FI115954B - Menetelmä kuitukangasmateriaalin valmistamiseksi - Google Patents

Description

1 115554

Menetelmä kuitukanqasmateriaalin valmistamiseksi 5 Tämä keksintö liittyy menetelmään uuden kuitukangasmateriaa-lin valmistamiseksi, joka materiaali sisältää hyaluronihappo-johdannaisia.

Hyaluronihappo on luonnon heteropolysakkaridi, joka koostuu 10 vuorottelevista D-glukuronihappo- ja N-asetyyli-D-glukoosi-amiini-osista. Se on lineaarinen polymeeri, jonka moolimassa on 50 000 - 13 000 000 sen alkuperästä sekä valmistus- ja määritysmenetelmän mukaan. Sitä esiintyy luonnossa soluja ympäröivissä geeleissä, perusaineena selkärankaisten eliöiden 15 sidekudoksessa, jossa se on yksi pääkomponenteista, nivelnesteessä, lasiaisnesteessä, ihmisen napanuorakudoksessa ja kukon harjoissa.

Tunnettuja ovat sellaiset hyaluronihapon erityisfraktiot, 20 joilla on tarkalleen määrätty moolimassa ja joilla ei ole tulehdusta aiheuttavaa vaikutusta ja joita voidaan sen vuoksi käyttää helpottamassa haavojen parantumista, korvaamassa ;t ydinjatkoksen sisäisiä (endobulbar) nesteitä tai joita '!!' voidaan käyttää niveltautien hoidossa nivelen sisäisinä 25 injektioina, kuten on kuvattu 25. heinäkuuta 1990 hakijoille myönnetyssä eurooppalaisessa patentissa 0 138 572.

• · t « « ,,7 Tunnettuja ovat myös sellaiset hyaluronihapon esterit, joissa : kaikki tai osa hapon karboksiryhmistä on esteröity, sekä 30 niiden käyttö lääkeaine- ja kosmetiikka-aloilla ja : biohajoavien muovimateriaalien alalla, kuten on kuvattu .···. hakijoille myönnetyissä US-patenteissa 4 851 521 ja 4 965 353.

35 Hyaluronihapolla tiedetään olevan tärkeä merkitys kudosten parantumisprosesseissa, erityisesti haavanpohjan verisuoni-rikkaan kudoksen muodostumisen ensi vaiheissa (granulation) , stabiloimalla hyytymismatriisiä ja säätelemällä sen hajoamista, suosimalla tulehdussolujen kuten monilohkotumaisten vai- 2 115954 kosolujen ja monosyyttien, mesenkyymisolujen kuten fibroblas- tien ja endoteelisolujen uusiutumista ja suuntaamalla sen jälkeen tapahtuvaa epiteelisolujen migraatiota.

5 Tiedetään, että hyaluronihappoliuosten käyttö voi nopeuttaa makuuhaavoista, haavoista ja palovammoista kärsivien potilaiden parantumista. Hyaluronihapon merkitystä erilaisissa kudosten parantumisprosessin muodostavissa vaiheissa on kuvattu muodostamalla teoreettinen malli: Vogel, P.H. et ai. "A model 10 for the role of hyaluronic acid and fibrin in the early events during the inflammatory response and would healing", J. Theor. Biol., 119 (1986) 219.

Tutkimukset, jotka ovat pyrkineet saamaan aikaan valmistet-15 tuja, iholle levitettäviä tuotteita, jotka koostuvat hyalu- ronihappoestereistä sellaisenaan tai seoksina muiden polymeerien kanssa, ovat johtaneet eri tyyppisten tuotteiden luomiseen. Näihin kuuluvat kankaat, kuten harsokankaat, joiden paksuus (lankojen lukumäärä senttimetrillä), mittasuhteet ja 20 lankojen denierluku (paino 9000 metriä lankaa kohden) vaihte- levat. On ehdotettu hyvin eripaksuisia kalvoja, kuten on kuvattu US-patenttijulkaisuissa 4 851 521 ja 4 965 353.

V : Sellaisten materiaalien käyttöä ihon peitteenä rajoittaa '·,*·.:25 niiden jäykkyys, joka määräytyy pääasiassa sen mukaan, miten : ne on valmistettu. On kuitenkin aina ongelmallista, kun mate- ··.· riaalin on muovauduttava pinnalle. Toinen haittapuoli sel- laisten materiaalien käytössä on niiden huono tai puuttuva imukyky sellaisille liuoksille kuten desinfiointiaineet, ,;30 antibiootit, antiseptiset aineet, sieniä estävät aineet, '!!! proteiinit tai yleensä haavoja parantavat aineet, jopa sil loinkin, kun ne eivät ole paksuja eivätkä viskooseja.

: : Tämän keksinnön tarkoituksena on saada aikaan taipuisia • ’•35 kuitukangasmateriaaleja.

3 115954 Tämän keksinnön tarkoituksena on myös saada aikaan menetelmä tällaisten kuitukangasmateriaalien valmistamiseksi.

Esillä olevan keksinnön mukaan aikaansaadut kuitukangas-5 materiaalit koostuvat hyaluronihappoestereistä, käytettynä yksin tai yhdistelmänä toistensa tai muun tyyppisten polymeerien kanssa. Materiaalit ovat erityisen pehmeitä ja niitä voidaan helposti impregnoida erityyppisillä nesteillä.

10 Tämän keksinnön muu soveltamisala käy ilmi jäljempänä esitettävästä yksityiskohtaisesta selityksestä ja piirustuksista. Tulee kuitenkin ymmärtää, että vaikka yksityiskohtainen selitys ja erityisesimerkit osoittavat keksinnön edullisia suoritusmuotoja, niin ne esitetään vain valaisevina esimerkkeinä, 15 koska erilaiset muutokset ja modifikaatiot keksinnön hengessä ja keksinnön alan rajoissa käyvät tästä yksityiskohtaisesta selityksestä ammattimiehille ilmeisiksi.

Edellä mainitut tämän keksinnön kohteet, ominaispiirteet Ja 20 edut ovat helpommin ymmärrettävissä seuraavista, yksityiskohtaisista selityksistä yhdessä mukana seuraavien piirustusten kanssa, jotka kaikki esitetään vain valaisevina esimerkkeinä ··· eivätkä ne ole tätä keksintöä rajoittavia.

25 Kuvio 1 on kaaviokuva, joka esittää tämän keksinnön mukaan aikaansaadun kuitukangasmateriaalin valmistukseen liittyvät * 1 1 ' vaiheet ja ·;;; kuvio 2 esittää esimerkissä 27 valmistetun, hyaluronihapom ♦ · · '·’ ’ bentsyyliesteriä, HYAFF 11, sisältävän kuitukangasmateriaalin 30 ulkonäköä.

• 1

Seuraava yksityiskohtainen selitys keksinnöstä esitetään aut- :v. tamaan ammattimiehiä suorittamaan tätä keksintöä. Siinäkään tapauksessa seuraavaa yksityiskohtaista selitystä ei tulisi 35 tulkita kohtuuttomasti tätä keksintöä rajoittavaksi, koska tavanomainen ammattimies voi tehdä modifikaatioita ja muufcok-siä tässä yhteydessä esitettyihin suoritusmuotoihin poikkeamatta tämän kekseliään löydön hengestä tai alasta.

4 115954

Kunkin tämän hakemuksen viitejulkaisun sisältö liitetään tässä yhteydessä viitteiksi kokonaisuuksissaan.

5 Tämän keksinnön kohteet saavutetaan tämän keksinnön mukaan aikaansaaduilla kuitukankailla, jotka painavat noin 20 g/m2 -500 g/m2 ja joiden paksuus on noin 0,2-5 mm. Kuitukangasta voidaan kuvata verkkona, joka koostuu suuresta määrästä kuituja, joiden halkaisija vaihtelee noin 12 - 60 mikromet-10 riin ja jotka ovat pituudeltaan noin 5 - 100 mm, jotka kuidut on liitetty yhteen kemiallisen koaguloinnin avulla tai mekaanisin keinoin, tai koossapitävän aineen avulla.

Kuitukangas sisältää hyaluronihappoestereitä käytettynä yksi- 15 nään tai seoksina toistensa kanssa erilaisissa määräsuhteis- sa. Lisäksi nämä kuitukankaat voivat sisältää hyaluroni-hap- poestereiden kuitujen seoksia luonnon polymeerien kuitujen kanssa, kokonaismääräsuhteen vaihdellessa 0 - 100 %, joita luonnon polymeerejä ovat esimerkiksi kollageeni tai kollagee- 20 nin ja glykoosiaminoglykaanien kerasaostumat, selluloosa, geelimuodossa olevat polysakkaridit kuten kitiini, kitosaani, pektiini tai pektiinihappo, agar, agaroosi, ksantaanikumi, gellaani, algiinihappo tai alginaatit, polymannaani tai poly- , ;·, glykaanit, tärkkelys ja luonnonkumit; tai seoksia luonnon ' 25 polymeerien puolisynteettisistä johdannaisista saatujen kui- • · ! *. tujen kanssa, joita johdannaisia ovat esimerkiksi kollageeni " ristisilloitettuna aineilla kuten aldehydit tai edellä maini- ··<*’ tun esimuodot, edellä mainitun dikarboksyylihapot tai halo- *.· · genidit, diamiinit, selluloosan, algiinihapon, tärkkelyksen, 30 hyaluronihapon, kitiinin tai kitosaanin, gellaanin, ksantaa- • » jj j nin, pektiinin tai pektiinihapon, polyglykaanien, polymannaa- nin, agarin, agaroosin, luonnonkumien, glykoosi-aminoglykaanien johdannaiset; tai seoksia synteettisistä polymeereistä saatujen kuitujen kanssa, joita synteettisiä 35 polymeerejä ovat esimerkiksi polymaitohappo, polyglykolihappo tai edellä mainittujen sekapolymeerit tai niiden johdannai-• :··· set, polydioksaanit, polyfosfatseenit, polysulfonihartsit ja polyuretaanihartsit.

5 115954 Tämän keksinnön mukaan aikaansaatuja kuitukankaita, joilla on edellä mainittuja ominaisuuksia, voidaan valmistaa säiekimpuista, jotka on valmistettu tavallisilla märkä- ja kuivakehruumenetelmillä ja leikattu sitten haluttuihin 5 pituuksiin. Kuitumassa syötetään karstauskoneeseen, joka tekee sen tapulikuiduiksi (staples). Kuituniput syötetään sitten ristilimityskoneeseen (cross lapper), josta ne tulevat esille tietyn painoisena verkkona.

10 Verkolle voidaan tehdä kemiallinen tai mekaaninen koossapitävä käsittely kuten liotus liuottimissa ja sen jälkeen koagu-lointi, neulalävistyskäsittely, käsittely sideaineella, joka on samaa materiaalia kuin kuitukankaan muodostava materiaali, tai eri materiaalia, jne.

15

Mekaanisten koossapitävien käsittelyjen osalta kuituverkon vahvistumisen periaate perustuu kuitujen sekoittamiseen ja lisääntyneeseen kuitukitkaan, joka on saatu aikaan kuituverkon lujittamisella. Kuidut sekoitetaan lävistämällä verkko 20 pystysuorassa huovutusneuloilla. Nämä neulat asennetaan koneisiin, ja kuituverkko syötetään lävistyskoneeseen lävistystä varten, ja lopuksi strukturointikoneeseen, joka suorittaa ‘1’ pinnan strukturoinnin.

