FI106962B - Menetelmä (1R, 5S, 6S)-2-[1-(1,3-tiatsolin-2-yyli)atsetidin-3-yyli]-tio-6-[(R)-1-hydroksietyyli]-1-metyylikarbapen-2-eemi-3-karboksyylihappojohdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Description

106962

Menetelmä (1R, 5S,6S)-2-[1-(1,3-tiatsolin-2-yyli)atsetidin- 3-yyli]-tio-6-[(R)-1-hydroksietyyli]-l-metyylikarbapen-2-eemi-3-karboksyylihappojohdannaisten valmistamiseksi 5 Keksinnön taustaa 1. Keksinnön ala Tämä keksintö koskee menetelmää karbapeneemiantibi-oottisten aineiden ja erityisemmin Ιβ-metyyli-karbapenee-mijohdannaisten valmistamiseksi, joissa on metyyliryhmä 10 liittyneenä karbapeneemirungon 1-asemaan ja [1-(1,3-tiat-solin-2-yyli)atsetidin-3-yyli]tioryhmä liittyneenä 2-ase-maan, ja bakteerien vastaisia koostumuksia, jotka sisältävät saman aktiivisena ainesosana.

2. Tunnetun tekniikan kuvaus 15 Aikaisemmin erilaisina bakteerien vastaisina ainei na on ehdotettu monia karbapeneemiantibioottisia aineita, joissa on perusrunkona karba-2-peneemi-3-karboksyylihappo, joka esitetään seuraavalla kaavalla (A): 20 rCX <*

0/ C00H

Esimerkiksi ensimmäinen karbapeneemiantibioottisten aineiden sukupolvi on luonnollisesti esiintyvä karbapenee-; 2 5 miyhdiste, kuten tienamysiini, joka esitetään kaavalla

(B) : H0 H H MU

f H H g NH2 \ (B) 30 (y ^cooh

Tienamysiini voidaan saada Streotornvces cattlevan fermentaatiolihaliemestä ja sillä on laaja-alainen bakteerien vastainen kirjo gram-positiivisia ja gram-negatiivi-sia bakteereja vastaan. Siksi on odotettu, että siitä ke- 2 106962 hitetään erittäin käyttökelpoinen yhdiste, mutta sen huono kemiallinen stabiilisuus on estänyt sen kaupallistamisen.

Tuntien edellä mainitun taustan monet tutkijat ovat yrittäneet kehittää karbapeneemiyhdisteen, jolla on bak-5 teerien vastaisia aktiivisuuksia, jotka ovat yhtä suuret kuin tienamysiinin, ja joka takaa paremman kemiallisen stabiilisuuden. Tuloksena on kehitetty imipeneemi (INN), joka esitetään seuraavalla kaavalla (C):

io n? H H

(C) ch3 M 11

COOH

Tämä yhdiste on käytännössä käytettävissä oleva 15 bakteerien vastainen aine ja se voidaan saada muuttamalla aminoryhmä, joka on sivuketjuna 2-asemassa, formimidoyyli-ryhmäksi.

Kaavan (C) mukainen imipeneemi osoittaa bakteerien vastaisia aktiivisuuksia, jotka ovat suuremmat kuin tiena-20 mysiinin, ja takaa jonkin asteen kemiallisen stabiilisuuden; se kuitenkin esittää sen haittapuolen, että se hajoaa lyhyen ajanjakson kuluessa munuaisen dehydropeptidaasilla (DHP) elävässä kehossa. Tästä syystä sitä ei voida antaa yksinään, vaan sitä täytyy käyttää yhdistelmässä DHP-inhi-25 biittorin kanssa, jolloin kontrolloidaan sen hajoamista, joka johtaa inaktivointiin. Sen formulaatio kliinistä antamista varten on yhdistelmä kilastatiinin kanssa, joka on DHP-inhibiittori.

Edullinen bakteerien vastainen aine käytännön 30 kliinistä käyttöä varten on kuitenkin sellainen, joka yk-’ sinään voi osoittaa bakteerien vastaista aktiivisuutta.

Lisäksi antibioottisen aineen kanssa yhdistettävä DHP-inhibiittori voisi panna liikkeelle ei-toivottuja toimintoja elävän kehon kudoksissa. Näiden syiden takia yhdistettyä 35 käyttöä tulisi välttää silloin kun se on mahdollista. Si- .3 106962 ten on ollut kasvava tarve karbapeneemiyhdisteelle, jolla on riittävän korkeat asteet sekä bakteerien vastaista aktiivisuutta että resistenssiä DHP:tä vastaan.

Äskettäin ehdotettiin joitakin sen tyyppisiä karba-5 peneemiyhdisteitä, jotka voivat saavuttaa edellä mainitut päämäärät. Tällaisia karbapeneemiyhdisteitä ovat 1-metyy-likarbapeneemiyhdisteet, joissa metyyliryhmä on liitetty karbapeneemirungon 1-asemaan ja erilaisia heterosyklyyli-tioryhmiä 2-asemaan. Esimerkiksi japanilainen laid-open- 10 patenttijulkaisu nro 202 866/1985 Sankyolle esittää 2-he-terosyklyyli-tio-l-metyylikarbapeneemiyhdisteitä mukaan lukien yhdisteen, jossa on 2-asemassa (N-metyyliasetoimi-doyyli-atsetidin-3-yyli)tiosubstituentti, joka esitetään kaavalla (D): 15 nti HO ®3 —< N—C=NCH,

LlT v k, 3 (D)

J-N—^3 0 COOH

20 On raportoitu, että tällä yhdisteellä on ylivoimai set bakteerien vastaiset aktiivisuudet, samoin kuin huomattavasti parantunut resistenssi hajomiselle DHP:llä, joka johtaa inaktivointiin, niin, että se osoittaa erittäin hyödyllisiä vaikutuksia; japanilainen patenttidoku-: 25 mentti ei kuitenkaan tarjoa mitään spesifistä bakteerien vastaista tietoa tai sovellusesimerkkejä. Siksi Sankyo ei esitä mitään karbapeneemiyhdisteistä, joissa on 2-asemassa 1-(1,3-tiatsolin-2-yyli)atsetidin-3-yyli-tiosubstituentti tämän keksinnön mukaisesti. Aivan äskettäin kansainvälinen 30 patenttijulkaisu nro WO 93/23 402 Fujusawalle esitti 2-(3-atsetidinyylitio)karbapeneemiyhdisteitä, jotka esitetään seuraavalla kaavalla (E): 2 ? /N— 35 vVs^N_cv © (Γ \1 4 106962 Tämän patenttijulkaisun selityksessä Fujusawa esittää erityisesti karbapeneemiyhdisteet, jotka esitetään seuraavalla kaavalla (F): 5 T 1H3 s^N_r^N-R5 V ' ' tr cooh jossa R4 ja R5 yhdessä muodostavat mahdollisesti substi-10 tuoidun iminon sisältävän heterosyklisen ryhmän; kaavan (F) mukaisten yhdisteiden joukossa kuitenkin vain yhtä yhdistettä tuetaan sovellusesimerkillä, eikä esitetä minkäänlaista spesifistä bakteerien vastaisen tiedon kuvausta. Mitään tämän keksinnön mukaisia spesifisiä yhdis-15 teitä ei esitetä tässä, eikä mikään edellä mainittu aikaisempi patenttihakemus ehdota, että millään tällaisista yhdisteistä olisi ylivoimaisia farmakologisia ominaispiirteitä, kuten on esitetty ja vaadittu tässä keksinnössä. Siksi tässä esitetyistä ja vaadituista spesifisistä yhdis-20 teistä ei ollut mitään ennakkoaavistuksia.

Karbapeneemiyhdisteet omaavat voimakkaan bakteerien vastaisen aktiivisuuden laajalla kirjolla. Kuten muut kliinisessä käytännössä käytetyt β-laktaamibakteerien vastaiset aineet, odotetaan kuitenkin, että karbapeneemiyh-:· 25 disteet ovat tehottomia karbapeneemiresistenttejä baktee reja vastaan. Siis on ehdotettu joitakin karbapeneemiyh-disteitä, joissa on ainutlaatuiset substituentit karbape-neemirungon 2-asemassa. Lisäksi vaikka karbapeneemiyhdis-teiden oraaliset formulaatiot ovat käyttökelpoisia päivit-30 täistä antamista varten, karbapeneemiantibioottisia aineita, joita on ehdotettu aikaisemmassa patenttihakemuksessa, käytetään pääasiassa injektoitavaa formulaatiota varten. Siksi on ollut tarvetta oraalisesti annettaville karbape-neemiantibioottisille aineille.

5 106962

Keksinnön yhteenveto Tämä keksintö koskee menetelmää karbapeneemiyhdis-teiden valmistamiseksi, joilla on korkeat bakteerien vastaiset aktiivisuudet, voimakas β-laktamaasia inhiboiva 5 toiminta, samoin kuin parantunut resistenssi munuaisen dehydropeptidaasille. Spesifisemmin tämä keksintö tarjoaa karbapeneemiyhdisteitä, jotka on substituoitu metyyliryh-mällä 1-asemaan β-konfiguraatiossa, jossa erityisesti [1-(1,3-tiatsolin-2-yyli)atsetidin-3-yyli]tio-ryhmä liitetään 10 2-asemaan.

Tämän keksinnön mukaisen menetelmän tarkoitus on tarjota {1R,5S,6S)-2-[1-(1,3-tiatsolin-2-yyli)atsetidin-3-yyli]tio-6-[(R)-1-hydroksietyyli]-1-metyyli-karbapen-2-ee-mi-3-karboksyylihappojohdannainen, joka esitetään seuraa-15 valla kaavalla: "Λ

0 Y

20 jossa R on vety; C4_4-alkyyliryhmä, joka on substituoitu C1.4-alkoksi-C1_4-alkoksiryhmällä; tai ryhmä -C0NR2R3 (R2 ja R3 ovat toisistaan riippumatta Cj^^-alkyyli) , Y on karboksi, -C00e, p-nitrobentsuulioksikarbonyyli, C1.g-alkoksi-CO-C4.4-: 25 alkoksi-CO- tai C3.7-sykloalkyyli-0-C0-0-C4.4-alkoksi-C0-, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

Spesifisemmin tämän keksinnön mukainen menetelmä tarjoaa (1R, 5S, 6S)-2- [1- (1,3-tiatsolin-2-yyli)atsetidin-3-yyli] tio-6-[(R)-1-hydroksietyyli]-1-metyyli-karbapen-2-30 eemi-3-karboksyylihapon, jolla on seuraava kaava: H! H H f3 S-1 35 ^ N \

0 Y

6 106962 jossa Y:llä on sama merkitys kuin edellä, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan.

Vielä spesifisemmin tämän keksinnön mukainen menetelmä tarjoaa (1R,5S,6S)-2-[1-(1,3-tiatsolin-2-yyli)atse-5 tidin-3-yyli]tio-6-[(R)-1-hydroksietyyli]-1-metyyli-karba-pen-2-eemi-3-karboksyylihapon, jolla on seuraava kaava: HT H H f 3 c /N,5! AL]A/s-< β~(n dl) 10 /-Ν-Λ

0 C00H

tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan.

Toinen tämän keksinnön mukaisen menetelmän tarkoitus on tarjota oraalisesti annettavia karbapeneemiyhdis-15 teitä, jotka muutetaan kaavan (II) mukaisiksi aktiivisiksi karbapeneemiyhdisteiksi kehossa ja jotka osoittavat voimakkaita aktiivisuuksia lukuisia patogeenisiä mikro-organismeja kohtaan. Keksinnön edellä mainittua tarkoitusta varten tarjotaan (1R,5S,6S)-2-[1-(1,3-tiatsolin-2-yyli)at-20 setidin-3-yyli]tio-6- [ (R)-1-hydroksietyyli] -1-metyyli-kar-bapen-2-eemi-3-karboksylaatti, jolla on seuraava kaava: H2 h h f3 *Ί (lll) CH3 1 ! |j v N— :· 2 5 A—1i-\ 0 COOR4 jossa R4 on esteröidyn karboksin esteriryhmä, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

Edullinen tämän keksinnön mukaisella menetelmällä 30 valmistettu oraalisesti annettava karbapeneemiyhdiste on I- [(sykloheksyylioksi)karbonyylioksi]etyyli-(1R,5S,6S)-2- II- (1,3-1iätsoiin-2-yyli)atsetidin-3-yyli] tio-6-[(R)-1-hydroksietyyli]-l-metyyli-karbapen-2-eemi-3-karboksylaat-ti, jolla on seuraava kaava: 7 106962 λιιαΙκχΠ CH3 Τ’ if ν N_J (ιν) C00CH-0C0— ch3.° tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

Karbapeneemiyhdisteitä, jotka esitetään kaavalla (I) , tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja 10 voidaan käyttää bakteerien vastaisissa koostumuksissa aktiivisena ainesosana.

Bakteerien vastainen koostumus on oraalisesti annettava formulaatio, joka sisältää kaavan (IV) mukaisen karbapeneemiyhdisteen.

15 Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus Tämän keksinnön mukaisella menetelmällä valmistetut karbapeneemiyhdisteet ovat uusia yhdisteitä, joita ei erityisesti esitetä aikaisemmissa patenttijulkaisuissa (esimerkiksi japanilainen laid-open-patenttijulkaisu nro 20 202 886/1985 ja WO 93/23 402) . Erityisesti ne ovat huomat tavan tunnettuja siitä, että karbapeneemirungon 2-asemassa oleva substituentti on [1-(1,3-tiatsolin-2-yyli)atsetidin- 3-yyli]tio-ryhmä ja siitä, että niillä on ylivoimaiset bakteerien vastaiset aktiivisuudet ja resistenssi DHP:lle.

: . 25 Tämän hakemuksen selityksessä termi "alempi", joka määrittelee yhdisteen ryhmää, tarkoittaa, että niin määritellyssä ryhmässä tai yhdisteessä on 1 - 7, edullisesti 1-4 hiiliatomia.

Termi "alkyyli", johon tässä viitataan, merkitsee 30 suoraketjuista tai haarautuneen ketjun hiilivetyryhmää, jossa on edullisesti 1-20 hiiliatomia, ja se voi käsittää esimerkiksi metyylin, etyylin, n-propyylin, isopropyy-lin, n-butyylin, isobutyylin, sec-butyylin, tert-butyylin, n-pentyylin, isopentyylin, n-heksyylin, isoheksyylin, 8 106962 n-heptyylin, isoheptyylin, oktyylin, iso-oktyylin, mo-nanyylin, dodekanyylin, pentadekanyylin, eikosanyylin tai niiden kaltaiset.

