ES2887254T3 - Lípidos y composiciones lipídicas para el suministro de agentes activos - Google Patents

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Rohan Eric John Beckwith
Keith Bowman
Crystal Byers
Tanzina Fazal
Gabriel Grant Gamber
Cameron Chuck-Munn Lee
Ritesh Bhanudasji Tichkule
Chandra Vargeese
Shuangxi Wang
Laura West
Thomas Zabawa
Junping Zhao
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Abstract

Una composición lipídica que comprende: i) bis(decanoato) de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) que tiene la siguiente fórmula: **(Ver fórmula)** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y ii) un agente biológicamente activo, en donde el agente biológicamente activo es ARNm.

Description

DESCRIPCIÓN
Lípidos y composiciones lipídicas para el suministro de agentes activos
CAMPO DE LA INVENCIÓN
La presente invención se refiere a composiciones lipídicas que comprenden compuestos lipídicos y ARNm.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
El suministro de agentes biológicamente activos (incluyendo compuestos terapéuticamente pertinentes) a sujetos está con frecuencia impedido por dificultades en los compuestos que alcanzan la célula o el tejido diana. En particular, el tráfico de muchos agentes biológicamente activos en células vivas está muy restringido por los sistemas complejos de membrana de las células. Estas restricciones pueden dar lugar a la necesidad de usar concentraciones mucho mayores de agentes biológicamente activos de lo que es deseable para lograr un resultado, lo que aumenta el riesgo de efectos tóxicos y efectos secundarios. Una solución a este problema es utilizar moléculas transportadoras específicas a las que se permite entrada selectiva en la célula. Se pueden usar vehículos lipídicos, polímeros biodegradables y diversos sistemas conjugados para mejorar el suministro de agentes biológicamente activos a células.
Una clase de agentes biológicamente activos que es particularmente difícil suministrar a células es un producto bioterapéutico (incluyendo nucleósidos, nucleótidos, polinucleótidos, ácidos nucleicos y derivados, tales como agentes de iARN). En general, los ácidos nucleicos son estables solo durante una duración limitada en células o plasma. El desarrollo de interferencia de ARN, terapia de iARN, fármacos de ARN, terapia antisentido y terapia génica, entre otros, ha aumentado la necesidad de un medio eficaz para introducir agentes de ácido nucleico activos en células. Por estos motivos, las composiciones que pueden estabilizar y suministrar agentes a base de ácido nucleico en células son de interés particular.
Los enfoques mejor estudiados para mejorar el transporte de ácidos nucleicos extraños a células implican el uso de vectores víricos o lípidos catiónicos. Pueden usarse vectores víricos para transferir genes eficientemente a algunos tipos celulares, pero en general no pueden usarse para introducir moléculas sintetizadas químicamente en células.
Un enfoque alternativo es usar composiciones de suministro que incorporan lípidos catiónicos que interactúan con un agente biológicamente activo en una parte e interactúan con un sistema de membrana en otra parte (para una revisión, véase Feigner, 1990, Advanced Drug Delivery Reviews, 5, 162-187 y Feigner, 1993, J. Liposome Res., 3, 3-16). Se ha indicado que dichas composiciones contienen liposomas.
Desde la primera descripción de liposomas en 1965 de Bangham (J. Mol. Biol. 13, 238-252), ha habido un interés continuado e intentos de desarrollar sistemas de transportadores a base de lípidos para el suministro de agentes biológicamente activos. El proceso de introducir ácidos nucleicos funcionales en células cultivadas usando liposomas con carga positiva se describió por primera vez en Philip Felgner et al. Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 84, 7413-7417 (1987). El proceso se demostró posteriormente in vivo en K. L. Brigham et al., Am. J. Med. Sci., 298, 278-281 (1989,).
Los liposomas son vehículos atractivos ya que protegen las moléculas biológicas de la degradación mejorando al mismo tiempo su captación celular. De las diversas clases de liposoma, se usan habitualmente liposomas que contienen lípidos catiónicos para suministrar polianiones (p. ej., ácidos nucleicos). Dichos liposomas pueden formarse usando lípidos catiónicos y que incluyen opcionalmente otros lípidos y anfífilos tales como fosfatidiletanolamina. Se conoce bien en la técnica que tanto la composición de la formulación lipídica así como su método de preparación afectan a la estructura y el tamaño del agregado resultante.
El uso de lípidos catiónicos para el suministro celular de agentes biológicamente activos tiene varias ventajas. La encapsulación de compuestos aniónicos usando lípidos catiónicos es esencialmente cuantitativa debido a la interacción electrostática. Además, se cree que los lípidos catiónicos interactúan con las membranas celulares con carga negativa que inician el transporte a través de la membrana celular (Akhtar et al., 1992, Trends Cell Bio., 2, 139; Xu et al., 1996, Biochemistry 35, 5616).
Mochizuki et al., 2012, Bulletin of the Chemical Society of Japan, 85, 3 desvela lípidos catiónicos aromáticos basados en un esqueleto de 3,5-dialcoxi bencilamonio que se usa para formar un lipoplex.
Existe la necesidad de lípidos catiónicos adicionales que facilitan el suministro sistémico y local de agentes biológicamente activos tales como agentes de iARN a células. También existe la necesidad de lípidos catiónicos que, en relación con los lípidos catiónicos que se conocen en la técnica, mejoran el suministro sistémico y local de agentes biológicamente activos a células. Existe una necesidad adicional de formulaciones lipídicas que tienen características físicas optimizadas para mejora del suministro sistémico y local de agentes biológicamente activos a órganos específicos y a tumores, especialmente tumores fuera del hígado.
SUMARIO DE LA INVENCIÓN
La presente invención se describe en las reivindicaciones adjuntas. En un primer aspecto de la invención, se proporciona una composición lipídica que comprende:
i) bis(decanoato) de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) que tiene la siguiente fórmula:
Figure imgf000003_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y
ii) un agente biológicamente activo, en donde el agente biológicamente activo es ARNm.
En un segundo aspecto de la invención, se proporciona una composición lipídica que comprende:
i) bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo) que tiene la siguiente fórmula:
Figure imgf000003_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y
ii) un agente biológicamente activo, en donde el agente biológicamente activo es ARNm.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
En el presente documento se describe es un compuesto de fórmula (I):
Figure imgf000003_0003
en donde:
L es alquileno C1-6, alquenileno C2-6, alquinileno C2-6, -(CH2)r-cicloalquileno C3-7-(CH2)s-, -(CH2)s-cicloalquenileno C3-7-(c H2)s-, -(CH2)s-cicloalquinileno C3-7-(CH2)s-, *-alquileno C1-4-L2-, *-alquileno Ci -4-L2-alquileno C1-4-,
Figure imgf000003_0004
o
Figure imgf000004_0001
en donde en el * representa la unión del resto con el grupo NR1R2;
L2, unido en cualquier dirección, es -O-, -S-, -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)O-, -CONH-, S(O)2NH-, NHCONH- o -NHCSNH-;
cada s es independientemente 0, 1 o 2;
cada t es independientemente 0, 1, 2, 3 o 4;
u es 0, 1, 2, 3, 4, 5 o 6;
cada uno de R1 y R2 es independientemente alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alquenilo C2-6 opcionalmente sustituido, alquinilo C2-6 opcionalmente sustituido, cicloalquil C3.7 opcionalmente sustituido-(CH2)s-, cicloalquenil C3-7 opcionalmente sustituido-(CH2)s-, cicloalquinil C3-7 opcionalmente sustituido-(CH2)s- o fenil opcionalmente sustituido-(CH2)s-; en donde dichos alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C3-7, cicloalquinilo C3-7 y fenilo están opcionalmente sustituidos con uno o dos sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en: OH, alcoxi C1-3, COOH y COO-alquilo C1-4,
o
R1 y R2 se unen formando un anillo heterocíclico de 4-12 miembros opcionalmente sustituido, estando dicho anillo heterocíclico opcionalmente sustituido con uno a tres sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en: OH, halo, alquilo C1-3, alcoxi C1-3, dimetilamino, -COO-alquilo C1-4, fenilo, piperidinilo y morfolinilo;
cada uno de R3 y R4 es independientemente:
(a) -Z1-Ra,
(b) -Z1-Rb-Z2- Ra,
(c) -Z1-Rb-Z2-Rb-Z3- Ra,
(d) -Z1-Rb-Z2-Rb-Z3-Rb-Z4-Ra,
(e) -Rb-Z1-Ra,
(f) -Rb-Z1-Rb-Z2-Ra,
(g) -Rb-Z1-Rb-Z2-Rb-Z3-Ra,
(h) -Rb-Z1-Rb-Z2-Rb-Z3-Rb-Z4-Ra,
(i) -Rc,
(j) -Z1-Rb-Rc, o
(k) -Rb-Z1-Rb-Rc;
en donde cada uno de Z1, Z2, Z3 y Z4, unido en cualquier dirección, es independientemente -O-, - C(O)O-, -OC(O)O- o -CONH-;
Ra es alquilo C2-22, alquenilo C2-22 o alquinilo C2-22;
cada Rb es independientemente alquileno C1.20, alquenileno C2-20 o alquinileno C2-20;
Rc es
Figure imgf000006_0001
Figure imgf000007_0001
R es alquilo C5-22, alquenilo C5-22 o alquinilo C5-22;
n es 0-12;
cada uno de m, p y q es independientemente 0, 1, 2, 3 o 4;
con la condición de que las cadenas (a)-(h) tengan 12-30 átomos de carbono y las cadenas (i)-(k) tengan 12-70 átomos de carbono;
X es CR6 o N; y
R6 es H, halo, alquilo C1-6 o R4
Como se describe en el presente documento, cada uno de R1 y R2 puede ser independientemente alquilo C1-6 opcionalmente sustituido. Como se describe en el presente documento, cada uno de R1 y R2 puede ser independientemente metilo opcionalmente sustituido o etilo opcionalmente sustituido. Como se describe en el presente documento, R1 puede ser metilo y R2 puede ser etilo opcionalmente sustituido. En la presente invención, R1 y R2 son los dos metilo.
Como se describe en el presente documento, R1 y R2 pueden unirse formando un anillo heterocíclico de 4-7 miembros opcionalmente sustituido. Como se describe en el presente documento, el anillo heterocíclico de 4-7 miembros puede ser azetidinilo opcionalmente sustituido, pirrolilo opcionalmente sustituido o piperidinilo opcionalmente sustituido. Como se describe en el presente documento, el anillo heterocíclico de 4-7 miembros puede ser azetidinilo, pirrolilo o piperidinilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con un grupo OH. Como se describe en el presente documento, el anillo heterocíclico de 4-7 miembros puede ser azetidinilo, pirrolilo o piperidinilo.
Como se describe en el presente documento, L puede ser alquileno C1-6, *-alquileno C1-4-L2-, *-alquileno C1-4-L2-alquileno C1-4-,
Figure imgf000007_0002
Como se describe en el presente documento, L puede ser *-alquileno C1-3-L2-, *-alquileno C1-4-L2-alquileno C1-2-,
Figure imgf000008_0001
en donde s es 0 y u es 1, o
Figure imgf000008_0002
en donde s es 0, t es 1 y u es 1.
Como se describe en el presente documento, L puede ser metileno, etileno o propileno. En la presente invención, L es metileno.
Como se describe en el presente documento, L2, unido en cualquier dirección, puede ser -C(O)O-, -OCOO- o - CONH-. Como se describe en el presente documento, L puede ser *-alquileno C1-3-O-C(O)-.
Como se describe en el presente documento, L puede ser *-alquileno C1-4-L2-alquileno C1-2-, en donde L2, unido en cualquier dirección, es -C(O)O- o -OC(O)O-.
Como se describe en el presente documento, L puede ser:
Figure imgf000008_0003
Como se describe en el presente documento, el grupo L-NR1R2 de fórmula (I) puede seleccionarse entre la lista de la Tabla 1.
Tabla 1. - .
Figure imgf000008_0004
continuación
Figure imgf000009_0001
continuación
Figure imgf000010_0001
continuación
Figure imgf000011_0001
Como se describe en el presente documento, el grupo L-NR1R2 de fórmula (I) puede seleccionarse entre la lista de la Tabla 2.
Tabla 2. Grupos L-NR1R2 f rm l I n n l lín i nin in i l n ni n n la fórmula (I).
Figure imgf000011_0002
continuación
Figure imgf000012_0001
continuación
Figure imgf000013_0001
continuación
Figure imgf000014_0001
Como se describe en el presente documento, cada uno de R3 y R4 puede ser independientemente:
(a) -Z1-Ra,
b) -Z1-Rb-Z2-Ra,
(c) -Z1-Rb-Z2-Rb-Z3-Ra,
(e) -Rb-Z1-Ra,
(f) -Rb-Z1-Rb-Z2-Ra,
(g) -Rb-Z1-Rb-Z2-Rb-Z3-Ra,
(i) -Rc, o
(j) -Z1-Rb-Rc.
Como se describe en el presente documento, cada uno de R3 y R4 puede ser independientemente:
(a) -Z1-Ra,
(b) -Z1-Rb-Z2-Ra,
(c) -Z1-Rb-Z2-Rb-Z3-Ra,
(e) -Rb-Z1-Ra,
(f) -Rb-Z1-Rb-Z2-Ra, o
(g) -Rb-Z1-Rb-Z2-Rb-Z3-Ra.
Como se describe en el presente documento, cada uno de R3 y R4 puede ser independientemente:
(a) -Z1-Ra,
(b) -Z1-Rb-Z2-Ra, o
(f) -Rb-Z1-Rb-Z2-Ra
Como se describe en el presente documento, cada uno de R3 y R4 puede ser independientemente:
(a) -Z1-Ra en donde Ra es alquenilo C12-18.
Como se describe en el presente documento, cada uno de R3 y R4 puede ser independientemente:
(a) -Z1-Ra en donde Ra es alquenilo C16-18.
Como se describe en el presente documento, cada uno de R3 y R4 puede ser independientemente (b) -Z1-Rb-Z2-Ra. Como se describe en el presente documento, cada uno de R3 y R4 puede ser independientemente (f) -Rb-Z1-Rb-Z2-Ra. Como se describe en el presente documento, cada uno de R3 y R4 puede ser independientemente (i) -Rc o (j) -Z1-Rb-Rc. En la presente invención, R4 = R3
Como se describe en el presente documento, Ra puede ser alquilo C2-22 o alquenilo C2-22. Como se describe en el presente documento, Ra puede ser alquilo C4-20. Como se describe en el presente documento, Ra puede ser alquilo C5-18. Como se describe en el presente documento, Ra puede ser alquenilo C2-22 que tiene de uno a tres dobles enlaces. Como se describe en el presente documento, Ra puede ser alquenilo C10-20 que tiene de uno a tres dobles enlaces, adecuadamente que tiene uno o dos dobles enlaces. Como se describe en el presente documento, Ra puede ser alquenilo C11-18 que tiene de uno a tres dobles enlaces, adecuadamente uno o dos dobles enlaces, adecuadamente dos dobles enlaces. Como se describe en el presente documento, Ra puede ser alquenilo C12-18 que tiene de uno a tres dobles enlaces, adecuadamente uno o dos dobles enlaces, adecuadamente dos dobles enlaces. Como se describe en el presente documento, Ra puede ser alquenilo C16-18 que tiene de uno a tres dobles enlaces, adecuadamente uno o dos dobles enlaces, adecuadamente dos dobles enlaces.
Como se describe en el presente documento, cada Rb puede ser independientemente alquileno C1-20. Como se describe en el presente documento, cada Rb puede ser independientemente alquileno C1-15, adecuadamente alquileno C1-10. Como se describe en el presente documento, Rc puede ser (c1) o (c3). Como se describe en el presente documento, Rc puede ser (c1) o (c3) en donde n es 1 o 2; m es 0 o 1; y p es 1.
Como se describe en el presente documento, Z1 puede ser -O-, -OCO- o -CONH-. Adecuadamente, Z1 puede ser -O-. Adecuadamente, Z1 puede ser -OCO-.
Como se describe en el presente documento, Z2 puede ser -OCO-, -COO-, -NHCO- o -OCOO-. Adecuadamente, Z2 puede ser -OCO- o -COO-. Adecuadamente, Z2 puede ser -OCO-.
Como se describe en el presente documento, Z3 puede ser -OCO- o -COO-.
Como se describe en el presente documento, cada uno de R3 y R4 puede ser independientemente (a) -Z1-Ra, (b) -Z1-Rb-Z2-Ra o (c) -Z1-Rb-Z2-Rb-Z3-Ra en donde Z1 es -O-.
Como se describe en el presente documento, cada uno de R3 y R4 puede ser independientemente (e) -Rb-Z1-Ra, (f) -Rb-Z1-Rb-Z2- Ra o (g) -Rb-Z1-Rb-Z2-Rb-Z3-Ra, en donde Z1 es -OCO-.
Como se describe en el presente documento, cada uno de R3 y R4 puede ser independientemente (a) -Z1-Ra en donde Z1 es -O-, -OCO- o -CONH- y Ra es alquenilo C12-18, adecuadamente alquenilo C15-18, que tiene de uno a tres dobles enlaces, adecuadamente uno o dos dobles enlaces, adecuadamente dos dobles enlaces. Adecuadamente, R4 = R3.
Como se describe en el presente documento, cada uno de R3 y R4 puede ser independientemente (b) -Z1-Rb-Z2-Ra en donde Z1 es -O-, Z2 es -OCO-, Rb es alquileno C1-15, adecuadamente alquileno C2-10 y Ra es alquilo C5-18 o alquenilo C11-18 que tiene de uno a tres dobles enlaces. Adecuadamente, R4 = R3.
Como se describe en el presente documento, R3 y R4 pueden ser iguales y cada uno puede ser (b) -Z1-Rb-Z2-Ra en donde Z1 es -O-, Z2 es -OCO-, Rb es alquileno C3-9 y Ra es alquenilo C16-18 que tiene dos dobles enlaces. Como se describe en el presente documento, R3 y R4 pueden ser iguales y cada uno puede ser (b) -Z1-Rb-Z2-Ra en donde Z1 es -O-, Z2 es -OCO-, Rb es alquileno C3-9 y Ra es alquilo C7-11.
Como se describe en el presente documento, cada uno de R3 y R4 puede ser independientemente (c) -Z1-Rb-Z2-Rb-Z3-Ra en donde Z1 es -O-, Z2 es -O- o -OCO-, Z3 es -O-, cada Rb es independientemente alquileno C2-7 y Ra es alquilo C8-9 o alquenilo C17 que tiene dos dobles enlaces. Adecuadamente, R4 = R3.
Como se describe en el presente documento, cada uno de R3 y R4 puede ser independientemente (e) -Rb-Z1-Ra en donde Z1 es -OCO-, Rb es metileno y Ra es alquilo C12-18 o alquenilo C17 que tiene dos dobles enlaces. Adecuadamente, R4 = R3 Como se describe en el presente documento, cada uno de R3 y R4 puede ser independientemente (f) -Rb-Z1-Rb-Z2-Ra en donde Z1 es -OCO-, Z2 es -COO-, -NHCO-, -OCO-, -OCOO-, cada Rb es independientemente alquileno C2-9 y Ra es alquilo C7-9 o alquenilo C17-18 que tiene dos dobles enlaces. Adecuadamente, R4 = R3.
Como se describe en el presente documento, X puede ser CR6, en donde R6 es H, cloro, bromo o alquilo C1-3. En la presente invención, X es CH.
Como se describe en el presente documento, X puede ser N.
En el presente documento se describe un compuesto seleccionado entre el grupo que consiste en:
1-(3,5-bis((Z)-octadec-9-en-1-iloxi) fenil)-N,N-dimetilmetanamina;
1-(3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenil)-N, N-dimetilmetanamina;
2,2'-((3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)bencil)azanodiil)dietanol;
1- (3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)bencil)pirrolidina;
1 -(3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1 -iloxi)bencil)azetidin-3-ol;
2- ((3,5-bis((Z)-octadec-9-en-1-iloxi)bencil)(metil)amino)acetato de etilo;
1-(3,5-bis((Z)-octadec-9-en-1-iloxi)bencil)pirrolidina;
ácido 2-((3,5-bis((Z)-octadec-9-en-1-iloxi)bencil)(metil)amino)acético
1-((2-(3,5-bis((Z)-octadec-9-en-1-iloxi)fenil)-1,3-dioxolan-4-il)metil)pirrolidina;
1-(2-(3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenil)-1,3-dioxolan-4-il)-N,N-dimetilmetanamina;
1- ((2-(3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenil)-1,3-dioxolan-4-il)metil)piperidina;
2- (dimetilamino)acetato de (2-(3,5-bis((Z)-octadec-9-en-1-iloxi)fenil)-1,3-dioxolan-4-il)metilo;
4-(dimetilamino)butanoato de 3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)bencilo;
3- (dimetilamino)propanoato de 3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)bencilo;
2- (dimetilamino)acetato de 3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)bencilo;
3- (dimetilamino)propanoato de 4-metil-3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)bencilo;
3-(dimetilamino)-2-metilpropanoato de 3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)bencilo;
2.6- bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)isonicotinato de 2-(dimetilamino)etilo;
2.6- bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)isonicotinato de 3-(dimetilamino)propilo;
bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-5-(((3-(dimetilamino)propanoil)oxi)metil)-1,3-fenileno; bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-5-(((4-(dimetilamino)butanoil)oxi)metil)-1,3-fenileno;
3- (dietilamino)propanoato de (2,6-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)piridin-4-il)metilo;
4- (dimetilamino)butanoato de (2,6-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)piridin-4-il)metilo;
3-(dimetilamino)propanoato de (2,6-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)piridin-4-il)metilo;
1- (2,6-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)piridin-4-il)-N,N-dimetilmetanamina;
5-(((3-(dimetilamino)propanoil)oxi)metil)isoftalato de di((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-ilo);
3- (dimetilamino)propanoato de 3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-ilcarbamoil)bencilo;
4- (dimetilamino)butanoato de 3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-ilcarbamoil)bencilo;
3- (dimetilamino)propanoato de 3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenetilo;
(3-(dimetilamino)propil)carbonato de 3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)bencilo;
bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-5-((((2-(dimetilamino)etoxi)carbonil)oxi)metil)-1,3-fenileno; 4- isopropil-3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)bencilcarbonato de 3-(dimetilamino)propilo;
(3-(dimetilamino)propil)carbonato de 4-bromo-3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)bencilo;
(3-(dimetilamino)propil)carbonato de 4-doro-3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)bencilo;
N-(3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)bencil)-2-(dimetilamino)acetamida;
3-(dimetilamino)propanoato de 3-(3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenil)propilo;
N,N-dimetil-1-(3,4,5-tris((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenil)metanamina;
2- (3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenil)-N,N-dimetiletanamina y
3- (3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenil)-N,N-dimetilpropan-1-amina.
En el presente documento se describe un compuesto seleccionado entre el grupo que consiste en:
bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-(((3-(dimetilamino)propanoil)oxi)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(etano-2,1-diílo);
bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-(((3-(dimetilamino)propanoil)oxi)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(propano-3,1-diílo);
bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((2-(dimetilamino)acetoxi)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(propano-3,1-diílo);
bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((2-(dimetilamino)acetoxi)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo);
bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-(((3-(dimetilamino)propanoil)oxi)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo);
bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-(((4-(dimetilamino)butanoil)oxi)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(etano-2,1-diílo);
bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo);
bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(propano-3,1-diílo);
bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(etano-2,1-diílo);
dihexanoato de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo);
dioctanoato de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo);
dioctanoato de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(decano-10,1-diílo);
dihexanoato de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(decano-10,1-diílo); bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'ZH(5-((dimetilaiTiino)iTietN)-1,3-fenNeno)bis(oxi))bis(hexano-6,1-diílo);
bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo);
bis(decanoato) de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(hexano-6,1-diílo);
dioctanoato de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(hexano-6,1-diílo);
bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((3-hidroxiazetidin-1-il)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo);
bis(dodec-8-enoato) de (8Z,8'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(hexano-6,1-diílo); bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-2-metil-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo);
bis(decanoato) de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo);
didodecanoato de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo); bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dietilamino)metil)-2-metil-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo); bis(3-octilundecanoato) de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(propano-3,1-diílo);
8,8'-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))dioctanoato de didecilo;
didodecanoato de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(hexano-6,1-diílo);
dioleato de (Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo);
ditetradecanoato de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo);
bis(octadeca-9,12,15-trienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z,15Z,15'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo);
octadeca-9,12-dienoato de (9Z,12Z)-4-(3-((dimetilamino)metil)-5-(4-(oleoiloxi)butoxi)fenoxi)butilo; octadeca-9,12,15-trienoato de (9Z,12Z,15Z)-4-(3-((dimetilamino)metil)-5-(4-((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dienoiloxi)butoxi)fenoxi)butilo;
5,5'-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))dipentanoato de di((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-ilo);
6,6'-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))dihexanoato de didodecilo;
octadeca-9,12-dienoato de (9Z,12Z)-3-(3-((dimetilamino)metil)-5-(3-((3-octilundecanoil)oxi)propoxi)fenoxi)propilo;
trioctanoato de ((5-((dimetilamino)metil)benceno-1,2,3-triil)tris(oxi))tris(decano-10,1-diílo);
trioctanoato de ((5-((dietilamino)metil)benceno-1,2,3-triil)tris(oxi))tris(decano-10,1-diílo);
octadeca-9,12-dienoato de (9Z,12Z)-4-(3-((dimetilamino)metil)-5-(4-((Z)-dodec-8-enoiloxi)butoxi)fenoxi)butilo; octadeca-9,12-dienoato de (9Z,12Z)-4-(3-((dimetilamino)metil)-5-(4-((3-octilundecanoil)oxi)butoxi)fenoxi)butilo; bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-(pirrolidin-1-ilmetil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo);
bis(7-hexiltridecanoato) de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo);
bis(9-pentiltetradecanoato) de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo);
bis(5-heptildodecanoato) de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo);
bis(3-octilundecanoato) de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo); bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'ZH(5-(3-(pipendin-1-il)propN)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4.1- diílo);
bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'ZH(5-(3-(dimetilairiino)propN)-1,3-fenNeno)bis(oxi))bis(butano-4.1- diílo);
bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-(3-morfolinopropil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo);
bis(decanoato) de ((5-(((3-(dimetilamino)propanoil)oxi)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo); y bis(decanoato) de ((5-(((4-(dimetilamino)butanoil)oxi)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo).
En el presente documento se describe un compuesto seleccionado entre el grupo que consiste en:
bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-(5-(((3-(dimetilamino)propanoil)oxi)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno);
bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-(5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno); ditridecanoato de (5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno);
bis(3-octilundecanoato) de (5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno);
octadeca-9,12-dienoato de (9Z,12Z)-3-((dimetilamino)metil)-5-(((3-octilundecanoil)oxi)metil)bencilo; bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-(5-((((3-(dietilamino)propoxi)carbonil)oxi)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno);
bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-(5-((((2-(dimetilamino)etoxi)carbonil)oxi)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno);
bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-(5-((((3-(dimetilamino)propoxi)carbonil)oxi)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno);
bis(5-heptildodecanoato) de (5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno);
bis(7-hexiltridecanoato) de (5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno); y
bis(9-pentiltetradecanoato) de (5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno).
En el presente documento se describe un compuesto seleccionado entre el grupo que consiste en: di((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-il)disuccinato de O,O'-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno));
bis(10-(octanoiloxi)decil)disuccinato de O,O'-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno));
8- dinonildioctanodioato de O'1,O1-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno));
9- dioctildinonanodioato de O'1,O1-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno));
bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-(((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno))bis(oxi))bis(4-oxobutano-4,1-diílo);
bis(decanoato) de (((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno))bis(oxi))bis(8-oxooctano-8,1-diílo); dioctanoato de (((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno))bis(oxi))bis(4-oxobutano-4,1-diílo); dioctanoato de (((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno))bis(oxi))bis(6-oxohexano-6,1-diílo); bis(10-(octanoiloxi)decanoato) de (5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno);
bis(8-(octanoiloxi)octanoato) de (5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno);
bis(decanoato) de (((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno))bis(oxi))bis(6-oxohexano-6,1-diílo); bis(8-decanamidooctanoato) de (5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno); y
bis(6-(((noniloxi)carbonil)oxi)hexanoato) de (5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno).
En el presente documento se describe un compuesto seleccionado entre el grupo que consiste en:
bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(etano-2,1-diil))bis(oxi))bis(etano-2,1-diílo);
bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((((5-((dietilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(etano-2,1-diil))bis(oxi))bis(etano-2,1-diílo);
bis(decanoato) de ((((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(propano-3,1-diil))bis(oxi))bis(4-oxobutano-4,1-diílo); y
9-dioctildinonanodioato de O'1,O1-(((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(propano-3,1-diílo)).
En el presente documento se describe un compuesto seleccionado entre el grupo que consiste en:
tetraoctanoato de 4,4'-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-1,2-diílo);
dioctanoato de (R)-4-(3-((S)-3,4-bis(octanoiloxi)butoxi)-5-((dimetilamino)metil)fenoxi)butano-1,2-dMlo; dioctanoato de _(S)-4-(3-((S)-3,4-bis(octanoiloxi)butoxi)-5-((dimetilamino)metil)fenoxi)butano-1,2-diílo; dioctanoato de (R)-4-(3-((R)-3,4-bis(octanoiloxi)butoxi)-5-((dimetilamino)metil)fenoxi)butano-1,2-dMlo; dihexanoato de 2-(3-(4-(5-((dimetilamino)metil)-2-metil-3-((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenoxi)butoxi)-3-oxopropil)propano-1,3-diílo;
tetraoctanoato de (((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diil))bis(propano-3,2,1-triílo); tetraoctanoato de (((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(metileno))bis(propano-3,2,1-triilo); y tetraoctanoato de ((((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diil))bis(oxi))bis(propano-3,2,1-triilo).
Como se usa en el presente documento, el término "alquilo" se refiere a una cadena hidrocarbonada, ramificada o no ramificada, completamente saturada, que tiene el número especificado de átomos de carbono. Por ejemplo, alquilo C1-6 se refiere a un grupo alquilo que tiene de 1 a 6 átomos de carbono. Los grupos alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes como se define en la fórmula (I). Los ejemplos representativos de alquilo incluyen, pero sin limitación, metilo, etilo, n-propilo, /so-propilo, n-butilo, sec-butilo, /'so-butilo, ferc-butilo, n-pentilo, isopentilo, neopentilo, n-hexilo, 3-metilhexilo, 2 ,2-dimetilpentilo, 2,3-dimetilpentilo, n-heptilo, n-octilo, n-nonilo, n-decilo, n-undecanilo, n-dodecanilo, n-tridecanilo, 9-metilheptadecanilo y similares.
Como se usa en el presente documento, el término "alquileno" se refiere a un grupo alquilo divalente como se ha definido anteriormente en el presente documento. Los ejemplos representativos de alquileno incluyen, pero sin limitación, metileno, etileno, n-propileno, /so-propileno, n-butileno, sec-butileno, /so-butileno, ferc-butileno, n-pentileno, isopentileno, neopentileno, n-hexileno, 3-metilhexileno, 2,2- dimetilpentileno, 2,3-dimetilpentileno, n-heptileno, n-octileno, n-nonileno, n-decileno y similares.
Como se usa en el presente documento, el término "alquenilo" se refiere a una cadena hidrocarbonada, ramificada o no ramificada, insaturada, que tiene el número especificado de átomos de carbono y uno o más dobles enlaces carbonocarbono dentro de la cadena. Por ejemplo, alquenilo C2-6 se refiere a un grupo alquenilo que tiene de 2 a 6 átomos de carbono con uno o más dobles enlaces carbono-carbono dentro de la cadena. Como se describe en el presente documento, los grupos alquenilo pueden tener un doble enlace carbono-carbono dentro de la cadena. Como se describe en el presente documento, los grupos alquenilo pueden tener más de un doble enlace carbono-carbono dentro de la cadena. Los grupos alquenilo pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes como se define en la fórmula (I). Los ejemplos representativos de alquenilo incluyen, pero sin limitación, etilenilo, propenilo, butenilo, pentenilo, hexenilo y similares. Otros ejemplos de alquenilo incluyen, pero sin limitación: Z-octadec-9-enilo, Z-undec-7-enilo, Z-heptadeca-8-enilo, (9Z,12Z)-octadeca-9,12-dienilo, (8Z,11Z)-heptadeca-8,11-dienilo y (8Z,11Z,14Z)-heptadeca-8,11,14-trienilo.
Como se usa en el presente documento, el término "alquenileno" se refiere a un grupo alquenilo divalente como se ha definido anteriormente en el presente documento. Los ejemplos representativos de alquenileno incluyen, pero sin limitación, etenileno, propenileno, butenileno, pentenileno, hexenileno y similares.
Como se usa en el presente documento, el término "alquinilo" se refiere a una cadena hidrocarbonada, ramificada o no ramificada, insaturada, que tiene el número especificado de átomos de carbono y uno o más triples enlaces carbonocarbono. Por ejemplo, alquinilo C2-6 se refiere a un grupo alquinilo que tiene de 2 a 6 átomos de carbono con uno o más triples enlaces carbono-carbono dentro de la cadena. Como se describe en el presente documento, los grupos alquinilo pueden tener un triple enlace carbono-carbono dentro de la cadena. Como se describe en el presente documento, los grupos alquinilo pueden tener más de un triple enlace carbono-carbono dentro de la cadena. Los grupos alquinilo pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes como se define en la fórmula (I). Los ejemplos representativos de alquinilo incluyen, pero sin limitación, etinilo, 1 -propinilo, propargilo, butinilo, pentinilo, hexinilo y similares.
Como se usa en el presente documento, el término "alquinileno" se refiere a un grupo alquinilo divalente como se ha definido anteriormente en el presente documento. Los ejemplos representativos de alquinileno incluyen, pero sin limitación, etinileno, propinileno, propargileno, butinileno, pentinleno, hexinileno y similares.
Como se usa en el presente documento, el término "alcoxi" se refiere a cualquier resto alquilo unido a través de un puente oxígeno (es decir, un grupo -O-alquilo C1-3 en el que el alquilo C1-3 es como se define en el presente documento). Los ejemplos de tales grupos incluyen, pero sin limitación, metoxi, etoxi y propoxi.
Como se usa en el presente documento, el término "cicloalquilo" se refiere a un anillo de hidrocarburo monocíclico, bicíclico o tricíclico, saturado, que tiene el número especificado de átomos de carbono. Por ejemplo, cicloalquilo C3-7 se refiere a un anillo cicloalquilo que tiene de 3 a 7 átomos de carbono. Los grupos cicloalquilo pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes como se define en la fórmula (I). Los ejemplos representativos de cicloalquilo incluyen, pero sin limitación, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, biciclo[2.1.1]hexilo, biciclo[2.2.1]heptilo, adamantilo y similares.
Como se usa en el presente documento, el término "cicloalquileno" se refiere a un grupo cicloalquilo divalente como se ha definido anteriormente.
Como se usa en el presente documento, el término "cicloalquenilo" se refiere a un anillo de hidrocarburo monocíclico, bicíclico o tricíclico, insaturado, no aromático, que tiene el número especificado de átomos de carbono y uno o más dobles enlaces carbono-carbono. Por ejemplo, cicloalquenilo C3-7 se refiere a un grupo cicloalquenilo que tiene de 3 a 7 átomos de carbono y uno o más dobles enlaces carbono-carbono. Como se describe en el presente documento, los grupos cicloalquenilo pueden tener un doble enlace carbono-carbono dentro del anillo. Como se describe en el presente documento, los grupos cicloalquenilo pueden tener más de un doble enlace carbono-carbono dentro del anillo. Los ejemplos representativos de cicloalquenilo incluyen, pero sin limitación, ciclopropenilo, ciclobutenilo, ciclopentenilo, ciclohexenilo, cicloheptenilo y similares.
Como se usa en el presente documento, el término "cicloalquenileno" se refiere a un grupo cicloalquenilo divalente como se ha definido anteriormente en el presente documento.
Como se usa en el presente documento, el término "cicloalquinilo" se refiere a un anillo de hidrocarburo monocíclico, bicíclico o tricíclico, insaturado, que tiene el número especificado de átomos de carbono y uno o más triples enlaces carbono-carbono. Por ejemplo, cicloalquinilo C3-7 se refiere a un grupo cicloalquinilo que tiene de 3 a 7 átomos de carbono. Como se describe en el presente documento, los grupos cicloalquinilo tienen un triple enlace carbono-carbono dentro del anillo. Como se describe en el presente documento, los grupos cicloalquinilo pueden tener más de un triple enlace carbono-carbono dentro del anillo. Los ejemplos representativos de cicloalquinilo incluyen, pero sin limitación, ciclopropinilo, ciclobutinilo, ciclopentinilo, ciclohexinilo, cicloheptinilo y similares.
Como se usa en el presente documento, el término "cicloalquinileno" se refiere a un grupo cicloalquinilo divalente como se ha definido anteriormente en el presente documento.
Como se usa en el presente documento, el término "halo" se refiere a flúor, cloro, bromo y yodo.
Como se usa en el presente documento, el término "heterocíclico" se refiere a un anillo monocíclico o bicíclico, saturado o insaturado, de 4 a 12 miembros, que contiene de 1 a 4 heteroátomos. Los sistemas de anillos heterocíclicos no son aromáticos. Los grupos heterocíclicos que contienen más de un heteroátomo pueden contener heteroátomos diferentes. Los grupos heterocíclicos pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes como se define en la fórmula (I). Son grupos heterocíclicos sistemas de anillos monocíclicos, espiro, condensados o puenteados. Los ejemplos de grupos heterocíclicos monocíclicos incluyen tetrahidrofuranoílo, dihidrofuranilo, 1,4-dioxanilo, morfolinilo, 1,4-ditianilo, azetidinilo, piperazinilo, piperidinilo, 1,3-dioxolanilo, imidazolidinilo, imidazolinilo, pirrolinilo, pirrolidinilo, tetrahidropiranilo, dihidropiranilo, 1,2,3,6-tetrahidropiridinilo, oxatiolanilo, ditiolanilo, 1,3-dioxanilo, 1,3-ditianilo, oxatianilo, tiomorfolinilo, 1,4,7-trioxa-10-azaciclododecanilo, azapanilo y similares. Los ejemplos de anillos heterocíclicos espiro incluyen, pero sin limitación, 1,5-dioxa-9-azaespiro[5.5]undecanilo, 1,4-dioxa-8-azaespiro[4.5]decanilo, 2-oxa-7-azaespiro[3.5]nonanilo y similares. Los sistemas de anillos heterocíclicos condensados tienen de 8 a 11 átomos en el anillo e incluyen grupos en donde un anillo heterocíclico está condensado con un anillo de fenilo. Los ejemplos de anillos heterocíclicos condensados incluyen, pero sin limitación, decahidroqunilinilo, (4aS,8aR)-decahidroisoquinolinilo, (4aS,8aS)-decahidroisoquinolinilo, octahidrociclopenta[c]pirrolilo, isoinolinilo, (3aR,7aS)-hexahidro-[1,3]dioxolo[4.5-c]piridinilo, octahidro-1H-pirrolo[3,4-b]piridinilo, tetrahidroisoquinolinilo y similares.
Como se usa en el presente documento, la expresión "un isómero óptico" o "un estereoisómero" se refiere a cualquiera de las diversas configuraciones que pueden existir para un compuesto dado de la presente invención e incluye isómeros geométricos. Se entiende que un sustituyente puede estar unido a un centro quiral de un átomo de carbono. El término "quiral" se refiere a moléculas que tienen la propiedad de no superponerse con su imagen especular, mientras que el término "aquiral" se refiere a moléculas que se pueden superponer con su imagen especular. Por lo tanto, la invención incluye enantiómeros, diastereómeros o racematos del compuesto. Los "enantiómeros" son un par de estereoisómeros que son imágenes especulares no superponibles entre sí. Una mezcla 1:1 de un par de enantiómeros es una mezcla "racémica". El término se utiliza para designar una mezcla racémica en los casos en los que sea apropiado. "Diastereoisómeros" son estereoisómeros que tienen al menos dos átomos asimétricos, pero que no son imágenes especulares entre sí. La estereoquímica absoluta se especifica de acuerdo con el sistema R-S de Cahn-Ingold-Prelog. Cuando un compuesto es un enantiómero puro, la estereoquímica en cada uno de los carbonos quirales se puede especificar ya sea como R o S. Los compuestos resueltos, cuya configuración absoluta es desconocida, se pueden designar (+) o (-) dependiendo de la dirección (dextrógira o levógira) en la que desvían el plano de luz polarizada a la longitud de onda de la línea D del sodio. Ciertos compuestos descritos en la presente contienen uno o más centros o ejes asimétricos y, por tanto, pueden dar lugar a enantiómeros, diastereómeros y otras formas estereoisoméricas que pueden definirse, en términos de su estereoquímica absoluta, como (R) o (S).
Dependiendo de la elección de los materiales de partida y los procedimientos, los compuestos se pueden encontrar presentes en forma de uno de los posibles isómeros o como mezclas de estos, por ejemplo, como isómeros ópticos puros, o como mezclas de isómeros tales como racematos y mezclas de diastereómeros, dependiendo del número de átomos de carbono asimétricos. La presente invención pretende incluir todos estos posibles isómeros, incluidas mezclas racémicas, mezclas diastereoisoméricas y formas ópticamente puras. Se pueden preparar isómeros (R) y (S) ópticamente activos utilizando sintones quirales o reactivos quirales, o se pueden resolver utilizando técnicas convencionales. Si el compuesto contiene un doble enlace, el sustituyente puede tener la configuración E o Z. Si el compuesto contiene un cicloalquilo disustituido, el sustituyente del cicloalquilo puede tener una configuración cis o trans. También se pretende incluir todas las formas tautoméricas.
Cualquier átomo asimétrico (p. ej., carbono o similar) del o de los compuestos de la presente invención puede estar presente en forma racémica o enriquecida enantioméricamente, por ejemplo la configuración (R), (S) o (R,S). En ciertas realizaciones, cada átomo asimétrico tiene al menos un 50 % de exceso enantiomérico, al menos un 60 % de exceso enantiomérico, al menos un 70 % de exceso enantiomérico, al menos un 80 % de exceso enantiomérico, al menos un 90 % de exceso enantiomérico, al menos un 95 % de exceso enantiomérico o al menos un 99 % de exceso enantiomérico en la configuración (R) o (S). Los sustituyentes en átomos con dobles enlaces insaturados pueden estar presentes, si es posible, en forma cis-(Z) o trans-(E).
Por consiguiente, tal como se utiliza en la presente, un compuesto de la presente invención puede estar en forma de uno de los posibles isómeros, rotámeros, atropisómeros, tautómeros o mezclas de estos, por ejemplo, como racematos, isómeros ópticos (enantiómeros), diastereómeros, isómeros geométricos (cis o trans) sustancialmente puros o mezclas de estos.
Cualquiera de las mezclas resultantes de isómeros puede separarse, basándose en las diferencias fisicoquímicas de los constituyentes, en los isómeros geométricos u ópticos, diastereómeros, racematos puros o sustancialmente puros, por ejemplo, mediante cromatografía y/o cristalización fraccionada.
Cualquier racemato resultante de productos finales o compuestos intermedios puede resolverse en los antípodas ópticos por métodos conocidos, p. ej., por separación de sus sales diastereoméricas, obtenidas con un ácido o base ópticamente activo, y liberando el compuesto de carácter ácido o básico ópticamente activo. En particular, de esta manera puede emplearse un resto básico para resolver los compuestos de la presente invención en sus antípodas ópticas, por ejemplo, por cristalización fraccionada de una sal formada con un ácido ópticamente activo, por ejemplo, ácido tartárico, ácido dibenzoil tartárico, ácido diacetil tartárico, ácido di-0,0'-p-toluoil tartárico, ácido mandélico, ácido málico o ácido canfor-10-sulfónico. Los productos racémicos también pueden resolverse por cromatografía quiral, por ejemplo, cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) usando un adsorbente quiral.
Como se usa en el presente documento, los términos "sal" o "sales" se refieren a una sal de adición de ácidos o de adición de bases de un compuesto de la invención. Las "sales" incluyen, en particular, "sales farmacéuticamente aceptables". La expresión "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a sales que conservan la efectividad biológica y las propiedades de los compuestos de esta invención y que normalmente no son biológicamente o de otra manera indeseables. En muchos casos, los compuestos de la presente invención son capaces de formar sales de ácidos y/o bases en virtud de la presencia de grupos amino y/o carboxilo o grupos similares a los mismos.
Se pueden formar sales de adición de ácidos farmacéuticamente aceptables con ácidos inorgánicos y ácidos orgánicos, por ejemplo, sales acetato, aspartato, benzoato, besilato, bromuro/bromhidrato, bicarbonato/carbonato, bisulfato/sulfato, canforsulfonato, cloruro/clorhidrato, cloroteofilonato, citrato, etandisulfonato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, hipurato, yodhidrato/yoduro, isetionato, lactato, lactobionato, laurilsulfato, malato, maleato, malonato, mandelato, mesilato, metilsulfato, naftoato, napsilato, nicotinato, nitrato, octadecanoato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato/hidrogenofosfato/dihidrogenofosfato, poligalacturonato, propionato, estearato, succinato, sulfosalicilato, tartrato, tosilato y trifluoroacetato.
Los ácidos inorgánicos a partir de los cuales se pueden obtener sales incluyen, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y similares.
Los ácidos orgánicos a partir de los cuales se pueden obtener sales incluyen, por ejemplo, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malónico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido toluenosulfónico, ácido sulfosalicílico y similares. Se pueden formar sales de adición de bases farmacéuticamente aceptables con bases orgánicas e inorgánicas.
Las bases inorgánicas a partir de las cuales se pueden obtener sales incluyen, por ejemplo, sales de amonio y metales de las columnas I a XII de la Tabla Periódica. En determinadas realizaciones, las sales se obtienen a partir de sodio, potasio, amonio, calcio, magnesio, hierro, plata, cinc y cobre; las sales particularmente adecuadas incluyen sales de amonio, potasio, sodio, calcio y magnesio.
Las bases orgánicas a partir de las cuales se pueden obtener sales incluyen, por ejemplo, aminas primarias, secundarias y terciarias, aminas sustituidas que incluyen aminas sustituidas de origen natural, aminas cíclicas, resinas de intercambio iónico básicas y similares. Determinadas aminas orgánicas incluyen isopropilamina, benzatina, colinato, dietanolamina, dietilamina, lisina, meglumina, piperazina y trometamina.
Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención se pueden sintetizar a partir de un resto básico o ácido, mediante métodos químicos convencionales. Generalmente, sales de este tipo se pueden preparar haciendo reaccionar formas de ácido libre de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base apropiada (tal como hidróxido, carbonato, bicarbonato de Na, Ca, Mg o K, o similares), o haciendo reaccionar formas de base libre de estos compuestos con una cantidad estequiométrica del ácido apropiado. Reacciones de este tipo se llevan a cabo típicamente en agua o en un disolvente orgánico, o en una mezcla de los dos. Generalmente, es deseable el uso de medios no acuosos, tales como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo, cuando sea posible. Se pueden encontrar listas de sales adecuadas adicionales, p. ej., en "Remington's Pharmaceutical Sciences", 20a ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); y en "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" por Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Alemania, 2002).
Métodos generales para sintetizar lípidos catiónicos
En el presente documento se describen procesos para la preparación de compuestos de fórmula (I). En las reacciones descritas, podría ser necesario proteger grupos funcionales reactivos, por ejemplo, grupos hidroxilo, amino, imino, tio o carboxi, en los sitios en los que se desee en el producto final, para evitar su participación no deseada en las reacciones.
Los compuestos y procesos descritos en el presente documento se entenderán mejor en relación con los siguientes esquemas sintéticos, que solo pretenden ser métodos ilustrativos mediante los que pueden prepararse generalmente los compuestos y no pretenden limitar el alcance de la invención que se define en las reivindicaciones.
Los compuestos finales de fórmula (I) pueden prepararse como se describe en el Esquema I.
Esquema I
Figure imgf000023_0001
Un compuesto de fórmula (I) puede prepararse haciendo reaccionar un compuesto de fórmula 2 con un compuesto de fórmula 3 usando un agente reductor adecuado (por ejemplo, acetoxiborohidruro de sodio y similares) y opcionalmente un ácido de Lewis (por ejemplo, tetraisopropóxido de titanio y similares) en un disolvente adecuado tal como etanol. La reacción puede realizarse entre la temperatura ambiente y 80 °C y puede tardar hasta 24 horas en completarse.
Los compuestos de fórmula (I) también pueden prepararse procediendo como se describe en el Esquema II. Esquema II
Figure imgf000024_0001
Un compuesto de fórmula I puede prepararse haciendo reaccionar un compuesto de fórmula 4 donde Y es un grupo cloro, bromo, yodo, mesilo, tosilo u otro grupo saliente con un compuesto de fórmula 5 en DMF u otro disolvente adecuado a una temperatura de 20 a 180 °C.
Los compuestos finales de fórmula (Ia) pueden prepararse como se describe en el Esquema III.
Esquema III
Figure imgf000024_0002
Un compuesto de fórmula (Ia) puede prepararse haciendo reaccionar un alcohol de fórmula 6 con un ácido de fórmula 7 en diclorometano u otro disolvente adecuado usando EDC u otro agente de acoplamiento adecuado con una base o catalizador opcional, tal como DMAP a una temperatura de 20 °C a 150 °C.
Los compuestos de fórmula 4 y 6 pueden prepararse a partir del precursor apropiado de fórmula 7 por métodos conocidos por los expertos en la materia, por ejemplo, como se describe en el Esquema IV.
Esquema IV
Figure imgf000024_0003
Un compuesto de fórmula 6 puede prepararse haciendo reaccionar un compuesto de fórmula 2 con borohidruro sódico u otro agente reductor apropiado (por ejemplo, hidruro de diisobutilaluminio, borohidruro de litio, etc.) en etanol u otro disolvente apropiado a una temperatura de entre -20 °C y 150 °C. Un compuesto de fórmula 4 puede prepararse a partir de un compuesto de fórmula 6 por reacción con anhídrido de mesilo u otro agente de activación apropiado (por ejemplo, cloruro de tosilo, oxicloruro de fósforo, etc.) en diclorometano u otro disolvente apropiado a una temperatura de entre -20 °C y 80 °C.
Los compuestos de fórmula 2 pueden prepararse como se describe en el Esquema V.
Esquema V
Figure imgf000025_0001
Un compuesto de fórmula 2 puede prepararse a partir de un compuesto de fórmula 8 haciendo reaccionar con un compuesto de fórmula 9 en presencia de DIAD u otro compuesto diazo apropiado (por ejemplo, DEAD, etc.) con trifenilfosfina u otra fosfina apropiada (por ejemplo, trimetilfosfina) en diclorometano u otro disolvente adecuado a una temperatura de entre -20 °C y 50 °C.
Como alternativa, los compuestos de fórmula 2 pueden prepararse de acuerdo con el Esquema VI.
Esquema VI
Figure imgf000025_0002
Un compuesto de fórmula 2 puede prepararse a partir de un compuesto de fórmula 8 haciendo reaccionar con un compuesto de fórmula 10, donde Y es un grupo halógeno, mesilato u otro grupo saliente apropiado, en presencia de carbonato potásico u otra base adecuada (por ejemplo, carbonato de cesio, fosfato potásico tribásico, etc.) en DMF u otro disolvente adecuado a una temperatura de entre 20 y 180 °C. Un compuesto de fórmula 10 puede prepararse a partir de un compuesto de fórmula 9 haciendo reaccionar con cloruro de mesilo u otro agente de activación adecuado (por ejemplo, cloruro de tosilo, oxicloruro de fósforo, etc.) en presencia de piridina u otra base adecuada en diclorometano u otro disolvente adecuado a una temperatura de entre -20 °C y 180 °C.
Como alternativa, los compuestos de fórmula 2 pueden prepararse de acuerdo con el Esquema VII.
Esquema VII
Figure imgf000025_0003
Un compuesto de fórmula 2 puede prepararse a partir de un compuesto de fórmula 11 haciendo reaccionar con un compuesto de fórmula 12 y e Dc u otro agente de acoplamiento adecuado (por ejemplo, DIC, HATU, etc.) en presencia de DMAP u otro catalizador apropiado y DIEA u otra base apropiada en diclorometano u otro disolvente apropiado (por ejemplo, DMF, DCE, etc.) a una temperatura de entre 0 °C y 180 °C.
