RU2448158C1 - Способ получения препарата фортелизин, обладающего фибринолитическими свойствами, и его применение для лечения инфаркта миокарда - Google Patents
Способ получения препарата фортелизин, обладающего фибринолитическими свойствами, и его применение для лечения инфаркта миокарда Download PDFInfo
- Publication number
- RU2448158C1 RU2448158C1 RU2011111094/10A RU2011111094A RU2448158C1 RU 2448158 C1 RU2448158 C1 RU 2448158C1 RU 2011111094/10 A RU2011111094/10 A RU 2011111094/10A RU 2011111094 A RU2011111094 A RU 2011111094A RU 2448158 C1 RU2448158 C1 RU 2448158C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- substance
- solution
- sodium chloride
- column
- preparation
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии и фармакологии, в частности к способу получения препарата Фортелизин, обладающего фибринолитическими свойствами, и его применению для лечения инфаркта миокарда. Размораживают супернатант, содержащий рекомбинантный белок с аминокислотной последовательностью стафилокиназы (РБСФ). Выделяют и хроматографически очищают РБСФ на СМ-сефарозе. Производят хроматографическую очистку РБСФ на DEAE-сефарозе. Затем переводят РБСФ в раствор 0,3% NaCl. Осуществляют стерилизацию, фасовку, лиофильную сушку и маркировку субстанции. В реактор с мешалкой, рабочим объемом 160 л, вносят 20 литров воды для инъекций, затем 150 г субстанции и воду для инъекций в количестве 10 л, включают мешалку реактора (скорость мешалки 80 об/мин), перемешивание продолжают в течение 15 мин, после чего мешалку реактора выключают, отбирают пробу, фиксируют рН полученного раствора, рН от 5,5 до 7,5. Осуществляют стерилизующую фильтрацию раствора, наполнение и предварительную укупорку флаконов. Затем осуществляют лиофильную сушку препарата и окончательную укупорку. Предлагается применение препарата Фортелизин для лечения инфаркта миокарда путем введения внутривенно в дозе 15 мг (2235000 ME), при этом содержимое флакона 5 мг (745000 ME) перед введением препарата разводят в 5 мл раствора натрия хлорида 0,9%, введение осуществляют двумя болюсами 10 мг (1490000 ME) одномоментно и через 30 минут 5 мг (745000 ME) или сначала 10 мг (1490000 ME) болюсно, а оставшиеся 5 мг (745000 ME) внутривенно инфузионно в 50 мл раствора натрия хлорида 0,9% в течение 30 мин. Изобретение расширяет арсенал лекарственных средств с фибринолитическими свойствами. 3 н.п. ф-лы.
Description
Изобретение относится к области биотехнологии, микробиологии и фармацевтической промышленности. Конкретно, изобретение относится к лекарственному препарату Фортелизин, обладающему фибринолитическими свойствами и получаемому из субстанции Фортеплазе, содержащей рекомбинантный белок с аминокислотной последовательностью стафилокиназы.
Сырьем для получения субстанции Фортеплазе является супернатант рекомбинантного белка с аминокислотной последовательностью стафилокиназы (РБСФ), полученный при культивировании штамма Escherichia coli MZ09, регистрационный номер В-10417 ВКПМ. Супернатант получают центрифугированием культуральной жидкости, затем его хранят в замороженном состоянии.
Рекомбинантный белок, содержащий аминокислотную последовательность стафилокиназы, состоит из 138 аминокислот (последовательность белка представлена SEQ ID NO:1). Эмпирическая формула - C711H1372N168O350S1. Молекулярная масса 15,5 кДа.
Стафилокиназа, не являясь ферментом, активирует плазминоген с образованием стехиометрического комплекса в соотношении 1:1. При этом фортелизин реагирует только с плазминогеном, связанным с частично деградированным фибрином, находящимся в области тромба (т.н. γ-плазминоген), и не взаимодействует с плазминогеном в системном кровотоке, что обусловливает его фибринселективность. Образовавшийся комплекс фортелизин-плазминоген осуществляет превращение плазминогена в плазмин, который лизирует (растворяет) фибриновые сгустки в тромбе.
Фибринселективность препарата обусловлена также и высокой скоростью нейтрализации его комплекса с плазмином в плазме крови по сравнению с тромбом. В связи с этим, фибринолитический эффект препарата не сопровождается снижением фибриногена крови.