• * » * » · ·.·.· 25 Sideainekäsittelyjen osalta kemiallinen koossapitävä käsitte-

• I

·/·· ly sideaineilla tehdään kuituverkolle sen tullessa esille *:* karstauskoneesta (Kuvio 1, kohta 9) . Tämän käsittelyn tarkoi- tuksena on kiinnittää kuidut kontaktikohdistaan. Pääasiassa hyaluronihappoestereistä koostuvien kuitukankaiden tapaukses-: ,·, 30 sa tämä saadaan aikaan ruiskuttamalla (11) karstauskoneesta tuleva kuituverkko hyaluronihappoestereiden liuoksella, esi-

» I

merkiksi dimetyylisulfoksidissa. Dimetyylisulfoksidi, joka on : ’,· verkon sisältämien kuitujen liuotin, liuottaa niitä ja "su- lattaa" ne yhteen sen jälkeen seuraavassa koagulointialtaassa 35 (12) . Siten kiinnitetty verkko pestään (13) sitten ja kuiva- tetaan (14) .

6 11E954

Koagulointialtaat 3 ja 15 ovat ruostumattomasta teräksestä ja ne ovat ylösalaisin käännetyn kolmion muotoisia, jotta muodostunut uutettu, liukoinen materiaali voidaan pitää kontaktissa tuoreen koagulointiliuoksen kanssa.

5

Koagulointiprosessi on pääasiassa uuttoprosessi, jossa polymeerin ja liuottimen liuoksesta voidaan tehdä liukoiseksi tekevän liuottimen poisto ja polymeerin kiinteytys lisäämällä toista liuotinta, esimerkiksi etanolia, johon liukoiseksi 10 tekevä liuotin, esimerkiksi dimetyylisulfoksidi, on liukoinen, ja polymeeri on liukenematon.

Edellä selitetyillä käsittelyillä on sellainen kuituja toisiinsa kiinnittävä vaikutus, että tuloksena on satunnaisesti 15 sijoittuneista, sekaisista kuiduista koostuva rakenne, joka muodostaa pehmeän, kestävän materiaalin.

Tämä keksintö liittyy siten uuden tuoteluokan, kuitukankaiden, valmistamiseen, joita kuitukankaita käytetään lääketie-20 teen/farmasian alalla ihon peitteenä. Nämä kangasmateriaalit ovat täysin tai osittain biologisesti yhteensopivia ja hyväksi* syttäviä, ja ne koostuvat hyaluronihappoestereistä, joita käytetään yksin tai seoksina toistensa tai muiden luonnon tai synteettisten polymeerien kanssa. Sellaisille materiaaleille 25 on tunnusomaista niiden pehmeys, ja niiden kyky imeä nesteitä.

M * i * · * • · a

Sellaisia kuitukankaita voidaan impregnoida muun muassa anti-. bioottien, antiseptien, sieniä estävien aineiden tai proteii-

* I I

'11.’ 30 nien liuoksilla. Termi "kuitukangas" käsittää käytännössä * t * · ;· sellaiset materiaalit kuten verkot ja huovat, jne., jotka • koostuvat suuresta määrästä kuituja, kemiallisesti tai mekaa- : : nisesti toisiinsa kiinnitettyinä. Materiaalilla on kankaan ulkonäkö, vaikka sitä ei ole kudottu sanan varsinaisessa 35 merkityksessä.

7 115954

Seuraavassa on pelkästään valaisutarkoituksessa selitetty joitakin esimerkkejä siitä, kuinka tämän keksinnön mukaan voidaan valmistaa kuitukangasmateriaalia.

5 Hyaluronihapon esterit Tässä keksinnössä käyttökelpoiset hyaluronihapon esterit ovat hyaluronihapon estereitä alifaattisten, aralifaattisten, sykloalifaattisten tai heterosyklisten alkoholien kanssa, 10 joihin esteröidään kaikki (niin sanottu "täysesterit") tai vain osa (niin sanottu "osittaisesterit") hyaluronihapon karboksyyliryhmistä, ja osittaisestereiden suolat metallien tai orgaanisten emästen kanssa, jotka yhdisteet ovat biologisesti yhteensopivia tai farmakologisesti hyväksyttäviä.

15 Käyttökelpoisiin estereihin kuuluvat esterit, jotka on johdettu alkoholeista, joilla itsellään on huomattava farmakologinen vaikutus. Alifaattisen sarjan tyydyttyneet alkoholit tai sykloalifaattisen sarjan yksinkertaiset alkoholit ovat 20 käyttökelpoisia tässä keksinnössä.

Edellä mainitut esterit, joissa osa karboksyylihapporyhmistä ·1· pysyy vapaina (eli osittaisesterit), voidaan tehdä suoloiksi metallien tai orgaanisten emästen, kuten alkali- tai maa-25 alkalimetallien tai ammoniakin tai typpipitoisten orgaanisten * · ♦ • emästen avulla.

• · · « 1 · • · » · »

Useimmat hyaluronihapon (HY) estereistä, toisin kuin HY itse, ’·1 ' ovat jossain määrin liukoisia orgaanisiin liuottimiin. Tämä 30 liukoisuus riippuu esteröityjen karboksyylihapporyhmien pro- • f : senttiosuudesta ja karboksyyliryhmiin liittyneen alkyyliryh- män lajista. Sen vuoksi HY-yhdisteellä, jonka kaikki karbok-; ,·, syyliryhmät on esteröity, on huoneenlämpötilassa hyvä liu- ,··’ koisuus esimerkiksi DMSO.-iin (HY:n bentsyyliesteriä liukenee 1 i T 35 DMS0:iin 200 mg/ml). Useimmilla HY:n täysestereistä on myös, toisin kuin HY:llä ja erityisesti sen suoloilla, huono liu-] koisuus veteen ja ne ovat pääasiassa veteen liukenemattomia.

115954

Liukoisuusominaisuudet, yhdessä tiettyjen erityisten ja huomattavien viskoelastisuusominaisuuksien kanssa tekevät HY-esterit erityisen edullisiksi käytettäväksi komposiittimem-braaneissa.

5

Alifaattisen sarjan alkoholit, joita käytetään tämän keksinnön mukaan valmistetuissa komposiittimembraaneissa käytettävän hyaluronihapon karboksyyliryhmiä esteröivinä aineina, ovat esimerkiksi sellaiset alkoholit, joissa on 34 hiili-10 atomia, alkoholit, jotka voivat olla tyydyttyneitä tai tyy-dyttymättömiä, ja jotka voivat mahdollisesti olla substi-tuoituja muilla, vapailla, funktionaalisilla tai funktionaalisesta modifioiduilla ryhmillä kuten amiini-, hydrok-syyli-, aldehydi-, ketoni-, merkaptaani- tai karboksyyli-15 ryhmillä tai näistä johdetuilla ryhmillä kuten hydrokarbyyli-tai di-hydrokarbyyliamiiniryhmillä (tästä lähtien termiä "hydrokarbyyli11 käytetään viittaamaan ei ainoastaan yksiarvoisiin hiilivetyradikaaleihin kuten CnH2M1+1-tyyppi in, vaan myös kaksi- tai kolmearvoisiin radikaaleihin kuten CnH2n-20 "alkeeneihin" tai CnH2n-"alkylideeneihin") , eetteri- tai esteriryhmillä, asetaali-tai ketaaliryhmillä, tioeetteri- tai tioesteriryhmillä ja esteröidyillä karboksyyli- tai karb-amidiryhmillä ja yhdellä tai useammalla hydrokarbyyliryh-mällä, nitriiliryhmillä tai halogeeneilla substituoidulla 25 karbamidilla.

• #» ' Edellä mainituista, hydrokarbyyliradikaaleja sisältävistä *!" ryhmistä ovat edullisia kevyet alifaattiset radikaalit kuten • · · *·* * alkyylit, joissa on enintään 6 hiiliatomia. Sellaisissa alko- 30 holeissa voi hiiliatomiketju olla heteroatomien kuten happi-, : typpi- tai rikkiatomien katkaisema. Edullisia ovat alkoholit, jotka on substituoitu yhdellä tai kahdella mainituista funk-tionaalisista ryhmistä.

» I

• · 35 Edellä mainitun ryhmän alkoholeista edullisesti käytetään niitä, joissa on enintään 12 ja erityisesti 6 hiiliatomia ja : joissa hydrokarbyyliatomit edellä mainituissa amiini-, eette ri, esteri-, tioeetteri, tioesteri-, asetaali-, ketaaliryh- 115954 9 missä edustavat alkyyliryhmiä, joissa on enintään 4 hiiliatomia, ja myös esteröidyissä karboksyyli- tai substituoiduissa karbamidiryhmissä hydrokarbyyliryhmät ovat alkyylejä, joissa on sama lukumäärä hiiliatomeja, ja joissa amiini- tai karba-5 midiryhmät voivat olla alkeeniamiini- tai alkeenikarbamidi- ryhmiä, joissa on enintään 8 hiiliatomia. Näistä alkoholeista erityisen edullisia ovat tyydyttyneet ja substituoimattomat alkoholit kuten metyyli-, etyyli-, propyyli- ja isopropyy-lialkoholit, normaali-butyylialkoholi, isobutyylialkoholi, 10 tertiäärinen butyylialkoholi, amyyli-, pentyyli, heksyyli, oktyyli, nonyyli- ja dodekyylialkoholit ja, ennen kaikkea ne, joissa on lineaarinen ketju kuten normaalioktyyli- ja -dodekyylialkoholit. Tämän ryhmän substituoiduista alkoholeista ovat käyttökelpoisia kahdenarvoiset alkoholit kuten ety-15 leeniglykoli, propyleeniglykoli ja butyleeniglykoli, kolmen- arvoiset alkoholit kuten glyseriini, aldehydialkoholit kuten tartronialkoholi, karboksyylialkoholit kuten maitohapot, esimerkiksi glykolihappo, omenahappo, viinihapot, sitruunahappo, aminoalkoholit kuten normaali-aminoetanoli, 20 aminopropanoli, normaali-aminobutanoli ja niiden aminofunkti- oon dimetyloidut ja dietyloidut johdannaiset, koliini, pyrro-lidinyylietanoli, piperidinyylietanoli, piperatsiinyy-·· lietanoli ja vastaavat normaali-propyyli- tai normaali-butyy- li-alkoholin johdannaiset, monotioetyleeniglykoli tai sen 25'. alkyylijohdannaiset, kuten merkaptaanifunktiossa oleva etyy-·. ; lijohdannainen.

Raskaammista, tyydyttyneistä, alifaattisista alkoholeista * ’ ovat edullisia setyylialkoholi ja myrisyylialkoholi, mutta 30 tämän keksinnön tarkoitusta varten ovat erityisen tärkeitä raskaammat, tyydyttymättömät alkoholit, joissa on yksi tai : kaksi kaksoissidosta, kuten erityisesti alkoholit, joita on monissa eteerisissä öljyissä ja terpeenin kaltaisissa aineis-··, sa, kuten sitronelloli, geranioli, neroli, nerolidoli, lina-35”’ looli, farnesoli ja fytoli. Tyydyttymättömistä, kevyemmistä \v alkoholeista on syytä tarkastella allyylialkoholeja ja pro-:“·* pargyylialkoholeja. Aralifaattisista alkoholeista ovat edul- 115954 10 lisiä ne, joissa on vain yksi bentseeniosa ja joiden alifaat-tisessa ketjussa on enintään 4 hiiliatomia ja joka bentseeniosa voi olla substituoitu 1-3 metyyli- tai hydroksyyliryhmällä tai halogeeniatomeilla, erityisesti kloorilla, bromilla 5 ja jodilla, ja joissa alifaattinen ketju voi olla substituoi tu vapailla amiiniryhmillä tai se voi olla mono-tai dimety-loiduilla tai substituoitu pyrrolidiini- tai piperidiiniryh-millä. Näistä alkoholeista edullisimpia ovat bentsyylialkoho- 11 ja fenetyylialkoholi.

