SU973615A1 - Способ получени тромболитических ферментов специфичных к фибрину - Google Patents
Способ получени тромболитических ферментов специфичных к фибрину Download PDFInfo
- Publication number
- SU973615A1 SU973615A1 SU813290294A SU3290294A SU973615A1 SU 973615 A1 SU973615 A1 SU 973615A1 SU 813290294 A SU813290294 A SU 813290294A SU 3290294 A SU3290294 A SU 3290294A SU 973615 A1 SU973615 A1 SU 973615A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- fibrin
- producing
- trombolytic
- enzymes
- hours
- Prior art date
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТГОМБОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ, СПЕЦИФИЧНЫХ К ФИБРИНУ
1
Изобретение относитс к получению ферментных препаратов и может быть применено в медицине , микробиологической промышленности, гематологии и биохимии микроорганизмон.
Известен способ получени протеаз фибринолитического , казеинолитического и тромболитического действи путем совместного культивировани двух микроорганизмов одного рода, но разных видов: Aspergillus kanagawaensis - продуцента протеаз и Aspergillus wentii - неак- JQ тивного в отношении образовани секретируемых протеаз организма, которые внос т в равных количествах в питательную среду: A.kana- gawaensis - в виде-посевного материала, а А. wentii -в виде вегетативного материала, ,5 инкубируют, отдег ют клетки и из культуральной жидкости выдел ют целевой продукт 11.
Недостатками способа вл ютс необходимость получени дл Aspergillus wentii не только двухсутошого посевного материала, 20 на трехсуточного вегетативного, что значительно (на 3 сут) удлин ет процесс получени нелепого продукта (7-8 сут). кроме того, невысокий выход нелевого продукта и снижение у делевого продукта специфичности к фибрину .
Известен способ получени нротеолитических ферментов казеинолитического и фибринолитического действи , предусматриваюший совметное культивирование при 28-30° С микроорганизма - продуцента и микроорганизма - стимул тора , не синтезирующего протеа:з, последуюшее отделение клеток и высаливание целевого продукта сернокислым аммонием при насыщении 0,6-0,8, в котором в качестве продуцента используют Actinomyces rimosus, в качестве микроорганизма - стимул тора Actinomyces violaceus, а посевной материал обоих штаммов внос т в среду в соотношении 0,25:1 соответственно 2.
Недостатками способа (прототипа) вл ютс длительность способа (6 сут), многокомпонентность состава среды и наличие в ней дефицитных и дорогосто щих реактивов, невысокий выход целевого продукта (фибринолитическа активность 1901 ед/мл, казеинолнтическа активность 156 ед/мл), а также низка специфичность к фибрину у целевого продукта (33,9). 3973 Цель изобретени - ускорение процесса куль тивирова1ш , увеличение фибринолитической активности и повышение специфичности ферментного препарата к фибрину. Поставленна цель достигаетс тем, что согласно способу получени тромболитических ферментов специфичных к фибрину, предусматри вающему совместное культивирование при 28- 30° С микроорганизма - продуцента и микроорганизма - стимул тора, не синтезирующего протеаз, последующее отделение клеток и высаливание целевого продукта сернокислым аммонием при насыщении 0,6-0,8, в качестве продуцента используют Nocardia species, цггамм 1, в качестве микроорганизма - стимул тора Arthro bacter citreus, штамм В-654, посевной материал обоих щтаммов внос т в питательную среду в соотношении 1:0,5-1; 0,25 соответственно, а культивирование осуществл ют в течение 7072 ч. Штамм В-654 Arthrobacter citreus хранитс о под этим номером во всесоюзной коллекции микроорганизмов АН СССР (Институт физиологии и биохимии микроорганизмов АИ СССР). Пример 1.