При применении препарата Фортелизин не образуются нейтрализующие антистафилокиназные антитела в связи с проведенными заменами аминокислот в иммунодоминантном эпитопе нативной стафилокиназы. В редких случаях может наблюдаться транзиторное образование антител к препарату Фортелизин (в низких титрах).
Лекарственный препарат Фортелизин представляет собой лиофилизированный порошок для приготовления стерильного раствора для внутривенного введения, 5 мг (750000 ME), показаниями к применению препарата служит острый инфаркт миокарда (в первые 6 часов от момента развития) в качестве фибринолитического средства у больных с инфарктом миокарда с подъемом сегмента ST согласно действующим Российским рекомендациям.
Отличить его можно по следующим признакам:
1. Образует зоны лизиса в фибриновом геле вследствие активации плазминогена.
2. При электрофорезе в полиакриламидном геле на электрофореграмме присутствует одна окрашенная полоса рекомбинантного белка с аминокислотной последовательностью стафилокиназы, соответствующей молекулярной массе 15,5 кДа.
3. Легко растворим в 0,9% растворе натрия хлорида. Время растворения содержимого 1 флакона (10 мг) менее 60 сек.
4. Значение рН для восстановленного раствора должно быть от 5,5 до 7.5.
5. Содержание воды не более 10%.
Получение субстанции Фортеплазе
Воду очищенную приготавливают на установке обратного осмоса AquaHard RQ 2500 (или аналогичной) и проводят деконтаминацию воды УФ-облучением.
Используемую посуду тщательно моют. Стеклянную бактериологическую посуду закрывают фольгой или пергаментной бумагой и стерилизуют сухим жаром в сушильно-стерилизационном шкафу при температуре 170-180°С в течение 2-2,5 часов.
Буферные растворы готовят в пластиковых емкостях с мешалкой следующим образом.
Приготовление уравновешивающего буферного раствора 0,02 М аммоний ацетата, рН 6,0 (УБ-1)
На весах отвешивают 0,0385±0,001 кг аммония ацетата. В промытую пластиковую тарированную емкость заливают 25 литров воды очищенной и при постоянном перемешивании засыпают навеску аммония ацетата. Перемешивают до полного растворения навески. Берут пробу и определяют рН. Требуемое значение рН 6,0±0,002. Добавлением уксусной кислоты доводят величину рН до требуемого значения. Очищенной водой доводят объем до 30 литров, и еще раз тщательно перемешав буферный раствор, контролируют величину рН.
Приготовление элюирующего буферного раствора 0,02 М аммоний ацетата, 0,4 М натрия хлористого, рН 6,0 (ЭБ-1)
На весах отвешивают 0,0385±0,001 кг аммония ацетата и 0,7±0,001 кг натрия хлористого.
В промытую пластиковую тарированную емкость заливают 25 литров воды очищенной и при постоянном перемешивании засыпают навеску аммония ацетата и натрия хлористого. Перемешивают до полного растворения навесок. Берут пробу и определяют рН. Требуемое значение рН 6,0±0,2. Добавлением уксусной кислоты доводят величину рН до требуемого значения. Очищенной водой доводят объем до 30 литров, и еще раз тщательно перемешав раствор, контролируют величину рН.
Приготовление уравновешивающего буферного раствора 0,01 М Трис, 0,0002 М ЭДТА, рН 8,0 (УБ-2)
На аналитических весах отвешивают 0,0605=0,0001 кг Трис и 0,00029±0,00001 кг двунатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА).
В промытую пластиковую тарированную емкость заливают 48 литров воды очищенной и при постоянном перемешивании засыпают навеску Трис и ЭДТА. Перемешивают до полного растворения навесок. Берут пробу и определяют рН. Требуемое значение рН 8,0±0,2. Добавлением уксусной кислоты доводят величину рН до требуемого значения. Очищенной водой доводят объем до 50 литров, и еще раз тщательно перемешав раствор, контролируют величину рН.
Приготовление элюирующего буферного раствора 0,01 М Трис, 0,0002 М ЭДТА, 1 М натрий хлористый, рН 8,0 (ЭБ-2)
На аналитических весах отвешивают 0,0605±0,0001 кг Трис и 0,00029±0,00001 кг двунатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА). На технических весах отвешивают 2,925±0,001 кг натрия хлористого.