10

Sykloalifaattisen tai alifaattis-sykloalifaattisen sarjan alkoholit voivat olla mono- tai polysyklisistä hiilivedyistä johdettua, niissä on edullisesti enintään 34 hiiliatomia, ne voivat olla substituoimattomia ja ne voivat sisältää yhden 15 tai useampia substituentteja, kuten sellaisia, joita edellä mainittiin alifaattisille alkoholeille. Syklisistä, yksiren-kaisista hiilivedyistä edullisia ovat ne, joissa on enintään 12 hiiliatomia, ja renkaissa on edullisesti 5-7 hiiliatomia, jotka voivat olla substituoituja esimerkiksi yhdestä 20 kolmeen kevyellä alkyyliryhmällä kuten metyyli, etyyli, propyyli- tai isopropyyliryhmillä. Tämän ryhmän erityisistä alkoholeista on edullisimpia seuraavat: sykloheksanoli, ··· sykloheksaanidioli, 1,2,3-sykloheksaanitrioli ja 1,3,5-syklo- heksaanitrioli (floroglusitoli) , inositoli ja p-metaanista 25,·, johdetut alkoholit kuten karvomentoli, mentoli ja a-yter-pineoli, 1-terpinoli, 4-terpinoli ja piperitoli tai näiden * alkoholien seos, joka tunnetaan nimellä "terpinoli", 1,4- ja ·;;; 1,8-terpiini. Alkoholeista, jotka on johdettu kondensoituja '·' ' renkaita sisältävistä hiilivedyistä, kuten thujaanista, 30 pinaanista tai komfäänistä, ovat edullisia seuraavat: thu- janoli, sabinoli, pinolihydraatti, D- ja L-borneoli ja D- ja : : : L-isoborneoli.

Tämän keksinnön estereitä varten käytettäviä alifaattis-35”' sykloalifaattisia polysyklisiä alkoholeja käytettäväksi ovat !,:,· steroli, koolihapot ja steroidit kuten sukupuolihormonit ja niiden synteettiset alkoholit, erityisesti kortikosteroidit 115954 11 ja niiden johdannaiset. Siten on mahdollista käyttää kolesterolia, divetykolesterolia, epidivetykolesterolia, kopros-tanoli, epikoprostanolia, sitosterolia, stigmasterolia, ergosterolia, koolihappoa, deoksikoolihappoa, litokoolihap-5 poa, estriolia, estradiolia, ekvileniiniä, ekviliiniä ja niiden alkylaattijohdannaisia kuten myös niiden etynyyli- ja propynyylijohdannaisia paikassa 17, kuten 17a-etynyyli-estra-dioli- tai 7a-metyyli- 17a-etynyyli-estradioli , pregnenoloni, pregnaanidioli, testosteroni ja sen johdannaiset kuten 17a-10 metyylitestosteroni, 1,2-dehydrotestosteroni ja 17a-metyyli- 1,2-dehydrotesteroni, testosteronin ja 1,2-dehydrotestostero-nin alkynylaattijohdannaiset paikassa 17, kuten 17a-etynyyli-testosteroni, 17a-propynyylitestosteroni, norgestreli, hyd-roksiprogesteroni, kortikosteroni, deoksikortikosteroni, 19-15 nortestosteroni, 19-nor-17a-metyylitestosteroni ja 19-nor- 17a-etynyylitestosteroni, antihormonit kuten cyproteroni, kortisoni, hydrokortisoni, prednisoni, prednisoloni, fluori-kortisoni, deksametasoni, beetametasoni, parametasoni, flume-tasoni, fluokinoloni, fluprednylideeni, klobeetasoli, beklo-20 metasoni, aldosteroni, deoksikortikosteroni, alfaksoloni, alfadoloni ja bolasteroni. Esteröivinä aineina tämän keksinnön estereille ovat käyttökelpoisia seuraavat: sydämen toi-·:* mintaan vaikuttavien glukosidien geniinit (aglykonit) , kuten digitoksigeniini, gitoksigeniini, digoksigeniini, strofanti-25.'. diini, tigogeniini ja saponiinit.

* Muita keksinnön mukaisesti käytettäviä alkoholeja ovat vita miinit kuten akseroftoli, D2- ja D3-vitamiinit, aneuriini, ' laktoflaviini, askorbiinihappo, riboflaviini, tiamiini ja 30 pantoteenihappo.

V * Heterosyklisistä hapoista voidaan seuraavassa lueteltavia pitää edellä mainittujen sykloalifaattisten tai alifaattis-,··. sykloalif aattisten alkoholien johdannaisina, jos niiden line- 35’” aarisen tai rengasrakenteisen ketjun katkaisee yksi tai useampi heteroatomi, esimerkiksi yhdestä kolmeen heteroato-’·'”· mia, jotka on esimerkiksi valittu ryhmästä, johon kuuluvat - 12 ι ηρχ κ 4

I I S vj *T

O-, -S-, -N- ja -NH-, ja näissä heterosyklisissä hapoissa voi olla yksi tai useampi tyydyttymätön sidos, esimerkiksi kak-soissidos, erityisesti yhdestä kolmeen kaksoissidosta, joten niihin kuuluvat myös aromaattisen rakenteen omaavat hetero-5 sykliset yhdisteet. Esimerkkeinä tulisi mainita seuraavat: furfuryylialkoholi, alkaloidit ja johdannaiset kuten atropii-ni, skopolamiini, kinkoniini, kinkonidiini, kiniini, morfiini, kodeiini, nalorfiini, N-butyyliskopolammoniumbromidi, ajmaliini; fenyylietyyliamiinit kuten efedriini, isoprote-10 renoli, epinefriini; fenotiatsiinilääkkeet kuten ferfenatsii- ni, pipotioatsiini, karfenatsiini, homofenatsiini, aseto-fenatsiini, fluofenatsiini ja N-hydroksietyyliprometatsiini-kloridi, tioksanteenilääkkeet kuten flupentiksoli ja klopen tiksoli; kouristuslääkkeet kuten meprofendioli; mielisairaus-15 lääkkeet kuten opipramoli; oksennuksen vastaiset lääkkeet kuten oksipendyyli, kipulääkkeet kuten karbetidiini ja feno-peridiini ja metadoli, unilääkkeet kuten etodroksitsiini; ruokahaluttomuuslääkkeet kuten bentsidroli ja difemetoksi-diini; lievät rauhoittavat lääkkeet kuten hydroksitsiini; 20 lihasrelaksantit kuten sinnamedriini, difylliini, mefenesii- ni, metokarbamoli, kloorifenesiini, 2,2-dietyyli-l,3-pro-paanidioli, guaifenesiini, hydrosilamidi; sepelvaltimoa laajentavat lääkkeet kuten dipyridamoli ja oksifedriini; beeta-reseptorin salpaajat kuten propanololi, timonoli, 25;'; pindololi, bupranololi, atenololi kuten 6-atsauridiini, : sytarabiini, floksuridiini; antibiootit kuten kloramfenikoli, tiamfenikoli, erytromysiini, oleandomysiini, linkomysiini; virusten vastaiset lääkkeet kuten isoksuridiini; ääreisverisuonia laajentavat lääkkeet kuten isonikotinyylialkoholi; 30 _ karbonianhydraasi-inhibiittorit kuten sulokarbilaatti; astma-ja tulehduslääkkeet kuten tiaramidi; sulfamidit kuten 2-p-’ ' sulf anilonoetanoli .

Joissakin tapauksissa voivat olla kiinnostavia sellaiset 35_· hyaluronihappoesterit, joissa esteriryhmät ovat peräisin ’kahdesta tai useammasta terapeuttisesti aktiivisesta, hydrok-syyliryhmiä sisältävästä aineesta ja luonnollisesti voidaan 11 r e, r 4 saada kaikkia mahdollisia muunnelmia. Erityisen kiinnostavia ovat aineet, joissa on kahden tyyppisiä, hydroksyyliluontei-sista lääkeaineista johdettuja, erilaisia esteriryhmiä ja joissa jäljellä olevat karboksyyliryhmät ovat vapaita, metal-5 lien tai emäksen avulla suoloiksi muutettuja, mahdollisesti myös emästen itsensä ollessa terapeuttisesti aktiivisia, esimerkiksi niillä on sama tai samanlainen aktiivisuus kuin esteröivällä yhdisteellä. Erityisesti ovat mahdollisia hyalu-ronihappoesterit, jotka on johdettu yhtäältä tulehduksen 10 vastaisesta steroidista, kuten joku edellä mainituista, ja toisaalta vitamiinista, alkaloidista tai antibiootista, kuten joku luetelluista.

Menetelmä keksinnön HY-estereiden valmistamiseksi 15 Menetelmä A:

Hyaluronihapon estereitä voidaan valmistaa sinänsä tunnetuilla menetelmillä karboksyylihappojen esteröimiseksi, esimerkiksi käsittelemällä vapaata hyaluronihappoa halutuilla alko-20 holeilla katalysoivien aineiden, kuten vahvojen epäorgaanisten happojen tai happotyyppisten ioninvaihtajien läsnäollessa, tai eetteröintlaineella, joka pystyy tuomaan halutun alkoholiosuuden epäorgaanisten tai orgaanisten emästen läsnä- ' » · ollessa. Esteröintiaineina on mahdollista käyttää kirjaili- » · · . 25 suudesta tunnettuja esteröintlaineita, kuten erityisesti f t t * » · ) \ erilaisten epäorgaanisten happojen tai orgaanisten sulfoni- * * k ’· ’· happojen estereitä, kuten hydrasideja eli hydrokarbyyli- ·...' halogenideja, kuten metyyli- tai etyylijodideja, tai neutraa- V · leja sulfaatteja tai hydrokarbyylihappoja, -alfiitteja, 30 -karbonaatteja, -silikaatteja, -fosfiitteja tai hydrokarbyy-j lisulfonaatteja kuten metyylibentseeni- tai p-tolueenisul- fonaattia tai metyyli- tai etyylikloorisulfonaattia. Reaktio . \ voi tapahtua sopivassa liuottimessa, esimerkiksi alkoholissa, ;;/ edullisesti sellaisessa, joka vastaa karboksyy li ryhmään ';·* 35 liitettävää a 1 kyy li ryhmää. Mutta reaktio voi tapahtua myös : ei-polaarisissa liuottimissa, kuten ketoneissa, eettereissä, '·,· kuten dioksaani, tai aproottisissa liuottimissa kuten dime- 14 1TES54 tyylisulfoksidi. Emäksenä on mahdollista käyttää esimerkiksi alkali- tai maa-alkalimetallihydraattia tai magnesium- tai hopeaoksidia tai jonkun näistä metalleista emäksistä suolaa kuten karbonaattia, ja orgaanisista emäksistä tertiääristä, 5 typpipitoista emästä kuten pyridiiniä tai kollidiinia. Emäk sen tilalta on myös mahdollista käyttää emästyyppistä ionin-vaihtajaa.

