TW202408595A - 用於對細胞進行遺傳修飾之方法及組合物 - Google Patents

用於對細胞進行遺傳修飾之方法及組合物 Download PDF

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博基 斯古特斯
雅倫 普羅迪斯
歐茲剛 奇力克
瑞恩 歐莉維拉
克莉絲汀 東博思基
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美商英特利亞醫療公司
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提供用於對細胞進行遺傳修飾之方法及組合物。

Description

用於對細胞進行遺傳修飾之方法及組合物
將多個遺傳編輯物引入至細胞中之能力對於基因編輯及臨床治療應用而言係受關注的。舉例而言，使用經遺傳修飾之免疫細胞之授受性細胞療法已成為治療包括癌症在內的多種疾患及疾病、重建細胞譜系及免疫系統防禦之有吸引力之方式。然而，部分地由於複雜之遺傳工程要求，細胞產品療法之臨床應用一直具有挑戰性。將多種屬性工程化至單細胞中之能力取決於有效地對多個靶基因實施編輯之能力，包括敲除及基因座插入，同時保持存活率及期望之細胞表型。
已證明CRISPR/Cas9基因體編輯係高效的；然而，據報導，在不同基因座中同時編輯導致細胞存活較差、易位增加，其潛在地損害細胞產品之品質及安全性，且隨著編輯次數增加，基因編輯效率降低。由於對細胞之累積毒性，現有細胞工程技術在使用順序編輯過程提供必要之細胞品質及產率方面存在侷限性。
因此，業內需要更安全、更有效的用於將多個基因體編輯工具遞送至細胞且用於例如以更少的步驟或在更短的時間段內實施多工基因編輯之製程。
本文所提供之方法包括使用至少兩種用於多工基因體編輯應用之基因體編輯工具，從而提供優於傳統方法之實質性優點。
在一些實施例中，本文所提供之方法產生具有更高存活率及擴增之細胞，同時維持高編輯速率，藉此縮短製造所需之時間且增加產率。
相關申請案之交叉引用
本申請案根據35 USC 119(e)主張2022年6月16日提出申請之美國臨時申請案第63/353,008號之權益，該臨時申請案之內容係以全文引用的方式併入本文中。 序列表
本申請案含有序列表，其已以XML檔案格式電子提交且以全文引用的方式併入本文中。該XML檔案創建於2023年6月13日，命名為「01155-0060-00PCT_SL.xml」且大小為2,718,632個位元組。
本揭示案提供例如使細胞與至少兩種基因體編輯工具接觸且用於多工基因體編輯之平台方法。該等方法例如在細胞中提供多工基因體編輯，而無顯著細胞副作用。該等方法亦提供以更少的步驟向細胞遞送多種基因體編輯工具，從而容許在更短的時間段內進行多重編輯。
在一些實施例中，該平台係關於在活體外製備細胞以用於隨後向個體進行治療性投與之製造方法。在一些實施例中，該平台係關於經由同時或依序投與包含至少兩種基因體編輯工具之脂質奈米顆粒(LNP)之多工基因體編輯。該平台與任何細胞類型均相關，但在製備需要多重基因體編輯以獲得完全治療適用性之細胞(例如原代免疫細胞)中尤其有利。與先前遞送技術相比，該等方法可展現出改良之性質；例如，該等方法提供核酸(諸如該至少兩種基因體編輯工具)之高效遞送，同時提供更大之細胞存活及擴增。如本文所提供，平台方法適用於「細胞」或適用於「細胞群體(a cell population或population of cells)」。當本文提及「細胞」之遞送或基因編輯方法時，應理解，該等方法可用於「細胞群體」之遞送或基因編輯。
在一些實施例中，本文提供對細胞進行遺傳修飾之方法，其包括：(a)使該細胞與第一基因體編輯工具接觸，其中該第一基因體編輯工具包含第一基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該第一基因體編輯器同源之向導RNA (gRNA)；及(b)使該細胞與第二基因體編輯工具接觸，其中該第二基因體編輯工具包含第二基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該第二基因體編輯器同源之gRNA，其中該第一基因體編輯器與該第二基因體編輯器正交，藉此在該細胞中產生至少兩種基因體編輯物。
在一些實施例中，本文提供對細胞進行遺傳修飾之方法，其包括：(a)使該細胞與第一基因體編輯工具接觸，該第一基因體編輯工具包含含有鹼基編輯器之第一基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該鹼基編輯器同源之向導RNA (gRNA)；及(b)使該細胞與第二基因體編輯工具接觸，該第二基因體編輯工具包含含有RNA引導之裂解酶的第二基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該RNA引導之裂解酶同源之gRNA，其中該鹼基編輯器與該RNA引導之裂解酶正交，藉此在該細胞中產生至少兩種基因體編輯物。
在一些實施例中，本文提供產生包含經編輯細胞之細胞群體之方法，其包括：(a)使該細胞與第一基因體編輯工具接觸，該第一基因體編輯工具包含含有鹼基編輯器之第一基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該鹼基編輯器同源之向導RNA (gRNA)；(b)使該細胞與第二基因體編輯工具接觸，該第二基因體編輯工具包含含有RNA引導之裂解酶的第二基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該RNA引導之裂解酶同源之gRNA，其中該鹼基編輯器與該RNA引導之裂解酶正交；及(c)培養該細胞，藉此產生該包含經編輯細胞之細胞群體，該等經編輯細胞之每個細胞包含至少兩種基因體編輯物。
在一些實施例中，本文提供組合物，其包含：(a)第一基因體編輯工具，其中該第一基因體編輯工具包含第一基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該第一基因體編輯器同源之向導RNA (gRNA)；及(b)第二基因體編輯工具，其中該第二基因體編輯工具包含第二基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該第二基因體編輯器同源之gRNA，其中該第一基因體編輯器與該第二基因體編輯器正交。
在一些實施例中，本文提供組合物，其包含：(a)第一基因體編輯工具，其中該第一基因體編輯工具包含含有鹼基編輯器之第一基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該鹼基編輯器同源之向導RNA (gRNA)；及(b)第二基因體編輯工具，該第二基因體編輯工具包含含有RNA引導之裂解酶的第二基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該RNA引導之裂解酶同源之gRNA，其中該鹼基編輯器與該RNA引導之裂解酶正交。
在一些實施例中，本文提供在活體外經本文所揭示之任何方法或組合物處理之細胞。在一些實施例中，本文提供在活體內經本文所揭示之任何方法或組合物處理之細胞。在一些實施例中，本文提供包含本文所揭示之任何細胞之細胞群體。
在一些實施例中，本文提供本文所揭示之任何細胞、細胞群體或組合物之用途，其用於治療癌症。在一些實施例中，本文提供本文所揭示之任何細胞、細胞群體或組合物之用途，其用於製備用以治療癌症之藥劑。
在一些實施例中，本文提供工程化細胞，其包含在至少三個基因體基因座中之至少三種鹼基編輯物以及至少一個外源基因。
在一些實施例中，本文提供組合物，其包含：a. gRNA，其包含選自以下之向導序列：i) SEQ ID NO: 251-264；ii)選自SEQ ID NO: 251-264之序列之至少17、18、19或20個鄰接核苷酸；iii)與選自SEQ ID NO: 251-264之序列至少95%、90%或85%一致之向導序列；iv)包含表5中所列示之基因體坐標之10個鄰接核苷酸±10個核苷酸之序列；v)來自(iv)之序列之至少17、18、19或20個鄰接核苷酸；或vi)與選自(v)之序列至少95%、90%或85%一致之向導序列；或b.編碼(a.)之gRNA之核酸。
在一些實施例中，本文提供改變AAVS1基因內之DNA序列之方法，其包括向細胞遞送：a. gRNA，其包含選自以下之向導序列：i) SEQ ID NO: 251-264；ii)選自SEQ ID NO: 251-264之序列之至少17、18、19或20個鄰接核苷酸；iii)與選自SEQ ID NO: 251-264之序列至少95%、90%或85%一致之向導序列；iv)包含表 5中所列示之基因體坐標之10個鄰接核苷酸±10個核苷酸之序列；v)來自(iv)之序列之至少17、18、19或20個鄰接核苷酸；或vi)與選自(v)之序列至少95%、90%或85%一致之向導序列；或b.編碼(a.)之gRNA之核酸。
在一些實施例中，本文提供免疫療法方法，其包括向個體投與包含工程化細胞之組合物，其中該細胞包含AAVS1基因中之基因體修飾，其中遺傳修飾包含選自以下之基因體坐標內之插入：chr19:55115695-55115715；chr19:55115588-55115608；chr19:55115616-55115636；chr19:55115623- 55115643；chr19:55115637-55115657；chr19:55115691-55115711；chr19:55115755- 55115775；chr19:55115823-55115843；chr19:55115834-55115854；chr19:55115835- 55115855；chr19:55115836-55115856；chr19:55115850-55115870；chr19:55115951- 55115971；及chr19:55115949-55115969；或其中藉由向該細胞中遞送以下物質使該細胞工程化：a. gRNA，其包含選自以下之向導序列：i) SEQ ID NO: 251-264；ii)選自SEQ ID NO: 251-264之序列之至少17、18、19或20個鄰接核苷酸；iii)與選自SEQ ID NO: 251-264之序列至少95%、90%或85%一致之向導序列；iv)包含表 5中所列示之基因體坐標之10個鄰接核苷酸±10個核苷酸之序列；v)來自(iv)之序列之至少17、18、19或20個鄰接核苷酸；或vi)與選自(v)之序列至少95%、90%或85%一致之向導序列；或b.編碼(a.)之gRNA之核酸。
在一些實施例中，本文提供工程化細胞，其包含AAVS1基因中之遺傳修飾，其中該遺傳修飾包含選自以下之基因體坐標內之插入：chr19:55115695- 55115715；chr19:55115588-55115608；chr19:55115616-55115636；chr19:55115623- 55115643；chr19:55115637-55115657；chr19:55115691-55115711；chr19:55115755- 55115775；chr19:55115823-55115843；chr19:55115834-55115854；chr19:55115835- 55115855；chr19:55115836-55115856；chr19:55115850-55115870；chr19:55115951- 55115971；及chr19:55115949-55115969。
本文提供以下編號實施例： 實施例1係一種對細胞進行遺傳修飾之方法，其包括： (a)  使該細胞與第一基因體編輯工具接觸，其中該第一基因體編輯工具包含第一基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該第一基因體編輯器同源之向導RNA (gRNA)；及 (b)  使該細胞與第二基因體編輯工具接觸，其中該第二基因體編輯工具包含第二基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該第二基因體編輯器同源之gRNA，其中該第一基因體編輯器與該第二基因體編輯器正交， 藉此在該細胞中產生至少兩種基因體編輯物。 實施例2係如實施例1之方法，其中該第一基因體編輯器或該第二基因體編輯器係作為至少一種多肽或至少一種編碼該多肽之多核苷酸遞送至該細胞。 實施例3係如實施例2之方法，其中該至少一種多核苷酸為至少一種mRNA。 實施例4係如實施例1至3中任一項之方法，其中該至少一種gRNA係作為至少一種編碼該gRNA之多核苷酸遞送至該細胞。 實施例5係如實施例1至4中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器包含裂解酶、切口酶、無催化活性之核酸酶、鹼基編輯器、視情況C至T鹼基編輯器或A至G鹼基編輯器，或包含DNA聚合酶及切口酶之融合蛋白。 實施例6係如實施例1至5中任一項之方法，其中該第二基因體編輯器包含裂解酶、切口酶、無催化活性之核酸酶、鹼基編輯器、視情況C至T鹼基編輯器或A至G鹼基編輯器，或包含DNA聚合酶及切口酶之融合蛋白。 實施例7係如實施例1至6中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器及該第二基因體編輯器中之一者包含鹼基編輯器、視情況C至T鹼基編輯器或A至G鹼基編輯器，且該第一基因體編輯器及該第二基因體編輯器中之另一者包含裂解酶。 實施例8係如實施例7之方法，其進一步包括使該細胞與編碼外源基因之核酸接觸。 實施例9係如實施例1至6中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器及該第二基因體編輯器中之一者包含C至T鹼基編輯器，且該第一基因體編輯器及該第二基因體編輯器中之另一者包含A至G鹼基編輯器。 實施例10係如實施例1至9中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器及該第二基因體編輯器中之一者包含腦膜炎奈瑟菌( N. meningitidis) (Nme) RNA引導之切口酶或裂解酶，且該第一基因體編輯器及該第二基因體編輯器中之另一者包含釀膿鏈球菌( S. pyogenes) (Spy) RNA引導之切口酶或裂解酶。 實施例11係如實施例1至10中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器或該第二基因體編輯器包含Cas核酸酶。 實施例12係如實施例11之方法，其中該Cas核酸酶為2類Cas核酸酶。 實施例13係如實施例11之方法，其中該Cas核酸酶為Cas9。 實施例14係如實施例13之方法，其中該Cas9為釀膿鏈球菌Cas9 (SpyCas9)、金黃色葡萄球菌( S. aureus) Cas9 (SauCas9)、白喉棒狀桿菌( C. diphtheriae) Cas9 (CdiCas9)、嗜熱鏈球菌( Streptococcus thermophilus) Cas9 (St1Cas9)、解纖維素乙酸弧菌( A. cellulolyticus) Cas9 (AceCas9)、空腸彎曲桿菌( C. jejuni) Cas9 (CjeCas9)、沼澤紅假單胞菌( R. palustris) Cas9 (RpaCas9)、深紅紅螺菌( R. rubrum) Cas9 (RruCas9)、內氏放線菌( A. naeslundii) Cas9 (AnaCas9)、新兇手弗朗西斯氏菌( Francisella novicida) Cas9 (FnoCas9)或腦膜炎奈瑟菌(NmeCas9)。 實施例15係如實施例13或實施例14之方法，其中該Cas9為Nme1Cas9、Nme2Cas9、Nme3Cas9或SpyCas9。 實施例16係一種對細胞進行遺傳修飾之方法，其包括： (a)  使該細胞與第一基因體編輯工具接觸，該第一基因體編輯工具包含含有鹼基編輯器之第一基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該鹼基編輯器同源之向導RNA (gRNA)；及 (b)  使該細胞與第二基因體編輯工具接觸，該第二基因體編輯工具包含含有RNA引導之裂解酶的第二基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該RNA引導之裂解酶同源之gRNA，其中該鹼基編輯器與該RNA引導之裂解酶正交， 藉此在該細胞中產生至少兩種基因體編輯物。 實施例17係一種產生包含經編輯細胞之細胞群體之方法，其包括： (a)  使該細胞與第一基因體編輯工具接觸，該第一基因體編輯工具包含含有鹼基編輯器之第一基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該鹼基編輯器同源之向導RNA (gRNA)； (b)  使該細胞與第二基因體編輯工具接觸，該第二基因體編輯工具包含含有RNA引導之裂解酶的第二基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該RNA引導之裂解酶同源之gRNA，其中該鹼基編輯器與該RNA引導之裂解酶正交；及 (c)  培養該細胞，藉此產生該包含經編輯細胞之細胞群體，該等經編輯細胞之每個細胞包含至少兩種基因體編輯物。 實施例18係如實施例16或17之方法，其中該鹼基編輯器為C至T鹼基編輯器，視情況包含胞苷去胺酶，或為A至G鹼基編輯器，視情況包含腺苷去胺酶。 實施例19係如實施例1至18中任一項之方法，其中該至少兩種基因體編輯物中之一者包含雙股斷裂，且該至少兩種基因體編輯物中之另一者包含轉變(例如A至G或C至T)。 實施例20係如實施例1至19中任一項之方法，其中該第一基因體編輯工具或該第二基因體編輯工具經由電穿孔遞送至該細胞。 實施例21係如實施例1至20中任一項之方法，其中該第一基因體編輯工具或該第二基因體編輯工具係經由至少一種脂質奈米顆粒(LNP)遞送至該細胞。 實施例22係如實施例1至21中任一項之方法，其中該第一基因體編輯工具或該第二基因體編輯工具在至少一種載體上遞送至該細胞。 實施例23係如實施例1至22中任一項之方法，其中該第一基因體編輯工具或該第二基因體編輯工具係作為至少一種編碼該第一基因體編輯工具或該第二基因體編輯工具之核酸遞送。 實施例24係如實施例23之方法，其中該至少一種核酸包含至少一種mRNA。 實施例25係如實施例1至24中任一項之方法，其中步驟(a)與步驟(b)同時實施。 實施例26係如實施例1至25中任一項之方法，其中步驟(a)與步驟(b)係以任何順序在約5分鐘、10分鐘、15分鐘、30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、11小時、12小時、13小時、14小時、15小時、16小時、17小時、18小時、19小時、20小時、21小時、22小時、23小時或24小時之時間段內實施。 實施例27係如實施例1至26中任一項之方法，其中步驟(a)與步驟(b)各自在約5分鐘、10分鐘、15分鐘、30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、11小時、12小時、13小時、14小時、15小時、16小時、17小時、18小時、19小時、20小時、21小時、22小時、23小時或24小時之時間段內獨立地實施。 實施例28係如實施例16至27中任一項之方法，其中該第一基因體編輯工具包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)，且該UGI與該鹼基編輯器包含在單一多肽中。 實施例29係如實施例16至27中任一項之方法，其中該第一基因體編輯工具包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)，且該UGI與該鹼基編輯器包含在不同多肽中。 實施例30係如實施例28或29之方法，其中該鹼基編輯器包含胞苷去胺酶及RNA引導之切口酶。 實施例31係如實施例30之方法，其中該胞苷去胺酶、該RNA引導之切口酶及該UGI包含在單一多肽中。 實施例32係如實施例30之方法，其中該胞苷去胺酶、該RNA引導之切口酶及該UGI包含在不同多肽中。 實施例33係如實施例30之方法，其中該胞苷去胺酶與該RNA引導之切口酶包含在單一多肽中，且其中該UGI包含在不同多肽中。 實施例34係如實施例1至33中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器包含與SEQ ID NO: 3、146或311至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之胺基酸序列。 實施例35係如實施例1至34中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器係作為包含與SEQ ID NO: 1至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之核苷酸序列的核酸遞送至該細胞，且該第二基因體編輯器係作為包含與SEQ ID NO: 180-190中之任一者至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之核苷酸序列的核酸遞送至該細胞。 實施例36係如實施例1至35中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器係作為包含與SEQ ID NO: 147或310至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之核苷酸序列的核酸遞送至該細胞，且該第二基因體編輯器係作為包含與SEQ ID NO: 293或295至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之核苷酸序列的核酸遞送至該細胞。 實施例37係如實施例1至33中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含與SEQ ID NO: 9、12、18及21中之任一者至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之胺基酸序列。 實施例38係如實施例1至37中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含胞苷去胺酶，且其中該胞苷去胺酶包含與SEQ ID NO: 22至少80%、85%、87%、90%、95%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。 實施例39係如實施例38之方法，其中該胞苷去胺酶包含APOBEC3A去胺酶(A3A)。 實施例40係如實施例39之方法，其中該A3A包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 22至少87%、90%、95%、98%或99%一致之胺基酸序列。 實施例41係如實施例39或40之方法，其中該A3A為人類A3A。 實施例42係如實施例39至41中任一項之方法，其中該A3A為野生型A3A。 實施例43係如實施例1至42中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含Cas9切口酶。 實施例44係如實施例1至43中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含腦膜炎奈瑟菌(Nme) Cas9切口酶。 實施例45係如實施例1至44中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含D16A NmeCas9切口酶，視情況為D16A Nme2Cas9。 實施例46係如實施例1至45中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含SEQ ID NO: 149之胺基酸序列。 實施例47係如實施例1至46中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含與SEQ ID NO: 146之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致之序列。 實施例48係如實施例1至47中任一項之方法，其中該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶包含Cas9裂解酶。 實施例49係如實施例1至48中任一項之方法，其中該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶包含釀膿鏈球菌(Spy) Cas9裂解酶。 實施例50係如1至49實施例中任一項之方法，其中該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶包含與SEQ ID NO: 156至少90%一致之胺基酸序列。 實施例51係如實施例1至50中任一項之方法，其中該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶包含SEQ ID NO: 156之胺基酸序列。 實施例52係如實施例1至43中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含釀膿鏈球菌(Spy) Cas9切口酶。 實施例53係如實施例1至43及52中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含D10A SpyCas9切口酶。 實施例54係如實施例1至43、52及53中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含SEQ ID NO: 41、43及45中之任一者之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 41、43及45中之任一者具有至少80%、90%、95%、98%或99%一致性之胺基酸序列。 實施例55係如實施例1至43及52至54中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器係作為包含SEQ ID NO: 42、44及46中之任一者之核苷酸序列或與SEQ ID NO: 42、44及46中之任一者具有至少80%、90%、95%、98%或99%一致性之核苷酸序列之核酸遞送至該細胞。 實施例56係如實施例1至43及52至54中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器係作為包含SEQ ID NO: 42、44及46-58中之任一者之核苷酸序列之核酸遞送至該細胞。 實施例57係如實施例1至43及52至54中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器係作為包含與SEQ ID NO: 1至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之核苷酸序列的核酸遞送至該細胞。 實施例58係如實施例1至43及52至54中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器係作為包含與SEQ ID NO: 4至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之核苷酸序列的核酸遞送至該細胞。 實施例59係如實施例1至43及52至56中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含與SEQ ID NO: 148至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之胺基酸序列。 實施例60係如實施例1至43及52至59中任一項之方法，其中該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶包含腦膜炎奈瑟菌(Nme) Cas9裂解酶。 實施例61係如實施例1至43及52至60中任一項之方法，其中該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶包含與SEQ ID NO: 157-167、191、198、205、212及219中之任一者至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列。 實施例62係如實施例1至43及52至61中任一項之方法，其中該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶包含SEQ ID NO: 157-167、191、198、205、212及219中之任一者之胺基酸序列。 實施例63係如實施例1至43及52至61中任一項之方法，其中該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶係作為包含與SEQ ID NO: 168-190、192-197、199-204、206-211、213-218及220-225中之任一者至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列的核酸遞送至該細胞。 實施例64係如實施例1至43及52至61中任一項之方法，其中該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶係作為包含SEQ ID NO: 168-190、192-197、199-204、206-211、213-218及220-225中之任一者之核苷酸序列之核酸遞送至該細胞。 實施例65係如實施例1至64中任一項之方法，其中至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶不同源。 實施例66係如實施例1至65中任一項之方法，其中至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器不同源。 實施例67係如實施例1至66中任一項之方法，其中該至少一種gRNA包含至少一種單一向導RNA (sgRNA)。 實施例68係如實施例67之方法，其中該至少一種sgRNA包含短單一向導RNA (短sgRNA)，該短sgRNA包含含有髮夾區之sgRNA保守部分，其中該髮夾區缺少至少5-10個核苷酸且其中該短sgRNA包含5’端修飾或3’端修飾或兩者。 實施例69係如實施例1至68中任一項之方法，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含至少兩種靶向至少兩個不同基因體基因座之gRNA。 實施例70係如實施例1至69中任一項之方法，其中該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含至少兩種靶向至少兩個不同基因體基因座之gRNA。 實施例71係如實施例1至70中任一項之方法，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含至少三種靶向至少三個不同基因體基因座之gRNA。 實施例72係如實施例1至71中任一項之方法，其中該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含至少三種靶向至少三個不同基因體基因座之gRNA。 實施例73係如實施例1至72中任一項之方法，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含至少四種靶向至少四個不同基因體基因座之gRNA。 實施例74係如實施例1至73中任一項之方法，其中該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含至少四種靶向至少四個不同基因體基因座之gRNA。 實施例75係如實施例1至74中任一項之方法，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含至少五種靶向至少五個不同基因體基因座之gRNA。 實施例76係如實施例1至75中任一項之方法，其中該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含至少五種靶向至少五個不同基因體基因座之gRNA。 實施例77係如實施例1至76中任一項之方法，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含至少六種靶向至少六個不同基因體基因座之gRNA。 實施例78係如實施例1至77中任一項之方法，其中該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含至少六種靶向至少六個不同基因體基因座之gRNA。 實施例79係如實施例1至78中任一項之方法，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA靶向一或多個選自以下之基因體基因座：TRBC基因座、HLA-A基因座、HLA-B基因座、CIITA基因座、HLA-DR基因座、HLA-DQ基因座及HLA-DP基因座。 實施例80係如實施例1至79中任一項之方法，其中該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA靶向一或多個選自以下之基因體基因座：TRAC基因座、AAVS1基因座及CIITA基因座。 實施例81係如實施例1至80中任一項之方法，其中 (i)   該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該HLA-A基因座之gRNA及靶向該CIITA基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該TRAC基因座之gRNA； (ii)  該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該TRBC基因座之gRNA、靶向該HLA-A基因座之gRNA及靶向該CIITA基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該TRAC基因座之gRNA； (iii) 該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該HLA-A基因座之gRNA、靶向該HLA-B基因座之gRNA及靶向該CIITA基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該TRAC基因座之gRNA； (iv) 該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該TRBC基因座之gRNA、靶向該HLA-A基因座之gRNA、靶向該HLA-B基因座之gRNA及靶向該CIITA基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該TRAC基因座之gRNA； (v)  該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該HLA-A基因座之gRNA及靶向該HLA-DR基因座、該HLA-DQ基因座或該HLA-DP基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該TRAC基因座之gRNA； (vi) 該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該TRBC基因座之gRNA、靶向該HLA-A基因座之gRNA及靶向該HLA-DR基因座、該HLA-DQ基因座或該HLA-DP基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該TRAC基因座之gRNA； (vii)       該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該HLA-A基因座之gRNA、靶向該HLA-B基因座之gRNA及靶向該HLA-DR基因座、該HLA-DQ基因座或該HLA-DP基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該TRAC基因座之gRNA； (viii)      該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該TRBC基因座之gRNA、靶向該HLA-A基因座之gRNA、靶向該HLA-B基因座之gRNA及靶向該HLA-DR基因座、該HLA-DQ基因座或該HLA-DP基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該TRAC基因座之gRNA； (ix) 該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該TRAC基因座之gRNA、靶向該TRBC基因座之gRNA、靶向該CIITA基因座之gRNA及靶向該HLA-A基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該TRAC基因座之gRNA； (x)  該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該TRBC基因座之gRNA、靶向該HLA-A基因座之gRNA及靶向該CIITA基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該AAVS1基因座之gRNA； (xi) 該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該TRBC基因座之gRNA、靶向該HLA-A基因座之gRNA、靶向該HLA-B基因座之gRNA及靶向該CIITA基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該AAVS1基因座之gRNA； (xii)該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該TRBC基因座之gRNA、靶向該HLA-A基因座之gRNA及靶向該HLA-DR基因座、該HLA-DQ基因座或該HLA-DP基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該AAVS1基因座之gRNA；或 (xiii)      該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該TRBC基因座之gRNA、靶向該HLA-A基因座之gRNA、靶向該HLA-B基因座之gRNA及靶向該HLA-DR基因座、該HLA-DQ基因座或該HLA-DP基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該AAVS1基因座之gRNA。 實施例82係如實施例1至81中任一項之方法，其進一步包括使該細胞與編碼用於插入至該TRAC或該AAVS1基因座中之外源基因之核酸接觸。 實施例83係如實施例82之方法，其中在子部分(i)至(ix)中之任一者中，該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該AAVS1基因座之另一gRNA。 實施例84係如實施例82之方法，其中在子部分(x)至(xiii)中之任一者中，該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該TRAC基因座之另一gRNA。 實施例85係如實施例84之方法，其中在使該細胞與靶向該TRAC基因座之該gRNA接觸後，使該細胞與靶向該AAVS1基因座之該另一gRNA接觸。 實施例86係如實施例85之方法，其中在使該細胞與靶向該AAVS1基因座之該gRNA接觸後，使該細胞與靶向該TRAC基因座之該另一gRNA接觸。 實施例87係一種組合物，其包含： (a)  第一基因體編輯工具，其中該第一基因體編輯工具包含第一基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該第一基因體編輯器同源之向導RNA (gRNA)；及 (b)  第二基因體編輯工具，其中該第二基因體編輯工具包含第二基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該第二基因體編輯器同源之gRNA，其中該第一基因體編輯器與該第二基因體編輯器正交。 實施例88係如實施例87之組合物，其中該第一基因體編輯器或該第二基因體編輯器包含至少一種多肽或至少一種mRNA。 實施例89係如實施例87或88之組合物，其中該至少一種gRNA包含至少一種編碼該gRNA之多核苷酸。 實施例90係如實施例87至89中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器包含裂解酶、切口酶、無催化活性之核酸酶、鹼基編輯器、視情況C至T鹼基編輯器或A至G鹼基編輯器，或包含DNA聚合酶及切口酶之融合蛋白。 實施例91係如實施例87至90中任一項之組合物，其中該第二基因體編輯器包含裂解酶、切口酶、無催化活性之核酸酶、鹼基編輯器、視情況C至T鹼基編輯器或A至G鹼基編輯器，或包含DNA聚合酶及切口酶之融合蛋白。 實施例92係如實施例87至91中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器及該第二基因體編輯器中之一者包含鹼基編輯器、視情況C至T鹼基編輯器或A至G鹼基編輯器，且該第一基因體編輯器及該第二基因體編輯器中之另一者包含裂解酶。 實施例93係如實施例92之組合物，其進一步包含編碼外源基因之核酸。 實施例94係如實施例87至91中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器及該第二基因體編輯器中之一者包含C至T鹼基編輯器，且該第一基因體編輯器及該第二基因體編輯器中之另一者包含A至G鹼基編輯器。 實施例95係如實施例87至94中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器及該第二基因體編輯器中之一者包含腦膜炎奈瑟菌(Nme) RNA引導之切口酶，且該第一基因體編輯器及該第二基因體編輯器中之另一者包含釀膿鏈球菌(Spy) RNA引導之切口酶。 實施例96係如實施例87至95中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器或該第二基因體編輯器為Cas核酸酶。 實施例97係如實施例96之組合物，其中該Cas核酸酶為2類Cas核酸酶。 實施例98係如實施例96之組合物，其中該Cas核酸酶為Cas9。 實施例99係如實施例98之組合物，其中該Cas9為釀膿鏈球菌Cas9 (SpyCas9)、金黃色葡萄球菌Cas9 (SauCas9)、白喉棒狀桿菌Cas9 (CdiCas9)、嗜熱鏈球菌Cas9 (St1Cas9)、解纖維素乙酸弧菌Cas9 (AceCas9)、空腸彎曲桿菌Cas9 (CjeCas9)、沼澤紅假單胞菌Cas9 (RpaCas9)、深紅紅螺菌Cas9 (RruCas9)、內氏放線菌Cas9 (AnaCas9)、新兇手弗朗西斯氏菌Cas9 (FnoCas9)或腦膜炎奈瑟菌(NmeCas9)。 實施例100係如實施例98或99之組合物，其中該Cas9為Nme1Cas9、Nme2Cas9、Nme3Cas9或SpyCas9。 實施例101係一種組合物，其包含： (a)  第一基因體編輯工具，其中該第一基因體編輯工具包含含有鹼基編輯器之第一基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該鹼基編輯器同源之向導RNA (gRNA)；及 (b)  第二基因體編輯工具，該第二基因體編輯工具包含含有RNA引導之裂解酶的第二基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該RNA引導之裂解酶同源之gRNA，其中該鹼基編輯器與該RNA引導之裂解酶正交。 實施例102係如實施例101之組合物，其中該鹼基編輯器為C至T鹼基編輯器，視情況包含胞苷去胺酶，或為A至G鹼基編輯器，視情況包含腺苷去胺酶。 實施例103係如實施例87至102中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯工具或該第二基因體編輯工具經由電穿孔遞送至細胞。 實施例104係如實施例87至103中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯工具或該第二基因體編輯工具含於至少一種脂質奈米顆粒(LNP)中。 實施例105係如實施例87至104中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯工具或該第二基因體編輯工具包含至少一種載體。 實施例106係如實施例87至105中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯工具或該第二基因體編輯工具包含至少一種多肽或至少一種編碼該第一基因體編輯工具或該第二基因體編輯工具之核酸。 實施例107係如實施例87至106中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯工具包含至少一種包含該第一基因體編輯工具之多肽或至少一種編碼該第一基因體編輯工具之核酸。 實施例108係如實施例87至107中任一項之組合物，其中該第二基因體編輯工具包含至少一種包含該第二基因體編輯工具之多肽或至少一種編碼該第二基因體編輯工具之核酸。 實施例109係如實施例106至108中任一項之組合物，其中該至少一種核酸包含至少一種mRNA。 實施例110係如實施例101至109中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯工具包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)，且該UGI與該鹼基編輯器包含在單一多肽中。 實施例111係如實施例101至109中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯工具包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)，且該UGI與該鹼基編輯器包含在不同多肽中。 實施例112係如實施例110或111之組合物，其中該鹼基編輯器包含胞苷去胺酶及RNA引導之切口酶。 實施例113係如實施例112之組合物，其中該胞苷去胺酶、該RNA引導之切口酶及該UGI包含在單一多肽中。 實施例114係如實施例112之組合物，其中該胞苷去胺酶、該RNA引導之切口酶及該UGI包含在不同多肽中。 實施例115係如實施例112之組合物，其中該胞苷去胺酶與該RNA引導之切口酶包含在單一多肽中，且其中該UGI包含在不同多肽中。 實施例116係如實施例87至115中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器包含與SEQ ID NO: 3、146或311至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之胺基酸序列。 實施例117係如實施例87至116中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器係作為包含與SEQ ID NO: 1至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之核苷酸序列的核酸遞送至細胞，且該第二基因體編輯器係作為包含與SEQ ID NO: 180-190中之任一者至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之核苷酸序列的核酸遞送至細胞。 實施例118係如實施例87至117中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器係作為包含與SEQ ID NO: 147或310至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之核苷酸序列的核酸遞送至細胞，且該第二基因體編輯器係作為包含與SEQ ID NO: 293或295至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之核苷酸序列的核酸遞送至細胞。 實施例119係如實施例87至115中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含與SEQ ID NO: 9、12、18及21中之任一者至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之胺基酸序列。 實施例120係如實施例87至119中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含胞苷去胺酶，且其中該胞苷去胺酶包含與SEQ ID NO: 22至少80%、85%、87%、90%、95%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。 實施例121係如實施例120之組合物，其中該胞苷去胺酶包含APOBEC3A去胺酶(A3A)。 實施例122係如實施例121之組合物，其中該A3A包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 22至少87%、90%、95%、98%或99%一致之胺基酸序列。 實施例123係如實施例121或122之組合物，其中該A3A為人類A3A。 實施例124係如實施例121至123中任一項之組合物，其中該A3A為野生型A3A。 實施例125係如實施例87至124中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含Cas9切口酶。 實施例126係如實施例87至125中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含腦膜炎奈瑟菌(Nme) Cas9切口酶。 實施例127係如實施例87至126中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含D16A NmeCas9切口酶，視情況為D16A Nme2Cas9。 實施例128係如實施例87至127中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含SEQ ID NO: 149之胺基酸序列。 實施例129係如實施例87至128中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含與SEQ ID NO: 146之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致之序列。 實施例130係如實施例87至129中任一項之組合物，其中該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶包含Cas9裂解酶。 實施例131係如實施例87至130中任一項之組合物，其中該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶包含釀膿鏈球菌(Spy) Cas9裂解酶。 實施例132係如實施例87至131中任一項之組合物，其中該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶包含與SEQ ID NO: 156至少90%一致之胺基酸序列。 實施例133係如實施例87至132中任一項之組合物，其中該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶包含SEQ ID NO: 156之胺基酸序列。 實施例134係如實施例87至125中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含釀膿鏈球菌(Spy) Cas9切口酶。 實施例135係如實施例87至125及134中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含D10A SpyCas9切口酶。 實施例136係如實施例87至125、134及135中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含SEQ ID NO: 41、43及45中之任一者之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 41、43及45中之任一者具有至少80%、90%、95%、98%或99%一致性之胺基酸序列。 實施例137係如實施例87至125及134至136中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器係作為包含SEQ ID NO: 42、44及46中之任一者之核苷酸序列或與SEQ ID NO: 42、44及46中之任一者具有至少80%、90%、95%、98%或99%一致性之核苷酸序列之核酸遞送至細胞。 實施例138係如實施例87至125及134至137中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器係作為包含SEQ ID NO: 42、44及46-58中之任一者之核苷酸序列之核酸遞送至細胞。 實施例139係如實施例87至125及134至138中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器係作為包含與SEQ ID NO: 1至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之核苷酸序列的核酸遞送至細胞。 實施例140係如實施例87至125及134至138中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器係作為包含與SEQ ID NO: 4至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之核苷酸序列的核酸遞送至細胞。 實施例141係如實施例87至125及134至138中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含與SEQ ID NO: 148至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之胺基酸序列。 實施例142係如實施例87至125及134至141中任一項之組合物，其中該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶包含腦膜炎奈瑟菌(Nme) Cas9裂解酶。 實施例143係如實施例87至125及134至142中任一項之組合物，其中該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶包含與SEQ ID NO: 157-167、191、198、205、212及219中之任一者至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列。 實施例144係如實施例87至124及134至143中任一項之組合物，其中該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶包含SEQ ID NO: 157-167、191、198、205、212及219中之任一者之胺基酸序列。 實施例145係如實施例87至124及134至144中任一項之組合物，其中該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶係作為包含與SEQ ID NO: 168-190、192-197、199-204、206-211、213-218及220-225中之任一者至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列的核酸遞送至細胞。 實施例146係如實施例87至124及134至144中任一項之組合物，其中該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶係作為包含SEQ ID NO: 168-190、192-197、199-204、206-211、213-218及220-225中之任一者之核苷酸序列之核酸遞送至該細胞。 實施例147係如實施例87至146中任一項之組合物，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶不同源。 實施例148係如實施例87至147中任一項之組合物，其中該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器不同源。 實施例149係如實施例87至148中任一項之組合物，其中該至少一種gRNA包含至少一種單一向導RNA (sgRNA)。 實施例150係如實施例149之組合物，其中該至少一種sgRNA包含短單一向導RNA (短sgRNA)，該短sgRNA包含含有髮夾區之sgRNA保守部分，其中該髮夾區缺少至少5-10個核苷酸且其中該短sgRNA包含5’端修飾或3’端修飾或兩者。 實施例151係如實施例87至150中任一項之組合物，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含至少兩種靶向至少兩個不同基因體基因座之gRNA。 實施例152係如實施例87至151中任一項之組合物，其中該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含至少兩種靶向至少兩個不同基因體基因座之gRNA。 實施例153係如實施例87至152中任一項之組合物，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含至少三種靶向至少三個不同基因體基因座之gRNA。 實施例154係如實施例87至153中任一項之組合物，其中該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含至少三種靶向至少三個不同基因體基因座之gRNA。 實施例155係如實施例87至154中任一項之組合物，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含至少四種靶向至少四個不同基因體基因座之gRNA。 實施例156係如實施例87至155中任一項之組合物，其中該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含至少四種靶向至少四個不同基因體基因座之gRNA。 實施例157係如實施例87至156中任一項之組合物，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含至少五種靶向至少五個不同基因體基因座之gRNA。 實施例158係如實施例87至157中任一項之組合物，其中該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含至少五種靶向至少五個不同基因體基因座之gRNA。 實施例159係如實施例87至158中任一項之組合物，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含至少六種靶向至少六個不同基因體基因座之gRNA。 實施例160係如實施例87至159中任一項之組合物，其中該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含至少六種靶向至少六個不同基因體基因座之gRNA。 實施例161係如實施例151至160中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器及該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源且靶向不同基因體基因座之gRNA中之一者、兩者、三者、四者、五者或六者含於同一脂質奈米顆粒(LNP)中。 實施例162係如實施例87至161中任一項之組合物，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA靶向一或多個選自以下之基因體基因座：TRBC基因座、HLA-A基因座、HLA-B基因座、CIITA基因座、HLA-DR基因座、HLA-DQ基因座及HLA-DP基因座。 實施例163係如實施例87至162中任一項之組合物，其中該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA靶向一或多個選自以下之基因體基因座：TRAC基因座、AAVS1基因座及CIITA基因座。 實施例164係如實施例87至163中任一項之組合物，其中 (i)   該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該HLA-A基因座之gRNA及靶向該CIITA基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該TRAC基因座之gRNA； (ii)  該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該TRBC基因座之gRNA、靶向該HLA-A基因座之gRNA及靶向該CIITA基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該TRAC基因座之gRNA； (iii) 該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該HLA-A基因座之gRNA、靶向該HLA-B基因座之gRNA及靶向該CIITA基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該TRAC基因座之gRNA； (iv) 該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該TRBC基因座之gRNA、靶向該HLA-A基因座之gRNA、靶向該HLA-B基因座之gRNA及靶向該CIITA基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該TRAC基因座之gRNA； (v)  該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該HLA-A基因座之gRNA及靶向該HLA-DR基因座、該HLA-DQ基因座或該HLA-DP基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該TRAC基因座之gRNA； (vi) 該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該TRBC基因座之gRNA、靶向該HLA-A基因座之gRNA及靶向該HLA-DR基因座、該HLA-DQ基因座或該HLA-DP基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該TRAC基因座之gRNA； (vii)       該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該HLA-A基因座之gRNA、靶向該HLA-B基因座之gRNA及靶向該HLA-DR基因座、該HLA-DQ基因座或該HLA-DP基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該TRAC基因座之gRNA； (viii)      該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該TRBC基因座之gRNA、靶向該HLA-A基因座之gRNA、靶向該HLA-B基因座之gRNA及靶向該HLA-DR基因座、該HLA-DQ基因座或該HLA-DP基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該TRAC基因座之gRNA； (ix) 該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該TRAC基因座之gRNA、靶向該TRBC基因座之gRNA、靶向該CIITA基因座之gRNA及靶向該HLA-A基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該TRAC基因座之gRNA； (x)  該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該TRBC基因座之gRNA、靶向該HLA-A基因座之gRNA及靶向該CIITA基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該AAVS1基因座之gRNA； (xi) 該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該TRBC基因座之gRNA、靶向該HLA-A基因座之gRNA、靶向該HLA-B基因座之gRNA及靶向該CIITA基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該AAVS1基因座之gRNA； (xii)       該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該TRBC基因座之gRNA、靶向該HLA-A基因座之gRNA及靶向該HLA-DR基因座、該HLA-DQ基因座或該HLA-DP基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該AAVS1基因座之gRNA；或 (xiii)      該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向該TRBC基因座之gRNA、靶向該HLA-A基因座之gRNA、靶向該HLA-B基因座之gRNA及靶向該HLA-DR基因座、該HLA-DQ基因座或該HLA-DP基因座之gRNA，且該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該AAVS1基因座之gRNA。 實施例165係如實施例87至164中任一項之組合物，其進一步包含編碼用於插入至該TRAC或該AAVS1基因座中之外源基因之核酸。 實施例166係如實施例164之組合物，其中在子部分(i)至(ix)中之任一者中，該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該AAVS1基因座之另一gRNA。 實施例167係如實施例164之組合物，其中在子部分(x)至(xiii)中之任一者中，該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向該TRAC基因座之另一gRNA。 實施例168係如實施例1、16、17、87及101中任一項之方法或組合物，其中該第一基因體編輯工具、該第二基因體編輯工具及該等gRNA共同含於以下中：(i)第一脂質奈米顆粒(LNP)，其包含該第二基因體編輯器及第一gRNA，(ii)第二LNP，其包含該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器，(iii)第三LNP，其包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)，(iv)第四LNP，其包含第二gRNA，(v)第五LNP，其包含第三gRNA，及(vi)第六LNP，其包含第四gRNA。 實施例169係如實施例1、16、17、87及101中任一項之方法或組合物，其中該第一基因體編輯工具、該第二基因體編輯工具及該等gRNA共同含於以下中：(i)第一脂質奈米顆粒(LNP)，其包含該第二基因體編輯器及第一gRNA，(ii)第二LNP，其包含該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器，(iii)第三LNP，其包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)，(iv)第四LNP，其包含第二gRNA及第三gRNA，及(v)第五LNP，其包含第四gRNA。 實施例170係如實施例1、16、17、87及101中任一項之方法或組合物，其中該第一基因體編輯工具、該第二基因體編輯工具及該等gRNA共同含於以下中：(i)第一脂質奈米顆粒(LNP)，其包含該第二基因體編輯器及第一gRNA，(ii)第二LNP，其包含該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器且包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)，(iii)第三LNP，其包含第二gRNA，(iv)第四LNP，其包含第三gRNA，及(v)第五LNP，其包含第四gRNA。 實施例171係如實施例1、16、17、87及101中任一項之方法或組合物，其中該第一基因體編輯工具、該第二基因體編輯工具及該等gRNA共同含於以下中：(i)第一脂質奈米顆粒(LNP)，其包含該第二基因體編輯器及第一gRNA，(ii)第二LNP，其包含該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器且包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)，(iii)第三LNP，其包含第二gRNA及第三gRNA，及(iv)第四LNP，其包含第四gRNA。 實施例172係如實施例1、16、17、87及101中任一項之方法或組合物，其中該第一基因體編輯工具、該第二基因體編輯工具及該等gRNA共同含於以下中：(i)第一脂質奈米顆粒(LNP)，其包含該第二基因體編輯器及第一gRNA，(ii)第二LNP，其包含該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器，(iii)第三LNP，其包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)，(iv)第四LNP，其包含第二gRNA、第三gRNA及第四gRNA。 實施例173係如實施例1、16、17、87及101中任一項之方法或組合物，其中該第一基因體編輯工具、該第二基因體編輯工具及該等gRNA共同含於以下中：(i)第一脂質奈米顆粒(LNP)，其包含該第二基因體編輯器及第一gRNA，(ii)第二LNP，其包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)，(iii)第三LNP，其包含該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器且包含第二gRNA，(iv)第四LNP，其包含該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器且包含第三gRNA，及(v)第五LNP，其包含該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器且包含第四gRNA。 實施例174係如實施例1、16、17、87及101中任一項之方法或組合物，其中該第一基因體編輯工具、該第二基因體編輯工具及該等gRNA共同含於以下中：(i)第一脂質奈米顆粒(LNP)，其包含該第二基因體編輯器及第一gRNA，(ii)第二LNP，其包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)，(iii)第三LNP，其包含該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器且包含第二gRNA及第三gRNA，及(iv)第四LNP，其包含該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器且包含第四gRNA。 實施例175係如實施例168至174中任一項之方法或組合物，其中該第一基因體編輯工具、該第二基因體編輯工具及該等gRNA共同含於第一至第四LNP、第一至第五LNP或第一至第六LNP中，以及包含第五gRNA之一或多種額外LNP中。 實施例176係如實施例175之方法或組合物，其中該一或多種額外LNP進一步包含第六gRNA。 實施例177係如實施例176之方法或組合物，其中該一或多種額外LNP進一步包含第七gRNA。 實施例178係如實施例177之方法或組合物，其中該一或多種額外LNP進一步包含第八gRNA。 實施例179係如實施例178之方法或組合物，其中該一或多種額外LNP進一步包含第九gRNA。 實施例180係如實施例179之方法或組合物，其中該一或多種額外LNP進一步包含第十gRNA。 實施例181係如實施例168至180中任一項之方法或組合物，其中該第二基因體編輯器包含釀膿鏈球菌(Spy) Cas9裂解酶，該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含腦膜炎奈瑟菌(Nme) Cas9切口酶，該第一gRNA靶向該TRAC基因座，該第二gRNA靶向該HLA-A基因座，該第三gRNA靶向該CIITA基因座，該第四gRNA靶向該HLA-B基因座，該第五 gRNA靶向該TRBC基因座且該一或多種額外gRNA各自靶向不同於該TRAC基因座、該HLA-A基因座、該HLA-B基因座、該CIITA基因座及該TRBC基因座之基因座。 實施例182係如實施例181之方法或組合物，其中該第一gRNA包含SEQ ID NO: 374或378之序列或與SEQ ID NO: 374或378至少95%、90%或85%一致之序列，其中該第二gRNA包含SEQ ID NO: 366或370之序列或與SEQ ID NO: 366或370至少95%、90%或85%一致之序列，其中該第三gRNA包含SEQ ID NO: 345或384之序列或與SEQ ID NO: 345或384至少95%、90%或85%一致之序列，且其中該第四gRNA包含SEQ ID NO: 363之序列或與SEQ ID NO: 363至少95%、90%或85%一致之序列。 實施例183係如實施例1至167中任一項之方法或組合物，其中該第一基因體編輯工具、該第二基因體編輯工具及該等gRNA共同含於至少2、3、4、5、6、7、8、9或10種各自包含不同核酸組分之不同的脂質奈米顆粒(LNP)中。 實施例184係如實施例183之方法或組合物，其中該第一基因體編輯工具、該第二基因體編輯工具及該等gRNA共同含於4、5、6或7種各自包含不同核酸組分之不同的脂質奈米顆粒(LNP)中。 實施例185係如實施例183之方法或組合物，其中該第一基因體編輯工具、該第二基因體編輯工具及該等gRNA共同含於4種各自包含不同核酸組分之不同LNP中。 實施例186係如實施例183之方法或組合物，其中該第一基因體編輯工具、該第二基因體編輯工具及該等gRNA共同含於5種各自包含不同核酸組分之不同LNP中。 實施例187係如實施例183之方法或組合物，其中該第一基因體編輯工具、該第二基因體編輯工具及該等gRNA共同含於6種各自包含不同核酸組分之不同LNP中。 實施例188係如實施例183之方法或組合物，其中該第一基因體編輯工具、該第二基因體編輯工具及該等gRNA共同含於7種各自包含不同核酸組分之不同LNP中。 實施例189係如實施例1至167中任一項之方法或組合物，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA及該至少一種與該第二基因體編輯器同源之gRNA共同地包含至少2種gRNA，且其中靶向不同基因體基因座之2種gRNA含於同一脂質奈米顆粒(LNP)中。 實施例190係如實施例1至167及189中任一項之方法或組合物，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA及該至少一種與該第二基因體編輯器同源之gRNA共同地包含至少3種gRNA，且其中靶向不同基因體基因座之3種gRNA含於同一脂質奈米顆粒中。 實施例191係如實施例1至167、189及190中任一項之方法或組合物，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA及該至少一種與該第二基因體編輯器同源之gRNA共同地包含至少4種gRNA，且其中靶向不同基因體基因座之4種gRNA含於同一脂質奈米顆粒中。 實施例192係如實施例189至191中任一項之方法或組合物，其中其他gRNA各自含於不同的LNP中。 實施例193係如實施例1至167中任一項之方法或組合物，其中該等gRNA中之每一者含於不同的LNP中。 實施例194係如實施例1至167中任一項之方法或組合物，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含一種以上靶向不同基因體基因座之gRNA，且該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器與該一種以上gRNA中之至少一種含於同一LNP中。 實施例195係如實施例194之方法或組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器及該等gRNA中之一者含於同一LNP中。 實施例196係如實施例194或195之方法或組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器及該等gRNA中之2者含於同一LNP中。 實施例197係如實施例194至196中任一項之方法或組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器及該等gRNA中之3者含於同一LNP中。 實施例198係如實施例194至197中任一項之方法或組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器及該等gRNA中之4者含於同一LNP中。 實施例199係如實施例1至167中任一項之方法或組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器含於與該至少一種同該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA中之每一者不同的LNP中。 實施例200係如實施例1至167中任一項之方法或組合物，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含一種以上靶向不同基因體基因座之gRNA，且該一種以上gRNA中之每一者含於不同的LNP中。 實施例201係如實施例200之方法或組合物，其中包含與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之該等gRNA中之一者的LNP各自進一步包含該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器。 實施例202係如實施例1至167中任一項之方法或組合物，其中該第二基因體編輯器及該至少一種與該第二基因體編輯器同源之gRNA含於同一LNP中。 實施例203係如實施例202之方法或組合物，其中該第二基因體編輯器與該等gRNA中之一者含於同一LNP中。 實施例204係如實施例1至167中任一項之方法或組合物，其中該第一基因體編輯工具包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)，且該UGI含於與該等gRNA中之每一者不同的LNP中。 實施例205係如實施例1至204中任一項之方法或組合物，其中該等LNP包含第一組不同的LNP及第二組不同的LNP，以及視情況第三組不同的LNP。 實施例206係如實施例205之方法或組合物，其中該第一組不同的LNP包含2、3、4或5種LNP，該第二組不同的LNP包含2、3、4或5種LNP，且該第三組不同的LNP在存在時包含2、3、4或5種LNP。 實施例207係如實施例205或206之方法或組合物，其中該第一組不同的LNP包含3或4種LNP，該第二組不同的LNP包含3或4種LNP。 實施例208係如實施例205至207中任一項之方法或組合物，其中該第一組不同的LNP、該第二組不同的LNP及該第三組不同的LNP (在存在時)依序遞送至細胞。 實施例209係如實施例205至208中任一項之方法或組合物，其中該第二組不同的LNP係在該第一組不同的LNP遞送至細胞後1、2或3天遞送至細胞，且其中該第三組不同的LNP (在存在時)係在該第二組不同的LNP遞送至細胞後1、2或3天遞送至細胞。 實施例210係如實施例205至209中任一項之方法或組合物，其中該第二組不同的LNP係在該第一組不同的LNP遞送至細胞後1天遞送至細胞。 實施例211係如實施例21至86及104至210中任一項之方法或組合物，其中該LNP之直徑為1-250 nm、10-200 nm、20-150 nm、約35-150 nm、50-150 nm、50-100 nm、50-120 nm、60-100 nm、75-150 nm、75-120 nm或75-100 nm。 實施例212係如實施例211之方法或組合物，其中該LNP之直徑＜ 100 nm。 實施例213係如實施例21至86及104至211中任一項之方法或組合物，其中該LNP包含可電離脂質。 實施例214係如實施例213之方法或組合物，其中該可電離脂質包含生物可降解之可電離脂質。 實施例215係如實施例213或214之方法或組合物，其中該可電離脂質之PK值係在約5.1至約7.4之pKa範圍內，諸如約5.5至約6.6、約5.6至約6.4、約5.8至約6.2或約5.8至約6.5。 實施例216係如實施例213至215中任一項之方法或組合物，其中該可電離脂質包含胺脂質。 實施例217係如實施例216之方法或組合物，其中該胺脂質為脂質A或其縮醛類似物或脂質D。 實施例218係如實施例21至86及104至217中任一項之方法或組合物，其中該LNP包含輔助脂質。 實施例219係如實施例21至86及104至218中任一項之方法或組合物，其中該LNP之N/P比為約6。 實施例220係如實施例21至86及104至219中任一項之方法或組合物，其中該LNP包含胺脂質、輔助脂質及PEG脂質。 實施例221係如實施例21至86及104至220中任一項之方法或組合物，其中該LNP包含胺脂質、輔助脂質、中性脂質及PEG脂質。 實施例222係如實施例21至86及104至221中任一項之方法或組合物，其中該LNP包含脂質組分且該脂質組分包含：約50-60 mol%胺脂質，諸如脂質A；約8-10 mol%中性脂質；及約2.5-4 mol%隱形脂質(例如PEG脂質)，其中該脂質組分之其餘部分為輔助脂質，且其中脂質LNP之N/P比為約3-7。 實施例223係如實施例21至86及104至222中任一項之方法或組合物，其中該LNP包含脂質組分且該脂質組分包含：約25-45 mol%胺脂質，諸如脂質A；約10-30 mol%中性脂質；約25-65 mol%輔助脂質；及約1.5-3.5 mol%隱形脂質(例如PEG脂質)，且其中該LNP之N/P比為約3-7。 實施例224係如實施例223之方法或組合物，其中該胺脂質之量為該脂質組分之約29-38 mol%；該脂質組分之約30-43 mol%；或該脂質組分之約25-34 mol%；視情況該脂質組分之約33 mol%、約35 mol%或該脂質組分之約38 mol%。 實施例225係223或224之方法或組合物，其中該中性脂質之量為該脂質組分之約11-20 mol%，視情況該脂質組分之約15 mol%。 實施例226係如實施例223至225中任一項之方法或組合物，其中該輔助脂質之量為該脂質組分之約43-65 mol%；或該脂質組分之約43-55 mol%；視情況該脂質組分之約47.5 mol%或該脂質組分之約49 mol%。 實施例227係如實施例223至226中任一項之方法或組合物，其中該PEG脂質之量為該脂質組分之約2.0-3.5 mol%；該脂質組分之約2.3-3.5 mol%；或該脂質組分之約2.3-2.7 mol%，視情況該脂質組分之約2.5 mol%或該脂質組分之約2.7 mol%。 實施例228係如實施例223至237中任一項之方法或組合物，其中 a.    該胺脂質之量為該脂質組分之約29-44 mol%；該中性脂質之量為該脂質組分之約11-28 mol%；該輔助脂質之量為該脂質組分之約28-55 mol%；且該PEG脂質之量為該脂質組分之約2.3-3.5 mol% b.    該胺脂質之量為該脂質組分之約29-38 mol%；該中性脂質之量為該脂質組分之約11-20 mol%；該輔助脂質之量為該脂質組分之約43-55 mol%；且該PEG脂質之量為該脂質組分之約2.3-2.7 mol%； c.    該胺脂質之量為該脂質組分之約25-34 mol%；該中性脂質之量為該脂質組分之約10-20 mol%；該輔助脂質之量為該脂質組分之約45-65 mol%；且該PEG脂質之量為該脂質組分之約2.5-3.5 mol%；或 d.    該胺脂質之量為該脂質組分之約30-43 mol%；該中性脂質之量為該脂質組分之約10-17 mol%；該輔助脂質之量為該脂質組分之約43.5-56 mol%；且該PEG脂質之量為該脂質組分之約1.5-3 mol%。 實施例229係如實施例21至86及104至228中任一項之方法或組合物，其中該LNP包含脂質組分且該脂質組分包含：約25-50 mol%胺脂質，諸如脂質D；約7-25 mol%中性脂質；約39-65 mol%輔助脂質；及約0.5-1.8 mol%隱形脂質(例如PEG脂質)，且其中該LNP之N/P比為約3-7。 實施例230係如實施例229之方法或組合物，其中該胺脂質之量為該脂質組分之約30-45 mol%；或該脂質組分之約30-40 mol%；視情況該脂質組分之約30 mol%、40 mol%或50 mol%。 實施例231係如實施例229或230之方法或組合物，其中該中性脂質之量為該脂質組分之約10-20 mol%；或該脂質組分之約10-15 mol%；視情況該脂質組分之約10 mol%或15 mol%。 實施例232係如實施例229至231中任一項之方法或組合物，其中該輔助脂質之量為該脂質組分之約50-60 mol%；該脂質組分之約39-59 mol%；或該脂質組分之約43.5-59 mol%；視情況該脂質組分之約59 mol%；該脂質組分之約43.5 mol%；或該脂質組分之約39 mol%。 實施例233係如實施例229至232中任一項之方法或組合物，其中該PEG脂質之量為該脂質組分之約0.9-1.6 mol%；或該脂質組分之約1-1.5 mol%；視情況該脂質組分之約1 mol%或該脂質組分之約1.5 mol%。 實施例234係如實施例229至233中任一項之方法或組合物，其中： a.    該可電離脂質之量為該脂質組分之約27-40 mol%；該中性脂質之量為該脂質組分之約10-20 mol%；該輔助脂質之量為該脂質組分之約50-60 mol%；且該PEG脂質之量為該脂質組分之約0.9-1.6 mol%； b.    該可電離脂質之量為該脂質組分之約30-45 mol%；該中性脂質之量為該脂質組分之約10-15 mol%；該輔助脂質之量為該脂質組分之約39-59 mol%；且該PEG脂質之量為該脂質組分之約1-1.5 mol%； c.    該可電離脂質之量為該脂質組分之約30 mol%；該中性脂質之量為該脂質組分之約10 mol%；該輔助脂質之量為該脂質組分之約59 mol%；且該PEG脂質之量為該脂質組分之約1 mol%； d.    該可電離脂質之量為該脂質組分之約40 mol%；該中性脂質之量為該脂質組分之約15 mol%；該輔助脂質之量為該脂質組分之約43.5 mol%；且該PEG脂質之量為該脂質組分之約1.5 mol%；或 e.    該可電離脂質之量為該脂質組分之約50 mol%；該中性脂質之量為該脂質組分之約10 mol%；該輔助脂質之量為該脂質組分之約39 mol%；且該PEG脂質之量為該脂質組分之約1 mol%。 實施例235係如實施例216至234中任一項之方法或組合物，其中該胺脂質為脂質A。 實施例236係如實施例216至234中任一項之方法或組合物，其中該胺脂質為脂質D。 實施例237係如實施例221至236中任一項之方法或組合物，其中該中性脂質為DSPC。 實施例238係如實施例222至237中任一項之方法或組合物，其中該隱形脂質為PEG-二肉豆蔻醯基甘油(PEG-DMG)。 實施例239係如實施例218至238中任一項之方法或組合物，其中該輔助脂質為膽固醇。 實施例240係如實施例21至86及104至239中任一項之方法或組合物，其中該LNP在接觸該細胞之前經血清因子預處理，視情況其中該血清因子為靈長類動物血清因子、視情況人類血清因子。 實施例241係如實施例21至86及104至240中任一項之方法或組合物，其中該LNP在接觸該細胞之前經人類血清預處理。 實施例242係如實施例21至86及104至241中任一項之方法或組合物，其中該LNP在接觸該細胞之前經ApoE預處理，視情況其中該ApoE為人類ApoE。 實施例243係如實施例21至86及104至242中任一項之方法或組合物，其中該LNP在接觸該細胞之前經重組ApoE3或ApoE4預處理，視情況其中該ApoE3或該ApoE4為人類ApoE3或ApoE4。 實施例244係一種細胞，其中該細胞在活體外經如實施例1至243中任一項之方法或組合物處理。 實施例245係一種細胞，其中該細胞在活體內經如實施例1至243中任一項之方法或組合物處理。 實施例246係如實施例244或245之細胞，其中該細胞為人類細胞。 實施例247係如實施例244至246中任一項之細胞，其中該細胞選自：間質幹細胞；造血幹細胞(HSC)；單核細胞；內皮祖細胞(EPC)；神經幹細胞(NSC)；緣幹細胞(LSC)；組織特異性原代細胞或由其衍生之細胞(TSC)、誘導型多能幹細胞(iPSC)；眼幹細胞；多能幹細胞(PSC)；胚胎幹細胞(ESC)；及用於器官或組織移植之細胞，以及視情況用於ACT療法中之細胞。 實施例248係如實施例244至247中任一項之細胞，其中該細胞為免疫細胞。 實施例249係如實施例248之細胞，其中該免疫細胞選自淋巴球(例如T細胞、B細胞、天然殺手細胞(「NK細胞」，及NKT細胞或iNKT細胞))、單核球、巨噬細胞、肥胖細胞、樹突細胞、顆粒球(例如嗜中性球、嗜酸性球及嗜鹼性球)、原代免疫細胞、CD3+細胞、CD4+細胞、CD8+ T細胞、調控性T細胞(Treg)、B細胞及樹突細胞(DC))。 實施例250係如實施例248之細胞，其中該免疫細胞選自外周血單核細胞(PBMC)、淋巴球、T細胞，視情況CD4+細胞、CD8+細胞、記憶T細胞、原初T細胞、幹細胞記憶T細胞；或B細胞，視情況記憶B細胞、原初B細胞；及原代細胞。 實施例251係如實施例250之細胞，其中該細胞為T細胞。 實施例252係如實施例251之細胞，其中該T細胞選自腫瘤浸潤性淋巴球(TIL)、表現α-β TCR之T細胞、表現γ-δ TCR之T細胞、調控性T細胞(Treg)、記憶T細胞及早期幹細胞記憶T細胞(Tscm, CD27+/CD45+)。 實施例253係如實施例244至252中任一項之細胞，其中該細胞在編輯前自人類供體PBMC或leukopak中分離出。 實施例254係如實施例244至253中任一項之細胞，其中該細胞源自編輯前之祖細胞。 實施例255係一種細胞群體，其包含如實施例244至254中任一項之細胞。 實施例256係如實施例255之細胞群體，其中該群體包含經編輯之T細胞，且其中該群體之至少30%、40%、50%、55%、60%、65%之細胞具有記憶表型(CD27+、CD45RA+)。 實施例257係如實施例255或256之細胞群體，其中該等細胞為非活化之免疫細胞。 實施例258係如實施例255至257中任一項之細胞群體，其中該等細胞為活化之免疫細胞。 實施例259係如實施例255至258中任一項之細胞群體，其中該等細胞為T細胞且該等細胞在編輯後對重複刺激有反應。 實施例260係如實施例255至259中任一項之細胞群體，其中該等細胞離體培養、擴增或增殖。 實施例261係如實施例87至260中任一項之細胞、細胞群體或組合物，其用於治療癌症。 實施例262  一種如實施例87至261中任一項之細胞、細胞群體或組合物之用途，其用於製備用以治療癌症之藥劑。 實施例263係一種工程化細胞，其包含在至少三個基因體基因座中之至少三種鹼基編輯物以及至少一個外源基因。 實施例264係一種組合物，其包含： a.    gRNA，其包含選自以下之向導序列：i) SEQ ID NO: 251-264；ii)選自SEQ ID NO: 251-264之序列之至少17、18、19或20個鄰接核苷酸；iii)與選自SEQ ID NO: 251-264之序列至少95%、90%或85%一致之向導序列；iv)包含表5中所列示之基因體坐標之10個鄰接核苷酸±10個核苷酸之序列；v)來自(iv)之序列之至少17、18、19或20個鄰接核苷酸；或vi)與選自(v)之序列至少95%、90%或85%一致之向導序列；或 b.    編碼(a.)之gRNA之核酸。 實施例265係一種改變AAVS1基因內之DNA序列之方法，其包括向細胞遞送： a.    gRNA，其包含選自以下之向導序列：i) SEQ ID NO: 251-264；ii)選自SEQ ID NO: 251-264之序列之至少17、18、19或20個鄰接核苷酸；iii)與選自SEQ ID NO: 251-264之序列至少95%、90%或85%一致之向導序列；iv)包含表 5中所列示之基因體坐標之10個鄰接核苷酸±10個核苷酸之序列；v)來自(iv)之序列之至少17、18、19或20個鄰接核苷酸；或vi)與選自(v)之序列至少95%、90%或85%一致之向導序列；或 b.    編碼(a.)之gRNA之核酸。 實施例266係一種免疫療法方法，其包括向個體投與包含工程化細胞之組合物， 其中該細胞包含AAVS1基因中之基因體修飾，其中遺傳修飾包含選自以下之基因體坐標內之插入：chr19:55115695-55115715；chr19:55115588-55115608；chr19:55115616-55115636；chr19:55115623-55115643；chr19:55115637- 55115657；chr19:55115691-55115711；chr19:55115755-55115775；chr19:55115823- 55115843；chr19:55115834-55115854；chr19:55115835-55115855；chr19:55115836- 55115856；chr19:55115850-55115870；chr19:55115951-55115971；及chr19:55115949-55115969；或 其中藉由向該細胞中遞送以下物質使該細胞工程化： a.    gRNA，其包含選自以下之向導序列：i) SEQ ID NO: 251-264；ii)選自SEQ ID NO: 251-264之序列之至少17、18、19或20個鄰接核苷酸；iii)與選自SEQ ID NO: 251-264之序列至少95%、90%或85%一致之向導序列；iv)包含表 5中所列示之基因體坐標之10個鄰接核苷酸±10個核苷酸之序列；v)來自(iv)之序列之至少17、18、19或20個鄰接核苷酸；或vi)與選自(v)之序列至少95%、90%或85%一致之向導序列；或 b.    編碼(a.)之gRNA之核酸。 實施例267係一種工程化細胞，其包含AAVS1基因中之遺傳修飾，其中該遺傳修飾包含選自以下之基因體坐標內之插入：chr19:55115695-55115715；chr19:55115588-55115608；chr19:55115616-55115636；chr19:55115623-55115643；chr19:55115637-55115657；chr19:55115691-55115711；chr19:55115755-55115775；chr19:55115823-55115843；chr19:55115834-55115854；chr19:55115835-55115855；chr19:55115836-55115856；chr19:55115850-55115870；chr19:55115951- 55115971；及chr19:55115949-55115969。 實施例268係如實施例1、16、17、87及101中任一項之方法或組合物，其中該第一基因體編輯工具、該第二基因體編輯工具及該等gRNA共同含於以下中： (a) (i)   第一脂質奈米顆粒(LNP)，其包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)；(ii)第二LNP，其包含該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器且包含第二gRNA；(iii)第三LNP，其包含該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器且包含第三gRNA；及(iv)第四LNP，其包含該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器且包含第四gRNA；及 (b) (i)   第五LNP，其包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)；(ii)第六LNP，其包含該第二基因體編輯器及第一gRNA；(iii)編碼外源基因之核酸，該外源基因用於插入在該第一gRNA之編輯位點處；(iv)視情況第七LNP，其包含該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器且包含第五gRNA；(v)視情況第八LNP，其包含該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器且包含第六gRNA；(vi)視情況第九LNP，其包含該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器且包含第七gRNA。 I. 定義
除非另有說明，否則如本文所用之以下術語及片語意欲具有以下含義： 「多核苷酸」及「核酸」在本文中用於指包含核苷或核苷類似物之多聚體化合物，其具有沿主鏈連接在一起之含氮雜環鹼基或鹼基類似物，包括習用RNA、DNA、混合RNA-DNA及作為其類似物之聚合物。核酸「主鏈」可由多種鍵聯組成，包括糖-磷酸二酯鍵聯、肽-核酸鍵(「肽核酸」或PNA；PCT第WO 95/32305號)、硫代磷酸酯鍵聯、甲基膦酸酯鍵聯中之一或多者或其組合。核酸之糖部分可為核糖、去氧核糖或具有取代(例如2’甲氧基、2’鹵化物或2’-O-(2-甲氧基乙基) (2’-O-moe)取代)之類似化合物。含氮鹼基可為習用鹼基(A、G、C、T、U)、其類似物(例如經修飾尿苷，諸如5-甲氧基尿苷、假尿苷或N1-甲基假尿苷，或其他尿苷)；肌苷；嘌呤或嘧啶之衍生物(例如N 4-甲基去氧鳥苷、去氮嘌呤或氮雜嘌呤、去氮嘧啶或氮雜嘧啶、在5位或6位具有取代基之嘧啶鹼基(例如5-甲基胞嘧啶)、在2位、6位或8位具有取代基之嘌呤鹼基、2-胺基-6-甲基胺基嘌呤、O 6-甲基鳥嘌呤、4-硫基-嘧啶、4-胺基-嘧啶、4-二甲基肼-嘧啶及O 4-烷基-嘧啶；美國專利第5,378,825號及PCT第WO 93/13121號)。關於一般論述，參見 The Biochemistry of the Nucleic Acids5-36，Adams等人編輯，第11版，1992)。核酸可包括一或多個「無鹼基」殘基，其中主鏈不包括聚合物位置之含氮鹼基(美國專利第5,585,481號)。核酸可僅包含習用RNA或DNA糖、鹼基及鍵聯，或可包括習用組分及取代二者(例如具有2’甲氧基鍵聯之習用鹼基，或含有習用鹼基及一或多種鹼基類似物之聚合物)。核酸包括「鎖核酸」(LNA)，其為一種含有一或多個LNA核苷酸單體之類似物，二環呋喃糖單元鎖定於模擬RNA之糖構形中，此增強對互補RNA及DNA序列之雜交親和力(Vester及Wengel，2004, Biochemistry43(42):13233-41)。核酸包括「解鎖核酸」，其使得能夠調節熱力學穩定性且亦提供核酸酶穩定性。RNA及DNA具有不同的糖部分，且可因RNA中存在尿嘧啶或其類似物且DNA中存在胸腺嘧啶或其類似物而不同。
如本文所用之「多肽」係指包含胺基酸殘基之多聚體化合物，其可採用三維構形。多肽包括(但不限於)酶、酶前體蛋白、調控性蛋白質、結構蛋白質、受體、核酸結合蛋白、抗體等。多肽可(但不一定)包含轉譯後修飾、非天然胺基酸、輔基及諸如此類。
如本文所用，「核糖核蛋白」(RNP)或「RNP複合物」係指向導RNA連同RNA引導之DNA結合劑，諸如Cas核酸酶，例如Cas裂解酶、Cas切口酶或dCas DNA結合劑(例如Cas9)。在一些實施例中，向導RNA將RNA引導之DNA結合劑(諸如Cas9)引導至靶序列，且向導RNA與該靶序列雜交且該劑與該靶序列結合；在該劑為裂解酶或切口酶之情形下，結合後可進行裂解或切口。
如本文所用，「RNA引導之DNA結合劑」意指具有RNA及DNA結合活性之多肽或多肽複合物，或此一複合物之DNA結合亞單元，其中DNA結合活性係序列特異性的，且取決於PAM之存在及向導RNA之序列。例示性RNA引導之DNA結合劑包括Cas裂解酶/切口酶及其不活化形式(「dCas DNA結合劑」)。如本文所用，「Cas核酸酶」亦稱為「Cas蛋白」，其涵蓋Cas裂解酶、Cas切口酶及dCas DNA結合劑。Cas裂解酶/切口酶及dCas DNA結合劑包括III型CRISPR系統之Csm或Cmr複合物、其Cas10、Csm1或Cmr2亞單元、I型CRISPR系統之級聯複合物、其Cas3亞單元及2類Cas核酸酶。如本文所用，「2類Cas核酸酶」係具有RNA引導之DNA結合活性之單鏈多肽。2類Cas核酸酶包括2類Cas裂解酶/切口酶(例如H840A、D10A或N863A變異體)，其進一步具有RNA引導之DNA裂解酶或切口酶活性；以及2類dCas DNA結合劑，其中裂解酶/切口酶活性係不活化的。2類Cas核酸酶包括例如Cas9、Cpf1、C2c1、C2c2、C2c3、HF Cas9 (例如N497A、R661A、Q695A、Q926A變異體)、HypaCas9 (例如N692A、M694A、Q695A、H698A變異體)、eSPCas9(1.0) (例如K810A、K1003A、R1060A變異體)及eSPCas9(1.1) (例如K848A、K1003A、R1060A變異體)蛋白質及其修飾形式。Cpf1蛋白(Zetsche等人， Cell, 163: 1-13 (2015))與Cas9同源，且含有RuvC樣核酸酶結構域。Zetsche之Cpf1序列係以整體引用的方式併入。例如，參見Zetsche，表S1及表S3。例如，參見Makarova等人， Nat Rev Microbiol, 13(11): 722-36 (2015)；Shmakov等人， Molecular Cell,60:385-397 (2015)。
如本文所用，術語「基因體編輯器」或「編輯器」係指包含能夠在核酸序列(例如DNA或RNA)內進行修飾之多肽的物質。在一些實施例中，編輯器為裂解酶，諸如Cas9裂解酶。在一些實施例中，編輯器能夠使核酸內之鹼基去胺基，且可將其稱為鹼基編輯器。在一些實施例中，編輯器能夠使DNA分子內之鹼基去胺基。在一些實施例中，編輯器能夠使DNA中之胞嘧啶(C)去胺基。在一些實施例中，編輯器係融合蛋白，其包含與胞苷去胺酶結構域融合之RNA引導之切口酶。在一些實施例中，編輯器係RNA引導之切口酶與胞苷去胺酶結構域之組合。在一些實施例中，編輯器係融合蛋白，其包含與APOBEC3A去胺酶(A3A)融合之RNA引導之切口酶。在一些實施例中，編輯器包含與APOBEC3A去胺酶(A3A)融合之Cas9切口酶。在一些實施例中，編輯器係融合蛋白，其包含與胞苷去胺酶結構域融合之酶無活性RNA引導之DNA結合蛋白。在一些實施例中，編輯器係與DNA聚合酶融合之切口酶。
如本文所用，術語「基因體編輯工具」係指包含基因體編輯器及至少一種與該基因體編輯器之核酸酶或切口酶組分同源之向導RNA的物質。
基因體編輯器例如可包含C至T鹼基編輯器，且可或可不包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)。基因體編輯器例如可包含胞苷去胺酶、RNA引導之切口酶及UGI，其中該胞苷去胺酶、該RNA引導之切口酶及該UGI包含在單一多肽中，其中該胞苷去胺酶、該RNA引導之切口酶及該UGI包含在不同多肽中，或其中該去胺酶與該RNA引導之切口酶包含在單一多肽中，且該UGI包含在不同多肽中。在一些實施例中，去胺酶包含胞苷去胺酶。
如本文所用，術語「正交」係指任兩個基因體編輯器(例如鹼基編輯器、核酸酶、切口酶或裂解酶)，其中每一者能夠經由其同源向導RNA識別其自身靶標，但與同另一基因體編輯器同源之向導RNA不相容，例如每一者不能經由與另一基因體編輯器同源之向導RNA識別另一基因體編輯器之靶標。舉例而言，腦膜炎奈瑟菌Cas9 (NmeCas9)切口酶可能能夠經由與NmeCas9切口酶同源之向導RNA識別基因體基因座，且釀膿鏈球菌Cas9 (SpyCas9)裂解酶可能能夠經由與SpyCas9裂解酶同源之向導RNA識別另一基因體基因座。在該實例中，NmeCas9切口酶與SpyCas9裂解酶彼此正交。基因體編輯器或基因體編輯組件可經工程化以正交。儘管在該實例中，NmeCas9切口酶與SpyCas9裂解酶源自不同生物體，但兩個基因體編輯器不需要源自不同生物體以彼此正交。
如本文所用，「胞苷去胺酶」意指能夠具有胞苷去胺酶活性之多肽或多肽複合物，其催化胞苷或去氧胞苷之水解去胺基作用，通常產生尿苷或去氧尿苷。胞苷去胺酶涵蓋胞苷去胺酶超家族中之酶，且特定而言，APOBEC家族之酶(APOBEC1、APOBEC2、APOBEC4及APOBEC3亞組之酶)、活化誘導之胞苷去胺酶(AID或AICDA)及CMP去胺酶(例如，參見Conticello等人，Mol. Biol. Evol. 22:367-77, 2005；Conticello, Genome Biol. 9:229, 2008；Muramatsu等人，J. Biol. Chem. 274: 18470-6, 1999)；Carrington等人，Cells 9:1690 (2020))。在一些實施例中，涵蓋任何已知之胞苷去胺酶或APOBEC蛋白之變異體。變異體包括具有因一個或若干個突變(亦即取代、缺失、插入，諸如一個或若干個單點取代)而與野生型蛋白質不同之序列的蛋白質。舉例而言，可使用縮短序列，例如藉由缺失N末端、C末端或內部胺基酸，較佳地缺失序列C末端之一至四個胺基酸。如本文所用，術語「變異體」係指與參考序列同源之等位基因變異體、剪接變異體以及天然或人工突變體。變異體具有「功能性」，此乃因其顯示出DNA編輯之催化活性。
如本文所用，術語「APOBEC3A」係指胞苷去胺酶，諸如由人類A3A基因表現之蛋白質。APOBEC3A可具有催化性DNA編輯活性。APOBEC3A之胺基酸序列已予以闡述(UniPROT登錄ID：p31941)，且作為SEQ ID NO: 22包括在本文中。在一些實施例中，APOBEC3A蛋白係人類APOBEC3A蛋白或野生型蛋白質。變異體包括具有因一個或若干個突變(亦即取代、缺失、插入，諸如一個或若干個單點取代)而與野生型APOBEC3A蛋白不同之序列的蛋白質。舉例而言，可使用縮短之APOBEC3A序列，例如藉由缺失N末端、C末端或內部胺基酸，較佳地缺失序列C末端之一至四個胺基酸。如本文所用，術語「變異體」係指與APOBEC3A參考序列同源之等位基因變異體、剪接變異體以及天然或人工突變體。變異體具有「功能性」，此乃因其顯示出DNA編輯之催化活性。在一些實施例中，APOBEC3A (諸如人類APOBEC3A)具有57位野生型胺基酸(如野生型序列中所編號)。在一些實施例中，APOBEC3A (諸如人類APOBEC3A)在57位胺基酸處具有天冬醯胺(如野生型序列中所編號)。
如本文所用，「切口酶」係在雙股DNA中產生單股斷裂(亦稱為「切口」)(亦即切割DNA雙螺旋之一股，但不切割另一股)之酶。如本文所用，「RNA引導之切口酶」意指具有DNA切口酶活性之多肽或多肽複合物，其中DNA切口酶活性係序列特異性的且取決於RNA之序列。例示性RNA引導之切口酶包括Cas切口酶。Cas切口酶包括(但不限於) III型CRISPR系統之Csm或Cmr複合物之切口酶形式、其Cas10、Csm1或Cmr2亞單元、I型CRISPR系統之級聯複合物、其Cas3亞單元及2類Cas核酸酶。2類Cas切口酶包括HNH或RuvC催化結構域不活化之多肽，例如Cas9 (例如SpyCas9之H840A、D10A或N863A變異體或NmeCas9之D16A變異體)。腦膜炎奈瑟菌之HNH或HNH樣核酸酶結構域或RuvC或RuvC樣結構域中之例示性胺基酸取代包括Nme2Cas9D16A (HNH切口酶)及Nme2Cas9H588A (RuvC切口酶)。2類Cas切口酶包括例如Cas9 (例如SpyCas9之H840A、D10A或N863A變異體)、Cpf1、C2c1、C2c2、C2c3、HF Cas9 (例如N497A、R661A、Q695A、Q926A變異體)、HypaCas9 (例如N692A、M694A、Q695A、H698A變異體)、eSPCas9(1.0) (例如K810A、K1003A、R1060A變異體)及eSPCas9(1.1) (例如K848A、K1003A、R1060A變異體)蛋白質及其修飾形式。Cpf1蛋白(Zetsche等人， Cell, 163: 1-13 (2015))與Cas9同源，且含有RuvC樣蛋白質結構域。Zetsche之Cpf1序列係以整體引用的方式併入。例如，參見Zetsche，表S1及表S3。「Cas9」涵蓋釀膿鏈球菌(Spy) Cas9、本文所列示之Cas9變異體及其等效形式。例如，參見Makarova等人， Nat Rev Microbiol, 13(11): 722-36 (2015)；Shmakov等人， Molecular Cell,60:385-397 (2015)。
如本文所用，術語「融合蛋白」係指雜合多肽，其包含來自至少兩種不同蛋白質或來源之多肽。一種多肽可位於融合蛋白之胺基末端(N末端)部分或位於羧基末端(C末端)蛋白質，由此分別形成「胺基末端融合蛋白」或「羧基末端融合蛋白」。本文所提供之任何蛋白質均可藉由此項技術中已知之任何方法來產生。舉例而言，本文所提供之蛋白質可經由重組蛋白質表現及純化產生，其尤其適於包含肽連接體之融合蛋白。重組蛋白質之表現及純化方法係眾所周知的，且包括Green及Sambrook，Molecular Cloning: A Laboratory Manual (第4版，Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2012))中所闡述之彼等方法，該文獻之全部內容係以引用的方式併入本文中。
如本文所用，術語「連接體」係指連接兩個毗鄰分子或部分之化學基團或分子。通常，連接體定位在兩個基團、分子或其他部分之間，或位於其側翼，且經由共價鍵彼此連結。在一些實施例中，連接體為一個胺基酸或複數個胺基酸(例如肽或蛋白質)，諸如16-胺基酸殘基「XTEN」連接體或其變異體(例如，參見實例；及Schellenberger等人，A recombinant polypeptide extends the in vivo half-life of peptides and proteins in a tunable manner. Nat. Biotechnol. 27, 1186-1190 (2009))。在一些實施例中，XTEN連接體包含序列SGSETPGTSE SATPES (SEQ ID NO: 25)、SGSETPGTSESA (SEQ ID NO: 26)或SGSETPGTSE SATPEGGSGGS (SEQ ID NO: 27)。在一些實施例中，連接體包含選自SEQ ID NO: 25-39及72-133之一或多個序列。
如本文所用，術語「尿嘧啶糖苷酶抑制劑」、「尿嘧啶-DNA糖苷酶抑制劑」或「UGI」係指能夠抑制尿嘧啶-DNA糖苷酶(UDG)鹼基切除修復酶之蛋白質(例如UniPROT ID: P14739；SEQ ID NO: 15；SEQ ID NO: 24)。
如本文所用，術語「核定位信號」(NLS)或「核定位序列」係指誘導包含此等序列或連接至此等序列之分子轉運至真核細胞之細胞核中的胺基酸序列。核定位信號可形成待轉運分子之一部分。在一些實施例中，NLS可藉由共價鍵、氫鍵或離子相互作用與分子融合。在一些實施例中，NLS可經由連接體與分子融合。
如本文所用，基因之「開放閱讀框」或「ORF」係指由一系列密碼子組成之序列，該等密碼子指定該基因所編碼之蛋白質之胺基酸序列。ORF通常以起始密碼子(例如在DNA中為ATG或在RNA中為AUG)開始，且以終止密碼子(例如在DNA中為TAA、TAG或TGA，或在RNA中為UAA、UAG或UGA)結束。
「向導RNA」、「gRNA」及「向導」在本文中可互換使用，以指crRNA (亦稱為CRISPR RNA)，或crRNA與trRNA之組合(亦稱為tracrRNA)。crRNA與trRNA可締合為單一RNA分子(單一向導RNA，sgRNA)，或為兩個單獨的RNA分子(雙向導RNA，dgRNA)。「向導RNA」或「gRNA」係指每一類型。trRNA可為天然序列或與天然序列相比具有修飾或變化之trRNA序列。
如本文所用，「向導序列」或「向導區」或「靶向序列」或「間隔體」或「間隔體序列」及諸如此類係指gRNA內與靶序列互補之序列，且用於將gRNA引導至靶序列以藉由RNA引導之切口酶進行結合或修飾(例如裂解)。向導序列之長度可為20個核苷酸，例如在釀膿鏈球菌( Streptococcus pyogenes) (亦即Spy Cas9 (亦稱為SpCas9))及相關Cas9同系物/直向同源物之情形下。亦可使用較短或較長序列作為向導，例如長度為15、16、17、18、19、21、22、23、24或25個核苷酸。向導序列之長度可為20-25個核苷酸，例如在Nme Cas9之情形下，例如長度為20、21、22、23、24或25個核苷酸。舉例而言，長度為24個核苷酸之向導序列可與Nme Cas9 (例如Nme2 Cas9)一起使用。
在一些實施例中，靶序列位於例如基因體基因座中或在染色體上，且與向導序列互補。在一些實施例中，向導序列與其相應靶序列之間的互補性或一致性程度可為約75%、80%、85%、90%、95%或100%。在一些實施例中，向導序列與靶區可為100%互補或一致的。在其他實施例中，向導序列及靶區可含有至少一個錯配。舉例而言，向導序列及靶序列可含有1、2、3或4個錯配，其中靶序列之總長度為至少17、18、19、20或更多個鹼基對。在一些實施例中，向導序列及靶區可含有1-4個錯配，其中向導序列包含至少17、18、19、20或更多個核苷酸。在一些實施例中，向導序列及靶區可含有1、2、3或4個錯配，其中向導序列包含20個核苷酸。在一些實施例中，例如當向導序列包含24個鄰接核苷酸之序列時，向導序列與其相應靶序列之間的互補性或一致性程度為至少80%、85%、90%或95%。在一些實施例中，向導序列與靶區可為100%互補或一致的。在其他實施例中，向導序列及靶區可含有至少一個錯配，亦即一個核苷酸不一致或不互補，此取決於參考序列。舉例而言，向導序列及靶序列可含有1-2個、較佳不超過1個錯配，其中靶序列之總長度為19、20、21、22、23或24個或更多個核苷酸。在一些實施例中，向導序列及靶區可含有1-2個錯配，其中向導序列包含至少24個或更多個核苷酸。在一些實施例中，向導序列及靶區可含有1-2個錯配，其中向導序列包含24個核苷酸。
如本文所用，「靶序列」或「基因體靶序列」係指正股或負股中靶基因體基因座中之核酸序列，其與gRNA之向導序列具有互補性，亦即與gRNA之向導序列充分互補，以允許向導序列與靶序列特異性結合。靶序列與向導序列之相互作用引導RNA引導之DNA結合劑結合且潛在地切割或裂解(取決於該劑之活性)靶序列。靶序列之具體長度以及靶序列與向導序列之間可能的錯配數取決於例如由gRNA引導之Cas9核酸酶之屬性(identity)。Cas蛋白之靶序列包括基因體DNA之正股及負股二者(亦即給定序列及該序列之反向互補序列)，此乃因Cas蛋白之核酸受質為雙股核酸。因此，在向導序列稱為「與靶序列互補」之情形下，應理解，向導序列可引導RNA引導之DNA結合劑(例如dCas9或受損Cas9)結合至靶序列之反向互補序列。因此，在一些實施例中，在向導序列結合靶序列之反向互補序列之情形下，向導序列與靶序列(例如不包括PAM之靶序列)之某些核苷酸一致，唯在向導序列中使用U取代T。
如本文所用，若第一序列與第二序列之比對顯示整個第二序列中X%或更多之位置與第一序列匹配，則第一序列視為「包含與第二序列具有至少X%一致性之序列」。舉例而言，序列AAGA包含與序列AAG具有100%一致性之序列，此乃因由於與第二序列之所有三個位置均匹配，故比對將得到100%一致性。RNA與DNA之間的差異(通常將尿苷交換為胸苷，或反之亦然)及存在核苷類似物(諸如經修飾尿苷)並不在多核苷酸中造成一致性或互補性差異，只要相關核苷酸(諸如胸苷、尿苷或經修飾尿苷)具有相同的互補序列即可(例如對於所有胸苷、尿苷或經修飾尿苷均為腺苷；另一實例係胞嘧啶及5-甲基胞嘧啶，二者均使用鳥苷作為互補序列)。因此，舉例而言，序列5’-AXG (其中X為任何經修飾尿苷，諸如假尿苷、N1-甲基假尿苷或5-甲氧基尿苷)視為與AUG 100%一致，此乃因兩者均與同一序列(5’-CAU)完全互補。例示性比對算法係此項技術中所熟知之Smith-Waterman及Needleman-Wunsch算法。熟習此項技術者將理解何種算法及參數設置適用於欲比對之給定序列對；對於通常具有類似長度及預期一致性(對於胺基酸而言＞50%或對於核苷酸而言＞75%)之序列，由EBI在www.ebi.ac.uk網路伺服器上提供的具有Needleman-Wunsch算法介面之默認設置之Needleman-Wunsch算法通常係適當的。
「mRNA」在本文中用於指不為DNA且包含可轉譯成多肽之開放閱讀框(亦即可用作核糖體及胺基醯化tRNA之轉譯受質)之多核苷酸。mRNA可包含一或多種修飾，例如如下文所提供之修飾。一般而言，mRNA不含實質量之胸苷殘基(例如0個殘基或少於30、20、10、5、4、3或2個胸苷殘基；或小於10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、4%、3%、2%、1%、0.5%、0.2%或0.1%之胸苷含量)。mRNA可在其尿苷位置之一些或所有位置處含有經修飾尿苷。
「經修飾尿苷」在本文中用於指除胸苷外與尿苷具有相同氫鍵受體且與尿苷具有一或多種結構差異之核苷。在一些實施例中，經修飾尿苷為經取代尿苷，亦即一或多個非質子取代基(例如烷氧基，諸如甲氧基)代替質子之尿苷。在一些實施例中，經修飾尿苷為假尿苷。在一些實施例中，經修飾尿苷為經取代之假尿苷，亦即一或多個非質子取代基(例如烷基，諸如甲基)代替質子之假尿苷。在一些實施例中，經修飾尿苷為經取代尿苷、假尿苷或經取代之假尿苷中之任一者。
如本文所用之「尿苷位置」係指多核苷酸中由尿苷或經修飾尿苷佔據之位置。因此，舉例而言，「100%之尿苷位置為經修飾尿苷」之多核苷酸在相同序列之習用RNA (其中所有鹼基均為標準A、U、C或G鹼基)中的每個應為尿苷之位置處含有經修飾尿苷。除非另有指示，否則本揭示案中或伴隨本揭示案之序列表格或序列表之多核苷酸序列中之U可為尿苷或經修飾尿苷。
如本文所用，給定胺基酸之「最小尿苷密碼子」係具有最少尿苷之密碼子(通常為0或1，苯丙胺酸之密碼子除外，其最小尿苷密碼子具有2個尿苷)。出於評估尿苷含量之目的，將經修飾尿苷殘基視為等效於尿苷。
如本文所用，ORF之「尿苷二核苷酸(UU)含量」可在絕對意義上表示為ORF中之所列舉UU二核苷酸，或以比率計表示為由尿苷二核苷酸之尿苷所佔據位置之百分比(舉例而言，AUUAU具有40%之尿苷二核苷酸含量，此乃因5個位置中之2個由尿苷二核苷酸之尿苷佔據)。出於評估尿苷二核苷酸含量之目的，將經修飾尿苷殘基視為等效於尿苷。
如本文所用，給定胺基酸之「最小腺嘌呤密碼子」係具有最少腺嘌呤之密碼子(通常為0或1，離胺酸及天冬醯胺之密碼子除外，其最小腺嘌呤密碼子具有2個腺嘌呤)。出於評估腺嘌呤含量之目的，將經修飾之腺嘌呤殘基視為等效於腺嘌呤。
如本文所用，ORF之「腺嘌呤二核苷酸含量」可在絕對意義上表示為ORF中之所列舉AA二核苷酸，或以比率計表示為由腺嘌呤二核苷酸之腺嘌呤所佔據位置之百分比(舉例而言，UAAUA具有40%之腺嘌呤二核苷酸含量，此乃因5個位置中之2個由腺嘌呤二核苷酸之腺嘌呤佔據)。出於評估腺嘌呤二核苷酸含量之目的，將經修飾之腺嘌呤殘基視為等效於腺嘌呤。
如本文所用，術語「基因體基因座」當在由向導RNA靶向之基因體基因座之背景中使用時，包括基因體之一或多個部分，靶向其影響與該基因座相關之基因之表現。舉例而言，基因體基因座可包括基因之編碼序列、基因之內含子序列、調控序列、基因之轉錄控制序列、基因之轉譯控制序列、剪接位點或基因之間的非編碼序列(例如基因間空間)。
如本文所用，術語「接觸」係指提供至少一種組分，使得該組分物理接觸細胞，包括物理接觸細胞表面、胞質液及/或細胞核。使細胞與多肽「接觸」涵蓋例如使該細胞與編碼該多肽之核酸接觸且容許該細胞表現該多肽。
如本文所用，術語「同時」當在使細胞與至少兩種基因體編輯工具(例如組合物、多肽、核酸或其組合)接觸之背景中使用時，係指該細胞與該至少兩種基因體編輯工具中之一者之接觸距該細胞與該至少兩種基因體編輯工具中之另一者之接觸不超過48小時。在一些實施例中，細胞與至少兩種基因體編輯工具中之一者之接觸距細胞與至少兩種基因體編輯工具中之另一者之接觸不超過36小時。在一些實施例中，細胞與至少兩種基因體編輯工具中之一者之接觸距細胞與至少兩種基因體編輯工具中之另一者之接觸不超過24小時。在一些實施例中，細胞與至少兩種基因體編輯工具中之一者之接觸距細胞與至少兩種基因體編輯工具中之另一者之接觸不超過18小時。在一些實施例中，細胞與至少兩種基因體編輯工具中之一者之接觸距細胞與至少兩種基因體編輯工具中之另一者之接觸不超過12小時。在一些實施例中，細胞與至少兩種基因體編輯工具中之一者之接觸距細胞與至少兩種基因體編輯工具中之另一者之接觸不超過6小時。在一些實施例中，細胞與至少兩種基因體編輯工具中之一者之接觸距細胞與至少兩種基因體編輯工具中之另一者之接觸不超過4小時。在一些實施例中，細胞與至少兩種基因體編輯工具中之一者之接觸距細胞與至少兩種基因體編輯工具中之另一者之接觸不超過3小時。在一些實施例中，細胞與至少兩種基因體編輯工具中之一者之接觸距細胞與至少兩種基因體編輯工具中之另一者之接觸不超過2小時。在一些實施例中，細胞與至少兩種基因體編輯工具中之一者之接觸距細胞與至少兩種基因體編輯工具中之另一者之接觸不超過1小時。在一些實施例中，細胞與至少兩種基因體編輯工具中之一者之接觸距細胞與至少兩種基因體編輯工具中之另一者之接觸不超過30分鐘。在一些實施例中，細胞與至少兩種基因體編輯工具中之一者之接觸距細胞與至少兩種基因體編輯工具中之另一者之接觸不超過15分鐘。在一些實施例中，細胞與至少兩種基因體編輯工具中之一者之接觸距細胞與至少兩種基因體編輯工具中之另一者之接觸不超過10分鐘。在一些實施例中，細胞與至少兩種基因體編輯工具中之一者之接觸距細胞與至少兩種基因體編輯工具中之另一者之接觸不超過5分鐘。在一些實施例中，細胞與至少兩種基因體編輯工具中之一者之接觸與細胞與至少兩種基因體編輯工具中之另一者之接觸同時進行。在一些實施例中，該兩種基因體編輯工具在接觸細胞之前預混合。
如本文所用，「插入缺失」係指由多個核苷酸組成之插入或缺失突變，該等核苷酸在靶核酸中(例如在雙股斷裂(DSB)位點處)插入、缺失或插入並缺失。如本文所用，當插入缺失形成導致插入時，該插入係在DSB位點之隨機插入，且通常不由模板序列引導或基於模板序列。
如本文所用，「敲低」係指特定基因產物(例如蛋白質、mRNA或兩者)之表現減少。蛋白質之敲低可藉由偵測由組織或細胞群體分泌之蛋白質(例如在血清或細胞培養基中)或藉由偵測來自所關注組織或細胞群體之蛋白質之總細胞量來量測。量測mRNA敲低之方法係已知的，且包括對自所關注組織或細胞群體分離之mRNA進行測序。在一些實施例中，「敲低」可指特定基因產物之表現之一定損失，例如所轉錄mRNA之量有所降低或由細胞群體(包括活體內群體，諸如在組織中所發現之彼等群體)表現或分泌之蛋白質之量有所降低。
如本文所用，「敲除」係指特定蛋白質在細胞中之表現之損失。敲除可藉由偵測自組織或細胞群體分泌之蛋白質之量(例如在血清或細胞培養基中)或藉由偵測組織或細胞群體中之蛋白質之總細胞量來量測。在一些實施例中，本揭示案之方法「敲除」一或多種細胞(例如細胞群體，包括活體內群體，諸如在組織中所發現之彼等群體)中之靶蛋白。在一些實施例中，敲除並非形成靶蛋白之突變體(例如藉由插入缺失產生)，而是細胞中靶蛋白之表現完全喪失，亦即使表現降低至低於所用分析之偵測水準。
如本文所用，「包含經編輯細胞之細胞群體(cell population comprising edited cells或population of cells comprising edited cells)」或諸如此類係指包含經編輯細胞之細胞群體，然而並非群體中之所有細胞均必須經編輯。包含經編輯細胞之細胞群體亦可包括未經編輯之細胞。如藉由標準細胞計數方法所測定，包含經編輯細胞之細胞群體內的經編輯細胞之百分比可藉由對群體內的在群體中經編輯之細胞進行計數來測定。舉例而言，在一些實施例中，包含含有單一基因體編輯物之經編輯細胞之細胞群體中將有至少20%、30%、40%、較佳至少50%、60%、70%、80%、90%、95%或99%之群體中細胞具有單一編輯物。在一些實施例中，包含含有至少兩種基因體編輯物之經編輯細胞之細胞群體中將有至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或95%之群體中細胞有至少兩種基因體編輯物。
如本文所用，「β2M」或「B2M」係指「β-2微球蛋白」之核酸序列或蛋白質序列；人類基因具有登錄號NC_000015 (範圍44711492..44718877)，參考GRCh38.p13。B2M蛋白在有核細胞表面上與MHC I類分子締合為異二聚體，且為MHC I類蛋白質表現所必需。
如本文所用，「 CIITA」或「CIITA」或「C2TA」係指「II類主要組織相容性複合物反式活化蛋白」之核酸序列或蛋白質序列；人類基因具有登錄號NC_000016.10 (範圍10866208..10941562)，參考GRCh38.p13。細胞核中之CIITA蛋白作為MHC II類基因轉錄之正調控蛋白，且為MHC II類蛋白質表現所必需。
如本文所用，「MHC」或「MHC分子」或「MHC蛋白」或「MHC複合物」係指一或多種主要組織相容性複合物分子，且包括例如MHC I類及MHC II類分子。在人類中，MHC分子稱為「人類白血球抗原」複合物或「HLA分子」或「HLA蛋白」。術語「MHC」及「HLA」之使用並不意欲具有限制性；如本文所用，術語「MHC」可用於指人類MHC分子，亦即HLA分子。因此，術語「MHC」及「HLA」在本文中可互換使用。