В промытую пластиковую тарированную емкость заливают 48 литров воды очищенной и при постоянном перемешивании засыпают навески Трис, натрия хлористого и ЭДТА. Перемешивают до полного растворения навесок. Берут пробу и определяют рН. Требуемое значение рН 8,0±0,2. Добавлением уксусной кислоты доводят величину рН до требуемого значения. Очищенной водой доводят объем до 50 литров, и еще раз тщательно перемешав раствор, контролируют величину рН.
Замороженный супернатант РБСФ не менее чем за 12 часов до начала хроматографической очистки на СМ-сефарозе извлекают из морозильника и оставляют в хранилище при комнатной температуре для размораживания. Затем проводят хроматографическую очистку и выделение РБСФ из супернатанта.
Все технологические операции по очистке РБСФ с использованием колонок выполняют на хроматографическом препаративном комплексе «Axioma» низкого давления (или аналогичном).
Хроматографическую очистку РБСФ осуществляют последовательно в 2 этапа - хроматографическая очистка на СМ-сефарозе и хроматографическая очистка на DEAE-сефарозе,
Хроматографическая очистка на СМ-сефарозе
Для проведения работы используют препаративную стеклянную колонку «Axioma» ПСК-146-500 (или аналогичную), в которую загружают 5 л сорбента СМ-сефарозы.
В реактор объемом 60 л со сливным краном, расположенным снизу, загружают 5 л сорбента, заливают его десятикратным объемом очищенной воды и перемешивают (5±1) мин. Через (30±5) мин после остановки мешалки жидкость над осадком декантируют перистальтическим насосом. Операцию повторяют 2 раза.
В реактор с промытым сорбентом заливают 45 л очищенной воды, добавляют 5 л раствора УБ-1. Суспензию сорбента в УБ-1 при постоянном перемешивании подают через перистальтический насос на колонку. Заполнение колонки проводят в соответствии с инструкцией «Подготовка колонки с СМ-сефарозой к работе».
Хроматографическая очистка
Для хроматографической очистки используют препаративный хроматографический комплекс «Axioma». Принцип работы комплекса изложен в инструкции по эксплуатации прибора.
При помощи гибких шлангов формируют линию подачи растворов на колонку через хроматографический модуль.
При этом:
- шланг от клапана коллектора фракций «F1» опускают в воронку самотечной производственной канализации;
- для сбора материала используют клапаны коллектора фракций, соединив их шлангом с емкостями для сбора фракций;
- подсоединяют к клапанам ввода хроматографа три шланга, два из них на линейке клапанов А, один на линейке В. Клапаны распределительного коллектора соединяют шлангами с емкостями с буферами. Клапан для подачи раствора супернатанта РБСФ соединяют шлангом с емкостью с супернатантом РБСФ. Выход из хроматографического модуля соединительным шлангом подсоединяют к верхнему адаптеру колонки, а нижний адаптер колонки соединяется с клапаном на линейке В.
Запускают программу. В начале процесса клапаны должны быть открыты так, чтобы на колонку подавался уравновешивающий буфер УБ-1 по шлангу. Включают насос со скоростью подачи жидкости (0,9±0,1) л/мин. После уравновешивания колонки (35±5) л буфера на нее подают 20 л супернатанта РБСФ, переключая соответствующий клапан хроматографа.
Далее колонку с сорбентом промывают буферным раствором до падения оптической плотности при 280 нм до (0,2±0,05) оптических единиц (ОЕ).
Устанавливают автоматический режим управления процессом, выбрав в меню кнопку «AUTO». В открывшемся окне набирают номер цикла (протокола). Выставляют необходимые пределы измерения, программируют заданный градиент. Сорбированный материал снимают градиентом натрия хлористого (от 0 до 0,4 М) в том же буфере ЭБ-1, подающимся через клапан из реактора со скоростью 0,4 л/мин. Сбор фракций происходит автоматически.
Из каждой фракции (емкости) отбирают пробы и проводят контроль методом ПААГ-электрофореза с додецилсульфатом натрия.
Фракции, содержащие по результатам электрофореза РБСФ, объединяют, отбирают (2,5±0,01) мл пробы в пробирку и проводят спектрофотометрический контроль.