Toisessa esteröintimenetelmässä käytetään metallisuoloja tai 10 orgaanisten, typpipitoisten emästen suoloja, esimerkiksi ammoniumsuoloja tai ammoniumsubstituoituja suoloja. Edullisesti käytetään alkali- tai maa-alkalimetallien suoloja, mutta myös mitä tahansa muita metallisuoloja voidaan käyttää. Esteröintiaineita ovat myös tässä tapauksessa edellä mainitut 15 esteröintiaineet ja sama koskee myös liuottimia. On edullista käyttää aproottisia liuottimia, esimerkiksi dimetyylisulfok-sidia ja dimetyyliformamidia.

Tämän menettelytavan tai muiden, jäljempänä kuvattavien me-20 nettelytapojen mukaisesti saatavissa estereissä voidaan vapaat karboksyyliryhmät haluttaessa muuttaa suoloiksi sinänsä tunnetulla tavalla.

* alt·

Menetelmä B: 2.5/.

,·.; Hyaluroniestereitä voidaan myös valmistaa menetelmällä, jossa käsitellään hyaluronihapon kvaternaarinen ammoniumsuola eet- * teröintiaineella, edullisesti aproottisessa orgaanisessa 1 * · • liuottimessa.

30

Orgaanisina liuottimina on edullista käyttää aproottisia V * liuottimia kuten dialkyylisulfoksideja, dialkyylikarboksami-deja kuten erityisesti kevytalkyylisiä dialkyylisulfoksideja, » · · (··*, erityisesti dimetyylisulfoksidia ja kevyiden alifaattisten 35”·’ happojen kevytalkyylisiä alkyylidialkyyliamideja, kuten dime- tyyli- tai dietyyliformamidia tai dimetyyli- tai dietyyliase-tamidia.

15 1 ire

On myös otettava huomioon muut liuottimet, jotka eivät aina ole aproottisia kuten alkoholit, eetterit, ketonit, esterit, erityisesti alifaattiset tai heterosykliset alkoholit ja ketonit, joilla on alhainen kiehumispiste kuten heksafluori-5 isopropanoli, trifluorietanoli ja N-metyylipyrrolidoni.

Reaktio suoritetaan edullisesti lämpötila-alueella, joka on noin 0 °C - 100 *C, erityisesti noin 25 °C - 75 *C, esimerkiksi noin 30 *C.

10

Esteröinti suoritetaan edullisesti lisäämällä vähitellen esteröintiainetta edellä mainittuun ammoniumsuolaan jossakin edellä mainituista liuottimista, esimerkiksi dimetyylisulfok-sidissa.

15

Alkylointlaineena on mahdollista käyttää edellä mainittuja alkylointiaineita, erityisesti hydrokarbyylihalogeeneja, esimerkiksi alkyylihalogeeneja. Kvaternaarisina ammonium- suola-lähtöaineina on edullista käyttää kevyitä ammoniumtet- 20 ra-alkylaatteja, joiden alkyyliryhmissä on edullisesti 1-6 hiiliatomia. Useimmiten käytetään tetrabutyyliammoniumin hyaluronaattia. On mahdollista valmistaa näitä kvaternaarisia ammoniumsuoloja antamalla hyaluronihapon metallisuolan, edul- lisesti jonkun edellä mainituista, erityisesti natrium- tai 25.'. kaliumsuolan, reagoida vesiliuoksessa kvaternaarisen ammo- ,·, : niumemäksen kanssa suolamuotoon saatetun sulfonihartsin * * · kanssa.

» > t • * ♦ ‘ Eräässä aiemmin kuvatun menettelytavan muunnelmassa hyalu- 30 _ ronihapon kalium- tai natriumsuolan annetaan sopivaan liuok- seen kuten dimetyylisulfoksidiin suspentoituna reagoida sopi-· van alkylointiaineen kanssa, kun läsnä on katalyyttisiä mää- » .·. riä kvaternaarista ammoniumsuolaa kuten tetrabutyyliammonium-/’·. jodidia.

Hyaluronihappoestereiden valmistamiseksi on mahdollista käyt-: tää mitä tahansa alkuperää olevia hyaluronihappoja kuten 35 115954 16 esimerkiksi happoja, jotka on uutettu edellä mainituista luonnon raaka-aineista kuten kukonharjoista. Sellaisten happojen valmistusta on kuvattu kirjallisuudessa: edullisesti käytetään puhdistettuja hyaluronihappoja. Erityisesti käyte-5 tään hyaluronihappoja, jotka sisältävät sellaisia integraali- happojen molekyylifraktioita, jotka on saatu suoraan uuttamalla orgaanisia aineita, joiden moolimassa vaihtelee laajalla alueella, esimerkiksi arvosta noin 90 % - 80% (moolimassa = 11,7 - 10, 4 miljoonaa) arvoon 0,2 % (moolimassa = 30 000) 10 integraalihapon moolimassasta, joka on 13 miljoonaa, edulli sesti 5 - 0,2 %. Sellaisia fraktioita voidaan valmistaa erilaisilla kirjallisuudessa kuvatuilla menettelytavoilla, kuten hydrolysoimalla, hapettamalla, entsymaattisilla tai fysikaalisilla menettelytavoilla kuten mekaanisilla tai säteilytys-15 käsittelyillä. Alkeisuutteet muodostuvat siten usein näiden samojen menettelyjen aikana julkaisujen menettelyissä (katso esimerkiksi Balazs'n et ai. artikkeli, jota on siteerattu edellä luvussa "Cosmetics Sc Toiletries"). Saatujen molekyyli-fraktioiden erotus ja puhdistus tehdään tunnettuja tekniikko-20 ja käyttäen, esimerkiksi molekyylisuodatuksella.

Lisäksi hyödyllisiä ovat hyaluronihaposta saatavat puhdiste- * tut fraktiot, kuten sellaiset, joita on kuvattu eurooppalai-,T: sessa patenttijulkaisussa nro. 0138572.

HY:n muuntaminen suolaksi edellä mainittujen metallien kanssa r # lähtöainesuolojen valmistamiseksi edellä kuvattua, yksittäis- t tä esteröintimenetelmää varten suoritetaan sinänsä tunnetulla , t « • * * * tavalla, esimerkiksi antamalla HY:n reagoida lasketun määrän 30 t kanssa emästä, esimerkiksi alkalihydraattien tai sellaisten «tr ···! metallien emäksisten suolojen, kuten karbonaattien tai bikar-V '* bonaattien kanssa.

» i f ··*, Osittaisestereissä on mahdollista muuntaa suoloiksi kaikki t » 35 ’ jäljellä olevat karboksyyliryhmät tai vain osa niistä, annos- telemalla emästen määrä siten, että saadaan toivottu, stoi- kiometrinen suolanmuodostumisaste. Oikealla suolanmuodostu- 17 115554 misasteella on mahdollista saada estereitä, joiden dissosiaa-tiovakio vaihtelee laajalla välillä ja jotka sen vuoksi tuottavat toivotun pH:n, liuoksessa tai in situ terapeuttisen käytön aikaan.

5

Valmistusesimerkit:

Seuraavassa valaistaan esimerkeillä tämän keksinnön mukaan aikaansaaduissa komposiittimembraaneissa käyttökelpoisten 10 hyaluronihappoestereiden valmistusta.

Esimerkki 1 - Hyaluronihapon (HY) (osittais) -propwliesterin valmistus 15 -50 % esteröityjä karboksyyliryhmiä -50 % suolaksi muunnettuja karboksyyliryhmiä (Na) 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka moolimassa on 170000 vastaten 20 m.Eq. monomeeriyksikköä, liuotetaan 620 ml 20 dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 1,8 g (10,6 m.Eq.) propyylijodidia ja tuloksena saatua liuosta pidetään 30 °C:n , lämpötilassa 12 tunnin ajan.

» » · ’·’ ' Lisätään liuos, joka sisältää 62 ml vettä ja 9 g natriumklo- '·*.* 25 ridia, ja tuloksena saatu seos kaadetaan hitaasti 3500 milli- • · ·.*·· litraan asetonia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu saostuma, „'·* joka suodatetaan ja pestään kolme kertaa 500 millilitralla asetoni/vesi-seosta (5:1) ja kolme kertaa asetonilla ja lopuksi tyhjökuivataan kahdeksan tunnin ajan 30 °C:ssa.

I.:’: 30

Tuote liuotetaan sitten 550 millilitraan vettä, joka sisältää 1 % natriumkloridia ja liuos kaadetaan hitaasti 3000 millilitraan asetonia koko ajan sekoittaen. Muodostuu saos-*··' tuma, joka suodatetaan ja pestään kahdesti 500 millilitralla *· 35 asetoni/vesi-seosta (5:1) ja kolme kertaa 500 millilitralla asetonia ja lopuksi tyhjökuivataan 24 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Saadaan 7,9 g otsikon osittaispropyyliesteriyhdistettä.

II vJ ^ *T

Esteriryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan käyttäen R.H. Cundiffin ja P.C. Markunas'n menetelmää [Anal. Chem. 33 (1961)1028 - 1030].

5 Esimerkki 2 - Hyaluronihapon (HY) (osittais)-isopropyylieste-rin valmistus - 50 % esteröityjä karboksyyliryhmiä - 50 % suolaksi muunnettuja karboksyyliryhmiä (Na) 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka moolimassa on 10 160000 vastaten 20 m.Eg. monomeeriyksikköä, liuotetaan 620 millilitraan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 1,8 g (10,6 m.Eq.) isopropyylijodidia ja tuloksena saatavaa liuosta pidetään 12 tunnin ajan 30 °C:ssa.

15 Lisätään liuos, joka sisältää 62 ml vettä ja 9 g natriumklo-ridia, ja tuloksena saatu seos kaadetaan hitaasti 3500 milli-litraan asetonia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu saostuma, joka suodatetaan ja pestään kolme kertaa 500 millilitralla asetoni/vesi-seosta (5:1) ja kolme kertaa asetonilla ja lo-20 puksi tyhjökuivataan kahdeksan tunnin ajan 30 °C:ssa.

Tuote liuotetaan sitten 550 millilitraan vettä, joka sisältää 1 % natriumkloridia ja liuos kaadetaan hitaasti 3000 milli- • i * :·. litraan asetonia koko ajan sekoittaen. Muodostuu saostuma, 25 joka suodatetaan ja pestään kahdesti 500 millilitralla

• « I

asetoni/vesi-seosta (5:1) ja kolme kertaa 500 millilitralla * / asetonia ja lopuksi tyhjökuivataan 24 tunnin ajan 30 °C:ssa.

·>·: Saadaan 7,8 g otsikon osittaisisopropyyliesteriyhdistettä.

t · · V * Esteriryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan käyttäen 30 R.H. Cundiffin ja P.C. Markunas'n menetelmää [Anal. Chem. 33 f,:’: (1961) 1028 - 1030] .

»· » • · • · i · 115954 19

Esimerkki 3 - Hvaluronihapon (HY) (osittais)-etwliesterin valmistus - 75 % esteröityiä karboksvvlirvhmiä - 25 % suolaksi muunnettuna karboksvvlirvhmiä (Na) 5 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka moolimassa on 250000 vastaten 20 m.Eq. monomeeriyksikköä, liuotetaan 620 millilitraan dimetyylisulfoksidia 25 “C:ssa, lisätään 2,5 g (15,9 m.Eq.) etyylijodidia ja tuloksena saatavaa liuosta pidetään 12 tunnin ajan 30 'C:ssa.

10

Lisätään liuos, joka sisältää 62 ml vettä ja 9 g natriumklo-ridia, ja tuloksena saatu seos kaadetaan hitaasti 3500 milli-litraan asetonia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu saostuma, joka suodatetaan ja pestään kolme kertaa 500 millilitralla 15 asetoni/vesi-seosta (5:1) ja kolme kertaa asetonilla ja lopuksi tyhjökuivataan kahdeksan tunnin ajan 30 "C:ssa.