Como alternativa, los compuestos de fórmula 2 pueden prepararse de acuerdo con el Esquema VIII.
Esquema VIII
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Un compuesto de fórmula 2 puede prepararse a partir de un compuesto de fórmula 13 haciendo reaccionar con un compuesto de fórmula 14 y EDC u otro agente de acoplamiento adecuado (por ejemplo, DIC, HATU, etc.) en presencia de DMAP u otro catalizador apropiado y DIEA u otra base apropiada en diclorometano u otro disolvente apropiado (por ejemplo, DMF, DCE, etc.) a una temperatura de entre 0 °C y 180 °C.
pKa para lípidos catiónicos
Los compuestos de fórmula (I) son lípidos catiónicos útiles en la administración de agentes biológicamente activos a células y tejidos. Se ha descubierto que las composiciones lipídicas para la administración de agentes biológicamente activos pueden ajustarse para que se dirijan preferentemente a un tipo de célula u órgano sobre otro únicamente alterando el lípido catiónico en la formulación. Por ejemplo, un lípido catiónico con un pKa de aproximadamente 5,1 a aproximadamente 7,4 generalmente es eficaz cuando se usa en una formulación para la liberación en el hígado. El pKa de un lípido catiónico puede ser de aproximadamente 5,1 a aproximadamente 7,4 para la liberación en el hígado. El pKa de un lípido catiónico puede ser de aproximadamente 5,3 a aproximadamente 7,0 para la liberación en el hígado. El pKa de un lípido catiónico puede ser de aproximadamente 5,3 a aproximadamente 6,6 para la liberación en el hígado. Para la liberación en un tumor, un lípido catiónico con un pKa de aproximadamente 5,3 a aproximadamente 6,4 es particularmente eficaz cuando se usa en una formulación para la liberación de un agente biológicamente activo en un tumor. Por lo tanto, el pKa de un lípido catiónico puede ser de aproximadamente 5,3 a aproximadamente 6,4 para la liberación en tumores. El pKa de un lípido catiónico puede ser de aproximadamente 5,4 a aproximadamente 6,2 para la liberación en tumores. El pKa del lípido catiónico puede ser de aproximadamente 5,8 a aproximadamente 6,1 para la liberación en tumores. Para propósitos de inmunización, el pKa de un lípido catiónico es útil de 5,0 a 7,6, tal como de 5,7 a 5,9 (véase el documento WO2012/006378).
Composiciones lipídicas
La presente invención proporciona una composición lipídica que comprende i) bis(decanoato) de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo), bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo) o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos; y ii) ARNm. En una realización, está presente al menos otro componente lipídico. Dichas composiciones contienen ARNm, opcionalmente junto con uno o más de otros componentes lipídicos.
Dichos otros componentes lipídicos incluyen, pero limitación, lípidos catiónicos, lípidos neutros, lípidos aniónicos, lípidos auxiliares y lípidos de circulación prolongada.
Los lípidos catiónicos adecuados para su uso en una composición lipídica de la invención incluyen, pero sin limitación, cloruro de N,N-dioleil-N,N-dimetilamonio (DODAC),
bromuro de N,N-diestearil-N,N-dimetilamonio (DDAB), cloruro de N-(1-(2,3-dioleoiloxi)propil)-N,N,N-trimetilamonio (DOTAP),
1.2- dioleoil-3-dimetilamonio-propano (DODAP),
cloruro de N-(1-(2,3-dioleiloxi)propil)-N,N,N-trimetilamonio (DOTMA), 1,2-dioleoilcarbamil-3-dimetilamoniopropano (DOCDAP),
1.2- dilineoil-3-dimetilamonio-propano (DLINDAP), dilauril(C12:0) trimetil amonio propano (DLTAP), dioctadecilamidoglicil espermina (DOGS), DC-Chol,
trifluoroacetato de dioleoiloxi-N-[2-sperminecarboxamido)etil}-N,N-dimetil-1-propanaminio (DOSPA), bromuro de 1.2- dimiristiloxipropil-3-dimetil-hidroxietilamonio (DMRIE),
3-dimetilamino-2-(colest-5-en-3-beta-oxibutan-4-oxi)-1-(cis,cis-9,12-octadecadienoxi)propano (CLinDMA), N,N-dimetil-2,3-dioleiloxi)propilamina (DODMA),
2-[5'-(colest-5-en-3[beta]-oxi)-3'-oxapentoxi)-3-dimetil-1-(cis,cis-9',12'-octadecadienoxi)propano (CpLinDMA) y N,N-dimetil-3,4-dioleiloxibencilamina (DMOBA), y
1,2-N,N'-dioleilcarbamil-3-dimetilaminopropano (DOcarbDAP). En una realización, el lípido catiónico es DOTAP o DLTAP.
Los lípidos neutros adecuados para su uso en una composición lipídica de la invención incluyen, por ejemplo, una diversidad de lípidos neutros, no cargados o zwiteriónicos. Los ejemplos de fosfolípidos neutros adecuados para su uso en la presente invención incluyen, pero sin limitación: 5-heptadecilbenceno-1,3-diol (resorcinol), hemisuccinato de colesterol (CHEMS), dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC), diestearoilfosfatidilcolina (Ds PC), fosfocolina (DOPC), dimiristoilfosfatidilcolina (DMPC), fosfatidilcolina (PLPC), 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DAPC), fosfatidiletanolamina (PE), fosfatidilcolina de huevo (EPC), dilauriloilfosfatidilcolina (DLPC), dimiristoilfosfatidilcolina (DMPC), 1 -miristoil-2-palmitoil fosfatidilcolina (MPPC), 1 -palmitoil-2-miristoil fosfatidilcolina (Pm Pc ), 1-palmitoil-2-estearoil fosfatidilcolina (PSPC), 1,2-diaraquidoil-sn-glicero-3- fosfocolina (DBPC), 1-estearoil-2-palmitoil fosfatidilcolina (SPPC), 1,2-dieicosenoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DEPC), palmitoiloleoil fosfatidilcolina (POPC), lisofosfatidil colina, dioleoil fosfatidiletanolamina (DOPE), dilinoleoilfosfatidilcolina diestearoilfosfatidiletanolamina (DSPE), dimiristoil fosfatidiletanolamina (DMPE), dipalmitoil fosfatidiletanolamina (DPPE), palmitoiloleoil fosfatidiletanolamina (POPE), lisofosfatidiletanolamina y combinaciones de los mismos. En una realización, el fosfolípido neutro se selecciona entre el grupo que consiste en diestearoilfosfatidilcolina (DSPC) y dimiristoil fosfatidil etanolamina (DMPE).
Los lípidos aniónicos adecuados para su uso en la presente invención incluyen, pero sin limitación, fosfatidilglicerol, cardiolipina, diacilfosfatidilserina, ácido diacilfosfatídico, N-dodecanoil fosfatidil etanoloamina, N-succinil fosfatidiletanolamina, N-glutaril fosfatidiletanolamina y lisilfosfatidilglicerol.
Los lípidos neutros y aniónicos adecuados también incluyen los que se describen en el documento US 2009/0048197.
Los lípidos auxiliares son lípidos que mejoran en cierta medida la transfección (por ejemplo, la transfección de la nanopartícula que incluye el agente biológicamente activo). El mecanismo por el que el lípido auxiliar mejora la transfección puede incluir, por ejemplo, mejorar la estabilidad de las partículas y/o mejorar la fusiogenicidad de la membrana. Los lípidos auxiliares incluyen esteroides y alquil resorcinoles. Los lípidos auxiliares adecuados para su uso en la presente invención incluyen, pero sin limitación, colesterol, 5-heptadecilresorcinol y hemisuccinato de colesterol.
Los lípidos de circulación prolongada son lípidos que aumentan el tiempo durante el cual las nanopartículas pueden existir in vivo (por ejemplo, en la sangre). Los lípidos de circulación prolongada adecuados para su uso en una composición lipídica de la invención incluyen, pero sin limitación, lípidos de circulación prolongada que tienen un grupo de cabeza hidrófilo unido a un resto lipídico. Los ejemplos de dichos lípidos de circulación prolongada incluyen compuestos de fórmula (XI), como se describe en el documento WO2011/076807,
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o una sal o derivado farmacéuticamente aceptable de los mismos,
en donde:
Z es un componente de grupo de cabeza hidrófilo seleccionado entre PEG y polímeros basados en poli(oxazolina), poli(óxido de etileno), poli(alcohol vinílico), poli(glicerol), poli(N-vinilpirrolidona), poli[N-(2-hidroxipropil)metacrilamida], polisacáridos y poli(aminoácidos), en donde el polímero puede ser linear o ramificado, y en donde el polímero puede estar opcionalmente sustituido;
en donde Z se polimeriza con n subunidades;
n es un grado de polimerización promediado entre 10 y 200 unidades de Z, en donde n está optimizado para diferentes tipos de polímeros;
L1 es un enlazador alquileno C1-10 o heteroalquileno C1-10 opcionalmente sustituido que incluye cero, uno, dos o más de un éter (por ejemplo, -O-), éster (por ejemplo, -C(O)O-), succinato (por ejemplo, -O(O)C-CH2-CH2-C(O)O-)), carbamato (por ejemplo, -OC(O)-Nr '-), carbonato (por ejemplo, -OC(O)O-), cetona (por ejemplo, -C-C(O)-C-), carbonilo (por ejemplo, -C(O)-), urea (por ejemplo, -NRC(O)NR'-), amina (por ejemplo, -NR'-), amida (por ejemplo, -C(O)NR'-), imina (por ejemplo, -C(Nr ')-), tioéter (por ejemplo, -S-), xantato (por ejemplo, -OC(S)S-) y fosfodiéster (por ejemplo, -OP(O)2O-); pudiendo estar cualquiera de ellos sustituido con cero, uno o más grupos Z;
en donde R' se selecciona independientemente entre -H, -NH-, -NH2, -O-, -S-, un fosfato o un alquileno C1-10 opcionalmente sustituido;
Xi y X2 se seleccionan independientemente entre un carbono o un heteroátomo seleccionado entre -NH-, -O-, -S- o un fosfato;
A1 y A2 se seleccionan independientemente entre un alquilo C6-30, alquenilo C6-30 y alquinilo C6-30, en donde A1 y A2 pueden ser iguales o diferentes,
o en donde A1 y A2, junto con el átomo de carbono al que están unidos, forman un esteroide opcionalmente sustituido.
Los lípidos de circulación prolongada específicos incluyen, pero sin limitación, los listados en la Tabla 3.
T l . Lí i ir l i n r l n
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continuación
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continuación
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continuación
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continuación
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Pueden encontrarse otros lípidos de circulación prolongada adecuados para su uso en una composición lipídica de la presente invención así como información sobre la bioquímica de dichos lípidos en Romberg et al., Pharmaceutical Research, Vol. 25, N.° 1, 2008, págs. 55-71 y Hoekstra et al., Biochimica et Biophysica Acta 1660 (2004) 41-52.
En una realización, el lípido de circulación prolongada adecuado comprende un grupo seleccionado entre PEG (en algunas ocasiones denominado poli(óxido de etileno) y polímeros basados en poli(oxazolina), poli(alcohol vinílico), poli(glicerol), poli(N-vinilpirrolidona), poliaminoácidos y poli[N-(2-hidroxipropil)metacrilamida]. Se divulgan lípidos de PEG adecuados adicionales, por ejemplo, en el documento WO 2006/007712.
Los lípidos de circulación prolongada adecuados específicos incluyen conjugados de polietilenglicol-diacilglicerol o polietilenglicol-diacilglicamida (PEG-DAG) que incluyen los que comprenden un grupo dialquilglicerol o dialquilglicamida que tiene una longitud de cadena de alquilo que comprende independientemente de aproximadamente C4 a aproximadamente C40 átomos de carbono saturados o insaturados. El grupo dialquilglicerol o dialquilglicamida puede comprender adicionalmente uno o más grupos alquilo sustituido. En cualquiera de las realizaciones descritas en el presente documento, el conjugado de PEG puede seleccionarse entre PEG-dilaurilglicerol, PEG-dimiristilglicerol (PEG-DMG) (n.° de catálogo GM-020 de n Of , Tokio, Japón), PEG-dipalmitoilglicerol, PEG-diesterilglicerol, PEG-dilaurilglicamida, PEG-dimiristilglicamida, PEG-dipalmitoilglicamida y PEG-diesterilglicamida, PEG-colesterol (1-[8'-(Colest-5-en-3[beta]-oxi)carboxamido-3',6'-dioxaoctanil]carbamoil-[omega]-metil-poli(etilenglicol), PEG-DMB (3,4-Ditetradecoxilbencil-[omega]-metil-poli(etilenglicol)éter), 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina-N-[metoxi(polietilenglicol)-2000] (n.° de catálogo 880150P de Avanti Polar Lipids, Alabaster, Alabama, EE.UU.).
En una realización, el lípido de circulación prolongada es S010, S011 o S024.
En otra realización, el lípido de circulación prolongada es PEG-dimiristilglicerol (PEG-DMG).
A menos que se indique otra cosa, el término "PEG", como se usa en el presente documento, significa cualquier polímero de polietilenglicol u otro polialquileno. En una realización, PEG es un polímero de etilenglicol u óxido de etileno lineal o ramificado, opcionalmente sustituido. En una realización, PEG está sin sustituir. En una realización, el PEG está sustituido, por ejemplo, con uno o más grupos alquilo, alcoxi, acilo o arilo. En una realización, el término incluye copolímeros PEG tales como PEG-poliuretano o PEG-polipropileno (véase, por ejemplo, J. Milton Harris, Poly(ethylene glycol) chemistry: biotechnical and biomedical applications (1992)); en otra realización, el término no incluye copolímeros de PEG. En una realización, el PEG tiene un peso molecular de aproximadamente 130 a aproximadamente 50.000, en una subrealización de aproximadamente 150 a aproximadamente 30.000, en una subrealización de aproximadamente 150 a aproximadamente 20.000, en una subrealización de aproximadamente 150 a aproximadamente 15,000, en una subrealización de aproximadamente 150 a aproximadamente 10.000, en una subrealización de aproximadamente 150 a aproximadamente 6.000, en una subrealización de aproximadamente 150 a aproximadamente 5.000, en una subrealización de aproximadamente 150 a aproximadamente 4.000, en una subrealización de aproximadamente 150 a aproximadamente 3.000, en una subrealización de aproximadamente 300 a aproximadamente 3.000, en una subrealización de aproximadamente 1.000 a aproximadamente 3.000 y en una subrealización de aproximadamente 1.500 a aproximadamente 2.500.
En ciertas realizaciones, el PEG es un "PEG-2K", también denominado "PEG 2000", que tiene un peso molecular promedio de aproximadamente 2000 daltons. PEG-2K se representa en el presente documento por la siguiente fórmula (XIIa), en donde n es 45, lo que significa que el grado de polimerización promediado comprende aproximadamente 45 subunidades. Sin embargo, pueden usarse otras realizaciones de PEG conocidas en la técnica, incluyendo, por ejemplo, aquellas en las que el grado de polimerización promediado comprende aproximadamente 23 subunidades (n = 23) y/o 68 subunidades (n = 68).
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Las composiciones lipídicas de la invención también pueden incluir uno o más agentes biológicamente activos incluyendo, pero sin limitación, anticuerpos (por ejemplo, monoclonales, quiméricos, humanizados, nanocuerpos y fragmentos de los mismos, etc.), colesterol, hormonas, péptidos, proteínas, productos quimioterapéuticos y otros tipos de agentes antineoplásicos, fármacos de bajo peso molecular, vitaminas, cofactores, nucleósidos, nucleótidos, oligonucleótidos, ácidos nucleicos enzimáticos, ácidos nucleicos antisentido, oligonucleótidos formadores de triples cadenas, composiciones de ADN o ARN antisentido, composiciones quiméricas de ADN:ARN, alozimas, aptámeros, ribozima, señuelos y análogos de los mismos, plásmidos y otros tipos de vectores de expresión, y moléculas pequeñas de ácido nucleico, agentes de iARN, ácido nucleico interferente pequeño (ANip), a Rn interferente pequeño (ARNip), ARN bicatenario (ARNbc), micro-ARN (miARN) y moléculas ARN en horquilla corta (ARNhc), ácido nucleico peptídico (ANP), un ribonucleótido de ácido nucleico bloqueado (LNA), nucleótido morfolino, ácido nucleico treósico (TNA), ácido nucleico glicólico (GNA), ARNipsi (ARN interferente pequeño segmentado internamente), ARNia (ARN interferente asimétrico) y ARNip con 1, 2 o más emparejamientos incorrectos entre la cadena con sentido y antisentido para células y/o tejidos relevantes, tal como en un cultivo celular, sujeto u organismo. Las composiciones lipídicas de la invención incluyen ARNm (ARN mensajero) como agente biológicamente activo. Dichos compuestos pueden estar purificados o parcialmente purificados, pueden aparecer de forma natural o sintética y pueden estar químicamente modificados. En una realización, el agente biológicamente activo es un agente de iARN, ácido nucleico interferente pequeño (ANip), ARN interferente pequeño (ARNip), ARN bicatenario (ARNbc), micro-ARN (miARN) o una molécula a Rn en horquilla corta (ARNhc). En una realización, el agente biológicamente activo es un agente de iARN útil para mediar la interferencia de ARN (iARN). En otra realización, el agente biológicamente activo es un agente ARNip.
En la técnica están disponibles diversos métodos para cargar agentes biológicamente activos en composiciones lipídicas, tales como liposomas y nanopartículas lipídicas, incluyendo métodos de carga pasivos y activos. El método exacto empleado puede elegirse basándose en múltiples factores que incluyen, pero sin limitación, por ejemplo, el agente biológicamente activo a cargar, el método de almacenamiento a usar una vez cargado, el tamaño de la partícula resultante y la posología contemplada. Los métodos incluyen, por ejemplo, la mezcla mecánica del fármaco y los lípidos en el momento en que se forman o reconstituyen los liposomas, disolver todos los componentes en un disolvente orgánico y concentrarlos en una película seca, formar un pH o gradiente iónico para atraer el agente activo hacia el interior del liposoma, crear un potencial transmembrana y carga mediada por ionóforos. Véase, por ejemplo, la publicación PCT N.° WO 95/08986, la Pat. de EE.UU. N.° 5.837.282, la Pat. de EE.UU. N.° 5.837.282 y la Pat. de EE.UU. N.° 7.811.602.
Por "nanopartícula lipídica" se entiende una partícula que comprende una pluralidad de (es decir, más de una) moléculas lipídicas asociadas físicamente entre sí por fuerzas intermoleculares. Las nanopartículas lipídicas pueden ser, por ejemplo, microesferas (incluyendo vesículas unilamelares y multilamelares, por ejemplo, liposomas), una fase dispersada en una emulsión, micelas o una fase interna en una suspensión.
Las nanopartículas lipídicas tienen un tamaño de aproximadamente 1 a aproximadamente 2.500 nm, de aproximadamente 1 a aproximadamente 1.500 nm, de aproximadamente 1 a aproximadamente 1.000 nm, en una subrealización de aproximadamente 50 a aproximadamente 600 nm, en una subrealización de aproximadamente 50 a aproximadamente 400 nm, en una subrealización de aproximadamente 50 a aproximadamente 250 nm, y en una subrealización de aproximadamente 50 a aproximadamente 150 nm. A menos que se indique lo contrario, todos los tamaños a los que se hace referencia en el presente documento son tamaños promedio (diámetros) de la nanopartícula completamente formada, medidos por dispersión dinámica de luz en un Malvern Zetasizer. La muestra de nanopartículas se diluye en solución salina tamponada con fosfato (PBS) para que el índice de recuento sea de aproximadamente 200 - 400 kcts. Los datos se presentan como un promedio ponderado de la medición de intensidad.
Una realización de la presente invención proporciona la composición lipídica que comprende adicionalmente otro componente lipídico. Otra realización proporciona la composición lipídica que comprende adicionalmente un lípido auxiliar, por ejemplo, colesterol. Otra realización proporciona la composición lipídica que comprende adicionalmente un lípido auxiliar, por ejemplo, colesterol, y un lípido neutro, por ejemplo DSPC. Otra realización de la presente invención proporciona la composición lipídica que comprende adicionalmente un lípido auxiliar, por ejemplo, colesterol, un lípido neutro, por ejemplo, DSPC, y un lípido de circulación prolongada, por ejemplo PEG-DMG, S010, S011 o S024. Otra realización de la presente invención proporciona la composición lipídica que comprende adicionalmente un lípido auxiliar, por ejemplo colesterol, un lípido neutro, por ejemplo DSPC, un lípido de circulación prolongada, por ejemplo PEG-DMG, S010, S011 o S024, y un agente biológicamente activo, por ejemplo un ARNip. Otra realización de la presente invención proporciona la composición lipídica que comprende adicionalmente un lípido auxiliar, por ejemplo colesterol, un lípido neutro, por ejemplo DSPC, un lípido de circulación prolongada, por ejemplo PEG-DMG, S010, S011 o S024, y un agente biológicamente activo, por ejemplo un ARNm. Otra realización de la presente invención proporciona la composición lipídica en forma de una nanopartícula lipídica que comprende adicionalmente un lípido auxiliar, por ejemplo colesterol, un lípido neutro, por ejemplo DSPC, y un lípido de circulación prolongada, por ejemplo PEG-DMG, S010, S011 o S024, y un agente biológicamente activo, por ejemplo un ARNip. Otra realización de la presente invención proporciona la composición lipídica en forma de una nanopartícula lipídica que comprende adicionalmente un lípido auxiliar, por ejemplo colesterol, un lípido neutro, por ejemplo DSPC, y un lípido de circulación prolongada, por ejemplo PEG-DMG, S010, S011 o S024, y un agente biológicamente activo, por ejemplo un ARNm.
Las realizaciones de la presente invención también proporcionan composiciones lipídicas descritas según las respectivas relaciones molares de los lípidos componentes en la formulación, en donde una barra ("/") indica los respectivos componentes, como se proporciona en el presente documento.
Otra realización de la presente invención es una composición lipídica que comprende ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) o bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo) y un lípido auxiliar, por ejemplo colesterol, en una proporción molar lipídica de 55­ 40 ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) o bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo) / 55-40 lípido auxiliar. Otra realización proporciona una composición lipídica que comprende ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) o bis(octadeca-9.12- dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo), un lípido auxiliar, por ejemplo colesterol, y un lípido neutro, por ejemplo DPSC en una proporción molar lipídica de 55-40 ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) o bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo) / 55-40 lípido auxiliar /15-5 lípido neutro. Otra realización proporciona una composición lipídica que comprende ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) o bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo), un lípido auxiliar, por ejemplo colesterol, un lípido neutro, por ejemplo DSPC, y un lípido de circulación prolongada, por ejemplo PEG-DMG, s 010, S011 o S024 en una proporción molar lipídica de 55-40 ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) o bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo) / 55-40 lípido auxiliar / 15-5 lípido neutro/ 10-1 lípido de circulación prolongada.
Otra realización de la presente invención es una composición lipídica que comprende ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) o bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo) y un lípido auxiliar, por ejemplo colesterol, en una proporción molar lipídica de 50­ 40 ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) o bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo) / 50-40 lípido auxiliar. Otra realización proporciona una composición lipídica que comprende ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) o bis(octadeca-9.12- dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo), un lípido auxiliar, por ejemplo colesterol, y un lípido neutro, por ejemplo DPSC en una proporción molar lipídica de 50-40 ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) o bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo) / 50-40 lípido auxiliar / 15-5 lípido neutro. Otra realización proporciona una composición lipídica que comprende ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) o bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo), un lípido auxiliar, por ejemplo colesterol, un lípido neutro, por ejemplo DSPC, un lípido de circulación prolongada, por ejemplo PEG-DMG, S010, S011 o S024 en una proporción molar lipídica de 50-40 ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) o bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo) / 50-40 lípido auxiliar / 15-5 lípido neutro / 5-1 lípido de circulación prolongada.
Otra realización de la presente invención es una composición lipídica que comprende ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) o bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo) y un lípido auxiliar, por ejemplo colesterol, en una proporción molar lipídica de 47­ 43 ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) o bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo) / 47-43 lípido auxiliar. Otra realización proporciona una composición lipídica que comprende ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) o bis(octadeca-9.12- dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo), un lípido auxiliar, por ejemplo colesterol, y un lípido neutro, por ejemplo DPSC en una proporción molar lipídica de 47-43 ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) o bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo) / 47-43 lípido auxiliar / 12-7 lípido neutro. Otra realización proporciona una composición lipídica que comprende ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) o bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo), un lípido auxiliar, por ejemplo colesterol, un lípido neutro, por ejemplo DSPC, un lípido de circulación prolongada, por ejemplo PEG-DMG, S010, S011 o S024 en una proporción molar lipídica de 47-43 ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) o bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo) / 47-43 lípido auxiliar / 12-7 lípido neutro / 4-1 lípido de circulación prolongada.
Otra realización de la presente invención es una composición lipídica que comprende ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) o bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo) y un lípido auxiliar, por ejemplo colesterol, en una proporción molar lipídica de aproximadamente 45 ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) o bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo) / aproximadamente 44 lípido auxiliar.
Otra realización proporciona una composición lipídica que comprende ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) o bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'ZH(5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo), un lípido auxiliar, por ejemplo colesterol, y un lípido neutro, por ejemplo DPSC en una proporción molar lipídica de aproximadamente 45 ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) o bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo) / aproximadamente 44 lípido auxiliar / aproximadamente 9 lípido neutro. Otra realización proporciona una composición lipídica que comprende ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) o bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo), un lípido auxiliar, por ejemplo colesterol, un lípido neutro, por ejemplo DSPC, un lípido de circulación prolongada, por ejemplo PEG-DMG, S010, S011 o S024 en una proporción molar lipídica de aproximadamente 45 ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8.1- diílo) o bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'ZH(5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4.1- diílo) / aproximadamente 44 lípido auxiliar / aproximadamente 9 lípido neutro / aproximadamente 2 lípido de circulación prolongada, por ejemplo PEG-d Mg , S010, S011 o S024.
Se dan posibles compuestos de fórmula (I) para usar en las composiciones lipídicas anteriores en los Ejemplos 38, 40, 41, 42, 43, 44, 47, 52, 62, 63, 92, 93, 94 y 112. Las composiciones lipídicas de la invención comprenden el compuesto dado en el Ejemplo 38 o 52. Son agentes biológicamente activos para su uso en las composiciones lipídicas anteriores los ARNip. Las composiciones lipídicas de la invención comprenden ARNm.
Las composiciones lipídicas de la presente invención pueden optimizarse adicionalmente por un experto en la materia combinando lípidos catiónicos con el intervalo de pKa deseado, lípidos de circulación prolongada, lípidos auxiliares y lípidos neutros en formulaciones, incluyendo, por ejemplo, formulaciones de liposomas, formulaciones de nanopartículas lipídicas (LNP) y similares, para administrar a células y tejidos específicos in vivo. En una realización, la optimización adicional se obtiene ajustando la proporción molar lipídica entre los diversos tipos de lípidos. En una realización, la optimización adicional se obtiene ajustando uno o más de: el tamaño de partículas deseado, la proporción N/P, los métodos de formulación y/o la posología (por ejemplo, número de dosis administradas a lo largo del tiempo, dosis real en mg/kg, tiempo de las dosis, combinaciones con otros agentes terapéuticos, etc.). Las diversas técnicas de optimización conocidas por los expertos en la materia que pertenecen a las realizaciones enumeradas anteriormente se consideran parte de esta invención.
Métodos generales para preparar nanopartículas lipídicas
Pueden emplearse los siguientes métodos para preparar nanopartículas lipídicas de la invención. Para lograr una reducción del tamaño y/o un aumento de la homogeneidad del tamaño en las partículas, el experto en la materia puede emplear las etapas del método que se detallan a continuación, experimentando con diferentes combinaciones. Además, el experto en la materia podría emplear sonicación, filtración u otras técnicas de dimensionamiento que se usan en formulaciones liposomales.
El proceso para preparar una composición de la invención típicamente comprende proporcionar una solución acuosa, tal como tampón citrato, que comprende un agente biológicamente activo en un primer reservorio, proporcionar un segundo reservorio que comprende una solución orgánica, tal como un alcohol orgánico, por ejemplo, etanol, del lípido o lípidos, y después mezclar la solución acuosa con la solución lipídica orgánica. El primer reservorio está opcionalmente en comunicación fluida con el segundo reservorio. La etapa de mezclado se sigue opcionalmente de una etapa de incubación, una etapa de filtración y una etapa de dilución y/o concentración. La etapa de incubación comprende dejar reposar la solución de la etapa de mezclado en un recipiente durante aproximadamente 0 a aproximadamente 100 horas (preferentemente de aproximadamente 0 a aproximadamente 24 horas) aproximadamente a la temperatura ambiente y opcionalmente protegida de la luz. La etapa de incubación puede estar seguida de una etapa de dilución. La etapa de dilución puede implicar la dilución con tampón acuoso (por ejemplo, tampón citrato) por ejemplo, usando un aparato de bombeo (por ejemplo, un abomba peristáltica). La etapa de filtración es ultrafiltración. La ultrafiltración comprende la concentración de la solución diluida seguida de diafiltración, por ejemplo, usando un sistema de bombeo adecuado (por ejemplo, un aparato de bombeo tal como una bomba peristáltica o equivalente) junto con una membrana de ultrafiltración adecuada (por ejemplo, cartuchos de fibra hueca GE o equivalente).
La etapa de mezclado puede proporcionar una sola fase transparente.
Después de la etapa de mezclado, el disolvente orgánico puede eliminarse para proporcionar una suspensión de partículas, en donde el agente biológicamente activo está encapsulado por el lípido o lípidos, por ejemplo, en una bicapa lipídica.
La selección de un disolvente orgánico implicará típicamente la consideración de la polaridad del disolvente y la facilidad con la que el disolvente pueda eliminarse en las últimas etapas de la formación de partículas. El disolvente orgánico, que también se emplea como agente solubilizante, está preferentemente en una cantidad suficiente para proporcionar una mezcla transparente de una sola fase de agentes biológicamente activos y lípidos. El disolvente orgánico puede seleccionarse entre uno o más (por ejemplo, dos) de cloroformo, diclorometano, éter dietílico, ciclohexano, ciclopentano, benceno, tolueno, metanol y otros alcoholes alifáticos (por ejemplo, de C1 a Ce) tales como etanol, propanol, isopropanol, butanol, terc-butanol, iso-butanol, pentanol y hexanol.
La etapa de mezclado puede realizarse por cualquiera de diversos métodos, por ejemplo, por medios mecánicos tales como un mezclador de vórtice.
Los métodos empleados para eliminar el disolvente orgánico implicarán típicamente diafiltración o evaporación a presiones reducidas o el soplado de una corriente de gas inerte (por ejemplo, nitrógeno o argón) a través de la mezcla.
El método puede comprender adicionalmente añadir policationes no lipídicos que son útiles para efectuar la transformación de células usando las presentes composiciones. Los ejemplos de policationes no lipídicos adecuados incluyen, pero sin limitación, bromuro de hexadimetrina (comercializado bajo el nombre comercial POLYBRENE(R), de Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wis., EE.UU.) u otras sales de hexadimetrina. Otros policationes adecuados incluyen, por ejemplo, sales de poli-L-ornitina, poli-L-arginina, poli-L-lisina, poli-D-lisina, polialilamina y polietilenimina.
La formación de las nanopartículas lipídicas puede realizarse en un sistema monofase (por ejemplo, una monofase de Bligh y Dyer o una mezcla similar de disolventes acuosos y orgánicos) o en un sistema de dos fases con un mezclado adecuado.
La nanopartícula lipídica puede formarse en un sistema monofase o bifase. En un sistema monofase, cada uno del lípido o lípidos catiónicos y el agente biológicamente activo se disuelven en un volumen de la mezcla monofase. La combinación de las dos soluciones proporciona una mezcla individual en la que se forman los complejos. En un sistema bifase, los lípidos catiónicos se unen al agente biológicamente activo (que está presente en la fase acuosa) y lo "arrastran" hacia la fase orgánica.
Las nanopartículas lipídicas pueden prepararse por un método que comprende: (a) poner en contacto el agente biológicamente activo con una solución que comprende lípidos no catiónicos y un detergente para formar una mezcla compuesto-lípido; (b) poner en contacto los lípidos catiónicos con la mezcla compuesto-lípido para neutralizar una parte de la carga negativa del agente biológicamente activo y formar una mezcla de carga neutralizada de agente biológicamente activo y lípidos; y (c) eliminar el detergente de la mezcla de carga neutralizada.
La solución de lípidos neutros y detergente puede ser una solución acuosa. La puesta en contacto del agente biológicamente activo con la solución de lípidos neutros y detergente se realiza típicamente mezclando juntos una primera solución del agente biológicamente activo y una segunda solución de los lípidos y detergente. Preferentemente, la solución de agente biológicamente activo también es una solución detergente. La cantidad de lípido neutro que se usa en el presente método se determina típicamente basándose en la cantidad de lípido catiónico usada, y típicamente es de aproximadamente 0,2 a 5 veces la cantidad de lípido catiónico, preferentemente de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 2 veces la cantidad de lípido catiónico usada.
La mezcla de agente biológicamente activo-lípido formada de esta manera se pone en contacto con lípidos catiónicos para neutralizar una parte de la carga negativa que está asociada con la molécula de interés (u otros materiales polianiónicos) presente. La cantidad de lípidos catiónicos usada es típicamente la cantidad suficiente para neutralizar el menos el 50 % de la carga negativa del agente biológicamente activo. Preferentemente, la carga negativa se neutralizará al menos al 70 %, más preferentemente se neutralizará al menos al 90 %.
Los métodos empleados para eliminar el detergente típicamente implican diálisis. Cuando están presentes disolventes orgánicos, la eliminación se realiza típicamente por diafiltración o evaporación a presiones reducidas o soplando una corriente de gas inerte (por ejemplo, nitrógeno o argón) a través de la mezcla.
En el presente documento se divulga un aparato para preparar una composición de la presente invención. El aparato incluye típicamente un primer reservorio para contener una solución acuosa que comprende un agente biológicamente activo y un segundo reservorio para contener una solución lipídica orgánica. El aparato también incluye típicamente un mecanismo de bombeo configurado para bombear las soluciones acuosa y lipídica orgánica a una región de mezclado o cámara de mezclado a caudales sustancialmente iguales. La región de mezclado o cámara de mezclado puede comprender un acoplamiento en T o equivalente, que permite que las corrientes de fluido acuoso y orgánico se combinen al entrar en el conector en T y las soluciones acuosa y orgánica combinadas resultantes salgan del conector en T hacia un reservorio de recogida o equivalente.
Métodos para suministrar agentes biológicamente activos y el tratamiento de la enfermedad
Los lípidos catiónicos de fórmula (I) y composiciones lipídicas de los mismos son útiles en composiciones farmacéuticas o formulaciones usadas para el suministro de agentes biológicamente activos. Las formulaciones que contienen lípidos catiónicos de fórmula (I) o composiciones lipídicas de los mismos puede estar en diversas formas, incluyendo, pero sin limitación, agentes de suministro de formación de partículas incluyendo micropartículas, nanopartículas y agentes de transfección que son útiles para suministrar diversas moléculas a células. Las formulaciones específicas son eficaces en la transfección o el suministro de agentes biológicamente activos, tales como anticuerpos (p. ej., monoclonales, quiméricos, humanizados, nanocuerpos y fragmentos de los mismos, etc.), colesterol, hormonas, péptidos, proteínas, productos quimioterapéuticos y otros tipos de agentes antineoplásicos, fármacos de bajo peso molecular, vitaminas, cofactores, nucleósidos, nucleótidos, oligonucleótidos, ácidos nucleicos enzimáticos, ácidos nucleicos antisentido, oligonucleótidos formadores de triples cadenas, composiciones de ADN o ARN antisentido, composiciones quiméricas de ADN:ARN, alozimas, aptámeros, ribozima, señuelos y análogos de los mismos, plásmidos y otros tipos de vectores de expresión, y moléculas pequeñas de ácido nucleico, agentes de iARN, ácido nucleico interferente pequeño (ANip), ARN interferente pequeño (Ar Níp), ARN bicatenario (ARNbc), micro-ARN (miARN) y moléculas ARN en horquilla corta (ARNhc), ácido nucleico peptídico (ANP), un ribonucleótido de ácido nucleico bloqueado (LNA), nucleótido morfolino, ácido nucleico treósico (TNA), ácido nucleico glicólico (GNA), ARNipsi (ARN interferente pequeño segmentado internamente), ARNia (ARN interferente asimétrico) y ARNip con 1, 2 o más emparejamientos incorrectos entre la cadena con sentido y antisentido para células y/o tejidos relevantes, tal como en un cultivo celular, sujeto u organismo. La lista anterior de agentes biológicamente activos es solo ilustrativa y no se pretende que sea limitante. Por ejemplo, las formulaciones lipídicas también son eficaces en la transfección o el suministro de agentes de ARNm a una célula. Dichos compuestos pueden estar purificados o parcialmente purificados, pueden aparecer de forma natural o sintética y pueden estar químicamente modificados.
Dichas formulaciones que contienen agentes biológicamente activos son útiles, p. ej., para proporcionar composiciones para prevenir, inhibir o tratar enfermedades, afecciones o rasgos en una célula, sujeto u organismo. Las enfermedades, afecciones o rasgos incluyen, pero sin limitación, enfermedades proliferativas, incluyendo cáncer, enfermedad inflamatoria, rechazo de trasplante y/o tejido, enfermedades o afecciones autoinmunitarias, enfermedad relacionada con la edad, enfermedad neurológica o neurodegenerativa, enfermedad respiratoria, enfermedad cardiovascular, enfermedad ocular, enfermedad metabólica, enfermedad dermatológica, enfermedad auditiva, una enfermedad hepática, una enfermedad de riñón o renal, etc.
La cantidad de agente activo administrada por dosis es una cantidad por encima de la dosis terapéutica mínima pero por debajo de una dosis tóxica. La cantidad real por dosis puede ser determinada por un médico dependiendo de varios factores, tales como el historial médico del paciente, el uso de otras terapias, el agente biológicamente activo que se va a proporcionar y la naturaleza de la enfermedad. La cantidad de agente biológicamente activo administrada puede ajustarse a lo largo del tratamiento, dependiendo de la respuesta del paciente al tratamiento y la presencia o gravedad de cualquier efecto secundario asociado con el tratamiento. Se conocen las dosis y el tratamiento ilustrativos para compuestos que han sido aprobados por una agencia reguladora y están disponibles para los expertos en la técnica. Véase, por ejemplo, Physician's Desk Reference, 64a ed., Physician's Desk Reference Inc. (2010), Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Filadelfia, Pa. (1985), y Remington The Science and Practice of Pharmacy, 21a ed., Lippincott Williams & Williams Publishers (2005).
Como se describe en el presente documento, puede administrarse una única dosis de un agente biológicamente activo a un paciente que lo necesite. Como se describe en el presente documento, pueden administrarse múltiples dosis, en donde las múltiples dosis pueden administrarse simultáneamente, secuencialmente o de forma alternante. Como se describe en el presente documento, la misma formulación puede administrarse en múltiples dosis. Como se describe en el presente documento, las formulaciones pueden diferir en múltiples dosis. Como se describe en el presente documento, las dosis pueden administrarse una vez al día o durante uno, dos, tres, cuatro o más días consecutivos. Como se describe en el presente documento, las dosis pueden administrarse una vez a la semana. Como se describe en el presente documento, las dosis pueden administrarse cada dos semanas. Como se describe en el presente documento, los pacientes pueden recibir al menos dos ciclos de un régimen de tratamiento, y potencialmente más, dependiendo de la respuesta del paciente al tratamiento. En regímenes de agentes individuales, los ciclos totales de tratamiento son determinados por el paciente y el médico en función de las respuestas y la toxicidad observadas. Los regímenes de dosificación anteriores deben considerarse ejemplos no limitantes. Se contemplan otras pautas posológicas como dentro del alcance de la divulgación, y dependen del efecto terapéutico deseado.
La divulgación también proporciona un método para el tratamiento de una enfermedad o afección que comprende la etapa de administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición lipídica de la invención a un paciente que necesite tratamiento de la misma. Como se describe en el presente documento, la enfermedad o afección puede ser tratable mediante la administración de un agente de ARNip. Como se describe en el presente documento, la enfermedad o afección puede ser tratable mediante la administración de un agente de ARNm.
La divulgación también proporciona el uso de una composición lipídica de la invención en el tratamiento de una enfermedad o afección en un paciente. Como se describe en el presente documento, la enfermedad o afección puede ser tratable mediante la administración de un agente de ARNip. Como se describe en el presente documento, la enfermedad o afección puede ser tratable mediante la administración de un agente de ARNm.
La cantidad total de lípido en la composición que se administra puede ser, como se describe en el presente documento, de aproximadamente 5 a aproximadamente 30 mg de lípido por mg de agente biológicamente activo (p. ej., ARNip), de aproximadamente 5 a aproximadamente 25 mg de lípido por mg de agente biológicamente activo (p. ej., ARNip), de aproximadamente 7 a aproximadamente 25 mg de lípido por mg de agente biológicamente activo (p. ej., ARNip) o de aproximadamente 7 a aproximadamente 15 mg de lípido por mg de agente biológicamente activo (p. ej., ARNip).
Como se describe en el presente documento, la cantidad total de lípido en la composición que se administra puede ser de aproximadamente 5 a aproximadamente 30 mg de lípido por mg de agente biológicamente activo (p. ej., ARNm), de aproximadamente 5 a aproximadamente 25 mg de lípido por mg de agente biológicamente activo (p. ej., ARNm), de aproximadamente 7 a aproximadamente 25 mg de lípido por mg de agente biológicamente activo (p. ej., ARNm) o de aproximadamente 7 a aproximadamente 15 mg de lípido por mg de agente biológicamente activo (p. ej., ARNm).
Como se usa en el presente documento, el "tratamiento" incluye tratamiento de mejora, curativo y profiláctico. Como se usa en el presente documento, un "paciente" significa un animal, preferentemente un mamífero, preferentemente un ser humano, que necesite tratamiento.
La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a la cantidad del compuesto de la divulgación y el agente biológicamente activo (p. ej., el compuesto terapéutico) necesaria para tratar o aliviar una enfermedad o afección diana.
La expresión "cantidad inmunológicamente eficaz" se refiere a la cantidad del compuesto de la divulgación y de ARN que codifica un inmunógeno necesario para inducir una respuesta inmunitaria que reconozca el inmunógeno (p. ej., en el contexto de un patógeno). El término "inmunógeno" se refiere a cualquier sustancia u organismo que provoque una respuesta inmunitaria cuando se introduzca en el cuerpo. La expresión "ARN que codifica un inmunógeno" se refiere a un polinucleótido, tal como un ARN mensajero o un replicón, que una célula u organismo es capaz de traducir a un polipéptido según la secuencia codónica de dicho ARN.
Por "enfermedad proliferativa", como se usa en el presente documento, se entiende cualquier enfermedad, afección, rasgo, genotipo o fenotipo caracterizado por un crecimiento o replicación celular desregulado como se conoce en la técnica. Como se describe en el presente documento, la enfermedad proliferativa puede ser cáncer. Como se describe en el presente documento, la enfermedad proliferativa puede ser un tumor. Como se describe en el presente documento, la enfermedad proliferativa puede incluir, pero sin limitación, por ejemplo, tumores líquidos tales como, por ejemplo, leucemias, por ejemplo, leucemia mielógena aguda (LMA), leucemia mielógena crónica (LMC), leucemia linfocítica aguda (LLA), mieloma múltiple y leucemia linfocítica crónica; y tumores sólidos, por ejemplo, cánceres relacionados con el SIDA tales como sarcoma de Kaposi; cánceres de mama; cánceres de hueso; cánceres de cerebro; cánceres de la cabeza y el cuello, linfoma no hodgkiniano, adenoma, carcinoma de células escamosas, carcinoma laríngeo, cánceres de la vesícula biliar y los conductos biliares, cánceres de la retina, cánceres del esófago, cánceres gastrointestinales, cáncer ovárico, cáncer uterino, cáncer de tiroides, cáncer testicular, cáncer endometrial, melanoma, cáncer colorrectal, cáncer de pulmón, cáncer de vejiga, cáncer de próstata, cáncer de pulmón (incluyendo carcinoma de pulmón no microcítico), cáncer pancreático, sarcomas, tumor de Wilms, cáncer del cuello uterino, cáncer de cabeza y cuello, cánceres de piel, carcinoma nasofaríngeo, liposarcoma, carcinoma epitelial, carcinoma de células renales, adenocarcinoma de la vesícula biliar, sarcoma endometrial, cánceres multirresistentes. Como se describe en el presente documento, la enfermedad proliferativa puede incluir neovascularización asociada con la angiogénesis tumoral, degeneración macular (por ejemplo, degeneración macular senil húmeda/seca), neovascularización corneal, retinopatía diabética, glaucoma neovascular, degeneración miópica. Como se describe en el presente documento, la enfermedad proliferativa puede incluir reestenosis y enfermedad de riñón poliquístico.
Por "enfermedad autoinmunitaria", como se usa en el presente documento, se entiende cualquier enfermedad, afección, rasgo, genotipo o fenotipo caracterizado por autoinmunidad como se conoce en la técnica. Las enfermedades autoinmunitarias incluyen, pero sin limitación, por ejemplo, esclerosis múltiple, diabetes mellitus, lupus, esclerodermia, fibromialgia, rechazo de trasplantes (por ejemplo, prevención del rechazo de aloinjertos), anemia perniciosa, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, dermatomiositis, miastenia grave, lupus eritematoso, esclerosis múltiple y enfermedad de Graves.
Por "enfermedad infecciosa" se entiende cualquier enfermedad, trastorno o afección asociado con un agente infeccioso, tal como un virus, bacteria, hongo, prion o parásito. La invención se puede usar para inmunizar contra patógenos que provocan enfermedad infecciosa. Se proporcionan ejemplos de dichos patógenos a continuación.
Por "enfermedad neurológica" se entiende cualquier enfermedad, trastorno o afección que afecte al sistema nervioso central o periférico. Las enfermedades neurológicas incluyen, pero sin limitación, enfermedades o trastornos del sistema nervioso central o periférico incluyendo, por ejemplo, enfermedad de Alzheimer, aneurisma, lesión cerebral, síndrome del túnel carpiano, aneurisma cerebral, dolor crónico, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob, epilepsia, enfermedad de Huntington, meningitis, trastornos de convulsiones y otras enfermedades, trastornos y síndromes neurológicos.
Por "enfermedad respiratoria" se entiende cualquier enfermedad o afección que afecte a las vías respiratorias. Las enfermedades respiratorias incluyen, pero sin limitación, por ejemplo, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), rinitis alérgica, sinusitis, alergias, respiración dificultosa, síndrome de dificultad respiratoria, fibrosis quística, hipertensión pulmonar o vasoconstricción y enfisema.
Por "enfermedad cardiovascular" se entiende cualquier enfermedad o afección que afecte al corazón y a la vasculatura. Las enfermedades cardiovasculares incluyen, pero sin limitación, por ejemplo, cardiopatía coronaria (CHD), enfermedad cerebrovascular (CVD), estenosis aórtica, enfermedad vascular periférica, infarto de miocardio (ataque al corazón), arritmia e insuficiencia cardíaca congestiva.
Por "enfermedad ocular", como se usa en el presente documento, se entiende cualquier enfermedad, afección, rasgo, genotipo o fenotipo del ojo y las estructuras relacionadas. Las enfermedades oculares incluyen, pero sin limitación, por ejemplo, edema macular quistoide, retinopatía diabética, degeneración reticular, oclusión de las venas retinianas, oclusión de las arterias retinianas, degeneración macular (por ejemplo, degeneración macular senil, tal como DMS húmeda o DMS seca), toxoplasmosis, retinitis pigmentosa, laceración de la conjuntiva, laceración corneal, glaucoma y similares.
Por "enfermedad metabólica" se entiende cualquier enfermedad o afección que afecte a las vías metabólicas. La enfermedad metabólica puede dar lugar a un proceso metabólico anómalo, ya sea congénito debido a anomalía enzimática heredada (metabolopatías innatas) o adquirido debido a una enfermedad de un órgano endocrino o insuficiencia de un órgano metabólicamente importante tal como el hígado. Como se describe en el presente documento, la enfermedad metabólica puede incluir obesidad, resistencia a la insulina y diabetes (por ejemplo, diabetes de tipo I y/o tipo II).
Por "enfermedad dermatológica" de entiende cualquier enfermedad o afección de la piel, dermis o cualquier subestructura en las mismas, tal como un pelo, un folículo, etc. Las enfermedades, trastornos, afecciones y rasgos dermatológicos pueden incluir psoriasis, dermatitis ectópica, cánceres cutáneos tales como melanoma y carcinoma de células basales, alopecia, eliminación del pelo y alteraciones de la pigmentación.
Por "enfermedad auditiva" se entiende cualquier enfermedad o afección del sistema auditivo, incluyendo el oído, tal como el oído interno, oído medio, oído externo, nervio auditivo y cualquier subestructura en los mismos. Las enfermedades, trastornos, afecciones y rasgos auditivos pueden incluir pérdida de audición, sordera, acúfenos, vértigo, equilibrio y trastornos del movimiento.
La expresión "ácido nucleico interferente pequeño" (ANip), como se usa en el presente documento, se refiere a cualquier molécula de ácido nucleico capaz de inhibir o regular negativamente la expresión génica o replicación vírica mediando en la interferencia de ARN (íaRn ) o el silenciamiento génico de una manera específica de secuencia. Incluye ARN interferente pequeño (ARNip), microARN (miARN), oligonucleótidos interferentes pequeños y moléculas de ácido nucleico interferente pequeño modificadas químicamente. Los ARNip son responsables de la interferencia de ARN, el proceso de silenciamiento génico postranscripcional específico de secuencia en animales y plantas. Se generan ARNip mediante escisión por ribonucleasa III de a Rn bicatenario (ARNbc) más largo que son homólogos de, o específicos para, la diana génica silenciada.
La expresión "interferencia de ARN" (iARN) es una técnica de silenciamiento génico dirigida, postranscripcional, que usa un agente de iARN para degradar el ARN mensajero (ARNm) que contiene una secuencia que es igual o muy similar al agente de iARN. Véase: Zamore y Haley, 2005, Science, 309, 1519-1524; Zamore et al., 2000, Cell, 101,25-33; Elbashir et al., 2001, Nature, 411,494-498; y Kreutzer et al., publicación PCT WO 00/44895; Fire, publicación PCT WO 99/32619; Mello y Fire, publicación PCT WO 01/29058; y similares.
Como se usa en el presente documento, iARN es equivalente a otros términos usados para describir la interferencia de ARN específica de secuencia, tal como el silenciamiento génico postranscripción, la inhibición de la traducción, la inhibición de la transcripción o la epigenética. Por ejemplo, las formulaciones que contienen lípidos de la invención pueden usarse junto con moléculas de ANip para silenciar epigenéticamente genes en el nivel postranscripcional y/o en el nivel pretranscripcional. En un ejemplo no limitante, la modulación de la expresión génica por moléculas de ANip puede resultar de la escisión mediada por ANip (ya sea ARN codificante o no codificante) mediante RISC o, como alternativa, inhibición de la traducción como se conoce en la técnica. Como se describe en el presente documento, la modulación de la expresión génica por ANip puede resultar de la inhibición de la transcripción tal como se indica, por ejemplo, en Janowski et al., 2005, Nature Chemical Biology, 1, 216-222.