Показатели раствора РБСФ должны удовлетворять следующим требованиям:
- оптическая плотность при длине волны λ=280 нм (l=1 см) - не менее 1,0 оптической единицы;
- отношение OD280/OD254 - не менее 2,0.
Фракции объединяют и емкость с раствором передают на дальнейшую переработку.
Регенерация СМ-сефарозы
После каждого цикла очистки проводят регенерацию колонки с использованием 0,1 М гидроокиси натрия.
Один из распределительных клапанов хроматографического модуля подсоединяют к емкости со щелочью. Пропускают через колонну 15 л раствора щелочи, затем проводят отмывку очищенной водой до достижения значений рН (7,5±0,5) единиц.
Хроматографическая очистка РБСФ на DEAE-сефарозе
Подготовка сорбента
В тарированную емкость загружают 3 л сорбента, заливают его десятикратным объемом очищенной воды и перемешивают (5±1) мин. Через (30±5) мин жидкость над осадком декантируют перистальтическим насосом. Операцию повторяют 2 раза.
В емкость с промытым сорбентом заливают 10 л очищенной воды, добавляют 5 л раствора УБ-2. Суспензию сорбента в УБ-2 при постоянном перемешивании подают через перистальтический насос на колонку ПСК-100-500. Заполнение колонки проводят в соответствии с инструкцией.
Хроматографическая очистка
При помощи гибких шлангов соединяют верхний и нижний адаптеры колонки соответственно с входным и выходным клапанами хроматографического комплекса в соответствии с инструкцией по работе.
Запускают программу по ручному управлению работой хроматографа. В начале процесса клапаны должны быть открыты так, чтобы на колонку подавался уравновешивающий буфер (УБ-2). Включают насос и со скоростью подачи 0,4±0,005 л/мин начинают подачу УБ-2 на колонку. После уравновешивания колонки пропусканием через нее 6±1 л буфера УБ-2 переключают клапан и на колонку с DEAE-сефарозой подают раствор РБСФ.
Далее колонку с DEAE-сефарозой промывают буферным раствором (УБ-2) до падения оптической плотности при 280 нм до (0,2±0,05) оптических единиц.
Отработанные буферные растворы после выхода из хроматографического комплекса направляют в контейнер для отходов.
Затем переключают хроматографический комплекс на автоматический режим управления процессом. В открывшемся окне набирают номер протокола. Выставляют необходимые пределы измерения оптической плотности, рН и проводимости. Программируют градиент и время работы хроматографического комплекса.
Сорбированный на колонке РБСФ элюируют градиентом натрия хлористого (от 0 до 1 М) в том же буфере (УБ-2), подающемся на колонку со скоростью 0,2 л/мин. Сбор фракций происходит в автоматическом режиме. Согласно заданной программе происходит переключение клапанов коллектора.
Из каждой фракции (емкости) отбирают пробы и передают в производственную лабораторию для контроля чистоты РБСФ во фракциях методом электрофореза в ПААГ с додецилсульфатом натрия.
Фракции, пригодные для дальнейшей работы, должны содержать по результатам электрофореза чистый РБСФ (наличие одной окрашенной полосы белка, соответствующей молекулярной массе 15,5 кДа).
Содержание белка (Сб) рассчитывают по формуле:
где OD280 - оптическая плотность анализируемого образца при длине волны 280 нм;
1,1 - коэффициент поглощения (соответствует оптической плотности раствора с концентрацией белка 1 мг в 1 мл при толщине слоя, равной 1 см, при длине волны 280 нм, мл (мг × см);
n - разбавление фракции раствора РБСФ в кювете;
В - толщина слоя, см (= для кюветы с толщиной оптического слоя 1 см).
Фракции чистого РБСФ с концентрацией не менее (0,5±0,01) мг/мл объединяют, перемешивают, отбирают (2,0±0,1) мл объединенной фракции и передают в контрольную лабораторию.
Показатели объединенной фракции должны удовлетворять следующим характеристикам:
- OD280 (l=1 см) - не менее 3 оптических единиц;
- отсутствие посторонних примесей по результатам ПААГ электрофореза.
Регенерация колонки
Цикл очистки DEAE-сефарозы проводят после 10 рабочих разделений. Сорбент в колонке промывают 6 л раствора 0,1 М гидроокиси натрия.
Пропускают через колонку 6 л раствора щелочи, затем проводят отмывку водой очищенной до достижения значений рН 7,5±0,5.