Tuote liuotetaan sitten 550 millilitraan vettä, joka sisältää 1 % natriumkloridia, ja liuos kaadetaan hitaasti 3000 milli-20 litraan asetonia koko ajan sekoittaen. Muodostuu saostuma, joka suodatetaan ja pestään kahdesti 500 millilitralla asetoni/vesi-seosta (5:1) ja kolme kertaa 500 millilitralla asetonia ja lopuksi tyhjökuivataan 24 tunnin ajan 30 *C:ssa.

Saadaan 7,9 g otsikon osittaisetyyliesteriyhdistettä. Esteri- 25/,! ryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan käyttäen R.H.

• · · ’ Cundiffin ja P.C. Markunas'n menetelmää [Anal. Chem. 33 ly' (1961) 1028 - 1030] .

• · ...i‘ Esimerkki 4 - Hvaluronihapon (HY) (osittais)-metvvliesterin 3 9/ - valmistus - 75 % esteröitviä karboksyvlirvhmiä - 25 % suolak si muunnettuja karboksvvlirvhmiä (Na) 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka moolimassa on 80000 vastaten 20 m.Eq. monomeeriyksikköä, liuotetaan 620 35·**' millilitraan dimetyylisulf oksidia 25 *C:ssa, lisätään 2,26 g (15,9 m.Eq.) metyylijodidia ja tuloksena saatavaa liuosta , V. pidetään 12 tunnin ajan 30 *C:ssa.

115954 20

Lisätään liuos, joka sisältää 62 ml vettä ja 9 g natriumklo-ridia, ja tuloksena saatu seos kaadetaan hitaasti 3500 milli-litraan asetonia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu saostuma, joka suodatetaan ja pestään kolme kertaa 500 millilitralla 5 asetoni/vesi-seosta (5:1) ja kolme kertaa asetonilla ja lopuksi tyhjökuivataan kahdeksan tunnin ajan 30 *C:ssa.

Tuote liuotetaan sitten 550 millilitraan vettä, joka sisältää 1 % natriumkloridia ja liuos kaadetaan hitaasti 3000 milli-10 litraan asetonia koko ajan sekoittaen. Muodostuu saostuma, joka suodatetaan ja pestään kahdesti 500 millilitralla asetoni/vesi-seosta (5:1) ja kolme kertaa 500 millilitralla asetonia ja lopuksi tyhjökuivataan 24 tunnin ajan 30 ‘C:ssa.

Saadaan 7,8 g otsikon osittaismetyyliesteriyhdistettä. Este-15 riryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan käyttäen R.H.

Cundiffin ja P.C. Markunas'n menetelmää [Anal. Chem. 33 (1961) 1028 - 1030].

Esimerkki 5 - Hvaluronihapon (HY) metvvliesterin valmistus 20 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka moolimassa on 120000 vastaten 20 m.Eq. monomeeriyksikköä, liuotetaan 620 millilitraan dimetyylisulfoksidia 25 *C:ssa, lisätään 3 g . (21,2 m.Eq.) metyylijodidia ja liuosta pidetään 12 tunnin 25;;; ajan 3 0 ’C:ssa.

• t · • · ·

Tuloksena saatava liuos kaadetaan hitaasti 3500 millilitraan etyyliasetaattia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu saostuma, joka suodatetaan ja pestään neljä kertaa 500 millilitralla 30 etyyliasetaattia ja lopuksi tyhjökuivataan kahdenkymmenennel- jän tunnin ajan 30 *C:ssa.

Saadaan 8 g otsikon etyyliesterituotetta. Esteriryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan käyttäen R.H. Cundiffin 35.V ja P.C. Markunas'n menetelmää [Anal. Chem. 33 (1961) 1028 - 1030] .

115554 21

Esimerkki 6 - Hvaluronihapon (HY) metvvliesterin valmistus 12.4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka moolimassa on 85000 vastaten 20 m.Eq. monomeeriyksikköä, liuotetaan 620 5 millilitraan dimetyylisulfoksidia 25 *C:ssa, lisätään 3,3 g (21,2 m.Eq.) etyylijodidia ja liuosta pidetään 12 tunnin ajan 30 ’C:ssa.

Tuloksena saatava liuos kaadetaan hitaasti 3500 millilitraan 10 etyyliasetaattia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu saostuma, joka suodatetaan ja pestään neljä kertaa 500 millilitralla etyyliasetaattia ja lopuksi tyhjökuivataan kahdenkymmenennel-jän tunnin ajan 30 *C:ssa.

15 Saadaan 8 g otsikon etyyliesterituotetta. Esteriryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan käyttäen R.H. Cundiffin ja P.C. Markunas'n menetelmää [Anal. Chem. 33 (1961) 1028 -1030] .

20 Esimerkki 7 - Hvaluronihapon (HY) propvvliesterin valmistus 12.4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka moolimassa on 170000 vastaten 20 m.Eq. monomeeriyksikköä, liuotetaan 620 . millilitraan dimetyylisulfoksidia 25 ‘C:ssa, lisätään 3,6 g 25;;; (21,2 m.Eq.) propyylijodidia ja liuosta pidetään 12 tunnin ‘ ajan 30 ’C:ssa.

t·» ·,’·! Tuloksena saatava liuos kaadetaan hitaasti 3500 millilitraan etyyliasetaattia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu saostuma, 3®:’: joka suodatetaan ja pestään neljä kertaa 500 millilitralla etyyliasetaattia ja lopuksi tyhjökuivataan kahdenkymmenennel-jän tunnin ajan 3 0 *C:ssa.

Saadaan 8,3 g otsikon propyyliesterituotetta. Esteriryhmien 35.V kvantitatiivinen määritys suoritetaan käyttäen R.H. Cundiffin ja P.C. Markunas'n menetelmää [Anal. Chem. 33 (1961) 1028 -1030] .

115554 22

Esimerkki 8 - Hvaluronihapon (HY) (osittais)-butvvliesterin valmistus - 50 % esteröitviä karboksvvlirvhmiä - 50 % suolaksi muunnettuja karboksvvlirvhmiä (Na) 5 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka moolimassa on 620000 vastaten 20 m.Eq. monomeeriyksikköä, liuotetaan 620 millilitraan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 1,95 g (10,6 m.Eq.) n-butyylijodidia ja tuloksena saatavaa liuosta pidetään 12 tunnin ajan 30 °C:ssa.

10

Liuos, joka sisältää 62 ml vettä ja 9 g natriumkloridia, lisätään ja tuloksena saatu seos kaadetaan hitaasti 3500 millilitraan asetonia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu saostuma, joka suodatetaan ja pestään kolme kertaa 500 millilit-15 ralla asetoni/vesi-seosta (5:1) ja kolme kertaa asetonilla ja lopuksi tyhjökuivataan kahdeksan tunnin ajan 30 °C:ssa.

Tuote liuotetaan sitten 550 millilitraan vettä, joka sisältää 1 % natriumkloridia ja liuos kaadetaan hitaasti 3000 milli-20 litraan asetonia koko ajan sekoittaen. Muodostuu saostuma, joka suodatetaan ja pestään kahdesti 500 millilitralla aseto-ni/vesi-seosta (5:1) ja kolme kertaa 500 millilitralla asetonia ja lopuksi tyhjökuivataan 24 tunnin ajan 30 *C:ssa.

. Saadaan 8 g otsikon osittaisbutyyliesteriyhdistettä. Esteri- 25;;; ryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan käyttäen R.H.

• · » *>’ Cundiffin ja P.C. Markunas'n menetelmää [Anal. Chem. 33 V.: (1961) 1028 - 1030] .

Esimerkki 9 - Hvaluronihapon (HY) (osittais) -etoksikarbonvv-30 .·’: limetwliesterin valmistus - 75 % esteröitviä karboksvvlirvh miä - 25 % suolaksi muunnettuja karboksvvlirvhmiä (Na) 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka moolimassa on • 180000 vastaten 20 m.Eq. monomeeriyksikköä, liuotetaan 620 35.'.' millilitraan dimetyylisulfoksidia 25 ’C:ssa, lisätään 2 g tetrabutyyliammoniumjodidia ja 1,84 g (15 m.Eq.) etyylikloo- 23 11ES54 riasetaattia ja tuloksena saatavaa liuosta pidetään 24 tunnin ajan 30 *C:ssa.

Liuos, joka sisältää 62 ml vettä ja 9 g natriumkloridia, 5 lisätään ja tuloksena saatu seos kaadetaan hitaasti 3500 millilitraan asetonia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu saostuma, joka suodatetaan ja pestään kolme kertaa 500 millilit-ralla asetoni/vesi-seosta (5:1) ja kolme kertaa asetonilla ja lopuksi tyhjökuivataan kahdeksan tunnin ajan 30 *C:ssa.

10

Tuote liuotetaan sitten 550 millilitraan vettä, joka sisältää 1 % natriumkloridia ja liuos kaadetaan hitaasti 3000 milli-litraan asetonia koko ajan sekoittaen. Muodostuu saostuma, joka suodatetaan ja pestään kahdesti 500 millilitralla aseto-15 ni/vesi-seosta (5:1) ja kolme kertaa 500 millilitralla aseto nia ja lopuksi tyhjökuivataan 24 tunnin ajan 30 *C:ssa. Saadaan 10 g otsikon osittaisetoksikarbonyylimetyyliesteriyh-distettä.

20 Esteriryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan käyttäen R.H. Cundiffin ja P.C. Markunas'n menetelmää [Anal. Chem. 33 (1961) 1028 - 1030].

. Esimerkki 10 - Hvaluronihapon (HY) n-pentwliesterin valmis- 2 s;;; tus « > · 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka moolimassa on 620000 vastaten 20 m.Eq. monomeeriyksikköä, liuotetaan 620 millilitraan dimetyylisulfoksidia 25 *C:ssa, lisätään 3,8 g i > * 3Q ! : (25 m. Eq.) n-pentyylijodidia ja 0,2 g tetrabutyyliammonium- jodidia ja liuosta pidetään 12 tunnin ajan 30 *C:ssa.

Tuloksena saatava seos kaadetaan hitaasti 3500 millilitraan etyyliasetaattia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu saostuma, 35'·'>· joka suodatetaan ja pestään neljä kertaa 500 millilitralla ’·...· etyyliasetaattia ja lopuksi tyhjökuivataan kahdenkymmenennel- jän tunnin ajan 30 *C:ssa.

115954 24

Saadaan 8,7 g otsikon n-pentyyliesterituotetta. Esteriryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan käyttäen julkaisussa Siggia, S. ja Hann, J.G., "Quantitative organic analysis via functional groups", 4. painos, John Wiley & Sons, sivuilla 5 169 - 172, kuvattua menetelmää.

Esimerkki 11 - Hvaluronihapon (HY) isopentwliesterin valmistus 10 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka moolimassa on 170000 vastaten 20 m.Eq. monomeeriyksikköä, liuotetaan 620 millilitraan dimetyylisulfoksidia 25 ’C:ssa, lisätään 3,8 g (25 m.Eq.) isopentyylibromidia ja 0,2 g tetrabutyyliammonium-jodidia ja liuosta pidetään 12 tunnin ajan 30 *C:ssa.