如本文在HLA-A蛋白之背景中所用之術語「HLA-A」係指MHC I類蛋白質分子，其為由重鏈(由HLA-A基因編碼)及輕鏈(亦即β-2微球蛋白)組成之異二聚體。如本文在核酸之背景中所用之術語「HLA-A」或「HLA-A基因」係指編碼HLA-A蛋白分子之重鏈之基因。HLA-A基因亦稱為「HLA I類組織相容性，A α鏈」；人類基因具有登錄號NC_000006.12 (29942532..29945870)。已知HLA-A基因在群體中具有數千種不同的形式(亦稱為「等位基因」)(且個體可接受HLA-A基因之兩種不同等位基因)。HLA-A等位基因之公共資料庫(包括序列資訊)可在IPD-IMGT/HLA： https://www.ebi.ac.uk/ipd/imgt/hla/獲得。術語「HLA-A」及「HLA-A基因」涵蓋HLA-A之所有等位基因。
如本文在核酸之背景中所用之「HLA-B」係指編碼HLA-B蛋白分子之重鏈之基因。HLA-B亦稱為「HLA I類組織相容性，B α鏈」；人類基因具有登錄號NC_000006.12 (31353875..31357179)。
如本文在核酸之背景中所用之「HLA-C」係指編碼HLA-C蛋白分子之重鏈之基因。HLA-C亦稱為「HLA I類組織相容性，C α鏈」；人類基因具有登錄號NC_000006.12 (31268749..31272092)。
如本文在核酸之背景中所用之「TRBC1」及「TRBC2」係指編碼T細胞受體β-鏈之兩個同源基因。「TRBC」或「TRBC1/2」在本文中用於指TRBC1及TRBC2。人類野生型TRBC1序列可在NCBI Gene ID：28639；Ensembl：ENSG00000211751獲得。T細胞受體β恆定V_區段轉譯產物、BV05S1J2.2、TCRBC1及TCRB係TRBC1之基因同義詞。人類野生型TRBC2序列可在NCBI Gene ID：28638；Ensembl：ENSG00000211772獲得。T細胞受體β恆定V_區段轉譯產物及TCRBC2係TRBC2之基因同義詞。
「TRAC」用於指「T細胞受體α鏈」之核酸序列或胺基酸序列。人類野生型TRAC序列可在NCBI Gene ID：28755；Ensembl：ENSG00000277734獲得。T細胞受體α恆定、TCRA、IMD7、TRCA及TRA係TRAC之基因同義詞。
「TRBC」用於指「T細胞受體β-鏈」之核酸序列或胺基酸序列，例如TRBC1及TRBC2。「TRBC1」及「TRBC2」係指編碼T細胞受體β-鏈之兩個同源基因，其為TRBC1或TRBC2基因之基因產物。
人類野生型TRBC1序列可在NCBI Gene ID：28639；Ensembl：ENSG00000211751獲得。T細胞受體β恆定V_區段轉譯產物、BV05S1J2.2、TCRBC1及TCRB係TRBC1之基因同義詞。
人類野生型TRBC2序列可在NCBI Gene ID：28638；Ensembl：ENSG00000211772獲得。T細胞受體β恆定V_區段轉譯產物及TCRBC2係TRBC2之基因同義詞。
如本文所用，術語「同型合子」係指具有特定基因之兩個一致等位基因。
如本文所用，「治療」係指針對個體之疾病或病症進行任何投與或施加治療劑，且包括抑制疾病，阻止其發展，減輕疾病之一或多種症狀，治癒疾病或預防疾病之一或多種症狀、包括症狀之復發。
如本文所用，「遞送」及「投與」可互換使用，且包括離體及活體內施加。
如本文所用，共投與意指複數種物質在時間上足夠接近地一起投與，使得劑一起發揮作用。共投與涵蓋以單一調配物一起投與物質及以在時間上足夠接近的分開調配物投與物質，使得劑一起發揮作用。
如本文所用，片語「醫藥學上可接受」意指其可用於製備通常無毒且並非生物不期望之醫藥組合物且在其他方面不為醫藥應用所不可接受。醫藥學上可接受通常係指非熱原性物質。醫藥學上可接受可指無菌物質，尤其用於注射或輸注之醫藥物質。
如本文所用，「個體」係指動物界之任何成員。在一些實施例中，「個體」係指人類。在一些實施例中，「個體」係指非人類動物。在一些實施例中，「個體」係指靈長類動物。在一些實施例中，個體包括(但不限於)哺乳動物、鳥、爬行動物、兩棲動物、魚、昆蟲或蠕蟲。在某些實施例中，非人類個體為哺乳動物(例如齧齒類動物、小鼠、大鼠、兔、猴、狗、貓、綿羊、牛、靈長類動物或豬)。在一些實施例中，個體可為基因轉殖動物、遺傳工程化動物或純系。在本發明之某些實施例中，個體為成人、青少年或嬰兒。在一些實施例中，使用術語「個體(individual)」或「患者」，且意欲與「個體(subject)」可交換使用。
如本文所用，細胞上蛋白質之「減少或消除」之表現係指相對於未經修飾之細胞，蛋白質表現之部分或完全喪失。在一些實施例中，藉由流式細胞術量測細胞上蛋白質之表面表現，且如藉由用針對蛋白質之相同抗體染色時螢光信號之減少所證明，相對於未經修飾之細胞具有「減少或消除」之表面表現。藉由流式細胞術，相對於未經修飾之細胞具有「減少或消除」之蛋白質表面表現之細胞可稱為該蛋白質之表現呈「陰性」，如藉由類似於用同型對照抗體染色之細胞的螢光信號所證明。蛋白質表現之「減少或消除」可藉由本領域中之其他已知技術，利用熟習此項技術者已知之適當對照來量測。如本文所用，表現「消除」應理解為表現降低至藉由所用方法之蛋白質偵測水準以下。
術語「約」或「大約」意指如由熟習此項技術者所測定之特定值的可接受誤差(其部分地取決於該值之量測或測定方式)，或不實質上影響所闡述標的物之性質之變化程度(例如在10%、5%、2%或1%內或在一組值之兩個標準偏差內)。因此，除非指示相反情形，否則以下說明書及隨附申請專利範圍中所陳述之數值參數為近似值，該等近似值可端視所尋求獲得之期望性質而變化。最低限度地，且並非試圖限制申請專利範圍之等效項之準則的應用，每一數值參數應至少根據所報告有效數位之數值且藉由應用普通舍入技術來解釋。
現將詳細參考本發明之某些實施例，在附圖中圖解說明該等實施例之實例。儘管將結合所闡釋之實施例來闡述本發明，但應理解，該等實施例並不意欲將本發明限於彼等實施例。與之相反，本發明意欲涵蓋如隨附申請專利範圍及所包括之實施例所界定的可包括在本發明內之所有替代方案、修改及等效形式。
在詳細地闡述本發明教示內容之前，應理解，本揭示案並不限於具體組合物或製程步驟，此乃因此等要素可變化。應注意，除非上下文另外明確指示，否則如本說明書及隨附申請專利範圍中所用，單數形式「一(a、an)」及「該(the)」包括複數個指示物。因此，舉例而言，對「結合物」之提及包括複數種結合物，且對「細胞」之提及包括複數個細胞，及諸如此類。
數值範圍包括界定該範圍之數值。所量測及可量測值應理解為係近似值，其慮及有效數位及與量測相關之誤差。同樣，「包含(comprise、comprises、comprising)」、「含有(contain、contains、containing)」、「包括(include、includes及including)」之使用並不意欲具有限制性。應理解，前述一般說明及詳細說明二者均僅為例示性及解釋性的，且並不限制教示內容。
除非在本說明書中明確註明，否則亦將本說明書中列舉「包含」各種組分之實施例考慮為「由所列舉組分組成」或「基本上由所列舉組分組成」；亦將本說明書中列舉「由各種組分組成」之實施例考慮為「包含所列舉組分」或「基本上由所列舉組分組成」；且亦將本說明書中列舉「基本上由各種組分組成」之實施例考慮為「由所列舉組分組成」或「包含所列舉組分」(此可互換性並不適用於該等術語在申請專利範圍中之使用)。
除非上下文另外明確指示，否則術語「或」係以包括性含義使用，亦即等同於「及/或」。
本文所用之章節標題僅用於組織目的，而不應解釋為以任何方式限制期望標的物。倘若以引用方式併入之任何材料與本說明書中所定義之任何術語或本說明書之任何其他表現內容衝突，則以本說明書為準。儘管本發明教示內容結合各個實施例予以闡述，但並不意欲將本發明教示內容限於此等實施例。與之相反，如熟習此項技術者將瞭解，本發明教示內容涵蓋各種替代方案、修改及等效形式。 II. 第一基因體編輯工具
在一些實施例中，第一基因體編輯工具包含第一基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該第一基因體編輯器同源之向導RNA (gRNA)。在一些實施例中，第一基因體編輯工具包含含有鹼基編輯器之第一基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該鹼基編輯器同源之向導RNA (gRNA)。
在一些實施例中，第一基因體編輯器係作為至少一種多肽或至少一種mRNA遞送至細胞。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含至少一種多肽或至少一種mRNA。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含裂解酶、切口酶、無催化活性之核酸酶、鹼基編輯器、視情況C至T鹼基編輯器或A至G鹼基編輯器，或包含DNA聚合酶及切口酶之融合蛋白。
在一些實施例中，第一基因體編輯器包含Cas核酸酶。在一些實施例中，Cas核酸酶為Cas9。在一些實施例中，Cas9為釀膿鏈球菌Cas9 (SpyCas9)、金黃色葡萄球菌Cas9 (SauCas9)、白喉棒狀桿菌Cas9 (CdiCas9)、嗜熱鏈球菌Cas9 (St1Cas9)、解纖維素乙酸弧菌Cas9 (AceCas9)、空腸彎曲桿菌Cas9 (CjeCas9)、沼澤紅假單胞菌Cas9 (RpaCas9)、深紅紅螺菌Cas9 (RruCas9)、內氏放線菌Cas9 (AnaCas9)、新兇手弗朗西斯氏菌Cas9 (FnoCas9)或腦膜炎奈瑟菌(NmeCas9)。在一些實施例中，Cas9為Nme1Cas9、Nme2Cas9、Nme3Cas9或SpyCas9。在一些實施例中，Cas核酸酶為2類Cas核酸酶。在一些實施例中，Cas核酸酶為Cas12。在一些實施例中，Cas12為毛螺科菌( Lachnospiraceae bacterium) Cas12a (LbCas12a)或Cas12為胺基酸球菌屬( Acidaminococcus sp.) Cas12a (AsCas12a)。在一些實施例中，Cas核酸酶為惰性真桿菌( Eubacterium siraeum) Cas13d (EsCas13d)。
在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器包含胞苷去胺酶(例如A3A)。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器包含胞苷去胺酶(包括本文所揭示之胞苷去胺酶中之任一者，例如A3A)，及RNA引導之切口酶(包括本文所揭示之RNA引導之切口酶中之任一者)。在一些實施例中，鹼基編輯器為C至T鹼基編輯器，視情況包含胞苷去胺酶，或為A至G鹼基編輯器，視情況包含腺苷去胺酶。
在一些實施例中，第一基因體編輯工具可與本文所揭示之任何第二基因體編輯工具組合。 A.   UGI
在一些實施例中，第一基因體編輯工具包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)，且該UGI與鹼基編輯器包含在單一多肽中。在一些實施例中，第一基因體編輯工具包含UGI，且該UGI與鹼基編輯器包含在不同多肽中。在一些實施例中，鹼基編輯器包含胞苷去胺酶及RNA引導之切口酶。在一些實施例中，胞苷去胺酶、RNA引導之切口酶及UGI包含在單一多肽中。在一些實施例中，胞苷去胺酶、RNA引導之切口酶及UGI包含在不同多肽中。在一些實施例中，胞苷去胺酶與RNA引導之切口酶包含在單一多肽中，且其中UGI包含在不同多肽中。
不受任何理論束縛，提供UGI以及包含去胺酶之多肽可藉由抑制細胞DNA修復機構(例如UDG及下游修復效應子)而有助於本文所闡述之方法，該細胞DNA修復機構將DNA中之尿嘧啶識別為一種DNA損害形式或將切除或修飾尿嘧啶及/或周圍核苷酸。應理解，使用UGI可增加能夠使C殘基去胺基之酶的編輯效率。
本文提供適宜UGI蛋白質及核苷酸序列，且熟習此項技術者已知其他適宜UGI序列，且包括例如以下文獻中所公佈之彼等序列：Wang等人，Uracil-DNA glycosylase inhibitor gene of bacteriophage PBS2 encodes a binding protein specific for uracil-DNA glycosylase. J. Biol. Chem. 264: 1163-1171(1989)；Lundquist等人，Site-directed mutagenesis and characterization of uracil-DNA glycosylase inhibitor protein. Role of specific carboxylic amino acids in complex formation with Escherichia coli uracil-DNA glycosylase. J. Biol. Chem. 272:21408-21419(1997)；Ravishankar等人，X-ray analysis of a complex of Escherichia coli uracil DNA glycosylase (EcUDG) with a proteinaceous inhibitor. The structure elucidation of a prokaryotic UDG. Nucleic Acids Res. 26:4880-4887 (1998)；及Putnam等人，Protein mimicry of DNA from crystal structures of the uracil-DNA glycosylase inhibitor protein and its complex with Escherichia coli uracil-DNA glycosylase. J. Mol. Biol. 287:331-346(1999)，其各自之全部內容係以引用的方式併入本文中。應瞭解，能夠抑制尿嘧啶-DNA糖苷酶鹼基切除修復酶之任何蛋白質均在本揭示案之範圍內。另外，阻斷或抑制鹼基切除修復之任何蛋白質亦在本揭示案之範圍內。在一些實施例中，尿嘧啶糖苷酶抑制劑係結合尿嘧啶之蛋白質。在一些實施例中，尿嘧啶糖苷酶抑制劑係結合DNA中之尿嘧啶之蛋白質。在一些實施例中，尿嘧啶糖苷酶抑制劑係單股結合蛋白。在一些實施例中，尿嘧啶糖苷酶抑制劑係無催化活性之尿嘧啶DNA-糖苷酶蛋白。在一些實施例中，尿嘧啶糖苷酶抑制劑係不自DNA中切除尿嘧啶之無催化活性之尿嘧啶DNA-糖苷酶蛋白。在一些實施例中，尿嘧啶糖苷酶抑制劑係無催化活性之UDG。
在一些實施例中，本文所揭示之尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)包含與SEQ ID NO: 15或24具有至少80%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，前述一致性水準中之任一者為至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%。在一些實施例中，UGI包含與SEQ ID NO: 15或24具有至少90%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，UGI包含與SEQ ID NO: 15或24具有至少95%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，UGI包含與SEQ ID NO: 15或24具有至少98%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，UGI包含與SEQ ID NO: 15或24具有至少99%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，UGI包含SEQ ID NO: 15或24之胺基酸序列。 B. 胞苷去胺酶
胞苷去胺酶涵蓋胞苷去胺酶超家族中之酶，且特定而言，APOBEC家族之酶(APOBEC1、APOBEC2、APOBEC4及APOBEC3亞組之酶)、活化誘導之胞苷去胺酶(AID或AICDA)及CMP去胺酶(例如，參見Conticello等人，Mol. Biol. Evol. 22:367-77, 2005；Conticello, Genome Biol. 9:229, 2008；Muramatsu等人，J. Biol. Chem. 274: 18470-6, 1999)；及Carrington等人，Cells 9:1690 (2020))。
在一些實施例中，本文所揭示之胞苷去胺酶係APOBEC家族之酶。在一些實施例中，本文所揭示之胞苷去胺酶係APOBEC1、APOBEC2、APOBEC4及APOBEC3亞組之酶。在一些實施例中，本文所揭示之胞苷去胺酶係APOBEC3亞組之酶。在一些實施例中，本文所揭示之胞苷去胺酶係APOBEC3A去胺酶(A3A)。
在一些實施例中，胞苷去胺酶係包含與SEQ ID NO: 22具有至少80%、85% 87%、90%、95%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列之胞苷去胺酶。 1.    APOBEC3A 去胺酶
在一些實施例中，本文所揭示之APOBEC3A去胺酶(A3A)係人類A3A。在一些實施例中，A3A係野生型A3A。
在一些實施例中，A3A係A3A變異體。A3A變異體與野生型A3A或其片段共有同源性。在一些實施例中，A3A變異體與野生型A3A具有至少約80%一致性、至少約85%一致性、至少約90%一致性、至少約95%一致性、至少約96%一致性、至少約97%一致性、至少約98%一致性、至少約99%一致性、至少約99.5%一致性或至少約99.9%一致性。在一些實施例中，與野生型A3A相比，A3A變異體可具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、21、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50或更多個胺基酸變化。在一些實施例中，A3A變異體包含A3A之片段，使得該片段與野生型A3A之相應片段具有至少約80%一致性、至少約90%一致性、至少約95%一致性、至少約96%一致性、至少約97%一致性、至少約98%一致性、至少約99%一致性、至少約99.5%一致性或至少約99.9%一致性。
在一些實施例中，A3A變異體係具有因一個或若干個突變(諸如取代、缺失、插入、一個或若干個單點取代)而與野生型A3A蛋白不同之序列的蛋白質。在一些實施例中，可使用縮短之A3A序列，例如藉由缺失N末端、C末端或內部胺基酸。在一些實施例中，使用縮短之A3A序列，其中在序列C末端之一至四個胺基酸缺失。在一些實施例中，APOBEC3A (諸如人類APOBEC3A)具有57位野生型胺基酸(如野生型序列中所編號)。在一些實施例中，APOBEC3A (諸如人類APOBEC3A)在57位胺基酸處具有天冬醯胺(如野生型序列中所編號)。
在一些實施例中，野生型A3A係人類A3A (UniPROT登錄ID：p319411，SEQ ID NO: 22)。
在一些實施例中，本文所揭示之A3A包含與SEQ ID NO: 22具有至少80%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，一致性水準為至少85%、至少87%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%。在一些實施例中，A3A包含與SEQ ID NO: 22具有至少87%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，A3A包含與SEQ ID NO: 22具有至少90%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，A3A包含與SEQ ID NO: 22具有至少95%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，A3A包含與SEQ ID NO: 22具有至少98%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，A3A包含與A3A SEQ ID NO: 22具有至少99%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，A3A包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列。 C. 連接體
在一些實施例中，本文所闡述之第一基因體編輯器或鹼基編輯器進一步包含連結去胺酶與RNA引導之切口酶的連接體。在一些實施例中，連接體為有機分子、聚合物或化學部分。在一些實施例中，連接體為肽連接體。在一些實施例中，編碼包含去胺酶及RNA引導之切口酶之多肽的核酸進一步包含編碼肽連接體之序列。提供編碼去胺酶-連接體-RNA引導之切口酶融合蛋白之mRNA。
在一些實施例中，肽連接體係具有至少1、至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10、至少15、至少20、至少25、至少30、至少40、至少50或更多個胺基酸之任何胺基酸區段。
在一些實施例中，肽連接體係16殘基「XTEN」連接體或其變異體(例如，參見Schellenberger等人，A recombinant polypeptide extends the in vivo half-life of peptides and proteins in a tunable manner. Nat. Biotechnol. 27, 1186-1190 (2009))。在一些實施例中，XTEN連接體包含以下中之任一者之序列：SGSETPGTSESATPES (SEQ ID NO: 25)、SGSETPGTSESA (SEQ ID NO: 26)或SGSETPGTSESATPEGGSGGS (SEQ ID NO: 27)。在一些實施例中，XTEN連接體由序列SGSETPGTSESATPES (SEQ ID NO: 25)、SGSETPGTSESA (SEQ ID NO: 26)或SGSETPGTSESATPEGGSGGS (SEQ ID NO: 27)組成。
在一些實施例中，肽連接體包含(GGGGS) n(例如SEQ ID NO: 73、77、82、101)、(G) n、(EAAAK) n(例如SEQ ID NO: 74、80、128)、(GGS) n、SGSETPGTSESATPES (SEQ ID NO: 25)模體(例如，參見Guilinger J P, Thompson D B, Liu D R. Fusion of catalytically inactive Cas9 to FokI nuclease improves the specificity of genome modification. Nat. Biotechnol.2014; 32(6): 577-82；全部內容係以引用的方式併入本文中)或(XP) n模體(SEQ ID NO: 407)，或該等序列中任一者之組合，其中n獨立地為介於1與30之間的整數。參見WO2015089406，例如段落[0012]，其全部內容係以引用的方式併入本文中。
在一些實施例中，肽連接體包含選自SEQ ID NO: 25-39及72-133之一或多個序列。在一些實施例中，肽連接體包含選自以下之一或多個序列：SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 131、SEQ ID NO: 132及SEQ ID NO: 133。在一些實施例中，肽連接體包含SEQ ID NO: 129之序列。 D.   RNA 引導之切口酶
在一些實施例中，本文所揭示之RNA引導之切口酶係Cas切口酶。在一些實施例中，RNA引導之切口酶來自特定Cas核酸酶，其中其催化結構域不活化。在一些實施例中，RNA引導之切口酶係2類Cas切口酶，諸如Cas9切口酶或Cpf1切口酶。在一些實施例中，RNA引導之切口酶係釀膿鏈球菌Cas9切口酶。在一些實施例中，RNA引導之切口酶係腦膜炎雙球菌( Neisseria meningitidis) Cas9切口酶。
在一些實施例中，RNA引導之切口酶係經修飾之2類Cas蛋白或源自2類Cas蛋白。在一些實施例中，RNA引導之切口酶係經修飾之Cas蛋白或源自Cas蛋白，諸如2類Cas核酸酶(其可為例如II型、V型或VI型Cas核酸酶)。2類Cas核酸酶包括例如Cas9、Cpf1 (Cas12a)、C2c1、C2c2及C2c3蛋白質及其修飾形式。Cas9核酸酶之實例包括釀膿鏈球菌、金黃色葡萄球菌及其他原核生物之II型CRISPR系統之彼等Cas9核酸酶(例如，參見下一段落中之列表)，及其經修飾(例如工程化或突變體)形式。例如，參見US2016/0312198 A1；US 2016/0312199 A1，其係以全文引用的方式併入。Cas核酸酶之其他實例包括III型CRISPR系統之Csm或Cmr複合物或其Cas10、Csm1或Cmr2亞單元；及I型CRISPR系統之級聯複合物，或其Cas3亞單元。在一些實施例中，Cas核酸酶可來自IIA型、IIB型或IIC型系統。關於各種CRISPR系統及Cas核酸酶之論述，參見例如Makarova等人，Nat. Rev. Microbiol. 9:467-477 (2011)；Makarova等人，Nat. Rev. Microbiol, 13: 722-36 (2015)；Shmakov等人，Molecular Cell ,60:385-397 (2015)。
本文所闡述之Cas切口酶可為Cas核酸酶之切口酶形式，其來自包括(但不限於)以下物種：釀膿鏈球菌、嗜熱鏈球菌、鏈球菌屬(Streptococcus sp.)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、無害李斯特氏菌(Listeria innocua)、加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)、新兇手弗朗西斯氏菌、產琥珀酸沃林氏菌(Wolinella succinogene)、華德薩特菌(Sutterella wadsworthensis)、γ變形菌(Gammaproteobacterium)、腦膜炎雙球菌、空腸彎曲菌(Campylobacter jejuni)、多殺巴斯德氏菌(Pasteurella multocida)、產琥珀酸絲狀桿菌(Fibrobacter succinogene)、深紅紅螺菌(Rhodospirillum rubrum)、達松維爾擬諾卡氏菌(Nocardiopsis dassonvillei)、始旋鏈黴菌(Streptomyces pristinaespiralis)、綠色產色鏈黴菌(Streptomyces viridochromogene)、綠色產色鏈黴菌、玫瑰鏈孢囊菌(Streptosporangium roseum)、玫瑰鏈孢囊菌、酸熱脂環酸芽胞桿菌(Alicyclobacillus acidocaldarius)、假真菌樣芽孢桿菌(Bacillus pseudomycoides)、還原硒酸鹽芽孢桿菌(Bacillus selenitireducens)、西伯利亞微小桿菌(Exiguobacterium sibiricum)、戴白氏乳桿菌(Lactobacillus delbrueckii)、唾液乳桿菌(Lactobacillus salivarius)、布氏乳桿菌(Lactobacillus buchneri)、齒垢密螺旋體(Treponema denticola)、海洋微顫菌(Microscilla marina)、伯克霍爾德氏菌(Burkholderiales bacterium)、食萘極單胞菌(Polaromonas naphthalenivorans)、極胞菌屬(Polaromonas sp.)、海洋固氮藍藻(Crocosphaera watsonii)、藍桿藻屬(Cyanothece sp.)、銅綠微囊藻(Microcystis aeruginosa)、聚球藻屬(Synechococcus sp.)、阿拉伯糖醋鹽桿菌(Acetohalobium arabaticum)、丹氏製胺菌(Ammonifex degensii)、熱角軍纖維素菌(Caldicelulosiruptor becscii)、礦菌(Candidatus Desulforudis)、肉毒梭狀芽孢桿菌(Clostridium botulinum)、難養芽胞梭菌(Clostridium difficile)、大芬戈爾德菌(Finegoldia magna)、嗜熱鹽鹼厭氧菌(Natranaerobius thermophilus)、嗜熱丙酸降解發酵菌(Pelotomaculum thermopropionicum)、嗜酸性喜溫硫桿菌(Acidithiobacillus caldus)、嗜酸性氧化亞鐵硫桿菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)、酒色別樣著色菌(Allochromatium vinosum)、海桿菌屬(Marinobacter sp.)、嗜鹽亞消化球菌(Nitrosococcus halophilus)、亞硝化球菌(Nitrosococcus watsoni)、假交替單胞菌(Pseudoalteromonas haloplanktis)、消旋纖線桿菌(Ktedonobacter racemifer)、甲烷鹽菌(Methanohalobium evestigatum)、魚腥藻(Anabaena variabilis)、泡沫節球藻(Nodularia spumigena)、念珠藻屬(Nostoc sp.)、極大螺旋藻(Arthrospira maxima)、鈍頂螺旋藻(Arthrospira platensis)、螺旋藻屬(Arthrospira sp.)、林氏藻屬(Lyngbya sp.)、原型微鞘藻(Microcoleus chthonoplastes)、顫藻屬(Oscillatoria sp.)、石袍藻(Petrotoga mobilis)、非洲棲熱腔菌(Thermosipho africanus)、巴氏鏈球菌(Streptococcus pasteurianus)、灰色奈瑟球菌(Neisseria cinerea)、紅嘴鷗彎曲桿菌(Campylobacter lari)、食清潔劑細小棒菌(Parvibaculum lavamentivorans)、白喉棒狀桿菌(Corynebacterium diphtheria)、胺基酸球菌屬、毛螺科菌ND2006或藻青菌(Acaryochloris marina)。
在一些實施例中，Cas切口酶係來自釀膿鏈球菌之Cas9核酸酶之切口酶形式。在一些實施例中，Cas切口酶係來自嗜熱鏈球菌之Cas9核酸酶之切口酶形式。在一些實施例中，Cas切口酶係來自腦膜炎雙球菌之Cas9核酸酶之切口酶形式。例如，參見WO/2020081568，其闡述Nme2Cas9 D16A切口酶。在一些實施例中，Cas切口酶係來自金黃色葡萄球菌之Cas9核酸酶之切口酶形式。在一些實施例中，Cas切口酶係來自新兇手弗朗西斯氏菌之Cpf1核酸酶之切口酶形式。在一些實施例中，Cas切口酶係來自胺基酸球菌屬之Cpf1核酸酶之切口酶形式。在一些實施例中，Cas切口酶係來自毛螺科菌ND2006之Cpf1核酸酶之切口酶形式。在其他實施例中，Cas切口酶係來自以下物種之Cpf1核酸酶之切口酶形式：土倫病弗朗西斯氏菌( Francisella tularensis)、毛螺科菌、解蛋白丁酸弧菌( Butyrivibrio proteoclasticus)、佩萊格里尼菌科細菌( Peregrinibacteria bacterium)、帕庫菌科細菌( Parcubacteria bacterium)、史密斯氏菌( Smithella)、胺基酸球菌( Acidaminococcus)、候選白蟻甲烷枝原體( Candidatus Methanoplasma termitum)、挑剔真桿菌( Eubacterium eligens)、牛眼莫拉氏菌( Moraxella bovoculi)、稻田鉤端螺旋體( Leptospira inadai)、狗口腔卟啉單胞菌( Porphyromonas crevioricanis)、解糖腖普雷沃菌( Prevotella disiens)或獼猴卟啉單胞菌( Porphyromonas macacae)。在某些實施例中，Cas切口酶係來自胺基酸球菌或毛螺菌科( Lachnospiraceae)之Cpf1核酸酶之切口酶形式。如在別處所論述，切口酶可源自(亦即與之相關)特定Cas核酸酶，此乃因切口酶係核酸酶之一種形式，其中其兩個催化結構域中之一者不活化，例如藉由使核溶解所必需之活性位點殘基(諸如Spy Cas9中之D10、H840或N863)突變。熟習此項技術者將熟悉用於容易地鑑別其他Cas蛋白中之相應殘基之技術，諸如序列比對及結構比對，其在下文中予以詳細論述。
在其他實施例中，Cas切口酶可與I型CRISPR/Cas系統有關。在一些實施例中，Cas切口酶可為I型CRISPR/Cas系統之級聯複合物之組分。在一些實施例中，Cas切口酶可為Cas3蛋白。在一些實施例中，Cas切口酶可來自III型CRISPR/Cas系統。
在一些實施例中，Cas切口酶係Cas核酸酶或經修飾之Cas核酸酶之切口酶形式，其中核酸內切活性位點(例如)因催化結構域中之一或多個改變(例如點突變)而不活化。關於Cas切口酶及例示性催化結構域改變之論述，參見例如美國專利第8,889,356號。
野生型釀膿鏈球菌Cas9具有兩個催化結構域：RuvC及HNH。RuvC結構域裂解非靶DNA股，且HNH結構域裂解靶DNA股。在一些實施例中，Cas核酸酶可包含RuvC或RuvC樣核酸酶結構域中之胺基酸取代。RuvC或RuvC樣核酸酶結構域中之例示性胺基酸取代包括D10A (基於釀膿鏈球菌Cas9蛋白)。例如，參見Zetsche等人(2015) Cell10月 22:163(3): 759-771。在一些實施例中，Cas核酸酶可包含HNH或HNH樣核酸酶結構域中之胺基酸取代。HNH或HNH樣核酸酶結構域中之例示性胺基酸取代包括E762A、H840A、N863A、H983A及D986A (基於釀膿鏈球菌Cas9蛋白)。例如，參見Zetsche等人(2015)。HNH或HNH樣核酸酶結構域或腦膜炎奈瑟菌之RuvC或RuvC樣結構域中之例示性胺基酸取代包括Nme2Cas9D16A (HNH切口酶)及Nme2Cas9H588A (RuvC切口酶)。其他例示性胺基酸取代包括D917A、E1006A及D1255A (基於新兇手弗朗西斯氏菌U112 Cpf1 (FnCpf1)序列(UniProtKB - A0Q7Q2 (CPF1_FRATN))。
在一些實施例中，Cas切口酶(諸如Cas9切口酶)具有不活化之RuvC或HNH結構域。在一些實施例中，使用具有活性降低之RuvC結構域之切口酶。在一些實施例中，使用具有無活性RuvC結構域之切口酶。在一些實施例中，使用具有活性降低之HNH結構域之切口酶。在一些實施例中，使用具有無活性HNH結構域之切口酶。
在一些實施例中，Cas9切口酶具有活性HNH核酸酶結構域且能夠裂解DNA之非靶向股，亦即由gRNA結合之股，且具有無活性RuvC核酸酶結構域且不能裂解DNA之靶向股，亦即期望藉由去胺酶進行鹼基編輯之股。
例示性Cas9切口酶胺基酸序列係作為SEQ ID NO: 41提供。適於包括在融合蛋白中之例示性Cas9切口酶mRNA編碼序列係作為SEQ ID NO: 42提供。
在一些實施例中，RNA引導之切口酶係本文所闡述之2類Cas切口酶。在一些實施例中，RNA引導之切口酶係本文所闡述之Cas9切口酶。
在一些實施例中，RNA引導之切口酶係本文所闡述之釀膿鏈球菌Cas9切口酶。
在一些實施例中，RNA引導之切口酶係本文所闡述之D10A SpyCas9切口酶。在一些實施例中，RNA引導之切口酶包含與SEQ ID NO: 41、43或45中之任一者具有至少80%、90%、95%、98%或99%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，RNA引導之切口酶包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列。
在一些實施例中，編碼多肽之核酸或第一ORF包含與SEQ ID NO: 42、44或46中之任一者之核苷酸序列具有至少80%、90%、95%、98%、99%或100%一致性之核苷酸序列。在一些實施例中，編碼多肽之核酸或第一ORF包含與SEQ ID NO: 42、44及46-58中之任一者之核苷酸序列具有至少80%、90%、95%、98%、99%或100%一致性之核苷酸序列。在一些實施例中，一致性水準為至少90%。在一些實施例中，一致性水準為至少95%。在一些實施例中，一致性水準為至少98%。在一些實施例中，一致性水準為至少99%。在一些實施例中，一致性水準為至少100%。在一些實施例中，編碼RNA引導之切口酶之序列包含SEQ ID NO: 42、44及46中之任一者之核苷酸序列。
在一些實施例中，RNA引導之切口酶係本文所闡述之腦膜炎雙球菌(Nme) Cas9切口酶。
在一些實施例中，RNA引導之切口酶係本文所闡述之D16A NmeCas9切口酶。在一些實施例中，D16A NmeCas9切口酶係D16A Nme2Cas9切口酶。在一些實施例中，D16A Nme2Cas9切口酶包含與SEQ ID NO: 149至少80%、90%、95%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，編碼D16A Nme2Cas9之序列包含與SEQ ID NO: 150-155中之任一者至少80%、90%、95%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列。 E. 包含胞苷去胺酶及 RNA 引導之切口酶之組合物
在一些實施例中，第一基因體編輯工具包含第一基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該第一基因體編輯器同源之向導RNA (gRNA)。在一些實施例中，第一基因體編輯工具包含含有鹼基編輯器之第一基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該鹼基編輯器同源之向導RNA (gRNA)。
在一些實施例中，第一基因體編輯工具包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)，且該UGI與鹼基編輯器包含在單一多肽中。在一些實施例中，第一基因體編輯工具包含UGI，且該UGI與鹼基編輯器包含在不同多肽中。在一些實施例中，鹼基編輯器包含胞苷去胺酶及RNA引導之切口酶。在一些實施例中，胞苷去胺酶、RNA引導之切口酶及UGI包含在單一多肽中。在一些實施例中，胞苷去胺酶、RNA引導之切口酶及UGI包含在不同多肽中。在一些實施例中，胞苷去胺酶與RNA引導之切口酶包含在單一多肽中，且其中UGI包含在不同多肽中。 1. 例示性組合物
在一些實施例中，提供第一基因體編輯器(例如鹼基編輯器)，其包含去胺酶(例如胞苷去胺酶)及RNA引導之切口酶。在一些實施例中，提供APOBEC家族之酶及RNA引導之切口酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC1亞組之酶及RNA引導之切口酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC2亞組之酶及RNA引導之切口酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC4亞組之酶及RNA引導之切口酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC3亞組之酶及RNA引導之切口酶。
在一些實施例中，提供第一基因體編輯器或鹼基編輯器，其包含去胺酶(例如胞苷去胺酶)及RNA引導之切口酶。在一些實施例中，提供APOBEC家族之酶及D10A SpyCas9切口酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC1亞組之酶及D10A SpyCas9切口酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC2亞組之酶及D10A SpyCas9切口酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC4亞組之酶及D10A SpyCas9切口酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC3亞組之酶及D10A SpyCas9切口酶。
在一些實施例中，提供第一基因體編輯器或鹼基編輯器，其包含去胺酶(例如胞苷去胺酶)及RNA引導之切口酶。在一些實施例中，提供APOBEC家族之酶及D16A NmeCas9切口酶。在一些實施例中，提供APOBEC家族之酶及D16A Nme2Cas9切口酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC1亞組之酶及D16A Nme2Cas9切口酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC2亞組之酶及D16A Nme2Cas9切口酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC4亞組之酶及D16A Nme2Cas9切口酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC3亞組之酶及D16A Nme2Cas9切口酶。
在一些實施例中，第一基因體編輯器缺少UGI。在一些實施例中，第一基因體編輯器含有一或多種UGI。
在一些實施例中，胞苷去胺酶與RNA引導之切口酶經由連接體連接。在一些實施例中，胞苷去胺酶與RNA引導之切口酶經由肽連接體連接。在一些實施例中，肽連接體包含選自SEQ ID NO: 25-39及72-133之一或多個序列。
在一些實施例中，第一基因體編輯器進一步包含一或多個額外異源性功能結構域。在一些實施例中，第一基因體編輯器進一步包含位於多肽C末端或多肽N末端之一或多個核定位序列(NLS) (本文所闡述)。
在一些實施例中，提供第一基因體編輯器或鹼基編輯器，其包含去胺酶(例如胞苷去胺酶)及RNA引導之切口酶。在一些實施例中，提供APOBEC家族之酶及RNA引導之切口酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC1亞組之酶及RNA引導之切口酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC2亞組之酶及RNA引導之切口酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC4亞組之酶及RNA引導之切口酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC3亞組之酶及RNA引導之切口酶。
在一些實施例中，提供第一基因體編輯器或鹼基編輯器，其包含去胺酶(例如胞苷去胺酶)及RNA引導之切口酶。在一些實施例中，APOBEC家族之酶及D10A SpyCas9切口酶，其中該APOBEC家族之酶與該D10A SpyCas9切口酶經由連接體融合。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC家族之酶及D10A SpyCas9切口酶，以及位於融合多肽C末端之核定位序列(NLS)。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC家族之酶及D10A SpyCas9切口酶，以及位於融合多肽N末端之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC家族之酶及D10A SpyCas9切口酶，其中該APOBEC家族之酶與該D10A SpyCas9切口酶經由連接體融合，以及視情況經由連接體與該D10A SpyCas9切口酶之C末端融合之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC家族之酶及D10A SpyCas9切口酶，其中該APOBEC家族之酶與該D10A SpyCas9切口酶經由連接體融合，以及視情況經由連接體與該D10A SpyCas9切口酶之C末端融合之NLS。
在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC家族之酶及D16A NmeCas9切口酶，其中該APOBEC家族之酶與該D16A NmeCas9切口酶經由連接體融合。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC家族之酶及D16A Nme2Cas9切口酶，其中該APOBEC家族之酶與該D16A Nme2Cas9切口酶經由連接體融合。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC家族之酶及D16A Nme2Cas9切口酶，以及位於融合多肽C末端之核定位序列(NLS)。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC家族之酶及D16A Nme2Cas9切口酶，以及位於融合多肽N末端之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC家族之酶及D16A Nme2Cas9切口酶，其中該APOBEC家族之酶與該D16A Nme2Cas9切口酶經由連接體融合，以及視情況經由連接體與該D16A Nme2Cas9切口酶之C末端融合之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC家族之酶及D16A Nme2Cas9切口酶，其中該APOBEC家族之酶與該D16A Nme2Cas9切口酶經由連接體融合，以及視情況經由連接體與該D16A Nme2Cas9切口酶之C末端融合之NLS。
在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC1亞組之酶及D10A SpyCas9切口酶，其中該APOBEC1亞組之酶與該D10A SpyCas9切口酶經由連接體融合。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC1亞組之酶及D10A SpyCas9切口酶，以及位於融合多肽C末端之核定位序列(NLS)。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC1亞組之酶及D10A SpyCas9切口酶，以及位於融合多肽N末端之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC1亞組之酶及D10A SpyCas9切口酶，其中該APOBEC1亞組之酶與該D10A SpyCas9切口酶經由連接體融合，以及視情況經由連接體與該D10A SpyCas9切口酶之C末端融合之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC1亞組之酶及D10A SpyCas9切口酶，其中該APOBEC1亞組之酶與該D10A SpyCas9切口酶經由連接體融合，以及視情況經由連接體與該D10A SpyCas9切口酶之C末端融合之NLS。
在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC1亞組之酶及D16A Nme2Cas9切口酶，其中該APOBEC1亞組之酶與該D16A Nme2Cas9切口酶經由連接體融合。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC1亞組之酶及D16A Nme2Cas9切口酶，其中該APOBEC1亞組之酶與該D16A Nme2Cas9切口酶經由連接體融合。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC1亞組之酶及D16A Nme2Cas9切口酶，以及位於融合多肽C末端之核定位序列(NLS)。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC1亞組之酶及D16A Nme2Cas9切口酶，以及位於融合多肽N末端之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC1亞組之酶及D16A Nme2Cas9切口酶，其中該APOBEC1亞組之酶與該D16A Nme2Cas9切口酶經由連接體融合，以及視情況經由連接體與該D16A Nme2Cas9切口酶之C末端融合之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC1亞組之酶及D16A Nme2Cas9切口酶，其中該APOBEC1亞組之酶與該D16A Nme2Cas9切口酶經由連接體融合，以及視情況經由連接體與該D16A Nme2Cas9切口酶之C末端融合之NLS。
在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC3亞組之酶及D10A SpyCas9切口酶，其中該APOBEC3亞組之酶與該D10A SpyCas9切口酶經由連接體融合。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC3亞組之酶及D10A SpyCas9切口酶，以及位於融合多肽C末端之核定位序列(NLS)。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC3亞組之酶及D10A SpyCas9切口酶，以及位於融合多肽N末端之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC3亞組之酶及D10A SpyCas9切口酶，其中該APOBEC3亞組之酶與該D10A SpyCas9切口酶經由連接體融合，以及視情況經由連接體與該D10A SpyCas9切口酶之C末端融合之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC3亞組之酶及D10A SpyCas9切口酶，其中該APOBEC3亞組之酶與該D10A SpyCas9切口酶經由連接體融合，以及視情況經由連接體與該D10A SpyCas9切口酶之C末端融合之NLS。
在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC3亞組之酶及D16A Nme2Cas9切口酶，其中該APOBEC3亞組之酶與該D16A Nme2Cas9切口酶經由連接體融合。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC3亞組之酶及D16A Nme2Cas9切口酶，其中該APOBEC3亞組之酶與該D16A Nme2Cas9切口酶經由連接體融合。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC3亞組之酶及D16A Nme2Cas9切口酶，以及位於融合多肽C末端之核定位序列(NLS)。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC3亞組之酶及D16A Nme2Cas9切口酶，以及位於融合多肽N末端之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC3亞組之酶及D16A Nme2Cas9切口酶，其中該APOBEC3亞組之酶與該D16A Nme2Cas9切口酶經由連接體融合，以及視情況經由連接體與該D16A Nme2Cas9切口酶之C末端融合之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含APOBEC3亞組之酶及D16A Nme2Cas9切口酶，其中該APOBEC3亞組之酶與該D16A Nme2Cas9切口酶經由連接體融合，以及視情況經由連接體與該D16A Nme2Cas9切口酶之C末端融合之NLS。
在一些實施例中，第一基因體編輯器包含D10A SpyCas9切口酶、包含SEQ ID NO: 129之胺基酸序列之連接體及包含與SEQ ID NO: 22至少85%一致之胺基酸序列之胞苷去胺酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含D10A SpyCas9切口酶、包含SEQ ID NO: 130之胺基酸序列之連接體及包含與SEQ ID NO: 22至少85%一致之胺基酸序列之胞苷去胺酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含D10A SpyCas9切口酶、包含SEQ ID NO: 131之胺基酸序列之連接體及包含與SEQ ID NO: 22至少85%一致之胺基酸序列之胞苷去胺酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含D10A SpyCas9切口酶、包含SEQ ID NO: 132之胺基酸序列之連接體及包含與SEQ ID NO: 22至少85%一致之胺基酸序列之胞苷去胺酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含D10A SpyCas9切口酶、包含SEQ ID NO: 133之胺基酸序列之連接體及包含與SEQ ID NO: 22至少85%一致之胺基酸序列之胞苷去胺酶。在任一前述實施例中，D10A SpyCas9切口酶可包含與SEQ ID NO: 41、43及45中之任一者至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。
在一些實施例中，第一基因體編輯器包含D16A Nme2Cas9切口酶、包含SEQ ID NO: 129之胺基酸序列之連接體及包含與SEQ ID NO: 22至少85%一致之胺基酸序列之胞苷去胺酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含D16A Nme2Cas9切口酶、包含SEQ ID NO: 130之胺基酸序列之連接體及包含與SEQ ID NO: 22至少85%一致之胺基酸序列之胞苷去胺酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含D16A Nme2Cas9切口酶、包含SEQ ID NO: 131之胺基酸序列之連接體及包含與SEQ ID NO: 22至少85%一致之胺基酸序列之胞苷去胺酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含D16A Nme2Cas9切口酶、包含SEQ ID NO: 132之胺基酸序列之連接體及包含與SEQ ID NO: 22至少85%一致之胺基酸序列之胞苷去胺酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含D16A Nme2Cas9切口酶、包含SEQ ID NO: 133之胺基酸序列之連接體及包含與SEQ ID NO: 22至少85%一致之胺基酸序列之胞苷去胺酶。在任一前述實施例中，D16A Nme2Cas9切口酶可包含與SEQ ID NO: 149至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。
在一些實施例中，第一基因體編輯器包含D10A SpyCas9切口酶、包含SEQ ID NO: 129之胺基酸序列之連接體及包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之胞苷去胺酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含D10A SpyCas9切口酶、包含SEQ ID NO: 130之胺基酸序列之連接體及包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之胞苷去胺酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含D10A SpyCas9切口酶、包含SEQ ID NO: 131之胺基酸序列之連接體及包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之胞苷去胺酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含D10A SpyCas9切口酶、包含SEQ ID NO: 132之胺基酸序列之連接體及包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之胞苷去胺酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含D10A SpyCas9切口酶、包含SEQ ID NO: 133之胺基酸序列之連接體及包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之胞苷去胺酶。在任一前述實施例中，D10A SpyCas9包含與SEQ ID NO: 41、43及45中之任一者至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。
在一些實施例中，第一基因體編輯器包含D16A Nme2Cas9切口酶、包含SEQ ID NO: 129之胺基酸序列之連接體及包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之胞苷去胺酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含D16A Nme2Cas9切口酶、包含SEQ ID NO: 130之胺基酸序列之連接體及包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之胞苷去胺酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含D16A Nme2Cas9切口酶、包含SEQ ID NO: 131之胺基酸序列之連接體及包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之胞苷去胺酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含D16A Nme2Cas9切口酶、包含SEQ ID NO: 132之胺基酸序列之連接體及包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之胞苷去胺酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含D16A Nme2Cas9切口酶、包含SEQ ID NO: 133之胺基酸序列之連接體及包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之胞苷去胺酶。在任一前述實施例中，D16A Nme2Cas9切口酶包含與SEQ ID NO: 149至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。
第一基因體編輯器可以多種方式組織以形成單鏈。NLS可為N末端或C末端的，或為N末端及C末端二者，且與RNA引導之切口酶相比，胞苷去胺酶可為N末端或C末端的。在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含胞苷去胺酶、視情況存在之連接體、RNA引導之切口酶及視情況存在之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含RNA引導之切口酶、視情況存在之連接體、胞苷去胺酶及視情況存在之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含視情況存在之NLS、RNA引導之切口酶、視情況存在之連接體及胞苷去胺酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含視情況存在之NLS、RNA引導之切口酶、視情況存在之連接體及胞苷去胺酶，以及視情況存在之NLS。
在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含視情況存在之NLS、APOBEC家族之酶、視情況存在之連接體、RNA引導之切口酶及視情況存在之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含視情況存在之NLS、RNA引導之切口酶、視情況存在之連接體、APOBEC家族之酶及視情況存在之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含視情況存在之NLS、RNA引導之切口酶、視情況存在之連接體、APOBEC家族之酶及視情況存在之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含視情況存在之NLS、RNA引導之切口酶、視情況存在之連接體、APOBEC家族之酶及視情況存在之NLS。
在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含視情況存在之NLS、APOBEC3亞組之酶、視情況存在之連接體、RNA引導之切口酶及視情況存在之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含視情況存在之NLS、RNA引導之切口酶、視情況存在之連接體、APOBEC3亞組之酶及視情況存在之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含視情況存在之NLS、RNA引導之切口酶、視情況存在之連接體、APOBEC3亞組之酶及視情況存在之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含視情況存在之NLS、RNA引導之切口酶、視情況存在之連接體、APOBEC3亞組之酶及視情況存在之NLS。
在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含視情況存在之NLS、APOBEC家族之酶、視情況存在之連接體、D10A SpyCas9切口酶或D16A Nme2Cas9切口酶及視情況存在之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含視情況存在之NLS、D10A SpyCas9切口酶或D16A Nme2Cas9切口酶、視情況存在之連接體、APOBEC家族之酶及視情況存在之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含視情況存在之NLS、D10A SpyCas9切口酶或D16A Nme2Cas9切口酶、視情況存在之連接體、APOBEC家族之酶及視情況存在之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含視情況存在之NLS、D10A SpyCas9切口酶或D16A Nme2Cas9切口酶、視情況存在之連接體及APOBEC家族之酶，以及視情況存在之NLS。
在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含視情況存在之NLS、APOBEC3亞組之酶、視情況存在之連接體、D10A SpyCas9切口酶或D16A Nme2Cas9切口酶及視情況存在之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含視情況存在之NLS、D10A SpyCas9切口酶或D16A Nme2Cas9切口酶、視情況存在之連接體、APOBEC3亞組之酶及視情況存在之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含視情況存在之NLS、D10A SpyCas9切口酶或D16A Nme2Cas9切口酶、視情況存在之連接體、APOBEC3亞組之酶及視情況存在之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含視情況存在之NLS、D10A SpyCas9切口酶或D16A Nme2Cas9切口酶、視情況存在之連接體及APOBEC3亞組之酶，以及視情況存在之NLS。
在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含視情況存在之NLS、APOBEC3亞組之酶、視情況存在之連接體、D16A Nme2Cas9切口酶。
在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含(i)視情況存在之NLS；(ii)胞苷去胺酶，其包含與SEQ ID NO: 22至少80%一致之胺基酸序列；(iii)連接體，其包含選自SEQ ID NO: 25-38、39及72-133之一或多個序列，(iv) D10A SpyCas9切口酶或D16A Nme2Cas9切口酶，及(v)視情況存在之NLS。
在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含(i)視情況存在之NLS，(ii) D10A SpyCas9切口酶或D16A Nme2Cas9切口酶，(iii)連接體，其包含選自SEQ ID NO: 25-38、39及72-133之一或多個序列，(iv)胞苷去胺酶，其包含與SEQ ID NO: 22至少80%一致之胺基酸序列，及(v)視情況存在之NLS。
在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含(i)視情況存在之NLS，(ii) D10A SpyCas9切口酶或D16A Nme2Cas9切口酶，(iii)連接體，其包含選自SEQ ID NO: 25-38、39及72-133之一或多個序列，(iv)胞苷去胺酶，其包含與SEQ ID NO: 22至少80%一致之胺基酸序列，及(v)視情況存在之NLS。
在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含(i)視情況存在之NLS，(ii) D10A SpyCas9切口酶或D16A Nme2Cas9切口酶，(iii)連接體，其包含選自SEQ ID NO: 25-38、39及72-133之一或多個序列，(iv)胞苷去胺酶，其包含與SEQ ID NO: 22至少80%一致之胺基酸序列，及(v)視情況存在之NLS。
在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含(i)視情況存在之NLS，(ii)胞苷去胺酶，其包含與SEQ ID NO: 22至少80%一致之胺基酸序列；(iii)連接體，其包含選自SEQ ID NO: 25-38、39及72-133之一或多個序列，(iv) D10A SpyCas9切口酶或D16A Nme2Cas9切口酶，及(v)視情況存在之NLS。
在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含(i)視情況存在之NLS，(ii) D10A SpyCas9切口酶或D16A Nme2Cas9切口酶，(iii)連接體，其包含選自SEQ ID NO: 25-38、39及72-133之一或多個序列，(iv)胞苷去胺酶，其包含與SEQ ID NO: 22至少80%一致之胺基酸序列，及(v)視情況存在之NLS。
在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含(i)視情況存在之NLS，(ii) D10A SpyCas9切口酶或D16A Nme2Cas9切口酶，(iii)連接體，其包含選自SEQ ID NO: 25-38、39及72-133之一或多個序列，(iv)胞苷去胺酶，其包含與SEQ ID NO: 22至少80%一致之胺基酸序列，及(v)視情況存在之NLS。
在一些實施例中，第一基因體編輯器自N至C末端包含(i)視情況存在之NLS，(ii) D10A SpyCas9切口酶或D16A Nme2Cas9切口酶，(iii)連接體，其包含選自SEQ ID NO: 25-38、39及72-133之一或多個序列，及(iv)胞苷去胺酶，其包含與SEQ ID NO: 22至少80%一致之胺基酸序列，及(v)視情況存在之NLS。 2. 包含 APOBEC3A 去胺酶及 RNA 引導之切口酶之組合物
在一些實施例中，提供包含第一基因體編輯器之第一基因體編輯工具。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含鹼基編輯器。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器包含人類A3A及RNA引導之切口酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器包含野生型A3A及RNA引導之切口酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器包含A3A變異體及RNA引導之切口酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器包含A3A及Cas9切口酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器包含A3A及D10A SpyCas9切口酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器包含人類A3A及D10A SpyCas9切口酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器包含A3A變異體及D10A SpyCas9切口酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器缺少UGI。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器包含一或多種UGI。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器包含兩種UGI。在一些實施例中，A3A與RNA引導之切口酶經由連接體連接。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器進一步包含一或多個額外異源性功能結構域。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器進一步包含位於多肽C末端或多肽N末端之核定位序列(NLS) (本文所闡述)。
在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器包含人類A3A及D10A SpyCas9切口酶，其中該人類A3A與該D10A SpyCas9切口酶經由連接體融合。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器包含人類A3A及D10A SpyCas9切口酶，以及位於融合多肽C末端之核定位序列(NLS)。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器包含人類A3A及D10A SpyCas9切口酶，以及位於融合多肽N末端之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器包含人類A3A及D10A SpyCas9切口酶，其中該人類A3A與該D10A SpyCas9切口酶經由連接體融合，以及視情況經由連接體與該D10A SpyCas9切口酶之C末端融合之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器包含人類A3A及D10A SpyCas9切口酶，其中該人類A3A與該D10A SpyCas9切口酶經由連接體融合，以及視情況經由連接體與該D10A SpyCas9切口酶之C末端融合之NLS。
在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器包含人類A3A及D16A NmeCas9切口酶，其中該人類A3A與該D16A NmeCas9切口酶經由連接體融合。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器包含人類A3A及D16A NmeCas9切口酶，以及位於融合多肽C末端之核定位序列(NLS)。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器包含人類A3A及D16A NmeCas9切口酶，以及位於融合多肽N末端之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器包含人類A3A及D16A NmeCas9切口酶，其中該人類A3A與該D16A NmeCas9切口酶經由連接體融合，以及視情況經由連接體與該D16A NmeCas9切口酶之C末端融合之NLS。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器包含人類A3A及D16A NmeCas9切口酶，其中該人類A3A與該D16A NmeCas9切口酶經由連接體融合，以及視情況經由連接體與該D16A NmeCas9切口酶之C末端融合之NLS。
第一基因體編輯器或鹼基編輯器可以多種方式組織以形成單鏈。NLS可為N末端或C末端的，或為N末端及C末端二者，且與RNA引導之切口酶相比，A3A可為N末端或C末端的。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器自N至C末端包含A3A、視情況存在之連接體、RNA引導之切口酶及視情況存在之NLS。在一些第一基因體編輯器或鹼基編輯器中，多肽自N至C末端包含RNA引導之切口酶、視情況存在之連接體、A3A及視情況存在之NLS。在一些第一基因體編輯器或鹼基編輯器中，多肽自N至C末端包含視情況存在之NLS、RNA引導之切口酶、視情況存在之連接體及A3A。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器自N至C末端包含視情況存在之NLS、RNA引導之切口酶、視情況存在之連接體及A3A，以及視情況存在之NLS。
在任一前述實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器可包含與SEQ ID NO: 3、6或146具有至少80%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，前述一致性水準中之任一者為至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%。在一些實施例中，本文所揭示之第一基因體編輯器或鹼基編輯器可包含與SEQ ID NO: 3、6或146具有至少90%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，本文所揭示之第一基因體編輯器或鹼基編輯器可包含與SEQ ID NO: 3、6或146具有至少95%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，本文所揭示之第一基因體編輯器或鹼基編輯器可包含與SEQ ID NO: 3、6或146具有至少98%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，本文所揭示之第一基因體編輯器或鹼基編輯器可包含與SEQ ID NO: 3、6或146具有至少99%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，本文所揭示之第一基因體編輯器或鹼基編輯器可包含SEQ ID NO: 3、6或146之胺基酸序列。
在任一前述實施例中，編碼本文所揭示之第一基因體編輯器或鹼基編輯器之核酸或ORF可包含與SEQ ID NO: 2、5或147具有至少80%一致性之核酸序列。在一些實施例中，前述一致性水準中之任一者為至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%。
在任一前述實施例中，編碼本文所揭示之第一基因體編輯器或鹼基編輯器之核酸或ORF可包含與SEQ ID NO: 1或4具有至少80%一致性之核酸序列。在一些實施例中，前述一致性水準中之任一者為至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%。
在任一前述實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器可包含與SEQ ID NO: 9、12、18及21中之任一者具有至少80%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，前述一致性水準中之任一者為至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%。在一些實施例中，本文所揭示之第一基因體編輯器或鹼基編輯器可包含與SEQ ID NO: 9、12、18及21中之任一者具有至少90%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，本文所揭示之第一基因體編輯器或鹼基編輯器可包含與SEQ ID NO: 9、12、18及21中之任一者具有至少95%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，本文所揭示之第一基因體編輯器或鹼基編輯器可包含與SEQ ID NO: 9、12、18及21中之任一者具有至少98%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，本文所揭示之第一基因體編輯器或鹼基編輯器可包含與SEQ ID NO: 9、12、18及21中之任一者具有至少99%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，本文所揭示之第一基因體編輯器或鹼基編輯器可包含SEQ ID NO: 9、12、18及21中之任一者之胺基酸序列。
在任一前述實施例中，編碼本文所揭示之第一基因體編輯器或鹼基編輯器之核酸或ORF可包含與SEQ ID NO: 8、11、17及20中之任一者具有至少80%一致性之核酸序列。在一些實施例中，前述一致性水準中之任一者為至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%。
在任一前述實施例中，編碼本文所揭示之第一基因體編輯器或鹼基編輯器之核酸或ORF可包含與SEQ ID NO: 7、10、16及19中之任一者具有至少80%一致性之核酸序列。在一些實施例中，前述一致性水準中之任一者為至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%。
在任一前述實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器可包含與SEQ ID NO: 136、139、142或145具有至少80%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，本文所揭示之第一基因體編輯器或鹼基編輯器可包含SEQ ID NO: 136、139、142或145之胺基酸序列。在任一前述實施例中，編碼本文所揭示之第一基因體編輯器或鹼基編輯器之核酸或ORF可包含與SEQ ID NO: SEQ ID NO: 135、138、141或144具有至少80%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%一致性之核酸序列。在一些實施例中，編碼本文所揭示之第一基因體編輯器或鹼基編輯器之核酸或ORF包含SEQ ID NO: 135、138、141或144之核酸序列。在任一前述實施例中，編碼本文所揭示之第一基因體編輯器或鹼基編輯器之核酸或ORF可包含與SEQ ID NO: 134、137、140或143具有至少80%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%一致性之核酸序列。在任一前述實施例中，編碼本文所揭示之第一基因體編輯器或鹼基編輯器之核酸或ORF可包含SEQ ID NO: 134、137、140或143之核酸序列。
在任一前述實施例中，A3A可包含與SEQ ID NO: 22具有至少80%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，一致性水準為至少85%、至少87%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%。在一些實施例中，A3A包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列。
在任一前述實施例中，RNA引導之切口酶可包含與SEQ ID NO: 41、43或45中之任一者具有至少80%、90%、95%、98%或99%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，一致性水準為至少85%、至少87%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%。在一些實施例中，RNA引導之切口酶包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列。在一些實施例中，RNA引導之切口酶包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列。在一些實施例中，RNA引導之切口酶包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列。
在任一前述實施例中，A3A可包含與SEQ ID NO: 22具有至少80%一致性之胺基酸序列，且RNA引導之切口酶可包含與SEQ ID NO: 41、43或45中之任一者具有至少80%、90%、95%、98%或99%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，A3A包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列，且RNA引導之切口酶包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列。
在任一前述實施例中，編碼第一基因體編輯器或鹼基編輯器之核酸或ORF包含與SEQ ID NO: 1至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之核苷酸序列。在任一前述實施例中，編碼第一基因體編輯器或鹼基編輯器之核酸或ORF包含與SEQ ID NO: 147至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之核苷酸序列。在任一前述實施例中，編碼第一基因體編輯器或鹼基編輯器之核酸或ORF包含與SEQ ID NO: 310至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之核苷酸序列。 III. 第二基因體編輯工具
在一些實施例中，第二基因體編輯工具包含第二基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該第二基因體編輯器同源之gRNA，其中該第一基因體編輯器與該第二基因體編輯器正交。在一些實施例中，第二基因體編輯工具包含含有RNA引導之裂解酶之第二基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該RNA引導之裂解酶同源之gRNA，其中鹼基編輯器與RNA引導之裂解酶正交。
在一些實施例中，第二基因體編輯器係作為至少一種多肽或至少一種mRNA遞送至細胞。在一些實施例中，第二基因體編輯器包含至少一種多肽或至少一種mRNA。在一些實施例中，第二基因體編輯器包含裂解酶、切口酶、無催化活性之核酸酶、鹼基編輯器、視情況C至T鹼基編輯器或A至G鹼基編輯器，或包含DNA聚合酶及切口酶之融合蛋白。
在一些實施例中，第一基因體編輯器及第二基因體編輯器中之一者包含鹼基編輯器、視情況C至T鹼基編輯器或A至G鹼基編輯器，且第一基因體編輯器及第二基因體編輯器中之另一者包含裂解酶。在一些實施例中，第一基因體編輯器及第二基因體編輯器中之一者包含C至T鹼基編輯器，且第一基因體編輯器及第二基因體編輯器中之另一者包含A至G鹼基編輯器。在一些實施例中，第一基因體編輯器及第二基因體編輯器中之一者包含腦膜炎奈瑟菌(Nme) RNA引導之切口酶或裂解酶，且第一基因體編輯器及第二基因體編輯器中之另一者包含釀膿鏈球菌(Spy) RNA引導之切口酶或裂解酶。
在一些實施例中，第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶為Cas核酸酶。在一些實施例中，Cas核酸酶為Cas9。在一些實施例中，Cas9為釀膿鏈球菌Cas9 (SpyCas9)、金黃色葡萄球菌Cas9 (SauCas9)、白喉棒狀桿菌Cas9 (CdiCas9)、嗜熱鏈球菌Cas9 (St1Cas9)、解纖維素乙酸弧菌Cas9 (AceCas9)、空腸彎曲桿菌Cas9 (CjeCas9)、沼澤紅假單胞菌Cas9 (RpaCas9)、深紅紅螺菌Cas9 (RruCas9)、內氏放線菌Cas9 (AnaCas9)、新兇手弗朗西斯氏菌Cas9 (FnoCas9)或腦膜炎奈瑟菌(NmeCas9)。在一些實施例中，Cas9為Nme1Cas9、Nme2Cas9、Nme3Cas9或SpyCas9。在一些實施例中，Cas核酸酶為2類Cas核酸酶。在一些實施例中，Cas核酸酶為Cas12。在一些實施例中，Cas12為毛螺科菌Cas12a (LbCas12a)或Cas12為胺基酸球菌屬Cas12a (AsCas12a)。在一些實施例中，Cas核酸酶為惰性真桿菌Cas13d (EsCas13d)。
在一些實施例中，第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶為Cas9裂解酶。在一些實施例中，第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶為釀膿鏈球菌Cas9 (SpyCas9)裂解酶。在一些實施例中，SpyCas9裂解酶包含與SEQ ID NO: 156至少90%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，SpyCas9裂解酶包含SEQ ID NO: 156之胺基酸序列。
在一些實施例中，第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶為Cas9裂解酶。在一些實施例中，第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶為腦膜炎奈瑟菌Cas9 (NmeCas9)裂解酶。在一些實施例中，NmeCas9裂解酶包含與SEQ ID NO: 157、158-167、191、198、205、212及219中之任一者至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，NmeCas9裂解酶包含SEQ ID NO: 157、158-167、191、198、205、212及219中之任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，第二基因體編輯工具、編碼RNA引導之裂解酶之核酸、包含第二ORF之第二核酸或第二ORF包含與SEQ ID NO: 168、169-178、180、181-190、192-197、199-204、206-211、213-218及220-225中之任一者至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之多核苷酸序列。在一些實施例中，第二基因體編輯工具、編碼RNA引導之裂解酶之核酸、包含第二ORF之第二核酸或第二ORF包含SEQ ID NO: 168、169-178、180、181-190、192-197、199-204、206-211、213-218及220-225中之任一者之多核苷酸序列。
在一些實施例中，第二基因體編輯工具包含RNA引導之裂解酶。在一些實施例中，當與至少一種同裂解酶同源之gRNA一起使用時，RNA引導之裂解酶提供由該至少一種gRNA靶向之基因體基因座之同時敲除及外源基因之敲入。
在一些實施例中，第二基因體編輯工具包含含有DNA聚合酶及切口酶之融合蛋白。在一些實施例中，當與至少一種同切口酶同源之gRNA一起使用時，包含DNA聚合酶及切口酶之融合蛋白提供外源核酸之靶向敲入。
在一些實施例中，第二基因體編輯工具可與本文所揭示之任何第一基因體編輯工具組合。在一些實施例中，包含任何第二ORF之第二核酸可與包含本文所揭示之任何第一ORF之任何第一核酸組合。在第一基因體編輯工具及第二基因體編輯工具中使用彼此直向同源之Cas9切口酶及Cas9裂解酶可防止 交叉利用。
在一些實施例中，第一基因體編輯工具包含第一基因體編輯器或鹼基編輯器(包含APOBEC家族之去胺酶(例如胞苷去胺酶)及D16A NmeCas9切口酶)，及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該切口酶同源之gRNA。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器包含一或多種UGI。在一些實施例中，第二基因體編輯工具包含釀膿鏈球菌Cas9 (SpyCas9)裂解酶及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該SpyCas9裂解酶同源之gRNA。
在一些實施例中，第一基因體編輯工具包含第一基因體編輯器或鹼基編輯器(包含APOBEC家族之去胺酶(例如胞苷去胺酶)及D16A NmeCas9切口酶)，及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該切口酶同源之gRNA。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器不包含任何UGI。在一些實施例中，第一基因體編輯工具進一步包含至少一種不同於第一基因體編輯器或鹼基編輯器之多肽中之UGI。在一些實施例中，第二基因體編輯工具包含釀膿鏈球菌Cas9 (SpyCas9)裂解酶及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該SpyCas9裂解酶同源之gRNA。
在一些實施例中，第一基因體編輯工具包含第一基因體編輯器或鹼基編輯器(包含APOBEC家族之去胺酶(例如胞苷去胺酶)及D10A SpyCas9切口酶)，及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該切口酶同源之gRNA。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器包含一或多種UGI。在一些實施例中，第二基因體編輯工具包含NmeCas9裂解酶及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該NmeCas9裂解酶同源之gRNA。
在一些實施例中，第一基因體編輯工具包含第一基因體編輯器或鹼基編輯器(包含APOBEC家族之去胺酶(例如胞苷去胺酶)及D10A SpyCas9切口酶)，及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該切口酶同源之gRNA。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器不包含任何UGI。在一些實施例中，第一基因體編輯工具進一步包含至少一種不同於第一基因體編輯器或鹼基編輯器之多肽中之UGI。在一些實施例中，第二基因體編輯工具包含NmeCas9裂解酶及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該NmeCas9裂解酶同源之gRNA。 IV. 其他特徵
以下部分提供第一基因體編輯器、鹼基編輯器、第二基因體編輯器及編碼其之核酸之其他特徵。在本文所陳述之任一實施例中，核酸可為表現構築體，其包含可操作地連接至編碼本文所揭示之第一基因體編輯器、鹼基編輯器或第二基因體編輯器之ORF之啟動子。 A. 密碼子最佳化
在一些實施例中，編碼第一基因體編輯器、鹼基編輯器或第二基因體編輯器之核酸包含含有密碼子最佳化之核酸序列之ORF。在一些實施例中，密碼子最佳化之核酸序列包含最小腺嘌呤密碼子及/或最小尿苷密碼子。
可例如藉由在ORF之足夠部分中使用最小尿苷密碼子來減少給定ORF之尿苷含量或尿苷二核苷酸含量。舉例而言，可藉由將胺基酸轉化成密碼子來將本文所闡述之第一基因體編輯器、鹼基編輯器或第二基因體編輯器之胺基酸序列回譯成ORF序列，其中一些或所有ORF使用下文所示之例示性最小尿苷密碼子。在一些實施例中，ORF中至少約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%之密碼子係 表 1中所列示之密碼子。 表 1. 例示性最小尿苷密碼子
胺基酸 最小尿苷密碼子
A 丙胺酸 GCA或GCC或GCG
G 甘胺酸 GGA或GGC或GGG
V 纈胺酸 GUC或GUA或GUG
D 天冬胺酸 GAC
E 麩胺酸 GAA或GAG
I 異白胺酸 AUC或AUA
T 蘇胺酸 ACA或ACC或ACG
N 天冬醯胺 AAC
K 離胺酸 AAG或AAA
S 絲胺酸 AGC
R 精胺酸 AGA或AGG
L 白胺酸 CUG或CUA或CUC
P 脯胺酸 CCG或CCA或CCC
H 組胺酸 CAC
Q 麩醯胺酸 CAG或CAA
F 苯丙胺酸 UUC
Y 酪胺酸 UAC
C 半胱胺酸 UGC
W 色胺酸 UGG
M 甲硫胺酸 AUG
在一些實施例中，ORF可由一組其中至少約75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%之密碼子係 表 1中所列示之密碼子的密碼子組成。
可例如藉由在ORF之足夠部分中使用最小腺嘌呤密碼子來減少給定ORF之腺嘌呤含量或腺嘌呤二核苷酸含量。舉例而言，可藉由將胺基酸轉化成密碼子來將本文所闡述之第一基因體編輯器、鹼基編輯器或第二基因體編輯器之胺基酸序列回譯成ORF序列，其中一些或所有ORF使用下文所示之例示性最小腺嘌呤密碼子。在一些實施例中，ORF中至少約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%之密碼子係 表 2中所列示之密碼子。 表 2. 例示性最小腺嘌呤密碼子
胺基酸 最小腺嘌呤密碼子
A 丙胺酸 GCU或GCC或GCG
G 甘胺酸 GGU或GGC或GGG
V 纈胺酸 GUC或GUU或GUG
D 天冬胺酸 GAC或GAU
E 麩胺酸 GAG
I 異白胺酸 AUC或AUU
T 蘇胺酸 ACU或ACC或ACG
N 天冬醯胺 AAC或AAU
K 離胺酸 AAG
S 絲胺酸 UCU或UCC或UCG
R 精胺酸 CGU或CGC或CGG
L 白胺酸 CUG或CUC或CUU
P 脯胺酸 CCG或CCU或CCC
H 組胺酸 CAC或CAU
Q 麩醯胺酸 CAG
F 苯丙胺酸 UUC或UUU
Y 酪胺酸 UAC或UAU
C 半胱胺酸 UGC或UGU
W 色胺酸 UGG
M 甲硫胺酸 AUG
在一些實施例中，ORF可由一組其中至少約75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%之密碼子係 表 2中所列示之密碼子的密碼子組成。
在可行程度上，上文針對低腺嘌呤含量所闡述之任一特徵可與上文針對低尿苷含量所闡述之任一特徵進行組合。尿苷及腺嘌呤二核苷酸亦如此。類似地，ORF中之尿苷核苷酸及腺嘌呤二核苷酸之含量可如上文所陳述。類似地，ORF中之尿苷二核苷酸及腺嘌呤核苷酸之含量可如上文所陳述。
可例如藉由在ORF之足夠部分中使用最小尿苷及腺嘌呤密碼子來減少給定ORF之尿苷及腺嘌呤核苷酸或二核苷酸含量。舉例而言，可藉由將胺基酸轉化成密碼子來將本文所闡述之多肽、第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶之胺基酸序列回譯成ORF序列，其中一些或所有ORF使用下文所示之例示性最小尿苷及腺嘌呤密碼子。在一些實施例中，ORF中至少約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%之密碼子係 表 3中所列示之密碼子。 表 3. 例示性最小尿苷及腺嘌呤密碼子
胺基酸 最小尿苷及腺嘌呤密碼子
A 丙胺酸 GCC或GCG
G 甘胺酸 GGC或GGG
V 纈胺酸 GUC或GUG
D 天冬胺酸 GAC
E 麩胺酸 GAG
I 異白胺酸 AUC
T 蘇胺酸 ACC或ACG
N 天冬醯胺 AAC
K 離胺酸 AAG
S 絲胺酸 AGC或UCC或UCG
R 精胺酸 CGC或CGG
L 白胺酸 CUG或CUC
P 脯胺酸 CCG或CCC
H 組胺酸 CAC
Q 麩醯胺酸 CAG
F 苯丙胺酸 UUC
Y 酪胺酸 UAC
C 半胱胺酸 UGC
W 色胺酸 UGG
M 甲硫胺酸 AUG
在一些實施例中，ORF可由一組其中至少約75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%之密碼子係 表 3中所列示之密碼子的密碼子組成。如 表 3中可見，三個所列示絲胺酸密碼子中之每一者含有一個A或一個U。在一些實施例中，在尿苷最小化中優先使用絲胺酸之AGC密碼子。在一些實施例中，在腺嘌呤最小化中優先使用絲胺酸之UCC或UCG密碼子。
在一些實施例中，ORF可具有增加哺乳動物(諸如人類)中之轉譯之密碼子。在其他實施例中，ORF為mRNA，且包含增加哺乳動物(諸如人類)之器官(諸如肝臟)中之轉譯之密碼子。在其他實施例中，ORF可具有增加哺乳動物(例如人類)之細胞類型(諸如肝細胞)中之轉譯之密碼子。哺乳動物、細胞類型、哺乳動物器官、人類、人類器官等中之轉譯增加可相對於ORF野生型序列之轉譯程度來測定，或相對於其密碼子分佈匹配衍生ORF之生物體或在胺基酸層面上含有最類似ORF之生物體之密碼子分佈的ORF來測定。或者，在一些實施例中，哺乳動物、細胞類型、哺乳動物器官、人類、人類器官等中Cas9序列之轉譯增加係在所有其他條件均等同之情形下(包括任何適用點突變、異源性結構域及諸如此類)，相對於具有SEQ ID NO: 2或5之序列的ORF之轉譯來測定。在一些實施例中，ORF中至少約75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之密碼子係對應於哺乳動物(諸如人類)中之高度表現tRNA (例如針對每一胺基酸之最高表現tRNA)之密碼子。在一些實施例中，ORF中至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之密碼子係對應於哺乳動物器官(諸如人類器官)中之高度表現tRNA (例如針對每一胺基酸之最高表現tRNA)之密碼子。
或者，通常可使用對應於生物體(例如人類)中高度表現之tRNA之密碼子。
用於密碼子選擇之前述方法中之任一者可與上文所示之最小尿苷或腺嘌呤密碼子組合，例如藉由以表1、表2或表3之密碼子起始，且接著在一種以上選擇可用之情形下，使用對應於通常生物體(例如人類)或所關注器官或細胞類型(例如人類肝臟或人類肝細胞)中之更高程度表現之tRNA之密碼子。
在一些實施例中，ORF中至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之密碼子係來自表4中所示之密碼子集之密碼子(例如低U 1、低A或低A/U密碼子集)。低U 1、低G、低A及低A/U集中之密碼子使用使所指示核苷酸最小化之密碼子，同時亦使用在一種以上選擇可用之情形下，對應於高度表現之tRNA之密碼子。在一些實施例中，ORF中至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之密碼子係來自 表 4中所示之低U 1密碼子集之密碼子。在一些實施例中，ORF中至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之密碼子係來自 表 4中所示之低A密碼子集之密碼子。在一些實施例中，ORF中至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之密碼子係來自 表 4中所示之低A/U密碼子集之密碼子。 表 4. 例示性密碼子集。
胺基酸 低U 1 低U 2 低A 低A/U
Gly GGC GGG GGC GGC
Glu GAG GAA GAG GAG
Asp GAC GAC GAC GAC
Val GTG GTA GTG GTG
Ala GCC GCG GCC GCC
Arg AGA CGA CGG CGG
Ser AGC AGC TCC AGC
Lys AAG AAA AAG AAG
Asn AAC AAC AAC AAC
Met ATG ATG ATG ATG
Ile ATC ATA ATC ATC
Thr ACC ACG ACC ACC
Trp TGG TGG TGG TGG
Cys TGC TGC TGC TGC
Tyr TAC TAC TAC TAC
Leu CTG CTA CTG CTG
Phe TTC TTC TTC TTC
Gln CAG CAA CAG CAG
His CAC CAC CAC CAC
B. 異源性功能結構域；核定位信號 (NLS)
在一些實施例中，本文所揭示之第一基因體編輯器、鹼基編輯器或第二基因體編輯器進一步包含一或多個其他異源性功能結構域(例如為或包含三元或更高階融合多肽)。
在一些實施例中，異源性功能結構域可有助於將第一基因體編輯器、鹼基編輯器或第二基因體編輯器轉運至細胞核中。舉例而言，異源性功能結構域可為核定位信號(NLS)。在一些實施例中，第一基因體編輯器、鹼基編輯器或第二基因體編輯器可與1-10個NLS融合。在一些實施例中，第一基因體編輯器、鹼基編輯器或第二基因體編輯器可與1-5個NLS融合。在一些實施例中，第一基因體編輯器、鹼基編輯器或第二基因體編輯器可與一個NLS融合。在使用一個NLS之情形下，NLS可在第一基因體編輯器、鹼基編輯器或第二基因體編輯器序列之N末端或C末端融合。在一些實施例中，第一基因體編輯器、鹼基編輯器或第二基因體編輯器可在C末端與至少一個NLS融合。NLS亦可插入在多肽、第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶序列內。在其他實施例中，第一基因體編輯器、鹼基編輯器或第二基因體編輯器可與一個以上NLS融合。在一些實施例中，第一基因體編輯器、鹼基編輯器或第二基因體編輯器可與2、3、4或5個NLS融合。在一些實施例中，第一基因體編輯器、鹼基編輯器或第二基因體編輯器可與兩個NLS融合。在某些情況下，該兩個NLS可相同(例如兩個SV40 NLS)或不同。在一些實施例中，第一基因體編輯器、鹼基編輯器或第二基因體編輯器在羧基末端與兩個SV40 NLS序列融合。在一些實施例中，第一基因體編輯器、鹼基編輯器或第二基因體編輯器可與兩個NLS融合，一個在N末端且一個在C末端。在一些實施例中，第一基因體編輯器、鹼基編輯器或第二基因體編輯器可與3個NLS融合。在一些實施例中，第一基因體編輯器、鹼基編輯器或第二基因體編輯器可不與NLS融合。在一些實施例中，NLS可為單組分序列，諸如SV40 NLS、PKKKRKV (SEQ ID NO: 40)或PKKKRRV (SEQ ID NO: 70)。在一些實施例中，NLS可為雙組分序列，諸如核質蛋白、KRPAATKKAGQAKKKK (SEQ ID NO: 71)之NLS。在具體實施例中，單一PKKKRKV (SEQ ID NO: 40) NLS可在第一基因體編輯器、鹼基編輯器或第二基因體編輯器之C末端融合。一或多個連接體視情況包括在融合位點處(例如在第一基因體編輯器、鹼基編輯器或第二基因體編輯器及NLS之間)。在一些實施例中，根據任一前述實施例之一或多個NLS與一或多個其他異源性功能結構域(諸如下文所闡述之異源性功能結構域中之任一者)組合存在於第一基因體編輯器、鹼基編輯器或第二基因體編輯器中。
在一些實施例中，胞苷去胺酶(例如A3A)位於第一基因體編輯器或鹼基編輯器中RNA引導之切口酶之N末端。在一些實施例中，RNA引導之切口酶包含核定位信號(NLS)。在一些實施例中，NLS與RNA引導之切口酶之C末端融合。在一些實施例中，NLS經由連接體與RNA引導之切口酶之C末端融合。在一些實施例中，NLS與RNA引導之切口酶之N末端融合。在一些實施例中，NLS經由連接體(例如SEQ ID NO:  39)與RNA引導之切口酶之N末端融合。在一些實施例中，NLS包含與SEQ ID NO: 40及59-71中之任一者具有至少80%、85%、90%或95%一致性之序列。在一些實施例中，NLS包含SEQ ID NO: 40及59-71中之任一者之序列。在一些實施例中，NLS由與SEQ ID NO: 40及59-71中之任一者之序列具有至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致性之序列編碼。
在一些實施例中，異源性功能結構域可能能夠改良第一基因體編輯器或鹼基編輯器中A3A或RNA引導之切口酶之細胞內半衰期。在一些實施例中，多肽中A3A或RNA引導之切口酶之半衰期可延長。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器中A3A或RNA引導之切口酶之半衰期可縮短。在一些實施例中，異源性功能結構域可能能夠增加第一基因體編輯器或鹼基編輯器中A3A或RNA引導之切口酶之穩定性。在一些實施例中，異源性功能結構域可能能夠降低第一基因體編輯器或鹼基編輯器中A3A或RNA引導之切口酶之穩定性。在一些實施例中，異源性功能結構域可用作蛋白質降解之信號肽。在一些實施例中，蛋白質降解可由蛋白水解酶介導，諸如蛋白酶體、溶酶體蛋白酶或鈣蛋白酶。在一些實施例中，異源性功能結構域可包含PEST序列。在一些實施例中，可藉由添加泛素或聚泛素鏈修飾多肽。在一些實施例中，泛素可為泛素樣蛋白(UBL)。泛素樣蛋白之非限制性實例包括小泛素樣修飾因子(SUMO)、泛素交叉反應性蛋白(UCRP，亦稱為干擾素刺激基因-15 (ISG15))、泛素相關之修飾因子-1 (URM1)、神經元前體細胞表現之發育下調蛋白-8 (NEDD8，亦稱為釀酒酵母( S. cerevisiae)中之Rub1)、人類白血球抗原F締合蛋白(FAT10)、自體吞噬-8 (ATG8)及-12 (ATG12)、Fau泛素樣蛋白(FUB1)、膜錨定之UBL (MUB)、泛素摺疊修飾因子-1 (UFM1)及泛素樣蛋白-5 (UBL5)。
在一些實施例中，異源性功能結構域可為標記物結構域。標記物結構域之非限制性實例包括螢光蛋白、純化標籤、抗原決定基標識及報導基因序列。在一些實施例中，標記物結構域可為螢光蛋白。任何已知之螢光蛋白均可用作標記物結構域，諸如GFP、YFP、EBFP、ECFP、DsRed或任何其他適宜螢光蛋白。在一些實施例中，標記物結構域可為純化標籤或抗原決定基標籤。非限制性例示性標籤包括麩胱甘肽-S-轉移酶(GST)、幾丁質結合蛋白(CBP)、麥芽糖結合蛋白(MBP)、硫氧還蛋白(TRX)、聚(NANP)、串聯親和純化(TAP)標籤、myc、AcV5、AU1、AU5、E、ECS、E2、FLAG、HA、nus、Softag 1、Softag 3、Strep、SBP、Glu-Glu、HSV、KT3、S、S1、T7、V5、VSV-G、6xHis (SEQ ID NO: 401)、8xHis (SEQ ID NO: 402)、生物素羧基載體蛋白(BCCP)、聚His及攜鈣蛋白。在一些實施例中，標記物結構域可為報導基因。非限制性例示性報導基因包括麩胱甘肽-S-轉移酶(GST)、辣根過氧化物酶(HRP)、氯黴素乙醯基轉移酶(CAT)、β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖醛酸苷酶、螢光素酶或螢光蛋白。
在其他實施例中，異源性功能結構域可使第一基因體編輯器、鹼基編輯器或第二基因體編輯器靶向至具體細胞器、細胞類型、組織或器官。在一些實施例中，異源性功能結構域可使第一基因體編輯器、鹼基編輯器或第二基因體編輯器向至粒線體。 C.   UTR ； Kozak 序列
在一些實施例中，本文所揭示之核酸(例如mRNA)包含來自羥基類固醇17-β去氫酶4 (HSD17B4或HSD)或球蛋白(諸如人類α球蛋白(HBA)、人類β球蛋白(HBB)、光滑爪蟾( Xenopus laevis) β球蛋白(XBG))、牛生長激素、巨細胞病毒(CMV)、小鼠Hba-al、熱休克蛋白90 (Hsp90)、甘油醛3-磷酸去氫酶(GAPDH)、β-肌動蛋白、α-微管蛋白、腫瘤蛋白(p53)或表皮生長因子受體(EGFR)之5’ UTR、3’ UTR或5’及3’ UTR。
在一些實施例中，本文所闡述之核酸不包含5’ UTR，例如在5’帽與起始密碼子之間不存在其他核苷酸。在一些實施例中，核酸在5’帽與起始密碼子之間包含Kozak序列(闡述於下文中)，但不具有任何其他5’ UTR。在一些實施例中，核酸不包含3’ UTR，例如在終止密碼子與聚A尾之間不存在其他核苷酸。
在一些實施例中，本文核酸包含Kozak序列。Kozak序列可影響轉譯起始及自mRNA轉譯之多肽之整體產率。Kozak序列包括可作為起始密碼子起作用之甲硫胺酸密碼子。最小Kozak序列為NNNRUGN，其中以下中之至少一者係真實的：第一N為A或G且第二N為G。在核苷酸序列之背景中，R意指嘌呤(A或G)。在一些實施例中，Kozak序列為RNNRUGN、NNNRUGG、RNNRUGG、RNNAUGN、NNNAUGG、RNNAUGG或GCCACCAUG。 D. 聚 A 尾
在一些實施例中，本文所揭示之核酸進一步包含多聚腺苷酸化(聚A)尾。聚A尾可包含至少8個連續腺嘌呤核苷酸，但亦包含一或多個非腺嘌呤核苷酸。如本文所用，「非腺嘌呤核苷酸」係指不包含腺嘌呤之任何天然或非天然核苷酸。鳥嘌呤、胸腺嘧啶及胞嘧啶核苷酸為例示性非腺嘌呤核苷酸。因此，本文所闡述核酸上之聚A尾可包含位於編碼所關注多肽之核苷酸3’之連續腺嘌呤核苷酸。在一些情況中，核酸上之聚A尾部包含位於編碼多肽之核苷酸3’之非連續腺嘌呤核苷酸，其中非腺嘌呤核苷酸與腺嘌呤核苷酸以規則或不規則間隔間雜排列。
在一些實施例中，聚A尾在用於活體外轉錄mRNA之質體中編碼且變為轉錄本之一部分。在質體中編碼之聚A序列(亦即聚A序列中之連續腺嘌呤核苷酸之數量)可不為確切的，例如質體中之100聚A序列(SEQ ID NO: 403)在所轉錄之mRNA中可能並不產生恰好100聚A序列(SEQ ID NO: 403)。在一些實施例中，聚A尾不在質體中編碼，且係藉由PCR加尾或酶促加尾例如使用大腸桿菌( E. coli)聚(A)聚合酶來添加。
在一些實施例中，一或多個非腺嘌呤核苷酸經定位以中斷連續腺嘌呤核苷酸，使得聚(A)結合蛋白可結合至一段連續腺嘌呤核苷酸。在一些實施例中，一或多個非腺嘌呤核苷酸位於至少8、9、10、11或12個連續腺嘌呤核苷酸(SEQ ID NO: 404)之後。在一些實施例中，一或多個非腺嘌呤核苷酸位於8-50個連續腺嘌呤核苷酸(SEQ ID NO: 405)之後。在一些實施例中，一或多個非腺嘌呤核苷酸位於8-100個連續腺嘌呤核苷酸(SEQ ID NO: 406)之後。
在一些實施例中，聚A尾包含或含有一個非腺嘌呤核苷酸或2-10個非腺嘌呤核苷酸之一個連續區段。
在一些實施例中，非腺嘌呤核苷酸為鳥嘌呤、胞嘧啶或胸腺嘧啶。在一些情況中，在存在一種以上非腺嘌呤核苷酸之情形下，非腺嘌呤核苷酸可選自：a)鳥嘌呤及胸腺嘧啶核苷酸；b)鳥嘌呤及胞嘧啶核苷酸；c)胸腺嘧啶及胞嘧啶核苷酸；或d)鳥嘌呤、胸腺嘧啶及胞嘧啶核苷酸。 E. 經修飾之核苷酸
在一些實施例中，本文所揭示之核酸在一些或所有尿苷位置包含經修飾尿苷。在一些實施例中，經修飾尿苷係在5位例如經鹵素或C1-C3烷氧基修飾之尿苷。在一些實施例中，經修飾尿苷係在1位例如經C1-C3烷基修飾之假尿苷。經修飾尿苷可為例如假尿苷、N1-甲基-假尿苷、5-甲氧基尿苷、5-碘尿苷或其組合。
在一些實施例中，本文所揭示之核酸中至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%之尿苷位置為經修飾尿苷。在一些實施例中，本文所揭示之mRNA中10%-25%、15-25%、25-35%、35-45%、45-55%、55-65%、65-75%、75-85%、85-95%或90-100%之尿苷位置為經修飾尿苷，例如5-甲氧基尿苷、5-碘尿苷、N1-甲基假尿苷、假尿苷或其組合。
在一些實施例中，至少10%之尿苷由經修飾尿苷取代。在一些實施例中，15%至45%之尿苷由經修飾尿苷取代。在一些實施例中，至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或100%之尿苷由經修飾尿苷取代。 F.   5’ 帽
在一些實施例中，本文所揭示之核酸包含5’帽，諸如帽0、帽1或帽2。5’帽通常為7-甲基鳥嘌呤核糖核苷酸(其可進一步經修飾，如下文例如關於ARCA所論述)，其經由5’-三磷酸酯連接至核酸中5’至3’鏈之第一核苷酸(亦即第一帽近端核苷酸)之5’位。在帽0中，mRNA之第一及第二帽近端核苷酸二者之核糖均包含2’-羥基。在帽1中，核酸之第一及第二轉錄核苷酸之核糖分別包含2’-甲氧基及2’-羥基。在帽2中，核酸之第一及第二帽近端核苷酸二者之核糖均包含2’-甲氧基。例如，參見Katibah等人(2014) Proc Natl Acad Sci USA111(33):12025-30；Abbas等人(2017) Proc Natl Acad Sci USA114(11):E2106-E2115。大部分內源性高級真核核酸(包括哺乳動物核酸，諸如人類核酸)包含帽1或帽2。帽0及其他不同於帽1及帽2之帽結構可在哺乳動物(諸如人類)中具有免疫原性，此乃因其由先天性免疫系統之組分(諸如IFIT-1及IFIT-5)識別為「非自身」，此可升高細胞介素(包括I型干擾素)之水準。先天性免疫系統之組分(諸如IFIT-1及IFIT-5)亦可與eIF4E競爭結合具有除帽1或帽2以外之帽的核酸，從而潛在地抑制核酸之轉譯。
可共轉錄性地包括帽。舉例而言，ARCA (抗反向帽類似物；Thermo Fisher Scientific目錄號AM8045)係包含連接至鳥嘌呤核糖核苷酸之5’位的7-甲基鳥嘌呤3’-甲氧基-5’-三磷酸酯之帽類似物，其可在起始時活體外併入至轉錄本中。ARCA產生帽0帽或帽0樣帽，其中第一帽近端核苷酸之2’位為羥基。例如，參見Stepinski等人(2001) 「Synthesis and properties of mRNAs containing the novel 『anti-reverse』 cap analogs 7-methyl(3'-O-methyl)GpppG and 7-methyl(3'deoxy)GpppG」, RNA7: 1486-1495。ARCA結構示於下文中。
CleanCap TMAG (m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pG; TriLink Biotechnologies目錄號N-7113)或CleanCap TMGG (m7G(5')ppp(5')(2'OMeG)pG; TriLink Biotechnologies目錄號N-7133)可用於共轉錄提供Cap1結構。CleanCap TMAG及CleanCap TMGG之3'-O-甲基化形式亦可自TriLink Biotechnologies分別以目錄號N-7413及N-7433獲得。CleanCap TMAG結構示於下文中。CleanCap TM結構在本文中有時使用上文所列示目錄號之最後三個數位來提及(例如「CleanCap TM113」係TriLink Biotechnologies目錄號N-7113)。
或者，可在轉錄後將帽添加至RNA中。舉例而言，牛痘加帽酶係市售的(New England Biolabs目錄號M2080S)，且具有RNA三磷酸酶及鳥苷酸轉移酶活性(由其D1亞單元提供)及鳥嘌呤甲基轉移酶活性(由其D12亞單元提供)。因此，可在S-腺苷基甲硫胺酸及GTP存在下將7-甲基鳥嘌呤添加至RNA中以得到帽0。例如，參見Guo, P.及Moss, B. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA87, 4023-4027；Mao, X.及Shuman, S. (1994) J. Biol. Chem. 269, 24472-24479。關於帽及加帽方法之其他論述，參見例如WO2017/053297及Ishikawa等人， Nucl. Acids. Symp. Ser. (2009)第53期，129-130。 V. 細胞
在一些實施例中，與第一基因體編輯工具或第二基因體編輯工具接觸之細胞係人類細胞。
在一些實施例中，使細胞與以下接觸：(a)第一基因體編輯工具，其中該第一基因體編輯工具包含第一基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該第一基因體編輯器同源之向導RNA (gRNA)；及(b)第二基因體編輯工具，其中該第二基因體編輯工具包含第二基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該第二基因體編輯器同源之gRNA，其中該第一基因體編輯器與該第二基因體編輯器正交，藉此在該細胞中產生至少兩種基因體編輯物。
在一些實施例中，使細胞與以下接觸：(a)第一基因體編輯工具，其包含含有鹼基編輯器之第一基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該鹼基編輯器同源之向導RNA (gRNA)；及(b)第二基因體編輯工具，其包含含有RNA引導之裂解酶之第二基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該RNA引導之裂解酶同源之gRNA，其中該鹼基編輯器與該RNA引導之裂解酶正交，藉此在該細胞中產生至少兩種基因體編輯物。
在一些實施例中，使細胞與以下接觸：(a)第一基因體編輯工具，其包含含有鹼基編輯器之第一基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該鹼基編輯器同源之向導RNA (gRNA)；及(b)第二基因體編輯工具，其包含含有RNA引導之裂解酶之第二基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該RNA引導之裂解酶同源之gRNA，其中該鹼基編輯器與該RNA引導之裂解酶正交；在一些實施例中，(c)培養該細胞，藉此產生包含經編輯細胞之細胞群體，該等經編輯細胞之每個細胞包含至少兩種基因體編輯物。
在一些實施例中，利用本文所揭示之任何方法或組合物在活體外處理細胞。在一些實施例中，利用本文所揭示之任何方法或組合物在活體內處理細胞。
在一些實施例中，本文所提供之任一實施例中之細胞由第一基因體編輯工具及第二基因體編輯工具工程化。在一些實施例中，第一基因體編輯工具包含C至T鹼基編輯器或A至G鹼基編輯器。在一些實施例中，第一基因體編輯工具包含第一基因體編輯器，其包含胞苷去胺酶及RNA引導之切口酶或編碼多肽之核酸。在一些實施例中，胞苷去胺酶係APOBEC3A去胺酶(A3A)。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含與SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 146或SEQ ID NO: 311至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，編碼第一基因體編輯器之核酸包含與SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 147或SEQ ID NO: 310至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之序列。在一些實施例中，第一基因體編輯器包含與SEQ ID NO: 9、12、18及21中之任一者至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之胺基酸序列。
在一些實施例中，第一基因體編輯工具或第二基因體編輯工具經由電穿孔遞送至細胞。在一些實施例中，第一基因體編輯工具或第二基因體編輯工具係經由至少一種脂質奈米顆粒(LNP)遞送至細胞。在一些實施例中，第一基因體編輯工具或第二基因體編輯工具含於至少一種LNP中。在一些實施例中，第一基因體編輯工具或第二基因體編輯工具在至少一種載體上遞送至細胞。在一些實施例中，第一基因體編輯工具或第二基因體編輯工具包含至少一種載體。在一些實施例中，第一基因體編輯工具或第二基因體編輯工具係作為至少一種編碼該第一基因體編輯工具或該第二基因體編輯工具之核酸遞送。在一些實施例中，第一基因體編輯工具或第二基因體編輯工具包含至少一種編碼該第一基因體編輯工具或該第二基因體編輯工具之核酸。在一些實施例中，第一基因體編輯工具包含至少一種包含該第一基因體編輯工具之多肽或至少一種編碼該第一基因體編輯工具之核酸。在一些實施例中，第二基因體編輯工具包含至少一種包含該第二基因體編輯工具之多肽或至少一種編碼該第二基因體編輯工具之核酸。在一些實施例中，該至少一種核酸包含至少一種mRNA。在一些實施例中，第一基因體編輯器或第二基因體編輯器係作為至少一種多肽或至少一種mRNA遞送至細胞。在一些實施例中，第一基因體編輯器或第二基因體編輯器包含至少一種多肽或至少一種mRNA。在一些實施例中，該至少一種gRNA係作為至少一種編碼該gRNA之多核苷酸遞送至細胞。在一些實施例中，使細胞與編碼用於插入至基因體基因座中之外源基因之核酸接觸。在一些實施例中，使細胞與編碼用於插入至TRAC或AAVS1基因座中之外源基因之核酸接觸。
在一些實施例中，在本文所揭示之任一方法中，接觸細胞之步驟(a)及步驟(b)同時實施。在一些實施例中，接觸細胞之步驟(a)及步驟(b)係以任何順序在約5分鐘、10分鐘、15分鐘、30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、11小時、12小時、13小時、14小時、15小時、16小時、17小時、18小時、19小時、20小時、21小時、22小時、23小時、24小時、30小時、36小時或48小時之時間段內實施。在一些實施例中，步驟(a)與步驟(b)各自在約5分鐘、10分鐘、15分鐘、30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、11小時、12小時、13小時、14小時、15小時、16小時、17小時、18小時、19小時、20小時、21小時、22小時、23小時、24小時、30小時、36小時或48小時之時間段內獨立地實施。
在一些實施例中，細胞為免疫細胞。如本文所用，「免疫細胞」係指免疫系統之細胞，包括例如淋巴球(例如T細胞、B細胞、天然殺手細胞(「NK細胞」，及NKT細胞或iNKT細胞))、單核球、巨噬細胞、肥胖細胞、樹突細胞或顆粒球(例如嗜中性球、嗜酸性球及嗜鹼性球)。在一些實施例中，細胞為原代免疫細胞。在一些實施例中，免疫系統細胞可選自CD3 +、CD4 +及CD8 +T細胞、調控性T細胞(Treg)、B細胞、NK細胞及樹突細胞(DC)。在一些實施例中，免疫細胞為同種異體的。
在一些實施例中，細胞為淋巴球。在一些實施例中，細胞為適應性免疫細胞。在一些實施例中，細胞為T細胞。在一些實施例中，細胞為B細胞。在一些實施例中，細胞為NK細胞。
如本文所用，T細胞可定義為表現T細胞受體(「TCR」或「αβ TCR」或「γδ TCR」)之細胞，然而在一些實施例中，T細胞之TCR可經遺傳修飾以降低其表現(例如藉由對TRAC或TRBC基因之遺傳修飾)，因此蛋白質CD3之表現可用作藉由標準流式細胞術方法鑑別T細胞之標記物。CD3係與TCR締合之多亞單元信號傳導複合物。因此，T細胞可稱為CD3+。在一些實施例中，T細胞係表現CD3+標記物以及CD4+或CD8+標記物之細胞。
在一些實施例中，T細胞表現糖蛋白CD8，且因此藉由標準流式細胞術方法為CD8+，且可稱為「細胞毒性」 T細胞。在一些實施例中，T細胞表現糖蛋白CD4，且因此藉由標準流式細胞術方法為CD4+，且可稱為「輔助」T細胞。CD4+ T細胞可分化成亞集，且可稱為Th1細胞、Th2細胞、Th9細胞、Th17細胞、Th22細胞、T調控性(「Treg」)細胞或T濾泡輔助細胞(「Tfh」)。每一CD4+亞集釋放特定細胞介素，其可具有促炎性或抗炎性功能、存活或保護功能。T細胞可藉由CD4+或CD8+選擇方法自個體分離。
在一些實施例中，T細胞為記憶T細胞。在體內，記憶T細胞遇到抗原。記憶T細胞可位於次級淋巴樣器官中(中樞記憶T細胞)或最近感染之組織中(效應記憶T細胞)。記憶T細胞可為CD8+ T細胞。記憶T細胞可為CD4+ T細胞。
如本文所用，「中樞記憶T細胞」可定義為經歷抗原之T細胞，且例如可表現CD62L及CD45RO。中樞記憶T細胞可按CD62L+及CD45RO+偵測，由於中樞記憶T細胞亦表現CCR7，因此可藉由標準流式細胞術方法按CCR7+偵測。
如本文所用，「早期幹細胞記憶T細胞」(或「Tscm」)可定義為表現CD27及CD45RA之T細胞，且因此藉由標準流式細胞術方法為CD27+及CD45RA+。Tscm不表現CD45同種型CD45RO，因此若藉由標準流式細胞術方法針對該同種型進行染色，則Tscm將進一步為CD45RO-的。因此，CD45RO- CD27+細胞亦為早期幹細胞記憶T細胞。Tscm細胞進一步表現CD62L及CCR7，因此可藉由標準流式細胞術方法按CD62L+及CCR7+偵測。已顯示早期幹細胞記憶T細胞與細胞療法產品之持久性及治療功效增加相關。
在一些實施例中，細胞為B細胞。如本文所用，「B細胞」可定義為表現CD19或CD20或B細胞成熟抗原(「BCMA」)之細胞，且因此藉由標準流式細胞術方法，B細胞為CD19+、或CD20+、或BCMA+。藉由標準流式細胞術方法，B細胞之CD3及CD56進一步呈陰性。B細胞可為血漿細胞。B細胞可為記憶B細胞。B細胞可為原初B細胞。B細胞可為IgM+，或具有類別轉換B細胞受體(例如IgG+，或IgA+)。
在一些實施例中，細胞為單核細胞，諸如來自骨髓或外周血。在一些實施例中，細胞為外周血單核細胞(「PBMC」)。在一些實施例中，細胞為PBMC，例如淋巴球或單核球。在一些實施例中，細胞為外周血淋巴球(「PBL」)。
在一些實施例中，細胞源自編輯前之祖細胞。在一些實施例中，細胞為誘導型多能幹細胞(iPSC)。
ACT療法中所用之細胞包括諸如間質幹細胞(例如自骨髓(BM)、外周血(PB)、胎盤、臍帶(UC)或脂肪分離)；造血幹細胞(HSC；例如自BM分離)；單核細胞(例如自BM或PB分離)；內皮祖細胞(EPC；自BM、PB及UC分離)；神經幹細胞(NSC)；緣幹細胞(LSC)；或組織特異性原代細胞或源自其之細胞(TSC)。ACT療法中所用之細胞進一步包括誘導型多能幹細胞(iPSC；例如，參見Mahla, International J. Cell Biol. 2016 (文章ID 6940283): 1-24 (2016))，該等細胞可經誘導以分化成其他細胞類型，包括例如胰島細胞、神經元及血液細胞；眼幹細胞；多能幹細胞(PSC)；胚胎幹細胞(ESC)；用於器官或組織移植之細胞，諸如胰島細胞、心肌細胞、甲狀腺細胞、胸腺細胞、神經元細胞、皮膚細胞、視網膜細胞、軟骨細胞、肌細胞及角質細胞。