Переключают клапан и начинают подачу на колонку уравновешивающего буфера УБ-2. После того как величина рН раствора на выходе из колонки сравняется с рН УБ-2 и достигнет значения рН 8,0±0,2, процесс уравновешивания прекращают, колонка готова к работе.
Перевод РБСФ в 0,3% раствор NaCl на колонке с сефадексом G-25
Подготовка колонки с сефадексом G-25
Для проведения работы используют препаративную стеклянную колонку «Axioma» ПСК-146-700 (или аналогичную). Размеры колонки: диаметр 200 мм, высота 500 мм.
В тарированную емкость загружают 2 кг сорбента, заливают его 50 л очищенной воды и перемешивают вручную (5±1) мин. Оставляют на ночь для набухания сорбента.
Утром декантируют воду и заливают набухший сорбент 15 л 0,3% натрия хлористого.
Суспензию сефадекс G-25 в 0,3% растворе натрия хлористого при постоянном перемешивании подают через перистальтический насос на колонку. Заполнение колонки проводят в соответствии с инструкцией «Подготовка колонки с сефадексом G-25 к работе».
Перевод РБСФ в 0,3% натрий хлористый
Для перевода РБСФ в 0,3% натрий хлористый используют метод фильтрации через колонку с сефадексом G-25, уравновешенным 0,3% натрием хлористым.
При помощи гибких шлангов соединяют верхний и нижний адаптеры колонки с сефадексом G-25 соответственно с входным и выходным клапанами хроматографического комплекса в соответствии с инструкцией по работе.
Запускают программу по ручному управлению работой хроматографического комплекса. В начале процесса клапаны должны быть открыты так, чтобы на колонку подавался 0,3% раствор хлористого натрия. Включают насос со скоростью подачи 0,3% хлористого натрия 0,1±0,005 л/мин. После уравновешивания колонки пропусканием через нее 10±1 л 0,3% раствора хлористого натрия на колонку с сефадексом G-25 подают раствор РБСФ.
После нанесения всего РБСФ переключают клапан и начинают подачу на колонку 0,3% натрия хлористого. Начинают собирать фракции, когда поглощение при 280 нм на выходе из колонки будет выше 0,5 OE, и перестают собирать, когда поглощение при 280 нм на выходе раствора из колонки упадет до 0,3 OE.
Из каждой фракции (емкости) отбирают пробы и передают в производственную лабораторию для контроля чистоты РБСФ методом электрофореза в ПААГ с додецилсульфатом натрия.
Фракции, содержащие по результатам электрофореза чистый белок РБСФ (одна полоса при 15,5 кДа), объединяют, отбирают (2,5±0,01) мл пробы в пробирку и проводят спектрофотометрический контроль.
Показатели раствора РБСФ должны удовлетворять следующим требованиям:
- оптическая плотность при длине волны λ=280 нм (l=1 см) - не менее 1,0 оптической единицы.
При положительном заключении контрольной лаборатории емкости с раствором очищенного РБСФ объединяют в одной емкости и передают на стерилизующую фильтрацию и лиофильную сушку.
Регенерация колонки
После каждого цикла колонку с сефадексом G-25 отмывают 0,3% раствором натрия хлористого до поглощения при 280 нм не более 0,05, и показатели датчика проводимости на входе и выходе из колонки должны быть равными. Колонка готова к работе.
Лиофильная сушка, фасовка и маркировка
Раствор РБСФ перемешивают и фильтруют через фильтр для стерильной фильтрации с размером пор 0,2 мкм в стерильную приемную емкость. Отбирают пробу для проверки стерильности и разливают в стерильные кюветы для сушки слоем высотой не более 1-1,5 см. Кюветы закрывают стерильной салфеткой, помещают в морозильник на минус 40°С и замораживают в течение 24 часов.
Кюветы извлекают из морозильника и быстро переносят в предварительно охлажденную лиофильную сушку для сушки в асептических условиях. Снимают салфетку и в соответствии с инструкцией по сушке в течение 40-48 часов получают лиофильно высушенную стерильную субстанцию Фортеплазе.
Кюветы накрывают стерильной салфеткой и переносят в стерильный бокс с ламинарным шкафом с вертикальным потоком.