15

Tuloksena saatava seos kaadetaan hitaasti 3500 millilitraan etyyliasetaattia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu saostuma, joka suodatetaan ja pestään neljä kertaa 500 millilitralla etyyliasetaattia ja lopuksi tyhjökuivataan kahdenkymmenennel-20 jän tunnin ajan 30 "C:ssa.

Saadaan 8,6 g otsikon isopentyyliesterituotetta. Esteriryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan julkaisussa Siggia, S. ja Hann, J.G., "Quantitative organic analysis via func- 25” tional groups", 4. painos, John Wiley & Sons, sivuilla 169 -• ' * ’ 172, kuvatun menetelmän mukaisesti.

► · · ;. ’: Esimerkki 12 - Hvaluronihapon (HY) bentsvyliesterin valmistus « 38J .* 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka moolimassa on 170000 vastaten 20 m.Eq. monomeeriyksikköä, liuotetaan 620 J. millilitraan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 4,5 g (25 m.Eq.) bentsyylibromidia ja 0,2 g tetrabutyyliammoniumjo-didia ja liuosta pidetään 12 tunnin ajan 30 ’C:ssa.

35·V

Tuloksena saatava seos kaadetaan hitaasti 3500 millilitraan etyyliasetaattia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu saostuma, 115954 25 joka suodatetaan ja pestään neljä kertaa 500 millilitralla etyyliasetaattia ja lopuksi tyhjökuivataan kahdenkymmenennel-jän tunnin ajan 30 *C:ssa.

5 Saadaan 9 g otsikon bentsyyliesterituotetta. Esteriryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan julkaisussa Siggia, S. ja Hann, J.G., "Quantitative organic analysis via functional groups", 4. painos, John Wiley & Sons, sivuilla 169 - 172, kuvatun menetelmän mukaisesti.

10

Esimerkki 13 - Hvaluronihaoon (HY) β-fenwlietwliesterin valmistus 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka moolimassa on 15 125000 vastaten 20 m.Eq. monomeeriyksikköä, liuotetaan 620 millilitraan dimetyylisulfoksidia 25 *C:ssa, lisätään 4,6 g (25 m.Eq.) 2-bromietyylibentseeniä ja 185 mg tetrabutyyliam-moniumjodidia ja liuosta pidetään 12 tunnin ajan 30 ’C:ssa.

20 Tuloksena saatava seos kaadetaan hitaasti 3500 millilitraan etyyliasetaattia jatkuvasti sekoittaen. Siten muodostuu saostuma, joka suodatetaan ja pestään neljä kertaa 500 milli-litralla etyyliasetaattia ja lopuksi tyhjökuivataan kahden-kymmenenneljän tunnin ajan 30 “C:ssa.

2s;: • » t , Saadaan 9,1 g otsikon β-fenyylietyyliesteriä. Esteriryhmien « i * kvantitatiivinen määritys suoritetaan julkaisussa Siggia, S.

*. ”> ja Hann, J.G., "Quantitative organic analysis via functional groups", 4. painos, John Wiley & Sons, sivuilla 168 - 172,

* > I

3®/ ! kuvatun menetelmän mukaisesti.

·<< Esimerkki 14 - Hvaluronihaoon (HY) bentsyyliesterin valmistus 3 g HY:n kaliumsuolaa, jonka moolimassa on 162000 suspentoi-35·'*' daan 200 millilitraan dimetyylisulfoksidia 25 *C:ssa, lisä-tään 120 mg tetrabutyyliammoniumjodidia ja 2,4 g bentsyyli-bromidia.

26 11 p;c^4

Suspensiota pidetään sekoituksessa 48 tunnin ajan 30 *C:ssa. Tuloksena saatava seos kaadetaan hitaasti 1000 millilitraan etyyliasetaattia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu saostuma, joka suodatetaan ja pestään neljä kertaa 150 millilitralla 5 etyyliasetaattia ja lopuksi tyhjökuivataan kahdenkymmenennel- jän tunnin ajan 30 "C-.ssa.

Saadaan 3,1 g otsikon bentsyyliesterituotetta. Esteriryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan julkaisussa Siggia, S.

10 ja Hann, J.G., "Quantitative organic analysis via functional groups", 4. painos, John Wiley & Sons, sivuilla 169 - 172, kuvatun menetelmän mukaisesti.

Esimerkki 15 - Hvaluronihaoon (HY) (osittaisoropyyli)esterin 15 valmistus - 85 % esteröitviä karboksvvlirvhmiä - 15 % suolak si muutettuja karboksvvlirvhmiä (Na) 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaan, jonka moolimassa on 1651000 vastaten 20 m.Eq. monomeeriyksikköä, liuotetaan 620 20 millilitraan dimetyylisulfoksidia 25 *C:ssa, lisätään 2,9 g (17 m.Eq.) propyylijodidia ja tuloksena saatua liuosta pidetään 12 tunnin ajan 30 ’C:ssa.

, Lisätään sitten liuos, joka sisältää 62 ml vettä ja 9 g < » » 25;;: natriumkloridia ja tuloksena saatu seos kaadetaan hitaasti f · ’ 3500 millilitraan asetonia koko ajan sekoittaen. Muodostuu « * * V,* saostuma, joka suodatetaan ja pestään kolme kertaa 500 milli- • i litralla asetoni/vesi-seosta (5:1) ja kolme kertaa asetonilla ja lopuksi tyhjökuivataan kahdeksan tunnin ajan 30*C:ssa.

3®:’;

Tuote liuotetaan sitten 550 millilitraan vettä, joka sisältää 1 % natriumkloridia ja liuos kaadetaan hitaasti 3000 ml » u • > t asetonia koko ajan sekoittaen. Muodostuu saostuma, joka t t t suodatetaan ja pestään kahdesti 500 ml asetoni/vesi-seosta 3 5.’.' (5:1) ja kolme kertaa 500 ml asetomia ja lopuksi tyhjökuiva- * taan 24 tunnin ajan 3 0 *C:ssa. Saadaan 8 g osittaispropyy- , liesteriyhdistettä. Esteriryhmien kvantitatiivinen määritys t 115954 27 suoritetaan käyttäen R.H. Cundiffin ja P.C. Markunas'n menetelmää [Anal. Chem. 33 (1961) 1028 - 1030].

Esimerkki 16 - Hyaluronihapon (HY) n-oktwliesterin valmistus 5 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka moolimassa on 170000 vastaten 20 m.Eq. monomeeriyksikköä, liuotetaan 620 millilitraan dimetyylisulfoksidia 25 eC:ssa, lisätään 4,1 g (21,2 m.Eq.) 1-bromioktaania ja liuosta pidetään 12 tunnin 10 ajan 30 ’C:ssa.

Tuloksena saatava seos kaadetaan hitaasti 3500 millilitraan etyyliasetaattia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu saostuma, joka suodatetaan ja pestään neljä kertaa 500 millilitralla 15 etyyliasetaattia ja lopuksi tyhjökuivataan kahdenkymmenennel- jän tunnin ajan 30 ’C:ssa. Saadaan 9,3 g otsikon oktyylieste-rituotetta. Esteriryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan käyttäen julkaisussa Siggia, S. ja Hann, J.G., "Quantitative organic analysis via functional groups", 4. painos, 20 John Wiley & Sons, sivuilla 169 - 172, kuvattua menetelmää.

Esimerkki 17 - Hyaluronihapon (HY) isopropwliesterin valmis-··· tus 25·. 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka moolimassa on « · < 170000 vastaten 20 m.Eq. monomeeriyksikköä, liuotetaan 620 millilitraan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 2,6 g *;;; (21,2 m.Eq.) isopropyylibromidia ja liuosta pidetään 12 *·’ ’ tunnin ajan 30 °C:ssa.

30

Tuloksena saatava seos kaadetaan hitaasti 3500 millilitraan V : etyyliasetaattia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu saostuma, ,·.·. joka suodatetaan ja pestään neljä kertaa 500 millilitralla !.! etyyliasetaattia ja lopuksi tyhjökuivataan kahdenkymmenennel- 31}· jän tunnin ajan 3 0 °C:ssa. Saadaan 8,3 g otsikon isopropyy- liesterituotetta. Esteriryhmien kvantitatiivinen määritys 115954 28 suoritetaan käyttäen R.H. Cundiffin ja P.C. Markunas'n menetelmää [Anal. Chew. 33 (1961) 1028 - 1030],

Esimerkki 18 - Hvaluronihapon (HY) 2.6-diklooribentswlieste-5 rin valmistus 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka moolimassa on 170000 vastaten 20 m.Eq. monomeeriyksikköä, liuotetaan 620 millilitraan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 5,08 g 10 (21,2 m.Eq.) 2,6-diklooribentsyylibromidia ja liuosta pide tään 12 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Tuloksena saatava seos kaadetaan hitaasti 3500 millilitraan etyyliasetaattia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu saostuma, 15 joka suodatetaan ja pestään neljä kertaa 500 millilitralla etyyliasetaattia ja lopuksi tyhjökuivataan kahdenkymmenennel-jän tunnin ajan 30 °C:ssa. Saadaan 9,7 g otsikon 2,6-dikloo-ribentsyyliesterituotetta. Esteriryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan käyttäen julkaisussa Siggia, S. ja Hann, 20 J.G., "Quantitative organic analysis via functional groups", 4. painos, John Wiley & Sons, sivuilla 169 - 172, kuvattua menetelmää.

.*:*. Esimerkki 19 - Hvaluronihapon (HY) 4-tertbutwlibentswlies- 2*5·. terin valmistus < » · .* 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka moolimassa on 170000 vastaten 20 m.Eq. monomeeriyksikköä, liuotetaan 620 ·’ ’ millilitraan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 4,81 g 30 (21,2 m.Eq.) 4-tertbutyylibentsyylibromidia ja liuosta pide- tään 12 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Tuloksena saatava seos kaadetaan hitaasti 3500 millilitraan ,···. etyyliasetaattia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu saostuma, 35’ joka suodatetaan ja pestään neljä kertaa 500 millilitralla \V etyyliasetaattia ja lopuksi tyhjökuivataan kahdenkymmenennel- Ί·'· jän tunnin ajan 30 °C:ssa. Saadaan 9,8 g otsikon 4-tertbutyy- 29 111954 liesterituotetta. Esteriryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan käyttäen julkaisussa Siggia, S. ja Hann, J.G., "Quantitative organic analysis via functional groups", 4. painos, John Wiley & Sons, sivuilla 169 - 172, kuvattua mene-5 telmää.

Esimerkki 20 - Hvaluronihapon (HY) heptadekwliesterin valmistus 10 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka moolimassa on 170000 vastaten 20 m.Eq. monomeeriyksikköä, liuotetaan 620 millilitraan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 6,8 g (21,2 m.Eq.) heptadekyylibromidia ja liuosta pidetään 12 tunnin ajan 30 °C:ssa.

15

Tuloksena saatava seos kaadetaan hitaasti 3500 millilitraan etyyliasetaattia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu saostuma, joka suodatetaan ja pestään neljä kertaa 500 millilitralla etyyliasetaattia ja lopuksi tyhjökuivataan kahdenkymmenennel- 20 jän tunnin ajan 30 °C:ssa. Saadaan 11 g otsikon heptadekyy- liesterituotetta. Esteriryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan käyttäen julkaisussa Siggia, S. ja Hann, J.G., ·· "Quantitative organic analysis via functional groups", 4.

.’l‘. painos, John Wiley & Sons, sivuilla 169 - 172, kuvattua mene- 25". telmää.