В известную синтетическую среду СР-1 (глюкоза 2%, KNOs 0,1%, К2НРО4 0,005%, MgS040,05%,NaC1 0,05%, CaCOj 0,1%, FeSO4 0,001%)после стерилизации внос т 5% по объему жидкого двухсуточного посевного материала Nocardia species штамм 1 и 2,5% по объему жидкого двухсуточного посевного. материала Arthrobacter citreus штамм В-654, выращенного на среде МПБ+3% глюкозы. Культивирование смешанной культуры осуществл ют глубш ным способом в колбах на 750 мл со 100 мл среды на качалках (220 об/мин) при 28° С в течение 72 ч. По истечении этого времени культуральна жидкость содержит 3456 усл. ед/мл фибринолитической акти&рости 14,3 каз. ед/мл казеинолитической активности и раствор ет тромбы за 1,5 ч. Дл выделени фермента клетки отдел ют от культуральной жидкости центрифугированием и провод т высаливание ферментов сернокислым аммонием при насыщении 0,6 в течение 48 ч при 4°С. Выпавший осадок раствор ют в воде, диализуют 24 ч при 4 С против 0,002 М ацетата кальци и лиофильно высушивают. Выделенный препарат обладает специфичной активностью в 16500 ед/мг белка. Полученные результаты свидетельствуют о том, что в смешанной культуре микроорганизмов по предлагаемому способу происходит образование протеаз с казеинолитическим действием на 28,8, фибринолитическим действием на 80% и тромболитическим действием на 50% больше, чем в чистой культуре Nocardia species штамм 1. Увеличение ферментативной активности сопровождаетс возрастанием специфичности ферментов к фибрину (в 7 раз по сравнению с прототипом). Пример 2. В известную синтетическую среду СР-1 (состав среды приведен) после стерилизации внос т 5% по объему жидкого двухсутошого посевного материала Nocardia species щтамм 1 и 1,25% по объему жидкого двухсуточного посевного материала Arthro- bacter citreus щтамм В-654, выращенного на среде МПБ+3% глюкозы. Культивирование смешанной культуры осуществл ют глубиннь1М способом в колбах на 750 мл со 100 мл среды на качалках (280 об/мин) при 30° С в течение 70 ч. По истечении этого времени культуральна жидкость содержит 3280 усл. ед/млфибринолитической активности , 14,1 каз. ед/мл казеинолитической активности и раствор ет тромбы за 1,6 ч. Дл вьщелени фермента клетки отдел ют от культуральной. .з идкости центрифугированием и провод т высаливание ферментов сернокислым аммонием при насыщении 0,8 в течение 48 ч при 4°С. Выпавший осадок раствор ют в воде, диализуют 24 ч при 4° С против 0,002 М ацетата кальци и лиофильно высушивают . Полученный препарат обладает специфичной активностью в 16450 ед/мг белка. В таблице представлена сравнительна характеристика ферментных препаратов, получен ных по способу прототипу и предлагаемому способу. Поскольку в совместной культуре казеинолиз возрастает всего на 28,8% , фибринолиз на 80%,то резко (2-7 раз) увеличиваетс специфичность получаемых протеаз к фибрину. Наличие у целевого продукта высокой специфичности к фибрину имеет большое практическое значение, так как именно это свойство обеспечивает при. действии фермента in vivo возможность раствор ть тромбы крови без гидролиза других жизненно важных белков крови, т. е. без гемофилии, котора представл ет такую же опасность дл жизни чело ,века как и тормбоз. Таким образом, реализаци изобретени позвол ет сократить врем культивировани продуцента, увеличить фибринолитическую активность и повысить специфичность целевого продукта к фибрину.
Прототип Act. rimosus
+ Act. viofaceus
Предлагаемый способ Контроль Nocardia species/
. Опыт Nocardia species/
+
Arthrobacter crtreus В 654
Claims (2)
1.Авторское свидетельство СССР W 605826, кл. С 12 N 9/68, 1978.
2.Авторское свидетельство СССР № 436086, кл. С 12 N 9/48, 1972 (прототип).