Termi "alkoksi", johon tässä viitataan, merkitsee 5 alkyyli-oksi-ryhmää, jossa "alkyyli"-ryhmällä on edellä mainittu merkitys. Esimerkkeihin kuuluvat metoksi, etoksi, n-propoksi, isopropoksi, n-butoksi, isobutoksi, sec-butok-si, tert-butoksi, n-pentyylioksi, isopentyylioksi, n-hek-syylioksi, isoheksyylioksi, n-heptyylioksi, isoheptyyliok-10 si tai niiden kaltaiset. Näiden joukosta käytetään edullisesti metoksia, etoksia, isobutoksia, sec-butoksia tai tert-butoksia.

Termi "suojattu karboksi" on esteröity karboksi, joka esitetään ryhmällä -COOR4 (jossa R4 on esteröidyn kar-15 boksin esteriryhmä). Sopiva ryhmällä "R4" esitettävä esteröidyn karboksin esteriryhmä on alempi alkyyli, jossa voi olla ainakin yksi sopiva substituentti ja joka voidaan esittää seuraavalla ryhmällä: 20 -CHOC-(0)-R 6 l5 II n r3 o jossa R5 on vety tai alkyyliryhmä R6 on alkyyli- tai sykioalkyyliryhmä, jossa nämä ; 25 ryhmät voivat olla substituoituja alkoksilla, ryhmällä -OP(=0)(OR7) (jossa R7 on vety, alkyyli, aryyli tai aral-kyyli), karboksyylillä tai propyyliglysinamidilla; ja n on 0 tai 1.

Termi "aryyli" voi olla monosyklinen tai polysykli-30 nen aryyliryhmä, jolla voi olla ainakin yksi substituentti, kuten alkyyli, esimerkiksi fenyyli, tolyyli, ksylyyli, α-naftyyli tai β-naftyyli ja niiden kaltaiset.

Sopiviin "aralkyyleihin" voi kuulua aryylisubsti-tuoitu alkyyli, jossa "aryyli"-ryhmällä ja "alkyyli"-ryh-35 mällä on edellä mainitut merkitykset. Esimerkkeihin kuulu- 9 106962 vat bentsyyli, bentshydryyli, trityyli, fenetyyli, a-me-tyylibentsyyli, fenyylipropyyli, naftyylimetyyli ja niiden kaltaiset.

Termi "sykloalkyyli" voi olla tyydyttynyt monosyk-5 linen hiilivetyryhmä, jossa on 3 - 7 rengashiiliatomia, esimerkiksi syklopropyyli, syklobutyyli, syklopentyyli, sykloheksyyli, sykloheptyyli tai niiden kaltaiset.

Siksi sopiva "esteriryhmä" on esimerkiksi (alempi alkanoyylioksi)(alempi alkyyli)esteri [esim. asetoksime-10 tyyliesteri, propionyylioksimetyyliesteri, butyryylioksi- metyyliesteri, valeryylioksimetyyliesteri, pivaloyylioksi-metyyliesteri, heksanoyylioksimetyyliesteri, 1-(tai 2-)-asetoksietyyliesteri, 1-(tai 2- tai 3-)asetoksipropyyli-esteri tai 1-(tai 2- tai 3- tai 4-)asetoksibutyyliesteri, 15 1-(tai 2-)propionyylioksietyyliesteri, 1-(tai 2- tai 3-)- propionyylioksipropyyliesteri, 1-(tai 2-)butyryyliok- sietyyliesteri, 1-(tai 2-)isobutyryylioksietyylieste- ri, 1-(tai 2-)pyvaloyylioksietyyliesteri, 1-(tai 2-)hek-sanoyylioksietyyliesteri, isobutyryylioksimetyyliesteri, 20 2-etyylibutyryylioksimetyyliesteri, 3,3-dimetyylibutyryy- lioksimetyyliesteri, 1-(tai 2-)pentanoyylioksietyylieste-ri, jne.], (alempi alkaanisulfonyyli)(alempi alkyyli)es-teri (esim. 2-mesyylietyyliesteri, jne.), mono(tai di-tai tri-)halogeeni(alempi alkyyli)esteri (esim. 2-jo-j· 25 dietyyliesteri, 2,2,2-trikloorietyyliesteri, jne.); (alempi alkoksi)karbonyylioksi(alempi alkyyli)esteri [esim. metoksikarbonyylioksimetyyliesteri, etoksikarbo-nyylioksimetyyliesteri, propoksikarbonyylioksimetyy-liesteri, t-butoksikarbonyylioksimetyyliesteri, 1-(tai 30 2-)metoksikarbonyylioksietyyliesteri 1-(tai 2-)etoksikar- bonyylioksietyyliesteri, 1-(tai 2-)isopropoksikarbonyyli-oksietyyliesteri, jne.], sykloalkyylioksikarbonyyIloksi (alempi alkyyli)esteri (esim. sykloheksyylioksikar-bonyylioksimetyyliesteri, 1-(tai 2-)sykloheksyylioksikar-35 bonyylioksietyyliesteri, jne.), ftalidylideeni(alempi ai- 10 106962 yyli)(alempi alkyyli)esteri [esim. (5-metyyli-2-okso-l, 3-dioksol-4-yyli)metyyliesteri, (5-etyyli-2-okso-l,3-diok-sol-4-yyli)metyyliesteri, (5-propyyli-2-okso-l,3-dioksol- 4-yyli)etyyliesteri, jne.] tai niiden kaltaiset. Näin mää-5 ritellyn suojatun karboksin edullisempi esimerkki voi olla pivaloyylioksimetyylioksikarbonyyli tai 1-(sykloheksyyli-oksikarbonyyli)etyylioksikarbonyyli.

Tyypillisiä esimerkkejä kaavan (I) mukaisista yhdisteistä esitetään seuraavassa taulukossa 1 ja taulukossa 10 2.

Taulukko 1 H2 H H f3 _/Ί

15 "VI

3 v N \ R

0 Y

R_Y

20 H COOH

CH2OCH2OCH3 COOH

CON(CH3)2 COOH

• · « t 11 106962

Taulukkko 2 «Sh nf3 5 m3^nY ^ N~ 0/ COOCHOC-(0)n-R6 k II " R° 0 10 OC-(O) -R6

R5 II

__ 0___ U OCCHo || ύ 15 0 CM, °™3 o C(CH3)3 occh3 20 0 H occh2och3 0 CH3 OCCHoOCH (CH3)2 " 25 ϋ H ^ 0 30 (ch2)5ch3 oc-® 0 H OC—( H )—OCHo 35 II N—t 6 0 12 106962

Rs OC - (0) n-R6

II

_ o 5 --- H OCC(CH3)3

II

0 c (CH3) 3 OCC (CH3) 3 10 0 H OC C4H9 0

CH3 OC C7H1S

II

15 0 H OCOCH3 0 H OCO (CH2) 3OCH3

2 0 II

0 H OCO -Φ 0 :·. 25 ch3 oco —( h ) II w 0 H OCOC (CH3) 3

II

0 30 ch3 ococ4h9

II

0 H occ7h15

3 5 II

0 13 106962

Edellä listattujen yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat kuuluvat myös yhdisteiden esimerkkeihin.

Lisäksi kun yhdisteillä on asymmetrinen hiili sivu-5 ketjussa 2-asemassa tai 3-asemassa, nämä optisesti aktiiviset yhdisteet voidaan saada stereoselektiivisesti käyttäen optisesti aktiivisia lähtöaineita (katso alla kuvatut esimerkit), tai ne voidaan saada myös näiden yhdisteiden diastereomeerisen seoksen resoluutiolla tavanomaisilla 10 menetelmillä. Siksi yhdisteiden (I) optisesti aktiivinen ja stereoisomeerinen seos tulisi sisällyttää tämän keksinnön yhdisteisiin.

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa alla esitetyillä reaktiokaavioilla havainnollistettujen 15 menetelmien mukaisesti.

Yhdiste, jolla on kaava (I) , jossa ryhmä "Y" on karboksi tai -COO , voidaan valmistaa seuraavalla reaktio-kaaviolla A:

Reaktiokaavio A

20 S— HO CH3 L—(' itfVX/S—<;nh

αιΛΗιΓ V (vo R

3 Λν-λ -*

o COOH

CV)

IuiL-OhH

CHq ΓΊ M V Ν-Λ

X- N—\ R

0 COOH

30 (VII) • « jossa L on poistuva ryhmä ja R:llä on sama merkitys kuin edellä.

"Poistuva ryhmä", jota merkitään L:llä kaavassa 35 (VI), voi olla esimerkiksi atsidoryhmä; halogeeniatomi kuten kloori, bromi tai fluori; alempi alkanoyylioksi 14 106962 -ryhmä, kuten asetoksi tai propionyylioksi; sulfonyyliok-siryhmä, kuten bentseenisulfonyylioksi, tosyylioksi tai metaanisulfonyylioksi; alempi alkoksi -ryhmä, kuten metok-si tai etoksi; (alempi alkyyli)tioryhmä, kuten metyylitio 5 tai etyylitio.

Kaavan (V) mukaisen (1R,5S,6S)-2-[(atsetidin-3-yyli)]tio-6-[(R)-1-hydroksietyyli] -1-metyyli-karbapen- 2-eemi-3-karboksyylihapon reaktio kaavan (VI) mukaisen yhdisteen kanssa voidaan suorittaa esimerkiksi saatta-10 maila kaavan (V) mukainen yhdiste reagoimaan yhdisteen (VI) kanssa sopivassa puskuriliuottimessa, jonka pH on 5 -7, kuten fosfaattipuskuriliuoksessa, asetaattipusku-riliuoksessa, sitraattipuskuriliuoksessa, morfolinopropaa-nisulfonaattipuskuriliuoksessa, N-metyylimorfolinofosfaat-15 tipuskuriliuoksessa tai niiden kaltaisessa. Reaktio voi daan suorittaa lisäämällä kaavan (VI) mukainen yhdiste kaavan (V) mukaisen yhdisteen liuosseokseen ja sekoittamalla reaktioseosta sopiva aika.

Kaavan (VI) mukaisen yhdisteen määrä ei ole ratkai-2 0 seva ja se voi vaihdella sopivasti alueella noin 1-10 mol, edullisesti alueella noin 1-5 mol kaavan (V) mukaisen yhdisteen moolia kohti. Jos tarpeen, orgaanista liuotinta, alkoholia kuten metanolia, etanolia tai isopropanolia; eetteriä kuten dietyylieetteriä tai tetrahydrofuraa-;·, 25 nia; asetonitriiliä; dimetyylif ormamidia tai dimetyyli- asetamidia voidaan käyttää reaktioliuottimena yhdessä edellä mainitun puskuriliuoksen kanssa. Reaktiolämpötilaa ei rajoiteta tietylle alueelle ja se voi vaihdella laajalla alueella käytetyn (VI):n lähtöaineen mukaan. Se voi 30 vaihdella yleensä noin -78 - 50 °C, edullisesti noin -20 -0 °C. Reaktio voidaan saattaa loppuun noin 5 minuutissa -5 tunnissa.

Kaavan (V) mukaiset yhdisteet, joita käytetään läh-töyhdisteenä edellä mainitussa reaktiossa, ovat tunnettuja 35 yhdisteitä tai ne voidaan valmistaa tunnetun menetelmän 15 106962 mukaisesti, joka kuvataan JP-patenttijulkaisussa nro 255 280/1988.

Lisäksi tämän keksinnön yhdiste, jolla on kaava (I), jossa ryhmä "Y" on karboksi tai -COO , voidaan val-5 mistaa myös seuraavan reaktiokaavion B mukaisesti.

Reaktiokaavio B

”2 H H f3 «Tax' m 10 0 · XC00R’ (Vili) HO „ „ CH, Λ s— HO CHo S—. f H H f 3 _ /

A- N-\ R COOH

15 0 C00R· (VM)

(X) V

jossa Ra on asyyliryhmä, R' on karboksyylisuojaryhmä ja R:llä on sama merkitys kuin edellä.

Termi "asyyliryhmä", jota merkitään Ra: 11a, voi olla 20 suppeammassa merkityksessä ryhmä, joka saadaan poistamalla hydroksyyliryhmä orgaanisen karboksyylihapon karboksyyli-ryhmästä, samoin kuin laajemmassa merkityksessä mikä tahansa asyyliryhmä, joka on johdettu orgaanisesta sulfoni-haposta tai orgaanisesta ortofosforihaposta. Tällaisiin j·, 25 asyyliryhmiin voivat kuulua esimerkiksi (alempi alkanoyy- li)ryhmä, kuten asetyyli, propionyyli, butyryyli tai niiden kaltaiset, (halogeeni)(alempi alkyyli)sulfonyyli-ryhmä, kuten metaanisulfonyyli, trifluorimetaanisulfonyyli tai niiden kaltaiset; substituoitu tai substituoimaton 30 aryylisulfonyyliryhmä, kuten bentseenisulfonyyli, p-nitro- • *#< bentseenisulfonyyli, p-bromibentseenisulfonyyli, tolueeni- sulfonyyli, 2,4,6-tri-isopropyylibentseenisulfonyyli tai niiden kaltaiset; ja difenyylifosforyyli.

Termi "karboksyylisuojaryhmä", jota merkitään 35 R':11a, tarkoittaa mitä tahansa ryhmää, joka pystyy suo- 16 106962 jaamaan kyseisen yhdisteen karboksyyliryhmän ilman, että vaikutetaan haitallisesti mihin tahansa muuhun substi-tuenttiin ja seuraaviin reaktiohin, ja se voi käsittää esimerkiksi esterijäännöksen, kuten (alempi alkyyli)este-5 rijäännöksen, mukaan lukien esimerkiksi metyyliesterin, etyyliesterin, n-propyyliesterin, isopropyyliesterin, n-, iso-, see- tai tert-butyyliesterin, n-heksyyliesterin tai niiden kaltaiset; aralkyyliesterijäännöksen käsittäen esimerkiksi bentsyyliesterin, n-nitrobentsyyliesterin, o-nit-10 robentsyyliesterin, p-metoksibentsyyliesterin tai niiden kaltaiset; ja (alempi alifaattinen asyyli)oksimetyylieste-rijäännöksen mukaan lukien esimerkiksi asetoksimetyylies-terin, propionyylioksimetyyliesterin, n- tai iso-butyryy-lioksimetyyliesterin, pivaloksyylioksimetyyliesterin tai 15 niiden kaltaiset.

Kaavan (VIII) mukaisen yhdisteen reaktio kaavan (IX) mukaisen [1-(1,3-tiatsolin-2-yyli)atsetidin-3-yyli]-tiolin kanssa voidaan suorittaa esimerkiksi saattamalla kaavan (VIII) mukainen yhdiste reagoimaan kaavan (IX) rau-20 kaisen yhdisteen kanssa määrässä, joka vaihtelee noin 0,5-5 moolia, edullisesti noin 0,8 - 3 moolia sopivassa liuottimessa, kuten tetrahydrofuraanissa, dikloorimetaa-nissa, dioksaanissa, dimetyyliformamidissa, dimetyylisulf-oksidissa, asetonitriilissä, heksametyleenifosforamidissa . v 25 tai niiden kaltaisissa, edullisesti emäksen ollessa läsnä, kuten natriumvetykarbonaatin, kaliumkarbonaatin, trietyy-liamiinin, di-isopropyylietyyliamiinin tai niiden kaltaisten, lämpötilassa, joka vaihtelee noin -40 - 25 °C noin 30 minuuttia - 24 tuntia.