» * »

Esimerkki 21 - Hvaluronihapon (HY) oktadekwliesterin val-;;; mistus 30 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka moolimassa on 170000 vastaten 20 m.Eq. monomeeriyksikköä, liuotetaan 620 V : millilitraan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 7,1 g (21,2 m.Eq.) oktadekyylibromidia ja liuosta pidetään 12 (.( tunnin ajan 3 0 °C:ssa.

35*‘ v,: Tuloksena saatava seos kaadetaan hitaasti 3500 millilitraan etyyliasetaattia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu saostuma, 115954 30 joka suodatetaan ja pestään neljä kertaa 500 millilitralla etyyliasetaattia ja lopuksi tyhjökuivataan kahdenkymmenennel-jän tunnin ajan 30 °C:ssa. Saadaan 11 g otsikon oktadekyy-liesterituotetta. Esteriryhmien kvantitatiivinen määritys 5 suoritetaan käyttäen julkaisussa Siggia, S. ja Hann, J.G., "Quantitative organic analysis via functional groups", 4. painos, John Wiley & Sons, sivuilla 169 - 172, kuvattua menetelmää .

10 Esimerkki 22 - Hvaluronihaoon (HY) 3-fenwliproowliesterin valmistus 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka moolimassa on 170000 vastaten 20 m.Eq. monomeeriyksikköä, liuotetaan 620 15 millilitraan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 4,22 g (21,2 m.Eq.) 3-fenyylipropyylibromidia ja liuosta pidetään 12 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Tuloksena saatava seos kaadetaan hitaasti 3500 millilitraan 20 etyyliasetaattia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu saostuma, joka suodatetaan ja pestään neljä kertaa 500 millilitralla etyyliasetaattia ja lopuksi tyhjökuivataan 24 tunnin ajan 30 ··· °C:ssa. Saadaan 9 g otsikon 3-fenyylipropyyliesterituotetta.

Esteriryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan käyttäen ?·5·. julkaisussa Siggia, S. ja Hann, J.G., "Quantitative organic *. analysis via functional groups", 4. painos, John Wiley & ' ,* Sons, sivuilla 169 - 172, kuvattua menetelmää.

’·' ' Esimerkki 23 - Hvaluronihaoon (HY) 3,4,5-trimetoksibentsw- 30 liesterin valmistus : .* : 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka moolimassa on 170000 vastaten 20 m.Eq. monomeeriyksikköä, liuotetaan 620 !.! millilitraan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 4,6 g 3T (21,2 m.Eq.) 3,4,5-trimetoksibentsyylikloridia ja liuosta ’·.·/ pidetään 12 tunnin ajan 30 °C:ssa.

! I I I I

115954 31

Tuloksena saatava seos kaadetaan hitaasti 3500 millilitraan etyyliasetaattia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu saostuma, joka suodatetaan ja pestään neljä kertaa 500 millilitralla etyyliasetaattia ja lopuksi tyhjökuivataan 24 tunnin ajan 30 5 °C:ssa. Saadaan 10 g otsikon 3,4,5-trimetoksibentsyylieste- rituotetta. Esteriryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan käyttäen julkaisussa Siggia, S. ja Hann, J.G., "Quantitative organic analysis via functional groups", 4. painos, John Wiley & Sons, sivuilla 169 - 172, kuvattua menetelmää.

10

Esimerkki 24 - Hvaluronihapon (HY) sinnamvvliesterin valmistus 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka moolimassa on 15 170000 vastaten 20 m.Eq. monomeeriyksikköä, liuotetaan 620 millilitraan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 4,2 g (21,2 m.Eq.) sinnamyylibromidia ja liuosta pidetään 12 tunnin ajan 30 °C:ssa.

20 Tuloksena saatava seos kaadetaan hitaasti 3500 millilitraan etyyliasetaattia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu saostuma, joka suodatetaan ja pestään neljä kertaa 500 millilitralla ··· etyyliasetaattia ja lopuksi tyhjökuivataan 24 tunnin ajan 3 0 . °C:ssa. Saadaan 9,3 g otsikon sinnamyyliesterituotetta. Este- 2’5\ riryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan käyttäen ' julkaisussa Siggia, S. ja Hann, J.G., "Quantitative organic analysis via functional groups", 4. painos, John Wiley &

Sons, sivuilla 16 9 - 172, kuvattua menetelmää.

30 Esimerkki 25 - Hvaluronihapon (HY) dekvvliesterin valmistus ·’ : : 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka moolimassa on 170000 vastaten 20 m.Eq. monomeeriyksikköä, liuotetaan 620 !.! millilitraan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 4,7 g 331 (21,2 m.Eq.) 1-bromidekaania ja liuosta pidetään 12 tunnin :.V ajan 30 °C:ssa.

115954 32

Tuloksena saatava seos kaadetaan hitaasti 3500 millilitraan etyyliasetaattia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu saostuma, joka suodatetaan ja pestään neljä kertaa 500 millilitralla etyyliasetaattia ja lopuksi tyhjökuivataan 24 tunnin ajan 30 5 °C:ssa. Saadaan 9,5 g otsikon dekyyliesterituotetta. Este- riryhtnien kvantitatiivinen määritys suoritetaan käyttäen julkaisussa Siggia, S. ja Hann, J.G., "Quantitative organic analysis via functional groups", 4. painos, John Wiley &

Sons, sivuilla 169 - 172, kuvattua menetelmää.

10

Esimerkki 26 - Hvaluronihapon (HY) nonwliesterin valmistus 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka moolimassa on 170000 vastaten 20 m.Eq. monomeeriyksikköä, liuotetaan 620 15 millilitraan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 4,4 g (21,2 m.Eq.) 1-brominonaania ja liuosta pidetään 12 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Tuloksena saatava seos kaadetaan hitaasti 3500 millilitraan 20 etyyliasetaattia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu saostuma, joka suodatetaan ja pestään neljä kertaa 500 millilitralla etyyliasetaattia ja lopuksi tyhjökuivataan 24 tunnin ajan 30 ··· °C.-ssa. Saadaan 9 g otsikon nonyyliesterituotetta. Esteriryh-

MM

mien kvantitatiivinen määritys suoritetaan käyttäen jul- 215’. kaisussa Siggia, S. ja Hann, J.G., "Quantitative organic • · · . analysis via functional groups", 4. painos, John Wiley & » t 1

Sons, sivuilla 169 - 172, kuvattua menetelmää.

* < 1 · 1 * · 1 ·' ’ Alqiinihapon esterit 30

Algiinihappoestereitä, joita voidaan käyttää tässä keksin-:(· · nössä, voidaan valmistaa eurooppalaisessa patenttihakemukses-,sa EPÄ 0 251 905 A2 kuvatulla tavalla lähtien algiinihapon λ! kvaternaarisistä ammoniumsuoloista eetteröintiaineen avulla, 35' edullisesti aproottisessa, orgaanisessa liuottimessa, kuten ν,: dialkyylisulfoksideissa, dialkyylikarboksamideissa, kuten erityisesti kevyen alkyyliosan omaavissa dialkyylisulf oksi- 33 A "I 50¾ 4 \ I j/'J7 deissa, etenkin dimetyylisulfoksideissa, ja kevyen alkyy-liosan omaavissa alifaattisten happojen dialkyyliamideissa, kuten dimetyyli- tai dietyyliformamideissa tai dimetyyli- tai dietyyliasetamideissa. On kuitenkin mahdollista käyttää muita 5 liuottimia, jotka eivät ole aina aproottisia, kuten alkoho lit, eetterit, detonit, esterit, erityisesti alifaattiset tai heterosykliset alkoholit ja ketonit, joiden kiehumispiste on matala, kuten heksafluori-isopropanoli ja trifluorietanoli. Reaktio suoritetaan edullisesti lämpötilan ollessa noin 0 10 °C - 100 °C, ja erityisesti noin 25 °C - 75 °C, esimerkiksi noin 30 °C.

Esteröinti suoritetaan edullisesti lisäämällä vähitellen esteröintiainetta edellä mainittuun ammoniumsuolaan, joka on 15 liuotettu johonkin edellä mainituista liuottimista, esimer kiksi dimetyylisulfoksidiin. Alkylointiaineina voidaan käyttää edellä mainittuja yhdisteitä, erityisesti hydrokarbyyli-halogenideja, esimerkiksi alkyylihalogenideja.

20 Siten edullisessa esteröintimenetelmässä saatetaan reaktioon orgaanisessa liuottimessa algiinihapon kvaternaarinen am-moniumsuola stoikiometrisen määrän kanssa yhdistettä, jonka •: · kaava on:

A - X

25·. jossa A on valittu ryhmästä, johon kuuluvat alifaattiset, ,·, ; aralifaattiset, sykloalifaattiset, alifaattis-sykloalifaatti- ’ / set ja heterosykliset radikaalit ja X on halogeeniatomi, ja * jossa mainittu stoikiometrinen määrä A-X:ää määräytyy halutun » t * ’ esteröintiasteen mukaan.

30

Kvaternaarisina ammoniumsuolalähtöaineina käytetään edulli-V sesti kevyitä ammonium tetra-alkylaatteja, joiden alkyyliryh- missä on edullisesti 1-6 hiiliatomia. Useimmiten käytetään

» I

···_ tetrabutyyliammoniumalginaattia. Näitä kvaternaarisia am- 3S‘ moniumsuoloja voidaan valmistaa antamalla algiinihapon metal- ν’.· lisuolan, joka edullisesti on joku edellä mainituista, eri- tyisesti natrium- tai kaliumsuola, reagoida vesiliuoksessa 34 1TE954 sellaisen sulfonihartsin kanssa, joka on muutettu suolaksi kvaternaarisella ammoniumemäksellä.

Eräässä edellä määritellyn menettelytavan muunnelmassa anne-5 taan sopivaan liuokseen kuten dimetyylisulfoksidiin suspen- toidun algiinihapon kalium- tai natriumsuolan reagoida sopivan alkylointiaineen kanssa katalysoivan, kun läsnä on katalysoiva määrä kvaternaarista ammoniumsuolaa, kuten tetra-butyyliammoniumjodidia. Tämä menettelytapa tekee mahdollisek-10 si valmistaa algiinihapon täysestereitä.

Uusien estereiden valmistamiseksi on mahdollista käyttää mistä tahansa lähteestä peräisin olevia algiinihappoja.

Näiden happojen valmistusta on kuvattu kirjallisuudessa. On 15 edullista käyttää puhdistettuja algiinihappoja.

Osittaisestereissä on mahdollista muuttaa suoloiksi kaikki jäljellä olevat karboksyyliryhmät tai vain osa niistä, annostellen emäksen määrää siten, että saadaan haluttu stoi-20 kiometrinen suolanmuodostusaste. Säätelemällä suolanmuodos- tusaste oikein on mahdollista valmistaa estereitä, joiden dissosiaatiovakiot ovat laajalla alueella ja jotka siten ·;· antavat halutun pH:n liuoksissa tai "in situ" terapeuttisen •T. käytön aikana.

25·.

i i : ALAFFll, algiinihapon bentsyyliesteri, ja ALAFF7, al- giinihapon etyyliesteri, ovat erityisen käyttökelpoisia esillä olevissa komposiittimembraaneissa.

’ * < 30 Esimerkki 27 V : Valmistettiin 40 g/m2 painava, 0,5 mm paksu, hyaluronihapon bentsyyliesteriä, HYAFF 11, sisältävä kuitukangas seuraavalla * » » • menettelytavalla (ks. kuvio 1).