В предварительно взвешенные стерильные банки стерильным шпателем переносят лиофильно высушенную субстанцию Фортеплазе, укупоривают и после этого взвешивают наполненные банки с точностью до 0,1 г. По разности между весом пустой и заполненной банки определяют вес сухой субстанции Фортеплазе в упаковке. Заполняют этикетку, на которой указано название субстанции, дата изготовления, номер серии, количество в граммах, условия хранения и срок годности. Передают упаковку на карантинное хранение.
При положительном заключении по качеству субстанции препарат поступает на склад.
Субстанцию Фортеплазе хранят в защищенном от света месте при температуре 2-25°С.
Срок хранения 3 года.
Краткая схема производственного процесса и внутрипроизводственного контроля получения субстанции Фортеплазе:
Проводят оценку пирогенности и аномальной токсичности с использованием следующих доз.
Тест-доза для проверки на пирогенность 0,133 мг субстанции в 0,5 мл 0,9% раствора натрия хлорида для инъекций на 1 кг массы тела кролика. Вещество апирогенно.
Тест-доза для проверки на токсичность 312 мкг Фортеплазе в 0,5 мл 0,9% раствора натрия хлорида для инъекций на мышь. Вещество не токсично.
Приготовление лекарственного препарата Фортелизин, обладающего фибринолитическими свойствами
Для получения лекарственного средства Фортелизин используют субстанцию Фортеплазе.
Получают воду для инъекций.
Вода для инъекций, полученная на данной технологической стадии, должна удовлетворять всем требованиям ФС 42-2620-97.
Вода для инъекций используется в производстве для ополаскивания деталей оборудования, приемных емкостей «Millipore» (или аналогичных), реакторов для приготовления инъекционного раствора, ополаскивания флаконов и приготовления раствора субстанции Фортеплазе.
Приготовление раствора субстанции Фортеплазе
В реактор с мешалкой, рабочим объемом 160 л, вносят 20 литров воды для инъекций, затем 150 г субстанции Фортеплазе и воду для инъекций в количестве 10 л. Включают мешалку реактора (скорость мешалки 80 об/мин). Перемешивание продолжают в течение 15 мин, после чего мешалку реактора выключают. Отбирают пробу, фиксируют рН полученного раствора. рН должен находиться в пределах от 5,5 до 7,5. После этого определяют содержание белка в растворе до стерилизующей фильтрации и проводят стерилизующую фильтрацию.
Раствор должен соответствовать пунктам ФСП.
рН раствора должна находиться в пределах от 5,5 до 7,5.
Раствор должен быть прозрачным, бесцветным.
Проводится контроль количественного содержания белка (от 4,5 до 5,5 мг/флакон).
Проводится контроль стерильности раствора путем высева на питательные среды (тиогликолевую и бульон Сабуро) в количестве 20,0 мл из каждой накопительной емкости.
Розлив полученного раствора субстанции Фортеплазе производят в стерильные флаконы по 1 мл. Наполненные флаконы поступают на этап предварительной укупорки. Отбирают раствор на контроль стерильности в начале, середине и конце розлива. Предварительно укупоренные флаконы помещают в лиофильную установку для замораживания до температуры минус 40°С и дальнейшей сушки. Время высушивания 36-40 часов. Высушивание проводят при температуре не выше 20°С. Проводят окончательное укупоривание прессом и вальцовку алюминиевыми колпачкам flip-off. Проводят контроль на механические включения в три этапа в соответствии с РД 42-501-98. Прошедшие контроль завальцованные флаконы передают на стадию маркировки и упаковки.
Перед началом этикетирования оператор загружает приемочный стол просмотренными флаконами с продуктом и этикетками. На этикетке указывается наименование препарата, срок годности, № серии, дозировка. Запускает автомат, а затем собирает флаконы с наклеенными этикетками. Каждый флакон упаковывается в полимерную контурную упаковку, вкладывает в нее 1 ампулу с раствором натрия хлорида 0,9% - 5 мл и укладывает в картонную пачку - вторичная упаковка. После упаковки и маркировки проводят выборку для проведения контроля готового продукта на соответствие требованиям ФСП и помещают готовую продукцию на склад карантинного хранения. При получении паспорта на серию продукцию перемещают на склад готовой продукции.
В качестве растворителя для препарата Фортелизин используется натрия хлорид раствор для инъекций 0,9% - 5 мл.