在一些實施例中，細胞為人類細胞，諸如來自個體之細胞。在一些實施例中，細胞係自人類個體中分離。在一些實施例中，細胞係自患者中分離。在一些實施例中，細胞係自供體中分離。在一些實施例中，細胞係自人類供體PBMC或leukopak中分離。在一些實施例中，細胞來自患有疾患、病症或疾病之個體。在一些實施例中，細胞來自患有艾伯斯坦-巴爾病毒(「EBV, Epstein Barr Virus」)之人類供體。
在一些實施例中，細胞對於HLA-B為同型合子的，且對於HLA-C為同型合子的。在一些實施例中，細胞含有HLA-A基因中之遺傳修飾，且對於HLA-B為同型合子的且對於HLA-C為同型合子的。在一些實施例中，細胞對於HLA-A為同型合子的，且對於HLA-C為同型合子的。在一些實施例中，細胞含有HLA-B基因中之遺傳修飾，且對於HLA-A為同型合子的且對於HLA-C為同型合子的。在一些實施例中，細胞對於HLA-C為同型合子的。在一些實施例中，細胞含有HLA-A基因中之遺傳修飾及HLA-B基因中之遺傳修飾，且對於HLA-C為同型合子的。
在一些實施例中，離體進行本文所揭示之方法。如本文所用，「離體」係指一種活體外方法，其中細胞能夠轉移至個體體內，例如作為ACT療法。在一些實施例中，離體方法係一種涉及ACT療法細胞或細胞群體之活體外方法。
在一些實施例中，細胞維持在培養物中。在一些實施例中，細胞移植至患者中。在一些實施例中，自個體體內取出細胞，離體進行遺傳修飾，且接著投與回至同一患者。在一些實施例中，自個體體內取出細胞，離體進行遺傳修飾，且接著投與回至除取出細胞之個體以外之個體。
在一些實施例中，細胞來自細胞株。在一些實施例中，細胞株源自人類個體。在一些實施例中，細胞株為淋巴母細胞樣細胞株(「LCL」)。可將細胞冷凍保存並解凍。細胞先前可未冷凍保存。
在一些實施例中，細胞來自細胞庫。在一些實施例中，對細胞進行遺傳修飾，且接著轉移至細胞庫中。在一些實施例中，自個體體內取出細胞，離體進行遺傳修飾，且轉移至細胞庫中。在一些實施例中，將經遺傳修飾之細胞群體轉移至細胞庫中。在一些實施例中，將經遺傳修飾之免疫細胞群體轉移至細胞庫中。在一些實施例中，將經遺傳修飾之免疫細胞群體轉移至細胞庫中，該群體包含第一及第二亞群體，其中該第一亞群體及該第二亞群體具有至少一種共同的遺傳修飾及至少一種不同的遺傳修飾。
在一些實施例中，細胞群體包含使用本文所揭示之任何方法或組合物編輯之任何細胞。
在一些實施例中，細胞群體包含經編輯之T細胞，且其中該群體至少30%、40%、50%、55%、60%、65%之細胞具有記憶表型(CD27+、CD45RA+)。
在一些實施例中，細胞群體包含非活化之免疫細胞。在一些實施例中，細胞群體包含活化之免疫細胞。
在一些實施例中，細胞群體包含T細胞，且在編輯後對重複刺激有反應。在一些實施例中，將細胞群體離體培養、擴增、分化或增殖。 VI. 向導 RNA 及供體核酸
在一些實施例中，第一基因體編輯工具包含第一基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該第一基因體編輯器同源之向導RNA (gRNA)。在一些實施例中，第一基因體編輯工具包含含有鹼基編輯器之第一基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該鹼基編輯器同源之向導RNA (gRNA)。
在一些實施例中，第二基因體編輯工具包含第二基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該第二基因體編輯器同源之gRNA，其中第一基因體編輯器與第二基因體編輯器正交。在一些實施例中，第二基因體編輯工具包含含有RNA引導之裂解酶之第二基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該RNA引導之裂解酶同源之gRNA，其中鹼基編輯器與RNA引導之裂解酶正交。
在一些實施例中，該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA與第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶不同源。在一些實施例中，該至少一種與第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶同源之gRNA與第一基因體編輯器或鹼基編輯器不同源。
在一些實施例中，該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA包含至少兩種靶向至少兩個不同基因體基因座之gRNA。在一些實施例中，該至少一種與第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含至少兩種靶向至少兩個不同基因體基因座之gRNA。在一些實施例中，該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA包含至少三種靶向至少三個不同基因體基因座之gRNA。在一些實施例中，該至少一種與第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含至少三種靶向至少三個不同基因體基因座之gRNA。在一些實施例中，該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA包含至少四種靶向至少四個不同基因體基因座之gRNA。在一些實施例中，該至少一種與第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含至少四種靶向至少四個不同基因體基因座之gRNA。在一些實施例中，該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA包含至少五種靶向至少五個不同基因體基因座之gRNA。在一些實施例中，該至少一種與第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含至少五種靶向至少五個不同基因體基因座之gRNA。在一些實施例中，該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA包含至少六種靶向至少六個不同基因體基因座之gRNA。在一些實施例中，第一基因體編輯器及該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源且靶向不同基因體基因座之gRNA中之一者、兩者、三者、四者、五者或六者含於同一脂質奈米顆粒(LNP)中。在一些實施例中，鹼基編輯器或該至少一種與第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含至少六種靶向至少六個不同基因體基因座之gRNA。 A. 靶序列及基因
在一些實施例中，本揭示案之方法及組合物利用CRISPR/Cas系統裂解由向導RNA靶向之至少一個基因體基因座之靶序列。舉例而言，靶序列可由Cas核酸酶識別並裂解。在一些實施例中，Cas核酸酶之靶序列位於核酸酶之同源PAM序列附近。在一些實施例中，2類Cas核酸酶可由gRNA引導至基因之靶序列，其中gRNA與靶序列雜交且2類Cas蛋白裂解靶序列。在一些實施例中，向導RNA與靶序列雜交且2類Cas核酸酶裂解靶序列，該靶序列毗鄰或包含其同源PAM。在一些實施例中，靶序列可與向導RNA之靶向序列互補。在一些實施例中，向導RNA之靶向序列與相應靶序列中同向導RNA雜交之部分之間的互補性程度可為約80%、85%、90%、95%、97%、98%、99%或100%。在一些實施例中，向導RNA之靶向序列與相應靶序列中同向導RNA雜交之部分之間的一致性百分比可為約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%、99%或100%。在一些實施例中，靶標之同源區與同源PAM序列毗鄰。在一些實施例中，靶序列可包含與向導RNA之靶向序列100%互補之序列。在其他實施例中，與向導RNA之靶向序列相比，靶序列可包含至少一個錯配、缺失或插入。
靶序列之長度可能取決於所用之核酸酶系統。舉例而言，用於CRISPR/Cas系統之向導RNA之靶向序列可包含長度為10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50或50個以上之核苷酸，且靶序列具有相應長度，視情況毗鄰PAM序列。在一些實施例中，靶序列可包含長度為15-24個之核苷酸。在一些實施例中，靶序列可包含長度為17-21個之核苷酸。在一些實施例中，靶序列可包含長度為20個之核苷酸。在一些實施例中，靶序列可包含長度為24個之核苷酸。當使用切口酶時，靶序列可包含一對靶序列，其由裂解DNA分子之相對股之一對切口酶識別。在一些實施例中，靶序列可包含一對靶序列，其由裂解DNA分子之相同股之一對切口酶識別。在一些實施例中，靶序列可包含由一或多種Cas核酸酶識別之靶序列之一部分。
靶核酸分子可為細胞內源或外源之任何DNA或RNA分子。在一些實施例中，靶核酸分子可為游離型DNA、質體、基因體DNA、病毒基因體或染色體DNA。在一些實施例中，基因之靶序列可為來自細胞或細胞中之基因體序列，包括人類細胞。
在其他實施例中，靶序列可為病毒序列。在其他實施例中，靶序列可為病原體序列。在其他實施例中，靶序列可為合成序列。在其他實施例中，靶序列可為染色體序列。在某些實施例中，靶序列可包含易位接頭，例如與癌症相關之易位。在一些實施例中，靶序列可在真核染色體上，諸如人類染色體。
在一些實施例中，靶序列可位於基因體基因座中；例如，靶序列可位於基因之編碼序列、基因之內含子序列、調控序列、基因之轉錄控制序列、基因之轉譯控制序列、剪接位點或基因之間的非編碼序列(例如基因間空間)中。在一些實施例中，基因可為蛋白質編碼基因。在其他實施例中，基因可為非編碼RNA基因。在一些實施例中，靶序列可包含疾病相關基因之全部或一部分。在一些實施例中，靶序列可位於基因體中之非基因功能位點中，例如控制染色質組織之態樣之位點，諸如支架位點或基因座控制區。
在涉及Cas核酸酶(諸如2類Cas核酸酶)之一些實施例中，靶序列可與原間隔序列毗鄰模體(「protospacer adjacent motif, PAM」)毗鄰。在一些實施例中，PAM可與靶序列3'端之1、2、3或4個核苷酸毗鄰或在其內。PAM之長度及序列可取決於所用之Cas蛋白。舉例而言，PAM可選自特定Spy Cas9蛋白或Spy Cas9直向同源物之一致或特定PAM序列，包括Ran等人， Nature, 520: 186-191 (2015)之圖1及Zetsche 2015之圖S5中所揭示之彼等PAM序列，其各自之相關揭示內容係以引用的方式併入本文中。在一些實施例中，PAM之長度可為2、3、4、5、6、7、8、9或10個核苷酸。非限制性例示性PAM序列包括NGG、NGGNG、NG、NAAAAN、NNAAAAW、NNNNACA、GNNNCNNA、TTN及NNNNGATT (其中N定義為任何核苷酸，且W定義為A或T)。在一些實施例中，PAM序列可為NGG。在一些實施例中，PAM序列可為NGGNG。在一些實施例中，PAM序列可為TTN。在一些實施例中，PAM序列可為NNAAAAW。
在一些實施例中，PAM可選自特定Nme Cas9蛋白或Nme Cas9直向同源物之一致或特定PAM序列(Edraki等人，2019)。在一些實施例中，Nme Cas9 PAM可包含2、3、4、5、6、7、8、9或10個長度之核苷酸。非限制性例示性PAM序列包括NCC、N4GAYW、N4GYTT、N4GTCT、NNNNCC(a)、NNNNCAAA (其中N定義為任何核苷酸，W定義為A或T，且R定義為A或G；且(a)為第二個C後之較佳、但非必需之A)。在一些實施例中，PAM序列可為NCC。
在一些實施例中，該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA或該至少一種與第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含至少一種單一向導RNA (sgRNA)。在一些實施例中，該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA或該至少一種與第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶同源之gRNA為短單一向導RNA (短sgRNA)，該短sgRNA包含含有髮夾區之sgRNA保守部分，其中該髮夾區缺少至少5-10個核苷酸且其中該短sgRNA包含5’端修飾或3’端修飾或兩者。
在一些實施例中，該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA靶向一或多個選自以下之基因：TRBC基因座、HLA-A基因座、HLA-B基因座、CIITA基因座、HLA-DR基因座、HLA-DQ基因座及HLA-DP基因座。在一些實施例中，該至少一種與第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶同源之gRNA靶向一或多個選自以下之基因體基因座：TRAC基因座、AAVS1基因座及CIITA基因座。
在一些實施例中，(i)該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向HLA-A基因座之gRNA及靶向CIITA基因座之gRNA，且該至少一種與第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向TRAC基因座之gRNA；(ii)該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向TRBC基因座之gRNA、靶向HLA-A基因座之gRNA及靶向CIITA基因座之gRNA，且該至少一種與第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向TRAC基因座之gRNA；(iii)該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向HLA-A基因座之gRNA、靶向HLA-B基因座之gRNA及靶向CIITA基因座之gRNA，且該至少一種與第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向TRAC基因座之gRNA；(iv)該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向TRBC基因座之gRNA、靶向HLA-A基因座之gRNA、靶向HLA-B基因座之gRNA及靶向CIITA基因座之gRNA，且該至少一種與第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向TRAC基因座之gRNA；(v)該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向HLA-A基因座之gRNA及靶向HLA-DR基因座、HLA-DQ基因座或HLA-DP基因座之gRNA，且該至少一種與第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向TRAC基因座之gRNA；(vi)該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向TRBC基因座之gRNA、靶向HLA-A基因座之gRNA及靶向HLA-DR基因座、HLA-DQ基因座或HLA-DP基因座之gRNA，且該至少一種與第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向TRAC基因座之gRNA；(vii)該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向HLA-A基因座之gRNA、靶向HLA-B基因座之gRNA及靶向HLA-DR基因座、HLA-DQ基因座或HLA-DP基因座之gRNA，且該至少一種與第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向TRAC基因座之gRNA；(viii)該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向TRBC基因座之gRNA、靶向HLA-A基因座之gRNA、靶向HLA-B基因座之gRNA及靶向HLA-DR基因座、HLA-DQ基因座或HLA-DP基因座之gRNA，且該至少一種與第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向TRAC基因座之gRNA；(ix)該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向TRAC基因座之gRNA、靶向TRBC基因座之gRNA、靶向CIITA基因座之gRNA及靶向HLA-A基因座之gRNA，且該至少一種與第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向TRAC基因座之gRNA；(x)該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向TRBC基因座之gRNA、靶向HLA-A基因座之gRNA及靶向CIITA基因座之gRNA，且該至少一種與第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向AAVS1基因座之gRNA；(xi)該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向TRBC基因座之gRNA、靶向HLA-A基因座之gRNA、靶向HLA-B基因座之gRNA及靶向CIITA基因座之gRNA，且該至少一種與第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向AAVS1基因座之gRNA；(xii)該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向TRBC基因座之gRNA、靶向HLA-A基因座之gRNA及靶向HLA-DR基因座、HLA-DQ基因座或HLA-DP基因座之gRNA，且該至少一種與第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向AAVS1基因座之gRNA；(xiii)該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA包含靶向TRBC基因座之gRNA、靶向HLA-A基因座之gRNA、靶向HLA-B基因座之gRNA及靶向HLA-DR基因座、HLA-DQ基因座或HLA-DP基因座之gRNA，且該至少一種與第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向AAVS1基因座之gRNA。
在一些實施例中，在上文子部分(i)至(ix)中之任一者中，該至少一種與第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向AAVS1基因座之另一gRNA。在一些實施例中，在上文子部分(x)至(xiii)中之任一者中，該至少一種與第二基因體編輯器或RNA引導之裂解酶同源之gRNA包含靶向TRAC基因座之另一gRNA。在一些實施例中，在使細胞與靶向TRAC基因座之gRNA接觸後，使細胞與靶向AAVS1基因座之另一gRNA接觸。在一些實施例中，在使細胞與靶向AAVS1基因座之gRNA接觸後，使細胞與靶向TRAC基因座之另一gRNA接觸。 B. 經修飾之 gRNA
在sgRNA之情形下，上述向導序列可進一步包含其他核苷酸以形成sgRNA，例如在向導序列3’端後之以下例示性核苷酸序列：5’至3’定向之GUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC (SEQ ID NO: 226)。
在sgRNA之情形下，上述向導序列可進一步包含其他核苷酸以形成sgRNA，例如在向導序列3’端後之以下例示性核苷酸序列：5’至3’定向之GUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 227)。
在sgRNA之情形下，可將向導序列整合至以下經修飾之模體中：mN*mN*mN*NNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU (SEQ ID NO: 228)，其中「N」可為任何天然或非天然核苷酸，較佳為RNA核苷酸；核苷酸之糖部分可為核糖、去氧核糖或具有取代之類似化合物；m為2’-O-甲基修飾之核苷酸，且*為與毗鄰核苷酸殘基之硫代磷酸酯鍵聯；且其中N共同為向導序列之核苷酸序列。在經修飾序列之背景中，除非另有指示，否則A、C、G、N及U為未經修飾之RNA核苷酸，亦即與毗鄰核苷酸殘基具有磷酸二酯酶鍵聯之2’-OH糖部分，或5’末端PO4。
在sgRNA之情形下，向導序列可進一步包含SpyCas9 sgRNA序列。SpyCas9 sgRNA序列之實例示於表YY中(SEQ ID NO: 226：GUUUUA GAGC UAGAAAUAGC AAGUUAAAAU AAGGCUAGUC CGUUAUCAAC UUGAAAAAGU GGCACCGAGU CGGUGC - 「例示性SpyCas9 sgRNA-1」)，其包括在向導序列之3’端，且與下表YY中所示之結構域一起提供。LS為下莖。B為凸起。US為上莖。H1與H2分別為髮夾1與髮夾2。H1與H2統稱為髮夾區。該結構之模型在WO2019237069之圖10A中提供，該文件係以引用的方式併入本文中。
例示性SpyCas9 sgRNA-1之核苷酸序列可用作特定化學修飾、序列取代及截短之模板序列。
在某些實施例中，gRNA為例如sgRNA或dgRNA，且其視情況包含化學修飾。在一些實施例中，經修飾之sgRNA包含向導序列及SpyCas9 sgRNA序列，例如例示性SpyCas9 sgRNA-1。gRNA (諸如sgRNA)可在向導序列之5’端上或SpyCas9 sgRNA序列之3’端上包括修飾，諸如在一或多個末端核苷酸處之例示性SpyCas9 sgRNA-1，例如在3’端或5’端之1、2、3或4個核苷酸處。在某些實施例中，經修飾之核苷酸選自2’-O-甲基(2’-OMe)修飾之核苷酸、2’-O-(2-甲氧基乙基) (2’-O-moe)修飾之核苷酸、2’-氟(2’-F)修飾之核苷酸、核苷酸之間的硫代磷酸酯(PS)鍵聯或反向無鹼基修飾之核苷酸；或其組合。在某些實施例中，經修飾之核苷酸包括2’-OMe修飾之核苷酸。在某些實施例中，修飾之核苷酸包括PS鍵聯。在某些實施例中，經修飾之核苷酸包括2’-OMe修飾之核苷酸及PS鍵聯。
在某些實施例中，使用SEQ ID NO: 226 (「例示性SpyCas9 sgRNA-1」)作為實例，例示性SpyCas9 sgRNA-1進一步包括以下中之一或多者：(A)縮短之髮夾1區或經取代且視情況縮短之髮夾1區，其中(1)髮夾1中以下核苷酸對中之至少一者經沃森-克里克(Watson-Crick)配對核苷酸取代：H1-1及H1-12、H1-2及H1-11、H1-3及H1-10或H1-4及H1-9，且該髮夾1區視情況缺少 (a) H1-5至H1-8中之任一者或兩者， (b)以下核苷酸對中之一者、兩者或三者：H1-1及H1-12、H1-2及H1-11、H1-3及H1-10及H1-4及H1-9，或(c)髮夾1區之1-8個核苷酸；或(2)該縮短之髮夾1區缺少4-8個核苷酸、較佳4-6個核苷酸，且(a)相對於例示性SpyCas9 sgRNA-1 (SEQ ID NO: 226)，位置H1-1、H1-2或H1-3中之一或多者缺失或經取代，或(b)相對於例示性SpyCas9 sgRNA-1 (SEQ ID NO: 226)，位置H1-6至H1-10中之一或多者經取代；或(3)該縮短之髮夾1區缺少5-10個核苷酸、較佳5-6個核苷酸，且相對於例示性SpyCas9 sgRNA-1 (SEQ ID NO: 226)，位置N18、H1-12或n中之一或多者經取代；或(B)縮短之上莖區，其中該縮短之上莖區缺少1-6個核苷酸且其中相對於例示性SpyCas9 sgRNA-1 (SEQ ID NO: 226)，該縮短之上莖區之6、7、8、9、10或11個核苷酸包括少於或等於4個取代；或(C)相對於例示性SpyCas9 sgRNA-1 (SEQ ID NO: 226)，在LS6、LS7、US3、US10、B3、N7、N15、N17、H2-2及H2-14中之任一或多者處之取代，其中取代基核苷酸既不為後面為腺嘌呤之嘧啶，亦不為前面為嘧啶之腺嘌呤；或(D)具有上莖區之例示性SpyCas9 sgRNA-1 (SEQ ID NO: 226)，其中上莖修飾包含對該上莖區中之US1-US12中之任一或多者之修飾，其中(1)經修飾之核苷酸視情況選自2’-O-甲基(2’-OMe)修飾之核苷酸、2’-O-(2-甲氧基乙基) (2’-O-moe)修飾之核苷酸、2’-氟(2’-F)修飾之核苷酸、核苷酸之間的硫代磷酸酯(PS)鍵聯、反向無鹼基修飾之核苷酸或其組合；或(2)經修飾之核苷酸視情況包括2’-OMe修飾之核苷酸。
在一些實施例中，sgRNA包含本文所揭示之經修飾之模體，包括SEQ ID NO: 228-242及246-250、312-314中之任一者之經修飾模體或序列表格中所示之任何其他經修飾之模體，其中「N」可為任何天然或非天然核苷酸、較佳RNA核苷酸；核苷酸之糖部分可為核糖、去氧核糖或具有取代之類似化合物；m為2’-O-甲基修飾之核苷酸，且*為與毗鄰核苷酸殘基之硫代磷酸酯鍵聯；且其中N共同為向導序列之核苷酸序列。
在某些實施例中，使用SEQ ID NO: 400 (如表20中所示之「例示性NmeCas9 sgRNA-1」)作為實例，例示性NmeCas9 sgRNA-1包括：(A)向導RNA (gRNA)，其包含向導區及保守區，該保守區包含以下中之一或多者：(a)縮短之重複序列/抗重複序列區，其中該縮短之重複序列/抗重複序列區缺少2-24個核苷酸，其中(i)相對於SEQ ID NO: 400，核苷酸37-48及53-64中之一或多者缺失且視情況核苷酸37-64中之一或多者經取代；及(ii)核苷酸36由至少2個核苷酸連接至核苷酸65；或(b)縮短之髮夾1區，其中該縮短之髮夾1缺少2-10個、視情況2-8個核苷酸，其中(i)相對於SEQ ID NO: 400，核苷酸82-86及91-95中之一或多者缺失且視情況位置82-96中之一或多者經取代；及(ii)核苷酸81由至少4個核苷酸連接至核苷酸96；或(c)縮短之髮夾2區，其中該縮短之髮夾2缺少2-18個、視情況2-16個核苷酸，其中(i)相對於SEQ ID NO: 400，核苷酸113-121及126-134中之一或多者缺失且視情況核苷酸113-134中之一或多者經取代；及(ii)核苷酸112由至少4個核苷酸連接至核苷酸135；其中相對於SEQ ID NO: 400，一個或全部兩個核苷酸144-145視情況缺失；其中視情況至少10個核苷酸為經修飾之核苷酸。
例示性未經修飾之保守部分核苷酸序列包括：GUUGUAGCUCCCUUUCUCAUUUCGGAAACGAAAUGAGAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCUGAAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCCCUUAAAGCUUCUGCUUUAAGGGGCAUCGUUUA (SEQ ID NO: 243)；GUUGUAGCU CCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU (SEQ ID NO: 244)，及GUUGUAGCUCCCU GGAAACCCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUUUAUU (SEQ ID NO: 245)。
在sgRNA之情形下，可將向導序列整合至以下例示性經修飾之保守部分模體中之一者中：GUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCG UUmGmCUAmCAAU*AAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGCmAmAmCmGCUCUmGmCCmUmUmCmUGmGCmAmUC*mG*mU*mU (SEQ ID NO: 246)及GUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUm GmCUAmCAAU*AAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 247)。
在某些實施例中，向導序列之長度為20-25個核苷酸((N)20-25)，其中每一核苷酸可獨立地經修飾。在某些實施例中，向導5’端之核苷酸1-3中之每一者獨立地經修飾。在某些實施例中，向導5’端之核苷酸1-3中之每一者獨立地經2’-OMe修飾修飾。在某些實施例中，向導5’端之核苷酸1-3中之每一者獨立地經與毗鄰核苷酸殘基之硫代磷酸酯鍵聯修飾。在某些實施例中，向導5’端之核苷酸1-3中之每一者獨立地經2’-OMe修飾及與毗鄰核苷酸殘基之硫代磷酸酯鍵聯修飾。
在sgRNA之情形下，可將經修飾之向導序列整合至以下例示性經修飾之保守部分模體中之一者中：mN*mNNNNNNNNmNNNmNNNNNNN NNNNNmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAU*AAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGCmAmAmCmGCUCUmGmCCmUmUmCmUGmGCmAmUC*mG*mU*mU (SEQ ID NO: 248)；(N) 20-25GUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCU AmCAAU*AA GmGmCCmGmUmCmGm AmAmAmGmAmUGUGC mCGCmAm AmCmGCUCUmGmCCmUmUmCmUGmGCmAmUC*mG*mU*mU (SEQ ID NO: 249)；mN*mN*mN*mNmNNNmNmNNmNNmNNNNNmNNNNmNNNmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAU*AAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 250)；或mN*mN*mN*mNmNNNmN mNNmNNmNNNNNmNNNNmNNNmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAUAAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 312)、mN*mN*mN*mNmNNNmNmNNmNNmNNNNNmNNNN mNNNmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAU*AAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGmCmUmCmUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 313)；mN*mN*mN*mNmNNNmNmNNmNNmNNNNNmNNNNmNNNmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAUAAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGmCmUmCmUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 314)中之任一者。
在某些實施例中，例示性SpyCas9 sgRNA-1或sgRNA (諸如包含例示性SpyCas9 sgRNA-1之sgRNA)進一步包括3’尾，例如1、2、3、4或更多個核苷酸之3’尾。在某些實施例中，尾包括一或多個經修飾之核苷酸。在某些實施例中，經修飾之核苷酸選自2'-O-甲基(2'-OMe)修飾之核苷酸、2'-O-(2-甲氧基乙基)(2'-O-moe)修飾之核苷酸、2'-氟(2'-F)修飾之核苷酸、核苷酸之間的硫代磷酸酯(PS)鍵聯、反向無鹼基修飾之核苷酸；或其組合。在某些實施例中，經修飾之核苷酸包括2’-OMe修飾之核苷酸。在某些實施例中，經修飾之核苷酸包括核苷酸之間的PS鍵聯。在某些實施例中，經修飾之核苷酸包括2’-OMe修飾之核苷酸及核苷酸之間的PS鍵聯。
在某些實施例中，髮夾區包括一或多個經修飾之核苷酸。在某些實施例中，經修飾之核苷酸選自2'-O-甲基(2'-OMe)修飾之核苷酸、2'-O-(2-甲氧基乙基)(2'-O-moe)修飾之核苷酸、2'-氟(2'-F)修飾之核苷酸、核苷酸之間的硫代磷酸酯(PS)鍵聯、反向無鹼基修飾之核苷酸；或其組合。在某些實施例中，經修飾之核苷酸包括2’-OMe修飾之核苷酸。
在某些實施例中，上莖區包括一或多個經修飾之核苷酸。在某些實施例中，經修飾之核苷酸選自2'-O-甲基(2'-OMe)修飾之核苷酸、2'-O-(2-甲氧基乙基)(2'-O-moe)修飾之核苷酸、2'-氟(2'-F)修飾之核苷酸、核苷酸之間的硫代磷酸酯(PS)鍵聯、反向無鹼基修飾之核苷酸；或其組合。在某些實施例中，經修飾之核苷酸包括2’-OMe修飾之核苷酸。
在某些實施例中，例示性SpyCas9 sgRNA-1包含一或多個YA二核苷酸，其中Y為嘧啶，其中YA二核苷酸包括經修飾之核苷酸。在某些實施例中，經修飾之核苷酸選自2'-O-甲基(2'-OMe)修飾之核苷酸、2'-O-(2-甲氧基乙基)(2'-O-moe)修飾之核苷酸、2'-氟(2'-F)修飾之核苷酸、核苷酸之間的硫代磷酸酯(PS)鍵聯、反向無鹼基修飾之核苷酸或其組合。在某些實施例中，經修飾之核苷酸包括2’-OMe修飾之核苷酸。
在某些實施例中，例示性SpyCas9 sgRNA-1包含一或多個YA二核苷酸，其中Y為嘧啶，其中YA二核苷酸包括序列取代之核苷酸，其中嘧啶取代嘌呤。在某些實施例中，當嘧啶在單一向導中形成沃森-克里克鹼基對時，序列取代之嘧啶核苷酸之基於沃森-克里克之核苷酸經取代以維持沃森-克里克鹼基配對。
在一些實施例中，gRNA經化學修飾。包含一或多個經修飾核苷或核苷酸之gRNA稱為「經修飾之」gRNA或「經化學修飾之」gRNA，以描述一或多種非天然或天然組分或構形之存在，該等組分或構形用於代替或補充規範A、G、C及U殘基。在一些實施例中，用非規範核苷或核苷酸合成經修飾之gRNA，在此稱為「經修飾」。經修飾之核苷及核苷酸可包括以下中之一或多者：(i)改變(例如置換)磷酸二酯主鏈鍵聯中之一或兩個非連接性磷酸酯氧或一或多個連接性磷酸酯氧(例示性主鏈修飾)；(ii)改變(例如置換)核糖之組分(例如核糖上之2'羥基) (例示性糖修飾)；(iii)修飾或置換天然核鹼基，包括利用非規範核鹼基(例示性鹼基修飾)；及(iv)修飾寡核苷酸之3'端或5'端以提供外核酸酶穩定性，例如經2’ O-me、2’鹵化物或2’去氧取代之核糖修飾；或反向無鹼基末端核苷酸，或用硫代磷酸酯置換磷酸二酯。
化學修飾(諸如上文所列示之彼等修飾)可經組合以提供經修飾之gRNA或mRNA，其包含可具有兩個、三個、四個或更多個修飾之核苷及核苷酸(統稱為「殘基」)。舉例而言，經修飾之殘基可具有經修飾之糖及經修飾之核鹼基。在某些實施例中，gRNA分子之所有或實質上所有磷酸酯基團經硫代磷酸酯基團置換。在一些實施例中，經修飾之gRNA在RNA之5'端處或附近包含至少一個經修飾之殘基。在一些實施例中，經修飾之gRNA在RNA之3'端處或附近包含至少一個經修飾之殘基。
在一些實施例中，gRNA包含一個、兩個、三個或更多個經修飾之殘基。在一些實施例中，經修飾之gRNA中至少5% (例如至少5%、10%、15%、較佳至少20%、25%、30%、35%、40%、45%或50%)之位置為經修飾之核苷或核苷酸。在一些實施例中，經修飾之向導RNA中至少5%之位置為經修飾之核苷酸或核苷。在一些實施例中，經修飾之向導RNA中至少10%之位置為經修飾之核苷酸或核苷。在一些實施例中，經修飾之gRNA中至少15%之位置為經修飾之核苷酸或核苷。在一些實施例中，經修飾之gRNA中較佳至少20%之位置為經修飾之核苷酸或核苷。在一些實施例中，經修飾之gRNA中不超過65%之位置為經修飾之核苷酸。在一些實施例中，經修飾之gRNA中不超過55%之位置為經修飾之核苷酸。在一些實施例中，經修飾之gRNA中不超過50%之位置為經修飾之核苷酸。在一些實施例中，經修飾之gRNA中10%-70%之位置為經修飾之核苷酸。在一些實施例中，經修飾之gRNA中20%-70%之位置為經修飾之核苷酸。在一些實施例中，經修飾之gRNA中20%-50%之位置為經修飾之核苷酸，且核酸酶為SpyCas9核酸酶。在一些實施例中，經修飾之gRNA中30%-70%之位置為經修飾之核苷酸，且核酸酶為NmeCas9核酸酶。
未經修飾之核酸可易於由例如細胞內核酸酶或血清中所發現之彼等核酸酶降解。舉例而言，核酸酶可水解核酸磷酸二酯鍵。因此，在一態樣中，本文所闡述之gRNA可含有一或多種經修飾之核苷或核苷酸，例如以引入對細胞內或基於血清之核酸酶之穩定性。在一些實施例中，本文所闡述之經修飾之gRNA分子在活體內及離體引入至細胞群體中時，可展現出降低之先天性免疫反應。術語「先天性免疫反應」包括對外源核酸(包括單股核酸)之細胞反應，其涉及誘導細胞介素(特定而言干擾素)表現及釋放，以及細胞死亡。
在主鏈修飾之一些實施例中，經修飾殘基之磷酸酯基團可藉由用不同的取代基置換一或多個氧而經修飾。此外，經修飾之殘基(例如經修飾核酸中所存在之經修飾之殘基)可包括用如本文所闡述之經修飾之磷酸酯基團置換未經修飾之磷酸酯部分。在一些實施例中，磷酸酯主鏈之主鏈修飾可包括產生不帶電連接體或具有不對稱電荷分佈之帶電連接體之改變。
經修飾之磷酸酯基團之實例包括硫代磷酸酯、硼烷基磷酸酯、甲基膦酸酯、胺基磷酸酯、二硫代磷酸酯、烷基或芳基膦酸酯及磷酸三酯。未經修飾之磷酸酯基團中之磷原子為非手性的。然而，用上述原子或原子群中之一者置換非橋接氧中之一者可使磷原子具有手性。立體源磷原子可具有「R」構形(本文為Rp)或「S」構形(本文為Sp)。亦可藉由用氮(橋接胺基磷酸酯)、硫(橋接硫代磷酸酯)及碳(橋接亞甲基膦酸酯)置換橋接氧(亦即，將磷酸酯與核苷連接之氧)來修飾主鏈。置換可在任一連接氧或在兩個連接氧處發生。
在某些主鏈修飾中，磷酸酯基團可由不含磷之連接基團(例如醯胺鍵聯)置換。在一些實施例中，帶電之磷酸酯基團可由中性部分置換。可置換磷酸酯基團之部分之實例可包括(但不限於)例如甲基膦酸酯、羧基甲基、胺基甲酸酯、醯胺、硫醚。可置換磷酸酯基團之部分之其他實例可包括(但不限於)例如環氧乙烷連接體、磺酸酯、磺醯胺、硫代甲縮醛、甲縮醛、亞甲基亞胺基、亞甲基甲基亞胺基、亞甲基伸肼基、亞甲基二甲基伸肼基及亞甲基氧基甲基亞胺基。
可模擬核酸之支架亦可經構築，其中磷酸酯連接體及核糖由核酸酶抗性核苷或核苷酸替代物置換。此等修飾可包含主鏈及糖修飾。在一些實施例中，核鹼基可由替代主鏈束縛。實例可包括(但不限於)嗎啉基、環丁基、吡咯啶及肽核酸(PNA)核苷替代物。
經修飾之核苷及經修飾之核苷酸可包括對糖基團之一或多種修飾，亦即糖修飾。舉例而言，2'羥基(OH)可經修飾，例如經多種不同「氧基」或「去氧」取代基置換。在一些實施例中，對2'羥基之修飾可增強核酸之穩定性，此乃因羥基不再能被去質子化以形成2'-醇鹽離子。
2'羥基修飾之實例可包括烷氧基或芳基氧基(OR，其中「R」可為例如烷基、環烷基、芳基、芳烷基、雜芳基或糖)；聚乙二醇(PEG)、O(CH2CH2O)nCH2CH2OR，其中R可為例如H或視情況經取代之烷基，且n可為0至20之整數(例如0至4、0至8、0至10、0至16、1至4、1至8、1至10、1至16、1至20、2至4、2至8、2至10、2至16、2至20、4至8、4至10、4至16及4至20)。在一些實施例中，2'羥基修飾可為2'-O-Me。在一些實施例中，2'羥基修飾可為2'-氟修飾，其用氟化物置換2'羥基。在一些實施例中，2'羥基修飾可包括「鎖」核酸(LNA)，其中2'羥基可(例如)由 C1-6伸烷基或C1-6伸雜烷基橋連結至同一核糖之4'碳，其中例示性橋可包括亞甲基、伸丙基、醚或胺基橋；O-胺基(其中胺基可為例如NH2；烷基胺基、二烷基胺基、雜環基、芳基胺基、二芳基胺基、雜芳基胺基或二雜芳基胺基、乙二胺或多胺基)及胺基烷氧基、O(CH2)n-胺基(其中胺基可為例如NH2；烷基胺基、二烷基胺基、雜環基、芳基胺基、二芳基胺基、雜芳基胺基或二雜芳基胺基、乙二胺或多胺基)。在一些實施例中，2'羥基修飾可包括「解鎖」核酸(UNA)，其中核糖環缺少C2'-C3'鍵。在一些實施例中，2'羥基修飾可包括甲氧基乙基(MOE)、(OCH2CH2OCH3，例如PEG衍生物)。2'修飾可包括氫(亦即去氧核糖)；鹵基(例如溴、氯、氟或碘)；胺基(其中胺基可為例如NH2；烷基胺基、二烷基胺基、雜環基、芳基胺基、二芳基胺基、雜芳基胺基、二雜芳基胺基或胺基酸)；NH(CH2CH2NH)nCH2CH2-胺基(其中胺基可例如如本文所闡述)、-NHC(O)R (其中R可為例如烷基、環烷基、芳基、芳烷基、雜芳基或糖)、氰基；巰基；烷基-硫基-烷基；硫烷氧基；及烷基、環烷基、芳基、烯基及炔基，其可視情況經(例如)如本文所闡述之胺基取代。
糖修飾可包含糖基團，該糖基團亦可含有一或多個所具有之立體化學構形與核糖中相應碳之立體化學構形相反之碳。因此，經修飾之核酸可包括含有例如阿拉伯糖作為糖之核苷酸。經修飾之核酸亦可包括無鹼基糖。此等無鹼基糖亦可在一或多個組成糖原子處進一步經修飾。經修飾之核酸亦可包括一或多種呈L形式之糖，例如L-核苷酸。如本文所用，單一無鹼基糖不應理解為導致雙鏈體中斷。
在某些實施例中，2’修飾包括例如包括2’-OMe、2’-F、2’-H、視情況2’-O-Me之修飾。
可併入至經修飾之核酸中的本文所闡述之經修飾核苷及經修飾核苷酸可包括經修飾之鹼基，亦稱為核鹼基。核鹼基之實例包括(但不限於)腺嘌呤(A)、鳥嘌呤(G)、胞嘧啶(C)及尿嘧啶(U)。該等核鹼基可經修飾或完全經置換，以提供可併入至經修飾之核酸中的經修飾殘基。核苷酸之核鹼基可獨立地選自嘌呤、嘧啶、嘌呤類似物或嘧啶類似物。在一些實施例中，核鹼基可包括例如鹼基之天然及合成衍生物。
在採用雙向導RNA之實施例中，crRNA及tracr RNA中之每一者均可含有修飾。此等修飾可在crRNA或tracr RNA之一端或兩端。在包含sgRNA之實施例中，可化學修飾位於sgRNA之一端或兩端之一或多個殘基，或可修飾內部核苷，或可化學修飾整個sgRNA。某些實施例包含5'端修飾。某些實施例包含3'端修飾。某些實施例包含5’端修飾及3’端修飾。
在一些實施例中，本文所揭示之向導RNA包含WO2018/107028中所揭示之修飾模式之一，其內容係以全文引用的方式併入本文中。在一些實施例中，本文所揭示之向導RNA包含US20170114334中所揭示之結構/修飾模式之一，其內容係以全文引用的方式併入本文中。在一些實施例中，本文所揭示之向導RNA包含WO2017/136794中所揭示之結構/修飾模式之一，其內容係以全文引用的方式併入本文中。在一些實施例中，本文所揭示之向導RNA包含WO2019/237069中所揭示之結構/修飾模式之一，其內容係以全文引用的方式併入本文中。在一些實施例中，本文所揭示之向導RNA包含WO2021/119275中所揭示之結構/修飾模式之一，其內容係以全文引用的方式併入本文中。在一些實施例中，本文所揭示之向導RNA包含美國申請案第63/275,426號中所揭示之結構/修飾模式之一，其內容係以全文引用的方式併入本文中。 C. 用於 AAVS1 編輯之例示性向導 RNA 、組合物、方法及工程化細胞
本揭示案提供靶向AAVS1基因座之向導RNA。靶向AAVS1基因座之向導序列以SEQ ID NO: 251-264示於 表 5中。
在一些實施例中，根據來自人類參考基因體hg38之坐標，向導序列與下 表 5中所示之相應基因體區互補。其他實施例之向導序列可與緊密靠近 表 5中所列示之基因體坐標之序列互補。舉例而言，其他實施例之向導序列可與包含表5中所列示基因體坐標之15個連續核苷酸±10個核苷酸之序列互補。
在一些實施例中，向導序列可進一步包含其他核苷酸以形成sgRNA，例如在向導序列3’端後之以下例示性核苷酸序列：5’至3’定向之GUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 227)。向導序列可進一步包含其他核苷酸以形成sgRNA。
在一些實施例中，sgRNA包含下文在SEQ ID NO: 141中所示之修飾模式，其中N為任何天然或非天然核苷酸，且其中N之總體包含如本文所闡述之向導序列且經修飾之sgRNA包含以下序列：mN*mN*mN*NNNNN NNNNNNNNNNNNGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU (SEQ ID NO: 228)，其中「N」可為任何天然或非天然核苷酸。舉例而言，本文涵蓋SEQ ID NO: 228，其中N經本文所揭示之任一向導序列置換。儘管用向導之核苷酸取代N，但修飾仍如SEQ ID NO: 141中所示。亦即，儘管向導之核苷酸置換「N」，但前三個核苷酸為2’OMe修飾的，且在第一與第二核苷酸之間、第二與第三核苷酸之間及第三與第四核苷酸之間存在硫代磷酸酯鍵聯。
在一些實施例中，靶向TRAC之gRNA包含選自以下之向導序列：i) SEQ ID NO: 251-264；ii)選自SEQ ID NO: 251-264之序列之至少17、18、19或20個鄰接核苷酸；iii)與選自SEQ ID NO: 251-264之序列至少95%、90%或85%一致之向導序列；iv)包含 表 5中所列示之基因體坐標之10個鄰接核苷酸±10個核苷酸之序列；v)來自(iv)之序列之至少17、18、19或20個鄰接核苷酸；或vi)與選自(v)之序列至少95%、90%或85%一致之向導序列。
在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 251。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 252。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 253。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 254。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 255。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 256。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 257。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 258。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 259。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 260。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 261。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 262。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 263。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 264。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 265。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 266。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 267。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 268。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 269。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 270。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 271。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 272。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 273。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 274。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 275。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 276。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 277。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 278。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 279。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 280。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 281。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 282。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 283。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 284。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 285。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 286。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 287。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 288。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 289。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 290。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 291。在一些實施例中，向導序列包含SEQ ID NO: 292。 表 5. AAVS1 向導序列、向導 RNA 序列及染色體坐標
向導 ID 向導序列之 SEQ ID NO 向導序列 例示性全序列 (SEQ ID NO: 265-278) 例示性經修飾序列 (SEQ ID NO: 279-292) 基因體坐標 (hg38)
G000562 251 CCAAUAUCAGGAGACUAGGA CCAAUAUCAGGAGACUAGGAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU mC*mC*mA*AUAUCAGGAGACUAGGAGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU chr19:55115695-55115715
G013515 252 CCAUCGUAAGCAAACCUUAG CCAUCGUAAGCAAACCUUAGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU mC*mC*mA*UCGUAAGCAAACCUUAGGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU chr19:55115588-55115608
G013519 253 GCAAGGAGAGAGAUGGCUCC GCAAGGAGAGAGAUGGCUCCGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU mG*mC*mA*AGGAGAGAGAUGGCUCCGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU chr19:55115616-55115636
G013520 254 GAGAGAUGGCUCCAGGAAAU GAGAGAUGGCUCCAGGAAAUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU mG*mA*mG*AGAUGGCUCCAGGAAAUGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU chr19:55115623-55115643
G013523 255 GGUGACACACCCCCAUUUCC GGUGACACACCCCCAUUUCCGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU mG*mG*mU*GACACACCCCCAUUUCCGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU chr19:55115637-55115657
G013533 256 AGACCCAAUAUCAGGAGACU AGACCCAAUAUCAGGAGACUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU mA*mG*mA*CCCAAUAUCAGGAGACUGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU chr19:55115691-55115711
G013543 257 UGUCCCUAGUGGCCCCACUG UGUCCCUAGUGGCCCCACUGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU mU*mG*mU*CCCUAGUGGCCCCACUGGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU chr19:55115755-55115775
G013559 258 CCGGCCCUGGGAAUAUAAGG CCGGCCCUGGGAAUAUAAGGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU mC*mC*mG*GCCCUGGGAAUAUAAGGGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU chr19:55115823-55115843
G013562 259 AAUAUAAGGUGGUCCCAGCU AAUAUAAGGUGGUCCCAGCUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU mA*mA*mU*AUAAGGUGGUCCCAGCUGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU chr19:55115834-55115854
G013563 260 AUAUAAGGUGGUCCCAGCUC AUAUAAGGUGGUCCCAGCUCGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU mA*mU*mA*UAAGGUGGUCCCAGCUCGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU chr19:55115835-55115855
G013564 261 UAUAAGGUGGUCCCAGCUCG UAUAAGGUGGUCCCAGCUCGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU mU*mA*mU*AAGGUGGUCCCAGCUCGGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU chr19:55115836-55115856
G013565 262 GGAUCCUGUGUCCCCGAGCU GGAUCCUGUGUCCCCGAGCUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU mG*mG*mA*UCCUGUGUCCCCGAGCUGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU chr19:55115850-55115870
G013582 263 CCUGUCAUGGCAUCUUCCAG CCUGUCAUGGCAUCUUCCAGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU mC*mC*mU*GUCAUGGCAUCUUCCAGGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU chr19:55115951-55115971
G013584 264 CCCUGGAAGAUGCCAUGACA CCCUGGAAGAUGCCAUGACAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU mC*mC*mC*UGGAAGAUGCCAUGACAGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU chr19:55115949-55115969
如本文所用，術語「mA」、「mC」、「mU」或「mG」表示經2’-O-Me修飾之核苷酸；「*」表示PS修飾；術語A*、C*、U*或G*表示以PS鍵連接至 下一個(例如3’)核苷酸之核苷酸。
在一些實施例中，本文提供組合物，其包含：a. gRNA，其包含選自以下之向導序列：i) SEQ ID NO: 251-264；ii)選自SEQ ID NO: 251-264之序列之至少17、18、19或20個鄰接核苷酸；iii)與選自SEQ ID NO: 251-264之序列至少95%、90%或85%一致之向導序列；iv)包含 表 5中所列示之基因體坐標之10個鄰接核苷酸±10個核苷酸之序列；v)來自(iv)之序列之至少17、18、19或20個鄰接核苷酸；或vi)與選自(v)之序列至少95%、90%或85%一致之向導序列；或b.編碼(a.)之gRNA之核酸。
在一些實施例中，本文提供改變AAVS1基因內之DNA序列之方法，其包括向細胞遞送：a. gRNA，其包含選自以下之向導序列：i) SEQ ID NO: 251-264；ii)選自SEQ ID NO: 251-264之序列之至少17、18、19或20個鄰接核苷酸；iii)與選自SEQ ID NO: 251-264之序列至少95%、90%或85%一致之向導序列；iv)包含 表 5中所列示之基因體坐標之10個鄰接核苷酸±10個核苷酸之序列；v)來自(iv)之序列之至少17、18、19或20個鄰接核苷酸；或vi)與選自(v)之序列至少95%、90%或85%一致之向導序列；或b.編碼(a.)之gRNA之核酸。
在一些實施例中，本文提供免疫療法方法，其包括向個體投與包含工程化細胞之組合物，其中該細胞包含AAVS1基因中之基因體修飾，其中遺傳修飾包含選自以下之基因體坐標內之插入：chr19:55115695-55115715；chr19:55115588-55115608；chr19:55115616-55115636；chr19:55115623-55115643；chr19:55115637-55115657；chr19:55115691-55115711；chr19: 55115755-55115775；chr19:55115823-55115843；chr19:55115834-55115854；chr19:55115835-55115855；chr19:55115836-55115856；chr19:55115850-55115870；chr19:55115951-55115971；及chr19:55115949-55115969；或其中藉由向該細胞中遞送以下物質使該細胞工程化：a. gRNA，其包含選自以下之向導序列：i) SEQ ID NO: 251-264；ii)選自SEQ ID NO: 251-264之序列之至少17、18、19或20個鄰接核苷酸；iii)與選自SEQ ID NO: 251-264之序列至少95%、90%或85%一致之向導序列；iv)包含 表 5中所列示之基因體坐標之10個鄰接核苷酸±10個核苷酸之序列；v)來自(iv)之序列之至少17、18、19或20個鄰接核苷酸；或vi)與選自(v)之序列至少95%、90%或85%一致之向導序列；或b.編碼(a.)之gRNA之核酸。
在一些實施例中，本文提供工程化細胞，其包含AAVS1基因中之遺傳修飾，其中該遺傳修飾包含選自以下之基因體坐標內之插入：chr19:55115695-55115715；chr19:55115588-55115608；chr19:55115616-55115636；chr19:55115623-55115643；chr19:55115637-55115657；chr19: 55115691-55115711；chr19:55115755-55115775；chr19:55115823-55115843；chr19:55115834-55115854；chr19:55115835-55115855；chr19:55115836-55115856；chr19:55115850-55115870；chr19:55115951-55115971；及chr19: 55115949-55115969。 D. 供體核酸
本文所揭示之組合物及方法可包括供體核酸，亦即編碼外源基因之模板核酸。供體/模板核酸可用於在Cas核酸酶之靶位點或其附近(諸如在遺傳基因座處)改變或插入外源基因。在一些實施例中，該等方法包括將模板引入至細胞中。在一些實施例中，可提供單一模板。在其他實施例中，可提供兩個或更多個模板，使得編輯可在兩個或更多個靶位點處發生。舉例而言，可提供不同模板以編輯細胞中之單一基因或細胞中之兩種不同基因。在一些實施例中，本文所揭示之組合物及方法包括編碼用於插入至TRAC、AAVS1或CIITA基因座中之外源基因之模板核酸。
在一些實施例中，模板可用於同源重組。在一些實施例中，同源重組可使得模板序列或模板序列之一部分整合至靶序列中。在其他實施例中，模板可用於同源定向修復，其涉及在靶序列中之裂解位點處之DNA股侵入。在一些實施例中，同源定向修復可導致在所編輯之靶序列中包括模板序列。在其他實施例中，模板可用於由非同源末端接合介導之基因編輯。在一些實施例中，模板序列與裂解位點附近之靶序列沒有相似性。在一些實施例中，併入模板或模板序列之一部分。在一些實施例中，模板包括側翼反向末端重複序列(ITR)。
在一些實施例中，模板可包含分別與位於裂解位點上游及下游之序列互補的第一同源臂及第二同源臂(亦稱為第一及第二核苷酸序列)。在模板含有兩個同源臂之情形下，每一臂可具有相同長度或不同長度，且同源臂之間的序列可與同源臂之間的靶序列實質上相似或一致，或其可完全不相關。在一些實施例中，模板上之第一核苷酸序列與裂解位點上游之序列之間以及模板上之第二核苷酸序列與裂解位點下游之序列之間的互補性程度或一致性百分比可允許在模板與靶核酸分子之間進行同源重組，諸如高保真同源重組。在一些實施例中，互補性程度可為約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%、99%或100%。在一些實施例中，互補性程度可為約95%、97%、98%、99%或100%。在一些實施例中，互補性程度可為至少98%、99%或100%。在一些實施例中，互補性程度可為100%。在一些實施例中，一致性百分比可為約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%、99%或100%。在一些實施例中，一致性百分比可為約95%、97%、98%、99%或100%。在一些實施例中，一致性百分比可為至少98%、99%或100%。在一些實施例中，一致性百分比可為100%。
在一些實施例中，模板序列可對應於、包含或由靶細胞之內源序列組成。其亦可或替代地對應於、包含或由靶細胞之外源序列組成。如本文所用，術語「內源序列」係指對於細胞為天然之序列。術語「外源序列」係指對於細胞不為天然之序列，或其在細胞基因體中之天然位置為不同位置之序列。在一些實施例中，內源序列可為細胞之基因體序列。在一些實施例中，內源序列可為染色體或染色體外序列。在一些實施例中，內源序列可為細胞之質體序列。在一些實施例中，模板序列可與細胞中裂解位點處或附近之內源序列之一部分實質上一致，但包含至少一個核苷酸變化。在一些實施例中，用模板編輯裂解之靶序列可導致突變，其包含靶序列之一或多個核苷酸之插入、缺失或取代。在一些實施例中，突變可導致由包含靶序列之基因表現的蛋白質中之一或多個胺基酸變化。
在一些實施例中，突變可導致由靶插入位點表現之RNA中之一或多個核苷酸變化。在一些實施例中，突變可改變靶基因之表現水準。在一些實施例中，突變可導致靶基因之表現增加或減少。在一些實施例中，突變可導致基因敲低。在一些實施例中，突變可導致基因敲除。在一些實施例中，突變可使得基因功能恢復。在一些實施例中，用模板編輯裂解之靶核酸分子 可導致靶核酸分子(諸如DNA)之外顯子序列、內含子序列、調控序列、轉錄控制序列、轉譯控制序列、剪接位點或非編碼序列之變化。
在其他實施例中，模板序列可包含外源序列。在一些實施例中，外源序列可包含編碼序列。在一些實施例中，外源序列可包含可操作地連接至外源啟動子序列之蛋白質或RNA編碼序列(例如ORF)，使得在將外源序列整合至靶序列中後，細胞能夠表現由所整合之序列編碼之蛋白質或RNA。在其他實施例中，在將外源序列整合至靶核酸分子中後，所整合序列之表現可由內源性啟動子序列調控。在一些實施例中，外源序列可提供編碼蛋白質或蛋白質之一部分之cDNA序列。在其他實施例中，外源序列可包含以下序列或由以下序列組成：外顯子序列、內含子序列、調控序列、轉錄控制序列、轉譯控制序列、剪接位點或非編碼序列。在一些實施例中，整合外源序列可使得基因功能恢復。在一些實施例中，整合外源序列可導致基因敲入。在一些實施例中，整合外源序列可導致基因敲除。
模板可具有任何適宜長度。在一些實施例中，模板可包含長度為10、15、20、25、50、75、100、150、200、500、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000或更多個核苷酸。模板可為單股核酸。模板可為雙股或部分雙股核酸。在一些實施例中，單股模板之長度為20、30、40、50、75、100、125、150、175或200個核苷酸。在一些實施例中，模板可包含與構成靶序列之靶序列之一部分互補之核苷酸序列(亦即「同源臂」)。在一些實施例中，模板可包含與位於靶序列上裂解位點上游或下游之序列互補之同源臂。
在一些實施例中，模板含有ssDNA或dsDNA，其含有側翼反向末端重複序列(ITR)。在一些實施例中，模板以載體、質體、微環、奈米環或PCR產物形式提供。 VII. 脂質核酸組裝體
以下部分提供基於脂質之遞送組合物之其他特徵，包括脂質奈米顆粒(LNP)及脂質複合物(lipoplex)，其用於第一基因體編輯工具、第二基因體編輯工具或編碼其之核酸。在一些實施例中，第一基因體編輯工具、第二基因體編輯工具或編碼其之核酸係經由至少一種脂質奈米顆粒(LNP)遞送至細胞。在一些實施例中，第一基因體編輯工具、第二基因體編輯工具或編碼其之核酸含於至少一種LNP中。
在一些實施例中，LNP係指如藉由動態光散射所量測，直徑＜100 nm之脂質奈米顆粒，或平均直徑＜100 nm之LNP群體。在一些實施例中，粒徑為數量平均值。在一些實施例中，粒徑為Z平均值。在某些實施例中，如藉由動態光散射所量測，LNP之直徑為約1-250 nm、10-200 nm、約20-150 nm、約35-150 nm、約50-150 nm、約50-100 nm、約50-120 nm、約60-100 nm、約75-150 nm、約75-120 nm或約75-100 nm，或LNP群體之平均直徑為約10-200 nm、約20-150 nm、約35-150 nm、約50-150 nm、約50-100 nm、約50-120 nm、約60-100 nm、約75-150 nm、約75-120 nm或約75-100 nm。在較佳實施例中，LNP組合物之直徑為75-150 nm。
LNP係藉由將脂質組分(例如於乙醇中)與水性核酸組分精確混合來形成，且LNP之大小均勻。脂質複合物係藉由大量混合脂質及核酸組分所形成之顆粒，且大小介於約100 nm與1微米之間。在某些實施例，脂質核酸組裝體為LNP。如本文所用，「脂質核酸組裝體」包含複數個(亦即一個以上)藉由分子間力彼此物理締合之脂質分子。脂質核酸組裝體可包含pKa值＜ 7.5或＜ 7之生物可利用脂質。脂質核酸組裝體係藉由混合含水性核酸之溶液與基於有機溶劑之脂質溶液(例如100%乙醇)來形成。適宜溶液或溶劑包括或可含有： 水、PBS、Tris緩衝液、NaCl、檸檬酸鹽緩衝液、乙醇、氯仿、二乙醚、環己烷、四氫呋喃、甲醇、異丙醇。醫藥學上可接受之緩衝液可視情況包含在包含脂質核酸組裝體之醫藥調配物中，例如用於離體ACT療法。在一些實施例中，水溶液包含RNA，諸如mRNA或gRNA。在一些實施例中，水溶液包含編碼RNA引導之DNA結合劑(諸如Cas9)之mRNA。
在一些實施例中，脂質核酸組裝體調配物包括「胺脂質」 (有時在此或別處描述為「可電離脂質」或「生物可降解脂質」)，以及視情況存在之「輔助脂質」、「中性脂質」及隱形脂質，諸如PEG脂質。在一些實施例中，端視於pH而定，胺脂質或可電離脂質係陽離子的。 A. 胺脂質
在一些實施例中，LNP包含「胺脂質」，其為例如可電離脂質，諸如脂質A，或脂質D或其等效形式，包括脂質A或脂質D之縮醛類似物。
在一些實施例中，胺脂質為脂質A，其為(9Z,12Z)-十八-9,12-二烯酸3-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)-2-((((3-(二乙基胺基)丙氧基)羰基)氧基)甲基)丙基酯((9Z,12Z)-3-((4,4-bis(octyloxy)butanoyl)oxy)-2-((((3-(diethylamino) propoxy)carbonyl)oxy)methyl)propyl octadeca-9,12-dienoate，亦稱為3-((4,4-bis(octyloxy)butanoyl)oxy)-2-((((3-(diethylamino)propoxy)carbonyl)oxy)methyl) propyl (9Z,12Z)-octadeca-9,12-dienoate)。脂質A可繪示為： 。
脂質A可根據WO2015/095340 (例如第84-86頁)來合成。在一些實施例中，胺脂質為脂質A，或WO2020/219876中所提供之胺脂質，該案係以引用的方式併入本文中。
在一些實施例中，胺脂質為脂質A之類似物。在一些實施例中，脂質A類似物為脂質A之縮醛類似物。在特定LNP中，縮醛類似物為C4-C12縮醛類似物。在一些實施例中，縮醛類似物為C5-C12縮醛類似物。在其他實施例中，縮醛類似物為C5-C10縮醛類似物。在其他實施例中，縮醛類似物選自：C4、C5、C6、C7、C9、C10、C11及C12縮醛類似物。
在一些實施例中，胺脂質為具有式IA結構之化合物 (IA)， 其中 X1A為O、NH或直接鍵； X2A為C2-3伸烷基； R3A為C1-3烷基； R2A為C1-3烷基，或 R2A與其所連接之氮原子及X2A之2-3個碳原子一起形成5員或6員環，或 R2A與R3A及其所連接之氮原子一起形成5員環； Y1A為C6-10伸烷基； Y2A選自 、 及 ； R4A為C4-11烷基； Z1A為C2-5伸烷基； Z2A為 或不存在； R5A為C6-8烷基或C6-8烷氧基；且 R6A為C6-8烷基或C6-8烷氧基 或其鹽。
在一些實施例中，胺脂質為式(IIA)化合物 (IIA)， 其中 X1A為O、NH或直接鍵； X2A為C2-3伸烷基； Z1A為C3伸烷基，且R5A及R6A各自為C6烷基，或Z1A為直接鍵，且R5A及R6A各自為C8烷氧基；且 R8A為 或 ； 或其鹽。
在某些實施例中，X1A為O。在其他實施例中，X1A為NH。在其他實施例中，X1A為直接鍵。
在某些實施例中，X2A為C3伸烷基。在特定實施例中，X2A為C2伸烷基。
在某些實施例中，Z1A為直接鍵，且R5A及R6A各自為C8烷氧基。在其他實施例中，Z1A為C3伸烷基，且R5A及R6A各自為C6烷基。
在某些實施例中，R8A為 。在其他實施例中，R8A為 。
在某些實施例中，胺脂質為鹽。
代表性式(IA)化合物包括：
化合物編號 化合物
1A
2A
3A
4A
5A
6A
7A
8A
9A
10A
11A
12A
13A
14A
15A
16A
17A
18A
19A
或其鹽，諸如其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，胺脂質為脂質D，其為8-((7,7-雙(辛基氧基)庚基)(2-羥基乙基)胺基)辛酸壬基酯： ，或其鹽。
脂質D可根據WO2020072605及 Mol. Ther.2018, 26(6), 1509-1519 (「 Sabnis」)來合成，該等文獻係以全文引用的方式併入。在一些實施例中，胺脂質為脂質D或WO2020072605中所提供之胺脂質，該案係以引用的方式併入本文中。
在一些實施例中，胺脂質為具有式IB結構之化合物： (IB) 其中 X 1B為C 6-7伸烷基； X 2B為 或不存在，前提條件為若X 2B為 ，則R 2B不為烷氧基； Z 1B為C 2-3伸烷基； Z 2B選自-OH、-NHC(=O)OCH 3及-NHS(=O) 2CH 3； R 1B為C 7-9無支鏈烷基；且 每一R 2B獨立地為C 8烷基或C 8烷氧基； 或其鹽。
在一些實施例中，胺脂質為式(IIB)化合物 (IIB) 其中 X 1B為C 6-7伸烷基； Z 1B為C 2-3伸烷基； R 1B為C 7-9無支鏈烷基；且 每一R 2B為C 8烷基； 或其鹽。
在某些實施例中，X 1B為C 6伸烷基。在其他實施例中，X 1B為C 7伸烷基。
在某些實施例中，Z 1B為直接鍵，且R 5B及R 6B各自為C 8烷氧基。在其他實施例中，Z 1B為C 3伸烷基，且R 5B及R 6B各自為C 6烷基。
在某些實施例中，X 2B為 ，且R 2B不為烷氧基。在其他實施例中，X 2B不存在。
在某些實施例中，Z 1B為C 2伸烷基；在其他實施例中，Z 1B為C 3伸烷基。
在某些實施例中，Z 2B為-OH。在其他實施例中，Z 2B為-NHC(=O)OCH 3。在其他實施例中，Z 2B為-NHS(=O) 2CH 3。
在某些實施例中，R 1B為C 7無支鏈伸烷基。在其他實施例中，R 1B為C 8具支鏈或無支鏈伸烷基。在其他實施例中，R 1B為C 9具支鏈或無支鏈伸烷基。
在某些實施例中，胺脂質為鹽。
代表性式(IB)化合物包括：
化合物編號 化合物
1B
2B
3B
4B
5B
6B
7B
或其鹽，諸如其醫藥學上可接受之鹽。
適用於本文所闡述之脂質核酸組裝體中之胺脂質及其他「生物可降解脂質」在活體內或離體係生物可降解的。胺脂質具有低毒性(例如在大於或等於10 mg/kg之量下，在動物模型中耐受且無不良效應)。在一些實施例中，包含胺脂質之脂質核酸組裝體包括其中至少75%之胺脂質在8、10、12、24或48小時或3、4、5、6、7或10天內自血漿或工程化細胞中清除之彼等脂質核酸組裝體。在一些實施例中，包含胺脂質之脂質核酸組裝體包括其中至少50%之核酸(例如mRNA或gRNA)在8、10、12、24或48小時或3、4、5、6、7或10天內自血漿中清除之彼等脂質核酸組裝體。在一些實施例中，包含胺脂質之脂質核酸組裝體包括例如藉由量測脂質(例如胺脂質)、核酸(例如RNA/mRNA)或其他組分，其中至少50%之脂質核酸組裝體在8、10、12、24或48小時或3、4、5、6、7或10天內自血漿中清除之彼等脂質核酸組裝體。在一些實施例中，量測脂質核酸組裝體之脂質囊封組分與游離脂質、RNA或核酸組分。
生物可降解脂質包括例如WO 2020/219876 (例如第13-33頁、第66-87頁)、WO 2020/118041、WO 2020/072605 (例如第5-12頁、第21-29頁、第61-68頁)、WO 2019/067992、WO 2017/173054、WO 2015/095340及WO 2014/136086之生物可降解脂質，且LNP包括其中所闡述之LNP組合物，其脂質及組成係以引用的方式併入本文中。
脂質清除率可如文獻中所闡述來量測。參見Maier, M.A.等人， Biodegradable Lipids Enabling Rapidly Eliminated Lipid Nanoparticles for Systemic Delivery of RNAi Therapeutics. Mol. Ther.2013, 21(8), 1570-78 (「 Maier」)。舉例而言，在 Maier中，經由側尾靜脈藉由靜脈內濃注注射將含有螢光素酶靶向siRNA之LNP-siRNA系統以0.3 mg/kg投與給六週齡至八週齡雄性C57Bl/6小鼠。在投藥後0.083、0.25、0.5、1、2、4、8、24、48、96及168小時收集血液、肝臟及脾臟樣品。在組織收集之前用鹽水灌注小鼠，且處理血液樣品以獲得血漿。所有樣品均經處理且藉由LC-MS進行分析。此外， Maier描述在投與LNP-siRNA調配物後評價毒性之程序。舉例而言，經由單次靜脈內濃注注射以5 mL/kg之劑量體積將螢光素酶靶向siRNA以0、1、3、5及10 mg/kg (5隻動物/組)投與給雄性Sprague-Dawley大鼠。24小時後，自清醒動物之頸靜脈中獲得約1 mL血液，且分離出血清。在投藥後72小時，將所有動物安樂死以進行尸檢。實施臨床徵象、體重、血清化學、器官重量及組織病理學之評價。儘管 Maier描述用於評價siRNA-LNP調配物之方法，但該等方法可應用於評價投與本揭示案之LNP之清除率、藥物動力學及毒性。
此項技術中已知之用於核酸LNP遞送之可電離及生物可利用脂質係適宜的。端視於脂質所處介質之pH，脂質可能為可電離的。舉例而言，在微酸性介質中，脂質(諸如胺脂質)可經質子化，且由此攜帶正電荷。相反，在微鹼性介質(諸如pH為大約7.35之血液)中，脂質(諸如胺脂質)可不經質子化，且由此不攜帶電荷。
脂質攜帶電荷之能力與其固有pKa有關。在一些實施例中，本揭示案之胺脂質之pKa可各自獨立地在約5.1至約7.4範圍內。在一些實施例中，本揭示案之生物可利用脂質之pKa可各自獨立地在約5.1至約7.4範圍內，諸如約5.5至約6.6、約5.6至約6.4、約5.8至約6.2或約5.8至約6.5。舉例而言，本揭示案之胺脂質之pKa可各自獨立地在約5.8至約6.5範圍內。pKa範圍在約5.1至約7.4內之脂質有效用於活體內遞送貨品，例如遞送至肝臟。此外，已發現，pKa範圍在約5.3至約6.4內之脂質有效用於活體內遞送，例如遞送至腫瘤中。例如，參見WO2014/136086。 B. 其他脂質
適用於本揭示案之脂質組合物中之「中性脂質」包括例如多種中性、不帶電或兩性離子脂質。適用於本揭示案中之中性磷脂之實例包括(但不限於) 5-十七烷基苯-1,3-二醇(間苯二酚)、二棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(DPPC)、二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(DSPC)、磷酸膽鹼(DOPC)、二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼(DMPC)、磷脂醯膽鹼(PLPC)、1,2-二硬脂醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DAPC)、磷脂醯乙醇胺(PE)、卵磷脂醯膽鹼(EPC)、二月桂醯基磷脂醯膽鹼(DLPC)、二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼(DMPC)、1-肉豆蔻醯基-2-棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(MPPC)、1-棕櫚醯基-2-肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼(PMPC)、1-棕櫚醯基-2-硬脂醯基磷脂醯膽鹼(PSPC)、1,2-二花生醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DBPC)、1-硬脂醯基-2-棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(SPPC)、1,2-二(二十烯醯基)-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DEPC)、棕櫚醯基油醯磷脂醯膽鹼(POPC)、溶血磷脂醯膽鹼、二油醯基磷脂醯乙醇胺(DOPE)、二亞油醯基磷脂醯膽鹼二硬脂醯基磷脂醯乙醇胺(DSPE)、二肉豆蔻醯基磷脂醯乙醇胺(DMPE)、二棕櫚醯基磷脂醯乙醇胺(DPPE)、棕櫚醯基油醯磷脂醯乙醇胺(POPE)、溶血磷脂醯乙醇胺及其組合。在一個實施例中，中性磷脂可選自由二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(DSPC)及二肉豆蔻醯基磷脂醯乙醇胺(DMPE)組成之群。在另一實施例中，中性磷脂可為二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(DSPC)。
「輔助脂質」包括類固醇、固醇及烷基間苯二酚。適用於本揭示案中之輔助脂質包括(但不限於)膽固醇、5-十七烷基間苯二酚及半琥珀酸膽固醇酯。在一個實施例中，輔助脂質可為膽固醇。在一個實施例中，輔助脂質可為半琥珀酸膽固醇酯。
「隱形脂質」係改變奈米顆粒可於活體內(例如在血液中)存在之時間長度之脂質。隱形脂質可藉由(例如)減少顆粒聚集及控制粒徑而有助於調配製程。本文所用之隱形脂質可調節脂質核酸組裝體之藥物動力學性質或有助於奈米顆粒離體穩定性。適用於本揭示案之脂質組合物中之隱形脂質包括(但不限於)具有連接至脂質部分之親水性頭基之隱形脂質。適用於本揭示案之脂質組合物中之隱形脂質及關於此等脂質之生物化學之資訊可參見Romberg等人，Pharmaceutical Research，第25卷，第1期，2008，第55-71頁及Hoekstra等人，Biochimica et Biophysica Acta 1660 (2004) 41-52。其他適宜PEG脂質揭示於(例如) WO 2006/007712中。
在一個實施例中，隱形脂質之親水性頭基包含選自基於PEG之聚合物之聚合物部分。隱形脂質可包含脂質部分。在一些實施例中，隱形脂質為PEG脂質。
在一個實施例中，隱形脂質包含選自基於PEG(有時稱為聚(環氧乙烷))、聚(噁唑啉)、聚(乙烯醇)、聚(甘油)、聚(N-乙烯吡咯啶酮)、聚胺基酸及聚[N-(2-羥基丙基)甲基丙烯醯胺]之聚合物之聚合物部分。
在一個實施例中，PEG脂質包含基於PEG (有時稱為聚(環氧乙烷))之聚合物部分。
PEG脂質進一步包含脂質部分。在一些實施例中，脂質部分可源自二醯基甘油或二醯基甘油醯胺，包括含有二烷基甘油或二烷基甘油醯胺基團者，該基團具有獨立地包含約C4至約C40飽和或不飽和碳原子之烷基鏈長度，其中該鏈可包含一或多個官能基，諸如醯胺或酯。在一些實施例中，烷基鏈長度包含約C10至C20。二烷基甘油或二烷基甘油醯胺基團可進一步包含一或多個經取代烷基。鏈長度可對稱或不對稱。
除非另有指示，否則如本文所用之術語「PEG」意指任何聚乙二醇或其他聚伸烷基醚聚合物。在一個實施例中，PEG為乙二醇或環氧乙烷之視情況經取代之直鏈或具支鏈聚合物。在一個實施例中，PEG未經取代。在一個實施例中，PEG經例如一或多個烷基、烷氧基、醯基、羥基或芳基取代。在一個實施例中，該術語包括PEG共聚物，諸如PEG-聚胺基甲酸酯或PEG-聚丙烯(例如，參見J. Milton Harris, Poly(ethylene glycol) chemistry:  biotechnical and biomedical applications (1992))；在另一實施例中，該術語不包括PEG共聚物。在一個實施例中，PEG之分子量為約130至約50,000，在子實施例中為約150至約30,000，在子實施例中為約150至約20,000，在子實施例中為約150至約15,000，在子實施例中為約150至約10,000，在子實施例中為約150至約6,000，在子實施例中為約150至約5,000，在子實施例中為約150至約4,000，在子實施例中為約150至約3,000，在子實施例中為約300至約3,000，在子實施例中為約1,000至約3,000，且在子實施例中為約1,500至約2,500。
在一些實施例中，PEG (例如與脂質部分或脂質(諸如隱形脂質)結合)係「PEG-2K」，亦稱為「PEG 2000」，其平均分子量為約2,000道耳頓。PEG-2K在本文中由下式(IV)表示，其中n為45，此意味著數量平均聚合度包含約45個亞單元 。然而，可使用此項技術中已知之其他PEG實施例，包括(例如)數量平均聚合度包含約23個亞單元(n=23)或68個亞單元(n=68)者。在一些實施例中，n可在約30至約60範圍內。在一些實施例中，n可在約35至約55範圍內。在一些實施例中，n可在約40至約50範圍內。在一些實施例中，n可在約42至約48範圍內。在一些實施例中，n可為45。在一些實施例中，R可選自H、經取代之烷基及未經取代之烷基。在一些實施例中，R可為未經取代之烷基。在一些實施例中，R可為甲基。
在本文所闡述之任一實施例中，PEG脂質可選自PEG-二月桂醯基甘油、PEG-二肉豆蔻醯基甘油(PEG-DMG目錄號GM-020，來自NOF, Tokyo, Japan)，諸如1,2-二肉豆蔻醯基-外消旋-甘油基-3-甲基聚氧乙二醇2000 (PEG2k-DMG)、PEG-二棕櫚醯基甘油、PEG-二硬脂醯基甘油(PEG-DSPE) (目錄號DSPE-020CN，NOF, Tokyo, Japan)、PEG-二月桂基甘油醯胺、PEG-二肉豆蔻基甘油醯胺、PEG-二棕櫚醯基甘油醯胺及PEG-二硬脂醯基甘油醯胺、PEG-膽固醇(1-[8'-(膽固-5-烯-3[β]-氧基)甲醯胺基-3',6'-二氧雜辛烷基]胺甲醯基-[ω]-甲基-聚(乙二醇)、PEG-DMB (3,4-雙十四烷氧基苄基-[ω]-甲基-聚(乙二醇)醚)、1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000] (PEG2k-DMPE) (目錄號880150P，來自Avanti Polar Lipids, Alabaster, Alabama, USA)、1,2-二硬脂醯基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000] (PEG2k-DSPE) (目錄號880120C，來自Avanti Polar Lipids, Alabaster, Alabama, USA)、1,2-二硬脂醯基-sn-甘油、甲氧基聚乙二醇(PEG2k-DSG；GS-020, NOF Tokyo, Japan)、聚(乙二醇)-2000-二甲基丙烯酸酯(PEG2k-DMA)及1,2-二硬脂基氧基丙基-3-胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000] (PEG2k-DSA)。在一個實施例中，PEG脂質可為1,2-二肉豆蔻醯基-外消旋-甘油基-3-甲基聚氧乙二醇2000。在一個實施例中，PEG脂質可為PEG2k-DMG。在一些實施例中，PEG脂質可為PEG2k-DSG。在一個實施例中，PEG脂質可為PEG2k-DSPE。在一個實施例中，PEG脂質可為PEG2k-DMA。在一個實施例中，PEG脂質可為PEG2k-C-DMA。在一個實施例中，PEG脂質可為WO2016/010840 (段落[00240]至[00244])中所揭示之化合物S027。在一個實施例中，PEG脂質可為PEG2k-DSA。在一個實施例中，PEG脂質可為PEG2k-C11。在一些實施例中，PEG脂質可為PEG2k-C14。在一些實施例中，PEG脂質可為PEG2k-C16。在一些實施例中，PEG脂質可為PEG2k-C18。 C. 脂質奈米顆粒 (LNP)
LNP可含有(i)生物可降解之脂質，(ii)視情況存在之中性脂質，(iii)輔助脂質，及(iv)隱形脂質，諸如PEG脂質。脂質核酸組裝體可含有生物可降解之脂質以及中性脂質、輔助脂質及隱形脂質(諸如PEG脂質)中之一或多者。
脂質核酸組裝體可含有(i)用於囊封及用於胞內體逃逸之胺脂質，(ii)用於穩定化之中性脂質，(iii)亦用於穩定化之輔助脂質，及(iv)隱形脂質，諸如PEG脂質。脂質核酸組裝體可含有胺脂質及中性脂質、輔助脂質(亦用於穩定化)以及隱形脂質(諸如PEG脂質)中之一或多者。
LNP可包含核酸(例如RNA)，亦即包括RNA引導之DNA結合劑、Cas核酸酶mRNA、2類Cas核酸酶mRNA、Cas9 mRNA及gRNA中之一或多者之組分。在一些實施例中，LNP可包括2類Cas核酸酶及作為RNA組分之gRNA。在一些實施例中，LNP可包含RNA組分、胺脂質、輔助脂質、中性脂質及隱形脂質。在某些LNP中，輔助脂質為膽固醇。在其他組合物中，中性脂質為DSPC。在其他實施例中，隱形脂質為PEG2k-DMG或PEG2k-C11。在一些實施例中，LNP包含脂質A或脂質A之等效形式；輔助脂質；中性脂質；隱形脂質；及RNA，諸如gRNA。在一些實施例中，LNP包含脂質A或脂質A之等效形式；輔助脂質；隱形脂質；及RNA，諸如gRNA。在一些組合物中，胺脂質為脂質A。在一些組合物中，胺脂質為脂質A或其縮醛類似物；輔助脂質為膽固醇；中性脂質為DSPC；且隱形脂質為PEG2k-DMG。
在一些實施例中，根據調配物中組分脂質之各別莫耳比來描述脂質組合物。本揭示案之實施例提供根據調配物中組分脂質之各別莫耳比描述之脂質組合物。在一個實施例中，胺脂質之mol%可為約30 mol%至約60 mol%。在一個實施例中，胺脂質之mol%可為約40 mol%至約60 mol%。在一個實施例中，胺脂質之mol%可為約45 mol%至約60 mol%。在一個實施例中，胺脂質之mol%可為約50 mol%至約60 mol%。在一個實施例中，胺脂質之mol%可為約55 mol%至約60 mol%。在一個實施例中，胺脂質之mol%可為約50 mol%至約55 mol%。在一個實施例中，胺脂質之mol%可為約50 mol%。在一個實施例中，胺脂質之mol%可為約55 mol%。在一些實施例中，脂質核酸組裝體批料之胺脂質mol%將為目標mol%之±30%、±25%、±20%、±15%、±10%、±5%或±2.5%。在一些實施例中，脂質核酸組裝體批料之胺脂質mol%將為目標mol%之±4 mol%、±3 mol%、±2 mol%、±1.5 mol%、±1 mol%、±0.5 mol%或±0.25 mol%。所有mol%數均作為LNP之脂質組分之分數給出。在一些實施例中，胺脂質mol%之脂質核酸組裝體批間可變性將小於15%、小於10%或小於5%。
在一個實施例中，中性脂質之mol%可為約5 mol%至約15 mol%。在一個實施例中，中性脂質之mol%可為約7 mol%至約12 mol%。在一個實施例中，中性脂質之mol%可為約9 mol%。在一些實施例中，脂質核酸組裝體批料之中性脂質mol%將為目標中性脂質mol%之±30%、±25%、±20%、±15%、±10%、±5%或±2.5%。在一些實施例中，脂質核酸組裝體批間可變性將小於15%、小於10%或小於5%。
在一個實施例中，輔助脂質之mol%可為約20 mol%至約60 mol%。在一個實施例中，輔助脂質之mol%可為約25 mol%至約55 mol%。在一個實施例中，輔助脂質之mol%可為約25 mol%至約50 mol%。在一個實施例中，輔助脂質之mol%可為約25 mol%至約40 mol%。在一個實施例中，輔助脂質之mol%可為約30 mol%至約50 mol%。在一個實施例中，輔助脂質之mol%可為約30 mol%至約40 mol%。在一個實施例中，基於胺脂質、中性脂質及PEG脂質濃度調整輔助脂質之mol%，以使脂質組分達到100 mol%。在一些實施例中，脂質核酸組裝體批料之輔助mol%將為目標mol%之±30%、±25%、±20%、±15%、±10%、±5%或±2.5%。在一些實施例中，脂質核酸組裝體批間可變性將小於15%、小於10%或小於5%。
在一個實施例中，PEG脂質之mol%可為約1 mol%至約10 mol%。在一個實施例中，PEG脂質之mol%可為約2 mol%至約10 mol%。在一個實施例中，PEG脂質之mol%可為約1 mol%至約3 mol%。在一個實施例中，PEG脂質之mol%可為約2 mol%至約4 mol%。在一個實施例中，PEG脂質之mol%可為約1.5 mol%至約2 mol%。在一個實施例中，PEG脂質之mol%可為約2.5 mol%至約4 mol%。在一個實施例中，PEG脂質之mol%可為約3 mol%。在一個實施例中，PEG脂質之mol%可為約2.5 mol%。在一個實施例中，PEG脂質之mol%可為約2 mol%。在一個實施例中，PEG脂質之mol%可為約1.5 mol%。在一些實施例中，脂質核酸組裝體批料之PEG脂質mol%將為目標PEG脂質mol%之±30%、±25%、±20%、±15%、±10%、±5%或±2.5%。在一些實施例中，LNP (例如LNP組合物)批間可變性將小於15%、小於10%或小於5%。
本揭示案之實施例提供LNP組合物，例如包含可電離脂質(例如脂質A或其類似物中之一者)、輔助脂質、輔助脂質及PEG脂質之LNP組合物，其係根據調配物中組分脂質之各別莫耳比予以描述。在某些實施例中，可電離脂質之量為約25 mol%至約45 mol%；中性脂質之量為約10 mol%至約30 mol%；輔助脂質之量為約25 mol%至約65 mol%；且PEG脂質之量為約1.5 mol%至約3.5 mol%。在某些實施例中，可電離脂質之量為脂質組分之約29-44 mol%；中性脂質之量為脂質組分之約11-28 mol%；輔助脂質之量為脂質組分之約28-55 mol%；且PEG脂質之量為脂質組分之約2.3-3.5 mol%。在某些實施例中，可電離脂質之量為脂質組分之約29-38 mol%；中性脂質之量為脂質組分之約11-20 mol%；輔助脂質之量為脂質組分之約43-55 mol%；且PEG脂質之量為脂質組分之約2.3-2.7 mol%。在某些實施例中，可電離脂質之量為脂質組分之約25-34 mol%；中性脂質之量為脂質組分之約10-20 mol%；輔助脂質之量為脂質組分之約45-65 mol%；且PEG脂質之量為脂質組分之約2.5-3.5 mol%。在某些實施例中，可電離脂質為脂質組分之約30-43 mol%；中性脂質之量為脂質組分之約10-17 mol%；輔助脂質之量為脂質組分之約43.5-56 mol%；且PEG脂質之量為脂質組分之約1.5-3 mol%。在某些實施例中，可電離脂質為脂質組分之約33 mol%；中性脂質之量為脂質組分之約15 mol%；輔助脂質之量為脂質組分之約49 mol%；且PEG脂質之量為脂質組分之約3 mol%。在某些實施例中，可電離脂質之量為脂質組分之約32.9 mol%；中性脂質之量為脂質組分之約15.2 mol%；輔助脂質之量為脂質組分之約49.2 mol%；且PEG脂質之量為脂質組分之約2.7 mol%。
在某些實施例中，可電離脂質(例如脂質A或其類似物中之一者)之量為約20-50 mol%、約25-34 mol%、約25-38 mol%、約25-45 mol%、約29-38 mol%、約29-43 mol%、約29-34 mol%、約30-34 mol%、約30-38 mol%、約30-43 mol%、約30-43 mol%或約33 mol%。在某些實施例中，中性脂質之量為約10-30 mol%、約11-30 mol%、約11-20 mol%、約13-17 mol%或約15 mol%。在某些實施例中，輔助脂質之量為約35-50 mol%、約35-65 mol%、約35-55 mol%、約38-50 mol%、約38-55 mol%、約38-65 mol%、約40-50 mol%、約40-65 mol%、約43-65 mol%、約43-55 mol%或約49 mol%。在某些實施例中，PEG脂質之量為約1.5-3.5 mol%、約2.0-2.7 mol%、約2.0-3.5 mol%、約2.3-3.5 mol%、約2.3-2.7 mol%、約2.5-3.5 mol%、約2.5-2.7 mol%、約2.9-3.5 mol%或約2.7 mol%。
本揭示案之其他實施例提供LNP組合物，例如包含可電離脂質(例如脂質D或其類似物中之一者)、輔助脂質、輔助脂質及PEG脂質之LNP組合物，其係根據調配物中組分脂質之各別莫耳比予以描述。在某些實施例中，可電離脂質之量為約25 mol%至約50 mol%；中性脂質之量為約7 mol%至約25 mol%；輔助脂質之量為約39 mol%至約65 mol%；且PEG脂質之量為約0.5 mol%至約1.8 mol%。在某些實施例中，可電離脂質之量為脂質組分之約27-40 mol%；中性脂質之量為脂質組分之約10-20 mol%；輔助脂質之量為脂質組分之約50-60 mol%；且PEG脂質之量為脂質組分之約0.9-1.6 mol%。在某些實施例中，可電離脂質之量為脂質組分之約30-45 mol%；中性脂質之量為脂質組分之約10-15 mol%；輔助脂質之量為脂質組分之約39-59 mol%；且PEG脂質之量為脂質組分之約1-1.5 mol%。在某些實施例中，可電離脂質之量為脂質組分之約30-45 mol%；中性脂質之量為脂質組分之約10-15 mol%；輔助脂質之量為脂質組分之約39-59 mol%；且PEG脂質之量為脂質組分之約1-1.5 mol%。在某些實施例中，可電離脂質為脂質組分之約30 mol%；中性脂質之量為脂質組分之約10 mol%；輔助脂質之量為脂質組分之約59 mol%；且PEG脂質之量為脂質組分之約1-1.5 mol%。在某些實施例中，可電離脂質之量為脂質組分之約40 mol%；中性脂質之量為脂質組分之約15 mol%；輔助脂質之量為脂質組分之約43.5 mol%；且PEG脂質之量為脂質組分之約1.5 mol%。在某些實施例中，可電離脂質之量為脂質組分之約50 mol%；中性脂質之量為脂質組分之約10 mol%；輔助脂質之量為脂質組分之約39 mol%；且PEG脂質之量為脂質組分之約1 mol%。
在某些實施例中，可電離脂質(例如脂質D或其類似物之一)之量為約20-55 mol%、約20-45 mol%、約20-40 mol%、約27-40 mol%、約27-45 mol%、約27-55 mol%、約30-40 mol%、約30-45 mol%、約30-55 mol%、約30 mol%、約40 mol%或約50 mol%。在某些實施例中，中性脂質之量為約7-25 mol%、約10-25 mol%、約10-20 mol%、約15-20 mol%、約8-15 mol%、約10-15 mol%、約10 mol%或約15 mol%。在某些實施例中，輔助脂質之量為約39-65 mol%、約39-59 mol%、約40-60 mol%、約40-65 mol%、約40-59 mol%、約43-65 mol%、約43-60 mol%、約43-59 mol%或約50-65 mol%、約50-59 mol%、約59 mol%或約43.5 mol%。在某些實施例中，PEG脂質之量為約0.5-1.8 mol%、約0.8-1.6 mol%、約0.8-1.5 mol%、0.9-1.8 mol%、約0.9-1.6 mol%、約0.9-1.5 mol%、1-1.8 mol%、約1-1.6 mol%、約1-1.5 mol%、約1 mol%或約1.5 mol%。
在一些實施例中，貨品包括編碼RNA引導之DNA結合劑(例如Cas核酸酶、2類Cas核酸酶或Cas9)之mRNA，或gRNA或編碼gRNA之核酸，或mRNA與gRNA之組合。在一個實施例中，LNP可包含脂質A或其等效形式，或如WO2020219876中所提供之胺脂質；或脂質D或WO2020/072605中所提供之胺脂質。在一些態樣中，胺脂質為脂質A或脂質D。在一些態樣中，胺脂質為脂質A等效形式，例如脂質A之類似物，或WO2020/219876中所提供之胺脂質。在某些態樣中，胺脂質為脂質A之縮醛類似物，視情況為WO2020/219876中所提供之胺脂質。在一些態樣中，胺脂質為脂質D或W2020072605中所發現之胺脂質。在各個實施例中，LNP包含胺脂質、中性脂質、輔助脂質及PEG脂質。在一些實施例中，輔助脂質為膽固醇。在一些實施例中，中性脂質為DSPC。在具體實施例中，PEG脂質為PEG2k-DMG。在一些實施例中，LNP可包含脂質A、輔助脂質、中性脂質及PEG脂質。在一些實施例中，LNP包含胺脂質、DSPC、膽固醇及PEG脂質。在一些實施例中，LNP包含含有DMG之PEG脂質。在一些實施例中，胺脂質選自脂質A及脂質A之等效形式，包括脂質A之縮醛類似物，或WO2020/219876中所提供之胺脂質；或脂質D或WO2020/072605中所提供之胺脂質。在其他實施例中，LNP包含脂質A、膽固醇、DSPC及PEG2k-DMG。在其他實施例中，LNP包含脂質D、膽固醇、DSPC及PEG2k-DMG。
本揭示案之實施例亦提供根據胺脂質之帶正電荷之胺基(N)與待囊封核酸之帶負電荷之磷酸酯基團(P)之間的莫耳比描述之脂質組合物。此可在數學上藉由等式N/P來表示。在一些實施例中，LNP可包含含有胺脂質、輔助脂質、中性脂質及輔助脂質之脂質組分；及核酸組分，其中N/P比為約3至10。在一些實施例中，LNP包含約4.5、5.0、5.5、6.0或6.5之胺脂質對RNA/DNA磷酸酯莫耳比(N:P)。在一些實施例中，LNP可包含含有胺脂質、輔助脂質、中性脂質及輔助脂質之脂質組分；及RNA組分，其中N/P比為約3至10。在一個實施例中，N/P比可為約5-7。在一個實施例中，N/P比可為約4.5-8。在一個實施例中，N/P比可為約6。在一個實施例中，N/P比可為6 ±1。在一個實施例中，N/P比可為約6 ± 0.5。在一些實施例中，N/P比將為目標N/P比之±30%、±25%、±20%、±15%、±10%、±5%或±2.5%。在一些實施例中，脂質核酸組裝體批間可變性將小於15%、小於10%或小於5%。
在一些實施例中，脂質核酸組裝體包含RNA組分，其可包含mRNA，諸如編碼Cas核酸酶之mRNA。在一個實施例中，RNA組分可包含Cas9 mRNA。在包含編碼Cas核酸酶之mRNA之一些組合物中，脂質核酸組裝體進一步包含gRNA核酸，諸如gRNA。在一些實施例中，RNA組分包含Cas核酸酶mRNA及gRNA。在一些實施例中，RNA組分包含2類Cas核酸酶mRNA及gRNA。
在一些實施例中，LNP可包含編碼Cas核酸酶(諸如2類Cas核酸酶)之mRNA、胺脂質、輔助脂質、中性脂質及PEG脂質。在包含編碼Cas核酸酶(諸如2類Cas核酸酶)之mRNA之某些LNP中，輔助脂質為膽固醇。在包含編碼Cas核酸酶(諸如2類Cas核酸酶)之mRNA之其他組合物中，中性脂質為DSPC。在包含編碼Cas核酸酶(諸如2類Cas核酸酶)之mRNA之其他實施例中，PEG脂質為PEG2k-DMG或PEG2k-C11。在包含編碼Cas核酸酶(諸如2類Cas核酸酶)之mRNA之特定組合物中，胺脂質選自脂質A及其等效形式，諸如脂質A之縮醛類似物，或WO2020/219876中所提供之胺脂質；或脂質D及WO2020/072605中所提供之胺脂質。
在一些實施例中，LNP可包含gRNA。在一些實施例中，LNP可包含胺脂質、gRNA、輔助脂質、中性脂質及PEG脂質。在包含gRNA之某些LNP中，輔助脂質為膽固醇。在包含gRNA之一些組合物中，中性脂質為DSPC。在包含gRNA之其他實施例中，PEG脂質為PEG2k-DMG或PEG2k-C11。在一些實施例中，胺脂質選自脂質A及其等效形式，諸如脂質A之縮醛類似物，或WO2020/219876中所提供之胺脂質及其等效形式；或脂質D及WO2020/072605中所提供之胺脂質及其等效形式。
在一個實施例中，LNP可包含sgRNA。在一個實施例中，LNP可包含Cas9 sgRNA。在一個實施例中，LNP可包含Cpf1 sgRNA。在包含sgRNA之一些組合物中，脂質核酸組裝體包括胺脂質、輔助脂質、中性脂質及PEG脂質。在包含sgRNA之某些組合物中，輔助脂質為膽固醇。在包含sgRNA之其他組合物中，中性脂質為DSPC。在包含sgRNA之其他實施例中，PEG脂質為PEG2k-DMG或PEG2k-C11。在一些實施例中，胺脂質選自脂質A及其等效形式，諸如脂質A之縮醛類似物，或WO2020/219876中所提供之胺脂質；或脂質D及WO2020/072605中所提供之胺脂質。
在一些實施例中，LNP包含編碼Cas核酸酶之mRNA及可為sgRNA之gRNA。在一個實施例中，LNP可包含胺脂質、編碼Cas核酸酶之mRNA、gRNA、輔助脂質、中性脂質及PEG脂質。在包含編碼Cas核酸酶之mRNA及gRNA之某些組合物中，輔助脂質為膽固醇。在包含編碼Cas核酸酶之mRNA及gRNA之一些組合物中，中性脂質為DSPC。在包含編碼Cas核酸酶之mRNA及gRNA之其他實施例中，PEG脂質為PEG2k-DMG或PEG2k-C11。在一些實施例中，胺脂質選自脂質A及其等效形式，諸如脂質A之縮醛類似物，或WO2020/219876中所提供之胺脂質；或脂質D及WO2020/072605中所提供之胺脂質。
在一些實施例中，LNP包括Cas核酸酶mRNA (諸如2類Cas mRNA)及至少一種gRNA。在一些實施例中，LNP包括約25:1至約1:25 wt/wt之gRNA對Cas核酸酶mRNA (諸如2類Cas核酸酶mRNA)比率。在一些實施例中，脂質核酸組裝體調配物包括約10:1至約1:10之gRNA對Cas核酸酶mRNA (諸如2類Cas核酸酶mRNA)比率。在一些實施例中，脂質核酸組裝體調配物包括約8:1至約1:8之gRNA對Cas核酸酶mRNA (諸如2類Cas核酸酶mRNA)比率。如本文所量測，比率係以重量計。在一些實施例中，脂質核酸組裝體調配物包括約5:1至約1:5之gRNA對Cas核酸酶mRNA (諸如2類Cas mRNA)比率。在一些實施例中，比率範圍為約3:1至1:3、約2:1至1:2、約5:1至1:2、約5:1至1:1、約3:1至1:2、約3:1至1:1、約3:1、約2:1至1:1。在一些實施例中，gRNA對mRNA比率為約3:1或約2:1。在一些實施例中，gRNA對Cas核酸酶mRNA (諸如2類Cas核酸酶)之比率為約1:1。在一些實施例中，gRNA對Cas核酸酶mRNA (諸如2類Cas核酸酶)之比率為約1:2。比率可為約25:1、10:1、5:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:5、1:10或1:25。
本文所揭示之LNP可包括模板核酸。模板核酸可與編碼Cas核酸酶之mRNA (諸如2類Cas核酸酶mRNA)一起共調配。在一些實施例中，模板核酸可與向導RNA一起共調配。在一些實施例中，模板核酸可與編碼Cas核酸酶之mRNA及向導RNA二者一起共調配。在一些實施例中，模板核酸可與編碼Cas核酸酶之mRNA或向導RNA分開調配。模板核酸可與LNP一起遞送或分開遞送。在一些實施例中，模板核酸可為單股或雙股，此取決於所期望之修復機制。模板可具有與靶DNA或與毗鄰靶DNA之序列同源之區域。
在一些實施例中，藉由將RNA水溶液與基於有機溶劑之脂質溶液(例如100%乙醇)混合來形成脂質核酸組裝體。適宜溶液或溶劑包括或可含有： 水、PBS、Tris緩衝液、NaCl、檸檬酸鹽緩衝液、乙醇、氯仿、二乙醚、環己烷、四氫呋喃、甲醇、異丙醇。可使用例如用於活體內投與脂質核酸組裝體之醫藥學上可接受之緩衝液。在一些實施例中，使用緩衝液將包含脂質核酸組裝體之組合物之pH維持在pH 6.5或以上。在一些實施例中，使用緩衝液將包含脂質核酸組裝體之組合物之pH維持在pH 7.0或以上。在一些實施例中，組合物之pH在約7.2至約7.7範圍內。在其他實施例中，組合物之pH在約7.3至約7.7範圍內或在約7.4至約7.6範圍內。在其他實施例中，組合物之pH為約7.2、7.3、7.4、7.5、7.6或7.7。可利用微型pH探針量測組合物之pH。在一些實施例中，將低溫保護劑包括在組合物中。低溫保護劑之非限制性實例包括蔗糖、海藻糖、甘油、DMSO及乙二醇。例示性組合物可包括高達10%之低溫保護劑，諸如蔗糖。在一些實施例中，LNP可包括約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%之低溫保護劑。在一些實施例中，LNP可包括約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%之蔗糖。在一些實施例中，LNP可包括緩衝液。在一些實施例中，緩衝液可包含磷酸鹽緩衝液(PBS)、Tris緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液及其混合物。在一些例示性實施例中，緩衝液包含NaCl。在一些實施例中，省略NaCl。NaCl之例示性量可在約20 mM至約45 mM範圍內。NaCl之例示性量可在約40 mM至約50 mM範圍內。在一些實施例中，NaCl之量為約45 mM。在一些實施例中，緩衝液為Tris緩衝液。Tris之例示性量可在約20 mM至約60 mM範圍內。Tris之例示性量可在約40 mM至約60 mM範圍內。在一些實施例中，Tris之量為約50 mM。在一些實施例中，緩衝液包含NaCl及Tris。LNP之某些例示性實施例含有於Tris緩衝液中之5%蔗糖及45 mM NaCl 。在其他例示性實施例中，組合物含有約5% w/v之量的蔗糖、約45 mM NaCl及約50 mM Tris，pH 7.5。鹽、緩衝液及低溫保護劑之量可變化，使得維持整體調配物之滲透壓。舉例而言，最終滲透壓可維持在小於450 mOsm/L。在其他實施例中，滲透壓介於350 mOsm/L與250 mOsm/L之間。某些實施例之最終滲透壓為300 +/- 20 mOsm/L。
在一些實施例中，使用微流體混合、T-混合或交叉混合。在某些態樣中，流速、接頭大小、接頭幾何結構、接頭形狀、管徑、溶液或RNA及脂質濃度可變化。可(例如)經由透析、切向流過濾或層析來濃縮或純化脂質核酸組裝體或LNP。脂質核酸組裝體可例如儲存為懸浮液、乳液或凍乾粉末。在一些實施例中，將LNP儲存在2℃-8℃下，在某些態樣中，將LNP儲存在室溫下。在其他實施例中，將LNP冷凍儲存在(例如) -20℃或-80℃下。在其他實施例中，將LNP儲存在範圍為約0℃至約-80℃之溫度下。可使冷凍LNP在使用之前解凍，例如在冰上、在4℃下、在室溫下或在25℃下。可將冷凍LNP維持在各種溫度下，例如在冰上、在4℃下、在室溫下、在25℃下或在37℃下。
在一些實施例中，LNP組合物中之LNP濃度為約1-10 ug/mL、約2-10 ug/mL、約2.5-10 ug/mL、約1-5 ug/mL、約2-5 ug/mL、約2.5-5 ug/mL、約0.04 ug/mL、約0.08 ug/mL、約0.16 ug/mL、約0.25 ug/mL、約0.63 ug/mL、約1.25 ug/mL、約2.5 ug/mL或約5 ug/mL。
在一些實施例中，LNP包含隱形脂質，視情況其中： (i) LNP包含脂質組分且該脂質組分包含：約50-60 mol%胺脂質，諸如脂質A或脂質D；約8-10 mol%中性脂質；及約2.5-4 mol%隱形脂質(例如PEG脂質)，其中該脂質組分之其餘部分為輔助脂質，且其中該LNP之N/P比為約6； (ii) LNP包含約50-60 mol%胺脂質，諸如脂質A或脂質D；約27-39.5 mol%輔助脂質；約8-10 mol%中性脂質；及約2.5-4 mol%隱形脂質(例如PEG脂質)， 其中該LNP之N/P比為約5-7 (例如約6)； (iii) LNP包含脂質組分且該脂質組分包含：約50-60 mol%胺脂質，諸如脂質A或脂質D；約5-15 mol%中性脂質；及約2.5-4 mol%隱形脂質(例如PEG脂質)，其中該脂質組分之其餘部分為輔助脂質，且其中該LNP之N/P比為約3-10； (iv) LNP包含脂質組分且該脂質組分包含：約40-60 mol%胺脂質，諸如脂質A或脂質D；約5-15 mol%中性脂質；及約2.5-4 mol%隱形脂質(例如PEG脂質)，其中該脂質組分之其餘部分為輔助脂質，且其中該LNP之N/P比為約6； (v) LNP包含脂質組分且該脂質組分包含：約50-60 mol%胺脂質，諸如脂質A或脂質D；約5-15 mol%中性脂質；及約1.5-10 mol%隱形脂質(例如PEG脂質)，其中該脂質組分之其餘部分為輔助脂質，且其中該LNP之N/P比為約6； (vi) LNP包含脂質組分且該脂質組分包含：約40-60 mol%胺脂質，諸如脂質A或脂質D；約0-10 mol%中性脂質；及約1.5-10 mol%隱形脂質(例如PEG脂質)，其中該脂質組分之其餘部分為輔助脂質，且其中該LNP之N/P比為約3-10； (vii) LNP包含脂質組分且該脂質組分包含：約40-60 mol%胺脂質，諸如脂質A或脂質D；少於約1 mol%之中性脂質；及約1.5-10 mol%隱形脂質(例如PEG脂質)，其中該脂質組分之其餘部分為輔助脂質，且其中該LNP之N/P比為約3-10； (viii) LNP包含脂質組分且該脂質組分包含：約40-60 mol%胺脂質，諸如脂質A或脂質D；及約1.5-10 mol%隱形脂質(例如PEG脂質)，其中該脂質組分之其餘部分為輔助脂質，其中LNP組合物之N/P比為約3-10，且其中該LNP基本上不含或不含中性磷脂；或 (ix) LNP包含脂質組分且該脂質組分包含：約50-60 mol%胺脂質，諸如脂質A或脂質D；約8-10 mol%中性脂質；及約2.5-4 mol%隱形脂質(例如PEG脂質)，其中該脂質組分之其餘部分為輔助脂質，且其中該LNP之N/P比為約3-7。
在一些實施例中，LNP包含脂質組分且該脂質組分包含：約50 mol%胺脂質，諸如脂質A或脂質D；約9 mol%中性脂質，諸如DSPC；約3 mol%隱形脂質，諸如PEG脂質，諸如PEG2k-DMG，且該脂質組分之其餘部分為輔助脂質，諸如膽固醇，其中該LNP之N/P比為約6。
在一些實施例中，LNP包含脂質組分且該脂質組分包含：約50 mol%脂質A；約9 mol% DSPC；約3 mol%之PEG2k-DMG，且該脂質組分之其餘部分為膽固醇，其中該LNP之N/P比為約6。
在一些實施例中，LNP包含脂質組分且該脂質組分包含：約35 mol%脂質A；約15 mol%中性脂質；約47.5 mol%輔助脂質；及約2.5 mol%隱形脂質(例如PEG脂質)，且其中LNP組合物之N/P比為約3-7。
在一些實施例中，LNP包含脂質組分且該脂質組分包含：約35 mol%脂質D；約15 mol%中性脂質；約47.5 mol%輔助脂質；及約2.5 mol%隱形脂質(例如PEG脂質)，且其中LNP組合物之N/P比為約3-7。
在一些實施例中，LNP包含脂質組分且該脂質組分包含：約25-45 mol%胺脂質，諸如脂質A；約10-30 mol%中性脂質；約25-65 mol%輔助脂質；及約1.5-3.5 mol%隱形脂質(例如PEG脂質)，且其中LNP組合物之N/P比為約3-7。
在一些實施例中，LNP包含脂質組分，其中： a.    胺脂質之量為脂質組分之約29-44 mol%；中性脂質之量為脂質組分之約11-28 mol%；輔助脂質之量為脂質組分之約28-55 mol%；且PEG脂質之量為脂質組分之約2.3-3.5 mol% b.    胺脂質之量為脂質組分之約29-38 mol%；中性脂質之量為脂質組分之約11-20 mol%；輔助脂質之量為脂質組分之約43-55 mol%；且PEG脂質之量為脂質組分之約2.3-2.7 mol%； c.    胺脂質之量為脂質組分之約25-34 mol%；中性脂質之量為脂質組分之約10-20 mol%；輔助脂質之量為脂質組分之約45-65 mol%；且PEG脂質之量為脂質組分之約2.5-3.5 mol%；或 d.    胺脂質之量為脂質組分之約30-43 mol%；中性脂質之量為脂質組分之約10-17 mol%；輔助脂質之量為脂質組分之約43.5-56 mol%；且PEG脂質之量為脂質組分之約1.5-3 mol%。
在一些實施例中，LNP包含脂質組分且該脂質組分包含：約25-50 mol%胺脂質，諸如脂質D；約7-25 mol%中性脂質；約39-65 mol%輔助脂質；及約0.5-1.8 mol%隱形脂質(例如PEG脂質)，且其中LNP組合物之N/P比為約3-7。
在一些實施例中，LNP包含脂質組分，其中胺脂質之量為脂質組分之約30-45 mol%；或脂質組分之約30-40 mol%；視情況脂質組分之約30 mol%、40 mol%或50 mol%。在一些實施例中，LNP包含脂質組分，其中中性脂質之量為脂質組分之約10-20 mol%；或脂質組分之約10-15 mol%；視情況脂質組分之約10 mol%或15 mol%。在一些實施例中，LNP包含脂質組分，其中輔助脂質之量為脂質組分之約50-60 mol%；脂質組分之約39-59 mol%；或脂質組分之約43.5-59 mol%；視情況脂質組分之約59 mol%；脂質組分之約43.5 mol%；或脂質組分之約39 mol%。在一些實施例中，LNP包含脂質組分，其中PEG脂質之量為脂質組分之約0.9-1.6 mol%；或脂質組分之約1-1.5 mol%；視情況脂質組分之約1 mol%或脂質組分之約1.5 mol%
在一些實施例中，LNP包含脂質組分，其中： a.    可電離脂質之量為脂質組分之約27-40 mol%；中性脂質之量為脂質組分之約10-20 mol%；輔助脂質之量為脂質組分之約50-60 mol%；且PEG脂質之量為脂質組分之約0.9-1.6 mol%； b.    可電離脂質之量為脂質組分之約30-45 mol%；中性脂質之量為脂質組分之約10-15 mol%；輔助脂質之量為脂質組分之約39-59 mol%；且PEG脂質之量為脂質組分之約1-1.5 mol%； c.    可電離脂質之量為脂質組分之約30 mol%；中性脂質之量為脂質組分之約10 mol%；輔助脂質之量為脂質組分之約59 mol%；且PEG脂質之量為脂質組分之約1-1.5 mol%； d.    可電離脂質之量為脂質組分之約40 mol%；中性脂質之量為脂質組分之約15 mol%；輔助脂質之量為脂質組分之約43.5 mol%；且PEG脂質之量為脂質組分之約1.5 mol%；或 e.    可電離脂質之量為脂質組分之約50 mol%；中性脂質之量為脂質組分之約10 mol%；輔助脂質之量為脂質組分之約39 mol%；且PEG脂質之量為脂質組分之約1 mol%。
在一些實施例中，LNP之直徑為約1-250 nm、10-200 nm、約20-150 nm、約50-150 nm、約50-100 nm、約50-120 nm、約60-100 nm、約75-150 nm、約75-120 nm或約75-100 nm。在一些實施例中，LNP之直徑小於100 nm。在一些實施例中，LNP組合物包含平均直徑為約10-200 nm、約20-150 nm、約50-150 nm、約50-100 nm、約50-120 nm、約60-100 nm、約75-150 nm、約75-120 nm或約75-100 nm之LNP群體。在一些實施例中，LNP之平均直徑小於100 nm。
在一些實施例中，LNP包含：約40-60 mol%胺脂質；約5-15 mol%中性脂質；及約1.5-10 mol% PEG脂質，其中脂質組分之其餘部分為輔助脂質，且其中LNP組合物之N/P比為約3-10。在一些實施例中，LNP包含：約50-60 mol%胺脂質；約8-10 mol%中性脂質；及約2.5-4 mol% PEG脂質，其中脂質組分之其餘部分為輔助脂質，且其中LNP組合物之N/P比為約3-8。在一些實施例中，LNP包含：約50-60 mol%胺脂質；約5-15 mol% DSPC；及約2.5-4 mol% PEG脂質，其中脂質組分之其餘部分為膽固醇，且其中LNP組合物之N/P比為3-8 ±0.2。
在實施例中，平均直徑為Z-平均直徑。在某些實施例中，使用此項技術中已知之方法，藉由動態光散射(DLS)量測Z-平均直徑。舉例而言，可使用Malvern Zetasizer DLS儀器，藉由動態光散射(DLS)量測平均粒徑及多分散性。在藉由DLS進行量測之前，將LNP樣品用PBS緩衝液稀釋。可測定Z-平均直徑及數量平均直徑以及多分散性指數(pdi)。Z平均值為顆粒集合之強度加權平均流體動力學大小。數量平均值為顆粒集合之顆粒數加權平均流體動力學大小。亦可使用Malvern Zetasizer儀器使用此項技術中已知之方法來量測LNP之ζ電位。 D.   LNP 中組分之排列
在一些實施例中，第一基因體編輯工具、第二基因體編輯工具或至少一種gRNA含於至少一種LNP中。在一些實施例中，第一基因體編輯工具、第二基因體編輯工具及gRNA共同含於以下中：(i)第一脂質奈米顆粒(LNP)，其包含第二基因體編輯器及第一gRNA，(ii)第二LNP，其包含第一基因體編輯器或鹼基編輯器，(iii)第三LNP，其包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)，(iv)第四LNP，其包含第二gRNA，(v)第五LNP，其包含第三gRNA，及(vi)第六LNP，其包含第四gRNA。在一些實施例中，第一基因體編輯工具、第二基因體編輯工具及gRNA共同含於以下中：(i)第一脂質奈米顆粒(LNP)，其包含第二基因體編輯器及第一gRNA，(ii)第二LNP，其包含第一基因體編輯器或鹼基編輯器，(iii)第三LNP，其包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)，(iv)第四LNP，其包含第二gRNA及第三gRNA，及(v)第五LNP，其包含第四gRNA。在一些實施例中，第一基因體編輯工具、第二基因體編輯工具及gRNA共同含於以下中：(i)第一脂質奈米顆粒(LNP)，其包含第二基因體編輯器及第一gRNA，(ii)第二LNP，其包含第一基因體編輯器或鹼基編輯器且包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)，(iii)第三LNP，其包含第二gRNA，(iv)第四LNP，其包含第三gRNA，及(v)第五LNP，其包含第四gRNA。在一些實施例中，第一基因體編輯工具、第二基因體編輯工具及gRNA共同含於以下中：(i)第一脂質奈米顆粒(LNP)，其包含第二基因體編輯器及第一gRNA，(ii)第二LNP，其包含第一基因體編輯器或鹼基編輯器且包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)，(iii)第三LNP，其包含第二gRNA及第三gRNA，及(iv)第四LNP，其包含第四gRNA。在一些實施例中，第一基因體編輯工具、第二基因體編輯工具及gRNA共同含於以下中：(i)第一脂質奈米顆粒(LNP)，其包含第二基因體編輯器及第一gRNA，(ii)第二LNP，其包含第一基因體編輯器或鹼基編輯器，(iii)第三LNP，其包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)，(iv)第四LNP，其包含第二gRNA、第三gRNA及第四gRNA。在一些實施例中，第一基因體編輯工具、第二基因體編輯工具及gRNA共同含於以下中：(i)第一脂質奈米顆粒(LNP)，其包含第二基因體編輯器及第一gRNA，(ii)第二LNP，其包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)，(iii)第三LNP，其包含第一基因體編輯器或鹼基編輯器且包含第二gRNA，(iv)第四LNP，其包含第一基因體編輯器或鹼基編輯器且包含第三gRNA，及(v)第五LNP，其包含第一基因體編輯器或鹼基編輯器且包含第四gRNA。在一些實施例中，第一基因體編輯工具、第二基因體編輯工具及gRNA共同含於以下中：(i)第一脂質奈米顆粒(LNP)，其包含第二基因體編輯器及第一gRNA，(ii)第二LNP，其包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)，(iii)第三LNP，其包含第一基因體編輯器或鹼基編輯器且包含第二gRNA及第三gRNA，及(iv)第四LNP，其包含第一基因體編輯器或鹼基編輯器且包含第四gRNA。在一些實施例中，第一基因體編輯工具、第二基因體編輯工具及gRNA共同含於第一至第四LNP、第一至第五LNP或第一至第六LNP中，以及包含第五gRNA之一或多種額外LNP中。在一些實施例中，該一或多種額外LNP進一步包含第六gRNA。在一些實施例中，該一或多種額外LNP進一步包含第七gRNA。在一些實施例中，該一或多種額外LNP進一步包含第八gRNA。在一些實施例中，該一或多種額外LNP進一步包含第九gRNA。在一些實施例中，該一或多種額外LNP進一步包含第十gRNA。
在一些實施例中，第二基因體編輯器包含釀膿鏈球菌(Spy) Cas9裂解酶，第一基因體編輯器或鹼基編輯器包含腦膜炎奈瑟菌(Nme) Cas9切口酶，第一gRNA靶向TRAC基因座，第二gRNA靶向HLA-A基因座，第三gRNA靶向CIITA基因座，第四gRNA靶向HLA-B基因座，第五gRNA靶向TRBC基因座且該一或多種額外gRNA各自靶向不同於該TRAC基因座、該HLA-A基因座、該HLA-B基因座、該CIITA基因座及該TRBC基因座之基因座。
在一些實施例中，第二基因體編輯器包含釀膿鏈球菌(Spy) Cas9裂解酶，第一基因體編輯器或鹼基編輯器包含腦膜炎奈瑟菌(Nme) Cas9切口酶，第一gRNA靶向TRAC基因座，第二gRNA靶向HLA-A基因座，第三gRNA靶向CIITA基因座，且第四gRNA靶向HLA-B基因座，且該一或多種額外gRNA各自靶向不同於該TRAC基因座、該HLA-A基因座、該HLA-B基因座及該CIITA基因座之基因座。
