(F17)似乎比所分析之其他pH位準更佳地維持含山梨糖醇組合物中之貝伐單抗純度(圖58及圖59)。

張力調節劑對穩定性之影響

張力調節劑對拮抗劑A及貝伐單抗之穩定性的影響係藉由在37℃下儲存來區分。山梨糖醇或氯化鈉之益處依賴於組合物之pH值。

在pH 5.0及6.0下，含山梨糖醇組合物(F15及F17)中之拮抗劑A在8週研究期間發生降解，如藉由AEX-HPLC所觀測(圖60)。然而，具有氯化鈉作為張力調節劑的此等pH值位準下之組合物(F16及F19)未發生此降解(圖60)。含有氯化鈉之pH 4.0組合物(F14)證明在加速應力下4週之後具有降低之穩定性，使得山梨糖醇成為pH 4.0下之優良張力調節劑(圖60)。在pH 7.0及pH 8.0下，具有氯化鈉或山梨糖醇作為張力調節劑的組合物(F20、F21、F22及F23)維持類似的穩定性。WCX-HPLC分析貝伐單抗顯示，相對於山梨糖醇，在pH 6.0-7.0下用氯化鈉調配使穩定性改良(圖61)。然而，pH 5.0組合物之情況相反，其中在37℃下儲存4週期間，相對於氯化鈉，山梨糖醇限制降解(圖61)。依據SE-HPLC，氯化鈉或山梨糖醇之存在影響拮抗劑A穩定性，而在兩種張力調節劑之間，貝伐單抗保持類似的穩定性。對於pH 5.0-6.0組合物，氯化鈉之存在比山梨糖醇更佳地防止拮抗劑A聚集或片段化(圖 62)。就所分析之其他pH值而言，拮抗劑A在pH 4.0下、在山梨糖醇存在下顯示較低純度(圖62)。在pH 7.0及pH 8.0下調配之拮抗劑A(圖62)及在pH 4.0、pH 7.0及pH 8.0下調配之貝伐單抗(圖63)在山梨糖醇或氯化鈉作為張力調節劑存在下維持類似的純度。

1：1混合物對穩定性的影響

所分析之另一個參數為將拮抗劑A與市購貝伐單抗混合的影響。此外，分析含有不同濃度之拮抗劑A與確定濃度之貝伐單抗(1：1混合物(F24)及1：1混合物(F26))的組合物。此外，組合物在37℃經受應力可提供與拮抗劑A與貝伐單抗降解有關的資訊。

對於單獨拮抗劑A，依據AEX-HPLC及SE-HPLC，以30mg/mL調配(F12)或以3mg/mL調配(F25)未使穩定性概況出現差異。將市購Avastin®與不同濃度(15mg/mL及3mg/mL)之拮抗劑A混合時，兩種組合物中之拮抗劑A在37℃下維持類似的穩定性長達8週，而將15mg/mL之拮抗劑A與12.5mg/mL之貝伐單抗一起調配產生輕微的降解，如藉由AEX-HPLC所觀測(圖64)。

即使此研究中所有組合物中之貝伐單抗濃度恆定，拮抗劑A之濃度不同亦影響貝伐單抗之穩定性。在37℃下儲存8週之後，WCX-HPLC顯示當與3mg/mL拮抗劑A(F26)或15mg/mL拮抗劑A(F24)一起調配時，貝伐單抗之降解概況之差異較小(圖65)。依據SE-HPLC，與以兩種濃度直接1：1混合(F24及F26)相比，30mg/mL拮抗劑A與3mg/mL拮抗劑A之間在純度概況方面未發現顯著差異(圖66)。然而，對於貝伐單抗，與3mg/mL組合物1：1混合物(F26)及市購Avastin®之經稀釋形式(F18)相比，具有15mg/mL拮抗劑A之組合物(F24)使貝伐單抗產生更多可溶性聚集及片段化(圖67)。

F19組合物之穩定性

在整個24週研究期間，在所分析之所有組合物中，組合物F19顯 示最佳穩定性。在整個研究中，所有F19組合物保持視覺上澄清且維持目標pH值。本節重點描述此組合物之穩定性概況。

依據AEX-HPLC分析，F19組合物在4℃與25℃下的整個24週期間維持類似的拮抗劑A純度(圖68)。然而，在37℃下儲存時，拮抗劑A之純度在第2週時降低約5%(圖68)。此傾向在37℃下、在接下來的12週期間持續，與拮抗劑A之其他儲存條件相比，拮抗劑A純度降低約20%(圖68)。

WCX-HPLC分析顯示儲存溫度與F19組合物中貝伐單抗之降解速率之間存在相關性。在37℃下儲存2週之後，與4℃樣品相比，貝伐單抗純度降低約10%(圖69)。此傾向持續長達12週，其中與4℃相比，在37℃下儲存之貝伐單抗之純度降低約50%(圖69)。在25℃下儲存維持與4℃類似的純度長達4週(圖42)。然而，第8週時，相對於4℃樣品，25℃樣品之純度下降7%(圖69)。在25℃下儲存之貝伐單抗之降解增強在24週研究之剩餘時間持續，其中在研究結束時，貝伐單抗純度比在4℃下儲存之樣品低約20%(圖69)。在整個24週研究期間，在4℃下儲存似乎維持與初始值類似的純度(圖69)。

依據SE-HPLC，組合物F19防止拮抗劑A發生另外的可溶性聚集或片段化，與初始值類似(圖70)。在37℃下儲存之F19中的貝伐單抗維持與4℃及25℃下儲存類似的純度長達2週，隨後在第4週時出現可溶性聚集(圖71)。貝伐單抗純度在25℃下維持長達8週，隨後在12週時出現顯著可溶性聚集(圖71)。貝伐單抗在4℃下維持與初始時間點類似的純度值持續24週(圖71)。

將組合物F19與包含單獨拮抗劑A或貝伐單抗的組合物相比較時，發現拮抗劑A純度與貝伐單抗純度之間形成對比。依據AEX-HPLC分析，在37℃下、在2週至8週期間，組合物F25維持比F19高5-8%的拮抗劑A純度。然而，第12週時，兩種組合物均下降至類似純度 (圖72)。此外，在4℃及25℃下，兩種組合物均維持類似的純度(圖72)。依據SE-HPLC，組合物F12在各儲存條件下的表現優於F19，其中在4℃下發現最大差異，但觀測到一些分析可變性(圖73)。

在F19中調配貝伐單抗得到的穩定性優於市購Avastin®之經稀釋形式(F18)。根據WCX-HPLC，F19在25℃下且尤其在37℃下比F18更佳地使貝伐單抗穩定化，顯示自2週至12週改良8%-11%(圖74)。類似地，與在37℃下儲存之F18相比，SE-HPLC分析顯示更好地防止貝伐單抗聚集或片段化(圖75)。