30 Edullisesti reaktio voidaan suorittaa inertissä at- .. mosfäärissä, esimerkiksi typpikaasu- tai argonkaasuatmos- fäärissä.

Edellä kuvattu reaktio tarjoaa kaavan (X) mukaisen yhdisteen, ja saatua reaktioseosta, joka sisältää kaavan 35 (X) mukaisen yhdisteen, voidaan käyttää seuraavaa reaktio- 17 106962 ta varten ilman lisäpuhdistusta; tai yhdiste (X) voidaan eristää reaktioseoksesta tavanomaisilla menetelmillä jos tarpeen.

Kaavan (VIII) mukaisen yhdisteen reaktiossa kaavan 5 (IX) mukaisen yhdisteen kanssa toista yhdistettä (IX'), jossa kaavan (IX) merkaptoyhdiste on suojattu merkaptosuo-jaryhmällä, voidaan käyttää yhdisteen (IX) sijaan. Reaktio voidaan suorittaa seuraavalla tavalla: Yhdisteen (IX') merkaptosuojaryhmä poistetaan aminohappokemiassa käyte-10 tyillä tavanomaisilla menetelmillä, sitten ilman, että eristetään saatu yhdiste (IX), reaktioseokseen lisätään kaavan (VIII) mukainen yhdiste. Reaktio-olosuhteet ovat samat kuin edellä.

Tämän keksinnön kaavan (VII) mukaiset karbapeneemi-15 yhdisteet voidaan saada poistamalla edellä kuvatulla reak-tiomenetelmällä saatujen kaavan (X) mukaisten yhdisteiden karboksyylisuojaryhmä R'. Suojaryhmän R' poistaminen voidaan tehdä sinänsä tunnetulla reaktiolla suojaryhmän poistamiseksi, kuten solvolyysillä tai hydrogenolyysillä. Tyy-20 pillisessä reaktiossa kaavan (X) mukaista yhdistettä voidaan käsitellä esimerkiksi liuottimien seoksessa, kuten tetrahydrofuraani-vedessä, tetrahydrofuraani-etanoii-ve-dessä, dioksaani-vedessä, dioksaani-etanoli-vedessä, n-bu-tanoli-vedessä tai niiden kaltaisissa, jotka sisältävät ♦.· 25 asetaattipuskuriliuoksen (pH 5,5), morfolinopropaanisulfo- nihappo-natriumhydroksidi-puskuriliuoksen (pH 5,5), fos-faattipuskuriliuoksen (pH 5,5), dikaliumfosfaatin, natriumbikarbonaatin tai niiden kaltaisen, käyttäen vetyä 1 -4 ilmakehän (101 - 405 kPa) paineessa, hydrausta varten 30 olevan katalyytin, kuten platinaoksidin, palladium-aktiivihiilen tai palladiumhydroksidi-aktiivihiilen, läsnä ollessa lämpötiloissa alueella noin 0 - 50 °C suunnilleen 0,25-5 tunnin ajan.

Lisäksi kaavan (X) mukaisen yhdisteen suojaryhmän 35 R1 poistaminen voidaan suorittaa myös saattamalla yhdiste 18 106962 (X) reagoimaan sinkin kanssa puskurissa. Tyypillisessä reaktiossa kaavan (X) mukaista yhdistettä voidaan käsitellä sinkillä sopivassa puskuriliuottimessa, jonka pH on 5 -7, kuten fosfaattipuskuriliuos, asetaattipuskuriliuos, 5 sitraattipuskuriliuos, morforinopropaanisulfonaattipusku-riliuos tai N-metyylimorforiinipuskuriliuos. Reaktiossa käytetty sinkki voi käsittää esimerkiksi alkuainesinkin jauheen, kukan tai granulaatin tai niiden kaltaisten muodossa .

10 Tässä reaktiossa käytetyn sinkin määrää ei ole tiu kasti rajoitettu; yleensä se kuitenkin on sopivasti noin 1-10 paino-osaa, edullisesti 1-5 paino-osaa reagoimaan saatettavan kaavan (X) mukaisen yhdisteen paino-osaa kohti.

15 Tässä reaktiossa orgaanista liuotinta voidaan käyt tää yhdistelmässä. Erimerkkejä liuottimista ovat alkoholit, kuten etanoli, propanoli ja n-butanoli; eetterit, kuten dietyylieetteri ja tetrahydrofuraani; asetonitriili, dimetyyliformamidi ja dimetyyliasetamidi. Yleensä reaktio 20 voidaan saattaa loppuun noin 5 minuutissa - 5 tunnissa reaktiolämpötilassa noin -20 - 50 °C, edullisesti huoneenlämpötila - noin 30 °C.

Yllä olevassa reaktiossa lähtöyhdisteenä käytettävä kaavan (VIII) mukainen yhdiste on sinänsä tunnet- 25 tu ja se voidaan valmistaa tavalla, joka on esitetty esimerkiksi japanilaisessa laid-open-patenttijulkaisussa nro 123 985/1981, tai edullisemmin stereoselektiivisen menetelmän mukaisesti, kuten on esitetty japanilaisessa laid-open-patenttijulkaisussa nro 284 174/1988.

30 Lisäksi kaavan (IX) mukainen [1-(1,3-tiatsolin-2- .. yyli)atsetidin-3-yyli]tioli voidaan valmistaa menetelmän mukaisesti, joka kuvataan valmistusesimerkeissä tai myöhemmin mainituissa sovellusesimerkeissä, tai se voidaan valmistaa helposti kaupallisesti saatavista yhdisteistä.

19 106962

Tuloksena tuotetaan erittäin korkealla saannolla (1R,5S,6S)-2- [1- (1,3-tiatsolin-2-yyli)atsetidin-3-yyli]-tio-6-[(R)-1-hydroksietyyli]-l-metyylikarbapen-2-eemi-3-karboksyylihapot, jotka esitetään kaavalla (I), jossa "Y" 5 on karboksi. Nämä yhdisteet voidaan eristää käyttämällä ioninvaihtohartseja tai polymeerihartseja.

Tämä keksintö tarjoaa karbapeneemiyhdisteiden oraalisesti annettavia esterijohdannaisia, siis (1R,5S,6S)-2 -[1-(1,3-tiatsoli-2-yyli)atsetidin-3-yyli]tio-6-[(R)-1-hyd-10 roksietyyli]-l-metyylikarbapen-2-eemi-3-karboksylaatteja, joilla on kaava (I), jossa ryhmä "Y". on suojaava karboksi. Tämän keksinnön kaavan (I) mukaiset esterijohdannaiset voidaan valmistaa seuraavan reaktiokaavion C mukaisesti:

Reaktiokaavio C 15 HO „ ,, CHq c-, r H H jr 3 _y\ ,b ^'Τ^ΐΓ' \/N N-l + X“?HOfi—<0>n—R® >»Λ R R5 0 20

—► ^ r^if n-L

25 0 COOCHOC-(O) -R6 I5 II n (XII) R° o jossa X on halogeeni, ja R:llä, Rs:llä, R6:lla ja n:llä on 30 samat merkitykset kuin edellä.

Reaktiokaaviossa C X:llä merkitty halogeeni voi olla kloori, jodi, bromi tai fluori.

Kaavan (VII) mukaisen (1R,5S,6S)-[1-(1,3-tiatsolin- 2-yyli)atsetidin-3-yyli]tio-6-[(R)-1-hydroksietyyli] -1-me-35 tyylikarbapen-2-eemi-3-karboksyylihapon reaktio kaavan 20 106962 (XI) mukaisen yhdisteen kanssa voidaan suorittaa esimerkiksi ensin saamalla kaavan (VII) mukainen alkalimetalli-suola vedessä, saattamalla kaavan (VII) mukainen yhdiste reagoimaan sopivien alkalimetalliemästen kanssa, kuten 5 natriumhydroksidin, kaiiumhydroksidin, natriumkarbonaatin, kaliumkarbonaatin, natriumbikarbonaatin, kaliumbikarbonaa-tin tai niiden kaltaisten kanssa. Sitten näin saatu kaavan (VII) mukainen alkalimetallisuola saatetaan reagoimaan kaavan (XI) mukaisen yhdisteen kanssa inertissä orgaani-10 sessa liuottimessa esimerkiksi eettereissä, kuten dietyy- lieetterissä, tetrahydrofuraanissa, dioksaanissa; hiili-hydrideissä, kuten bentseenissä, tolueenissa, ksyleenissä, sykloheksaanissa; Ν,Ν-dimetyyliformamidissa, dimetyylisul-foksidissa, asetonitriilissä, edullisesti dimetyyliform-15 amidissa käyttäen sekoitusta.

Alkalimetalliemäksen määrä ei ole ratkaiseva ja se voi vaihdella sopivasti alueella noin 1-10 moolia, edullisesti alueella noin 1-5 moolia yhdisteen (VII) moolia kohti. Reaktiolämpötila ei rajoitu tietylle alueel-2 0 le ja se voi vaihdella noin 0 °C:sta huoneenlämpötilaan. Reaktio voidaan saattaa loppuun noin 2 tai 3 minuutissa -1 tunnissa näissä olosuhteissa.

Lisäksi kaavan (XI) mukaisen yhdisteen määrä ei ole ratkaiseva ja se voi vaihdella sopivasti alueella noin 1 -25 3 moolia, edullisesti alueella noin 1-1,5 moolia kaavan (VII) mukaisen alkalimetallisuolan moolia kohti. Reak-tiolämpötilaa ei rajoiteta ja se voi yleensä vaihdella alueella noin -20 - 50 °C, edullisesti alueella 0 °C - huoneenlämpötila, ja reaktio voidaan saattaa loppuun noin 30 10 minuutissa - noin 2-3 tunnissa.

Siten tuotetaan (1R, 5S, 6S) -2-[1-(1,3-tiatsolin-2-yyli)atsetidin-3-yyli]tio-6-[(R)-1-hydroksietyyli]-1-me-tyylikarbapen-2-eemi-3-karboksylaatit, jotka esitetään kaavalla (I), jossa Y on suojattu karboksi [kaavan (XII) 35 mukaiset yhdisteet], ja nämä yhdisteet voidaan eristää ja . 21 106962 puhdistaa tavanomaisella menetelmällä, esimerkiksi suodattamalla, dekantoimalla, uuttamalla, pesemällä, poistamalla liuotin, pyiväskromatografiällä, ohutkerroskromatografial-la, uudelleenkiteytyksellä, tislaamalla, sublimoinnilla 5 tai niiden kaltaisilla.

Edellä olevassa reaktiokaaviossa C lähtöyhdisteenä käytettävät kaavan (VII) mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa myöhemmin mainituissa esimerkeissä kuvatun menetelmän mukaisesti.

10 Tämän keksinnön kaavalla (I) esitetyt yhdisteet voidaan muuttaa niiden farmaseuttisesti hyväksyttäväksi happoadditiosuolaksi epäorgaanisten tai orgaanisten happojen kanssa; näihin kuuluvat esimerkiksi alifaattinen happo, kuten etikkahappo, propionihappo, voihappo, trifluori-15 etikkahappo, trikloorietikkahappo tai niiden kaltaiset; substituoitu tai substituoimaton bentsoehappo, kuten bent-soehappo, p-nitrobentsoehappo tai niiden kaltaiset; (alempi (halogeeni)alkyyli)sulfonihappo, kuten metaanisulfoni-happo, trifluorimetaanisulfonihappo tai niiden kaltaiset; 20 substituoitu tai substituoimaton aryylisulfonihappo, kuten bentseenisulfonihappo, p-nitrobentseenisulfonihappo, p-bromibentseenisulfonihappo, tolueenisulfonihappo, 2,4,6-tri-isopropyylibentseenisulfonihappo tai niiden kaltaiset; orgaaninen fosfiinihappo, kuten difenyylifosfiinihappo; ja ·. 25 epäorgaaninen happo, kuten kloorivetyhappo, rikkihappo, bromivetyhappo, jodivetyhappo, boorifluorihappo, typpihappo tai niiden kaltaiset.

Tämän keksinnön mukaiset halutut yhdisteet, joilla on kaava (I), ovat uusia yhdisteitä, joita ei erityisesti 30 esitetä edellä mainitussa julkaisussa ja jotka ovat erittäin stabiileja dehydropeptidaasia (DHP) vastaan, joka ♦ tunnetaan munuaisentsyyminä, ja niillä on ylivoimaiset bakteerien vastaiset aktiivisuudet. Lisäksi tämän keksinnön oraalisesti annettavat karbapeneemiyhdisteet osoitta-35 vat hyvää suoliabsorptiota kehossa ja ne muutetaan helpos- 22 106962 ti karbapeneemiyhdisteeksi, joka on erittäin aktiivinen lukuisia patogeenisiä mikro-organismeja vastaan. Siksi tämän keksinnön karbapeneemiyhdisteitä, joilla on kaava (I) , jossa ryhmä Y on suojaava karboksi, voidaan käyttää lääk-5 keen esiaste -tyyppisinä antibioottisina aineina oraalista antamista varten ja ne ovat käyttökelpoisia käytännön kliinistä käyttöä varten. Tämän keksinnön mukaisista yhdisteistä, joilla on kaava (I), on määritetty alla kuvatuilla biologisilla kokeilla merkittävän suuria bakteerin 10 vastaisia aktiivisuuksia, suoliabsorptiota ja stabiili- suutta munuais-DHP:tä vastaan.

I. Bakteerien vastaiset kokeet

Koemenetelmät:

Bakteerien vastaiset aktiivisuudet testattiin agar-15 levylaimennusmenetelmällä Japanese Chemotherapy Societyn [Chemotherapy, Voi. 29, 76 - 79 (1981)] standardimenetel män mukaisesti.

Koemikro-organismien Mueller-Hinton (MH) agar-nes-teväliainetta viljeltiin yön yli 37 °C:ssa ja saatu vil-20 jelmäväliaine laimennettiin puskuroidulla suolaliuosgela- tiiniliuoksella . (BSG) sisältämään noin 106 koemikro-orga-nismisolua millilitraa kohti, ja sitten laimennettu liuos siirrostettiin mikroistuttajalla määrässä noin 5 mikrolit-raa MH-agar-väliaineelle, joka sisältää koeyhdisteen. Tätä .· 25 väliainetta inkuboitiin sitten 37 °C:ssa 18 tunnin ajan.