Способ применения и дозы
Препарат применяют только для внутривенного введения.
Фортелизин вводится как можно раньше от момента возникновения клинической симптоматики острого инфаркта миокарда.
Фортелизин вводят внутривенно в дозе 15 мг (2235000 ME).
Содержимое флакона 5 мг (745000 ME) перед введением препарата разводится в 5 мл раствора натрия хлорида 0,9%.
Препарат рекомендуется вводить по двум схемам.
Первая схема: Фортелизин вводится двумя болюсами - 10 мг (1490000 ME) одномоментно и через 30 минут оставшиеся 5 мг (745000 ME).
Вторая схема: 10 мг (1490000 ME) вводится болюсно, оставшиеся 5 мг (745000 ME) вводятся внутривенно инфузионно в 50 мл раствора натрия хлорида 0,9% в течение 30 мин.
Препарат Фортелизин нельзя смешивать с другими лекарственными средствами в одном флаконе для инфузий или в общей системе для внутривенного введения.
Не выявлено клинически значимых взаимодействий препарата Фортелизин с другими препаратами, часто применяемыми у больных с острым инфарктом миокарда.
При одновременном применении препарата Фортелизин с антиагрегантными средствами и препаратами, влияющими на свертывающую систему крови, увеличивается риск развития кровотечений.
Claims (3)
1. Способ получения препарата Фортелизин, обладающего фибринолитическими свойствами, включающий размораживание супернатанта, содержащего рекомбинантный белок с аминокислотной последовательностью стафилокиназы (РБСФ), полученный при культивировании штамма Escherichia coli MZ09, регистрационный номер В-10417 ВКПМ, выделение и хроматографическую очистку РБСФ на СМ-сефарозе с последующей хроматографической очисткой на DEAE-сефарозе, перевод в 0,3%-ный раствор NaCl, стерилизацию, фасовку, лиофильную сушку субстанции, введение стерилизованной лиофильной субстанции в реактор с мешалкой в соотношении 30 л воды для инъекций к 150 г субстанции, вводя сначала 2/3 воды, затем субстанцию, затем 1/3 воды, проведение стерилизующей фильтрации полученного раствора, наполнение и предварительную укупорку флаконов, проведение лиофильной сушки препарата и окончательной укупорки флаконов.
2. Применение препарата Фортелизин для лечения инфаркта миокарда путем введения внутривенно в дозе 15 мг (2235000 ME), при этом содержимое флакона 5 мг (745000 ME) перед введением препарата разводят в 5 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида.
3. Применение препарата Фортелизин для лечения инфаркта миокарда путем введения двумя болюсами - 10 мг (1490000 ME) одномоментно и через 30 мин - оставшиеся 5 мг (745000 ME) или путем введения 10 мг (1490000 ME) болюсно и оставшихся 5 мг (745000 ME) внутривенно инфузионно в 50 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида в течение 30 мин.
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2011111094/10A RU2448158C1 (ru) | 2011-03-24 | 2011-03-24 | Способ получения препарата фортелизин, обладающего фибринолитическими свойствами, и его применение для лечения инфаркта миокарда |
PCT/RU2011/000558 WO2012134332A1 (ru) | 2011-03-24 | 2011-07-26 | Способ получения фибринолитического препарата и его применение для лечения инфаркта миокарда |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2011111094/10A RU2448158C1 (ru) | 2011-03-24 | 2011-03-24 | Способ получения препарата фортелизин, обладающего фибринолитическими свойствами, и его применение для лечения инфаркта миокарда |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2448158C1 true RU2448158C1 (ru) | 2012-04-20 |
Family
ID=46032635
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2011111094/10A RU2448158C1 (ru) | 2011-03-24 | 2011-03-24 | Способ получения препарата фортелизин, обладающего фибринолитическими свойствами, и его применение для лечения инфаркта миокарда |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2448158C1 (ru) |