根據24週穩定性測試期間所收集之數據，確定F19為最穩定的拮抗劑A及貝伐單抗組合物。在所測試之組合物中，當在4℃下儲存時，F19有助於使3mg/mL拮抗劑A與12.5mg/mL貝伐單抗穩定長達至少24週。此外，在25℃下，F19組合物中拮抗劑A與貝伐單抗之純度維持長達至少4週。

實例3 包含蘭尼單抗與拮抗劑A之組合物的生物活性

此研究之目的為評估包含蘭尼單抗與拮抗劑A之組合物的生物活性，與包含單獨蘭尼單抗(Lucentis®)或拮抗劑A的組合物相比。根據基因表現量，使用即時PCR量測活性，此活性與對VEGF及PDGF-BB與其個別細胞受體之結合的抑制有關。分析三種不同的蘭尼單抗+拮抗劑A組合物：F6、F8及F11(參見實例1)。此等組合物在其用於此研究中之前在4℃下儲存12個月。

單獨或存在於亦包含拮抗劑A之組合物中之蘭尼單抗抗-VEGF活性係依據其抑制人類臍靜脈內皮細胞(HUVEC)中之組織因子(TF)基因之VEGF誘導的能力來確定。一式三份地分析樣品且所有數據相對於單獨VEGF治療所得之數據標準化。如圖76中所示，針對所有組合物及單獨Lucentis®所測定之抗-VEGF EC₅₀(nM)值在95%信賴區間內相 同。

單獨或存在於亦包含蘭尼單抗之組合物中的拮抗劑A抗-FDGF活性係依據其抑制3T3纖維母細胞中之BTG2基因表現之PDGF-BB誘導的能力來確定。一式兩份地分析樣品且所有數據相對於單獨PDGF-BB治療所得之數據標準化。如圖77中所示，針對所有組合物與單獨拮抗劑A所測定之抗-PDGF EC₅₀(nM)值在95%信賴區間內相同。此等結果表明，包含蘭尼單抗與拮抗劑A之組合物當在4℃下儲存時顯示各藥劑之活性持續至少12個月。

特定而言，為了證明拮抗劑A與蘭尼單抗之共調配對拮抗劑A或蘭尼單抗之活性無不利影響，測定共調配物(在4℃下儲存12個月)中存在之拮抗劑A之抗-PDGF活性及蘭尼單抗之抗-VEGF活性。包含拮抗劑A與蘭尼單抗之三種不同組合物(F6、F8及F11)在4℃下儲存12個月之後加以分析，隨後用於此研究中(參見實例1)。另外，包含拮抗劑A或蘭尼單抗(Lucentis®)之組合物作為對照物加以分析。

蘭尼單抗活性

蘭尼單抗之抗-VEGF活性係依據其抑制人類臍靜脈內皮細胞(HUVEC)中之VEGF誘導性基因(組織因子(TF)基因)之VEGF誘導的能力加以量測。

HUVEC(第8至9代；Lonza Group Ltd.,Basel,Switzerland)接種於24孔板(50,000個細胞/孔)上且在不含氫化可體松(hydrocortisone)之內皮生長培養基(EGM2；Lonza)中、在37℃下、5% CO₂下生長。次日，細胞在處理之前，在含有0.5% FBS及50μg/ml慶大黴素(gentamicin)之EGM基礎培養基(饑餓培養基)中經歷血清饑餓4小時。

為測定蘭尼單抗之EC₅₀，細胞用以下處理：單獨VEGF(陽性對照物；328 pM人類VEGF165(Preprotech))，或VEGF與F6、F8、F11、拮抗劑A或Lucentis®組合。對於此等處理，製備且測試以下各組合物於饑餓培養基中之連續稀釋液：F6、F8、F11及Lucentis®。各別連續 稀釋液中之蘭尼單抗及拮抗劑A濃度如下：蘭尼單抗=200nM、40nM、8nM、1.6nM、0.32nM(9.6、1.92、0.38、0.077、0.015μg/ml)；及拮抗劑A=580nM、116nM、23.2nM、4.64nM、0.928nM(5.97、1.19、0.24、0.048、0.009μg/ml)。對於VEGF+拮抗劑A處理，僅測試拮抗劑A之一種濃度(580nM=5.97μg/ml)。細胞在37℃、5% CO₂下用單獨VEGF或VEGF與上述濃度之上述連續稀釋液之一之組合處理1.5小時。其他對照細胞不處理。

處理之後立即使用RNeasy迷你型離心管柱套組(Qiagen)，根據製造商之方案自各孔收穫RNA樣品。所得總RNA用脫氧核糖核酸酶I處理以移除任何污染性基因組DNA且依據260nm下之光學密度(O.D.)加以定量。接著使用QuantiTect RT套組(Qiagen)，根據製造商說明書，使用總RNA進行逆轉錄。為評估組合物抑制VEGF活性之能力，使用特異性人類TaqMan探針(Applied Biosystems)對TF基因執行定量即時PCR。人類HPRT TaqMan基因分析用作對照管家基因(Applied Biosystems)。

一式三份地執行實驗且數據以平均值±SEM表示。使用GraphPad Prism軟體進行統計學及非線性回歸分析。即時PCR之所有數據相對於單獨VEGF治療(陽性對照物)標準化，以測定各條件下之TF基因表現變化程度(亦即，對VEGF誘導之基因表現之抑制)。針對所測試之不同濃度之各組合物測定的相對TF基因表現量顯示於圖76中。如表7中所示，針對缺乏拮抗劑A之蘭尼單抗及所有共調配樣品測定的抗-VEGF EC₅₀(nM)值在95%信賴區間內相同。未觀測到單獨拮抗劑A(亦即缺乏蘭尼單抗)對VEGF活性之抑制(數據未顯示)。

拮抗劑A活性

拮抗劑A之抗-PDGF活性係依據其抑制NIH-3T3纖維母細胞中PDGF誘導性基因(B細胞易位基因2(BTG2))之PDGF-BB誘導的能力加以測定。

NIH 3T3細胞接種於24孔板中(50000個細胞/孔)且在37℃、5% CO₂下，在DMEM(Gibco)10% FBS、1%青黴素/鏈黴素中生長。次日，細胞在處理之前，在DMEM 1% FBS、1%青黴素/鏈黴素(饑餓培養基)中經歷血清饑餓16小時。

為了測定拮抗劑A之EC₅₀，細胞用單獨PDGF-BB(陽性對照物)處理或用PDGF-BB與F6、F8、F11、拮抗劑A或Lucentis®組合處理。使用濃度為1.65nM(40ng/ml；Peprotech)之PDGF-BB。對於此等處理，製備且測試以下各組合物於饑餓培養基中之連續稀釋液：F6、F8、F11及拮抗劑A。各別連續稀釋液中之拮抗劑A及蘭尼單抗濃度如下：拮抗劑A=580nM、116nM、23.2nM、4.64nM、0.928nM(5.97、1.19、0.24、0.048、0.009μg/ml)；及蘭尼單抗=200nM、40nM、8nM、1.6nM、0.32nM(9.6、1.92、0.38、0.077、0.015μg/ml)。對於PDGF-BB+Lucentis®處理，僅測試蘭尼單抗之一種濃度(200nM=9.6μg/ml)。細胞在37℃、5% CO₂下用單獨PDGF-BB或PDGF-BB與上述濃度之上述連續稀釋液之一之組合處理1.5小時。其他對照細胞不處理。