Minimi inhibiittipitoisuus (MIC) määritetään pienimpänä mahdollisena pitoisuutena, jossa koemikro-organismi ei voinut kasvaa. Tässä mainitaan erikseen, että koeorganis-mit olivat kaikki standardikantoja.

3 0 Tulokset: ... Taulukko 3 esittää koetulokset. Tässä käytetyt koe- yhdisteet olivat esimerkissä 2 saatu yhdiste (28), joka on esimerkissä 6 saadun yhdisteen (33) aktiivinen yhdiste, ja esimerkissä 4 saatu yhdiste (31).

Taulukko 3 23 106962

Minimit inhibiittipitoisuudet (MIC) MIC (p-g/ml) koeyhdisteet 5

Koeorganismit (28) (31) S. aureus FDA209P JC-1 0,013 0,05 S. aureus Terajima <0,006 <0,006 S. aureus MS353 <0,006 0,025 10 S. pyogenes Cook <0,006 <0,006 B. subtilis ATCC 6633 0;025 0,025 M. luteus ATCC 9341 0,2 0.2 E. coli NIHJ JC-2 0,013 0,05 E. coli K-12 C600 0,1 0,2 15 E. cloacae 963 * 0,05 0,2 E. aerogenes ATCC 13048 0,1 0,39 K. pneumoniae PCI-602 0,013 0,013 S. typhimurium IID971 0,025 0,1 S. typhi 901 £0,006 0,05 20 .S. paratyphi 1015 0,05 0,05 S. schottmuelleri 8006 0,025 0,2 S. enteritidis G14 0,39 0,2 S. marcescens IAM 1184 0,05 0,39 M. morganii IFO 3848 0,39 0,2 25 P. mirabilis IFO 3849 0,39 0,78 P. vulgaris OX-19 0,1 0,1 P. vulgaris HX-19 0,1 0,39 P. rettgeri IFO 3850 0,39 6^25 30 Edelliset tulokset osoittavat selvästi, että tämän ;· keksinnön mukaisilla karbapeneemiyhdisteillä on ylivoimai set bakteerien vastaiset aktiivisuudet Staohvlococcusta. Streptococcusta, Klebsiel.1 aa ja Proteusta vastaan.

24 106962 II. Bakteerien vastaiset aktiivisuudet kliinisesti eristettyä mikro-organismia vastaan

Koemenetelmät 1. Koeorganismien kannat: 5 Tässä kokeessa käytettiin seuraavia juuri Japanissa kliinisesti eritettyjä kantoja.

MRSA 28 kantaa S. eoidermidis 23 kantaa 10 E. faecalis 16 kantaa E. coli 20 kantaa E. cloacae 14 kantaa K, pneumoniae 23 kantaa S. marcescens 27 kantaa 15 2. Koe suoritettiin agar-levylaimennusmenetelmällä The Japanese Chemotherapy Societyn standardimenetelmän mukaisesti. Minimi inhibiittipitoisuus (MIC) määritettiin oleellisesti samalla tavalla kuin kokeessa I kuvatussa 20 koemenetelmässä.

Tulokset:

Esimerkissä 2 saatua yhdistettä (28) käytettiin tässä kokeessa. Käytetyt kontrolliyhdisteet olivat keftat-sidiimi (CAZ) kefalosporiiniyhdisteenä, ja imipeneemi kar-.·, 25 bapeneemiyhdisteenä, joita käytetään laajalti kliinisessä käytössä.

Taulukko 4 esittää koetulokset. Taulukossa on listattuna 50-%:n inhibiittipitoisuudet MICS0 koekantoja vastaan .

» · 25 106962

Taulukko 4 MIC50 kliinisesti eristettyä mikro-organismia vastaan _______(pg/ml) 5 ----- MRSA S.epidermidis E.faecalis (28) 0,78 0, 39 0,39 3,13 0,2 0,78 CAZ 100 12,5 25 10 ============================== E.coli» E.cloacae K.pneumoniae (28) 0,05 0,1 0,025 15 °;78 0,2 · 0,2 CAZ 3^ 13 1,56 0,2 S.marcescens 20 (28) 0,2 1,56 CAZ 0,39 1 E. colin tapauksessa esitetään MIC100-tiedot.

2 5

Edelliset tulokset osoittavat selvästi, että tämän keksinnön mukaisilla karbapeneemiyhdisteillä on ylivoimaiset bakteerien vastaiset aktiivisuudet.

III. Stabiilisuuskoe munuaisdehydropeptidaasi-1:tä 30 vastaan:

Koemenetelmät: Tämän keksinnön karbapeneemiyhdisteiden stabiilisuus mitattiin puhdistetulla entsyymillä, joka on uutettu sianmunuaiskuoresta. Substraattina yhdiste säädettiin an-35 tamaan loppupitoisuus 35 μΐ/ml ja lisättiin sitten entsyy- 26 106962 miliuokseen 50 mM:ssa MOPS-puskuria (pH 7,0) . Reaktioseos-ta inkuboitiin 30 °C:ssa 2 tunnin ajan ja laimennettiin sitten yhtäsuurella tilavuudella metanolia. Jäljelle jäänyt antibioottinen aktiivisuus supernatantissa 20 minuutin 5 sentrifugoinnin kierrosnopeudella 1 000 x g jälkeen määritettiin bioanalyysimenetelmällä käyttäen Staphylococcus aureus Terajimaa. Standardikäyrät laskettiin käyttäen in-aktivoitua entsyymiä kontrollina.

Esimerkissä 2 saatua yhdistettä (28) käytettiin 10 koeyhdisteenä ja imipeneemiä käytettiin kontrolliyhdistee- nä.

Tulokset:

Taulukko 5 alla esittää tämän keksinnön mukaisen yhdisteen ja imipeneemin stabiilisuuskokeen tulokset sian-15 munuaisdehydropeptidaasi-1:tä vastaan.

Taulukko 5

Stabiilisuus sianmunuais-DHP-1:tä kohtaan

Koeyhdisteet 0 30 60 120 2110 (min) 20

Yhdiste (28) 100 100 82,9 67, 1 1l0/0

Imipineemi 100 35 10 3 0 ‘Jäljelle jäävä aktiivisuus (%) 25

Stabiilisuuskokeen tulokset DHP-l:tä vastaan osoittavat selvästi, että tämän keksinnön mukainen karbapenee-miyhdiste oli stabiilimpi kuin imipeneemi.

IV. In situ -kokeet absorptiolla rotan suolenmut- 30 kasta .. Menetelmä: « 7-viikkoisia Wistar-suvun koirasrottia käytettiin yön yli paastolla pitämisen jälkeen. Kun eläimet oli nukutettu eetterillä, suolisto otettiin esiin ja 30 cm:n pi-35 tuinen terävä mutka valmistettiin tyhjäsuolen yläosasta 27 106962 sitomalla molemmat päät. 0,2-%:isiä koeyhdisteiden fysiologisia suolaliuoksia injektoitiin annoksessa 20 mg/kg mutkaan ruiskulla ja mutka palautettiin. Noin 0,4 ml verta otettiin kaulalaskimosta 10, 30, 60 ja 120 minuuttia an-5 nostamisen jälkeen. Sitten koeyhdisteiden tai aktiivisen metaboliitin plasmapitoisuudet mitattiin HPLCrllä. Ja laskettiin ala plasmapitoisuustaso-aika-käyrän (AUC) alla 2 tuntia antamisen jälkeen.

Koeyhdisteinä käytettiin yhdisteitä (28), (32) ja 10 (33), jotka saatiin vastaavasti esimerkeistä 2, 5 ja 6.

Tulokset:

Taulukko 6 esittää koetulokset. Taulukossa esitetään koeyhdisteiden maksimipitoisuudet plasmassa (C max) ja AUC: t (^g *h/ml) . Yhdisteiden (32) ja (33) antamisen 15 jälkeen nämä yhdisteet olivat huomaamattomia ja havaittiin vain de-esteröity aktiivinen yhdiste [yhdiste (28)] . Siksi näiden yhdisteiden tapauksissa koetulokset on esitetty yhdisteen (28) tuloksina.

Taulukko 6 20 Suoliabsorptio , Koevhdisteet

Testikohdat ----- _(28) (32) (33) C max ^g/ml) 0^8 8r12;3 - - - 2 5 AUC ^g.h j ml) (0-2 Xl) 1;° 9/η 15/7

Edelliset tulokset osoittavat selvästi, että tämän keksinnön oraalisesti annettavilla karbapeneemiyhdisteillä 30 on ylivoimainen suoliabsorptio. Siis yhdisteiden (32) ja (33) antamisen jälkeen nämä yhdisteet absorboitiin helpos ti kehoon ja sitten nopeasti muutettiin aktiiviseksi kar-bapeneemiyhdisteeksi [yhdiste (28)].

28 106962 V. Oraalisen absorption tutkiminen

Menetelmä: 5-viikkoisia ddY-suvun koirashiiriä käytettiin yön yli paastolla pitämisen jälkeen. Koeyhdisteet l-%:ssa fy-5 siologista suolaliuosta annoksessa 100 mg/kg annettiin oraalisesti 2 hiiren ryhmälle. Verta otettiin kaulalaski-mosta 15, 30, 60 ja 120 minuuttia annostamisen jälkeen.

Sitten koeyhdisteiden tai aktiivisen metaboliitin pitoisuudet ja ala plasmapitoisuustaso-aika-käyrän (AUC) alla 10 laskettiin samalla tavalla kuin edellä on mainittu.

Koeyhdisteinä käytettiin tämän keksinnön yhdisteitä (28), (32) ja (33), jotka saatiin esimerkeistä 2, 5 ja 6.

Tulokset:

Taulukko .7 esittää koetulokset. Taulukossa esite-15 tään koeyhdisteiden maksimipitoisuudet plasmassa (C max) ja AUC: t (^g-h/ml). Yhdisteiden (32) ja (33) antamisen jälkeen näitä yhdisteitä ei havaittu ja havaittiin vain de-esteröity aktiivinen yhdiste [yhdiste (28)] . Siksi näiden yhdisteiden tapauksissa koetulokset on esitetty yhdis-20 teen (28) tuloksina.

Taulukko 7

Oraalinen absorptio (pg/ml)

Koeyhdisteet

Koekohdat (28) (32) (33) C max (μ8/πι1) 3j5 131;2 . 128^3 AUC ^s.h./ml) 5,0 147,8 150,2 (0-2 h) 30 In vivo -koetuloksista tämän keksinnön oraalisesti annettavat karbapeneemiyhdisteet osoittivat hyvää oraalista absorptiota.

VI. Toksisuus:

Toksikologiset tutkimukset suoritettiin käyttäen 35 10 CrjCD(SD)-sukua olevan koirashiiren ryhmää, jotka hii- 29 106962 ret painoivat 20-23 grammaa. Liuos, joka sisälsi kutakin tämän keksinnön karbapeneemiyhdistettä (28), (31), (32) ja (33), annettiin ihonalaisesti hiirille, ja ne altistettiin tarkkailulle yhdeksi viikoksi.

5 Tulokset ovat paljastaneet, että ryhmä hiiriä, joille oli annettu tämän keksinnön karbapeneemiyhdisteitä määrässä 500 mg/kg, olivat elossa ilman mitään epänormaaleja löydöksiä.

Kuten edellä on kuvattu, tämän keksinnön mukaiset 10 karbapeneemiyhdisteet osoittavat laajempaa antibakteerisen kirjon piiriä kuin tavanomaiset kefalosporiiniyhdisteet, ja huomattavia bakteerien vastaisia aktiivisuuksia verrattuna imipeneemiin samoin kuin suunnattomasti suurempaa resistenssiä DHP:lie kuin imipeneemi.

15 Siksi tämän keksinnön mukaiset karbapeneemiyhdis teet, joilla on kaava (I), sallivat yksittäisen antamisen ilman yhdistelmää minkä tahansa toisen yhdisteen kanssa ja ilman minkään sivuvaikuksen riskiä, joka saattaisi aiheutua niiden yhdistetyssä käytössä DHP-inhibiittorin kanssa, 20 toisin kuin imipeneemi, joka vietiin ensimmäistä kertaa käytännössä hyödylliseen bakteerien vastaiseen aineeseen yhdistelmässä kilastatiinin kanssa, joka toimi DHP-inhi-biittorina. Karbapeneemiyhdisteet ovat siis erittäin käyttökelpoisia bakteerien vastaisina aineina eri patogeeni-25 sista organismeista peräisin olevien tarttuvien tautien terapiaa ja ehkäisyä varten.

Tämän keksinnön mukaiset karbapeneemiyhdisteet, joilla on kaava (I), voidaan antaa bakteerien vastaisena aineena ihmiselle ja muille nisäkkäille farmaseuttisesti 30 hyväksyttävän koostumuksen muodossa, joka sisältää sitä bakteerien vastaisen vaikuttavan määrän. Antamisannos voi vaihdella laajalla alueella iän, potilaiden, potilaiden painon ja tilan, antamismuotojen tai -reittien, lääkärin diagnoosien tai niiden kaltaisten mukaan, ja se voidaan 35 antaa oraalisesti, parenteraalisesti tai paikallisesti 30 106962 aikuispotilaille yleensä standardina vuorokausiannoksena alueella noin 2 00 - 3 000 mg kerran tai useampina erinä vuorokautta kohti.

Tämän keksinnön mukaisen karbapeneemiyhdisteen, 5 jolla on kaava (I), farmaseuttisesti hyväksyttävä koostumus voi sisältää epäorgaanisen tai orgaanisen kiinteän tai nestemäisen kantajan tai laimentimen, jota käytetään tavanomaisesti lääkkeiden valmistusta varten, erityisesti antibioottisia valmisteita varten, kuten täyteaine esim. 10 tärkkelys, laktoosi, valkoinen sokeri, kiteinen selluloosa, kalsiumvetyfosfaatti tai niiden kaltaiset; sideaine esim. akaasia, hydroksipropyyliselluloosa, algiinihappo, gelatiini, polyvinyylipyrrolidoni tai niiden kaltaiset; voiteluaine esim. steariinihappo, magnesiumstearaatti, 15 kalsiumstearaatti, talkki, hydrattu kasviöljy tai niiden kaltaiset; hajotusaine esim. modifoitu tärkkelys, kal-siumkarboksimetyyliselluloosa, alhaisesti substituoitu hydroksipropyyliselluloosa tai niiden kaltaiset; tai liuo-tusapuaine esim. ei-ioninen pinta-aktiivinen aine, anioni-20 nen pinta-aktiivinen aine tai niiden kaltaiset, ja se voidaan valmistaa muotoihin, jotka ovat sopivia oraalista, parenteraalista tai paikallista antamista varten. Formu-laatioihin oraalista antamista varten voivat kuulua kiinteät valmisteet, kuten tabletit, pinnoitteet, kapselit, .* 25 pillerit, jauheet, hienot jauheet, granulaatit, kuivat siirappimaiset aineet tai niiden kaltaiset, tai nestemäiset valmisteet, kuten siirappimaiset aineet ja sen kaltaiset; formulaatioihin parenteraalista antamista varten voivat kuulua esimerkiksi injektoitavat liuokset, tiputuksel-30 la annettavat liuokset, depositorit tai niiden kaltaiset; ja formulaatioihin paikallista antamista varten voi kuulua ♦ esimerkiksi salvat, tinktuurat, voiteet, geelit tai niiden kaltaiset. Nämä formulaatiot voidaan muodostaa sinänsä farmaseuttisten formulaatioiden alan ammattimiesten tunte-35 millä menetelmillä.