在一些實施例中，第一gRNA包含SEQ ID NO: 374或378之序列或與SEQ ID NO: 374或378至少95%、90%或85%一致之序列，其中第二gRNA包含SEQ ID NO: 366或370之序列或與SEQ ID NO: 366或370至少95%、90%或85%一致之序列，其中第三gRNA包含SEQ ID NO: 345或384之序列或與SEQ ID NO: 345或384至少95%、90%或85%一致之序列，且其中第四gRNA包含SEQ ID NO: 363之序列或與SEQ ID NO: 363至少95%、90%或85%一致之序列。
在一些實施例中，第一基因體編輯工具、第二基因體編輯工具及gRNA共同含於至少2、3、4、5、6、7、8、9或10種各自包含不同核酸組分之不同的脂質奈米顆粒(LNP)中。在一些實施例中，第一基因體編輯工具、第二基因體編輯工具及gRNA共同含於4、5、6或7種各自包含不同核酸組分之不同的脂質奈米顆粒(LNP)中。在一些實施例中，第一基因體編輯工具、第二基因體編輯工具及gRNA共同含於4種各自包含不同核酸組分之不同LNP中。在一些實施例中，第一基因體編輯工具、第二基因體編輯工具及gRNA共同含於5種各自包含不同核酸組分之不同LNP中。在一些實施例中，第一基因體編輯工具、第二基因體編輯工具及gRNA共同含於6種各自包含不同核酸組分之不同LNP中。在一些實施例中，第一基因體編輯工具、第二基因體編輯工具及gRNA共同含於7種各自包含不同核酸組分之不同LNP中。
在一些實施例中，該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA及該至少一種與第二基因體編輯器同源之gRNA共同地包含至少2種gRNA，且其中靶向不同基因體基因座之2種gRNA含於同一脂質奈米顆粒(LNP)中。在一些實施例中，該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA及該至少一種與第二基因體編輯器同源之gRNA共同地包含至少3種gRNA，且其中靶向不同基因體基因座之3種gRNA含於同一脂質奈米顆粒中。在一些實施例中，該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA及該至少一種與第二基因體編輯器同源之gRNA共同地包含至少4種gRNA，且其中靶向不同基因體基因座之4種gRNA含於同一脂質奈米顆粒中。
在一些實施例中，其他gRNA中之每一者含於不同的LNP中。在一些實施例中，該等gRNA中之每一者含於不同的LNP中。
在一些實施例中，該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA包含一種以上靶向不同基因體基因座之gRNA，且該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器與該一種以上gRNA中之至少一種含於同一LNP中。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器及該等gRNA中之一者含於同一LNP中。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器及該等gRNA中之2者含於同一LNP中。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器及該等gRNA中之3者含於同一LNP中。在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器及該等gRNA中之4者含於同一LNP中。
在一些實施例中，第一基因體編輯器或鹼基編輯器含於與該至少一種同第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA中之每一者不同的LNP中。
在一些實施例中，該至少一種與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之gRNA包含一種以上靶向不同基因體基因座之gRNA，且該一種以上gRNA中之每一者含於不同的LNP中。
在一些實施例中，包含與第一基因體編輯器或鹼基編輯器同源之該等gRNA中之一者之LNP各自進一步包含第一基因體編輯器或鹼基編輯器。
在一些實施例中，第二基因體編輯器及該至少一種與該第二基因體編輯器同源之gRNA含於同一LNP中。在一些實施例中，第二基因體編輯器與該等gRNA中之一者含於同一LNP中。
在一些實施例中，第一基因體編輯工具包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)，且該UGI含於與該等gRNA中之每一者不同的LNP中。
在一些實施例中，LNP包含第一組不同的LNP及第二組不同的LNP，以及視情況第三組不同的LNP。在一些實施例中，第一組不同的LNP包含2、3、4或5種LNP，第二組不同的LNP包含2、3、4或5種LNP，且第三組不同的LNP在存在時包含2、3、4或5種LNP。在一些實施例中，第一組不同的LNP包含3或4種LNP，第二組不同的LNP包含3或4種LNP。在一些實施例中，第一組不同的LNP、第二組不同的LNP及第三組不同的LNP (在存在時)依序遞送至細胞。在一些實施例中，第二組不同的LNP係在第一組不同的LNP遞送至細胞後1、2或3天遞送至細胞，且其中第三組不同的LNP (在存在時)係在第二組不同的LNP遞送至細胞後1、2或3天遞送至細胞。
在一些實施例中，第一基因體編輯工具、第二基因體編輯工具及gRNA共同含於以下中：(a) (i)第一脂質奈米顆粒(LNP)，其包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)；(ii)第二LNP，其包含第一基因體編輯器或鹼基編輯器且包含第二gRNA；(iii)第三LNP，其包含第一基因體編輯器或鹼基編輯器且包含第三gRNA；及(iv)第四LNP，其包含第一基因體編輯器或鹼基編輯器且包含第四gRNA；及(b) (i)第五LNP，其包含尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)；(ii)第六LNP，其包含第二基因體編輯器及第一gRNA；(iii)編碼用於插入在第一gRNA之編輯位點處之外源基因之核酸；(iv)視情況第七LNP，其包含第一基因體編輯器或鹼基編輯器且包含第五gRNA；(v)視情況第八LNP，其包含第一基因體編輯器或鹼基編輯器且包含第六gRNA；(vi)視情況第九LNP，其包含第一基因體編輯器或鹼基編輯器且包含第七gRNA。 E. 使細胞與 LNP 接觸
在一些實施例中，LNP在接觸細胞之前經血清因子預處理。在一些實施例中，LNP在接觸細胞之前經靈長類動物血清因子預處理。在一些實施例中，LNP在接觸細胞之前經人類血清因子預處理。在一些實施例中，LNP在接觸細胞之前經ApoE預處理。在一些實施例中，LNP在接觸細胞之前經重組ApoE3或ApoE4預處理。在一些實施例中，細胞在接觸LNP之前係血清飢餓的。
在一些實施例中，多工方法包括將血清因子及LNP預培育約30秒至隔夜。在一些實施例中，預培育步驟包括將血清因子及LNP預培育約1分鐘至1小時。在一些實施例中，其包括預培育約1-30分鐘。在其他實施例中，其包括預培育約1-10分鐘。
在一些實施例中，依序投與LNP組合物。在一些實施例中，同時投與LNP組合物。在一些實施例中，使細胞群體與2-12種LNP組合物接觸。在一些實施例中，使細胞群體與2-8種LNP組合物接觸。在一些實施例中，使細胞群體與2-6種LNP組合物接觸。在一些實施例中，使細胞群體與3-8種LNP組合物接觸。在一些實施例中，使細胞群體與3-6種LNP組合物接觸。在一些實施例中，使細胞群體與4-6種LNP組合物接觸。在一些實施例中，使細胞群體與6-12種LNP組合物接觸。在一些實施例中，使細胞群體與3種LNP組合物接觸。在一些實施例中，使細胞群體與4種LNP組合物接觸。在一些實施例中，使細胞群體與6種LNP組合物接觸。在一些實施例中，使細胞群體與3種LNP組合物接觸。在一些實施例中，使細胞群體同時與LNP組合物接觸。在一些實施例中，使細胞群體同時與不超過6種LNP組合物接觸。在一些實施例中，使細胞群體同時與不超過2種LNP組合物接觸。
在一些實施例中，在依序接觸或編輯步驟之間使細胞冷凍。
在一些實施例中，LNP在接觸細胞之前經血清因子預處理。在一些實施例中，LNP在接觸細胞之前經人類血清預處理。在一些實施例中，LNP經血清替代物(例如市售血清替代物)預處理，較佳地其中血清替代物適於離體使用。在一些實施例中，LNP在接觸細胞之前經ApoE預處理。在一些實施例中，LNP在接觸細胞之前經重組ApoE3或ApoE4預處理。在一些實施例中，細胞在接觸LNP之前係血清飢餓的。
在一些實施例中，多工方法包括將血清因子及LNP預培育約30秒至隔夜。在一些實施例中，預培育步驟包括將血清因子及LNP預培育約1分鐘至1小時。在一些實施例中，其包括預培育約1-30分鐘。在其他實施例中，其包括預培育約1-10分鐘。其他實施例包括預培育約5分鐘。
在一些實施例中，預培育步驟在約4℃下進行。在一些實施例中，預培育步驟在約25℃下進行。在一些實施例中，預培育步驟在約37℃下進行。預培育步驟可包含緩衝劑，諸如碳酸氫鈉或HEPES。
在一些實施例中，向「非活化」之細胞提供LNP。「非活化」之細胞係指未在活體外受到刺激之細胞。在一些實施例中，「非活化」之T細胞在體內時可能已受到活體內刺激(例如藉由抗原)，然而若該細胞在活體外培養中未受到刺激，則該細胞在本文中可稱為非活化的。「活化」細胞亦可用於本文所揭示之方法中，且可指在活體外受到刺激之細胞。本文提供用於活體外活化細胞之劑，且該等劑為此項技術中所已知，特定而言用於活化T細胞或B細胞之劑。
在一些實施例中，在與LNP接觸之前，在培養基中培養T細胞。在一些實施例中，使T細胞與一或多種增殖性細胞介素(例如IL-2、IL-15、IL-7及IL-21中之一或多者或全部)或一或多種經由CD3或CD28提供活化之劑一起培養。
在一些實施例中，使T細胞在與LNP接觸之前活化，在與LNP接觸之間活化，或在與LNP接觸之後活化。
在一些實施例中，細胞為T細胞，且該方法在第一與第二接觸步驟之間進一步包括活化步驟。在一些實施例中，使非活化之T細胞與一種、兩種或三種核酸組裝體組合物接觸。在一些實施例中，使活化之T細胞與1至8種LNP、視情況1至4種LNP接觸。在一些實施例中，使T細胞與至少6種LNP接觸。在一些實施例中，使T細胞與不超過12種LNP接觸。在一些實施例中，使T細胞與2-12種LNP接觸。在一些實施例中，使T細胞與2-8種LNP接觸。在一些實施例中，使T細胞與2-6種LNP接觸。在一些實施例中，使T細胞與3-8種LNP接觸。在一些實施例中，使T細胞與3-6種LNP接觸。在一些實施例中，使T細胞與4-6種LNP接觸。在一些實施例中，使T細胞與4-12種LNP接觸。在一些實施例中，使T細胞與4-8種LNP接觸。在一些實施例中，使T細胞與6-12種LNP接觸。在一些實施例中，使T細胞與3、4、5或6種LNP接觸。在一些實施例中，使T細胞同時與不超過8種LNP接觸。在一些實施例中，使T細胞同時與不超過6種LNP接觸。在一些實施例中，使活化之T細胞與至少6種LNP接觸。在一些實施例中，使活化之T細胞與不超過12種LNP接觸。在一些實施例中，使活化之T細胞與2-12種LNP接觸。在一些實施例中，使活化之T細胞與4-12種LNP接觸。在一些實施例中，使活化之T細胞與4-8種LNP接觸。在一些實施例中，使活化之T細胞同時與不超過8種LNP接觸。在一些實施例中，使活化之T細胞同時與不超過6種LNP接觸。 VIII. 其他例示性實施例
儘管結合所闡釋之實施例來闡述本發明，但應理解，該等實施例並不意欲將本發明限於彼等實施例。相反，本發明意欲涵蓋如隨附申請專利範圍所界定的可包括在本發明內之所有替代方案、修改及等效形式，包括具體特徵之等效形式。
前述一般說明及詳細說明二者以及以下實例僅為例示性及解釋性的，且並不限制教示內容。本文所用之章節標題僅用於組織目的，而不應解釋為以任何方式限制期望標的物。倘若以引用方式併入之任何文獻與本說明書中所定義之任何術語衝突，則以本說明書為準。除非另有說明，否則本申請案中所給出之所有範圍均涵蓋端點。 IX. 實例 實例 1. 材料及方法 實例 1.1. 下一代測序 ( 「 NGS 」 ) 及在靶裂解效率分析。
使用QuickExtract™ DNA提取溶液(Lucigen，目錄號QE09050)，根據製造商之方案提取基因體DNA。
為定量地測定基因體中靶位置之編輯效率，利用深度測序來鑑別藉由基因編輯引入之插入、缺失及取代之存在。在所關注基因(例如HLA-A)內之靶位點附近設計PCR引子，且擴增所關注之基因體區域。按照本領域中之標準進行引子序列設計。
根據製造商之方案(Illumina)實施額外PCR，以添加用於測序之化學物質。在Illumina MiSeq儀器上對擴增子進行測序。在消除品質評分較低之讀段之後，將讀段與人類參考基因體(例如hg38)進行比對。將與所關注靶區重疊之讀段與局部基因體序列進行重新比對，以改良比對。接著計算野生型讀段之數量與含有C至T突變、C至A/G突變或插入缺失之讀段之數量。在以所預測之Cas9裂解位點為中心的20 bp區域中對插入及缺失進行評分。插入缺失百分比定義為在20 bp評分區域內插入或缺失一或多個鹼基之測序讀段總數除以測序讀段總數，包括野生型。在40 bp區域中對C至T突變或C至A/G突變進行評分，該區域包括該20 bp sgRNA靶序列之上游10 bp及下游10 bp。C至T編輯百分比定義為在40 bp區域內具有一個或多個C至T突變之測序讀段總數除以測序讀段總數，包括野生型。類似地計算C至A/G突變之百分比。 實例 1.2. 脂質奈米顆粒之製備。
將脂質組分以各種莫耳比溶解於100%乙醇中。將RNA貨品(例如Cas9 mRNA及sgRNA)溶解於25 mM檸檬酸鹽緩衝液、100 mM NaCl，pH 5.0中，使得RNA貨品之濃度為大約0.45 mg/mL。
脂質核酸組裝體含有下文實例中所列示之莫耳比之可電離脂質A ((9Z,12Z)-十八-9,12-二烯酸3-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)-2-((((3-(二乙基胺基)丙氧基)羰基)氧基)甲基)丙基酯((9Z,12Z)-3-((4,4-bis(octyloxy)butanoyl)oxy)-2-((((3-(diethylamino)propoxy)carbonyl)oxy)methyl)propyl octadeca-9,12-dienoate，亦稱為3-((4,4-bis(octyloxy)butanoyl)oxy)-2-((((3-(diethylamino)propoxy)carbonyl) oxy)methyl)propyl (9Z,12Z)-octadeca-9,12-dienoate))、膽固醇、DSPC及PEG2k-DMG。以脂質胺對RNA磷酸酯(N:P)之莫耳比為約6且gRNA對mRNA之重量比為1:1或1:2來調配脂質核酸組裝體。
使用交叉流技術，利用將乙醇中之脂質與兩體積之RNA溶液及一體積之水進行碰撞射流混合來製備脂質奈米顆粒(LNP組合物)。乙醇中之脂質經由十字混合器與兩體積之RNA溶液混合。第四水流經由線內T形管與十字混合器之出口流混合(參見WO2016010840，圖2)。將LNP組合物在室溫(RT)下保持1小時，且用水(大約1:1 v/v)進一步稀釋。使用切向流過濾在平板盒(Sartorius，100 kD MWCO)上濃縮LNP組合物，且使用PD-10去鹽管柱(GE)緩衝液交換至50 mM Tris、45 mM NaCl、5% (w/v)蔗糖，pH 7.5 (TSS)中。或者，視情況使用100 kDa Amicon旋轉過濾器濃縮LNP，且使用PD-10去鹽管柱(GE)緩衝液交換至TSS中。接著使用0.2 μm無菌過濾器過濾所得混合物。將最終LNP儲存在4℃或-80℃下，直至進一步使用。 實例 1.3. mRNA 之活體外轉錄 ( 「 IVT 」 )
藉由活體外轉錄使用線性化質體DNA模板及T7 RNA聚合酶來生成含有N1-甲基假U之加帽及多聚腺苷酸化mRNA。藉由使含有T7啟動子、轉錄序列及多聚腺苷酸化序列之質體DNA在以下條件下與XbaI一起在37℃下培育2小時使其線性化：200 ng/μL質體、2 U/μL XbaI (NEB)及1×反應緩衝液。藉由將反應物在65℃下加熱20分鐘使XbaI不活化。自酶及緩衝液鹽中純化線性化質體。藉由在37℃下於以下條件中培育1.5-4小時來實施IVT反應，以生成經修飾之mRNA：50 ng/μL線性化質體；GTP、ATP、CTP及N1-甲基假UTP (Trilink)，各自2-5 mM；10-25 mM ARCA (Trilink)；5 U/μL T7 RNA聚合酶(NEB)；1 U/μL鼠類RNA酶抑制劑(NEB)；0.004 U/μL無機大腸桿菌焦磷酸酶(NEB)；及1×反應緩衝液。添加TURBO DNA酶(ThermoFisher)至最終濃度為0.01 U/μL，且使反應物再培育30分鐘以去除DNA模板。根據製造商之方案，使用MegaClear轉錄清理套組(ThermoFisher)或RNeasy Maxi套組(Qiagen)純化mRNA。或者，經由沈澱方案純化mRNA，在一些情形中，其後為基於HPLC之純化。簡言之，在DNA酶消化後，使用LiCl沈澱、乙酸銨沈澱及乙酸鈉沈澱純化mRNA。對於HPLC純化之mRNA，在LiCl沈澱及重構後，藉由RP-IP HPLC純化mRNA (例如，參見Kariko等人，Nucleic Acids Research, 2011，第39卷，第21期e142)。合併選擇用於彙集之流份，且如上文所闡述藉由乙酸鈉/乙醇沈澱來去鹽。在另一替代方法中，用LiCl沈澱法純化mRNA，之後藉由切向流過濾進一步純化。藉由量測260 nm下之吸光度(Nanodrop)測定RNA濃度，且藉由Bioanlayzer (Agilent)之毛細管電泳對轉錄本進行分析。
自編碼根據SEQ ID NO: 307 (參見序列表格中之序列)之開放閱讀框之質體DNA生成釀膿鏈球菌(「Spy」) Cas9 mRNA。自編碼根據SEQ ID NO: 306之開放閱讀框之質體DNA生成Sp BC22n mRNA。自編碼根據SEQ ID NO: 309之開放閱讀框之質體DNA生成UGI mRNA。自編碼根據SEQ ID NO: 305之開放閱讀框之質體DNA生成腦膜炎雙球菌(Nme2) Cas9 mRNA。自編碼根據SEQ ID NO: 308之開放閱讀框之質體DNA生成Nme2 BC22n mRNA。關於RNA，應理解，T應經U置換(其為如上文所闡述之N1-甲基假尿苷)。實例中所用之信使RNA包括5’帽及3’多聚腺苷酸化區，例如長達100 nt，且例如在序列表格之SEQ ID NO: 147中予以闡述。向導RNA係藉由此項技術中已知之方法來化學合成。 實例 2. 使用電穿孔之一鍋式方法
在P3緩衝液中製備含有編碼SpBC22n (SEQ ID NO: 306)及UGI (SEQ ID NO: 309)或Nme2BC22n (SEQ ID NO: 308)及UGI (SEQ ID NO: 309)之相應mRNA混合物之溶液，其中含有或不含Spy Cas9 (SEQ ID NO: 307)或Nme2 Cas9 (SEQ ID NO: 305) mRNA。本研究中所用之每一向導首先在95℃下熱變性2分鐘，之後在室溫下培育5分鐘且在冰上冷卻。以商業方式獲得健康人類供體血球分離(Hemacare)。遵循製造商之說明，使用EasySep人類T細胞分離套組(Stemcell Technology，目錄號17951)，藉由負選擇分離T細胞。將T細胞冷凍保存於Cryostor CS10冷凍培養基(Stemcell，目錄號07930)中以供將來使用。在本研究開始時(第0天)，將冷凍保存之T細胞解凍且在1×細胞介素T細胞生長培養基中培養隔夜，該等生長培養基由CTS OpTmizer SFM (Gibco, A3705001)與IL-15 (5 ng/mL)、IL-7 (5 ng/mL)及IL-2 (200U/mL)組成。第二天，經由Transact (Miltenyi，目錄號130-111-160)使T細胞活化。
活化後48小時，收穫T細胞，離心，且重新懸浮於P3電穿孔緩衝液(Lonza)中。對於每一待電穿孔之孔，如 表 6 及表 7中所指示，將1 × 10^5個T細胞與試劑混合。在指示之情形下，樣品接受160 ng編碼Cas9或鹼基編輯器(BE)之mRNA、160 ng編碼UGI之mRNA及2 uM每一sgRNA，其最終體積為20 µL P3電穿孔緩衝液。使用製造商之脈衝編碼，對此混合物進行電穿孔。使電穿孔之T細胞立即在不含細胞介素之T細胞基礎培養基中靜置10分鐘，之後洗滌且重新懸浮於100 µL含有IL15 (5 ng/mL)、IL7 (5 ng/mL)及IL2 (200 U/mL)且含有0.5 uM化合物1之T細胞基礎培養基中。
化合物1係DNA依賴性蛋白激酶之小分子抑制劑。該抑制劑為9-(4,4-二氟環己基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)胺基)-7,9-二氫-8H-嘌呤-8-酮，亦繪示為： 。
如下製備DNAPKI化合物1： 一般資訊
所有試劑及溶劑均係自商業供應商購得且按接收狀態使用，或根據所引用之程序合成。所有中間體及最終化合物均使用急速管柱層析在矽膠上進行純化。在Bruker或Varian 400 MHz光譜儀上記錄NMR光譜，且在環境溫度下在CDCl3中收集NMR數據。化學位移以相對於CDCl3 (7.26)之百萬分率(ppm)報告。1H NMR之數據報告如下：化學位移，多重性(br =寬峰，s =單峰，d =雙重峰，t =三重峰，q =四重峰，dd =雙二重峰，dt =雙三重峰，m =多重峰)，偶合常數及積分。在具有電噴霧電離(ESI)源之Waters SQD2質譜儀上記錄MS數據。藉由UPLC-MS-ELS，使用配備有SQD2質譜儀之Waters Acquity H-Class液相層析儀測定最終化合物之純度，該質譜儀帶有光電二極體陣列(PDA)及蒸發光散射(ELS)偵測器。 中間體1a：(E)-N,N-二甲基-N'-(4-甲基-5-硝基吡啶-2-基)甲脒
向4-甲基-5-硝基-吡啶-2-胺(5 g, 1.0當量)於甲苯(0.3 M)中之溶液中添加DMF-DMA (3.0當量)。將混合物在110℃下攪拌2 h。將反應混合物在減壓下濃縮，得到殘餘物且藉由管柱層析進行純化，得到呈黃色固體之產物(59%)。 1H NMR (400 MHz, (CD 3) 2SO) δ 8.82 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 6.74 (s, 1H), 3.21 (m, 6H)。 中間體1b：(E)-N-羥基-N'-(4-甲基-5-硝基吡啶-2-基)甲脒
向中間體1a (4 g, 1.0當量)於MeOH (0.2 M)中之溶液中添加NH 2OH·HCl (2.0當量)。將反應混合物在80℃下攪拌1 h。過濾反應混合物，且將濾液在減壓下濃縮，得到殘餘物。使殘餘物在H 2O與EtOAc之間分配，之後用EtOAc萃取2次。將有機相在減壓下濃縮，得到殘餘物且藉由管柱層析進行純化，得到呈白色固體之產物(66%)。1H NMR (400 MHz, (CD 3) 2SO) δ 10.52 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 10.08 (dd, J = 9.9, 3.7 Hz, 1H), 8.84 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 7.85 (dd, J = 9.7, 3.8 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 3.36 (s, 3 H)。 中間體1c：7-甲基-6-硝基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶
在0℃下向中間體1b (2.5 g, 1.0當量)於THF (0.4 M)中之溶液中添加三氟乙酸酐(1.0當量)。將混合物在25℃下攪拌18 h。過濾反應混合物，且將濾液在減壓下濃縮，得到殘餘物。藉由管柱層析純化殘餘物，得到呈白色固體之產物(44%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 9.53 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 2.78 (d, J = 1.0 Hz, 3H)。 中間體1d：7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-胺
向Pd/C (10% w/w, 0.2當量)於EtOH (0.1 M)中之混合物中添加中間體1c (1.0當量)及甲酸銨(5.0當量)。將混合物在105℃下加熱2 h。過濾反應混合物，且將濾液在減壓下濃縮，得到殘餘物。藉由管柱層析純化殘餘物，得到呈淺褐色固體之產物。 1H NMR (400 MHz, (CD 3) 2SO) δ 8.41 (s, 2H), 8.07 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.43 (s, 1H), 2.22 (s, 3H)。 中間體1e：8-亞甲基-1,4-二氧雜螺[4.5]癸烷
在-78℃下向甲基(三苯基)溴化鏻(1.15當量)於THF (0.6 M)中之溶液中逐滴添加 n-BuLi (1.1當量)，且將混合物在0℃下攪拌1 h。接著，將1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-酮(50 g, 1.0當量)添加至反應混合物中。將混合物在25℃下攪拌12 h。在0℃下將反應混合物傾倒至NH 4Cl水溶液中，用H 2O稀釋，且用EtOAc萃取3次。將合併的有機層在減壓下濃縮，得到殘餘物且藉由管柱層析進行純化，得到呈無色油狀物之產物(51%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 4.67 (s, 1H), 3.96 (s, 4 H), 2.82 (t, J = 6.4 Hz, 4 H), 1.70 (t, J = 6.4 Hz, 4 H)。 中間體1f：7,10-二氧雜二螺[2.2.4 6.2 3]十二烷
在-40℃下向中間體4a (5 g, 1.0當量)於甲苯(3 M)中之溶液中逐滴添加ZnEt 2(2.57當量)，且將混合物在-40℃下攪拌1 h。接著在-40℃下在N 2下向混合物中逐滴添加二碘甲烷(6.0當量)。接著將混合物在N 2氛圍下在20℃下攪拌17 h。在0℃下將反應混合物傾倒至NH 4Cl水溶液中，且用EtOAc萃取2次。將合併的有機相用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且將濾液在真空中濃縮。藉由管柱層析純化殘餘物，得到呈淺黃色油狀物之產物(73%)。 中間體1g：螺[2.5]辛-6-酮
向中間體4b (4 g, 1.0當量)於1:1 THF/H 2O (1.0 M)中之溶液中添加TFA (3.0當量)。將混合物在N 2氛圍下在20℃下攪拌2 h。將反應混合物在減壓下濃縮以去除THF，且利用2 M NaOH (水溶液)將殘餘物調整至pH 7。將混合物傾倒至水中且用EtOAc萃取3次。將合併的有機相用鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且將濾液在真空中濃縮。藉由管柱層析純化殘餘物，得到呈淺黃色油狀物之產物(68%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 2.35 (t, J = 6.6 Hz, 4H), 1.62 (t, J = 6.6 Hz, 4H), 0.42 (s, 4H)。 中間體1h：N-(4-甲氧基苄基)螺[2.5]辛-6-胺
向中間體4c (2 g, 1.0當量)及(4-甲氧基苯基)甲胺(1.1當量)於DCM (0.3 M)中之混合物中添加AcOH (1.3當量)。將混合物在N 2氛圍下在20℃下攪拌1 h。接著，在0℃下向混合物中添加NaBH(OAc) 3(3.3當量)，且將混合物在N 2氛圍下在20℃下攪拌17 h。將反應混合物在減壓下濃縮以去除DCM，且用H 2O稀釋所得殘餘物並用EtOAc萃取3次。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且將濾液在減壓下濃縮，得到殘餘物。藉由管柱層析純化殘餘物，得到呈灰色固體之產物(51%)。 1H NMR (400 MHz, (CD 3) 2SO) δ 7.15 - 7.07 (m, 2H), 6.77 - 6.68 (m, 2H), 3.58 (s, 3H), 3.54 (s, 2H), 2.30 (ddt, J = 10.1, 7.3, 3.7 Hz, 1H), 1.69 - 1.62 (m, 2H), 1.37 (td, J = 12.6, 3.5 Hz, 2H), 1.12 - 1.02 (m, 2H), 0.87 - 0.78 (m, 2H), 0.13 - 0.04 (m, 2H)。 中間體1i：螺[2.5]辛-6-胺
向Pd/C (10% w/w, 1.0當量)於MeOH (0.25 M)中之懸浮液中添加中間體4d (2 g, 1.0當量)，且將混合物在H 2氛圍下在80℃及50 Psi下攪拌24 h。過濾反應混合物，且將濾液在減壓下濃縮，得到殘餘物，藉由管柱層析純化該殘餘物，得到呈白色固體之產物。 1H NMR (400 MHz, (CD 3) 2SO) δ 2.61 (tt, J = 10.8, 3.9 Hz, 1H), 1.63 (ddd, J = 9.6, 5.1, 2.2 Hz, 2H), 1.47 (td, J = 12.8, 3.5 Hz, 2H), 1.21 - 1.06 (m, 2H), 0.82 - 0.72 (m, 2H), 0.14 - 0.05 (m, 2H)。 中間體1j：2-氯-4-(螺[2.5]辛-6-基胺基)嘧啶-5-甲酸乙基酯
在N 2下向2,4-二氯嘧啶-5-甲酸乙基酯(2.7 g, 1.0當量)及中間體1i (1.0當量)於ACN (0.5 - 0.6 M)中之混合物中一次性添加K 2CO 3(2.5當量)。將混合物在20℃下攪拌12 h。過濾反應混合物，且將濾液在減壓下濃縮，得到殘餘物。藉由管柱層析純化殘餘物，得到呈白色固體之產物(54%)。 1H NMR (400 MHz, (CD 3) 2SO) δ 8.64 (s, 1H), 8.41 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.33 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.08 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 1.90 (dd, J = 12.7, 4.8 Hz, 2H), 1.64 (t, J = 12.3 Hz, 2H), 1.52 (q, J = 10.7, 9.1 Hz, 2H), 1.33 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.12 (d, J = 13.0 Hz, 2H), 0.40 - 0.21 (m, 4H)。 中間體1k：2-氯-4-(螺[2.5]辛-6-基胺基)嘧啶-5-甲酸
向中間體1j (2 g, 1.0當量)於1:1 THF/H 2O (0.3 M)中之溶液中添加LiOH (2.0當量)。將混合物在20℃下攪拌12 h。過濾反應混合物，且將濾液在減壓下濃縮，得到殘餘物。利用2 M HCl將殘餘物調整至pH 2，且藉由過濾收集沈澱物，用水洗滌，且在真空下乾燥。產物不經額外純化即直接用於下一步驟中(82%)。 1H NMR (400 MHz, (CD 3) 2SO) δ 13.54 (s, 1H), 8.38 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.35 (s, 1H), 3.82 (qt, J = 8.2, 3.7 Hz, 1H), 1.66 (dq, J = 12.8, 4.1 Hz, 2H), 1.47 - 1.34 (m, 2H), 1.33 - 1.20 (m, 2H), 0.86 (dt, J = 13.6, 4.2 Hz, 2H), 0.08 (dd, J = 8.3, 4.8 Hz, 4H)。 中間體1l：2-氯-9-(螺[2.5]辛-6-基)-7,9-二氫-8H-嘌呤-8-酮
向中間體1k (1.5 g, 1.0當量)及Et 3N (1.0當量)於DMF (0.3 M)中之混合物中添加DPPA (1.0當量)。將混合物在N 2氛圍下在120℃下攪拌8 h。將反應混合物傾倒至水中。藉由過濾收集沈澱物，用水洗滌，且在真空下乾燥以得到殘餘物，其不經額外純化即直接用於下一步驟中(67%)。 1H NMR (400 MHz, (CD 3) 2SO) δ 11.68 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 4.26 (ddt, J = 12.3, 7.5, 3.7 Hz, 1H), 2.42 (qd, J = 12.6, 3.7 Hz, 2H), 1.95 (td, J = 13.3, 3.5 Hz, 2H), 1.82 - 1.69 (m, 2H), 1.08 - 0.95 (m, 2H), 0.39 (tdq, J = 11.6, 8.7, 4.2, 3.5 Hz, 4H)。 中間體1m：2-氯-7-甲基-9-(螺[2.5]辛-6-基)-7,9-二氫-8H-嘌呤-8-酮
向中間體1l (1.0 g, 1.0當量)及NaOH (5.0當量)於1:1 THF/H 2O (0.3-0.5 M)中之混合物中添加MeI (2.0當量)。將混合物在N 2氛圍下在20℃下攪拌12 h。將反應混合物在減壓下濃縮，得到殘餘物，藉由管柱層析純化該殘餘物，得到呈淺黃色固體之產物(67%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 7.57 (s, 1H), 4.03 (tt, J = 12.5, 3.9 Hz, 1H), 3.03 (s, 3H), 2.17 (qd, J = 12.6, 3.8 Hz, 2H), 1.60 (td, J = 13.4, 3.6 Hz, 2H), 1.47 - 1.34 (m, 2H), 1.07 (s, 1H), 0.63 (dp, J = 14.0, 2.5 Hz, 2H), -0.05 (s, 4H)。 DNAPKI化合物4：7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)胺基)-9-(螺[2.5]辛-6-基)-7,9-二氫-8H-嘌呤-8-酮
將中間體1m (1.0當量)及中間體1d (1.0當量)、Pd(dppf)Cl 2(0.2當量)、XantPhos (0.4當量)及Cs 2CO 3(2.0當量)於DMF (0.2 - 0.3 M)中之混合物脫氣且用N 2吹掃3次，且將混合物在N 2氛圍下在130℃下攪拌12 h。接著將混合物傾倒至水中，且用DCM萃取3次。將合併的有機相用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且將濾液在真空中濃縮。藉由管柱層析純化殘餘物，得到呈灰白色固體之產物。 1H NMR (400 MHz, (CD 3) 2SO) δ 9.09 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 4.21 (t, J = 12.5 Hz, 1H), 3.36 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.34 (dt, J = 13.0, 6.5 Hz, 2H), 1.93 - 1.77 (m, 2H), 1.77 - 1.62 (m, 2H), 0.91 (d, J = 13.2 Hz, 2H), 0.31 (t, J = 7.1 Hz, 2H)。MS: 405.5 m/z [M+H]。
經AAV處理之細胞接受3 × 10^5感染複數(MOI)之AAV6，該AAV6編碼側翼為針對SpCas9 G013006切割位點設計之同源臂之TCR (SEQ ID NO: 297)。在第二天，向T細胞中添加額外100 µL含有細胞介素之T細胞基礎培養基。隨後將電穿孔之T細胞再培養4天，且收集細胞沈澱以進行如實例1中所闡述之NGS測序。在解凍後第10天，藉由流式細胞術對T細胞進行表型分析，以測定編輯是否導致細胞表面蛋白質之損失。 表 6 - 編輯處理
處理 sgRNA mRNA
Nme2 Cas9 G021469 TRAC  SEQ ID No: 305
Sp Cas9 G013006 TRAC  SEQ ID No.:307
Nme2鹼基編輯器 G028935 TRAC G028986 TRBC G028907 HLA-A 鹼基編輯器SEQ ID No:308 UGI SEQ ID No: 309
Sp鹼基編輯器 G023520 TRAC G023524 TRBC G023523 HLA-A 鹼基編輯器SEQ ID No: 306 UGI SSEQ ID No: 309
對於流式細胞分析，在FACS緩衝液(PBS + 2% FBS + 2 mM EDTA)中洗滌細胞。使工程化T細胞在靶向HLA-A2 (Biolegend, 343320)、CD3 (Biolegend, 300430)、CD4 (Biolegend, 317434)、CD8 (Biolegend, 301046)、Vb8 (Biolegend, 348104)之抗體與ViaKrome 808可固定活力染料(Beckman Coulter, C36628)之混合劑中培育。隨後洗滌T細胞，且在Cytoflex儀器(Beckman Coulter)上進行分析。使用FlowJo軟體包(第10.6.1版)實施數據分析。針對大小、活力、CD4或CD8表現及 表 7中所指示之標記物表現對T細胞進行門控。 表 7及 圖 1A- 圖 2C中之流式細胞術數據顯示內源性TRAC、TRBC1或TRBC2基因座受到破壞之所有細胞，表示為非CD3+Vb8-之細胞之百分比。類似地， 表 7及 圖 2A- 圖 2C中之流式細胞術數據顯示破壞HLA-A2表現之鹼基編輯。表現基因轉殖TCR (Vb8+)之細胞百分比示於 表 7及 圖 3A- 圖 3C中。 表 8及 圖 4A- 圖 4H中所示之NGS數據結果亦顯示當使用正交Cas9種類時，在TRAC、TRBC1及TRBC2基因座中之編輯。 表 7. 展示細胞表面表型之 T 細胞之平均百分比
標記物 處理 供體45127 供體3410 供體3786
平均值 SD 平均值 SD 平均值 SD
HLA-A- 無RNA，無AAV 3.11 1.01 2.41 0.77 0.31 0.32
僅AAV 1.28 1.33 3.52 2.66 0.50 0.18
Nme2 BE，無向導 0.58 0.39 5.73 2.02 0.18 0.16
Spy BE，無向導 0.64 0.47 1.46 1.04 0.19 0.16
Nme2Cas9 3.32 3.22 2.55 2.51 0.35 0.31
SpyCas9 3.28 3.75 2.43 1.16 0.37 0.31
Nme2Cas9 + AAV 5.48 5.45 1.62 1.31 0.00 0.00
SpyCas9 + AAV 3.94 4.05 1.26 1.64 0.28 0.49
Nme2 BE 91.18 3.72 85.81 3.25 87.66 2.35
Nme2 BE + Nme2Cas9 86.95 4.04 76.65 0.97 85.61 2.58
Nme2 BE + SpyCas9 92.14 1.76 77.24 12.68 84.80 1.98
Nme2 BE + Nme2Cas9 + AAV 96.17 0.86 89.47 3.07 91.14 2.99
Nme2 BE + SpyCas9+ AAV 96.83 0.52 94.57 2.28 91.23 0.66
Spy BE 96.17 0.35 93.77 2.33 96.37 0.72
Spy BE + Nme2Cas9 96.85 0.86 89.84 3.15 91.58 3.17
Spy BE + SpyCas9 88.39 3.19 90.08 2.81 85.05 4.59
Spy BE + Nme2Cas9 + AAV 99.13 0.60 98.18 0.70 99.52 0.28
Spy BE + SpyCas9 + AAV 95.90 3.57 94.33 6.33 85.08 15.10
100-(CD3+ Vb8-) 無RNA，無AAV 5.43 1.57 8.77 4.76 4.90 0.53
僅AAV 5.47 2.10 8.93 1.12 5.59 0.19
Nme2 BE，無向導 4.95 0.87 7.37 0.87 5.20 0.80
Spy BE，無向導 5.06 0.68 6.30 0.28 4.60 0.71
Nme2Cas9 95.40 0.33 38.61 4.83 93.38 1.33
SpyCas9 95.69 1.07 96.87 1.86 95.40 1.21
Nme2Cas9 + AAV 55.60 4.17 52.36 7.23 64.49 3.87
SpyCas9 + AAV 55.21 3.59 70.55 2.78 68.82 6.50
Nme2 BE 96.86 2.85 92.80 6.16 92.87 1.17
Nme2 BE + Nme2Cas9 93.62 2.26 89.74 2.27 93.45 3.39
Nme2 BE + SpyCas9 97.11 2.00 86.25 12.98 95.45 0.87
Nme2 BE + Nme2Cas9 + AAV 96.07 1.53 97.14 0.56 97.75 1.08
Nme2 BE + SpyCas9+ AAV 96.37 0.59 97.69 0.18 97.27 1.15
Spy BE 97.84 1.13 97.01 1.20 96.03 0.20
Spy BE + Nme2Cas9 98.85 0.51 97.79 0.82 93.99 1.57
Spy BE + SpyCas9 92.26 3.62 92.97 2.36 85.78 5.33
Spy BE + Nme2Cas9 + AAV 99.66 0.59 98.58 0.80 99.63 0.21
Spy BE + SpyCas9 + AAV 95.39 4.32 94.63 6.43 86.04 14.58
Vb8+ 無RNA，無AAV 4.52 2.28 7.85 3.41 4.30 0.76
僅AAV 5.37 2.12 8.57 1.15 4.81 0.24
Nme2 BE，無向導 3.94 1.70 6.93 0.70 4.69 0.74
Spy BE，無向導 4.58 0.81 6.02 0.18 4.21 0.62
Nme2Cas9 0.28 0.16 3.59 1.46 0.23 0.23
SpyCas9 0.34 0.31 0.48 0.83 0.14 0.09
Nme2Cas9 + AAV 49.49 5.74 49.23 8.00 59.70 6.46
SpyCas9 + AAV 49.72 3.83 66.90 3.45 63.34 7.86
Nme2 BE 0.05 0.09 0.35 0.61 0.13 0.07
Nme2 BE + Nme2Cas9 0.60 1.05 0.26 0.46 0.12 0.15
Nme2 BE + SpyCas9 0.22 0.19 0.90 0.90 0.05 0.04
Nme2 BE + Nme2Cas9 + AAV 56.65 4.77 57.19 2.78 65.74 3.66
Nme2 BE + SpyCas9+ AAV 79.48 2.27 80.11 2.56 81.06 1.35
Spy BE 0.06 0.05 0.33 0.13 0.09 0.02
Spy BE + Nme2Cas9 0.05 0.08 0.38 0.05 0.26 0.34
Spy BE + SpyCas9 0.58 0.60 0.42 0.26 0.11 0.19
Spy BE + Nme2Cas9 + AAV 93.65 1.49 82.46 4.70 93.43 4.20
Spy BE + SpyCas9 + AAV 59.29 10.60 62.74 10.82 57.84 9.70
                       
表 8 - T 細胞之平均編輯百分比
基因座 供體 處理 C 至T C 至A/G 插入缺失
平均值 SD n 平均值 SD n 平均值 SD n
Spy BE TRAC G023520 供體3410 無RNA，無AAV 0.22 0.21 3 0.47 0.41 3 0.14 0.13 3
Spy BE 82.54 5.70 3 1.18 0.07 3 4.71 4.56 3
Spy BE + Nme2Cas9 83.08 6.03 3 2.92 2.64 3 0.89 0.78 3
Spy BE + SpyCas9 58.58 2.58 3 1.04 0.27 3 22.05 0.76 3
供體3786 無RNA，無AAV 0.31 0.19 3 0.63 0.00 3 0.19 0.02 3
Spy BE 91.66 0.95 3 1.11 0.08 3 1.18 0.20 3
Spy BE + Nme2Cas9 92.07 2.22 3 1.37 0.19 3 0.94 0.15 3
Spy BE + SpyCas9 63.28 0.72 3 1.11 0.28 3 28.98 0.27 3
供體45127 無RNA，無AAV 17.82 17.45 3 1.00 0.29 3 0.55 0.48 3
Spy BE 93.89 0.94 3 1.08 0.12 3 0.63 0.11 3
Spy BE + Nme2Cas9 94.05 1.12 3 1.14 0.09 3 0.71 0.24 3
Spy BE + SpyCas9 62.68 1.62 3 1.00 0.09 3 28.64 0.96 3
Spy BE TRBC1 G023524 供體3410 無RNA，無AAV 0.30 0.02 3 1.58 0.17 3 0.32 0.12 3
Spy BE 41.64 16.02 3 2.78 0.72 3 37.83 26.97 3
Spy BE + Nme2Cas9 85.43 5.60 3 4.94 0.40 3 3.36 3.54 3
Spy BE + SpyCas9 45.07 6.66 3 2.77 0.33 3 40.63 6.14 3
供體3786 無RNA，無AAV 1.31 0.93 3 1.70 0.10 3 0.53 0.07 3
Spy BE 84.95 5.87 2 4.76 0.25 2 3.50 2.12 2
Spy BE + Nme2Cas9 89.15 1.66 3 4.56 0.16 3 1.26 0.10 3
Spy BE + SpyCas9 50.70 2.37 3 2.66 0.17 3 40.24 0.94 3
供體45127 無RNA，無AAV 0.59 0.05 3 1.58 0.28 3 0.51 0.09 3
Spy BE 84.82 4.62 3 4.20 0.45 3 1.55 0.23 3
Spy BE + Nme2Cas9 90.59 0.74 3 4.36 0.30 3 1.12 0.08 3
Spy BE + SpyCas9 49.44 6.79 3 2.74 0.43 3 36.66 4.32 3
Spy BE TRBC2 G023524 供體3410 無RNA，無AAV 1.82 0.56 3 2.22 0.18 3 0.33 0.02 3
Nme2 BE 81.25 2.37 3 6.25 0.27 3 2.38 0.17 3
Nme2 BE + Nme2Cas9 28.93 2.87 3 2.90 0.16 3 45.04 1.57 3
Spy BE + Nme2Cas9 77.18 7.55 3 6.58 1.17 3 2.37 0.68 3
供體3786 無RNA，無AAV 2.58 0.26 2 2.23 0.00 2 0.39 0.05 2
Nme2 BE 53.46 46.30 3 38.01 53.69 3 1.83 1.70 3
Nme2 BE + Nme2Cas9 34.59 1.87 3 2.77 0.25 3 53.90 1.70 3
Spy BE + Nme2Cas9 84.02 2.41 3 7.17 0.61 3 2.43 0.51 3
供體45127 無RNA，無AAV 1.89 0.86 3 2.28 0.09 3 0.29 0.10 3
Nme2 BE 83.00 0.98 3 6.36 0.29 3 2.39 0.94 3
Nme2 BE + Nme2Cas9 33.53 5.09 3 2.78 0.32 3 49.17 7.44 3
Spy BE + Nme2Cas9 87.88 0.75 3 5.97 0.28 3 1.77 0.04 3
SpyCas9 TRAC G013006 供體3410 無RNA，無AAV 0.16 0.03 3 0.73 0.06 3 0.44 0.11 3
SpyCas9 0.01 0.01 3 0.13 0.03 3 96.11 0.27 3
Nme2 BE + SpyCas9 6.54 0.68 3 0.45 0.13 3 83.37 9.38 3
Spy BE + SpyCas9 66.13 1.10 3 2.77 0.23 3 23.59 0.94 3
供體3786 無RNA，無AAV 0.18 0.04 3 0.79 0.04 3 0.46 0.21 3
SpyCas9 0.03 0.01 3 0.06 0.01 3 97.47 0.41 3
Nme2 BE + SpyCas9 5.19 0.80 3 0.30 0.03 3 91.86 0.43 3
Spy BE + SpyCas9 64.38 1.16 3 2.78 0.18 3 27.24 0.77 3
供體45127 無RNA，無AAV 0.22 0.04 3 0.76 0.16 3 0.32 0.08 3
SpyCas9 0.03 0.02 3 0.11 0.03 3 96.72 0.54 3
Nme2 BE + SpyCas9 7.57 0.50 3 0.33 0.01 3 89.96 0.66 3
Spy BE + SpyCas9 67.08 0.48 3 2.69 0.33 3 24.13 0.13 3
Nme2 BE TRAC G028935 供體3410 無RNA，無AAV 0.24 0.00 1 1.18 0.00 1 0.13 0.00 1
Nme2 BE 60.14 14.46 3 2.24 1.07 3 9.63 13.65 3
Nme2 BE + Nme2Cas9 20.74 0.91 2 2.03 0.01 2 44.67 1.31 2
Spy BE + Nme2Cas9 22.62 14.01 3 1.78 0.32 3 1.45 0.99 3
供體3786 無RNA，無AAV 0.30 0.05 3 1.19 0.17 3 0.15 0.02 3
Nme2 BE 86.81 1.57 3 3.18 0.55 3 2.69 1.25 3
Nme2 BE + Nme2Cas9 21.13 3.19 3 1.55 0.25 3 69.11 6.71 3
Spy BE + Nme2Cas9 83.36 2.74 3 3.51 0.26 3 4.50 0.36 3
供體45127 無RNA，無AAV 0.34 0.04 2 1.28 0.13 2 0.10 0.01 2
Nme2 BE 69.26 16.30 3 2.86 0.43 3 3.04 1.83 3
Nme2 BE + Nme2Cas9 24.18 1.65 3 1.85 0.16 3 51.95 2.75 3
Spy BE + Nme2Cas9 58.64 6.57 3 2.29 0.06 3 3.31 1.68 3
Nme2 BE TRBC1 G028986 供體3410 無RNA，無AAV 0.67 0.02 3 2.14 0.06 3 0.19 0.02 3
Nme2 BE 80.76 1.87 3 5.96 0.12 3 2.19 0.06 3
Nme2 BE + Nme2Cas9 33.74 3.05 3 3.25 0.22 3 39.30 2.37 3
Spy BE + Nme2Cas9 76.48 10.05 3 6.76 1.27 3 2.18 0.38 3
供體3786 無RNA，無AAV 2.08 0.88 3 2.10 0.26 3 0.29 0.15 3
Nme2 BE 83.13 0.88 3 7.15 0.50 3 2.89 1.48 3
Nme2 BE + Nme2Cas9 32.96 6.88 3 2.87 0.62 3 53.89 5.17 3
Spy BE + Nme2Cas9 81.49 2.92 3 7.34 0.52 3 3.14 1.18 3
供體45127 無RNA，無AAV 1.30 0.17 3 2.23 0.24 3 0.23 0.01 3
Nme2 BE 77.77 10.90 3 5.68 1.10 3 1.60 0.30 3
Nme2 BE + Nme2Cas9 32.22 0.92 3 2.76 0.30 3 49.49 1.83 3
Spy BE + Nme2Cas9 86.16 1.21 3 5.91 0.29 3 2.21 0.14 3
Nme2 BE TRBC2 G028986 供體3410 無RNA，無AAV 1.82 0.56 3 2.22 0.18 3 0.33 0.02 3
Nme2 BE 81.25 2.37 3 6.25 0.27 3 2.38 0.17 3
Nme2 BE + Nme2Cas9 28.93 2.87 3 2.90 0.16 3 45.04 1.57 3
Spy BE + Nme2Cas9 77.18 7.55 3 6.58 1.17 3 2.37 0.68 3
供體3786 無RNA，無AAV 2.58 0.26 2 2.23 0.00 2 0.39 0.05 2
Nme2 BE 53.46 46.30 3 38.01 53.69 3 1.83 1.70 3
Nme2 BE + Nme2Cas9 34.59 1.87 3 2.77 0.25 3 53.90 1.70 3
Spy BE + Nme2Cas9 84.02 2.41 3 7.17 0.61 3 2.43 0.51 3
供體45127 無RNA，無AAV 1.89 0.86 3 2.28 0.09 3 0.29 0.10 3
Nme2 BE 83.00 0.98 3 6.36 0.29 3 2.39 0.94 3
Nme2 BE + Nme2Cas9 33.53 5.09 3 2.78 0.32 3 49.17 7.44 3
Spy BE + Nme2Cas9 87.88 0.75 3 5.97 0.28 3 1.77 0.04 3
Nme2Cas9 TRAC G021469 供體3410 無RNA，無AAV 0.17 0.03 3 0.75 0.14 3 0.57 0.09 3
Nme2 BE 0.10 0.01 3 0.63 0.23 3 41.21 1.82 3
Nme2 BE + Nme2Cas9 0.37 0.02 3 0.73 0.07 3 13.32 0.64 3
Spy BE + Nme2Cas9 0.10 0.02 3 0.55 0.04 3 34.91 0.39 3
供體3786 無RNA，無AAV 0.19 0.08 3 0.72 0.05 3 0.47 0.21 3
Nme2 BE 0.02 0.04 3 0.04 0.04 3 98.31 2.79 3
Nme2 BE + Nme2Cas9 0.00 0.00 3 0.00 0.00 3 33.83 57.30 3
Spy BE + Nme2Cas9 0.05 0.02 3 0.14 0.05 3 89.85 4.22 3
供體45127 無RNA，無AAV 0.21 0.05 3 0.78 0.08 3 0.41 0.10 3
Nme2 BE 0.03 0.01 3 0.08 0.01 3 95.24 0.85 3
Nme2 BE + Nme2Cas9 0.27 0.07 3 0.50 0.07 3 37.49 1.05 3
Spy BE + Nme2Cas9 0.04 0.01 3 0.11 0.02 3 95.29 0.22 3
實例 3. 使用脂質奈米顆粒之一鍋式方法 實例 3.1. T 細胞製備
以商業方式獲得健康人類供體血球分離(Hemacare)，且洗滌細胞，重新懸浮於CliniMACS® PBS/EDTA緩衝液(Miltenyi Biotec，目錄號130-070-525)中，且在MultiMACS™ Cell 24 Separator Plus裝置(Miltenyi Biotec)中處理。使用Straight from Leukopak®人類CD4/CD8微珠套組(Miltenyi Biotec，目錄號130-122-352)，經由正選擇分離T細胞。將T細胞等分，且在Cryostor® CS10 (StemCell Technologies，目錄號07930)中冷凍保存以供將來使用。
解凍後，將T細胞以1.0 × 10^6個細胞/mL之密度平鋪於T細胞生長培養基(TCGM)中，該培養基由CTS OpTmizer T細胞擴增SFM及T細胞擴增補充物(ThermoFisher，目錄號A1048501)、5%人類AB血清(GeminiBio，目錄號100-512)、1X青黴素-鏈黴素、1X Glutamax、10 mM HEPES、200 U/mL重組人類介白素-2 (Peprotech，目錄號200-02)、5 ng/mL重組人類介白素7 (Peprotech，目錄號200-07)及5 ng/mL重組人類介白素15 (Peprotech，目錄號200-15)構成。使T細胞在此培養基中靜置24小時，此時用以1:100體積比添加之T細胞TransAct™人類試劑(Miltenyi，目錄號130-111-160)使該等T細胞活化。T細胞在LNP處理之前活化48小時。 實例 3.2. T 細胞處理及擴增
活化後48小時，收穫T細胞，以500 g離心5 min，且以1 × 10^6個T細胞/mL之濃度重新懸浮於T細胞平鋪培養基(TCPM)中：TCGM之無血清形式，其含有400 U/mL重組人類介白素-2 (Peprotech，目錄號200-02)、10 ng/ml重組人類介白素7 (Peprotech，目錄號200-07)及10 ng/ml重組人類介白素15 (Peprotech，目錄號200-15)。將TCPM中之T細胞以5 × 10^4個細胞/孔接種於平底96孔板中。
如實例1中所闡述，以35脂質A/47.5膽固醇/15 DSPC/2.5 PEG2k-DMG之莫耳比生成LNP。信使RNA序列係如實例1中所闡述。在T細胞處理之前，在T細胞處理培養基(TCTM)中製備不同的LNP混合物：TCTM為一種形式之TCGM，其含有20 ug/mL rhApoE3，不存在介白素2、7或15。每個處理組中每一LNP之最終濃度示於 表 9中。使LNP混合物在37℃下培育15分鐘，且接著添加至先前接種於96孔板中之5 × 10^4個T細胞中。
接下來，將化合物1及呈編碼TCR (SEQ ID NO: 297)之腺相關病毒(AAV)形式之修復模板在TCTM中稀釋，且分別以0.5 µM及3 × 10^5個基因體拷貝/細胞之最終濃度添加至T細胞中。使T細胞在37℃下培育24小時，此時將其以500 g離心5 min，重新懸浮於新鮮TCGM中且放回至培育器。在處理後第4天，T細胞在TCGM中以1:4比率(v/v)繼代培養。在處理後第7天，實施流式細胞術以評價由Sp鹼基編輯器靶向之基因編碼的不同表面受體之敲除效率以及SpCas9或Nme2 Cas9之在TRAC基因座中之TCR插入效率。 表 9.每一處理組中LNP混合物之組成。每一LNP之最終濃度以µg/mL示出
LNP 組成 處理組
未經處理 僅 AAV 僅 SpBC22n 僅 SpCas9 僅 Nme2 Cas9 SpBC22n + SpCas9 SpBC22n + Nme2 Cas9
SpBC22n mRNA - - 0.83 - - 0.83 0.83
UGI mRNA - - 0.4175 - - 0.4175 0.4175
TRAC G023520 SpBC22n向導 - - 0.15 - - 0.15 0.15
TRBC1/2 G023524 SpBC22n向導 - - 0.29 - - 0.29 0.29
CIITA G023521 SpBC22n向導 - - 0.715 - - 0.715 0.715
HLA-A G023524 SpBC22n向導 - - 2.185 - - 2.185 2.185
SpCas9 mRNA - - - 0.4175 - 0.4175 -
TRAC G013006 Spy Cas9向導 - - - 0.83 - 0.83 -
Nme2 Cas9 mRNA - - - - 0.4175 - 0.4175
TRAC G021469 Nme2 Cas9向導 - - - - 0.83 - 0.83
HD1 TCR AAV - + - + + + +
實例 3.3. 流式細胞術
在LNP處理後第7天，將T細胞轉移至U形底96孔板中，且以500 g旋轉沈降5分鐘。棄去上清液，且將細胞重新懸浮於含有Viakrome 808 (Beckman Coulter，目錄號C36628) (1:100)、PC5.5抗人類CD3 (Biolegend，目錄號300430) (1:100)、BV421抗人類CD4 (Biolegend，目錄號317434) (1:100)、BV785抗人類CD8 (Biolegend，目錄號301046) (1:100)、APC/Fire 750抗人類HLA-DR, DP, DQ (Biolegend，目錄號361712) (1:50)、BV510抗人類HLA-A2 (Biolegend，目錄號343320) (1:100)、FITC抗人類HLA-A3 (eBioscience，目錄號11-5754-42) (1:100)及PE抗人類TCR Vβ8 (Biolegend，目錄號348104) (1:100)之FACS緩衝液中。使T細胞在黑暗中在4℃下染色30分鐘。將T細胞洗滌一次，重新懸浮於FACS緩衝液中，且在Cytoflex LX流式細胞儀(Beckman Coulter)上處理。在FlowJo第10.8.1版(BD Biosciences)上處理流式細胞術數據。針對大小、特異性(singularity)以及活力及CD8+表現對所有T細胞進行門控。特異性抗原呈陰性及/或TCR插入呈陽性之CD8+ T細胞百分比示於 表 10及 圖 5A- 圖 5E中。 表 10-不同抗原呈陰性及/或HD1 TCR插入呈陽性之T細胞百分比。
標記物 處理組 供體1 供體2 供體3 供體4
平均值 SD n 平均值 SD n 平均值 SD n 平均值 SD n
CD3- 未經處理 0.7 0.2 3 0.3 0.1 3 0.3 0.1 3 0.3 0.0 3
僅AAV 0.5 0.2 3 0.2 0.1 3 0.1 0.1 3 0.2 0.1 3
僅SpBC22n 99.7 0.0 3 98.5 0.2 3 99.4 0.1 3 99.4 0.1 2
僅SpCas9 11.3 3.6 3 6.4 1.0 3 12.1 0.2 3 12.3 0.4 3
僅Nme2 Cas9 5.8 3.1 3 4.1 0.1 3 7.0 0.6 3 7.9 0.6 3
SpBC22n + SpCas9 46.0 7.3 3 56.8 1.4 3 52.6 0.5 3 58.2 6.4 3
SpBC22n + Nme2 Cas9 10.1 1.5 3 17.9 0.8 3 9.8 0.3 3 16.8 1.0 3
HLA-DR, DP, DQ- 未經處理 52.2 7.3 3 47.2 3.2 3 64.7 1.0 3 57.8 1.6 3
僅AAV 53.6 4.1 3 48.3 1.3 3 63.4 1.7 3 60.6 2.1 3
僅SpBC22n 97.8 0.4 3 96.4 0.4 3 98.2 0.1 3 98.0 0.4 2
僅SpCas9 53.7 3.5 3 63.7 0.7 3 74.5 1.3 3 60.9 1.2 3
僅Nme2 Cas9 44.9 9.2 3 54.8 1.8 3 62.6 1.1 3 52.5 0.6 3
SpBC22n + SpCas9 95.7 2.3 3 91.4 0.3 3 97.7 0.1 3 93.3 2.7 3
SpBC22n + Nme2 Cas9 98.7 0.1 3 96.2 0.6 3 99.0 0.2 3 98.0 0.3 3
HLA-A2- 與HLA-A3- 之聯集 未經處理 1.2 0.2 3 0.8 0.2 3 1.2 0.4 3 1.1 0.2 3
僅AAV 1.2 0.1 3 0.2 0.1 3 0.2 0.1 3 0.4 0.2 3
僅SpBC22n 98.6 0.2 3 98.8 0.2 3 99.4 0.1 3 99.3 0.4 2
僅SpCas9 1.2 0.2 3 0.6 0.2 3 0.5 0.2 3 0.5 0.2 3
僅Nme2 Cas9 0.7 0.2 3 0.1 0.0 3 0.2 0.0 3 0.4 0.3 3
SpBC22n + SpCas9 98.7 0.6 3 95.2 1.2 3 99.5 0.1 3 98.5 0.8 3
SpBC22n + Nme2 Cas9 99.9 0.1 3 98.5 0.2 3 99.9 0.0 3 99.9 0.0 3
CD3+ Vb8+ 未經處理 4.4 0.5 3 6.6 1.1 3 7.3 0.6 3 7.5 4.5 3
僅AAV 5.8 1.5 3 6.5 0.3 3 6.2 0.6 3 4.4 1.0 3
僅SpBC22n 0.0 0.0 3 0.1 0.0 3 0.0 0.0 3 0.0 0.0 2
僅SpCas9 84.2 3.3 3 85.8 0.6 3 83.9 0.4 3 81.6 0.2 3
僅Nme2 Cas9 90.0 3.9 3 89.8 1.2 3 88.3 1.0 3 87.8 1.1 3
SpBC22n + SpCas9 55.6 7.2 3 41.9 1.1 3 48.2 0.7 3 41.8 6.3 3
SpBC22n + Nme2 Cas9 90.5 1.5 3 81.8 0.6 3 90.5 0.2 3 83.7 0.9 3
CD3+ 、Vb8+ 、HLA-DR, DP, DQ- 、[HLA-A2- /HLA-A A3-] 未經處理 0.1 0.2 3 0.5 0.1 3 0.8 0.4 3 0.6 0.2 3
僅AAV 0.1 0.1 3 0.0 0.0 3 0.0 0.0 3 0.0 0.0 3
僅SpBC22n 0.0 0.0 3 0.0 0.0 3 0.0 0.0 3 0.0 0.0 3
僅SpCas9 0.6 0.2 3 0.1 0.0 3 0.2 0.1 3 0.2 0.1 3
僅Nme2 Cas9 0.5 0.1 3 0.1 0.0 3 0.1 0.0 3 0.2 0.1 3
SpBC22n + SpCas9 53.5 7.6 3 37.1 0.4 3 46.7 0.4 3 38.2 4.8 3
SpBC22n + Nme2 Cas9 89.6 1.3 3 79.2 0.6 3 89.8 0.2 3 82.5 0.6 3
實例 4. 原代小鼠肝細胞中 Nme2Cas9 及 SpBC22n 之同時多重編輯
使用NmeCas9在白蛋白基因座處且使用SpCas9或SpBC22n鹼基編輯器在TTR基因座處同時編輯原代小鼠肝細胞(PMH)。使PMH (Gibco，批號MC931)解凍且重新懸浮於含有平鋪補充物(威廉E培養基(William’s E Medium, Gibco，目錄號A12176-01))與地塞米松(dexamethasone) +混合劑補充物(Gibco，目錄號A15563，批號2019842)以及平鋪補充物與FBS所含物(Gibco，目錄號A13450，批號1970698)之肝細胞解凍培養基中，之後離心。棄去上清液，且將沈澱細胞重新懸浮於肝細胞平鋪培養基加補充物包(Invitrogen，目錄號A1217601，及Gibco，目錄號CM3000)中。對細胞進行計數，且以20,000個細胞/孔之濃度平鋪在生物塗層膠原I包覆之96孔板(ThermoFisher，目錄號877272)上。使所平鋪之細胞在組織培養培育器中於37℃及5% CO2氛圍下沈降且黏附4-6小時。培育後，檢查細胞之單層形成且用肝細胞維持培養基(Invitrogen，目錄號A1217601，及Gibco，目錄號CM4000)洗滌一次。每一條件均用技術兩個重複樣品進行測試。添加Cellartis PowerHEP培養基(Takara Bio, Y20020)，以使每一板之總體積為100 uL。
通常如實例1中所闡述，利用單一RNA種類作為貨品或gRNA與mRNA之共調配物製備LNP。以50脂質A:38膽固醇:9之莫耳比製備LNP以50脂質A:38膽固醇:9 DSPC: 3 PEG2k-DMG之莫耳比製備LNP。信使RNA序列係如實例1中所闡述。以脂質胺對RNA磷酸酯(N:P)莫耳比為約6調配LNP。對於Nme2Cas9 mRNA及白蛋白向導共調配物，以2:1重量比之gRNA對編輯器mRNA貨品製備LNP。對於SpyCas9及SpyCas9鹼基編輯器mRNA及TTR向導單一調配物，以單一RNA種類作為貨品製備LNP，且在處理前將LNP以gRNA貨品對編輯器mRNA貨品之重量比為1:2混合。
利用 表 11中所指示劑量之LNP處理細胞。稀釋系列指示將向導及編輯器mRNA組合，以300 ng高濃度起始，使用劑量之8點三倍稀釋系列。每一樣品用額外5 ng含有UGI mRNA之LNP處理。在用編碼NanoLuc模板(SEQ ID No: 304)之AAV載體處理之細胞中，在感染複數(MOI)為5E5時測試插入效率，且使用Nano-Glo螢光素酶分析，經由NanoLuc模板之表現進行定量。在未接受AAV處理之細胞中測試編輯效率。所遞送之所有組分之總體積為100 uL/孔。 表 11
組 處理 mRNA gRNA 劑量
僅Nme2Cas9 插入 LNP Nme2Cas9 G023805 (白蛋白) 稀釋系列
僅SpCas9 插入 LNP 混合物 SpCas9 G025427 (TTR) 稀釋系列
僅Spy 鹼基編輯 LNP 混合物 Sp BE G025427 (TTR) 稀釋系列
SpCas9 + 固定A1AT 插入 LNP Nme2Cas9 G023805 (白蛋白) 100 ng組合RNA
LNP 混合物 SpCas9 G025427 (TTR) 稀釋系列
Spy 鹼基編輯+ 固定A1AT 插入 LNP Nme2Cas9 G023805 (白蛋白) 100 ng組合RNA
LNP 混合物 Sp BE G025427 (TTR) 稀釋系列
插入+ 固定SpCas9 LNP Nme2Cas9 G023805 (白蛋白) 稀釋系列
LNP 混合物 SpCas9 G025427 (TTR) 100 ng組合RNA
插入+ 固定鹼基編輯 LNP Nme2Cas9 G023805 (白蛋白) 稀釋系列
LNP 混合物 Sp BE G025427 (TTR) 100 ng組合RNA
處理後72小時，將用於編輯讀出之轉染板經受溶解，對TTR及白蛋白基因座進行PCR擴增，且隨後如實例1中所闡述進行NGS分析。所有實驗均以兩個生物重複實施。 表 12及 圖 6B顯示TTR基因座處之平均編輯百分比。 表 12. 在用SpCas9或Sp鹼基編輯器處理後，TTR基因座處之平均編輯百分比。
處理 編輯器+ gRNA (ng) C 至T% C 至A/G% 插入缺失%
平均值 SD 平均值 SD 平均值 SD
僅插入 300.0 0.78 0.20 1.32 0.39 0.73 0.33
100.0 0.54 0.16 0.91 0.11 0.36 0.09
33.0 0.73 0.24 1.02 0.01 0.66 0.28
11.0 0.90 0.05 1.04 0.18 0.50 0.03
3.7 0.87 0.17 1.22 0.08 0.98 0.18
1.2 0.98 0.57 0.92 0.10 0.66 0.00
0.4 0.83 0.27 1.00 0.03 0.50 0.04
0.0 0.80 0.19 1.20 0.34 0.53 0.06
SpCas9 300.0 0.02 0.01 0.14 0.00 99.24 0.08
100.0 0.02 0.01 0.06 0.02 97.71 0.97
33.0 0.13 0.14 0.11 0.01 95.67 1.62
11.0 0.31 0.14 0.28 0.04 89.06 1.26
3.7 0.53 0.22 0.27 0.10 84.35 1.10
1.2 0.70 0.23 0.46 0.02 60.17 0.15
0.4 1.14 0.62 0.70 0.01 28.28 0.45
0.0 1.09 0.12 1.27 0.54 9.10 0.90
僅鹼基編輯 300.0 61.27 1.27 11.00 1.52 26.68 0.06
100.0 56.74 3.40 10.98 0.58 30.52 3.01
33.0 50.56 2.71 10.34 1.34 36.02 0.31
11.0 48.79 2.79 10.21 1.28 32.73 1.03
3.7 49.46 1.84 8.27 0.01 32.07 0.98
1.2 51.11 2.84 5.88 1.07 26.28 3.16
0.4 45.89 1.17 4.56 0.98 17.27 5.70
0.0 23.53 3.66 2.10 0.13 9.93 0.98
SpCas9 +固定插入 300.0 0.02 0.01 0.14 0.17 98.60 0.13
100.0 0.06 0.04 0.21 0.21 97.61 0.33
33.0 0.10 0.12 0.09 0.01 94.67 1.82
11.0 0.36 0.26 0.44 0.35 86.53 0.54
3.7 0.46 0.08 0.24 0.07 81.06 0.50
1.2 0.65 0.14 0.60 0.11 56.78 2.21
0.4 1.25 0.36 1.03 0.18 18.66 0.18
0.0 0.71 0.00 0.98 0.21 4.06 0.59
鹼基編輯+固定插入 300.0 58.44 1.05 11.80 0.70 28.44 1.27
100.0 57.96 3.20 11.30 0.78 29.11 2.28
33.0 57.80 1.62 9.39 0.35 30.47 2.81
11.0 48.69 0.37 9.39 0.64 34.05 3.43
3.7 51.81 1.75 10.39 0.33 31.84 0.18
1.2 54.91 2.76 9.05 0.78 29.69 3.90
0.4 46.13 2.51 3.35 0.29 16.98 1.49
0.0 42.78 1.66 3.08 0.32 11.53 1.87
插入+固定SpCas9 300.0 0.07 0.04 0.17 0.01 90.88 0.01
100.0 0.05 0.00 0.11 0.04 92.86 0.14
33.0 0.02 0.01 0.14 0.00 96.98 0.27
11.0 0.03 0.00 0.08 0.02 98.17 0.10
3.7 0.04 0.01 0.10 0.01 97.99 0.02
1.2 0.06 0.02 0.11 0.02 98.02 0.36
0.4 0.03 0.03 0.10 0.03 98.12 0.67
0.0 0.04 0.00 0.12 0.06 97.56 0.01
插入+固定鹼基編輯 300.0 60.82 0.62 9.31 0.81 28.69 0.45
100.0 61.26 3.13 10.58 2.28 26.73 1.34
33.0 54.48 2.86 11.08 0.12 32.86 2.55
11.0 48.15 1.58 10.69 0.21 36.16 0.78
3.7 50.37 2.72 11.11 1.00 33.73 0.52
1.2 57.19 1.63 10.77 0.29 30.94 1.10
0.4 59.47 7.16 9.58 2.93 29.58 3.70
0.0 60.91 0.45 10.56 0.89 27.46 0.06
對於用於插入讀出之轉染板，遵循製造商之說明，將50 uL來自每一孔之培養基添加至等量之所製備Nano-Glo螢光素酶分析試劑(Promega N1110)中，以量化NanoLuc信號且在Biotek Neo2讀板儀中讀取。將剩餘培養基自插入讀出板中吸出，且用100 uL所製備Cell TiterGlo試劑(Promega G9241)量化細胞活力，並在Biotek Neo2讀板儀中讀取。藉由將NanoLuc信號除以細胞活力信號，經由細胞活力正規化NanoLuc信號。 表 13及 圖 6A顯示如在無AAV樣品中所分析的在白蛋白基因座處之平均插入缺失百分比。 表 13及 圖 6A亦顯示由細胞活力正規化之平均螢光，其為跨群體之相對插入效率讀出。 表 13. 白蛋白基因座處NanoLuc之插入，表示為以細胞活力作正規化之發光(RLU)
處理 編輯器+ gRNA (ng) 插入缺失% 插入
(RLU/ 細胞活力)
平均值 SD n 平均值 SD n
僅插入 300 90.66 4.91 2 32.80 5.15 2
100 91.46 2.06 2 22.40 1.51 2
33 82.17 1.06 2 19.80 1.10 2
11 43.08 15.62 2 13.73 0.70 2
3.7 34.69 1.10 2 4.91 2.43 2
1.2 10.32 1.81 2 1.47 1.01 2
0.4 4.26 1.78 2 0.74 0.59 2
0 1.91 0.88 2 0.20 0.00 2
SpCas9 300 1.18 0.25 2 0.22 0.00 2
100 0.93 0.18 2 0.10 0.04 2
33 1.55 0.26 2 0.08 0.01 2
11 0.93 0.31 2 0.07 0.01 2
3.7 1.07 0.50 2 0.10 0.00 2
1.2 1.40 0.34 2 0.09 0.01 2
0.4 1.30 0.64 2 0.06 0.02 2
0 0.94 0.13 2 0.06 0.01 2
僅鹼基編輯 300 0.40 0.30 2 0.12 0.03 2
100 0.95 0.17 2 0.09 0.01 2
33 1.03 0.59 2 0.07 0.01 2
11 0.73 0.28 2 0.05 0.02 2
3.7 0.80 0.00 2 0.06 0.02 2
1.2 0.70 0.10 2 0.07 0.02 2
0.4 1.03 0.14 2 0.07 0.02 2
0 0.88 0.18 2 0.07 0.01 2
SpCas9 +固定插入 300 67.04 5.35 2 33.10 0.00 1
100 82.16 1.43 2 25.01 3.47 2
33 87.32 1.43 2 22.74 1.18 2
11 77.77 0.17 2 20.69 1.50 2
3.7 82.93 4.74 2 18.82 2.77 2
1.2 86.97 2.58 2 19.41 6.97 2
0.4 86.17 2.09 2 17.86 0.65 2
0 91.25 0.08 2 24.70 1.05 2
鹼基編輯+固定插入 300 76.37 2.74 2 20.16 8.66 2
100 83.83 0.07 2 27.76 2.00 2
33 88.91 0.28 2 19.82 11.09 2
11 80.21 6.44 2 21.19 1.43 2
3.7 88.42 1.23 2 19.94 1.25 2
1.2 90.44 1.06 2 24.31 3.64 2
0.4 89.96 2.22 2 18.80 0.53 2
0 92.06 4.89 2 26.27 0.57 2
插入+固定SpCas9 300 88.20 3.05 2 33.10 2.95 2
100 84.11 0.16 2 31.97 0.94 2
33 78.36 5.41 2 26.88 1.38 2
11 44.14 7.61 2 15.93 7.78 2
3.7 18.85 5.05 2 8.73 1.91 2
1.2 6.70 2.71 2 2.09 1.04 2
0.4 2.15 1.27 2 0.82 1.06 2
0 1.11 0.06 2 0.30 0.08 2
插入+固定鹼基編輯 300 95.57 0.00 2 33.11 0.00 1
100 84.00 0.10 2 25.21 0.51 2
33 71.87 2.41 2 20.12 0.83 2
11 44.47 8.35 2 12.13 1.68 2
3.7 24.06 1.23 2 3.01 0.75 2
1.2 4.01 1.13 2 1.45 0.53 2
0.4 1.74 0.38 2 0.38 0.01 2
0 1.16 0.22 2 0.17 0.01 2
實例 5. 活體內正交編輯及插入
在LNP遞送後，在活體內評估實例4中所測試之sgRNA，以評價使用NmeCas9與SpCas9或Sp鹼基編輯器在TTR基因座處同時編輯及將編碼A1AT蛋白之SERPINA1插入至小鼠模型中之白蛋白基因座中之效率。
本實驗中所用之LNP係如實例4中所闡述調配並製備，且含有單一RNA種類作為貨品或gRNA與mRNA之共調配物。所用之信使RNA係如實例1中所闡述之彼等信使RNA。如 表 14中所示，所調配之LNP與sgRNA及mRNA一起投用。LNP與在1×磷酸鹽緩衝鹽水+ 0.0001% PF-68中稀釋之100 uL AAV (SEQ ID NO: 298)一起遞送。 表 14. 活體內遞送之LNP調配物
組 LNP 貨品 貨品比率(sgRNA:mRNA) 向導ID mRNA 劑量(mg/kg)
1 TSS            
2 共調配物 2:1 G23805 Nme2 Cas9 0.50
3 單一貨品    G25427    0.10
      Sp BC22n BE 0.20
      UGI 0.10
4 共調配物 2:1 G23805 Nme2 Ca9 0.50
單一貨品    G25427    0.10
Sp BC22n BE 0.20
UGI 0.10
5 共調配物 1:2 G25427    0.10
      Sp Cas9 0.20
6 共調配物 1:2 G23805 Nme2 Cas9 0.50
單一貨品    G25427    0.10
      Sp Cas9 0.20
      UGI 0.10
在涉及小鼠之每項研究中使用6-10週齡範圍內之C5BL/6雄性小鼠(n = 5隻/組，唯TSS對照n= 4)。LNP及AAV係以 表 14中所示之劑量經由尾靜脈注射來靜脈內投與。在投藥後至少24小時內定期觀察動物之不良效應。在投藥後1週、2週及4週進行期中活體尾部取血，以藉由ELISA分析量化小鼠血清中之hA1AT蛋白。簡言之，使用Aviva α1-抗胰蛋白酶ELISA人類套組(目錄號OKIA00048)，根據製造商之方案測定hA1AT血清水準。將小鼠血清用1×分析稀釋液稀釋至10,000倍之最終稀釋度。此係藉由以下來完成：進行兩次連續50倍稀釋，從而產生2500倍稀釋度。進行最終4倍稀釋步驟，以獲得10,000倍之總樣品稀釋度。將標準曲線稀釋液(各自100 μL)及經稀釋之血清樣品二者添加至經捕獲抗體預包覆之ELISA板之每一孔中。使板在室溫下培育30分鐘，之後洗滌。添加酶-抗體結合物(每孔100 μL)培育20分鐘。去除未結合之抗體結合物，且再次洗滌板，之後添加生色受質溶液。使板培育10分鐘，之後添加100 μL終止溶液，例如硫酸(大約0.3 M)。在SpectraMax M5或Clariostar讀板儀上在450 nm之吸光度下讀板。藉由SoftMax Pro軟體第6.4.2版或Mars軟體第3.31版，使用擬合標準曲線之四參數邏輯曲線計算血清TTR水準。針對分析稀釋度調整最終血清值。相對於對照測定蛋白質敲低百分比(KD%)值，除非另有指示，否則該等對照通常為經媒劑(TSS)假治療之動物。
注射後五週，在異氟醚麻醉下藉由心臟穿刺使動物安樂死；收集肝臟組織用於下游分析。收集重量介於5 mg與15 mg之間的肝臟穿孔樣品(punch)用於分離基因體DNA及總RNA。使用DNA分離套組(ZymoResearch, D3010)提取基因體DNA，且利用如實例1中所闡述之NGS測序對樣品進行分析。含有所指示gRNA之LNP之TTR編輯效率示於 表 15及 圖 7A中。白蛋白編輯效率示於 表 16及 圖 7B中。hA1AT之血清蛋白質水準示於 表 17及 圖 7C 中。 表 15-小鼠肝臟中之平均TTR編輯百分比。
   C 至T % C 至A/G % 插入缺失% n
平均值 SD 平均值 SD 平均值 SD
TSS 0.12 0.25 1.97 0.16 0.10 0.10 5
僅Nme2Cas9 插入 24.67 0.05 1.93 0.25 0.09 0.12 5
僅Spy BE 49.24 1.16 4.90 0.22 17.29 0.88 5
Nme2Cas9 插入+ Spy BE 21.86 1.68 4.94 0.22 17.41 1.23 4
僅SpyCas9 0.03 0.01 0.62 0.08 70.75 1.23 5
Nme2Cas9 插入+ SpyCas9 0.05 0.03 0.67 0.15 71.99 2.77 5
表 16-小鼠肝臟中之平均白蛋白編輯百分比。
   C 至T % C 至A/G % 插入缺失%
   平均值 SD n 平均值 SD n 平均值 SD n
TSS 0.05 0.04 5 1.49 0.22 5 0.13 0.21 5
僅Nme2Cas9 插入 0.02 0.01 5 0.65 0.08 5 46.58 0.60 5
僅Spy BE 0.06 0.02 5 1.29 0.07 5 0.07 0.04 5
Nme2Cas9 插入+ Spy BE 0.03 0.03 5 0.85 0.37 5 51.42 3.02 4
僅SpyCas9 0.07 0.02 5 1.30 0.08 5 0.03 0.02 5
Nme2Cas9 插入+ SpyCas9 0.01 0.01 3 0.57 0.16 3 51.44 3.75 3
表 17-hA1AT之血清蛋白質水準。
   週 平均值 SD n
TSS 1 0 0 5
2 0 0 5
4 0 0 5
僅Nme2Cas9 插入 1 2179.22 326.30 5
2 2220.62 333.81 5
4 3619.96 598.05 5
僅Spy BE 1 0 0 5
2 0 0 5
4 0 0 5
Nme2Cas9 插入+ Spy BE 1 2347.69 188.48 5
2 2158.60 196.80 4
4 3183.90 709.25 4
僅SpyCas9 1 0 0 5
2 0 0 5
4 0 0 5
Nme2Cas9 插入+ SpyCas9 1 2486.46 271.82 5
2 2629.86 238.45 5
4 4201.42 582.27 5
實例 6. 用空位 AAV 模板及 SpyCas9 篩選插入向導 RNA
設計AAVS1向導RNA，且使用一系列空位AAV GFP模板(A、B、C、D、OG)進行篩選以鑑別插入SpyCas9向導，每一模板均針對向導RNA之亞集而設計。藉由流式細胞術，藉由評價GFP表現來檢查T細胞中之插入功效。在藉由mRNA對AAVS1進行編輯及AAV遞送後，藉由流式細胞術分析綠色螢光蛋白呈陽性之T細胞百分比(「GFP+ %」)。 實例 6.1. T 細胞製備
自兩名供體(110042863號及110040377號)商業獲得健康人類供體血球分離(Hemacare)，且將細胞洗滌並重新懸浮於含有於PBS中之2 mM EDTA及0.5%胎牛血清(FBS)之MACS緩衝液中。藉由離心將細胞洗滌兩次，之後使用Easy Sep人類T細胞分離套組(Stemcell，目錄號100-0695)進行CD3負選擇且使用Easy Sep Magnets (Stemcell，目錄號18000)分離。將T細胞等分，且在Cryostor® CS10 (StemCell Technologies，目錄號07930)中冷凍保存以供將來使用。 實例 6.2. T 細胞之 RNP 電穿孔
藉由流式細胞術，藉由評價GFP表現來評價AAVS1向導RNA在T細胞中之插入功效。在藉由mRNA對AAVS1進行編輯及AAV遞送後，藉由流式細胞術分析綠色螢光蛋白呈陽性之T細胞百分比(「GFP+ %」)。
將靶向對應於空位模板A、B、C、D及OG (SEQ ID NO: 299-303)之側翼同源區之sgRNA的AAVS1自其儲存板中取出，且在95℃下變性2分鐘，之後在室溫下冷卻10分鐘。製備20 µM sgRNA及10 µM Cas9-NLS蛋白(SEQ ID NO: 296)之RNP混合物，且在25℃下培育10分鐘。將2.5 µL RNP混合物與250,000個細胞組合於20 µL P3電穿孔緩衝液(Lonza)中。將22 µL RNP/細胞混合物轉移至Lonza shuttle 96孔電穿孔板之相應孔中。利用製造商之脈衝編碼以一式兩份對細胞進行電穿孔。在電穿孔後立即向細胞中添加上文所闡述之不含任何細胞介素之T細胞培養基。使T細胞在37℃下靜置10分鐘。在含有上文所闡述之T細胞培養基之48孔板(Corning，目錄號353078)中製備空位模板AAV，該等T細胞培養基含有2X細胞介素、400 U/mL重組人類介白素-2 (Peprotech，目錄號200-02)、10 ng/ml重組人類介白素7 (Peprotech，目錄號200-07)及10 ng/ml重組人類介白素15 (Peprotech，目錄號200-15)細胞介素。AAV之感染複數(MOI)為3×10^ 5。在電穿孔後15分鐘內向T細胞中添加AAV，且在37℃下培育48小時。AAV-6載體編碼AAVS1模板A、B、C、D或OG。電穿孔後兩天，細胞在補充有如上文所闡述之含有1X細胞介素之T細胞培養基的48孔板中1:2分裂。利用AAV構築體及空位模板測試每一sgRNA。 實例 6.3. 流式細胞術
在編輯後第7天，藉由流式細胞術對細胞進行表型分析，以測定GFP表現，從而證實AAV在其GAP模板位點處之整合。簡言之，在含有2 mM EDTA (Invitrogen，目錄號15575020)及於PBS中之1% FBS的FACS緩衝液中洗滌T細胞，之後重新懸浮於含有1:10,000稀釋度之DAPI (Biolegend，目錄號422801)核染色劑之FACS緩衝液中。接著在Cytoflex流式細胞儀(Beckman Coulter)上處理細胞，且使用FlowJo軟體包進行分析。基於大小、形狀、活力及GFP表現對T細胞進行門控。不由流式細胞儀測定之值表示為「ND」。 表 18及 圖 8A- 圖 8B顯示GFP表現呈陽性之T細胞之平均百分比。 表 18-在用SpyCas9及AAV對 AAVS1進行基因體編輯後，GFP表現呈陽性之T細胞之平均百分比
向導ID 供體1 供體2
平均值 SD N 平均值 SD N
對照 僅EP 0.03 ND 1 0.04 ND 1
僅AAV 6.81 0.18 2 8.31 0.785 2
TRAC 52.05 1.95 2 ND ND ND
模板A G000562 30.60 0.10 2 41.20 13.6 2
G013562 65.75 0.45 2 62.35 0.95 2
G013563 73.15 0.25 2 69.40 0.9 2
G013564 65.95 0.45 2 61.20 0 2
G013582 66.30 0.10 2 61.00 0.3 2
G013584 69.15 0.15 2 62.95 3.95 2
模板B 僅AAV 8.44 1.07 2 9.74 0.23 2
G000562 34.00 0.10 2 32.75 2.35 2
G013559 65.55 0.35 2 64.05 2.65 2
G013562 63.60 0.90 2 65.40 0.2 2
G013563 69.15 0.65 2 71.35 0.35 2
G013564 61.50 1.10 2 63.45 0.55 2
G013565 63.50 0.40 2 65.00 1.1 2
模板C 僅AAV 7.98 ND 1 10.10 ND 1
G000562 57.95 0.15 2 59.10 0.9 2
G013515 61.15 0.65 2 60.95 1.15 2
G013533 65.65 0.35 2 65.15 0.25 2
模板D 僅AAV 7.12 ND 1 10.70 ND 1
G000562 29.65 1.15 2 27.50 0.7 2
G013519 73.35 0.45 2 72.10 0.9 2
G013520 71.80 0.20 2 72.20 1.3 2
G013523 70.50 0.60 2 72.05 0.55 2
模板OG 僅AAV 6.32 ND 1 6.87 ND 1
G000562 41.75 0.15 2 37.80 0.4 2
G013543 65.25 0.05 2 64.40 0.2 2
實例 7. 正交或非正交多重編輯
為評價使用正交編輯器或其他編輯方案進行同時多重編輯之細胞之編輯型態及細胞行為，用脂質奈米顆粒(LNP)處理T細胞，且分析細胞擴增、編輯及表面蛋白質表現。 實例 7.1. T 細胞製備
在第0天於水浴中使經分離之冷凍保存T細胞解凍，且以1.5 × 10^6個細胞/mL之密度平鋪於含有CTS OpTmizer T細胞擴增SFM及T細胞擴增補充物(ThermoFisher，目錄號A1048501)、1X青黴素-鏈黴素、1X Glutamax、10 mM HEPES、200 U/mL重組人類介白素-2 (Peprotech，目錄號200-02)、5 ng/ml重組人類介白素7 (Peprotech，目錄號200-07)及5 ng/ml重組人類介白素15 (Peprotech，目錄號200-15)及2.5%人類AB血清(GeminiBio，目錄號100-512)之TCAM培養基中。使用來自3名供體之經分離T細胞實施生物學重複。 實例 7.2. LNP 處理及 T 細胞之擴增
通常如實例1中所闡述製備LNP。本實例中之脂質奈米顆粒係以35脂質A: 47.5膽固醇: 15 DSPC: 2.5 PEG2k-DMG之莫耳比來製備。LNP係以脂質胺對RNA磷酸酯(N:P)莫耳比為約6來製得。如 表 22中所闡述，LNP係以單一RNA貨品來調配或與多種RNA種類共調配。如 表 23中及下文所闡述，將LNP遞送至含有ApoE3 (Peprotech，目錄號350-02)之TCAM培養基中之T細胞。 表 22. 脂質奈米顆粒。貨品質量比分別按貨品欄中之順序列示。以每單位體積總RNA貨品之質量來衡量劑量。
LNP 劑量(ug/ml) 貨品 貨品質量比
1 0.84 SpBC22n mRNA n/a
2 0.42 UGI mRNA n/a
3 1.67 TRAC G023520 + TRBC G023524 + HLA-A G023523 + CIITA G023521 1: 1.9 : 14.5 : 4.8
4 1.25 Nme2Cas9 mRNA + TRAC G021469 1:2
5 0.65 SpCas9 mRNA + CIITA G013675 1:1
6 1.00 SpCas9 mRNA + TRAC G013006 1:1
7 0.65 SpCas9 mRNA + HLA-A G018995 1:1
8 1.00 SpCas9 mRNA + TRBC G016239 1:1
解凍後24小時(第1天)，收穫細胞且用TransAct™ (1:100稀釋，Miltenyi Biotec)活化。按照 表 23中所提供之時間表，以 表 22中所列示之劑量來施加LNP。在處理之間，使細胞在37℃下培育。如 表 23中所指示，在第3天，組C、組D及組E用3 × 10 5個GC/細胞之AAV處理，以遞送編碼基因轉殖T細胞受體之同源定向修復模板，同時遞送LNP處理及0.25 uM化合物1。將T細胞以1E6個細胞/mL之密度接種以進行活化(第1天)，且在第3天至第5天之整個編輯期間保持0.5 × 10 6/細胞/mL之密度。 表 23. T細胞工程化之編輯順序
處理 第1 天 第3 天 第4 天 第5 天
組A未編輯 無 無 無 無
組B同時Sp鹼基編輯器 無 LNP1 無 無
無 LNP2 無 無
無 LNP3 無 無
組C同時Sp鹼基編輯器+ Nme2Cas9插入 無 LNP1 無 無
無 LNP2 無 無
無 LNP3 無 無
無 LNP4 無 無
無 AVV: TCR 無 無
組D同時SpCas9 無 LNP5 無 無
無 LNP6 無 無
無 LNP7 無 無
無 LNP8 無 無
無 AAV: TCR 無 無
組E連續SpCas9 LNP5 LNP6 LNP7 LNP8
無 AAV: TCR 無 無
對於組A、組B、組C及組D在第5天且對於組E在第6天，洗滌細胞且轉移至6孔GREX板(Wilson Wolf)中。在第7天及第10天更換培養基。使用Cellaca MX (Nexcelom)對細胞進行計數，且藉由將細胞產量除以在第1天活化之起始材料來計算倍數擴增。 表 24及 圖 9顯示活化後之細胞擴增。在擴增9天後，與同時多重裂解組D及連續多重裂解組E相比，具有四個經由鹼基編輯之基因破壞及用於插入之單一DNA裂解之組C顯示出優約五倍之細胞擴增。 表 24-擴增培養基中在所指示之生長期後之細胞群體擴增。
天 組A 組B 組C 組D 組E
平均值 SD 平均值 SD 平均值 SD 平均值 SD 平均值 SD
1 1.0 0.0 1.0 0.0 1.0 0.0 1.0 0.0 1.0 0.0
3 1.5 0.1 1.5 0.1 1.5 0.2 1.4 0.0 1.2 0.1
5 10.8 1.2 8.0 0.8 4.0 0.7 2.7 0.5 2.9 0.6
8 118.8 13.6 108.4 20.2 57.6 7.6 13.1 4.2 10.6 7.0
9 202.2 9.9 186.2 28.9 120.4 17.2 24.4 6.6 22.1 13.9
11       54.0 16.1 63.4 38.9
在擴增生長之第9天或第11天，收穫細胞且藉由流式細胞術進行分析。對於流式細胞分析，在FACS緩衝液(PBS + 2% FBS + 2 mM EDTA)中洗滌細胞。使工程化T細胞在靶向CD4 (Biolegend 317434)、CD8 (Biolegend 301046)、CD3 (Biolegend 300430)、Vb8 (Biolegend 348104)、HLA-A2 (Biolegend 343320)或HLA-A3 (Fisher 50-112-3136)及HLA-DR,DP,DQ (Biolegend 361712)之抗體混合劑中培育。隨後洗滌T細胞，且在Cytoflex儀器(Beckman Coulter)上進行分析。使用FlowJo軟體包(第10.6.1版)實施數據分析。針對大小、單細胞、CD4或CD8表現及 表 25中所指示之標記物表現對T細胞進行門控。流式細胞術數據示於 表 25及 圖 10A- 圖 10B中。Vb8+水準指示組C、組D及組E中基因轉殖TCR之插入及表現。與組A相比，HLA-DR, DP, DQ-細胞之增加指示組B、組C、組D及組E中之高效CIITA破壞，此乃因CIITA係控制該等表面蛋白質表現之轉錄因子。與組A相比，組B、組C、組D及組E中HLA-A-群體之增加指示高效HLA-A破壞。與組A相比，組B、組C、組D及組E中CD3+Vb8-之減少指示TRAC及TRBC基因座之高效破壞。以HLA-A-、HLA-DR/DP/DQ-、CD3+、Vb8+對完全編輯產物之百分比進行門控。 表 25. 展示細胞表面表型之T細胞之平均百分比
T 細胞類型 其他標記物 組 A 組 B 組 C 組 D 組 E
平均值 SD 平均值 SD 平均值 SD 平均值 SD 平均值 SD
CD4+ HLA-A- 0.3 0.3 99.5 0.3 99.9 0.2 95.0 5.1 95.4 4.7
HLA-DR/DP/DQ- 50.5 15.2 97.6 1.0 98.7 0.8 97.8 0.4 98.9 0.4
CD3+Vb8- 93.7 0.9 0.4 0.5 0.1 0.1 0.2 0.1 0.2 0.3
Vb8+ 6.0 1.0 0.0 0.0 83.9 7.9 90.6 1.7 88.0 1.9
HLA-A-、HLA-DR/DP/DQ-、Vb8+、CD3+ 0.0 0.0 0.0 0.0 83.2 8.1 84.9 6.8 83.5 6.0
CD8+ HLA-A- 0.3 0.5 99.3 0.3 99.7 0.5 93.6 9.1 95.7 6.1
HLA-DR/DP/DQ- 23.8 15.3 94.7 3.3 96.6 3.0 94.5 2.2 97.8 0.8
CD3+Vb8- 94.7 1.5 0.8 0.6 0.1 0.1 0.2 0.3 0.0 0.1
Vb8+ 5.1 1.4 0.1 0.1 82.7 8.4 90.2 1.8 87.1 4.3
HLA-A-、HLA-DR/DP/DQ-、Vb8+、CD3+ 0.0 0.0 0.0 0.1 80.2 9.4 81.2 7.1 82.2 8.6
實例 8. 正交工程化 T 細胞之功能表徵
為評價用正交編輯器工程化之細胞之功能，分析細胞之編輯、表面蛋白質表現及細胞毒性。 實例 8.1. T 細胞製備
使經分離之冷凍保存T細胞於水浴中解凍，且以1.5 × 10 6個細胞/mL之密度平鋪於含有CTS OpTmizer T細胞擴增SFM及T細胞擴增補充物(ThermoFisher，目錄號A1048501)、1X青黴素-鏈黴素、1X Glutamax、10 mM HEPES、200 U/mL重組人類介白素-2 (Peprotech，目錄號200-02)、5 ng/ml重組人類介白素7 (Peprotech，目錄號200-07)及5 ng/ml重組人類介白素15 (Peprotech，目錄號200-15)及2.5%人類AB血清(GeminiBio，目錄號100-512)之TCAM培養基中。 實例 8.2. T 細胞工程化
通常如實例1中所闡述製備LNP。本實例中之脂質奈米顆粒係以35脂質A: 47.5膽固醇: 15 DSPC: 2.5 PEG2k-DMG之莫耳比來製備。LNP係以脂質胺對RNA磷酸酯(N:P)莫耳比為約6來製得。如 表 26中所闡述，LNP係以單一RNA種類來調配或與多種RNA種類共調配。如 表 27中及下文所闡述，將LNP遞送至含有ApoE3 (Peprotech，目錄號350-02)之TCAM培養基中之T細胞。 表 26. 脂質奈米顆粒。貨品質量比分別按貨品欄中之順序列示。以每單位體積總RNA貨品之質量來衡量劑量。
LNP 劑量(ug/ml) 貨品 貨品質量比
1 0.25 Spy BC22 mRNA n/a
2 0.5 UGI mRNA n/a
3 1.67 TRAC G027891 TRBC G027904 CIITA G028535 HLA-A G028536 4.5/8.7/21.4/65.4
4 1.25 Nme2Cas9 mRNA + TRAC G021469 1:2
在第1天(例如解凍後24小時)，收穫細胞且用TransAct™ (1:100稀釋，Miltenyi Biotec)活化。在第3天，以 表 26中所列示之劑量將LNP施加至如 表 27中所列示之處理組。組C樣品在進行LNP處理的同時用3E+5 GC/mL編碼基因轉殖T細胞受體之AAV (具有HD1插入之AAV 1760)及0.5 uM化合物1處理。 表 27T細胞工程化之編輯方案。
處理 第3 天
組A未編輯 無
組BSp鹼基編輯器 LNP1
LNP2
LNP3
組CSp鹼基編輯器+ Nme2 Cas9插入 LNP1
LNP2
LNP3
LNP4
AAV
在第4天，將細胞轉移至含有T細胞擴增培養基(TCEM)之6孔GREX板(Wilson Wolf)中，該擴增培養基為補充有5%人類AB血清、1X GlutaMAX (Thermofisher，目錄號35050061)、10 mM HEPES、200 U/mL IL-2 (Peprotech，目錄號200-02)、IL-7 (Peprotech，目錄號200-07)及IL-15 (Peprotech，目錄號200-15)之CTS OpTmizer (Thermofisher，目錄號A3705001)。定期更換培養基。在第7天，收穫一部分細胞，用於TRBC1、TRBC2及CIITA基因座處之測序分析。如實例1中所闡述，以三個技術重複實施NGS分析。 表 28及 圖 11A- 圖 11C顯示該等細胞之平均編輯百分比。 表 28. 平均編輯百分比。「Cas9」指示對於Nme2Cas9具有特異性之向導。「BE」指示針對SpyBC22n鹼基編輯器所設計之向導。「n/a」指示標準偏差不適用。
編輯 處理 C 至T C 至A/G 插入缺失
平均值 SD n 平均值 SD n 平均值 SD n
G027891 TRAC BE 組A 0.3 0.1 5 0.7 0.1 5 0.2 0.0 5
組B 94.5 0.8 5 2.2 0.2 5 1.8 0.5 5
組C 95.3 1.0 6 1.9 0.4 6 0.9 0.2 6
G027904 TRBC1 BE 組A 0.3 0.1 3 1.6 0.1 3 0.2 0.0 3
組B 92.9 1.2 3 5.6 0.5 3 1.2 0.7 3
組C 90.8 3.1 4 6.5 3.1 4 1.6 1.9 4
G027904 TRBC2 BE 組A 0.3 0.3 4 1.9 0.2 3 0.2 0.0 3
組B 89.6 1.8 4 7.0 3.0 4 1.5 0.8 4
組C 90.5 3.9 5 6.9 2.8 5 1.6 1.7 5
G028535 CIITA BE 組A 0.3 n/a 1 2.8 1.4 3 1.2 1.0 3
組B 92.3 0.1 2 2.6 1.6 4 1.3 1.4 4
組C 92.9 0.6 3 3.9 0.1 3 1.6 0.6 3
在第11天，使用Cellaca MX (Nexcelom)以三個技術重複對細胞進行計數，且在第3天藉由將細胞產量除以經編輯細胞之量來計算倍數擴增。 表 29顯示倍數細胞擴增。 表 29.細胞群體之倍數擴增。
處理 倍數 SD n
組A 218 12 6
組B 173 9 6
組C 110 4 6
實例 8.3 流式細胞術
在第11天，收穫細胞以用於藉由流式細胞術進行分析(三個技術重複)。對於流式細胞分析，在FACS緩衝液(PBS + 2% FBS + 2 mM EDTA)中洗滌細胞。使工程化T細胞在靶向CD4 (Biolegend 317434)、CD8 (Biolegend 301046)、CD3 (Biolegend 300430)、Vb8 (Biolegend 348104)、HLA-A2 (Biolegend 343320)、HLA-A3 (Thermo Fisher Scientific, 501122136)、HLA-DR,DP,DQ (Biolegend 361712)、CD45RA (Biolegend, 304134)、CD45RO (Biolegend, 304230)、CD62L (Biolegend, 304820)、CCR7 (Biolegend, 353214)之抗體與ViaKrome 808可固定活力染料(Beckman Coulter, C36628)之混合劑中培育。隨後洗滌T細胞，且在Cytoflex儀器(Beckman Coulter)上進行分析。使用FlowJo軟體包(第10.6.1版)實施數據分析。針對大小、活力、CD4或CD8表現及 表 30中所指示之標記物表現對T細胞進行門控。CD8+細胞之流式細胞術數據示於 表 30以及 圖 12A- 圖 12B及 圖 13A- 圖 13C中。CD4+細胞之結果與CD8+細胞類似。與未編輯之對照組A相比，組B及組C中HLA-A2-、HLA-A3-及HLA-DP, DQ, DQ-細胞群體分別指示HLA-A基因座及CIITA基因座之高效破壞。為測定由TRAC及TRBC基因座編輯引起之內源性TCR破壞(在 表 30及 圖 12A中稱為「CD3-」)，自100%減去表現內源性TCR之細胞(CD3+Vb8-)%。與組A及組B相比，組C中Vb8+細胞群體之增加指示基因轉殖TCR之有效插入。 表 30及 圖 13A- 圖 13C中所示之組A與組C之間CD45RA+及CD45RO+表型之相似性指示，工程化細胞之中樞記憶細胞、中樞記憶幹細胞及效應記憶表型係完整的。 表 30. 展示細胞表面表型之CD8+ T細胞之平均百分比。
表型 處理 平均值 SD n
「CD3-」 (100%-CD3+Vb8-) 組A 4.1 2.5 6
組B 99.1 0.1 6
組C 99.5 0.0 6
HLA-DP, DQ, DR- 組A 29.2 2.8 6
組B 94.9 0.3 6
組C 95.9 0.1 6
HLA-A2- 組A 1.5 0.4 6
組B 98.2 0.2 6
組C 100.0 0.0 6
HLA-A3- 組A 2.4 1.5 6
組B 98.5 0.1 6
組C 99.2 0.1 6
Vb8+ 組A 5.6 0.3 6
組B 0.0 0.0 6
組C 76.4 0.3 6
CD45RA+CCR7-CD62L+ 組A 12.8 1.3 6
組B 4.4 5.2 6
組C 12.1 0.3 6
CD45RA+CCR7+CD62L+ 組A 32.1 2.9 6
組B 36.9 24.1 6
組C 39.9 1.3 6
CD45RO+CCR7-CD62L+ 組A 29.2 1.0 6
組B 16.3 14.0 6
組C 18.5 0.4 6
CD45RO+CCR7+CD62L+ 組A 17.7 1.5 6
組B 22.3 17.6 6
組C 22.8 0.7 6
CD45RO+CCR7+CD62L- 組A 0.5 0.2 6
組B 5.1 8.4 6
組C 1.3 0.1 6
CD45RO+CCR7-CD62L- 組A 1.4 0.5 6
組B 2.6 4.3 6
組C 3.3 0.1 6
實例 8.4. 基於螢光素酶之細胞毒性分析
使處理組C細胞解凍且培養隔夜。將細胞與697 Luc GFP+細胞以 表 31中所指示之效應物對靶標比率共培養。在不含細胞介素之培養基中實施共培養，該等培養基由CTS OpTmizer T細胞擴增SFM及T細胞擴增補充物(ThermoFisher，目錄號A1048501)、2.5%人類AB血清(GeminiBio，目錄號100-512)、1X青黴素-鏈黴素、1X Glutamax及10 mM HEPES構成。
24及48小時後，藉由Bright-Glo分析(Promega，目錄號E2620)，遵循製造商之說明量測由活的697細胞產生之螢光素酶之量，該量與工程化T細胞毒性成反比。使用CLARIOstar Plus (BMG LabTech系列號430-4346) 讀板儀量測發光。特異性殺死百分比計算為100%-(100*實驗孔發光/平均僅靶標孔發光)。 表 31及 圖 14顯示在各種效應物對靶標比率下之平均細胞殺死百分比。 表 31.工程化T細胞之平均靶細胞殺死百分比。
E:T 24 小時 48 小時
平均值 SD n 平均值 SD n
4:1 79.7 0.7 3 98.2 9.6 3
2:1 65.4 2.2 3 95.4 4.3 3
1:1 46.1 2.1 3 82.2 5.9 3
1:2 41.1 2.2 3 65.0 2.8 3
1:4 35.6 1.2 3 59.7 6.1 3
1:8 12.2 0.9 3 38.2 1.6 3
1:16 10.3 1.1 3 34.7 1.2 3
1:32 3.9 2.1 3 28.7 1.3 3
僅靶標 1.5 1.7 3 -0.3 2.0 3
實例 9. 使用 SpCas9 及 Nme2 鹼基編輯器對所選向導之編輯
為評價使用SpyCas9及Nme2鹼基編輯器對所選向導之編輯，藉由流式細胞術及NGS評估工程化細胞。本實例包括所選向導濃度及Nme2 BC22 mRNA濃度。 實例 9.1. T 細胞製備
使經分離之冷凍保存T細胞於水浴中解凍，且以1 × 10 6個細胞/mL之密度平鋪於含有CTS OpTmizer T細胞擴增SFM及T細胞擴增補充物(ThermoFisher，目錄號A1048501)、1X青黴素-鏈黴素、1X Glutamax、10 mM HEPES、200 U/mL重組人類介白素-2 (Peprotech，目錄號200-02)、5 ng/mL重組人類介白素7 (Peprotech，目錄號200-07)及5 ng/mL重組人類介白素15 (Peprotech，目錄號200-15)及2.5%人類AB血清(GeminiBio，目錄號100-512)之TCAM培養基中。使用來自多名供體之經分離T細胞製備技術重複。所示數據來自選定供體。 實例 9.2. T 細胞工程化
通常如實例1中所闡述製備LNP。本實例中之脂質奈米顆粒係以35脂質A: 47.5膽固醇: 15 DSPC: 2.5 PEG2k-DMG之莫耳比來製備。LNP係以脂質胺對RNA磷酸酯(N:P)莫耳比為約6來製得。如 表 32中所闡述，LNP係以單一RNA種類來調配或與多種RNA種類共調配。如 表 32中所闡述，將LNP遞送至含有ApoE3 (Peprotech，目錄號350-02)之TCAM培養基中之T細胞。 表 32. 脂質奈米顆粒。貨品質量比分別按貨品欄中之順序列示。以每單位體積總RNA貨品之質量來衡量劑量。
LNP 劑量(ug/ml) 貨品 貨品質量比
1 - NmeBC22n mRNA n/a
2 0.5 UGI mRNA n/a
3 0.32 G028986(TRBC) n/a
4 0.68 G026584 (CIITA) n/a
5 0.21 G028907 (HLA-A/HLA-B) n/a
6 1 SpyCas9 mRNA + G013006 (TRAC) 1:1
在第1天(例如解凍後約24小時)，收穫細胞且用TransAct™ (1:100稀釋，Miltenyi Biotec)活化。在第3天，以 表 32中所列示之劑量施加LNP以及0.5 uM化合物1。
在第4天開始，細胞分裂且定期更換培養基。在第7天，收穫一部分細胞，用於TRAC、TRBC1、TRBC2及CIITA基因座處之測序分析。如實例1中所闡述實施NGS分析。 表 33及 圖 15顯示該等細胞之平均編輯百分比。 表 33. 平均編輯百分比。
向導 BE mRNA C 至T C 至A/G 插入缺失
平均值 SD n 平均值 SD n 平均值 SD n
G013006 TRAC Cas9 1.0 ug/mL 4.9 0.6 3 0.2 0.1 3 91.4 1.9 3
0.5 ug/mL 5.0 3.4 3 0.2 0.1 3 87.2 12.0 3
G028986 TRBC1 BE 1.0 ug/mL 93.3 1.5 3 0.9 0.5 3 1.0 1.4 3
0.5 ug/mL 94.4 0.2 3 1.0 0.6 3 0.3 0.3 3
G026584 CIITA BE 1.0 ug/mL 91.6 0.8 3 1.4 0.2 3 0.6 0.3 3
0.5 ug/mL 91.8 1.3 3 1.2 0.3 3 0.9 0.2 3
實例 9.3 流式細胞術
在第9天，收穫細胞以用於藉由流式細胞術進行分析。對於流式細胞分析，在FACS緩衝液(PBS + 2% FBS + 2 mM EDTA)中洗滌細胞。使工程化T細胞在靶向CD4 (Biolegend 317434)、CD8 (Biolegend 301046)、CD3 (Biolegend 300430)、HLA-A2 (Biolegend 343320)、HLA-B7 (Miltenyi Biotec, 130-120-234)、HLA-DR,DP,DQ (Biolegend 361712)之抗體與ViaKrome 808可固定活力染料(Beckman Coulter, C36628)之混合劑中培育。隨後洗滌T細胞，且在Cytoflex儀器(Beckman Coulter)上進行分析。使用FlowJo軟體包(第10.6.1版)實施數據分析。針對活的單細胞、CD8+表現及 表 34中所指示之標記物表現對T細胞進行門控。CD8+細胞之流式細胞術數據示於 表 34及 圖 16中。CD3-、HLA-A2-、HLA-B7-及HLA-DP, DQ, DQ-細胞群體分別指示TRAC、TRBC1以及TRBC2基因座、HLA-A基因座、HLA-B基因座及CIITA基因座之高效破壞。 表 34. 表面蛋白質表現呈陰性之CD8+ T細胞之平均百分比。
表型 0.5 ug/ml Nme2 BC22 mRNA 1.0 ug/ml Nme2 BC22 mRNA
平均值 SD n 平均值 SD n
CD3- 99 0 3 99 0 3
HLA-A- 95 1 3 94 0 3
HLA-B7- 60 1 3 58 1 3
HLA-DP, DQ, DR- 98 1 3 98 0 3
序列表格
在下表中，術語「mA」、「mC」、「mU」或「mG」用於表示經2’-O-Me修飾之核苷酸。
在下表中，每一「N」用於獨立地表示任何核苷酸(例如A、U、T、C、G)。在某些實施例中，核苷酸為未經修飾之RNA核苷酸殘基，亦即核糖及磷酸二酯主鏈。
在下表中，「*」用於表示PS修飾。在本申請案中，術語A*、C*、U*或G*可用於表示以PS鍵與下一(例如3’)核苷酸連接之核苷酸。
應理解，若關於RNA提及DNA序列(包含T)，則T應經U (其可端視背景經修飾或經未修飾)置換，且反之亦然。
在下表中，使用單一胺基酸字母代碼提供肽序列。
SEQ ID NO 說明 序列