處理之後立即使用RNeasy迷你型離心管柱套組(Qiagen)，根據製造商之方案自各孔收穫RNA樣品。所得總RNA用脫氧核糖核酸酶I處理以移除任何污染性基因組DNA且依據260nm下之O.D.加以定量。接 著使用QuantiTect RT套組(Qiagen)，根據製造商說明書，使用總RNA進行逆轉錄。為了評估組合物抑制PDGF-BB活性之能力，使用特異性小鼠TaqMan探針(Applied Biosystems)對BTG2基因執行定量即時PCR。小鼠GAPDH基因分析用作對照管家基因(Applied Biosystems)。

一式兩份地執行實驗且數據以平均值±SEM表示。使用GraphPad Prism軟體進行統計學及非線性回歸分析。即時PCR之所有數據相對於單獨PDGF處理(陽性對照物)標準化，以測定各條件下之BTG2基因表現變化程度(亦即，對PDGF誘導之基因表現之抑制)。針對所測試之不同濃度之各組合物測定的相對BTG2基因表現量顯示於圖77中。如表8中所示，針對單獨拮抗劑A及所有共調配樣品測定的抗-PDGF EC₅₀(nM)值在95%信賴區間內相同。未觀測到單獨蘭尼單抗(亦即缺乏拮抗劑A)對PDGF-BB活性之抑制(數據未顯示)。

此等研究表明，拮抗劑A對蘭尼單抗抑制VEGF活性之能力無不利影響且蘭尼單抗對拮抗劑A抑制PDGF-BB活性之能力無不利影響，即使在拮抗劑A與蘭尼單抗之說明性共調配物在4℃下儲存至少12個月之後亦如此。

實例4 儲存條件對包含拮抗劑A及蘭尼單抗之組合物之穩定性的影響

使用不用顯微鏡不可見粒子分析來檢驗各種組合物中之拮抗劑A及蘭尼單抗的穩定性以評估不同儲存溫度及不同儲存容器之影響。藉 由微血流成像(MFI)對拮抗劑A(30mg/mL)、蘭尼單抗(10mg/mL及40mg/mL)及拮抗劑A與蘭尼單抗之各種組合進行不用顯微鏡不可見粒子分析。利用不同儲存條件分析總共五種各別組合物，以評估儲存溫度(5℃及30℃持續4小時)及儲存容器(2cc小瓶及1mL注射器)對各調配物之不用顯微鏡不可見粒子計數的影響。各樣品之MFI結果係以特定粒度範圍呈現(包括總數，2μm、5μm、10μm及25μm)。對於在相同條件下儲存之不同樣品觀測到粒子計數存在一定程度的相對相關性。

材料

研究中使用以下拮抗劑A及蘭尼單抗組合物：

(1)30個含有0.23mL含30mg/mL拮抗劑A之10mM磷酸鈉及150mM氯化鈉(pH 7.3)(組合物F27)的小瓶。

(2)9個含有0.5mL含10mg/mL蘭尼單抗之10mM組胺酸鹽酸鹽、10% α,α-海藻糖及0.01%聚山梨醇酯20(pH 5.5)(組合物F28；Genentech,South San Francisco,CA)的小瓶。

(3)7個含有0.5mL含40mg/mL蘭尼單抗之10mM組胺酸鹽酸鹽、10% α,α-海藻糖及0.01%聚山梨醇酯20(pH 5.5)(組合物F29；Genentech,South San Francisco,CA)的小瓶。

用於製備組合物之容器材料列於表9中。

† 小瓶使用前用Milli-Q水沖洗且乾燥

* 建議與Protein Simple之MFI儀器一起使用

組合物製備

為了製備此研究中所檢驗之組合物，將數小瓶之相同樣品(亦即拮抗劑A或蘭尼單抗)彙集在一起。在此過程中，將30個小瓶之30mg/mL拮抗劑A(每個小瓶0.20mL)彙集至一個5cc玻璃小瓶中，將7個小瓶之10mg/mL蘭尼單抗(每個小瓶0.5mL)彙集至另一個5cc玻璃小瓶中，且將7個小瓶之40mg/mL蘭尼單抗(每個小瓶0.5mL)彙集至第三個5cc玻璃小瓶中。雖然30mg/mL拮抗劑A之小瓶預期含有0.23mL，但彙集時每個小瓶僅回收到約0.2mL。藉由移除各小瓶之帽蓋且經由吸移管以無菌方式轉移內含物來執行彙集。利用彙集物質之各種組合，在潔淨玻璃小瓶中製備另外兩個樣品。表10詳述為此研究所製備之五個樣品各自之內含物。為了確保樣品潔淨度及防止粒子污染，在100級生物安全櫥(Nuaire NU-425-600)中執行所有彙集及樣品製備。

*未獲得足夠體積之F31來填充一個小瓶；因此此調配物僅填充兩個小瓶。

「Ant.A」為拮抗劑A。

在此過程中，用總共兩個1mL注射器及三個2cc玻璃小瓶以0.5 mL填充體積製備各樣品，但F31除外，其係用兩個注射器及兩個小瓶製備。個別地製備各種組合物以便在MFI儀器上進行準確時間點分析。製備之後，各容器裝上塞子，且使樣品經受穩定性研究條件。

儲存條件

各組合物之樣品於小瓶或注射器中在5℃或30℃下儲存4小時，以確定儲存溫度及容器類型對不用顯微鏡不可見粒子含量的影響。填充之後，立即對玻璃小瓶中之樣品進行T=0分析。用於此研究之溫度條件及分析時間點顯示於表11中。

解析分析及數據處理

使用Brightwell Technologies之MFI儀器(型號# DPA-4200)收集尺寸量測結果及不用顯微鏡不可見粒子計數。使用吸移管管尖，經由安裝於分析用流槽頂部的入口直接施加0.5mL各樣品。在此過程中，流槽用0.17mL樣品淨化，因此提供約0.30mL用於粒子評估。

對MFI數據應用減法以減去總粒子計數中所包括之氣泡及非蛋白質粒子數目。在此過程中，自數據中去除黏著粒子、慢移動粒子及高圓度氣泡樣粒子數據，以試圖分離及評估各樣品中之寡核苷酸或蛋白質粒子。在此減法中亦去除邊緣粒子，從而可正確地篩選各粒子之性質。

MFI分析結果係以每個樣品中之粒子計數獲得。藉由將所得粒子計數除以所分析之準確體積(約0.30mL)而將此等數據換算為每毫升樣品中粒子數之單位。每毫升樣品中粒子數之值捨位為最接近的整數。