. 31 106962 Tämän keksinnön mukaiset karbapeneemiyhdisteet, joilla on kaava (I), annetaan sopivasti oraalisten tai pa-renteraalisten formulaatioiden muodossa, erityisesti oraalisten formulaatioiden muodossa.

5 Tämän keksinnön mukaisten karbapeneemiyhdisteiden, joilla on kaava (I) , valmistus kuvataan yksityiskohtaisemmin sovellusesimerkeillä.

Seuraavassa kuvauksessa käytetään seuraavia symboleja, joilla on erityismerkitykset.

10 Me : metyyliryhmä

Et : etyyliryhmä

Ac : asetyyliryhmä

Ph : fenyyliryhmä PNB : p-nitrobentsyyliryhmä 15 PNZ : p-nitrobentsyylioksikarbonyyliryhmä i-Pr : isopropyyli t-But : tert-butyyli

Boc : t-butoksikarbonyyli

Valmistus 1:

20 $ S

*HCi + MeS—4 * H°~^\/N_^n_ Π) (2) (3) 25 s— -► AcS—.N—^ N— (4) 30 (a) Liuokseen, jonka muodosti 109 mg 3-hydroksiat- ·. setidiini *HC1:a [yhdiste (1)] 5 ml:ssa etanolia, lisättiin seos, jonka muodostivat 133 mg 2-metyylitiätsoliiniä [yhdiste (2)] ja natriummetoksidia, ja reaktioseosta palautus jäähdytettiin 8 tuntia. Kun liuotin oli poistettu alen-35 netussa paineessa, saatu jäännös liuotettiin kloroformiin 32 106962 ja pestiin 50-%:isella vesipitoisella kaliumkarbonaatti-liuoksella. Liuotin poistettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 119 mg (81,5 %) 3-hydroksi-l-(tiatsolin-2-yyli)atsetidiiniä [yhdiste (3)] kiteisenä aineena.

5 ^-NMR (CDC13) δ: 3,356 (t, 2H, J= 7,26 Hz), 3,70 ~ 4,00 (m, 4H), 4,211 (t, 2H, J = 8,21 Hz), 4,622 = 4,705 (m, 1H), 4,971 (s, 1H).

(b) Seosliuokseen, jonka muodostivat trifenyylifos-fiini ja dietyyliatsodikarboksylaatti 10 ml:ssa tetrahyd-10 rofuraania, lisättiin seos, jonka muodostivat 119 mg yhdistettä (3) ja tioetikkahappo, käyttäen jää-jäähdytystä, ja reaktioseosta sekoitettiin 1 tunti samoissa olosuhteissa, sitten 1 tunti huoneenlämpötilassa. Kun reaktioliuotin oli poistettu alennetussa paineessa, saatu jäännös puhdis-15' tettiin silikageelipylväskromatografiällä (kloroformi :etanoli = 1:1), jolloin saatiin 107 mg (65 %) 3-asetyylitio-1-(tiatsolin-2-yyli)atsetidiiniä [yhdiste (4)].

1H-NMR (CDCI3) δ: 2,333 (s, 3H) , 3,352 (t, 2H, J = 7,26 Hz), 3,885 (dd, 2H, J = 8,24, 5,28 Hz), 4,012 (t, 2H, 20 J = 7,26 Hz), 4,250 ~ 4,374 (m, 1H), 4,426 (t, 2H, J = 8,25 Hz).

Valmistus 2: s— · .s— S— HS—^ -► MeS—^ MeS—^ ·': 25 N—l^OH N—S^OH N">v^0\^0CH3 (5) (6) (7) g__ g_ 30 — *“0"“^ “* AcS^0N~i N—N—1S^Ö^OCHg " (8) (9) (a) Seosliuokseen, jonka muodostivat 4,88 g 4 (R)-hydroksimetyyli-2-merkapto-l,3-tiatsoliinia [yhdiste (5)] 35 ja 22,8 ml di-isopropyylietyyliamiinia 65 ml:ssa kuivaa 33 106962 metanolia, lisättiin 14,00 g metyylijodidia palautusjääh-dytysolosuhteissa, ja reaktioseosta palautusjäähdytettiin 1 tunti. Kun liuotin oli poistettu alennetussa paineessa, saatu jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin ja orgaaninen 5 kerros pestiin kylläisellä natriumbikarbonaattiliuoksella, vedellä ja kylläisellä suolaliuoksella, ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin alennetussa paineessa ja saatu jäännös puhdistettiin silikageelipylväs-kromatografiällä (kloroformi-asetoni), jolloin saatiin 10 3,14 g (59 %) 4(R)-hydroksimetyyli-2-metyylitio-1,3-tiat- soliiniä [yhdiste (6)].

1H-NMR (CDC13) δ: 2,53 (s, 3H) , 3,30 (dd, 1H, J = 8,6, 10,6 Hz), 3,44 (dd, 1H, J = 7,6, 10,6 Hz), 3,67 - 3,73 (m, 1H), 3,86 - 3,92 (m, 1H), 4,51 - 4,68 (m, 1H).

15 (b) 3,14 g kohdassa (a) saatua yhdistettä (6) ja 6,7 ml di-isopropyylietyyliamiinia liuotettiin 40 ml.-aan kuivaa dikloorimetaaniliuosta. 2,33 g kloorimetyylimetyy-lieetteriä lisättiin edellä mainittuun seokseen käyttäen jää-jäähdytystä, ja reaktioseosta sekoitettiin 1 tunti 20 samoissa olosuhteissa ja 15 tuntia huoneenlämpötilassa.

Reaktion jälkeen reaktioseos pestiin vedellä, kylläisellä natriumbikarbonaattiliuoksella ja kylläisellä suolaliuoksella, ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Kun liuotin oli poistettu, saatu jäännös puhdistettiin silikageelipylväs-. 25 kromatografiällä (kloroformi-etyyliasetaatti) , jolloin saatiin 1,42 g (36 %) 4(R)-metoksi-metyylioksimetyyli-2- metyylitio-1,3-tiatsoliinia [yhdiste (7)].

1H-NMR (CDCI3) δ: 2,55 (s, 3H) , 3,35 (dd, 1H, J = 7,3, 10,9 Hz), 3,38 (s, 3H), 3,42 (dd, 1H, J = 8,3, 10,9 30 Hz), 3,474 (dd, 1H, J = 7,6, 9,9 Hz), 3,78 (dd, 1H, J = 5,0, 9,9 Hz), 4,66 - 4,70 (m, 1H) , 4,67 (s, 2H) .

(c) Seosliuosta, jonka muodostivat 0,924 g edellä kohdassa (b) saatua yhdistettä (7), 0,540 g 3-hydroksiat-setidiini -HCl:a [yhdiste (1)] , 0,4 90 g natriumbikarbonaat-35 tia ja 0,160 g etikkahappoa 20 ml:ssa etanolia, palautus- 34 106962 jäähdytettiin 24 tuntia. Kun liuotin oli poistettu, saatu jäännös liuotettiin kloroformiin ja pestiin 50-%:isella kaliumkarbonaatin vesiliuoksella. Orgaaninen kerros kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja poistettiin sitten alen-5 netussa paineessa. Saatu jäännös puhdistettiin silikagee-lipylväskromatografiällä (10 % metanolia kloroformissa), jolloin saatiin 0,590 g (57 %) 1-(4(R)-metoksimetyyliok-simetyyli-l,3-tiatsoli-2-yyli)-3-hydroksiatsetidiiniä [yhdiste (8) ] .

10 ^-NMR (CDC13) Ö: 3,25 - 3,32 (m, 1H) , 3,37 (s, 3H) , 3,40 - 3,46 (m, 1H) , 3,47 - 3,52 (m, 1H), 3,63 (dd, 1H, J = 5,3, 9,9 Hz), 3,79 - 3,89 (m, 2H) , 4,16 - 4,22 (m, 2H), 4,38 - 4,45 (m, 1H), 4,61 - 4,68 (m, 3H).

(d) Liuokseen, jonka muodosti 1,40 g trifenyyli-15 fosfiinia 15 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania, lisättiin 0,800 ml dietyyliatsodikarboksylaattia käyttäen jää-jääh-dytystä, ja liuosta sekoitettiin 0,5 tuntia. Sitten seos-liuos, jonka muodostivat 0,588 g edellä kohdassa (c) saatua yhdistettä (8) ja 0,361 ml tioetikkahappoa 15 ml:ssa 20 kuivaa tetrahydrofuraania, lisättiin tipoittain edellä mainittuun liuokseen käyttäen jää-jäähdytystä, ja reak-tioseosta sekoitettiin 1 tunti samoissa olosuhteissa ja 1 tunti huoneenlämpötilassa. Kun liuotin oli poistettu, saatu jäännös puhdistettiin silikageelipylväskromatogra-. 25 f iällä (kloroformi-asetoni), jolloin saatiin 0,600 g (82 %) 2-asetyylitio-1-(4(R)-metoksimetyylioksimetyyli- 1,3-tiatsolin-2-yyli)atsetidiiniä [yhdiste (9)].

"H-NMR (CDCI3) δ: 2,33 (s, 3H) , 3,29 (dd, 1H, J = 6,3, 10,9 Hz), 3,37 (s, 3H), 3,43 (dd, 1H, J = 7,6, 10,9 30 Hz), 3,50 (dd, 1H, J = 7,9, 9,9 Hz), 3,67 (dd, 1H, J = 4,6, 9,9 Hz), 3,86 - 3,91 (m, 2H) , 4,25 - 4,34 (m, 1H) , 4,39 - 4,51 (m, 3H), 4,66 (s, 2H).

Valmistus 3: 35 106962 CH20H —► <Q>— CH2OCCH2(MOH -► ' _ O «3 5 (10) 01) o o

ft Λ II II

\ y-CH20CCH2CH0—P(0Ph)2 -► CICH20CCH2CH0-P(0Ph)2 O CHj O CHj io (12) (13) (a) 0,3 g natriumhydroksidia lisättiin 64,8 g:aan bentsyylialkoholia, ja reaktioseos jäähdytettiin 0 °C:seen. Tähän reaktioseokseen lisättiin 12,9 g β-buty- 15 rolaktonia, ja seosta sekoitettiin 5 minuuttia 0 °C:ssa ja 2 tuntia huoneenlämpötilassa. Reaktion jälkeen reaktio-liuos neutraloitiin lisäämällä 15 ml 1 N HCl-liuosta, ja erotettu orgaaninen kerros pestiin kylläisellä natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja suolaliuoksella, ja kuivat-20 tiin magnesiumsulfaatilla. Saatu orgaaninen kerros tislattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 23,3 g (79 %) bentsyyli-3-hydroksibutanoaattia [yhdiste (11)] öljynä.

Kiehumispiste: 134 °C/8 mmHg ^H-NMR (CDC13) δ: 1,22 (d, 3H, J = 6,3 Hz), 2,41 * .·; 25 2,58 (m, 2H) , 2,95 (leveä s, 1H) , 4,15 « 4,24· (m, 1H) , 5,14 (s, 2H), 7,30 « 7,36 (m, 5H).

(b) Seosliuos, jonka muodostivat 1,0 g kohdassa (a) saatua bentsyyli-3-hydroksibutanoaattia, 1,0 ml trietyyli-amiinia ja 63 mg 4-dimetyyliaminopyridiiniä 10 ml:ssa me- 30 tyleenikloridia, jäähdytettiin 0 °C:seen. Tähän liuokseen lisättiin 1,79 g difenyylifosforokloridaattia typpiatmos-fäärissä, ja reaktioseosta sekoitettiin 3 tuntia huoneenlämpötilassa. Reaktion jälkeen reaktioseos pestiin 1 N HCl-liuoksella, kylläisellä natriumbikarbonaatin vesi-35 liuoksella ja suolaliuoksella, ja kuivattiin magnesiumsul- 36 106962 faatilla. Liuotin poistettiin alennetussa paineessa ja saatu jäännös puhdistettiin silikageelipylväskromatogra-fialla metyleenikloridin kanssa, jolloin saatiin 1,85 g (84 %) 3-difenoksifosforyylioksibutanoaattia [yhdiste 5 (12)] värittömänä öljynä.

^-NMR (CDClj) δ: 1,32 (d, 3H, J = 6,3 Hz), 2,52 (dd, 1H, J = 6,3, 15,8 Hz), 2,72 (dd, 1H, J = 6,3, 15,8

Hz), 4,92 (d, 1H, J = 12,9 Hz), 4,98 (d, 1H, J = 12,9 Hz), 4,9 ~ 5,1 (m, 1H), 7,06 ~ 7,20 (m, 15H) .

10 (c) Liuokseen, jonka muodostivat 1,23 .g kohdassa (b) saatua yhdistettä (12), 8 ml etyyliasetaattia ja 8 ml etanolia, lisättiin 61 mg 10-%:ista palladium-hiiltä, ja reaktioseosta sekoitettiin 1 tunti H2-kaasuatmosfäärissä huoneenlämpötilassa. Sitten palladium-hiili suodatettiin 15 ja orgaaninen kerros poistettiin alennetussa paineessa.

Saatu jäännös liuotettiin 8 ml:aan metyleenikloridia ja tähän liuokseen lisättiin seos, jonka muodostivat 847 mg natriumbikarbonaattia, 8 ml vettä, 98 ml tetrabutyyliam-moniumfosfaattia ja 570 mg kloorimetyylikloorisulfonaat-20 tia, ja reaktioseosta sekoitettiin 2 tuntia huoneenlämpö-tilassa. Reaktion jälkeen orgaaninen kerros erotettiin ja pestiin suolaliuoksella ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin alennetussa paineessa, ja saatu jäännös puhdistettiin silikageelipylväskromatografiällä 25 metyleenikloridin kanssa, jolloin saatiin 1,10 g (99 %) kloorimetyyli-3-difenyylifosforyylioksibutanoaattia [yhdiste (13)] värittömänä öljynä.

1H-NMR (CDCI3) 6: 1,46 (d, 3H, J = 6,3 Hz), 2,66 (dd, 1H, J = 6,3 Hz, 15,8 Hz), 2,85 (dd, 1H, J = 6,3 Hz, 30 15,8 Hz), 5,09 » 5,18 (m, 1H), 5,58 (d, 1H, J = 6,0 Hz), .. 5,61 (d, 1H, J = 6,0 Hz), 7,16 ~ 7,37 (m, 10H) .