La expresión "inhibidor de iARN" es cualquier molécula que puede modular negativamente (por ejemplo, reducir o inhibir) la función o actividad de interferencia de ARN en una célula o paciente. Un inhibidor de iARN puede regular negativamente, reducir o inhibir iARN (por ejemplo, escisión mediada por íaRn de un polinucleótido diana, inhibición de la traducción o silenciamiento de la transcripción) mediante interacción con o interferencia con la función de cualquier componente de la vía de iARN, incluyendo componentes proteicos tales como RISC o componentes de ácido nucleico tales como miARN o ARNip. Un inhibidor de iARN puede ser una molécula de ANip, una molécula antisentido, un aptámero o una molécula pequeña que interactúa con o interfiere con la función de RISC, un miARN o un ARNip o cualquier otro componente de la vía de iARN en una célula o paciente. Al inhibir la iARN (por ejemplo, escisión mediada por iARN de un polinucleótido diana, inhibición de la traducción o silenciamiento de la transcripción), se puede usar un inhibidor de iARN para modular (por ejemplo, regular positivamente o regular negativamente) la expresión de un gen diana. Como se describe en el presente documento, un inhibidor de ARN puede usarse para regular positivamente la expresión génica al interferir con (por ejemplo, reducir o prevenir) la regulación negativa endógena o inhibición de la expresión génica a través de inhibición de la traducción, silenciamiento de la transcripción o escisión mediada por RISC de un polinucleótido (por ejemplo, ARNm). Al interferir con mecanismos de represión, silenciamiento o inhibición endógenos de la expresión génica, los inhibidores de iARN de la divulgación pueden usarse por lo tanto para regular positivamente la expresión génica para el tratamiento de enfermedades o afecciones resultantes de una pérdida de función. La expresión "inhibidor de iARN" se usa indistintamente con el término "ANip" en diversas realizaciones del presente documento.
La expresión "ácido ribonucleico mensajero" (ARN mensajero, ARNm) se refiere a una molécula de ácido ribonucleico (ARN) que media en la transferencia de información genética a ribosomas en el citoplasma, donde actúa como un molde para la síntesis de proteínas. Se sintetiza a partir de un molde de ADN durante el proceso de transcripción. Véase, The American Heritage® Dictionary of the English Language, cuarta edición (actualizado en 2009). Houghton Mifflin Company.
Un "ácido ribonucleico" (ARN) es un polímero de nucleótidos ligados por un enlace fosfodiéster, donde cada nucleótido contiene ribosa o una modificación de la misma como el componente de azúcar. Cada nucleótido contiene una adenina (A), una guanina (G), una citosina (C), un uracilo (U) o una modificación de los mismos como base. La información genética en una molécula de ARNm está codificada en la secuencia de las bases nucleotídicas de la molécula ARNm, que están dispuestas en codones que consisten en tres bases nucleotídicas cada uno. Cada codón codifica un aminoácido específico del polipéptido, excepto para los codones de parada, que terminan la traducción (síntesis de proteínas). En una célula viva, el ARNm se transporta a un ribosoma, el sitio de síntesis de proteínas, donde proporciona la información genética para la síntesis de proteínas (traducción). Para una descripción más completa, véase, Alberts B et al. (2007) Molecular Biology of the Cell, quinta edición, Garly Science.
En eucariotas, el ARNm se transcribe in vivo en los cromosomas mediante la enzima celular ARN polimerasa. Durante o después de la transcripción in vivo, se añade una caperuza 5' (también denominada caperuza de ARN, caperuza de 7-metilguanosina de ARN o caperuza de m7G de ARN) in vivo al extremo 5' del ARNm. La caperuza 5' es el resto de 7-metilguanosina terminal que está ligado a través de un enlace 5'-5'-trifosfato al primer nucleótido transcrito. Además, la mayoría de moléculas de ARNm eucariotas tienen un resto de poliadenililo ("cola de poli(A)") en el extremo 3' de la molécula de ARNm. In vivo, la célula eucariota añade la cola de poli(A) después de la transcripción, con frecuencia a una longitud de aproximadamente 250 restos de adenosina. Por tanto, un ARNm eucariota maduro habitual tiene una estructura que comienza en el extremo 5' con un nucleótido de caperuza de ARNm seguido de una región 5' no traducida (5'UTR) de nucleótidos, después una fase abierta de lectura que comienza con un codón de inicio que es un triplete AUG de bases nucleotídicas, que es la secuencia codificante de una proteína, y que termina con un codón de parada que puede ser un triplete UAA, UAG o UGA de bases nucleotídicas, después una región 3' no traducida (3'UTR) de nucleótidos y que termina con una cola de poliadenosina. Aunque los elementos del ARNm eucariota maduro habitual se producen de forma natural en una célula eucariota in vivo, los mismos elementos o elementos estructural y funcionalmente equivalentes pueden producirse in vitro usando los métodos de biología molecular. Por consiguiente, cualquier ARN que tenga la estructura similar a un ARNm eucariota maduro habitual puede actuar como ARNm y está dentro del alcance de la expresión "ácido ribonucleico mensajero".
La molécula de ARNm tiene en general un tamaño que puede encapsularse en una nanopartícula lipídica de la invención. Aunque el tamaño de una molécula de ARNm varía en la naturaleza dependiendo de la identidad de la especie de ARNm que codifica una proteína en particular, un tamaño promedio para una molécula de ARNm es el tamaño promedio del ARNm de 500-10.000 bases.
La expresión "ácido nucleico enzimático", como se usa en el presente documento, se refiere a una molécula de ácido nucleico que tiene complementariedad en una región de unión a sustrato para una diana génica específica y también tiene una actividad enzimática que actúa para escindir de forma específica un ARN diana, inactivando de este modo la molécula de ARN diana. Las regiones complementarias permiten suficiente hibridación de la molécula de ácido nucleico enzimático con el ARN diana y, de este modo, permiten la escisión. Se prefiere una complementariedad del 100 %, pero también puede ser útil una complementariedad tan baja como del 50-75 % en la presente invención (véase, por ejemplo, Werner y Uhlenbeck, 1995, Nucleic Acids Research, 23, 2092-2096; Hammann et al., 1999, Antisense and Nucleic Acid Drug Dev., 9, 25-31). Los ácidos nucleicos pueden modificarse en la base, el azúcar y/o los grupos fosfato. La expresión ácido nucleico enzimático se usa indistintamente con expresiones tales como ribozimas, ARN catalítico, ARN enzimático, ADN catalítico, aptazima o ribozima de unión a aptámero, ribozima regulable, oligonucleótidos catalíticos, nucleozima, ADNzima, enzima de ARN, endorribonucleasa, endonucleasa, minizima, enzima de plomo, oligozima o enzima de ADN. Toda esta terminología describe moléculas de ácido nucleico con actividad enzimática. Las características clave de una molécula de ácido nucleico enzimático son que tiene un sitio de unión a sustrato específico que es complementario de una o más de las regiones de ácido nucleico diana y que tiene secuencias de nucleótidos en o en torno al sitio de unión a sustrato que transmite una actividad de escisión y/o ligamiento de ácido nucleico a la molécula (véase, por ejemplo, Cech et al., patente de los Estados Unidos 4.987.071; Cech et al., 1988, 260 JAMA 3030). Las ribozimas y moléculas de ácido nucleico enzimático de la divulgación se pueden modificar químicamente, por ejemplo, como se describe en la técnica y en otra parte del presente documento.
La expresión "ácido nucleico antisentido", como se usa en el presente documento, se refiere a una molécula de ácido nucleico no enzimático que se une a ARN diana por medio de interacciones ARN-ARN o ARN-ADN o ARN-PNA (ácido nucleico proteico; Egholm et al., 1993 Nature 365, 566) y altera la actividad del ARN diana (para una revisión, véase Stein y Cheng, 1993 Science 261, 1004 y Woolf et al., patente de los Estados Unidos 5.849.902). El ADN antisentido puede sintetizarse químicamente o expresarse mediante el uso de un vector de expresión de ADN monocatenario o equivalente del mismo. Las moléculas antisentido de la divulgación pueden modificarse químicamente, por ejemplo como se describe en la técnica.
La expresión "región activadora de RNasa H", como se usa en el presente documento, se refiere a una región (generalmente mayor o igual a 4-25 nucleótidos de longitud, preferentemente de 5-11 nucleótidos de longitud) de una molécula de ácido nucleico capaz de unirse a un ARN diana para formar un complejo no covalente que es reconocido por la enzima RNasa H celular (véase, por ejemplo, Arrow et al., patente de los Estados Unidos 5.849.902; Arrow et al., patente de los Estados Unidos 5.989.912). La enzima RNasa H se une al complejo de molécula de ácido nucleico-ARN diana y escinde la secuencia de ARN diana.
La expresión "quimera antisentido 2-5A", como se usa en el presente documento, se refiere a un oligonucleótido antisentido que contiene un resto de adenilato ligado en 2'-5' fosforilado en 5'. Estas quimeras se unen a ARN diana de una manera específica de secuencia y activan una ribonucleasa dependiente de 2-5A que, a su vez, escinde el ARN diana (Torrence et al., 1993 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90, 1300; Silverman et al., 2000, Methods Enzymol., 313, 522-533; Player y Torrence, 1998, Pharmacol. Ther., 78, 55-113). Las moléculas quiméricas antisentido 2-5A pueden modificarse químicamente, por ejemplo, como se describe en la técnica.
La expresión "oligonucleótidos formadores de triples cadenas", como se usa en el presente documento, se refiere a un oligonucleótido que puede unirse a un ADN bicatenario de una manera específica de secuencia para formar una hélice tricatenaria. Se ha mostrado que la formación de dicha estructura de hélice triple inhibe la transcripción del gen diana (Duval-Valentin et al., 1992 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 504; Fox, 2000, Curr. Med. Chem., 7, 17-37; Praseuth et. al., 2000, Biochim. Biophys. Acta, 1489, 181-206). Las moléculas oligonucleotídicas formadoras de triples cadenas de la divulgación pueden modificarse químicamente, por ejemplo, como se describe en la técnica.
La expresión "ARN señuelo", como se usa en el presente documento, se refiere a una molécula de ARN o aptámero que está diseñado para unirse preferentemente a un ligando predeterminado. Dicha unión puede dar lugar a la inhibición o activación de una molécula diana. El ARN señuelo o aptámero puede competir con una diana de unión de origen natural para la unión de un ligando específico. De forma análoga, a ARN señuelo puede estar diseñado para unirse a un receptor y bloquear la unión de una molécula efectora, o puede estar diseñado para unirse a un receptor de interés y evitar la interacción con el receptor. Las moléculas señuelo de la divulgación pueden modificarse químicamente, por ejemplo, como se describe en la técnica.
La expresión "ADN monocatenario" (ADNmc), como se usa en el presente documento, se refiere a una molécula de ácido desoxirribonucleico de origen natural o sintético que comprende una única cadena lineal, por ejemplo, un ADNmc puede ser una secuencia génica con sentido o antisentido o EST (marcador de secuencia expresado).
El término "alozima", como se usa en el presente documento, se refiere a una molécula de ácido nucleico enzimático alostérica, incluyendo, por ejemplo, patentes de los Estados Unidos n.° 5.834.186, 5.741.679, 5.589.332, 5.871.914, y publicaciones PCT n.° WO 00/24931, WO 00/26226, WO 98/27104 y WO 99/29842.
El término "aptámero", como se usa en el presente documento, se entiende como una composición polinucleotídica que se une específicamente a una molécula diana, en donde el polinucleótido tiene una secuencia que difiere de una secuencia normalmente reconocida por la molécula diana en una célula. Como alternativa, un aptámero puede ser una molécula de ácido nucleico que se une a una molécula diana donde la molécula diana no se une de forma natural a un ácido nucleico. La molécula diana puede ser cualquier molécula de interés. Las moléculas de aptámeros de la divulgación pueden modificarse químicamente, por ejemplo, como se describe en la técnica.
Formulaciones de composiciones lipídicas
Para uso farmacéutico, las composiciones lipídicas de la invención pueden ser administradas por vías entéricas o parenterales, incluyendo administración intravenosa, intramuscular, subcutánea, transdérmica, de las vías respiratorias (aerosol), oral, intranasal, rectal, vaginal, bucal, nasofaríngea, gastrointestinal o sublingual. La administración puede ser sistémica o tópica. La administración tópica puede implicar, por ejemplo, cateterización, implantación, bombeo osmótico, inyección directa, aplicación dérmica/transdérmica, endoprótesis vascular, gotas para los oídos/ojos o administración en la vena porta. Los compuestos de fórmula (I) deben evaluarse para determinar sus propiedades biofarmacéuticas, tales como solubilidad y estabilidad en solución (a través del pH), permeabilidad, etc., para seleccionar la forma de dosificación y vía de administración más apropiadas para el tratamiento de la indicación propuesta.
Las composiciones de la invención se administrarán en general, pero no necesariamente, como una formulación en asociación con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. El término "excipiente" incluye cualquier ingrediente distinto del compuesto o los compuestos de la divulgación, el otro componente o componentes lipídicos y el agente biológicamente activo. Un excipiente puede transmitir una característica funcional (por ejemplo, control de la velocidad de liberación del fármaco) y/o no funcional (por ejemplo, ayuda de procesamiento o diluyente) a las formulaciones. La elección de excipiente dependerá en gran medida de factores tales como el modo particular de administración, el efecto del excipiente en la solubilidad y estabilidad, y la naturaleza de la forma de dosificación.
Los excipientes farmacéuticamente aceptables habituales incluyen:
□ diluyentes, por ejemplo, lactosa, dextrosa, sacarosa, manitol, sorbitol, celulosa y/o glicina;
□ lubricantes, por ejemplo, sílice, talco, ácido esteárico, su sal de magnesio o calcio y/o polietilenglicol; □ aglutinantes, por ejemplo, silicato de magnesio y aluminio, pasta de almidón, gelatina, tragacanto, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio y/o polivinilpirrolidona;
□ disgregantes, por ejemplo, almidones, agar, ácido algínico o su sal de sodio, o mezclas efervescentes; y/o
□ absorbentes, colorantes, sabores y/o edulcorantes.
El excipiente puede ser un vehículo de solución acuosa que puede contener opcionalmente un tampón (por ejemplo, un tampón de PBS) y/o un azúcar.
Se dispone de un análisis profundo de excipientes farmacéuticamente aceptables en Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy 2000, 20.a edición (ISBN: 0683306472).
Las composiciones de la invención se pueden administrar por vía oral. La administración oral puede implicar la deglución, de modo que el compuesto entre en el tracto gastrointestinal, y/o la administración bucal, lingual o sublingual mediante la cual el compuesto entra en el torrente sanguíneo directamente desde la boca.
Las composiciones de la invención se pueden administrar por vía parenteral. Los compuestos y composiciones de la invención se pueden administrar directamente en el torrente sanguíneo, en tejido subcutáneo, en el músculo o en un órgano interno. Los medios adecuados para administración incluyen intravenoso, intraarterial, intratecal, intraventricular, intrauretral, intraesternal, intracraneal, intramuscular, intrasinovial y subcutáneo. Los dispositivos adecuados para administración incluyen inyectores de aguja (incluyendo microaguja), inyectores sin aguja y técnicas de infusión.
Las formulaciones parenterales son normalmente soluciones acuosas u oleosas. Cuando la solución es acuosa, excipientes tales como azúcares (incluyendo, pero sin limitación, glucosa, manitol, sorbitol, etc.) sales, carbohidratos y agentes tamponantes (preferentemente a un pH de 3 a 9), pero, para algunas aplicaciones, pueden formularse más adecuadamente como una solución no acuosa estéril o como una forma seca para usar junto con un vehículo adecuado tal como agua estéril, sin pirógenos (WFI).
Las formulaciones parenterales pueden incluir implantes derivados de polímeros degradables tales como poliésteres (es decir, ácido poliláctico, polilactida, polilactida-co-glicólido, policaprolactona, polihidroxibutirato), poliortoésteres y polianhídridos. Estas formulaciones pueden administrarse mediante incisión quirúrgica en el tejido subcutáneo, tejido muscular o directamente en órganos específicos.
La preparación de formulaciones parenterales en condiciones estériles, por ejemplo, por liofilización, puede lograrse fácilmente usando técnicas farmacéuticas convencionales bien conocidas por el experto en la materia.
La solubilidad de los compuestos y las composiciones en la preparación de soluciones parenterales puede aumentarse mediante el uso de técnicas de formulación adecuadas, tales como la incorporación de codisolventes y/o agentes de mejora de la solubilidad tales como tensioactivos, estructuras de micelos y ciclodextrinas.
Las composiciones de la invención se pueden administrar por vía intranasal o por inhalación, normalmente en forma de un polvo seco (ya sea solo, como una mezcla, por ejemplo, en una mezcla seca con lactosa, o como una partícula de componentes mixtos, por ejemplo, mezclada con fosfolípidos, tales como fosfatidilcolina) a partir de un inhalador de polvo seco, como un pulverizador de aerosol de un recipiente presurizado, bomba, pulverizador, atomizador (preferentemente un atomizador que usa electrohidrodinámica para producir una bruma fina) o nebulizador, con o sin el uso de un propulsor adecuado, tal como 1,1,1,2-tetrafluoroetano o 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoropropano, o como gotas nasales. Para uso intranasal, el polvo puede comprender un agente bioadhesivo, por ejemplo, quitosano o ciclodextrina.
El recipiente presurizado, bomba, pulverizador, atomizador o nebulizador contiene una solución o suspensión del compuesto o los compuestos de la divulgación que comprenden, por ejemplo, etanol, etanol acuoso o un agente alternativo adecuado para dispersar, solubilizar o extender la liberación de las composiciones de la invención, un propulsor o propulsores como disolvente y un tensioactivo opcional, tal como trioleato de sorbitano, ácido oleico o un ácido oligoláctico.
Antes de su uso en un polvo seco o formulación de suspensión, la composición se microniza a un tamaño adecuado para suministro por inhalación (normalmente menos de 5 micrómetros). Esto se puede lograr mediante cualquier método de trituración adecuado, tal como molienda a chorro en espiral, molienda a chorro de lecho fluido, procesamiento de líquido supercrítico para formar nanopartículas, homogeneización a alta presión o secado por pulverización.
Pueden formularse cápsulas (hechas, por ejemplo, de gelatina o hidroxipropilmetilcelulosa), blísteres y cartuchos para su uso en un inhalador o insuflador para contener una mezcla de polvo del compuesto de la divulgación o composición de la invención, una base de polvo adecuada tal como lactosa o almidón y un modificador del rendimiento tal como /-leucina, manitol o estearato de magnesio. La lactosa puede ser anhidra o en forma de monohidrato, preferentemente este último. Otros excipientes adecuados incluyen dextrano, glucosa, maltosa, sorbitol, xilitol, fructosa, sacarosa y trehalosa.
Las formulaciones para administración inhalada/intranasal pueden formularse para ser de liberación inmediata y/o modificada usando, por ejemplo, PGLA. Las formulaciones de liberación modificada incluyen liberación retardada, sostenida, por pulsos, controlada, dirigida y programada.
Las formulaciones adecuadas para la aplicación transdérmica incluyen una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la divulgación o composición de la invención con un vehículo. Los soportes ventajosos incluyen disolventes absorbibles farmacológicamente aceptables para ayudar al paso a través de la piel del huésped. De manera característica, los dispositivos transdérmicos tienen la forma de un vendaje que comprende un miembro de respaldo, un depósito que contiene el compuesto opcionalmente con vehículos, opcionalmente una barrera de control de la velocidad para suministrar el compuesto a la piel del huésped a una velocidad controlada y predeterminada durante un período prolongado de tiempo y medios para fijar el dispositivo a la piel.
Las composiciones lipídicas de la invención se administran en cualquiera de varias maneras, incluyendo parenteral, intravenosa, sistémica, local, oral, intratumoral, intramuscular, subcutánea, intraperitoneal, por inhalación o cualquier método similar de suministro. Como se describe en el presente documento, las composiciones se pueden administrar por vía parenteral, es decir, intraarticular, intravenosa, intraperitoneal, subcutánea o intramuscular. Como se describe en el presente documento, las composiciones se pueden administrar mediante infusión intravenosa o por vía intraperitoneal mediante una inyección de embolada.
Las composiciones lipídicas de la invención se pueden formular como composiciones farmacéuticas adecuadas para el suministro a un sujeto. Las composiciones farmacéuticas de la invención comprenderán con frecuencia además uno o más tampones (por ejemplo, solución salina tamponada neutra o solución salina tamponada con fosfato), carbohidratos (por ejemplo, glucosa, manosa, sacarosa, dextrosa o dextranos), manitol, proteínas, polipéptidos o aminoácidos tales como glicina, antioxidantes, bacteriostáticos, agentes quelantes tales como EDTA o glutatión, adyuvantes (por ejemplo, hidróxido de aluminio), solutos que hacen a la formulación isotónica, hipotónica o débilmente hipertónica con la sangre de un receptor, agentes de suspensión, agentes espesantes y/o conservantes. Como alternativa, las composiciones de la presente invención pueden formularse como un liofilizado.
Pueden encontrarse formulaciones adecuadas para su uso en la presente invención, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Filadelfia, Pa., 17.sup.th ed. (1985). Con frecuencia, las composiciones intravenosas comprenderán una solución de los liposomas suspendidos en un vehículo aceptable, tal como un vehículo acuoso.
En el presente documento se describe una composición farmacéutica (es decir, formulación) que comprende una composición lipídica de la invención y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable. Como se describe en el presente documento, al menos otro componente lipídico puede estar presente en la composición lipídica. Como se describe en el presente documento, la composición lipídica puede estar en forma de liposoma. Como se describe en el presente documento, la composición lipídica puede estar en forma de nanopartícula lipídica. Como se describe en el presente documento, la composición lipídica puede ser adecuada para su suministro al hígado. Como se describe en el presente documento, la composición lipídica puede ser adecuada para su suministro a un tumor. Como se describe en el presente documento, el agente biológicamente activo puede ser ADN o ARN. Como se describe en el presente documento, el agente biológicamente activo puede ser ARNip. Como se describe en el presente documento, el agente biológicamente activo puede ser ARNm.
Para fines de inmunización, una composición se preparará, en general, como un inyectable y se administrará mediante inyección (por ejemplo, mediante inyección intramuscular).
Se describe en el presente documento un dispositivo de suministro (por ejemplo, jeringa, nebulizador, pulverizador, inhalador, parche dérmico, etc.) que contiene una composición de la invención. Este dispositivo se puede usar para administrar una composición farmacéutica a un sujeto, por ejemplo, a un ser humano para inmunización.
Células y órganos a los que se dirige la invención y divulgación
Los compuestos, composiciones, métodos y usos se pueden usar para suministrar un agente biológicamente activo a uno o más de los siguientes en un paciente:
el hígado o células hepáticas (por ejemplo, hepatocitos);
un riñón o células renales;
un tumor o células tumorales;
el SNC o células del SNC (sistema nervioso central, por ejemplo, cerebro y/o médula espinal);
el SNP o células del SNP (sistema nervioso periférico);
un pulmón o células pulmonares;
la vasculatura o células vasculares;
la piel o células cutáneas (por ejemplo, células de la dermis y/o células foliculares);
un ojo o células oculares (por ejemplo, mácula, fóvea, córnea, retina) y
un oído o células del oído (por ejemplo, células del oído interno, oído medio y/u oído externo).
Los compuestos, composiciones, métodos y usos también se pueden usar para suministrar un agente biológicamente activo (por ejemplo, ARN que codifica un inmunógeno) a células del sistema inmunitario.
Como se describe en el presente documento, los compuestos, composiciones, métodos y usos pueden ser para suministrar un agente biológicamente activo a células hepáticas (por ejemplo, hepatocitos). Como se describe en el presente documento, los compuestos, composiciones, métodos y usos pueden ser para suministrar un agente biológicamente activo a un tumor o células tumorales (por ejemplo, un tumor primario o células de cáncer metastásico).
Para el suministro de un agente biológicamente activo al hígado o a células hepáticas, como se describe en el presente documento, una composición de la invención puede ponerse en contacto con el hígado o las células hepáticas del paciente como se conoce en general en la técnica, tal como mediante administración parenteral (por ejemplo, administración intravenosa, intramuscular, subcutánea) o administración local (por ejemplo, inyección directa, inyección en la vena porta, cateterización, endoprótesis), para facilitar el suministro.
Para el suministro de un agente biológicamente activo al riñón o a células renales, como se describe en el presente documento, una composición de la invención puede ponerse en contacto con el riñón o las células renales del paciente como se conoce en general en la técnica, tal como mediante administración parenteral (por ejemplo, administración intravenosa, intramuscular, subcutánea) o administración local (por ejemplo, inyección directa, cateterización, endoprótesis), para facilitar el suministro.
Para el suministro de un agente biológicamente activo a un tumor o a células tumorales, como se describe en el presente documento, una composición de la invención puede ponerse en contacto con el tumor o las células tumorales del paciente como se conoce en general en la técnica, tal como mediante administración parenteral (por ejemplo, administración intravenosa, intramuscular, subcutánea) o administración local (por ejemplo, inyección directa, cateterización, endoprótesis), para facilitar el suministro.
Para el suministro de un agente biológicamente activo al SNC o a células del SNC (por ejemplo, células del cerebro y/o células de la médula espinal), como se describe en el presente documento, una composición de la invención puede ponerse en contacto con el SNC o las células del SNC (por ejemplo, células del cerebro y/o células de la médula espinal) del paciente como se conoce en general en la técnica, tal como mediante administración parenteral (por ejemplo, administración intravenosa, intramuscular, subcutánea) o administración local (por ejemplo, inyección directa, cateterización, endoprótesis, administración por bombeo osmótico (por ejemplo, intratecal o ventricular)), para facilitar el suministro.
Para el suministro de un agente biológicamente activo al SNP o a células del SNP, como se describe en el presente documento, una composición de la invención puede ponerse en contacto con el SNP o las células del SNP del paciente como se conoce en general en la técnica, tal como mediante administración parenteral (por ejemplo, administración intravenosa, intramuscular, subcutánea) o administración local (por ejemplo, inyección directa), para facilitar el suministro.
Para el suministro de un agente biológicamente activo a un pulmón o a células pulmonares, como se describe en el presente documento, una composición de la invención puede ponerse en contacto con el pulmón o las células pulmonares del paciente como se conoce en general en la técnica, tal como mediante administración parenteral (por ejemplo, administración intravenosa, intramuscular, subcutánea) o administración local (por ejemplo, administración por vía pulmonar directa a tejidos y células pulmonares), para facilitar el suministro.
Para el suministro de un agente biológicamente activo a la vasculatura o a células vasculares, como se describe en el presente documento, una composición de la invención puede ponerse en contacto con la vasculatura o células vasculares del paciente como se conoce en general en la técnica, tal como mediante administración parenteral (por ejemplo, administración intravenosa, intramuscular, subcutánea) o administración local (por ejemplo, pinzamiento, cateterización, endoprótesis), para facilitar el suministro.
Para el suministro de un agente biológicamente activo a la piel o a células cutáneas (por ejemplo, células de la dermis y/o células foliculares), como se describe en el presente documento, una composición de la invención puede ponerse en contacto con la piel o las células cutáneas (por ejemplo, células de la dermis y/o células foliculares) del paciente como se conoce en general en la técnica, tal como mediante administración parenteral (por ejemplo, administración intravenosa, intramuscular, subcutánea) o administración local (por ejemplo, aplicación dérmica directa, iontoforesis), para facilitar el suministro.
Para el suministro de un agente biológicamente activo a un ojo o a células oculares (por ejemplo, mácula, fóvea, córnea, retina), como se describe en el presente documento, una composición de la invención puede ponerse en contacto con el ojo o las células oculares (por ejemplo, mácula, fóvea, córnea, retina) del paciente como se conoce en general en la técnica, tal como mediante administración parenteral (por ejemplo, administración intravenosa, intramuscular, subcutánea) o administración local (por ejemplo, inyección directa, inyección intraocular, inyección periocular, subretiniana, iontoforesis, uso de colirio, implantes), para facilitar el suministro.
Para el suministro de un agente biológicamente activo a un oído o células del oído (por ejemplo, células del oído interno, oído medio y/u oído externo), como se describe en el presente documento, la composición de la invención puede ponerse en contacto con el oído o células del oído (por ejemplo, células del oído interno, oído medio y/u oído externo) del paciente como se conoce en general en la técnica, tal como mediante administración parenteral (por ejemplo, administración intravenosa, intramuscular, subcutánea) o administración local (por ejemplo, inyección directa), para facilitar el suministro.
Para el suministro de un agente biológicamente activo (por ejemplo, ARN que codifica un inmunógeno) a células del sistema inmunitario (por ejemplo, células presentadoras de antígenos, incluyendo células presentadoras de antígenos profesionales), como se describe en el presente documento, la composición de la invención puede suministrarse por vía intramuscular, después de lo cual las células inmunitarias pueden infiltrarse en el sitio de suministro y procesar el ARN suministrado. Dichas células inmunitarias pueden incluir macrófagos (por ejemplo, macrófagos derivados de médula ósea), células dendríticas (por ejemplo, células dendríticas plasmacitoides derivadas de médula ósea y/o células dendríticas mieloides derivadas de médula ósea), monocitos (por ejemplo, monocitos de sangre periférica humana), etc. (por ejemplo, véase el documento WO2012/006372).
Inmunización
Para fines de inmunización, la divulgación implica el suministro de un ARN que codifica un inmunógeno. El inmunógeno induce una respuesta inmunitaria que reconoce el inmunógeno y, por tanto, puede usarse para proporcionar inmunidad contra un patógeno, o contra un alérgeno o contra un antígeno tumoral. Se prefiere la inmunización contra enfermedad y/o infección provocada por un patógeno.
El ARN se suministra con una composición lipídica de la divulgación (por ejemplo, con un liposoma o LNP) y, normalmente, la divulgación utiliza liposomas o LNP dentro de los cuales se encapsula ARN que codifican inmunógenos. La encapsulación dentro de los liposomas puede proteger ARN de la digestión por RNasa.
Se desvela en el presente documento un liposoma que tiene una bicapa lipídica que encapsula un núcleo acuoso, en donde: (i) la bicapa lipídica comprende un lípido de la divulgación; y (ii) el núcleo incluye un ARN que codifica un inmunógeno. Si una composición comprende una población de liposomas con diámetros diferentes, para fines de inmunización puede ser útil si: (i) al menos 80 % en número de los liposomas tienen diámetros en el intervalo de 60­ 180 nm, y preferentemente en el intervalo de 80-160 nm, y/o (ii) el diámetro promedio (en intensidad, por ejemplo, promedio Z) de la población está en el intervalo de 60-180 nm, y preferentemente en el intervalo de 80-160 nm. Los diámetros dentro de la pluralidad deberían tener idealmente un índice de polidispersión <0,2.
Después de la administración in vivo de una composición de inmunización, el ARN suministrado se libera y se traduce dentro de una célula para proporcionar el inmunógeno in situ. El ARN es de hebra positiva ("+"), de modo que puede ser traducido por células sin necesitar etapas de replicación intermedias tales como transcripción inversa. También se puede unir a receptores TLR7 expresados por células inmunitarias, iniciando de este modo un efecto adyuvante.
Los ARN de hebra positiva (+) preferidos son autorreplicantes. Una molécula de ARN autorreplicante (replicón) puede, cuando se suministra a una célula de vertebrado incluso sin ninguna proteína, conducir a la producción de múltiples ARN descendientes mediante transcripción de sí misma (a través de una copia antisentido que genera a partir de sí misma). Una molécula de ARN autorreplicante es por tanto normalmente una molécula de hebra que puede traducirse directamente después de su suministro a una célula, y esta traducción proporciona una ARN polimerasa dependiente de ARN que después produces transcritos tanto antisentido como con sentido a partir del ARN suministrado. Por tanto, el ARN suministrado conduce a la producción de múltiples ARN descendientes. Estos ARN descendientes, así como transcritos subgenómicos colineales, pueden en sí traducirse para proporcionar expresión in situ de un inmunógeno codificado o pueden transcribirse para proporcionar transcritos adicionales con el mismo sentido que el ARN suministrado que se traducen para proporcionar expresión in situ del inmunógeno. El resultado general de esta secuencia de transcripciones es una amplificación enorme del número de los ARN de replicones introducidos y, por tanto, el inmunógeno codificado se convierte en un producto polipeptídico importante de las células.
Un sistema adecuado para lograr la autorreplicación es usar un replicón de ARN basado en alfavirus. Estos replicones de hebra se traducen después del suministro a una célula para proporcionar una replicasa (o replicasa-transcriptasa). La replicasa se traduce como una poliproteína que se autoescinde para proporcionar un complejo de replicación que crea copias de hebra - genómicas del ARN suminsitrado de hebra . Estos transcritos de hebra - pueden a su vez transcribirse para proporcionar copias adicionales del ARN parental de hebra y también para proporcionar un transcrito subgenómico que codifica el inmunógeno. La traducción del transcrito subgenómico conduce de este modo a la expresión in situ del inmunógeno por la célula infectada. Los replicones de alfavirus adecuados pueden usar una replicasa de un virus sindbis, un virus del bosque de semliki, un virus de la encefalitis equina oriental, un virus de la encefalitis equina venezolana, etc. Pueden usarse secuencias de virus mutantes o de tipo silvestre, por ejemplo, el mutante TC83 atenuado de VEEV se ha usado en replicones.
Una molécula preferida de ARN autorreplicante codifica por tanto (i) una ARN polimerasa dependiente de ARN que puede transcribir ARN de molécula de ARN autorreplicante y (ii) un inmunógeno. La polimerasa puede ser una replicasa de alfavirus, por ejemplo, que comprende uno o más de las proteínas de alfavirus nsP1, nsP2, nsP3 y nsP4.
Mientras que los genomas de alfavirus naturales codifican proteínas estructurales de viriones además de la poliproteína de replicasa no estructural, se prefiere que una molécula de ARN autorreplicante de la divulgación no codifique proteínas estructurales de alfavirus. Por tanto, un ARN autorreplicante preferido puede conducir a la producción de copias genómicas de ARN de sí mismo en una célula, pero no a la producción de viriones que contienen ARN. La incapacidad para producir estos viriones significa que, a diferencia de un alfavirus de tipo silvestre, la molécula de ARN autorreplicante no puede perpetuarse en sí misma en forma infecciosa. Las proteínas estructurales de alfavirus que son necesarias para perpetuación en virus de tipo silvestre están ausentes de ARN autorreplicantes de la divulgación y su lugar es tomado por gen o genes que codifican el inmunógeno de interés, de modo que el transcrito subgenómico codifique el inmunógeno en lugar de las proteínas de viriones de alfavirus estructurales.
Por tanto, una molécula de ARN autorreplicante útil con la invención puede tener dos marcos abiertos de lectura. El primer marco abierto de lectura (5') codifica una replicasa; el segundo marco abierto de lectura (3') codifica un inmunógeno. En algunas realizaciones, el ARN puede tener marcos abiertos de lectura (por ejemplo, corriente abajo) adicionales, por ejemplo, para codificar inmunógenos adicionales (véase a continuación) o para codificar polipéptidos accesorios.
Una molécula de ARN autorreplicante puede tener una secuencia 5' que es compatible con la replicasa codificada.
Las moléculas de ARN autorreplicantes pueden tener diversas longitudes, pero normalmente son de 5000-25000 nucleótidos de longitud, por ejemplo, 8000-15000 nucleótidos o 9000-12000 nucleótidos. Por tanto, el ARN es más largo que lo visto en el suministro de ARNip.
Una molécula de ARN puede tener una caperuza 5' (por ejemplo, una 7-metilguanosina). Esta caperuza puede mejorar la traducción in vivo del ARN.
El nucleótido 5' de una molécula de ARN útil con la invención puede tener un grupo 5' trifosfato. En un ARN con caperuza esto puede ligarse con una 7-metilguanosina a través de un enlace de 5' a 5'. Un trifosfato 5' puede mejorar la unión de RIG-I y, por tanto, promover efectos adyuvantes.
Una molécula de ARN puede tener una cola de poli A 3'. También puede incluir una secuencia de reconocimiento de poli A polimerasa (por ejemplo, AAUAAA) cerca de su extremo 3'.
Una molécula de ARN útil con la invención para fines de inmunización normalmente será monocatenaria. Los ARN monocatenarios pueden iniciar en general un efecto de adyuvante al unirse a TLR7, TLR8, ARN helicasas y/o PKR. El ARN suministrado en forma bicatenaria (ARNbc) puede unirse a TLR3 y este receptor también puede desencadenarse mediante ARNbc que se forma durante la replicación de un ARN monocatenario o dentro de la estructura secundaria de un ARN monocatenario.
Las moléculas de ARN para fines de inmunización pueden prepararse convenientemente mediante transcripción in vitro (IVT). La IVT puede usar un molde (ADNc) creado y propagado en forma de plásmido en bacterias o creado de forma sintética (por ejemplo, mediante métodos de ingeniería de síntesis génica y/o reacción en cadena de la polimerasa (PCR)). Por ejemplo, una ARN polimerasa dependiente de ADN (tal como las a Rn polimerasas de bacteriófagos T7, T3 o SP6) puede usarse para transcribir el ARN de un molde de ADN. Se pueden usar reacciones adecuadas de recubrimiento con caperuzas y adición de poli A según sea necesario (aunque el poli-A del replicón está habitualmente codificado dentro del molde de ADN). Estas ARN polimerasas pueden tener requisitos rigurosos para el o los nucleótidos 5' y, en algunas realizaciones, estos requisitos deben coincidir con los requisitos de la replicasa codificada, para garantizar que el ARN transcrito por IVT pueda actuar eficientemente como un sustrato para su replicasa autocodificada.
Como se analiza en el documento WO2011/005799, el ARN autorreplicante puede incluir (además de cualquier estructura de caperuza 5') uno o más nucleótidos que tienen una nucleobase modificada. Por ejemplo, un ARN autorreplicante puede incluir una o más nucleobases de pirimidina modificadas, tales como restos de pseudouridina y/o 5-metilcitosina. En algunas realizaciones, sin embargo, el ARN no incluye nucleobases modificadas y puede no incluir nucleótidos modificados, es decir, todos los nucleótidos en el ARN son ribonucleótidos A, C, G y U convencionales (excepto para cualquier estructura de caperuza 5', que puede incluir una metilguanosina 7'). En otras realizaciones, el ARN puede incluir una caperuza 5' que comprende una metilguanosina 7', y los primeros 1, 2 o 3 ribonucleótidos 5' pueden estar metilados en la posición 2' de la ribosa.
Un ARN usado con la invención para fines de inmunización incluye idealmente solo enlaces fosfodiéster entre nucleósidos, pero en algunas realizaciones puede contener enlaces de fosforamidato, fosforotioato y/o metilfosfonato.
La cantidad de ARN por liposoma puede variar. El número de moléculas de ARN autorreplicantes individuales por liposoma es normalmente <50, por ejemplo, <20, <10, <5 o 1-4 por liposoma.
Las moléculas de ARN usadas con la invención para fines de inmunización codifican un inmunógeno polipeptídico. Después de la administración, el ARN se traduce in vivo y el inmunógeno puede inducir una respuesta inmunitaria en el receptor. El inmunógeno puede inducir una respuesta inmunitaria contra un patógeno (por ejemplo, una bacteria, un virus, un hongo o un parásito) pero puede inducir una respuesta inmunitaria contra un alérgeno o un antígeno tumoral. La respuesta inmunitaria puede comprender una respuesta de anticuerpo (que incluye habitualmente IgG) y/o una respuesta inmunitaria mediada por células. El inmunógeno polipeptídico inducirá normalmente una respuesta inmunitaria que reconoce el polipéptido patógeno (o alérgeno o tumoral) correspondiente, pero en algunas realizaciones el polipéptido puede actuar como un mimótopo para inducir una respuesta inmunitaria que reconoce un sacárido. El inmunógeno será normalmente un polipéptido de superficie, por ejemplo, una adhesina, una hemaglutinina, una glucoproteína de envoltura, una glucoproteína espicular, etc.
La molécula de ARN puede codificar un único inmunógeno polipeptídico o múltiples polipéptidos. Múltiples inmunógenos pueden presentarse como un único inmunógeno polipeptídico (polipéptido de fusión) o como polipéptidos separados. Si los inmunógenos se expresan como polipéptidos separados de un replicón, entonces uno o más de estos puede estar provisto de un IRES cadena arriba o un elemento promotor vírico adicional. Como alternativa, múltiples inmunógenos pueden expresarse a partir de una poliproteína que codifica inmunógenos individuales fusionados con una proteasa autocatalítica corta (por ejemplo, proteína 2A del virus de la glosopeda) o como inteínas.
El inmunógeno puede inducir una respuesta inmunitaria contra una de estas bacterias:
Neisseria meningitidis: los inmunógenos útiles incluyen, pero sin limitación, proteínas de membrana tales como adhesinas, autotransportadores, toxinas, proteínas de adquisición de hierro y proteína de unión al factor H. Se desvela una combinación de tres polipéptidos útiles en Giuliani et al. (2006) Proc Natl Acad Sci U S A 103 (29): 10834-9.
Streptococcus pneumoniae: se desvelan inmunógenos polipeptídicos útiles en el documento WO2009/016515. Estos incluyen, pero sin limitación, la subunidad pilosa RrgB, el precursor de beta-N-acetil-hexosaminidasa (spr0057), spr0096, proteína de tensión general GSP-781 (spr2021, SP2216), serina/treonina cinasa StkP (SP1732) y adhesina de superficie neumocócica PsaA.
Streptococcus pyogenes: los inmunógenos útiles incluyen, pero sin limitación, los polipéptidos desvelados en los documentos WO02/34771 y WO2005/032582.
Moraxella catarrhalis.
Bordetella pertussis: Los inmunógenos tosferínicos útiles incluyen, pero sin limitación, toxina o toxoide tosferínico (PT), hemaglutinina filamentosa (FHA), pertactina y aglutinógenos 2 y 3.
Staphylococcus aureus: Los inmunógenos útiles incluyen, pero sin limitación, the polipéptidos desvelados en el documento WO2010/119343, tales como una hemolisina, esxA, esxB, proteína de unión a ferricrome (sta006) y/o la lipoproteína sta011.
Clostridium tetani: el inmunógeno habitual es el toxoide tetánico.
Cornynebacterium diphtheriae: el inmunógeno habitual es el toxoide diftérico.
Haemophilus influenzae: Los inmunógenos útiles incluyen, pero sin limitación, los polipéptidos desvelados en los documentos WO2006/110413 y WO2005/111066.
Pseudomonas aeruginosa
Streptococcus agalactiae: los inmunógenos útiles incluyen, pero sin limitación, los polipéptidos desvelados en el documento WO02/34771.
Chlamydia trachomatis: Los inmunógenos útiles incluyen, pero sin limitación, PepA, LcrE, ArtJ, DnaK, CT398, OmpH-like, L7/L12, OmcA, AtoS, CT547, Eno, HtrA y MurG (por ejemplo, como se desvela en el documento WO2005/002619). LcrE (documento WO2006/138004) y HtrA (documento WO2009/109860) son dos inmunógenos preferidos.
Chlamydia pneumoniae: Los inmunógenos útiles incluyen, pero sin limitación, los polipéptidos desvelados en el documento WO02/02606.
Helicobacter pylori: Los inmunógenos útiles incluyen, pero sin limitación, CagA, VacA, NAP y/o ureasa (documento WO03/018054).
Escherichia coli: Los inmunógenos útiles incluyen, pero sin limitación, inmunógenos procedentes de E.coli enterotoxígena (ETEC), E.coli enteroagregante (EAggEC), E.coli de adherencia difusa (DAEC), E coli enteropatógena (EPEC), E.coli patógena extraintestinal (ExPEC) y/o E.coli enterohemorrágica (EHEC). Las cepas de ExPEC incluyen E.coli uropatógena (UPEC) y E.coli asociada a meningitis/septicemia (MNEC). Se desvelan inmunógenos UPEC en los documentos WO2006/091517 y WO2008/020330. Se desvelan inmunógenos MNEC útiles en el documento WO2006/089264. Un inmunógeno útil para varios tipos de E.coli es AcfD (documento WO2009/104092).
Bacillus anthracis
Yersinia pestis: Los inmunógenos útiles incluyen, pero sin limitación, los desvelados en los documentos WO2007/049155 y WO2009/031043.
Staphylococcus epidermis
Clostridium perfringens o Clostridium botulinums
Legionella pneumophila
Coxiella burnetii
Brucella, tal como B.abortus, B.canis, B.melitensis, B.neotomae, B.ovis, B.suis, B.pinnipediae.
Francisella, such as F.novicida, F.philomiragia, F.tularensis.
Neisseria gonorrhoeae
Treponema pallidum
Haemophilus ducreyi
Enterococcus faecalis o Enterococcus faecium
Staphylococcus saprophyticus
Yersinia enterocolitica
Mycobacterium tuberculosis
Rickettsia
Listeria monocytogenes
Vibrio cholerae
Salmonella typhi
Borrelia burgdorferi
Porphyromonas gingivalis
Klebsiella
Como se describe en el presente documento, el inmunógeno puede inducir una respuesta inmunitaria contra uno de estos virus:
Orthomyxovirus: Los inmunógenos útiles pueden ser de un virus de la gripe A, B o C, tal como las proteínas hemaglutinina, neuraminidasa o M2 de la matriz. Cuando el inmunógeno es una hemaglutinina del virus de la gripe A puede ser de cualquier subtipo, por ejemplo, H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15 o H16.
Virus Paramyxoviridae: los inmunógenos incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de Pneumovirus (por ejemplo, virus respiratorio sincitial, VRS), Rubulavirus (por ejemplo, virus de las paperas), Paramyxovirus (por ejemplo, virus paragripal), Metapneumovirus y Morbillivirus (por ejemplo, virus del sarampión).
Poxviridae: los inmunógenos incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de Orthopoxvirus tales como viruela, incluyendo, pero sin limitación, viruela mayor y viruela menor.
Picornavirus: los inmunógenos incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de Picornavirus, tales como Enterovirus, Rhinovirus, Heparnavirus, Cardiovirus y Aphthovirus. En una realización, el enterovirus es un poliovirus, por ejemplo, un poliovirus de tipo 1, tipo 2 y/o tipo 3. En otra realización, el enterovirus es un enterovirus EV71. En otra realización, el enterovirus es un virus coxsackie A o B.
Bunyavirus: los inmunógenos incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de un Orthobunyavirus, tal como el virus de la encefalitis de California, un Phlebovirus, tal como el virus de la fiebre del valle del Rift o un Nairovirus, tal como el virus de la fiebre hemorrágica de Crimea-Congo.
Heparnavirus: los inmunógenos incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de un Heparnavirus, tal como el virus de la hepatitis A (VHA).
Filovirus: los inmunógenos incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de un filovirus, tal como un virus del Ébola (incluyendo un ebolavirus de Zaire, Costa de Marfil, Reston o Sudán) o un virus de Marburgo.
Togavirus: los inmunógenos incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de un Togavirus, tal como un Rubivirus, un Alphavirus o un Arterivirus. Esto incluye el virus de la rubéola.
Flavivirus: los inmunógenos incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de un Flavivirus, tal como el virus de la encefalitis transmitida por garrapatas (TBE), virus del Dengue (tipos 1, 2, 3 o 4), virus de la fiebre amarilla, virus de la encefalitis japonesa, virus del bosque de Kyasanur, virus de la encefalitis del Nilo occidental, virus de la encefalitis de San Luis, virus de la encefalitis de primavera-verano rusa, virus de la encefalitis de Powassan.
Pestivirus: los inmunógenos incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de un Pestivirus, tales como diarrea vírica bovina (BVDV), fiebre porcina clásica (CSFV) o enfermedad de la frontera (BDV).
Hepadnavirus: los inmunógenos incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de un Hepadnavirus, tal como el virus de la hepatitis B. Una composición puede incluir el antígeno de superficie del virus de la hepatitis B (HBsAg).
Otros virus de hepatitis: Una composición puede incluir un inmunógeno de un virus de la hepatitis C, virus de la hepatitis delta, virus de la hepatitis E o virus de la hepatitis G.
Rhabdovirus: los inmunógenos incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de un Rhabdovirus, tal como un Lyssavirus (por ejemplo, un virus de la rabia) y Vesiculovirus (VSV).
Caliciviridae: los inmunógenos incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de Calciviridae, tal como virus de Norwalk (Norovirus) y virus de tipo Norwalk, tales como virus de Hawaii y virus de Snow Mountain.
Coronavirus: los inmunógenos incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de un coronavirus de SARS, bronquitis infecciosa aviar (IBV), virus de la hepatitis de ratón (MHV) y virus de la gastroenteritis transmisible porcina (TGEV). El inmunógeno de coronavirus puede ser un polipéptido espicular.
Retrovirus: los inmunógenos incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de un Oncovirus, un Lentivirus (por ejemplo, VIH-1 o VIH-2) o un Spumavirus.
Reovirus: los inmunógenos incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de un Orthoreovirus, un Rotavirus, un Orbivirus o un Coltivirus.
Parvovirus: los inmunógenos incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de Parvovirus B19.
Herpesvirus: los inmunógenos incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de un herpesvirus humano, tales como, solo a modo de ejemplo, virus del Herpes simple (VHS) (por ejemplo, VHS de tipos 1 y 2), virus de varicela zóster (VZV), virus de Epstein-Barr virus (VEB), citomegalovirus (CMV), herpesvirus humano 6 (HVH6), herpesvirus humano 7 (HVH7) y herpesvirus humano 8 (HVH8).
Papovavirus: los inmunógenos incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de Papilomavirus y Poliomavirus. El papilomavirus (humano) puede ser del serotipo 1, 2, 4, 5, 6, 8, 11, 13, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 41, 42, 47, 51, 57, 58, 63 o 65, por ejemplo, de uno o más de los serotipos 6, 11, 16 y/o 18.
Adenovirus: los inmunógenos incluyen los obtenidos a partir del serotipo 36 (Ad-36).
Como se describe en el presente documento, el inmunógeno puede inducir una respuesta inmunitaria contra un virus que infecta a peces, tal como: virus de la anemia infecciosa del salmón (ISAV), virus de la enfermedad pancreática del salmón (SPDV), virus de la necrosis pancreática infecciosa (IPNV), virus del siluro del canal (CCV), virus de la enfermedad linfoquística de los peces (FLDv ), virus de la necrosis hematopoyética infecciosa (IHNV), herpesvirus de la carpa koi, virus de tipo picorna del salmón (también conocido como virus de tipo picorna del salmón atlántico), virus del salmón de interior (LSV), rotavirus del salmón atlántico (ASR), virus de las manchas de fresa de la trucha (TSD), virus tumoral del salmón plateado (CSTV) o virus de la septicemia hemorrágica vírica (VHSV).
Pueden obtenerse inmunógenos fúngicos de dermatófitos, incluyendo: Epidermophyton floccusum, Microsporum audouini, Microsporum canis, Microsporum distortum, Microsporum equinum, Microsporum gypsum, Microsporum nanum, Trichophyton concentricum, Trichophyton equinum, Trichophyton gallinae, Trichophyton gypseum, Trichophyton megnini, Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton quinckeanum, Trichophyton rubrum, Trichophyton schoenleini, Trichophyton tonsurans, Trichophyton verrucosum, T. verrucosum var. album, var. discoides, var. ochraceum, Trichophyton violaceum y/o Trichophyton faviforme; o de Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Aspergillus nidulans, Aspergillus terreus, Aspergillus sydowi, Aspergillus flavatus, Aspergillus glaucus, Blastoschizomyces capitatus, Candida albicans, Candida enolase, Candida tropicalis, Candida glabrata, Candida krusei, Candida parapsilosis, Candida stellatoidea, Candida kusei, Candida parakwsei, Candida lusitaniae, Candida pseudotropicalis, Candida guilliermondi, Cladosporium carrionii, Coccidioides immitis, Blastomyces dermatidis, Cryptococcus neoformans, Geotrichum clavatum, Histoplasma capsulatum, Klebsiella pneumoniae, Microsporidia, Encephalitozoon spp., Septata intestinalis y Enterocytozoon bieneusi; los menos habituales son Brachiola spp, Microsporidium spp., Nosema spp., Pleistophora spp., Trachipleistophora spp., Vittaforma spp., Paracoccidioides brasiliensis, Pneumocystis carinii, Pythiumn insidiosum, Pityrosporum ovale, Sacharomyces cerevisae, Saccharomyces boulardii, Saccharomyces pombe, Scedosporium apiosperum, Sporothrix schenckii, Trichosporon beigelii, Toxoplasma gondii, Penicillium marneffei, Malassezia spp., Fonsecaea spp., Wangiella spp., Sporothrix spp., Basidiobolus spp., Conidiobolus spp., Rhizopus spp, Mucor spp, Absidia spp, Mortierella spp, Cunninghamella spp, Saksenaea spp., Alternaria spp, Curvularia spp, Helminthosporium spp, Fusarium spp, Aspergillus spp, Penicillium spp, Monolinia spp, Rhizoctonia spp, Paecilomyces spp, Pithomyces spp y Cladosporium spp.