WO (1) | WO2012134332A1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2649760C1 (ru) * | 2017-07-11 | 2018-04-04 | ООО "СупраГен" | Способ лечения острого инфаркта миокарда с подъемом сегмента ST, осложненного кардиогенным шоком |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU375829A3 (ru) * | 1969-06-09 | 1973-03-23 | ||
SU973615A1 (ru) * | 1981-03-17 | 1982-11-15 | Московский Ордена Ленина,Ордена Октябрьской Революции И Ордена Трудового Красного Знамени Государственный Университет Им.М.В.Ломоносова | Способ получени тромболитических ферментов специфичных к фибрину |
SU1421348A1 (ru) * | 1986-12-24 | 1988-09-07 | Центральный научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови | Способ получени тромболитического фермента из гриба ТRIснотесIUм RоSеUм штамм D |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2719479B1 (fr) * | 1994-05-04 | 1996-07-26 | Sanofi Elf | Formulation stable lyophilisée comprenant une protéine: kit de dosage. |
CN101314769B (zh) * | 2008-07-09 | 2011-04-20 | 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 | 一种葡激酶及其表达载体 |
-
2011
- 2011-03-24 RU RU2011111094/10A patent/RU2448158C1/ru active
- 2011-07-26 WO PCT/RU2011/000558 patent/WO2012134332A1/ru active Application Filing
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU375829A3 (ru) * | 1969-06-09 | 1973-03-23 | ||
SU973615A1 (ru) * | 1981-03-17 | 1982-11-15 | Московский Ордена Ленина,Ордена Октябрьской Революции И Ордена Трудового Красного Знамени Государственный Университет Им.М.В.Ломоносова | Способ получени тромболитических ферментов специфичных к фибрину |
SU1421348A1 (ru) * | 1986-12-24 | 1988-09-07 | Центральный научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови | Способ получени тромболитического фермента из гриба ТRIснотесIUм RоSеUм штамм D |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2649760C1 (ru) * | 2017-07-11 | 2018-04-04 | ООО "СупраГен" | Способ лечения острого инфаркта миокарда с подъемом сегмента ST, осложненного кардиогенным шоком |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2012134332A1 (ru) | 2012-10-04 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2021176910A (ja) | 免疫原性組成物を安定化させ、沈殿を阻害する新規製剤 | |
AU675051B2 (en) | Topical fibrinogen complex | |
US5792835A (en) | Method of preparing a topical fibrinogen complex | |
CN102008433A (zh) | 一种改善稳定性的法舒地尔盐注射液及其制备方法 | |
CN107858324A (zh) | 一种基于阴离子交换树脂吸附分离细胞向培养基分泌的包括外泌体在内的细胞外囊泡的方法 | |
WO1995025748A1 (en) | Topical fibrinogen complex | |
RU2448158C1 (ru) | Способ получения препарата фортелизин, обладающего фибринолитическими свойствами, и его применение для лечения инфаркта миокарда | |
CN105820232B (zh) | 单修饰聚乙二醇重组人促红素的制备方法及其制品和应用 | |
CN108704122A (zh) | 一种注射用rhTNK-tPA冻干制剂及其制备方法 | |
CN111606978A (zh) | 一种去除大肠杆菌重组表达猪细小病毒vp2蛋白中内毒素的方法 | |
CN110078835B (zh) | 一种类egf蛋白及其构建方法、嵌合蛋白及其制备方法和应用 | |
RU2448156C1 (ru) | Способ получения лиофилизированной субстанции | |
CN101642429A (zh) | 一种稳定的利福霉素钠注射液和利福霉素钠氯化钠(葡萄糖)注射液的制备方法 | |
CN108467434A (zh) | 哌拉西林单克隆抗体的制备方法及应用 | |
WO2022172035A1 (en) | Medium for production of bacterial extracellular vesicles | |
CN111471100B (zh) | 一种新型红细胞膜单抗生产方法及其加工装置 | |
BR112013015914B1 (pt) | composições farmacêuticas de tenecteplase | |
CN101843896A (zh) | 高浓度低装量重组人干扰素α2b注射液 | |
CN114945582A (zh) | 纯化肉毒杆菌毒素的方法 | |
CN101664385B (zh) | 富马酸伊布利特注射液及其制备方法 | |
CN104288099A (zh) | 一种布洛芬注射液 | |
RU2590588C1 (ru) | Способ производства препарата на основе нереплицирующегося вирусного вектора, экспрессирующего ген человеческого toll-подобного рецептора и ген модифицированного белка флагеллина | |
CN110151977B (zh) | 一种保护aFGF蛋白药物稳定性和活性的方法 | |
Meyer et al. | Compounding and filling: Drug substance to drug product | |
CN106727292A (zh) | 一种肝素钠注射液的制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20180420 |