37 106962

Valmistus 4 :

O

II

iPr2N-P(OPNB)2 5 ^ ho-(ch2)5—cooch2och3 -—-► (14) ° (15)

R O

ίο II n

(PNB0)2P0—(ch2)5—cooch2och3 -► (PNB0)2P0—(CH2)5C00CH2CI

M (18) 15 (a) Liuokseen, jonka muodosti 12,0 g e-heksanolak- tonia 20 ml:ssa etanolia, lisättiin liuos, jonka muodosti 11,7 g kaliumhydroksidia 20 ml:ssa vettä, käyttäen jää-jäähdytystä, ja reaktioseosta sekoitettiin 2,5 tuntia 40 °C:ssa. Reaktion jälkeen reaktioseos säädettiin pH-ar-20 voon 9 lisäämällä 1 N HCl-liuosta ja pestiin etyyliasetaatilla (kahdesti). Vesikerros väkevöitiin alennetussa paineessa, ja jäännös säädettiin pH-arvoon 1 lisäämällä 1 N HCl-liuosta ja uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros kuivattiin magnesiumsulfaatilla, ja liuotin pois-25 tettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 11,5 g 6-hydroksiheksaanihappoa. Seosta, jonka muodostivat 1 g edellä saatua 6-hydroksiheksaanihappoa, 0,72 mg natriumbikarbonaattia 20 ml:ssa vettä, sekoitettiin 15 minuuttia. Reaktion jälkeen liuotin poistettiin ja saatu jäännös pes-30 tiin asetonitriilillä, jolloin saatiin 1,24 g natrium-6-: hydroksiheksaanihappoa. Sitten 276 mg tätä yhdistettä liuotettiin 2,7 mitään dimetyyliformamidia ja tähän liuokseen lisättiin 161 mg metoksimetyylikloridia, ja reaktio-seosta sekoitettiin 1,5 tuntia huoneenlämpötilassa. Kun 35 reaktioseokseen oli lisätty 10 ml etyyliasetaattia, orgaa- 38 106962 ninen kerros pestiin suolaliuoksella, kylläisellä natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja vastaavasti suolaliuoksella ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin, jolloin saatiin 190 mg (59 %) metoksimetyyli-6-hyd-5 roksiheksanoaattia [yhdiste (15)].

^-NMR (CDC13) δ: 1,36 ~ 1,72 (m, 6H) , 2,34 (t, 2H, J = 7,2 Hz), 3,45 (s, 3H), 4,07 (t, 2H, J = 6,7 Hz), 5,16 (s, 2H), 5,19 (s, 2H), 5,22 (s, 2H), 7,53 (d, 4H, J = 8,7 Hz), 8,23 (d, 4H, J = 8,7 Hz).

10 (b) Liuokseen, jonka muodosti 25 g fosforitriklo- ridia 70 mlrssa dietyylieetteriä, . lisättiin tipoittain 30 minuutin aikana seos, jonka muodostivat 51 ml di-iso-propyyliamiinia ja 60 ml dietyylieetteriä, -10 °C:ssa, sitten reaktioseosta sekoitettiin 1 tunti huoneeniämpöti-15 lassa. Reaktion jälkeen liukenematon aine suodatettiin ja suodos tislattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 19,8 g (53 %) fosforidi-isopropyyliaminodikloridia öljynä. Kp. 57 0C/4 mmHg.

Liuokseen, jonka muodosti 2,06 g fosforidi-isopro-20 pyyliaminodikloridia 40 ml:ssa metyleenikloridia, lisättiin 4,19 ml di-isopropyyliamiinia -30 °C:ssa typpiatmos-fäärissä ja 3,06 g p-nitrobentsyylialkoholia. Reaktioseosta sekoitettiin 0,5 tuntia samassa lämpötilassa ja vielä 0,5 tuntia huoneenlämpötilassa. Kun liuotin oli poistettu, : 25 saatu jäännös liuotettiin 40 ml:aan dietyylieetteriä ja pestiin kylläisellä suolaliuoksella ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin, jolloin saatiin 4,50 g (100 %) di-isopropyyliamino-di-p-nitrobentsyylifos-fiittia [yhdiste (16)] kellertävänä kiinteänä aineena.

30 ^-NMR (CDCI3) δ: 1,23 (d, 12H, J = 6,6 Hz), 3,71 (q, 1H, J = 6,6 Hz), 3,73 (q, 1H, J = 6,6 Hz), 4,75 « 4,91 (m, 4H) , 7,51 (d, 4H, J = 8,2 Hz), 8,21 (d, 4H, J = 8,2

Hz) .

(c) Seosliuosta, jonka muodostivat 100 mg kohdassa 35 (a) satua yhdistettä (15), 87,4 mg tetratsolia ja 274 mg 39 106962 kohdassa (b) saatua yhdistettä (16) 10 raltssa metyleenik-loridia, sekoitettiin 1,5 tuntia huoneenlämpötilassa. Sitten reaktioseos jäähdytettiin -40 °C:seen ja 215 mg 3-klooriperbentsoehappoa lisättiin reaktioseokseen, ja 5 reaktioseosta sekoitettiin 30 minuuttia. Reaktion jälkeen seos pestiin kylläisellä suolaliuoksella, 10-%:isella nat-riumtiosulfaatin vesiliuoksella, kylläisellä natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja vastaavasti kylläisellä suolaliuoksella. Orgaaninen kerros kuivattiin magnesiumsulfaa-10 tiliä, ja liuotin poistettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 306 mg (95 %) metoksimetyyli-6-di-p-nitro-bentsyylioksifosforyylioksiheksanoaattia [yhdiste (17)].

^H-NMR (CDC13) δ: 1,36 ~ 1,72 (m, 6H) , 2,34 (t, 2H, J = 7,2 Hz), 3,45 (s, 3H), 4,07 (t, 2H, J = 6,8 Hz), 5,16 15 (s, 2H) , 5,19 (s, 2H) , 5,22 (s, 2H) ,' 7,53 (d, 4H, J = 8,7

Hz), 8,23 (d, 4H, J = 8,7 Hz).

(d) Liuokseen, jonka muodosti 206 mg kohdassa (c) edellä saatua yhdistettä (17) 2 ml:ssa tetrahydrofuraania, lisättiin 1 ml 4 N HCl-liuosta, ja reaktioseosta sekoi-20 tettiin 1,5 tuntia huoneenlämpötilassa. Reaktion jälkeen reaktioseos säädettiin pH-arvoon 1 lisäämällä 1 N NaOH-liuosta ja pestiin dietyylieetterillä. Sitten vesikerros säädettiin pH-arvoon 1 lisäämällä 1 N HCl-liuosta ja uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros kuivattiin . . 25 magnesiumsulfaatilla, ja liuotin poistettiin, jolloin saa tiin 96 mg (51 %) 6-di-p-nitrobentsyylioksifosforyylioksi-heksaanihappoa. Sitten 96 mg tätä heksaanihappoa liuotettiin 4,8 ml:aan metyleenikloridia, ja tähän liuokseen lisättiin seosliuos, jonka muodosti 51,3 mg natriumbikarbo-30 naattia 4,8 ml:ssa vettä, 6,6 mg tetrabutyyliammoniumvety-sulfaattia ja 40,4 mg kloorimetyylikloorisulfonaattia, ja reaktioseosta sekoitettiin 1 tunti huoneenlämpötilassa. Reaktion jälkeen orgaaninen kerros erotettiin ja pestiin kylläisellä natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja suola-35 liuoksella, ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Kun liuo- 40 106962 tin oli poistettu alennetussa paineessa, saatu jäännös puhdistettiin silikageelipylväskromatografiällä (metylee-nikloridi-asetoni), jolloin saatiin 69 mg (55 %) kloorime-tyyli-6-di-p-nitrobentsyylioksifosforyylioksiheksanoaattia 5 [yhdiste (18)3 .

^-NMR (CDC13) 6: 1,37 * 1,71 (m, 6H) , 2,37 (t, 2H, J = 7,2 Hz), 4,07 (t, 2H, J = 6,6 Hz), 5,16 (s, 2H), 5,19 (s, 2H), 5,69 (s, 2H), 7,54 (d, 4H, J = 8,5 Hz), 8,23 (d, 4H, J = 8,5 Hz).

10 Valmistus 5:

HOOC— CCH2>7—C00H -FWB00C— (CHgJy—COOCHgC I

Ct9) (20) 15 Liuokseen, jonka muodosti 10 g atselaiinihappoa 200 ml:ssa asetonitriiliä, lisättiin 16,2 mg trietyyliamiinia ja 11,4 g p-nitrobentsyylibromidia typpiatmosfäärissä käyttäen jää-jäähdytystä, ja reaktioseosta sekoitettiin 3 tuntia. Reaktion jälkeen reaktioseos väkevöitiin ja 100 20 ml vettä lisättiin. Liuos säädettiin pH-arvoon 2 lisäämällä 1 N HCl-liuosta ja uutettiin 50 ml :11a etyyliasetaattia (kahdesti). Orgaaninen kerros pestiin kylläisellä suolaliuoksella ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin alennetussa paineessa ja saatu jäännös puhdis-. 25 tettiin silikageelipylväskromatograf iällä (metyleeniklori- di-metanoli), jolloin saatiin 4,51 g (26 %) mono-p-nitro-bentsyyliatselaattia. Sitten liuokseen, jonka muodosti 550 mg tätä atselaattia 10 ml:ssa metyleenikloridia, lisättiin 428 mg natriumbikarbonaattia 10 ml:ssa vettä, 57 mg tetra-30 butyyliammoniumvetysulfaattia ja 336 mg kloorimetyylikloo-risulfonaattia, ja reaktioseosta sekoitettiin voimakkaasti 2 tuntia huoneenlämpötilassa. Reaktion jälkeen reaktioseos pestiin kylläisellä natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja kylläisellä suolaliuoksella, ja kuivattiin magnesiumsul-35 faatilla. Kun liuotin oli poistettu, saatu jäännös puhdis- 106962 41 tettiin silikageelipylväskromatografiällä (metyleeniklori-di), jolloin saatiin 450 mg (74 %) p-nitrobentsyylikloori-metyyliatselaattia [yhdiste (20)].

^-NMR (CDC13) δ: 1,20 » 1,40 (m, 10H) , 2,37 (t, 2H, 5 J = 7,3 Hz), 2,39 (t, 2H, J = 7,2 Hz), 5,20 (s, 2H), 5,70 (s, 2H) , 7,51 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 8,23 (d, 2H, J = 8,7

Hz) .

Valmistus 6: 10 JT~J '—- ΙΓ3 —-

H00C Jj PNB00(f" N

COCH2NHCOO-t-But (21) (22) 15 O —" .0 pibooc' n p®ooc" ^

C0CH2NHC0- ((^2)3—COOH C0CH2NHC0-(CH2)3-C00CH2I

(23) ÖO

20 (a) Seosliuosta, jonka muodostivat 5,0 g L-prolii-nia, 9,91 g p-tolueenisulfonihappomonohydraattia ja 6,65 g p-nitrobentsyylialkoholia 100 ml:ssa bentseeniä, palautus-jäähdytettiin 2 vuorokautta käyttäen Dean-Stark-loukkua.

. 25 Reaktion jälkeen liuotin poistettiin alennetussa painees sa, ja saatu jäännös pestiin dietyylieetterillä, jolloin saatiin 21,7 g L-proliini-p-nitrobentsyyliesteri-p-toluee-nisulfonihapposuolaa öljynä. Sitten seosliuosta, jonka muodostivat 12,17 g Boc-glysiiniä ja 13,32 g l-etyyli-3- 30 (3-dimetyyliaminopropyyli)karbodi-imidi vetykloridia 150 mlrssa etyleenikloridia, sekoitettiin 25 minuuttia käyttäen jää-jäähdytystä typpiatmosfäärissä. Tähän reaktio-seokseen lisättiin liuos, jonka muodosti 29,36 g edellä saatua yhdistettä 100 mlrssa etyleenikloridia, ja reaktio- 35 seosta sekoitettiin yön yli huoneenlämpötilassa. Reaktion 42 106962 jälkeen reaktioseos pestiin 10-%:isella sitruunahapon vesiliuoksella, 4-%:isella natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja suolaliuoksella, ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin alennetussa paineessa, ja saatu 5 jäännös puhdistetiin silikageelipylväskromatografiällä (kloroformi-metanoii) , jolloin saatiin 8,00 g [N-(t-butok-sikarbonyyli)glysyyli]-L-proliini-p-nitrobentsyyliesteriä [yhdiste (22)].

1H-NMR (CDClj) δ: 1,45 (s, 9H) , 1,96 * 2,33 (m, 4H) , 10 3,43 * 3,70 (m, 2H) , 3,93 ® 4,01 (m, 2H) , 4,59 (dd, 1H, J = 4,0 Hz, 8,6 Hz), 5,23 (d, 1H, J = 13,5 Hz), 5,30 (d, 1H, J = 13,5 Hz), 5,37 (leveä, 1H) , 7,52 (d, 2H, J = 8,9

Hz), 8,23 (d, 2H, J = 8,9 Hz).

(b) Liuokseen, jonka muodosti 4,10 g kohdassa (a) 15 saatua yhdistettä (22) 5 ml:ssa metyleenikloridia, lisättiin 2,5 ml trifluorietikkahappoa käyttäen jää-jäähdytystä, ja reaktioseosta sekoitettiin 1 tunti, sitten reaktio-seokseen lisättiin 4 ml trifluorietikkahappoa ja sekoitusta jatkettiin 2 tuntia. Reaktion jälkeen liuotin poistet-20 tiin, jolloin saatiin 5,82 g glysyyli-L-proliini-p-nitro-bentsyyliesteritrifluorietikkahapposuolaa vaalean ruskehtavana öljynä.

Sitten jäällä jäähdytettyyn liuokseen, jonka muodostivat 5,54 g edellä saatua yhdistettä ja 1,499 g glu-. 25 taarihappoanhydridiä 50 ml:ssa metyleenikloridia, lisät tiin 1,83 ml trietyyliamiinia, ja reaktioseosta sekoitettiin 20 minuuttia samassa lämpötilassa. Reaktion jälkeen reaktioseokseen lisättiin 60 ml 10-%:ista sitruunahapon vesiliuosta ja 200 ml etyyliasetaattia, ja orgaaninen ker-30 ros erotettiin. Orgaanista kerrosta uutettiin 300 ml :11a * 4-%:ista natriumbikarbonaatin vesiliuosta, ja uute säädet tiin pH-arvoon 4 ja uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen liuotin poistettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 3,43 g [N-(4-karboksibutanoyyli)glysyyli]-L-pro- 43 106962 liini-p-nitrobentsyyliesteriä [yhdiste (23)] vaalean kellertävänä öljynä.