結果及討論

表12彙總此研究中所分析之五種組合物F27至F31之MFI分析結果。組合物在各儲存條件下之原始與減除MFI數據係以每毫升總粒子計數及粒度2μm、5μm、8μm、10μm及25μm之每毫升粒子計數呈現。在不同溫度及容器條件期間觀測到不同結果。

*未獲得足夠體積之F31來分析此特定條件。

△由於F31之體積小，因此利用最初吸入注射器中之一部分F31來製備此樣品。

T=0時之溫度為室溫。

組合物F27至F31在經受不同儲存條件之後的減除MFI結果分別以柱狀圖顯示於圖79至83中。此等柱狀圖呈現各樣品中各種尺寸範圍(包括1至2μm、2至5μm、5至10μm、10至25μm、25至50μm、50至75μm及75至100μm)內之粒子計數。此等圖亦顯示組合物在經受不同儲存條件後之不同結果。

圖84比較各樣品在不同儲存條件下之減除MFI結果。在此圖中，評估1至2μm、2至5μm、5至10μm、10至25μm、25至50μm及50至 75μm範圍內之粒子計數。在30℃下4小時之後，針對玻璃小瓶中之F31所觀測到之高粒子計數可能係由樣品處置問題引起。然而，無另外的樣品用於再分析。

結論

藉由MFI對拮抗劑A、蘭尼單抗及拮抗劑A與蘭尼單抗之各種組合進行粒子分析。在此研究中，在5℃及30℃下儲存4小時之後，分析2cc玻璃小瓶或1mL注射器中之5種組合物之總共24個不同樣品。各樣品之結果係以特定粒度範圍(包括2μm、5μm、10μm、25μm及總粒子計數)呈現。未觀測到顯著差異；然而，偵測到玻璃小瓶中之F31在30℃下儲存之後出現較高粒子計數。

實例5 合成拮抗劑A

使用流通式反應器設計，在固相倒位脫氧核糖胸苷可控孔徑玻璃(CPG)支撐物上進行拮抗劑A之32聚物寡核苷酸之反覆化學合成。寡核苷酸合成過程包含依如下順序進行的四個化學反應：(a)將經二甲氧基三苯甲基(DMT)保護之核苷或新生寡核苷酸解封(deblocking)(脫除三苯甲基)；(b)使引入的亞磷醯胺(亞醯胺)活化及偶合；(c)使所得亞磷酸三酯氧化為五價磷酸酯鍵聯；及(d)將未能成功偶合的寡核苷酸鏈封端。

以倒位胸苷CPG支撐物(3'-DMT-5'-dT-CPG)開始，重複上述四個步驟，依序列之順序添加亞磷醯胺，直至合成終止於己胺基連接子的所要寡核苷酸。內部六乙二醇間隔子係以與其他亞磷醯胺相同的方式偶合。

此循環中之第一步涉及將新生寡核苷酸鏈之末端羥基上的二甲氧基三苯甲基保護基移除。此如下達成：用二氯乙酸於二氯甲烷中之溶液處理CPG上之經DMT保護之寡核苷酸。此反應產生無保護基之末 端羥基。分裂之DMT基團用二氯乙酸/二氯甲烷(DCA/DCM)溶劑移除。接著用乙腈(ACN)洗滌CPG。

第二步涉及用乙基硫四唑(ETT)活化引入的亞磷醯胺，以產生將與前一步驟產生之末端羥基快速偶合的物質。所得亞磷酸三酯用ACN洗滌，以移除活化劑及未反應之亞磷醯胺。

第三步為新形成之亞磷酸三酯氧化為五價磷酸酯。此如下達成：使亞磷酸三酯與碘及吡啶於水中之混合物反應。未使用的氧化劑用ACN自CPG洗去。

第四步涉及將未能偶合之任何未反應羥基封端。CPG用CAP NMI(含N-甲基咪唑之ACN)與CAP ALA(乙酸酐、2,6-二甲基吡啶、ACN)之混合物處理。此等試劑用ACN自CPG洗去。

重複此四個反應之循環，直至在固相支撐物上組裝得到正確長度及序列之寡核苷酸。最後一個亞磷醯胺(位於寡核苷酸之5'末端之己胺基連接子)以與用於合成之其他亞磷醯胺相同的方式反應；然而，此連接子不封端。

藉由用第三丁胺/氫氧化銨溶液處理含有所合成之粗寡核苷酸的固相支撐物來使寡核苷酸脫除保護基且分裂。使CPG與脫除保護基且分裂之寡核苷酸分離。完全脫除保護基之粗寡核苷酸之純度係藉由分析型陰離子交換層析法測定且符合大於50%之規範。

所得寡核苷酸相對於氯化鈉滲濾以移除胺鹽。

接著，在位於寡核苷酸5'端之第一胺與聚乙二醇化試劑(mPEG₂-NHS酯)之間形成共價鍵。反應係在硼酸鈉緩衝液中，在pH 9下進行。已表明，使用所述聚乙二醇化條件的反應對位於寡核苷酸5'端之己胺基連接子具有位點特異性。

藉由製備性陰離子交換層析法(AX HPLC)，自未結合的PEG試劑、未聚乙二醇化適體及其他副產物純化得到聚乙二醇化寡核苷酸。 藉由分析性AX HPLC分析個別溶離份。將具有聚乙二醇化全長寡核苷酸之所選溶離份彙集且將所得彙集物脫鹽、濃縮且過濾。

所得拮抗劑A經真空冷凍乾燥以降低水含量。

實例6 拮抗劑A及拮抗劑A+阿柏西普共調配物對3T3纖維母細胞中PDGF-BB誘導之BTG2表現的抑制

測定包含拮抗劑A或拮抗劑A與阿柏西普之組合物抑制PDGF-BB活性的能力，以證明拮抗劑A與阿柏西普之共調配對拮抗劑A活性無不利影響。

材料及方法

拮抗劑A之抗-PDGF活性係依據其抑制NIH 3T3細胞中PDGF-BB誘導之PDGF-BB反應性基因(B細胞易位基因2(BTG2))的能力加以測定。

NIH3T3細胞於0.5ml含有杜貝科氏改良之伊格爾氏培養基(Dulbecco's Modified Eagle Medium，DMEM；Gibco)、10%小牛血清(CS)、2mM麩醯胺酸及1%青黴素/鏈黴素的培養基中接種於24孔板上(4×10⁴個細胞/孔)，且在37℃、5% CO₂下生長。24小時之後，細胞在處理之前，在含有1% CS、2mM麩醯胺酸及1%青黴素/鏈黴素之DMEM(饑餓培養基)中經歷血清饑餓9小時。