Como se describe en el presente documento, el inmunógeno puede inducir una respuesta inmunitaria contra un parásito del género Plasmodium, tal como P. falciparum, P. vivax, P. malariae o P. ovale. Por tanto, la invención se puede usar para inmunizar contra el paludismo. Como se describe en el presente documento, el inmunógeno puede inducir una respuesta inmunitaria contra un parásito de la familia Caligidae, en particular los de los géneros Lepeophtheirus y Caligus, por ejemplo, piojos de mar tales como Lepeophtheirus salmonis o Caligus rogercresseyi.
Como se describe en el presente documento, el inmunógeno puede inducir una respuesta inmunitaria contra: alérgenos de polen (alérgenos de polen de árboles, herbáceas, hierbas y céspedes); alérgenos de insectos o arácnidos (alérgenos inhalantes, de saliva y de veneno, por ejemplo, alérgenos de ácaros, cucarachas y mosquitos, alérgenos de veneno de himenópteros); alérgenos de pelo y caspa de animales (de, por ejemplo, perro, gato, caballo, rata, ratón, etc.); y alérgenos de alimentos (por ejemplo, una gliadina). Los alérgenos de polen importantes de árboles, hierbas y herbáceas son los que se originan de los órdenes taxonómicos de Fagales, Oleales, Pinales y platanáceas incluyendo, pero sin limitación, abedul (Betula), aliso (Alnus), avellano (Corylus), carpe (Carpinus) y olivo (Olea), cedro (Cryptomeria y Juniperus), plátano (Platanus), el orden de Poales incluyendo hierbas de los géneros Lolium, Phleum, Poa, Cynodon, Dactylis, Holcus, Phalaris, Secale y Sorghum, los órdenes de Asterales y Urticales incluyendo hierbas de los géneros Ambrosia, Artemisia y Parietaria. Otros alérgenos de inhalación importantes son los de ácaros del polvo domésticos del género Dermatophagoides y Euroglyphus, ácaros de los silos por ejemplo, Lepidoglyphys, Glycyphagus y Tyrophagus, los de cucarachas, mosquitos y pulgas, por ejemplo, Blatella, Periplaneta, Chironomus y Ctenocepphalides, y los de mamíferos tales como gato, perro y caballo, alérgenos de veneno incluyendo los que se originan de insectos picadores o mordedores tales como los del orden taxonómico de Hymenoptera incluyendo abejas (Apidae), avispas (Vespidea) y hormigas (Formicoidae).
Como se describe en el presente documento, el inmunógeno puede ser un antígeno tumoral seleccionado de: (a) antígenos de cáncer de testículo tales como NY-ESO-1, SSX2, SCP1 así como polipéptidos de las familias RAGE, BAGE, GAGE y MAGE, por ejemplo, GAGE-1, GAGE-2, MAGE-1, MAGE-2, MAGE-3, MAGE-4, MAGE-5, MAGE-6 y MAGE-12 (que pueden usarse, por ejemplo, para abordar el melanoma, tumores de pulmón, cabeza y cuello, NSCLC, de mama, gastrointestinal y de vejiga; (b) antígenos mutados, por ejemplo, p53 (asociado con diversos tumores sólidos, por ejemplo, cáncer colorrectal, de pulmón, cabeza y cuello), p21/Ras (asociado con, por ejemplo, melanoma, cáncer pancreático y colorrectal), CDK4 (asociado con, por ejemplo, melanoma), MUM1 (asociado con, por ejemplo, melanoma), caspasa-8 (asociado con, e.g., cáncer de cabeza y cuello), CIA 0205 (asociado con, por ejemplo, cáncer de vejiga), HLA-A2-R1701, beta catenina (asociado con, por ejemplo, melanoma), TCR (asociado con, por ejemplo, linfoma no hodgkiniano de linfocitos T), BCR-abl (asociado con, por ejemplo, leucemia mielógena crónica), triosafosfato isomerasa, KIA 0205, CDC-27 y LDLR-FUT; (c) antígenos sobreexpresados, por ejemplo, Galectina 4 (asociado con, por ejemplo, cáncer colorrectal), Galectina 9 (asociado con, por ejemplo, enfermedad de Hodgkin), proteinasa 3 (asociado con, por ejemplo, leucemia mielógena crónica), WT 1 (asociado con, por ejemplo, diversas leucemias), anhidrasa carbónica (asociado con, por ejemplo, cáncer renal), aldolasa A (asociado con, por ejemplo, cáncer de pulmón), PRAME (asociado con, por ejemplo, melanoma), HER-2/neu (asociado con, por ejemplo, cáncer de mama, colon, pulmón y ovario), mamaglobina, alfafetoproteína (asociado con, por ejemplo, hepatoma), KSA (asociado con, por ejemplo, cáncer colorrectal), gastrina (asociado con, por ejemplo, cáncer pancreático y gástrico), proteína catalítica de la telomerasa, MUC-1 (asociado con, por ejemplo, cáncer de mama y ovario), G-250 (asociado con, por ejemplo, carcinoma de células renales), p53 (asociado con, por ejemplo, cáncer de mama, colon) y antígeno carcinoembrionario (asociado con, por ejemplo, cáncer de mama, cáncer de pulmón y cánceres del tracto gastrointestinal tales como cáncer colorrectal); (d) antígenos compartidos, por ejemplo, antígenos de diferenciación de melanoma-melanocitos tales como MART-1/Melan A, gp100, MC1R, receptor hormonal estimulante de melanocitos, tirosinasa, proteína 1 relacionada con la tirosinasa/TRP1 y proteína 2 relacionada con la tirosinasa/TRP2 (asociado con, por ejemplo, melanoma); (e) antígenos asociados a próstata tales como PAP, PSA, PSMA, PSH-P1, PSM-P1, PSM-P2, asociados con por ejemplo, cáncer de próstata; (f) idiotipos de inmunoglobulina (asociados con mieloma y linfomas de linfocitos B, por ejemplo). En determinadas realizaciones, los inmunógenos tumorales incluyen, pero sin limitación, p15, Hom/Mel-40, H-Ras, E2A-PRL, H4-RET, IGH-IGK, MYL-RAR, antígenos del virus de Epstein Barr, EBNA, antígenos del papilomavirus humano (PVH), incluyendo E6 y E7, antígenos de virus de la hepatitis B y C, antígenos de virus linfotrópicos humanos de linfocitos T, TSP-180, p185erbB2, p180erbB-3, c-met, mn-23H1, TAG-72-4, CA 19-9, CA 72-4, CAM 17,1, NuMa, K-ras, p16, TAGE, PSCA, CT7, 43-9F, 5T4, 791 Tgp72, beta-HCG, BCA225, BTAA, CA 125, CA 15-3 (CA 27,29\BCAA), CA 195, CA 242, CA-50, CAM43, CD68\KP1, CO-029, FGF-5, Ga733 (EpCAM), HTgp-175, M344, MA-50, MG7-Ag, MOV18, NB/70K, NY-CO-1, RCAS1, SDCCAG16, TA-90 (proteína de unión a Mac-2/proteína asociada a ciclofilina C), TAAL6, TAG72, TLP, TPS y similares.
Una composición farmacéutica de la divulgación, particularmente una útil para inmunización, puede incluir uno o más inmunopotenciadores de moléculas pequeñas. Por ejemplo, la composición puede incluir a agonista de TLR2 (por ejemplo, Pam3CSK4), un agonista de TLR4 (por ejemplo, un glucosaminida fosfato de aminoalquilo, tal como E6020), un agonista de TLR7 (por ejemplo, imiquimod), un agonista de TLR8 (por ejemplo, resiquimod) y/o un agonista de TLR9 (por ejemplo, IC31). Cualquiera de dichos agonistas tiene idealmente un peso molecular de <2000 Da. Dicho agonista o agonistas pueden, como se describe en el presente documento, estar encapsulados con ARN dentro de liposomas o pueden estar sin encapsular.
EJEMPLOS - los ejemplos marcados con * están fuera del alcance de la invención
Lípidos catiónicos de Fórmula (I)
Los siguientes ejemplos pretenden ilustrar la invención y no deben interpretarse como limitaciones de la misma. Las temperaturas se indican en grados centígrados. Si no se menciona lo contrario, todas las concentraciones evaporativas se realizan a presión reducida, preferentemente entre aproximadamente 15 mm de Hg y 100 mm de Hg (= 20-133 mbar). La estructura de los productos finales, compuestos intermedios y materiales de partida se confirma mediante métodos analíticos convencionales, por ejemplo, microanálisis y características espectroscópicas, por ejemplo, MS, IR o RMN. Las abreviaturas utilizadas son las convencionales en la técnica, algunas de las cuales se definen a continuación.
La purificación en columna ultrarrápida se realiza preferentemente sobre gel de sílice usando un eluyente apropiado de composición isocrática o en gradiente.
El análisis por HPLC se realiza sobre una columna Waters Atlantis dC18 (4,6 x 150 mm, 3 mm), con elución en gradiente (acetonitrilo del 0 % al 95 % en agua modificado con ácido trifluoroacético al 0,1 % v/v durante 20 min y un caudal de 1,4 ml/min), a menos que se describa otra cosa.
Los espectros de 1H RMN se registraron en un espectrómetro Bruker Avance II 400 MHz. Todos los desplazamientos químicos se indican en partes por millón (8) con respecto a tetrametilsilano. Las siguientes abreviaturas se usan para indicar patrones de señales: s = singlete, d = doblete, t = triplete, c = cuadruplete, quint. = quintuplete, m = multiplete, a = ancho. Los datos de ES-MS se registraron usando un espectrómetro de masas Waters LTC Premier con una fuente de ionización por electronebulización dual en un cromatógrafo de líquidos Agilent 1100. Se usó sulfadimetoxina [Sigma, m/z = 311,0814 (M+1)] como referencia adquirida a través del canal LockSpray™ cada tres barridos.
Abreviaturas
C
Centígrados
DCM
diclorometano
O
grados
DIEA
W,W-d¡¡soprop¡let¡lam¡na
DIPEA
W,W-d¡¡soprop¡let¡lam¡na
DMAP
4-dimetilaminopiridina
DMF
N,N-d¡met¡lformam¡da
DMSO
d¡met¡lsulfóx¡do
EDC
1-et¡l-3-(3-d¡met¡lam¡noprop¡l)carbod¡¡m¡da
ES-MS
espectroscopia de masas por electropulver¡zac¡ón
EtOAc
acetato de et¡lo
EtOH
etanol
g
gramo
h
hora(s)
HATU
hexafluorofosfato de 2-(1H-7-azabenzotr¡azol-1-¡l)-1,1,3,3-tetramet¡luron¡o HOBt
h¡drox¡benzotr¡azol
HPLC
cromatografía líqu¡da de alta resoluc¡ón
kg
k¡logramo
l
l¡tro
LAH
h¡druro de l¡t¡o y alum¡n¡o
LC
cromatografía líquida
LCMS
cromatografía líquida y espectrometría de masas MeOH
metanol
MS
espectrometría de masas
mbar
milibar
min
minutos
ml
mililitro(s)
mm
milímetro
pM
micromolar
m/z
relación entre masa y carga
nm
nanómetro
nM
nanomolar
N
normal
NaOEt
etilóxido de sodio
NMP
N-metilpirrolidona
RMN
resonancia magnética nuclear
Pd/C
paladio sobre carbono
PdCl2(dppf)CH2Cl2
complejo de dicloruro de 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno-paladio (II) y diclorometano psi
libras por pulgada cuadrada
ppm
partes por millón
pTsOH
ácido p-toluenosulfónico
quint.
quintuplete
rac.
racémico
Tr
tiempo de retención
TBAF
fluoruro de tetrabutilamonio
TBDPS
terc-butildifenilsilil éter
TBTU
tetrafluoroborato de O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio
TCEP
tris(2-carboxietil)fosfina
TEA
trietilamina
TFA
ácido trifluoroacético
THF
tetrahidrofurano
THP
tetrahidropirano
TLC
cromatografía de capa fina
TMS-CN
cianuro de trimetilsililo
TsOH
ácido tosílico
* Síntesis del Ejemplo 1:
Intermedio 1a: 3,5-bis((Z)-octadec-9-en-1-iloxi)benzaldehído
Figure imgf000055_0001
A un matraz que contenía DMF (40 ml) se le añadieron 3,5-dihidroxibenzaldehído (2 g, 14,2 mmol), carbonato potásico (5,88 g, 42,6 mmol) y mesilato de oleílo (11,3 g, 32,6 mmol). La mezcla resultante se calentó a 80 °C durante una noche con agitación. La reacción se enfrió y se añadieron agua y EtOAc. La capa orgánica se recogió, se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de magnesio. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida para dar un material en bruto que se purificó sobre sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente, proporcionando 8,53 g del producto deseado. TLC (gel de sílice, EtOAc al 10 % en heptanos): Fr = 0,56.
Compuesto del Ejemplo 1: 1-(3,5-bis((Z)-octadec-9-en-1-iloxi)fenil)-N,N-dimetilmetanamina
Figure imgf000055_0002
El Intermedio 1a (4 g, 6,26 mmol) se agitó en EtOH (25 ml) y se añadió clorhidrato de dimetilamina (1,02 g, 12,5 mmol) seguido de TEA (1,21 ml, 8,76 mmol) y tetraisopropóxido de titanio (1,8 ml, 6,3 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 3 h a temperatura ambiente y se añadió en una porción borohidruro sódico (355 mg, 9,39 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La reacción se interrumpió con amoniaco 7 N en MeOH (8,94 ml, 62,6 mmol) y la suspensión de color blanco resultante se filtró a través de celite con un lavado con DCM. El filtrado se concentró a presión reducida para producir un material en bruto que se purificó sobre sílice en EtOAc del 0 al 50 % en heptanos, proporcionando 2,66 g del producto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 8: 6,46 (d, J = 2,0 Hz, 2 H), 6,36 (t, J = 2,5 Hz, 1 H), 5,41 - 5,31 (m, 4 H), 3,93 (t, J = 6,9 Hzm 4 H), 3,34 (s, 2 H), 2,24 (s, 6 H), 2,09 - 1,98 (m, 8 H), 1,81 -1,69 (m, 4 H), 1,50 -1,21 (m, 44 H), 0,89 (t, J = 7,0 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 668,8 (MH+).
Los Ejemplos 2 - 7 pueden prepararse usando métodos similares a los empleados para la preparación del Ejemplo 1. * Ejemplo 2: 1-(3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenil)-N,N-dimetilmetanamina 1
Figure imgf000055_0003
1H RMN (400 MHz, CDCla) 8: 6,46 (d, J = 2,5 Hz, 2 H), 6,35 (t, J = 2,3 Hz, 1 H), 5,44 - 5,30 (m, 8 H), 3,93 (t, J = 6,5 Hz, 4 H), 3,34 (s, 2 H), 2,78 (t, J = 6,2 Hz, 4 H), 2,24 (s, 6 H), 2,13 - 1,99 (m, 8 H), 1,81 - 1,71 (m, 4 H), 1,49 - 1,23 (m, 32 H), 0,90 (t, J = 6,8 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 664,9 (MH+).
* Ejemplo 3: 2,2'-((3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)bencil)azanodiil)dietanol
Figure imgf000056_0001
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 5: 6,46 - 6,44 (m, 2 H), 6,38 - 6,34 (m, 1 H), 5,44 - 5,29 (m, 8 H), 3,92 (t, J = 6,5 Hz, 4 H), 3,69 - 3,63 (m, 6 H), 2,82 -2,71 (m, 8 H), 2,12 -2,00 (m, 8 H), 1,82 - 1,70 (m, 4 H), 1,51 -1,22 (m, 32 H), 0,90 (t, J = 6,9 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 724,6 (MH+).
* Ejemplo 4: 1-(3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)bencil)pirrolidina
Figure imgf000056_0002
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 5: 6,52 - 6,47 (m, 2 H), 6,36 - 6,32 (m, 1 H), 5,47 - 5,26 (m, 8 H), 3,93 (t, J = 6,6 Hz, 4 H), 3,55 (s, 2 H), 2,83 -2,74 (m, 4 H), 2,57 -2,47 (m, 4 H), 2,14 -2,00 (m, 8 H), 1,86 - 1,70 (m, 8 H), 1,52 -1,21 (m, 32 H), 0,90 (t, J = 6,8 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 690,5 (MH+).
* Ejemplo 5: 1 -(3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iIoxi)benciI)azetidin-3-oI
Figure imgf000056_0003
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 5: 6,49 (d, J = 2,0 Hz, 2H), 6,42 (t, J = 2,1 Hz, 1H), 5,33 - 5,47 (m, 7H), 4,46 (tt, J = 6,7, 3,6 Hz, 1H), 3,94 (t, J = 6,7 Hz, 4H), 3,76 - 3,85 (m, 4H), 3,59 (d, J = 10,3 Hz, 2H), 2,80 (t, J = 6,5 Hz, 4H), 2,00 - 2,12 (m, 8H), 1,78 (dtd, J = 7,8, 6,8, 5,8 Hz, 4H), 1,41 -1,51 (m, 4H), 1,25 -1,41 (m, 27H), 0,83 -0,95 (m, J = 6,8, 6,8 Hz, 5H) ppm. ES-MS m/z = 692,5 (MH+).
* EjempIo 6: 2-((3,5-bis((Z)-octadec-9-en-1-iIoxi)benciI)(metiI)amino)acetato de etiIo
Figure imgf000056_0004
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 56,50 (s, 2 H), 6,36 (s, 1 H), 5,39-5,32 (m, 4 H), 4,18 (c, J = 7,0 Hz, 2 H), 3,92 (t, J = 6,5 Hz, 4 H), 3,60 (s, 2 H), 3,24 (s, 2 H), 2,40 (s, 3 H), 2,10-1,95 (m, 8 H), 1,80-1,60 (m, 4 H), 1,50-1,15 (m, 47 H), 0,88 (t, J = 7,0 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 740,9 (MH+).
* EjempIo 7: 1-(3,5-bis((Z)-octadec-9-en-1-iIoxi)benciI)pirroIidina 1
Figure imgf000056_0005
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 56,53 (s, 2 H), 6,35 (s, 1 H), 5,38-5,30 (m, 4 H), 3,92 (t, J = 6,5 Hz, 4 H), 3,62 (s, a, 2 H), 2,62 (m, 4 H), 2,10-1,95 (m, 8 H), 1,90-1,80 (m, 4 H), 1,80-1,65 (m, 4 H), 1,50-1,20 (m, 43 H), 0,87 (t, J = 7,0 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 694,9 (MH+).
* Ejemplo 8: ácido 2-((3,5-bis((Z)-octadec-9-en-1-iloxi)bencil)(metil)amino)acético
Figure imgf000057_0001
A una solución del compuesto del Ejemplo 6 (160 mg, 0,22 mmol) en dioxano (7 ml) se le añadió HCl al 50 % en agua (6,57 ml). La mezcla se calentó a reflujo durante una noche y después se enfrió a temperatura ambiente. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el material resultante se purificó usando resina de intercambio catiónico fuerte seguido de cromatografía en columna sobre sílice usando DCM/MeOH como eluyente, proporcionando 123 mg del producto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 810,34 (s, a, 1 H), 6,57 (s, 2 H), 6,42 (s, 1 H), 5,38-5,30 (m, 4 H), 4,17 (s, 2 H), 3,87 (t, J = 6,5 Hz, 4 H), 3,51 (s, 2 H), 2,77 (s, 3 H), 2,10-1,95 (m, 8 H), 1,80-1,60 (m, 4 H), 1,50-1,15 (m, 44 H), 0,87 (t, J = 7,0 Hz, 6 H) ppm. 13C RMN (100 MHz, CDCla) 8 168,6, 160,6, 132,3, 129,9, 129,7, 109,0, 101,8, 68,1, 60,0, 57,6, 41,1, 31,8, 29,7, 29,5, 29,5, 29,4, 29,4, 29,2, 29,2, 27,2, 26,0, 22,6, 14,1 ppm.
* Síntesis del Ejemplo 9:
Intermedio 9a: ((2-(3,5-bis((Z)-octadec-9-en-1-iloxi)fenil)-1,3-dioxolan-4-il)metoxi)(terc-butil)difenilsilano
Figure imgf000057_0002
Al Intermedio 1a (1 g, 1,56 mmol) en MePh (30 ml) se le añadieron glicerol protegido con TBDPS (0,52 g, 1,56 mmol) y TsOH monohidrato (0,03 g, 0,16 mmol). La mezcla se calentó a reflujo durante una noche y después se enfrió a temperatura ambiente. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el material resultante se purificó sobre sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente, proporcionando 1,28 g de una mezcla que contenía el producto deseado.
TLC (gel de sílice, EtOAc al 10 % en heptanos): Fr = 0,45.
Intermedio 9b: (2-(3,5-bis((Z)-octadec-9-en-1-iloxi)fenil)-1,3-dioxolan-4-il)metanol
Figure imgf000057_0003
A una solución del Intermedio 9a (1,28 g, 1,34 mmol) en THF (10 ml) se le añadió TBAF (9,9 ml, 1,0 M en THF, 9,93 mmol). La solución resultante se agitó durante una noche a temperatura ambiente. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el material resultante se purificó sobre sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente, proporcionando 638 mg (67 %) del producto deseado.
TLC (gel de sílice, EtOAc al 50 % en heptanos): Fr = 0,65.
Intermedio 9c: metanosulfonato de (2-(3,5-bis((Z)-octadec-9-en-1-iloxi)fenil)-1,3-dioxolan-4-il)metilo
A una solución del Intermedio 9b (638 mg, 0,895 mmol) en DCM (20 ml) se le añadieron DIEA (0,78 ml, 4,5 mmol) y MsCI (0,35 ml, 4,5 mmol). La solución resultante se agitó durante 30 min. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el material resultante se usó sin purificación adicional.
ES-MS m/z = 791,4 (MH+).
Compuesto del Ejemplo 9: 1-((2-(3,5-bis((Z)-octadec-9-en-1-iloxi)fenil)-1,3-dioxolan-4-il)metil)pirrolidina
Figure imgf000058_0001
Una solución del Intermedio 9c (708 mg, 0,895 mmol) se disolvió en pirrolidina (3,0 ml, 36,2 mmol) y se calentó a 140 °C en un reactor de microondas. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el material resultante se purificó sobre sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente, proporcionando 292 mg del producto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 86,62 (dd, J = 6,0 Hz, 2,5 Hz, 2 H), 6,44-6,42 (m, 1 H), 5,89 (s, 0,50 H), 5,75 (s, 0,50 H), 5,37­ 5,35 (m, 4 H), 4,42-4,33 (m, 1 H), 4,26-4,23 (m, 0,50 H), 4,12 (dd, J = 7,8 Hz, 6,8 Hz, 0,50 H), 3,93 (t, J = 6,3 Hz, 4 H), 3,80 (dd, J = 7,8 Hz, 6,8 Hz, 0,50 H), 3,71-3,67 (m, 0,50 H), 2,81-2,73 (m, 2 H), 2,65-2,57 (m, 4 H), 2,05-2,00 (m, 8 H), 1,81-1,73 (m, 8 H), 1,48-1,27 (m, 44 H), 0,89 (m, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 766,6 (MH+).
Los Ejemplos 10 y 11 pueden prepararse usando métodos similares a los empleados para la preparación del Ejemplo 9. * Ejemplo 10: 1-(2-(3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenil)-1,3-dioxolan-4-il)-N,N-dimetilmetanamina
Figure imgf000058_0002
1H RMN (400 MHz, COCla) 86,59 -6,65 (m, 2H), 6,44 (t, J = 2,3 Hz, 1H), 5,75 (s, 1H), 5,32 -5,44 (m, 6H), 4,32 -4,42 (m, 1H), 4,08 - 4,18 (m, 1H), 3,94 (t, J = 6,5 Hz, 4H), 3,78 (dd, J = 8,0, 6,5 Hz, 1H), 2,74 - 2,83 (m, 4H), 2,51 - 2,66 (m, 2H), 2,31 -2,37 (m, 6H), 2,00 -2,11 (m, 8H), 1,68 - 1,85 (m, 6H), 1,20 - 1,50 (m, 32H), 0,84 -0,93 (m, 6H) ppm.
ES-MS m/z = 736,5 (MH+).
* Ejemplo 11: 1-((2-(3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenil)-1,3-dioxolan-4-il)metil)piperidina 1
Figure imgf000058_0003
1H RMN (400 MHz, CDCh) 86,63 (d, J = 2,0 Hz, 2H), 6,45 (t, J = 2,3 Hz, 1H), 5,74 (s, 1H), 5,29 - 5,48 (m, 8H), 4,38 (t, J = 6,1 Hz, 1H), 4,07 - 4,15 (m, 1H), 3,96 (t, J = 6,6 Hz, 4H), 3,78 (dd, J = 8,1, 6,6 Hz, 1H), 2,80 (t, J = 6,3 Hz, 4H), 2,62 -2,72 (m, 1H), 2,50 - 2,62 (m, 4H), 2,40 - 2,50 (m, 2H), 2,08 (d, J = 7,1 Hz, 4H), 1,70 - 1,83 (m, 4H), 1,53 - 1,70 (m, 7H), 1,23 - 1,53 (m, 34H), 0,91 (t, J = 7,1 Hz, 6H) ppm.
ES-MS m/z 776,7 (MH+).
* Ejemplo 12: 2-(dimetilamino)acetato de (2-(3,5-bis((Z)-octadec-9-en-1-iloxi)fenil)-1,3-dioxolan-4-il)metilo
Figure imgf000059_0001
A una solución del Intermedio 9b (2,42 g, 3,39 mmol) en DCM (30 ml) se le añadió N,N-dimetilglicina (0,38 g, 3,73 mmol), seguido de HATU (1,55 g, 4,07 mmol) y piridina (1,1 ml, 13 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el material resultante se purificó sobre sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente, proporcionando 1,14 g del producto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 86,60 (dt, J = 8,8 Hz, 2,0 Hz, 2 H), 6,44-6,41 (m, 1 H), 5,87 (s, 0,33 H), 5,73 (s, 0,33 H), 5,45 (s, 0,33 H), 5,36-5,30 (m, 4 H), 4,74 (m, 0,33 H), 3,91 (m, 0,33 H), 3,76 (m, 0,33 H), 4,50-4,06 (m, 4 H), 3,91 (t, J = 6,5 Hz, 4 H), 3,31 (s, 0,66 H), 3,22 (s, 0,66 H), 3,19 (s, 0,66 H), 2,38 (s, 2 H), 2,36 (s, 2 H), 2,34 (s, 2 H), 2,04-1,99 (m, 8 H), 1,78­ 1,71 (m, 4 H), 1,50-1,26 (m, 44 H), 0,87 (t, J = 7,0 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 798,5 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 13:
Intermedio 13a: (3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenil)metanol
Figure imgf000059_0002
Al Intermedio 1a (1,5 g, 2,4 mmol) en THF (10 ml) y MeOH (5 ml) se le añadió borohidruro sódico (0,116 g, 3,07 mmol). La mezcla resultante se agitó durante una noche y después se inactivó con MeOH y agua. El material resultante se extrajo con EtOAc y las capas orgánicas se secaron sobre sulfato sódico. El material se decantó y los volátiles se eliminaron a presión reducida. El material se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Compuesto del Ejemplo 13: 4-(dimetilamino)butanoato de 3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)bencilo
Figure imgf000059_0003
Al Intermedio 13a (486 mg, 0,762 mmol) en DCM (5 ml) se le añadió ácido 4-dimetilaminobutanoico (100 mg, 0,762 mmol), seguido de DIEA (0,32 ml, 1,83 mmol), DMAP (50 mg, 0,41 mmol) y EDC (175 mg, 0,92 mmol). La mezcla resultante se agitó durante una noche a temperatura ambiente y se purificó directamente sobre sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente, proporcionando 319 mg (56 %) del producto deseado.
1H RMN (400 MHz, COCla) 86,48 - 6,45 (m, 2H), 6,41 - 6,38 (m, 1 H), 5,44 - 5,29 (m, 8 H), 5,04 (s, 2 H), 3,92 (t, J = 6,5 Hz, 4 H), 2,81 -2,75 (m, 4 H), 2,41 (t, J = 7,5 Hz, 2 H), 2,29 (t, J = 7,3 Hz, 2 H), 2,21 (s, 6 H), 2,10 -2,00 (m, 8 H), 1,87 -1,71 (m, 6 H), 1,51 - 1,23 (m, 32 H), 0,90 (t, J = 6,8 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 750,7 (MH+).
Los Ejemplos 14 -17 pueden prepararse usando métodos similares a los empleados para la preparación del Ejemplo 13.
* Ejemplo 14: 3-(dimetilamino)propanoato de 3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)bencilo
Figure imgf000059_0004
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 56,49 - 6,46 (m, 2 H), 6,42 - 6,39 (m, 1 H), 5,44 - 5,29 (m, 8 H), 5,05 (s, 2 H), 3,93 (t, J = 6,8 Hz, 4 H), 2,82 -2,75 (m, 4 H), 2,68 -2,61 (m, 2 H), 2,59 -2,52 (m, 2H), 2,25 (s, 6 H), 2,12 -2,01 (m, 8 H), 1,82 -1,71 (m, 4 H), 1,52 - 1,23 (m, 32 H), 0,90 (t, J = 6,8 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 736,8 (MH+).
* Ejemplo 15: 2-(dimetilamino)acetato de 3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)bencilo
Figure imgf000060_0001
1H RMN (400 MHz, COCI3) 56,51 - 6,46 (m, 2 H), 6,42 - 6,39 (m, 1 H), 5,46 - 5,29 (m, 8 H), 5,09 (s, 2 H), 3,92 (t, J = 6,5 Hz, 4 H), 3,23 (s, 2 H), 2,83 -2,75 (m, 4 H), 2,37 (s, 6 H), 2,12 -2,00 (m, 8 H), 1,83 - 1,70 (m, 4 H), 1,50 - 1,23 (m, 32 H), 0,89 (t, J = 6,8 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 722,4 (MH+).
* Ejemplo 16: 3-(dimetiIamino)propanoato de 4-metiI-3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iIoxi)benciIo
Figure imgf000060_0002
1H RMN (400 MHz, COCI3) 56,51 (s, 2 H), 5,31 - 5,45 (m, 8 H), 5,07 (s, 2 H), 3,97 (t, J=6,6 Hz, 4 H), 2,80 (dd, J=6,3, 6,3 Hz, 4 H), 2,68 (t, J=7,1 Hz, 2 H), 2,54 (t, J=7,3 Hz, 2 H), 2,27 (s, 6 H), 2,04 - 2,13 (m, 11 H), 1,76 - 1,85 (m, 4 H), 1,46 -1,53 (m, 4 H), 1,26 - 1,45 (m, 32 H), 0,92 (t, J=6,8 Hz, 5 H), 0,93 (s a., 1 H) ppm.
ES-MS m/z = 750,5 (MH+).
* EjempIo 17: 3-(dimetiIamino)-2-metiIpropanoato de 3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iIoxi)benciIo
Figure imgf000060_0003
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 56,40 (d, J = 2,0 Hz, 2 H), 6,34 - 6,29 (m, 1 H), 5,36 - 5,21 (m, 8 H), 4,98 (s, 2 H), 3,85 (t, J = 6,6 Hz, 4 H), 2,70 (t, J = 6,3 Hz, 4 H), 2,66 -2,54 (m, 2 H), 2,14 (s, 6 H), 1,98 (c, J = 6,6 Hz, 8 H), 1,72 - 1,64 (m, 4 H), 1,42 - 1,34 (m, 4 H), 1,33 -1,16 (m, 36 H), 1,10 (d, J = 6,6 Hz, 3 H), 0,85 - 0,79 (m, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 750,3 (MH+).
* Síntesis deI EjempIo 18:
Intermedio 18a: octadeca-9,12-dienoato de (9Z,12Z)-2-hidroxietiIo
Figure imgf000060_0004
Se disoIvió ácido IinoIeico (5,0 g, 17,83 mmoI) en 39,9 mI etiIengIicoI con agitación. A Ia mezcIa se Ie añadieron EDC (5,136 g, 26,7 mmoI) y HOBt (4,10 g, 26,7 mmoI) seguido de trietiIamina (7,45 mI, 53,5 mmoI). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 48 horas y se comprobó que se había compIetado por TLC. EI producto en bruto se diIuyó en 100 mI de dicIorometano y se Iavó con 50 mI de agua y 50 mI de saImuera. La capa orgánica se separó y se secó sobre suIfato sódico anhidro. EI producto en bruto se cargó en seco sobre ceIite y se purificó por cromatografía sobre geI de sílice con un gradiente del 10 al 40% de EtOAc en heptanos. El producto se recuperó en forma de un aceite transparente (3,884 g, 67,1 %).
TLC (gel de sílice, EtOAc al 20 % en heptanos): Fr = 0,22.
Intermedio 18b: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-formil-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(etano-2,1-diílo)
Figure imgf000061_0001
El Intermedio 18a (1,5 g, 4,62 mmol), 3,5-dihidroxibenzaldehído (0,319 g, 2,311 mmol) y trifenilfosfina (1,273 g, 4,85 mmol) se disolvieron en 19 ml de THF anhidro. Se añadió DIAD (0,944 ml, 4,85 mmol) y la reacción se dejó en agitación 48 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró directamente sobre celite y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con un gradiente del 10 al 20 % de EtOAc en heptanos. El producto se aisló en forma de un aceite incoloro (1,077 g, 62,1 %).
1H RMN (400 MHz, CDCla) 89,92 (s, 1H), 7,06 (d, J = 2,3 Hz, 2H), 6,76 (t, J = 2,3 Hz, 1H), 5,31 -5,43 (m, 8H), 4,43 -4,49 (m, 4H), 4,20 -4,26 (m, 4H), 2,78 (t, J = 6,4 Hz, 4H), 2,37 (t, J = 7,7 Hz, 4H), 2,01 -2,11 (m, 8H), 1,58 -1,71 (m, 5H), 1,24 - 1,42 (m, 30H), 0,90 (t, J = 6,8 Hz, 6H) ppm.
Intermedio 18c: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-(hidroximetil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(etano-2,1-diílo)
Figure imgf000061_0002
El Intermedio 18b (465,2 mg, 0,619 mmol) se disolvió en 4,1 ml de etanol seco en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió borohidruro sódico (46,9 mg, 1,239 mmol) en una porción y se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La reacción se controló para determinar que se había completado por TLC. La reacción se interrumpió con ácido acético y se diluyó con 10 ml de agua y se extrajo en 30 ml de DCM.
Las capas orgánicas resultantes se combinaron, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron. El producto se recuperó como 429 mg de un aceite transparente.
TLC (gel de sílice, EtOAc al 30 % en heptanos): Fr = 0,55
Compuesto del Ejemplo 18: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-(((3-(dimetilamino)propanoil)oxi)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(etano-2,1-diílo)
Figure imgf000061_0003
El Intermedio 18c (50 mg, 0,066 mmol) y ácido N,N-dimetilaminopropanoico (10,20 mg, 0,066 mmol) se disolvieron en 4 ml de DCM. Se añadió HATU (37,9 mg, 0,100 mmol) seguido de trietilamina (9,25 ul, 0,066 mmol). La reacción se agitó 18 horas a temperatura ambiente y se controló por LCMS. La reacción se diluyó con 100 ml de DCM y 50 ml de agua. Las capas orgánicas se separaron, después se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron. El producto en bruto se purificó sobre gel de sílice con metanol y diclorometano como eluyente. El producto se purificó adicionalmente por HPLC (columna Waters Sunfire C8 con 5 al 100 % de 1:1 de Acetonitrilo: Isopropanol en agua, modificado con TFA al 0,1 %). Las fracciones que contenían el producto se repartieron entre diclorometano y bicarbonato sódico acuoso saturado durante una hora. La capa de diclorometano se secó sobre sulfato sódico y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar el compuesto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 56,54 (d, J=2,26 Hz, 2 H), 6,45 (t, J=2,26 Hz, 1 H), 5,28 - 5,49 (m, 8 H), 5,07 (s, 2 H), 4,35 -4,48 (m, 4 H), 4,08 - 4,22 (m, 4 H), 2,79 (t, J=6,53 Hz, 4 H), 2,60 - 2,72 (m, 2 H), 2,49 - 2,60 (m, 2 H), 2,37 (t, J=7,65 Hz, 4 H), 2,27 (s, 6 H), 1,97 -2,14 (m, 8 H), 1,56 - 1,74 (m, 4 H), 1,23 - 1,44 (m, 28 H), 0,85 -0,97 (m, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 852,7 (MH+).
Los Ejemplos 19 - 23 pueden prepararse usando métodos similares a los empleados para la preparación del Ejemplo 18. * Ejemplo 19: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-(((3-(dimetilamino)propanoil)oxi)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(propano-3,1-diílo)
Figure imgf000062_0001
1H RMN (400 MHz, COCla) 56,50 (d, J = 2,3 Hz, 2H), 6,41 (t, J = 2,3 Hz, 1H), 5,33 - 5,44 (m, 8H), 5,07 (s, 2H), 4,27 (t, J = 6,4 Hz, 4H), 4,03 (t, J = 6,1 Hz, 4H), 2,73 - 2,78 (m, 4H), 2,64 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 2,29 - 2,37 (m, 10H), 2,12 (dd, J = 6,3, 6,3 Hz, 4H), 2,02 - 2,10 (m, 8H), 1,63 (dd, J = 7,3, 7,3 Hz, 5H), 1,25 -1,41 (m, 32H), 0,91 (t, J = 6,8 Hz, 6H) ppm.
ES-MS m/z = 880,4 (MH+).
* Ejemplo 20: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((2-(dimetilamino)acetoxi)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(propano-3,1-diílo)
Figure imgf000062_0002
1H RMN (400 MHz, CDCls) 56,51 (d, J = 2,0 Hz, 2H), 6,42 (t, J = 2,0 Hz, 1H), 5,27 - 5,47 (m, 8H), 5,11 (s, 2H), 4,27 (dd, J = 6,4, 6,4 Hz, 4H), 4,03 (dd, J = 6,1, 6,1 Hz, 4H), 3,30 (s, 2H), 2,79 (dd, J = 6,4, 6,4 Hz, 4H), 2,44 (s, 6H), 2,32 (dd, J = 7,5, 7,5 Hz, 4H), 2,03 - 2,15 (m, 12H), 1,53 - 1,77 (m, 14H), 1,25 - 1,43 (m, 32H), 0,91 (t, J = 6,8 Hz, 6H) ppm.
ES-MS m/z = 866,4 (MH+).
* Ejemplo 21: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((2-(dimetilamino)acetoxi)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo)
Figure imgf000062_0003
1H RMN (400 MHz, CDCls) 56,48 (d, J = 2,3 Hz, 2 H), 6,40 (t, J = 2,1 Hz, 1 H), 5,43 - 5,32 (m, 8 H), 5,11 (s, 2 H), 4,17 -4,10 (m, 4 H), 3,96 (dd, J = 5,6, 5,6 Hz, 4 H), 3,54 (s, 2 H), 3,20 - 3,27 (m, J = 7,3 Hz, 3 H), 2,81 (s, 22 H), 2,77 (dd, J = 6,7, 6,7 Hz, 4 H), 2,63 (s, 6 H), 2,30 (dd, J = 7,7, 7,7 Hz, 4 H), 2,01-2,08 (m, 8 H), 1,86 - 1,78 (m, 8 H), 1,66 - 1,58 (m, 5 H), 1,42 - 1,37 (m, 7 H), 1,37 - 1,23 (m, 36 H), 0,91 - 0,87 (m, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 894,5 (MH+).
* Ejemplo 22: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-(((3-(dimetilamino)propanoil)oxi)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo)
Figure imgf000063_0001
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 5: 6,48 (d, J = 2,3 Hz, 2H), 6,40 (s a, 1H), 5,32 -5,43 (m, 8H), 5,11 (s, 2H), 4,10 -4,17 (m, 4H), 3,96 (t, J = 5,6 Hz, 4H), 3,54 (s, 2H), 3,23 (c, J = 7,3 Hz, 2H), 2,77 (dd, J = 6,7, 6,7 Hz, 4H), 2,63 (s, 6H), 2,30 (dd, J = 7,7, 7,7 Hz, 4H), 2,02 - 2,07 (m, 8H), 1,79 - 1,88 (m, 8H), 1,58 - 1,68 (m, 5H), 1,23 - 1,39 (m, 38H), 0,89 (t, J = 6,5 Hz, 7H) ppm.
ES-MS m/z = 908,7 (MH+).
* Ejemplo 23: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-(((4-(dimetilamino)butanoil)oxi)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(etano-2 ,1-diílo)
Figure imgf000063_0002
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 56,84 (s, 1H), 6,74 (d, J = 1,5 Hz, 2H), 5,21 - 5,35 (m, 8H), 5,07 (s, 2H), 4,31 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 4,03 - 4,08 (m, 4H), 2,69 (t, J = 6,1 Hz, 4H), 2,47 - 2,58 (m, 8H), 2,35 - 2,41 (m, 7H), 2,23 - 2,28 (m, 5H), 1,95 - 2,00 (m, 8H), 1,79 - 1,86 (m, 2H), 1,52 - 1,59 (m, 5H), 1,17 -1,32 (m, 37H), 0,82 (t, J = 6,8 Hz, 6H) ppm.
ES-MS m/z = 866,4 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 24:
Intermedio 24a: 2,6-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iIoxi)isonicotinato de (9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iIo
Figure imgf000063_0003
Una solución de ácido citrazínico (1,8 g, 11,6 mmol) en DMF (60 ml) se agitó a temperatura ambiente y se añadieron mesilato de linoleílo (16,0 g, 46,4 mmol) y carbonato potásico (8,02 g, 58,0 mmol). La mezcla se calentó a 80 °C durante una noche y después se enfrió a temperatura ambiente y se añadieron agua (50 ml) y EtOAc (100 ml). La fase orgánica se recogió y se secó sobre sulfato sódico y después los volátiles se eliminaron a presión reducida. El material en bruto resultante se purificó sobre sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente, proporcionando 5,2 g del producto deseado.
13C RMN (100 MHz, CDCh) 5165,3, 163,5, 142,9, 130,2, 130,1, 130,1, 120,8, 127,9, 101,2, 66,6, 65,7, 31,6, 29,7, 29,7, 29,5, 29,4, 29,4, 29,3, 29,3, 29,1, 28,6, 27,2, 26,1,26,0, 25,6, 22,6, 14,1 ppm.
Intermedio 24b: ácido 2,6-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)isonicotínico
Figure imgf000063_0004
El Intermedio 24a (3,06 g, 3,40 mmol) se agitó en EtOH (15 ml) y se añadió hidróxido potásico (329 mg, 5,10 mmol). La solución turbia se volvió transparente y se añadieron agua (10 ml) y THF (8 ml). La mezcla resultante se agitó durante una noche a temperatura ambiente y después los volátiles se eliminaron a presión reducida. El residuo resultante se purificó sobre sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente, proporcionando 1,6 g del producto deseado.
ES-MS m/z = 652,4 (MH+).
Compuesto del Ejemplo 24: 2,6-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)isonicotinato de 2-(dimetilamino)etilo
Figure imgf000064_0001
El Intermedio 24b (311 mg, 0,477 mmol) se agitó en DMF (15 ml) y se añadieron HBTU (651 mg, 1,717 mmol), HOBt (120 mg, 0,444 mmol) y DIEA (0,582 ml, 3,34 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche, la reacción se vertió en agua (50 ml) y la mezcla resultante se extrajo con EtOAc. Las fases orgánicas se recogieron y se secaron sobre sulfato sódico y después se concentraron a presión reducida. El material en bruto resultante se purificó sobre sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente, proporcionando 207 mg del producto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 86,85 (s, 2 H), 5,32-5,44 (m, 8H), 4,42 (t, J= 8Hz, 2H), 4,27 (t, J= 8Hz, 2H), 2,79 (t, J= 8Hz, 2H), 2,71 (t, J= 8Hz, 2H), 2,34 (s, 6H), 2,07(dd, J= 8Hz, 8H), 1,78 (c, J=8Hz, 4H), 1,27-1,48 (m, 32H), 0,91(t, J=8Hz, 6H) ppm.
ES-MS m/z = 723,4 (MH+).
* Ejemplo 25: 2,6-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)isonicotinato de 3-(dimetilamino)propilo
Figure imgf000064_0002
El Ejemplo 25 puede prepararse métodos similares a los empleados para la preparación del Ejemplo 24.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 86,84 (s, 2 H), 5,32-5,44 (m, 8H), 4,37 (t, J= 8Hz, 2H), 4,28 (t, J= 8Hz, 4H), 2,79 (t, J= 8Hz, 4H), 2,45 (t, J= 8Hz, 2H), 2,29 (s, 6H), 2,07 (dd, J= 8Hz, 8H), 1,97 (c, J= 5Hz, 2H), 1,78 (c, J=8Hz, 6H), 1,27-1,48 (m, 32H), 0,90(t, J=8Hz, 6H) ppm.
ES-MS m/z = 737,5 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 26:
Intermedio 26a: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-5-formil-1,3-fenileno
Figure imgf000064_0003
Una solución de 3,5-dihidroxibenzaldehído (500 mg, 3,62 mmol) en DCE (9 ml) se puso en un vial para microondas y se añadieron ácido linoleico (2,03 g, 7,24 mmol), DIEA (1,26 ml, 7,24 mmol), DMAP (442 mg, 3,62 mmol) y EDC (1,74 g, 9,05 mmol). La reacción se calentó a 80 °C en un reactor de microondas durante 20 min y después se almacenó 4 °C durante 2 días. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el material resultante se purificó sobre sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente, proporcionando 1,44 g del producto deseado.
13C RMN (100 MHz, CDCh) 8190,2, 171,6, 151,7, 138., 130,3, 130,0, 128,1, 127,9, 121,5, 119,9, 34,3, 31,5, 29,6, 29,4, 29,2, 29,1, 29,1,27,2, 27,2, 25,6, 24,8, 22,6, 14,1 ppm.
Intermedio 26b: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-5-(hidroximetil)-1,3-fenileno
Figure imgf000065_0001
El Intermedio 26a (1,44 g, 2,17 mmol) se agitó en THF (18 ml) y EtOH (18 ml) y la solución resultante se enfrió en un baño de hielo. Se añadió borohidruro sódico (25 mg, 0,65 mmol) y la reacción se agitó a 0 °C durante 1 h. La reacción se diluyó con EtOAc y se lavó dos veces con agua. La capa orgánica resultante se secó sobre sulfato sódico y después los volátiles se eliminaron a presión reducida. El material en bruto se purificó sobre sílice usando heptanos/EtOAc seguido de DCM/MeOH como eluyente, proporcionando 850 mg (59 %) del producto deseado.
1H RMN (400 MHz, COCh) 87,01-6,97 (m, 2 H), 6,82-6,80 (m, 1 H), 5,45-5,30 (m, 8 H), 4,71 (s, 2 H), 2,82-2,75 (m, 4 H), 2,58-2,51 (m, 4 H), 2,12-2,01 (m, 8 H), 1,80-1,70 (m, 4 H), 1,45-1,23 (m, 28 H), 0,93-0,86 (m, 6 H) ppm.
Compuesto del Ejemplo 26: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-5-(((3-(dimetilamino)propanoil)oxi)metil)-1,3-fenileno
Figure imgf000065_0002
Al Intermedio 26b (330 mg, 0,496 mmol) en DCM (30 ml) se le añadieron clorhidrato del ácido 3-dimetilaminopropiónico (114 mg, 0,744 mmol), EDC (143 mg, 0,744 mmol), Dm Ap (6 mg, 0,05 mmol) y TEA (0,277 ml, 1,98 mmol). La mezcla resultante se agitó durante una noche a temperatura ambiente y después se purificó directamente sobre gel de sílice modificado con ácido fórmico usando heptanos/EtOAc seguido de DCM/MeOH como eluyente, proporcionando 428 mg del producto deseado en forma de la sal formiato y 697 mg en forma de la base libre. Caracterización de la sal formiato.
1H RMN (400 MHz, COCls) 88,41 (d, J=1,26 Hz, 0,5 H, formate), 6,99 (d, J=2,01 Hz, 2 H), 6,89 (t, J=2,13 Hz, 1 H), 5,26 - 5,48 (m, 8 H), 5,13 (s, 2 H), 2,93 (c, J=7,03 Hz, 2 H), 2,80 (t, J=6,80 Hz, 4 H), 2,67 - 2,77 (m, 2 H), 2,56 (t, J=7,53 Hz, 4 H), 2,45 (d, J=5,52 Hz, 6 H), 1,97 - 2,17 (m, 8 H), 1,75 (quin, J=7,47 Hz, 4 H), 1,23 - 1,50 (m, 28 H), 0,81 - 0,98 (m, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 764,6 (MH+).
* Ejemplo 27: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-5-(((4-(dimetilamino)butanoil)oxi)metil)-1,3-fenileno
Figure imgf000065_0003
El Ejemplo 27 puede prepararse métodos similares a los empleados para la preparación del Ejemplo 26.
1H RMN (400 MHz, CDCls) 86,97 (d, J = 2,0 Hz, 2H), 6,87 (t, J = 2,1 Hz, 1H), 5,27 - 5,48 (m, 8H), 5,10 (s, 2H), 2,78 (t, J = 6,5 Hz, 4H), 2,54 (t, J = 7,5 Hz, 4H), 2,41 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 2,27 -2,35 (m, 2H), 2,22 (s, 6H), 2,00 -2,12 (m, 8H), 1,82 (quin, J = 7,3 Hz, 2H), 1,74 (quin, J = 7,5 Hz, 4H), 1,23 - 1,46 (m, 28H), 0,89 (t, J = 7,0 Hz, 6H) ppm.
ES-MS m/z = 778,5 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 28:
Intermedio 28a: (2,6-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)piridin-4-il)metanol
Figure imgf000066_0001
El Intermedio 24b (3,5 g, 3,89 mmol) se agitó en THF (50 ml) y la solución se enfrió en un baño de hielo. A esta solución fría se le añadió lentamente hidruro de litio y aluminio (570 mg, 15 mmol). Después de la adición, la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante una noche. Se añadió cuidadosamente hielo y la mezcla resultante se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas se recogieron y se secaron sobre sulfato sódico y después se concentraron a presión reducida. El material en bruto resultante se purificó sobre sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente, proporcionando 1,3 g del producto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 86,27 (s, 2 H), 5,44-5,27 (m, 8 H), 4,63 (s, 2 H), 4,23 (t, J = 5,7 Hz, 4 H), 2,82-2,75 (m, 4 H), 2,10-2,02 (m, 8 H), 1,80-1,72 (m, 4 H), 1,47-1,23 (m, 32 H), 0,93-0,86 (m, 6 H) ppm.
Compuesto del Ejemplo 28: 3-(dietilamino)propanoato de (2,6-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)piridin-4-il)metilo
Figure imgf000066_0002
El Intermedio 28a (334 mg, 0,523 mmol) se agitó en DCM (20 ml) con clorhidrato del ácido 3-dietilaminopropiónico (143 mg, 0,785 mmol). Se añadió HATU (397 mg, 1,05 mmol) y la reacción se agitó durante una noche a temperatura ambiente. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el material en bruto se purificó sobre sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente, proporcionando 171 mg del producto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 86,25 (s, 2 H), 5,32-5,44 (m, 8H), 5,04 (s, 2H), 4,24 (t, J= 8Hz, 4H), 2,78-2,87 (m, 6H), 2,55 (dd, J= 8Hz, 6H), 2,07 (dd, J= 8Hz, 8H), 1,78 (c, J=8Hz, 4H), 1,27-1,48 (m, 32H), 1,05(t, J=8Hz, 6H), 0,91 (t, J=8Hz, 6H) ppm.
ES-MS m/z = 765,7 (MH+).