^-NMR (CDC13) 6: 1,90 ~ 2,20 (m, 3H) , 1,97 (kvintetti, 2H, J = 7,3 Hz), 2,20 ~ 2,34 (m, 1H), 2,41 (t, 2H, 5 J = 7,3 Hz), 2,44 (t, 2H, J = 7,3 Hz), 3,53 = 3,75 (m, 2H), 4,04 (dd, 1H, J = 4,3 Hz, 17,5 Hz), 4,22 (dd, 1H, J = 4,9 Hz, 17,5 Hz), 4,58 (dd, 1H, J = 4,0 Hz, 8,9 Hz), 5,20 (d, 1H, J = 13,5 Hz), 5,32 (d, 1H, J = 13,5 hz), 6,85 (leveä, 1H), 7,50 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 8,22 (d, 2H, J = 8,6 10 Hz).

(c) Liuokseen, jonka muodosti 3,09 g kohdassa (b) saatua yhdistettä (23) 70 ml:ssa metyleenikloridia, lisättiin 1,85 g natriumbikarbonaattia 70 ml:ssa vettä, 249 mg tetrabutyyliammoniumvetysulfaattia ja 1,57 g C1CH2S03C1 :a, 15 ja reaktioseosta sekoitettiin 140 minuuttia huoneenlämpö- tilassa. Reaktion jälkeen orgaaninen kerros erotettiin ja pestiin 4-%:isella natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja suolaliuoksella, ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 20 3,00 g [N-(4-kloorimetyylioksikarbonyylibutanoyyli)glysyy- li]-L-proliini-p-nitrobentsyyliesteriä vaalean kellertävänä öljynä. Sitten seosliuosta, jonka muodostivat 2,86 g edellä saatua yhdistettä ja 1,83 g natriumjodidia 20 ml:ssa asetonitriiliä, palautusjäähdytettiin 2 tuntia.

. 25 Reaktion jälkeen liuotin poistettiin, ja saatu jäännös liuotettiin 70 ml:aan etyyliasetaattia. Orgaaninen kerros pestiin 0,1 N natriumtiosulfaatin vesiliuoksella ja suolaliuoksella, ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin alennetussa paineessa, ja saatu jäännös puh-30 distettiin silikageelipylväskromatografiällä (metyleeni- kloridi-asetoni), jolloin saatiin 2,35 g [N-(4-jodimetyy-lioksikarbonyylibutanoyyli)glysyyli]-L-proliini-p-nitro-bentsyyliesteriä [yhdiste (24)] kellertävänä öljynä.

^-NMR (CDCI3) δ: 1,92 » 2,17 (m, 5H) , 2,17 * 2,37 35 (m, 1H) , 2,33 (t, 2H, J = 7,3 Hz), 2,42 (t, 2H, J = 7,3 44 106962

Hz), 3,46 « 3,74 (m, 2H), 4,02 (dd, 1H, J = 4,0 Hz, 17,8 Hz), 4,12 (dd, 1H, J = 4,3 Hz, 17,8 Hz), 4,59 (dd, 1H, J = 4,0 Hz, 8,9 Hz), 5,24 (d, 1H, J = 13,5 Hz), 5,32 (d, 1H, J = 13,5 Hz), 5,91 (S, 2H), 6,45 (leveä, 1H), 7,53 (d, 2H, 5 J = 8,9 Hz), 8,24 (d, 2H, J = 8,9 Hz).

Esimerkki 1: HO u „ CH, 0

a S—| Ϊ w = I N

yhdiste (4) -► HS-<^N—(\ I +

(T N COOPNB

10 O» n? H H f3 S-|

— ^ ΊχΧ v »J

0X COOPNB

15 (27) 770 mg 28-%:ista natriummetoksidi-metanoli-liuosta lisättiin seosliuokseen, jonka muodosti 862 mg valmistuksen 1 kohdassa (c) saatua yhdistettä (4) 20 ml:ssa vede-20 töntä metanolia, käyttäen jää-jäähdytystä ja typpikaasu-virtausta. Sitten reaktioseosta sekoitettiin 10 minuuttia samoissa olosuhteissa. Reaktion jälkeen 4 ml 2 N HCl:a lisättiin reaktioseokseen ja liuotin poistettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin raaka yhdiste (25) . Sitten raa-• . 25 ka yhdiste (25) liuotettiin vedettömän asetoni-kloroformin seosliuokseen, ja tähän liuokseen lisättiin 2430 mg p-nit-robentsyyli-(1R,5S,6S)-2-(difenyylifosforyylioksi)-6- [ (R)-1-hydroks ietyyli]-1-metyy1ikarbapen-2 -eemi-3 -karboksylaat-tia (yhdiste (26)] ja 2,8 ml di-isopropyylietyyliamiinia 30 käyttäen jää-jäähdytystä ja typpikaasuvirtausta. Kun reak-• tioseosta oli sekoitettu 2 tuntia samoissa olosuhteissa, etyyliasetaatti lisättiin ja erotettu orgaaninen kerros pestiin kylläisellä natriumbikarbonaatin vesiluoksella ja kylläisellä suolaliuoksella. Liuotin poistettiin ja saatu 35 jäännös puhdistettiin silikageelipylväskromatografiällä 45 106962 kloroformi:asetonilla (1:2), jolloin saatiin 1339 mg (65 % yhdisteestä (4)) p-nitrobentsyyli-(1R,5S,6S)-2-[1-(tiatso-lin-2-yyli)atsetidin-3-yyli]tio-6-[(R)-1-hydroksietyyli]-l-metyylikarbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [yhdiste (27)]. 5 ^-NMR (CDC13) δ 1,235 (d, 3H, J = 7,26 Hz), 1,349 (d, 3H, J = 6,27 Hz), 3,160 (kvintetti, 1H, J = 7,26 Hz), 3,265 (dd, 1H, J = 2,3, 6,26 Hz), 3,367 (t, 2H, J = 7,26 Hz), 3,898 « 4,038 (m, 4H), 4,071 * 4,147 (m, 1H), 4,212 = 4,278 (m, 2H) , 4,372 (2H, J = 7,92 Hz), 5,255 - 5,517 10 (d (AB) , 2H, J = 13,85 Hz), 7,665 (d, 2H, J = 8,58 Hz), 8,226 (d, 2H, J = 8,58 Hz).

Esimerkki 2:

Hi H H 1^3 S—,

\ N—(\ I

η e- yhdiste (27) -►» [ l || N—’ 5 //^-\

0 C00H

(28)

Seosliuokseen, jonka muodosti 1 339 mg esimerkissä 1 saatua yhdistettä (27) 2 ml:ssa tetrahydrofuraania, li-20 sättiin 60 ml 0,38 M fosfaattipuskuriliuosta ja 11,2 g sinkkijauhetta, ja reaktioseosta sekoitettiin voimakkaasti 2 tuntia. Reaktion jälkeen liukenematon aine poistettiin käyttäen CeliteR:ä, ja suodos pestiin etyyliasetaatilla ja suodoksen pH säädettiin arvoon 5,5. Sitten suodos väkevöi-

. 25 tiin ja saatu jäännös puhdistettiin käyttäen Diaion HP-40R

kolonnia (5-%:inen isopropyylialkoholi-vesi), jolloin saatiin 630 mg (64 %) (1R, 5S,6S)-2-[1-(tiatsolin-2-yyli)atse- tidin-3-yyli]tio-6-[(R)-1-hydroksietyyli]-1-metyylikarba-pen-2-eemi-3-karboksyylihappoa [yhdiste (28)].

30 ^-NMR (D20) δ: 1,093 (d, 3H, J = 6,93 Hz), 1,207 · (d, 3H, J = 6,27 Hz), 3,05 » 3,20 (m, 1H), 3,357 (dd, 1H, J = 2,3, 5,94 Hz), 3,558 (t, 2H, J = 7,26 Hz), 3,920 (t, 2H, J = 7,26 Hz), 4,00 * 4,20 (m, 5H) , 4,20 « 4,30 (m, 1H), 4,60 - 4,70 (m, 1H).

35 IR (KBr) : 1740, 1640, 1590 cm'1.

46 106962

Esimerkki 3: yhdiste (9) -► HS——(\ + V N—1s^O^OCH3 (29) 5 if coon® ίο (30)

Liuokseen, jonka muodosti 600 mg valmistuksen 2 kohdassa (d) saatua yhdistettä (9) 10 ml-.ssa vedetöntä metanolia, lisättiin 400 mg 28-%:ista natriummetoksidi-15 metanoliliuosta käyttäen jää-jäähdytystä ja typpiatmosfääriä, ja reaktioseosta sekoitettiin 5 minuuttia samoissa olosuhteissa. Reaktion jälkeen 0,355 ml etikkahappoa lisättiin ja liuotin poistettiin alennetussa paineessa. Saatu jäännös liuotettiin 5 ml:aan vedetöntä asetonitriiliä, 20 ja liukenematon aine poistettiin suodattamalla. Sitten tämä suodos lisättiin liuokseen, jonka muodosti 1,230 g p-nitrobentsyyli-(1R,5S,6S)-2-(difenyylifosforyylioksi)-6-[(R)-1-hydroksietyyli]-l-metyylikarbapen-2-eemi-3-karbok-sylaattia [yhdiste (26)] 5 mlrssa vedetöntä asetonitrii-; 25 liä, käyttäen jää-jäähdytystä, ja 2,2 ml di-isopropyyli- etyyliamiinia lisättiin vielä tipoittain reaktioseokseen. Kun reaktioseosta oli sekoitettu 1,5 tuntia samoissa olosuhteissa, liuotin poistettiin alennetussa paineessa. Saatu jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin, ja orgaaninen 30 kerros pestiin kylläisellä natriumbikarbonaatin vesiliuok-* sella, ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Liuottimen poistamisen jälkeen saatu jäännös puhdistettiin silikagee-lipylväskromatografiällä (kloroformi-asetoni), jolloin saatiin 0,788 g (64 % yhdisteestä (26)) p-nitrobentsyyli-35 (1R,5S,6S)-2-[1-(4(R)-metoksimetyylioksimetyyli-1,3-tiat- 47 106962 solin-2-yyli)atsetidin-3-yyli]tio-6-[(R)-1-hydroksietyyli] -l-metyylikarbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [yhdiste (30)].

"H-NMR (CDC13) δ: 1,24 (d, 3H, J = 7,3 Hz), 1,36 (d, 5 3H, J = 6,3 Hz), 3,16 (dq, 1H, J = 7,3, 9,2 Hz), 3,25 - 3,34 (m, 2H), 3,37 (m, 2H), 3,43 - 3,47 (m, 1H), 3,51 (dd, 1H, J = 7,9, 9,9 Hz), 3,67 (dd, 1H, J = 5,0, 9,9 Hz), 2,94 - 4,00 (m, 2H) , 4,07 - 4,17 (ra, 1H) , 4,23 (dd, 1H, J = 2,6, 9,2 Hz), 4,20 - 4,30 (m, 1H) , 4,30 - 4,51 (m, 3H) , 10 4,66 (s, 2H), 5,25 (d, 1H, J = 13,9 Hz), 5,51 (d, 1H, J = 13,9 Hz), 7,66 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 8,23 (d, 2H, J = 8,6

Hz) .

15 yhdiste (30)-►- J \\ ^~>/0\/0CH3

/ tOOH

(31) 20 Liuokseen, jonka muodosti 756 mg esimerkissä 3 saatua yhdistettä (30) 10 mlrssa tetrahydrofuraania ja 30 ml:ssa 0,35 M fosfaattipuskuriliuosta (pH 6,0), lisättiin 6,0 g sinkkijauhetta, ja reaktioseosta sekoitettiin 2 tuntia huoneenlämpötilassa. Kun sinkkijauhe oli poistettu . 25 suodattamalla, suodos pestiin etyyliasetaatilla ja suodok- sen pH säädettiin arvoon 5,5, sitten suodos väkevöitiin. Saatu jäännös puhdistettiin käyttäen Diaion HP-40R kolonnia (10-%:inen isopropanoli-vesi), jolloin saatiin 415 mg (71 %) (1R,5S,6S)-2-[1-((4R)-metoksimetyylioksimetyyli- 30 1,3-tiatsolin-2-yyli)atsetidin-3-yyli]tio-6-[(R)-1-hydrok- sietyyli]-l-metyylikarbapen-2-eemi-3-karboksyylihappoa [yhdiste (31)].

^-NMR (D20) ö: 1,10 (d, 3H, J = 7,3 Hz), 1,21 (d, 3H, J = 6,6 Hz), 3,06 - 3,18 (m, 1H), 3,22 - 3,33 (m, 1H), 35 3,33 (S, 3H), 3,36 - 3,47 (m, 1H) , 3,61 - 3,75 (m, 3H), 48 106962 4,09 - 4,31 (τη, 6Η) , 4,33 - 4,56 (τη, 1Η) , 4,60 - 4,68 (τη, 3Η) .

IR (KBr) : 1735, 1640, 1580 cm'1.

Esimerkki 5:

5 »un®! A

yhdiste (28) -^] J, | ^

J-N-V

o COOC^OCO-t-But 10 (32)

Seosliuos, jonka muodostivat 430 mg (1,12 mM) esi merkissä 2 saatua yhdistettä (28) ja 94,1 mg (1,12 mM) natriumbikarbonaattia 15 mlrssa vettä, lyofilisoitiin. 15 Saatu amorfinen kiinteä aine liuotettiin 5 ml:aan dimetyy-liformamidia, ja 285 mg (1,18 mM) pivaliinihappojodimetyy-liesteriä lisättiin tähän liuokseen ja reaktioseosta sekoitettiin 1 tunti huoneenlämpötilassa. Reaktion jälkeen etyyliasetaatti lisättiin reaktioseokseen ja orgaaninen 20 kerros pestiin kylläisellä natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja suolaliuoksella, ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Kun liuotin oli poistettu, saatu jäännös puhdistettiin silikageelipylväskromatografiällä (10-%:inen metano-li-kloroformi), jolloin saatiin 415 mg (74,6 %) pivaloyy-; 25 lioksimetyyli-(1R,5S,6S)-2-[1-(1,3-tiatsolin-2-yyli)at- setidin-3-yyli]tio-6-[(R) -1-hydroksietyyli]-1-metyyli-karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [yhdiste (32)].