為了測定拮抗劑A之EC₅₀，細胞用PDGF-BB(陽性對照物)或PDGF-BB與以下組合物之一組合處理：拮抗劑A(組合物F32)；拮抗劑A+阿柏西普(組合物F33)；或拮抗劑A+PBS(組合物F34)。使用濃度為1.65nM之PDGF-BB(人類PDGF-BB；Preprotech,London,UK)。用於製備組合物之拮抗劑A之儲備溶液為含30mg/mL拮抗劑A之10mM磷酸鈉及150mM NaCl(pH 7.3)。市購Eylea®(含40mg/mL阿柏西普之10mM磷酸鈉、40mM氯化鈉、0.03%聚山梨醇酯20及5% 蔗糖(pH 6.2))用作製備組合物F33之儲備溶液。對於組合物F33，在使用之前，將拮抗劑A與阿柏西普以等莫耳濃度培育且在4℃下儲存隔夜。作為組合物F33之對照物，拮抗劑A在4℃下與PBS一起培育隔夜(組合物F34)。對於此等處理，在臨用前製備組合物F32、F33及F34於饑餓培養基中之連續稀釋液。連續稀釋液中之拮抗劑A濃度分別如下：400nM、80nM、16nM、3.2nM及0.64nM。組合物F33之連續稀釋液中之阿柏西普之莫耳濃度與組合物F33之各連續稀釋液中之拮抗劑A之莫耳濃度相同。細胞在37℃、5% CO₂下用單獨PDGF或PDGF與上述濃度之上述連續稀釋液之一之組合處理1小時。其他對照細胞不處理。

處理之後，立即使用RNeasy迷你型離心管柱套組(Qiagen,Germantown,MD)，根據製造商之方案收穫細胞用於分離RNA。所得總RNA依據260nm下之光學密度(O.D.)定量，隨後用脫氧核糖核酸酶I處理，以移除任何污染性基因組DNA。接著使用QuantiTect®逆轉錄套組(Qiagen)，根據製造商之說明書，藉由逆轉錄進行cDNA合成。為了評估缺乏阿柏西普之拮抗劑A(組合物F32及F34)及拮抗劑A+阿柏西普混合物(組合物F33)抑制PDGF-BB活性的能力，使用特異性小鼠TaqMan探針(Applied Biosystems；Foster City,CA)對BTG2基因執行定量即時PCR。小鼠β-肌動蛋白TaqMan基因分析用作內部對照(Applied Biosystems)。

一式三份地執行實驗，且數據以平均值±標準差(SD)表示。使用GraphPad Prism軟體進行統計學及非線性回歸分析。獲自即時PCR實驗之所有數據相對於缺乏拮抗劑A之經PDGF-BB處理之樣品(陽性對照物)標準化，以測定各條件下之BTG2基因表現之相對變化。

結果

拮抗劑A能夠有效地抑制3T3細胞中PDGF-BB誘導之BTG2基因表 現(圖85)。此外，與阿柏西普一起預培育未使拮抗劑A抑制BTG2表現的能力降低(圖86)。針對拮抗劑A所測定之EC₅₀值顯示於表13中。

此等研究表明，拮抗劑A與阿柏西普之共調配物當在4℃下儲存隔夜時能夠維持拮抗劑A之穩定性，如根據其抗-PDGF生物活性所量測。拮抗劑A與阿柏西普之共調配對拮抗劑A之活性無不利影響。

本說明書中所提及或任何申請資料表中所列的所有美國專利、美國專利申請公開案、美國專利申請案、國外專利、國外專利申請案及非專利公開案以全文引用的方式併入本文中。

根據前述內容應瞭解，雖然本文中已出於說明之目的描述本發明之特定實施例，但可在不脫離本發明之精神及範疇下進行各種修改。

<110> 美商奧普多科技公司 理查 艾佛瑞特 拜恩 席安 張

<120> 包含抗-PDGF適體及VEGF拮抗劑之組合物

<130> OPHT-010/02TW 315137-2201

<150> US 61/778,208

<151> 2013-03-12

<150> US 61/654,672

<151> 2012-06-01

<160> 85

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 9

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (6)..(6)

<223> 尿苷經2'-氟取代

<220>

<221> modified_base

<222> (8)..(8)

<223> 胞苷經2'-氟取代

<220>

<221> modified_base

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<223> gm

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<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

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<222> (5)..(5)

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<220>

<221> modified_base

<222> (7)..(7)

<223> gm

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<221> modified_base

<222> (10)..(10)

<223> 尿苷經2'-氟取代

<220>

<221> modified_base

<222> (11)..(11)

<223> 胞苷經2'-氟取代

<220>

<221> modified_base

<222> (12)..(12)

<223> 腺苷經2'-O-甲基取代

<400> 2

<210> 3

<211> 9

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (5)..(6)

<223> 胞苷經2'-氟取代

<220>

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<222> (7)..(7)

<223> 尿苷經2'-氟取代

<220>

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<222> (8)..(8)

<223> gm

<220>

<221> modified_base

<222> (9)..(9)

<223> 倒位胸苷

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<212> DNA

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<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (10)..(32)

<223> 自核苷酸10至32，所有嘌呤(A及G)及

所有嘧啶(C及U)經2'-O-甲基取代

<400> 4

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<212> DNA

<213> 人工

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<223> 合成適體

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<221> modified_base

<222> (10)..(30)

<223> 自核苷酸10至30，所有嘌呤(A及G)及所 有嘧啶(C及U)經2'-O-甲基取代

<400> 5

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<212> DNA

<213> 人工

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<223> 合成適體

<400> 6

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<211> 22

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(22)

<223> 硫代磷酸酯主鏈

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<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(14)

<223> 硫代磷酸酯主鏈

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<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

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<222> (1)..(12)

<223> 硫代磷酸酯主鏈

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<211> 10

<212> DNA

<213> 人工

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<223> 合成適體

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<222> (1)..(10)

<223> 硫代磷酸酯主鏈

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<223> 合成適體

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<222> (1)..(13)

<223> 硫代磷酸酯主鏈

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<210> 12

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<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

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<222> (1)..(24)

<223> 硫代磷酸酯主鏈

<400> 12

<210> 13

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<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(18)

<223> 硫代磷酸酯主鏈

<400> 13

<210> 14

<211> 14

<212> DNA

<213> 人工

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<223> 合成適體

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(14)

<223> 硫代磷酸酯主鏈

<400> 14

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<212> DNA

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<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(11)

<223> 核苷酸1至11之間的硫代磷酸酯主鏈

<220>

<221> misc_feature

<222> (44)..(46)

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<212> DNA

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<223> 合成適體

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<222> (1)..(14)

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<212> DNA

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<223> 合成適體

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<222> (1)..(23)

<223> 核苷酸1至23之間的硫代磷酸酯主鏈

<220>

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<212> DNA

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<223> 合成適體

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<220>

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<212> DNA

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<223> 合成適體

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<220>

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<222> (8)..(14)

<223> 核苷酸8至14之間的硫代磷酸酯主鏈

<220>

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<222> (32)..(35)

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<212> DNA

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<223> 合成適體

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<223> 核苷酸8至14之間的硫代磷酸酯主鏈

<220>

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<222> (32)..(35)