* Ejemplo 29: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-(5-(((3-(dimetilamino)propanoil)oxi)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno)
Figure imgf000066_0003
El Ejemplo 29 puede prepararse métodos similares a los empleados para la preparación del Intermedio 33a y el Ejemplo 18.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 87,30 (s, 3H), 5,28 - 5,45 (m, 8H), 5,14 (s, 2H), 5,11 (s, 4H), 2,77 (t, J = 6,5 Hz, 4H), 2,61 -2,70 (m, 2H), 2,51 - 2,59 (m, 2H), 2,37 (t, J = 7,5 Hz, 4H), 2,25 (s, 6H), 2,05 (c, J = 6,9 Hz, 8H), 1,59 - 1,73 (m, 6H), 1,22 - 1,43 (m, 26H), 0,89 (t, J = 7,0 Hz, 6H) ppm.
ES-MS m/z = 792,4 (MH+).
Los Ejemplos 30 - 31 pueden prepararse usando métodos similares a los empleados para la preparación del Ejemplo 28. * Ejemplo 30: 4-(dimetilamino)butanoato de (2,6-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)piridin-4-il)metilo
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 56,24 (s, 2 H), 5,46 - 5,33 (m, 8 H), 5,05 (s, 2 H), 4,24 (t, J = 6,7 Hz, 4 H), 2,81 - 2,72 (m, 7 H), 2,66 -2,61 (m, 2 H), 2,34 (s, 6 H), 2,02-2,11 (m, 8 H), 1,80 - 1,72 (m, 4 H), 1,49 - 1,40 (m, J = 6,0, 13,8 Hz, 5 H), 1,40 - 1,25 (m, 32 H), 0,90 (t, J = 6,9 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 751,7 (MH+).
* Ejemplo 31: 3-(dimetilamino)propanoato de (2,6-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)piridin-4-il)metilo
Figure imgf000067_0001
1H RMN (400 MHz, COCI3) 56,51 (d, J = 2,0 Hz, 2 H), 6,42 (t, J = 2,0 Hz, 1 H), 5,44 - 5,30 (m, 8 H), 5,11 (s, 2 H), 4,27 (t, J = 6,4 Hz, 4 H), 4,03 (t, J = 6,1 Hz, 4 H), 3,30 (s, 2 H), 2,79 (t, J = 6,4 Hz, 4 H), 2,44 (s, 6 H), 2,32 (t, J = 7,5 Hz, 4 H), 2,17 -2,10 (m, 4 H), 2,09 -2,03 (m, 9 H), 1,68 - 1,57 (m, 10 H), 1,42 - 1,26 (m, 34 H), 0,91 (t, J = 6,8 Hz, 6 H).
ES-MS m/z = 737,5 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 32:
Intermedio 32a: metanosulfonato de (2,6-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iIoxi)piridin-4-iI)metiIo
Figure imgf000067_0002
El Intermedio 28a (330 mg, 0,517 mmol) se agitó en DCM (30 ml) con TEA (0,290 ml, 2,07 mmol) y la solución resultante se enfrió en un baño de hielo. Se añadió MsCl (0,08 ml, 1,0 mmol) y la mezcla resultante se dejó calentar a temperatura ambiente con agitación durante 4 h. La reacción se trató con HCl (30 ml, 1 M en agua) y DCM (50 ml) y la capa orgánica se recogió. El material se secó sobre sulfato sódico y los volátiles se eliminaron a presión reducida para proporcionar 360 mg de material que se usó sin purificación adicional.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 56,27-6,36 (s, 2 H), 5,32-5,44 (m, 10H), 5,14 (s, 1H), 4,39-4,50 (m, 1H), 4,17-4,30 (m, 5H), 3,41 (c, J= 7,03Hz, 1H), 3,01-3,06 (m, 2H), 2,74-2,84 (m, 5H), 2,07 (c, J=6,86Hz, 10H), 1,70-1,87 (m, 5H), 1,66 (s, 2H), 1,24-1,55 (m, 34H), 0,91(t, J=6,78Hz, 6H) ppm.
Compuesto del Ejemplo 32: 1-(2,6-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)piridin-4-il)-N,N-dimetilmetanamina
Figure imgf000067_0003
El Intermedio 32a (360 mg, 0,503 mmol) se agitó en DMF (3 ml) con dimetilamina (3 ml, 2 M, 11,9 mmol) y la mezcla se calentó en un reactor de microondas a 140 °C durante 30 min. Este calentamiento se repitió hasta que todo el material de partida había reaccionado según se determinó mediante análisis por TLC. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el material en bruto resultante se purificó sobre sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente, proporcionando 123 mg del producto deseado.1
1H RMN (400 MHz, CDCh) 56,27 (s, 2 H), 5,32-5,44 (m, 8H), 4,26 (t, J= 8Hz, 4H), 3,33 (s, 2H) 2,80 (t, J=8Hz, 4H), 2,26 (s, 6H), 2,07 (dd, J= 8Hz, 8H), 1,78 (c, J=5Hz, 4H), 1,27-1,48 (m, 32H), 0,92(t, J=8Hz, 6H) ppm.
ES-MS m/z = 665,5 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 33:
Intermedio 33a: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-(5-(hidroximetil)-1,3-fenileno)bis(metileno)
Figure imgf000068_0001
Se agitó ácido linoleico (3,42 g, 12,19 mmol) con EDC (2,33 g, 12,2 mmol) en DCM (30 ml). Una vez disuelto, se añadieron DIEA (2,60 ml, 14,9 mmol) y DMAP (145 mg, 1,19 mmol). Después de 10 minutos de agitación, se añadió benceno-1,3,5-triiltrimetanol (1,0 g, 6,0 mmol) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 días. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el material en bruto resultante se purificó sobre sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente, proporcionando 1,36 g del producto deseado.
TLC (gel de sílice, EtOAc al 20 % en heptanos): Fr = 0,12.
Intermedio 33b: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-(5-formil-1,3-fenileno)bis(metileno)
Figure imgf000068_0002
El Intermedio 33a (214 mg, 0,309 mmol) se agitó en DCM (30 ml) y se añadió PDC (244 mg, 0,648 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el material en bruto resultante se purificó sobre sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente, proporcionando 210 mg del producto deseado.
TLC (gel de sílice, EtOAc al 20 % en heptanos): Fr = 0,44.
Compuesto del Ejemplo 33: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-(5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno)
Figure imgf000068_0003
El Intermedio 33b (210 mg, 0,30 mmol) se agitó en DCE (10 ml) y se añadió dimetilamina (0,53 ml, 2,0 M en THF, 1,06 mmol). Se añadieron ácido acético (0,017 ml, 0,304 mmol) y triacetoxiborohidruro sódico (129 mg, 0,608 mmol) y el material se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el material en bruto resultante se purificó sobre sílice usando heptanos/EtOAc seguido de DCM/MeOH como eluyente, proporcionando 186 mg del producto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 87,29 - 7,25 (m, 2 H), 7,25 - 7,22 (m, 1 H), 5,44 - 5,27 (m, 8 H), 5,10 (s, 4 H), 3,44 (s, 2 H), 2,81 - 2,74 (m, 4 H), 2,36 (t, J = 7,5 Hz, 4 H), 2,25 (s, 6 H), 2,10 - 2,01 (m, 8 H), 1,70 - 1,58 (m, 4 H), 1,42 - 1,21 (m, 28 H), 0,89 (t, J = 6,9 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 721,1 (MH+).
Los Ejemplos 34 - 36 pueden prepararse usando métodos similares a los empleados para la preparación del Ejemplo 33.
* Ejemplo 34: ditridecanoato de (5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno) 1
Figure imgf000068_0004
1H RMN (400 MHz, CDCla) 87,21 (s, 2H); 7,18 (s, 1H), 5,03 (s, 4H); 3,42 (s a, 2H); 2,28 (t, J = 7,5 Hz, 4H); 2,22 (s, 6H); 1,61-1,53 (m, 4H); 1,27-1,15 (m, 36H); 0,81 (t, J = 6,8 Hz, 6H) ppm.
ES-MS m/z = 588,5 (MH+).
* Ejemplo 35: bis(3-octilundecanoato) de (5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno)
Figure imgf000069_0001
1H RMN (400 MHz, COCl3) 87,26 (s, 2 H), 7,24 (s, 1 H), 5,10 (s, 4 H), 3,43 (s, 2 H), 2,29 (d, J = 7,4 Hz, 2 H), 2,25 (s, 6 H), 1,87 (m, 2 H), 1,31-1,25 (m, 58 H), 0,91-0,87 (m, 12 H) ppm.
ES-MS m/z = 756,6 (MH+).
* Ejemplo 36: octadeca-9,12-dienoato de (9Z,12Z)-3-((dimetilamino)metil)-5-(((3-octilundecanoil)oxi)metil)bencilo
Figure imgf000069_0002
1H RMN (400 MHz, CDCla) 87,28 - 7,25 (m, 2 H), 7,25 - 7,22 (m, 1 H), 5,44 - 5,29 (m, 4 H), 5,10 (s, 4 H), 3,43 (s, 2 H), 2,83 - 2,73 (m, 2 H), 2,36 (t, J = 7,5 Hz, 2 H), 2,29 (d, J = 6,8 Hz, 2 H), 2,25 (s, 6 H), 2,10 - 2,00 (m, 4 H), 1,92 - 1,80 (m, 1 H), 1,71 -1,57 (m, 2 H), 1,43 - 1,17 (m, 42 H), 0,94 - 0,83 (m, 9 H) ppm.
ES-MS m/z = 736,6 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 37:
Intermedio 37a: ácido 5-formilisoftálico
Figure imgf000069_0003
A una solución de ácido 3-formil-5-(metoxicarbonil)benzoico (1 g, 4,80 mmol) en THF (25 ml) se le añadió LiOH (12,01 ml, 24,02 mmol) y se agitó a temp. ambiente durante 16 h. Se observó hidrólisis parcial. La reacción se calentó a 50 °C durante 16 h más. La reacción se diluyó con EtOAc (50 ml) y agua (50 ml) y el pH se ajustó a neutro con HCl 1 N. La capa orgánica se recogió, se lavó con agua (2 x 50 ml) y se secó sobre sulfato sódico. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el material resultante se usó sin purificación adicional.
Intermedio 37b: 5-formilisoftalato de di((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-ilo)
Figure imgf000069_0004
El Intermedio 37a (700 mg, 0,36 mmol) se agitó en DCM (15 ml) y se añadió cloruro de oxalilo (3,16 ml, 36 mmol) junto con una gota de DMF. La mezcla resultante se agitó durante una noche a temperatura ambiente. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el residuo resultante se disolvió de nuevo en THF (10 ml). Se añadió linoleil alcohol (2,02 g, 7,57 mmol) seguido de TEA (2,51 ml, 18,0 mmol) y la mezcla resultante se agitó en un baño de hielo durante 3 h. La reacción se diluyó con EtOAc (50 ml) y agua (50 ml). La capa orgánica se recogió, se lavó con agua (2 x 50 ml) y se secó sobre sulfato sódico. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el material en bruto resultante se purificó sobre sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente, proporcionando 350 mg del producto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 88,66 (s, 1 H), 8,26 (s, 2 H), 5,25 - 5,53 (m, 8 H), 4,16 - 4,43 (m, 4 H), 3,47 - 3,67 (m, 1 H), 2,77 (t, J=5,68 Hz, 4 H), 2,05 (d, J=6,32 Hz, 7 H), 1,91 (s a., 2 H), 1,65 - 1,85 (m, 4 H), 1,37 - 1,53 (m, 5 H), 1,09 - 1,37 (m, 28 H), 0,88 (t, J=6,19 Hz, 6 H) ppm.
Intermedio 37c: 5-(hidroximetil)isoftalato de di((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-ilo)
Figure imgf000070_0001
A una solución del Intermedio 37b (250 mg, 0,36 mmol) en THF (30 ml) y EtOH (15 ml) se le añadió borohidruro sódico (17,8 mg, 0,47 mmol). La reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente y después se diluyó con EtOAc (50 ml) y agua (50 ml). La capa orgánica se recogió, se lavó con agua (2 x 50 ml) y se secó sobre sulfato sódico. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el material en bruto resultante se purificó sobre sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente, proporcionando 260 mg del producto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 88,60 (t, J=1,51 Hz, 1 H), 8,13 -8,32 (m, 2 H), 5,22 -5,46 (m, 8 H), 4,82 (d, J=5,77 Hz, 2 H), 4,34 (t, J=6,78 Hz, 4 H), 2,77 (t, J=6,53 Hz, 4 H), 1,93 - 2,13 (m, 9 H), 1,70 - 1,86 (m, 4 H), 1,20 - 1,49 (m, 32 H), 0,76 -1,00 (m, 6 H) ppm.
Compuesto del Ejemplo 37: 5-(((3-(dimetilamino)propanoil)oxi)metil)isoftalato de di((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-ilo)
Figure imgf000070_0002
A una solución de ácido 3-dimetilaminopropiónico (25 mg, 0,16 mmol) en DCM (3 ml) se le añadieron EDC (31 mg, 0,16 mmol) y DMAP (1,32 mg, 0,011 mmol) seguido de TEA (0,06 ml, 0,43 mmol). La solución resultante se agitó durante 30 min a temperatura ambiente y se añadió el Intermedio 37c (75 mg, 0,11 mmol). La reacción se agitó durante 16 h y después se diluyó con DCM (20 ml) y agua (20 ml). La capa orgánica se recogió y se lavó con agua (2 x 20 ml) y después se secó sobre sulfato de magnesio. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el material en bruto resultante se purificó sobre sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente, proporcionando 41 mg del producto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 88,63 (t, J = 1,6 Hz, 1 H), 8,20 (d, J = 1,8 Hz, 2 H), 5,47 - 5,26 (m, 8 H), 5,22 (s, 2 H), 4,35 (t, J = 6,8 Hz, 4 H), 2,89 -2,74 (m, 6 H), 2,74 -2,65 (m, J = 7,0 Hz, 2 H), 2,39 (s, 6 H), 2,12 -1,95 (m, 8 H), 1,87 -1,71 (m, 4 H), 1,49 -1,19 (m, 33 H), 0,89 (t, J = 7,0 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 792,4 (MH+).
Síntesis del Ejemplo 38:
Intermedio 38a: metanosulfonato de 4-(viniloxi)butilo
Figure imgf000070_0003
Una solución de 4-(viniloxi)butan-1-ol (50 g, 430 mmol) en DCM (430 ml) se enfrió en un baño de hielo. A esta solución se le añadió TEA (90 ml, 646 mmol) seguido de la adición gota a gota de cloruro de metanosulfonilo (36,9 ml, 473 mmol). Durante la segunda mitad de la adición, se formó un precipitado de color blanco y, una vez completada la adición, la reacción se volvió de color naranja pálido. La reacción se agitó durante una noche, dejando que el hielo se fundiera y la reacción alcanzara la temperatura ambiente. La reacción se vertió en un embudo de decantación y se diluyó con 400 ml de bicarbonato sódico saturado (ac.) y 400 ml de EtOAc. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con 300 ml de EtOAc dos veces más. Las capas de EtOAc se lavaron con 200 ml de bicarbonato sódico saturado seguido de agua y después la capa de EtOAc se secó sobre sulfato sódico y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar 84 g, (100 %) del producto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 86,47 (dd, J = 6,8, 14,3 Hz, 1 H), 4,29 (t, J = 6,3 Hz, 2 H), 4,19 (dd, J = 2,0, 14,3 Hz, 1 H), 4,02 (dd, J = 2,0, 6,8 Hz, 1 H), 3,74 (t, J = 5,9 Hz, 2 H), 3,03 (s, 3 H), 1,96 - 1,85 (m, 2 H), 1,86 - 1,73 (m, 2 H) ppm.
Intermedio 38b: 3,5-bis(4-(viniloxi)butoxi)benzaldehído
Figure imgf000071_0001
El Intermedio 38a (84 g, 435 mmol) se agitó en DMF (400 ml) y se añadió 3,5-dihidroxibenzaldehído (27,3 g, 198 mmol) seguido de carbonato potásico (109 mg, 791 mmol). La reacción se calentó a 80 °C durante una noche. Después de enfriar a temperatura ambiente, la reacción se diluyó con EtOAc (600 ml) y agua (700 ml). La capa orgánica se recogió y la capa acuosa se extrajo de nuevo con EtOAc (300 ml). Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con agua (4 x 300 ml), se secaron sobre sulfato sódico y después los volátiles se eliminaron a presión reducida. El material en bruto resultante se purificó sobre sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente, proporcionando 56 g del producto deseado.
ES-MS m/z = 335,1 (MH+).
Intermedio 38c: 1-(3,5-bis(4-(viniloxi)butoxi)fenil)-N,N-dimetilmetanamina
Figure imgf000071_0002
El Intermedio 38b (37 g, 111 mmol) se agitó con dimetilamina (116 ml, 2 M en THF, 332 mmol) y ácido acético (6,33 ml, 111 mmol) en DCM (400 ml). A esta mezcla se le añadió triacetoxiborohidruro sódico (58,6 g, 277 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. A la reacción se le añadieron bicarbonato sódico saturado (800 ml) y EtOAc (1000 ml). La fase orgánica se recogió y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (500 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y los volátiles se eliminaron a presión reducida. El material en bruto resultante se purificó sobre sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente, proporcionando 34 g del producto deseado.
ES-MS m/z = 364,9 (MH+).
Intermedio 38d: 4,4'-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butan-1-ol)
Figure imgf000071_0003
A una solución del Intermedio 38c (42 g, 116 mmol) en EtOAc (200 ml) se le añadió HCl (87 ml, 4 M en dioxano, 348 mmol). Una vez completada la reacción, según se controló mediante análisis por TLC, se añadió bicarbonato sódico acuoso saturado (500 ml) y el pH se ajustó a 10 mediante la adición de carbonato potásico sólido. Se añadió EtOAc (600 ml) y la capa orgánica se recogió. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 500 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico. Los volátiles se eliminaron a presión reducida para proporcionar 35 g de material que se usó sin purificación adicional.1
1H RMN (400 MHz, CDCla) 86,50 (d, J = 2,3 Hz, 2 H), 6,37 (t, J = 2,3 Hz, 1 H), 4,01 (t, J = 6,1 Hz, 4 H), 3,79 - 3,68 (m, 6 H), 3,36 (s, 2 H), 2,26 (s, 6 H), 1,93 - 1,82 (m, 4 H), 1,82 - 1,67 (m, 4 H) ppm.
Compuesto del Ejemplo 38: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo)
Figure imgf000072_0001
A una solución del Intermedio 36 (10 g, 32 mmol) en DCM (161 ml) se le añadieron DMAP (392 mg, 3,21 mmol), DIEA (16,8 ml, 96 mmol) y ácido linoleico (18,9 g, 67,4 mmol). Se añadió EDC (14,8 g, 77 mmol) y el material se dejó en agitación a temperatura ambiente durante una noche. Se añadió bicarbonato sódico acuoso saturado (500 ml) y la mezcla resultante se extrajo con EtOAc (3 x 600 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y después los volátiles se eliminaron a presión reducida. El material en bruto resultante se purificó sobre sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente para proporcionar 18,6 g del material deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 86,50 (s a, 2 H), 6,36 (s a, 1 H), 5,28-5,45 (m, 8 H), 4,14 (t, J = 6,05 Hz, 4 H), 3,98 (t, J = 5,70 Hz, 4 H), 3,39 (s a, 2 H), 2,78 (t, J = 6,55 Hz, 4 H), 2,16-2,41 (m, 10 H), 1,98-2,12 (m, 8 H), 1,77-1,90 (m, 8 H), 1,52-1,71 (m, 4 H), 1,20-1,43 (m, 28 H), 0,90 (t, J = 6,85 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 836,7 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 39:
Intermedio 39a: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-formil-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(propano-3,1-diílo)
Figure imgf000072_0002
El Intermedio 39a puede prepararse de una manera similar a la preparación del Intermedio 18b usando ácido linoleico y 1,3-propanodiol como materiales de partida.
TLC (gel de sílice, EtOAc al 40 % en heptano): Fr = 0,74.
Compuesto del Ejemplo 39: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(propano-3,1-diílo)
Figure imgf000072_0003
A una solución del Intermedio 39a (2,42 g, 3,11 mmol) en DCE (20 ml) se le añadieron dimetilamina (3,25 ml, 2,0 M en THF, 6,5 mmol) y ácido acético (0,18 ml, 3,1 mmol) seguido de triacetoxiborohidruro sódico (1,32 g, 6,21 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche y después se añadió bicarbonato sódico acuoso saturado seguido de DCM. La capa orgánica se recogió y después se lavó con más cantidad de bicarbonato sódico acuoso saturado. La capa acuosa resultante se extrajo de nuevo con DCM y las capas orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato sódico. Los volátiles se eliminaron a presión reducida. El material en bruto resultante se purificó sobre sílice usando heptanos/EtOAc seguido de DCM/MeOH como eluyente para proporcionar 1,4 g del material deseado.1
1H RMN (400 MHz, CDCla) 80,89 (t, J=8,00 Hz, 6 H) 1,21 -1,43 (m, 28 H) 1,55 -1,71 (m, 4 H) 1,98 -2,14 (m, 12 H) 2,25 (s, 6 H) 2,30 (t, J=7,65 Hz, 4 H) 2,77 (t, J=8,00 Hz, 4 H) 3,35 (s, 2 H) 4,02 (t, J=6,15 Hz, 4 H) 4,25 (t, J=6,40 Hz, 4 H) 5,24 - 5,52 (m, 8 H) 6,35 (t, J=2,26 Hz, 1 H) 6,48 (d, J=2,26 Hz, 2 H) ppm.
ES-MS m/z = 809,2 (MH+).
Los Ejemplos 40 - 64 pueden prepararse usando métodos similares a los empleados para la preparación del Ejemplo 38, Ejemplo 39 y Ejemplo 52.
* Ejemplo 40: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetiIamino)metiI)-1,3-femIeno)bis(oxi))bis(etano-2 ,1 -diílo)
Figure imgf000073_0001
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 50,88 (t, J=8,00 Hz, 6 H) 1,22 - 1,42 (m, 28 H) 1,56 - 1,71 (m, 4 H) 1,98 -2,10 (m, 8 H) 2,23 (s, 6 H) 2,34 (t, J=7,53 Hz, 4 H) 2,76 (t, J=6,53 Hz, 4 H) 3,34 (s, 2 H) 4,08 - 4,20 (m, 4 H) 4,35 - 4,46 (m, 4 H) 5,26 - 5,44 (m, 8 H) 6,38 (t, J=2,26 Hz, 1 H) 6,51 (d, J=2,26 Hz, 2 H) ppm.
ES-MS m/z = 781,3 (MH+).
* Ejemplo 41: dihexanoato de ((5-((dimetiIamino)metiI)-1,3-feniIeno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diíIo)
Figure imgf000073_0002
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 50,90 (t, J=8,00 Hz, 6 H) 1,29 - 1,52 (m, 24 H) 1,63 (quin, J=7,45 Hz, 8 H) 1,71 - 1,82 (m, 4 H) 2,26 (s, 6 H) 2,30 (t, J=7,58 Hz, 4 H) 3,37 (s, 2 H) 3,93 (t, J=6,57 Hz, 4 H) 4,06 (t, J=6,69 Hz, 4 H) 6,35 (t, J=2,27 Hz, 1 H) 6,47 (d, J=2,27 Hz, 3 H) ppm.
ES-MS m/z = 620,2 (MH+).
* EjempIo 42: dioctanoato de ((5-((dimetiIamino)metiI)-1,3-feniIeno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diíIo)
Figure imgf000073_0003
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 50,88 (t, J=8,00 Hz, 6 H) 1,19 -1,50 (m, 32 H) 1,55 - 1,68 (m, 8 H) 1,71 -1,85 (m, 4 H) 2,21 -2,39 (m, 10 H) 3,40 (s a., 2 H) 3,94 (t, J=6,44 Hz, 4 H) 4,07 (t, J=6,69 Hz, 4 H) 6,36 (t, J=2,27 Hz, 1 H) 6,49 (d, J=2,02 Hz, 2 H) ppm.
ES-MS m/z = 676,6 (MH+).
* EjempIo 43: dioctanoato de ((5-((dimetiIamino)metiI)-1,3-feniIeno)bis(oxi))bis(decano-10,1-diíIo)
Figure imgf000073_0004
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 50,88 (t, J=8,00 Hz, 6 H) 1,21 -1,50 (m, 40 H) 1,62 (quin, J=6,95 Hz, 8 H) 1,70 - 1,82 (m, 4 H) 2,25 (s, 6 H) 2,29 (t, J=7,58 Hz, 4 H) 3,35 (s, 2 H) 3,93 (t, J=6,57 Hz, 4 H) 4,06 (t, J=6,82 Hz, 4 H) 6,35 (t, J=2,27 Hz, 1 H) 6,46 (d, J=2,27 Hz, 2 H) ppm.
ES-MS m/z = 732,1 (MH+).
* EjempIo 44: dihexanoato de ((5-((dimetiIamino)metiI)-1,3-feniIeno)bis(oxi))bis(decano-10,1-diíIo)
Figure imgf000074_0001
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 50,89 (t, J=8,00 Hz, 6 H) 1,23 -1,51 (m, 32 H) 1,57 - 1,69 (m, 8 H) 1,70 - 1,82 (m, 4 H) 2,24 -2,39 (m, 10 H) 3,43 (s a., 2 H) 3,94 (t, J=6,57 Hz, 4 H) 4,06 (t, J=6,69 Hz, 4 H) 6,37 (t, J=2,15 Hz, 1 H) 6,50 (d, J=1,52 Hz, H) ppm.
ES-MS m/z = 676,6 (MH+).
* Ejemplo 45: bis(octadeca-9.12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetiIamino)metiI)-1,3-feniIeno)bis(oxi))bis(hexano-,1 -diílo)
Figure imgf000074_0002
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 50,90 (t, J=8,00 Hz, 6 H) 1,23 -1,52 (m, 36 H) 1,65 (dt, J=14,59, 7,48 Hz, 8 H) 1,73 - 1,83 (m, 4 H) 1,99 -2,11 (m, 8 H) 2,24 (s, 6 H) 2,30 (t, J=7,58 Hz, 4 H) 2,78 (t, J=6,57 Hz, 4 H) 3,39 (s a., 2 H) 3,94 (t, J=6,44 Hz, 4 H) 4,08 (t, J=6,69 Hz, 4 H) 5,25 - 5,49 (m, 8 H) 6,35 (t, J=2,27 Hz, 1 H) 6,46 (d, J=2,27 Hz, 2 H) ppm.
ES-MS m/z = 892,8 (MH+).
* Ejemplo 46: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetiIamino)metiI)-1,3-feniIeno)bis(oxi))bis(octano-8,1 -diíIo)
Figure imgf000074_0003
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 50,89 (t, J=8,00 Hz, 6 H) 1,23 -1,51 (m, 44 H) 1,55 - 1,69 (m, 8 H) 1,71 -1,82 (m, 4 H) 1,99 -2,11 (m, 8 H) 2,24 (s, 6 H) 2,30 (t, J=7,58 Hz, 4 H) 2,78 (t, J=6,57 Hz, 4 H) 3,35 (s, 2 H) 3,93 (t, J=6,57 Hz, 4 H) 4,07 (t, J=6,69 Hz, 4 H) 5,28 - 5,45 (m, 8 H) 6,35 (t, J=2,27 Hz, 1 H) 6,46 (d, J=2,27 Hz, 2 H) ppm.
ES-MS m/z = 948,8 (MH+).
* EjempIo 47: bis(decanoato) de ((5-((dimetiIamino)metiI)-1,3-feniIeno)bis(oxi))bis(hexano-6,1-diíIo)
Figure imgf000074_0004
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 56,49 - 6,43 (m, 2 H), 6,37 - 6,32 (m, 1 H), 4,07 (t, J = 6,6 Hz, 4 H), 3,93 (t, J = 6,4 Hz, 4 H), 3,35 (s, 2 H), 2,29 (t, J = 7,6 Hz, 4 H), 2,25 (s, 6 H), 1,84 - 1,72 (m, 4 H), 1,72 - 1,55 (m, 8 H), 1,55 - 1,36 (m, 8 H), 1,36 -1,16 (m, 24 H), 0,88 (t, J = 6,8 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 676,4 (MH+).
* EjempIo 48: dioctanoato de ((5-((dimetiIamino)metiI)-1,3-feniIeno)bis(oxi))bis(hexano-6,1-diíIo)
Figure imgf000075_0001
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 5: 6,65 - 6,58 (m, 2 H), 6,44 - 6,39 (m, 1 H), 4,07 (t, J = 6,6 Hz, 4 H), 3,96 (t J = 6,3 Hz, 4 H), 3,72 (s, 2 H), 2,52 (s, 6 H), 2,29 (t, J = 7,5 Hz, 4 H), 1,84 - 1,73 (m, 4 H), 1,72 - 1,56 (m, 8 H), 1,55 - 1,36 (m, 8 H), 1,36 -1,18 (m, 16 H), 0,91 - 0,84 (m, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 620,4 (MH+).
* Ejemplo 49: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((3-hidroxiazetidin-1-iI)metiI)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo)
Figure imgf000075_0002
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 56,45 (d, J=2,01 Hz, 2H) 6,35 (t, J=1,00 Hz 1 H), 5,31-5,44 (m, 8 H), 4,11-4,19 (m, 5 H), 3,97 (t, J=1,00 Hz, 4 H), 3,65-3,76 (m, 2 H), 3,60 (s, 2 H), 2,79(t, J=1,00 Hz, 4 H), 2,32 (t, J=7,53 Hz, 4 H), 2,07 (c, J=6,78 Hz, 8 H), 1,80-1,89 (m, 8 H), 1,64 (d, J=16,81 Hz, 6 H), 1,24-43 (m, 31 H), 0,91 (t, J=1,00 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 864,6 (MH+).
* Ejemplo 50: bis(dodec-8-enoato) de (8Z,8'Z)-((5-((dimetiIamino)metiI)-1,3-feniIeno)bis(oxi))bis(hexano-6,1-diíIo)
Figure imgf000075_0003
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 56,48 (d, J = 2,0 Hz, 2 H), 6,35 (t, J = 2,2 Hz, 1 H), 5,43 - 5,25 (m, 4 H), 4,08 (t, J = 6,8 Hz, 4 H), 3,94 (t, J = 6,4 Hz, 4 H), 3,38 (s, 2 H), 2,30 (t, J = 7,6 Hz, 4 H), 2,27 (s, 6 H), 2,07 - 1,90 (m, 8 H), 1,85 - 1,70 (m, 4 H), 1,71 -1,55 (m, 8 H), 1,55 - 1,29 (m, 24 H), 0,90 (t, J = 7,4 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 728,5 (MH+).
* EjempIo 51: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetiIamino)metiI)-2-metiI-1,3-feniIeno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diíIo) 1
Figure imgf000075_0004
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 56,48 (s, 2 H), 5,32-5,44 (m, 8H), 4,17 (t, J= 8Hz, 4H), 4,01 (t, J= 8Hz, 4H), 3,37 (s, 2H), 2,79 (t, J= 8Hz, 4H), 2,32 (t, J= 8Hz, 4H), 2,25 (s, 6H), 2,10 (s, 3H), 2,08 (dd, J= 8Hz, 8H), 1,87 (c, J= 5Hz, 8H), 1,64 (m, 4H), 1,27-1,48 (m, 28H), 0,90(t, J=8Hz, 6H) ppm.
ES-MS m/z = 850,6 (MH+).
Síntesis deI EjempIo 52:
Intermedio 52a: decanoato de 8-hidroxioctiIo
Figure imgf000076_0001
En un matraz de fondo redondo se mezclaron octano-1,8-diol (21,90 g, 150 mmol), decanoato de etilo (10 g, 49,9 mmol) y ácido tósico trihidrato (0,4 g, 2,103 mmol). El matraz se puso en un rotavapor a presión reducida (100 mbar) y se giró lentamente en un baño de aceite a 100 °C para formar un fundido transparente. Después de 6 h, la presión se redujo a 10 mbar y la reacción se mantuvo durante 15 minutos. La reacción después se diluyó con 150 ml de heptano y se agitó hasta que el octano-diol comenzó a solidificar. La reacción se puso en un baño de hielo, se agitó durante 10 minutos y después se filtró. El residuo se lavó con 150 ml más de heptano y los filtrados combinados se transfirieron a un embudo de decantación. La capa de heptano se lavó con 3 x 150 ml de agua y después los lavados de agua combinados se extrajeron de nuevo con 100 ml de heptano. Los extractos de heptano combinados se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a presión reducida para proporcionar el producto deseado (contaminado con producto bisacilado), que se utilizó sin purificación adicional.
Como alternativa, el Intermedio 52a puede sintetizarse como se indica a continuación. En un matraz de fondo redondo, se disolvió octano-1,8-diol (58,5 g, 400 mmol) en piridina (100 ml). A la solución resultante se le añadió cloruro de decanoílo (41,5 ml, 200 mmol) gota a gota. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La reacción se concentró a presión reducida para formar un residuo sólido. Se añadió heptano (300 ml) y la suspensión resultante se agitó vigorosamente durante 30 minutos. La reacción se filtró y el residuo se lavó con 500 ml más de heptano.
El filtrado se lavó con una solución acuosa 1 N de HCl (3 x 200 ml) y las capas acuosas combinadas se extrajeron de nuevo con 150 ml de heptano. Las capas de heptano combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar el producto deseado (contaminado con producto bis-acilado), que se utilizó sin purificación adicional.
ES-MS m/z = 301,6 (MH+).
Intermedio 52b: decanoato de 8-((metilsulfonil)oxi)octilo
Figure imgf000076_0002
En un matraz de fondo redondo, el Intermedio 52a (62,7 g, 210 mmol, Intermedio 52a) y trietilamina (32,2 ml, 231 mmol) se recogieron en diclorometano (anhidro, 400 ml). La solución se enfrió en un baño de hielo-agua y se añadió gota a gota cloruro de metanosulfonilo (16,38 ml, 210 mmol) durante 5 minutos. La reacción se agitó en el baño de hielo-agua durante 2 h, tiempo después del cual el baño de refrigeración se retiró y la reacción se calentó a temperatura ambiente. La reacción se transfirió a un embudo de decantación y se lavó con una solución acuosa 1 N de HCl (3 x 200 ml). Los lavados acuosos se extrajeron de nuevo con 100 ml de diclorometano y los extractos de DCM combinados se secaron sobre sulfato de magnesio y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar el compuesto deseado (pureza de masa del 68 %), que se utilizó sin purificación adicional.
ES-MS m/z = 378,7 (MH+).
Intermedio 52c: bis(decanoato) de ((5-formil-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo)
Figure imgf000076_0003
En un matraz de fondo redondo, el Intermedio 52b (78,0 g, 206 mmol Intermedio 52b), 3,5-dihidroxibenzaldehído (12,5 g, 91 mmol) y carbonato de cesio (88 g, 272 mmol) se recogieron en DMF (500 ml). La reacción se calentó en un baño de aceite de la temperatura ambiente a 80 °C. Después de 16 h a 80 °C, la reacción se enfrió a temperatura ambiente, se transfirió a un embudo de decantación y se diluyó con 500 ml de acetato de etilo, 500 ml de heptano y 1500 ml de agua. Toda la reacción se filtró a través de una capa de celite, que se lavó por separado con 500 ml de acetato de etilo y 500 ml de heptano. El filtrado se separó en capas y la capa acuosa se extrajo con los lavados de celite después de la filtración, seguido de 1000 ml de heptano. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con 500 ml de agua, se secaron sobre sulfato de magnesio y se filtraron. El filtrado de color pardo oscuro se concentró a presión reducida. El material se purificó sobre gel de sílice con acetato de etilo y heptano como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
ES-MS m/z = 703,4 (MH+).
Compuesto del Ejemplo 52: bis(decanoato) de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo)
Figure imgf000077_0001
En un matraz de fondo redondo, el Intermedio 52c (47,5 g, 67,6 mmol) se recogió en diclorometano (300 ml), seguido de dimetilamina (2 M en THF, 203 ml, 406 mmol) y ácido acético (3,87 ml, 67,6 mmol). A la solución resultante se le añadió triacetoxiborohidruro sódico (35,8 g, 169 mmol). Después de 16 h a temperatura ambiente, la reacción se interrumpió con 300 ml de bicarbonato sódico acuoso saturado y 300 ml de agua y las capas resultantes se separaron. La capa orgánica se lavó con 2 x 200 ml de bicarbonato sódico acuoso saturado. Las capas acuosas combinadas se extrajeron con 2 x 300 ml de diclorometano. Los extractos de diclorometano combinados se secaron sobre sulfato de magnesio y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó sobre gel de sílice con acetona y heptano como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 80,88 (t, J=8,00 Hz, 6 H) 1,18 - 1,50 (m, 40 H) 1,56 - 1,70 (m, 8 H) 1,70 - 1,81 (m, 4 H) 2,24 (s, 6 H) 2,30 (t, J=7,53 Hz, 4 H) 3,34 (s, 2 H) 3,93 (t, J=6,53 Hz, 4 H) 4,06 (t, J=6,78 Hz, 4 H) 6,35 (t, J=2,26 Hz, 1 H) 6,46 (d, J=2,26 Hz, 2 H) ppm.
ES-MS m/z = 732,5 (MH+).
* Ejemplo 53: didodecanoato de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo)
Figure imgf000077_0002
1H RMN (400 MHz, CDCla) 80,83 -0,97 (m, 6 H) 1,19 -1,51 (m, 48 H) 1,56 - 1,68 (m, 8 H) 1,71 -1,83 (m, 4 H) 2,24 (s, 6 H) 2,30 (t, J=7,53 Hz, 4 H) 3,34 (s, 2 H) 3,93 (t, J=6,53 Hz, 4 H) 4,06 (t, J=6,78 Hz, 4 H) 6,35 (t, J=2,26 Hz, 1 H) 6,46 (d, J=2,01 Hz, 2 H) ppm.
ES-MS m/z = 788,6 (MH+).
* Ejemplo 54: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(etano-2,1 -diil))bis(oxi))bis(etano-2,1-diílo) 1
Figure imgf000077_0003
1H RMN (400 MHz, CDCh) 86,59 (s a, 2 H), 6,44 (s a, 1 H), 5,27-5,44 (m, 8 H), 4,26 (t, J = 4,9 Hz, 4 H), 4,13 (t, J = 4,65 Hz, 4 H), 3,85 (t, J = 4,65 Hz, 4 H), 3,77 (t, J = 4,9 Hz, 4 H), 3,50 (s a, 2 H), 2,77 (t, J = 6,65 Hz, 4 H), 2,21-2,52 (m, 10 H), 1,96-2,12 (m, 8 H), 1,55-1,70 (m, 4 H), 1,19-1,45 (m, 28 H), 0,89 (t, J = 6,90 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 868,9 (MH+).
* Ejemplo 55: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dietilamino)metil)-2-metil-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo)
Figure imgf000078_0001
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 56,52 (s, 2 H), 5,32-5,44 (m, 8H), 4,16 (t, J= 8Hz, 4H), 4,00 (t, J= 8Hz, 4H), 3,52 (s, 2H), 2,79 (t, J= 8Hz, 4H), 2,54 (dd, J= 8Hz, 4H), 2,32 (t, J = 8Hz, 4H), 2,09 (s, 3H), 2,08 (dd, J= 8Hz, 8H), 1,87 (c, J= 5Hz, 8H), 1,64 (m, 4H), 1,27-1,48 (m, 28H), 1,06 (t, J=8Hz, 6H), , 0,91(t, J=8Hz, 6H) ppm.
ES-MS m/z = 878,6 (MH+).
* Ejemplo 56: bis(3-octilundecanoato) de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(propano-3,1-diílo)
Figure imgf000078_0002
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 56,48 (d, J=2,02 Hz, 2 H) 6,35 (t, J=2,27 Hz, 1 H) 4,25 (t, J=6,32 Hz, 4 H) 4,03 (t, J=6,19 Hz, 4 H) 3,35 (s, 2 H) 2,20 - 2,30 (m, 10 H) 2,10 (quin, J=6,25 Hz, 4 H) 1,84 (s a., 2 H) 1,19 - 1,36 (m, 56 H) 0,81 - 0,97 (m, 12 H) ppm.
ES-MS m/z = 844,7 (MH+).
* Ejemplo 57: 8,8'-((5-((dimetiIamino)metiI)-1,3-feniIeno)bis(oxi))dioctanoato de didecilo
Figure imgf000078_0003
1H RMN (400 MHz, COCI3) 56,51 - 6,45 (m, 2 H), 6,38 - 6,33 (m, 1 H), 4,06 (t, J = 6,8 Hz, 4 H), 3,93 (t, J = 6,5 Hz, 4 H), 3,40 (s, 2 H), 2,30 (t, J = 7,5 Hz, 4 H), 2,28 (s, 6 H), 1,82 - 1,71 (m, 4 H), 1,70 - 1,56 (m, 8 H), 1,54 - 1,20 (m, 40 H), 0,93 - 0,84 (m, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 732,4 (MH+).
* EjempIo 58: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((((5-((dietiIamino)metiI)-1,3-femIeno)bis(oxi))bis(etano-2,1 -diiI))bis(oxi))bis(etano-2,1-diíIo)
Figure imgf000078_0004
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 56,54 (d, J = 2,3 Hz, 2 H), 6,37 (t, J = 2,25 Hz, 1 H), 5,25-5,46 (m, 8 H), 4,26 (t, J = 4,8 Hz, 4 H), 4,11 (t, J = 4,75 Hz, 4 H), 3,85 (t, J = 4,75 Hz, 4 H), 3,77 ((t, J = 4,9 Hz, 4 H), 3,48 (s, 2 H), 2,77 (t, J = 6,5 Hz, 4 H), 2,50 (c, J = 7,1 Hz, 4 H), 2,34 (t, J = 7,7 Hz, 4 H), 1,98-2,13 (m, 8 H), 1,55-1,70 (m, 4 H), 1,22-1,42 (m, 28 H), 1,03 (t, J = 7,2 Hz, 6 H), 0,89 (t, J = 6,9 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 896,8 (MH+).
* EjempIo 59: didodecanoato de ((5-((dimetiIamino)metiI)-1,3-feniIeno)bis(oxi))bis(hexano-6,1-diíIo)
Figure imgf000079_0001
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 56,48 (d, J=2,26 Hz, 2 H) 6,36 (t, J=2,51 Hz, 1 H) 4,08 (t, J=6,65 Hz, 4 H) 3,94 (t, J=6,40 Hz, 4 H) 3,43 (s, 2 H) 2,23-2,35 (m, 10 H) 2,03 (s, 1H) 1,78 (ddt, J=14,05, 13,30, 7,53, 7,53 Hz, 4 H) 1,57-1,70(m, 8 H) 1,38­ 1,53 (m, 8 H) 1,22-1,34 (m, 33 H) 0,88 (t, J=6,02 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 732,6 (MH+).
* Ejemplo 60: dioleato de (Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo)
Figure imgf000079_0002
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 56,49 (s a., 2 H), 6,36 (t, J = 2,0 Hz, 1 H), 5,44 - 5,28 (m, 4 H), 4,15 (t, J = 5,8 Hz, 4 H), 3,98 (t, J = 5,8 Hz, 4 H), 3,36 (s a., 2 H), 2,38 -2,18 (m, 10 H), 2,10 -1,95 (m, 8 H), 1,92 -1,76 (m, 8 H), 1,71 -1,56 (m, J = 7,3, 7,3 Hz, 4 H), 1,30 (d, J = 15,6 Hz, 40 H), 0,90 (t, J = 6,5 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 840,7 (MH+).
* Ejemplo 61: ditetradecanoato de ((5-((dimetiIamino)metiI)-1,3-feniIeno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diíIo)
Figure imgf000079_0003
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 56,54 (s a, 2 H) 6,37 (s a, 1 H) 4,14 (t, J=6,30 Hz, 4 H) 3,98 (t, J=5,65 Hz, 4 H) 3,48 (s a, 2 H) 2,22 -2,51 (m, 10 H) 1,73 - 1,93 (m, 8 H) 1,62 (m, 4 H) 1,19 -1,49 (m, 40 H), 0,88 (t, J=6,9 Hz, 6H) ppm.
ES-MS m/z = 732,7 (MH+).
* EjempIo 62: bis(octadeca-9,12,15-trienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z,15Z,15'Z)-((5-((dimetiIamino)metiI)-1,3-feniIeno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diíIo) 1
Figure imgf000079_0004
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 56,51 (d, J = 1,8 Hz, 2 H), 6,36 (t, J = 2,3 Hz, 1 H), 5,55 - 5,18 (m, 12 H), 4,15 (t, J = 5,5 Hz, 4 H), 3,98 (t, J = 5,6 Hz, 4 H), 3,41 (s a., 2 H), 2,82 (t, J = 6,0 Hz, 8 H), 2,39 -2,22 (m, 10 H), 2,17 -2,00 (m, 8 H), 1,92 -1,74 (m, 9 H), 1,71 - 1,55 (m, 4 H), 1,45 - 1,22 (m, 16 H), 0,99 (t, J = 7,5 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 833,0 (MH+).
* EjempIo 63: octadeca-9,12-dienoato de (9Z,12Z)-4-(3-((dimetiIamino)metiI)-5-(4-(oIeoiIoxi)butoxi)fenoxi)butiIo
Figure imgf000080_0001
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 56,51 (s, 2 H), 6,37 (t, J = 2,0 Hz, 1 H), 5,49 - 5,23 (m, 6 H), 4,15 (t, J = 6,5 Hz, 4 H), 3,99 (t, J = 5,6 Hz, 4 H), 3,42 (s a., 2 H), 2,79 (t, J = 6,7 Hz, 2 H), 2,39 -2,21 (m, 10 H), 2,18 -1,95 (m, 8 H), 1,94 - 1,73 (m, 8 H), 1,73 - 1,55 (m, 4 H), 1,44 -1,19 (m, 34 H), 0,95 -0,86 (m, J = 4,0, 6,8, 6,8 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 838,7 (MH+).
* Ejemplo 64: octadeca-9,12,15-trienoato de (9Z,12Z,15Z)-4-(3-((dimetilamino)metil)-5-(4-((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dienoiloxi)butoxi)fenoxi)butilo
Figure imgf000080_0002
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 56,48 (d, J = 2,0 Hz, 2 H), 6,35 (t, J = 2,3 Hz, 1 H), 5,48 - 5,27 (m, 10 H), 4,15 (t, J = 5,8 Hz, 4 H), 3,98 (t, J = 5,8 Hz, 4 H), 3,36 (s, 2 H), 2,90 - 2,73 (m, 6 H), 2,32 (t, J = 7,7 Hz, 4 H), 2,26 (s, 6 H), 2,16 - 2,00 (m, 8 H), 1,93 - 1,75 (m, 8 H), 1,64 (t, J = 7,3 Hz, 4 H), 1,44 - 1,22 (m, 22 H), 0,99 (t, J = 7,5 Hz, 3 H), 0,91 (t, J = 7,0 Hz, 3 H) ppm.
ES-MS m/z = 835,0 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 65:
Intermedio 65a: ácido 5-(hidroximetiI)isoftáIico
Figure imgf000080_0003
A una solución de 5-(hidroximetiI)isoftaIato de dietilo (509 mg, 2,02 mmol) en THF (5 ml) se le añadió NaOH (5,04 ml, 1,0 M en agua, 5,04 mmol). La reacción se agitó durante 3 días a temperatura ambiente. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el material resultante se usó sin purificación adicional.
Intermedio 65b: 5-(hidroximetil)-N1,N3-di((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-il)isoftalamida
Figure imgf000080_0004
El Intermedio 65a (168 mg, 0,694 mmol) se agitó en DCM (25 ml) y se añadieron EDC (399 mg, 2,08 mmol) y HOBt (319 mg, 2,08 mmol) seguido de TEA (0,481 ml, 3,47 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 min y se añadió el clorhidrato de linoleil amina (419 mg, 1,39 mmol). La reacción se agitó durante una noche a temperatura ambiente y después se diluyó con DCM (100 ml) y agua (100 ml). La capa orgánica se recogió y se lavó con agua (2 x 50 ml) y se secó sobre sulfato de magnesio. Los volátiles se eliminaron a presión reducida. El material en bruto resultante se purificó sobre sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente para proporcionar 150 mg del material deseado.
ES-MS m/z = 691,4 (MH+).
Compuesto del Ejemplo 65: 3-(dimetilamino)propanoato de 3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-ilcarbamoil)bencilo
Figure imgf000081_0001
El Ejemplo 65 puede prepararse a partir del Intermedio 65b usando condiciones similares a las usadas en la preparación del Ejemplo 37.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 88,11 (t, J = 1,5 Hz, 1H), 7,89 (d, J = 1,5 Hz, 2H), 6,43 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 5,25 -5,48 (m, 8H), 5,19 (s, 2H), 3,33 - 3,53 (m, 4H), 2,77 (t, J = 6,5 Hz, 4H), 2,60 - 2,70 (m, 2H), 2,49 - 2,60 (m, 2H), 2,26 (s, 6H), 2,05 (c, J = 6,9 Hz, 8H), 1,55 -1,71 (m, 4H), 1,18 -1,47 (m, 32H), 0,89 (t, J = 7,0 Hz, 6H) ppm.
ES-MS m/z = 790,4 (MH+).
* Ejemplo 66: 4-(dimetilamino)butanoato de 3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-ilcarbamoil)bencilo
Figure imgf000081_0002
El Ejemplo 66 puede prepararse métodos similares a los empleados para la preparación del Ejemplo 65.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 88,11 (t, J = 1,6 Hz, 1H), 7,88 (d, J = 1,5 Hz, 2H), 6,50 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 5,20 -5,48 (m, 8H), 5,15 (s, 2H), 3,31 - 3,55 (m, 4H), 2,66 - 2,85 (m, 4H), 2,41 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 2,28 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,20 (s, 6H), 2,04 (c, J = 6,9 Hz, 8H), 1,82 (c, J = 7,4 Hz, 2H), 1,54 - 1,67 (m, 4H), 1,17 - 1,45 (m, 32H), 0,88 (t, J = 7,0 Hz, 6H) ppm. ES-MS m/z = 804,5 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 67:
Intermedio 67a: 2-(3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenil)acetato de metilo
Figure imgf000081_0003
A una solución de 3-(3,5-dihidroxifenil)acetato de metilo (1,0 g, 5,4 mmol) en DMF (25 ml) se le añadieron mesilato de linoleílo (4,16 g, 12,1 mmol) y carbonato potásico (3,0 g, 21,6 mmol). La reacción se calentó a 100 °C durante 4 h, después de lo cual la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se añadió agua (100 ml). La mezcla resultante se extrajo con EtOAc (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y los volátiles se eliminaron a presión reducida. El material en bruto resultante se purificó sobre sílice usando n-hexano/EtOAc como eluyente para producir 3,3 g del producto deseado.
ES-MS m/z = 680 (MH+).
Intermedio 67b: 2-(3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenil)etanol
Figure imgf000081_0004
El Intermedio 67a (3,3 g, 4,8 mmol) se agitó en THF (50 ml) y se enfrió en un baño de hielo. A la reacción en agitación se le añadió lentamente una solución de hidruro de litio y aluminio (370 mg, 97 mmol) en THF (3 ml). Después de la adición, la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Después, el material se enfrió de nuevo en un baño de hielo y se añadieron agua (5 ml) y EtOAc (5 ml). Después de 10 minutos, la suspensión resultante se filtró a través de celite y el filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar 2,8 g de material que se usó sin purificación adicional.
Compuesto del Ejemplo 67: 3-(dimetilamino)propanoato de 3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenetilo
Figure imgf000082_0001
Al Intermedio 67b (75 mg, 0,12 mmol) en DCM (3 ml) se le añadieron clorhidrato del ácido 3-dimetilaminopropiónico (26 mg, 0,17 mmol) y HATU (88 mg, 0,23 mmol) seguido de TEA (0,016 ml, 0,12 mmol). La reacción se agitó durante una noche a temperatura ambiente y después se añadió agua (2 ml). La mezcla se extrajo con DCM (3 x 5 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el material en bruto resultante se purificó sobre sílice usando DCM/MeOH como eluyente para proporcionar 72 mg del material deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 86,32 - 6,37 (m, 3H), 5,28 - 5,44 (m, 8H), 4,37 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 3,92 (t, J = 6,6 Hz, 4H), 3,36 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,86 -2,92 (m, 8H), 2,75 -2,81 (m, 6H), 2,06 (ddd, J = 6,7, 6,7, 6,7 Hz, 8H), 1,71 -1,80 (m, 4H), 1,41 - 1,49 (m, 4H), 1,24 -1,41 (m, 32H), 0,90 (t, J = 7,1 Hz, 6H) ppm.