^-NMR (CDCl3) δ: 1,229 (s, 9H) , 1,229 (d, 3H, J = 7.3 Hz), 1,339 (d, 3H, 6,3 Hz), 3,165 (dd, 1H, J = 7,3 Hz, 30 9,2 Hz), 3,227 (dd, 1H, J = 2,6 Hz, 6,9 Hz), 3,369 (t, 2H, 7.3 Hz), 3,952 (dd, 2H, 5,6 Hz, 8,6 Hz), 3,988 = 4,043 (m, 2H), 4,085 = 4,162 (m, 1H), 4,183 ~ 4,274 (m, 2H), 4,346 = 4,426 (m, 2H), 5,842 (d, 1H, J = 5,6 Hz), 5,972 (d, 1H, J = 5,6 Hz).

Esimerkki 6: 49 106962 ΛΗίχ>-<]

s yhdiste (28) -► CH3^In \ N

5 COOCHOCOO — (33) ^3

Seosliuos, jonka muodostivat 500 mg (1,30 mM) esi-10 merkissä 2 saatua yhdistettä (28) ja 109,4 mg (1,30 mM) natriumbikarbonaattia 15 ml:ssa vettä, lyofilisoitiin. Saatu amorfinen kiinteä aine liuotettiin 5 ml:aan dimetyy-liformamidia ja 379,5 mg (1,30 mM) 1-jodietyylisyklohek-syylikarbonaattia [valmistettu menetelmällä, joka on ku-15 vattu julkaisussa The Journal of Antibiotics, voi. XL, nro 1, sivu 81] lisättiin tähän liuokseen, ja reaktioseosta sekoitettiin 2 tuntia huoneenlämpötilassa. Reaktion jälkeen etyyliasetaatti lisättiin reaktioseokseen, ja orgaaninen kerros pestiin kylläisellä natriumbikarbonaatin ve-20 siliuoksella ja suolaliuoksella, ja kuivattiin magnesium-sulfaatilla. Liuotin poistettiin alennetussa paineessa ja saatu jäännös puhdistettiin silikageelipylväskromatogra-fiällä (10-%:inen metanoli-kloroformi) , jolloin saatiin 309 mg (43 %) 1-[(sykloheksyylioksi)karbonyylioksi]etyyli-; 25 (1R,5S,6S)-2 - [1- (1,3-tiatsolin-2-yyli)atsetidin-3-yyli]- tio-6-[(R)-1-hydroksietyyli]-l-metyylikarbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [yhdiste (33)].

1H-NMR (CDC13) δ: 1,219 (d, 3H, J = 7,3 Hz), 1,323 (d, 3H, J = 6,3 Hz), 1,37 * 1,50 (m, 2H), 1,563 (d, 1,5H, 30 J = 5,3 Hz), 1,611 (d, 1,5H, J = 5,3 Hz), 1,67 * 1,82 (m, - ‘ 4H), 1,90 * 2,05 (m, 4H), 3,20 (m, 1H), 3,216 (dd, 1H, J = 2,7 Hz, 6,9 Hz), 3,367 (t, 2H, J = 7,6 Hz), 3,92 « 4,04 (m, 4H), 4,08 « 4,25 (m, 3H), 4,34 » 4,43 (m, 2H), 4,59 » 4,71 (m, 1H), 6,880 (q, 0,5H, J = 5,3 Hz), 6,890 (q, 0,5H, 35 J = 5,3 Hz).

Esimerkki 7: R0 106962

bU

, ; ,J

0 C00R4

Muut (1R,5S,6S)-2-[1-(1,3 -tiatsolin-2-yyli)atseti-din-3-yyli]tio-6-[(R)-1-hydroksietyyli]-1-metyylikarbapen-10 2-eemi-3-karboksyylihapon esteriyhdisteet, jotka esitetään edellä olevalla kaavalla, saatiin saattamalla yhdiste (28) reagoimaan yhdisteen (18) [saatu valmistuksessa 4], yhdisteen (20) [saatu valmistuksessa 5] ja yhdisteen (24) kanssa [saatu valmistuksessa 6] vastaavasti.

15 Esimerkki 8: «S H H f 3 /vN_/η .

a/frr8^i4:H ^

J~N—Λ C0NC J

0 C00H CH, 20 ö (34)

Yhdiste (34) saatiin oleellisesti samalla tavalla kuin esimerkeissä 1 ja 2.

;· 25 ^-NMR (D20) δ: 1,16 (d, 3H, J = 6,9 Hz), 1,27 (d, 3H, J = 6,3 Hz), 2,95 (s, 3H), 3,11 (s, 3H), 3,19 (m, 1H), 3,41 (dd, 1H, J = 2,5 Hz, 6,1 Hz), 3,57 (dd, 1H, J = 5,9

Hz, 11,5 Hz), 3,89 (dd, 1H, J = 8,6 Hz, 11,5 Hz), 4,11 = 4,37 (m, 5H), 4,62 = 4,80 (m, 2H), 5,37 (dd, 1H, J = 5,9 30 Hz, 8,6 Hz).

Tämän keksinnön mukaiset karbapeneemiyhdisteet voidaan formuloida erilaisissa valmistemuodoissa.

51 106962

Formulaatioesimerkki 1 (injektio): (1) Injektoitava suspensio:

Yhdiste (28) 25,0 g

Metyyliselluloosa 0,5 g 5 Polyvinyylipyrrolidoni 0,05 g

Metyyli-p-oksibentsoaatti 0,1 g

Polysolvaatti 80 0,1 g

Lidokaiini vetykloridi 0,5 g

Tislattu vesi 100 ml:aan 10

Edellä mainitut komponentit formuloitiin 100 ml:aan injektoitavaa suspensiota.

(2) Lyofilisaatti:

Sopiva määrä tislattua vettä lisättiin 20 g:aan 15 yhdisteen (28) natriumsuolaa, jolloin saatiin kokonaistilavuus 100 ml. Edellä olevalla liuoksella (2,5 ml) täytettiin viaalit siten, että kukin viaali sisältää 500 mg yhdisteen (28) natriumsuolaa, ja lyofilisoitiin. Lyofilisoi-tu viaali sekoitettiin in situ noin 3 - 4 ml:n kanssa tis-20 lattua vettä, jolloin saatiin injektoitava liuos.

(3) Jauhe:

Yhdisteellä (28) täytettiin viaali määrässä 250 ml ja sekoitettiin in situ noin 3 - 4 ml:n kanssa tislattua vettä, jolloin saatiin injektoitava liuos.

25 Formulaatioesimerkki 2 (tabletit):

Yhdiste (33) 25 g

Laktoosi 130 g

Kiteinen selluloosa 20 g

Maissitärkkelys 20 g 30 3-%:inen hydroksipropyyliselluloosan 100 ml ' * vesiliuos

Magnesiumstearaatti 2 g

Yhdiste (33) , laktoosi, kiteinen selluloosa ja 35 maissitärkkelys seulottiin 60-mesh seulan läpi, homogeni- 52 106962 soitiin ja vietiin sekoittimeen. 3-%:inen hydroksipropyy-liselluloosan vesiliuos lisättiin ja seos sekoitettiin. Tuote granuloitiin 16-mesh seulalla, kuivattiin ilmassa 50 °C:ssa ja granuloitiin uudelleen 16-mesh-seulalla. Mag-5 nesiumstearaatti lisättiin granulaattiin ja sekoitettiin. Seos tabletoitiin, jolloin saatiin tabletteja, jotka pai-noivat 200 mg kukin ja joiden halkaisija oli 8 mm. Formulaatxoesxmerkkx 3 (kapselit):

Yhdiste (33) 25 g 10 Laktoosi 125 g

Maissitärkkelys 48,5 g

Magnesiumstearaatti 1,5 g

Edellä olevat komponentit jauhettiin hienoksi ja 15 sekoitettiin huolellisesti, jolloin saatiin homogeeninen seos. Seoksella täytettiin gelatiinikapselit, 0,2 g kapselia kohti, jolloin saatiin kapselit oraalista antamista varten.

Formulaatxoesimerkki 4 (tabletit): 20 Yhdiste (32) 25 g

Laktoosi 130 g

Kiteinen selluloosa 20 g

Maissitärkkelys 20 g 3-%:inen vesipitoinen hydroksipropyyli- 100 ml 25 selluloosa

Magnesiumstearaatti 2 g

Yhdiste (32), laktoosi, kiteinen selluloosa ja maissitärkkelys seulottiin 60-mesh seulan läpi, homogeni-30 soitiin ja vietiin sekoittimeen. 3-%:inen hydroksipropyy-• liselluloosan vesiliuos lisättiin ja seos sekoitettiin.

Tuote granuloitiin 16-mesh seulalla, kuivattiin ilmassa 50 °C:ssa ja granuloitiin uudelleen 16-mesh-seulalla. Magnesiumstearaatti lisättiin granulaattiin ja sekoitettiin.

53 106962

Seos tabletoitiin, jolloin saatiin tabletteja, jotka pai-noivat 200 mg kukin ja joiden halkaisija oli 8 mm. Formulaatioesimerkki 5 (pilleri):

Yhdiste (33) 200 mg 5 Sokeri 770 mg

Hydroksipropyyliselluloosa 5 mg

Magnesiumstearaatti 20 mg

Makuaine 5 mg 1 000 mg/pilleri 10

Komponentit sekoitettiin toistensa kanssa ja formuloitiin pillereiksi puristamalla tavanomaisella tavalla. Formulaatioesimerkki 6 (kapselit):

Yhdiste (33) 500 mg 15 Magnesiumstearaatti 10 ma 510 mg/kapseli

Komponentit sekoitettiin toistensa kanssa ja tavanomaiset kovagelatiinikapselit täytettiin.

20 Formulaatioesimerkki 7 (kuiva siirappimainen aine):

Yhdiste (33) 200 mg

Hydroksipropyyliselluloosa 2 mg

Sokeri 793 mg

Makuaine 5 mg .25 1000 mg

Edellä mainitut komponentit sekoitettiin toistensa kanssa ja formuloitiin kuiviksi siirappimaisiksi aineiksi tavanomaisella tavalla.

30 Formulaatioesimerkki 8 (jauheet): · (1) Yhdiste (33) 200 mg

Laktoosi 800 ma 1 000 mg (2) Yhdiste (33) 250 mg 35 Laktoosi 750 ma 54 106962 1 000 mg

Komponentit sekoitettiin toistensa kanssa ja formuloitiin jauheiksi tavanomaisella tavalla.

Formulaatioesimerkki 9 (peräpuikko): 5 Yhdiste (33) 500 mg

Witepsol H-12 700 mg (Dynamite Noblen tuote) 1 200 mg 10 Edellä mainitut komponentit sekoitettiin toistensa kanssa ja formuloitiin peräpuikoiksi tavanomaisella tavalla.

Claims (6)

55 106962

1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen (lR,5S,6S)-2-[l-(l,3-tiatsolin-2-yyli)atsetidin-3-yyli]-5 tio-6-[(R)-1-hydroksietyyli]-l-metyylikarbapen-2-eemi-3-karboksyylihappojohdanaisen valmistamiseksi, jolla on kaava :

10 N-l^ J-U—\

0 Y jossa R on vety; Ci_4-alkyyliryhmä, joka on substi-15 tuoitu Ci_4-alkoksi-Ci_4-alkoksiryhmällä; tai ryhmä CONR2R3 (R2 ja R3 ovat toisistaan riippumatta C1-4-alkyyli), Y on karboksi, -COO , p-nitrobentsyylioksi-karbonyyli, Cl-6-alkoksi-CO-Ci-4~alkoksi-CO- tai C3-7-sykloalkyyli-0-C0-0-Ci_4-alkoksi-C0-, tai sen farmaseutti-20 sesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi, tunnet-t u siitä, että 'yhdiste, jolla on kaava: m. H H f3 Jr- N-Uv • 25 0 C00R’ (Vili) jossa Ra on asyyliryhmä ja R' on karboksyylisuoja-ryhmä, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava: , . 30 λ S— ' HS—N—(n V N—L (IX) R 35 jossa R:llä on sama merkitys kuin edellä, jolloin saadaan yhdiste, jolla on kaava: 56 106962 n? H H P tH3 I I II V N—k. R

0 C00FT s (X) jossa R:llä ja R':lla on sama merkitys kuin edellä, sitten altistetaan saatu kaavan (X) mukainen yhdiste karboksyylisuojaryhmän poistamiselle, jolloin saadaan yh- 10 diste, jolla on kaava: cH3^tDC n^r q7 C00H 15 (VII) jossa R:llä on sama merkitys kuin edellä, tai farmaseuttisesti hyväksyttävä suola, ja sitten jos tarpeen,altistetaan saatu kaavan (VII) mukainen yhdis- 20 te karboksiryhmän esteröinnille, jolloin saadaan kaavalla (I) esitetty yhdiste.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan (I) mukainen yhdiste on (lR,5S,6S)-2-[l-(l,3-tiatsolin-2-yyli)atsetidin-3- • ' • 25 yyli]tio-6-[(R)-1-hydroksi-etyyli]-l-metyylikarbapen-2- eemi-3-karboksyylihappo, jolla on seuraava kaava: f.HHffc /X S-| ^ nV v"i, (n)

30. I ' N— ^ N-Λ

0 C00H tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 35 tunnettu siitä, että kaavan (I) mukainen yhdiste on 1-[(sykloheksyylioksi)karbonyylioksi]etyyli-(1R,5S,6S)- 57 106962 2-[1-(1,3-tiatsolin-2-yyli)atsetidin-3-yyli]tio-6-[(R)-1-hydroksietyyli] -l-metyylikarba-pen-2-eemi-3-karboksy-laatti, jolla on seuraava kaava: auTVkWi ch3 Tjjj if N_J (IV) oy C00CH-0C0-C~\ I u \—/ CHo 0 10 ύ tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan (I) mukainen yhdiste on pivaloyylioksimetyyli-(1R,5S,6S)-2-[1-(1,3-tiatsolin-2- 15 yy-li)atsetidin-3-yyli]tio-6-[(R)-1-hydroksietyyli]-1-metyylikarbapen-2-eemi-3-karboksylaatti, jolla on kaava N— 20 /"N—1\

0 COOCH^OCO-t-But tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, • 25 tunnettu siitä, että kaavan (I) mukainen yhdiste on (lR,5S,6S)-2-[l-((4R)-metoksi-metyloksimetyyli-1,3- tiatsolin-2-yyli)-atsetidin-3-yyli]tio-6-[(R)-1-hydro-ksietyyli]-l-metyylikarbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo, jolla on kaava n^voch3 C00H tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola. 58 106962

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan (I) mukainen yhdiste on (lR,5S,6S)-2-[l-((4R)-dimetyyliaminokarbonyyli-l,3- tiatsolin-2-yyli)atsetidin-3-yyli]tio-6-[(R)-1-5 hydroksietyyli]-l-metyylikarbapen-2-eemi-3-karboksyyli-happo, jolla on kaava HO j, h CH3 /\ /S__ Xj —<Qn—<n h CHfTT Π V N"X /CHo ίο 0 i—N-\ CONf d (T COOH CH3 tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola. 59 106962