<223> 核苷酸32至35之間的硫代磷酸酯主鏈

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<210> 21

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<223> 合成適體

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<223> 核苷酸1至4之間的硫代磷酸酯主鏈

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<223> 核苷酸8至13之間的硫代磷酸酯主鏈

<220>

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<222> (31)..(34)

<223> 核苷酸31至34之間的硫代磷酸酯主鏈

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<212> DNA

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<223> 合成適體

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<220>

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<223> 核苷酸1至4之間的硫代磷酸酯主鏈

<220>

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<222> (32)..(35)

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<223> 合成適體

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<223> 合成適體

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<223> 核苷酸1至4之間的硫代磷酸酯主鏈

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<223> 合成適體

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<222> (1)..(4)

<223> 核苷酸1至4之間的硫代磷酸酯主鏈

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<223> 核苷酸1至4之間的硫代磷酸酯主鏈

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<212> DNA

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<223> 合成適體

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<222> (1)..(4)

<223> 核苷酸1至4之間的硫代磷酸酯主鏈

<220>

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<222> (33)..(36)

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<212> DNA

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<223> 合成適體

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<222> (33)..(36)

<223> 核苷酸33至36之間的硫代磷酸酯主鏈

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<212> DNA

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<223> 合成適體

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<212> DNA

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<223> 合成適體

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<223> gm

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<223> gm

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<221> modified_base

<222> (12)..(12)

<223> 腺苷經2'-O-甲基取代

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<223> 合成適體

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<223> gm

<400> 33

<210> 34

<211> 9

<212> DNA

<213> 人工

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<223> 合成適體

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<223> um

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<223> cm

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<223> gm

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<212> DNA

<213> 人工

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<223> 合成適體

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<223> gm

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<222> (7)..(7)

<223> gm

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<222> (11)..(11)

<223> cm

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<221> modified_base

<222> (12)..(12)

<223> 腺苷經2'-O-甲基取代

<400> 35

<210> 36

<211> 8

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (5)..(6)

<223> cm

<220>

<221> modified_base

<222> (7)..(7)

<223> um

<220>

<221> modified_base

<222> (8)..(8)

<223> gm

<400> 36

<210> 37

<211> 9

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<400> 37

<210> 38

<211> 12

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<400> 38

<210> 39

<211> 8

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<400> 39

<210> 40

<211> 9

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(9)

<223> 所有嘌呤(A及G)及所有嘧啶(C及U)經2'-O-甲基取代

<400> 40

<210> 41

<211> 12

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(12)

<223> 所有嘌呤(A及G)及所有嘧啶(G及U)經2'-O-甲基取代

<400> 41

<210> 42

<211> 8

<212> RNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(8)

<223> 所有嘌呤(A及G)及所有嘧啶(C及U)經2'-O-甲基取代

<400> 42

<210> 43

<211> 10

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<400> 43

<210> 44

<211> 9

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<400> 44

<210> 45

<211> 11

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<400> 45

<210> 46

<211> 10

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<400> 46

<210> 47

<211> 9

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(1)

<223> cm

<220>

<221> modified_base

<222> (2)..(2)

<223> 腺苷經2'-O-甲基取代

<220>

<221> modified_base

<222> (3)..(4)

<223> gm

<400> 47

<210> 48

<211> 9

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (5)..(6)

<223> cm

<220>

<221> modified_base

<222> (7)..(7)

<223> um

<220>

<221> modified_base

<222> (8)..(8)

<223> gm

<220>

<221> modified_base

<222> (9)..(9)

<223> um

<400> 48

<210> 49

<211> 10

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (5)..(6)

<223> cm

<220>

<221> modified_base

<222> (7)..(7)

<223> um

<220>

<221> modified_base

<222> (8)..(8)

<223> gm

<220>

<221> modified_base

<222> (9)..(9)

<223> um

<220>

<221> modified_base

<222> (10)..(10)

<223> gm

<400> 49

<210> 50

<211> 9

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (8)..(8)

<223> cm

<220>

<221> modified_base

<222> (9)..(9)

<223> gm

<400> 50

<210> 51

<211> 9

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (6)..(6)

<223> um

<220>

<221> modified_base

<222> (9)..(9)

<223> gm

<400> 51

<210> 52

<211> 12

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (5)..(5)

<223> gm

<220>

<221> modified_base

<222> (7)..(7)

<223> gm

<220>

<221> modified_base

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> modified_base

<222> (12)..(12)

<223> 2'-O-甲基腺苷

<400> 52

<210> 53

<211> 12

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (5)..(5)

<223> gm

<220>

<221> modified_base

<222> (7)..(7)

<223> gm

<220>

<221> modified_base

<222> (10)..(10)

<223> um

<220>

<221> modified_base

<222> (12)..(12)

<223> 2'-O-甲基腺苷

<400> 53

<210> 54

<211> 9

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (5)..(5)

<223> cm

<220>

<221> modified_base

<222> (6)..(6)

<223> um

<220>

<221> modified_base

<222> (8)..(8)

<223> cm

<400> 54

<210> 55

<211> 12

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(1)

<223> cm

<220>

<221> modified_base

<222> (3)..(3)

<223> um

<220>

<221> modified_base

<222> (8)..(8)

<223> cm

<220>

<221> modified_base

<222> (10)..(10)

<223> um

<220>

<221> modified_base

<222> (11)..(11)

<223> cm

<400> 55

<210> 56

<211> 8

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(1)

<223> um

<220>

<221> modified_base

<222> (4)..(4)

<223> um

<220>

<221> modified_base

<222> (5)..(6)

<223> cm

<220>

<221> modified_base

<222> (7)..(7)

<223> um

<400> 56

<210> 57

<211> 8

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> modified_base

<222> (7)..(7)

<223> um

<220>

<221> modified_base

<222> (8)..(8)

<223> gm

<400> 57

<210> 58

<211> 11

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (11)..(11)

<223> gm

<400> 58

<210> 59

<211> 10

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<400> 59

<210> 60

<211> 10

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> modified_base

<222> (7)..(7)

<223> um

<220>

<221> modified_base

<222> (8)..(8)

<223> gm

<220>

<221> modified_base

<222> (9)..(9)

<223> um

<220>

<221> modified_base

<222> (10)..(10)

<223> gm

<400> 60

<210> 61

<211> 11

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (8)..(8)

<223> um

<220>

<221> modified_base

<222> (10)..(10)

<223> cm

<220>

<221> modified_base

<222> (11)..(11)

<223> gm

<400> 61

<210> 62

<211> 8

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (5)..(5)

<223> cm

<220>

<221> modified_base

<222> (7)..(7)

<223> um

<220>

<221> modified_base

<222> (8)..(8)

<223> gm

<400> 62

<210> 63

<211> 8

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (5)..(6)

<223> cm

<220>

<221> modified_base

<222> (8)..(8)

<223> gm

<400> 63

<210> 64

<211> 11

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (11)..(11)