ES-MS m/z = 750,5 (MH+).
* Ejemplo 68: (3-(dimetilamino)propil)carbonato de 3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)bencilo
Figure imgf000082_0002
El Intermedio 13a (82,5 mg, 0,130 mmol) se disolvió en CDCl3 seco (2 ml) y se añadió carbonocloridato de 4-nitrofenilo (28,7 mg, 0,142 mmol) seguido de piridina (0,011 ml, 0,129 mmol). Esto se agitó a 50 °C durante 30 minutos. Después de este tiempo, el calentamiento se detuvo y la reacción se dejó en agitación durante una noche a temperatura ambiente. La reacción se comprobó por TLC, que indicó el consumo completo del MP. El intermedio se concentró y se redisolvió en diclorometano (3 ml) y se añadió 3-(dimetilamino)propan-1-ol (66,8 mg, 0,648 mmol) seguido de DMAP (3,16 mg, 0,026 mmol). La reacción se agitó durante 72 h a temperatura ambiente. La reacción se interrumpió con agua (2 ml) y se extrajo en más cantidad de DCM (3 x 5 ml). Las capas orgánicas se concentraron. El material en bruto se purificó sobre sílice usando MeOH del 0 al 6 % en DCM como eluyente para producir 47 mg del producto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 86,51 (d, J = 2,3 Hz, 2H), 6,42 (t, J = 2,3 Hz, 1H), 5,32 - 5,48 (m, 8H), 5,09 (s, 2H), 4,23 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 3,94 (t, J = 6,5 Hz, 4H), 2,80 (dd, J = 6,4, 6,4 Hz, 4H), 2,37 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 2,24 (s, 6H), 1,99 -2,16 (m, 8H), 1,82 -1,91 (m, 2H), 1,72 - 1,82 (m, 4H), 1,41 -1,50 (m, 5H), 1,27 -1,41 (m, 29H), 0,83 - 0,97 (m, J = 6,8, 6,8 Hz, 5H) ppm.
ES-MS m/z = 766,5 (MH+).
* Ejemplo 69: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-(5-((((3-(dietilamino)propoxi)carbonil)oxi)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno)
Figure imgf000082_0003
El Ejemplo 69 puede prepararse usando métodos similares a los descritos para el Intermedio 33a y el Ejemplo 68.
1H RMN (400 MHz, CDCls) 87,33 (s, 2 H), 7,31 (s, 1 H), 5,25 - 5,45 (m, 8 H), 5,16 (s, 2 H), 5,11 (s, 4 H), 4,22 (t, J=6,5 Hz, 2 H), 2,73 - 2,82 (m, 4 H), 2,43 - 2,55 (m, 6 H), 2,37 (t, J=7,5 Hz, 4 H), 2,01 - 2,09 (m, 8 H), 1,83 (quin, J=6,5 Hz, 2 H), 1,57 -1,71 (m, 5 H), 1,21 -1,42 (m, 28 H), 1,01 (t, J=7,2 Hz, 6 H), 0,89 (t, J=6,8 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 850,6 (MH+).
Los Ejemplos 70 y 71 pueden prepararse usando métodos similares a los empleados para la preparación del Ejemplo 69. * Ejemplo 70: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-(5-((((2-(dimetilamino)etoxi)carbonil)oxi)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno)
Figure imgf000083_0001
1H RMN (400 MHz, CDCh) 67,33 (s, 2 H), 7,30 (s, 1 H), 5,29 -5,43 (m, 8 H), 5,16 (s, 2 H), 5,11 (s, 4 H), 4,25 (t, J=5,8 Hz, 2 H), 2,77 (t, J=6,5 Hz, 4 H), 2,60 (t, J=5,8 Hz, 2 H), 2,37 (t, J=7,7 Hz, 4 H), 2,29 (s, 6 H), 2,05 (c, J=6,8 Hz, 8 H), 1,52 -1,75 (m, 4 H), 1,24 - 1,40 (m, 29 H), 0,88 (t, J=6,8 Hz, 5 H) ppm.
ES-MS m/z = 808,5 (MH+).
* Ejemplo 71: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-(5-((((3-(dimetilamino)propoxi)carbonil)oxi)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno)
Figure imgf000083_0002
1H RMN (400 MHz, COCla) 67,34 (s, 2 H), 7,32 (s, 1 H), 5,29 - 5,45 (m, 8 H), 5,17 (s, 2 H), 5,12 (s, 4 H), 4,24 (t, J=6,5 Hz, 2 H), 2,79 (t, J=6,5 Hz, 4 H), 2,34 - 2,41 (m, 6 H), 2,24 (s, 6 H), 2,06 (c, J=6,7 Hz, 8 H), 1,87 (quin, J=6,5 Hz, 2 H), 1,61 -1,72 (m, 4 H), 1,25 - 1,42 (m, 29 H), 0,91 (t, J=7,0 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 822,6 (MH+).
* Ejemplo 72: bis(octadeca-9.12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-5-((((2-(dimetilamino)etoxi)carbonil)oxi)metil)-1,3-fenileno
Figure imgf000083_0003
El Ejemplo 72 puede prepararse usando métodos similares a los usados en la síntesis del Intermedio 26b y el Ejemplo 68.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 67,01 (d, J=2,0 Hz, 2 H), 6,89 (t, J=2,1 Hz, 1 H), 5,30 - 5,46 (m, 8 H), 5,14 (s, 2 H), 4,26 (t, J=5,8 Hz, 2 H), 2,79 (t, J=6,4 Hz, 4 H), 2,61 (t, J=5,8 Hz, 2 H), 2,54 (t, J=7,5 Hz, 4 H), 2,29 (s, 6 H), 2,01 - 2,11 (m, 8 H), 1,74 (dt, J=14,7, 7,5 Hz, 4 H), 1,24 - 1,46 (m, 31 H), 0,90 (t, J=7,0 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 780,4 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 73
Intermedio 73a: 4-bromo-3,5-dimetoxibenzoato de metilo
A una solución de ácido 4-bromo-3,5-dihidroxibenzoico (28 g, 120,7 mmol) en acetona (300 ml) se le añadieron sulfato de dimetilo (53 g, 422,4 mmol) y carbonato potásico (58 g, 422,4 mmol). La reacción se mantuvo a reflujo durante 4 h y después se enfrió a temperatura ambiente. La reacción se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se recristalizó en metanol para proporcionar el compuesto deseado.
TLC (gel de sílice, acetato de etilo al 10 % en hexano): Fr = 0,82
Intermedio 73b: 3,5-dimetoxi-4-(prop-1-en-2-il)benzoato de metilo
Figure imgf000084_0001
A una solución del Intermedio 73a (6,0 g, 21,9 mmol) en DMF (100 ml) se le añadieron isopropeniltributilestanano (7,98 g, 24,1 mmol), fluoruro de cesio (6,66 g, 43,8 mmol) y Pd[(terc-butil)3P]4 (225 mg, 0,44 mmol). La reacción se calentó en un baño a 100 °C durante 3 h y después se enfrió a temperatura ambiente. La reacción se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó sobre gel de sílice con acetato de etilo y hexano como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
TLC (gel de sílice, acetato de etilo al 10 % en hexano): Fr = 0,45
Intermedio 73c: 4-isopropil-3,5-dimetoxibenzoato de metilo
Figure imgf000084_0002
A una solución del Intermedio 73b (4,0 g, 16,94 mmol) en metanol (200 ml) se le añadieron Pd al 10 %/C (4,0 g) y formiato amónico (21,35 g, 339,0 mmol). La reacción se calentó en un baño de calentamiento a 90 °C durante 48 h. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró sobre celite. El filtrado se concentró a presión reducida, el residuo se diluyó con agua y se extrajo con diclorometano (2 x 100 ml) y los extractos de DCM combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó sobre gel de sílice con acetato de etilo y hexano como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
TLC (gel de sílice, acetato de etilo al 10 % en hexano): Fr = 0,50
Intermedio 73d: 3,5-dihidroxi-4-isopropilbenzoato de metilo
Figure imgf000084_0003
A una solución del Intermedio 73c (2,0 g, 8,40 mmol) en diclorometano (200 ml), enfriada en un baño de hielo-agua, se le añadieron tribromuro de boro (42 ml, 1 M en DCM, 42 mmol) y yoduro de tetrabutilamonio (15,53 g, 42,01 mmol). Después de 3 h, la mezcla de reacción se vertió en una solución acuosa saturada cloruro de amonio. La reacción se extrajo con diclorometano (2 x 100 ml) y los extractos de DCM combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó sobre gel de sílice con acetato de etilo y hexano como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
TLC (gel de sílice, acetato de etilo al 10 % en hexano): Fr = 0,05
Intermedio 73e: 4-isopropil-3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)benzoato de metilo
Figure imgf000085_0001
A una solución del Intermedio 73d (1,4 g, 6,66 mmol) en DMF (60 ml) se le añadieron mesilato de linoleílo (5,05 g, 14,66 mmol) y carbonato potásico (3,68 g, 26,66 mmol). La reacción se calentó en un baño de aceite a 100 °C durante 2 h y después se enfrió a temperatura ambiente. La reacción se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo (2 x 200 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó sobre gel de sílice con acetato de etilo y hexano como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
TLC (gel de sílice, acetato de etilo al 10 % en hexano): Fr = 0,82
Intermedio 73f: (4-isopropil-3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenil)metanol
Figure imgf000085_0002
A una solución del Intermedio 73e (3,8 g, 5,38 mmol) en THF (80 ml), enfriada en un baño de hielo-agua, se le añadió hidruro de litio y aluminio (410 mg, 10,76 mmol). La reacción se agitó durante 30 minutos y después se interrumpió con agua. La reacción se filtró sobre celite y el filtrado se extrajo con acetato de etilo (2 x 150 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó sobre gel de sílice con acetato de etilo y hexano como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
TLC (gel de sílice, acetato de etilo al 10 % en hexano): Fr = 0,21
Compuesto del Ejemplo 73: 4-isopropil-3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)bencilcarbonato de 3-(dimetilamino)propilo
Figure imgf000085_0003
El Ejemplo 73 puede prepararse a partir del Intermedio 73f usando procedimientos similares a los usados en la síntesis del Ejemplo 68.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 86,52 (s, 2 H), 5,50 - 5,25 (m, 8 H), 5,07 (s, 2 H), 4,21 (t, J = 6,5 Hz, 2 H), 3,93 (t, J = 6,4 Hz, 4 H), 3,63 (quin, J = 7,1 Hz, 1 H), 2,79 (t, J = 6,4 Hz, 4 H), 2,36 (t, J = 7,5 Hz, 2 H), 2,22 (s, 6 H), 2,06 (c, J = 6,8 Hz, 8 H), 1,92 -1,71 (m, 6 H), 1,56 -1,41 (m, 4 H), 1,41 -1,20 (m, 34 H), 0,90 (t, J = 6,8 Hz, 3 H) ppm.
ES-MS m/z = 808,8 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 74:
Intermedio 74a: 4-bromo-3,5-dihidroxibenzoato de metilo
Figure imgf000085_0004
A una solución de ácido 4-bromo-3,5-dihidroxibenzoico (7,0 g, 30,2 mmol) en metanol se le añadió clorotrimetilsilano (8,11 g, 75,4 mmol). La reacción se calentó a reflujo durante 3 h y después se enfrió a temperatura ambiente. La reacción se concentró a presión reducida y el residuo se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo (2 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con bicarbonato sódico ac. saturado y salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar el compuesto deseado, que se utilizó sin purificación adicional.
TLC (gel de sílice, acetato de etilo al 30 % en hexano): Fr = 0,33
Intermedio 74b: 4-bromo-3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)benzoato de metilo
Figure imgf000086_0001
El Intermedio 74b puede prepararse a partir del Intermedio 74a usando procedimientos similares a los usados en la síntesis del Intermedio 73e.
TLC (gel de sílice, acetato de etilo al 10 % en hexano): Fr = 0,70
Intermedio 74c: (4-bromo-3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1 -iloxi)fenil)metanol
Figure imgf000086_0002
A una solución del Intermedio 74b (500 mg, 0,67 mmol) en diclorometano (20 ml), enfriada en un baño de hielo seco/acetona, se le añadió DIBAL-H (25% en tolueno, 0,96 ml). La reacción se agitó durante 15 min y después se interrumpió con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio. La reacción se filtró sobre celite y el filtrado se extrajo con diclorometano (2 x 50 ml). Los extractos de DCM combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó sobre gel de sílice con acetato de etilo y hexano como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
TLC (gel de sílice, acetato de etilo al 20 % en hexano): Fr = 0,49
Compuesto del Ejemplo 74: (3-(dimetilamino)propil)carbonato de 4-bromo-3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)bencilo
Figure imgf000086_0003
El Ejemplo 74 puede prepararse a partir del Intermedio 74c usando procedimientos similares a los usados en la síntesis del Ejemplo 68.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 86,55 (s, 2 H), 5,44 - 5,30 (m, 8 H), 5,08 (s, 2 H), 4,22 (t, J= 6,7 Hz, 2 H), 4,02 (t, J = 6,5 Hz, 4 H), 2,78 (t, J = 6,3 Hz, 4 H), 2,35 (t, J = 7,4 Hz, 2 H), 2,22 (s, 6 H), 2,06 (c, J = 6,7 Hz, 8 H), 1,90 - 1,77 (m, 6 H), 1,55 -1,46 (m, 4 H), 1,42 - 1,22 (m, 28 H), 0,89 (t, J = 6,8 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 844,4 (MH+), patrón de isótopos de bromo observado.
* Síntesis del Ejemplo 75:
Intermedio 75a: ácido 4-cloro-3,5-dihidroxibenzoico
A una solución de ácido 3,5-dihidroxibenzoico (4 g, 26,0 mmol) en metanol (25 ml) se le añadió una solución de N-clorosuccinimida (3,64 g, 27,3 mmol) en metanol (10 ml), durante 1 h. Después de 16 h, la reacción se vertió en agua fría y se extrajo con acetato de etilo (2 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar el compuesto deseado, que se usó sin purificación adicional.
TLC (gel de sílice, acetato de etilo al 10 % en hexano): Fr = 0,15
Compuesto del Ejemplo 75: (3-(dimetilamino)propil)carbonato de 4-cloro-3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)bencilo
Figure imgf000087_0001
El Ejemplo 75 puede prepararse a partir del Intermedio 75a usando procedimientos similares a los usados en la síntesis del Ejemplo 74.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 86,59 (d, J = 2,8 Hz, 1 H), 6,48 (d, J = 2,8 Hz, 1 H), 5,51 - 5,29 (m, 8 H), 5,26 (s, 2 H), 4,25 (t, J = 6,5 Hz, 2 H), 4,00 (t, J = 6,5 Hz, 2 H), 3,94 (t, J = 6,5 Hz, 2 H), 2,80 (t, J = 6,4 Hz, 4 H), 2,38 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 2,24 (s, 6 H), 2,07 (c, J = 6,7 Hz, 8 H), 1,91 - 1,75 (m, 6 H), 1,55 -1,44 (m, 4 H), 1,44 - 1,24 (m, 30 H), 0,91 (t, J = 6,8 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 800,6 (MH+), patrón de isótopos de cloro observado.
* Síntesis del Ejemplo 76:
Intermedio 76a: 2-(3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)bencil)isoindolin-1,3-diona
Figure imgf000087_0002
El Intermedio 13a (120 mg, 0,188 mmol), isoindolin-1,3-diona (34,6 mg, 0,235 mmol) y trifenilfosfina (64,2 mg, 0,245 mmol) se disolvieron THF (1,5 ml). Después, se añadió gota a gota DIAD (0,044 ml, 0,226 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. Se comprobó que la reacción se había completado por LCMS. La reacción se concentró, después se lavó con agua y después con salmuera, se secó sobre sulfato sódico se reconcentró. Se obtuvo el producto deseado en forma de una mezcla con óxido de trifenilfosfina para producir 144,0 mg de material.
Intermedio 76b: (3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenil)metanamina
Figure imgf000087_0003
El Intermedio 76a (144 mg, 0,188 mmol, mezcla) se disolvió en EtOH (3,7 ml). Se añadió hidrazina (0,030 ml, 0,940 mmol) y la reacción se calentó durante 4 horas a 50 °C. Se controló que la reacción se había completado mediante análisis por LCMS. La reacción se concentró y se suspendió en DCM (10 ml). La reacción se filtró. Después, el filtrado se cargó sobre una columna BondElute SCX pre-equilibrada con DCM. La columna se lavó con 3 VC de DCM y después el producto se eluyó con DCM amoniaco 7 N al 5 % en metanol para recuperar 57 mg del producto deseado.
ES-MS m/z = 636,5 (MH+).
Compuesto del Ejemplo 76: N-(3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)bencil)-2-(dimetilamino)acetamida
Figure imgf000088_0001
El Intermedio 76b (36,1 mg, 0,057 mmol), clorhidrato del ácido 2-(dimetilamino)acético (23,77 mg, 0,170 mmol) y HATU (43,2 mg, 0,114 mmol) se disolvieron en DCM (4 ml). Después, se añadió trietilamina (0,032 ml, 0,227 mmol) y la reacción se agitó 18 horas a temperatura ambiente y se comprobó por LCMS. La reacción se interrumpió con agua (2 ml) y se extrajo en más cantidad de DCM (3 x 5 ml). La reacción se purificó por cromatografía sobre gel de sílice en MeOH del 0 al 5 % en DCM para proporcionar 20 mg del producto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 87,34 (s a., 1 H), 6,43 (d, J = 2,0 Hz, 2 H), 6,40 - 6,33 (m, 1 H), 5,54 - 5,30 (m, 8 H), 4,40 (d, J = 6,1 Hz, 2 H), 3,94 (t, J = 6,6 Hz, 4 H), 3,01 (s, 2 H), 2,80 (t, J = 6,3 Hz, 4 H), 2,30 (s, 6 H), 2,13 - 1,98 (m, 8 H), 1,70 -1,82 (m, J = 6,6 Hz, 4 H), 1,53 - 1,23 (m, 41 H), 0,91 (t, J = 7,1 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 721,5 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 77:
Intermedio 77a: 5-((dimetilamino)metil)isoftalato de dietilo
Figure imgf000088_0002
En un matraz de fondo redondo, 5-(hidroximetil)isoftalato de dietilo (15,53 g, 47,6 mmol) y DIPEA (10,39 ml, 59,5 mmol) se recogieron en cloroformo (40 ml). La suspensión resultante se agitó durante 1 h. A la suspensión resultante se le añadió anhídrido toluenosulfónico (10 g, 39,6 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente. Después de 20 h, la solución de reacción se añadió gota a gota a dimetilamina (60 ml, 120 mmol) durante ~30 minutos para controlar la reacción exotérmica por debajo del reflujo. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La reacción se diluyó con diclorometano (200 ml), bicarbonato sódico acuoso saturado (200 ml) y agua (50 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con dichorometano (3 x 100 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con bicarbonato sódico acuoso saturado (3 x 100 ml). Los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, metanol al 0 %-10 % en diclorometano) seguido de cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, acetato de etilo al 0 %-100 % en diclorometano, metanol al 0 %-10 % en acetato de etilo) para proporcionar 7,3 g del producto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 81,44 (t, J = 7,2 Hz, 6H); 2,29 (s, 6H); 3,55 (s, 2H); 4,43 (c, J = 7,1 Hz, 4H); 8,20 (d, J = 1,5 Hz, 2H); 8,61 (t, J = 1,5 Hz, 1H) ppm.
Intermedio 77b: (5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)dimetanol
Figure imgf000088_0003
En un matraz de fondo redondo, se recogió LAH (2,480 g, 65,3 mmol) en tetrahidrofurano (50 ml) y la reacción se puso en un baño de agua a temperatura ambiente. El Intermedio 77a (7,3 g, 26,1 mmol) se disolvió en THF (10 ml) y se añadió gota a gota durante 10 minutos a la suspensión de LAH para mantener la reacción exotérmica por debajo del reflujo. La suspensión de color verde resultante se agitó durante una noche a temperatura ambiente, momento en el que cambió de color a gris oscuro. La reacción se diluyó hasta 150 ml con más cantidad de THF y se interrumpió con agua (2,5 ml) mediante adición gota a gota para mantener la temperatura por debajo del reflujo. Después de agitar a temperatura ambiente durante 15 minutos, la reacción se interrumpió adicionalmente con NaOH acuoso 2,5 M (5 ml) mediante adición gota a gota durante 5 minutos. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos y se añadió gota a gota agua (7,5 ml) durante 1 min, momento en el que la suspensión se volvió de color blanco. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h, después de lo cual las sales se filtraron a través de celite con lavado con acetato de etilo. El filtrado se recogió y se concentró a presión reducida para proporcionar un aceite incoloro viscoso. El material se disolvió en diclorometano y se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, metanol al 0 %-50 % en diclorometano). Las fracciones del producto se recogieron y los disolventes se eliminaron a presión reducida para proporcionar un aceite incoloro. El material se disolvió en diclorometano (100 ml) y se filtró. El lavado del residuo con acetato de etilo dio como resultado más cantidad de precipitado. Los disolventes se eliminaron a presión reducida y el material se disolvió de nuevo en acetato de etilo (100 ml), se filtró y los disolventes se eliminaron a presión reducida para proporcionar 4 g del producto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 82,21 (s, 6H); 3,37 (s, 2H); 3,77 (s a, 2H); 4,56 (s, 4H); 7,16 (s, 2H); 7,21 (s, 1H) ppm.
Intermedio 77c: ácido 4-((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)-4-oxobutanoico
Figure imgf000089_0001
En un vial de vidrio de borosilicato, linoleil alcohol (2 g, 7,51 mmol) y DMAP (0,046 g, 0,375 mmol) se agitaron en cloroformo (7 ml). Se añadió anhídrido succínico (1,127 g, 11,26 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente. Después de 3 días, la reacción se purificó directamente por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, metanol al 0 -10 % en diclorometano), lo que proporcionó 2,73 g del producto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 80,91 (t, J = 7,0 Hz, 3H); 1,27-1,41 (m, 17H); 1,64 (m, 2H); 2,07 (dd, J = 7,0, 13,8 Hz, 4H); 2,62-2,73 (m, 4H); 2,79 (t, J = 6,7 Hz, 2H); 4,11 (t, J = 6,8 Hz, 2H); 5,32-5,44 (m, 4H) ppm.
Compuesto del Ejemplo 77: di((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-il)disuccinato de O,O'-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno))
Figure imgf000089_0002
En un vial de vidrio de borosilicato, el Intermedio 77b (250 mg, 1,280 mmol) se agitó en diclorometano (10 ml). Se añadieron secuencialmente DIPEA (0,671 ml, 3,84 mmol), DMAP (15,64 mg, 0,128 mmol), EDC (736 mg, 3,84 mmol) y el material del Intermedio 77c (1032 mg, 2,82 mmol). La reacción se cerró herméticamente y se agitó a temperatura ambiente. Después de 2 días, la reacción se purificó directamente por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, equilibrada con ácido fórmico al 1 % en diclorometano, purificación con metanol al 0 % - 10 % en diclorometano) para proporcionar 916 mg del producto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 88,24 (s, 0,5H, formate); 7,55 (s, 2H); 7,41 (s, 1H); 5,43-5,31 (m, 8H); 5,20 (s, 4H); 4,16 (s, 2H); 4,08 (t, J = 6,8Hz, 4H); 2,79 (t, J = 6,8 Hz, 4H); 2,75 (s, 6H); 2,75-2,66 (m, 8H); 2,06 (c, J = 6,6 Hz, 8H); 1,66-1,59 (m, 4H); 1,40-1,27 (m, 32H); 0,90 (t, J = 6,5Hz, 6H) ppm.
ES-MS m/z = 892,7 (MH+).
* Ejemplo 78: bis(10-(octanoiloxi)decil)disuccinato de O,O'-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno))
Figure imgf000089_0003
El Ejemplo 78 puede prepararse usando métodos similares a los usados en la síntesis del Intermedio 18a y el Ejemplo 77.
1H RMN (400 MHz, COCI3) 58,37 (s, 1,6 H, fórmate); 7,42 (s, 2H); 7,38 (s, 1H); 5,18 (s, 4H); 4,10-4,05 (m, 10H); 2,74­ 2,65 (m, 14H); 2,31 (t, J = 7,5Hz, 4H); 1,66-1,59 (m, 12H); 1,40-1,25 (m, 40H); 0,90 (t, J = 7,0Hz, 6H) ppm.
ES-MS m/z = 960,9 (MH+)
* Síntesis del Ejemplo 79:
Intermedio 79a: ácido 8-(noniloxi)-8-oxooctanoico
Figure imgf000090_0001
En un matraz de fondo redondo de 250 ml equipado con una barra de agitación, se disolvieron ácido subérico (5 g, 28,7 mmol) y EDC (6,60 g, 34,4 mmol) en DCM (150 ml). Se añadió DIPEA (15,04 ml, 86 mmol) seguido de DMAP (1,403 g, 11,48 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h antes de la adición de 1-nonanol (5,01 ml, 28,7 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el material resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente para proporcionar 1 g del producto deseado.
Compuesto del Ejemplo 79: 8-dinonildioctanodioato de O'1,O1-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno))
Figure imgf000090_0002
El Ejemplo 79 puede prepararse usando métodos similares a los usados para el Ejemplo 77.
1H RMN (400 MHz, COCh) 57,26 (s, 2 H), 7,23 (s, 1 H), 5,10 (s, 4 H), 4,05 (t, J = 6,8 Hz, 4 H), 3,44 (s, 2 H), 2,36 (t, J = 7,7 Hz, 4 H), 2,31-2,25 (m, 10 H), 1,69-1,58 (m, 12 H), 1,36-1,27 (m, 32 H), 0,88 (t, J = 7,0 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 760,4 (MH+).
* Ejemplo 80: dinonanodioato de O'1,O1-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno))9-dioctilo
Figure imgf000090_0003
El Ejemplo 80 puede prepararse métodos similares a los empleados para la preparación del Ejemplo 79.
1H RMN (400 MHz, CDCls) 57,27 (s, 2 H), 7,24 (s, 1 H), 5,11 (s, 4 H), 4,07 (t, J = 6,8 Hz, 4 H), 3,44 (s, 2 H), 2,37 (t, J = 7,7 Hz, 4 H), 2,30 (t, J = 7,5 Hz, 4 H), 2,26 (s, 6 H), 1,67-1,59 (m, 12 H), 1,33-1,29 (m, 32 H), 0,90 (t, J = 8,0 Hz, 6 H) ppm. ES-MS m/z = 760,4 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 81:
Intermedio 81a: 3-(3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenil)acrilato de metilo
Figure imgf000091_0001
Se añadió fosfonoacetato de trimetilo (357 mg, 1,96 mmol) a una suspensión de NaH (78 mg, 1,96 mmol) en THF (10 ml) que se agitó en un baño de hielo. Después de 10 min, el aldehído de partida (1 g, 1,63 mmol), preparado usando un procedimiento análogo al del Ejemplo 1a, se disolvió en THF (5 ml) y se añadió lentamente. La reacción se agitó durante 1 h, después se añadió agua enfriada con hielo (5 ml) y la mezcla resultante se extrajo con EtOAc (3 x 30 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron a presión reducida. El material resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente para proporcionar 1,2 g del material deseado.
TLC (gel de sílice, acetato de etilo al 10 % en hexano): Fr = 0,77.
Intermedio 81b: 3-(3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenil)propan-1-ol
Figure imgf000091_0002
El Intermedio 81a (2,6 g, 3,7 mmol) en THF (75 ml) se enfrió en un baño de hielo y se añadió en porciones hidruro de litio y aluminio (300 mg, 7,9 mmol). La reacción se agitó durante 45 min en un baño de refrigeración y después se interrumpió con agua enfriada con hielo. El material resultante se filtró a través de celite y el filtrado se concentró a presión reducida. El material resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente para proporcionar 2,5 g del material deseado.
TLC (gel de sílice, EtOAc al 10 % en hexano): Fr = 0,21
Compuesto del Ejemplo 81: 3-(dimetilamino)propanoato de 3-(3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenil)propilo
Figure imgf000091_0003
El Ejemplo 81 puede prepararse a partir del Intermedio 81b usando métodos similares a los usados para la síntesis del Ejemplo 13.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 86,34 (d, J = 2,0 Hz, 2H), 6,32 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 5,27 - 5,47 (m, 8H), 4,16 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 3,93 (t, J = 6,5 Hz, 4H), 2,92 - 3,03 (m, 2H), 2,80 (dd, J = 6,4, 6,4 Hz, 4H), 2,61 - 2,69 (m, 4H), 2,58 (s, 6H), 2,07 (c, J = 6,9 Hz, 8H), 1,91 - 2,03 (m, 2H), 1,71 -1,85 (m, J = 7,8 Hz, 4H), 1,42 - 1,52 (m, 4H), 1,23 -1,41 (m, 29H), 0,91 (t, J = 6,8 Hz, 6H) ppm.
ES-MS m/z = 764,6 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 82:
Intermedio 82a: ácido 4-((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dienoiloxi)butanoico
Figure imgf000091_0004
El alcohol de partida, octadeca-9,12-dienoato de (9Z,12Z)-4-hidroxibutilo (1,0 g, 2,8 mmol), preparado usando una química como la del Intermedio 18a, se agitó en acetona (25 ml) y se enfrió en un baño de hielo. Se añadió gota a gota reactivo de Jones (2,27 ml, 2,5 M, 5,67 mmol) y el baño de hielo se retiró. Después de 1 h de agitación, se añadió MeOH (5 ml) seguido de EtOAc (220 ml). La mezcla resultante se lavó con 1:1 de agua:salmuera y después con salmuera. La capa orgánica resultante se secó sobre sulfato sódico y después los volátiles se eliminaron a presión reducida. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente para proporcionar 672 mg del material deseado.
13C RMN (100 MHz, CDCh) 86,178,3, 173,8, 130,2, 130,0, 128,0, 127,9, 63,0, 34,2, 31,5, 30,4, 29,6, 29,3, 29,2, 29,1, 27,2, 25,6, 24,9, 23,7, 22,5, 14,1 ppm.
Compuesto del Ejemplo 82: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-(((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno))bis(oxi))bis(4-oxobutano-4,1-diílo)
Figure imgf000092_0001
El Intermedio 82a (672 mg, 1,83 mmol) se agitó en DCE (40 ml). Se añadió EDC (501 mg, 2,6 mmol) seguido del material del Intermedio 77b (170 mg, 0,87 mmol) en forma de una solución en DCE (10 ml). Se añadieron TEA (0,485 ml, 3,48 mmol) y DMAP (21 mg, 0,17 mmol) y la reacción se agitó durante 3 días a temperatura ambiente. La reacción se concentró a presión reducida y el material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente para proporcionar 359 mg del material deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 87,31 -7,28 (m, 2 H), 7,25 - 7,23 (m, 1 H), 5,44 -5,28 (m, 8 H), 5,12 (s, 4 H), 4,11 (t, J = 6,4 Hz, 4 H), 2,81 - 2,73 (m, 4 H), 2,46 (t, J = 7,4 Hz, 4 H), 2,32 - 2,24 (m, 9 H), 2,09 - 1,94 (m, 12 H), 1,69 - 1,51 (m, 5 H), 1,42 - 1,22 (m, 28 H), 0,89 (t, J = 6,9 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 892,7 (MH+).
Los Ejemplos 83 - 88 pueden prepararse usando métodos similares a los empleados para la preparación del Ejemplo 82. * Ejemplo 83: bis(decanoato) de (((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno))bis(oxi))bis(8-oxooctano-8,1-diílo)
Figure imgf000092_0002
1H RMN (400 MHz, CDCh) 87,28 - 7,25 (m, 2 H), 7,24 - 7,21 (m, 1 H), 5,10 (s, 4 H), 4,05 (t, J = 6,8 Hz, 4 H), 3,43 (s, 2 H), 2,36 (t, J = 7,6 Hz, 4 H), 2,29 (t, J = 7,6 Hz, 4 H), 2,25 (s, 6 H), 1,72 - 1,52 (m, 12 H), 1,42 -1,14 (m, 36 H), 0,95 -0,75 (m, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 788,4 (MH+).
* Ejemplo 84: dioctanoato de (((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno))bis(oxi))bis(4-oxobutano-4,1-diílo)
Figure imgf000092_0003
El Ejemplo 84 se caracterizó como la sal formiato.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 88,33 (s, 1H, formate); 7,54 (s, 2H); 7,39 (s, 1H); 5,17 (s, 4H); 4,15 (s, 2H), 4,12 (t, J = 6,4Hz, 4H); 2,74 (s, 6H); 2,50 (t, J = 7,4Hz, 4H); 2,30 (t, J = 7,5Hz, 4H); 2,04-1,97 (m, 4H); 1,65-1,58 (m, 4H); 1,34-1,23 (m, 16H); 0,88 (t, J = 6,7Hz, 6H) ppm.
LCMS m /z = 620,2 (MH+).
* Ejemplo 85: dioctanoato de (((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno))bis(oxi))bis(6-oxohexano-6,1-diílo)
Figure imgf000093_0001
1H RMN (400 MHz, CDCh) 68,30 (s, 0,6H, formate); 7,54 (s, 2H); 7,40 (s, 1H); 5,15 (s, 4H); 4,15 (s, 2H); 4,06 (t, J = 6,5Hz, 4H); 2,74 (s, 6H); 2,42 (t, J = 7,5 Hz, 4H); 2,29 (t, J = 7,5 Hz, 4H); 1,73-1,58 (m, 12H); 1,44-1,36 (m, 4H); 1,34-1,23 (m, 16H); 0,88 (t, J = 6,3Hz, 6H) ppm.
LCMS m/z = 676,2 (MH+).
* Ejemplo 86: bis(10-(octanoiloxi)decanoato) de (5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno)
Figure imgf000093_0002
1H RMN (400 MHz, COCh) 67,50 (s, 2H); 7,38 (s, 1H); 5,14 (s, 4H); 4,06 (t, J = 6,8Hz, 4H); 3,97 (s, 2H); 2,63 (s, 6H); 2,39 (t, J = 7,7Hz, 4H); 2,30 (t, J = 7,5Hz, 4H); 1,69-1,59 (m, 12H); 1,38-1,25 (m, 36H); 0,89 (t, J = 7,0, 6H) ppm.
LCMS m/z = 788,8 (MH+).
* Ejemplo 87: bis(8-(octanoiloxi)octanoato) de (5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno)
Figure imgf000093_0003
1H RMN (400 MHz, CDCh) 67,52 (s, 2H); 7,38 (s, 1H); 5,15 (s, 4H); 4,06 (t, J = 6,7Hz, 4H); 3,99 (s, 2H); 2,65 (s, 6H); 2,40 (t, J = 7,5Hz, 4H); 2,30 (t, J = 7,5Hs, 4H); 1,70-1,59 (m, 12H); 1,38-1,25 (m, 28H); 0,89 (t, J = 6,8Hz, 6H) ppm.
LCMS m/z = 732,8 (MH+).
* Ejemplo 88: bis(decanoato) de (((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno))bis(oxi))bis(6-oxohexano-6,1-diílo) 1
Figure imgf000093_0004
1H RMN (400 MHz, CDCh) 67,54 (s, 2H); 7,38 (s, 1H); 5,15 (s, 4H); 4,07 (t, J = 6,7Hz, 4H); 4,02 (s, 2H); 2,66 (s, 6H); 2,42 (t, J = 7,5Hz, 4H); 2,30 (t, J = 7,7Hz, 4H); 1,74-1,58 (m, 12H); 1,45-1,37 (m, 4H); 1,35-1,22 (m, 24H); 0,89 (t, J = 7,0Hz, 6H) ppm.
LCMS m /z =732,8 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 89:
Intermedio 89a: 5,5'-((5-formil-1,3-fenileno)bis(oxi))dipentanoato de dimetilo
Figure imgf000094_0001
A una solución de 3,5-dihidroxibenzaldehído (1,0 g, 7,24 mmol) en acetona (35 ml) se le añadió 5-bromopentanoato de metilo (3,53 g, 18,1 mmol). Se añadió carbonato potásico (3,0 g, 22 mmol) y la reacción se calentó a reflujo en un baño de aceite. Después de calentar durante una noche, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se dejó en agitación durante 4 días. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el material se suspendió de nuevo en d Cm . La mezcla resultante se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida para dar un material en bruto que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente para proporcionar 824 mg del material deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 89,89 (s, 1H), 6,99 (s, 2H), 6,68 (s, 1H), 4,01 (m, 4H), 3,68 (s, 6H), 2,41 (m, 4H), 1,84 (m, 8H) ppm.
Intermedio 89b: ácido 5,5'-((5-formil-1,3-fenileno)bis(oxi))dipentanoico
Figure imgf000094_0002
El Intermedio 89a (824 mg, 2,25 mmol) se agitó en EtOH (15 ml). Se añadieron hidróxido potásico (505 mg, 9,0 mmol) y agua (5 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Después, el material se diluyó con EtOAc (100 ml) y se lavó con HCl 1 M (2 x 50 ml). La fase orgánica resultante se secó sobre sulfato sódico y se concentró a presión reducida para proporcionar 710 mg del material deseado.
1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 89,90 (s, 1H), 7,03 (s, 2H), 6,81 (s, 1H), 4,02 (m, 4H), 2,29 (m, 4H), 1,6-1,8 (m, 8H) ppm.
Intermedio 89c: 5,5'-((5-formil-1,3-fenileno)bis(oxi))dipentanoato de di((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-ilo)
Figure imgf000094_0003
El Intermedio 89b (710 mg, 2,1 mmol) se agitó en DCM (20 ml). Se añadió linoleil alcohol (1,40 g, 5,25 mmol) junto con DMAP (64 mg, 0,52 mmol) y ácido paratoluenosulfónico monohidrato (100 mg, 0,52 mmol). Después, se añadió EDC (1,0 g, 5,25 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 48 h. El material se purificó directamente por cromatografía sobre gel de sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente para proporcionar 1,32 g de material que contenía el producto deseado y aproximadamente 30 % de linoleil alcohol. El material se llevó a continuación sin purificación adicional.
Compuesto del Ejemplo 89: 5,5'-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))dipentanoato de di((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-ilo)
Figure imgf000095_0001
El Ejemplo 89 puede prepararse a partir del Intermedio 89c usando métodos similares a los descritos en el Ejemplo 33.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 86,46 (d, J = 2,20 Hz, 2 H), 6,33 (t, J = 2,30 Hz, 1 H), 5,27-5,45 (m, 8 H), 4,07 (t, J = 6,80 Hz, 4 H), 3,88-4,01 (m, 4 H), 3,34 (s, 2 H), 2,78 (t, J = 6,65 Hz, 4 H), 2,33-2,44 (m, 4 H), 2,24 (s, 6 H), 1,98-2,13 (m, 8 H), 1,75­ 1,88 (m, 8 H), 1,55-1,70 (m, 4 H), 1,22-1,43 (m, 32 H), 0,90 (t, J = 6,90 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 864,5 (MH+).
* Ejemplo 90: 6,6'-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))dihexanoato de didodecilo
Figure imgf000095_0002
El Ejemplo 90 puede prepararse métodos similares a los empleados para la preparación del Ejemplo 89.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 86,48 (s a., 2 H) 6,35 (s a., 1 H) 4,00 -4,11 (m, 4 H) 3,94 (t, J=6,44 Hz, 4 H) 2,34 (t, J=7,45 Hz, 5 H) 2,27 (s a., 3 H) 1,57 - 1,85 (m, 12 H) 1,40 - 1,57 (m, 4 H) 1,20 - 1,39 (m, 40 H) 0,80 - 0,98 (m, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 732,1 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 91:
Intermedio 91a: 4-metilbencenosulfonato de 2-(2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)etilo
Figure imgf000095_0003
A una suspensión de 2-(2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)etanol (10 g, 68,4 mmol) en DCM (100 ml) se le añadió piridina (25 ml). Se añadió anhídrido toluenosulfónico (26,8 g, 82 mmol) y la reacción se agitó durante una noche a temperatura ambiente. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el material resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente para proporcionar 8,92 g del material deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 87,82-7,77 (m, 2 H), 7,38-7,32 (m, 2 H), 4,21-4,07 (m, 3 H), 4,05-3,99 (m, 1 H), 3,55-3,49 (m, 1H), 2,45 (s, 3 H), 1,97-1,83 (m, 2 H), 1,34 (s, 3 H), 1,29 (s, 3 H) ppm.
Intermedio 91b: 3,5-bis(2-(2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)etoxi)benzaldehído
Figure imgf000095_0004
A un matraz que contenía el Intermedio 91a (8,92 g, 29,7 mmol) se le añadieron 3,5-dixidroxibenzaldehído (1,9 g, 13,8 mmol) y DMF (50 ml). Se añadió carbonato potásico (5,7 g, 41,3 mmol) y la reacción se calentó a 80 °C durante una noche. La reacción se enfrió y se añadió agua. El material resultante se extrajo con EtOAc y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente para proporcionar 1,9 g del producto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 89,89 (s, 1 H), 7,02-6,99 (m, 2 H), 6,72-6,68 (m, 1 H), 4,36-4,26 (m, 2 H), 4,18-4,07 (m, 6 H), 3,68-3,62 (m, 2 H), 2,10-2,02 (m, 4 H), 1,43 (s, 3 H), 1,37 (s 3 H) ppm.
Intermedio 91c: 1-(3,5-bis(2-(2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)etoxi)fenil)-N,N-dimetilmetanamina
Figure imgf000096_0001
El Intermedio 91b (1,4 g, 3,55 mmol) se agitó en DCE (35 ml). Se añadió dimetilamina (7,10 ml, 2 M en THF, 14,2 mmol) seguido de ácido acético (0,20 ml, 3,6 mmol) y después triacetoxiborohidruro sódico (1,88 g, 8,87 mmol). La reacción se tapó y se dejó en agitación a temperatura ambiente durante una noche. La reacción se interrumpió con bicarbonato sódico acuoso saturado y la mezcla resultante se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron a presión reducida para dar 1,34 g de un material en bruto que se usó sin purificación adicional.
Intermedio 91d: 4,4'-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-1,2-diol)
Figure imgf000096_0002
El Intermedio 91c (1,34 g, 3,16 mmol) se agitó en MeOH (20 ml). Se añadió HCl acuoso concentrado (0,19 ml, 6,33 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el material se usó sin purificación adicional.
ES-MS m/z = 344,2 (MH+).
Compuesto del Ejemplo 91: tetraoctanoato de 4,4'-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-1,2-diílo)
Figure imgf000096_0003
El Intermedio 91d (1,0 g, 2,63 mmol) se agitó en DMF (6 ml) hasta que se disolvió. Se añadió DCM (6 ml), seguido de piridina (1,7 ml, 21 mmol) y DMAP (0,096 mg, 0,79 mmol). A la reacción en agitación se le añadió lentamente cloruro de octanoílo (2,14 g, 13,16 mmol) y la mezcla resultante se dejó en agitación durante 3 días a temperatura ambiente. La reacción se diluyó con agua y bicarbonato sódico acuoso saturado y la mezcla resultante se extrajo con DCM y EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y los volátiles se eliminaron a presión reducida. El material se purificó usando gel de sílice que se había lavado previamente con ácido acético al 1 % (en volumen) en DCM. El compuesto se eluyó con EtOAc/heptanos y las fracciones que contenían el producto se lavaron con bicarbonato sódico acuoso saturado. Los extractos orgánicos resultantes se secaron sobre sulfato sódico y después se concentraron a presión reducida. El material resultante se purificó por segunda vez sobre sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente para producir 1,65 g del producto deseado
1H RMN (400 MHz, CDCla) 86,59 (s a, 2 H) 6,36 (s a, 1 H) 5,25 - 5,37 (m, 2 H) 4,35 (dd, J=12,05, 3,26 Hz, 2 H) 4,12 (dd, J=11,92, 6,15 Hz, 2 H) 3,91 -4,09 (m, 4 H) 3,58 (s a, 2 H) 2,25 -2,55 (m, 14 H) 2,01 -2,13 (m, 4 H) 1,49 - 1,70 (m, 8 H) 1,13 -1,39 (m, 32 H) 0,77 - 0,99 (m, 12 H) ppm.
ES-MS m / z = 848,6 (MH+).
Los Ejemplos 92 - 94 pueden prepararse usando métodos similares a los empleados para la preparación del Ejemplo 91. * Ejemplo 92: dioctanoato de (R)-4-(3-((S)-3,4-bis(octanoiloxi)butoxi)-5-((dimetilamino)metil)fenoxi)butano-1,2-diílo
Figure imgf000097_0001
1H RMN (400 MHz, CDCh) 80,74 -0,97 (m, 12 H) 1,14 -1,40 (m, 32 H) 1,51 -1,71 (m, 8 H) 2,07 (c, J=5,94 Hz, 4 H) 2,21 -2,46 (m, 14 H) 3,44 (s., 2 H) 3,89 -4,07 (m, 4 H) 4,12 (dd, J=11,92, 6,15 Hz, 2 H) 4,34 (dd, J=12,05, 3,26 Hz, 2 H), 5,20 - 5,40 (m, 2 H) 6,32 (t, J=2,26 Hz, 1 H) 6,49 (d, J=2,01 Hz, 2 H) ppm.
ES-MS m/z = 848,3 (MH+).
* Ejemplo 93: dioctanoato de (S)-4-(3-((S)-3,4-bis(octanoiloxi)butoxi)-5-((dimetilamino)metil)fenoxi)butano-1,2-diílo
Figure imgf000097_0002
1H RMN (400 MHz, CDCla) 80,87 (m, 12 H) 1,14 -1,38 (m, 32 H) 1,48 - 1,72 (m, 8 H) 2,07 (c, J=6,19 Hz, 4 H) 2,22 -2,41 (m, 14 H) 3,44 (s., 2 H) 3,87 -4,07 (m, 4 H) 4,12 (dd, J=11,92, 6,15 Hz, 2 H) 4,34 (dd, J=12,05, 3,26 Hz, 2 H) 5,20 -5,40 (m, 2 H) 6,32 (t, J=2,26 Hz, 1 H) 6,49 (d, J=2,01 Hz, 2 H) ppm.
ES-MS m/z = 848,3 (MH+).
* Ejemplo 94: dioctanoato de (R)-4-(3-((R)-3,4-bis(octanoiloxi)butoxi)-5-((dimetilamino)metil)fenoxi)butano-1,2-diílo
Figure imgf000097_0003
1H RMN (400 MHz, CDCh) 80,87 (m, 12 H) 1,12 -1,40 (m, 32 H) 1,47 -1,71 (m, 8 H) 2,07 (c, J=6,44 Hz, 4 H) 2,18 -2,38 (m, 14 H) 3,47 (s, 2 H) 3,85 -4,06 (m, 4 H) 4,12 (dd, J=11,92, 6,15 Hz, 2 H) 4,34 (dd, J=11,92, 3,39 Hz, 2 H) 5,20 - 5,40 (m, 2 H) 6,33 (t, J=2,26 Hz, 1 H) 6,49 (d, J=2,01 Hz, 2 H) ppm.
ES-MS m/z = 848,3 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 95:
Intermedio 95a: 3,4,5-tris((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)benzaldehído
Figure imgf000098_0001
Se mezclaron 3,4,5-trihidroxibenzaldehído (600 mg, 3,89 mmol), LinOMs (4427 mg, 12,85 mmol) y carbonato potásico (2690 mg, 19,47 mmol) en DMF (30 ml) y se calentaron a 80 °C durante una noche. La mezcla de reacción se vertió en hielo-agua (100 ml) y se extrajo con éter dietílico (100 ml x 2). La fase orgánica se recogió y se secó sobre sulfato sódico y los volátiles se eliminaron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente para proporcionar 2,76 g, del material deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 89,84 (s, 1H),7,72 (dd, J=5,77, 3,26Hz, 1H), 7,50-7,58 (m, 1H), 7,09 (s, 2H), 5,22-5,47 (m, 13H), 4,23 (t, J=6,02Hz, 1H), 3,94-4,12 (m, 7H), 2,78 (t, J=6,40Hz, 7H), 2,06 (c, J=6,69Hz, 13H), 1,78-1,91(m, 5H), 1,73­ 1,78 (m, 2H), 1,70 (dd, J=11,42, 5,40Hz, 1H), 1,58 (s, 1H), 1,42-1,55 (m, 8H) 1,22-1,42 (m, 51H) 0,82-0,98 (m, 13H) ppm. Compuesto del Ejemplo 95: N,N-dimetil-1-(3,4,5-tris((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenil)metanamina
Figure imgf000098_0002
El Ejemplo 95 puede prepararse a partir del Intermedio 95a usando condiciones de reacción similares a las usadas en la preparación del Ejemplo 33.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 86,50 (s, 2 H), 5,44-5,29 (m, 12 H), 4,00-3,91 (m, 6 H), 3,32 (s, 2 H), 2,81-2,75 (m, 6 H), 2,24 (s, 6 H), 2,10-2,01 (m, 12 H), 1,85-1,65 (m, 8 H), 1,52-1,24 (m, 50 H), 0,92-0,86 (m, 9 H) ppm.
13C RMN (100 MHz, CDCta) 8152,9, 137,5, 134,1, 130,2, 130,1, 130,1, 128,0, 127,9, 107,3, 73,3, 69,0, 64,7, 45,4, 31,3, 30,3, 29,7, 29,7, 29,6, 29,6, 29,5, 29,4, 29,4, 29,3, 29,3, 27,3, 27,2, 27,2, 26,1, 25,6, 22,6, 14,1 ppm.
* Síntesis del Ejemplo 96:
Intermedio 96a: decanoato de 4-hidroxibutilo
Figure imgf000098_0003
A una solución de butanodiol (3,54 g, 39,3 mmol) en DCM (80 ml) se le añadieron piridina (1,65 ml, 20,4 mmol) y DMAP (0,38 g, 3,2 mmol). Se añadió cloruro de decanoílo (3,0 g, 15,7 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el material resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente para producir 3,3 g del producto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCta) 84,1 (m, 2H), 3,7 (m, 2H), 2,3 (m, 2H), 1,7 (m, 2H), 1,6 (m, 4H), 1,3 (m, 12H), 0,9 (m, 3H) ppm. Intermedio 96b: ácido 4-(decanoiloxi)butanoico
Figure imgf000098_0004
El Intermedio 96b puede prepararse a partir del Intermedio 98a y usando condiciones similares a las usadas en la síntesis del Intermedio 84a.
1H RMN (400 MHz, CDCta) 84,1 (m, 2H), 2,5 (m, 2H), 2,3 (m, 2H), 2,0 (m, 2H), 1,6 (m, 2H), 1,3 (m, 12H), 0,9 (m, 3H) ppm.
Intermedio 96c: decanoato de 4-(3-hidroxipropoxi)-4-oxobutilo
Figure imgf000099_0001
El Intermedio 98c puede prepararse a partir del Intermedio 98b y 1,3-propanodiol usando condiciones similares a las empleadas en la preparación del Intermedio 18a.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 84,3 (m, 2H), 4,1 (m, 2H), 3,7 (m, 2H), 2,4 (m, 2H), 2,3 (m, 2H), 2,0 (m, 2H), 1,9 (m, 3H), 1,6 (m, 2H), 1,3 (m, 12H), 0,9 (m, 3H) ppm.
Intermedio 96d: bis(decanoato) de ((((5-formil-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(propano-3,1-diil))bis(oxi))bis(4-oxobutano-4,1-diílo)
Figure imgf000099_0002
El Intermedio 96d puede prepararse a partir del Intermedio 98c usando condiciones similares a las empleadas en la síntesis del Intermedio 18b.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 889,9 (s, 1H), 7,0 (s, 2H), 6,7 (s, 1H), 4,3 (m, 4H), 4,1 (m, 8H), 2,4 (m, 4H), 2,3 (m, 4H), 2,2 (m, 4H), 2,0 (m, 4H), 1,6 (m, 4H), 1,3 (m, 24H), 0,9 (m, 6H) ppm.