1 編碼SpyCas9 BC22n之mRNA GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGAGGCCUCCCCCGCCUCCGGCCCCCGGCACCUGAUGGACCCCCACAUCUUCACCUCCAACUUCAACAACGGCAUCGGCCGGCACAAGACCUACCUGUGCUACGAGGUGGAGCGGCUGGACAACGGCACCUCCGUGAAGAUGGACCAGCACCGGGGCUUCCUGCACAACCAGGCCAAGAACCUGCUGUGCGGCUUCUACGGCCGGCACGCCGAGCUGCGGUUCCUGGACCUGGUGCCCUCCCUGCAGCUGGACCCCGCCCAGAUCUACCGGGUGACCUGGUUCAUCUCCUGGUCCCCCUGCUUCUCCUGGGGCUGCGCCGGCGAGGUGCGGGCCUUCCUGCAGGAGAACACCCACGUGCGGCUGCGGAUCUUCGCCGCCCGGAUCUACGACUACGACCCCCUGUACAAGGAGGCCCUGCAGAUGCUGCGGGACGCCGGCGCCCAGGUGUCCAUCAUGACCUACGACGAGUUCAAGCACUGCUGGGACACCUUCGUGGACCACCAGGGCUGCCCCUUCCAGCCCUGGGACGGCCUGGACGAGCACUCCCAGGCCCUGUCCGGCCGGCUGCGGGCCAUCCUGCAGAACCAGGGCAACUCCGGCUCCGAGACCCCCGGCACCUCCGAGUCCGCCACCCCCGAGUCCGACAAGAAGUACUCCAUCGGCCUGGCCAUCGGCACCAACUCCGUGGGCUGGGCCGUGAUCACCGACGAGUACAAGGUGCCCUCCAAGAAGUUCAAGGUGCUGGGCAACACCGACCGGCACUCCAUCAAGAAGAACCUGAUCGGCGCCCUGCUGUUCGACUCCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCUGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGUACACCCGGCGGAAGAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCUCCAACGAGAUGGCCAAGGUGGACGACUCCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGUCCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAGGUGGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUGGACUCCACCGACAAGGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCCCUGGCCCACAUGAUCAAGUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCCGACAACUCCGACGUGGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACCUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCUCCGGCGUGGACGCCAAGGCCAUCCUGUCCGCCCGGCUGUCCAAGUCCCGGCGGCUGGAGAACCUGAUCGCCCAGCUGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCUGUUCGGCAACCUGAUCGCCCUGUCCCUGGGCCUGACCCCCAACUUCAAGUCCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAGCUGCAGCUGUCCAAGGACACCUACGACGACGACCUGGACAACCUGCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCCGCCAAGAACCUGUCCGACGCCAUCCUGCUGUCCGACAUCCUGCGGGUGAACACCGAGAUCACCAAGGCCCCCCUGUCCGCCUCCAUGAUCAAGCGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACCCUGCUGAAGGCCCUGGUGCGGCAGCAGCUGCCCGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGUCCAAGAACGGCUACGCCGGCUACAUCGACGGCGGCGCCUCCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUGGAGAAGAUGGACGGCACCGAGGAGCUGCUGGUGAAGCUGAACCGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGCGGACCUUCGACAACGGCUCCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGCGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACCGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUGACCUUCCGGAUCCCCUACUACGUGGGCCCCCUGGCCCGGGGCAACUCCCGGUUCGCCUGGAUGACCCGGAAGUCCGAGGAGACCAUCACCCCCUGGAACUUCGAGGAGGUGGUGGACAAGGGCGCCUCCGCCCAGUCCUUCAUCGAGCGGAUGACCAACUUCGACAAGAACCUGCCCAACGAGAAGGUGCUGCCCAAGCACUCCCUGCUGUACGAGUACUUCACCGUGUACAACGAGCUGACCAAGGUGAAGUACGUGACCGAGGGCAUGCGGAAGCCCGCCUUCCUGUCCGGCGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAGACCAACCGGAAGGUGACCGUGAAGCAGCUGAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACUCCGUGGAGAUCUCCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCUCCCUGGGCACCUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACCCUGACCCUGUUCGAGGACCGGGAGAUGAUCGAGGAGCGGCUGAAGACCUACGCCCACCUGUUCGACGACAAGGUGAUGAAGCAGCUGAAGCGGCGGCGGUACACCGGCUGGGGCCGGCUGUCCCGGAAGCUGAUCAACGGCAUCCGGGACAAGCAGUCCGGCAAGACCAUCCUGGACUUCCUGAAGUCCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACUCCCUGACCUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUGUCCGGCCAGGGCGACUCCCUGCACGAGCACAUCGCCAACCUGGCCGGCUCCCCCGCCAUCAAGAAGGGCAUCCUGCAGACCGUGAAGGUGGUGGACGAGCUGGUGAAGGUGAUGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACUCCCGGGAGCGGAUGAAGCGGAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCUCCCAGAUCCUGAAGGAGCACCCCGUGGAGAACACCCAGCUGCAGAACGAGAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAACGGCCGGGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUGUCCGACUACGACGUGGACCACAUCGUGCCCCAGUCCUUCCUGAAGGACGACUCCAUCGACAACAAGGUGCUGACCCGGUCCGACAAGAACCGGGGCAAGUCCGACAACGUGCCCUCCGAGGAGGUGGUGAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAGCUGAUCACCCAGCGGAAGUUCGACAACCUGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCUGUCCGAGCUGGACAAGGCCGGCUUCAUCAAGCGGCAGCUGGUGGAGACCCGGCAGAUCACCAAGCACGUGGCCCAGAUCCUGGACUCCCGGAUGAACACCAAGUACGACGAGAACGACAAGCUGAUCCGGGAGGUGAAGGUGAUCACCCUGAAGUCCAAGCUGGUGUCCGACUUCCGGAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUGCGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCCGUGGUGGGCACCGCCCUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUGGAGUCCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAGGUGUACGACGUGCGGAAGAUGAUCGCCAAGUCCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACCGCCAAGUACUUCUUCUACUCCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACCGAGAUCACCCUGGCCAACGGCGAGAUCCGGAAGCGGCCCCUGAUCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGAUCGUGUGGGACAAGGGCCGGGACUUCGCCACCGUGCGGAAGGUGCUGUCCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAGAAGACCGAGGUGCAGACCGGCGGCUUCUCCAAGGAGUCCAUCCUGCCCAAGCGGAACUCCGACAAGCUGAUCGCCCGGAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGCGGCUUCGACUCCCCCACCGUGGCCUACUCCGUGCUGGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGCAAGUCCAAGAAGCUGAAGUCCGUGAAGGAGCUGCUGGGCAUCACCAUCAUGGAGCGGUCCUCCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAGGCCAAGGGCUACAAGGAGGUGAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUGCCCAAGUACUCCCUGUUCGAGCUGGAGAACGGCCGGAAGCGGAUGCUGGCCUCCGCCGGCGAGCUGCAGAAGGGCAACGAGCUGGCCCUGCCCUCCAAGUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCUCCCACUACGAGAAGCUGAAGGGCUCCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAGCACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCUCCGAGUUCUCCAAGCGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAACCUGGACAAGGUGCUGUCCGCCUACAACAAGCACCGGGACAAGCCCAUCCGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACCCUGACCAACCUGGGCGCCCCCGCCGCCUUCAAGUACUUCGACACCACCAUCGACCGGAAGCGGUACACCUCCACCAAGGAGGUGCUGGACGCCACCCUGAUCCACCAGUCCAUCACCGGCCUGUACGAGACCCGGAUCGACCUGUCCCAGCUGGGCGGCGACGGCGGCGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGUGACUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAUGGAAAAAAAAAAAACGGAAA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2 BC22n之開放閱讀框 AUGGAGGCCUCCCCCGCCUCCGGCCCCCGGCACCUGAUGGACCCCCACAUCUUCACCUCCAACUUCAACAACGGCAUCGGCCGGCACAAGACCUACCUGUGCUACGAGGUGGAGCGGCUGGACAACGGCACCUCCGUGAAGAUGGACCAGCACCGGGGCUUCCUGCACAACCAGGCCAAGAACCUGCUGUGCGGCUUCUACGGCCGGCACGCCGAGCUGCGGUUCCUGGACCUGGUGCCCUCCCUGCAGCUGGACCCCGCCCAGAUCUACCGGGUGACCUGGUUCAUCUCCUGGUCCCCCUGCUUCUCCUGGGGCUGCGCCGGCGAGGUGCGGGCCUUCCUGCAGGAGAACACCCACGUGCGGCUGCGGAUCUUCGCCGCCCGGAUCUACGACUACGACCCCCUGUACAAGGAGGCCCUGCAGAUGCUGCGGGACGCCGGCGCCCAGGUGUCCAUCAUGACCUACGACGAGUUCAAGCACUGCUGGGACACCUUCGUGGACCACCAGGGCUGCCCCUUCCAGCCCUGGGACGGCCUGGACGAGCACUCCCAGGCCCUGUCCGGCCGGCUGCGGGCCAUCCUGCAGAACCAGGGCAACUCCGGCUCCGAGACCCCCGGCACCUCCGAGUCCGCCACCCCCGAGUCCGACAAGAAGUACUCCAUCGGCCUGGCCAUCGGCACCAACUCCGUGGGCUGGGCCGUGAUCACCGACGAGUACAAGGUGCCCUCCAAGAAGUUCAAGGUGCUGGGCAACACCGACCGGCACUCCAUCAAGAAGAACCUGAUCGGCGCCCUGCUGUUCGACUCCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCUGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGUACACCCGGCGGAAGAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCUCCAACGAGAUGGCCAAGGUGGACGACUCCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGUCCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAGGUGGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUGGACUCCACCGACAAGGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCCCUGGCCCACAUGAUCAAGUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCCGACAACUCCGACGUGGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACCUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCUCCGGCGUGGACGCCAAGGCCAUCCUGUCCGCCCGGCUGUCCAAGUCCCGGCGGCUGGAGAACCUGAUCGCCCAGCUGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCUGUUCGGCAACCUGAUCGCCCUGUCCCUGGGCCUGACCCCCAACUUCAAGUCCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAGCUGCAGCUGUCCAAGGACACCUACGACGACGACCUGGACAACCUGCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCCGCCAAGAACCUGUCCGACGCCAUCCUGCUGUCCGACAUCCUGCGGGUGAACACCGAGAUCACCAAGGCCCCCCUGUCCGCCUCCAUGAUCAAGCGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACCCUGCUGAAGGCCCUGGUGCGGCAGCAGCUGCCCGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGUCCAAGAACGGCUACGCCGGCUACAUCGACGGCGGCGCCUCCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUGGAGAAGAUGGACGGCACCGAGGAGCUGCUGGUGAAGCUGAACCGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGCGGACCUUCGACAACGGCUCCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGCGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACCGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUGACCUUCCGGAUCCCCUACUACGUGGGCCCCCUGGCCCGGGGCAACUCCCGGUUCGCCUGGAUGACCCGGAAGUCCGAGGAGACCAUCACCCCCUGGAACUUCGAGGAGGUGGUGGACAAGGGCGCCUCCGCCCAGUCCUUCAUCGAGCGGAUGACCAACUUCGACAAGAACCUGCCCAACGAGAAGGUGCUGCCCAAGCACUCCCUGCUGUACGAGUACUUCACCGUGUACAACGAGCUGACCAAGGUGAAGUACGUGACCGAGGGCAUGCGGAAGCCCGCCUUCCUGUCCGGCGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAGACCAACCGGAAGGUGACCGUGAAGCAGCUGAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACUCCGUGGAGAUCUCCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCUCCCUGGGCACCUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACCCUGACCCUGUUCGAGGACCGGGAGAUGAUCGAGGAGCGGCUGAAGACCUACGCCCACCUGUUCGACGACAAGGUGAUGAAGCAGCUGAAGCGGCGGCGGUACACCGGCUGGGGCCGGCUGUCCCGGAAGCUGAUCAACGGCAUCCGGGACAAGCAGUCCGGCAAGACCAUCCUGGACUUCCUGAAGUCCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACUCCCUGACCUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUGUCCGGCCAGGGCGACUCCCUGCACGAGCACAUCGCCAACCUGGCCGGCUCCCCCGCCAUCAAGAAGGGCAUCCUGCAGACCGUGAAGGUGGUGGACGAGCUGGUGAAGGUGAUGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACUCCCGGGAGCGGAUGAAGCGGAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCUCCCAGAUCCUGAAGGAGCACCCCGUGGAGAACACCCAGCUGCAGAACGAGAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAACGGCCGGGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUGUCCGACUACGACGUGGACCACAUCGUGCCCCAGUCCUUCCUGAAGGACGACUCCAUCGACAACAAGGUGCUGACCCGGUCCGACAAGAACCGGGGCAAGUCCGACAACGUGCCCUCCGAGGAGGUGGUGAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAGCUGAUCACCCAGCGGAAGUUCGACAACCUGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCUGUCCGAGCUGGACAAGGCCGGCUUCAUCAAGCGGCAGCUGGUGGAGACCCGGCAGAUCACCAAGCACGUGGCCCAGAUCCUGGACUCCCGGAUGAACACCAAGUACGACGAGAACGACAAGCUGAUCCGGGAGGUGAAGGUGAUCACCCUGAAGUCCAAGCUGGUGUCCGACUUCCGGAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUGCGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCCGUGGUGGGCACCGCCCUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUGGAGUCCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAGGUGUACGACGUGCGGAAGAUGAUCGCCAAGUCCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACCGCCAAGUACUUCUUCUACUCCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACCGAGAUCACCCUGGCCAACGGCGAGAUCCGGAAGCGGCCCCUGAUCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGAUCGUGUGGGACAAGGGCCGGGACUUCGCCACCGUGCGGAAGGUGCUGUCCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAGAAGACCGAGGUGCAGACCGGCGGCUUCUCCAAGGAGUCCAUCCUGCCCAAGCGGAACUCCGACAAGCUGAUCGCCCGGAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGCGGCUUCGACUCCCCCACCGUGGCCUACUCCGUGCUGGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGCAAGUCCAAGAAGCUGAAGUCCGUGAAGGAGCUGCUGGGCAUCACCAUCAUGGAGCGGUCCUCCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAGGCCAAGGGCUACAAGGAGGUGAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUGCCCAAGUACUCCCUGUUCGAGCUGGAGAACGGCCGGAAGCGGAUGCUGGCCUCCGCCGGCGAGCUGCAGAAGGGCAACGAGCUGGCCCUGCCCUCCAAGUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCUCCCACUACGAGAAGCUGAAGGGCUCCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAGCACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCUCCGAGUUCUCCAAGCGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAACCUGGACAAGGUGCUGUCCGCCUACAACAAGCACCGGGACAAGCCCAUCCGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACCCUGACCAACCUGGGCGCCCCCGCCGCCUUCAAGUACUUCGACACCACCAUCGACCGGAAGCGGUACACCUCCACCAAGGAGGUGCUGGACGCCACCCUGAUCCACCAGUCCAUCACCGGCCUGUACGAGACCCGGAUCGACCUGUCCCAGCUGGGCGGCGACGGCGGCGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGUGA
3 BC22n之胺基酸序列 MEASPASGPRHLMDPHIFTSNFNNGIGRHKTYLCYEVERLDNGTSVKMDQHRGFLHNQAKNLLCGFYGRHAELRFLDLVPSLQLDPAQIYRVTWFISWSPCFSWGCAGEVRAFLQENTHVRLRIFAARIYDYDPLYKEALQMLRDAGAQVSIMTYDEFKHCWDTFVDHQGCPFQPWDGLDEHSQALSGRLRAILQNQGNSGSETPGTSESATPESDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDGGGSPKKKRKV
4 編碼帶有Hibit標籤之BC22n之mRNA GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGAGGCCUCCCCCGCCUCCGGCCCCCGGCACCUGAUGGACCCCCACAUCUUCACCUCCAACUUCAACAACGGCAUCGGCCGGCACAAGACCUACCUGUGCUACGAGGUGGAGCGGCUGGACAACGGCACCUCCGUGAAGAUGGACCAGCACCGGGGCUUCCUGCACAACCAGGCCAAGAACCUGCUGUGCGGCUUCUACGGCCGGCACGCCGAGCUGCGGUUCCUGGACCUGGUGCCCUCCCUGCAGCUGGACCCCGCCCAGAUCUACCGGGUGACCUGGUUCAUCUCCUGGUCCCCCUGCUUCUCCUGGGGCUGCGCCGGCGAGGUGCGGGCCUUCCUGCAGGAGAACACCCACGUGCGGCUGCGGAUCUUCGCCGCCCGGAUCUACGACUACGACCCCCUGUACAAGGAGGCCCUGCAGAUGCUGCGGGACGCCGGCGCCCAGGUGUCCAUCAUGACCUACGACGAGUUCAAGCACUGCUGGGACACCUUCGUGGACCACCAGGGCUGCCCCUUCCAGCCCUGGGACGGCCUGGACGAGCACUCCCAGGCCCUGUCCGGCCGGCUGCGGGCCAUCCUGCAGAACCAGGGCAACUCCGGCUCCGAGACCCCCGGCACCUCCGAGUCCGCCACCCCCGAGUCCGACAAGAAGUACUCCAUCGGCCUGGCCAUCGGCACCAACUCCGUGGGCUGGGCCGUGAUCACCGACGAGUACAAGGUGCCCUCCAAGAAGUUCAAGGUGCUGGGCAACACCGACCGGCACUCCAUCAAGAAGAACCUGAUCGGCGCCCUGCUGUUCGACUCCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCUGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGUACACCCGGCGGAAGAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCUCCAACGAGAUGGCCAAGGUGGACGACUCCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGUCCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAGGUGGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUGGACUCCACCGACAAGGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCCCUGGCCCACAUGAUCAAGUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCCGACAACUCCGACGUGGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACCUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCUCCGGCGUGGACGCCAAGGCCAUCCUGUCCGCCCGGCUGUCCAAGUCCCGGCGGCUGGAGAACCUGAUCGCCCAGCUGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCUGUUCGGCAACCUGAUCGCCCUGUCCCUGGGCCUGACCCCCAACUUCAAGUCCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAGCUGCAGCUGUCCAAGGACACCUACGACGACGACCUGGACAACCUGCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCCGCCAAGAACCUGUCCGACGCCAUCCUGCUGUCCGACAUCCUGCGGGUGAACACCGAGAUCACCAAGGCCCCCCUGUCCGCCUCCAUGAUCAAGCGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACCCUGCUGAAGGCCCUGGUGCGGCAGCAGCUGCCCGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGUCCAAGAACGGCUACGCCGGCUACAUCGACGGCGGCGCCUCCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUGGAGAAGAUGGACGGCACCGAGGAGCUGCUGGUGAAGCUGAACCGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGCGGACCUUCGACAACGGCUCCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGCGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACCGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUGACCUUCCGGAUCCCCUACUACGUGGGCCCCCUGGCCCGGGGCAACUCCCGGUUCGCCUGGAUGACCCGGAAGUCCGAGGAGACCAUCACCCCCUGGAACUUCGAGGAGGUGGUGGACAAGGGCGCCUCCGCCCAGUCCUUCAUCGAGCGGAUGACCAACUUCGACAAGAACCUGCCCAACGAGAAGGUGCUGCCCAAGCACUCCCUGCUGUACGAGUACUUCACCGUGUACAACGAGCUGACCAAGGUGAAGUACGUGACCGAGGGCAUGCGGAAGCCCGCCUUCCUGUCCGGCGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAGACCAACCGGAAGGUGACCGUGAAGCAGCUGAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACUCCGUGGAGAUCUCCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCUCCCUGGGCACCUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACCCUGACCCUGUUCGAGGACCGGGAGAUGAUCGAGGAGCGGCUGAAGACCUACGCCCACCUGUUCGACGACAAGGUGAUGAAGCAGCUGAAGCGGCGGCGGUACACCGGCUGGGGCCGGCUGUCCCGGAAGCUGAUCAACGGCAUCCGGGACAAGCAGUCCGGCAAGACCAUCCUGGACUUCCUGAAGUCCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACUCCCUGACCUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUGUCCGGCCAGGGCGACUCCCUGCACGAGCACAUCGCCAACCUGGCCGGCUCCCCCGCCAUCAAGAAGGGCAUCCUGCAGACCGUGAAGGUGGUGGACGAGCUGGUGAAGGUGAUGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACUCCCGGGAGCGGAUGAAGCGGAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCUCCCAGAUCCUGAAGGAGCACCCCGUGGAGAACACCCAGCUGCAGAACGAGAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAACGGCCGGGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUGUCCGACUACGACGUGGACCACAUCGUGCCCCAGUCCUUCCUGAAGGACGACUCCAUCGACAACAAGGUGCUGACCCGGUCCGACAAGAACCGGGGCAAGUCCGACAACGUGCCCUCCGAGGAGGUGGUGAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAGCUGAUCACCCAGCGGAAGUUCGACAACCUGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCUGUCCGAGCUGGACAAGGCCGGCUUCAUCAAGCGGCAGCUGGUGGAGACCCGGCAGAUCACCAAGCACGUGGCCCAGAUCCUGGACUCCCGGAUGAACACCAAGUACGACGAGAACGACAAGCUGAUCCGGGAGGUGAAGGUGAUCACCCUGAAGUCCAAGCUGGUGUCCGACUUCCGGAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUGCGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCCGUGGUGGGCACCGCCCUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUGGAGUCCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAGGUGUACGACGUGCGGAAGAUGAUCGCCAAGUCCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACCGCCAAGUACUUCUUCUACUCCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACCGAGAUCACCCUGGCCAACGGCGAGAUCCGGAAGCGGCCCCUGAUCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGAUCGUGUGGGACAAGGGCCGGGACUUCGCCACCGUGCGGAAGGUGCUGUCCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAGAAGACCGAGGUGCAGACCGGCGGCUUCUCCAAGGAGUCCAUCCUGCCCAAGCGGAACUCCGACAAGCUGAUCGCCCGGAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGCGGCUUCGACUCCCCCACCGUGGCCUACUCCGUGCUGGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGCAAGUCCAAGAAGCUGAAGUCCGUGAAGGAGCUGCUGGGCAUCACCAUCAUGGAGCGGUCCUCCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAGGCCAAGGGCUACAAGGAGGUGAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUGCCCAAGUACUCCCUGUUCGAGCUGGAGAACGGCCGGAAGCGGAUGCUGGCCUCCGCCGGCGAGCUGCAGAAGGGCAACGAGCUGGCCCUGCCCUCCAAGUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCUCCCACUACGAGAAGCUGAAGGGCUCCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAGCACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCUCCGAGUUCUCCAAGCGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAACCUGGACAAGGUGCUGUCCGCCUACAACAAGCACCGGGACAAGCCCAUCCGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACCCUGACCAACCUGGGCGCCCCCGCCGCCUUCAAGUACUUCGACACCACCAUCGACCGGAAGCGGUACACCUCCACCAAGGAGGUGCUGGACGCCACCCUGAUCCACCAGUCCAUCACCGGCCUGUACGAGACCCGGAUCGACCUGUCCCAGCUGGGCGGCGACGGCGGCGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGUCCGAGUCCGCCACCCCCGAGUCCGUGUCCGGCUGGCGGCUGUUCAAGAAGAUCUCCUGACUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAG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5 帶有Hibit標籤之BC22n之開放閱讀框 AUGGAGGCCUCCCCCGCCUCCGGCCCCCGGCACCUGAUGGACCCCCACAUCUUCACCUCCAACUUCAACAACGGCAUCGGCCGGCACAAGACCUACCUGUGCUACGAGGUGGAGCGGCUGGACAACGGCACCUCCGUGAAGAUGGACCAGCACCGGGGCUUCCUGCACAACCAGGCCAAGAACCUGCUGUGCGGCUUCUACGGCCGGCACGCCGAGCUGCGGUUCCUGGACCUGGUGCCCUCCCUGCAGCUGGACCCCGCCCAGAUCUACCGGGUGACCUGGUUCAUCUCCUGGUCCCCCUGCUUCUCCUGGGGCUGCGCCGGCGAGGUGCGGGCCUUCCUGCAGGAGAACACCCACGUGCGGCUGCGGAUCUUCGCCGCCCGGAUCUACGACUACGACCCCCUGUACAAGGAGGCCCUGCAGAUGCUGCGGGACGCCGGCGCCCAGGUGUCCAUCAUGACCUACGACGAGUUCAAGCACUGCUGGGACACCUUCGUGGACCACCAGGGCUGCCCCUUCCAGCCCUGGGACGGCCUGGACGAGCACUCCCAGGCCCUGUCCGGCCGGCUGCGGGCCAUCCUGCAGAACCAGGGCAACUCCGGCUCCGAGACCCCCGGCACCUCCGAGUCCGCCACCCCCGAGUCCGACAAGAAGUACUCCAUCGGCCUGGCCAUCGGCACCAACUCCGUGGGCUGGGCCGUGAUCACCGACGAGUACAAGGUGCCCUCCAAGAAGUUCAAGGUGCUGGGCAACACCGACCGGCACUCCAUCAAGAAGAACCUGAUCGGCGCCCUGCUGUUCGACUCCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCUGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGUACACCCGGCGGAAGAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCUCCAACGAGAUGGCCAAGGUGGACGACUCCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGUCCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAGGUGGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUGGACUCCACCGACAAGGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCCCUGGCCCACAUGAUCAAGUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCCGACAACUCCGACGUGGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACCUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCUCCGGCGUGGACGCCAAGGCCAUCCUGUCCGCCCGGCUGUCCAAGUCCCGGCGGCUGGAGAACCUGAUCGCCCAGCUGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCUGUUCGGCAACCUGAUCGCCCUGUCCCUGGGCCUGACCCCCAACUUCAAGUCCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAGCUGCAGCUGUCCAAGGACACCUACGACGACGACCUGGACAACCUGCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCCGCCAAGAACCUGUCCGACGCCAUCCUGCUGUCCGACAUCCUGCGGGUGAACACCGAGAUCACCAAGGCCCCCCUGUCCGCCUCCAUGAUCAAGCGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACCCUGCUGAAGGCCCUGGUGCGGCAGCAGCUGCCCGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGUCCAAGAACGGCUACGCCGGCUACAUCGACGGCGGCGCCUCCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUGGAGAAGAUGGACGGCACCGAGGAGCUGCUGGUGAAGCUGAACCGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGCGGACCUUCGACAACGGCUCCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGCGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACCGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUGACCUUCCGGAUCCCCUACUACGUGGGCCCCCUGGCCCGGGGCAACUCCCGGUUCGCCUGGAUGACCCGGAAGUCCGAGGAGACCAUCACCCCCUGGAACUUCGAGGAGGUGGUGGACAAGGGCGCCUCCGCCCAGUCCUUCAUCGAGCGGAUGACCAACUUCGACAAGAACCUGCCCAACGAGAAGGUGCUGCCCAAGCACUCCCUGCUGUACGAGUACUUCACCGUGUACAACGAGCUGACCAAGGUGAAGUACGUGACCGAGGGCAUGCGGAAGCCCGCCUUCCUGUCCGGCGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAGACCAACCGGAAGGUGACCGUGAAGCAGCUGAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACUCCGUGGAGAUCUCCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCUCCCUGGGCACCUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACCCUGACCCUGUUCGAGGACCGGGAGAUGAUCGAGGAGCGGCUGAAGACCUACGCCCACCUGUUCGACGACAAGGUGAUGAAGCAGCUGAAGCGGCGGCGGUACACCGGCUGGGGCCGGCUGUCCCGGAAGCUGAUCAACGGCAUCCGGGACAAGCAGUCCGGCAAGACCAUCCUGGACUUCCUGAAGUCCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACUCCCUGACCUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUGUCCGGCCAGGGCGACUCCCUGCACGAGCACAUCGCCAACCUGGCCGGCUCCCCCGCCAUCAAGAAGGGCAUCCUGCAGACCGUGAAGGUGGUGGACGAGCUGGUGAAGGUGAUGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACUCCCGGGAGCGGAUGAAGCGGAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCUCCCAGAUCCUGAAGGAGCACCCCGUGGAGAACACCCAGCUGCAGAACGAGAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAACGGCCGGGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUGUCCGACUACGACGUGGACCACAUCGUGCCCCAGUCCUUCCUGAAGGACGACUCCAUCGACAACAAGGUGCUGACCCGGUCCGACAAGAACCGGGGCAAGUCCGACAACGUGCCCUCCGAGGAGGUGGUGAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAGCUGAUCACCCAGCGGAAGUUCGACAACCUGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCUGUCCGAGCUGGACAAGGCCGGCUUCAUCAAGCGGCAGCUGGUGGAGACCCGGCAGAUCACCAAGCACGUGGCCCAGAUCCUGGACUCCCGGAUGAACACCAAGUACGACGAGAACGACAAGCUGAUCCGGGAGGUGAAGGUGAUCACCCUGAAGUCCAAGCUGGUGUCCGACUUCCGGAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUGCGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCCGUGGUGGGCACCGCCCUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUGGAGUCCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAGGUGUACGACGUGCGGAAGAUGAUCGCCAAGUCCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACCGCCAAGUACUUCUUCUACUCCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACCGAGAUCACCCUGGCCAACGGCGAGAUCCGGAAGCGGCCCCUGAUCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGAUCGUGUGGGACAAGGGCCGGGACUUCGCCACCGUGCGGAAGGUGCUGUCCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAGAAGACCGAGGUGCAGACCGGCGGCUUCUCCAAGGAGUCCAUCCUGCCCAAGCGGAACUCCGACAAGCUGAUCGCCCGGAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGCGGCUUCGACUCCCCCACCGUGGCCUACUCCGUGCUGGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGCAAGUCCAAGAAGCUGAAGUCCGUGAAGGAGCUGCUGGGCAUCACCAUCAUGGAGCGGUCCUCCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAGGCCAAGGGCUACAAGGAGGUGAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUGCCCAAGUACUCCCUGUUCGAGCUGGAGAACGGCCGGAAGCGGAUGCUGGCCUCCGCCGGCGAGCUGCAGAAGGGCAACGAGCUGGCCCUGCCCUCCAAGUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCUCCCACUACGAGAAGCUGAAGGGCUCCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAGCACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCUCCGAGUUCUCCAAGCGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAACCUGGACAAGGUGCUGUCCGCCUACAACAAGCACCGGGACAAGCCCAUCCGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACCCUGACCAACCUGGGCGCCCCCGCCGCCUUCAAGUACUUCGACACCACCAUCGACCGGAAGCGGUACACCUCCACCAAGGAGGUGCUGGACGCCACCCUGAUCCACCAGUCCAUCACCGGCCUGUACGAGACCCGGAUCGACCUGUCCCAGCUGGGCGGCGACGGCGGCGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGUCCGAGUCCGCCACCCCCGAGUCCGUGUCCGGCUGGCGGCUGUUCAAGAAGAUCUCCUGA
6 帶有Hibit標籤之BC22n之胺基酸序列 MEASPASGPRHLMDPHIFTSNFNNGIGRHKTYLCYEVERLDNGTSVKMDQHRGFLHNQAKNLLCGFYGRHAELRFLDLVPSLQLDPAQIYRVTWFISWSPCFSWGCAGEVRAFLQENTHVRLRIFAARIYDYDPLYKEALQMLRDAGAQVSIMTYDEFKHCWDTFVDHQGCPFQPWDGLDEHSQALSGRLRAILQNQGNSGSETPGTSESATPESDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDGGGSPKKKRKVSESATPESVSGWRLFKKIS
7 編碼BE3之mRNA 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8 BE3之開放閱讀框 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9 BE3之胺基酸序列 MSSETGPVAVDPTLRRRIEPHEFEVFFDPRELRKETCLLYEINWGGRHSIWRHTSQNTNKHVEVNFIEKFTTERYFCPNTRCSITWFLSWSPCGECSRAITEFLSRYPHVTLFIYIARLYHHADPRNRQGLRDLISSGVTIQIMTEQESGYCWRNFVNYSPSNEAHWPRYPHLWVRLYVLELYCIILGLPPCLNILRRKQPQLTFFTIALQSCHYQRLPPHILWATGLKSGSETPGTSESATPESDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLSGGSPKKKRKV
10 編碼BE3之mRNA 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11 BE3之開放閱讀框 AUGAGCUCAGAGACUGGCCCAGUGGCUGUGGACCCCACAUUGAGACGGCGGAUCGAGCCCCAUGAGUUUGAGGUAUUCUUCGAUCCGAGAGAGCUCCGCAAGGAGACCUGCCUGCUUUACGAAAUUAAUUGGGGGGGCCGGCACUCCAUUUGGCGACAUACAUCACAGAACACUAACAAGCACGUCGAAGUCAACUUCAUCGAGAAGUUCACGACAGAAAGAUAUUUCUGUCCGAACACAAGGUGCAGCAUUACCUGGUUUCUCAGCUGGAGCCCAUGCGGCGAAUGUAGUAGGGCCAUCACUGAAUUCCUGUCAAGGUAUCCCCACGUCACUCUGUUUAUUUACAUCGCAAGGCUGUACCACCACGCUGACCCCCGCAAUCGACAAGGCCUGCGGGAUUUGAUCUCUUCAGGUGUGACUAUCCAAAUUAUGACUGAGCAGGAGUCAGGAUACUGCUGGAGAAACUUUGUGAAUUAUAGCCCGAGUAAUGAAGCCCACUGGCCUAGGUAUCCCCAUCUGUGGGUACGACUGUACGUUCUUGAACUGUACUGCAUCAUACUGGGCCUGCCUCCUUGUCUCAACAUUCUGAGAAGGAAGCAGCCACAGCUGACAUUCUUUACCAUCGCUCUUCAGUCUUGUCAUUACCAGCGACUGCCCCCACACAUUCUCUGGGCCACCGGGUUGAAAAGCGGCAGCGAGACUCCGGGCACCUCAGAGUCCGCCACACCCGAAAGUGAUAAGAAGUACUCAAUCGGGCUGGCCAUCGGAACUAAUUCCGUGGGUUGGGCAGUGAUCACGGAUGAAUACAAAGUGCCGUCCAAGAAGUUCAAGGUCCUGGGGAACACCGAUAGACACAGCAUCAAGAAAAAUCUCAUCGGAGCCCUGCUGUUUGACUCCGGCGAAACCGCAGAAGCGACCCGGCUCAAACGUACCGCGAGGCGACGCUACACCCGGCGGAAGAAUCGCAUCUGCUAUCUGCAAGAGAUCUUUUCGAACGAAAUGGCAAAGGUCGACGACAGCUUCUUCCACCGCCUGGAAGAAUCUUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCAUGAACGGCAUCCUAUCUUUGGAAACAUCGUCGACGAAGUGGCGUACCACGAAAAGUACCCGACCAUCUACCAUCUGCGGAAGAAGUUGGUUGACUCAACUGACAAGGCCGACCUCAGAUUGAUCUACUUGGCCCUCGCCCAUAUGAUCAAAUUCCGCGGACACUUCCUGAUCGAAGGCGAUCUGAACCCUGAUAACUCCGACGUGGAUAAGCUUUUCAUUCAACUGGUGCAGACCUACAACCAACUGUUCGAAGAAAACCCAAUCAAUGCUAGCGGCGUCGAUGCCAAGGCCAUCCUGUCCGCCCGGCUGUCGAAGUCGCGGCGCCUCGAAAACCUGAUCGCACAGCUGCCGGGAGAGAAAAAGAACGGACUUUUCGGCAACUUGAUCGCUCUCUCACUGGGACUCACUCCCAAUUUCAAGUCCAAUUUUGACCUGGCCGAGGACGCGAAGCUGCAACUCUCAAAGGACACCUACGACGACGACUUGGACAAUUUGCUGGCACAAAUUGGCGAUCAGUACGCGGAUCUGUUCCUUGCCGCUAAGAACCUUUCGGACGCAAUCUUGCUGUCCGAUAUCCUGCGCGUGAACACCGAAAUAACCAAAGCGCCGCUUAGCGCCUCGAUGAUUAAGCGGUACGACGAGCAUCACCAGGAUCUCACGCUGCUCAAAGCGCUCGUGAGACAGCAACUGCCUGAAAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGUCCAAGAAUGGGUACGCAGGGUACAUCGAUGGAGGCGCUAGCCAGGAAGAGUUCUAUAAGUUCAUCAAGCCAAUCCUGGAAAAGAUGGACGGAACCGAAGAACUGCUGGUCAAGCUGAACAGGGAGGAUCUGCUCCGGAAACAGAGAACCUUUGACAACGGAUCCAUUCCCCACCAGAUCCAUCUGGGUGAGCUGCACGCCAUCUUGCGGCGCCAGGAGGACUUUUACCCAUUCCUCAAGGACAACCGGGAAAAGAUCGAGAAAAUUCUGACGUUCCGCAUCCCGUAUUACGUGGGCCCACUGGCGCGCGGCAAUUCGCGCUUCGCGUGGAUGACUAGAAAAUCAGAGGAAACCAUCACUCCUUGGAAUUUCGAGGAAGUUGUGGAUAAGGGAGCUUCGGCACAAAGCUUCAUCGAACGAAUGACCAACUUCGACAAGAAUCUCCCAAACGAGAAGGUGCUUCCUAAGCACAGCCUCCUUUACGAAUACUUCACUGUCUACAACGAACUGACUAAAGUGAAAUACGUUACUGAAGGAAUGAGGAAGCCGGCCUUUCUGUCCGGAGAACAGAAGAAAGCAAUUGUCGAUCUGCUGUUCAAGACCAACCGCAAGGUGACCGUCAAGCAGCUUAAAGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGUUUCGACUCAGUGGAAAUCAGCGGGGUGGAGGACAGAUUCAACGCUUCGCUGGGAACCUAUCAUGAUCUCCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUUGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAAGAUAUCGUCCUGACCUUGACCCUUUUCGAGGAUCGCGAGAUGAUCGAGGAGAGGCUUAAGACCUACGCUCAUCUCUUCGACGAUAAGGUCAUGAAACAACUCAAGCGCCGCCGGUACACUGGUUGGGGCCGCCUCUCCCGCAAGCUGAUCAACGGUAUUCGCGAUAAACAGAGCGGUAAAACUAUCCUGGAUUUCCUCAAAUCGGAUGGCUUCGCUAAUCGUAACUUCAUGCAAUUGAUCCACGACGACAGCCUGACCUUUAAGGAGGACAUCCAAAAAGCACAAGUGUCCGGACAGGGAGACUCACUCCAUGAACACAUCGCGAAUCUGGCCGGUUCGCCGGCGAUUAAGAAGGGAAUUCUGCAAACUGUGAAGGUGGUCGACGAGCUGGUGAAGGUCAUGGGACGGCACAAACCGGAGAAUAUCGUGAUUGAAAUGGCCCGAGAAAACCAGACUACCCAGAAGGGCCAGAAAAACUCCCGCGAAAGGAUGAAGCGGAUCGAAGAAGGAAUCAAGGAGCUGGGCAGCCAGAUCCUGAAAGAGCACCCGGUGGAAAACACGCAGCUGCAGAACGAGAAGCUCUACCUGUACUAUUUGCAAAAUGGACGGGACAUGUACGUGGACCAAGAGCUGGACAUCAAUCGGUUGUCUGAUUACGACGUGGACCACAUCGUUCCACAGUCCUUUCUGAAGGAUGACUCGAUCGAUAACAAGGUGUUGACUCGCAGCGACAAGAACAGAGGGAAGUCAGAUAAUGUGCCAUCGGAGGAGGUCGUGAAGAAGAUGAAGAAUUACUGGCGGCAGCUCCUGAAUGCGAAGCUGAUUACCCAGAGAAAGUUUGACAAUCUCACUAAAGCCGAGCGCGGCGGACUCUCAGAGCUGGAUAAGGCUGGAUUCAUCAAACGGCAGCUGGUCGAGACUCGGCAGAUUACCAAGCACGUGGCGCAGAUCUUGGACUCCCGCAUGAACACUAAAUACGACGAGAACGAUAAGCUCAUCCGGGAAGUGAAGGUGAUUACCCUGAAAAGCAAACUUGUGUCGGACUUUCGGAAGGACUUUCAGUUUUACAAAGUGAGAGAAAUCAACAACUACCAUCACGCGCAUGACGCAUACCUCAACGCUGUGGUCGGUACCGCCCUGAUCAAAAAGUACCCUAAACUUGAAUCGGAGUUUGUGUACGGAGACUACAAGGUCUACGACGUGAGGAAGAUGAUAGCCAAGUCCGAACAGGAAAUCGGGAAAGCAACUGCGAAAUACUUCUUUUACUCAAACAUCAUGAACUUUUUCAAGACUGAAAUUACGCUGGCCAAUGGAGAAAUCAGGAAGAGGCCACUGAUCGAAACUAACGGAGAAACGGGCGAAAUCGUGUGGGACAAGGGCAGGGACUUCGCAACUGUUCGCAAAGUGCUCUCUAUGCCGCAAGUCAAUAUUGUGAAGAAAACCGAAGUGCAAACCGGCGGAUUUUCAAAGGAAUCGAUCCUCCCAAAGAGAAAUAGCGACAAGCUCAUUGCACGCAAGAAAGACUGGGACCCGAAGAAGUACGGAGGAUUCGAUUCGCCGACUGUCGCAUACUCCGUCCUCGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGAAAGAGCAAAAAGCUCAAAUCCGUCAAAGAGCUGCUGGGGAUUACCAUCAUGGAACGAUCCUCGUUCGAGAAGAACCCGAUUGAUUUCCUCGAGGCGAAGGGUUACAAGGAGGUGAAGAAGGAUCUGAUCAUCAAACUCCCCAAGUACUCACUGUUCGAACUGGAAAAUGGUCGGAAGCGCAUGCUGGCUUCGGCCGGAGAACUCCAAAAAGGAAAUGAGCUGGCCUUGCCUAGCAAGUACGUCAACUUCCUCUAUCUUGCUUCGCACUACGAAAAACUCAAAGGGUCACCGGAAGAUAACGAACAGAAGCAGCUUUUCGUGGAGCAGCACAAGCAUUAUCUGGAUGAAAUCAUCGAACAAAUCUCCGAGUUUUCAAAGCGCGUGAUCCUCGCCGACGCCAACCUCGACAAAGUCCUGUCGGCCUACAAUAAGCAUAGAGAUAAGCCGAUCAGAGAACAGGCCGAGAACAUUAUCCACUUGUUCACCCUGACUAACCUGGGAGCCCCAGCCGCCUUCAAGUACUUCGAUACUACUAUCGAUCGCAAAAGAUACACGUCCACCAAGGAAGUUCUGGACGCGACCCUGAUCCACCAAAGCAUCACUGGACUCUACGAAACUAGGAUCGAUCUGUCGCAGCUGGGUGGCGAUUCUGGUGGUUCUACUAAUCUGUCAGAUAUUAUUGAAAAGGAGACCGGUAAGCAACUGGUUAUCCAGGAAUCCAUCCUCAUGCUCCCAGAGGAGGUGGAAGAAGUCAUUGGGAACAAGCCGGAAAGCGAUAUACUCGUGCACACCGCCUACGACGAGAGCACCGA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12 BE3之胺基酸序列 MSSETGPVAVDPTLRRRIEPHEFEVFFDPRELRKETCLLYEINWGGRHSIWRHTSQNTNKHVEVNFIEKFTTERYFCPNTRCSITWFLSWSPCGECSRAITEFLSRYPHVTLFIYIARLYHHADPRNRQGLRDLISSGVTIQIMTEQESGYCWRNFVNYSPSNEAHWPRYPHLWVRLYVLELYCIILGLPPCLNILRRKQPQLTFFTIALQSCHYQRLPPHILWATGLKSGSETPGTSESATPESDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLSGGSPKKKRKV
13 編碼UGI之mRNA GGGAGACCCAAGCUGGCUAGCUCCCGCAGUCGGCGUCCAGCGGCUCUGCUUGUUCGUGUGUGUGUCGUUGCAGGCCUUAUUCGGAUCCGCCACCAUGGGACCGAAGAAGAAGAGAAAGGUCGGAGGAGGAAGCACAAACCUGUCGGACAUCAUCGAAAAGGAAACAGGAAAGCAGCUGGUCAUCCAGGAAUCGAUCCUGAUGCUGCCGGAAGAAGUCGAAGAAGUCAUCGGAAACAAGCCGGAAUCGGACAUCCUGGUCCACACAGCAUACGACGAAUCGACAGACGAAAACGUCAUGCUGCUGACAUCGGACGCACCGGAAUACAAGCCGUGGGCACUGGUCAUCCAGGACUCGAACGGAGAAAACAAGAUCAAGAUGCUGUGAUAGUCUAGACAUCACAUUUAAAAGCAUCUCAGCCUACCAUGAGAAUAAGAGAAAGAAAAUGAAGAUCAAUAGCUUAUUCAUCUCUUUUUCUUUUUCGUUGGUGUAAAGCCAACACCCUGUCUAAAAAACAUAAAUUUCUUUAAUCAUUUUGCCUCUUUUCUCUGUGCUUCAAUUAAUAAAAAAUGGAAAGAACCUCGAGUCUAG
14 UGI之開放閱讀框 AUGGGACCGAAGAAGAAGAGAAAGGUCGGAGGAGGAAGCACAAACCUGUCGGACAUCAUCGAAAAGGAAACAGGAAAGCAGCUGGUCAUCCAGGAAUCGAUCCUGAUGCUGCCGGAAGAAGUCGAAGAAGUCAUCGGAAACAAGCCGGAAUCGGACAUCCUGGUCCACACAGCAUACGACGAAUCGACAGACGAAAACGUCAUGCUGCUGACAUCGGACGCACCGGAAUACAAGCCGUGGGCACUGGUCAUCCAGGACUCGAACGGAGAAAACAAGAUCAAGAUGCUGUGA
15 UGI之胺基酸序列 MTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLSGGSKRTADGSEFESPKKKRKVE
16 編碼具有2× UGI之BC22之mRNA GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGAGGCCUCCCCCGCCUCCGGCCCCCGGCACCUGAUGGACCCCCACAUCUUCACCUCCAACUUCAACAACGGCAUCGGCCGGCACAAGACCUACCUGUGCUACGAGGUGGAGCGGCUGGACAACGGCACCUCCGUGAAGAUGGACCAGCACCGGGGCUUCCUGCACAACCAGGCCAAGAACCUGCUGUGCGGCUUCUACGGCCGGCACGCCGAGCUGCGGUUCCUGGACCUGGUGCCCUCCCUGCAGCUGGACCCCGCCCAGAUCUACCGGGUGACCUGGUUCAUCUCCUGGUCCCCCUGCUUCUCCUGGGGCUGCGCCGGCGAGGUGCGGGCCUUCCUGCAGGAGAACACCCACGUGCGGCUGCGGAUCUUCGCCGCCCGGAUCUACGACUACGACCCCCUGUACAAGGAGGCCCUGCAGAUGCUGCGGGACGCCGGCGCCCAGGUGUCCAUCAUGACCUACGACGAGUUCAAGCACUGCUGGGACACCUUCGUGGACCACCAGGGCUGCCCCUUCCAGCCCUGGGACGGCCUGGACGAGCACUCCCAGGCCCUGUCCGGCCGGCUGCGGGCCAUCCUGCAGAACCAGGGCAACUCCGGCUCCGAGACCCCCGGCACCUCCGAGUCCGCCACCCCCGAGUCCGACAAGAAGUACUCCAUCGGCCUGGCCAUCGGCACCAACUCCGUGGGCUGGGCCGUGAUCACCGACGAGUACAAGGUGCCCUCCAAGAAGUUCAAGGUGCUGGGCAACACCGACCGGCACUCCAUCAAGAAGAACCUGAUCGGCGCCCUGCUGUUCGACUCCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCUGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGUACACCCGGCGGAAGAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCUCCAACGAGAUGGCCAAGGUGGACGACUCCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGUCCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAGGUGGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUGGACUCCACCGACAAGGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCCCUGGCCCACAUGAUCAAGUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCCGACAACUCCGACGUGGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACCUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCUCCGGCGUGGACGCCAAGGCCAUCCUGUCCGCCCGGCUGUCCAAGUCCCGGCGGCUGGAGAACCUGAUCGCCCAGCUGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCUGUUCGGCAACCUGAUCGCCCUGUCCCUGGGCCUGACCCCCAACUUCAAGUCCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAGCUGCAGCUGUCCAAGGACACCUACGACGACGACCUGGACAACCUGCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCCGCCAAGAACCUGUCCGACGCCAUCCUGCUGUCCGACAUCCUGCGGGUGAACACCGAGAUCACCAAGGCCCCCCUGUCCGCCUCCAUGAUCAAGCGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACCCUGCUGAAGGCCCUGGUGCGGCAGCAGCUGCCCGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGUCCAAGAACGGCUACGCCGGCUACAUCGACGGCGGCGCCUCCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUGGAGAAGAUGGACGGCACCGAGGAGCUGCUGGUGAAGCUGAACCGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGCGGACCUUCGACAACGGCUCCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGCGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACCGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUGACCUUCCGGAUCCCCUACUACGUGGGCCCCCUGGCCCGGGGCAACUCCCGGUUCGCCUGGAUGACCCGGAAGUCCGAGGAGACCAUCACCCCCUGGAACUUCGAGGAGGUGGUGGACAAGGGCGCCUCCGCCCAGUCCUUCAUCGAGCGGAUGACCAACUUCGACAAGAACCUGCCCAACGAGAAGGUGCUGCCCAAGCACUCCCUGCUGUACGAGUACUUCACCGUGUACAACGAGCUGACCAAGGUGAAGUACGUGACCGAGGGCAUGCGGAAGCCCGCCUUCCUGUCCGGCGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAGACCAACCGGAAGGUGACCGUGAAGCAGCUGAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACUCCGUGGAGAUCUCCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCUCCCUGGGCACCUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACCCUGACCCUGUUCGAGGACCGGGAGAUGAUCGAGGAGCGGCUGAAGACCUACGCCCACCUGUUCGACGACAAGGUGAUGAAGCAGCUGAAGCGGCGGCGGUACACCGGCUGGGGCCGGCUGUCCCGGAAGCUGAUCAACGGCAUCCGGGACAAGCAGUCCGGCAAGACCAUCCUGGACUUCCUGAAGUCCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACUCCCUGACCUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUGUCCGGCCAGGGCGACUCCCUGCACGAGCACAUCGCCAACCUGGCCGGCUCCCCCGCCAUCAAGAAGGGCAUCCUGCAGACCGUGAAGGUGGUGGACGAGCUGGUGAAGGUGAUGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACUCCCGGGAGCGGAUGAAGCGGAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCUCCCAGAUCCUGAAGGAGCACCCCGUGGAGAACACCCAGCUGCAGAACGAGAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAACGGCCGGGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUGUCCGACUACGACGUGGACCACAUCGUGCCCCAGUCCUUCCUGAAGGACGACUCCAUCGACAACAAGGUGCUGACCCGGUCCGACAAGAACCGGGGCAAGUCCGACAACGUGCCCUCCGAGGAGGUGGUGAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAGCUGAUCACCCAGCGGAAGUUCGACAACCUGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCUGUCCGAGCUGGACAAGGCCGGCUUCAUCAAGCGGCAGCUGGUGGAGACCCGGCAGAUCACCAAGCACGUGGCCCAGAUCCUGGACUCCCGGAUGAACACCAAGUACGACGAGAACGACAAGCUGAUCCGGGAGGUGAAGGUGAUCACCCUGAAGUCCAAGCUGGUGUCCGACUUCCGGAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUGCGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCCGUGGUGGGCACCGCCCUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUGGAGUCCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAGGUGUACGACGUGCGGAAGAUGAUCGCCAAGUCCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACCGCCAAGUACUUCUUCUACUCCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACCGAGAUCACCCUGGCCAACGGCGAGAUCCGGAAGCGGCCCCUGAUCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGAUCGUGUGGGACAAGGGCCGGGACUUCGCCACCGUGCGGAAGGUGCUGUCCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAGAAGACCGAGGUGCAGACCGGCGGCUUCUCCAAGGAGUCCAUCCUGCCCAAGCGGAACUCCGACAAGCUGAUCGCCCGGAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGCGGCUUCGACUCCCCCACCGUGGCCUACUCCGUGCUGGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGCAAGUCCAAGAAGCUGAAGUCCGUGAAGGAGCUGCUGGGCAUCACCAUCAUGGAGCGGUCCUCCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAGGCCAAGGGCUACAAGGAGGUGAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUGCCCAAGUACUCCCUGUUCGAGCUGGAGAACGGCCGGAAGCGGAUGCUGGCCUCCGCCGGCGAGCUGCAGAAGGGCAACGAGCUGGCCCUGCCCUCCAAGUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCUCCCACUACGAGAAGCUGAAGGGCUCCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAGCACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCUCCGAGUUCUCCAAGCGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAACCUGGACAAGGUGCUGUCCGCCUACAACAAGCACCGGGACAAGCCCAUCCGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACCCUGACCAACCUGGGCGCCCCCGCCGCCUUCAAGUACUUCGACACCACCAUCGACCGGAAGCGGUACACCUCCACCAAGGAGGUGCUGGACGCCACCCUGAUCCACCAGUCCAUCACCGGCCUGUACGAGACCCGGAUCGACCUGUCCCAGCUGGGCGGCGACUCCGGCGGCUCCGGCGGCUCCGGCGGCUCCACCAACCUGUCCGACAUCAUCGAGAAGGAGACCGGCAAGCAGCUGGUGAUCCAGGAGUCCAUCCUGAUGCUGCCCGAGGAGGUGGAGGAGGUGAUCGGCAACAAGCCCGAGUCCGACAUCCUGGUGCACACCGCCUACGACGAGUCCACCGACGAGAACGUGAUGCUGCUGACCUCCGAC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17 具有2× UGI之BC22之開放閱讀框 AUGGAGGCCUCCCCCGCCUCCGGCCCCCGGCACCUGAUGGACCCCCACAUCUUCACCUCCAACUUCAACAACGGCAUCGGCCGGCACAAGACCUACCUGUGCUACGAGGUGGAGCGGCUGGACAACGGCACCUCCGUGAAGAUGGACCAGCACCGGGGCUUCCUGCACAACCAGGCCAAGAACCUGCUGUGCGGCUUCUACGGCCGGCACGCCGAGCUGCGGUUCCUGGACCUGGUGCCCUCCCUGCAGCUGGACCCCGCCCAGAUCUACCGGGUGACCUGGUUCAUCUCCUGGUCCCCCUGCUUCUCCUGGGGCUGCGCCGGCGAGGUGCGGGCCUUCCUGCAGGAGAACACCCACGUGCGGCUGCGGAUCUUCGCCGCCCGGAUCUACGACUACGACCCCCUGUACAAGGAGGCCCUGCAGAUGCUGCGGGACGCCGGCGCCCAGGUGUCCAUCAUGACCUACGACGAGUUCAAGCACUGCUGGGACACCUUCGUGGACCACCAGGGCUGCCCCUUCCAGCCCUGGGACGGCCUGGACGAGCACUCCCAGGCCCUGUCCGGCCGGCUGCGGGCCAUCCUGCAGAACCAGGGCAACUCCGGCUCCGAGACCCCCGGCACCUCCGAGUCCGCCACCCCCGAGUCCGACAAGAAGUACUCCAUCGGCCUGGCCAUCGGCACCAACUCCGUGGGCUGGGCCGUGAUCACCGACGAGUACAAGGUGCCCUCCAAGAAGUUCAAGGUGCUGGGCAACACCGACCGGCACUCCAUCAAGAAGAACCUGAUCGGCGCCCUGCUGUUCGACUCCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCUGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGUACACCCGGCGGAAGAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCUCCAACGAGAUGGCCAAGGUGGACGACUCCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGUCCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAGGUGGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUGGACUCCACCGACAAGGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCCCUGGCCCACAUGAUCAAGUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCCGACAACUCCGACGUGGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACCUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCUCCGGCGUGGACGCCAAGGCCAUCCUGUCCGCCCGGCUGUCCAAGUCCCGGCGGCUGGAGAACCUGAUCGCCCAGCUGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCUGUUCGGCAACCUGAUCGCCCUGUCCCUGGGCCUGACCCCCAACUUCAAGUCCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAGCUGCAGCUGUCCAAGGACACCUACGACGACGACCUGGACAACCUGCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCCGCCAAGAACCUGUCCGACGCCAUCCUGCUGUCCGACAUCCUGCGGGUGAACACCGAGAUCACCAAGGCCCCCCUGUCCGCCUCCAUGAUCAAGCGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACCCUGCUGAAGGCCCUGGUGCGGCAGCAGCUGCCCGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGUCCAAGAACGGCUACGCCGGCUACAUCGACGGCGGCGCCUCCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUGGAGAAGAUGGACGGCACCGAGGAGCUGCUGGUGAAGCUGAACCGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGCGGACCUUCGACAACGGCUCCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGCGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACCGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUGACCUUCCGGAUCCCCUACUACGUGGGCCCCCUGGCCCGGGGCAACUCCCGGUUCGCCUGGAUGACCCGGAAGUCCGAGGAGACCAUCACCCCCUGGAACUUCGAGGAGGUGGUGGACAAGGGCGCCUCCGCCCAGUCCUUCAUCGAGCGGAUGACCAACUUCGACAAGAACCUGCCCAACGAGAAGGUGCUGCCCAAGCACUCCCUGCUGUACGAGUACUUCACCGUGUACAACGAGCUGACCAAGGUGAAGUACGUGACCGAGGGCAUGCGGAAGCCCGCCUUCCUGUCCGGCGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAGACCAACCGGAAGGUGACCGUGAAGCAGCUGAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACUCCGUGGAGAUCUCCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCUCCCUGGGCACCUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACCCUGACCCUGUUCGAGGACCGGGAGAUGAUCGAGGAGCGGCUGAAGACCUACGCCCACCUGUUCGACGACAAGGUGAUGAAGCAGCUGAAGCGGCGGCGGUACACCGGCUGGGGCCGGCUGUCCCGGAAGCUGAUCAACGGCAUCCGGGACAAGCAGUCCGGCAAGACCAUCCUGGACUUCCUGAAGUCCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACUCCCUGACCUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUGUCCGGCCAGGGCGACUCCCUGCACGAGCACAUCGCCAACCUGGCCGGCUCCCCCGCCAUCAAGAAGGGCAUCCUGCAGACCGUGAAGGUGGUGGACGAGCUGGUGAAGGUGAUGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACUCCCGGGAGCGGAUGAAGCGGAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCUCCCAGAUCCUGAAGGAGCACCCCGUGGAGAACACCCAGCUGCAGAACGAGAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAACGGCCGGGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUGUCCGACUACGACGUGGACCACAUCGUGCCCCAGUCCUUCCUGAAGGACGACUCCAUCGACAACAAGGUGCUGACCCGGUCCGACAAGAACCGGGGCAAGUCCGACAACGUGCCCUCCGAGGAGGUGGUGAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAGCUGAUCACCCAGCGGAAGUUCGACAACCUGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCUGUCCGAGCUGGACAAGGCCGGCUUCAUCAAGCGGCAGCUGGUGGAGACCCGGCAGAUCACCAAGCACGUGGCCCAGAUCCUGGACUCCCGGAUGAACACCAAGUACGACGAGAACGACAAGCUGAUCCGGGAGGUGAAGGUGAUCACCCUGAAGUCCAAGCUGGUGUCCGACUUCCGGAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUGCGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCCGUGGUGGGCACCGCCCUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUGGAGUCCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAGGUGUACGACGUGCGGAAGAUGAUCGCCAAGUCCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACCGCCAAGUACUUCUUCUACUCCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACCGAGAUCACCCUGGCCAACGGCGAGAUCCGGAAGCGGCCCCUGAUCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGAUCGUGUGGGACAAGGGCCGGGACUUCGCCACCGUGCGGAAGGUGCUGUCCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAGAAGACCGAGGUGCAGACCGGCGGCUUCUCCAAGGAGUCCAUCCUGCCCAAGCGGAACUCCGACAAGCUGAUCGCCCGGAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGCGGCUUCGACUCCCCCACCGUGGCCUACUCCGUGCUGGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGCAAGUCCAAGAAGCUGAAGUCCGUGAAGGAGCUGCUGGGCAUCACCAUCAUGGAGCGGUCCUCCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAGGCCAAGGGCUACAAGGAGGUGAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUGCCCAAGUACUCCCUGUUCGAGCUGGAGAACGGCCGGAAGCGGAUGCUGGCCUCCGCCGGCGAGCUGCAGAAGGGCAACGAGCUGGCCCUGCCCUCCAAGUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCUCCCACUACGAGAAGCUGAAGGGCUCCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAGCACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCUCCGAGUUCUCCAAGCGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAACCUGGACAAGGUGCUGUCCGCCUACAACAAGCACCGGGACAAGCCCAUCCGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACCCUGACCAACCUGGGCGCCCCCGCCGCCUUCAAGUACUUCGACACCACCAUCGACCGGAAGCGGUACACCUCCACCAAGGAGGUGCUGGACGCCACCCUGAUCCACCAGUCCAUCACCGGCCUGUACGAGACCCGGAUCGACCUGUCCCAGCUGGGCGGCGACUCCGGCGGCUCCGGCGGCUCCGGCGGCUCCACCAACCUGUCCGACAUCAUCGAGAAGGAGACCGGCAAGCAGCUGGUGAUCCAGGAGUCCAUCCUGAUGCUGCCCGAGGAGGUGGAGGAGGUGAUCGGCAACAAGCCCGAGUCCGACAUCCUGGUGCACACCGCCUACGACGAGUCCACCGACGAGAACGUGAUGCUGCUGACCUCCGACGCCCCCGAGUACAAGCCCUGGGCCCUGGUGAUCCAGGACUCCAA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18 具有2× UGI之BC22之胺基酸序列 MEASPASGPRHLMDPHIFTSNFNNGIGRHKTYLCYEVERLDNGTSVKMDQHRGFLHNQAKNLLCGFYGRHAELRFLDLVPSLQLDPAQIYRVTWFISWSPCFSWGCAGEVRAFLQENTHVRLRIFAARIYDYDPLYKEALQMLRDAGAQVSIMTYDEFKHCWDTFVDHQGCPFQPWDGLDEHSQALSGRLRAILQNQGNSGSETPGTSESATPESDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLSGGSKRTADGSEFEPKKKRKV
19 編碼BE4MAX蛋白之mRNA GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGAAGCGGACCGCCGACGGCUCCGAGUUCGAGUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGUCCUCCGAGACCGGCCCCGUGGCCGUGGACCCCACCCUGCGGCGGCGGAUCGAGCCCCACGAGUUCGAGGUGUUCUUCGACCCCCGGGAGCUGCGGAAGGAGACCUGCCUGCUGUACGAGAUCAACUGGGGCGGCCGGCACUCCAUCUGGCGGCACACCUCCCAGAACACCAACAAGCACGUGGAGGUGAACUUCAUCGAGAAGUUCACCACCGAGCGGUACUUCUGCCCCAACACCCGGUGCUCCAUCACCUGGUUCCUGUCCUGGUCCCCCUGCGGCGAGUGCUCCCGGGCCAUCACCGAGUUCCUGUCCCGGUACCCCCACGUGACCCUGUUCAUCUACAUCGCCCGGCUGUACCACCACGCCGACCCCCGGAACCGGCAGGGCCUGCGGGACCUGAUCUCCUCCGGCGUGACCAUCCAGAUCAUGACCGAGCAGGAGUCCGGCUACUGCUGGCGGAACUUCGUGAACUACUCCCCCUCCAACGAGGCCCACUGGCCCCGGUACCCCCACCUGUGGGUGCGGCUGUACGUGCUGGAGCUGUACUGCAUCAUCCUGGGCCUGCCCCCCUGCCUGAACAUCCUGCGGCGGAAGCAGCCCCAGCUGACCUUCUUCACCAUCGCCCUGCAGUCCUGCCACUACCAGCGGCUGCCCCCCCACAUCCUGUGGGCCACCGGCCUGAAGUCCGGCGGCUCCUCCGGCGGCUCCUCCGGCUCCGAGACCCCCGGCACCUCCGAGUCCGCCACCCCCGAGUCCUCCGGCGGCUCCUCCGGCGGCUCCGACAAGAAGUACUCCAUCGGCCUGGCCAUCGGCACCAACUCCGUGGGCUGGGCCGUGAUCACCGACGAGUACAAGGUGCCCUCCAAGAAGUUCAAGGUGCUGGGCAACACCGACCGGCACUCCAUCAAGAAGAACCUGAUCGGCGCCCUGCUGUUCGACUCCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCUGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGUACACCCGGCGGAAGAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCUCCAACGAGAUGGCCAAGGUGGACGACUCCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGUCCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAGGUGGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUGGACUCCACCGACAAGGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCCCUGGCCCACAUGAUCAAGUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCCGACAACUCCGACGUGGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACCUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCUCCGGCGUGGACGCCAAGGCCAUCCUGUCCGCCCGGCUGUCCAAGUCCCGGCGGCUGGAGAACCUGAUCGCCCAGCUGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCUGUUCGGCAACCUGAUCGCCCUGUCCCUGGGCCUGACCCCCAACUUCAAGUCCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAGCUGCAGCUGUCCAAGGACACCUACGACGACGACCUGGACAACCUGCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCCGCCAAGAACCUGUCCGACGCCAUCCUGCUGUCCGACAUCCUGCGGGUGAACACCGAGAUCACCAAGGCCCCCCUGUCCGCCUCCAUGAUCAAGCGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACCCUGCUGAAGGCCCUGGUGCGGCAGCAGCUGCCCGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGUCCAAGAACGGCUACGCCGGCUACAUCGACGGCGGCGCCUCCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUGGAGAAGAUGGACGGCACCGAGGAGCUGCUGGUGAAGCUGAACCGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGCGGACCUUCGACAACGGCUCCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGCGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACCGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUGACCUUCCGGAUCCCCUACUACGUGGGCCCCCUGGCCCGGGGCAACUCCCGGUUCGCCUGGAUGACCCGGAAGUCCGAGGAGACCAUCACCCCCUGGAACUUCGAGGAGGUGGUGGACAAGGGCGCCUCCGCCCAGUCCUUCAUCGAGCGGAUGACCAACUUCGACAAGAACCUGCCCAACGAGAAGGUGCUGCCCAAGCACUCCCUGCUGUACGAGUACUUCACCGUGUACAACGAGCUGACCAAGGUGAAGUACGUGACCGAGGGCAUGCGGAAGCCCGCCUUCCUGUCCGGCGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAGACCAACCGGAAGGUGACCGUGAAGCAGCUGAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACUCCGUGGAGAUCUCCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCUCCCUGGGCACCUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACCCUGACCCUGUUCGAGGACCGGGAGAUGAUCGAGGAGCGGCUGAAGACCUACGCCCACCUGUUCGACGACAAGGUGAUGAAGCAGCUGAAGCGGCGGCGGUACACCGGCUGGGGCCGGCUGUCCCGGAAGCUGAUCAACGGCAUCCGGGACAAGCAGUCCGGCAAGACCAUCCUGGACUUCCUGAAGUCCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACUCCCUGACCUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUGUCCGGCCAGGGCGACUCCCUGCACGAGCACAUCGCCAACCUGGCCGGCUCCCCCGCCAUCAAGAAGGGCAUCCUGCAGACCGUGAAGGUGGUGGACGAGCUGGUGAAGGUGAUGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACUCCCGGGAGCGGAUGAAGCGGAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCUCCCAGAUCCUGAAGGAGCACCCCGUGGAGAACACCCAGCUGCAGAACGAGAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAACGGCCGGGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUGUCCGACUACGACGUGGACCACAUCGUGCCCCAGUCCUUCCUGAAGGACGACUCCAUCGACAACAAGGUGCUGACCCGGUCCGACAAGAACCGGGGCAAGUCCGACAACGUGCCCUCCGAGGAGGUGGUGAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAGCUGAUCACCCAGCGGAAGUUCGACAACCUGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCUGUCCGAGCUGGACAAGGCCGGCUUCAUCAAGCGGCAGCUGGUGGAGACCCGGCAGAUCACCAAGCACGUGGCCCAGAUCCUGGACUCCCGGAUGAACACCAAGUACGACGAGAACGACAAGCUGAUCCGGGAGGUGAAGGUGAUCACCCUGAAGUCCAAGCUGGUGUCCGACUUCCGGAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUGCGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCCGUGGUGGGCACCGCCCUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUGGAGUCCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAGGUGUACGACGUGCGGAAGAUGAUCGCCAAGUCCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACCGCCAAGUACUUCUUCUACUCCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACCGAGAUCACCCUGGCCAACGGCGAGAUCCGGAAGCGGCCCCUGAUCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGAUCGUGUGGGACAAGGGCCGGGACUUCGCCACCGUGCGGAAGGUGCUGUCCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAGAAGACCGAGGUGCAGACCGGCGGCUUCUCCAAGGAGUCCAUCCUGCCCAAGCGGAACUCCGACAAGCUGAUCGCCCGGAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGCGGCUUCGACUCCCCCACCGUGGCCUACUCCGUGCUGGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGCAAGUCCAAGAAGCUGAAGUCCGUGAAGGAGCUGCUGGGCAUCACCAUCAUGGAGCGGUCCUCCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAGGCCAAGGGCUACAAGGAGGUGAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUGCCCAAGUACUCCCUGUUCGAGCUGGAGAACGGCCGGAAGCGGAUGCUGGCCUCCGCCGGCGAGCUGCAGAAGGGCAACGAGCUGGCCCUGCCCUCCAAGUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCUCCCACUACGAGAAGCUGAAGGGCUCCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAGCACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCUCCGAGUUCUCCAAGCGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAACCUGGACAAGGUGCUGUCCGCCUACAACAAGCACCGGGACAAGCCCAUCCGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACCCUGACCAACCUGGGCGCCCCCGCCGCCUUCAAGUACUUCGACACCACCAUCGACCGGAAGCGGUACACCUCCACCAAGGAGGUGCUGGACGCCACCCUGAUCCACCAGUCCAUCACCGGCCUGUACGAGACCCGGAUCGACCUGUCCCAGCUGGGCGGCGACUCCGGCGGCUCCGGCGGCUCCGGCGGCUCCACCAACCUGUCCGACAUCAUCGAGAAGGAGACCGGCAAGCAGCUGGUGAUCCAGGAGUCCAUCCUGAUGCUGCCCGAGGAGGUGGAGGAGGUGAUCGGCAACAAGCCCGAGUCCGACAUCCUGGUGCACACCGCCUACGACGAGUCCACCGACGAGAACGUGAUGCUGCUGACCUCCGACGCCCCCGAGUACAAGCCCUGGGCCCUGGUGAUCCAGGACUCCAACGGCGAGAACAAGAUCAAGAUGCUGUCCGGCGGCUCCGGCGGCUCCGGCGGCUCCACCAACCUGUCCGACAUCAUCGAGAAGGAGACCGGCAAGCAGCUGGUGAUCCAGGAGUCCAUCCUGAUGCUGCCCGAGGAGGUGGAGGAGGUGAUCGGCAACAAGCCCGAGUCCGACAUCCUGGUGCACACCGCCUACGACGAGUCCACCGACGAGAACGUGAUGCUGCUGACCUCCGACGCCCCCGAGUACAAGCCCUGGGCCCUGGUGAUCCAGGACUCCAACGGCGAGAACAAGAUCAAGAUGCUGUCCGGCGGCUCCAAGCGGACCGCCGACGGCUCCGAGUUCGAGCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGUGAUAGCUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAUGGAAAAAAAAAAAACGGAAAAAAAAAAAAGGUAAAAAAAAAAAAUAUAAAAAAAAAAAACAUAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACGUAAAAAAAAAAAACUCAAAAAAAAAAAAGAUAAAAAAAAAAAACCUAAAAAAAAAAAAUGUAAAAAAAAAAAAGGGAAAAAAAAAAAACGCAAAAAAAAAAAACACAAAAAAAAAAAAUGCAAAAAAAAAAAAUCGAAAAAAAAAAAAUCUAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACCCAAAAAAAAAAAAGACAAAAAAAAAAAAUAGAAAAAAAAAAAAGUUAAAAAAAAAAAACUGAAAAAAAAAAAAUUUAAAAAAAAAAAAUCUAG
20 BE4MAX蛋白之開放閱讀框 AUGAAGCGGACCGCCGACGGCUCCGAGUUCGAGUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGUCCUCCGAGACCGGCCCCGUGGCCGUGGACCCCACCCUGCGGCGGCGGAUCGAGCCCCACGAGUUCGAGGUGUUCUUCGACCCCCGGGAGCUGCGGAAGGAGACCUGCCUGCUGUACGAGAUCAACUGGGGCGGCCGGCACUCCAUCUGGCGGCACACCUCCCAGAACACCAACAAGCACGUGGAGGUGAACUUCAUCGAGAAGUUCACCACCGAGCGGUACUUCUGCCCCAACACCCGGUGCUCCAUCACCUGGUUCCUGUCCUGGUCCCCCUGCGGCGAGUGCUCCCGGGCCAUCACCGAGUUCCUGUCCCGGUACCCCCACGUGACCCUGUUCAUCUACAUCGCCCGGCUGUACCACCACGCCGACCCCCGGAACCGGCAGGGCCUGCGGGACCUGAUCUCCUCCGGCGUGACCAUCCAGAUCAUGACCGAGCAGGAGUCCGGCUACUGCUGGCGGAACUUCGUGAACUACUCCCCCUCCAACGAGGCCCACUGGCCCCGGUACCCCCACCUGUGGGUGCGGCUGUACGUGCUGGAGCUGUACUGCAUCAUCCUGGGCCUGCCCCCCUGCCUGAACAUCCUGCGGCGGAAGCAGCCCCAGCUGACCUUCUUCACCAUCGCCCUGCAGUCCUGCCACUACCAGCGGCUGCCCCCCCACAUCCUGUGGGCCACCGGCCUGAAGUCCGGCGGCUCCUCCGGCGGCUCCUCCGGCUCCGAGACCCCCGGCACCUCCGAGUCCGCCACCCCCGAGUCCUCCGGCGGCUCCUCCGGCGGCUCCGACAAGAAGUACUCCAUCGGCCUGGCCAUCGGCACCAACUCCGUGGGCUGGGCCGUGAUCACCGACGAGUACAAGGUGCCCUCCAAGAAGUUCAAGGUGCUGGGCAACACCGACCGGCACUCCAUCAAGAAGAACCUGAUCGGCGCCCUGCUGUUCGACUCCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCUGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGUACACCCGGCGGAAGAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCUCCAACGAGAUGGCCAAGGUGGACGACUCCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGUCCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAGGUGGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUGGACUCCACCGACAAGGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCCCUGGCCCACAUGAUCAAGUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCCGACAACUCCGACGUGGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACCUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCUCCGGCGUGGACGCCAAGGCCAUCCUGUCCGCCCGGCUGUCCAAGUCCCGGCGGCUGGAGAACCUGAUCGCCCAGCUGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCUGUUCGGCAACCUGAUCGCCCUGUCCCUGGGCCUGACCCCCAACUUCAAGUCCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAGCUGCAGCUGUCCAAGGACACCUACGACGACGACCUGGACAACCUGCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCCGCCAAGAACCUGUCCGACGCCAUCCUGCUGUCCGACAUCCUGCGGGUGAACACCGAGAUCACCAAGGCCCCCCUGUCCGCCUCCAUGAUCAAGCGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACCCUGCUGAAGGCCCUGGUGCGGCAGCAGCUGCCCGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGUCCAAGAACGGCUACGCCGGCUACAUCGACGGCGGCGCCUCCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUGGAGAAGAUGGACGGCACCGAGGAGCUGCUGGUGAAGCUGAACCGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGCGGACCUUCGACAACGGCUCCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGCGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACCGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUGACCUUCCGGAUCCCCUACUACGUGGGCCCCCUGGCCCGGGGCAACUCCCGGUUCGCCUGGAUGACCCGGAAGUCCGAGGAGACCAUCACCCCCUGGAACUUCGAGGAGGUGGUGGACAAGGGCGCCUCCGCCCAGUCCUUCAUCGAGCGGAUGACCAACUUCGACAAGAACCUGCCCAACGAGAAGGUGCUGCCCAAGCACUCCCUGCUGUACGAGUACUUCACCGUGUACAACGAGCUGACCAAGGUGAAGUACGUGACCGAGGGCAUGCGGAAGCCCGCCUUCCUGUCCGGCGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAGACCAACCGGAAGGUGACCGUGAAGCAGCUGAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACUCCGUGGAGAUCUCCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCUCCCUGGGCACCUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACCCUGACCCUGUUCGAGGACCGGGAGAUGAUCGAGGAGCGGCUGAAGACCUACGCCCACCUGUUCGACGACAAGGUGAUGAAGCAGCUGAAGCGGCGGCGGUACACCGGCUGGGGCCGGCUGUCCCGGAAGCUGAUCAACGGCAUCCGGGACAAGCAGUCCGGCAAGACCAUCCUGGACUUCCUGAAGUCCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACUCCCUGACCUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUGUCCGGCCAGGGCGACUCCCUGCACGAGCACAUCGCCAACCUGGCCGGCUCCCCCGCCAUCAAGAAGGGCAUCCUGCAGACCGUGAAGGUGGUGGACGAGCUGGUGAAGGUGAUGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACUCCCGGGAGCGGAUGAAGCGGAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCUCCCAGAUCCUGAAGGAGCACCCCGUGGAGAACACCCAGCUGCAGAACGAGAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAACGGCCGGGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUGUCCGACUACGACGUGGACCACAUCGUGCCCCAGUCCUUCCUGAAGGACGACUCCAUCGACAACAAGGUGCUGACCCGGUCCGACAAGAACCGGGGCAAGUCCGACAACGUGCCCUCCGAGGAGGUGGUGAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAGCUGAUCACCCAGCGGAAGUUCGACAACCUGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCUGUCCGAGCUGGACAAGGCCGGCUUCAUCAAGCGGCAGCUGGUGGAGACCCGGCAGAUCACCAAGCACGUGGCCCAGAUCCUGGACUCCCGGAUGAACACCAAGUACGACGAGAACGACAAGCUGAUCCGGGAGGUGAAGGUGAUCACCCUGAAGUCCAAGCUGGUGUCCGACUUCCGGAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUGCGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCCGUGGUGGGCACCGCCCUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUGGAGUCCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAGGUGUACGACGUGCGGAAGAUGAUCGCCAAGUCCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACCGCCAAGUACUUCUUCUACUCCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACCGAGAUCACCCUGGCCAACGGCGAGAUCCGGAAGCGGCCCCUGAUCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGAUCGUGUGGGACAAGGGCCGGGACUUCGCCACCGUGCGGAAGGUGCUGUCCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAGAAGACCGAGGUGCAGACCGGCGGCUUCUCCAAGGAGUCCAUCCUGCCCAAGCGGAACUCCGACAAGCUGAUCGCCCGGAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGCGGCUUCGACUCCCCCACCGUGGCCUACUCCGUGCUGGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGCAAGUCCAAGAAGCUGAAGUCCGUGAAGGAGCUGCUGGGCAUCACCAUCAUGGAGCGGUCCUCCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAGGCCAAGGGCUACAAGGAGGUGAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUGCCCAAGUACUCCCUGUUCGAGCUGGAGAACGGCCGGAAGCGGAUGCUGGCCUCCGCCGGCGAGCUGCAGAAGGGCAACGAGCUGGCCCUGCCCUCCAAGUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCUCCCACUACGAGAAGCUGAAGGGCUCCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAGCACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCUCCGAGUUCUCCAAGCGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAACCUGGACAAGGUGCUGUCCGCCUACAACAAGCACCGGGACAAGCCCAUCCGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACCCUGACCAACCUGGGCGCCCCCGCCGCCUUCAAGUACUUCGACACCACCAUCGACCGGAAGCGGUACACCUCCACCAAGGAGGUGCUGGACGCCACCCUGAUCCACCAGUCCAUCACCGGCCUGUACGAGACCCGGAUCGACCUGUCCCAGCUGGGCGGCGACUCCGGCGGCUCCGGCGGCUCCGGCGGCUCCACCAACCUGUCCGACAUCAUCGAGAAGGAGACCGGCAAGCAGCUGGUGAUCCAGGAGUCCAUCCUGAUGCUGCCCGAGGAGGUGGAGGAGGUGAUCGGCAACAAGCCCGAGUCCGACAUCCUGGUGCACACCGCCUACGACGAGUCCACCGACGAGAACGUGAUGCUGCUGACCUCCGACGCCCCCGAGUACAAGCCCUGGGCCCUGGUGAUCCAGGACUCCAACGGCGAGAACAAGAUCAAGAUGCUGUCCGGCGGCUCCGGCGGCUCCGGCGGCUCCACCAACCUGUCCGACAUCAUCGAGAAGGAGACCGGCAAGCAGCUGGUGAUCCAGGAGUCCAUCCUGAUGCUGCCCGAGGAGGUGGAGGAGGUGAUCGGCAACAAGCCCGAGUCCGACAUCCUGGUGCACACCGCCUACGACGAGUCCACCGACGAGAACGUGAUGCUGCUGACCUCCGACGCCCCCGAGUACAAGCCCUGGGCCCUGGUGAUCCAGGACUCCAACGGCGAGAACAAGAUCAAGAUGCUGUCCGGCGGCUCCAAGCGGACCGCCGACGGCUCCGAGUUCGAGCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGUGAUAG
21 BE4MAX蛋白之胺基酸序列 MKRTADGSEFESPKKKRKVSSETGPVAVDPTLRRRIEPHEFEVFFDPRELRKETCLLYEINWGGRHSIWRHTSQNTNKHVEVNFIEKFTTERYFCPNTRCSITWFLSWSPCGECSRAITEFLSRYPHVTLFIYIARLYHHADPRNRQGLRDLISSGVTIQIMTEQESGYCWRNFVNYSPSNEAHWPRYPHLWVRLYVLELYCIILGLPPCLNILRRKQPQLTFFTIALQSCHYQRLPPHILWATGLKSGGSSGGSSGSETPGTSESATPESSGGSSGGSDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLSGGSKRTADGSEFEPKKKRKV**
22 智人APOBEC3A去胺酶(A3A)之胺基酸序列，參見BC22 MEASPASGPRHLMDPHIFTSNFNNGIGRHKTYLCYEVERLDNGTSVKMDQHRGFLHNQAKNLLCGFYGRHAELRFLDLVPSLQLDPAQIYRVTWFISWSPCFSWGCAGEVRAFLQENTHVRLRIFAARIYDYDPLYKEALQMLRDAGAQVSIMTYDEFKHCWDTFVDHQGCPFQPWDGLDEHSQALSGRLRAILQNQGN
23    未使用
24 例示性UGI TNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKML
25 例示性XTEN SGSETPGTSESATPES
26 例示性XTEN SGSETPGTSESA
27 例示性XTEN SGSETPGTSESATPEGGSGGS
28 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSEAAAKEAAAK
29 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKGGGGSGGGGS
30 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKEAAAKEAAAK
31 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
32 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSGGGGSEAAAKEAAAK
33 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSEAAAKGGGGSGGGGS
34 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKEAAAKEAAAKGGGGSGGGGS
35 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKEAAAKEAAAKEAAAK
36 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSEAAAKEAAAKGGGGSEAAAK
37 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKEAAAKGGGGSGGGGSGGGGS
38 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKEAAAKGGGGSGGGGSEAAAK
39 例示性連接體SGGS之胺基酸序列 SGGS
40 SV40 NLS之胺基酸序列 PKKKRKV
41 具有作為C末端7胺基酸之1× NLS之Cas9切口酶(D10A)之胺基酸序列 MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDGGGSPKKKRKV
42 使用如表3中所列示之最小尿苷密碼子(無起始或終止密碼子；適於包括在融合蛋白編碼序列中)之Cas9切口酶(D10A) mRNA編碼序列 GACAAGAAGUACAGCAUCGGACUGGCAAUCGGAACAAACAGCGUCGGAUGGGCAGUCAUCACAGACGAAUACAAGGUCCCGAGCAAGAAGUUCAAGGUCCUGGGAAACACAGACAGACACAGCAUCAAGAAGAACCUGAUCGGAGCACUGCUGUUCGACAGCGGAGAAACAGCAGAAGCAACAAGACUGAAGAGAACAGCAAGAAGAAGAUACACAAGAAGAAAGAACAGAAUCUGCUACCUGCAGGAAAUCUUCAGCAACGAAAUGGCAAAGGUCGACGACAGCUUCUUCCACAGACUGGAAGAAAGCUUCCUGGUCGAAGAAGACAAGAAGCACGAAAGACACCCGAUCUUCGGAAACAUCGUCGACGAAGUCGCAUACCACGAAAAGUACCCGACAAUCUACCACCUGAGAAAGAAGCUGGUCGACAGCACAGACAAGGCAGACCUGAGACUGAUCUACCUGGCACUGGCACACAUGAUCAAGUUCAGAGGACACUUCCUGAUCGAAGGAGACCUGAACCCGGACAACAGCGACGUCGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUCCAGACAUACAACCAGCUGUUCGAAGAAAACCCGAUCAACGCAAGCGGAGUCGACGCAAAGGCAAUCCUGAGCGCAAGACUGAGCAAGAGCAGAAGACUGGAAAACCUGAUCGCACAGCUGCCGGGAGAAAAGAAGAACGGACUGUUCGGAAACCUGAUCGCACUGAGCCUGGGACUGACACCGAACUUCAAGAGCAACUUCGACCUGGCAGAAGACGCAAAGCUGCAGCUGAGCAAGGACACAUACGACGACGACCUGGACAACCUGCUGGCACAGAUCGGAGACCAGUACGCAGACCUGUUCCUGGCAGCAAAGAACCUGAGCGACGCAAUCCUGCUGAGCGACAUCCUGAGAGUCAACACAGAAAUCACAAAGGCACCGCUGAGCGCAAGCAUGAUCAAGAGAUACGACGAACACCACCAGGACCUGACACUGCUGAAGGCACUGGUCAGACAGCAGCUGCCGGAAAAGUACAAGGAAAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAACGGAUACGCAGGAUACAUCGACGGAGGAGCAAGCCAGGAAGAAUUCUACAAGUUCAUCAAGCCGAUCCUGGAAAAGAUGGACGGAACAGAAGAACUGCUGGUCAAGCUGAACAGAGAAGACCUGCUGAGAAAGCAGAGAACAUUCGACAACGGAAGCAUCCCGCACCAGAUCCACCUGGGAGAACUGCACGCAAUCCUGAGAAGACAGGAAGACUUCUACCCGUUCCUGAAGGACAACAGAGAAAAGAUCGAAAAGAUCCUGACAUUCAGAAUCCCGUACUACGUCGGACCGCUGGCAAGAGGAAACAGCAGAUUCGCAUGGAUGACAAGAAAGAGCGAAGAAACAAUCACACCGUGGAACUUCGAAGAAGUCGUCGACAAGGGAGCAAGCGCACAGAGCUUCAUCGAAAGAAUGACAAACUUCGACAAGAACCUGCCGAACGAAAAGGUCCUGCCGAAGCACAGCCUGCUGUACGAAUACUUCACAGUCUACAACGAACUGACAAAGGUCAAGUACGUCACAGAAGGAAUGAGAAAGCCGGCAUUCCUGAGCGGAGAACAGAAGAAGGCAAUCGUCGACCUGCUGUUCAAGACAAACAGAAAGGUCACAGUCAAGCAGCUGAAGGAAGACUACUUCAAGAAGAUCGAAUGCUUCGACAGCGUCGAAAUCAGCGGAGUCGAAGACAGAUUCAACGCAAGCCUGGGAACAUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAAGAAAACGAAGACAUCCUGGAAGACAUCGUCCUGACACUGACACUGUUCGAAGACAGAGAAAUGAUCGAAGAAAGACUGAAGACAUACGCACACCUGUUCGACGACAAGGUCAUGAAGCAGCUGAAGAGAAGAAGAUACACAGGAUGGGGAAGACUGAGCAGAAAGCUGAUCAACGGAAUCAGAGACAAGCAGAGCGGAAAGACAAUCCUGGACUUCCUGAAGAGCGACGGAUUCGCAAACAGAAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACAGCCUGACAUUCAAGGAAGACAUCCAGAAGGCACAGGUCAGCGGACAGGGAGACAGCCUGCACGAACACAUCGCAAACCUGGCAGGAAGCCCGGCAAUCAAGAAGGGAAUCCUGCAGACAGUCAAGGUCGUCGACGAACUGGUCAAGGUCAUGGGAAGACACAAGCCGGAAAACAUCGUCAUCGAAAUGGCAAGAGAAAACCAGACAACACAGAAGGGACAGAAGAACAGCAGAGAAAGAAUGAAGAGAAUCGAAGAAGGAAUCAAGGAACUGGGAAGCCAGAUCCUGAAGGAACACCCGGUCGAAAACACACAGCUGCAGAACGAAAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAACGGAAGAGACAUGUACGUCGACCAGGAACUGGACAUCAACAGACUGAGCGACUACGACGUCGACCACAUCGUCCCGCAGAGCUUCCUGAAGGACGACAGCAUCGACAACAAGGUCCUGACAAGAAGCGACAAGAACAGAGGAAAGAGCGACAACGUCCCGAGCGAAGAAGUCGUCAAGAAGAUGAAGAACUACUGGAGACAGCUGCUGAACGCAAAGCUGAUCACACAGAGAAAGUUCGACAACCUGACAAAGGCAGAGAGAGGAGGACUGAGCGAACUGGACAAGGCAGGAUUCAUCAAGAGACAGCUGGUCGAAACAAGACAGAUCACAAAGCACGUCGCACAGAUCCUGGACAGCAGAAUGAACACAAAGUACGACGAAAACGACAAGCUGAUCAGAGAAGUCAAGGUCAUCACACUGAAGAGCAAGCUGGUCAGCGACUUCAGAAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUCAGAGAAAUCAACAACUACCACCACGCACACGACGCAUACCUGAACGCAGUCGUCGGAACAGCACUGAUCAAGAAGUACCCGAAGCUGGAAAGCGAAUUCGUCUACGGAGACUACAAGGUCUACGACGUCAGAAAGAUGAUCGCAAAGAGCGAACAGGAAAUCGGAAAGGCAACAGCAAAGUACUUCUUCUACAGCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACAGAAAUCACACUGGCAAACGGAGAAAUCAGAAAGAGACCGCUGAUCGAAACAAACGGAGAAACAGGAGAAAUCGUCUGGGACAAGGGAAGAGACUUCGCAACAGUCAGAAAGGUCCUGAGCAUGCCGCAGGUCAACAUCGUCAAGAAGACAGAAGUCCAGACAGGAGGAUUCAGCAAGGAAAGCAUCCUGCCGAAGAGAAACAGCGACAAGCUGAUCGCAAGAAAGAAGGACUGGGACCCGAAGAAGUACGGAGGAUUCGACAGCCCGACAGUCGCAUACAGCGUCCUGGUCGUCGCAAAGGUCGAAAAGGGAAAGAGCAAGAAGCUGAAGAGCGUCAAGGAACUGCUGGGAAUCACAAUCAUGGAAAGAAGCAGCUUCGAAAAGAACCCGAUCGACUUCCUGGAAGCAAAGGGAUACAAGGAAGUCAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUGCCGAAGUACAGCCUGUUCGAACUGGAAAACGGAAGAAAGAGAAUGCUGGCAAGCGCAGGAGAACUGCAGAAGGGAAACGAACUGGCACUGCCGAGCAAGUACGUCAACUUCCUGUACCUGGCAAGCCACUACGAAAAGCUGAAGGGAAGCCCGGAAGACAACGAACAGAAGCAGCUGUUCGUCGAACAGCACAAGCACUACCUGGACGAAAUCAUCGAACAGAUCAGCGAAUUCAGCAAGAGAGUCAUCCUGGCAGACGCAAACCUGGACAAGGUCCUGAGCGCAUACAACAAGCACAGAGACAAGCCGAUCAGAGAACAGGCAGAAAACAUCAUCCACCUGUUCACACUGACAAACCUGGGAGCACCGGCAGCAUUCAAGUACUUCGACACAACAAUCGACAGAAAGAGAUACACAAGCACAAAGGAAGUCCUGGACGCAACACUGAUCCACCAGAGCAUCACAGGACUGUACGAAACAAGAAUCGACCUGAGCCAGCUGGGAGGAGACGGAGGAGGAAGCCCGAAGAAGAAGAGAAAGGUC
43 Cas9切口酶(不含NLS)之胺基酸序列 MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD
44 使用如表3中所列示之最小尿苷密碼子(無起始或終止密碼子；適於包括在融合蛋白編碼序列中)，編碼SEQ ID NO: 43之Cas9切口酶編碼序列 GACAAGAAGUACAGCAUCGGACUGGCAAUCGGAACAAACAGCGUCGGAUGGGCAGUCAUCACAGACGAAUACAAGGUCCCGAGCAAGAAGUUCAAGGUCCUGGGAAACACAGACAGACACAGCAUCAAGAAGAACCUGAUCGGAGCACUGCUGUUCGACAGCGGAGAAACAGCAGAAGCAACAAGACUGAAGAGAACAGCAAGAAGAAGAUACACAAGAAGAAAGAACAGAAUCUGCUACCUGCAGGAAAUCUUCAGCAACGAAAUGGCAAAGGUCGACGACAGCUUCUUCCACAGACUGGAAGAAAGCUUCCUGGUCGAAGAAGACAAGAAGCACGAAAGACACCCGAUCUUCGGAAACAUCGUCGACGAAGUCGCAUACCACGAAAAGUACCCGACAAUCUACCACCUGAGAAAGAAGCUGGUCGACAGCACAGACAAGGCAGACCUGAGACUGAUCUACCUGGCACUGGCACACAUGAUCAAGUUCAGAGGACACUUCCUGAUCGAAGGAGACCUGAACCCGGACAACAGCGACGUCGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUCCAGACAUACAACCAGCUGUUCGAAGAAAACCCGAUCAACGCAAGCGGAGUCGACGCAAAGGCAAUCCUGAGCGCAAGACUGAGCAAGAGCAGAAGACUGGAAAACCUGAUCGCACAGCUGCCGGGAGAAAAGAAGAACGGACUGUUCGGAAACCUGAUCGCACUGAGCCUGGGACUGACACCGAACUUCAAGAGCAACUUCGACCUGGCAGAAGACGCAAAGCUGCAGCUGAGCAAGGACACAUACGACGACGACCUGGACAACCUGCUGGCACAGAUCGGAGACCAGUACGCAGACCUGUUCCUGGCAGCAAAGAACCUGAGCGACGCAAUCCUGCUGAGCGACAUCCUGAGAGUCAACACAGAAAUCACAAAGGCACCGCUGAGCGCAAGCAUGAUCAAGAGAUACGACGAACACCACCAGGACCUGACACUGCUGAAGGCACUGGUCAGACAGCAGCUGCCGGAAAAGUACAAGGAAAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAACGGAUACGCAGGAUACAUCGACGGAGGAGCAAGCCAGGAAGAAUUCUACAAGUUCAUCAAGCCGAUCCUGGAAAAGAUGGACGGAACAGAAGAACUGCUGGUCAAGCUGAACAGAGAAGACCUGCUGAGAAAGCAGAGAACAUUCGACAACGGAAGCAUCCCGCACCAGAUCCACCUGGGAGAACUGCACGCAAUCCUGAGAAGACAGGAAGACUUCUACCCGUUCCUGAAGGACAACAGAGAAAAGAUCGAAAAGAUCCUGACAUUCAGAAUCCCGUACUACGUCGGACCGCUGGCAAGAGGAAACAGCAGAUUCGCAUGGAUGACAAGAAAGAGCGAAGAAACAAUCACACCGUGGAACUUCGAAGAAGUCGUCGACAAGGGAGCAAGCGCACAGAGCUUCAUCGAAAGAAUGACAAACUUCGACAAGAACCUGCCGAACGAAAAGGUCCUGCCGAAGCACAGCCUGCUGUACGAAUACUUCACAGUCUACAACGAACUGACAAAGGUCAAGUACGUCACAGAAGGAAUGAGAAAGCCGGCAUUCCUGAGCGGAGAACAGAAGAAGGCAAUCGUCGACCUGCUGUUCAAGACAAACAGAAAGGUCACAGUCAAGCAGCUGAAGGAAGACUACUUCAAGAAGAUCGAAUGCUUCGACAGCGUCGAAAUCAGCGGAGUCGAAGACAGAUUCAACGCAAGCCUGGGAACAUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAAGAAAACGAAGACAUCCUGGAAGACAUCGUCCUGACACUGACACUGUUCGAAGACAGAGAAAUGAUCGAAGAAAGACUGAAGACAUACGCACACCUGUUCGACGACAAGGUCAUGAAGCAGCUGAAGAGAAGAAGAUACACAGGAUGGGGAAGACUGAGCAGAAAGCUGAUCAACGGAAUCAGAGACAAGCAGAGCGGAAAGACAAUCCUGGACUUCCUGAAGAGCGACGGAUUCGCAAACAGAAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACAGCCUGACAUUCAAGGAAGACAUCCAGAAGGCACAGGUCAGCGGACAGGGAGACAGCCUGCACGAACACAUCGCAAACCUGGCAGGAAGCCCGGCAAUCAAGAAGGGAAUCCUGCAGACAGUCAAGGUCGUCGACGAACUGGUCAAGGUCAUGGGAAGACACAAGCCGGAAAACAUCGUCAUCGAAAUGGCAAGAGAAAACCAGACAACACAGAAGGGACAGAAGAACAGCAGAGAAAGAAUGAAGAGAAUCGAAGAAGGAAUCAAGGAACUGGGAAGCCAGAUCCUGAAGGAACACCCGGUCGAAAACACACAGCUGCAGAACGAAAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAACGGAAGAGACAUGUACGUCGACCAGGAACUGGACAUCAACAGACUGAGCGACUACGACGUCGACCACAUCGUCCCGCAGAGCUUCCUGAAGGACGACAGCAUCGACAACAAGGUCCUGACAAGAAGCGACAAGAACAGAGGAAAGAGCGACAACGUCCCGAGCGAAGAAGUCGUCAAGAAGAUGAAGAACUACUGGAGACAGCUGCUGAACGCAAAGCUGAUCACACAGAGAAAGUUCGACAACCUGACAAAGGCAGAGAGAGGAGGACUGAGCGAACUGGACAAGGCAGGAUUCAUCAAGAGACAGCUGGUCGAAACAAGACAGAUCACAAAGCACGUCGCACAGAUCCUGGACAGCAGAAUGAACACAAAGUACGACGAAAACGACAAGCUGAUCAGAGAAGUCAAGGUCAUCACACUGAAGAGCAAGCUGGUCAGCGACUUCAGAAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUCAGAGAAAUCAACAACUACCACCACGCACACGACGCAUACCUGAACGCAGUCGUCGGAACAGCACUGAUCAAGAAGUACCCGAAGCUGGAAAGCGAAUUCGUCUACGGAGACUACAAGGUCUACGACGUCAGAAAGAUGAUCGCAAAGAGCGAACAGGAAAUCGGAAAGGCAACAGCAAAGUACUUCUUCUACAGCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACAGAAAUCACACUGGCAAACGGAGAAAUCAGAAAGAGACCGCUGAUCGAAACAAACGGAGAAACAGGAGAAAUCGUCUGGGACAAGGGAAGAGACUUCGCAACAGUCAGAAAGGUCCUGAGCAUGCCGCAGGUCAACAUCGUCAAGAAGACAGAAGUCCAGACAGGAGGAUUCAGCAAGGAAAGCAUCCUGCCGAAGAGAAACAGCGACAAGCUGAUCGCAAGAAAGAAGGACUGGGACCCGAAGAAGUACGGAGGAUUCGACAGCCCGACAGUCGCAUACAGCGUCCUGGUCGUCGCAAAGGUCGAAAAGGGAAAGAGCAAGAAGCUGAAGAGCGUCAAGGAACUGCUGGGAAUCACAAUCAUGGAAAGAAGCAGCUUCGAAAAGAACCCGAUCGACUUCCUGGAAGCAAAGGGAUACAAGGAAGUCAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUGCCGAAGUACAGCCUGUUCGAACUGGAAAACGGAAGAAAGAGAAUGCUGGCAAGCGCAGGAGAACUGCAGAAGGGAAACGAACUGGCACUGCCGAGCAAGUACGUCAACUUCCUGUACCUGGCAAGCCACUACGAAAAGCUGAAGGGAAGCCCGGAAGACAACGAACAGAAGCAGCUGUUCGUCGAACAGCACAAGCACUACCUGGACGAAAUCAUCGAACAGAUCAGCGAAUUCAGCAAGAGAGUCAUCCUGGCAGACGCAAACCUGGACAAGGUCCUGAGCGCAUACAACAAGCACAGAGACAAGCCGAUCAGAGAACAGGCAGAAAACAUCAUCCACCUGUUCACACUGACAAACCUGGGAGCACCGGCAGCAUUCAAGUACUUCGACACAACAAUCGACAGAAAGAGAUACACAAGCACAAAGGAAGUCCUGGACGCAACACUGAUCCACCAGAGCAUCACAGGACUGUACGAAACAAGAAUCGACCUGAGCCAGCUGGGAGGAGAC
45 具有兩個核定位信號作為C末端胺基酸之Cas9切口酶之胺基酸序列 DKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDGSGSPKKKRKVDGSPKKKRKVDSG
46 使用如表3中所列示之最小尿苷密碼子(無起始或終止密碼子；適於包括在融合蛋白編碼序列中)，編碼SEQ ID NO: 45之Cas9切口酶編碼序列 GACAAGAAGUACAGCAUCGGACUGGCAAUCGGAACAAACAGCGUCGGAUGGGCAGUCAUCACAGACGAAUACAAGGUCCCGAGCAAGAAGUUCAAGGUCCUGGGAAACACAGACAGACACAGCAUCAAGAAGAACCUGAUCGGAGCACUGCUGUUCGACAGCGGAGAAACAGCAGAAGCAACAAGACUGAAGAGAACAGCAAGAAGAAGAUACACAAGAAGAAAGAACAGAAUCUGCUACCUGCAGGAAAUCUUCAGCAACGAAAUGGCAAAGGUCGACGACAGCUUCUUCCACAGACUGGAAGAAAGCUUCCUGGUCGAAGAAGACAAGAAGCACGAAAGACACCCGAUCUUCGGAAACAUCGUCGACGAAGUCGCAUACCACGAAAAGUACCCGACAAUCUACCACCUGAGAAAGAAGCUGGUCGACAGCACAGACAAGGCAGACCUGAGACUGAUCUACCUGGCACUGGCACACAUGAUCAAGUUCAGAGGACACUUCCUGAUCGAAGGAGACCUGAACCCGGACAACAGCGACGUCGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUCCAGACAUACAACCAGCUGUUCGAAGAAAACCCGAUCAACGCAAGCGGAGUCGACGCAAAGGCAAUCCUGAGCGCAAGACUGAGCAAGAGCAGAAGACUGGAAAACCUGAUCGCACAGCUGCCGGGAGAAAAGAAGAACGGACUGUUCGGAAACCUGAUCGCACUGAGCCUGGGACUGACACCGAACUUCAAGAGCAACUUCGACCUGGCAGAAGACGCAAAGCUGCAGCUGAGCAAGGACACAUACGACGACGACCUGGACAACCUGCUGGCACAGAUCGGAGACCAGUACGCAGACCUGUUCCUGGCAGCAAAGAACCUGAGCGACGCAAUCCUGCUGAGCGACAUCCUGAGAGUCAACACAGAAAUCACAAAGGCACCGCUGAGCGCAAGCAUGAUCAAGAGAUACGACGAACACCACCAGGACCUGACACUGCUGAAGGCACUGGUCAGACAGCAGCUGCCGGAAAAGUACAAGGAAAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAACGGAUACGCAGGAUACAUCGACGGAGGAGCAAGCCAGGAAGAAUUCUACAAGUUCAUCAAGCCGAUCCUGGAAAAGAUGGACGGAACAGAAGAACUGCUGGUCAAGCUGAACAGAGAAGACCUGCUGAGAAAGCAGAGAACAUUCGACAACGGAAGCAUCCCGCACCAGAUCCACCUGGGAGAACUGCACGCAAUCCUGAGAAGACAGGAAGACUUCUACCCGUUCCUGAAGGACAACAGAGAAAAGAUCGAAAAGAUCCUGACAUUCAGAAUCCCGUACUACGUCGGACCGCUGGCAAGAGGAAACAGCAGAUUCGCAUGGAUGACAAGAAAGAGCGAAGAAACAAUCACACCGUGGAACUUCGAAGAAGUCGUCGACAAGGGAGCAAGCGCACAGAGCUUCAUCGAAAGAAUGACAAACUUCGACAAGAACCUGCCGAACGAAAAGGUCCUGCCGAAGCACAGCCUGCUGUACGAAUACUUCACAGUCUACAACGAACUGACAAAGGUCAAGUACGUCACAGAAGGAAUGAGAAAGCCGGCAUUCCUGAGCGGAGAACAGAAGAAGGCAAUCGUCGACCUGCUGUUCAAGACAAACAGAAAGGUCACAGUCAAGCAGCUGAAGGAAGACUACUUCAAGAAGAUCGAAUGCUUCGACAGCGUCGAAAUCAGCGGAGUCGAAGACAGAUUCAACGCAAGCCUGGGAACAUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAAGAAAACGAAGACAUCCUGGAAGACAUCGUCCUGACACUGACACUGUUCGAAGACAGAGAAAUGAUCGAAGAAAGACUGAAGACAUACGCACACCUGUUCGACGACAAGGUCAUGAAGCAGCUGAAGAGAAGAAGAUACACAGGAUGGGGAAGACUGAGCAGAAAGCUGAUCAACGGAAUCAGAGACAAGCAGAGCGGAAAGACAAUCCUGGACUUCCUGAAGAGCGACGGAUUCGCAAACAGAAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACAGCCUGACAUUCAAGGAAGACAUCCAGAAGGCACAGGUCAGCGGACAGGGAGACAGCCUGCACGAACACAUCGCAAACCUGGCAGGAAGCCCGGCAAUCAAGAAGGGAAUCCUGCAGACAGUCAAGGUCGUCGACGAACUGGUCAAGGUCAUGGGAAGACACAAGCCGGAAAACAUCGUCAUCGAAAUGGCAAGAGAAAACCAGACAACACAGAAGGGACAGAAGAACAGCAGAGAAAGAAUGAAGAGAAUCGAAGAAGGAAUCAAGGAACUGGGAAGCCAGAUCCUGAAGGAACACCCGGUCGAAAACACACAGCUGCAGAACGAAAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAACGGAAGAGACAUGUACGUCGACCAGGAACUGGACAUCAACAGACUGAGCGACUACGACGUCGACCACAUCGUCCCGCAGAGCUUCCUGAAGGACGACAGCAUCGACAACAAGGUCCUGACAAGAAGCGACAAGAACAGAGGAAAGAGCGACAACGUCCCGAGCGAAGAAGUCGUCAAGAAGAUGAAGAACUACUGGAGACAGCUGCUGAACGCAAAGCUGAUCACACAGAGAAAGUUCGACAACCUGACAAAGGCAGAGAGAGGAGGACUGAGCGAACUGGACAAGGCAGGAUUCAUCAAGAGACAGCUGGUCGAAACAAGACAGAUCACAAAGCACGUCGCACAGAUCCUGGACAGCAGAAUGAACACAAAGUACGACGAAAACGACAAGCUGAUCAGAGAAGUCAAGGUCAUCACACUGAAGAGCAAGCUGGUCAGCGACUUCAGAAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUCAGAGAAAUCAACAACUACCACCACGCACACGACGCAUACCUGAACGCAGUCGUCGGAACAGCACUGAUCAAGAAGUACCCGAAGCUGGAAAGCGAAUUCGUCUACGGAGACUACAAGGUCUACGACGUCAGAAAGAUGAUCGCAAAGAGCGAACAGGAAAUCGGAAAGGCAACAGCAAAGUACUUCUUCUACAGCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACAGAAAUCACACUGGCAAACGGAGAAAUCAGAAAGAGACCGCUGAUCGAAACAAACGGAGAAACAGGAGAAAUCGUCUGGGACAAGGGAAGAGACUUCGCAACAGUCAGAAAGGUCCUGAGCAUGCCGCAGGUCAACAUCGUCAAGAAGACAGAAGUCCAGACAGGAGGAUUCAGCAAGGAAAGCAUCCUGCCGAAGAGAAACAGCGACAAGCUGAUCGCAAGAAAGAAGGACUGGGACCCGAAGAAGUACGGAGGAUUCGACAGCCCGACAGUCGCAUACAGCGUCCUGGUCGUCGCAAAGGUCGAAAAGGGAAAGAGCAAGAAGCUGAAGAGCGUCAAGGAACUGCUGGGAAUCACAAUCAUGGAAAGAAGCAGCUUCGAAAAGAACCCGAUCGACUUCCUGGAAGCAAAGGGAUACAAGGAAGUCAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUGCCGAAGUACAGCCUGUUCGAACUGGAAAACGGAAGAAAGAGAAUGCUGGCAAGCGCAGGAGAACUGCAGAAGGGAAACGAACUGGCACUGCCGAGCAAGUACGUCAACUUCCUGUACCUGGCAAGCCACUACGAAAAGCUGAAGGGAAGCCCGGAAGACAACGAACAGAAGCAGCUGUUCGUCGAACAGCACAAGCACUACCUGGACGAAAUCAUCGAACAGAUCAGCGAAUUCAGCAAGAGAGUCAUCCUGGCAGACGCAAACCUGGACAAGGUCCUGAGCGCAUACAACAAGCACAGAGACAAGCCGAUCAGAGAACAGGCAGAAAACAUCAUCCACCUGUUCACACUGACAAACCUGGGAGCACCGGCAGCAUUCAAGUACUUCGACACAACAAUCGACAGAAAGAGAUACACAAGCACAAAGGAAGUCCUGGACGCAACACUGAUCCACCAGAGCAUCACAGGACUGUACGAAACAAGAAUCGACCUGAGCCAGCUGGGAGGAGACGGAAGCGGAAGCCCGAAGAAGAAGAGAAAGGUCGACGGAAGCCCGAAGAAGAAGAGAAAGGUCGACAGCGGA
47 使用表4之低A密碼子之Cas9切口酶ORF，具有起始及終止密碼子 ATGGACAAGAAGTACTCCATCGGCCTGGCCATCGGCACCAACTCCGTGGGCTGGGCCGTGATCACCGACGAGTACAAGGTGCCCTCCAAGAAGTTCAAGGTGCTGGGCAACACCGACCGGCACTCCATCAAGAAGAACCTGATCGGCGCCCTGCTGTTCGACTCCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCTGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGTACACCCGGCGGAAGAACCGGATCTGCTACCTGCAGGAGATCTTCTCCAACGAGATGGCCAAGGTGGACGACTCCTTCTTCCACCGGCTGGAGGAGTCCTTCCTGGTGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCATCTTCGGCAACATCGTGGACGAGGTGGCCTACCACGAGAAGTACCCCACCATCTACCACCTGCGGAAGAAGCTGGTGGACTCCACCGACAAGGCCGACCTGCGGCTGATCTACCTGGCCCTGGCCCACATGATCAAGTTCCGGGGCCACTTCCTGATCGAGGGCGACCTGAACCCCGACAACTCCGACGTGGACAAGCTGTTCATCCAGCTGGTGCAGACCTACAACCAGCTGTTCGAGGAGAACCCCATCAACGCCTCCGGCGTGGACGCCAAGGCCATCCTGTCCGCCCGGCTGTCCAAGTCCCGGCGGCTGGAGAACCTGATCGCCCAGCTGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCTGTTCGGCAACCTGATCGCCCTGTCCCTGGGCCTGACCCCCAACTTCAAGTCCAACTTCGACCTGGCCGAGGACGCCAAGCTGCAGCTGTCCAAGGACACCTACGACGACGACCTGGACAACCTGCTGGCCCAGATCGGCGACCAGTACGCCGACCTGTTCCTGGCCGCCAAGAACCTGTCCGACGCCATCCTGCTGTCCGACATCCTGCGGGTGAACACCGAGATCACCAAGGCCCCCCTGTCCGCCTCCATGATCAAGCGGTACGACGAGCACCACCAGGACCTGACCCTGCTGAAGGCCCTGGTGCGGCAGCAGCTGCCCGAGAAGTACAAGGAGATCTTCTTCGACCAGTCCAAGAACGGCTACGCCGGCTACATCGACGGCGGCGCCTCCCAGGAGGAGTTCTACAAGTTCATCAAGCCCATCCTGGAGAAGATGGACGGCACCGAGGAGCTGCTGGTGAAGCTGAACCGGGAGGACCTGCTGCGGAAGCAGCGGACCTTCGACAACGGCTCCATCCCCCACCAGATCCACCTGGGCGAGCTGCACGCCATCCTGCGGCGGCAGGAGGACTTCTACCCCTTCCTGAAGGACAACCGGGAGAAGATCGAGAAGATCCTGACCTTCCGGATCCCCTACTACGTGGGCCCCCTGGCCCGGGGCAACTCCCGGTTCGCCTGGATGACCCGGAAGTCCGAGGAGACCATCACCCCCTGGAACTTCGAGGAGGTGGTGGACAAGGGCGCCTCCGCCCAGTCCTTCATCGAGCGGATGACCAACTTCGACAAGAACCTGCCCAACGAGAAGGTGCTGCCCAAGCACTCCCTGCTGTACGAGTACTTCACCGTGTACAACGAGCTGACCAAGGTGAAGTACGTGACCGAGGGCATGCGGAAGCCCGCCTTCCTGTCCGGCGAGCAGAAGAAGGCCATCGTGGACCTGCTGTTCAAGACCAACCGGAAGGTGACCGTGAAGCAGCTGAAGGAGGACTACTTCAAGAAGATCGAGTGCTTCGACTCCGTGGAGATCTCCGGCGTGGAGGACCGGTTCAACGCCTCCCTGGGCACCTACCACGACCTGCTGAAGATCATCAAGGACAAGGACTTCCTGGACAACGAGGAGAACGAGGACATCCTGGAGGACATCGTGCTGACCCTGACCCTGTTCGAGGACCGGGAGATGATCGAGGAGCGGCTGAAGACCTACGCCCACCTGTTCGACGACAAGGTGATGAAGCAGCTGAAGCGGCGGCGGTACACCGGCTGGGGCCGGCTGTCCCGGAAGCTGATCAACGGCATCCGGGACAAGCAGTCCGGCAAGACCATCCTGGACTTCCTGAAGTCCGACGGCTTCGCCAACCGGAACTTCATGCAGCTGATCCACGACGACTCCCTGACCTTCAAGGAGGACATCCAGAAGGCCCAGGTGTCCGGCCAGGGCGACTCCCTGCACGAGCACATCGCCAACCTGGCCGGCTCCCCCGCCATCAAGAAGGGCATCCTGCAGACCGTGAAGGTGGTGGACGAGCTGGTGAAGGTGATGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACATCGTGATCGAGATGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACTCCCGGGAGCGGATGAAGCGGATCGAGGAGGGCATCAAGGAGCTGGGCTCCCAGATCCTGAAGGAGCACCCCGTGGAGAACACCCAGCTGCAGAACGAGAAGCTGTACCTGTACTACCTGCAGAACGGCCGGGACATGTACGTGGACCAGGAGCTGGACATCAACCGGCTGTCCGACTACGACGTGGACCACATCGTGCCCCAGTCCTTCCTGAAGGACGACTCCATCGACAACAAGGTGCTGACCCGGTCCGACAAGAACCGGGGCAAGTCCGACAACGTGCCCTCCGAGGAGGTGGTGAAGAAGATGAAGAACTACTGGCGGCAGCTGCTGAACGCCAAGCTGATCACCCAGCGGAAGTTCGACAACCTGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCTGTCCGAGCTGGACAAGGCCGGCTTCATCAAGCGGCAGCTGGTGGAGACCCGGCAGATCACCAAGCACGTGGCCCAGATCCTGGACTCCCGGATGAACACCAAGTACGACGAGAACGACAAGCTGATCCGGGAGGTGAAGGTGATCACCCTGAAGTCCAAGCTGGTGTCCGACTTCCGGAAGGACTTCCAGTTCTACAAGGTGCGGGAGATCAACAACTACCACCACGCCCACGACGCCTACCTGAACGCCGTGGTGGGCACCGCCCTGATCAAGAAGTACCCCAAGCTGGAGTCCGAGTTCGTGTACGGCGACTACAAGGTGTACGACGTGCGGAAGATGATCGCCAAGTCCGAGCAGGAGATCGGCAAGGCCACCGCCAAGTACTTCTTCTACTCCAACATCATGAACTTCTTCAAGACCGAGATCACCCTGGCCAACGGCGAGATCCGGAAGCGGCCCCTGATCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGATCGTGTGGGACAAGGGCCGGGACTTCGCCACCGTGCGGAAGGTGCTGTCCATGCCCCAGGTGAACATCGTGAAGAAGACCGAGGTGCAGACCGGCGGCTTCTCCAAGGAGTCCATCCTGCCCAAGCGGAACTCCGACAAGCTGATCGCCCGGAAGAAGGACTGGGACCCCAAGAAGTACGGCGGCTTCGACTCCCCCACCGTGGCCTACTCCGTGCTGGTGGTGGCCAAGGTGGAGAAGGGCAAGTCCAAGAAGCTGAAGTCCGTGAAGGAGCTGCTGGGCATCACCATCATGGAGCGGTCCTCCTTCGAGAAGAACCCCATCGACTTCCTGGAGGCCAAGGGCTACAAGGAGGTGAAGAAGGACCTGATCATCAAGCTGCCCAAGTACTCCCTGTTCGAGCTGGAGAACGGCCGGAAGCGGATGCTGGCCTCCGCCGGCGAGCTGCAGAAGGGCAACGAGCTGGCCCTGCCCTCCAAGTACGTGAACTTCCTGTACCTGGCCTCCCACTACGAGAAGCTGAAGGGCTCCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCTGTTCGTGGAGCAGCACAAGCACTACCTGGACGAGATCATCGAGCAGATCTCCGAGTTCTCCAAGCGGGTGATCCTGGCCGACGCCAACCTGGACAAGGTGCTGTCCGCCTACAACAAGCACCGGGACAAGCCCATCCGGGAGCAGGCCGAGAACATCATCCACCTGTTCACCCTGACCAACCTGGGCGCCCCCGCCGCCTTCAAGTACTTCGACACCACCATCGACCGGAAGCGGTACACCTCCACCAAGGAGGTGCTGGACGCCACCCTGATCCACCAGTCCATCACCGGCCTGTACGAGACCCGGATCGACCTGTCCCAGCTGGGCGGCGACGGCGGCGGCTCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGTGTGA
48 使用表4之低A密碼子之Cas9切口酶ORF，具有起始及終止密碼子且無NLS ATGGACAAGAAGTACTCCATCGGCCTGGCCATCGGCACCAACTCCGTGGGCTGGGCCGTGATCACCGACGAGTACAAGGTGCCCTCCAAGAAGTTCAAGGTGCTGGGCAACACCGACCGGCACTCCATCAAGAAGAACCTGATCGGCGCCCTGCTGTTCGACTCCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCTGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGTACACCCGGCGGAAGAACCGGATCTGCTACCTGCAGGAGATCTTCTCCAACGAGATGGCCAAGGTGGACGACTCCTTCTTCCACCGGCTGGAGGAGTCCTTCCTGGTGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCATCTTCGGCAACATCGTGGACGAGGTGGCCTACCACGAGAAGTACCCCACCATCTACCACCTGCGGAAGAAGCTGGTGGACTCCACCGACAAGGCCGACCTGCGGCTGATCTACCTGGCCCTGGCCCACATGATCAAGTTCCGGGGCCACTTCCTGATCGAGGGCGACCTGAACCCCGACAACTCCGACGTGGACAAGCTGTTCATCCAGCTGGTGCAGACCTACAACCAGCTGTTCGAGGAGAACCCCATCAACGCCTCCGGCGTGGACGCCAAGGCCATCCTGTCCGCCCGGCTGTCCAAGTCCCGGCGGCTGGAGAACCTGATCGCCCAGCTGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCTGTTCGGCAACCTGATCGCCCTGTCCCTGGGCCTGACCCCCAACTTCAAGTCCAACTTCGACCTGGCCGAGGACGCCAAGCTGCAGCTGTCCAAGGACACCTACGACGACGACCTGGACAACCTGCTGGCCCAGATCGGCGACCAGTACGCCGACCTGTTCCTGGCCGCCAAGAACCTGTCCGACGCCATCCTGCTGTCCGACATCCTGCGGGTGAACACCGAGATCACCAAGGCCCCCCTGTCCGCCTCCATGATCAAGCGGTACGACGAGCACCACCAGGACCTGACCCTGCTGAAGGCCCTGGTGCGGCAGCAGCTGCCCGAGAAGTACAAGGAGATCTTCTTCGACCAGTCCAAGAACGGCTACGCCGGCTACATCGACGGCGGCGCCTCCCAGGAGGAGTTCTACAAGTTCATCAAGCCCATCCTGGAGAAGATGGACGGCACCGAGGAGCTGCTGGTGAAGCTGAACCGGGAGGACCTGCTGCGGAAGCAGCGGACCTTCGACAACGGCTCCATCCCCCACCAGATCCACCTGGGCGAGCTGCACGCCATCCTGCGGCGGCAGGAGGACTTCTACCCCTTCCTGAAGGACAACCGGGAGAAGATCGAGAAGATCCTGACCTTCCGGATCCCCTACTACGTGGGCCCCCTGGCCCGGGGCAACTCCCGGTTCGCCTGGATGACCCGGAAGTCCGAGGAGACCATCACCCCCTGGAACTTCGAGGAGGTGGTGGACAAGGGCGCCTCCGCCCAGTCCTTCATCGAGCGGATGACCAACTTCGACAAGAACCTGCCCAACGAGAAGGTGCTGCCCAAGCACTCCCTGCTGTACGAGTACTTCACCGTGTACAACGAGCTGACCAAGGTGAAGTACGTGACCGAGGGCATGCGGAAGCCCGCCTTCCTGTCCGGCGAGCAGAAGAAGGCCATCGTGGACCTGCTGTTCAAGACCAACCGGAAGGTGACCGTGAAGCAGCTGAAGGAGGACTACTTCAAGAAGATCGAGTGCTTCGACTCCGTGGAGATCTCCGGCGTGGAGGACCGGTTCAACGCCTCCCTGGGCACCTACCACGACCTGCTGAAGATCATCAAGGACAAGGACTTCCTGGACAACGAGGAGAACGAGGACATCCTGGAGGACATCGTGCTGACCCTGACCCTGTTCGAGGACCGGGAGATGATCGAGGAGCGGCTGAAGACCTACGCCCACCTGTTCGACGACAAGGTGATGAAGCAGCTGAAGCGGCGGCGGTACACCGGCTGGGGCCGGCTGTCCCGGAAGCTGATCAACGGCATCCGGGACAAGCAGTCCGGCAAGACCATCCTGGACTTCCTGAAGTCCGACGGCTTCGCCAACCGGAACTTCATGCAGCTGATCCACGACGACTCCCTGACCTTCAAGGAGGACATCCAGAAGGCCCAGGTGTCCGGCCAGGGCGACTCCCTGCACGAGCACATCGCCAACCTGGCCGGCTCCCCCGCCATCAAGAAGGGCATCCTGCAGACCGTGAAGGTGGTGGACGAGCTGGTGAAGGTGATGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACATCGTGATCGAGATGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACTCCCGGGAGCGGATGAAGCGGATCGAGGAGGGCATCAAGGAGCTGGGCTCCCAGATCCTGAAGGAGCACCCCGTGGAGAACACCCAGCTGCAGAACGAGAAGCTGTACCTGTACTACCTGCAGAACGGCCGGGACATGTACGTGGACCAGGAGCTGGACATCAACCGGCTGTCCGACTACGACGTGGACCACATCGTGCCCCAGTCCTTCCTGAAGGACGACTCCATCGACAACAAGGTGCTGACCCGGTCCGACAAGAACCGGGGCAAGTCCGACAACGTGCCCTCCGAGGAGGTGGTGAAGAAGATGAAGAACTACTGGCGGCAGCTGCTGAACGCCAAGCTGATCACCCAGCGGAAGTTCGACAACCTGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCTGTCCGAGCTGGACAAGGCCGGCTTCATCAAGCGGCAGCTGGTGGAGACCCGGCAGATCACCAAGCACGTGGCCCAGATCCTGGACTCCCGGATGAACACCAAGTACGACGAGAACGACAAGCTGATCCGGGAGGTGAAGGTGATCACCCTGAAGTCCAAGCTGGTGTCCGACTTCCGGAAGGACTTCCAGTTCTACAAGGTGCGGGAGATCAACAACTACCACCACGCCCACGACGCCTACCTGAACGCCGTGGTGGGCACCGCCCTGATCAAGAAGTACCCCAAGCTGGAGTCCGAGTTCGTGTACGGCGACTACAAGGTGTACGACGTGCGGAAGATGATCGCCAAGTCCGAGCAGGAGATCGGCAAGGCCACCGCCAAGTACTTCTTCTACTCCAACATCATGAACTTCTTCAAGACCGAGATCACCCTGGCCAACGGCGAGATCCGGAAGCGGCCCCTGATCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGATCGTGTGGGACAAGGGCCGGGACTTCGCCACCGTGCGGAAGGTGCTGTCCATGCCCCAGGTGAACATCGTGAAGAAGACCGAGGTGCAGACCGGCGGCTTCTCCAAGGAGTCCATCCTGCCCAAGCGGAACTCCGACAAGCTGATCGCCCGGAAGAAGGACTGGGACCCCAAGAAGTACGGCGGCTTCGACTCCCCCACCGTGGCCTACTCCGTGCTGGTGGTGGCCAAGGTGGAGAAGGGCAAGTCCAAGAAGCTGAAGTCCGTGAAGGAGCTGCTGGGCATCACCATCATGGAGCGGTCCTCCTTCGAGAAGAACCCCATCGACTTCCTGGAGGCCAAGGGCTACAAGGAGGTGAAGAAGGACCTGATCATCAAGCTGCCCAAGTACTCCCTGTTCGAGCTGGAGAACGGCCGGAAGCGGATGCTGGCCTCCGCCGGCGAGCTGCAGAAGGGCAACGAGCTGGCCCTGCCCTCCAAGTACGTGAACTTCCTGTACCTGGCCTCCCACTACGAGAAGCTGAAGGGCTCCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCTGTTCGTGGAGCAGCACAAGCACTACCTGGACGAGATCATCGAGCAGATCTCCGAGTTCTCCAAGCGGGTGATCCTGGCCGACGCCAACCTGGACAAGGTGCTGTCCGCCTACAACAAGCACCGGGACAAGCCCATCCGGGAGCAGGCCGAGAACATCATCCACCTGTTCACCCTGACCAACCTGGGCGCCCCCGCCGCCTTCAAGTACTTCGACACCACCATCGACCGGAAGCGGTACACCTCCACCAAGGAGGTGCTGGACGCCACCCTGATCCACCAGTCCATCACCGGCCTGTACGAGACCCGGATCGACCTGTCCCAGCTGGGCGGCGACTGA
49 使用表4之低A密碼子之Cas9切口酶ORF，具有兩個C末端NLS序列以及起始及終止密碼子 ATGGACAAGAAGTACTCCATCGGCCTGGCCATCGGCACCAACTCCGTGGGCTGGGCCGTGATCACCGACGAGTACAAGGTGCCCTCCAAGAAGTTCAAGGTGCTGGGCAACACCGACCGGCACTCCATCAAGAAGAACCTGATCGGCGCCCTGCTGTTCGACTCCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCTGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGTACACCCGGCGGAAGAACCGGATCTGCTACCTGCAGGAGATCTTCTCCAACGAGATGGCCAAGGTGGACGACTCCTTCTTCCACCGGCTGGAGGAGTCCTTCCTGGTGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCATCTTCGGCAACATCGTGGACGAGGTGGCCTACCACGAGAAGTACCCCACCATCTACCACCTGCGGAAGAAGCTGGTGGACTCCACCGACAAGGCCGACCTGCGGCTGATCTACCTGGCCCTGGCCCACATGATCAAGTTCCGGGGCCACTTCCTGATCGAGGGCGACCTGAACCCCGACAACTCCGACGTGGACAAGCTGTTCATCCAGCTGGTGCAGACCTACAACCAGCTGTTCGAGGAGAACCCCATCAACGCCTCCGGCGTGGACGCCAAGGCCATCCTGTCCGCCCGGCTGTCCAAGTCCCGGCGGCTGGAGAACCTGATCGCCCAGCTGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCTGTTCGGCAACCTGATCGCCCTGTCCCTGGGCCTGACCCCCAACTTCAAGTCCAACTTCGACCTGGCCGAGGACGCCAAGCTGCAGCTGTCCAAGGACACCTACGACGACGACCTGGACAACCTGCTGGCCCAGATCGGCGACCAGTACGCCGACCTGTTCCTGGCCGCCAAGAACCTGTCCGACGCCATCCTGCTGTCCGACATCCTGCGGGTGAACACCGAGATCACCAAGGCCCCCCTGTCCGCCTCCATGATCAAGCGGTACGACGAGCACCACCAGGACCTGACCCTGCTGAAGGCCCTGGTGCGGCAGCAGCTGCCCGAGAAGTACAAGGAGATCTTCTTCGACCAGTCCAAGAACGGCTACGCCGGCTACATCGACGGCGGCGCCTCCCAGGAGGAGTTCTACAAGTTCATCAAGCCCATCCTGGAGAAGATGGACGGCACCGAGGAGCTGCTGGTGAAGCTGAACCGGGAGGACCTGCTGCGGAAGCAGCGGACCTTCGACAACGGCTCCATCCCCCACCAGATCCACCTGGGCGAGCTGCACGCCATCCTGCGGCGGCAGGAGGACTTCTACCCCTTCCTGAAGGACAACCGGGAGAAGATCGAGAAGATCCTGACCTTCCGGATCCCCTACTACGTGGGCCCCCTGGCCCGGGGCAACTCCCGGTTCGCCTGGATGACCCGGAAGTCCGAGGAGACCATCACCCCCTGGAACTTCGAGGAGGTGGTGGACAAGGGCGCCTCCGCCCAGTCCTTCATCGAGCGGATGACCAACTTCGACAAGAACCTGCCCAACGAGAAGGTGCTGCCCAAGCACTCCCTGCTGTACGAGTACTTCACCGTGTACAACGAGCTGACCAAGGTGAAGTACGTGACCGAGGGCATGCGGAAGCCCGCCTTCCTGTCCGGCGAGCAGAAGAAGGCCATCGTGGACCTGCTGTTCAAGACCAACCGGAAGGTGACCGTGAAGCAGCTGAAGGAGGACTACTTCAAGAAGATCGAGTGCTTCGACTCCGTGGAGATCTCCGGCGTGGAGGACCGGTTCAACGCCTCCCTGGGCACCTACCACGACCTGCTGAAGATCATCAAGGACAAGGACTTCCTGGACAACGAGGAGAACGAGGACATCCTGGAGGACATCGTGCTGACCCTGACCCTGTTCGAGGACCGGGAGATGATCGAGGAGCGGCTGAAGACCTACGCCCACCTGTTCGACGACAAGGTGATGAAGCAGCTGAAGCGGCGGCGGTACACCGGCTGGGGCCGGCTGTCCCGGAAGCTGATCAACGGCATCCGGGACAAGCAGTCCGGCAAGACCATCCTGGACTTCCTGAAGTCCGACGGCTTCGCCAACCGGAACTTCATGCAGCTGATCCACGACGACTCCCTGACCTTCAAGGAGGACATCCAGAAGGCCCAGGTGTCCGGCCAGGGCGACTCCCTGCACGAGCACATCGCCAACCTGGCCGGCTCCCCCGCCATCAAGAAGGGCATCCTGCAGACCGTGAAGGTGGTGGACGAGCTGGTGAAGGTGATGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACATCGTGATCGAGATGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACTCCCGGGAGCGGATGAAGCGGATCGAGGAGGGCATCAAGGAGCTGGGCTCCCAGATCCTGAAGGAGCACCCCGTGGAGAACACCCAGCTGCAGAACGAGAAGCTGTACCTGTACTACCTGCAGAACGGCCGGGACATGTACGTGGACCAGGAGCTGGACATCAACCGGCTGTCCGACTACGACGTGGACCACATCGTGCCCCAGTCCTTCCTGAAGGACGACTCCATCGACAACAAGGTGCTGACCCGGTCCGACAAGAACCGGGGCAAGTCCGACAACGTGCCCTCCGAGGAGGTGGTGAAGAAGATGAAGAACTACTGGCGGCAGCTGCTGAACGCCAAGCTGATCACCCAGCGGAAGTTCGACAACCTGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCTGTCCGAGCTGGACAAGGCCGGCTTCATCAAGCGGCAGCTGGTGGAGACCCGGCAGATCACCAAGCACGTGGCCCAGATCCTGGACTCCCGGATGAACACCAAGTACGACGAGAACGACAAGCTGATCCGGGAGGTGAAGGTGATCACCCTGAAGTCCAAGCTGGTGTCCGACTTCCGGAAGGACTTCCAGTTCTACAAGGTGCGGGAGATCAACAACTACCACCACGCCCACGACGCCTACCTGAACGCCGTGGTGGGCACCGCCCTGATCAAGAAGTACCCCAAGCTGGAGTCCGAGTTCGTGTACGGCGACTACAAGGTGTACGACGTGCGGAAGATGATCGCCAAGTCCGAGCAGGAGATCGGCAAGGCCACCGCCAAGTACTTCTTCTACTCCAACATCATGAACTTCTTCAAGACCGAGATCACCCTGGCCAACGGCGAGATCCGGAAGCGGCCCCTGATCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGATCGTGTGGGACAAGGGCCGGGACTTCGCCACCGTGCGGAAGGTGCTGTCCATGCCCCAGGTGAACATCGTGAAGAAGACCGAGGTGCAGACCGGCGGCTTCTCCAAGGAGTCCATCCTGCCCAAGCGGAACTCCGACAAGCTGATCGCCCGGAAGAAGGACTGGGACCCCAAGAAGTACGGCGGCTTCGACTCCCCCACCGTGGCCTACTCCGTGCTGGTGGTGGCCAAGGTGGAGAAGGGCAAGTCCAAGAAGCTGAAGTCCGTGAAGGAGCTGCTGGGCATCACCATCATGGAGCGGTCCTCCTTCGAGAAGAACCCCATCGACTTCCTGGAGGCCAAGGGCTACAAGGAGGTGAAGAAGGACCTGATCATCAAGCTGCCCAAGTACTCCCTGTTCGAGCTGGAGAACGGCCGGAAGCGGATGCTGGCCTCCGCCGGCGAGCTGCAGAAGGGCAACGAGCTGGCCCTGCCCTCCAAGTACGTGAACTTCCTGTACCTGGCCTCCCACTACGAGAAGCTGAAGGGCTCCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCTGTTCGTGGAGCAGCACAAGCACTACCTGGACGAGATCATCGAGCAGATCTCCGAGTTCTCCAAGCGGGTGATCCTGGCCGACGCCAACCTGGACAAGGTGCTGTCCGCCTACAACAAGCACCGGGACAAGCCCATCCGGGAGCAGGCCGAGAACATCATCCACCTGTTCACCCTGACCAACCTGGGCGCCCCCGCCGCCTTCAAGTACTTCGACACCACCATCGACCGGAAGCGGTACACCTCCACCAAGGAGGTGCTGGACGCCACCCTGATCCACCAGTCCATCACCGGCCTGTACGAGACCCGGATCGACCTGTCCCAGCTGGGCGGCGACGGCTCCGGCTCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGTGGACGGCTCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGTGGACTCCGGCTGA
50 使用表4之低A/U密碼子之Cas9切口酶ORF，具有起始及終止密碼子 ATGGACAAGAAGTACAGCATCGGCCTGGCCATCGGCACCAACAGCGTGGGCTGGGCCGTGATCACCGACGAGTACAAGGTGCCCAGCAAGAAGTTCAAGGTGCTGGGCAACACCGACCGGCACAGCATCAAGAAGAACCTGATCGGCGCCCTGCTGTTCGACAGCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCTGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGTACACCCGGCGGAAGAACCGGATCTGCTACCTGCAGGAGATCTTCAGCAACGAGATGGCCAAGGTGGACGACAGCTTCTTCCACCGGCTGGAGGAGAGCTTCCTGGTGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCATCTTCGGCAACATCGTGGACGAGGTGGCCTACCACGAGAAGTACCCCACCATCTACCACCTGCGGAAGAAGCTGGTGGACAGCACCGACAAGGCCGACCTGCGGCTGATCTACCTGGCCCTGGCCCACATGATCAAGTTCCGGGGCCACTTCCTGATCGAGGGCGACCTGAACCCCGACAACAGCGACGTGGACAAGCTGTTCATCCAGCTGGTGCAGACCTACAACCAGCTGTTCGAGGAGAACCCCATCAACGCCAGCGGCGTGGACGCCAAGGCCATCCTGAGCGCCCGGCTGAGCAAGAGCCGGCGGCTGGAGAACCTGATCGCCCAGCTGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCTGTTCGGCAACCTGATCGCCCTGAGCCTGGGCCTGACCCCCAACTTCAAGAGCAACTTCGACCTGGCCGAGGACGCCAAGCTGCAGCTGAGCAAGGACACCTACGACGACGACCTGGACAACCTGCTGGCCCAGATCGGCGACCAGTACGCCGACCTGTTCCTGGCCGCCAAGAACCTGAGCGACGCCATCCTGCTGAGCGACATCCTGCGGGTGAACACCGAGATCACCAAGGCCCCCCTGAGCGCCAGCATGATCAAGCGGTACGACGAGCACCACCAGGACCTGACCCTGCTGAAGGCCCTGGTGCGGCAGCAGCTGCCCGAGAAGTACAAGGAGATCTTCTTCGACCAGAGCAAGAACGGCTACGCCGGCTACATCGACGGCGGCGCCAGCCAGGAGGAGTTCTACAAGTTCATCAAGCCCATCCTGGAGAAGATGGACGGCACCGAGGAGCTGCTGGTGAAGCTGAACCGGGAGGACCTGCTGCGGAAGCAGCGGACCTTCGACAACGGCAGCATCCCCCACCAGATCCACCTGGGCGAGCTGCACGCCATCCTGCGGCGGCAGGAGGACTTCTACCCCTTCCTGAAGGACAACCGGGAGAAGATCGAGAAGATCCTGACCTTCCGGATCCCCTACTACGTGGGCCCCCTGGCCCGGGGCAACAGCCGGTTCGCCTGGATGACCCGGAAGAGCGAGGAGACCATCACCCCCTGGAACTTCGAGGAGGTGGTGGACAAGGGCGCCAGCGCCCAGAGCTTCATCGAGCGGATGACCAACTTCGACAAGAACCTGCCCAACGAGAAGGTGCTGCCCAAGCACAGCCTGCTGTACGAGTACTTCACCGTGTACAACGAGCTGACCAAGGTGAAGTACGTGACCGAGGGCATGCGGAAGCCCGCCTTCCTGAGCGGCGAGCAGAAGAAGGCCATCGTGGACCTGCTGTTCAAGACCAACCGGAAGGTGACCGTGAAGCAGCTGAAGGAGGACTACTTCAAGAAGATCGAGTGCTTCGACAGCGTGGAGATCAGCGGCGTGGAGGACCGGTTCAACGCCAGCCTGGGCACCTACCACGACCTGCTGAAGATCATCAAGGACAAGGACTTCCTGGACAACGAGGAGAACGAGGACATCCTGGAGGACATCGTGCTGACCCTGACCCTGTTCGAGGACCGGGAGATGATCGAGGAGCGGCTGAAGACCTACGCCCACCTGTTCGACGACAAGGTGATGAAGCAGCTGAAGCGGCGGCGGTACACCGGCTGGGGCCGGCTGAGCCGGAAGCTGATCAACGGCATCCGGGACAAGCAGAGCGGCAAGACCATCCTGGACTTCCTGAAGAGCGACGGCTTCGCCAACCGGAACTTCATGCAGCTGATCCACGACGACAGCCTGACCTTCAAGGAGGACATCCAGAAGGCCCAGGTGAGCGGCCAGGGCGACAGCCTGCACGAGCACATCGCCAACCTGGCCGGCAGCCCCGCCATCAAGAAGGGCATCCTGCAGACCGTGAAGGTGGTGGACGAGCTGGTGAAGGTGATGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACATCGTGATCGAGATGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACAGCCGGGAGCGGATGAAGCGGATCGAGGAGGGCATCAAGGAGCTGGGCAGCCAGATCCTGAAGGAGCACCCCGTGGAGAACACCCAGCTGCAGAACGAGAAGCTGTACCTGTACTACCTGCAGAACGGCCGGGACATGTACGTGGACCAGGAGCTGGACATCAACCGGCTGAGCGACTACGACGTGGACCACATCGTGCCCCAGAGCTTCCTGAAGGACGACAGCATCGACAACAAGGTGCTGACCCGGAGCGACAAGAACCGGGGCAAGAGCGACAACGTGCCCAGCGAGGAGGTGGTGAAGAAGATGAAGAACTACTGGCGGCAGCTGCTGAACGCCAAGCTGATCACCCAGCGGAAGTTCGACAACCTGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCTGAGCGAGCTGGACAAGGCCGGCTTCATCAAGCGGCAGCTGGTGGAGACCCGGCAGATCACCAAGCACGTGGCCCAGATCCTGGACAGCCGGATGAACACCAAGTACGACGAGAACGACAAGCTGATCCGGGAGGTGAAGGTGATCACCCTGAAGAGCAAGCTGGTGAGCGACTTCCGGAAGGACTTCCAGTTCTACAAGGTGCGGGAGATCAACAACTACCACCACGCCCACGACGCCTACCTGAACGCCGTGGTGGGCACCGCCCTGATCAAGAAGTACCCCAAGCTGGAGAGCGAGTTCGTGTACGGCGACTACAAGGTGTACGACGTGCGGAAGATGATCGCCAAGAGCGAGCAGGAGATCGGCAAGGCCACCGCCAAGTACTTCTTCTACAGCAACATCATGAACTTCTTCAAGACCGAGATCACCCTGGCCAACGGCGAGATCCGGAAGCGGCCCCTGATCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGATCGTGTGGGACAAGGGCCGGGACTTCGCCACCGTGCGGAAGGTGCTGAGCATGCCCCAGGTGAACATCGTGAAGAAGACCGAGGTGCAGACCGGCGGCTTCAGCAAGGAGAGCATCCTGCCCAAGCGGAACAGCGACAAGCTGATCGCCCGGAAGAAGGACTGGGACCCCAAGAAGTACGGCGGCTTCGACAGCCCCACCGTGGCCTACAGCGTGCTGGTGGTGGCCAAGGTGGAGAAGGGCAAGAGCAAGAAGCTGAAGAGCGTGAAGGAGCTGCTGGGCATCACCATCATGGAGCGGAGCAGCTTCGAGAAGAACCCCATCGACTTCCTGGAGGCCAAGGGCTACAAGGAGGTGAAGAAGGACCTGATCATCAAGCTGCCCAAGTACAGCCTGTTCGAGCTGGAGAACGGCCGGAAGCGGATGCTGGCCAGCGCCGGCGAGCTGCAGAAGGGCAACGAGCTGGCCCTGCCCAGCAAGTACGTGAACTTCCTGTACCTGGCCAGCCACTACGAGAAGCTGAAGGGCAGCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCTGTTCGTGGAGCAGCACAAGCACTACCTGGACGAGATCATCGAGCAGATCAGCGAGTTCAGCAAGCGGGTGATCCTGGCCGACGCCAACCTGGACAAGGTGCTGAGCGCCTACAACAAGCACCGGGACAAGCCCATCCGGGAGCAGGCCGAGAACATCATCCACCTGTTCACCCTGACCAACCTGGGCGCCCCCGCCGCCTTCAAGTACTTCGACACCACCATCGACCGGAAGCGGTACACCAGCACCAAGGAGGTGCTGGACGCCACCCTGATCCACCAGAGCATCACCGGCCTGTACGAGACCCGGATCGACCTGAGCCAGCTGGGCGGCGACGGCGGCGGCAGCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGTGTGA
51 使用表4之低A/U密碼子之Cas9切口酶ORF，具有兩個C末端NLS序列以及起始及終止密碼子 ATGGACAAGAAGTACAGCATCGGCCTGGCCATCGGCACCAACAGCGTGGGCTGGGCCGTGATCACCGACGAGTACAAGGTGCCCAGCAAGAAGTTCAAGGTGCTGGGCAACACCGACCGGCACAGCATCAAGAAGAACCTGATCGGCGCCCTGCTGTTCGACAGCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCTGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGTACACCCGGCGGAAGAACCGGATCTGCTACCTGCAGGAGATCTTCAGCAACGAGATGGCCAAGGTGGACGACAGCTTCTTCCACCGGCTGGAGGAGAGCTTCCTGGTGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCATCTTCGGCAACATCGTGGACGAGGTGGCCTACCACGAGAAGTACCCCACCATCTACCACCTGCGGAAGAAGCTGGTGGACAGCACCGACAAGGCCGACCTGCGGCTGATCTACCTGGCCCTGGCCCACATGATCAAGTTCCGGGGCCACTTCCTGATCGAGGGCGACCTGAACCCCGACAACAGCGACGTGGACAAGCTGTTCATCCAGCTGGTGCAGACCTACAACCAGCTGTTCGAGGAGAACCCCATCAACGCCAGCGGCGTGGACGCCAAGGCCATCCTGAGCGCCCGGCTGAGCAAGAGCCGGCGGCTGGAGAACCTGATCGCCCAGCTGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCTGTTCGGCAACCTGATCGCCCTGAGCCTGGGCCTGACCCCCAACTTCAAGAGCAACTTCGACCTGGCCGAGGACGCCAAGCTGCAGCTGAGCAAGGACACCTACGACGACGACCTGGACAACCTGCTGGCCCAGATCGGCGACCAGTACGCCGACCTGTTCCTGGCCGCCAAGAACCTGAGCGACGCCATCCTGCTGAGCGACATCCTGCGGGTGAACACCGAGATCACCAAGGCCCCCCTGAGCGCCAGCATGATCAAGCGGTACGACGAGCACCACCAGGACCTGACCCTGCTGAAGGCCCTGGTGCGGCAGCAGCTGCCCGAGAAGTACAAGGAGATCTTCTTCGACCAGAGCAAGAACGGCTACGCCGGCTACATCGACGGCGGCGCCAGCCAGGAGGAGTTCTACAAGTTCATCAAGCCCATCCTGGAGAAGATGGACGGCACCGAGGAGCTGCTGGTGAAGCTGAACCGGGAGGACCTGCTGCGGAAGCAGCGGACCTTCGACAACGGCAGCATCCCCCACCAGATCCACCTGGGCGAGCTGCACGCCATCCTGCGGCGGCAGGAGGACTTCTACCCCTTCCTGAAGGACAACCGGGAGAAGATCGAGAAGATCCTGACCTTCCGGATCCCCTACTACGTGGGCCCCCTGGCCCGGGGCAACAGCCGGTTCGCCTGGATGACCCGGAAGAGCGAGGAGACCATCACCCCCTGGAACTTCGAGGAGGTGGTGGACAAGGGCGCCAGCGCCCAGAGCTTCATCGAGCGGATGACCAACTTCGACAAGAACCTGCCCAACGAGAAGGTGCTGCCCAAGCACAGCCTGCTGTACGAGTACTTCACCGTGTACAACGAGCTGACCAAGGTGAAGTACGTGACCGAGGGCATGCGGAAGCCCGCCTTCCTGAGCGGCGAGCAGAAGAAGGCCATCGTGGACCTGCTGTTCAAGACCAACCGGAAGGTGACCGTGAAGCAGCTGAAGGAGGACTACTTCAAGAAGATCGAGTGCTTCGACAGCGTGGAGATCAGCGGCGTGGAGGACCGGTTCAACGCCAGCCTGGGCACCTACCACGACCTGCTGAAGATCATCAAGGACAAGGACTTCCTGGACAACGAGGAGAACGAGGACATCCTGGAGGACATCGTGCTGACCCTGACCCTGTTCGAGGACCGGGAGATGATCGAGGAGCGGCTGAAGACCTACGCCCACCTGTTCGACGACAAGGTGATGAAGCAGCTGAAGCGGCGGCGGTACACCGGCTGGGGCCGGCTGAGCCGGAAGCTGATCAACGGCATCCGGGACAAGCAGAGCGGCAAGACCATCCTGGACTTCCTGAAGAGCGACGGCTTCGCCAACCGGAACTTCATGCAGCTGATCCACGACGACAGCCTGACCTTCAAGGAGGACATCCAGAAGGCCCAGGTGAGCGGCCAGGGCGACAGCCTGCACGAGCACATCGCCAACCTGGCCGGCAGCCCCGCCATCAAGAAGGGCATCCTGCAGACCGTGAAGGTGGTGGACGAGCTGGTGAAGGTGATGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACATCGTGATCGAGATGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACAGCCGGGAGCGGATGAAGCGGATCGAGGAGGGCATCAAGGAGCTGGGCAGCCAGATCCTGAAGGAGCACCCCGTGGAGAACACCCAGCTGCAGAACGAGAAGCTGTACCTGTACTACCTGCAGAACGGCCGGGACATGTACGTGGACCAGGAGCTGGACATCAACCGGCTGAGCGACTACGACGTGGACCACATCGTGCCCCAGAGCTTCCTGAAGGACGACAGCATCGACAACAAGGTGCTGACCCGGAGCGACAAGAACCGGGGCAAGAGCGACAACGTGCCCAGCGAGGAGGTGGTGAAGAAGATGAAGAACTACTGGCGGCAGCTGCTGAACGCCAAGCTGATCACCCAGCGGAAGTTCGACAACCTGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCTGAGCGAGCTGGACAAGGCCGGCTTCATCAAGCGGCAGCTGGTGGAGACCCGGCAGATCACCAAGCACGTGGCCCAGATCCTGGACAGCCGGATGAACACCAAGTACGACGAGAACGACAAGCTGATCCGGGAGGTGAAGGTGATCACCCTGAAGAGCAAGCTGGTGAGCGACTTCCGGAAGGACTTCCAGTTCTACAAGGTGCGGGAGATCAACAACTACCACCACGCCCACGACGCCTACCTGAACGCCGTGGTGGGCACCGCCCTGATCAAGAAGTACCCCAAGCTGGAGAGCGAGTTCGTGTACGGCGACTACAAGGTGTACGACGTGCGGAAGATGATCGCCAAGAGCGAGCAGGAGATCGGCAAGGCCACCGCCAAGTACTTCTTCTACAGCAACATCATGAACTTCTTCAAGACCGAGATCACCCTGGCCAACGGCGAGATCCGGAAGCGGCCCCTGATCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGATCGTGTGGGACAAGGGCCGGGACTTCGCCACCGTGCGGAAGGTGCTGAGCATGCCCCAGGTGAACATCGTGAAGAAGACCGAGGTGCAGACCGGCGGCTTCAGCAAGGAGAGCATCCTGCCCAAGCGGAACAGCGACAAGCTGATCGCCCGGAAGAAGGACTGGGACCCCAAGAAGTACGGCGGCTTCGACAGCCCCACCGTGGCCTACAGCGTGCTGGTGGTGGCCAAGGTGGAGAAGGGCAAGAGCAAGAAGCTGAAGAGCGTGAAGGAGCTGCTGGGCATCACCATCATGGAGCGGAGCAGCTTCGAGAAGAACCCCATCGACTTCCTGGAGGCCAAGGGCTACAAGGAGGTGAAGAAGGACCTGATCATCAAGCTGCCCAAGTACAGCCTGTTCGAGCTGGAGAACGGCCGGAAGCGGATGCTGGCCAGCGCCGGCGAGCTGCAGAAGGGCAACGAGCTGGCCCTGCCCAGCAAGTACGTGAACTTCCTGTACCTGGCCAGCCACTACGAGAAGCTGAAGGGCAGCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCTGTTCGTGGAGCAGCACAAGCACTACCTGGACGAGATCATCGAGCAGATCAGCGAGTTCAGCAAGCGGGTGATCCTGGCCGACGCCAACCTGGACAAGGTGCTGAGCGCCTACAACAAGCACCGGGACAAGCCCATCCGGGAGCAGGCCGAGAACATCATCCACCTGTTCACCCTGACCAACCTGGGCGCCCCCGCCGCCTTCAAGTACTTCGACACCACCATCGACCGGAAGCGGTACACCAGCACCAAGGAGGTGCTGGACGCCACCCTGATCCACCAGAGCATCACCGGCCTGTACGAGACCCGGATCGACCTGAGCCAGCTGGGCGGCGACGGCAGCGGCAGCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGTGGACGGCAGCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGTGGACAGCGGCTGA
52 使用表4之低A/U密碼子之Cas9切口酶ORF，具有起始及終止密碼子且無NLS ATGGACAAGAAGTACAGCATCGGCCTGGCCATCGGCACCAACAGCGTGGGCTGGGCCGTGATCACCGACGAGTACAAGGTGCCCAGCAAGAAGTTCAAGGTGCTGGGCAACACCGACCGGCACAGCATCAAGAAGAACCTGATCGGCGCCCTGCTGTTCGACAGCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCTGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGTACACCCGGCGGAAGAACCGGATCTGCTACCTGCAGGAGATCTTCAGCAACGAGATGGCCAAGGTGGACGACAGCTTCTTCCACCGGCTGGAGGAGAGCTTCCTGGTGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCATCTTCGGCAACATCGTGGACGAGGTGGCCTACCACGAGAAGTACCCCACCATCTACCACCTGCGGAAGAAGCTGGTGGACAGCACCGACAAGGCCGACCTGCGGCTGATCTACCTGGCCCTGGCCCACATGATCAAGTTCCGGGGCCACTTCCTGATCGAGGGCGACCTGAACCCCGACAACAGCGACGTGGACAAGCTGTTCATCCAGCTGGTGCAGACCTACAACCAGCTGTTCGAGGAGAACCCCATCAACGCCAGCGGCGTGGACGCCAAGGCCATCCTGAGCGCCCGGCTGAGCAAGAGCCGGCGGCTGGAGAACCTGATCGCCCAGCTGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCTGTTCGGCAACCTGATCGCCCTGAGCCTGGGCCTGACCCCCAACTTCAAGAGCAACTTCGACCTGGCCGAGGACGCCAAGCTGCAGCTGAGCAAGGACACCTACGACGACGACCTGGACAACCTGCTGGCCCAGATCGGCGACCAGTACGCCGACCTGTTCCTGGCCGCCAAGAACCTGAGCGACGCCATCCTGCTGAGCGACATCCTGCGGGTGAACACCGAGATCACCAAGGCCCCCCTGAGCGCCAGCATGATCAAGCGGTACGACGAGCACCACCAGGACCTGACCCTGCTGAAGGCCCTGGTGCGGCAGCAGCTGCCCGAGAAGTACAAGGAGATCTTCTTCGACCAGAGCAAGAACGGCTACGCCGGCTACATCGACGGCGGCGCCAGCCAGGAGGAGTTCTACAAGTTCATCAAGCCCATCCTGGAGAAGATGGACGGCACCGAGGAGCTGCTGGTGAAGCTGAACCGGGAGGACCTGCTGCGGAAGCAGCGGACCTTCGACAACGGCAGCATCCCCCACCAGATCCACCTGGGCGAGCTGCACGCCATCCTGCGGCGGCAGGAGGACTTCTACCCCTTCCTGAAGGACAACCGGGAGAAGATCGAGAAGATCCTGACCTTCCGGATCCCCTACTACGTGGGCCCCCTGGCCCGGGGCAACAGCCGGTTCGCCTGGATGACCCGGAAGAGCGAGGAGACCATCACCCCCTGGAACTTCGAGGAGGTGGTGGACAAGGGCGCCAGCGCCCAGAGCTTCATCGAGCGGATGACCAACTTCGACAAGAACCTGCCCAACGAGAAGGTGCTGCCCAAGCACAGCCTGCTGTACGAGTACTTCACCGTGTACAACGAGCTGACCAAGGTGAAGTACGTGACCGAGGGCATGCGGAAGCCCGCCTTCCTGAGCGGCGAGCAGAAGAAGGCCATCGTGGACCTGCTGTTCAAGACCAACCGGAAGGTGACCGTGAAGCAGCTGAAGGAGGACTACTTCAAGAAGATCGAGTGCTTCGACAGCGTGGAGATCAGCGGCGTGGAGGACCGGTTCAACGCCAGCCTGGGCACCTACCACGACCTGCTGAAGATCATCAAGGACAAGGACTTCCTGGACAACGAGGAGAACGAGGACATCCTGGAGGACATCGTGCTGACCCTGACCCTGTTCGAGGACCGGGAGATGATCGAGGAGCGGCTGAAGACCTACGCCCACCTGTTCGACGACAAGGTGATGAAGCAGCTGAAGCGGCGGCGGTACACCGGCTGGGGCCGGCTGAGCCGGAAGCTGATCAACGGCATCCGGGACAAGCAGAGCGGCAAGACCATCCTGGACTTCCTGAAGAGCGACGGCTTCGCCAACCGGAACTTCATGCAGCTGATCCACGACGACAGCCTGACCTTCAAGGAGGACATCCAGAAGGCCCAGGTGAGCGGCCAGGGCGACAGCCTGCACGAGCACATCGCCAACCTGGCCGGCAGCCCCGCCATCAAGAAGGGCATCCTGCAGACCGTGAAGGTGGTGGACGAGCTGGTGAAGGTGATGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACATCGTGATCGAGATGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACAGCCGGGAGCGGATGAAGCGGATCGAGGAGGGCATCAAGGAGCTGGGCAGCCAGATCCTGAAGGAGCACCCCGTGGAGAACACCCAGCTGCAGAACGAGAAGCTGTACCTGTACTACCTGCAGAACGGCCGGGACATGTACGTGGACCAGGAGCTGGACATCAACCGGCTGAGCGACTACGACGTGGACCACATCGTGCCCCAGAGCTTCCTGAAGGACGACAGCATCGACAACAAGGTGCTGACCCGGAGCGACAAGAACCGGGGCAAGAGCGACAACGTGCCCAGCGAGGAGGTGGTGAAGAAGATGAAGAACTACTGGCGGCAGCTGCTGAACGCCAAGCTGATCACCCAGCGGAAGTTCGACAACCTGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCTGAGCGAGCTGGACAAGGCCGGCTTCATCAAGCGGCAGCTGGTGGAGACCCGGCAGATCACCAAGCACGTGGCCCAGATCCTGGACAGCCGGATGAACACCAAGTACGACGAGAACGACAAGCTGATCCGGGAGGTGAAGGTGATCACCCTGAAGAGCAAGCTGGTGAGCGACTTCCGGAAGGACTTCCAGTTCTACAAGGTGCGGGAGATCAACAACTACCACCACGCCCACGACGCCTACCTGAACGCCGTGGTGGGCACCGCCCTGATCAAGAAGTACCCCAAGCTGGAGAGCGAGTTCGTGTACGGCGACTACAAGGTGTACGACGTGCGGAAGATGATCGCCAAGAGCGAGCAGGAGATCGGCAAGGCCACCGCCAAGTACTTCTTCTACAGCAACATCATGAACTTCTTCAAGACCGAGATCACCCTGGCCAACGGCGAGATCCGGAAGCGGCCCCTGATCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGATCGTGTGGGACAAGGGCCGGGACTTCGCCACCGTGCGGAAGGTGCTGAGCATGCCCCAGGTGAACATCGTGAAGAAGACCGAGGTGCAGACCGGCGGCTTCAGCAAGGAGAGCATCCTGCCCAAGCGGAACAGCGACAAGCTGATCGCCCGGAAGAAGGACTGGGACCCCAAGAAGTACGGCGGCTTCGACAGCCCCACCGTGGCCTACAGCGTGCTGGTGGTGGCCAAGGTGGAGAAGGGCAAGAGCAAGAAGCTGAAGAGCGTGAAGGAGCTGCTGGGCATCACCATCATGGAGCGGAGCAGCTTCGAGAAGAACCCCATCGACTTCCTGGAGGCCAAGGGCTACAAGGAGGTGAAGAAGGACCTGATCATCAAGCTGCCCAAGTACAGCCTGTTCGAGCTGGAGAACGGCCGGAAGCGGATGCTGGCCAGCGCCGGCGAGCTGCAGAAGGGCAACGAGCTGGCCCTGCCCAGCAAGTACGTGAACTTCCTGTACCTGGCCAGCCACTACGAGAAGCTGAAGGGCAGCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCTGTTCGTGGAGCAGCACAAGCACTACCTGGACGAGATCATCGAGCAGATCAGCGAGTTCAGCAAGCGGGTGATCCTGGCCGACGCCAACCTGGACAAGGTGCTGAGCGCCTACAACAAGCACCGGGACAAGCCCATCCGGGAGCAGGCCGAGAACATCATCCACCTGTTCACCCTGACCAACCTGGGCGCCCCCGCCGCCTTCAAGTACTTCGACACCACCATCGACCGGAAGCGGTACACCAGCACCAAGGAGGTGCTGGACGCCACCCTGATCCACCAGAGCATCACCGGCCTGTACGAGACCCGGATCGACCTGAGCCAGCTGGGCGGCGACTGA
53 使用表4之低A密碼子之Cas9切口酶ORF (無起始或終止密碼子；適於包括在融合蛋白編碼序列中) GACAAGAAGTACTCCATCGGCCTGGCCATCGGCACCAACTCCGTGGGCTGGGCCGTGATCACCGACGAGTACAAGGTGCCCTCCAAGAAGTTCAAGGTGCTGGGCAACACCGACCGGCACTCCATCAAGAAGAACCTGATCGGCGCCCTGCTGTTCGACTCCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCTGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGTACACCCGGCGGAAGAACCGGATCTGCTACCTGCAGGAGATCTTCTCCAACGAGATGGCCAAGGTGGACGACTCCTTCTTCCACCGGCTGGAGGAGTCCTTCCTGGTGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCATCTTCGGCAACATCGTGGACGAGGTGGCCTACCACGAGAAGTACCCCACCATCTACCACCTGCGGAAGAAGCTGGTGGACTCCACCGACAAGGCCGACCTGCGGCTGATCTACCTGGCCCTGGCCCACATGATCAAGTTCCGGGGCCACTTCCTGATCGAGGGCGACCTGAACCCCGACAACTCCGACGTGGACAAGCTGTTCATCCAGCTGGTGCAGACCTACAACCAGCTGTTCGAGGAGAACCCCATCAACGCCTCCGGCGTGGACGCCAAGGCCATCCTGTCCGCCCGGCTGTCCAAGTCCCGGCGGCTGGAGAACCTGATCGCCCAGCTGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCTGTTCGGCAACCTGATCGCCCTGTCCCTGGGCCTGACCCCCAACTTCAAGTCCAACTTCGACCTGGCCGAGGACGCCAAGCTGCAGCTGTCCAAGGACACCTACGACGACGACCTGGACAACCTGCTGGCCCAGATCGGCGACCAGTACGCCGACCTGTTCCTGGCCGCCAAGAACCTGTCCGACGCCATCCTGCTGTCCGACATCCTGCGGGTGAACACCGAGATCACCAAGGCCCCCCTGTCCGCCTCCATGATCAAGCGGTACGACGAGCACCACCAGGACCTGACCCTGCTGAAGGCCCTGGTGCGGCAGCAGCTGCCCGAGAAGTACAAGGAGATCTTCTTCGACCAGTCCAAGAACGGCTACGCCGGCTACATCGACGGCGGCGCCTCCCAGGAGGAGTTCTACAAGTTCATCAAGCCCATCCTGGAGAAGATGGACGGCACCGAGGAGCTGCTGGTGAAGCTGAACCGGGAGGACCTGCTGCGGAAGCAGCGGACCTTCGACAACGGCTCCATCCCCCACCAGATCCACCTGGGCGAGCTGCACGCCATCCTGCGGCGGCAGGAGGACTTCTACCCCTTCCTGAAGGACAACCGGGAGAAGATCGAGAAGATCCTGACCTTCCGGATCCCCTACTACGTGGGCCCCCTGGCCCGGGGCAACTCCCGGTTCGCCTGGATGACCCGGAAGTCCGAGGAGACCATCACCCCCTGGAACTTCGAGGAGGTGGTGGACAAGGGCGCCTCCGCCCAGTCCTTCATCGAGCGGATGACCAACTTCGACAAGAACCTGCCCAACGAGAAGGTGCTGCCCAAGCACTCCCTGCTGTACGAGTACTTCACCGTGTACAACGAGCTGACCAAGGTGAAGTACGTGACCGAGGGCATGCGGAAGCCCGCCTTCCTGTCCGGCGAGCAGAAGAAGGCCATCGTGGACCTGCTGTTCAAGACCAACCGGAAGGTGACCGTGAAGCAGCTGAAGGAGGACTACTTCAAGAAGATCGAGTGCTTCGACTCCGTGGAGATCTCCGGCGTGGAGGACCGGTTCAACGCCTCCCTGGGCACCTACCACGACCTGCTGAAGATCATCAAGGACAAGGACTTCCTGGACAACGAGGAGAACGAGGACATCCTGGAGGACATCGTGCTGACCCTGACCCTGTTCGAGGACCGGGAGATGATCGAGGAGCGGCTGAAGACCTACGCCCACCTGTTCGACGACAAGGTGATGAAGCAGCTGAAGCGGCGGCGGTACACCGGCTGGGGCCGGCTGTCCCGGAAGCTGATCAACGGCATCCGGGACAAGCAGTCCGGCAAGACCATCCTGGACTTCCTGAAGTCCGACGGCTTCGCCAACCGGAACTTCATGCAGCTGATCCACGACGACTCCCTGACCTTCAAGGAGGACATCCAGAAGGCCCAGGTGTCCGGCCAGGGCGACTCCCTGCACGAGCACATCGCCAACCTGGCCGGCTCCCCCGCCATCAAGAAGGGCATCCTGCAGACCGTGAAGGTGGTGGACGAGCTGGTGAAGGTGATGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACATCGTGATCGAGATGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACTCCCGGGAGCGGATGAAGCGGATCGAGGAGGGCATCAAGGAGCTGGGCTCCCAGATCCTGAAGGAGCACCCCGTGGAGAACACCCAGCTGCAGAACGAGAAGCTGTACCTGTACTACCTGCAGAACGGCCGGGACATGTACGTGGACCAGGAGCTGGACATCAACCGGCTGTCCGACTACGACGTGGACCACATCGTGCCCCAGTCCTTCCTGAAGGACGACTCCATCGACAACAAGGTGCTGACCCGGTCCGACAAGAACCGGGGCAAGTCCGACAACGTGCCCTCCGAGGAGGTGGTGAAGAAGATGAAGAACTACTGGCGGCAGCTGCTGAACGCCAAGCTGATCACCCAGCGGAAGTTCGACAACCTGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCTGTCCGAGCTGGACAAGGCCGGCTTCATCAAGCGGCAGCTGGTGGAGACCCGGCAGATCACCAAGCACGTGGCCCAGATCCTGGACTCCCGGATGAACACCAAGTACGACGAGAACGACAAGCTGATCCGGGAGGTGAAGGTGATCACCCTGAAGTCCAAGCTGGTGTCCGACTTCCGGAAGGACTTCCAGTTCTACAAGGTGCGGGAGATCAACAACTACCACCACGCCCACGACGCCTACCTGAACGCCGTGGTGGGCACCGCCCTGATCAAGAAGTACCCCAAGCTGGAGTCCGAGTTCGTGTACGGCGACTACAAGGTGTACGACGTGCGGAAGATGATCGCCAAGTCCGAGCAGGAGATCGGCAAGGCCACCGCCAAGTACTTCTTCTACTCCAACATCATGAACTTCTTCAAGACCGAGATCACCCTGGCCAACGGCGAGATCCGGAAGCGGCCCCTGATCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGATCGTGTGGGACAAGGGCCGGGACTTCGCCACCGTGCGGAAGGTGCTGTCCATGCCCCAGGTGAACATCGTGAAGAAGACCGAGGTGCAGACCGGCGGCTTCTCCAAGGAGTCCATCCTGCCCAAGCGGAACTCCGACAAGCTGATCGCCCGGAAGAAGGACTGGGACCCCAAGAAGTACGGCGGCTTCGACTCCCCCACCGTGGCCTACTCCGTGCTGGTGGTGGCCAAGGTGGAGAAGGGCAAGTCCAAGAAGCTGAAGTCCGTGAAGGAGCTGCTGGGCATCACCATCATGGAGCGGTCCTCCTTCGAGAAGAACCCCATCGACTTCCTGGAGGCCAAGGGCTACAAGGAGGTGAAGAAGGACCTGATCATCAAGCTGCCCAAGTACTCCCTGTTCGAGCTGGAGAACGGCCGGAAGCGGATGCTGGCCTCCGCCGGCGAGCTGCAGAAGGGCAACGAGCTGGCCCTGCCCTCCAAGTACGTGAACTTCCTGTACCTGGCCTCCCACTACGAGAAGCTGAAGGGCTCCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCTGTTCGTGGAGCAGCACAAGCACTACCTGGACGAGATCATCGAGCAGATCTCCGAGTTCTCCAAGCGGGTGATCCTGGCCGACGCCAACCTGGACAAGGTGCTGTCCGCCTACAACAAGCACCGGGACAAGCCCATCCGGGAGCAGGCCGAGAACATCATCCACCTGTTCACCCTGACCAACCTGGGCGCCCCCGCCGCCTTCAAGTACTTCGACACCACCATCGACCGGAAGCGGTACACCTCCACCAAGGAGGTGCTGGACGCCACCCTGATCCACCAGTCCATCACCGGCCTGTACGAGACCCGGATCGACCTGTCCCAGCTGGGCGGCGACGGCGGCGGCTCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGTG
54 使用表4之低A密碼子之Cas9切口酶ORF (無NLS且無起始或終止密碼子；適於包括在融合蛋白編碼序列中) GACAAGAAGTACTCCATCGGCCTGGCCATCGGCACCAACTCCGTGGGCTGGGCCGTGATCACCGACGAGTACAAGGTGCCCTCCAAGAAGTTCAAGGTGCTGGGCAACACCGACCGGCACTCCATCAAGAAGAACCTGATCGGCGCCCTGCTGTTCGACTCCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCTGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGTACACCCGGCGGAAGAACCGGATCTGCTACCTGCAGGAGATCTTCTCCAACGAGATGGCCAAGGTGGACGACTCCTTCTTCCACCGGCTGGAGGAGTCCTTCCTGGTGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCATCTTCGGCAACATCGTGGACGAGGTGGCCTACCACGAGAAGTACCCCACCATCTACCACCTGCGGAAGAAGCTGGTGGACTCCACCGACAAGGCCGACCTGCGGCTGATCTACCTGGCCCTGGCCCACATGATCAAGTTCCGGGGCCACTTCCTGATCGAGGGCGACCTGAACCCCGACAACTCCGACGTGGACAAGCTGTTCATCCAGCTGGTGCAGACCTACAACCAGCTGTTCGAGGAGAACCCCATCAACGCCTCCGGCGTGGACGCCAAGGCCATCCTGTCCGCCCGGCTGTCCAAGTCCCGGCGGCTGGAGAACCTGATCGCCCAGCTGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCTGTTCGGCAACCTGATCGCCCTGTCCCTGGGCCTGACCCCCAACTTCAAGTCCAACTTCGACCTGGCCGAGGACGCCAAGCTGCAGCTGTCCAAGGACACCTACGACGACGACCTGGACAACCTGCTGGCCCAGATCGGCGACCAGTACGCCGACCTGTTCCTGGCCGCCAAGAACCTGTCCGACGCCATCCTGCTGTCCGACATCCTGCGGGTGAACACCGAGATCACCAAGGCCCCCCTGTCCGCCTCCATGATCAAGCGGTACGACGAGCACCACCAGGACCTGACCCTGCTGAAGGCCCTGGTGCGGCAGCAGCTGCCCGAGAAGTACAAGGAGATCTTCTTCGACCAGTCCAAGAACGGCTACGCCGGCTACATCGACGGCGGCGCCTCCCAGGAGGAGTTCTACAAGTTCATCAAGCCCATCCTGGAGAAGATGGACGGCACCGAGGAGCTGCTGGTGAAGCTGAACCGGGAGGACCTGCTGCGGAAGCAGCGGACCTTCGACAACGGCTCCATCCCCCACCAGATCCACCTGGGCGAGCTGCACGCCATCCTGCGGCGGCAGGAGGACTTCTACCCCTTCCTGAAGGACAACCGGGAGAAGATCGAGAAGATCCTGACCTTCCGGATCCCCTACTACGTGGGCCCCCTGGCCCGGGGCAACTCCCGGTTCGCCTGGATGACCCGGAAGTCCGAGGAGACCATCACCCCCTGGAACTTCGAGGAGGTGGTGGACAAGGGCGCCTCCGCCCAGTCCTTCATCGAGCGGATGACCAACTTCGACAAGAACCTGCCCAACGAGAAGGTGCTGCCCAAGCACTCCCTGCTGTACGAGTACTTCACCGTGTACAACGAGCTGACCAAGGTGAAGTACGTGACCGAGGGCATGCGGAAGCCCGCCTTCCTGTCCGGCGAGCAGAAGAAGGCCATCGTGGACCTGCTGTTCAAGACCAACCGGAAGGTGACCGTGAAGCAGCTGAAGGAGGACTACTTCAAGAAGATCGAGTGCTTCGACTCCGTGGAGATCTCCGGCGTGGAGGACCGGTTCAACGCCTCCCTGGGCACCTACCACGACCTGCTGAAGATCATCAAGGACAAGGACTTCCTGGACAACGAGGAGAACGAGGACATCCTGGAGGACATCGTGCTGACCCTGACCCTGTTCGAGGACCGGGAGATGATCGAGGAGCGGCTGAAGACCTACGCCCACCTGTTCGACGACAAGGTGATGAAGCAGCTGAAGCGGCGGCGGTACACCGGCTGGGGCCGGCTGTCCCGGAAGCTGATCAACGGCATCCGGGACAAGCAGTCCGGCAAGACCATCCTGGACTTCCTGAAGTCCGACGGCTTCGCCAACCGGAACTTCATGCAGCTGATCCACGACGACTCCCTGACCTTCAAGGAGGACATCCAGAAGGCCCAGGTGTCCGGCCAGGGCGACTCCCTGCACGAGCACATCGCCAACCTGGCCGGCTCCCCCGCCATCAAGAAGGGCATCCTGCAGACCGTGAAGGTGGTGGACGAGCTGGTGAAGGTGATGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACATCGTGATCGAGATGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACTCCCGGGAGCGGATGAAGCGGATCGAGGAGGGCATCAAGGAGCTGGGCTCCCAGATCCTGAAGGAGCACCCCGTGGAGAACACCCAGCTGCAGAACGAGAAGCTGTACCTGTACTACCTGCAGAACGGCCGGGACATGTACGTGGACCAGGAGCTGGACATCAACCGGCTGTCCGACTACGACGTGGACCACATCGTGCCCCAGTCCTTCCTGAAGGACGACTCCATCGACAACAAGGTGCTGACCCGGTCCGACAAGAACCGGGGCAAGTCCGACAACGTGCCCTCCGAGGAGGTGGTGAAGAAGATGAAGAACTACTGGCGGCAGCTGCTGAACGCCAAGCTGATCACCCAGCGGAAGTTCGACAACCTGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCTGTCCGAGCTGGACAAGGCCGGCTTCATCAAGCGGCAGCTGGTGGAGACCCGGCAGATCACCAAGCACGTGGCCCAGATCCTGGACTCCCGGATGAACACCAAGTACGACGAGAACGACAAGCTGATCCGGGAGGTGAAGGTGATCACCCTGAAGTCCAAGCTGGTGTCCGACTTCCGGAAGGACTTCCAGTTCTACAAGGTGCGGGAGATCAACAACTACCACCACGCCCACGACGCCTACCTGAACGCCGTGGTGGGCACCGCCCTGATCAAGAAGTACCCCAAGCTGGAGTCCGAGTTCGTGTACGGCGACTACAAGGTGTACGACGTGCGGAAGATGATCGCCAAGTCCGAGCAGGAGATCGGCAAGGCCACCGCCAAGTACTTCTTCTACTCCAACATCATGAACTTCTTCAAGACCGAGATCACCCTGGCCAACGGCGAGATCCGGAAGCGGCCCCTGATCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGATCGTGTGGGACAAGGGCCGGGACTTCGCCACCGTGCGGAAGGTGCTGTCCATGCCCCAGGTGAACATCGTGAAGAAGACCGAGGTGCAGACCGGCGGCTTCTCCAAGGAGTCCATCCTGCCCAAGCGGAACTCCGACAAGCTGATCGCCCGGAAGAAGGACTGGGACCCCAAGAAGTACGGCGGCTTCGACTCCCCCACCGTGGCCTACTCCGTGCTGGTGGTGGCCAAGGTGGAGAAGGGCAAGTCCAAGAAGCTGAAGTCCGTGAAGGAGCTGCTGGGCATCACCATCATGGAGCGGTCCTCCTTCGAGAAGAACCCCATCGACTTCCTGGAGGCCAAGGGCTACAAGGAGGTGAAGAAGGACCTGATCATCAAGCTGCCCAAGTACTCCCTGTTCGAGCTGGAGAACGGCCGGAAGCGGATGCTGGCCTCCGCCGGCGAGCTGCAGAAGGGCAACGAGCTGGCCCTGCCCTCCAAGTACGTGAACTTCCTGTACCTGGCCTCCCACTACGAGAAGCTGAAGGGCTCCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCTGTTCGTGGAGCAGCACAAGCACTACCTGGACGAGATCATCGAGCAGATCTCCGAGTTCTCCAAGCGGGTGATCCTGGCCGACGCCAACCTGGACAAGGTGCTGTCCGCCTACAACAAGCACCGGGACAAGCCCATCCGGGAGCAGGCCGAGAACATCATCCACCTGTTCACCCTGACCAACCTGGGCGCCCCCGCCGCCTTCAAGTACTTCGACACCACCATCGACCGGAAGCGGTACACCTCCACCAAGGAGGTGCTGGACGCCACCCTGATCCACCAGTCCATCACCGGCCTGTACGAGACCCGGATCGACCTGTCCCAGCTGGGCGGCGAC
55 使用表4之低A密碼子之Cas9切口酶ORF，具有兩個C末端NLS序列(無起始或終止密碼子；適於包括在融合蛋白編碼序列中) GACAAGAAGTACTCCATCGGCCTGGCCATCGGCACCAACTCCGTGGGCTGGGCCGTGATCACCGACGAGTACAAGGTGCCCTCCAAGAAGTTCAAGGTGCTGGGCAACACCGACCGGCACTCCATCAAGAAGAACCTGATCGGCGCCCTGCTGTTCGACTCCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCTGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGTACACCCGGCGGAAGAACCGGATCTGCTACCTGCAGGAGATCTTCTCCAACGAGATGGCCAAGGTGGACGACTCCTTCTTCCACCGGCTGGAGGAGTCCTTCCTGGTGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCATCTTCGGCAACATCGTGGACGAGGTGGCCTAC CACGAGAAGTACCCCACCATCTACCACCTGCGGAAGAAGCTGGTGGACTCCACCGACAAGGCCGACCTGCGGCTGATCTACCTGGCCCTGGCCCACATGATCAAGTTCCGGGGCCACTTCCTGATCGAGGGCGACCTGAACCCCGACAACTCCGACGTGGACAAGCTGTTCATCCAGCTGGTGCAGACCTACAACCAGCTGTTCGAGGAGAACCCCATCAACGCCTCCGGCGTGGACGCCAAGGCCATCCTGTCCGCCCGGCTGTCCAAGTCCCGGCGGCTGGAGAACCTGATCGCCCAGCTGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCTGTTCGGCAACCTGATCGCCCTGTCCCTGGGCCTGACCCCCAACTTCAAGTCCAACTTCGACCTGGCCGAGGACGCCAAGCTGCAGCTGTCCAAGGACACCTACGACGACGACCTGGACAACCTGCTGGCCCAGATCGGCGACCAGTACGCCGACCTGTTCCTGGCCGCCAAGAACCTGTCCGACGCCATCCTGCTGTCCGACATCCTGCGGGTGAACACCGAGATCACCAAGGCCCCCCTGTCCGCCTCCATGATCAAGCGGTACGACGAGCACCACCAGGACCTGACCCTGCTGAAGGCCCTGGTGCGGCAGCAGCTGCCCGAGAAGTACAAGGAGATCTTCTTCGACCAGTCCAAGAACGGCTACGCCGGCTACATCGACGGCGGCGCCTCCCAGGAGGAGTTCTACAAGTTCATCAAGCCCATCCTGGAGAAGATGGACGGCACCGAGGAGCTGCTGGTGAAGCTGAACCGGGAGGACCTGCTGCGGAAGCAGCGGACCTTCGACAACGGCTCCATCCCCCACCAGATCCACCTGGGCGAGCTGCACGCCATCCTGCGGCGGCAGGAGGACTTCTACCCCTTCCTGAAGGACAACCGGGAGAAGATCGAGAAGATCCTGACCTTCCGGATCCCCTACTACGTGGGCCCCCTGGCCCGGGGCAACTCCCGGTTCGCCTGGATGACCCGGAAGTCCGAGGAGACCATCACCCCCTGGAACTTCGAGGAGGTGGTGGACAAGGGCGCCTCCGCCCAGTCCTTCATCGAGCGGATGACCAACTTCGACAAGAACCTGCCCAACGAGAAGGTGCTGCCCAAGCACTCCCTGCTGTACGAGTACTTCACCGTGTACAACGAGCTGACCAAGGTGAAGTACGTGACCGAGGGCATGCGGAAGCCCGCCTTCCTGTCCGGCGAGCAGAAGAAGGCCATCGTGGACCTGCTGTTCAAGACCAACCGGAAGGTGACCGTGAAGCAGCTGAAGGAGGACTACTTCAAGAAGATCGAGTGCTTCGACTCCGTGGAGATCTCCGGCGTGGAGGACCGGTTCAACGCCTCCCTGGGCACCTACCACGACCTGCTGAAGATCATCAAGGACAAGGACTTCCTGGACAACGAGGAGAACGAGGACATCCTGGAGGACATCGTGCTGACCCTGACCCTGTTCGAGGACCGGGAGATGATCGAGGAGCGGCTGAAGACCTACGCCCACCTGTTCGACGACAAGGTGATGAAGCAGCTGAAGCGGCGGCGGTACACCGGCTGGGGCCGGCTGTCCCGGAAGCTGATCAACGGCATCCGGGACAAGCAGTCCGGCAAGACCATCCTGGACTTCCTGAAGTCCGACGGCTTCGCCAACCGGAACTTCATGCAGCTGATCCACGACGACTCCCTGACCTTCAAGGAGGACATCCAGAAGGCCCAGGTGTCCGGCCAGGGCGACTCCCTGCACGAGCACATCGCCAACCTGGCCGGCTCCCCCGCCATCAAGAAGGGCATCCTGCAGACCGTGAAGGTGGTGGACGAGCTGGTGAAGGTGATGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACATCGTGATCGAGATGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACTCCCGGGAGCGGATGAAGCGGATCGAGGAGGGCATCAAGGAGCTGGGCTCCCAGATCCTGAAGGAGCACCCCGTGGAGAACACCCAGCTGCAGAACGAGAAGCTGTACCTGTACTACCTGCAGAACGGCCGGGACATGTACGTGGACCAGGAGCTGGACATCAACCGGCTGTCCGACTACGACGTGGACCACATCGTGCCCCAGTCCTTCCTGAAGGACGACTCCATCGACAACAAGGTGCTGACCCGGTCCGACAAGAACCGGGGCAAGTCCGACAACGTGCCCTCCGAGGAGGTGGTGAAGAAGATGAAGAACTACTGGCGGCAGCTGCTGAACGCCAAGCTGATCACCCAGCGGAAGTTCGACAACCTGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCTGTCCGAGCTGGACAAGGCCGGCTTCATCAAGCGGCAGCTGGTGGAGACCCGGCAGATCACCAAGCACGTGGCCCAGATCCTGGACTCCCGGATGAACACCAAGTACGACGAGAACGACAAGCTGATCCGGGAGGTGAAGGTGATCACCCTGAAGTCCAAGCTGGTGTCCGACTTCCGGAAGGACTTCCAGTTCTACAAGGTGCGGGAGATCAACAACTACCACCACGCCCACGACGCCTACCTGAACGCCGTGGTGGGCACCGCCCTGATCAAGAAGTACCCCAAGCTGGAGTCCGAGTTCGTGTACGGCGACTACAAGGTGTACGACGTGCGGAAGATGATCGCCAAGTCCGAGCAGGAGATCGGCAAGGCCACCGCCAAGTACTTCTTCTACTCCAACATCATGAACTTCTTCAAGACCGAGATCACCCTGGCCAACGGCGAGATCCGGAAGCGGCCCCTGATCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGATCGTGTGGGACAAGGGCCGGGACTTCGCCACCGTGCGGAAGGTGCTGTCCATGCCCCAGGTGAACATCGTGAAGAAGACCGAGGTGCAGACCGGCGGCTTCTCCAAGGAGTCCATCCTGCCCAAGCGGAACTCCGACAAGCTGATCGCCCGGAAGAAGGACTGGGACCCCAAGAAGTACGGCGGCTTCGACTCCCCCACCGTGGCCTACTCCGTGCTGGTGGTGGCCAAGGTGGAGAAGGGCAAGTCCAAGAAGCTGAAGTCCGTGAAGGAGCTGCTGGGCATCACCATCATGGAGCGGTCCTCCTTCGAGAAGAACCCCATCGACTTCCTGGAGGCCAAGGGCTACAAGGAGGTGAAGAAGGACCTGATCATCAAGCTGCCCAAGTACTCCCTGTTCGAGCTGGAGAACGGCCGGAAGCGGATGCTGGCCTCCGCCGGCGAGCTGCAGAAGGGCAACGAGCTGGCCCTGCCCTCCAAGTACGTGAACTTCCTGTACCTGGCCTCCCACTACGAGAAGCTGAAGGGCTCCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCTGTTCGTGGAGCAGCACAAGCACTACCTGGACGAGATCATCGAGCAGATCTCCGAGTTCTCCAAGCGGGTGATCCTGGCCGACGCCAACCTGGACAAGGTGCTGTCCGCCTACAACAAGCACCGGGACAAGCCCATCCGGGAGCAGGCCGAGAACATCATCCACCTGTTCACCCTGACCAACCTGGGCGCCCCCGCCGCCTTCAAGTACTTCGACACCACCATCGACCGGAAGCGGTACACCTCCACCAAGGAGGTGCTGGACGCCACCCTGATCCACCAGTCCATCACCGGCCTGTACGAGACCCGGATCGACCTGTCCCAGCTGGGCGGCGACGGCTCCGGCTCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGTGGACGGCTCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGTGGACTCCGGC
56 使用表4之低A/U密碼子之Cas9切口酶ORF (無起始或終止密碼子；適於包括在融合蛋白編碼序列中) GACAAGAAGTACAGCATCGGCCTGGCCATCGGCACCAACAGCGTGGGCTGGGCCGTGATCACCGACGAGTACAAGGTGCCCAGCAAGAAGTTCAAGGTGCTGGGCAACACCGACCGGCACAGCATCAAGAAGAACCTGATCGGCGCCCTGCTGTTCGACAGCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCTGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGTACACCCGGCGGAAGAACCGGATCTGCTACCTGCAGGAGATCTTCAGCAACGAGATGGCCAAGGTGGACGACAGCTTCTTCCACCGGCTGGAGGAGAGCTTCCTGGTGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCATCTTCGGCAACATCGTGGACGAGGTGGCCTACCACGAGAAGTACCCCACCATCTACCACCTGCGGAAGAAGCTGGTGGACAGCACCGACAAGGCCGACCTGCGGCTGATCTACCTGGCCCTGGCCCACATGATCAAGTTCCGGGGCCACTTCCTGATCGAGGGCGACCTGAACCCCGACAACAGCGACGTGGACAAGCTGTTCATCCAGCTGGTGCAGACCTACAACCAGCTGTTCGAGGAGAACCCCATCAACGCCAGCGGCGTGGACGCCAAGGCCATCCTGAGCGCCCGGCTGAGCAAGAGCCGGCGGCTGGAGAACCTGATCGCCCAGCTGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCTGTTCGGCAACCTGATCGCCCTGAGCCTGGGCCTGACCCCCAACTTCAAGAGCAACTTCGACCTGGCCGAGGACGCCAAGCTGCAGCTGAGCAAGGACACCTACGACGACGACCTGGACAACCTGCTGGCCCAGATCGGCGACCAGTACGCCGACCTGTTCCTGGCCGCCAAGAACCTGAGCGACGCCATCCTGCTGAGCGACATCCTGCGGGTGAACACCGAGATCACCAAGGCCCCCCTGAGCGCCAGCATGATCAAGCGGTACGACGAGCACCACCAGGACCTGACCCTGCTGAAGGCCCTGGTGCGGCAGCAGCTGCCCGAGAAGTACAAGGAGATCTTCTTCGACCAGAGCAAGAACGGCTACGCCGGCTACATCGACGGCGGCGCCAGCCAGGAGGAGTTCTACAAGTTCATCAAGCCCATCCTGGAGAAGATGGACGGCACCGAGGAGCTGCTGGTGAAGCTGAACCGGGAGGACCTGCTGCGGAAGCAGCGGACCTTCGACAACGGCAGCATCCCCCACCAGATCCACCTGGGCGAGCTGCACGCCATCCTGCGGCGGCAGGAGGACTTCTACCCCTTCCTGAAGGACAACCGGGAGAAGATCGAGAAGATCCTGACCTTCCGGATCCCCTACTACGTGGGCCCCCTGGCCCGGGGCAACAGCCGGTTCGCCTGGATGACCCGGAAGAGCGAGGAGACCATCACCCCCTGGAACTTCGAGGAGGTGGTGGACAAGGGCGCCAGCGCCCAGAGCTTCATCGAGCGGATGACCAACTTCGACAAGAACCTGCCCAACGAGAAGGTGCTGCCCAAGCACAGCCTGCTGTACGAGTACTTCACCGTGTACAACGAGCTGACCAAGGTGAAGTACGTGACCGAGGGCATGCGGAAGCCCGCCTTCCTGAGCGGCGAGCAGAAGAAGGCCATCGTGGACCTGCTGTTCAAGACCAACCGGAAGGTGACCGTGAAGCAGCTGAAGGAGGACTACTTCAAGAAGATCGAGTGCTTCGACAGCGTGGAGATCAGCGGCGTGGAGGACCGGTTCAACGCCAGCCTGGGCACCTACCACGACCTGCTGAAGATCATCAAGGACAAGGACTTCCTGGACAACGAGGAGAACGAGGACATCCTGGAGGACATCGTGCTGACCCTGACCCTGTTCGAGGACCGGGAGATGATCGAGGAGCGGCTGAAGACCTACGCCCACCTGTTCGACGACAAGGTGATGAAGCAGCTGAAGCGGCGGCGGTACACCGGCTGGGGCCGGCTGAGCCGGAAGCTGATCAACGGCATCCGGGACAAGCAGAGCGGCAAGACCATCCTGGACTTCCTGAAGAGCGACGGCTTCGCCAACCGGAACTTCATGCAGCTGATCCACGACGACAGCCTGACCTTCAAGGAGGACATCCAGAAGGCCCAGGTGAGCGGCCAGGGCGACAGCCTGCACGAGCACATCGCCAACCTGGCCGGCAGCCCCGCCATCAAGAAGGGCATCCTGCAGACCGTGAAGGTGGTGGACGAGCTGGTGAAGGTGATGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACATCGTGATCGAGATGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACAGCCGGGAGCGGATGAAGCGGATCGAGGAGGGCATCAAGGAGCTGGGCAGCCAGATCCTGAAGGAGCACCCCGTGGAGAACACCCAGCTGCAGAACGAGAAGCTGTACCTGTACTACCTGCAGAACGGCCGGGACATGTACGTGGACCAGGAGCTGGACATCAACCGGCTGAGCGACTACGACGTGGACCACATCGTGCCCCAGAGCTTCCTGAAGGACGACAGCATCGACAACAAGGTGCTGACCCGGAGCGACAAGAACCGGGGCAAGAGCGACAACGTGCCCAGCGAGGAGGTGGTGAAGAAGATGAAGAACTACTGGCGGCAGCTGCTGAACGCCAAGCTGATCACCCAGCGGAAGTTCGACAACCTGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCTGAGCGAGCTGGACAAGGCCGGCTTCATCAAGCGGCAGCTGGTGGAGACCCGGCAGATCACCAAGCACGTGGCCCAGATCCTGGACAGCCGGATGAACACCAAGTACGACGAGAACGACAAGCTGATCCGGGAGGTGAAGGTGATCACCCTGAAGAGCAAGCTGGTGAGCGACTTCCGGAAGGACTTCCAGTTCTACAAGGTGCGGGAGATCAACAACTACCACCACGCCCACGACGCCTACCTGAACGCCGTGGTGGGCACCGCCCTGATCAAGAAGTACCCCAAGCTGGAGAGCGAGTTCGTGTACGGCGACTACAAGGTGTACGACGTGCGGAAGATGATCGCCAAGAGCGAGCAGGAGATCGGCAAGGCCACCGCCAAGTACTTCTTCTACAGCAACATCATGAACTTCTTCAAGACCGAGATCACCCTGGCCAACGGCGAGATCCGGAAGCGGCCCCTGATCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGATCGTGTGGGACAAGGGCCGGGACTTCGCCACCGTGCGGAAGGTGCTGAGCATGCCCCAGGTGAACATCGTGAAGAAGACCGAGGTGCAGACCGGCGGCTTCAGCAAGGAGAGCATCCTGCCCAAGCGGAACAGCGACAAGCTGATCGCCCGGAAGAAGGACTGGGACCCCAAGAAGTACGGCGGCTTCGACAGCCCCACCGTGGCCTACAGCGTGCTGGTGGTGGCCAAGGTGGAGAAGGGCAAGAGCAAGAAGCTGAAGAGCGTGAAGGAGCTGCTGGGCATCACCATCATGGAGCGGAGCAGCTTCGAGAAGAACCCCATCGACTTCCTGGAGGCCAAGGGCTACAAGGAGGTGAAGAAGGACCTGATCATCAAGCTGCCCAAGTACAGCCTGTTCGAGCTGGAGAACGGCCGGAAGCGGATGCTGGCCAGCGCCGGCGAGCTGCAGAAGGGCAACGAGCTGGCCCTGCCCAGCAAGTACGTGAACTTCCTGTACCTGGCCAGCCACTACGAGAAGCTGAAGGGCAGCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCTGTTCGTGGAGCAGCACAAGCACTACCTGGACGAGATCATCGAGCAGATCAGCGAGTTCAGCAAGCGGGTGATCCTGGCCGACGCCAACCTGGACAAGGTGCTGAGCGCCTACAACAAGCACCGGGACAAGCCCATCCGGGAGCAGGCCGAGAACATCATCCACCTGTTCACCCTGACCAACCTGGGCGCCCCCGCCGCCTTCAAGTACTTCGACACCACCATCGACCGGAAGCGGTACACCAGCACCAAGGAGGTGCTGGACGCCACCCTGATCCACCAGAGCATCACCGGCCTGTACGAGACCCGGATCGACCTGAGCCAGCTGGGCGGCGACGGCGGCGGCAGCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGTG
57 使用表4之低A/U密碼子之Cas9切口酶ORF，具有兩個C末端NLS序列(無起始或終止密碼子；適於包括在融合蛋白編碼序列中) GACAAGAAGTACAGCATCGGCCTGGCCATCGGCACCAACAGCGTGGGCTGGGCCGTGATCACCGACGAGTACAAGGTGCCCAGCAAGAAGTTCAAGGTGCTGGGCAACACCGACCGGCACAGCATCAAGAAGAACCTGATCGGCGCCCTGCTGTTCGACAGCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCTGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGTACACCCGGCGGAAGAACCGGATCTGCTACCTGCAGGAGATCTTCAGCAACGAGATGGCCAAGGTGGACGACAGCTTCTTCCACCGGCTGGAGGAGAGCTTCCTGGTGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCATCTTCGGCAACATCGTGGACGAGGTGGCCTACCACGAGAAGTACCCCACCATCTACCACCTGCGGAAGAAGCTGGTGGACAGCACCGACAAGGCCGACCTGCGGCTGATCTACCTGGCCCTGGCCCACATGATCAAGTTCCGGGGCCACTTCCTGATCGAGGGCGACCTGAACCCCGACAACAGCGACGTGGACAAGCTGTTCATCCAGCTGGTGCAGACCTACAACCAGCTGTTCGAGGAGAACCCCATCAACGCCAGCGGCGTGGACGCCAAGGCCATCCTGAGCGCCCGGCTGAGCAAGAGCCGGCGGCTGGAGAACCTGATCGCCCAGCTGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCTGTTCGGCAACCTGATCGCCCTGAGCCTGGGCCTGACCCCCAACTTCAAGAGCAACTTCGACCTGGCCGAGGACGCCAAGCTGCAGCTGAGCAAGGACACCTACGACGACGACCTGGACAACCTGCTGGCCCAGATCGGCGACCAGTACGCCGACCTGTTCCTGGCCGCCAAGAACCTGAGCGACGCCATCCTGCTGAGCGACATCCTGCGGGTGAACACCGAGATCACCAAGGCCCCCCTGAGCGCCAGCATGATCAAGCGGTACGACGAGCACCACCAGGACCTGACCCTGCTGAAGGCCCTGGTGCGGCAGCAGCTGCCCGAGAAGTACAAGGAGATCTTCTTCGACCAGAGCAAGAACGGCTACGCCGGCTACATCGACGGCGGCGCCAGCCAGGAGGAGTTCTACAAGTTCATCAAGCCCATCCTGGAGAAGATGGACGGCACCGAGGAGCTGCTGGTGAAGCTGAACCGGGAGGACCTGCTGCGGAAGCAGCGGACCTTCGACAACGGCAGCATCCCCCACCAGATCCACCTGGGCGAGCTGCACGCCATCCTGCGGCGGCAGGAGGACTTCTACCCCTTCCTGAAGGACAACCGGGAGAAGATCGAGAAGATCCTGACCTTCCGGATCCCCTACTACGTGGGCCCCCTGGCCCGGGGCAACAGCCGGTTCGCCTGGATGACCCGGAAGAGCGAGGAGACCATCACCCCCTGGAACTTCGAGGAGGTGGTGGACAAGGGCGCCAGCGCCCAGAGCTTCATCGAGCGGATGACCAACTTCGACAAGAACCTGCCCAACGAGAAGGTGCTGCCCAAGCACAGCCTGCTGTACGAGTACTTCACCGTGTACAACGAGCTGACCAAGGTGAAGTACGTGACCGAGGGCATGCGGAAGCCCGCCTTCCTGAGCGGCGAGCAGAAGAAGGCCATCGTGGACCTGCTGTTCAAGACCAACCGGAAGGTGACCGTGAAGCAGCTGAAGGAGGACTACTTCAAGAAGATCGAGTGCTTCGACAGCGTGGAGATCAGCGGCGTGGAGGACCGGTTCAACGCCAGCCTGGGCACCTACCACGACCTGCTGAAGATCATCAAGGACAAGGACTTCCTGGACAACGAGGAGAACGAGGACATCCTGGAGGACATCGTGCTGACCCTGACCCTGTTCGAGGACCGGGAGATGATCGAGGAGCGGCTGAAGACCTACGCCCACCTGTTCGACGACAAGGTGATGAAGCAGCTGAAGCGGCGGCGGTACACCGGCTGGGGCCGGCTGAGCCGGAAGCTGATCAACGGCATCCGGGACAAGCAGAGCGGCAAGACCATCCTGGACTTCCTGAAGAGCGACGGCTTCGCCAACCGGAACTTCATGCAGCTGATCCACGACGACAGCCTGACCTTCAAGGAGGACATCCAGAAGGCCCAGGTGAGCGGCCAGGGCGACAGCCTGCACGAGCACATCGCCAACCTGGCCGGCAGCCCCGCCATCAAGAAGGGCATCCTGCAGACCGTGAAGGTGGTGGACGAGCTGGTGAAGGTGATGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACATCGTGATCGAGATGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACAGCCGGGAGCGGATGAAGCGGATCGAGGAGGGCATCAAGGAGCTGGGCAGCCAGATCCTGAAGGAGCACCCCGTGGAGAACACCCAGCTGCAGAACGAGAAGCTGTACCTGTACTACCTGCAGAACGGCCGGGACATGTACGTGGACCAGGAGCTGGACATCAACCGGCTGAGCGACTACGACGTGGACCACATCGTGCCCCAGAGCTTCCTGAAGGACGACAGCATCGACAACAAGGTGCTGACCCGGAGCGACAAGAACCGGGGCAAGAGCGACAACGTGCCCAGCGAGGAGGTGGTGAAGAAGATGAAGAACTACTGGCGGCAGCTGCTGAACGCCAAGCTGATCACCCAGCGGAAGTTCGACAACCTGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCTGAGCGAGCTGGACAAGGCCGGCTTCATCAAGCGGCAGCTGGTGGAGACCCGGCAGATCACCAAGCACGTGGCCCAGATCCTGGACAGCCGGATGAACACCAAGTACGACGAGAACGACAAGCTGATCCGGGAGGTGAAGGTGATCACCCTGAAGAGCAAGCTGGTGAGCGACTTCCGGAAGGACTTCCAGTTCTACAAGGTGCGGGAGATCAACAACTACCACCACGCCCACGACGCCTACCTGAACGCCGTGGTGGGCACCGCCCTGATCAAGAAGTACCCCAAGCTGGAGAGCGAGTTCGTGTACGGCGACTACAAGGTGTACGACGTGCGGAAGATGATCGCCAAGAGCGAGCAGGAGATCGGCAAGGCCACCGCCAAGTACTTCTTCTACAGCAACATCATGAACTTCTTCAAGACCGAGATCACCCTGGCCAACGGCGAGATCCGGAAGCGGCCCCTGATCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGATCGTGTGGGACAAGGGCCGGGACTTCGCCACCGTGCGGAAGGTGCTGAGCATGCCCCAGGTGAACATCGTGAAGAAGACCGAGGTGCAGACCGGCGGCTTCAGCAAGGAGAGCATCCTGCCCAAGCGGAACAGCGACAAGCTGATCGCCCGGAAGAAGGACTGGGACCCCAAGAAGTACGGCGGCTTCGACAGCCCCACCGTGGCCTACAGCGTGCTGGTGGTGGCCAAGGTGGAGAAGGGCAAGAGCAAGAAGCTGAAGAGCGTGAAGGAGCTGCTGGGCATCACCATCATGGAGCGGAGCAGCTTCGAGAAGAACCCCATCGACTTCCTGGAGGCCAAGGGCTACAAGGAGGTGAAGAAGGACCTGATCATCAAGCTGCCCAAGTACAGCCTGTTCGAGCTGGAGAACGGCCGGAAGCGGATGCTGGCCAGCGCCGGCGAGCTGCAGAAGGGCAACGAGCTGGCCCTGCCCAGCAAGTACGTGAACTTCCTGTACCTGGCCAGCCACTACGAGAAGCTGAAGGGCAGCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCTGTTCGTGGAGCAGCACAAGCACTACCTGGACGAGATCATCGAGCAGATCAGCGAGTTCAGCAAGCGGGTGATCCTGGCCGACGCCAACCTGGACAAGGTGCTGAGCGCCTACAACAAGCACCGGGACAAGCCCATCCGGGAGCAGGCCGAGAACATCATCCACCTGTTCACCCTGACCAACCTGGGCGCCCCCGCCGCCTTCAAGTACTTCGACACCACCATCGACCGGAAGCGGTACACCAGCACCAAGGAGGTGCTGGACGCCACCCTGATCCACCAGAGCATCACCGGCCTGTACGAGACCCGGATCGACCTGAGCCAGCTGGGCGGCGACGGCAGCGGCAGCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGTGGACGGCAGCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGTGGACAGCGGC
58 使用表4之低A/U密碼子之Cas9切口酶ORF (無NLS且無起始或終止密碼子；適於包括在融合蛋白編碼序列中) GACAAGAAGTACAGCATCGGCCTGGCCATCGGCACCAACAGCGTGGGCTGGGCCGTGATCACCGACGAGTACAAGGTGCCCAGCAAGAAGTTCAAGGTGCTGGGCAACACCGACCGGCACAGCATCAAGAAGAACCTGATCGGCGCCCTGCTGTTCGACAGCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCTGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGTACACCCGGCGGAAGAACCGGATCTGCTACCTGCAGGAGATCTTCAGCAACGAGATGGCCAAGGTGGACGACAGCTTCTTCCACCGGCTGGAGGAGAGCTTCCTGGTGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCATCTTCGGCAACATCGTGGACGAGGTGGCCTACCACGAGAAGTACCCCACCATCTACCACCTGCGGAAGAAGCTGGTGGACAGCACCGACAAGGCCGACCTGCGGCTGATCTACCTGGCCCTGGCCCACATGATCAAGTTCCGGGGCCACTTCCTGATCGAGGGCGACCTGAACCCCGACAACAGCGACGTGGACAAGCTGTTCATCCAGCTGGTGCAGACCTACAACCAGCTGTTCGAGGAGAACCCCATCAACGCCAGCGGCGTGGACGCCAAGGCCATCCTGAGCGCCCGGCTGAGCAAGAGCCGGCGGCTGGAGAACCTGATCGCCCAGCTGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCTGTTCGGCAACCTGATCGCCCTGAGCCTGGGCCTGACCCCCAACTTCAAGAGCAACTTCGACCTGGCCGAGGACGCCAAGCTGCAGCTGAGCAAGGACACCTACGACGACGACCTGGACAACCTGCTGGCCCAGATCGGCGACCAGTACGCCGACCTGTTCCTGGCCGCCAAGAACCTGAGCGACGCCATCCTGCTGAGCGACATCCTGCGGGTGAACACCGAGATCACCAAGGCCCCCCTGAGCGCCAGCATGATCAAGCGGTACGACGAGCACCACCAGGACCTGACCCTGCTGAAGGCCCTGGTGCGGCAGCAGCTGCCCGAGAAGTACAAGGAGATCTTCTTCGACCAGAGCAAGAACGGCTACGCCGGCTACATCGACGGCGGCGCCAGCCAGGAGGAGTTCTACAAGTTCATCAAGCCCATCCTGGAGAAGATGGACGGCACCGAGGAGCTGCTGGTGAAGCTGAACCGGGAGGACCTGCTGCGGAAGCAGCGGACCTTCGACAACGGCAGCATCCCCCACCAGATCCACCTGGGCGAGCTGCACGCCATCCTGCGGCGGCAGGAGGACTTCTACCCCTTCCTGAAGGACAACCGGGAGAAGATCGAGAAGATCCTGACCTTCCGGATCCCCTACTACGTGGGCCCCCTGGCCCGGGGCAACAGCCGGTTCGCCTGGATGACCCGGAAGAGCGAGGAGACCATCACCCCCTGGAACTTCGAGGAGGTGGTGGACAAGGGCGCCAGCGCCCAGAGCTTCATCGAGCGGATGACCAACTTCGACAAGAACCTGCCCAACGAGAAGGTGCTGCCCAAGCACAGCCTGCTGTACGAGTACTTCACCGTGTACAACGAGCTGACCAAGGTGAAGTACGTGACCGAGGGCATGCGGAAGCCCGCCTTCCTGAGCGGCGAGCAGAAGAAGGCCATCGTGGACCTGCTGTTCAAGACCAACCGGAAGGTGACCGTGAAGCAGCTGAAGGAGGACTACTTCAAGAAGATCGAGTGCTTCGACAGCGTGGAGATCAGCGGCGTGGAGGACCGGTTCAACGCCAGCCTGGGCACCTACCACGACCTGCTGAAGATCATCAAGGACAAGGACTTCCTGGACAACGAGGAGAACGAGGACATCCTGGAGGACATCGTGCTGACCCTGACCCTGTTCGAGGACCGGGAGATGATCGAGGAGCGGCTGAAGACCTACGCCCACCTGTTCGACGACAAGGTGATGAAGCAGCTGAAGCGGCGGCGGTACACCGGCTGGGGCCGGCTGAGCCGGAAGCTGATCAACGGCATCCGGGACAAGCAGAGCGGCAAGACCATCCTGGACTTCCTGAAGAGCGACGGCTTCGCCAACCGGAACTTCATGCAGCTGATCCACGACGACAGCCTGACCTTCAAGGAGGACATCCAGAAGGCCCAGGTGAGCGGCCAGGGCGACAGCCTGCACGAGCACATCGCCAACCTGGCCGGCAGCCCCGCCATCAAGAAGGGCATCCTGCAGACCGTGAAGGTGGTGGACGAGCTGGTGAAGGTGATGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACATCGTGATCGAGATGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACAGCCGGGAGCGGATGAAGCGGATCGAGGAGGGCATCAAGGAGCTGGGCAGCCAGATCCTGAAGGAGCACCCCGTGGAGAACACCCAGCTGCAGAACGAGAAGCTGTACCTGTACTACCTGCAGAACGGCCGGGACATGTACGTGGACCAGGAGCTGGACATCAACCGGCTGAGCGACTACGACGTGGACCACATCGTGCCCCAGAGCTTCCTGAAGGACGACAGCATCGACAACAAGGTGCTGACCCGGAGCGACAAGAACCGGGGCAAGAGCGACAACGTGCCCAGCGAGGAGGTGGTGAAGAAGATGAAGAACTACTGGCGGCAGCTGCTGAACGCCAAGCTGATCACCCAGCGGAAGTTCGACAACCTGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCTGAGCGAGCTGGACAAGGCCGGCTTCATCAAGCGGCAGCTGGTGGAGACCCGGCAGATCACCAAGCACGTGGCCCAGATCCTGGACAGCCGGATGAACACCAAGTACGACGAGAACGACAAGCTGATCCGGGAGGTGAAGGTGATCACCCTGAAGAGCAAGCTGGTGAGCGACTTCCGGAAGGACTTCCAGTTCTACAAGGTGCGGGAGATCAACAACTACCACCACGCCCACGACGCCTACCTGAACGCCGTGGTGGGCACCGCCCTGATCAAGAAGTACCCCAAGCTGGAGAGCGAGTTCGTGTACGGCGACTACAAGGTGTACGACGTGCGGAAGATGATCGCCAAGAGCGAGCAGGAGATCGGCAAGGCCACCGCCAAGTACTTCTTCTACAGCAACATCATGAACTTCTTCAAGACCGAGATCACCCTGGCCAACGGCGAGATCCGGAAGCGGCCCCTGATCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGATCGTGTGGGACAAGGGCCGGGACTTCGCCACCGTGCGGAAGGTGCTGAGCATGCCCCAGGTGAACATCGTGAAGAAGACCGAGGTGCAGACCGGCGGCTTCAGCAAGGAGAGCATCCTGCCCAAGCGGAACAGCGACAAGCTGATCGCCCGGAAGAAGGACTGGGACCCCAAGAAGTACGGCGGCTTCGACAGCCCCACCGTGGCCTACAGCGTGCTGGTGGTGGCCAAGGTGGAGAAGGGCAAGAGCAAGAAGCTGAAGAGCGTGAAGGAGCTGCTGGGCATCACCATCATGGAGCGGAGCAGCTTCGAGAAGAACCCCATCGACTTCCTGGAGGCCAAGGGCTACAAGGAGGTGAAGAAGGACCTGATCATCAAGCTGCCCAAGTACAGCCTGTTCGAGCTGGAGAACGGCCGGAAGCGGATGCTGGCCAGCGCCGGCGAGCTGCAGAAGGGCAACGAGCTGGCCCTGCCCAGCAAGTACGTGAACTTCCTGTACCTGGCCAGCCACTACGAGAAGCTGAAGGGCAGCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCTGTTCGTGGAGCAGCACAAGCACTACCTGGACGAGATCATCGAGCAGATCAGCGAGTTCAGCAAGCGGGTGATCCTGGCCGACGCCAACCTGGACAAGGTGCTGAGCGCCTACAACAAGCACCGGGACAAGCCCATCCGGGAGCAGGCCGAGAACATCATCCACCTGTTCACCCTGACCAACCTGGGCGCCCCCGCCGCCTTCAAGTACTTCGACACCACCATCGACCGGAAGCGGTACACCAGCACCAAGGAGGTGCTGGACGCCACCCTGATCCACCAGAGCATCACCGGCCTGTACGAGACCCGGATCGACCTGAGCCAGCTGGGCGGCGAC
59 例示性NLS 1 LAAKRSRTT
60 例示性NLS 2 QAAKRSRTT
61 例示性NLS 3 PAPAKRERTT
62 例示性NLS 4 QAAKRPRTT
63 例示性NLS 5 RAAKRPRTT
64 例示性NLS 6 AAAKRSWSMAA
65 例示性NLS 7 AAAKRVWSMAF
66 例示性NLS 8 AAAKRSWSMAF
67 例示性NLS 9 AAAKRKYFAA
68 例示性NLS 10 RAAKRKAFAA
69 例示性NLS 11 RAAKRKYFAV
70 交替性SV40 NLS PKKKRRV
71 核質蛋白NLS KRPAATKKAGQAKKKK
72 例示性連接體之胺基酸序列 GGS
73 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGS
74 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAK
75 例示性連接體之胺基酸序列 SEGSA
76 例示性連接體之胺基酸序列 SEGSAGTST
77 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSGGGGS
78 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSEAAAK
79 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKGGGGS
80 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKEAAAK
81 例示性連接體之胺基酸序列 SEGSAGTSTESEGSA
82 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSGGGGSGGGGS
83 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSGGGGSEAAAK
84 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSEAAAKGGGGS
85 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKGGGGSEAAAK
86 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKEAAAKGGGGS
87 例示性連接體之胺基酸序列 SEGSAGTSTESEGSAGTSTE
88 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSGGGGSGGGGSEAAAK
89 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSGGGGSEAAAKGGGGS
90 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSEAAAKGGGGSEAAAK
91 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSEAAAKEAAAKGGGGS
92 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSEAAAKEAAAKEAAAK
93 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKGGGGSGGGGSGGGGS
94 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKGGGGSGGGGSEAAAK
95 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKGGGGSEAAAKGGGGS
96 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKGGGGSEAAAKEAAAK
97 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKEAAAKGGGGSGGGGS
98 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKEAAAKGGGGSEAAAK
99 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKEAAAKEAAAKGGGGS
100 例示性連接體之胺基酸序列 SEGSAGTSTESEGSAGTSTESEGSA
101 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
102 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEAAAK
103 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSGGGGSGGGGSEAAAKGGGGS
104 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSGGGGSGGGGSEAAAKEAAAK
105 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSGGGGSEAAAKGGGGSGGGGS
106 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSGGGGSEAAAKGGGGSEAAAK
107 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSGGGGSEAAAKEAAAKGGGGS
108 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSGGGGSEAAAKEAAAKEAAAK
109 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSEAAAKGGGGSGGGGSGGGGS
110 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSEAAAKGGGGSGGGGSEAAAK
111 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSEAAAKGGGGSEAAAKGGGGS
112 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSEAAAKGGGGSEAAAKEAAAK
113 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSEAAAKEAAAKGGGGSGGGGS
114 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSEAAAKEAAAKEAAAKGGGGS
115 例示性連接體之胺基酸序列 GGGGSEAAAKEAAAKEAAAKEAAAK
116 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
117 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKGGGGSGGGGSGGGGSEAAAK
118 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKGGGGSGGGGSEAAAKGGGGS
119 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKGGGGSGGGGSEAAAKEAAAK
120 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKGGGGSEAAAKGGGGSGGGGS
121 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKGGGGSEAAAKGGGGSEAAAK
122 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKGGGGSEAAAKEAAAKGGGGS
123 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKGGGGSEAAAKEAAAKEAAAK
124 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKEAAAKGGGGSEAAAKGGGGS
125 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKEAAAKGGGGSEAAAKEAAAK
126 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKEAAAKEAAAKGGGGSEAAAK
127 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKEAAAKEAAAKEAAAKGGGGS
128 例示性連接體之胺基酸序列 EAAAKEAAAKEAAAKEAAAKEAAAK
129 例示性連接體之胺基酸序列 GTKDSTKDIPETPSKD
130 例示性連接體之胺基酸序列 GRDVRQPEVKEEKPES
131 例示性連接體之胺基酸序列 EGKSSGSGSESKSTAG
132 例示性連接體之胺基酸序列 TPGSPAGSPTSTEEGT
133 例示性連接體之胺基酸序列 GSEPATSGSETPGTST
134 編碼APOBEC3A-Nme2D16A之例示性mRNA GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGAGGCCUCCCCCGCCUCCGGCCCCCGGCACCUGAUGGACCCCCACAUCUUCACCUCCAACUUCAACAACGGCAUCGGCCGGCACAAGACCUACCUGUGCUACGAGGUGGAGCGGCUGGACAACGGCACCUCCGUGAAGAUGGACCAGCACCGGGGCUUCCUGCACAACCAGGCCAAGAACCUGCUGUGCGGCUUCUACGGCCGGCACGCCGAGCUGCGGUUCCUGGACCUGGUGCCCUCCCUGCAGCUGGACCCCGCCCAGAUCUACCGGGUGACCUGGUUCAUCUCCUGGUCCCCCUGCUUCUCCUGGGGCUGCGCCGGCGAGGUGCGGGCCUUCCUGCAGGAGAACACCCACGUGCGGCUGCGGAUCUUCGCCGCCCGGAUCUACGACUACGACCCCCUGUACAAGGAGGCCCUGCAGAUGCUGCGGGACGCCGGCGCCCAGGUGUCCAUCAUGACCUACGACGAGUUCAAGCACUGCUGGGACACCUUCGUGGACCACCAGGGCUGCCCCUUCCAGCCCUGGGACGGCCUGGACGAGCACUCCCAGGCCCUGUCCGGCCGGCUGCGGGCCAUCCUGCAGAACCAGGGCAACUCCGGCUCCGAGACCCCCGGCACCUCCGAGUCCGCCACCCCCGAGUCCGCAGCGUUCAAACCAAAUCCCAUCAACUACAUCCUGGGCCUGGCCAUCGGCAUCGCCUCCGUGGGCUGGGCCAUGGUGGAGAUCGACGAGGAGGAGAACCCCAUCCGGCUGAUCGACCUGGGCGUGCGGGUGUUCGAGCGGGCCGAGGUGCCCAAGACCGGCGACUCCCUGGCCAUGGCCCGGCGGCUGGCCCGGUCCGUGCGGCGGCUGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCUGCUGCGGGCCCGGCGGCUGCUGAAGCGGGAGGGCGUGCUGCAGGCCGCCGACUUCGACGAGAACGGCCUGAUCAAGUCCCUGCCCAACACCCCCUGGCAGCUGCGGGCCGCCGCCCUGGACCGGAAGCUGACCCCCCUGGAGUGGUCCGCCGUGCUGCUGCACCUGAUCAAGCACCGGGGCUACCUGUCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCUGGGCGCCCUGCUGAAGGGCGUGGCCAACAACGCCCACGCCCUGCAGACCGGCGACUUCCGGACCCCCGCCGAGCUGGCCCUGAACAAGUUCGAGAAGGAGUCCGGCCACAUCCGGAACCAGCGGGGCGACUACUCCCACACCUUCUCCCGGAAGGACCUGCAGGCCGAGCUGAUCCUGCUGUUCGAGAAGCAGAAGGAGUUCGGCAACCCCCACGUGUCCGGCGGCCUGAAGGAGGGCAUCGAGACCCUGCUGAUGACCCAGCGGCCCGCCCUGUCCGGCGACGCCGUGCAGAAGAUGCUGGGCCACUGCACCUUCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCUACACCGCCGAGCGGUUCAUCUGGCUGACCAAGCUGAACAACCUGCGGAUCCUGGAGCAGGGCUCCGAGCGGCCCCUGACCGACACCGAGCGGGCCACCCUGAUGGACGAGCCCUACCGGAAGUCCAAGCUGACCUACGCCCAGGCCCGGAAGCUGCUGGGCCUGGAGGACACCGCCUUCUUCAAGGGCCUGCGGUACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCUCCACCCUGAUGGAGAUGAAGGCCUACCACGCCAUCUCCCGGGCCCUGGAGAAGGAGGGCCUGAAGGACAAGAAGUCCCCCCUGAACCUGUCCUCCGAGCUGCAGGACGAGAUCGGCACCGCCUUCUCCCUGUUCAAGACCGACGAGGACAUCACCGGCCGGCUGAAGGACCGGGUGCAGCCCGAGAUCCUGGAGGCCCUGCUGAAGCACAUCUCCUUCGACAAGUUCGUGCAGAUCUCCCUGAAGGCCCUGCGGCGGAUCGUGCCCCUGAUGGAGCAGGGCAAGCGGUACGACGAGGCCUGCGCCGAGAUCUACGGCGACCACUACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGAUCUACCUGCCCCCCAUCCCCGCCGACGAGAUCCGGAACCCCGUGGUGCUGCGGGCCCUGUCCCAGGCCCGGAAGGUGAUCAACGGCGUGGUGCGGCGGUACGGCUCCCCCGCCCGGAUCCACAUCGAGACCGCCCGGGAGGUGGGCAAGUCCUUCAAGGACCGGAAGGAGAUCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGUUCCGGGAGUACUUCCCCAACUUCGUGGGCGAGCCCAAGUCCAAGGACAUCCUGAAGCUGCGGCUGUACGAGCAGCAGCACGGCAAGUGCCUGUACUCCGGCAAGGAGAUCAACCUGGUGCGGCUGAACGAGAAGGGCUACGUGGAGAUCGACCACGCCCUGCCCUUCUCCCGGACCUGGGACGACUCCUUCAACAACAAGGUGCUGGUGCUGGGCUCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCUACGAGUACUUCAACGGCAAGGACAACUCCCGGGAGUGGCAGGAGUUCAAGGCCCGGGUGGAGACCUCCCGGUUCCCCCGGUCCAAGAAGCAGCGGAUCCUGCUGCAGAAGUUCGACGAGGACGGCUUCAAGGAGUGCAACCUGAACGACACCCGGUACGUGAACCGCUUCCUGUGCCAGUUCGUGGCCGACCACAUCCUGCUGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGUGUUCGCCUCCAACGGCCAGAUCACCAACCUGCUGCGGGGCUUCUGGGGCCUGCGGAAGGUGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCUGGACGCCGUGGUGGUGGCCUGCUCCACCGUGGCCAUGCAGCAGAAGAUCACCCGGUUCGUGCGGUACAAGGAGAUGAACGCCUUCGACGGCAAGACCAUCGACAAGGAGACCGGCAAGGUGCUGCACCAGAAGACCCACUUCCCCCAGCCCUGGGAGUUCUUCGCCCAGGAGGUGAUGAUCCGGGUGUUCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGUUCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCUGCGGACCCUGCUGGCCGAGAAGCUGUCCUCCCGGCCCGAGGCCGUGCACGAGUACGUGACCCCCCUGUUCGUGUCCCGGGCCCCCAACCGGAAGAUGUCCGGCGCCCACAAGGACACCCUGCGGUCCGCCAAGCGGUUCGUGAAGCACAACGAGAAGAUCUCCGUGAAGCGGGUGUGGCUGACCGAGAUCAAGCUGGCCGACCUGGAGAACAUGGUGAACUACAAGAACGGCCGGGAGAUCGAGCUGUACGAGGCCCUGAAGGCCCGGCUGGAGGCCUACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCUUCGACCCCAAGGACAACCCCUUCUACAAGAAGGGCGGCCAGCUGGUGAAGGCCGUGCGGGUGGAGAAGACCCAGGAGUCCGGCGUGCUGCUGAACAAGAAGAACGCCUACACCAUCGCCGACAACGGCGACAUGGUGCGGGUGGACGUGUUCUGCAAGGUGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGUACUUCAUCGUGCCCAUCUACGCCUGGCAGGUGGCCGAGAACAUCCUGCCCGACAUCGACUGCAAGGGCUACCGGAUCGACGACUCCUACACCUUCUGCUUCUCCCUGCACAAGUACGACCUGAUCGCCUUCCAGAAGGACGAGAAGUCCAAGGUGGAGUUCGCCUACUACAUCAACUGCGACUCCUCCAACGGCCGGUUCUACCUGGCCUGGCACGACAAGGGCUCCAAGGAGCAGCAGUUCCGGAUCUCCACCCAGAACCUGGUGCUGAUCCAGAAGUACCAGGUGAACGAGCUGGGCAAGGAGAUCCGGCCCUGCCGGCUGAAGAAGCGGCCCCCCGUGCGGUCCGGAAAGCGGACCGCCGACGGCUCCGAGUUCGAGUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGGAGUAGUGACUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCU
135 APOBEC3A-Nme2D16A之例示性開放閱讀框 AUGGAGGCCUCCCCCGCCUCCGGCCCCCGGCACCUGAUGGACCCCCACAUCUUCACCUCCAACUUCAACAACGGCAUCGGCCGGCACAAGACCUACCUGUGCUACGAGGUGGAGCGGCUGGACAACGGCACCUCCGUGAAGAUGGACCAGCACCGGGGCUUCCUGCACAACCAGGCCAAGAACCUGCUGUGCGGCUUCUACGGCCGGCACGCCGAGCUGCGGUUCCUGGACCUGGUGCCCUCCCUGCAGCUGGACCCCGCCCAGAUCUACCGGGUGACCUGGUUCAUCUCCUGGUCCCCCUGCUUCUCCUGGGGCUGCGCCGGCGAGGUGCGGGCCUUCCUGCAGGAGAACACCCACGUGCGGCUGCGGAUCUUCGCCGCCCGGAUCUACGACUACGACCCCCUGUACAAGGAGGCCCUGCAGAUGCUGCGGGACGCCGGCGCCCAGGUGUCCAUCAUGACCUACGACGAGUUCAAGCACUGCUGGGACACCUUCGUGGACCACCAGGGCUGCCCCUUCCAGCCCUGGGACGGCCUGGACGAGCACUCCCAGGCCCUGUCCGGCCGGCUGCGGGCCAUCCUGCAGAACCAGGGCAACUCCGGCUCCGAGACCCCCGGCACCUCCGAGUCCGCCACCCCCGAGUCCGCAGCGUUCAAACCAAAUCCCAUCAACUACAUCCUGGGCCUGGCCAUCGGCAUCGCCUCCGUGGGCUGGGCCAUGGUGGAGAUCGACGAGGAGGAGAACCCCAUCCGGCUGAUCGACCUGGGCGUGCGGGUGUUCGAGCGGGCCGAGGUGCCCAAGACCGGCGACUCCCUGGCCAUGGCCCGGCGGCUGGCCCGGUCCGUGCGGCGGCUGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCUGCUGCGGGCCCGGCGGCUGCUGAAGCGGGAGGGCGUGCUGCAGGCCGCCGACUUCGACGAGAACGGCCUGAUCAAGUCCCUGCCCAACACCCCCUGGCAGCUGCGGGCCGCCGCCCUGGACCGGAAGCUGACCCCCCUGGAGUGGUCCGCCGUGCUGCUGCACCUGAUCAAGCACCGGGGCUACCUGUCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCUGGGCGCCCUGCUGAAGGGCGUGGCCAACAACGCCCACGCCCUGCAGACCGGCGACUUCCGGACCCCCGCCGAGCUGGCCCUGAACAAGUUCGAGAAGGAGUCCGGCCACAUCCGGAACCAGCGGGGCGACUACUCCCACACCUUCUCCCGGAAGGACCUGCAGGCCGAGCUGAUCCUGCUGUUCGAGAAGCAGAAGGAGUUCGGCAACCCCCACGUGUCCGGCGGCCUGAAGGAGGGCAUCGAGACCCUGCUGAUGACCCAGCGGCCCGCCCUGUCCGGCGACGCCGUGCAGAAGAUGCUGGGCCACUGCACCUUCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCUACACCGCCGAGCGGUUCAUCUGGCUGACCAAGCUGAACAACCUGCGGAUCCUGGAGCAGGGCUCCGAGCGGCCCCUGACCGACACCGAGCGGGCCACCCUGAUGGACGAGCCCUACCGGAAGUCCAAGCUGACCUACGCCCAGGCCCGGAAGCUGCUGGGCCUGGAGGACACCGCCUUCUUCAAGGGCCUGCGGUACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCUCCACCCUGAUGGAGAUGAAGGCCUACCACGCCAUCUCCCGGGCCCUGGAGAAGGAGGGCCUGAAGGACAAGAAGUCCCCCCUGAACCUGUCCUCCGAGCUGCAGGACGAGAUCGGCACCGCCUUCUCCCUGUUCAAGACCGACGAGGACAUCACCGGCCGGCUGAAGGACCGGGUGCAGCCCGAGAUCCUGGAGGCCCUGCUGAAGCACAUCUCCUUCGACAAGUUCGUGCAGAUCUCCCUGAAGGCCCUGCGGCGGAUCGUGCCCCUGAUGGAGCAGGGCAAGCGGUACGACGAGGCCUGCGCCGAGAUCUACGGCGACCACUACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGAUCUACCUGCCCCCCAUCCCCGCCGACGAGAUCCGGAACCCCGUGGUGCUGCGGGCCCUGUCCCAGGCCCGGAAGGUGAUCAACGGCGUGGUGCGGCGGUACGGCUCCCCCGCCCGGAUCCACAUCGAGACCGCCCGGGAGGUGGGCAAGUCCUUCAAGGACCGGAAGGAGAUCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGUUCCGGGAGUACUUCCCCAACUUCGUGGGCGAGCCCAAGUCCAAGGACAUCCUGAAGCUGCGGCUGUACGAGCAGCAGCACGGCAAGUGCCUGUACUCCGGCAAGGAGAUCAACCUGGUGCGGCUGAACGAGAAGGGCUACGUGGAGAUCGACCACGCCCUGCCCUUCUCCCGGACCUGGGACGACUCCUUCAACAACAAGGUGCUGGUGCUGGGCUCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCUACGAGUACUUCAACGGCAAGGACAACUCCCGGGAGUGGCAGGAGUUCAAGGCCCGGGUGGAGACCUCCCGGUUCCCCCGGUCCAAGAAGCAGCGGAUCCUGCUGCAGAAGUUCGACGAGGACGGCUUCAAGGAGUGCAACCUGAACGACACCCGGUACGUGAACCGCUUCCUGUGCCAGUUCGUGGCCGACCACAUCCUGCUGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGUGUUCGCCUCCAACGGCCAGAUCACCAACCUGCUGCGGGGCUUCUGGGGCCUGCGGAAGGUGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCUGGACGCCGUGGUGGUGGCCUGCUCCACCGUGGCCAUGCAGCAGAAGAUCACCCGGUUCGUGCGGUACAAGGAGAUGAACGCCUUCGACGGCAAGACCAUCGACAAGGAGACCGGCAAGGUGCUGCACCAGAAGACCCACUUCCCCCAGCCCUGGGAGUUCUUCGCCCAGGAGGUGAUGAUCCGGGUGUUCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGUUCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCUGCGGACCCUGCUGGCCGAGAAGCUGUCCUCCCGGCCCGAGGCCGUGCACGAGUACGUGACCCCCCUGUUCGUGUCCCGGGCCCCCAACCGGAAGAUGUCCGGCGCCCACAAGGACACCCUGCGGUCCGCCAAGCGGUUCGUGAAGCACAACGAGAAGAUCUCCGUGAAGCGGGUGUGGCUGACCGAGAUCAAGCUGGCCGACCUGGAGAACAUGGUGAACUACAAGAACGGCCGGGAGAUCGAGCUGUACGAGGCCCUGAAGGCCCGGCUGGAGGCCUACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCUUCGACCCCAAGGACAACCCCUUCUACAAGAAGGGCGGCCAGCUGGUGAAGGCCGUGCGGGUGGAGAAGACCCAGGAGUCCGGCGUGCUGCUGAACAAGAAGAACGCCUACACCAUCGCCGACAACGGCGACAUGGUGCGGGUGGACGUGUUCUGCAAGGUGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGUACUUCAUCGUGCCCAUCUACGCCUGGCAGGUGGCCGAGAACAUCCUGCCCGACAUCGACUGCAAGGGCUACCGGAUCGACGACUCCUACACCUUCUGCUUCUCCCUGCACAAGUACGACCUGAUCGCCUUCCAGAAGGACGAGAAGUCCAAGGUGGAGUUCGCCUACUACAUCAACUGCGACUCCUCCAACGGCCGGUUCUACCUGGCCUGGCACGACAAGGGCUCCAAGGAGCAGCAGUUCCGGAUCUCCACCCAGAACCUGGUGCUGAUCCAGAAGUACCAGGUGAACGAGCUGGGCAAGGAGAUCCGGCCCUGCCGGCUGAAGAAGCGGCCCCCCGUGCGGUCCGGAAAGCGGACCGCCGACGGCUCCGAGUUCGAGUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGGAGUAG
136 APOBEC3A-Nme2D16A之例示性胺基酸序列 MEASPASGPRHLMDPHIFTSNFNNGIGRHKTYLCYEVERLDNGTSVKMDQHRGFLHNQAKNLLCGFYGRHAELRFLDLVPSLQLDPAQIYRVTWFISWSPCFSWGCAGEVRAFLQENTHVRLRIFAARIYDYDPLYKEALQMLRDAGAQVSIMTYDEFKHCWDTFVDHQGCPFQPWDGLDEHSQALSGRLRAILQNQGNSGSETPGTSESATPESAAFKPNPINYILGLAIGIASVGWAMVEIDEEENPIRLIDLGVRVFERAEVPKTGDSLAMARRLARSVRRLTRRRAHRLLRARRLLKREGVLQAADFDENGLIKSLPNTPWQLRAAALDRKLTPLEWSAVLLHLIKHRGYLSQRKNEGETADKELGALLKGVANNAHALQTGDFRTPAELALNKFEKESGHIRNQRGDYSHTFSRKDLQAELILLFEKQKEFGNPHVSGGLKEGIETLLMTQRPALSGDAVQKMLGHCTFEPAEPKAAKNTYTAERFIWLTKLNNLRILEQGSERPLTDTERATLMDEPYRKSKLTYAQARKLLGLEDTAFFKGLRYGKDNAEASTLMEMKAYHAISRALEKEGLKDKKSPLNLSSELQDEIGTAFSLFKTDEDITGRLKDRVQPEILEALLKHISFDKFVQISLKALRRIVPLMEQGKRYDEACAEIYGDHYGKKNTEEKIYLPPIPADEIRNPVVLRALSQARKVINGVVRRYGSPARIHIETAREVGKSFKDRKEIEKRQEENRKDREKAAAKFREYFPNFVGEPKSKDILKLRLYEQQHGKCLYSGKEINLVRLNEKGYVEIDHALPFSRTWDDSFNNKVLVLGSENQNKGNQTPYEYFNGKDNSREWQEFKARVETSRFPRSKKQRILLQKFDEDGFKECNLNDTRYVNRFLCQFVADHILLTGKGKRRVFASNGQITNLLRGFWGLRKVRAENDRHHALDAVVVACSTVAMQQKITRFVRYKEMNAFDGKTIDKETGKVLHQKTHFPQPWEFFAQEVMIRVFGKPDGKPEFEEADTPEKLRTLLAEKLSSRPEAVHEYVTPLFVSRAPNRKMSGAHKDTLRSAKRFVKHNEKISVKRVWLTEIKLADLENMVNYKNGREIELYEALKARLEAYGGNAKQAFDPKDNPFYKKGGQLVKAVRVEKTQESGVLLNKKNAYTIADNGDMVRVDVFCKVDKKGKNQYFIVPIYAWQVAENILPDIDCKGYRIDDSYTFCFSLHKYDLIAFQKDEKSKVEFAYYINCDSSNGRFYLAWHDKGSKEQQFRISTQNLVLIQKYQVNELGKEIRPCRLKKRPPVRSGKRTADGSEFESPKKKRKVE*
137 編碼APOBEC3A-Nme2D16A之例示性mRNA GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACGGCUCCGGCGGCGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGGAGGACAAGCGGCCCGCCGCCACCAAGAAGGCCGGCCAGGCCAAGAAGAAGAAGGGCGGCUCCGGCGGCGGCGAGGCCUCCCCCGCCUCCGGCCCCCGGCACCUGAUGGACCCCCACAUCUUCACCUCCAACUUCAACAACGGCAUCGGCCGGCACAAGACCUACCUGUGCUACGAGGUGGAGCGGCUGGACAACGGCACCUCCGUGAAGAUGGACCAGCACCGGGGCUUCCUGCACAACCAGGCCAAGAACCUGCUGUGCGGCUUCUACGGCCGGCACGCCGAGCUGCGGUUCCUGGACCUGGUGCCCUCCCUGCAGCUGGACCCCGCCCAGAUCUACCGGGUGACCUGGUUCAUCUCCUGGUCCCCCUGCUUCUCCUGGGGCUGCGCCGGCGAGGUGCGGGCCUUCCUGCAGGAGAACACCCACGUGCGGCUGCGGAUCUUCGCCGCCCGGAUCUACGACUACGACCCCCUGUACAAGGAGGCCCUGCAGAUGCUGCGGGACGCCGGCGCCCAGGUGUCCAUCAUGACCUACGACGAGUUCAAGCACUGCUGGGACACCUUCGUGGACCACCAGGGCUGCCCCUUCCAGCCCUGGGACGGCCUGGACGAGCACUCCCAGGCCCUGUCCGGCCGGCUGCGGGCCAUCCUGCAGAACCAGGGCAACUCCGGCUCCGAGACCCCCGGCACCUCCGAGUCCGCCACCCCCGAGUCCGCAGCGUUCAAACCAAAUCCCAUCAACUACAUCCUGGGCCUGGCCAUCGGCAUCGCCUCCGUGGGCUGGGCCAUGGUGGAGAUCGACGAGGAGGAGAACCCCAUCCGGCUGAUCGACCUGGGCGUGCGGGUGUUCGAGCGGGCCGAGGUGCCCAAGACCGGCGACUCCCUGGCCAUGGCCCGGCGGCUGGCCCGGUCCGUGCGGCGGCUGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCUGCUGCGGGCCCGGCGGCUGCUGAAGCGGGAGGGCGUGCUGCAGGCCGCCGACUUCGACGAGAACGGCCUGAUCAAGUCCCUGCCCAACACCCCCUGGCAGCUGCGGGCCGCCGCCCUGGACCGGAAGCUGACCCCCCUGGAGUGGUCCGCCGUGCUGCUGCACCUGAUCAAGCACCGGGGCUACCUGUCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCUGGGCGCCCUGCUGAAGGGCGUGGCCAACAACGCCCACGCCCUGCAGACCGGCGACUUCCGGACCCCCGCCGAGCUGGCCCUGAACAAGUUCGAGAAGGAGUCCGGCCACAUCCGGAACCAGCGGGGCGACUACUCCCACACCUUCUCCCGGAAGGACCUGCAGGCCGAGCUGAUCCUGCUGUUCGAGAAGCAGAAGGAGUUCGGCAACCCCCACGUGUCCGGCGGCCUGAAGGAGGGCAUCGAGACCCUGCUGAUGACCCAGCGGCCCGCCCUGUCCGGCGACGCCGUGCAGAAGAUGCUGGGCCACUGCACCUUCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCUACACCGCCGAGCGGUUCAUCUGGCUGACCAAGCUGAACAACCUGCGGAUCCUGGAGCAGGGCUCCGAGCGGCCCCUGACCGACACCGAGCGGGCCACCCUGAUGGACGAGCCCUACCGGAAGUCCAAGCUGACCUACGCCCAGGCCCGGAAGCUGCUGGGCCUGGAGGACACCGCCUUCUUCAAGGGCCUGCGGUACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCUCCACCCUGAUGGAGAUGAAGGCCUACCACGCCAUCUCCCGGGCCCUGGAGAAGGAGGGCCUGAAGGACAAGAAGUCCCCCCUGAACCUGUCCUCCGAGCUGCAGGACGAGAUCGGCACCGCCUUCUCCCUGUUCAAGACCGACGAGGACAUCACCGGCCGGCUGAAGGACCGGGUGCAGCCCGAGAUCCUGGAGGCCCUGCUGAAGCACAUCUCCUUCGACAAGUUCGUGCAGAUCUCCCUGAAGGCCCUGCGGCGGAUCGUGCCCCUGAUGGAGCAGGGCAAGCGGUACGACGAGGCCUGCGCCGAGAUCUACGGCGACCACUACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGAUCUACCUGCCCCCCAUCCCCGCCGACGAGAUCCGGAACCCCGUGGUGCUGCGGGCCCUGUCCCAGGCCCGGAAGGUGAUCAACGGCGUGGUGCGGCGGUACGGCUCCCCCGCCCGGAUCCACAUCGAGACCGCCCGGGAGGUGGGCAAGUCCUUCAAGGACCGGAAGGAGAUCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGUUCCGGGAGUACUUCCCCAACUUCGUGGGCGAGCCCAAGUCCAAGGACAUCCUGAAGCUGCGGCUGUACGAGCAGCAGCACGGCAAGUGCCUGUACUCCGGCAAGGAGAUCAACCUGGUGCGGCUGAACGAGAAGGGCUACGUGGAGAUCGACCACGCCCUGCCCUUCUCCCGGACCUGGGACGACUCCUUCAACAACAAGGUGCUGGUGCUGGGCUCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCUACGAGUACUUCAACGGCAAGGACAACUCCCGGGAGUGGCAGGAGUUCAAGGCCCGGGUGGAGACCUCCCGGUUCCCCCGGUCCAAGAAGCAGCGGAUCCUGCUGCAGAAGUUCGACGAGGACGGCUUCAAGGAGUGCAACCUGAACGACACCCGGUACGUGAACCGCUUCCUGUGCCAGUUCGUGGCCGACCACAUCCUGCUGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGUGUUCGCCUCCAACGGCCAGAUCACCAACCUGCUGCGGGGCUUCUGGGGCCUGCGGAAGGUGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCUGGACGCCGUGGUGGUGGCCUGCUCCACCGUGGCCAUGCAGCAGAAGAUCACCCGGUUCGUGCGGUACAAGGAGAUGAACGCCUUCGACGGCAAGACCAUCGACAAGGAGACCGGCAAGGUGCUGCACCAGAAGACCCACUUCCCCCAGCCCUGGGAGUUCUUCGCCCAGGAGGUGAUGAUCCGGGUGUUCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGUUCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCUGCGGACCCUGCUGGCCGAGAAGCUGUCCUCCCGGCCCGAGGCCGUGCACGAGUACGUGACCCCCCUGUUCGUGUCCCGGGCCCCCAACCGGAAGAUGUCCGGCGCCCACAAGGACACCCUGCGGUCCGCCAAGCGGUUCGUGAAGCACAACGAGAAGAUCUCCGUGAAGCGGGUGUGGCUGACCGAGAUCAAGCUGGCCGACCUGGAGAACAUGGUGAACUACAAGAACGGCCGGGAGAUCGAGCUGUACGAGGCCCUGAAGGCCCGGCUGGAGGCCUACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCUUCGACCCCAAGGACAACCCCUUCUACAAGAAGGGCGGCCAGCUGGUGAAGGCCGUGCGGGUGGAGAAGACCCAGGAGUCCGGCGUGCUGCUGAACAAGAAGAACGCCUACACCAUCGCCGACAACGGCGACAUGGUGCGGGUGGACGUGUUCUGCAAGGUGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGUACUUCAUCGUGCCCAUCUACGCCUGGCAGGUGGCCGAGAACAUCCUGCCCGACAUCGACUGCAAGGGCUACCGGAUCGACGACUCCUACACCUUCUGCUUCUCCCUGCACAAGUACGACCUGAUCGCCUUCCAGAAGGACGAGAAGUCCAAGGUGGAGUUCGCCUACUACAUCAACUGCGACUCCUCCAACGGCCGGUUCUACCUGGCCUGGCACGACAAGGGCUCCAAGGAGCAGCAGUUCCGGAUCUCCACCCAGAACCUGGUGCUGAUCCAGAAGUACCAGGUGAACGAGCUGGGCAAGGAGAUCCGGCCCUGCCGGCUGAAGAAGCGGCCCCCCGUGCGGUCCGGAAAGCGGACCGCCGACGGCUCCGAGUUCGAGUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGGAGUAGUGACUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCU
138 APOBEC3A-Nme2D16A之例示性開放閱讀框 AUGGACGGCUCCGGCGGCGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGGAGGACAAGCGGCCCGCCGCCACCAAGAAGGCCGGCCAGGCCAAGAAGAAGAAGGGCGGCUCCGGCGGCGGCGAGGCCUCCCCCGCCUCCGGCCCCCGGCACCUGAUGGACCCCCACAUCUUCACCUCCAACUUCAACAACGGCAUCGGCCGGCACAAGACCUACCUGUGCUACGAGGUGGAGCGGCUGGACAACGGCACCUCCGUGAAGAUGGACCAGCACCGGGGCUUCCUGCACAACCAGGCCAAGAACCUGCUGUGCGGCUUCUACGGCCGGCACGCCGAGCUGCGGUUCCUGGACCUGGUGCCCUCCCUGCAGCUGGACCCCGCCCAGAUCUACCGGGUGACCUGGUUCAUCUCCUGGUCCCCCUGCUUCUCCUGGGGCUGCGCCGGCGAGGUGCGGGCCUUCCUGCAGGAGAACACCCACGUGCGGCUGCGGAUCUUCGCCGCCCGGAUCUACGACUACGACCCCCUGUACAAGGAGGCCCUGCAGAUGCUGCGGGACGCCGGCGCCCAGGUGUCCAUCAUGACCUACGACGAGUUCAAGCACUGCUGGGACACCUUCGUGGACCACCAGGGCUGCCCCUUCCAGCCCUGGGACGGCCUGGACGAGCACUCCCAGGCCCUGUCCGGCCGGCUGCGGGCCAUCCUGCAGAACCAGGGCAACUCCGGCUCCGAGACCCCCGGCACCUCCGAGUCCGCCACCCCCGAGUCCGCAGCGUUCAAACCAAAUCCCAUCAACUACAUCCUGGGCCUGGCCAUCGGCAUCGCCUCCGUGGGCUGGGCCAUGGUGGAGAUCGACGAGGAGGAGAACCCCAUCCGGCUGAUCGACCUGGGCGUGCGGGUGUUCGAGCGGGCCGAGGUGCCCAAGACCGGCGACUCCCUGGCCAUGGCCCGGCGGCUGGCCCGGUCCGUGCGGCGGCUGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCUGCUGCGGGCCCGGCGGCUGCUGAAGCGGGAGGGCGUGCUGCAGGCCGCCGACUUCGACGAGAACGGCCUGAUCAAGUCCCUGCCCAACACCCCCUGGCAGCUGCGGGCCGCCGCCCUGGACCGGAAGCUGACCCCCCUGGAGUGGUCCGCCGUGCUGCUGCACCUGAUCAAGCACCGGGGCUACCUGUCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCUGGGCGCCCUGCUGAAGGGCGUGGCCAACAACGCCCACGCCCUGCAGACCGGCGACUUCCGGACCCCCGCCGAGCUGGCCCUGAACAAGUUCGAGAAGGAGUCCGGCCACAUCCGGAACCAGCGGGGCGACUACUCCCACACCUUCUCCCGGAAGGACCUGCAGGCCGAGCUGAUCCUGCUGUUCGAGAAGCAGAAGGAGUUCGGCAACCCCCACGUGUCCGGCGGCCUGAAGGAGGGCAUCGAGACCCUGCUGAUGACCCAGCGGCCCGCCCUGUCCGGCGACGCCGUGCAGAAGAUGCUGGGCCACUGCACCUUCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCUACACCGCCGAGCGGUUCAUCUGGCUGACCAAGCUGAACAACCUGCGGAUCCUGGAGCAGGGCUCCGAGCGGCCCCUGACCGACACCGAGCGGGCCACCCUGAUGGACGAGCCCUACCGGAAGUCCAAGCUGACCUACGCCCAGGCCCGGAAGCUGCUGGGCCUGGAGGACACCGCCUUCUUCAAGGGCCUGCGGUACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCUCCACCCUGAUGGAGAUGAAGGCCUACCACGCCAUCUCCCGGGCCCUGGAGAAGGAGGGCCUGAAGGACAAGAAGUCCCCCCUGAACCUGUCCUCCGAGCUGCAGGACGAGAUCGGCACCGCCUUCUCCCUGUUCAAGACCGACGAGGACAUCACCGGCCGGCUGAAGGACCGGGUGCAGCCCGAGAUCCUGGAGGCCCUGCUGAAGCACAUCUCCUUCGACAAGUUCGUGCAGAUCUCCCUGAAGGCCCUGCGGCGGAUCGUGCCCCUGAUGGAGCAGGGCAAGCGGUACGACGAGGCCUGCGCCGAGAUCUACGGCGACCACUACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGAUCUACCUGCCCCCCAUCCCCGCCGACGAGAUCCGGAACCCCGUGGUGCUGCGGGCCCUGUCCCAGGCCCGGAAGGUGAUCAACGGCGUGGUGCGGCGGUACGGCUCCCCCGCCCGGAUCCACAUCGAGACCGCCCGGGAGGUGGGCAAGUCCUUCAAGGACCGGAAGGAGAUCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGUUCCGGGAGUACUUCCCCAACUUCGUGGGCGAGCCCAAGUCCAAGGACAUCCUGAAGCUGCGGCUGUACGAGCAGCAGCACGGCAAGUGCCUGUACUCCGGCAAGGAGAUCAACCUGGUGCGGCUGAACGAGAAGGGCUACGUGGAGAUCGACCACGCCCUGCCCUUCUCCCGGACCUGGGACGACUCCUUCAACAACAAGGUGCUGGUGCUGGGCUCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCUACGAGUACUUCAACGGCAAGGACAACUCCCGGGAGUGGCAGGAGUUCAAGGCCCGGGUGGAGACCUCCCGGUUCCCCCGGUCCAAGAAGCAGCGGAUCCUGCUGCAGAAGUUCGACGAGGACGGCUUCAAGGAGUGCAACCUGAACGACACCCGGUACGUGAACCGCUUCCUGUGCCAGUUCGUGGCCGACCACAUCCUGCUGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGUGUUCGCCUCCAACGGCCAGAUCACCAACCUGCUGCGGGGCUUCUGGGGCCUGCGGAAGGUGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCUGGACGCCGUGGUGGUGGCCUGCUCCACCGUGGCCAUGCAGCAGAAGAUCACCCGGUUCGUGCGGUACAAGGAGAUGAACGCCUUCGACGGCAAGACCAUCGACAAGGAGACCGGCAAGGUGCUGCACCAGAAGACCCACUUCCCCCAGCCCUGGGAGUUCUUCGCCCAGGAGGUGAUGAUCCGGGUGUUCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGUUCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCUGCGGACCCUGCUGGCCGAGAAGCUGUCCUCCCGGCCCGAGGCCGUGCACGAGUACGUGACCCCCCUGUUCGUGUCCCGGGCCCCCAACCGGAAGAUGUCCGGCGCCCACAAGGACACCCUGCGGUCCGCCAAGCGGUUCGUGAAGCACAACGAGAAGAUCUCCGUGAAGCGGGUGUGGCUGACCGAGAUCAAGCUGGCCGACCUGGAGAACAUGGUGAACUACAAGAACGGCCGGGAGAUCGAGCUGUACGAGGCCCUGAAGGCCCGGCUGGAGGCCUACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCUUCGACCCCAAGGACAACCCCUUCUACAAGAAGGGCGGCCAGCUGGUGAAGGCCGUGCGGGUGGAGAAGACCCAGGAGUCCGGCGUGCUGCUGAACAAGAAGAACGCCUACACCAUCGCCGACAACGGCGACAUGGUGCGGGUGGACGUGUUCUGCAAGGUGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGUACUUCAUCGUGCCCAUCUACGCCUGGCAGGUGGCCGAGAACAUCCUGCCCGACAUCGACUGCAAGGGCUACCGGAUCGACGACUCCUACACCUUCUGCUUCUCCCUGCACAAGUACGACCUGAUCGCCUUCCAGAAGGACGAGAAGUCCAAGGUGGAGUUCGCCUACUACAUCAACUGCGACUCCUCCAACGGCCGGUUCUACCUGGCCUGGCACGACAAGGGCUCCAAGGAGCAGCAGUUCCGGAUCUCCACCCAGAACCUGGUGCUGAUCCAGAAGUACCAGGUGAACGAGCUGGGCAAGGAGAUCCGGCCCUGCCGGCUGAAGAAGCGGCCCCCCGUGCGGUCCGGAAAGCGGACCGCCGACGGCUCCGAGUUCGAGUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGGAGUAG
139 APOBEC3A-Nme2D16A之例示性胺基酸序列 MDGSGGGSPKKKRKVEDKRPAATKKAGQAKKKKGGSGGGEASPASGPRHLMDPHIFTSNFNNGIGRHKTYLCYEVERLDNGTSVKMDQHRGFLHNQAKNLLCGFYGRHAELRFLDLVPSLQLDPAQIYRVTWFISWSPCFSWGCAGEVRAFLQENTHVRLRIFAARIYDYDPLYKEALQMLRDAGAQVSIMTYDEFKHCWDTFVDHQGCPFQPWDGLDEHSQALSGRLRAILQNQGNSGSETPGTSESATPESAAFKPNPINYILGLAIGIASVGWAMVEIDEEENPIRLIDLGVRVFERAEVPKTGDSLAMARRLARSVRRLTRRRAHRLLRARRLLKREGVLQAADFDENGLIKSLPNTPWQLRAAALDRKLTPLEWSAVLLHLIKHRGYLSQRKNEGETADKELGALLKGVANNAHALQTGDFRTPAELALNKFEKESGHIRNQRGDYSHTFSRKDLQAELILLFEKQKEFGNPHVSGGLKEGIETLLMTQRPALSGDAVQKMLGHCTFEPAEPKAAKNTYTAERFIWLTKLNNLRILEQGSERPLTDTERATLMDEPYRKSKLTYAQARKLLGLEDTAFFKGLRYGKDNAEASTLMEMKAYHAISRALEKEGLKDKKSPLNLSSELQDEIGTAFSLFKTDEDITGRLKDRVQPEILEALLKHISFDKFVQISLKALRRIVPLMEQGKRYDEACAEIYGDHYGKKNTEEKIYLPPIPADEIRNPVVLRALSQARKVINGVVRRYGSPARIHIETAREVGKSFKDRKEIEKRQEENRKDREKAAAKFREYFPNFVGEPKSKDILKLRLYEQQHGKCLYSGKEINLVRLNEKGYVEIDHALPFSRTWDDSFNNKVLVLGSENQNKGNQTPYEYFNGKDNSREWQEFKARVETSRFPRSKKQRILLQKFDEDGFKECNLNDTRYVNRFLCQFVADHILLTGKGKRRVFASNGQITNLLRGFWGLRKVRAENDRHHALDAVVVACSTVAMQQKITRFVRYKEMNAFDGKTIDKETGKVLHQKTHFPQPWEFFAQEVMIRVFGKPDGKPEFEEADTPEKLRTLLAEKLSSRPEAVHEYVTPLFVSRAPNRKMSGAHKDTLRSAKRFVKHNEKISVKRVWLTEIKLADLENMVNYKNGREIELYEALKARLEAYGGNAKQAFDPKDNPFYKKGGQLVKAVRVEKTQESGVLLNKKNAYTIADNGDMVRVDVFCKVDKKGKNQYFIVPIYAWQVAENILPDIDCKGYRIDDSYTFCFSLHKYDLIAFQKDEKSKVEFAYYINCDSSNGRFYLAWHDKGSKEQQFRISTQNLVLIQKYQVNELGKEIRPCRLKKRPPVRSGKRTADGSEFESPKKKRKVE*
140 編碼APOBEC3A-Nme2D16A之例示性mRNA GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACGGCUCCGGCGGCGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGGAGGACAAGCGGCCCGCCGCCACCAAGAAGGCCGGCCAGGCCAAGAAGAAGAAGGGCGGCUCCGGCGGCGGCGAGGCCUCCCCCGCCUCCGGCCCCCGGCACCUGAUGGACCCCCACAUCUUCACCUCCAACUUCAACAACGGCAUCGGCCGGCACAAGACCUACCUGUGCUACGAGGUGGAGCGGCUGGACAACGGCACCUCCGUGAAGAUGGACCAGCACCGGGGCUUCCUGCACAACCAGGCCAAGAACCUGCUGUGCGGCUUCUACGGCCGGCACGCCGAGCUGCGGUUCCUGGACCUGGUGCCCUCCCUGCAGCUGGACCCCGCCCAGAUCUACCGGGUGACCUGGUUCAUCUCCUGGUCCCCCUGCUUCUCCUGGGGCUGCGCCGGCGAGGUGCGGGCCUUCCUGCAGGAGAACACCCACGUGCGGCUGCGGAUCUUCGCCGCCCGGAUCUACGACUACGACCCCCUGUACAAGGAGGCCCUGCAGAUGCUGCGGGACGCCGGCGCCCAGGUGUCCAUCAUGACCUACGACGAGUUCAAGCACUGCUGGGACACCUUCGUGGACCACCAGGGCUGCCCCUUCCAGCCCUGGGACGGCCUGGACGAGCACUCCCAGGCCCUGUCCGGCCGGCUGCGGGCCAUCCUGCAGAACCAGGGCAACUCCGGCUCCGAGACCCCCGGCACCUCCGAGUCCGCCACCCCCGAGUCCGCAGCGUUCAAACCAAAUCCCAUCAACUACAUCCUGGGCCUGGCCAUCGGCAUCGCCUCCGUGGGCUGGGCCAUGGUGGAGAUCGACGAGGAGGAGAACCCCAUCCGGCUGAUCGACCUGGGCGUGCGGGUGUUCGAGCGGGCCGAGGUGCCCAAGACCGGCGACUCCCUGGCCAUGGCCCGGCGGCUGGCCCGGUCCGUGCGGCGGCUGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCUGCUGCGGGCCCGGCGGCUGCUGAAGCGGGAGGGCGUGCUGCAGGCCGCCGACUUCGACGAGAACGGCCUGAUCAAGUCCCUGCCCAACACCCCCUGGCAGCUGCGGGCCGCCGCCCUGGACCGGAAGCUGACCCCCCUGGAGUGGUCCGCCGUGCUGCUGCACCUGAUCAAGCACCGGGGCUACCUGUCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCUGGGCGCCCUGCUGAAGGGCGUGGCCAACAACGCCCACGCCCUGCAGACCGGCGACUUCCGGACCCCCGCCGAGCUGGCCCUGAACAAGUUCGAGAAGGAGUCCGGCCACAUCCGGAACCAGCGGGGCGACUACUCCCACACCUUCUCCCGGAAGGACCUGCAGGCCGAGCUGAUCCUGCUGUUCGAGAAGCAGAAGGAGUUCGGCAACCCCCACGUGUCCGGCGGCCUGAAGGAGGGCAUCGAGACCCUGCUGAUGACCCAGCGGCCCGCCCUGUCCGGCGACGCCGUGCAGAAGAUGCUGGGCCACUGCACCUUCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCUACACCGCCGAGCGGUUCAUCUGGCUGACCAAGCUGAACAACCUGCGGAUCCUGGAGCAGGGCUCCGAGCGGCCCCUGACCGACACCGAGCGGGCCACCCUGAUGGACGAGCCCUACCGGAAGUCCAAGCUGACCUACGCCCAGGCCCGGAAGCUGCUGGGCCUGGAGGACACCGCCUUCUUCAAGGGCCUGCGGUACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCUCCACCCUGAUGGAGAUGAAGGCCUACCACGCCAUCUCCCGGGCCCUGGAGAAGGAGGGCCUGAAGGACAAGAAGUCCCCCCUGAACCUGUCCUCCGAGCUGCAGGACGAGAUCGGCACCGCCUUCUCCCUGUUCAAGACCGACGAGGACAUCACCGGCCGGCUGAAGGACCGGGUGCAGCCCGAGAUCCUGGAGGCCCUGCUGAAGCACAUCUCCUUCGACAAGUUCGUGCAGAUCUCCCUGAAGGCCCUGCGGCGGAUCGUGCCCCUGAUGGAGCAGGGCAAGCGGUACGACGAGGCCUGCGCCGAGAUCUACGGCGACCACUACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGAUCUACCUGCCCCCCAUCCCCGCCGACGAGAUCCGGAACCCCGUGGUGCUGCGGGCCCUGUCCCAGGCCCGGAAGGUGAUCAACGGCGUGGUGCGGCGGUACGGCUCCCCCGCCCGGAUCCACAUCGAGACCGCCCGGGAGGUGGGCAAGUCCUUCAAGGACCGGAAGGAGAUCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGUUCCGGGAGUACUUCCCCAACUUCGUGGGCGAGCCCAAGUCCAAGGACAUCCUGAAGCUGCGGCUGUACGAGCAGCAGCACGGCAAGUGCCUGUACUCCGGCAAGGAGAUCAACCUGGUGCGGCUGAACGAGAAGGGCUACGUGGAGAUCGACCACGCCCUGCCCUUCUCCCGGACCUGGGACGACUCCUUCAACAACAAGGUGCUGGUGCUGGGCUCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCUACGAGUACUUCAACGGCAAGGACAACUCCCGGGAGUGGCAGGAGUUCAAGGCCCGGGUGGAGACCUCCCGGUUCCCCCGGUCCAAGAAGCAGCGGAUCCUGCUGCAGAAGUUCGACGAGGACGGCUUCAAGGAGUGCAACCUGAACGACACCCGGUACGUGAACCGCUUCCUGUGCCAGUUCGUGGCCGACCACAUCCUGCUGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGUGUUCGCCUCCAACGGCCAGAUCACCAACCUGCUGCGGGGCUUCUGGGGCCUGCGGAAGGUGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCUGGACGCCGUGGUGGUGGCCUGCUCCACCGUGGCCAUGCAGCAGAAGAUCACCCGGUUCGUGCGGUACAAGGAGAUGAACGCCUUCGACGGCAAGACCAUCGACAAGGAGACCGGCAAGGUGCUGCACCAGAAGACCCACUUCCCCCAGCCCUGGGAGUUCUUCGCCCAGGAGGUGAUGAUCCGGGUGUUCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGUUCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCUGCGGACCCUGCUGGCCGAGAAGCUGUCCUCCCGGCCCGAGGCCGUGCACGAGUACGUGACCCCCCUGUUCGUGUCCCGGGCCCCCAACCGGAAGAUGUCCGGCGCCCACAAGGACACCCUGCGGUCCGCCAAGCGGUUCGUGAAGCACAACGAGAAGAUCUCCGUGAAGCGGGUGUGGCUGACCGAGAUCAAGCUGGCCGACCUGGAGAACAUGGUGAACUACAAGAACGGCCGGGAGAUCGAGCUGUACGAGGCCCUGAAGGCCCGGCUGGAGGCCUACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCUUCGACCCCAAGGACAACCCCUUCUACAAGAAGGGCGGCCAGCUGGUGAAGGCCGUGCGGGUGGAGAAGACCCAGGAGUCCGGCGUGCUGCUGAACAAGAAGAACGCCUACACCAUCGCCGACAACGGCGACAUGGUGCGGGUGGACGUGUUCUGCAAGGUGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGUACUUCAUCGUGCCCAUCUACGCCUGGCAGGUGGCCGAGAACAUCCUGCCCGACAUCGACUGCAAGGGCUACCGGAUCGACGACUCCUACACCUUCUGCUUCUCCCUGCACAAGUACGACCUGAUCGCCUUCCAGAAGGACGAGAAGUCCAAGGUGGAGUUCGCCUACUACAUCAACUGCGACUCCUCCAACGGCCGGUUCUACCUGGCCUGGCACGACAAGGGCUCCAAGGAGCAGCAGUUCCGGAUCUCCACCCAGAACCUGGUGCUGAUCCAGAAGUACCAGGUGAACGAGCUGGGCAAGGAGAUCCGGCCCUGCCGGCUGAAGAAGCGGCCCCCCGUGCGGGAGGACAAGCGGCCCGCCGCCACCAAGAAGGCCGGCCAGGCCAAGAAGAAGAAGUACCCCUACGACGUGCCCGACUACGCCGGCUACCCCUACGACGUGCCCGACUACGCCGGCUCCUACCCCUACGACGUGCCCGACUACGCCGCCGCCCCCGCCGCCAAGAAGAAGAAGCUGGACUAGCUAGUGACUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCU
141 APOBEC3A-Nme2D16A之例示性開放閱讀框 AUGGACGGCUCCGGCGGCGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGGAGGACAAGCGGCCCGCCGCCACCAAGAAGGCCGGCCAGGCCAAGAAGAAGAAGGGCGGCUCCGGCGGCGGCGAGGCCUCCCCCGCCUCCGGCCCCCGGCACCUGAUGGACCCCCACAUCUUCACCUCCAACUUCAACAACGGCAUCGGCCGGCACAAGACCUACCUGUGCUACGAGGUGGAGCGGCUGGACAACGGCACCUCCGUGAAGAUGGACCAGCACCGGGGCUUCCUGCACAACCAGGCCAAGAACCUGCUGUGCGGCUUCUACGGCCGGCACGCCGAGCUGCGGUUCCUGGACCUGGUGCCCUCCCUGCAGCUGGACCCCGCCCAGAUCUACCGGGUGACCUGGUUCAUCUCCUGGUCCCCCUGCUUCUCCUGGGGCUGCGCCGGCGAGGUGCGGGCCUUCCUGCAGGAGAACACCCACGUGCGGCUGCGGAUCUUCGCCGCCCGGAUCUACGACUACGACCCCCUGUACAAGGAGGCCCUGCAGAUGCUGCGGGACGCCGGCGCCCAGGUGUCCAUCAUGACCUACGACGAGUUCAAGCACUGCUGGGACACCUUCGUGGACCACCAGGGCUGCCCCUUCCAGCCCUGGGACGGCCUGGACGAGCACUCCCAGGCCCUGUCCGGCCGGCUGCGGGCCAUCCUGCAGAACCAGGGCAACUCCGGCUCCGAGACCCCCGGCACCUCCGAGUCCGCCACCCCCGAGUCCGCAGCGUUCAAACCAAAUCCCAUCAACUACAUCCUGGGCCUGGCCAUCGGCAUCGCCUCCGUGGGCUGGGCCAUGGUGGAGAUCGACGAGGAGGAGAACCCCAUCCGGCUGAUCGACCUGGGCGUGCGGGUGUUCGAGCGGGCCGAGGUGCCCAAGACCGGCGACUCCCUGGCCAUGGCCCGGCGGCUGGCCCGGUCCGUGCGGCGGCUGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCUGCUGCGGGCCCGGCGGCUGCUGAAGCGGGAGGGCGUGCUGCAGGCCGCCGACUUCGACGAGAACGGCCUGAUCAAGUCCCUGCCCAACACCCCCUGGCAGCUGCGGGCCGCCGCCCUGGACCGGAAGCUGACCCCCCUGGAGUGGUCCGCCGUGCUGCUGCACCUGAUCAAGCACCGGGGCUACCUGUCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCUGGGCGCCCUGCUGAAGGGCGUGGCCAACAACGCCCACGCCCUGCAGACCGGCGACUUCCGGACCCCCGCCGAGCUGGCCCUGAACAAGUUCGAGAAGGAGUCCGGCCACAUCCGGAACCAGCGGGGCGACUACUCCCACACCUUCUCCCGGAAGGACCUGCAGGCCGAGCUGAUCCUGCUGUUCGAGAAGCAGAAGGAGUUCGGCAACCCCCACGUGUCCGGCGGCCUGAAGGAGGGCAUCGAGACCCUGCUGAUGACCCAGCGGCCCGCCCUGUCCGGCGACGCCGUGCAGAAGAUGCUGGGCCACUGCACCUUCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCUACACCGCCGAGCGGUUCAUCUGGCUGACCAAGCUGAACAACCUGCGGAUCCUGGAGCAGGGCUCCGAGCGGCCCCUGACCGACACCGAGCGGGCCACCCUGAUGGACGAGCCCUACCGGAAGUCCAAGCUGACCUACGCCCAGGCCCGGAAGCUGCUGGGCCUGGAGGACACCGCCUUCUUCAAGGGCCUGCGGUACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCUCCACCCUGAUGGAGAUGAAGGCCUACCACGCCAUCUCCCGGGCCCUGGAGAAGGAGGGCCUGAAGGACAAGAAGUCCCCCCUGAACCUGUCCUCCGAGCUGCAGGACGAGAUCGGCACCGCCUUCUCCCUGUUCAAGACCGACGAGGACAUCACCGGCCGGCUGAAGGACCGGGUGCAGCCCGAGAUCCUGGAGGCCCUGCUGAAGCACAUCUCCUUCGACAAGUUCGUGCAGAUCUCCCUGAAGGCCCUGCGGCGGAUCGUGCCCCUGAUGGAGCAGGGCAAGCGGUACGACGAGGCCUGCGCCGAGAUCUACGGCGACCACUACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGAUCUACCUGCCCCCCAUCCCCGCCGACGAGAUCCGGAACCCCGUGGUGCUGCGGGCCCUGUCCCAGGCCCGGAAGGUGAUCAACGGCGUGGUGCGGCGGUACGGCUCCCCCGCCCGGAUCCACAUCGAGACCGCCCGGGAGGUGGGCAAGUCCUUCAAGGACCGGAAGGAGAUCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGUUCCGGGAGUACUUCCCCAACUUCGUGGGCGAGCCCAAGUCCAAGGACAUCCUGAAGCUGCGGCUGUACGAGCAGCAGCACGGCAAGUGCCUGUACUCCGGCAAGGAGAUCAACCUGGUGCGGCUGAACGAGAAGGGCUACGUGGAGAUCGACCACGCCCUGCCCUUCUCCCGGACCUGGGACGACUCCUUCAACAACAAGGUGCUGGUGCUGGGCUCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCUACGAGUACUUCAACGGCAAGGACAACUCCCGGGAGUGGCAGGAGUUCAAGGCCCGGGUGGAGACCUCCCGGUUCCCCCGGUCCAAGAAGCAGCGGAUCCUGCUGCAGAAGUUCGACGAGGACGGCUUCAAGGAGUGCAACCUGAACGACACCCGGUACGUGAACCGCUUCCUGUGCCAGUUCGUGGCCGACCACAUCCUGCUGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGUGUUCGCCUCCAACGGCCAGAUCACCAACCUGCUGCGGGGCUUCUGGGGCCUGCGGAAGGUGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCUGGACGCCGUGGUGGUGGCCUGCUCCACCGUGGCCAUGCAGCAGAAGAUCACCCGGUUCGUGCGGUACAAGGAGAUGAACGCCUUCGACGGCAAGACCAUCGACAAGGAGACCGGCAAGGUGCUGCACCAGAAGACCCACUUCCCCCAGCCCUGGGAGUUCUUCGCCCAGGAGGUGAUGAUCCGGGUGUUCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGUUCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCUGCGGACCCUGCUGGCCGAGAAGCUGUCCUCCCGGCCCGAGGCCGUGCACGAGUACGUGACCCCCCUGUUCGUGUCCCGGGCCCCCAACCGGAAGAUGUCCGGCGCCCACAAGGACACCCUGCGGUCCGCCAAGCGGUUCGUGAAGCACAACGAGAAGAUCUCCGUGAAGCGGGUGUGGCUGACCGAGAUCAAGCUGGCCGACCUGGAGAACAUGGUGAACUACAAGAACGGCCGGGAGAUCGAGCUGUACGAGGCCCUGAAGGCCCGGCUGGAGGCCUACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCUUCGACCCCAAGGACAACCCCUUCUACAAGAAGGGCGGCCAGCUGGUGAAGGCCGUGCGGGUGGAGAAGACCCAGGAGUCCGGCGUGCUGCUGAACAAGAAGAACGCCUACACCAUCGCCGACAACGGCGACAUGGUGCGGGUGGACGUGUUCUGCAAGGUGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGUACUUCAUCGUGCCCAUCUACGCCUGGCAGGUGGCCGAGAACAUCCUGCCCGACAUCGACUGCAAGGGCUACCGGAUCGACGACUCCUACACCUUCUGCUUCUCCCUGCACAAGUACGACCUGAUCGCCUUCCAGAAGGACGAGAAGUCCAAGGUGGAGUUCGCCUACUACAUCAACUGCGACUCCUCCAACGGCCGGUUCUACCUGGCCUGGCACGACAAGGGCUCCAAGGAGCAGCAGUUCCGGAUCUCCACCCAGAACCUGGUGCUGAUCCAGAAGUACCAGGUGAACGAGCUGGGCAAGGAGAUCCGGCCCUGCCGGCUGAAGAAGCGGCCCCCCGUGCGGGAGGACAAGCGGCCCGCCGCCACCAAGAAGGCCGGCCAGGCCAAGAAGAAGAAGUACCCCUACGACGUGCCCGACUACGCCGGCUACCCCUACGACGUGCCCGACUACGCCGGCUCCUACCCCUACGACGUGCCCGACUACGCCGCCGCCCCCGCCGCCAAGAAGAAGAAGCUGGACU
142 APOBEC3A-Nme2D16A之例示性胺基酸序列 MDGSGGGSPKKKRKVEDKRPAATKKAGQAKKKKGGSGGGEASPASGPRHLMDPHIFTSNFNNGIGRHKTYLCYEVERLDNGTSVKMDQHRGFLHNQAKNLLCGFYGRHAELRFLDLVPSLQLDPAQIYRVTWFISWSPCFSWGCAGEVRAFLQENTHVRLRIFAARIYDYDPLYKEALQMLRDAGAQVSIMTYDEFKHCWDTFVDHQGCPFQPWDGLDEHSQALSGRLRAILQNQGNSGSETPGTSESATPESAAFKPNPINYILGLAIGIASVGWAMVEIDEEENPIRLIDLGVRVFERAEVPKTGDSLAMARRLARSVRRLTRRRAHRLLRARRLLKREGVLQAADFDENGLIKSLPNTPWQLRAAALDRKLTPLEWSAVLLHLIKHRGYLSQRKNEGETADKELGALLKGVANNAHALQTGDFRTPAELALNKFEKESGHIRNQRGDYSHTFSRKDLQAELILLFEKQKEFGNPHVSGGLKEGIETLLMTQRPALSGDAVQKMLGHCTFEPAEPKAAKNTYTAERFIWLTKLNNLRILEQGSERPLTDTERATLMDEPYRKSKLTYAQARKLLGLEDTAFFKGLRYGKDNAEASTLMEMKAYHAISRALEKEGLKDKKSPLNLSSELQDEIGTAFSLFKTDEDITGRLKDRVQPEILEALLKHISFDKFVQISLKALRRIVPLMEQGKRYDEACAEIYGDHYGKKNTEEKIYLPPIPADEIRNPVVLRALSQARKVINGVVRRYGSPARIHIETAREVGKSFKDRKEIEKRQEENRKDREKAAAKFREYFPNFVGEPKSKDILKLRLYEQQHGKCLYSGKEINLVRLNEKGYVEIDHALPFSRTWDDSFNNKVLVLGSENQNKGNQTPYEYFNGKDNSREWQEFKARVETSRFPRSKKQRILLQKFDEDGFKECNLNDTRYVNRFLCQFVADHILLTGKGKRRVFASNGQITNLLRGFWGLRKVRAENDRHHALDAVVVACSTVAMQQKITRFVRYKEMNAFDGKTIDKETGKVLHQKTHFPQPWEFFAQEVMIRVFGKPDGKPEFEEADTPEKLRTLLAEKLSSRPEAVHEYVTPLFVSRAPNRKMSGAHKDTLRSAKRFVKHNEKISVKRVWLTEIKLADLENMVNYKNGREIELYEALKARLEAYGGNAKQAFDPKDNPFYKKGGQLVKAVRVEKTQESGVLLNKKNAYTIADNGDMVRVDVFCKVDKKGKNQYFIVPIYAWQVAENILPDIDCKGYRIDDSYTFCFSLHKYDLIAFQKDEKSKVEFAYYINCDSSNGRFYLAWHDKGSKEQQFRISTQNLVLIQKYQVNELGKEIRPCRLKKRPPVREDKRPAATKKAGQAKKKKYPYDVPDYAGYPYDVPDYAGSYPYDVPDYAAAPAAKKKKLD
143 編碼APOBEC3A-NME2D16A之例示性MRNA GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACGGCUCCGGCGGCGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGGAGGACAAGCGGCCCGCCGCCACCAAGAAGGCCGGCCAGGCCAAGAAGAAGAAGGGCGGCUCCGGCGGCGGCGAGGCCUCCCCCGCCUCCGGCCCCCGGCACCUGAUGGACCCCCACAUCUUCACCUCCAACUUCAACAACGGCAUCGGCCGGCACAAGACCUACCUGUGCUACGAGGUGGAGCGGCUGGACAACGGCACCUCCGUGAAGAUGGACCAGCACCGGGGCUUCCUGCACAACCAGGCCAAGAACCUGCUGUGCGGCUUCUACGGCCGGCACGCCGAGCUGCGGUUCCUGGACCUGGUGCCCUCCCUGCAGCUGGACCCCGCCCAGAUCUACCGGGUGACCUGGUUCAUCUCCUGGUCCCCCUGCUUCUCCUGGGGCUGCGCCGGCGAGGUGCGGGCCUUCCUGCAGGAGAACACCCACGUGCGGCUGCGGAUCUUCGCCGCCCGGAUCUACGACUACGACCCCCUGUACAAGGAGGCCCUGCAGAUGCUGCGGGACGCCGGCGCCCAGGUGUCCAUCAUGACCUACGACGAGUUCAAGCACUGCUGGGACACCUUCGUGGACCACCAGGGCUGCCCCUUCCAGCCCUGGGACGGCCUGGACGAGCACUCCCAGGCCCUGUCCGGCCGGCUGCGGGCCAUCCUGCAGAACCAGGGCAACUCCGGCUCCGAGACCCCCGGCACCUCCGAGUCCGCCACCCCCGAGUCCGCAGCGUUCAAACCAAAUCCCAUCAACUACAUCCUGGGCCUGGCCAUCGGCAUCGCCUCCGUGGGCUGGGCCAUGGUGGAGAUCGACGAGGAGGAGAACCCCAUCCGGCUGAUCGACCUGGGCGUGCGGGUGUUCGAGCGGGCCGAGGUGCCCAAGACCGGCGACUCCCUGGCCAUGGCCCGGCGGCUGGCCCGGUCCGUGCGGCGGCUGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCUGCUGCGGGCCCGGCGGCUGCUGAAGCGGGAGGGCGUGCUGCAGGCCGCCGACUUCGACGAGAACGGCCUGAUCAAGUCCCUGCCCAACACCCCCUGGCAGCUGCGGGCCGCCGCCCUGGACCGGAAGCUGACCCCCCUGGAGUGGUCCGCCGUGCUGCUGCACCUGAUCAAGCACCGGGGCUACCUGUCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCUGGGCGCCCUGCUGAAGGGCGUGGCCAACAACGCCCACGCCCUGCAGACCGGCGACUUCCGGACCCCCGCCGAGCUGGCCCUGAACAAGUUCGAGAAGGAGUCCGGCCACAUCCGGAACCAGCGGGGCGACUACUCCCACACCUUCUCCCGGAAGGACCUGCAGGCCGAGCUGAUCCUGCUGUUCGAGAAGCAGAAGGAGUUCGGCAACCCCCACGUGUCCGGCGGCCUGAAGGAGGGCAUCGAGACCCUGCUGAUGACCCAGCGGCCCGCCCUGUCCGGCGACGCCGUGCAGAAGAUGCUGGGCCACUGCACCUUCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCUACACCGCCGAGCGGUUCAUCUGGCUGACCAAGCUGAACAACCUGCGGAUCCUGGAGCAGGGCUCCGAGCGGCCCCUGACCGACACCGAGCGGGCCACCCUGAUGGACGAGCCCUACCGGAAGUCCAAGCUGACCUACGCCCAGGCCCGGAAGCUGCUGGGCCUGGAGGACACCGCCUUCUUCAAGGGCCUGCGGUACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCUCCACCCUGAUGGAGAUGAAGGCCUACCACGCCAUCUCCCGGGCCCUGGAGAAGGAGGGCCUGAAGGACAAGAAGUCCCCCCUGAACCUGUCCUCCGAGCUGCAGGACGAGAUCGGCACCGCCUUCUCCCUGUUCAAGACCGACGAGGACAUCACCGGCCGGCUGAAGGACCGGGUGCAGCCCGAGAUCCUGGAGGCCCUGCUGAAGCACAUCUCCUUCGACAAGUUCGUGCAGAUCUCCCUGAAGGCCCUGCGGCGGAUCGUGCCCCUGAUGGAGCAGGGCAAGCGGUACGACGAGGCCUGCGCCGAGAUCUACGGCGACCACUACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGAUCUACCUGCCCCCCAUCCCCGCCGACGAGAUCCGGAACCCCGUGGUGCUGCGGGCCCUGUCCCAGGCCCGGAAGGUGAUCAACGGCGUGGUGCGGCGGUACGGCUCCCCCGCCCGGAUCCACAUCGAGACCGCCCGGGAGGUGGGCAAGUCCUUCAAGGACCGGAAGGAGAUCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGUUCCGGGAGUACUUCCCCAACUUCGUGGGCGAGCCCAAGUCCAAGGACAUCCUGAAGCUGCGGCUGUACGAGCAGCAGCACGGCAAGUGCCUGUACUCCGGCAAGGAGAUCAACCUGGUGCGGCUGAACGAGAAGGGCUACGUGGAGAUCGACCACGCCCUGCCCUUCUCCCGGACCUGGGACGACUCCUUCAACAACAAGGUGCUGGUGCUGGGCUCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCUACGAGUACUUCAACGGCAAGGACAACUCCCGGGAGUGGCAGGAGUUCAAGGCCCGGGUGGAGACCUCCCGGUUCCCCCGGUCCAAGAAGCAGCGGAUCCUGCUGCAGAAGUUCGACGAGGACGGCUUCAAGGAGUGCAACCUGAACGACACCCGGUACGUGAACCGCUUCCUGUGCCAGUUCGUGGCCGACCACAUCCUGCUGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGUGUUCGCCUCCAACGGCCAGAUCACCAACCUGCUGCGGGGCUUCUGGGGCCUGCGGAAGGUGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCUGGACGCCGUGGUGGUGGCCUGCUCCACCGUGGCCAUGCAGCAGAAGAUCACCCGGUUCGUGCGGUACAAGGAGAUGAACGCCUUCGACGGCAAGACCAUCGACAAGGAGACCGGCAAGGUGCUGCACCAGAAGACCCACUUCCCCCAGCCCUGGGAGUUCUUCGCCCAGGAGGUGAUGAUCCGGGUGUUCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGUUCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCUGCGGACCCUGCUGGCCGAGAAGCUGUCCUCCCGGCCCGAGGCCGUGCACGAGUACGUGACCCCCCUGUUCGUGUCCCGGGCCCCCAACCGGAAGAUGUCCGGCGCCCACAAGGACACCCUGCGGUCCGCCAAGCGGUUCGUGAAGCACAACGAGAAGAUCUCCGUGAAGCGGGUGUGGCUGACCGAGAUCAAGCUGGCCGACCUGGAGAACAUGGUGAACUACAAGAACGGCCGGGAGAUCGAGCUGUACGAGGCCCUGAAGGCCCGGCUGGAGGCCUACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCUUCGACCCCAAGGACAACCCCUUCUACAAGAAGGGCGGCCAGCUGGUGAAGGCCGUGCGGGUGGAGAAGACCCAGGAGUCCGGCGUGCUGCUGAACAAGAAGAACGCCUACACCAUCGCCGACAACGGCGACAUGGUGCGGGUGGACGUGUUCUGCAAGGUGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGUACUUCAUCGUGCCCAUCUACGCCUGGCAGGUGGCCGAGAACAUCCUGCCCGACAUCGACUGCAAGGGCUACCGGAUCGACGACUCCUACACCUUCUGCUUCUCCCUGCACAAGUACGACCUGAUCGCCUUCCAGAAGGACGAGAAGUCCAAGGUGGAGUUCGCCUACUACAUCAACUGCGACUCCUCCAACGGCCGGUUCUACCUGGCCUGGCACGACAAGGGCUCCAAGGAGCAGCAGUUCCGGAUCUCCACCCAGAACCUGGUGCUGAUCCAGAAGUACCAGGUGAACGAGCUGGGCAAGGAGAUCCGGCCCUGCCGGCUGAAGAAGCGGCCCCCCGUGCGGUAGUGACUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCU
144 APOBEC3A-Nme2D16A之例示性開放閱讀框 AUGGACGGCUCCGGCGGCGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGGAGGACAAGCGGCCCGCCGCCACCAAGAAGGCCGGCCAGGCCAAGAAGAAGAAGGGCGGCUCCGGCGGCGGCGAGGCCUCCCCCGCCUCCGGCCCCCGGCACCUGAUGGACCCCCACAUCUUCACCUCCAACUUCAACAACGGCAUCGGCCGGCACAAGACCUACCUGUGCUACGAGGUGGAGCGGCUGGACAACGGCACCUCCGUGAAGAUGGACCAGCACCGGGGCUUCCUGCACAACCAGGCCAAGAACCUGCUGUGCGGCUUCUACGGCCGGCACGCCGAGCUGCGGUUCCUGGACCUGGUGCCCUCCCUGCAGCUGGACCCCGCCCAGAUCUACCGGGUGACCUGGUUCAUCUCCUGGUCCCCCUGCUUCUCCUGGGGCUGCGCCGGCGAGGUGCGGGCCUUCCUGCAGGAGAACACCCACGUGCGGCUGCGGAUCUUCGCCGCCCGGAUCUACGACUACGACCCCCUGUACAAGGAGGCCCUGCAGAUGCUGCGGGACGCCGGCGCCCAGGUGUCCAUCAUGACCUACGACGAGUUCAAGCACUGCUGGGACACCUUCGUGGACCACCAGGGCUGCCCCUUCCAGCCCUGGGACGGCCUGGACGAGCACUCCCAGGCCCUGUCCGGCCGGCUGCGGGCCAUCCUGCAGAACCAGGGCAACUCCGGCUCCGAGACCCCCGGCACCUCCGAGUCCGCCACCCCCGAGUCCGCAGCGUUCAAACCAAAUCCCAUCAACUACAUCCUGGGCCUGGCCAUCGGCAUCGCCUCCGUGGGCUGGGCCAUGGUGGAGAUCGACGAGGAGGAGAACCCCAUCCGGCUGAUCGACCUGGGCGUGCGGGUGUUCGAGCGGGCCGAGGUGCCCAAGACCGGCGACUCCCUGGCCAUGGCCCGGCGGCUGGCCCGGUCCGUGCGGCGGCUGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCUGCUGCGGGCCCGGCGGCUGCUGAAGCGGGAGGGCGUGCUGCAGGCCGCCGACUUCGACGAGAACGGCCUGAUCAAGUCCCUGCCCAACACCCCCUGGCAGCUGCGGGCCGCCGCCCUGGACCGGAAGCUGACCCCCCUGGAGUGGUCCGCCGUGCUGCUGCACCUGAUCAAGCACCGGGGCUACCUGUCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCUGGGCGCCCUGCUGAAGGGCGUGGCCAACAACGCCCACGCCCUGCAGACCGGCGACUUCCGGACCCCCGCCGAGCUGGCCCUGAACAAGUUCGAGAAGGAGUCCGGCCACAUCCGGAACCAGCGGGGCGACUACUCCCACACCUUCUCCCGGAAGGACCUGCAGGCCGAGCUGAUCCUGCUGUUCGAGAAGCAGAAGGAGUUCGGCAACCCCCACGUGUCCGGCGGCCUGAAGGAGGGCAUCGAGACCCUGCUGAUGACCCAGCGGCCCGCCCUGUCCGGCGACGCCGUGCAGAAGAUGCUGGGCCACUGCACCUUCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCUACACCGCCGAGCGGUUCAUCUGGCUGACCAAGCUGAACAACCUGCGGAUCCUGGAGCAGGGCUCCGAGCGGCCCCUGACCGACACCGAGCGGGCCACCCUGAUGGACGAGCCCUACCGGAAGUCCAAGCUGACCUACGCCCAGGCCCGGAAGCUGCUGGGCCUGGAGGACACCGCCUUCUUCAAGGGCCUGCGGUACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCUCCACCCUGAUGGAGAUGAAGGCCUACCACGCCAUCUCCCGGGCCCUGGAGAAGGAGGGCCUGAAGGACAAGAAGUCCCCCCUGAACCUGUCCUCCGAGCUGCAGGACGAGAUCGGCACCGCCUUCUCCCUGUUCAAGACCGACGAGGACAUCACCGGCCGGCUGAAGGACCGGGUGCAGCCCGAGAUCCUGGAGGCCCUGCUGAAGCACAUCUCCUUCGACAAGUUCGUGCAGAUCUCCCUGAAGGCCCUGCGGCGGAUCGUGCCCCUGAUGGAGCAGGGCAAGCGGUACGACGAGGCCUGCGCCGAGAUCUACGGCGACCACUACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGAUCUACCUGCCCCCCAUCCCCGCCGACGAGAUCCGGAACCCCGUGGUGCUGCGGGCCCUGUCCCAGGCCCGGAAGGUGAUCAACGGCGUGGUGCGGCGGUACGGCUCCCCCGCCCGGAUCCACAUCGAGACCGCCCGGGAGGUGGGCAAGUCCUUCAAGGACCGGAAGGAGAUCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGUUCCGGGAGUACUUCCCCAACUUCGUGGGCGAGCCCAAGUCCAAGGACAUCCUGAAGCUGCGGCUGUACGAGCAGCAGCACGGCAAGUGCCUGUACUCCGGCAAGGAGAUCAACCUGGUGCGGCUGAACGAGAAGGGCUACGUGGAGAUCGACCACGCCCUGCCCUUCUCCCGGACCUGGGACGACUCCUUCAACAACAAGGUGCUGGUGCUGGGCUCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCUACGAGUACUUCAACGGCAAGGACAACUCCCGGGAGUGGCAGGAGUUCAAGGCCCGGGUGGAGACCUCCCGGUUCCCCCGGUCCAAGAAGCAGCGGAUCCUGCUGCAGAAGUUCGACGAGGACGGCUUCAAGGAGUGCAACCUGAACGACACCCGGUACGUGAACCGCUUCCUGUGCCAGUUCGUGGCCGACCACAUCCUGCUGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGUGUUCGCCUCCAACGGCCAGAUCACCAACCUGCUGCGGGGCUUCUGGGGCCUGCGGAAGGUGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCUGGACGCCGUGGUGGUGGCCUGCUCCACCGUGGCCAUGCAGCAGAAGAUCACCCGGUUCGUGCGGUACAAGGAGAUGAACGCCUUCGACGGCAAGACCAUCGACAAGGAGACCGGCAAGGUGCUGCACCAGAAGACCCACUUCCCCCAGCCCUGGGAGUUCUUCGCCCAGGAGGUGAUGAUCCGGGUGUUCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGUUCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCUGCGGACCCUGCUGGCCGAGAAGCUGUCCUCCCGGCCCGAGGCCGUGCACGAGUACGUGACCCCCCUGUUCGUGUCCCGGGCCCCCAACCGGAAGAUGUCCGGCGCCCACAAGGACACCCUGCGGUCCGCCAAGCGGUUCGUGAAGCACAACGAGAAGAUCUCCGUGAAGCGGGUGUGGCUGACCGAGAUCAAGCUGGCCGACCUGGAGAACAUGGUGAACUACAAGAACGGCCGGGAGAUCGAGCUGUACGAGGCCCUGAAGGCCCGGCUGGAGGCCUACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCUUCGACCCCAAGGACAACCCCUUCUACAAGAAGGGCGGCCAGCUGGUGAAGGCCGUGCGGGUGGAGAAGACCCAGGAGUCCGGCGUGCUGCUGAACAAGAAGAACGCCUACACCAUCGCCGACAACGGCGACAUGGUGCGGGUGGACGUGUUCUGCAAGGUGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGUACUUCAUCGUGCCCAUCUACGCCUGGCAGGUGGCCGAGAACAUCCUGCCCGACAUCGACUGCAAGGGCUACCGGAUCGACGACUCCUACACCUUCUGCUUCUCCCUGCACAAGUACGACCUGAUCGCCUUCCAGAAGGACGAGAAGUCCAAGGUGGAGUUCGCCUACUACAUCAACUGCGACUCCUCCAACGGCCGGUUCUACCUGGCCUGGCACGACAAGGGCUCCAAGGAGCAGCAGUUCCGGAUCUCCACCCAGAACCUGGUGCUGAUCCAGAAGUACCAGGUGAACGAGCUGGGCAAGGAGAUCCGGCCCUGCCGGCUGAAGAAGCGGCCCCCCGUGCGGUAG