<223> gm

<400> 64

<210> 65

<211> 10

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (5)..(5)

<223> cm

<220>

<221> modified_base

<222> (8)..(10)

<223> gm

<400> 65

<210> 66

<211> 10

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (8)..(10)

<223> gm

<400> 66

<210> 67

<211> 10

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<400> 67

<210> 68

<211> 10

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (5)..(5)

<223> cm

<400> 68

<210> 69

<211> 10

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成

<400> 69

<210> 70

<211> 87

<212> RNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(87)

<223> 所有嘧啶(C及U)經2'-氟取代

<400> 70

<210> 71

<211> 88

<212> RNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(88)

<223> 所有嘧啶(C及U)經2'-氟取代

<400> 71

<210> 72

<211> 88

<212> RNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(88)

<223> 所有嘧啶(C及U)經2'-氟取代

<400> 72

<210> 73

<211> 88

<212> RNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(88)

<223> 所有嘧啶(C及U)經2'-氟取代

<400> 73

<210> 74

<211> 88

<212> RNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成適體

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(88)

<223> 所有嘧啶(C及U)經2'-氟取代

<400> 74

<210> 75

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗-PDGF適體

<220>

<221> modified_base

<222> (30)..(30)

<223> 倒位胸苷核苷酸在核糖之3'位置連接至寡核苷酸之3'端

<400> 75

<210> 76

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化抗-VEGF抗體重鏈可變域

<220>

<221> VARIANT

<222> (28)..(28)

<223> Xaa=Thr或Asp

<220>

<221> VARIANT

<222> (31)..(31)

<223> Xaa=Asn或His

<220>

<221> VARIANT

<222> (101)..(101)

<223> Xaa=Tyr或His

<220>

<221> VARIANT

<222> (105)..(105)

<223> Xaa=Ser或Thr

<400> 76

<210> 77

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化抗-VEGF抗體重鏈可變域

<400> 77

<210> 78

<211> 11

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 78

<210> 79

<211> 7

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 79

<210> 80

<211> 9

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 80

<210> 81

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化抗-VEGF抗體輕鏈可變域

<220>

<221> VARIANT

<222> (4)..(4)

<223> Xaa=Met或Leu

<400> 81

<210> 82

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化抗-VEGF抗體輕鏈可變域

<400> 82

<210> 83

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDRH1之變異高變區

<400> 83

<210> 84

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDRH3之變異高變區

<400> 84

<210> 85

<211> 458

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VEGF-Trap-包含兩種融合多肽的二聚融合多肽

<400> 85

Claims (49)