Compuesto del Ejemplo 96: bis(decanoato) de ((((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(propano-3,1-diil))bis(oxi))bis(4-oxobutano-4,1-diílo)
Figure imgf000099_0003
El Ejemplo 96 puede prepararse a partir del Intermedio 96d usando condiciones de reacción similares a las usadas en la síntesis del Ejemplo 33.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 80,81 - 0,92 (m, 6 H) 1,18 - 1,37 (m, 24 H) 1,53 - 1,67 (m, 4 H) 1,96 (quin, J=6,90 Hz, 4 H) 2,09 (quin, J=6,27 Hz, 4 H) 2,23 (s, 6 H) 2,28 (t, J=7,53 Hz, 4 H) 2,40 (t, J=7,53 Hz, 4 H) 3,33 (s, 2 H) 4,02 (t, J=6,02 Hz, 4 H) 4,09 (t, J=6,00 Hz, 4 H) 4,26 (t, J=6,27 Hz, 4 H) 6,33 (t, J=2,26 Hz, 1 H) 6,47 (d, J=2,26 Hz, 2 H) ppm.
ES-MS m/z = 764,5 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 97:
Intermedio 97a: 3-octilundec-2-enoato de etilo
Figure imgf000099_0004
Una solución de 9-heptadecanona (15 g, 59 mmol) y fosfonoacetato de trietilo (13,2 g, 59 mmol) se agitó en THF (100 ml). A esta reacción se le añadió NaOEt (26,4 ml, al 21 % en EtOH, 70,7 mmol) y la solución resultante se calentó a reflujo durante 48 h. La reacción se acidificó con HCl 1 M y después se diluyó con EtOAc. La capa orgánica se recogió y se lavó con bicarbonato sódico acuoso saturado. El material orgánico resultante se secó sobre sulfato sódico y los volátiles se eliminaron a presión reducida para producir un material en bruto que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente, proporcionando 11,7 g del producto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 85,62 (s, 1 H) 4,01 - 4,26 (m, 2 H) 2,49 - 2,68 (m, 2 H) 2,13 (m, 2 H) 1,44 (dd, J=7,33, 4,80 Hz, 4 H) 1,17 -1,35 (m, 23 H) 0,83 - 0,98 (m, 6 H) ppm.
Intermedio 97b: 3-octilundecanoato de etilo
Figure imgf000100_0001
El Intermedio 97a (11,75 g, 36,2 mmol) se agitó en DCM (16,5 ml) y MeOH (165 ml). Se añadió Pd/C (3,85 g, Pd al 10 %) y el matraz de reacción se equipó con un globo relleno de hidrógeno. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 24 h. La reacción se desgasificó con nitrógeno y se filtró a través de celite con un lavado de DCM y MeOH. El filtrado se recogió y los volátiles se eliminaron a presión reducida para proporcionar 10,6 g de material que se usó sin purificación adicional.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 84,13 (c, J=7,16 Hz, 2 H) 2,39 (t, J=7,45 Hz, 2 H) 2,22 (d, J=6,82 Hz, 2 H) 1,84 (s a., 1 H) 1,56 (t, J=7,20 Hz, 2 H) 1,19 -1,36 (m, 27 H) 0,81 - 0,95 (m, 6 H) ppm.
Intermedio 97c: ácido 3-octilundecanoico
Figure imgf000100_0002
El Intermedio 97b (10,6 g, 32,5 mmol) se agitó con NaOH (9,74 ml, 10 M, 97,4 mmol) en MeOH (100 ml) y DCM (10 ml). La reacción se calentó a reflujo durante una noche. Se añadió HCl acuoso para neutralizar la solución, los volátiles se eliminaron a presión reducida y el material resultante se recogió de nuevo en DCM. Los extractos orgánicos se lavaron con bicarbonato sódico acuoso saturado y la capa acuosa resultante se extrajo con DCM. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente. El material resultante se recogió en DCM y se cargó sobre una columna funcionalizada con NH2. La columna se lavó con DCM y después con DCM/MeOH. El producto se eluyó con metanol ácido y el eluyente se concentró a presión reducida. El residuo se recogió en DCM y se lavó con bicarbonato sódico acuoso saturado, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar 6,5 g del producto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 82,28 (d, J=7,07 Hz, 2 H) 1,86 (s a., 1 H) 1,15 - 1,44 (m, 28 H) 0,82 - 0,97 (m, 6 H) ppm.
Intermedio 97d: 3,5-bis(3-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)propoxi)benzaldehído
Figure imgf000100_0003
Una solución de 3,5-dihidroxibenzaldehído (3 g, 22 mmol) y 2-(3-bromopropoxi)tetrahidro-2H-pirano (8,11 ml, 47,8 mmol) se agitaron en DMF (100 ml). Se añadió carbonato potásico (15 g, 109 mmol) y la reacción se calentó a 80 °C durante una noche. La reacción se diluyó con salmuera y EtOAc, seguido de bicarbonato sódico acuoso saturado. La mezcla resultante se filtró, la capa orgánica se recogió, se secó sobre sulfato sódico y los volátiles se eliminaron a presión reducida. El material resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente para proporcionar 3,8 g del material deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 59,88 (s, 1 H) 6,84 - 7,12 (m, 2 H) 6,68 (t, J=2,40 Hz, 1 H) 4,52 - 4,76 (m, 1 H) 4,13 (t, J=6,32 Hz, 2 H) 3,78 - 4,05 (m, 2 H) 3,44 - 3,73 (m, 2 H) 1,97 - 2,27 (m, 2 H) 1,79 - 1,92 (m, 1 H) 1,67 - 1,79 (m, 1 H) 1,41 -1,67 (m, 4 H) ppm.
Intermedio 97e: 3,5-bis(3-hidroxipropoxi)benzaldehído
Figure imgf000101_0001
El Intermedio 97d (2,6 g, 6,15 mmol) se agitó en MeOH (40 ml) y THF (40 ml) y HCl (24,6 ml, 1 N en agua, 24,6 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. Se añadió bicarbonato sódico acuoso saturado y la reacción se concentró a presión reducida. La mezcla resultante se extrajo con diclorometano y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el material resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente para proporcionar 1,4 g del material deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 59,90 (s, 1 H) 7,03 (d, J=2,27 Hz, 2 H) 6,73 (t, J=2,27 Hz, 1 H) 4,17 (t, J=6,06 Hz, 4 H) 3,88 (t, J=5,81 Hz, 4 H) 1,98 - 2,20 (m, 4 H) ppm.
Intermedio 97f: 3-octildodecanoato de 3-(3-formil-5-(3-hidroxipropoxi)fenoxi)propilo
Figure imgf000101_0002
El Intermedio 97e (1,0 g, 3,93 mmol), el ácido del Intermedio 99c (1,41 g, 4,72 mmol), EDC (0,90 g, 4,7 mmol), DIEA (2,06 ml, 11,8 mmol) y DMAP (0,48 g, 3,93 mmol) se disolvieron en DCE (20 ml) y la solución resultante se dividió en dos partes. Cada parte se calentó en un reactor de microondas durante 20 min a 70 °C. Las mezclas resultantes se combinaron y se purificaron directamente por cromatografía sobre gel de sílice usando heptanos/EtOAc como eluyente para proporcionar 680 mg del material deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 59,90 (s, 1 H) 7,02 (ddd, J=7,83, 2,27, 1,26 Hz, 1 H) 6,72 (t, J=2,27 Hz, 1 H) 4,22 - 4,35 (m, 2 H) 4,13 - 4,22 (m, 2 H) 4,09 (t, J=6,06 Hz, 1 H) 3,88 (c, J=5,81 Hz, 2 H) 2,25 (d, J=6,82 Hz, 2 H) 1,99 - 2,19 (m, 4 H) 1,84 (s a., 1 H) 1,14 -1,38 (m, 30 H) 0,89 (td, J=6,95, 3,54 Hz, 6 H) ppm.
Intermedio 97g: octadeca-9,12-dienoato de (9Z,12Z)-3-(3-formil-5-(3-((3-octildodecanoil)oxi)propoxi)fenoxi)propilo
Figure imgf000101_0003
El Intermedio 97 g puede prepararse a partir del Intermedio 99f usando las condiciones usadas para preparar el Intermedio 18a.
1H RMN (400 MHz, CDCl3) 59,90 (s, 1 H) 7,01 (d, J=2,27 Hz, 2 H) 6,70 (t, J=2,27 Hz, 1 H) 5,28 - 5,44 (m, 4 H) 4,27 (t, J=6,32 Hz, 4 H) 4,02 - 4,17 (m, 4 H) 2,78 (t, J=6,44 Hz, 2 H) 2,32 (t, J=7,45 Hz, 2 H) 2,25 (d, J=6,82 Hz, 2 H) 2,14 (quin, J=6,19 Hz, 4 H) 1,98 -2,09 (m, 4 H) 1,84 (s a., 1 H) 1,58 - 1,70 (m, 2 H) 1,18 -1,41 (m, 42 H) 0,77 -0,99 (m, 9 H) ppm. Compuesto del Ejemplo 97: octadeca-9,12-dienoato de (9Z,12Z)-3-(3-((dimetilamino)metil)-5-(3-((3-octilundecanoil)oxi)propoxi)fenoxi)propilo
Figure imgf000102_0001
El Ejemplo 97 puede prepararse a partir del Intermedio 97 g usando condiciones similares a las usadas para preparar el Ejemplo 39.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 86,49 (s a., 2 H) 6,27 - 6,43 (m, 1 H) 5,29 - 5,46 (m, 4 H) 4,26 (t, J=6,32 Hz, 4 H) 4,03 (t, J=6,19 Hz, 4 H) 3,36 (s a., 2 H) 2,78 (t, J=6,57 Hz, 2 H) 2,18 -2,39 (m, 10 H) 1,96 -2,18 (m, 8 H) 1,84 (s a., 1 H) 1,48 -1,73 (m, 4 H) 1,17 -1,47 (m, 40 H) 0,74 - 1,03 (m, 9 H) ppm.
ES-MS m/z = 826,3 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 98:
Intermedio 98a: 8-noniloctanodioato de 1 -(3-hidroxipropilo)
Figure imgf000102_0002
El Intermedio 98a puede prepararse a partir del Intermedio 79a usando condiciones similares a las empleadas en la preparación del Intermedio 18a.
TLC (sílice, MeOH al 5 % en DCM): Fr = 0,51.
Compuesto del Ejemplo 98: dinonanodioato de O'1.O1-(((5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-1.3-fen¡leno)b¡s(ox¡))b¡s(propano-3,1-d¡¡l)) 9-dioctilo
Figure imgf000102_0003
El Ejemplo 98 puede prepararse a partir del Intermedio 98a usando condiciones similares a las descritas para la preparación del Ejemplo 33.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 86,47 (s, 2 H), 6,34 (s, 1 H), 4,25 (t, J = 6,3 Hz, 4 H), 4,07-4,01 (m, 8 H), 3,34 (s, 2 H), 2,29 (c, J = 7,2 Hz, 8 H), 2,24 (s, 6 H), 2,09 (quin, J = 6,2 Hz, 4 H), 1,65-1,58 (m, 12 H), 1,31-1,28 (m, 32 H), 0,88 (t, J = 6,8 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 848,5 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 99:
Intermedio 99a: octanoato de 10-hidroxidecilo
Figure imgf000102_0004
Se preparó a partir de 1,10-decanodiol y cloruro de octanoílo usando condiciones similares a las usadas en la preparación del Intermedio 96a.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 84,06 (t, J=6,65Hz, 2H), 3,64 (t, J=6,65Hz, 2H), 2,29 (t, J=7,65Hz, 2H), 1,50-1,70 (m, 5H), 1,18-1,41 (m, 19H), 0,88 (t, J=7,28Hz, 3H) ppm.
Intermedio 99b: octanoato de 10-((metilsulfonil)oxi)decilo
Figure imgf000103_0001
Una mezcla del Intermedio 99a (3,34 g, 11,1 mmol) y trietilamina (6,2 ml, 44 mmol) en DCM (40 ml) se agitó en un baño de hielo y se añadió MsCl (1,04 ml, 13,3 mmol). La reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante una noche. Después, la reacción se vertió en agua enfriada con hielo. La fase orgánica resultante se recogió, se secó sobre sulfato sódico y se concentró a presión reducida para producir 4,2 g de material que se usó sin purificación adicional.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 84,23 (t, J=6,57Hz, 1H), 4,06 (t, J=6,82Hz, 2H), 3,15 (s, 1H), 3,01 (s, 1H), 2,30 (t, J=7,58Hz, 2H), 1,75 (dd, J=8,08, 6,82Hz, 1H), 1,62 (t, J=6,95Hz, 5H), 1,40(t, J=7,33Hz, 4H), 1,18-1,34 (m, 17H), 0,89 (t, J=7,10Hz, 3H) ppm.
Compuesto del Ejemplo 99: trioctanoato de ((5-((dimetilamino)metil)benceno-1,2,3-triil)tris(oxi))tris(decano-10,1-diílo)
Figure imgf000103_0002
Después, se obtuvo el compuesto final a partir del Intermedio 99b siguiendo procedimientos similares a los usados en la preparación del Intermedio 97d y el Ejemplo 33.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 86,51 (s, 2 H), 4,03 - 4,12 (m, 6 H), 3,89 - 4,03 (m, 6 H), 3,33 (s, 2 H), 2,31 (t, J=7,53 Hz, 6 H), 2,25 (s, 6 H), 1,69 - 1,87 (m, 6 H), 1,55 - 1,69 (m, 12 H), 1,42 - 1,55 (m, 6 H), 1,21 -1,42 (m, 54 H), 0,82 - 0,96 (m, 9 H) ppm.
ES-MS m/z =1030,7 (MH+).
* Ejemplo 100: trioctanoato de ((5-((dietilamino)metil)benceno-1,2,3-triil)tris(oxi))tris(decano-10,1-diílo)
Figure imgf000103_0003
El Ejemplo 100 puede prepararse métodos similares a los empleados para la preparación del Ejemplo 99.
1H RMN (400 MHz, CDCta) 86,55 (s, 2 H), 4,02 -4,12 (m, 6 H), 3,90 -4,02 (m, 6 H), 3,48 (s, 2 H), 2,53 (c, J=7,11 Hz, 4 H), 2,31 (t, J=7,53 Hz, 6 H), 1,69 - 1,87 (m, 6 H), 1,57 - 1,69 (m, 12 H), 1,41 -1,54 (m, 6 H), 1,23 -1,41 (m, 54 H), 1,05 (t, J=7,03 Hz, 6 H), 0,84 - 0,96 (m, 9 H) ppm. ES-MS m/z =1058,7 (MH+).
* Ejemplo 101: 3-octilundecanoato de 3-((dimetilamino)metil)-5-(((8-(octanoiloxi)octanoil)oxi)metil)bencilo
Figure imgf000103_0004
El Ejemplo 101 puede prepararse a partir del Intermedio 77b, el ácido preparado de forma análoga al Intermedio 79a, y el Intermedio 97c, usando métodos similares a los usados para preparar el Ejemplo 77.
1H RMN (400 MHz, CDCta) 87,27 (s, 2 H), 7,24 (s, 1 H), 5,11 (s, 4 H), 4,06 (t, J = 6,8 Hz, 2 H), 3,44 (s, 2 H), 2,37 (t, J = 7,5 Hz, 2 H), 2,32-2,29 (m, 4 H), 2,26 (s, 6 H), 1,88 (m, 1 H), 1,70-1,59 (m, 6 H), 1,35-1,26 (m, 42 H), 0,89 (t, J = 6,8 Hz, 9 H) ppm.
ES-MS m / z = 744,4 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 102:
Intermedio 102a: 2-(3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenil)acetato de metilo
Figure imgf000104_0001
A una suspensión de carbonato potásico (12,1 g, 88 mmol) en dimetilformamida (100 ml) se le añadieron 2-(3,5-dihidroxifenil)acetato de metilo (4,0 g, 22 mmol) y mesilato de linoleílo (16,6 g, 48 mmol). La reacción se calentó en un baño a 100 °C durante 4 h y después se dejó enfriar a temperatura ambiente. Se añadió agua (100 ml) y la reacción se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando acetato de etilo y n-hexano como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
ES-MS m/z = 680 (MH+).
Intermedio 102b: 2-(3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenil)etanol
Figure imgf000104_0002
A una suspensión de hidruro de litio y aluminio (671 mg, 17,6 mmol) en tetrahidrofurano (50 ml) se le añadió lentamente una solución del Intermedio 104a (6 g, 8,8 mmol) en THF (38 ml). Después, la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h, momento en el que la reacción se enfrió en un baño a 0 °C y se interrumpió con agua (5 ml) y acetato de etilo (5 ml). La reacción se agitó durante 10 min y después se filtró sobre celite. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar el compuesto deseado.
ES-MS m/z = 652 (MH+).
Intermedio 102c: 2-(3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenil)acetaldehído
Figure imgf000104_0003
A una solución del Intermedio 102b (5,3 g, 8,1 mmol) en diclorometano (86 ml) se le añadió peryodinano de Dess-Martin (10,3 g, 24 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h, momento en el que la reacción se interrumpió mediante la adición de una solución acuosa de bicarbonato sódico. La reacción se extrajo con diclorometano y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando acetato de etilo y n-hexano como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
ES-MS m/z = 649 (MH+).
Compuesto del Ejemplo 102: 2-(3.5-b¡s((9Z.12Z)-octadeca-9.12-d¡en-1-¡lox¡)fen¡l)-N,N-d¡met¡letanam¡na
Figure imgf000104_0004
A una solución del Intermedio 102c (2,5 g, 3,8 mmol) en etanol (10 ml) y tetrahidrofurano (10 ml) se le añadió clorhidrato de dimetilamina (627 mg, 5,7 mmol) seguido de trietilamina (1,1 ml, 7,7 mmol) e isopropóxido de titanio (IV) (2,1 g, 7,7 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente, momento en el que se añadió borohidruro sódico (216 mg, 5,7 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 h más. La reacción se interrumpió mediante la adición lenta de agua (2 ml) y la mezcla resultante se filtró a través de celite. El residuo se lavó con tetrahidrofurano y los filtrados combinados se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando metanol en diclorometano con hidróxido de amonio al 0,1 % como eluyente, para proporcionar el compuesto deseado. 1H RMN (400 MHz, CDCla) 86,36 (d, J = 2,3Hz, 2H); 6,32 (t, J = 2,0Hz, 1H); 5,44-5,32 (m, 8H), 3,93 (t, J = 6,5 Hz, 4H); 2,81­ 2,74 (m, 6H); 2,62-2,58 (m, 2H); 2,36 (s, 6H); 2,08 (t, J = 6,9Hz, 4H); 2,06 (t, J = 6,9Hz, 4H); 1,78 (quin, J = 7,0Hz, 4H); 1,48-1,27 (m, 32H), 0,90 (t, J = 7,0Hz, 6H).
ES-MS m/z = 678,7 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 103:
Intermedio 103a: 3-(3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenil)acrilato de metilo
Figure imgf000105_0001
A una suspensión de hidruro sódico (dispersión al 60 %, 18 mmol) en tetrahidrofurano (50 ml), enfriada en un baño a 0 °C, se le añadió fosfonoacetato de trimetilo (1,0 g, 18 mmol). La reacción se agitó durante 10 minutos y después se añadió lentamente una solución del aldehido, preparada usando condiciones similares a las del Ejemplo 1a, (7,5 g, 12 mmol) en tetrahidrofurano (25 ml). La reacción se agitó durante 1 h más y después se añadió hielo-agua (5 ml). La reacción se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 ml) y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con acetato de etilo y nhexano como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
TLC (gel de sílice, EtOAc al 10 % en hexano): Fr = 0,77.
Intermedio 103b: 3-(3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenil)propan-1-ol
Figure imgf000105_0002
A una solución del Intermedio 103a (7,7 g, 11,1 mmol) en THF (100 ml), enfriada en un baño a 0 °C, se le añadió hidruro de litio y aluminio (927 mg, 24 mmol). La reacción se agitó durante 45 minutos y después se añadió lentamente hieloagua. La mezcla resultante se filtró a través de celite y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con acetato de etilo y n-hexano como eluyente para proporcionar el compuesto deseado. TLC (sílice, EtOAc al 10 % en hexano): Fr = 0,21.
Intermedio 103c: 3-(3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1 -iloxi)fenil)propanal
Figure imgf000105_0003
Una solución del Intermedio 105b (2,5 g, 3,8 mmol) en tetrahidrofurano (40 ml) se añadió a una segunda solución de ácido 2-yodoxibenzoico (2,3 g, 8,3 mmol) en DMSO (8 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La reacción se diluyó con éter y se filtró a través de celite. Se añadió agua y la reacción se extrajo con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con acetato de etilo y n-hexano como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
TLC (gel de sílice, EtOAc al 10 % en hexano): Fr = 0,75.
Compuesto del Ejemplo 103: 3-(3,5-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenil)-N,N-dimetilpropan-1-amina
Figure imgf000106_0001
A una solución del Intermedio 103c (2,0 g, 3,0 mmol) en etanol (40 ml) se le añadieron clorhidrato de dimetilamina (742 mg, 9,0 mmol), trietilamina (913 mg, 9,0 mmol) e isopropóxido de titanio (IV) (2,5 g, 9,0 mmol). La reacción se agitó a la temperatura de la amina durante 10 h, momento en el que se añadió borohidruro sódico (172 mg, 4,5 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 h más, momento en el que se añadió agua (2 ml). La reacción se filtró a través de celite y el residuo se lavó con tetrahidrofurano. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con eluyente de metanol y diclorometano modificado con hidróxido de amonio al 0,1 % para proporcionar el compuesto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 86,26 (d, J=2,0 Hz, 2 H), 6,21 (t, J=2,3 Hz, 1 H), 5,22 - 5,35 (m, 8 H), 3,84 (t, J=6,7 Hz, 4 H), 2,71 (t, J=6,3 Hz, 4 H), 2,49 (t, J=7,8 Hz, 2 H), 2,22 (t, J=7,3 Hz, 2 H), 2,15 (s, 6 H), 1,98 (c, J=6,9 Hz, 8 H), 1,65 - 1,74 (m, J=7,0 Hz, 6 H), 1,33 - 1,42 (m, 5 H), 1,15 -1,33 (m, 33 H), 0,82 (t, J=6,8 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 692,5 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 104:
Intermedio 104a: 2-(3-(benciloxi)propil)malonato de dietilo
Figure imgf000106_0002
A una suspensión de hidruro sódico (1,05 g, 26 mmol) en tetrahidrofurano (40 ml) se le añadió malonato de dietilo (7 g, 44 mmol). Una vez cesó el desprendimiento de gas, se añadió ((3-bromopropoxi)metil)benceno (5 g, 22 mmol). La mezcla de reacción se calentó en un baño a 90 °C durante 6 h y después se enfrió a temperatura ambiente. La reacción se diluyó con éter dietílico (100 ml) y se lavó con agua (100 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con éter dietílico (2 x 100 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con acetato de etilo y heptanos como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 87,31-7,38 (m, 4H), 7,25-7,31 (m, 1H), 4,50 (s, 2H), 4,10-4,27 (m, 7H), 3,50 (t, J=6,3 Hz, 2H), 3,32-3,41 (m, 2H), 1,93-2,08 (m, 2H), 1,60 - 1,73 (m, 2H), 1,20-1,38 (m, 10H) ppm.
Intermedio 104b: 2-(3-(benciloxi)propil)propano-1,3-diol
Figure imgf000106_0003
A una solución del Intermedio 104a (7 g, 23 mmol) en tetrahidrofurano (100 ml), enfriada en un baño a 0 °C, se le añadió hidruro de litio y aluminio (2,58 g, 68 mmol). El baño de refrigeración se retiró y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. A la reacción se le añadió hielo y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con acetato de etilo y heptanos como eluyente para proporcionar el compuesto deseado. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 87,27­ 7,39 (m, 5H), 4,51 (s, 2H), 3,75-3,88 (m, 2H), 3,60-3,73 (m, 2H), 3,41-3,55 (m, 2H), 2,39 (t, J=5,1 Hz, 2H), 1,76 (dt, J =7,2, 3,5 Hz, 1H), 1,59-1,71 (m, 3H), 1,32-1,45 (m, 2H)
Intermedio 104c: dihexanoato de 2-(3-(benciloxi)propil)propano-1,3-diílo
A una mezcla del Intermedio 104b (600 mg, 2,7 mmol), piridina (466 mg, 5,9 mmol) y 4-(dimetilamino)piridina (16 mg, 0,13 mmol) en diclorometano (30 ml) se le añadió cloruro de hexanoílo (792 mg, 5,9 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y después se vertió en HCl acuoso 6 M (20 ml). La mezcla se extrajo con éter dietílico (2 x 40 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con acetato de etilo y heptanos como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 87,27-7,39 (m, 5H), 4,43 (s, 2H), 3,96-4,06 (m, 4H), 3,39-3,42 (t, 2H), 2,20-2,24(t, 4H), 1,94 (m, 1H), 1,52-1,60 (m, 8H), 1,39 (m, 2H), 1,17-1,26(m, 10H), 0,80-0,85 (t, 6H) ppm.
Intermedio 104d: dihexanoato de 2-(3-hidroxipropil)propano-1,3-diílo
Figure imgf000107_0001
El Intermedio 104c (1 g, 2,4 mmol) y paladio (al 10 % en peso sobre carbono, 20 mg) se recogieron en metanol (10 ml). La reacción se presurizó con hidrógeno a 54 psi y se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La presión se liberó y la reacción se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar el compuesto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 84,06-4,14 (m, 4H), 3,66-3,70 (m, 2H), 2,03-2,06 (m, 1H), 1,59-1,69 (m, 6H), 1,46-1,48 (m, 2H), 1,29-1,36 (m, 10H), 0,89-0,93 (m, 6H) ppm.
Intermedio 104e: ácido 5-(hexanoiloxi)-4-((hexanoiloxi)metil)pentanoico
Figure imgf000107_0002
A una solución del Intermedio 104d (760 mg, 2,3 mmol) en acetona (10 ml), enfriada en un baño de agua enfriada con hielo, se le añadió reactivo de Jones (2 M, 1,8 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Se añadió metanol (1 ml) y la reacción se agitó durante 5 min y después se concentró a presión reducida. El residuo se recogió en acetato de etilo (50 ml) y agua (540 ml) y la fase orgánica se recogió, se secó sobre sulfato sódico y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con acetato de etilo y heptanos como eluyente para proporcionar el producto esperado.
ES-MS m/z = 343 (M-H).
Intermedio 104f: metanosulfonato de 4-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)butilo
Figure imgf000107_0003
A una mezcla del 1,4-butanodiol protegido con THP (9,2 g, 53 mmol) y cloruro de metanosulfonilo (7,26 g, 63 mmol) en diclorometano (50 ml), enfriada en un baño de hielo-agua, se le añadió trietilamina (16,0 g, 158 mmol). El baño de refrigeración se retiró y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La reacción se vertió en agua enfriada con hielo. La fase orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico y se concentró a presión reducida para proporcionar el compuesto deseado.1
1H RMN (400 MHz, CDCh) 84,49-4,51 (m, 1H), 4,22 (t, 2H), 3,69-3,80 (m, 2H), 3,33-3,47 (m, 2H), 2,95 (s, 3H), 1,44-1,83(m, 11H) ppm.
Intermedio 104g: 3-hidroxi-4-metil-5-(4-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)butoxi)benzoato de 4-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)butilo
Figure imgf000108_0001
Una mezcla del Intermedio 104f (20,4 g, 81 mmol), ácido 3,5-dihidroxi-4-metilbenzoico (4,12 g, 25 mmol) y carbonato potásico (13,55 g, 98 mmol) en dimetilformamida (100 ml) se calentó en un baño a 80 °C durante una noche. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se vertió en hielo-agua (150 ml). La mezcla se extrajo con éter dietílico (2 x 150 ml) y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con acetato de etilo y heptanos como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
ES-MS m/z = 479 (M-H).
Intermedio 104h: 4-metil-3-((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)-5-(4-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)butoxi)benzoato de 4-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)butilo
Figure imgf000108_0002
Una mezcla del Intermedio 104 g (2,07 g, 4,3 mmol), mesilato de linoleílo (1,78 g, 5,2 mmol) y carbonato potásico (2,38 g, 17,2 mmol) en dimetilformamida (20 ml) se calentó en un baño a 80 °C durante una noche. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se vertió en hielo-agua. La mezcla se extrajo con éter dietílico (2 x 100 ml). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con acetato de etilo y heptanos como eluyente para proporcionar el producto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 87,20 (s, 2H), 5,34-5,42 (m, 4H), 4,60-4,63 (m, 2H), 4,36 (t, 2H), 4,00-4,08 (m, 4H), 3,83-3,86 (m, 4H), 3,47-3,51 (m, 4H), 2,80 (t, 2H), 2,16 (s, 3H), 2,06-2,08 (m, 5H), 1,73-1,84 (m, 14H), 1,51-1,60 (m, 20H), 1,29-1,37 (m, 18H), 0,90 (m, 4H) ppm.
Intermedio 104i: (4-metil-3-((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)-5-(4-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)butoxi)fenil)metanol
Figure imgf000108_0003
A una solución del Intermedio 104h (1,55 g, 2,1 mmol) en tetrahidrofurano (25 ml), enfriada en un baño de hielo-agua, se le añadió hidruro de litio y aluminio (89 mg, 2,3 mmol). El baño de refrigeración se retiró y la reacción se agitó durante una noche. Se añadió hielo y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando acetato de etilo y heptanos como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 86,54 (s, 2H), 5,34-5,44 (m, 4H), 3,97-4,03 (m, 4H), 3,85-3,87 (m, 2H), 3,49-3,52 (m, 2H), 2,80 (t, 2H), 2,11 (s, 3H), 2,07-2,08 (m, 4H), 1,72-1,90 (m, 18H), 1,26-1,35 (m, 16H), 0,91 (t, 4H) ppm.
Intermedio 104j: metanosulfonato de 4-metil-3-((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)-5-(4-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)butoxi)bencilo
A una mezcla del Intermedio 104i (580 mg, 1,0 mmol) y cloruro de metanosulfonilo (143 mg, 1,2 mmol) en diclorometano (20 ml), enfriada en un baño de hielo-agua, se le añadió trietilamina (420 mg, 4,2 mmol). El baño de refrigeración se retiró y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, momento en el que la reacción se vertió en hielo-agua. La fase orgánica se recogió, se secó sobre sulfato sódico y se concentró a presión reducida para proporcionar el compuesto deseado, que se usó sin purificación adicional.
Intermedio 104k: N,N-dimetil-1-(4-metil-3-((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)-5-(4-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)butoxi)fenil)metanamina
Figure imgf000109_0001
El Intermedio 104j (660 mg, 1,0 mmol), yoduro sódico (600 mg, 4,0 mmol) y dimetilamina (2 M en tetrahidrofurano, 2 ml) se recogieron en dimetilformamida (5 ml). La reacción se cerró herméticamente y se calentó a 120 °C por irradiación con microondas durante 40 minutos. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El residuo se recogió en acetato de etilo (50 ml) y se lavó con agua (50 ml). La fase orgánica se recogió, se secó sobre sulfato sódico y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando diclorometano y metanol como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
ES-MS m/z = 586,3 (MH+).
Intermedio 1041: 4-(5-((dimetilamino)metil)-2-metil-3-((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenoxi)butan-1-ol
Figure imgf000109_0002
A una solución del Intermedio 104k (520 mg, 0,89 mmol) en metanol (10 ml) se le añadió HCl acuoso (2 M, 2 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos y después se concentró a presión reducida. El residuo se recogió en tolueno (3 ml) y se concentró a presión reducida para proporcionar el compuesto deseado en forma de la sal clorhidrato.
ES-MS m/z = 502,3(MH+).
Compuesto del Ejemplo 104: dihexanoato de 2-(3-(4-(5-((dimetilamino)metil)-2-metil-3-((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi)fenoxi)butoxi)-3-oxopropil)propano-1,3-diílo
Figure imgf000109_0003
A una solución del Intermedio 104e (250 mg, 0,73 mmol) se le añadieron EDCI (167 mg, 0,871 mmol), diisopropiletilamina (0,190 ml, 1,1 mmol) y 4-(dimetilamino)piridina (1,8 mg, 0,015 mmol). La reacción se agitó durante 1 h a temperatura ambiente y después se añadió el alcohol del Experimento 1041 (480 mg, 0,892 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche y después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con diclorometano y metanol con modificador de ácido acético al 1 %. Las fracciones que contenían el producto se lavaron con solución de bicarbonato sódico y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó de nuevo por cromatografía sobre gel de sílice con acetato de etilo y heptanos como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 86,48 (s, 1H), 6,47 (s, 1H), 5,32-5,44 (m, 4H), 3,95-4,19 (m, 10H), 3,37 (s, 2H), 2,80 (t, J= 8Hz, 2H), 2,42 (t, J = 8Hz, 2H), 2,32 (t, J = 8Hz, 4H), 2,25 (s, 6H), 2,10 (s, 3H), 2,08 (dd, J= 8Hz, 4H), 1,86 (c, J= 5Hz, 4H), 1,64 (m, 4H), 1,27-1,48 (m, 24H), 0,91(t, J=8Hz, 9H) ppm.
ES-MS m/z = 828,4 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 105:
Intermedio 105a: ácido 8-decanamidooctanoico
Figure imgf000110_0001
A una solución de cloruro de decanoílo (3,73 g, 20 mmol) y piridina (3,10 g, 39 mmol) en diclorometano (50 ml) se le añadió ácido 8-aminocaprílico (3,27 g, 21 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla se diluyó con agua y diclorometano y la fase acuosa se ajustó a pH entre 4 y 6 con soluciones de HCl acuoso 1 N y bicarbonato sódico. La fase orgánica se separó y se lavó con agua. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con acetato de etilo y heptanos como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
TLC (sílice, MeOH al 5 % en DCM): Fr = 0,25.
Compuesto del Ejemplo 105: bis(8-decanamidooctanoato) de (5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno)
Figure imgf000110_0002
El Ejemplo 105 puede prepararse a partir del Intermedio 105a usando condiciones similares a las descritas para la síntesis del Ejemplo 77.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 87,21 (s, 2 H), 7,18 (s, 1 H), 5,90 (t, J = 5,4 Hz, 2 H), 5,05 (s, 4 H), 3,38 (s, 2 H), 3,17 (c, J = 6,9 Hz, 4 H), 2,31 (t, J = 7,5 Hz, 4 H), 2,20 (s, 6 H), 2,11 (t, J = 7,7 Hz, 4 H), 1,62-1,53 (m, 8 H), 1,46-1,39 (m, 4 H), 1,27­ 1,21 (m, 36 H), 0,82 (t, J = 6,9 Hz, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 786,5 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 106:
Intermedio 106a: 6-(((noniloxi)carbonil)oxi)hexanoato de terc-butilo
Figure imgf000110_0003
A una solución de cloroformiato de 4-nitrofenilo (3,75 g, 19 mmol), 4-(dimetilamino)piridina (0,65 g, 5,3 mmol) y piridina (3,15 g, 40 mmol) en diclorometano (30 ml) se le añadió 6-hidroxihexanoato de terc-butilo (2,5 g, 13 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Se añadió nonanol (5,75 g, 40 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con acetato de etilo y heptanos como eluyente para proporcionar el compuesto deseado. TLC (sílice, EtOAc al 20 % en heptano): Fr = 0,58.
Intermedio 106b: ácido 6-(((noniloxi)carbonil)oxi)hexanoico
Figure imgf000110_0004
Una solución del Intermedio 106a (2,42 g, 6,7 mmol) en ácido trifluoroacético (3,0 ml) se agitó durante 1 min y después se concentró a presión reducida. El residuo se recogió en diclorometano (10 ml) y se concentró a presión reducida para proporcionar el compuesto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 810,20 (s, a, 1H), 4,18-4,13 (m, 4 H), 2,45 (t, J = 7,3 Hz, 2 H), 1,76-1,64 (m, 6 H), 1,50-1,27 (m, 14 H), 0,89 (m, 3 H) ppm.
Compuesto del Ejemplo 106: bis(6-(((noniloxi)carbonil)oxi)hexanoato) de (5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno)
Figure imgf000111_0001
El Ejemplo 106 puede prepararse a partir del Intermedio 106b usando condiciones similares a las empleadas en la síntesis del Ejemplo 77.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 87,26 (s, 2 H), 7,23 (s, 1 H), 5,10 (s, 4 H), 4,12 (t, J = 6,7 Hz, 8 H), 3,43 (s, 2 H), 2,38 (t, J = 7,5 Hz, 4 H), 2,25 (s, 6 H), 1,73-1,62 (m, 12 H), 1,46-1,27 (m, 28 H), 0,88 (m, 6 H) ppm.
ES-MS m/z = 764,3 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 107:
Intermedio 107a: ácido 4-((1,3-bis(octanoiloxi)propan-2-il)oxi)-4-oxobutanoico
Figure imgf000111_0002
A una solución de 1,3-dicaprilina (1,0 g, 2,9 mmol) en tolueno (12 ml) se le añadió anhídrido succínico (0,320 g, 3,2 mmol). La reacción se cerró herméticamente y se calentó con irradiación con microondas a 140 °C durante 40 minutos. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El residuo se suspendió en DCM y se filtró a través de celite. El filtrado se concentra a presión reducida para proporcionar el compuesto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 813,26 (s, a, 1H), 5,32-5,26 (m, 1 H), 4,35-4,28 (m, 2 H), 4,23-4,15 (m, 2 H), 2,70-2,65 (m, 4 H), 2,38-2,31 (m, 4 H), 1,70-1,55 (m, 4 H), 1,40-1,20 (m, 16 H), 0,91-0,88 (m, 6 H) ppm.
Compuesto del Ejemplo 107: disuccinato de bis(1,3-bis(octanoiloxi)propan-2-il) O,O'-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno))
Figure imgf000111_0003
El Ejemplo 107 puede prepararse a partir del Intermedio 107a usando condiciones similares a las descritas para la síntesis del Ejemplo 77.
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 57,27 (s, 2 H), 7,23 (s, 1 H), 5,30-5,25 (m, 2 H), 5,13 (s, 4 H), 4,34-4,28 (m, 4 H), 4,21-4,13 (m, 4 H), 3,43 (s, 2 H), 2,70-2,67 (m, 8 H), 2,35-2,30 (m, 8 H), 2,25 (s, 6 H), 1,65-1,58 (m, 8 H), 1,32-1,27 (m, 32 H), 0,88 (m, 12 H) ppm.
ES-MS m/z = 1048,5 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 108:
Intermedio 108a: octadeca-9,12-dienoato de (9Z,12Z)-4-(3-formil-5-(4-hidroxibutoxi)fenoxi)butilo
Figure imgf000112_0001
A una solución de ácido linoleico (2,33 g, 8,3 mmol) en dicloroetano (21 ml) se le añadieron EDCI (2,41 g, 12,6 mmol), DIPEA (1,63 g, 12,6 mmol) y DMAP (0,10 g, 0,84 mmol). Se añadió el diol, preparado usando condiciones similares a las del Ejemplo 99e, y la reacción se cerró herméticamente y se calentó con irradiación con microondas a 80 °C durante 20 minutos. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con acetato de etilo y heptanos como eluyente, seguido de metanol y diclorometano como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 59,90 (s, 1H), 7,00 (d, J=2,3 Hz, 1H), 6,69 (d, J=2,3 Hz, 1H), 5,22-5,47 (m, 4H), 4,15 (t, J=6,1 Hz, 2H), 3,97-4,10 (m, 2H), 2,77 (t, J=6,5 Hz, 2H), 2,31 (t, J=7,7 Hz, 2H), 1,97-2,14 (m, 4H), 1,72-1,97 (m, 5H), 1,46-1,70 (m, 4H), 1,23-1,45 (m, 15H), 0,89 (t, J=6,8 Hz, 3H) ppm.
Intermedio 108b: octadeca-9,12-dienoato de (9Z,12Z)-4-(3-(4-((Z)-dodec-8-enoiloxi)butoxi)-5-formilfenoxi)butilo
Figure imgf000112_0002
A una solución de ácido dodec-8-enoico (60,1 mg, 0,30 mmol) en dicloroetano (690 ul) se le añadieron EDCI (79 mg, 0,41 mmol), diisopropiletilamina (53 mg, 0,41 mmol) y 4-(dimetilamino)piridina (3,4 mg, 0,03 mmol). Se añadió el Intermedio 110a (150 mg, 0,28 mmol) y la reacción se cerró herméticamente y se calentó con irradiación con microondas a 80 °C durante 20 minutos. La reacción se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con acetato de etilo y heptanos como eluyente seguido de metanol y diclorometano como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 59,90 (s, 1H), 7,00 (d, J=2,3 Hz, 2H), 6,69 (t, J=2,3 Hz, 1H), 5,23-5,45 (m, 6H), 4,15 (t, J=6,1 Hz, 4H), 4,03 (t, J=5,9 Hz, 4H), 2,77 (t, J=6,5 Hz, 2H), 2,31 (t, J=7,7 Hz, 4H), 1,94-2,12 (m, 8H), 1,75-1,94 (m, 8H), 1,51­ 1,72 (m, 6H), 1,21-1,45 (m, 23H), 0,79-1,02 (m, 6H) ppm.
Compuesto del Ejemplo 108: octadeca-9,12-dienoato de (9Z,12Z)-4-(3-((dimetilamino)metil)-5-(4-((Z)-dodec-8-enoiloxi)butoxi)fenoxi)butilo
Figure imgf000112_0003
El Ejemplo 108 puede prepararse a partir del Intermedio 108b usando condiciones similares a las empleadas en la síntesis del Ejemplo 33.
1H RMN (400 MHz, CDCls) 56,48 (d, J=2,26 Hz, 2 H) 6,35 (t, J=1,00 Hz, 1 H) 5,37 (d, J=4,77 Hz, 5 H) 4,15 (s, 4 H) 3,98 (s, 4 H) 3,36 (s, 2 H) 2,74-2,83 (m, 2 H) 2,32 (t, J=7,53 Hz, 4 H) 2,25 (s, 6 H) 1,96-2,11 (m, 8 H) 1,77-1,91 (m, 8 H) 1,60 (s, 8 H) 1,27-1,43 (m, 23 H) 0,88-0,95 (m, 6 H) ppm.
ES-MS m / z = 754,5(MH+).
* Ejemplo______ 109: octadeca-9,12-dienoato de (9Z,12Z)-4-(3-((dimetilamino)metil)-5-(4-((3-octilundecanoil)oxi)butoxi)fenoxi)butilo
Figure imgf000113_0001
El Ejemplo 109 puede prepararse métodos similares a los empleados para la preparación del Intermedio 97c y el Ejemplo 108.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 86,49 (d, J=2,01 Hz, 2 H) 6,36 (t, J=4,30 Hz, 1 H) 5,37 (d, J=5,77 Hz, 4 H) 4,11-4,19 (m, 4 H) 3,98 (t, J=5,65 Hz, 4 H) 3,40 (s, 2 H) 2,79 (t, J=6,65 Hz, 2 H) 2,23-2,34 (m, 10 H) 2,07 (d, J=7,78 Hz, 5 H) 1,79-1,90 (m, 9 H) 1,23-1,40 (m, 44 H) 0,86-0,94 (m, 9 H) ppm.
ES-MS m/z = 854,5 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 110:
Intermedio 110a: dioctanoato de 2-(4-hidroxibutil)propano-1,3-diílo
Figure imgf000113_0002
El Intermedio 110a puede prepararse usando condiciones similares a las empleadas en la síntesis del Intermedio 104d. Este intermedio se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación.
Intermedio 110b: tetraoctanoato de (((5-formil-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diil))bis(propano-3,2,1-triílo)
Figure imgf000113_0003
El Intermedio 110b puede prepararse a partir del Intermedio 110a usando condiciones similares a las empleadas en la síntesis del Intermedio 104f y el Intermedio 104 g.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 89,87 (s, 1H), 6,97 (s, 2H), 6,67 (s, 1H), 3,96-4,11 (m,12H), 2,29 (t, 8H), 2,00 (m, 2H), 1,76­ 1,82 (m, 4H), 1,58-1,61 (m, 12H), 1,41-1,45 (m, 4H), 1,25-1,27 (m, 34H), 0,87 (t, 12H) ppm.
Compuesto del Ejemplo 110: tetraoctanoato de (((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-d¡¡l))b¡s(propano-3,2.1-tr¡ílo)
Figure imgf000114_0001
El Ejemplo 110 puede prepararse a partir del Intermedio 110c usando condiciones similares a las descritas para la preparación del Ejemplo 33.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 86,49-6,44 (m, 2 H), 6,35-6,31 (m, 1 H), 4,14-4,01 (m, 8 H), 3,97-3,90 (m, 4 H), 3,35 (s, 2 H), 2,34-2,27 (m, 8 H), 2,25 (s, 6 H), 2,08-1,98 (m, 2 H), 1,82-1,71 (m, 4 H), 1,68-1,38 (m, 16 H), 1,36-1,19 (m, 32 H), 0,93­ 0,84 (m, 12 H) ppm.
ES-MS m/z = 932,6 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 111:
Intermedio 111a: dioctanoato de 2-(hidroximetil)propano-1,3-diílo
Figure imgf000114_0002
A una solución de cloruro de octanoílo (12,3 g, 75 mmol) en diclorometano (50 ml) se le añadieron DMAP (1,84, 15 mmol) y piridina (11,9 g, 150 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 min y después se añadió 2-(hidroximetil)-1,3-propanodiol (4,0 g, 38 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche y después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con acetato de etilo y heptano para proporcionar el producto deseado.
TLC (sílice, EtOAc al 20 % en heptanos): Fr = 0,21.
Intermedio 111b: tetraoctanoato de (((5-formil-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(metileno))bis(propano-3,2,1-triílo)
Figure imgf000114_0003
El Intermedio 111b puede prepararse a partir del Intermedio 111a usando condiciones similares a las usadas para preparar el Intermedio 18b.
TLC (sílice, EtOAc al 20 % en heptanos): Fr = 0,44.
Compuesto del Ejemplo 111: tetraoctanoato de (((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(metileno))bis(propano-3,2,1 -triílo)
Figure imgf000115_0001
El Ejemplo 111 puede prepararse a partir del Intermedio 111b usando condiciones similares a las empleadas para preparar el Ejemplo 33.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 86,51 (s, 2 H), 6,37 (s, 1 H), 4,25-4,22 (m, 8 H), 4,00-3,98 (m, 4 H), 3,52 (s, a, 2 H), 2,53-2,50 (m, 2 H), 2,34-2,30 (m, 14 H), 1,65-1,58 (m, 8 H), 1,31-1,25 (m, 32 H), 0,87 (m, 12 H) ppm.
ES-MS m/z = 848,4 (MH+).
* Ejemplo 112: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-(pirrolidin-1-ilmetil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo)
Figure imgf000115_0002
El Ejemplo 112 puede prepararse a partir del Intermedio 38b usando condiciones similares a las empleadas para preparar el Ejemplo 38.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 86,52 (s, 2H), 6,35 (s, 1H), 5,44-5,32 (m, 8H), 4,15 (t, J=5,6 Hz, 4H), 3,98 (t, J=5,1 Hz, 4H), 3,57 (s, 2H), 2,79 (t, J=6,4 Hz, 4H), 2,54 (s a, 4H), 2,32 (t, J=7,5 Hz, 4H), 2,07 (c, J=6,7 Hz, 8H), 1,79-1,90 (m, 12H), 1,68­ 1,59 (m, 5H), 1,42-1,27 (m, 27H), 0,91 (t, J=6,8 Hz, 6H) ppm.
ES-MS m/z = 862,8 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 113:
Intermedio 113a: 3-hexilnon-2-enoato de metilo
Figure imgf000115_0003
A una suspensión de hidruro sódico (el 60 % en aceite de parafina, 14,16 g, 335 mmol) en THF (500 ml), enfriada en un baño de hielo-agua, se le añadió lentamente fosfonoacetato de trimetilo (50,74 g, 278,8 mmol). Después de 2 h, se añadió lentamente tridecan-7-ona (6,5 g, 32,8 mmol) y la reacción se calentó a temperatura ambiente. Después de 1 h, la reacción se calentó a reflujo. Después de 4 días, la reacción se enfrió y se añadió HCl 1 N (ac.) para interrumpir la reacción. La reacción se extrajo con acetato de etilo (3 x 200 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El concentrado se purificó sobre gel de sílice, usando acetato de etilo/hexanos como eluyente para proporcionar 8,0 g del producto deseado.
TLC (gel de sílice, acetato de etilo al 10 % en hexanos): Fr = 0,72.
Intermedio 113b: 3-hexilnon-2-en-1-ol
A una solución del Intermedio 113a (8,1 g, 31,9 mmol) en THF (100 ml), enfriada en un baño de hielo-agua, se le añadió hidruro de diisobutilaluminio (al 25% en tolueno, 54,4 ml, 95,6 mmol). Después de 30 min, la reacción se llevó a temperatura ambiente. Después de 6 h, la reacción se enfrió en un baño de hielo-agua y se interrumpió con agua enfriada con hielo (50 ml) y HCl 1 N (ac., 15 ml). La reacción se extrajo con acetato de etilo (2 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (2 x 60 ml) y salmuera (60 ml). El extracto orgánico se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró a presión reducida. El concentrado se purificó sobre gel de sílice, usando acetato de etilo/hexanos como eluyente para proporcionar 6,8 g del producto deseado. TLC (gel de sílice, acetato de etilo al 20 % en hexanos): Fr = 0,29.
Intermedio 113c: 3-hexilnon-2-enal
Figure imgf000116_0001
A una suspensión agitada de IBX (21,0 g, 75,12 mmol) en DMSO (30 ml), calentada a 30 °C, se le añadió el Intermedio 113b en THF (100 ml). La reacción se mantuvo a 25-30 °C durante 2 h. La reacción se diluyó con éter dietílico y se filtró a través de celite con lavados de éter dietílico. El filtrado se lavó con agua (2 x 200 ml) y salmuera (200 ml). El extracto orgánico se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar 6,0 g del producto deseado, que se usó sin purificación adicional.
TLC (gel de sílice, acetato de etilo al 10 % en hexanos): Fr = 0,50.
Intermedio 113d: ácido 7-hexiltrideca-4,6-dienoico
Figure imgf000116_0002
A una suspensión de bromuro de (3-carboxipropil)trifenilfosfonio (19,09 g, 44,6 mmol) en THF (80 ml) y HMPA (5 ml), enfriada en un baño de hielo-agua, se le añadió NaHMDS (1,0 M en THF, 111 ml, 111 mmol). Se añadió lentamente el Intermedio 113c (5,0 g, 22,3 mmol) en THF (20 ml) y la reacción se calentó a 30 °C. Después de 16 h, la reacción se diluyó con 200 ml de agua y se acidificó con HCl 2 N (ac.). La reacción se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El concentrado se purificó sobre gel de sílice con acetato de etilo/hexanos como eluyente para proporcionar 4,0 g del producto deseado.
TLC (gel de sílice, EtOAc al 30 % en n-hexano): Fr = 0,21.
Intermedio 113e: ácido 7-hexiltridecanoico
Figure imgf000116_0003
A una suspensión del Intermedio 113d (4,0 g, 13,6 mmol) en metanol (100 ml) en un recipiente agitador Paar se le añadió Pd/C (Pd al 10 %/C, 2,0 g). La reacción se puso en el aparato agitador y se presurizó con gas hidrógeno a 60 psi. Después de 2 h, la mezcla de reacción se filtró a través de celite con lavados de metanol (2 x 50 ml). El filtrado se concentró a presión reducida y el concentrado se purificó sobre gel de sílice con acetato de etilo/n-hexano como eluyente para proporcionar 3,9 g del producto deseado.
TLC (gel de sílice, EtOAc al 30 % en n-hexano): Fr = 0,21.
Compuesto del Ejemplo 113: bis(7-hexiltridecanoato) de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo)
Figure imgf000116_0004
El Ejemplo 113 puede prepararse a partir del Intermedio 38d y el Intermedio 113e usando métodos similares a los empleados para preparar el Ejemplo 38.