35’* ‘.V Valmistetaan tankissa (1) HYAFF 11:n liuos dimetyylisulfoksi-dissa pitoisuuden ollessa 135 mg/ml ja syötetään hammaspyörä- 35 11E954 pumpulla (2) märkäsuulakepuristusta varten kehruusuuttimeen, joka koostuu 3000 reiästä, joista kukin on 65 mikrometrin suuruinen.

5 Suulakepuristettu lankamassa kulkee koagulointialtaaseen (3), joka sisältää puhdasta etanolia. Sitten se siirretään edelleen siirtoteloilla kahteen peräkkäiseen huuhtelualtaaseen (4 ja 5), jotka sisältävät puhdasta etanolia. Ensimmäisen telan vetosuhde (drafting ratio) asetetaan nollaan, kun taas muiden 10 telojen välinen vetosuhde asetetaan arvoon 1,05. Läpäistyään huuhtelualtaat lankavyyhti puhalletaan kuivaksi kuumalla ilmalla (6) , jonka lämpötila on 45 °C - 50 °C ja katkotaan telaleikkurilla (7) 40 mm kuiduiksi.

15 Siten saatu kuitumassa tiputetaan sitten kouruun, joka johtaa karstaus/ristilimityskoneeseen (9), josta se tulee ulos verkkona, joka on 1 mm paksu ja painaa 40 mg/m2. Sitten verkkoa ruiskutetaan HYAFF 11:n liuoksella dimetyylisulfoksi-dilla, 80 mg/ml (11), tuodaan etanolikoagulointialtaaseen 20 (12), huuhtelukammioon (13) ja viimeiseksi kuivauskammioon (14) .

··* Materiaalin lopullinen paksuus on 0,5 mm. Sen ulkonäkö on .·;·. nähtävissä kuviossa 2.

25 \ Esimerkki 2 8 * · « — " — ·;;; Valmistettiin 200 g/m2 painava, 1,5 mm paksu, hyaluronihapon *·* * etyyliesteriä, HYAFF 7, sisältävä kuitukangas seuraavalla 30 menettelytavalla.

* « · «

Esimerkissä 27 kuvatulla kehruukäsittelyllä saatuja HYAFF 7 -: /, kuituja, 3 mm pitkiä, syötettiin karstauskoneen kouruun, josta ne tulivat ulos 1,8 mm paksuna verkkona, joka painoi 35 200 g/m2. Verkko johdetaan neulalävistyskoneeseen (kuvio 1, • '·· yksityiskohdat 16, 17 ja 18) , joka muuntaa sen 200 g/m2 painavaksi ja 1,5 mm paksuksi kuitukankaaksi.

36 115954

Esimerkki 29

Valmistettiin 200 g/m2 painava, 1,5 mm paksu, hyaluronihapon 5 etyyliesterin, HYAFF 7, ja hyaluronihapon bentsyyliesterin, HYAFF 11, yhtä suurien määrien seosta sisältävä kuitukangas seuraavalla menettelytavalla.

Esimerkissä 27 kuvatulla kehruukäsittelyllä saatuja HYAFF 7:n 10 ja HYAFF 11:n kuituja, 3 mm pitkiä, sekoitettiin huolellisesti kierresekoittimessa. Kuituseos syötettiin karstausko-neeseen, josta se tuli ulos 1,8 mm paksuna verkkona, joka painoi 200 g/m2.

15 Verkko syötettiin neulalävistyskoneen (Kuvio 1, yksityiskohdat 16, 17 ja 18), joka muunsi sen 1,5 mm paksuksi kuitukankaaksi, joka painoi 200 g/m2, kahden materiaalin ollessa täydellisesti sekoittuneena keskenään.

20 Esimerkki 30

Valmistettiin 40 g/m2 painava, 0,5 mm paksu, hyaluronihapon ·;· bentsyyliesterin, HYAFF 11, ja hyaluronihapon osittaisen (75 %) bentsyyliesterin, HYAFF llp75, yhtä suurien määrien seosta 25 sisältävä kuitukangas seuraavalla menettelytavalla.

• · · HYAFF llp75 valmistetaan seuraavasti. 10 g hyaluronihapon a tetrabutyyliammoniumsuolaa, moolimassa = 620,76, 16,1 nmol • · · *·' ‘ vastaava määrä, liuotetaan N-metyylipyrrolidoni/H20-seokseen, 30 90/10, 2,5 % paino-%, jotta saatiin 400 ml liuosta. Liuos i jäähdytetään 10 °C:een, sitten puhdistettua N2-.ä kuplitetaan sen kautta 30 minuuttia. Sitten se esteröidään 1,49 millilit-; ralla (vastaa 12,54 mmol) bentsyylibromidia. Liuosta ravis- ['·/ teilaan varovasti 60 tunnin ajan, 15-20 °C:ssa.

35 : '·· Sen jälkeen seuraava puhdistus tehdään saostamalla etyy- :/·| liasetaatissa kyllästetyn natriumkloridiliuoksen lisäyksen jälkeen ja seuraavaksi pesut tehdään etyyliasetaatti/puhdas 37 1 15954 etanoli -seoksella, 80/20. Kiinteä faasi erotetaan suodattamalla ja käsitellään vedettömällä asetonilla. Siten saadaan 6,8 g tuotetta, mikä vastaa noin 95 % saantoa.

5 40 mm pitkät HYAFF 11 ja HYAFF llp75 kuidut, jotka oli saatu esimerkissä 1 kuvatulla menetelmällä, sekoitettiin huolellisesti kierresekoittimessa.

Sekoitetut kuidut syötettiin karstauskoneeseen, josta ne 10 tulivat ulos 1 mm paksuna verkkona, joka painoi 40 mg/m2.

Sitten verkko ruiskutettiin HYAFF 11:n liuoksella dimetyy-lisulfoksidissa, 80 mg/ml (kuvio 1, yksityiskohta 11) , tuotiin etanolikoagulointialtaaseen (12), sitten vettä tai vettä ja etanolia 10 - 95 %:n suhteessa sisältävään huuhtelukammi-15 oon (13) ja lopulta kuivauskammioon (14).

Materiaalin lopullinen paksuus on 0,5 mm ja HYAFF 11 m ja HYAFF llp75:n kuidut ovat täydellisesti toisiinsa sekoittuneita ja kiinnittyneitä.

20

Esimerkki 31 ·' Valmistettiin 200 g/m2 painava, 1,5 mm paksu, vancomysiinillä :: impregnoitu hyaluronihapon bentsyyliesteriä, HYAFF 11, sisäl- ; 25 tävä kuitukangas seuraavalla menettelytavalla (ks. kuvio 1) .

t · » · • * ·

Kuitukangas, joka oli valmistettu esimerkissä 28 kuvatun 4 ” 1 mukaisesti, upotettiin 4 tunnin ajaksi vancomysiinin vesiliu- * * · ' okseen, jonka pitoisuus oli 0,1 mg/ml. Seuraavaksi, kuumenne- 30 tussa siivilässä käsittelyn jälkeen, kuitukangasta kuivataan ·'·· : 2 tunnin ajan uunissa. In vitro - koeet osoittivat, että vancomysiiniä sisältyy materiaaliin farmakologisesti aktiivi-sinä määrinä.

» » I 4 35 Tämän keksinnön mukaan aikaansaatuja kuitukankaita voidaan edullisesti käyttää erityyppisissä mikrokirurgisissa menetelmissä kuten esimerkiksi hammaslääketieteessä, stomatologiassa, korva-, nenä- ja 38 11S&G4 kurkkutautiopissa, ortopediassa, neurokirurgiassa, jne., joissa on välttämätöntä käyttää ainetta, jota elimen aineenvaihdunta voi käyttää ja joka pystyy helpottamaan läppäottoa (flap take), limakalvojen epiteelin uudelleenmuodostumista, 5 siirrännäisten stabiloitumista, ja onteloiden täyttymistä.

Uusia kuitukankaita voidaan myös käyttää puskuriaineena nenän ja sisäkorvan kirurgiassa.

Keksinnön ollessa täten kuvattu on ilmeistä, että sitä voi-10 daan varioida monin tavoin. Sellaisia variaatioita ei tule katsoa poikkeamaksi keksinnön hengestä ja alasta, ja kaikki muunnelmat, jotka olisivat ilmeisiä ammattimiehelle, on tarkoitettu sisällytettäväksi seuraavien vaatimusten suoja-alaan .

15 »

Claims (6)

39 115S £4 1. Menetelmä sellaisen kuitukangasmateriaalin valmistamiseksi, joka käsittää ainakin yhden hyaluronihappoesterin 5 kuituja tai hyaluronihappoesterin kuituja yhdistettynä toiseen polymeeriin, tunnettu siitä, että a) valmistetaan mainitun materiaalin kuituverkko, ruiskutetaan mainittu verkko hyaluronihappoesteriliuoksella, hyaluronihappoesterin ja 10 mainitun polymeerin yhdistelmäliuoksella tai mainitun verkon muodostavan polymeerin liuoksella ja kemiallisesti koaguloidaan ruiskutettu verkko mainitun verkon kuitujen kiinnittämiseksi toisiinsa, b) valmistetaan mainitun materiaalin kuituverkko ja 15 neulalävistetään mainittu verkko tai c) valmistetaan mainitun materiaalin kuituverkko ja impregnoidaan mainittu materiaali nesteellä tai geelillä, minkä jälkeen kuivataan mainittu materiaali. 20 2.Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että ruiskutettu polymeeriliuos on erilainen kuin mainitun kuituverkon muodostama polymeeri. 3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu .< » · . 25 siitä, että kuitukangas impregnoidaan farmakologisesti * · * ‘ aktiivisella liuoksella. * * * • · 4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu < I I *.· · siitä, että mainitun esterin alkoholi on farmakologisesti ei- 30 aktiivinen alkoholi. i t » · ♦ 5.Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu alkoholi on alifaattinen, aralifaat- • · · • · tinen, sykloalifaattinen tai heterosyklinen alkoholi. 35 sesti aktiivinen alkoholi. *;· 6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu ;·>· siitä, että jossa mainitun esterin alkoholi on farmakologi 41> 11E954

1. Förfarande för framställning av fibertygsmaterial, som omfattar fibrer av ätminstone en hyaluronsyraester eller 5 fibrer av en hyaluronsyraester kombinerat med en annan polymer, kännetecknat av att a) ett fibernät av nämnda material framställs, nämnda nät besprutas med en hyaluronsyraesterlösning, en kombinationslösning av hyaluronsyraester och nämnda 10 polymer eller en lösning av polymeren, som bildar nämnda nät, och det besprutade nätet koaguleras kemiskt för att binda fibrerna av nämnda nät tili varandra, b) ett fibernät av nämnda material framställs och nämnda nät nälperforeras eller 15 c) ett fibernät av nämnda material framställs och nämnda material impregneras med en vätska eller gel, varefter nämnda material torkas.

! 2. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att den 20 besprutade polymerlösningen är olik polymeren, som bildats av nämnda fibernät.

·;· 3. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att ί ί fibertyget impregneras med en farmakologiskt aktiv lösning. : V: 25 t * ;\j

4. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att ·*· alkoholen av nämnda ester är en f armakologiskt maktiv « « · « alkohol . • » » ·, (·, 30

5. Förfarande enligt patentkrav 4, kännetecknat av att nämnda ,***, alkohol är en alifatisk, aralifatisk, cykloal i f at i sk eller 1’ heterocyklisk alkohol. » · » » · t · t « * h,,·

6. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att där ·;· 35 alkoholen av nämnda ester är en f armakologiskt aktiv alkohol. *»·»♦ t *