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU813290294A SU973615A1 (ru) | 1981-03-17 | 1981-03-17 | Способ получени тромболитических ферментов специфичных к фибрину |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU813290294A SU973615A1 (ru) | 1981-03-17 | 1981-03-17 | Способ получени тромболитических ферментов специфичных к фибрину |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU973615A1 true SU973615A1 (ru) | 1982-11-15 |
Family
ID=20958821
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU813290294A SU973615A1 (ru) | 1981-03-17 | 1981-03-17 | Способ получени тромболитических ферментов специфичных к фибрину |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU973615A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2448158C1 (ru) * | 2011-03-24 | 2012-04-20 | Эспосито Трейдинг Лтд | Способ получения препарата фортелизин, обладающего фибринолитическими свойствами, и его применение для лечения инфаркта миокарда |
-
1981
- 1981-03-17 SU SU813290294A patent/SU973615A1/ru active
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2448158C1 (ru) * | 2011-03-24 | 2012-04-20 | Эспосито Трейдинг Лтд | Способ получения препарата фортелизин, обладающего фибринолитическими свойствами, и его применение для лечения инфаркта миокарда |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chitte et al. | Production, purification, and biochemical characterization of a fibrinolytic enzyme from thermophilic Streptomyces sp. MCMB-379 | |
| US20030170221A1 (en) | Streptomyces megasporus sd5, process for the isolation thereof, novel fibrinolytic enzyme prepared therefrom, process for the production of said enzyme and method of treatment of thrombolytic disorders using said enzyme | |
| Meshram et al. | Production, purification and characterisation of a potential fibrinolytic protease from endophytic Xylaria curta by solid substrate fermentation | |
| US5252481A (en) | Mutant of bacterium Clostridium histolyticum, a process for the obtaining thereof, and its use in the production of clostripain-free collagenase | |
| US3151039A (en) | Milk coagulating enzyme "microbial rennet" and method of preparation thereof | |
| US3212905A (en) | Process for making cheese | |
| US3677900A (en) | Method of producing collagenase with a species of vibrio | |
| SU973615A1 (ru) | Способ получени тромболитических ферментов специфичных к фибрину | |
| Eldeen et al. | Optimization of culture conditions to enhance nattokinase production using RSM | |
| RU2664468C2 (ru) | Способ получения протеиназ с фибринолитической и фибриногенолитической активностями | |
| CN101134951A (zh) | 一种纤溶酶及其培制方法 | |
| US3616234A (en) | Method of preparing protease from candida lipolytica | |
| US3490995A (en) | Process for the biosynthesis of cellbound pullulanase by aerobacter aerogenes | |
| KR0180103B1 (ko) | 바실러스 서브틸리스 속 균주 유래의 혈전용해효소 | |
| RU2728456C1 (ru) | Штамм sarocladium strictum - продуцент фибринолитических ферментов с активаторной к плазминогену активностью | |
| JP3532503B2 (ja) | 加工食品および食品加工方法 | |
| KR100189660B1 (ko) | 바실러스속 균주 유래의 혈전용해효소 | |
| SU971877A1 (ru) | Среда дл получени протеолитических ферментов | |
| US7150985B2 (en) | Bacteriolytic complex, method for producing said complex and strain for carrying out said method | |
| SU605826A1 (ru) | Способ получени протеаз | |
| JPH0198485A (ja) | 微生物による−α−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼの製造法 | |
| SU1615177A1 (ru) | Штамм бактерий BacILLUS ceReUS-продуцент протеолитических ферментов с тромболитическим действием | |
| KR880002315B1 (ko) | 히아론산과 스트렙토 키나제를 동시에 생산하기 위한 스트렙토코커스속 미생물의 배양방법 | |
| Khobragade et al. | Purification and Characterization of Extracellular Protease from Soil Isolate Stenotrophomonas Maltophilia as Novel Target for Fibrinolysis. | |
| JP2521706B2 (ja) | プロテア−ゼの製造方法 |