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 56,58 (s a., 2 H), 6,38 (s a., 1 H), 4,08 - 4,19 (m, 4 H), 3,93-4,08 (m, 4 H), 3,56 (s a., 2 H), 2,41 (s a., 6 H), 2,23 -2,35 (m, 4 H), 1,75 - 1,93 (m, 8 H), 1,51 -1,73 (m, 6 H), 1,13 -1,41 (m, 52 H), 0,75 - 1,02 (m, 12 H) ppm.
13C RMN (101 MHz, CDCla) 5 174,03 (2C), 160,29 (2C), 107,85 (3C), 101,26, 67,46 (2C), 63,89 (3C), 44,26 (2C), 37,37 (2C), 34,40 (2C), 33,63 (4C), 33,51 (2C), 31,98 (4C), 29,85 (4C), 29,71 (2C), 26,66 (4C), 26,38 (2C), 25,84, 25,80, 25,48 (2C), 25,07 (2C), 22,74 (4C), 14,18 (4C) ppm.
* Ejemplo 114: bis(9-pentiltetradecanoato) de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo)
Figure imgf000117_0001
El Ejemplo 114 puede prepararse a partir de intermedio 38d usando métodos similares a los empleados para preparar el Ejemplo 113.
1H RMN (400 MHz, CDCl3) 56,49 (s a., 2 H), 6,35 (s, 1 H), 4,09 - 4,23 (m, 4 H), 3,98 (t, J=5,56 Hz, 4 H), 3,38 (s a., 2 H), 2,19 -2,37 (m, 10 H), 1,75 - 1,94 (m, 8 H), 1,48 - 1,75 (m, 10 H), 1,14 -1,39 (m, 48 H), 0,89 (t, J=7,07 Hz, 12 H) ppm.
ES-MS m/z = 872,9 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 115:
Intermedio 115a: 3-heptildec-2-enal
Figure imgf000117_0002
El Intermedio 115a puede prepararse usando métodos similares a los empleados para la preparación del Intermedio 113c en la síntesis del Ejemplo 113.
TLC (gel de sílice, EtOAc al 10 % en hexanos): Fr = 0,63.
Intermedio 115b: 5-heptildodeca-2,4-dienoato de metilo
Figure imgf000117_0003
A una suspensión de hidruro sódico (al 55 % en aceite de parafina, 3,5 g, 74,3 mmol) en THF (70 ml), enfriada en un baño de hielo-agua, se le añadió fosfonoacetato de trimetilo (9,6 ml, 59,5 mmol). Después de 10 min, se añadió Intermedio 115a (7,5 g, 29,7 mmol) en THF (10 ml) y la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente. Después de 2 h, la reacción se interrumpió mediante la adición lenta de agua enfriada con hielo (20 ml). La reacción se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 ml) y los extractos orgánicos se lavaron con agua y salmuera. Los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a presión reducida para proporcionar 8,0 g del producto deseado. TLC (gel de sílice, EtOAc al 10 % en hexanos): Fr = 0,75.
Intermedio 115c: 5-heptildodecanoato de metilo
Figure imgf000117_0004
A una solución del Intermedio 115b (8,0 g, 25,95 mmol) en metanol (350 ml) se le añadió paladio sobre carbono (Pd al 10 %/C, 1,0 g). La reacción se realizó a 1 atm de hidrógeno suministrado por un globo. Después de 14 h, la reacción se filtró a través de celite con lavados de metanol. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar 7,7 g del producto deseado.
TLC (gel de sílice, metanol al 5 % en diclorometano): Fr = 0,63.
Intermedio 115d: ácido 5-heptildodecanoico
Figure imgf000118_0001
A una mezcla de hidróxido sódico 5 N (ac., 125 ml) y metanol (350 ml) se le añadió el Intermedio 115c (7,7 g, 24,7 mmol) y la reacción se calentó a reflujo. Después de 16 h, la reacción se enfrió en un baño de hielo-agua y se interrumpió mediante la adición de HCl acuoso concentrado hasta que se hizo ácida. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (2 x 250 ml). Los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El concentrado se purificó sobre gel de sílice con acetato de etilo/hexanos como eluyente para proporcionar 7,0 g del producto deseado.
TLC (gel de sílice, EtOAc al 50 % en heptano): Fr = 0,82.
Compuesto del Ejemplo 115: bis(5-heptildodecanoato) de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo)
Figure imgf000118_0002
El Ejemplo 115 puede prepararse a partir del Intermedio 38d y el Intermedio 115d usando métodos similares a los empleados para preparar el Ejemplo 38.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 86,48 (d, J=1,76 Hz, 2 H), 6,35 (t, J=2,13 Hz, 1 H), 4,14 (t, J=5,90 Hz, 4 H), 3,97 (t, J=5,52 Hz, 4 H), 3,38 (s a., 2 H), 2,19 -2,36 (m, 10 H), 1,76 - 1,93 (m, 8 H), 1,60 (dt, J=15,31, 7,65 Hz, 4 H), 1,15 - 1,40 (m, 54 H), 0,79 - 0,95 (m, 12 H) ppm.
ES-MS m/z = 873,0 (MH+).
* Ejemplo 116: bis(3-octilundecanoato) de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo)
Figure imgf000118_0003
El Ejemplo 116 puede prepararse a partir del Intermedio 38d y el Intermedio 97c usando métodos similares a los empleados para preparar el Ejemplo 38.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 86,63 - 6,82 (m, 2 H), 6,38 - 6,52 (m, 1 H), 4,09 - 4,23 (m, 4 H), 4,02 (t, J=5,56 Hz, 4 H), 2,49 - 2,84 (m, 6 H), 2,24 (d, J=7,07 Hz, 4 H), 1,75 - 1,98 (m, 10 H), 1,49 - 1,69 (m, 2 H), 1,16 -1,39 (m, 56 H), 0,79 - 0,94 (m, 12 H) ppm.
ES-MS m/z = 872,3 (MH+).
* Ejemplo 117: bis(5-heptildodecanoato) de (5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno)
Figure imgf000118_0004
El Ejemplo 117 puede prepararse a partir del Intermedio 77b y el Intermedio 115d usando métodos similares a los empleados para preparar el Ejemplo 77.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 87,35 (s a., 2 H), 7,29 (s a., 1 H), 5,12 (s, 4 H), 3,62 (s a., 2 H), 2,35 (t, J=7,58 Hz, 10 H), 1,62 (dt, J=15,16, 7,58 Hz, 4 H), 1,14 - 1,43 (m, 54 H), 0,80 - 0,99 (m, 12 H) ppm.
ES-MS m/z = 756,7 (MH+).
* Ejemplo 118: bis(7-hexiltridecanoato) de (5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno)
Figure imgf000119_0001
El Ejemplo 118 puede prepararse a partir del Intermedio 77b y el Intermedio 113e usando métodos similares a los empleados para preparar el Ejemplo 77.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 87,30 (s, 2 H), 7,22 -7,29 (m, 1 H), 5,11 (s, 4 H), 3,55 (s a., 2 H), 2,23 -2,46 (m, 10 H), 1,65 (quin, J=7,40 Hz, 4 H), 1,18 - 1,41 (m, 54 H), 0,79 - 0,94 (m, 12 H) ppm.
13C RMN (101 MHz, CDCta) 8173,70 (2C), 136,83 (2C), 128,86 (3C), 127,01, 65,67 (2C), 63,60, 45,01 (2C), 37,38 (2C), 34,34 (2C), 33,63 (4C), 33,53 (2C), 31,97 (4C), 29,85 (4C), 29,70 (2C), 26,66 (4C), 26,40 (2C), 25,02 (2C), 22,74 (4C), 14,17 (4C) ppm.
* Ejemplo 119: bis(9-pentiltetradecanoato) de (5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(metileno)
Figure imgf000119_0002
El Ejemplo 119 puede prepararse a partir del Intermedio 77b usando métodos similares a los empleados para preparar el Ejemplo 118.
1H RMN (400 MHz, CDCta) 87,24 - 7,34 (m, 3 H), 5,11 (s, 4 H), 3,55 (s a., 2 H), 2,23 -2,43 (m, 10 H), 1,64 (quin, J=7,28 Hz, 4 H), 1,11 -1,41 (m, 54 H), 0,88 (t, J=7,03 Hz, 12 H) ppm. ES-MS m/z = 756,5 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 120:
Intermedio 120a: metanosulfonato de 4-((terc-butildimetilsilil)oxi)butilo
Figure imgf000119_0003
A una solución de 4-((terc-butildimetilsilil)oxi)butan-1-ol (10,0 g, 49,0 mmol) en diclorometano (100 ml) se le añadieron trietilamina (20,4 ml, 147 mmol) y cloruro de metanosulfonilo (4,93 ml, 63,7 mmol). Después de 5 h, la reacción se interrumpió con agua (150 ml) y se extrajo con diclorometano (2 x 150 ml). Las capas de DCM combinadas se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar el compuesto deseado.
TLC (gel de sílice, acetato de etilo al 20 % en hexanos): Fr = 0,42
Intermedio 120b: 3,5-bis(4-((terc-butildimetilsilil)oxi)butoxi)benzaldehído
Figure imgf000120_0001
A una solución de 3,5-dihidroxibenzaldehído (2,5 g, 18,1 mmol) en DMF (50 ml) se le añadió carbonato potásico (12,50 g, 90,5 mmol), seguido del Intermedio 120a (12,76 g, 45,3 mmol). La reacción se calentó a 80 °C y se agitó durante 24 h. La reacción se enfrió, se interrumpió con agua (200 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 200 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (150 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó sobre gel de sílice con acetato de etilo y hexanos como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
TLC (gel de sílice, acetato de etilo al 30 % en hexanos): Fr = 0,71
Intermedio 120c: 3-(3,5-bis(4-((terc-butildimetilsilil)oxi)butoxi)fenil)acrilato de metilo
Figure imgf000120_0002
A una solución de fosfonoacetato de trimetilo (3,0 ml, 20,6 mmol) en THF (70 ml), enfriada en un baño de hielo-agua, se le añadió hidruro sódico (898 mg, dispersión al 55 %, 20,6 mmol). La reacción se agitó durante 30 min y después se añadió una solución del Intermedio 120b (7,0 g, 13,7 mmol) en THF (30 ml). El baño de refrigeración se retiró y la reacción continuó durante 90 minutos más. La reacción se interrumpió con agua (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 200 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (200 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó sobre gel de sílice con acetato de etilo y hexanos como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
ES-MS m/z = 567,5 (MH+).
Intermedio 120d: 3-(3,5-bis(4-((terc-butildimetilsilil)oxi)butoxi)fenil)propan-1-ol
Figure imgf000120_0003
A una solución del Intermedio 120c (7,0 g, 12,4 mmol) en THF (100 ml), enfriada en un baño de hielo-agua, se le añadió hidruro de litio y aluminio (1,88 g, 49,4 mmol), y la reacción se agitó durante 3 h. La reacción se interrumpió con agua fría y se filtró sobre celite. El filtrado se extrajo con acetato de etilo (2 x 200 ml) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (200 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar el producto deseado, que se usó sin purificación adicional.
ES-MS m/z = 541,4 (MH+).
Intermedio 120e: 1-(3-(3,5-bis(4-((terc-butildimetilsilil)oxi)butoxi)fenil)propil)piperidina
Figure imgf000120_0004
A una solución de anhídrido de tosilo (Ts2O, 1,81 g, 5,55 mmol) en diclorometano (25 ml) se le añadió trietilamina (1,03 ml, 7,40 mmol), seguido de una solución del Intermedio 120d (2,0 g, 3,70 mmol) en DCM (15 ml). Después de 1 h, se añadió piperidina (3,15 g, 18,50 mmol) y la reacción se cerró herméticamente. Después de 15 h más, la mezcla de reacción se diluyó con agua (100 ml) y se extrajo con diclorometano (2 x 100 ml). Los extractos de diclorometano combinados se lavaron con salmuera (200 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó sobre gel de sílice con metanol:diclorometano como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
ES-MS m/z = 608,3 (MH+).
Intermedio 120f: 4,4'-((5-(3-(piperidin-1-il)propil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butan-1-ol)
Figure imgf000121_0001
A una solución del Intermedio 120e (1,3 g, 2,14 mmol) en éter dietílico (10 ml) se le añadió HCl en dioxano (20 ml). Después de 2 h, la reacción se concentró a presión reducida y se lavó con éter dietílico. El residuo se diluyó con bicarbonato sódico acuoso saturado y se extrajo con acetato de etilo (2 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar el compuesto deseado, que se usó sin purificación adicional.
ES-MS m/z = 380,1 (MH+).
Compuesto del Ejemplo 120: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-(3-(piperidin-1-il)propil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo)
Figure imgf000121_0002
El Ejemplo 120 puede prepararse a partir del Intermedio 120f y usando métodos similares a los empleados para preparar el Ejemplo 38.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 86,33 (d, J=2,01 Hz, 2 H), 6,21 - 6,31 (m, 1 H), 5,22 - 5,51 (m, 8 H), 4,07 - 4,22 (m, 4 H), 3,95 (t, J=5,52 Hz, 4 H), 2,78 (t, J=6,65 Hz, 4 H), 2,56 (t, J=7,53 Hz, 2 H), 2,35 - 2,54 (m, 4 H), 2,26 - 2,35 (m, 4 H), 2,05 (c, J=6,61 Hz, 8 H), 1,77 - 1,98 (m, 10 H), 1,55-1,76 (m, 8 H), 1,42 - 1,55 (m, 2 H), 1,20 - 1,42 (m, 30 H), 0,85 -0,99 (m, 6 H) ppm.
13C RMN (101 MHz, CDCla) 8173,98 (2C), 160,07 (2C), 130,24 (2C), 130,07 (2C), 128,05 (2C), 127,91 (2C), 106,92 (3C), 98,74 (1C), 67,21 (2C), 63,91 (2C), 58,48, 54,34 (2C), 34,36 (2C), 34,02, 31,55 (2C), 29,63 (2C), 29,37 (2C), 29,21 (2C), 29,17 (2C), 29,15 (2C), 27,22 (4C), 25,90 (2C), 25,64 (2C), 25,47 (2C), 25,00 (2C), 24,21 (2C), 22,61 (2C), 14,12 (2C) ppm.
ES-MS m/z = 904,9 (MH+).
* Ejemplo 121: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-(3-(dimetilamino)propil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo)
Figure imgf000121_0003
El Ejemplo 121 puede prepararse a partir del Intermedio 120d y usando métodos similares a los empleados para preparar el Ejemplo 120.
1H RMN (400 MHz, CDCta) 86,33 (d, J=2,02 Hz, 2 H) 6,25 - 6,31 (m, 1 H) 5,26 - 5,47 (m, 8 H) 4,07 - 4,22 (m, 4 H) 3,96 (t, J=5,56 Hz, 4 H) 2,78 (t, J=6,57 Hz, 4 H) 2,62 (t, J=7,33 Hz, 4 H) 2,52 (s a., 6 H) 2,30 (t, J=7,58 Hz, 4 H) 2,05 (c, J=6,65 Hz, 10 H) 1,76 - 1,94 (m, 8 H) 1,55-1,70 (m, 4 H) 1,21 -1,46 (m, 28 H) 0,81 -0,98 (m, 6 H) ppm.
ES-MS m / z = 864,6 (MH+).
* Ejemplo 122: bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-(3-morfolinopropil)-1,3-femleno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo)
Figure imgf000122_0001
El Ejemplo 122 puede prepararse a partir del Intermedio 120d y usando métodos similares a los empleados para preparar el Ejemplo 120.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 86,33 (d, J=2,26 Hz, 2 H), 6,23 - 6,30 (m, 1 H), 5,23 - 5,48 (m, 8 H), 4,07 - 4,22 (m, 4 H), 3,95 (t, J=5,52 Hz, 4 H), 3,75 (s a., 4 H), 2,78 (t, J=6,53 Hz, 4 H), 2,56-2,64 (m, 2 H), 2,35 - 2,51 (m, 4 H), 2,30 (t, J=7,65 Hz, 4 H), 2,05 (d, J=6,78 Hz, 8 H), 1,75 - 1,97 (m, 10 H), 1,53 - 1,72 (m, 6 H), 1,16 - 1,44 (m, 28 H), 0,79 -1,01 (m, 6 H) ppm. ES-MS m/z = 906,9 (MH+).
* Ejemplo 123: bis(decanoato) de ((5-(((3-(dimetilamino)propanoil)oxi)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo)
Figure imgf000122_0002
El Ejemplo 123 puede prepararse a partir de métodos similares a los empleados para preparar el Ejemplo 18 y el Ejemplo 52.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 86,47 (d, J = 2,2 Hz, 2H), 6,40 (t, J = 2,2 Hz, 1H), 5,07 (s, 2H), 4,05 (t, J = 6,7 Hz, 4H), 3,92 (t, J = 6,5 Hz, 4H), 3,00 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 2,71 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 2,56 (s, 6H), 2,29 (t, J = 7,6 Hz, 4H), 2,07 (s, 2H), 1,76 (p, J = 6,7 Hz, 4H), 1,61 (td, J = 7,4, 7,0, 3,9 Hz, 8H), 1,43 (d, J = 7,9 Hz, 4H), 1,39 -1,11 (m, 34H), 0,91 -0,83 (m, 6H). ES-MS m/z = 805,0 (MH+)
* Ejemplo 124: bis(decanoato) de ((5-(((4-(dimetilamino)butanoil)oxi)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo)
Figure imgf000122_0003
El Ejemplo 124 puede prepararse con métodos similares a los empleados para preparar el Ejemplo 18 y el Ejemplo 52.
1H RMN (400 MHz, CDCta) 86,46 (d, J = 2,2 Hz, 2H), 6,39 (t, J = 2,2 Hz, 1H), 5,04 (s, 2H), 4,05 (t, J = 6,7 Hz, 4H), 3,92 (t, J = 6,5 Hz, 4H), 2,62 (s, 6H), 2,51 (t, J = 6,9 Hz, 2H), 2,29 (t, J = 7,5 Hz, 4H), 1,95 (p, J = 7,0 Hz, 2H), 1,80 -1,71 (m, 4H), 1,61 (dc, J = 7,2, 3,9 Hz, 8H), 1,44 (t, J = 7,7 Hz, 4H), 1,40 - 1,20 (m, 38H), 0,87 (t, J = 6,7 Hz, 6H).
ES-MS m/z = 819,0 (MH+)
* Ejemplo 125:
Intermedio 125a: 2,2,3,3,9,9,10,10-octametil-4,8-dioxa-3,9-disilaundecan-6-ol
Figure imgf000123_0001
Una suspensión de glicerol (5 g, 54,3 mmol), imidazol (8,1 g, 119 mmol) y terc-butilclorodimetilsilano (16,37 g, 109 mmol) en THF (40 ml) se agitó durante 15 h. La reacción se interrumpió con agua (300 ml) y se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó sobre gel de sílice con acetato de etilo y heptano como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 83,55 - 3,76 (m, 4 H), 2,47 (s a., 1 H), 1,61 (s a., 1 H), 0,79-1,06 (m, 18 H), -0,06 - 0,21 (m, 12 H) ppm.
Intermedio 125b: 6-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-2,2,3,3-tetrametil-4,7,12-trioxa-3-silatetradec-13-eno
Figure imgf000123_0002
A una solución del Intermedio 38a (2 g, 10,3 mmol) y el Intermedio 125a (3,30 g, 10,3 mmol) en THF (20 ml), enfriada en un baño de hielo seco/acetona, se le añadió hidruro sódico (0,618 g, dispersión al 60 %, 15,44 mmol). Después de 1 h, el baño de refrigeración se retiró y la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante 4 d, seguido de reflujo durante 1 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se inactivó con agua enfriada con hielo. La reacción se extrajo con acetato de etilo (100 ml). El extracto orgánico se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó sobre gel de sílice con acetato de etilo y heptano como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 86,47 (dd, J=14,31,6,78 Hz, 1 H), 4,11 -4,22 (m, 1 H), 3,98 (dt, J=7,03, 2,01 Hz, 1 H), 3,56 -3,76 (m, 6 H), 3,42 - 3,56 (m, 2 H), 3,30 - 3,42 (m, 1 H), 1,60-1,81 (m, 4 H), 0,80 - 1,01 (m, 18 H), 0,00 - 0,12 (m, 12 H) ppm.
Intermedio 125c: 2-(4-(viniloxi)butoxi)propano-1,3-diol
Figure imgf000123_0003
A una solución del Intermedio 125b (1,4 g, 3,34 mmol) en THF (10 ml) se le añadió fluoruro de tetrabutilamonio (10 ml, 1 M en THF, 10 mmol). Después de 2 h, la reacción se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con acetato de etilo y se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó sobre gel de sílice con acetato de etilo y hexanos como eluyente para dar el producto deseado.
TLC (gel de sílice, acetato de etilo al 50 % en hexanos): Fr = 0,10.
Intermedio 125d: dioctanoato de 2-(4-(viniloxi)butoxi)propano-1,3-diílo
Figure imgf000123_0004
A una solución de ácido octanoico (584 mg, 4,05 mmol), el Intermedio 125c (350 mg, 1,84 mmol), DMAP (22,5 mg, 0,184 mmol) y diisopropiletilamina (713 mg, 5,52 mmol) en diclorometano (10 ml), enfriada en un baño de hielo-agua, se le añadió EDCI (846 mg, 4,42 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche, momento en el que la reacción se concentró a presión reducida. El residuo se purificó sobre gel de sílice con acetato de etilo y heptano como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
TLC (gel de sílice, acetato de etilo al 50 % en heptano): Fr = 0,85
Intermedio 125e: dioctanoato de 2-(4-hidroxibutoxi)propano-1,3-diílo
Figure imgf000124_0001
A una solución del Intermedio 125d (520 mg, 1,18 mmol) en diclorometano (10 ml) se le añadió ácido trifluoroacético (0,181 ml, 2,35 mmol). Después de 1 h, la reacción se concentró a presión reducida y el residuo se purificó sobre gel de sílice con acetato de etilo y heptano como eluyente para proporcionar el compuesto deseado.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 84,23 (dd, J=11,54, 5,02 Hz, 2 H), 4,12 (dd, J=11,54, 5,52 Hz, 2 H), 3,71 (quin, J=5,14 Hz, 1 H), 3,64 (dt, J=15,43, 5,83 Hz, 4 H), 2,34 (t, J=7,00 Hz, 4 H), 1,56 - 1,73 (m, 8 H), 1,19-1,41 (m, 16 H), 0,81 - 1,01 (m, 6 H) ppm.
Compuesto del Ejemplo 125: tetraoctanoato de ((((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diil))bis(oxi))bis(propano-3,2,1 -triílo)
Figure imgf000124_0002
El Ejemplo 125 puede prepararse a partir de intermedio 125e usando métodos similares a los empleados para la preparación del Ejemplo 39 o el Ejemplo 52.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 86,49 (s, 2 H) 6,34 (t, J=2,01 Hz, 1 H) 4,17 - 4,26 (m, 4 H) 4,08-4,17 (m, 4 H) 3,95 (t, J=6,15 Hz, 4 H) 3,71 (quin, J=5,14 Hz, 2 H) 3,63 (t, J=6,27 Hz, 4 H) 3,42 (s a., 2 H) 2,24 -2,40 (m, 14 H) 1,79 - 1,90 (m, 4 H) 1,69 - 1,79 (m, 4 H) 1,62 (quin, J=7,34 Hz, 8 H) 1,21 -1,38 (m, 32 H) 0,83 - 0,94 (m, 12 H) ppm.
ES-MS m/z = 964,7 (MH+).
* Síntesis del Ejemplo 126:
Intermedio 126a: 4,4-bis(octiloxi)butanonitrilo
Figure imgf000124_0003
A una mezcla de 4,4-dietoxibutanonitrilo (15 g, 95 mmol) y octanol (37,3 g, 286 mmol) se le añadió p-toluenosulfonato de piridinio (1,2 g, 4,77 mmol) y la mezcla se calentó a 105 °C. Después de 72 h, la mezcla de reacción se enfría y se purificó sobre gel de sílice usando acetato de etilo/heptano como eluyente para proporcionar 9,34 g del producto esperado. 1H RMN (400 MHz, CDCh): 84,56 (t, J = 5,40 Hz, 1H), 3,61 (dt, J = 9,16, 6,59 Hz, 2H), 3,44 (dt, J = 9,22, 6,68 Hz, 2H), 2,43 (t, J = 7,28 Hz, 2H), 1,95 (td, J = 7,34, 5,40 Hz, 2H), 1,50-1,66 (m, 4H), 1,17-1,44 (m, 20H), 0,80-0,95 (m, 6H) ppm. Intermedio 126b: 4,4-bis(octiloxi)butan-1-ol
Figure imgf000125_0001
A una solución del Intermedio 126a (5 g, 15,4 mmol) en diclorometano (60 ml), enfriada en un baño de hielo seco/acetona, se le añadió DIBAL-H (1,0 M en tolueno, 15,4 ml, 15,4 mmol). Después de 1,5 h, el baño de refrigeración se retiró y la reacción se calentó a temperatura ambiente. La reacción se interrumpió con cloruro de amonio acuoso saturado (20 ml) y agua (10 ml) y se extrajo con diclorometano. Los extractos de DCM se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio y se filtraron. El filtrado se concentró y el residuo se disolvió de nuevo en metanol (20 ml). Se añadió borohidruro sódico (0,581 g, 15,4 mmol). Después de 1 h, la reacción se interrumpió con agua y la reacción se concentró a presión reducida para eliminar el metanol. La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo y los extractos de acetato de etilo se lavaron con bicarbonato sódico acuoso saturado, se secaron sobre sulfato sódico y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó sobre gel de sílice con acetato de etilo y heptano como eluyente.
1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 84,34 -4,46 (m, 2 H), 3,47 (dt, J=9,03, 6,53 Hz, 2 H), 3,28 -3,41 (m, 6 H), 1,35 - 1,58 (m, 8 H), 1,13 -1,35 (m, 18 H), 0,79 - 0,91 (m, 6 H) ppm.
Compuesto del Ejemplo 126: 1-(3,5-bis(4,4-bis(octiloxi)butoxi)fenil)-N,N-dimetilmetanamina
Figure imgf000125_0002
El Ejemplo 126 puede prepararse a partir de intermedio 126b usando métodos similares a los empleados para la preparación del Ejemplo 39 o el Ejemplo 52.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 86,48 (d, J=2,01 Hz, 2 H), 6,35 (t, J=2,13 Hz, 1 H), 4,48 - 4,58 (m, 2 H), 3,96 (t, J=5,90 Hz, 4 H), 3,58 (dt, J=9,29, 6,65 Hz, 4 H), 3,33 - 3,49 (m, 6 H), 2,28 (s, 6 H) 1,73 - 1,92 (m, 8 H), 1,57 (quin, J=6,96 Hz, 8 H), 1,18 -1,42 (m, 40 H), 0,79 - 0,97 (m, 12 H) ppm.
ES-MS m/z = 792,8 (MH+).
Composiciones lipídicas
Las nanopartículas lipídicas (LNP) se formaron mezclando volúmenes iguales de lípidos disueltos en alcohol con ARNip disuelto en un tampón de citrato mediante un proceso de incidencia a chorro. La solución lipídica contiene un compuesto lipídico catiónico de la divulgación, un lípido auxiliar (colesterol), un lípido neutro opcional (DSPC) y un lípido de PEG (PEG) a una concentración de 8-16 mg/ml con una diana de 12 mg/ml en un alcohol. Las relaciones molares relativas de cada componente lipídico en las formulaciones de esta invención se indican en las tablas 4 y 5. La relación de ARNip con respecto a lípido total es de aproximadamente 0,05 (p/p). Cuando una formulación de LNP contiene cuatro componentes lipídicos, las relaciones molares corresponden al tipo de lípido como aparece en las primeras cuatro columnas de la tabla, en el orden en que aparecen. La relación de los lípidos varía de 20 a 70 por ciento molar para el lípido catiónico con una diana de 40-60, el porcentaje molar de lípido auxiliar varía de 20 a 70 con una diana de 30 a 50, el porcentaje molar de lípido neutro varía de 0 a 30, el porcentaje molar de lípido de PEG tiene un intervalo de 1 a 6 con una diana de 2 a 5. La concentración de solución de ARNip varía de 0,7 a 1,0 mg/ml con una diana de 0,8 a 0,9 mg/ml en un tampón de citrato de sodio:cloruro de sodio de pH 4-6, con una diana de 4,5-5,5. Las LNP se forman mezclando volúmenes iguales de solución lipídica en etanol con ARNip disuelto en un tampón de citrato mediante un proceso de incidencia a chorro a través de un dispositivo de mezclado con ID que varía de 0,25 a 2,0 mm a un caudal de 10 a 640 ml/min. La solución de LNP mixta se mantiene a temperatura ambiente durante 0-24 h antes de una etapa de dilución. La solución después se concentra y diafiltra con tampón adecuado mediante un proceso de ultrafiltración usando membranas con un punto de corte de p M de 30 a 500 KD. El producto final se esteriliza por filtrado y se almacena a 4 °C.
ARNip
El ARNip usado en las nanopartículas lipídicas descritas anteriormente estaba compuesto de secuencias de ARNip bicatenarias específicas de una secuencia de ARNm diana.
1. Secuencia de doble cadena de ARNip de FVII
5' UUu AAU UGA AAC cAA GAc Auu 3' (SEQ ID NO: 1)
5' uGu cuu GGu uuc AAu uAA Auu 3' (SEQ ID NO: 2)
2. Secuencia de doble cadena de ARNip de PLK1-424
5' UAU UUA AgG AGG GUG AuC Uuu 3' (SEQ ID NO: 3)
5' AGA Uca cCC Ucc uuA AAU auu 3' (SEQ ID NO: 4)
En estas secuencias se usan las siguientes abreviaturas:
A = adenosina
U = uridina
G = guanosina
C = citosina
a = 2'-O-metil-adenosina
u = 2'-O-metil-uridina
g = 2'-O-metil-guanosina
c = 2'-O-metil-citosina
Mediciones de pKa
A menos que se indique de otro modo, todos los pKa a los que se hace referencia en el presente documento se miden a temperatura y presión convencionales. Además, a menos que se indique otra cosa, todas las referencias a pKa son referencias a pKa medido usando la siguiente técnica.
Se preparó una solución 2 mM de lípido en etanol pesando el lípido y después disolviéndolo en etanol. Se preparó una solución 0,3 mM de sonda fluorescente TNS en etanol:metanol 9:1 realizando en primer lugar una solución 3 mM de TNS en metanol y diluyendo después hasta 0,3 mM con etanol.
Se preparó un tampón acuoso que contenía fosfato de sodio dibásico 200 mM y ácido cítrico 100 mM. El tampón se dividió en doce partes y el pH se ajustó con HCl 12 N o NaOH 6 N a 4,21-4,33, 4,86-4,99, 5,23-5,37, 5,46-5,54, 5,65-5,74, 5,82­ 5,89, 6,09-6,18, 6,21-6,32, 6,45-6,52, 6,66-6,72, 6,83-6,87, 7,19-7,28. Se mezclaron 400 ul de solución lipídica 2 mM y 800 ul de solución de TNS 0,3 mM.
Usando el manipulador de líquidos de alto rendimiento Hamilton Microlab Star y programa informático de control de ejecución de Hamilton, se añadieron 7,5 ul de mezcla de sonda/lípido a 242,5 ul de tampón en una placa de 96 pocillos de 1 ml (modelo NUNC 260252, Nalgae Nunc International). Esto se hizo con los doce tampones.
Después de mezclar en una placa de 96 pocillos de 1 ml, se transfirieron 100 ul de cada sonda/lípido/tampón se transfirió a una placa negra con fondo transparente de 250 ul de 96 pocillos (modelo COSTAR 3904, Corning).
Las mediciones de fluorescencia se llevan a cabo en el espectrofotómetro SpectraMax M5 usando el programa informático SoftMax pro 5.2 y los siguientes parámetros:
Figure imgf000126_0001
Después de la medición, el valor de fluorescencia de fondo de un pocilio vacío en la placa de 96 pocilios se restó de cada mezcla de sonda/lípido/tampón. Los valores de intensidad de fluorescencia se normalizaron después con respecto al valor al menor pH. El diagrama de intensidad de fluorescencia normalizado frente a pH se representó después en el programa informático de Microsoft Excel. Los doce puntos se conectaron con una línea continua.
Se encontró el punto en la línea en el que la intensidad de fluorescencia normalizada era igual a 0,5. Se encontró el pH correspondiente a intensidad de fluorescencia normalizada igual a 0,5 y se consideró el pKa del lípido.
El pKa determinado usando este método es preciso a aproximadamente 0,1 unidades de pKa.
Mediciones de índice de polidispersión (PDI)
A menos que se indique lo contrario, todos los PDI a los que se hace referencia en el presente documento son los PDI de la nanopartícula completamente formada, medidos por dispersión dinámica de luz en un Malvern Zetasizer. La muestra de nanopartículas se diluyó en solución salina tamponada con fosfato (PBS) de modo que el índice de recuento fuera de aproximadamente 200 - 400 kcts. Los datos se presentan se presentan en las tablas 4 y 5 como un promedio ponderado de la medición de intensidad.
El tamaño de partículas de la nanopartícula lipídica
A menos que se indique lo contrario, todas las mediciones de tamaños de partículas a las que se hace referencia en las tablas 4 y 5 son el tamaño de partícula promedio Z de la nanopartícula completamente formada, medidos por dispersión dinámica de luz en un Malvern Zetasizer. La muestra de nanopartículas se diluyó en solución salina tamponada con fosfato (PBS) para que el índice de recuento sea de aproximadamente 200 - 400 kcts.
Ensayos biológicos
Dosificación del factor VII de ratón
Se recibieron ratonas CD-1 de Harlan Labs y se mantuvieron en pienso convencional y agua a voluntad. Los animales pesaron aproximadamente 25 gramos en el momento de dosificación. Se administró ARNip de factor VII formulado como una única dosis por vía intravenosa a través de la vena lateral de la cola. Aproximadamente 48 horas después de la inyección, los ratones se sacrificaron mediante inhalación de CO2 seguido de exsanguinación a través de la vena cava. La sangre se recogió en tubos que contenían citrato de sodio 0,105 M anticoagulante para análisis de actividad del factor VII de plasma.
Ensayo de actividad del factor VII
Se ensayó plasma recogido de ratones inyectados para determinar la actividad enzimática del factor VII usando el equipo Biophen FVII de Hyphen Biomedical (número de catálogo 221304). Se preparó una curva patrón de ensayo usando alícuotas de plasma agrupadas de los animales de control de vehículo. Todas las muestras se diluyeron para que quedaran dentro del intervalo lineal de la curva patrón y se informó de la actividad del factor VII en relación con el plasma de control.
Se probaron nanopartículas lipídicas que comprendían compuestos lipídicos de fórmula (I) y la secuencia de doble cadena de ARNip de FVII enumerada anteriormente en el ensayo de actividad del factor VII. Los resultados de este ensayo se proporcionan en la tabla 4 a continuación como porcentaje de atenuación de la actividad enzimática del factor VII de plasma a una dosis de 0,3 mg/kg y 0,03 mg/kg.
T l 4. R l l n ivi l f r VII n n n rí l li í i ARNi FVII
Figure imgf000127_0001
continuación
Figure imgf000128_0001
continuación
Figure imgf000129_0001
Ensayo de xenoinierto de LS411 N:
Se implantaron en ratonas Nu/Nu (6-8 semanas de edad) por vía subcutánea 5x106 células LS411 N. El crecimiento tumoral se controló mediante medición por calibrador antes del inicio del tratamiento. Se seleccionaron aleatoriamente ratones que portaban tumores subcutáneos de 150-250 mm3 y se incluyeron en el estudio. Las formulaciones de ARNip de reserva se diluyeron a 0,3 m/ml con PBS para dosificación. Los animales incluidos en grupos diferentes recibieron una inyección IV de embolada diaria individual de ARNip 3 mg/kg durante tres días. Los tumores se recogieron 24 horas después de la última inyección para evaluar la regulación de genes diana mediante qRT-PCR.
Se probaron nanopartículas lipídicas que comprendían compuestos lipídicos de fórmula (I) y la secuencia de doble cadena de ARNip de PLK1-424 enumerada anteriormente en el ensayo de xenoinjerto de LS411 N. Los resultados de este ensayo se proporcionan en la tabla 5 a continuación como un porcentaje de atenuación de ARNm de PLK-1 en comparación con el control cuando se administró como una única dosis diaria durante tres días a una dosis de 3 mg/kg.
Tabla 5. Nano artículas li ídicas ue com renden ARNi de PLK1-424 resultados del ensa o de LS411N Xeno ra h.
Figure imgf000129_0002
continuación
Figure imgf000130_0001
Estudios de inmunización:
Se inmunizaron BALB/c con liposomas que comprendían DSPC, colesterol y diversos lípidos de la divulgación (o, para comparación, el lípido catiónico 1,2-dilinoleiloxi-N,N-dimetil-3-aminopropano o 'DLinDMA'). Los liposomas encapsularon 0,1 |jg de replicón de ARN autorreplicante de "vA317" que codifica la proteína del virus F sincitial respiratorio (véase el documento WO2012/031043). Como control negativo, los ratones recibieron 1 jg de replicón "desnudo". Se proporcionaron dosis los días 0 y 21 o los días 0 y 42. Las respuestas inmunitarias se evaluaron 2 semanas después de cada dosis (2wp1,2wp2) y, en algunos casos, también a las 4 semanas después de la segunda dosis (4wp2). Se realizaron cuatro series de experimentos, cada uno con su propio control desnudo. En todos los experimentos, se evaluaron sueros en dos agrupamientos y se muestran los títulos anti-RSV-F en la tabla 6 a continuación.
Tabla . Tí l inm niz i n fr n r ín F VR
Figure imgf000130_0002
continuación
Figure imgf000131_0002
Ciclo: A = días 0 y 21; B = días 0 y 42.
Protocolo de transcripción de ARNm:
Se construyó un molde de ADN plasmídico circular que contenía un casete de transcripción de ARNm que consistía en los siguientes elementos: un promotor de ARN polimerasa dependiente de ADN de bacteriófago T7 consenso, una región 5' sin traducir (UTR), una secuencia de Kozak y marco abierto de lectura, una 3' UTR y una cola de poliadenosina de 120 nucleótidos de longitud (poliA120). El molde de ADN plasmídico se propagó en E. coli, se aisló y se linealizó mediante digestión con enzimas de restricción inmediatamente 3' de la cola de poli120. El ADN plasmídico se combinó con ARN polimerasa T7, ribonucleótido trifosfatos, inhibidor de RNasa, enzima pirofosfatasa, ditiotreitol, espermidina y tampón de reacción enzimática y se incubó durante 1 hora a 37 °C. Se añadió enzima DNasa I para digerir el molde de ADN plasmídico y se incubó durante 0,5 horas a 37 °C. Se aisló ARNm mediante precipitación secuencial con cloruro de litio, lavado del sedimento en etanol al 70 %, resuspensión del sedimento de ARNm en agua, reprecipitación con isopropanol y acetato de sodio, y lavado del sedimento de nuevo en etanol al 70 %. El sedimento de ARNm final se suspendió de nuevo en a ua.
Figure imgf000131_0001
TEV-hLeptina-GAopt-2xhBG-120A (SEQ ID NO: 5)
Elementos de secuencia:
UTR 5' del virus del grabado del tabaco (TEV): 14-154
Secuencia de Kozak óptima: 155-163
Aminoácidos 1-167 que codifican la leptina humana del n.° de referencia de proteínas NP_000221, codón de secuencia optimizado por GeneArt: 164-664
2 codones de parada: 665-670
2 copias de 3'UTR de beta-globina humana: 689-954
Cola de poliA de 120 nucleótidos: 961-1080
GGGAGACGCGUGUUAAAUAACAAAUCUCAACACAACAUAUACAAAACAAACGAAUCUCA
AGCAAUCAAGCAUUCUACUUCUAUUGCAGCAAUUUAAAUCAUUUCUUUUAAAGCAAAAG
CAAUUUUCUGAAAAUUUUCACCAUUUACGAACGAUAGCCGCCACCAUGCACUGGGGAA
CCCUGUGCGGAUUCCUGUGGCUGUGGCCCUACCUGUUCUAUGUGCAAGCCGUGCCCA
UCCAGAAGGUGCAGGACGACACCAAGACCCUGAUCAAGACCAUCGUGACCCGGAUCAA
CGACAUCAGCCACACCCAGAGCGUGUCCAGCAAGCAGAAAGUGACCGGCCUGGACUUC
AUCCCCGGCCUGCACCCUAUCCUGACCCUGUCCAAGAUGGACCAGACCCUGGCCGUG
UACCAGCAGAUCCUGACCAGCAUGCCCAGCCGGAACGUGAUCCAGAUCAGCAACGACC
UGGAAAACCUGCGGGACCUGCUGCACGUGCUGGCCUUCAGCAAGAGCUGCCAUCUGC
CUUGGGCCAGCGGCCUGGAAACCCUGGAUUCUCUGGGCGGAGUGCUGGAAGCCAGCG
GCUACUCUACAGAGGUGGUGGCCCUGAGCAGACUGCAGGGCAGCCUGCAGGAUAUGC
UGUGGCAGCUGGAUCUGAGCCCCGGCUGCUAAUAGCGGACCGGCGAUAGAUGAAGCU
CGCUUUCUUGCUGUCCAAUUUCUAUUAAAGGUUCCUUUGUUCCCUAAGUCCAACUACU
AAACUGGGGGAUAUUAUGAAGGGCCUUGAGCAUCUGGAUUCUGCCUAAUAAAAAACAU
UUAUUUUCAUUGCAGCUCGCUUUCUUGCUGUCCAAUUUCUAUUAAAGGUUCCUUUGUU
CCCUAAGUCCAACUACUAAACUGGGGGAUAUUAUGAAGGGCCUUGAGCAUCUGGAUUC
UGCCUAAUAAAAAACAUUU AU U U UCAU U GCG GCCGCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA
AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAMAAA
AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA (SEQ ID NO:5)
Empaquetamiento de ARNm:
El fabricante certificó que todo el equipamiento y el material desechable estaban exentos de actividad Rnasa o se hicieron exentos de actividad Rnasa mediante el uso del reactivo RNaseZap (LifeTechnologies). Se encapsuló ARNm a una relación molar de amina de lípidos catiónicos con respecto a fosfato de ARNm (N:P) de 4:1. Los lípidos (lípido catiónico, DSPC, colesterol y PEG lipidado o lípido de circulación prolongada) se disolvieron en etanol. Las relaciones molares fueron 40:10:38:2, respectivamente. La mezcla se sonicó brevemente, después se agitó suavemente durante 5 minutos y después se mantuvo a 37 °C hasta su uso. Se intercambió ARNm en tampón de citrato a pH 5,8 - 6,0 mediante el uso de concentradores centrífugos Amicon Ultra-15 y la concentración final se ajustó a 0,5 mg/ml y se mantuvo a 37 °C hasta su uso. Un volumen igual de lípidos en etanol, ARNm en tampón de citrato y tampón de citrato solo se extrajeron en jeringas desechables. Se unieron tubos que conducían de jeringas que contenían lípidos y ARNm se unieron a la unión en T los tubos que conducían de la jeringa que contenía tampón de citrato solo se emparejaron con los tubos que salían de la unión en T sobre un recipiente de recogida que contenía una barra de agitación en una placa de agitación activa. Las jeringas se pusieron en una bomba de jeringa ajustada para expulsar contenidos a un caudal de 1 ml por minuto.
La bomba se activó y el ARNm recogido en nanopartículas lipídicas se transfirió a tubos de diálisis SnakeSkin (10000 PCPM, Thermo Scientific). El material se dializó frente a solución salina de fosfato 1x sin RNasa y sin pirógenos durante una noche a 4 °C.
Medición de la encapsulación de ARNm:
Se determinó el porcentaje de encapsulación de ARNm en nanopartículas lipídicas usando el equipo de ensayo de ARN Quant-iT Ribogreen (Life Technologies). La suspensión de LNP-ARNm se ensayó en tampón (ARNm fuera de la partícula) y tampón más detergente Triton X-100 (ARNm total). La diferencia calculada fue el ARNm dentro de la partícula. Se preparó una reserva 1000 ng/ml del ARN proporcionado en el equipo y se usó para generar una curva patrón (0 ng/ml, 15,63-1000 ng/ml) en TE and TE Triton X-1000,75 %. Se prepararon muestras de LNP-ARNm en tampón TE y tampón TE Tritón X-100 al 0,75 % con dilución adecuada de modo que la lectura estaba en el intervalo de la curva patrón (400­ 2000 veces). En una placa de 384 pocillos (Costar sin tratar n.° 3573) se añadieron 0,04 ml de patrón (por duplicado) o muestra (por triplicado) por pocillo. Se diluyó reactivo Ribogreen 240 veces en tampón TE y se añadieron 0,06 ml por pocillo. Los contenidos de pocillos se mezclaron se midió la fluorescencia (excitación = 480 nm, emisión = 520 nm). Los valores de fondo (sin ARN) se restaron de valores de muestras de patrón y prueba y las concentraciones de ARN se determinaron en las muestras usando las curvas patrón. El porcentaje de encapsulación de la muestra se determinó dividiendo la diferencia en concentraciones entre muestra triton y muestra en tampón solo por la concentración de muestra triton.
hLEPTINA
Inyección intravenosa en la vena de la cola de ratón de ARNm de leptina sintética modificada
Antes de la inyección en la vena de la cola, se registraron los pesos corporales de los ratones y se ponderaron con respecto a la dieta, agrupándose los ratones según sus pesos corporales. Los ratones se prepararon calentándolos bajo una lámpara de calentamiento durante ~2 minutos, con los ratones a aproximadamente 30,48 cm (12 pulgadas) de la lámpara de calor.
Para el procedimiento de inyección en la vena de la cola, los ratones se pusieron en un dispositivo de inmovilización y sus colas se limpiaron con alcohol al 70 %. Se insertó una aguja de calibre 27 (Becton Dickinson, n.° de catálogo 305109) conectado con una jeringa de 1 ml (Becton Dickinson, n.° de catálogo 309659) en la vena de la cola, con el bisel hacia arriba, y se tiró del émbolo hacia atrás para garantizar que la sangre se extrajera a la jeringa. El volumen deseado de ARNm de leptina sintética modificada se inyectó a mano con presión y velocidad moderadas. La aguja se extrajo a continuación y se detuvo la hemorragia añadiendo presión al sitio de inyección con gasa.
Se usaron ratones macho, de 8-9 semanas de edad, C57BL/6 alojados individualmente para el estudio in vivo. El ARNm de leptina sintética modificada purificada con FPLC (SEQ ID NO: 5) en el que las uridinas se sustituyeron con pseudouridina se empaquetó en un lípido catiónico (relación molar N:P = 8:1) y después se diluyeron en solución salina inyectable a una dosis de 10 pg por peso corporal promedio de grupo.
El día 0, los animales se pesaron y clasificaron según el peso corporal promedio. Se administraron dosis a los ratones y se registró el consumo de alimentos (FI) cada uno de los días 1-7 y los días 9, 11 y 16.
Inyección subcutánea en ratón de ARNm de leptina sintética modificada
Antes de la inyección subcutánea, se registraron los pesos corporales de los ratones y se ponderaron con respecto a la dieta, agrupándose los ratones según sus pesos corporales. Los ratones se inmovilizaron manualmente y se colocaron sobre una superficie de trabajo. Se pellizcaron sus pescuezos y se levantaron del músculo subyacente, el espacio en el que se insertó una aguja de calibre 25 conectada con una jeringa de 1 ml. El émbolo de la jeringa se retiró hacia atrás de tal manera que se garantizó que no se extraía líquido a la jeringa y después se inyectó manualmente el volumen deseado de ARNm de leptina con presión y velocidad moderadas. Después se extrajo la aguja y se devolvieron los ratones a sus jaulas.
Se usaron ratones macho, de 8-9 semanas de edad, C57BL/6 para el estudio in vivo. El ARNm de leptina sintética modificada purificada con FPLC (SEQ ID NO: 5) en el que las uridinas se sustituyeron con pseudouridina (relación molar N:P = 8:1) empaquetadas en lípido catiónico múltiple se diluyeron en solución salina inyectable a una dosis de 10 pg por peso corporal promedio de grupo.
El día 0, los animales se pesaron y clasificaron según el peso corporal promedio. Se administraron dosis a los ratones a las 9 AM y se extrajo sangre a las 9 AM el día 0. También se extrajo sangre a las 9 AM cada uno de los días 1 y 2 y se evaluó para determinar los niveles de proteínas de leptina. También se registraron el peso corporal y el consumo de alimentos.
Se midió la leptina humana en plasma de ratón mediante ELISA. Se reconstituyeron anticuerpos adquiridos de R&D Systems duoset (Cat n.° DY398E, parte n.° 840279 para anticuerpo de captura y parte n.° 840280 para anticuerpo de detección) usando PBS y se valoraron, usando de nuevo PBS. El anticuerpo de captura se aplicó a 4 ug/ml en 30 ul/pocillo en una placa blanca Nunc® Maxisorp de 384 pocillos (Cat n.° 460372). Después de una incubación durante una noche a temperatura ambiente el anticuerpo de captura se aspiró y la placa se bloqueó durante 2 horas a temperatura ambiente con 90 ul/pocillo de bloqueador de leche KpL (Cat n.° 50-82-00). Una vez que se hubo completado la incubación, se aspiró la placa y se añadieron patrones recombinantes y muestras a la placa a 30 ul/pocillo durante 2 horas a 37 °C agitando al mismo tiempo a 600 rpm. Se prepararon diluciones de muestra/patrón usando diluyente de muestra de caseína. Se siguió de lavado/aspiración 3 veces con 100 ul/pocillo seguido, usando solución de lavado de placas Teknova (Cat n.° P1192). Después, se diluyó anticuerpo de detección usando diluyente de anticuerpo de detección de caseína hasta 12,5 ng/ml y se añadió a 30 ul/pocillo durante 2 horas a temperatura ambiente. Después de esta incubación, la placa se lavó de nuevo y se añadió una solución de poli-estreptavidina-HRP (Cat n.° 21140) a una dilución 1:1250 en tampón de dilución de HRP a cada pocillo (30 ul/pocillo) y se incubó durante 30 minutos a temperatura ambiente. Un lavado/aspiración final eliminó

Claims (9)

REIVINDICACIONES
1. Una composición lipídica que comprende:
i) bis(decanoato) de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) que tiene la siguiente fórmula:
Figure imgf000138_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y
ii) un agente biológicamente activo, en donde el agente biológicamente activo es ARNm.
2. Una composición lipídica que comprende:
i) bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo) que tiene la siguiente fórmula:
Figure imgf000138_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y
ii) un agente biológicamente activo, en donde el agente biológicamente activo es ARNm.
3. La composición lipídica de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en forma de una nanopartícula lipídica.
4. La composición lipídica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 3, que comprende adicionalmente un lípido auxiliar.
5. La composición lipídica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 -4, que comprende adicionalmente un lípido neutro.
6. La composición lipídica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 5, que comprende adicionalmente un lípido de circulación prolongada.
7. La composición lipídica de acuerdo con la reivindicación 6, en donde
i) el lípido auxiliar es colesterol,
ii) el lípido neutro es DSPC, y
(continuación)
Figure imgf000139_0001
8. La composición lipídica de acuerdo con la reivindicación 7 que tiene una proporción molar de aproximadamente 45 / aproximadamente 44 / aproximadamente 9 / aproximadamente 2 de bis(decanoato) de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) o bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo) / colesterol / DSPC / PEG-Dm G, S010, S011 o S024, respectivamente.
9. La composición lipídica de acuerdo con la reivindicación 3, que tiene una proporción molar de aproximadamente 40 / aproximadamente 38 / aproximadamente 10 / aproximadamente 2 de bis(decanoato) de ((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(octano-8,1-diílo) o bis(octadeca-9,12-dienoato) de (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((dimetilamino)metil)-1,3-fenileno)bis(oxi))bis(butano-4,1-diílo) / colesterol / DSPC / PEG-Dm G, S010, S011 o S024, respectivamente.
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