1. 一種組合物，包含有效量之：(a)約0.3mg/mL至約30mg/mL拮抗劑A或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約0.5mg/mL至約20mg/mL蘭尼單抗(ranibizumab)或其醫藥學上可接受之鹽；及以下一或兩者：(c)緩衝液，其能夠使該組合物之pH值達成或維持在約pH 5.0至約pH 8.0；及(d)張力調節劑。
2. 如請求項1之組合物，其中該緩衝液為約1mM至約20mM L-組胺酸或約1mM至約20mM磷酸鈉；且該張力調節劑為約10mM至約200mM NaCl、約1%至約20%(w/v)山梨糖醇，或約1%至約20%(w/v)海藻糖。
3. 如請求項2之組合物，其中該緩衝液為約1mM至約20mM L-組胺酸；且該張力調節劑為約10mM至約200mM NaCl。
4. 如請求項1至3中任一項之組合物，其進一步包含：(e)約0.001%(w/v)至約0.05%(w/v)界面活性劑。
5. 如請求項2之組合物，其中該組合物包含：(a)約3mg/mL拮抗劑A或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約5mg/mL蘭尼單抗或其醫藥學上可接受之鹽；(c)約10mM L-組胺酸；及(d)約130mM NaCl，其中該組合物之pH值為約pH 6.0。
6. 如請求項5之組合物，其進一步包含： (e)約0.01%(w/v)聚山梨醇酯20。
7. 如請求項2之組合物，其中該組合物包含：(a)約3mg/mL拮抗劑A或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約5mg/mL蘭尼單抗或其醫藥學上可接受之鹽；(c)約10mM磷酸鈉；及(d)約5%(w/v)山梨糖醇，其中該組合物之pH值為約pH 7.0。
8. 如請求項7之組合物，其進一步包含：(e)約0.01%(w/v)聚山梨醇酯20。
9. 如請求項2之組合物，其中該組合物包含：(a)約3mg/mL拮抗劑A或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約5mg/mL蘭尼單抗或其醫藥學上可接受之鹽；(c)約10mM磷酸鈉；及(d)約130mM NaCl，其中該組合物之pH值為約pH 7.0。
10. 如請求項9之組合物，其進一步包含：(e)約0.01%(w/v)聚山梨醇酯20。
11. 如請求項2之組合物，其中該組合物包含：(a)約3mg/mL拮抗劑A或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約5mg/mL蘭尼單抗或其醫藥學上可接受之鹽；(c)約5mM磷酸鈉；(d)約5mM組胺酸鹽酸鹽；(e)約75mM NaCl；及(f)約5%(w/v)海藻糖，其中該組合物之pH值為約pH 6.5。
12. 如請求項11之組合物，其進一步包含： (g)約0.005%(w/v)聚山梨醇酯20。
13. 一種組合物，其包含有效量之：(a)約0.3mg/mL至約30mg/mL拮抗劑A或其醫藥學上可接受之鹽；及(b)約0.5mg/mL至約25mg/mL貝伐單抗(bevacizumab)或其醫藥學上可接受之鹽；及以下一或兩者：(c)緩衝液，其能夠使該組合物之pH值達成或維持在約pH 5.0至約pH 8.0；及(d)張力調節劑。
14. 如請求項13之組合物，其中該緩衝液為約5mM至約200mM磷酸鈉或約5mM至約200mM Tris.HCl；及該張力調節劑為約10mM至約200mM NaCl、約1%至約20%(w/v)山梨糖醇，或約1%至約20%(w/v)海藻糖。
15. 如請求項14之組合物，其中該緩衝液為約5mM至約200mM磷酸鈉；且該張力劑為約10mM至約200mM NaCl，其中該組合物之pH值為約pH 5.0至約pH 7.0。
16. 如請求項13至15中任一項之組合物，其進一步包含：(e)約0.001%(w/v)至約0.05%(w/v)界面活性劑。
17. 如請求項14之組合物，其中該組合物包含：(a)約3mg/mL拮抗劑A或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約12.5mg/mL貝伐單抗或其醫藥學上可接受之鹽；(c)約50mM磷酸鈉；及(d)約130mM NaCl，其中該組合物之pH值為約pH 6.0。
18. 如請求項17之組合物，其進一步包含： (e)約0.02%(w/v)聚山梨醇酯20。
19. 如請求項14之組合物，其中該組合物包含：(a)約3mg/mL拮抗劑A或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約12.5mg/mL貝伐單抗或其醫藥學上可接受之鹽；(c)約50mM磷酸鈉；及(d)約5%(w/v)山梨糖醇，其中該組合物之pH值為約pH 6.0。
20. 如請求項19之組合物，其進一步包含：(e)約0.02%(w/v)聚山梨醇酯20。
21. 如請求項14之組合物，其中該組合物包含：(a)約3mg/mL拮抗劑A或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約12.5mg/mL貝伐單抗或其醫藥學上可接受之鹽；(c)約50mM磷酸鈉；及(d)約5%(w/v)山梨糖醇，其中該組合物之pH值為約pH 7.0。
22. 如請求項21之組合物，其進一步包含：e)約0.02%(w/v)聚山梨醇酯20。
23. 如請求項14之組合物，其中該組合物包含：(a)約3mg/mL拮抗劑A或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約12.5mg/mL貝伐單抗或其醫藥學上可接受之鹽；(c)約50mM磷酸鈉；及(d)約150mM NaCl，其中該組合物之pH值為約pH 7.0。
24. 如請求項23之組合物，其進一步包含：(e)約0.02%(w/v)聚山梨醇酯20。
25. 如請求項14之組合物，其中該組合物包含： (a)約3mg/mL拮抗劑A或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約12.5mg/mL貝伐單抗或其醫藥學上可接受之鹽；(c)約50mM Tris.HCl；及(d)約130mM NaCl，其中該組合物之pH值為約pH 8.0。
26. 如請求項25之組合物，其進一步包含：(e)約0.02%(w/v)聚山梨醇酯20。
27. 如請求項14之組合物，其中該組合物包含：(a)約15mg/mL拮抗劑A或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約12.5mg/mL貝伐單抗或其醫藥學上可接受之鹽；(c)約30mM磷酸鈉；(d)約75mM NaCl；及(e)約3%(w/v)海藻糖，其中該組合物之pH值為約pH 6.3。
28. 如請求項27之組合物，其進一步包含：(f)約0.02%(w/v)聚山梨醇酯20。
29. 如請求項14之組合物，其中該組合物包含：(a)約3mg/mL拮抗劑A或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約12.5mg/mL貝伐單抗或其醫藥學上可接受之鹽；(c)約30mM磷酸鈉；(d)約75mM NaCl；及(e)約3%(w/v)海藻糖，其中該組合物之pH值為約pH 6.3。
30. 如請求項29之組合物，其進一步包含：(f)約0.02%(w/v)聚山梨醇酯20。
31. 一種組合物，其包含有效量之： (a)約0.3mg/mL至約30mg/mL拮抗劑A或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約5mg/mL至約40mg/mL阿柏西普(aflibercept)或其醫藥學上可接受之鹽；及以下一或多者：(c)緩衝液，其能夠使該組合物之pH值達成或維持在約pH 5.0至約pH 8.0；(d)張力調節劑；及(e)0至約10%(w/v)蔗糖。
32. 如請求項31之組合物，其中該緩衝液為約5mM至約50mM磷酸鹽；且該張力調節劑為約10mM至約200mM NaCl。
33. 如請求項32之組合物，其中該組合物包含：(a)約0.3mg/mL至約30mg/mL拮抗劑A或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約5mg/mL至約40mg/mL阿柏西普或其醫藥學上可接受之鹽；(c)約5mM至約50mM磷酸鹽；(d)約10mM至約200mM NaCl；及(e)0至約10%(w/v)蔗糖，其中該組合物之pH值為約pH 6.0至約pH 8.0。
34. 如請求項31至33中任一項之組合物，其進一步包含：(f)約0.001%(w/v)至約0.05%(w/v)界面活性劑。
35. 如請求項32之組合物，其中該組合物包含：(a)約6mg/mL拮抗劑A或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約40mg/mL阿柏西普或其醫藥學上可接受之鹽；(c)約10mM磷酸鹽； (d)約40mM NaCl；及(e)約5%(w/v)蔗糖，其中該組合物之pH值為約pH 6.2。
36. 如請求項35之組合物，其進一步包含：(f)約0.03%(w/v)聚山梨醇酯20。
37. 一種組合物，其包含有效量之：(a)約3mg/mL至約90mg/mL拮抗劑A或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約1.0mg/mL至約30mg/mL蘭尼單抗或其醫藥學上可接受之鹽；及以下一或兩者：(c)緩衝液，其能夠使該組合物之pH值達成或維持在約pH 5.0至約pH 8.0；及(d)張力調節劑。
38. 如請求項37之組合物，其中該緩衝液包含約1mM至約100mM磷酸鈉或約1.0mM至約10mM組胺酸鹽酸鹽；且該張力調節劑為約0.5%(w/v)至約10%(w/v)海藻糖。
39. 如請求項38之組合物，其中該組合物包含：(a)約15mg/mL拮抗劑A或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約5mg/mL蘭尼單抗或其醫藥學上可接受之鹽；(c)約5mM磷酸鹽；(d)約75mM NaCl；(e)約5mM組胺酸鹽酸鹽；及(f)約5%(w/v)海藻糖。
40. 如請求項39之組合物，其進一步包含：(g)約0.005%(w/v)聚山梨醇酯20。
41. 如請求項38之組合物，其中該組合物包含： (a)約24mg/mL拮抗劑A或其醫藥學上可接受之鹽；(b)約8mg/mL蘭尼單抗或其醫藥學上可接受之鹽；(c)約8mM磷酸鹽；(d)約120mM NaCl；(e)約2mM組胺酸鹽酸鹽；及(f)約2%(w/v)海藻糖。
42. 如請求項41之組合物，其進一步包含：(g)約0.002%(w/v)聚山梨醇酯20。
43. 一種如請求項1、13、31及37中任一項之組合物的用途，其係用於製造供治療或預防哺乳動物之眼科疾病用的藥劑。
44. 如請求項43之用途，其中該眼科疾病為年齡相關性黃斑部變性、息肉狀脈絡膜血管病變、脈絡膜新血管生成相關病狀、高血壓性視網膜病變、糖尿病性視網膜病變、鐮狀細胞性視網膜病變、周邊視網膜新血管生成相關病狀、早產兒視網膜病變、靜脈阻塞性疾病、動脈阻塞性疾病、中心性漿液性脈絡膜視網膜病變、囊樣黃斑部水腫、視網膜毛細血管擴張症、大動脈瘤、視網膜血管瘤病、輻射誘導性視網膜病變、虹膜紅變(rubeosis iridis)或贅生物。
45. 如請求項43之用途，其中該眼科疾病為濕性年齡相關性黃斑部變性或乾性年齡相關性黃斑部變性。
46. 如請求項43之用途，其中該組合物係存在於藥物遞送裝置中。
47. 如請求項43至46中任一項之用途，其中該藥劑係用於眼內投與。
48. 如請求項47之用途，其中該眼內投與為玻璃體內投與或前房投與。
49. 如請求項43至46中任一項之用途，其中該哺乳動物為人類。