145 APOBEC3A-Nme2D16A之例示性胺基酸序列 MDGSGGGSPKKKRKVEDKRPAATKKAGQAKKKKGGSGGGEASPASGPRHLMDPHIFTSNFNNGIGRHKTYLCYEVERLDNGTSVKMDQHRGFLHNQAKNLLCGFYGRHAELRFLDLVPSLQLDPAQIYRVTWFISWSPCFSWGCAGEVRAFLQENTHVRLRIFAARIYDYDPLYKEALQMLRDAGAQVSIMTYDEFKHCWDTFVDHQGCPFQPWDGLDEHSQALSGRLRAILQNQGNSGSETPGTSESATPESAAFKPNPINYILGLAIGIASVGWAMVEIDEEENPIRLIDLGVRVFERAEVPKTGDSLAMARRLARSVRRLTRRRAHRLLRARRLLKREGVLQAADFDENGLIKSLPNTPWQLRAAALDRKLTPLEWSAVLLHLIKHRGYLSQRKNEGETADKELGALLKGVANNAHALQTGDFRTPAELALNKFEKESGHIRNQRGDYSHTFSRKDLQAELILLFEKQKEFGNPHVSGGLKEGIETLLMTQRPALSGDAVQKMLGHCTFEPAEPKAAKNTYTAERFIWLTKLNNLRILEQGSERPLTDTERATLMDEPYRKSKLTYAQARKLLGLEDTAFFKGLRYGKDNAEASTLMEMKAYHAISRALEKEGLKDKKSPLNLSSELQDEIGTAFSLFKTDEDITGRLKDRVQPEILEALLKHISFDKFVQISLKALRRIVPLMEQGKRYDEACAEIYGDHYGKKNTEEKIYLPPIPADEIRNPVVLRALSQARKVINGVVRRYGSPARIHIETAREVGKSFKDRKEIEKRQEENRKDREKAAAKFREYFPNFVGEPKSKDILKLRLYEQQHGKCLYSGKEINLVRLNEKGYVEIDHALPFSRTWDDSFNNKVLVLGSENQNKGNQTPYEYFNGKDNSREWQEFKARVETSRFPRSKKQRILLQKFDEDGFKECNLNDTRYVNRFLCQFVADHILLTGKGKRRVFASNGQITNLLRGFWGLRKVRAENDRHHALDAVVVACSTVAMQQKITRFVRYKEMNAFDGKTIDKETGKVLHQKTHFPQPWEFFAQEVMIRVFGKPDGKPEFEEADTPEKLRTLLAEKLSSRPEAVHEYVTPLFVSRAPNRKMSGAHKDTLRSAKRFVKHNEKISVKRVWLTEIKLADLENMVNYKNGREIELYEALKARLEAYGGNAKQAFDPKDNPFYKKGGQLVKAVRVEKTQESGVLLNKKNAYTIADNGDMVRVDVFCKVDKKGKNQYFIVPIYAWQVAENILPDIDCKGYRIDDSYTFCFSLHKYDLIAFQKDEKSKVEFAYYINCDSSNGRFYLAWHDKGSKEQQFRISTQNLVLIQKYQVNELGKEIRPCRLKKRPPVR*
146 NLS-NLS-APOBEC3A-L070-Nme2D16A之例示性胺基酸序列 MDGSGGGSPKKKRKVEDKRPAATKKAGQAKKKKGGSGGGEASPASGPRHLMDPHIFTSNFNNGIGRHKTYLCYEVERLDNGTSVKMDQHRGFLHNQAKNLLCGFYGRHAELRFLDLVPSLQLDPAQIYRVTWFISWSPCFSWGCAGEVRAFLQENTHVRLRIFAARIYDYDPLYKEALQMLRDAGAQVSIMTYDEFKHCWDTFVDHQGCPFQPWDGLDEHSQALSGRLRAILQNQGNGTKDSTKDIPETPSKDAAFKPNPINYILGLAIGIASVGWAMVEIDEEENPIRLIDLGVRVFERAEVPKTGDSLAMARRLARSVRRLTRRRAHRLLRARRLLKREGVLQAADFDENGLIKSLPNTPWQLRAAALDRKLTPLEWSAVLLHLIKHRGYLSQRKNEGETADKELGALLKGVANNAHALQTGDFRTPAELALNKFEKESGHIRNQRGDYSHTFSRKDLQAELILLFEKQKEFGNPHVSGGLKEGIETLLMTQRPALSGDAVQKMLGHCTFEPAEPKAAKNTYTAERFIWLTKLNNLRILEQGSERPLTDTERATLMDEPYRKSKLTYAQARKLLGLEDTAFFKGLRYGKDNAEASTLMEMKAYHAISRALEKEGLKDKKSPLNLSSELQDEIGTAFSLFKTDEDITGRLKDRVQPEILEALLKHISFDKFVQISLKALRRIVPLMEQGKRYDEACAEIYGDHYGKKNTEEKIYLPPIPADEIRNPVVLRALSQARKVINGVVRRYGSPARIHIETAREVGKSFKDRKEIEKRQEENRKDREKAAAKFREYFPNFVGEPKSKDILKLRLYEQQHGKCLYSGKEINLVRLNEKGYVEIDHALPFSRTWDDSFNNKVLVLGSENQNKGNQTPYEYFNGKDNSREWQEFKARVETSRFPRSKKQRILLQKFDEDGFKECNLNDTRYVNRFLCQFVADHILLTGKGKRRVFASNGQITNLLRGFWGLRKVRAENDRHHALDAVVVACSTVAMQQKITRFVRYKEMNAFDGKTIDKETGKVLHQKTHFPQPWEFFAQEVMIRVFGKPDGKPEFEEADTPEKLRTLLAEKLSSRPEAVHEYVTPLFVSRAPNRKMSGAHKDTLRSAKRFVKHNEKISVKRVWLTEIKLADLENMVNYKNGREIELYEALKARLEAYGGNAKQAFDPKDNPFYKKGGQLVKAVRVEKTQESGVLLNKKNAYTIADNGDMVRVDVFCKVDKKGKNQYFIVPIYAWQVAENILPDIDCKGYRIDDSYTFCFSLHKYDLIAFQKDEKSKVEFAYYINCDSSNGRFYLAWHDKGSKEQQFRISTQNLVLIQKYQVNELGKEIRPCRLKKRPPVR
147 編碼BC22-Nme2D16A (Nme2 BC22n)之mRNA GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACGGCUCCGGCGGCGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGGAGGACAAGCGGCCCGCCGCCACCAAGAAGGCCGGCCAGGCCAAGAAGAAGAAGGGCGGCUCCGGCGGCGGCGAGGCCUCCCCCGCCUCCGGCCCCCGGCACCUGAUGGACCCCCACAUCUUCACCUCCAACUUCAACAACGGCAUCGGCCGGCACAAGACCUACCUGUGCUACGAGGUGGAGCGGCUGGACAACGGCACCUCCGUGAAGAUGGACCAGCACCGGGGCUUCCUGCACAACCAGGCCAAGAACCUGCUGUGCGGCUUCUACGGCCGGCACGCCGAGCUGCGGUUCCUGGACCUGGUGCCCUCCCUGCAGCUGGACCCCGCCCAGAUCUACCGGGUGACCUGGUUCAUCUCCUGGUCCCCCUGCUUCUCCUGGGGCUGCGCCGGCGAGGUGCGGGCCUUCCUGCAGGAGAACACCCACGUGCGGCUGCGGAUCUUCGCCGCCCGGAUCUACGACUACGACCCCCUGUACAAGGAGGCCCUGCAGAUGCUGCGGGACGCCGGCGCCCAGGUGUCCAUCAUGACCUACGACGAGUUCAAGCACUGCUGGGACACCUUCGUGGACCACCAGGGCUGCCCCUUCCAGCCCUGGGACGGCCUGGACGAGCACUCCCAGGCCCUGUCCGGCCGGCUGCGGGCCAUCCUGCAGAACCAGGGCAACUCCGGCUCCGAGACCCCCGGCACCUCCGAGUCCGCCACCCCCGAGUCCGCAGCGUUCAAACCAAAUCCCAUCAACUACAUCCUGGGCCUGGCCAUCGGCAUCGCCUCCGUGGGCUGGGCCAUGGUGGAGAUCGACGAGGAGGAGAACCCCAUCCGGCUGAUCGACCUGGGCGUGCGGGUGUUCGAGCGGGCCGAGGUGCCCAAGACCGGCGACUCCCUGGCCAUGGCCCGGCGGCUGGCCCGGUCCGUGCGGCGGCUGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCUGCUGCGGGCCCGGCGGCUGCUGAAGCGGGAGGGCGUGCUGCAGGCCGCCGACUUCGACGAGAACGGCCUGAUCAAGUCCCUGCCCAACACCCCCUGGCAGCUGCGGGCCGCCGCCCUGGACCGGAAGCUGACCCCCCUGGAGUGGUCCGCCGUGCUGCUGCACCUGAUCAAGCACCGGGGCUACCUGUCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCUGGGCGCCCUGCUGAAGGGCGUGGCCAACAACGCCCACGCCCUGCAGACCGGCGACUUCCGGACCCCCGCCGAGCUGGCCCUGAACAAGUUCGAGAAGGAGUCCGGCCACAUCCGGAACCAGCGGGGCGACUACUCCCACACCUUCUCCCGGAAGGACCUGCAGGCCGAGCUGAUCCUGCUGUUCGAGAAGCAGAAGGAGUUCGGCAACCCCCACGUGUCCGGCGGCCUGAAGGAGGGCAUCGAGACCCUGCUGAUGACCCAGCGGCCCGCCCUGUCCGGCGACGCCGUGCAGAAGAUGCUGGGCCACUGCACCUUCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCUACACCGCCGAGCGGUUCAUCUGGCUGACCAAGCUGAACAACCUGCGGAUCCUGGAGCAGGGCUCCGAGCGGCCCCUGACCGACACCGAGCGGGCCACCCUGAUGGACGAGCCCUACCGGAAGUCCAAGCUGACCUACGCCCAGGCCCGGAAGCUGCUGGGCCUGGAGGACACCGCCUUCUUCAAGGGCCUGCGGUACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCUCCACCCUGAUGGAGAUGAAGGCCUACCACGCCAUCUCCCGGGCCCUGGAGAAGGAGGGCCUGAAGGACAAGAAGUCCCCCCUGAACCUGUCCUCCGAGCUGCAGGACGAGAUCGGCACCGCCUUCUCCCUGUUCAAGACCGACGAGGACAUCACCGGCCGGCUGAAGGACCGGGUGCAGCCCGAGAUCCUGGAGGCCCUGCUGAAGCACAUCUCCUUCGACAAGUUCGUGCAGAUCUCCCUGAAGGCCCUGCGGCGGAUCGUGCCCCUGAUGGAGCAGGGCAAGCGGUACGACGAGGCCUGCGCCGAGAUCUACGGCGACCACUACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGAUCUACCUGCCCCCCAUCCCCGCCGACGAGAUCCGGAACCCCGUGGUGCUGCGGGCCCUGUCCCAGGCCCGGAAGGUGAUCAACGGCGUGGUGCGGCGGUACGGCUCCCCCGCCCGGAUCCACAUCGAGACCGCCCGGGAGGUGGGCAAGUCCUUCAAGGACCGGAAGGAGAUCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGUUCCGGGAGUACUUCCCCAACUUCGUGGGCGAGCCCAAGUCCAAGGACAUCCUGAAGCUGCGGCUGUACGAGCAGCAGCACGGCAAGUGCCUGUACUCCGGCAAGGAGAUCAACCUGGUGCGGCUGAACGAGAAGGGCUACGUGGAGAUCGACCACGCCCUGCCCUUCUCCCGGACCUGGGACGACUCCUUCAACAACAAGGUGCUGGUGCUGGGCUCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCUACGAGUACUUCAACGGCAAGGACAACUCCCGGGAGUGGCAGGAGUUCAAGGCCCGGGUGGAGACCUCCCGGUUCCCCCGGUCCAAGAAGCAGCGGAUCCUGCUGCAGAAGUUCGACGAGGACGGCUUCAAGGAGUGCAACCUGAACGACACCCGGUACGUGAACCGCUUCCUGUGCCAGUUCGUGGCCGACCACAUCCUGCUGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGUGUUCGCCUCCAACGGCCAGAUCACCAACCUGCUGCGGGGCUUCUGGGGCCUGCGGAAGGUGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCUGGACGCCGUGGUGGUGGCCUGCUCCACCGUGGCCAUGCAGCAGAAGAUCACCCGGUUCGUGCGGUACAAGGAGAUGAACGCCUUCGACGGCAAGACCAUCGACAAGGAGACCGGCAAGGUGCUGCACCAGAAGACCCACUUCCCCCAGCCCUGGGAGUUCUUCGCCCAGGAGGUGAUGAUCCGGGUGUUCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGUUCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCUGCGGACCCUGCUGGCCGAGAAGCUGUCCUCCCGGCCCGAGGCCGUGCACGAGUACGUGACCCCCCUGUUCGUGUCCCGGGCCCCCAACCGGAAGAUGUCCGGCGCCCACAAGGACACCCUGCGGUCCGCCAAGCGGUUCGUGAAGCACAACGAGAAGAUCUCCGUGAAGCGGGUGUGGCUGACCGAGAUCAAGCUGGCCGACCUGGAGAACAUGGUGAACUACAAGAACGGCCGGGAGAUCGAGCUGUACGAGGCCCUGAAGGCCCGGCUGGAGGCCUACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCUUCGACCCCAAGGACAACCCCUUCUACAAGAAGGGCGGCCAGCUGGUGAAGGCCGUGCGGGUGGAGAAGACCCAGGAGUCCGGCGUGCUGCUGAACAAGAAGAACGCCUACACCAUCGCCGACAACGGCGACAUGGUGCGGGUGGACGUGUUCUGCAAGGUGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGUACUUCAUCGUGCCCAUCUACGCCUGGCAGGUGGCCGAGAACAUCCUGCCCGACAUCGACUGCAAGGGCUACCGGAUCGACGACUCCUACACCUUCUGCUUCUCCCUGCACAAGUACGACCUGAUCGCCUUCCAGAAGGACGAGAAGUCCAAGGUGGAGUUCGCCUACUACAUCAACUGCGACUCCUCCAACGGCCGGUUCUACCUGGCCUGGCACGACAAGGGCUCCAAGGAGCAGCAGUUCCGGAUCUCCACCCAGAACCUGGUGCUGAUCCAGAAGUACCAGGUGAACGAGCUGGGCAAGGAGAUCCGGCCCUGCCGGCUGAAGAAGCGGCCCCCCGUGCGGUAGUGACUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAUGGAAAAAAAAAAAACGGAAAAAAAAAAAGGUAAAAAAAAAAAAUAUAAAAAAAAAAACAUAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACGUAAAAAAAAAAAACUCAAAAAAAAAAAGAUAAAAAAAAAAAACCUAAAAAAAAAAAAUGUAAAAAAAAAAAAGGGAAAAAAAAAAACGCAAAAAAAAAAAACACAAAAAAAAAAAAUGCAAAAAAAAAAAAUCGAAAAAAAAAAAAUCUAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACCCAAAAAAAAAAAAGACAAAAAAAAAAAAUAGAAAAAAAAAAAGUUAAAAAAAAAAAACUGAAAAAAAAAAAAUUUAAAAAAAAAAAAUCUAG
148 具有連接體L070之鹼基編輯器之胺基酸序列 MEASPASGPRHLMDPHIFTSNFNNGIGRHKTYLCYEVERLDNGTSVKMDQHRGFLHNQAKNLLCGFYGRHAELRFLDLVPSLQLDPAQIYRVTWFISWSPCFSWGCAGEVRAFLQENTHVRLRIFAARIYDYDPLYKEALQMLRDAGAQVSIMTYDEFKHCWDTFVDHQGCPFQPWDGLDEHSQALSGRLRAILQNQGNGTKDSTKDIPETPSKDDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDGGGSPKKKRKV
149 D16A Nme2Cas9切口酶之胺基酸序列 MAAFKPNPINYILGLAIGIASVGWAMVEIDEEENPIRLIDLGVRVFERAEVPKTGDSLAMARRLARSVRRLTRRRAHRLLRARRLLKREGVLQAADFDENGLIKSLPNTPWQLRAAALDRKLTPLEWSAVLLHLIKHRGYLSQRKNEGETADKELGALLKGVANNAHALQTGDFRTPAELALNKFEKESGHIRNQRGDYSHTFSRKDLQAELILLFEKQKEFGNPHVSGGLKEGIETLLMTQRPALSGDAVQKMLGHCTFEPAEPKAAKNTYTAERFIWLTKLNNLRILEQGSERPLTDTERATLMDEPYRKSKLTYAQARKLLGLEDTAFFKGLRYGKDNAEASTLMEMKAYHAISRALEKEGLKDKKSPLNLSSELQDEIGTAFSLFKTDEDITGRLKDRVQPEILEALLKHISFDKFVQISLKALRRIVPLMEQGKRYDEACAEIYGDHYGKKNTEEKIYLPPIPADEIRNPVVLRALSQARKVINGVVRRYGSPARIHIETAREVGKSFKDRKEIEKRQEENRKDREKAAAKFREYFPNFVGEPKSKDILKLRLYEQQHGKCLYSGKEINLVRLNEKGYVEIDHALPFSRTWDDSFNNKVLVLGSENQNKGNQTPYEYFNGKDNSREWQEFKARVETSRFPRSKKQRILLQKFDEDGFKECNLNDTRYVNRFLCQFVADHILLTGKGKRRVFASNGQITNLLRGFWGLRKVRAENDRHHALDAVVVACSTVAMQQKITRFVRYKEMNAFDGKTIDKETGKVLHQKTHFPQPWEFFAQEVMIRVFGKPDGKPEFEEADTPEKLRTLLAEKLSSRPEAVHEYVTPLFVSRAPNRKMSGAHKDTLRSAKRFVKHNEKISVKRVWLTEIKLADLENMVNYKNGREIELYEALKARLEAYGGNAKQAFDPKDNPFYKKGGQLVKAVRVEKTQESGVLLNKKNAYTIADNGDMVRVDVFCKVDKKGKNQYFIVPIYAWQVAENILPDIDCKGYRIDDSYTFCFSLHKYDLIAFQKDEKSKVEFAYYINCDSSNGRFYLAWHDKGSKEQQFRISTQNLVLIQKYQVNELGKEIRPCRLKKRPPVR
150 D16A Nme2Cas9切口酶之編碼序列 GCTGCTTTTAAGCCTAATCCTATTAATTATATTCTTGGTCTTGCTATTGGTATTGCTTCTGTTGGTTGGGCTATGGTTGAGATTGATGAGGAGGAGAATCCTATTCGTCTTATTGATCTTGGTGTTCGTGTTTTTGAGCGTGCTGAGGTTCCTAAGACTGGTGATTCTCTTGCTATGGCTCGTCGTCTTGCTCGTTCTGTTCGTCGTCTTACTCGTCGTCGTGCTCATCGTCTTCTTCGTGCTCGTCGTCTTCTTAAGCGTGAGGGTGTTCTTCAGGCTGCTGATTTTGATGAGAATGGTCTTATTAAGTCTCTTCCTAATACTCCTTGGCAGCTTCGTGCTGCTGCTCTTGATCGTAAGCTTACTCCTCTTGAGTGGTCTGCTGTTCTTCTTCATCTTATTAAGCATCGTGGTTATCTTTCTCAGCGTAAGAATGAGGGTGAGACTGCTGATAAGGAGCTTGGTGCTCTTCTTAAGGGTGTTGCTAATAATGCTCATGCTCTTCAGACTGGTGATTTTCGTACTCCTGCTGAGCTTGCTCTTAATAAGTTTGAGAAGGAGTCTGGTCATATTCGTAATCAGCGTGGTGATTATTCTCATACTTTTTCTCGTAAGGATCTTCAGGCTGAGCTTATTCTTCTTTTTGAGAAGCAGAAGGAGTTTGGTAATCCTCATGTTTCTGGTGGTCTTAAGGAGGGTATTGAGACTCTTCTTATGACTCAGCGTCCTGCTCTTTCTGGTGATGCTGTTCAGAAGATGCTTGGTCATTGTACTTTTGAGCCTGCTGAGCCTAAGGCTGCTAAGAATACTTATACTGCTGAGCGTTTTATTTGGCTTACTAAGCTTAATAATCTTCGTATTCTTGAGCAGGGTTCTGAGCGTCCTCTTACTGATACTGAGCGTGCTACTCTTATGGATGAGCCTTATCGTAAGTCTAAGCTTACTTATGCTCAGGCTCGTAAGCTTCTTGGTCTTGAGGATACTGCTTTTTTTAAGGGTCTTCGTTATGGTAAGGATAATGCTGAGGCTTCTACTCTTATGGAGATGAAGGCTTATCATGCTATTTCTCGTGCTCTTGAGAAGGAGGGTCTTAAGGATAAGAAGTCTCCTCTTAATCTTTCTTCTGAGCTTCAGGATGAGATTGGTACTGCTTTTTCTCTTTTTAAGACTGATGAGGATATTACTGGTCGTCTTAAGGATCGTGTTCAGCCTGAGATTCTTGAGGCTCTTCTTAAGCATATTTCTTTTGATAAGTTTGTTCAGATTTCTCTTAAGGCTCTTCGTCGTATTGTTCCTCTTATGGAGCAGGGTAAGCGTTATGATGAGGCTTGTGCTGAGATTTATGGTGATCATTATGGTAAGAAGAATACTGAGGAGAAGATTTATCTTCCTCCTATTCCTGCTGATGAGATTCGTAATCCTGTTGTTCTTCGTGCTCTTTCTCAGGCTCGTAAGGTTATTAATGGTGTTGTTCGTCGTTATGGTTCTCCTGCTCGTATTCATATTGAGACTGCTCGTGAGGTTGGTAAGTCTTTTAAGGATCGTAAGGAGATTGAGAAGCGTCAGGAGGAGAATCGTAAGGATCGTGAGAAGGCTGCTGCTAAGTTTCGTGAGTATTTTCCTAATTTTGTTGGTGAGCCTAAGTCTAAGGATATTCTTAAGCTTCGTCTTTATGAGCAGCAGCATGGTAAGTGTCTTTATTCTGGTAAGGAGATTAATCTTGTTCGTCTTAATGAGAAGGGTTATGTTGAGATTGATCATGCTCTTCCTTTTTCTCGTACTTGGGATGATTCTTTTAATAATAAGGTTCTTGTTCTTGGTTCTGAGAATCAGAATAAGGGTAATCAGACTCCTTATGAGTATTTTAATGGTAAGGATAATTCTCGTGAGTGGCAGGAGTTTAAGGCTCGTGTTGAGACTTCTCGTTTTCCTCGTTCTAAGAAGCAGCGTATTCTTCTTCAGAAGTTTGATGAGGATGGTTTTAAGGAGTGTAATCTTAATGATACTCGTTATGTTAATCGTTTTCTTTGTCAGTTTGTTGCTGATCATATTCTTCTTACTGGTAAGGGTAAGCGTCGTGTTTTTGCTTCTAATGGTCAGATTACTAATCTTCTTCGTGGTTTTTGGGGTCTTCGTAAGGTTCGTGCTGAGAATGATCGTCATCATGCTCTTGATGCTGTTGTTGTTGCTTGTTCTACTGTTGCTATGCAGCAGAAGATTACTCGTTTTGTTCGTTATAAGGAGATGAATGCTTTTGATGGTAAGACTATTGATAAGGAGACTGGTAAGGTTCTTCATCAGAAGACTCATTTTCCTCAGCCTTGGGAGTTTTTTGCTCAGGAGGTTATGATTCGTGTTTTTGGTAAGCCTGATGGTAAGCCTGAGTTTGAGGAGGCTGATACTCCTGAGAAGCTTCGTACTCTTCTTGCTGAGAAGCTTTCTTCTCGTCCTGAGGCTGTTCATGAGTATGTTACTCCTCTTTTTGTTTCTCGTGCTCCTAATCGTAAGATGTCTGGTGCTCATAAGGATACTCTTCGTTCTGCTAAGCGTTTTGTTAAGCATAATGAGAAGATTTCTGTTAAGCGTGTTTGGCTTACTGAGATTAAGCTTGCTGATCTTGAGAATATGGTTAATTATAAGAATGGTCGTGAGATTGAGCTTTATGAGGCTCTTAAGGCTCGTCTTGAGGCTTATGGTGGTAATGCTAAGCAGGCTTTTGATCCTAAGGATAATCCTTTTTATAAGAAGGGTGGTCAGCTTGTTAAGGCTGTTCGTGTTGAGAAGACTCAGGAGTCTGGTGTTCTTCTTAATAAGAAGAATGCTTATACTATTGCTGATAATGGTGATATGGTTCGTGTTGATGTTTTTTGTAAGGTTGATAAGAAGGGTAAGAATCAGTATTTTATTGTTCCTATTTATGCTTGGCAGGTTGCTGAGAATATTCTTCCTGATATTGATTGTAAGGGTTATCGTATTGATGATTCTTATACTTTTTGTTTTTCTCTTCATAAGTATGATCTTATTGCTTTTCAGAAGGATGAGAAGTCTAAGGTTGAGTTTGCTTATTATATTAATTGTGATTCTTCTAATGGTCGTTTTTATCTTGCTTGGCATGATAAGGGTTCTAAGGAGCAGCAGTTTCGTATTTCTACTCAGAATCTTGTTCTTATTCAGAAGTATCAGGTTAATGAGCTTGGTAAGGAGATTCGTCCTTGTCGTCTTAAGAAGCGTCCTCCTGTTCGT
151 D16A Nme2Cas9切口酶之編碼序列 GCCGCCTTCAAGCCCAACCCCATCAACTACATCCTGGGCCTGGCCATCGGCATCGCCTCCGTGGGCTGGGCCATGGTGGAGATCGACGAGGAGGAGAACCCCATCCGGCTGATCGACCTGGGCGTGCGGGTGTTCGAGCGGGCCGAGGTGCCCAAGACCGGCGACTCCCTGGCCATGGCCCGGCGGCTGGCCCGGTCCGTGCGGCGGCTGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCTGCTGCGGGCCCGGCGGCTGCTGAAGCGGGAGGGCGTGCTGCAGGCCGCCGACTTCGACGAGAACGGCCTGATCAAGTCCCTGCCCAACACCCCCTGGCAGCTGCGGGCCGCCGCCCTGGACCGGAAGCTGACCCCCCTGGAGTGGTCCGCCGTGCTGCTGCACCTGATCAAGCACCGGGGCTACCTGTCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCTGGGCGCCCTGCTGAAGGGCGTGGCCAACAACGCCCACGCCCTGCAGACCGGCGACTTCCGGACCCCCGCCGAGCTGGCCCTGAACAAGTTCGAGAAGGAGTCCGGCCACATCCGGAACCAGCGGGGCGACTACTCCCACACCTTCTCCCGGAAGGACCTGCAGGCCGAGCTGATCCTGCTGTTCGAGAAGCAGAAGGAGTTCGGCAACCCCCACGTGTCCGGCGGCCTGAAGGAGGGCATCGAGACCCTGCTGATGACCCAGCGGCCCGCCCTGTCCGGCGACGCCGTGCAGAAGATGCTGGGCCACTGCACCTTCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCTACACCGCCGAGCGGTTCATCTGGCTGACCAAGCTGAACAACCTGCGGATCCTGGAGCAGGGCTCCGAGCGGCCCCTGACCGACACCGAGCGGGCCACCCTGATGGACGAGCCCTACCGGAAGTCCAAGCTGACCTACGCCCAGGCCCGGAAGCTGCTGGGCCTGGAGGACACCGCCTTCTTCAAGGGCCTGCGGTACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCTCCACCCTGATGGAGATGAAGGCCTACCACGCCATCTCCCGGGCCCTGGAGAAGGAGGGCCTGAAGGACAAGAAGTCCCCCCTGAACCTGTCCTCCGAGCTGCAGGACGAGATCGGCACCGCCTTCTCCCTGTTCAAGACCGACGAGGACATCACCGGCCGGCTGAAGGACCGGGTGCAGCCCGAGATCCTGGAGGCCCTGCTGAAGCACATCTCCTTCGACAAGTTCGTGCAGATCTCCCTGAAGGCCCTGCGGCGGATCGTGCCCCTGATGGAGCAGGGCAAGCGGTACGACGAGGCCTGCGCCGAGATCTACGGCGACCACTACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGATCTACCTGCCCCCCATCCCCGCCGACGAGATCCGGAACCCCGTGGTGCTGCGGGCCCTGTCCCAGGCCCGGAAGGTGATCAACGGCGTGGTGCGGCGGTACGGCTCCCCCGCCCGGATCCACATCGAGACCGCCCGGGAGGTGGGCAAGTCCTTCAAGGACCGGAAGGAGATCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGTTCCGGGAGTACTTCCCCAACTTCGTGGGCGAGCCCAAGTCCAAGGACATCCTGAAGCTGCGGCTGTACGAGCAGCAGCACGGCAAGTGCCTGTACTCCGGCAAGGAGATCAACCTGGTGCGGCTGAACGAGAAGGGCTACGTGGAGATCGACCACGCCCTGCCCTTCTCCCGGACCTGGGACGACTCCTTCAACAACAAGGTGCTGGTGCTGGGCTCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCTACGAGTACTTCAACGGCAAGGACAACTCCCGGGAGTGGCAGGAGTTCAAGGCCCGGGTGGAGACCTCCCGGTTCCCCCGGTCCAAGAAGCAGCGGATCCTGCTGCAGAAGTTCGACGAGGACGGCTTCAAGGAGTGCAACCTGAACGACACCCGGTACGTGAACCGGTTCCTGTGCCAGTTCGTGGCCGACCACATCCTGCTGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGTGTTCGCCTCCAACGGCCAGATCACCAACCTGCTGCGGGGCTTCTGGGGCCTGCGGAAGGTGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCTGGACGCCGTGGTGGTGGCCTGCTCCACCGTGGCCATGCAGCAGAAGATCACCCGGTTCGTGCGGTACAAGGAGATGAACGCCTTCGACGGCAAGACCATCGACAAGGAGACCGGCAAGGTGCTGCACCAGAAGACCCACTTCCCCCAGCCCTGGGAGTTCTTCGCCCAGGAGGTGATGATCCGGGTGTTCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGTTCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCTGCGGACCCTGCTGGCCGAGAAGCTGTCCTCCCGGCCCGAGGCCGTGCACGAGTACGTGACCCCCCTGTTCGTGTCCCGGGCCCCCAACCGGAAGATGTCCGGCGCCCACAAGGACACCCTGCGGTCCGCCAAGCGGTTCGTGAAGCACAACGAGAAGATCTCCGTGAAGCGGGTGTGGCTGACCGAGATCAAGCTGGCCGACCTGGAGAACATGGTGAACTACAAGAACGGCCGGGAGATCGAGCTGTACGAGGCCCTGAAGGCCCGGCTGGAGGCCTACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCTTCGACCCCAAGGACAACCCCTTCTACAAGAAGGGCGGCCAGCTGGTGAAGGCCGTGCGGGTGGAGAAGACCCAGGAGTCCGGCGTGCTGCTGAACAAGAAGAACGCCTACACCATCGCCGACAACGGCGACATGGTGCGGGTGGACGTGTTCTGCAAGGTGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGTACTTCATCGTGCCCATCTACGCCTGGCAGGTGGCCGAGAACATCCTGCCCGACATCGACTGCAAGGGCTACCGGATCGACGACTCCTACACCTTCTGCTTCTCCCTGCACAAGTACGACCTGATCGCCTTCCAGAAGGACGAGAAGTCCAAGGTGGAGTTCGCCTACTACATCAACTGCGACTCCTCCAACGGCCGGTTCTACCTGGCCTGGCACGACAAGGGCTCCAAGGAGCAGCAGTTCCGGATCTCCACCCAGAACCTGGTGCTGATCCAGAAGTACCAGGTGAACGAGCTGGGCAAGGAGATCCGGCCCTGCCGGCTGAAGAAGCGGCCCCCCGTGCGG
152 D16A Nme2Cas9切口酶之編碼序列 GCCGCCTTCAAGCCCAACCCCATCAACTACATCCTGGGCCTGGCCATCGGCATCGCCTCCGTGGGCTGGGCCATGGTGGAGATCGACGAGGAGGAGAACCCCATCCGGCTGATCGACCTGGGCGTGCGGGTGTTCGAGCGGGCCGAGGTGCCCAAGACCGGCGACTCCCTGGCCATGGCCCGGCGGCTGGCCCGGTCCGTGCGGCGGCTGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCTGCTGCGGGCCCGGCGGCTGCTGAAGCGGGAGGGCGTGCTGCAGGCCGCCGACTTCGACGAGAACGGCCTGATCAAGTCCCTGCCCAACACCCCCTGGCAGCTGCGGGCCGCCGCCCTGGACCGGAAGCTGACCCCCCTGGAGTGGTCCGCCGTGCTGCTGCACCTGATCAAGCACCGGGGCTACCTGTCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCTGGGCGCCCTGCTGAAGGGCGTGGCCAACAACGCCCACGCCCTGCAGACCGGCGACTTCCGGACCCCCGCCGAGCTGGCCCTGAACAAGTTCGAGAAGGAGTCCGGCCACATCCGGAACCAGCGGGGCGACTACTCCCACACCTTCTCCCGGAAGGACCTGCAGGCCGAGCTGATCCTGCTGTTCGAGAAGCAGAAGGAGTTCGGCAACCCCCACGTGTCCGGCGGCCTGAAGGAGGGCATCGAGACCCTGCTGATGACCCAGCGGCCCGCCCTGTCCGGCGACGCCGTGCAGAAGATGCTGGGCCACTGCACCTTCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCTACACCGCCGAGCGGTTCATCTGGCTGACCAAGCTGAACAACCTGCGGATCCTGGAGCAGGGCTCCGAGCGGCCCCTGACCGACACCGAGCGGGCCACCCTGATGGACGAGCCCTACCGGAAGTCCAAGCTGACCTACGCCCAGGCCCGGAAGCTGCTGGGCCTGGAGGACACCGCCTTCTTCAAGGGCCTGCGGTACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCTCCACCCTGATGGAGATGAAGGCCTACCACGCCATCTCCCGGGCCCTGGAGAAGGAGGGCCTGAAGGACAAGAAGTCCCCCCTGAACCTGTCCTCCGAGCTGCAGGACGAGATCGGCACCGCCTTCTCCCTGTTCAAGACCGACGAGGACATCACCGGCCGGCTGAAGGACCGGGTGCAGCCCGAGATCCTGGAGGCCCTGCTGAAGCACATCTCCTTCGACAAGTTCGTGCAGATCTCCCTGAAGGCCCTGCGGCGGATCGTGCCCCTGATGGAGCAGGGCAAGCGGTACGACGAGGCCTGCGCCGAGATCTACGGCGACCACTACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGATCTACCTGCCCCCCATCCCCGCCGACGAGATCCGGAACCCCGTGGTGCTGCGGGCCCTGTCCCAGGCCCGGAAGGTGATCAACGGCGTGGTGCGGCGGTACGGCTCCCCCGCCCGGATCCACATCGAGACCGCCCGGGAGGTGGGCAAGTCCTTCAAGGACCGGAAGGAGATCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGTTCCGGGAGTACTTCCCCAACTTCGTGGGCGAGCCCAAGTCCAAGGACATCCTGAAGCTGCGGCTGTACGAGCAGCAGCACGGCAAGTGCCTGTACTCCGGCAAGGAGATCAACCTGGTGCGGCTGAACGAGAAGGGCTACGTGGAGATCGACCACGCCCTGCCCTTCTCCCGGACCTGGGACGACTCCTTCAACAACAAGGTGCTGGTGCTGGGCTCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCTACGAGTACTTCAACGGCAAGGACAACTCCCGGGAGTGGCAGGAGTTCAAGGCCCGGGTGGAGACCTCCCGGTTCCCCCGGTCCAAGAAGCAGCGGATCCTGCTGCAGAAGTTCGACGAGGACGGCTTCAAGGAGTGCAACCTGAACGACACCCGGTACGTGAACCGGTTCCTGTGCCAGTTCGTGGCCGACCACATCCTGCTGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGTGTTCGCCTCCAACGGCCAGATCACCAACCTGCTGCGGGGCTTCTGGGGCCTGCGGAAGGTGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCTGGACGCCGTGGTGGTGGCCTGCTCCACCGTGGCCATGCAGCAGAAGATCACCCGGTTCGTGCGGTACAAGGAGATGAACGCCTTCGACGGCAAGACCATCGACAAGGAGACCGGCAAGGTGCTGCACCAGAAGACCCACTTCCCCCAGCCCTGGGAGTTCTTCGCCCAGGAGGTGATGATCCGGGTGTTCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGTTCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCTGCGGACCCTGCTGGCCGAGAAGCTGTCCTCCCGGCCCGAGGCCGTGCACGAGTACGTGACCCCCCTGTTCGTGTCCCGGGCCCCCAACCGGAAGATGTCCGGCGCCCACAAGGACACCCTGCGGTCCGCCAAGCGGTTCGTGAAGCACAACGAGAAGATCTCCGTGAAGCGGGTGTGGCTGACCGAGATCAAGCTGGCCGACCTGGAGAACATGGTGAACTACAAGAACGGCCGGGAGATCGAGCTGTACGAGGCCCTGAAGGCCCGGCTGGAGGCCTACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCTTCGACCCCAAGGACAACCCCTTCTACAAGAAGGGCGGCCAGCTGGTGAAGGCCGTGCGGGTGGAGAAGACCCAGGAGTCCGGCGTGCTGCTGAACAAGAAGAACGCCTACACCATCGCCGACAACGGCGACATGGTGCGGGTGGACGTGTTCTGCAAGGTGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGTACTTCATCGTGCCCATCTACGCCTGGCAGGTGGCCGAGAACATCCTGCCCGACATCGACTGCAAGGGCTACCGGATCGACGACTCCTACACCTTCTGCTTCTCCCTGCACAAGTACGACCTGATCGCCTTCCAGAAGGACGAGAAGTCCAAGGTGGAGTTCGCCTACTACATCAACTGCGACTCCTCCAACGGCCGGTTCTACCTGGCCTGGCACGACAAGGGCTCCAAGGAGCAGCAGTTCCGGATCTCCACCCAGAACCTGGTGCTGATCCAGAAGTACCAGGTGAACGAGCTGGGCAAGGAGATCCGGCCCTGCCGGCTGAAGAAGCGGCCCCCCGTGCGG
153 D16A Nme2Cas9切口酶之開放閱讀框 ATGGCTGCTTTTAAGCCTAATCCTATTAATTATATTCTTGGTCTTGCTATTGGTATTGCTTCTGTTGGTTGGGCTATGGTTGAGATTGATGAGGAGGAGAATCCTATTCGTCTTATTGATCTTGGTGTTCGTGTTTTTGAGCGTGCTGAGGTTCCTAAGACTGGTGATTCTCTTGCTATGGCTCGTCGTCTTGCTCGTTCTGTTCGTCGTCTTACTCGTCGTCGTGCTCATCGTCTTCTTCGTGCTCGTCGTCTTCTTAAGCGTGAGGGTGTTCTTCAGGCTGCTGATTTTGATGAGAATGGTCTTATTAAGTCTCTTCCTAATACTCCTTGGCAGCTTCGTGCTGCTGCTCTTGATCGTAAGCTTACTCCTCTTGAGTGGTCTGCTGTTCTTCTTCATCTTATTAAGCATCGTGGTTATCTTTCTCAGCGTAAGAATGAGGGTGAGACTGCTGATAAGGAGCTTGGTGCTCTTCTTAAGGGTGTTGCTAATAATGCTCATGCTCTTCAGACTGGTGATTTTCGTACTCCTGCTGAGCTTGCTCTTAATAAGTTTGAGAAGGAGTCTGGTCATATTCGTAATCAGCGTGGTGATTATTCTCATACTTTTTCTCGTAAGGATCTTCAGGCTGAGCTTATTCTTCTTTTTGAGAAGCAGAAGGAGTTTGGTAATCCTCATGTTTCTGGTGGTCTTAAGGAGGGTATTGAGACTCTTCTTATGACTCAGCGTCCTGCTCTTTCTGGTGATGCTGTTCAGAAGATGCTTGGTCATTGTACTTTTGAGCCTGCTGAGCCTAAGGCTGCTAAGAATACTTATACTGCTGAGCGTTTTATTTGGCTTACTAAGCTTAATAATCTTCGTATTCTTGAGCAGGGTTCTGAGCGTCCTCTTACTGATACTGAGCGTGCTACTCTTATGGATGAGCCTTATCGTAAGTCTAAGCTTACTTATGCTCAGGCTCGTAAGCTTCTTGGTCTTGAGGATACTGCTTTTTTTAAGGGTCTTCGTTATGGTAAGGATAATGCTGAGGCTTCTACTCTTATGGAGATGAAGGCTTATCATGCTATTTCTCGTGCTCTTGAGAAGGAGGGTCTTAAGGATAAGAAGTCTCCTCTTAATCTTTCTTCTGAGCTTCAGGATGAGATTGGTACTGCTTTTTCTCTTTTTAAGACTGATGAGGATATTACTGGTCGTCTTAAGGATCGTGTTCAGCCTGAGATTCTTGAGGCTCTTCTTAAGCATATTTCTTTTGATAAGTTTGTTCAGATTTCTCTTAAGGCTCTTCGTCGTATTGTTCCTCTTATGGAGCAGGGTAAGCGTTATGATGAGGCTTGTGCTGAGATTTATGGTGATCATTATGGTAAGAAGAATACTGAGGAGAAGATTTATCTTCCTCCTATTCCTGCTGATGAGATTCGTAATCCTGTTGTTCTTCGTGCTCTTTCTCAGGCTCGTAAGGTTATTAATGGTGTTGTTCGTCGTTATGGTTCTCCTGCTCGTATTCATATTGAGACTGCTCGTGAGGTTGGTAAGTCTTTTAAGGATCGTAAGGAGATTGAGAAGCGTCAGGAGGAGAATCGTAAGGATCGTGAGAAGGCTGCTGCTAAGTTTCGTGAGTATTTTCCTAATTTTGTTGGTGAGCCTAAGTCTAAGGATATTCTTAAGCTTCGTCTTTATGAGCAGCAGCATGGTAAGTGTCTTTATTCTGGTAAGGAGATTAATCTTGTTCGTCTTAATGAGAAGGGTTATGTTGAGATTGATCATGCTCTTCCTTTTTCTCGTACTTGGGATGATTCTTTTAATAATAAGGTTCTTGTTCTTGGTTCTGAGAATCAGAATAAGGGTAATCAGACTCCTTATGAGTATTTTAATGGTAAGGATAATTCTCGTGAGTGGCAGGAGTTTAAGGCTCGTGTTGAGACTTCTCGTTTTCCTCGTTCTAAGAAGCAGCGTATTCTTCTTCAGAAGTTTGATGAGGATGGTTTTAAGGAGTGTAATCTTAATGATACTCGTTATGTTAATCGTTTTCTTTGTCAGTTTGTTGCTGATCATATTCTTCTTACTGGTAAGGGTAAGCGTCGTGTTTTTGCTTCTAATGGTCAGATTACTAATCTTCTTCGTGGTTTTTGGGGTCTTCGTAAGGTTCGTGCTGAGAATGATCGTCATCATGCTCTTGATGCTGTTGTTGTTGCTTGTTCTACTGTTGCTATGCAGCAGAAGATTACTCGTTTTGTTCGTTATAAGGAGATGAATGCTTTTGATGGTAAGACTATTGATAAGGAGACTGGTAAGGTTCTTCATCAGAAGACTCATTTTCCTCAGCCTTGGGAGTTTTTTGCTCAGGAGGTTATGATTCGTGTTTTTGGTAAGCCTGATGGTAAGCCTGAGTTTGAGGAGGCTGATACTCCTGAGAAGCTTCGTACTCTTCTTGCTGAGAAGCTTTCTTCTCGTCCTGAGGCTGTTCATGAGTATGTTACTCCTCTTTTTGTTTCTCGTGCTCCTAATCGTAAGATGTCTGGTGCTCATAAGGATACTCTTCGTTCTGCTAAGCGTTTTGTTAAGCATAATGAGAAGATTTCTGTTAAGCGTGTTTGGCTTACTGAGATTAAGCTTGCTGATCTTGAGAATATGGTTAATTATAAGAATGGTCGTGAGATTGAGCTTTATGAGGCTCTTAAGGCTCGTCTTGAGGCTTATGGTGGTAATGCTAAGCAGGCTTTTGATCCTAAGGATAATCCTTTTTATAAGAAGGGTGGTCAGCTTGTTAAGGCTGTTCGTGTTGAGAAGACTCAGGAGTCTGGTGTTCTTCTTAATAAGAAGAATGCTTATACTATTGCTGATAATGGTGATATGGTTCGTGTTGATGTTTTTTGTAAGGTTGATAAGAAGGGTAAGAATCAGTATTTTATTGTTCCTATTTATGCTTGGCAGGTTGCTGAGAATATTCTTCCTGATATTGATTGTAAGGGTTATCGTATTGATGATTCTTATACTTTTTGTTTTTCTCTTCATAAGTATGATCTTATTGCTTTTCAGAAGGATGAGAAGTCTAAGGTTGAGTTTGCTTATTATATTAATTGTGATTCTTCTAATGGTCGTTTTTATCTTGCTTGGCATGATAAGGGTTCTAAGGAGCAGCAGTTTCGTATTTCTACTCAGAATCTTGTTCTTATTCAGAAGTATCAGGTTAATGAGCTTGGTAAGGAGATTCGTCCTTGTCGTCTTAAGAAGCGTCCTCCTGTTCGTUGA
154 D16A Nme2Cas9切口酶之開放閱讀框 ATGGCCGCCTTCAAGCCCAACCCCATCAACTACATCCTGGGCCTGGCCATCGGCATCGCCTCCGTGGGCTGGGCCATGGTGGAGATCGACGAGGAGGAGAACCCCATCCGGCTGATCGACCTGGGCGTGCGGGTGTTCGAGCGGGCCGAGGTGCCCAAGACCGGCGACTCCCTGGCCATGGCCCGGCGGCTGGCCCGGTCCGTGCGGCGGCTGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCTGCTGCGGGCCCGGCGGCTGCTGAAGCGGGAGGGCGTGCTGCAGGCCGCCGACTTCGACGAGAACGGCCTGATCAAGTCCCTGCCCAACACCCCCTGGCAGCTGCGGGCCGCCGCCCTGGACCGGAAGCTGACCCCCCTGGAGTGGTCCGCCGTGCTGCTGCACCTGATCAAGCACCGGGGCTACCTGTCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCTGGGCGCCCTGCTGAAGGGCGTGGCCAACAACGCCCACGCCCTGCAGACCGGCGACTTCCGGACCCCCGCCGAGCTGGCCCTGAACAAGTTCGAGAAGGAGTCCGGCCACATCCGGAACCAGCGGGGCGACTACTCCCACACCTTCTCCCGGAAGGACCTGCAGGCCGAGCTGATCCTGCTGTTCGAGAAGCAGAAGGAGTTCGGCAACCCCCACGTGTCCGGCGGCCTGAAGGAGGGCATCGAGACCCTGCTGATGACCCAGCGGCCCGCCCTGTCCGGCGACGCCGTGCAGAAGATGCTGGGCCACTGCACCTTCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCTACACCGCCGAGCGGTTCATCTGGCTGACCAAGCTGAACAACCTGCGGATCCTGGAGCAGGGCTCCGAGCGGCCCCTGACCGACACCGAGCGGGCCACCCTGATGGACGAGCCCTACCGGAAGTCCAAGCTGACCTACGCCCAGGCCCGGAAGCTGCTGGGCCTGGAGGACACCGCCTTCTTCAAGGGCCTGCGGTACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCTCCACCCTGATGGAGATGAAGGCCTACCACGCCATCTCCCGGGCCCTGGAGAAGGAGGGCCTGAAGGACAAGAAGTCCCCCCTGAACCTGTCCTCCGAGCTGCAGGACGAGATCGGCACCGCCTTCTCCCTGTTCAAGACCGACGAGGACATCACCGGCCGGCTGAAGGACCGGGTGCAGCCCGAGATCCTGGAGGCCCTGCTGAAGCACATCTCCTTCGACAAGTTCGTGCAGATCTCCCTGAAGGCCCTGCGGCGGATCGTGCCCCTGATGGAGCAGGGCAAGCGGTACGACGAGGCCTGCGCCGAGATCTACGGCGACCACTACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGATCTACCTGCCCCCCATCCCCGCCGACGAGATCCGGAACCCCGTGGTGCTGCGGGCCCTGTCCCAGGCCCGGAAGGTGATCAACGGCGTGGTGCGGCGGTACGGCTCCCCCGCCCGGATCCACATCGAGACCGCCCGGGAGGTGGGCAAGTCCTTCAAGGACCGGAAGGAGATCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGTTCCGGGAGTACTTCCCCAACTTCGTGGGCGAGCCCAAGTCCAAGGACATCCTGAAGCTGCGGCTGTACGAGCAGCAGCACGGCAAGTGCCTGTACTCCGGCAAGGAGATCAACCTGGTGCGGCTGAACGAGAAGGGCTACGTGGAGATCGACCACGCCCTGCCCTTCTCCCGGACCTGGGACGACTCCTTCAACAACAAGGTGCTGGTGCTGGGCTCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCTACGAGTACTTCAACGGCAAGGACAACTCCCGGGAGTGGCAGGAGTTCAAGGCCCGGGTGGAGACCTCCCGGTTCCCCCGGTCCAAGAAGCAGCGGATCCTGCTGCAGAAGTTCGACGAGGACGGCTTCAAGGAGTGCAACCTGAACGACACCCGGTACGTGAACCGGTTCCTGTGCCAGTTCGTGGCCGACCACATCCTGCTGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGTGTTCGCCTCCAACGGCCAGATCACCAACCTGCTGCGGGGCTTCTGGGGCCTGCGGAAGGTGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCTGGACGCCGTGGTGGTGGCCTGCTCCACCGTGGCCATGCAGCAGAAGATCACCCGGTTCGTGCGGTACAAGGAGATGAACGCCTTCGACGGCAAGACCATCGACAAGGAGACCGGCAAGGTGCTGCACCAGAAGACCCACTTCCCCCAGCCCTGGGAGTTCTTCGCCCAGGAGGTGATGATCCGGGTGTTCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGTTCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCTGCGGACCCTGCTGGCCGAGAAGCTGTCCTCCCGGCCCGAGGCCGTGCACGAGTACGTGACCCCCCTGTTCGTGTCCCGGGCCCCCAACCGGAAGATGTCCGGCGCCCACAAGGACACCCTGCGGTCCGCCAAGCGGTTCGTGAAGCACAACGAGAAGATCTCCGTGAAGCGGGTGTGGCTGACCGAGATCAAGCTGGCCGACCTGGAGAACATGGTGAACTACAAGAACGGCCGGGAGATCGAGCTGTACGAGGCCCTGAAGGCCCGGCTGGAGGCCTACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCTTCGACCCCAAGGACAACCCCTTCTACAAGAAGGGCGGCCAGCTGGTGAAGGCCGTGCGGGTGGAGAAGACCCAGGAGTCCGGCGTGCTGCTGAACAAGAAGAACGCCTACACCATCGCCGACAACGGCGACATGGTGCGGGTGGACGTGTTCTGCAAGGTGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGTACTTCATCGTGCCCATCTACGCCTGGCAGGTGGCCGAGAACATCCTGCCCGACATCGACTGCAAGGGCTACCGGATCGACGACTCCTACACCTTCTGCTTCTCCCTGCACAAGTACGACCTGATCGCCTTCCAGAAGGACGAGAAGTCCAAGGTGGAGTTCGCCTACTACATCAACTGCGACTCCTCCAACGGCCGGTTCTACCTGGCCTGGCACGACAAGGGCTCCAAGGAGCAGCAGTTCCGGATCTCCACCCAGAACCTGGTGCTGATCCAGAAGTACCAGGTGAACGAGCTGGGCAAGGAGATCCGGCCCTGCCGGCTGAAGAAGCGGCCCCCCGTGCGGUGA
155 D16A Nme2Cas9切口酶之開放閱讀框 ATGGCCGCCTTCAAGCCCAACCCCATCAACTACATCCTGGGCCTGGCCATCGGCATCGCCTCCGTGGGCTGGGCCATGGTGGAGATCGACGAGGAGGAGAACCCCATCCGGCTGATCGACCTGGGCGTGCGGGTGTTCGAGCGGGCCGAGGTGCCCAAGACCGGCGACTCCCTGGCCATGGCCCGGCGGCTGGCCCGGTCCGTGCGGCGGCTGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCTGCTGCGGGCCCGGCGGCTGCTGAAGCGGGAGGGCGTGCTGCAGGCCGCCGACTTCGACGAGAACGGCCTGATCAAGTCCCTGCCCAACACCCCCTGGCAGCTGCGGGCCGCCGCCCTGGACCGGAAGCTGACCCCCCTGGAGTGGTCCGCCGTGCTGCTGCACCTGATCAAGCACCGGGGCTACCTGTCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCTGGGCGCCCTGCTGAAGGGCGTGGCCAACAACGCCCACGCCCTGCAGACCGGCGACTTCCGGACCCCCGCCGAGCTGGCCCTGAACAAGTTCGAGAAGGAGTCCGGCCACATCCGGAACCAGCGGGGCGACTACTCCCACACCTTCTCCCGGAAGGACCTGCAGGCCGAGCTGATCCTGCTGTTCGAGAAGCAGAAGGAGTTCGGCAACCCCCACGTGTCCGGCGGCCTGAAGGAGGGCATCGAGACCCTGCTGATGACCCAGCGGCCCGCCCTGTCCGGCGACGCCGTGCAGAAGATGCTGGGCCACTGCACCTTCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCTACACCGCCGAGCGGTTCATCTGGCTGACCAAGCTGAACAACCTGCGGATCCTGGAGCAGGGCTCCGAGCGGCCCCTGACCGACACCGAGCGGGCCACCCTGATGGACGAGCCCTACCGGAAGTCCAAGCTGACCTACGCCCAGGCCCGGAAGCTGCTGGGCCTGGAGGACACCGCCTTCTTCAAGGGCCTGCGGTACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCTCCACCCTGATGGAGATGAAGGCCTACCACGCCATCTCCCGGGCCCTGGAGAAGGAGGGCCTGAAGGACAAGAAGTCCCCCCTGAACCTGTCCTCCGAGCTGCAGGACGAGATCGGCACCGCCTTCTCCCTGTTCAAGACCGACGAGGACATCACCGGCCGGCTGAAGGACCGGGTGCAGCCCGAGATCCTGGAGGCCCTGCTGAAGCACATCTCCTTCGACAAGTTCGTGCAGATCTCCCTGAAGGCCCTGCGGCGGATCGTGCCCCTGATGGAGCAGGGCAAGCGGTACGACGAGGCCTGCGCCGAGATCTACGGCGACCACTACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGATCTACCTGCCCCCCATCCCCGCCGACGAGATCCGGAACCCCGTGGTGCTGCGGGCCCTGTCCCAGGCCCGGAAGGTGATCAACGGCGTGGTGCGGCGGTACGGCTCCCCCGCCCGGATCCACATCGAGACCGCCCGGGAGGTGGGCAAGTCCTTCAAGGACCGGAAGGAGATCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGTTCCGGGAGTACTTCCCCAACTTCGTGGGCGAGCCCAAGTCCAAGGACATCCTGAAGCTGCGGCTGTACGAGCAGCAGCACGGCAAGTGCCTGTACTCCGGCAAGGAGATCAACCTGGTGCGGCTGAACGAGAAGGGCTACGTGGAGATCGACCACGCCCTGCCCTTCTCCCGGACCTGGGACGACTCCTTCAACAACAAGGTGCTGGTGCTGGGCTCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCTACGAGTACTTCAACGGCAAGGACAACTCCCGGGAGTGGCAGGAGTTCAAGGCCCGGGTGGAGACCTCCCGGTTCCCCCGGTCCAAGAAGCAGCGGATCCTGCTGCAGAAGTTCGACGAGGACGGCTTCAAGGAGTGCAACCTGAACGACACCCGGTACGTGAACCGGTTCCTGTGCCAGTTCGTGGCCGACCACATCCTGCTGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGTGTTCGCCTCCAACGGCCAGATCACCAACCTGCTGCGGGGCTTCTGGGGCCTGCGGAAGGTGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCTGGACGCCGTGGTGGTGGCCTGCTCCACCGTGGCCATGCAGCAGAAGATCACCCGGTTCGTGCGGTACAAGGAGATGAACGCCTTCGACGGCAAGACCATCGACAAGGAGACCGGCAAGGTGCTGCACCAGAAGACCCACTTCCCCCAGCCCTGGGAGTTCTTCGCCCAGGAGGTGATGATCCGGGTGTTCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGTTCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCTGCGGACCCTGCTGGCCGAGAAGCTGTCCTCCCGGCCCGAGGCCGTGCACGAGTACGTGACCCCCCTGTTCGTGTCCCGGGCCCCCAACCGGAAGATGTCCGGCGCCCACAAGGACACCCTGCGGTCCGCCAAGCGGTTCGTGAAGCACAACGAGAAGATCTCCGTGAAGCGGGTGTGGCTGACCGAGATCAAGCTGGCCGACCTGGAGAACATGGTGAACTACAAGAACGGCCGGGAGATCGAGCTGTACGAGGCCCTGAAGGCCCGGCTGGAGGCCTACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCTTCGACCCCAAGGACAACCCCTTCTACAAGAAGGGCGGCCAGCTGGTGAAGGCCGTGCGGGTGGAGAAGACCCAGGAGTCCGGCGTGCTGCTGAACAAGAAGAACGCCTACACCATCGCCGACAACGGCGACATGGTGCGGGTGGACGTGTTCTGCAAGGTGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGTACTTCATCGTGCCCATCTACGCCTGGCAGGTGGCCGAGAACATCCTGCCCGACATCGACTGCAAGGGCTACCGGATCGACGACTCCTACACCTTCTGCTTCTCCCTGCACAAGTACGACCTGATCGCCTTCCAGAAGGACGAGAAGTCCAAGGTGGAGTTCGCCTACTACATCAACTGCGACTCCTCCAACGGCCGGTTCTACCTGGCCTGGCACGACAAGGGCTCCAAGGAGCAGCAGTTCCGGATCTCCACCCAGAACCTGGTGCTGATCCAGAAGTACCAGGTGAACGAGCTGGGCAAGGAGATCCGGCCCTGCCGGCTGAAGAAGCGGCCCCCCGTGCGGUAA
156 Cas9胺基酸序列 MDKKYSIGLDIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDGGGSPKKKRKV   
157 由mRNA C編碼之Nme2Cas9之胺基酸序列 MTGAAFKPNPINYILGLDIGIASVGWAMVEIDEEENPIRLIDLGVRVFERAEVPKTGDSLAMARRLARSVRRLTRRRAHRLLRARRLLKREGVLQAADFDENGLIKSLPNTPWQLRAAALDRKLTPLEWSAVLLHLIKHRGYLSQRKNEGETADKELGALLKGVANNAHALQTGDFRTPAELALNKFEKESGHIRNQRGDYSHTFSRKDLQAELILLFEKQKEFGNPHVSGGLKEGIETLLMTQRPALSGDAVQKMLGHCTFEPAEPKAAKNTYTAERFIWLTKLNNLRILEQGSERPLTDTERATLMDEPYRKSKLTYAQARKLLGLEDTAFFKGLRYGKDNAEASTLMEMKAYHAISRALEKEGLKDKKSPLNLSSELQDEIGTAFSLFKTDEDITGRLKDRVQPEILEALLKHISFDKFVQISLKALRRIVPLMEQGKRYDEACAEIYGDHYGKKNTEEKIYLPPIPADEIRNPVVLRALSQARKVINGVVRRYGSPARIHIETAREVGKSFKDRKEIEKRQEENRKDREKAAAKFREYFPNFVGEPKSKDILKLRLYEQQHGKCLYSGKEINLVRLNEKGYVEIDHALPFSRTWDDSFNNKVLVLGSENQNKGNQTPYEYFNGKDNSREWQEFKARVETSRFPRSKKQRILLQKFDEDGFKECNLNDTRYVNRFLCQFVADHILLTGKGKRRVFASNGQITNLLRGFWGLRKVRAENDRHHALDAVVVACSTVAMQQKITRFVRYKEMNAFDGKTIDKETGKVLHQKTHFPQPWEFFAQEVMIRVFGKPDGKPEFEEADTPEKLRTLLAEKLSSRPEAVHEYVTPLFVSRAPNRKMSGAHKDTLRSAKRFVKHNEKISVKRVWLTEIKLADLENMVNYKNGREIELYEALKARLEAYGGNAKQAFDPKDNPFYKKGGQLVKAVRVEKTQESGVLLNKKNAYTIADNGDMVRVDVFCKVDKKGKNQYFIVPIYAWQVAENILPDIDCKGYRIDDSYTFCFSLHKYDLIAFQKDEKSKVEFAYYINCDSSNGRFYLAWHDKGSKEQQFRISTQNLVLIQKYQVNELGKEIRPCRLKKRPPVRSGKRTADGSEFESPKKKRKVE
158 由mRNA H編碼之Nme2Cas9之胺基酸序列 MAAFKPNPINYILGLDIGIASVGWAMVEIDEEENPIRLIDLGVRVFERAEVPKTGDSLAMARRLARSVRRLTRRRAHRLLRARRLLKREGVLQAADFDENGLIKSLPNTPWQLRAAALDRKLTPLEWSAVLLHLIKHRGYLSQRKNEGETADKELGALLKGVANNAHALQTGDFRTPAELALNKFEKESGHIRNQRGDYSHTFSRKDLQAELILLFEKQKEFGNPHVSGGLKEGIETLLMTQRPALSGDAVQKMLGHCTFEPAEPKAAKNTYTAERFIWLTKLNNLRILEQGSERPLTDTERATLMDEPYRKSKLTYAQARKLLGLEDTAFFKGLRYGKDNAEASTLMEMKAYHAISRALEKEGLKDKKSPLNLSSELQDEIGTAFSLFKTDEDITGRLKDRVQPEILEALLKHISFDKFVQISLKALRRIVPLMEQGKRYDEACAEIYGDHYGKKNTEEKIYLPPIPADEIRNPVVLRALSQARKVINGVVRRYGSPARIHIETAREVGKSFKDRKEIEKRQEENRKDREKAAAKFREYFPNFVGEPKSKDILKLRLYEQQHGKCLYSGKEINLVRLNEKGYVEIDHALPFSRTWDDSFNNKVLVLGSENQNKGNQTPYEYFNGKDNSREWQEFKARVETSRFPRSKKQRILLQKFDEDGFKECNLNDTRYVNRFLCQFVADHILLTGKGKRRVFASNGQITNLLRGFWGLRKVRAENDRHHALDAVVVACSTVAMQQKITRFVRYKEMNAFDGKTIDKETGKVLHQKTHFPQPWEFFAQEVMIRVFGKPDGKPEFEEADTPEKLRTLLAEKLSSRPEAVHEYVTPLFVSRAPNRKMSGAHKDTLRSAKRFVKHNEKISVKRVWLTEIKLADLENMVNYKNGREIELYEALKARLEAYGGNAKQAFDPKDNPFYKKGGQLVKAVRVEKTQESGVLLNKKNAYTIADNGDMVRVDVFCKVDKSGGGSPKKKRKVSGGSGKNQYFIVPIYAWQVAENILPDIDCKGYRIDDSYTFCFSLHKYDLIAFQKDEKSKVEFAYYINCDSSNGRFYLAWHDKGSKEQQFRISTQNLVLIQKYQVNELGKEIRPCRLKKRPPVR
159 由mRNA I編碼之Nme2Cas9之胺基酸序列 MVPKKKRKVAAFKPNPINYILGLDIGIASVGWAMVEIDEEENPIRLIDLGVRVFERAEVPKTGDSLAMARRLARSVRRLTRRRAHRLLRARRLLKREGVLQAADFDENGLIKSLPNTPWQLRAAALDRKLTPLEWSAVLLHLIKHRGYLSQRKNEGETADKELGALLKGVANNAHALQTGDFRTPAELALNKFEKESGHIRNQRGDYSHTFSRKDLQAELILLFEKQKEFGNPHVSGGLKEGIETLLMTQRPALSGDAVQKMLGHCTFEPAEPKAAKNTYTAERFIWLTKLNNLRILEQGSERPLTDTERATLMDEPYRKSKLTYAQARKLLGLEDTAFFKGLRYGKDNAEASTLMEMKAYHAISRALEKEGLKDKKSPLNLSSELQDEIGTAFSLFKTDEDITGRLKDRVQPEILEALLKHISFDKFVQISLKALRRIVPLMEQGKRYDEACAEIYGDHYGKKNTEEKIYLPPIPADEIRNPVVLRALSQARKVINGVVRRYGSPARIHIETAREVGKSFKDRKEIEKRQEENRKDREKAAAKFREYFPNFVGEPKSKDILKLRLYEQQHGKCLYSGKEINLVRLNEKGYVEIDHALPFSRTWDDSFNNKVLVLGSENQNKGNQTPYEYFNGKDNSREWQEFKARVETSRFPRSKKQRILLQKFDEDGFKECNLNDTRYVNRFLCQFVADHILLTGKGKRRVFASNGQITNLLRGFWGLRKVRAENDRHHALDAVVVACSTVAMQQKITRFVRYKEMNAFDGKTIDKETGKVLHQKTHFPQPWEFFAQEVMIRVFGKPDGKPEFEEADTPEKLRTLLAEKLSSRPEAVHEYVTPLFVSRAPNRKMSGAHKDTLRSAKRFVKHNEKISVKRVWLTEIKLADLENMVNYKNGREIELYEALKARLEAYGGNAKQAFDPKDNPFYKKGGQLVKAVRVEKTQESGVLLNKKNAYTIADNGDMVRVDVFCKVDKKGKNQYFIVPIYAWQVAENILPDIDCKGYRIDDSYTFCFSLHKYDLIAFQKDEKSKVEFAYYINCDSSNGRFYLAWHDKGSKEQQFRISTQNLVLIQKYQVNELGKEIRPCRLKKRPPVRYPYDVPDYAAAPAAKKKKLD
160 由mRNA J編碼之Nme2Cas9之胺基酸序列 MAAFKPNPINYILGLDIGIASVGWAMVEIDEEENPIRLIDLGVRVFERAEVPKTGDSLAMARRLARSVRRLTRRRAHRLLRARRLLKREGVLQAADFDENGLIKSLPNTPWQLRAAALDRKLTPLEWSAVLLHLIKHRGYLSQRKNEGETADKELGALLKGVANNAHALQTGDFRTPAELALNKFEKESGHIRNQRGDYSHTFSRKDLQAELILLFEKQKEFGNPHVSGGLKEGIETLLMTQRPALSGDAVQKMLGHCTFEPAEPKAAKNTYTAERFIWLTKLNNLRILEQGSERPLTDTERATLMDEPYRKSKLTYAQARKLLGLEDTAFFKGLRYGKDNAEASTLMEMKAYHAISRALEKEGLKDKKSPLNLSSELQDEIGTAFSLFKTDEDITGRLKDRVQPEILEALLKHISFDKFVQISLKALRRIVPLMEQGKRYDEACAEIYGDHYGKKNTEEKIYLPPIPADEIRNPVVLRALSQARKVINGVVRRYGSPARIHIETAREVGKSFKDRKEIEKRQEENRKDREKAAAKFREYFPNFVGEPKSKDILKLRLYEQQHGKCLYSGKEINLVRLNEKGYVEIDHALPFSRTWDDSFNNKVLVLGSENQNKGNQTPYEYFNGKDNSREWQEFKARVETSRFPRSKKQRILLQKFDEDGFKECNLNDTRYVNRFLCQFVADHILLTGKGKRRVFASNGQITNLLRGFWGLRKVRAENDRHHALDAVVVACSTVAMQQKITRFVRYKEMNAFDGKTIDKETGKVLHQKTHFPQPWEFFAQEVMIRVFGKPDGKPEFEEADTPEKLRTLLAEKLSSRPEAVHEYVTPLFVSRAPNRKMSGAHKDTLRSAKRFVKHNEKISVKRVWLTEIKLADLENMVNYKNGREIELYEALKARLEAYGGNAKQAFDPKDNPFYKKGGQLVKAVRVEKTQESGVLLNKKNAYTIADNGDMVRVDVFCKVDKKGKNQYFIVPIYAWQVAENILPDIDCKGYRIDDSYTFCFSLHKYDLIAFQKDEKSKVEFAYYINCDSSNGRFYLAWHDKGSKEQQFRISTQNLVLIQKYQVNELGKEIRPCRLKKRPPVR
161 由mRNA K編碼之Nme2Cas9之胺基酸序列 MAAFKPNPINYILGLDIGIASVGWAMVEIDEEENPIRLIDLGVRVFERAEVPKTGDSLAMARRLARSVRRLTRRRAHRLLRARRLLKREGVLQAADFDENGLIKSLPNTPWQLRAAALDRKLTPLEWSAVLLHLIKHRGYLSQRKNEGETADKELGALLKGVANNAHALQTGDFRTPAELALNKFEKESGHIRNQRGDYSHTFSRKDLQAELILLFEKQKEFGNPHVSGGLKEGIETLLMTQRPALSGDAVQKMLGHCTFEPAEPKAAKNTYTAERFIWLTKLNNLRILEQGSERPLTDTERATLMDEPYRKSKLTYAQARKLLGLEDTAFFKGLRYGKDNAEASTLMEMKAYHAISRALEKEGLKDKKSPLNLSSELQDEIGTAFSLFKTDEDITGRLKDRVQPEILEALLKHISFDKFVQISLKALRRIVPLMEQGKRYDEACAEIYGDHYGKKNTEEKIYLPPIPADEIRNPVVLRALSQARKVINGVVRRYGSPARIHIETAREVGKSFKDRKEIEKRQEENRKDREKAAAKFREYFPNFVGEPKSKDILKLRLYEQQHGKCLYSGKEINLVRLNEKGYVEIDHALPFSRTWDDSFNNKVLVLGSENQNKGNQTPYEYFNGKDNSREWQEFKARVETSRFPRSKKQRILLQKFDEDGFKECNLNDTRYVNRFLCQFVADHILLTGKGKRRVFASNGQITNLLRGFWGLRKVRAENDRHHALDAVVVACSTVAMQQKITRFVRYKEMNAFDGKTIDKETGKVLHQKTHFPQPWEFFAQEVMIRVFGKPDGKPEFEEADTPEKLRTLLAEKLSSRPEAVHEYVTPLFVSRAPNRKMSGAHKDTLRSAKRFVKHNEKISVKRVWLTEIKLADLENMVNYKNGREIELYEALKARLEAYGGNAKQAFDPKDNPFYKKGGQLVKAVRVEKTQESGVLLNKKNAYTIADNGDMVRVDVFCKVDKKGKNQYFIVPIYAWQVAENILPDIDCKGYRIDDSYTFCFSLHKYDLIAFQKDEKSKVEFAYYINCDSSNGRFYLAWHDKGSKEQQFRISTQNLVLIQKYQVNELGKEIRPCRLKKRPPVR
162 由mRNA L編碼之Nme2Cas9之胺基酸序列 MDGSGGGSPKKKRKVGGSGGGAAFKPNPINYILGLDIGIASVGWAMVEIDEEENPIRLIDLGVRVFERAEVPKTGDSLAMARRLARSVRRLTRRRAHRLLRARRLLKREGVLQAADFDENGLIKSLPNTPWQLRAAALDRKLTPLEWSAVLLHLIKHRGYLSQRKNEGETADKELGALLKGVANNAHALQTGDFRTPAELALNKFEKESGHIRNQRGDYSHTFSRKDLQAELILLFEKQKEFGNPHVSGGLKEGIETLLMTQRPALSGDAVQKMLGHCTFEPAEPKAAKNTYTAERFIWLTKLNNLRILEQGSERPLTDTERATLMDEPYRKSKLTYAQARKLLGLEDTAFFKGLRYGKDNAEASTLMEMKAYHAISRALEKEGLKDKKSPLNLSSELQDEIGTAFSLFKTDEDITGRLKDRVQPEILEALLKHISFDKFVQISLKALRRIVPLMEQGKRYDEACAEIYGDHYGKKNTEEKIYLPPIPADEIRNPVVLRALSQARKVINGVVRRYGSPARIHIETAREVGKSFKDRKEIEKRQEENRKDREKAAAKFREYFPNFVGEPKSKDILKLRLYEQQHGKCLYSGKEINLVRLNEKGYVEIDHALPFSRTWDDSFNNKVLVLGSENQNKGNQTPYEYFNGKDNSREWQEFKARVETSRFPRSKKQRILLQKFDEDGFKECNLNDTRYVNRFLCQFVADHILLTGKGKRRVFASNGQITNLLRGFWGLRKVRAENDRHHALDAVVVACSTVAMQQKITRFVRYKEMNAFDGKTIDKETGKVLHQKTHFPQPWEFFAQEVMIRVFGKPDGKPEFEEADTPEKLRTLLAEKLSSRPEAVHEYVTPLFVSRAPNRKMSGAHKDTLRSAKRFVKHNEKISVKRVWLTEIKLADLENMVNYKNGREIELYEALKARLEAYGGNAKQAFDPKDNPFYKKGGQLVKAVRVEKTQESGVLLNKKNAYTIADNGDMVRVDVFCKVDKKGKNQYFIVPIYAWQVAENILPDIDCKGYRIDDSYTFCFSLHKYDLIAFQKDEKSKVEFAYYINCDSSNGRFYLAWHDKGSKEQQFRISTQNLVLIQKYQVNELGKEIRPCRLKKRPPVR
163 由mRNA M編碼之帶有HiBiT標籤之Nme2Cas9之胺基酸序列 MDGSGGGSPKKKRKVGGSGGGAAFKPNPINYILGLDIGIASVGWAMVEIDEEENPIRLIDLGVRVFERAEVPKTGDSLAMARRLARSVRRLTRRRAHRLLRARRLLKREGVLQAADFDENGLIKSLPNTPWQLRAAALDRKLTPLEWSAVLLHLIKHRGYLSQRKNEGETADKELGALLKGVANNAHALQTGDFRTPAELALNKFEKESGHIRNQRGDYSHTFSRKDLQAELILLFEKQKEFGNPHVSGGLKEGIETLLMTQRPALSGDAVQKMLGHCTFEPAEPKAAKNTYTAERFIWLTKLNNLRILEQGSERPLTDTERATLMDEPYRKSKLTYAQARKLLGLEDTAFFKGLRYGKDNAEASTLMEMKAYHAISRALEKEGLKDKKSPLNLSSELQDEIGTAFSLFKTDEDITGRLKDRVQPEILEALLKHISFDKFVQISLKALRRIVPLMEQGKRYDEACAEIYGDHYGKKNTEEKIYLPPIPADEIRNPVVLRALSQARKVINGVVRRYGSPARIHIETAREVGKSFKDRKEIEKRQEENRKDREKAAAKFREYFPNFVGEPKSKDILKLRLYEQQHGKCLYSGKEINLVRLNEKGYVEIDHALPFSRTWDDSFNNKVLVLGSENQNKGNQTPYEYFNGKDNSREWQEFKARVETSRFPRSKKQRILLQKFDEDGFKECNLNDTRYVNRFLCQFVADHILLTGKGKRRVFASNGQITNLLRGFWGLRKVRAENDRHHALDAVVVACSTVAMQQKITRFVRYKEMNAFDGKTIDKETGKVLHQKTHFPQPWEFFAQEVMIRVFGKPDGKPEFEEADTPEKLRTLLAEKLSSRPEAVHEYVTPLFVSRAPNRKMSGAHKDTLRSAKRFVKHNEKISVKRVWLTEIKLADLENMVNYKNGREIELYEALKARLEAYGGNAKQAFDPKDNPFYKKGGQLVKAVRVEKTQESGVLLNKKNAYTIADNGDMVRVDVFCKVDKKGKNQYFIVPIYAWQVAENILPDIDCKGYRIDDSYTFCFSLHKYDLIAFQKDEKSKVEFAYYINCDSSNGRFYLAWHDKGSKEQQFRISTQNLVLIQKYQVNELGKEIRPCRLKKRPPVRSESATPESVSGWRLFKKIS
164 由mRNA N編碼之Nme2Cas9之胺基酸序列 MDGSGGGSPKKKRKVGGSGGGAAFKPNPINYILGLDIGIASVGWAMVEIDEEENPIRLIDLGVRVFERAEVPKTGDSLAMARRLARSVRRLTRRRAHRLLRARRLLKREGVLQAADFDENGLIKSLPNTPWQLRAAALDRKLTPLEWSAVLLHLIKHRGYLSQRKNEGETADKELGALLKGVANNAHALQTGDFRTPAELALNKFEKESGHIRNQRGDYSHTFSRKDLQAELILLFEKQKEFGNPHVSGGLKEGIETLLMTQRPALSGDAVQKMLGHCTFEPAEPKAAKNTYTAERFIWLTKLNNLRILEQGSERPLTDTERATLMDEPYRKSKLTYAQARKLLGLEDTAFFKGLRYGKDNAEASTLMEMKAYHAISRALEKEGLKDKKSPLNLSSELQDEIGTAFSLFKTDEDITGRLKDRVQPEILEALLKHISFDKFVQISLKALRRIVPLMEQGKRYDEACAEIYGDHYGKKNTEEKIYLPPIPADEIRNPVVLRALSQARKVINGVVRRYGSPARIHIETAREVGKSFKDRKEIEKRQEENRKDREKAAAKFREYFPNFVGEPKSKDILKLRLYEQQHGKCLYSGKEINLVRLNEKGYVEIDHALPFSRTWDDSFNNKVLVLGSENQNKGNQTPYEYFNGKDNSREWQEFKARVETSRFPRSKKQRILLQKFDEDGFKECNLNDTRYVNRFLCQFVADHILLTGKGKRRVFASNGQITNLLRGFWGLRKVRAENDRHHALDAVVVACSTVAMQQKITRFVRYKEMNAFDGKTIDKETGKVLHQKTHFPQPWEFFAQEVMIRVFGKPDGKPEFEEADTPEKLRTLLAEKLSSRPEAVHEYVTPLFVSRAPNRKMSGAHKDTLRSAKRFVKHNEKISVKRVWLTEIKLADLENMVNYKNGREIELYEALKARLEAYGGNAKQAFDPKDNPFYKKGGQLVKAVRVEKTQESGVLLNKKNAYTIADNGDMVRVDVFCKVDKKGKNQYFIVPIYAWQVAENILPDIDCKGYRIDDSYTFCFSLHKYDLIAFQKDEKSKVEFAYYINCDSSNGRFYLAWHDKGSKEQQFRISTQNLVLIQKYQVNELGKEIRPCRLKKRPPVRSGKRTADGSGGGSPAAKKKKLD
165 由mRNA O編碼之Nme2Cas9之胺基酸序列 MDGSGGGSPKKKRKVEDKRPAATKKAGQAKKKKGGSGGGAAFKPNPINYILGLDIGIASVGWAMVEIDEEENPIRLIDLGVRVFERAEVPKTGDSLAMARRLARSVRRLTRRRAHRLLRARRLLKREGVLQAADFDENGLIKSLPNTPWQLRAAALDRKLTPLEWSAVLLHLIKHRGYLSQRKNEGETADKELGALLKGVANNAHALQTGDFRTPAELALNKFEKESGHIRNQRGDYSHTFSRKDLQAELILLFEKQKEFGNPHVSGGLKEGIETLLMTQRPALSGDAVQKMLGHCTFEPAEPKAAKNTYTAERFIWLTKLNNLRILEQGSERPLTDTERATLMDEPYRKSKLTYAQARKLLGLEDTAFFKGLRYGKDNAEASTLMEMKAYHAISRALEKEGLKDKKSPLNLSSELQDEIGTAFSLFKTDEDITGRLKDRVQPEILEALLKHISFDKFVQISLKALRRIVPLMEQGKRYDEACAEIYGDHYGKKNTEEKIYLPPIPADEIRNPVVLRALSQARKVINGVVRRYGSPARIHIETAREVGKSFKDRKEIEKRQEENRKDREKAAAKFREYFPNFVGEPKSKDILKLRLYEQQHGKCLYSGKEINLVRLNEKGYVEIDHALPFSRTWDDSFNNKVLVLGSENQNKGNQTPYEYFNGKDNSREWQEFKARVETSRFPRSKKQRILLQKFDEDGFKECNLNDTRYVNRFLCQFVADHILLTGKGKRRVFASNGQITNLLRGFWGLRKVRAENDRHHALDAVVVACSTVAMQQKITRFVRYKEMNAFDGKTIDKETGKVLHQKTHFPQPWEFFAQEVMIRVFGKPDGKPEFEEADTPEKLRTLLAEKLSSRPEAVHEYVTPLFVSRAPNRKMSGAHKDTLRSAKRFVKHNEKISVKRVWLTEIKLADLENMVNYKNGREIELYEALKARLEAYGGNAKQAFDPKDNPFYKKGGQLVKAVRVEKTQESGVLLNKKNAYTIADNGDMVRVDVFCKVDKKGKNQYFIVPIYAWQVAENILPDIDCKGYRIDDSYTFCFSLHKYDLIAFQKDEKSKVEFAYYINCDSSNGRFYLAWHDKGSKEQQFRISTQNLVLIQKYQVNELGKEIRPCRLKKRPPVR
166 由mRNA P編碼之帶有HiBiT標籤之Nme2Cas9之胺基酸序列 MDGSGGGSPKKKRKVEDKRPAATKKAGQAKKKKGGSGGGAAFKPNPINYILGLDIGIASVGWAMVEIDEEENPIRLIDLGVRVFERAEVPKTGDSLAMARRLARSVRRLTRRRAHRLLRARRLLKREGVLQAADFDENGLIKSLPNTPWQLRAAALDRKLTPLEWSAVLLHLIKHRGYLSQRKNEGETADKELGALLKGVANNAHALQTGDFRTPAELALNKFEKESGHIRNQRGDYSHTFSRKDLQAELILLFEKQKEFGNPHVSGGLKEGIETLLMTQRPALSGDAVQKMLGHCTFEPAEPKAAKNTYTAERFIWLTKLNNLRILEQGSERPLTDTERATLMDEPYRKSKLTYAQARKLLGLEDTAFFKGLRYGKDNAEASTLMEMKAYHAISRALEKEGLKDKKSPLNLSSELQDEIGTAFSLFKTDEDITGRLKDRVQPEILEALLKHISFDKFVQISLKALRRIVPLMEQGKRYDEACAEIYGDHYGKKNTEEKIYLPPIPADEIRNPVVLRALSQARKVINGVVRRYGSPARIHIETAREVGKSFKDRKEIEKRQEENRKDREKAAAKFREYFPNFVGEPKSKDILKLRLYEQQHGKCLYSGKEINLVRLNEKGYVEIDHALPFSRTWDDSFNNKVLVLGSENQNKGNQTPYEYFNGKDNSREWQEFKARVETSRFPRSKKQRILLQKFDEDGFKECNLNDTRYVNRFLCQFVADHILLTGKGKRRVFASNGQITNLLRGFWGLRKVRAENDRHHALDAVVVACSTVAMQQKITRFVRYKEMNAFDGKTIDKETGKVLHQKTHFPQPWEFFAQEVMIRVFGKPDGKPEFEEADTPEKLRTLLAEKLSSRPEAVHEYVTPLFVSRAPNRKMSGAHKDTLRSAKRFVKHNEKISVKRVWLTEIKLADLENMVNYKNGREIELYEALKARLEAYGGNAKQAFDPKDNPFYKKGGQLVKAVRVEKTQESGVLLNKKNAYTIADNGDMVRVDVFCKVDKKGKNQYFIVPIYAWQVAENILPDIDCKGYRIDDSYTFCFSLHKYDLIAFQKDEKSKVEFAYYINCDSSNGRFYLAWHDKGSKEQQFRISTQNLVLIQKYQVNELGKEIRPCRLKKRPPVRSESATPESVSGWRLFKKIS
167 由mRNA Q編碼之Nme2Cas9之胺基酸序列 MDGSGGGSEDKRPAATKKAGQAKKKKGGSGGGAAFKPNPINYILGLDIGIASVGWAMVEIDEEENPIRLIDLGVRVFERAEVPKTGDSLAMARRLARSVRRLTRRRAHRLLRARRLLKREGVLQAADFDENGLIKSLPNTPWQLRAAALDRKLTPLEWSAVLLHLIKHRGYLSQRKNEGETADKELGALLKGVANNAHALQTGDFRTPAELALNKFEKESGHIRNQRGDYSHTFSRKDLQAELILLFEKQKEFGNPHVSGGLKEGIETLLMTQRPALSGDAVQKMLGHCTFEPAEPKAAKNTYTAERFIWLTKLNNLRILEQGSERPLTDTERATLMDEPYRKSKLTYAQARKLLGLEDTAFFKGLRYGKDNAEASTLMEMKAYHAISRALEKEGLKDKKSPLNLSSELQDEIGTAFSLFKTDEDITGRLKDRVQPEILEALLKHISFDKFVQISLKALRRIVPLMEQGKRYDEACAEIYGDHYGKKNTEEKIYLPPIPADEIRNPVVLRALSQARKVINGVVRRYGSPARIHIETAREVGKSFKDRKEIEKRQEENRKDREKAAAKFREYFPNFVGEPKSKDILKLRLYEQQHGKCLYSGKEINLVRLNEKGYVEIDHALPFSRTWDDSFNNKVLVLGSENQNKGNQTPYEYFNGKDNSREWQEFKARVETSRFPRSKKQRILLQKFDEDGFKECNLNDTRYVNRFLCQFVADHILLTGKGKRRVFASNGQITNLLRGFWGLRKVRAENDRHHALDAVVVACSTVAMQQKITRFVRYKEMNAFDGKTIDKETGKVLHQKTHFPQPWEFFAQEVMIRVFGKPDGKPEFEEADTPEKLRTLLAEKLSSRPEAVHEYVTPLFVSRAPNRKMSGAHKDTLRSAKRFVKHNEKISVKRVWLTEIKLADLENMVNYKNGREIELYEALKARLEAYGGNAKQAFDPKDNPFYKKGGQLVKAVRVEKTQESGVLLNKKNAYTIADNGDMVRVDVFCKVDKKGKNQYFIVPIYAWQVAENILPDIDCKGYRIDDSYTFCFSLHKYDLIAFQKDEKSKVEFAYYINCDSSNGRFYLAWHDKGSKEQQFRISTQNLVLIQKYQVNELGKEIRPCRLKKRPPVR
168 編碼Nme2Cas9之mRNA C GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGACCGGUGCCGCCUUCAAGCCCAACCCCAUCAACUACAUCCUGGGCCUGGACAUCGGCAUCGCCUCCGUGGGCUGGGCCAUGGUGGAGAUCGACGAGGAGGAGAACCCCAUCCGGCUGAUCGACCUGGGCGUGCGGGUGUUCGAGCGGGCCGAGGUGCCCAAGACCGGCGACUCCCUGGCCAUGGCCCGGCGGCUGGCCCGGUCCGUGCGGCGGCUGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCUGCUGCGGGCCCGGCGGCUGCUGAAGCGGGAGGGCGUGCUGCAGGCCGCCGACUUCGACGAGAACGGCCUGAUCAAGUCCCUGCCCAACACCCCCUGGCAGCUGCGGGCCGCCGCCCUGGACCGGAAGCUGACCCCCCUGGAGUGGUCCGCCGUGCUGCUGCACCUGAUCAAGCACCGGGGCUACCUGUCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCUGGGCGCCCUGCUGAAGGGCGUGGCCAACAACGCCCACGCCCUGCAGACCGGCGACUUCCGGACCCCCGCCGAGCUGGCCCUGAACAAGUUCGAGAAGGAGUCCGGCCACAUCCGGAACCAGCGGGGCGACUACUCCCACACCUUCUCCCGGAAGGACCUGCAGGCCGAGCUGAUCCUGCUGUUCGAGAAGCAGAAGGAGUUCGGCAACCCCCACGUGUCCGGCGGCCUGAAGGAGGGCAUCGAGACCCUGCUGAUGACCCAGCGGCCCGCCCUGUCCGGCGACGCCGUGCAGAAGAUGCUGGGCCACUGCACCUUCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCUACACCGCCGAGCGGUUCAUCUGGCUGACCAAGCUGAACAACCUGCGGAUCCUGGAGCAGGGCUCCGAGCGGCCCCUGACCGACACCGAGCGGGCCACCCUGAUGGACGAGCCCUACCGGAAGUCCAAGCUGACCUACGCCCAGGCCCGGAAGCUGCUGGGCCUGGAGGACACCGCCUUCUUCAAGGGCCUGCGGUACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCUCCACCCUGAUGGAGAUGAAGGCCUACCACGCCAUCUCCCGGGCCCUGGAGAAGGAGGGCCUGAAGGACAAGAAGUCCCCCCUGAACCUGUCCUCCGAGCUGCAGGACGAGAUCGGCACCGCCUUCUCCCUGUUCAAGACCGACGAGGACAUCACCGGCCGGCUGAAGGACCGGGUGCAGCCCGAGAUCCUGGAGGCCCUGCUGAAGCACAUCUCCUUCGACAAGUUCGUGCAGAUCUCCCUGAAGGCCCUGCGGCGGAUCGUGCCCCUGAUGGAGCAGGGCAAGCGGUACGACGAGGCCUGCGCCGAGAUCUACGGCGACCACUACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGAUCUACCUGCCCCCCAUCCCCGCCGACGAGAUCCGGAACCCCGUGGUGCUGCGGGCCCUGUCCCAGGCCCGGAAGGUGAUCAACGGCGUGGUGCGGCGGUACGGCUCCCCCGCCCGGAUCCACAUCGAGACCGCCCGGGAGGUGGGCAAGUCCUUCAAGGACCGGAAGGAGAUCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGUUCCGGGAGUACUUCCCCAACUUCGUGGGCGAGCCCAAGUCCAAGGACAUCCUGAAGCUGCGGCUGUACGAGCAGCAGCACGGCAAGUGCCUGUACUCCGGCAAGGAGAUCAACCUGGUGCGGCUGAACGAGAAGGGCUACGUGGAGAUCGACCACGCCCUGCCCUUCUCCCGGACCUGGGACGACUCCUUCAACAACAAGGUGCUGGUGCUGGGCUCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCUACGAGUACUUCAACGGCAAGGACAACUCCCGGGAGUGGCAGGAGUUCAAGGCCCGGGUGGAGACCUCCCGGUUCCCCCGGUCCAAGAAGCAGCGGAUCCUGCUGCAGAAGUUCGACGAGGACGGCUUCAAGGAGUGCAACCUGAACGACACCCGGUACGUGAACCGCUUCCUGUGCCAGUUCGUGGCCGACCACAUCCUGCUGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGUGUUCGCCUCCAACGGCCAGAUCACCAACCUGCUGCGGGGCUUCUGGGGCCUGCGGAAGGUGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCUGGACGCCGUGGUGGUGGCCUGCUCCACCGUGGCCAUGCAGCAGAAGAUCACCCGGUUCGUGCGGUACAAGGAGAUGAACGCCUUCGACGGCAAGACCAUCGACAAGGAGACCGGCAAGGUGCUGCACCAGAAGACCCACUUCCCCCAGCCCUGGGAGUUCUUCGCCCAGGAGGUGAUGAUCCGGGUGUUCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGUUCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCUGCGGACCCUGCUGGCCGAGAAGCUGUCCUCCCGGCCCGAGGCCGUGCACGAGUACGUGACCCCCCUGUUCGUGUCCCGGGCCCCCAACCGGAAGAUGUCCGGCGCCCACAAGGACACCCUGCGGUCCGCCAAGCGGUUCGUGAAGCACAACGAGAAGAUCUCCGUGAAGCGGGUGUGGCUGACCGAGAUCAAGCUGGCCGACCUGGAGAACAUGGUGAACUACAAGAACGGCCGGGAGAUCGAGCUGUACGAGGCCCUGAAGGCCCGGCUGGAGGCCUACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCUUCGACCCCAAGGACAACCCCUUCUACAAGAAGGGCGGCCAGCUGGUGAAGGCCGUGCGGGUGGAGAAGACCCAGGAGUCCGGCGUGCUGCUGAACAAGAAGAACGCCUACACCAUCGCCGACAACGGCGACAUGGUGCGGGUGGACGUGUUCUGCAAGGUGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGUACUUCAUCGUGCCCAUCUACGCCUGGCAGGUGGCCGAGAACAUCCUGCCCGACAUCGACUGCAAGGGCUACCGGAUCGACGACUCCUACACCUUCUGCUUCUCCCUGCACAAGUACGACCUGAUCGCCUUCCAGAAGGACGAGAAGUCCAAGGUGGAGUUCGCCUACUACAUCAACUGCGACUCCUCCAACGGCCGGUUCUACCUGGCCUGGCACGACAAGGGCUCCAAGGAGCAGCAGUUCCGGAUCUCCACCCAGAACCUGGUGCUGAUCCAGAAGUACCAGGUGAACGAGCUGGGCAAGGAGAUCCGGCCCUGCCGGCUGAAGAAGCGGCCCCCCGUGCGGUCCGGAAAGCGGACCGCCGACGGCUCCGAGUUCGAGUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGGAGUAGCUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAUGGAAAAAAAAAAAACGGAAAAAAAAAAAAGGUAAAAAAAAAAAAUAUAAAAAAAAAAAACAUAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACGUAAAAAAAAAAAACUCAAAAAAAAAAAAGAUAAAAAAAAAAAACCUAAAAAAAAAAAAUGUAAAAAAAAAAAAGGGAAAAAAAAAAAACGCAAAAAAAAAAAACACAAAAAAAAAAAAUGCAAAAAAAAAAAAUCGAAAAAAAAAAAAUCUAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACCCAAAAAAAAAAAAGACAAAAAAAAAAAAUAGAAAAAAAAAAAAGUUAAAAAA
169 編碼Nme2Cas9之mRNA H GGGaagctcagaataaacgctcaactttggccggatctgccacCATGGCCGCCTTCAAGCCCAACCCCATCAACTACATCCTGGGCCTGGACATCGGCATCGCCTCCGTGGGCTGGGCCATGGTGGAGATCGACGAGGAGGAGAACCCCATCCGGCTGATCGACCTGGGCGTGCGGGTGTTCGAGCGGGCCGAGGTGCCCAAGACCGGCGACTCCCTGGCCATGGCCCGGCGGCTGGCCCGGTCCGTGCGGCGGCTGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCTGCTGCGGGCCCGGCGGCTGCTGAAGCGGGAGGGCGTGCTGCAGGCCGCCGACTTCGACGAGAACGGCCTGATCAAGTCCCTGCCCAACACCCCCTGGCAGCTGCGGGCCGCCGCCCTGGACCGGAAGCTGACCCCCCTGGAGTGGTCCGCCGTGCTGCTGCACCTGATCAAGCACCGGGGCTACCTGTCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCTGGGCGCCCTGCTGAAGGGCGTGGCCAACAACGCCCACGCCCTGCAGACCGGCGACTTCCGGACCCCCGCCGAGCTGGCCCTGAACAAGTTCGAGAAGGAGTCCGGCCACATCCGGAACCAGCGGGGCGACTACTCCCACACCTTCTCCCGGAAGGACCTGCAGGCCGAGCTGATCCTGCTGTTCGAGAAGCAGAAGGAGTTCGGCAACCCCCACGTGTCCGGCGGCCTGAAGGAGGGCATCGAGACCCTGCTGATGACCCAGCGGCCCGCCCTGTCCGGCGACGCCGTGCAGAAGATGCTGGGCCACTGCACCTTCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCTACACCGCCGAGCGGTTCATCTGGCTGACCAAGCTGAACAACCTGCGGATCCTGGAGCAGGGCTCCGAGCGGCCCCTGACCGACACCGAGCGGGCCACCCTGATGGACGAGCCCTACCGGAAGTCCAAGCTGACCTACGCCCAGGCCCGGAAGCTGCTGGGCCTGGAGGACACCGCCTTCTTCAAGGGCCTGCGGTACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCTCCACCCTGATGGAGATGAAGGCCTACCACGCCATCTCCCGGGCCCTGGAGAAGGAGGGCCTGAAGGACAAGAAGTCCCCCCTGAACCTGTCCTCCGAGCTGCAGGACGAGATCGGCACCGCCTTCTCCCTGTTCAAGACCGACGAGGACATCACCGGCCGGCTGAAGGACCGGGTGCAGCCCGAGATCCTGGAGGCCCTGCTGAAGCACATCTCCTTCGACAAGTTCGTGCAGATCTCCCTGAAGGCCCTGCGGCGGATCGTGCCCCTGATGGAGCAGGGCAAGCGGTACGACGAGGCCTGCGCCGAGATCTACGGCGACCACTACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGATCTACCTGCCCCCCATCCCCGCCGACGAGATCCGGAACCCCGTGGTGCTGCGGGCCCTGTCCCAGGCCCGGAAGGTGATCAACGGCGTGGTGCGGCGGTACGGCTCCCCCGCCCGGATCCACATCGAGACCGCCCGGGAGGTGGGCAAGTCCTTCAAGGACCGGAAGGAGATCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGTTCCGGGAGTACTTCCCCAACTTCGTGGGCGAGCCCAAGTCCAAGGACATCCTGAAGCTGCGGCTGTACGAGCAGCAGCACGGCAAGTGCCTGTACTCCGGCAAGGAGATCAACCTGGTGCGGCTGAACGAGAAGGGCTACGTGGAGATCGACCACGCCCTGCCCTTCTCCCGGACCTGGGACGACTCCTTCAACAACAAGGTGCTGGTGCTGGGCTCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCTACGAGTACTTCAACGGCAAGGACAACTCCCGGGAGTGGCAGGAGTTCAAGGCCCGGGTGGAGACCTCCCGGTTCCCCCGGTCCAAGAAGCAGCGGATCCTGCTGCAGAAGTTCGACGAGGACGGCTTCAAGGAGTGCAACCTGAACGACACCCGGTACGTGAACCGGTTCCTGTGCCAGTTCGTGGCCGACCACATCCTGCTGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGTGTTCGCCTCCAACGGCCAGATCACCAACCTGCTGCGGGGCTTCTGGGGCCTGCGGAAGGTGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCTGGACGCCGTGGTGGTGGCCTGCTCCACCGTGGCCATGCAGCAGAAGATCACCCGGTTCGTGCGGTACAAGGAGATGAACGCCTTCGACGGCAAGACCATCGACAAGGAGACCGGCAAGGTGCTGCACCAGAAGACCCACTTCCCCCAGCCCTGGGAGTTCTTCGCCCAGGAGGTGATGATCCGGGTGTTCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGTTCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCTGCGGACCCTGCTGGCCGAGAAGCTGTCCTCCCGGCCCGAGGCCGTGCACGAGTACGTGACCCCCCTGTTCGTGTCCCGGGCCCCCAACCGGAAGATGTCCGGCGCCCACAAGGACACCCTGCGGTCCGCCAAGCGGTTCGTGAAGCACAACGAGAAGATCTCCGTGAAGCGGGTGTGGCTGACCGAGATCAAGCTGGCCGACCTGGAGAACATGGTGAACTACAAGAACGGCCGGGAGATCGAGCTGTACGAGGCCCTGAAGGCCCGGCTGGAGGCCTACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCTTCGACCCCAAGGACAACCCCTTCTACAAGAAGGGCGGCCAGCTGGTGAAGGCCGTGCGGGTGGAGAAGACCCAGGAGTCCGGCGTGCTGCTGAACAAGAAGAACGCCTACACCATCGCCGACAACGGCGACATGGTGCGGGTGGACGTGTTCTGCAAGGTGGACAAGTCCGGCGGCGGCTCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGTGTCCGGCGGCTCCGGCAAGAACCAGTACTTCATCGTGCCCATCTACGCCTGGCAGGTGGCCGAGAACATCCTGCCCGACATCGACTGCAAGGGCTACCGGATCGACGACTCCTACACCTTCTGCTTCTCCCTGCACAAGTACGACCTGATCGCCTTCCAGAAGGACGAGAAGTCCAAGGTGGAGTTCGCCTACTACATCAACTGCGACTCCTCCAACGGCCGGTTCTACCTGGCCTGGCACGACAAGGGCTCCAAGGAGCAGCAGTTCCGGATCTCCACCCAGAACCTGGTGCTGATCCAGAAGTACCAGGTGAACGAGCTGGGCAAGGAGATCCGGCCCTGCCGGCTGAAGAAGCGGCCCCCCGTGCGGTAGCTAGCaccagcctcaagaacacccgaatggagtctctaagctacataataccaacttacactttacaaaatgttgtcccccaaaatgtagccattcgtatctgctcctaataaaaagaaagtttcttcacattctCTCGAGAAAAAAAAAAAATGGAAAAAAAAAAAACGGAAAAAAAAAAAAGGTAAAAAAAAAAAATATAAAAAAAAAAAACATAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACGTAAAAAAAAAAAACTCAAAAAAAAAAAAGATAAAAAAAAAAAACCTAAAAAAAAAAAATGTAAAAAAAAAAAAGGGAAAAAAAAAAAACGCAAAAAAAAAAAACACAAAAAAAAAAAATGCAAAAAAAAAAAATCGAAAAAAAAAAAATCTAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACCCAAAAAAAAAAAAGACAAAAAAAAAAAATAGAAAAAAAAAAAAGTTAAAAAAAAAAAACTGAAAAAAAAAAAATTTAAAAAAAAAAAAT
170 編碼Nme2Cas9之mRNA I GGGaagctcagaataaacgctcaactttggccggatctgccacCATGGTGCCCAAGAAGAAGCGGAAGGTGGCCGCCTTCAAGCCCAACCCCATCAACTACATCCTGGGCCTGGACATCGGCATCGCCTCCGTGGGCTGGGCCATGGTGGAGATCGACGAGGAGGAGAACCCCATCCGGCTGATCGACCTGGGCGTGCGGGTGTTCGAGCGGGCCGAGGTGCCCAAGACCGGCGACTCCCTGGCCATGGCCCGGCGGCTGGCCCGGTCCGTGCGGCGGCTGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCTGCTGCGGGCCCGGCGGCTGCTGAAGCGGGAGGGCGTGCTGCAGGCCGCCGACTTCGACGAGAACGGCCTGATCAAGTCCCTGCCCAACACCCCCTGGCAGCTGCGGGCCGCCGCCCTGGACCGGAAGCTGACCCCCCTGGAGTGGTCCGCCGTGCTGCTGCACCTGATCAAGCACCGGGGCTACCTGTCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCTGGGCGCCCTGCTGAAGGGCGTGGCCAACAACGCCCACGCCCTGCAGACCGGCGACTTCCGGACCCCCGCCGAGCTGGCCCTGAACAAGTTCGAGAAGGAGTCCGGCCACATCCGGAACCAGCGGGGCGACTACTCCCACACCTTCTCCCGGAAGGACCTGCAGGCCGAGCTGATCCTGCTGTTCGAGAAGCAGAAGGAGTTCGGCAACCCCCACGTGTCCGGCGGCCTGAAGGAGGGCATCGAGACCCTGCTGATGACCCAGCGGCCCGCCCTGTCCGGCGACGCCGTGCAGAAGATGCTGGGCCACTGCACCTTCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCTACACCGCCGAGCGGTTCATCTGGCTGACCAAGCTGAACAACCTGCGGATCCTGGAGCAGGGCTCCGAGCGGCCCCTGACCGACACCGAGCGGGCCACCCTGATGGACGAGCCCTACCGGAAGTCCAAGCTGACCTACGCCCAGGCCCGGAAGCTGCTGGGCCTGGAGGACACCGCCTTCTTCAAGGGCCTGCGGTACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCTCCACCCTGATGGAGATGAAGGCCTACCACGCCATCTCCCGGGCCCTGGAGAAGGAGGGCCTGAAGGACAAGAAGTCCCCCCTGAACCTGTCCTCCGAGCTGCAGGACGAGATCGGCACCGCCTTCTCCCTGTTCAAGACCGACGAGGACATCACCGGCCGGCTGAAGGACCGGGTGCAGCCCGAGATCCTGGAGGCCCTGCTGAAGCACATCTCCTTCGACAAGTTCGTGCAGATCTCCCTGAAGGCCCTGCGGCGGATCGTGCCCCTGATGGAGCAGGGCAAGCGGTACGACGAGGCCTGCGCCGAGATCTACGGCGACCACTACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGATCTACCTGCCCCCCATCCCCGCCGACGAGATCCGGAACCCCGTGGTGCTGCGGGCCCTGTCCCAGGCCCGGAAGGTGATCAACGGCGTGGTGCGGCGGTACGGCTCCCCCGCCCGGATCCACATCGAGACCGCCCGGGAGGTGGGCAAGTCCTTCAAGGACCGGAAGGAGATCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGTTCCGGGAGTACTTCCCCAACTTCGTGGGCGAGCCCAAGTCCAAGGACATCCTGAAGCTGCGGCTGTACGAGCAGCAGCACGGCAAGTGCCTGTACTCCGGCAAGGAGATCAACCTGGTGCGGCTGAACGAGAAGGGCTACGTGGAGATCGACCACGCCCTGCCCTTCTCCCGGACCTGGGACGACTCCTTCAACAACAAGGTGCTGGTGCTGGGCTCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCTACGAGTACTTCAACGGCAAGGACAACTCCCGGGAGTGGCAGGAGTTCAAGGCCCGGGTGGAGACCTCCCGGTTCCCCCGGTCCAAGAAGCAGCGGATCCTGCTGCAGAAGTTCGACGAGGACGGCTTCAAGGAGTGCAACCTGAACGACACCCGGTACGTGAACCGGTTCCTGTGCCAGTTCGTGGCCGACCACATCCTGCTGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGTGTTCGCCTCCAACGGCCAGATCACCAACCTGCTGCGGGGCTTCTGGGGCCTGCGGAAGGTGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCTGGACGCCGTGGTGGTGGCCTGCTCCACCGTGGCCATGCAGCAGAAGATCACCCGGTTCGTGCGGTACAAGGAGATGAACGCCTTCGACGGCAAGACCATCGACAAGGAGACCGGCAAGGTGCTGCACCAGAAGACCCACTTCCCCCAGCCCTGGGAGTTCTTCGCCCAGGAGGTGATGATCCGGGTGTTCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGTTCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCTGCGGACCCTGCTGGCCGAGAAGCTGTCCTCCCGGCCCGAGGCCGTGCACGAGTACGTGACCCCCCTGTTCGTGTCCCGGGCCCCCAACCGGAAGATGTCCGGCGCCCACAAGGACACCCTGCGGTCCGCCAAGCGGTTCGTGAAGCACAACGAGAAGATCTCCGTGAAGCGGGTGTGGCTGACCGAGATCAAGCTGGCCGACCTGGAGAACATGGTGAACTACAAGAACGGCCGGGAGATCGAGCTGTACGAGGCCCTGAAGGCCCGGCTGGAGGCCTACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCTTCGACCCCAAGGACAACCCCTTCTACAAGAAGGGCGGCCAGCTGGTGAAGGCCGTGCGGGTGGAGAAGACCCAGGAGTCCGGCGTGCTGCTGAACAAGAAGAACGCCTACACCATCGCCGACAACGGCGACATGGTGCGGGTGGACGTGTTCTGCAAGGTGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGTACTTCATCGTGCCCATCTACGCCTGGCAGGTGGCCGAGAACATCCTGCCCGACATCGACTGCAAGGGCTACCGGATCGACGACTCCTACACCTTCTGCTTCTCCCTGCACAAGTACGACCTGATCGCCTTCCAGAAGGACGAGAAGTCCAAGGTGGAGTTCGCCTACTACATCAACTGCGACTCCTCCAACGGCCGGTTCTACCTGGCCTGGCACGACAAGGGCTCCAAGGAGCAGCAGTTCCGGATCTCCACCCAGAACCTGGTGCTGATCCAGAAGTACCAGGTGAACGAGCTGGGCAAGGAGATCCGGCCCTGCCGGCTGAAGAAGCGGCCCCCCGTGCGGTACCCCTACGACGTGCCCGACTACGCCGCCGCCCCCGCCGCCAAGAAGAAGAAGCTGGACTAGCTAGCaccagcctcaagaacacccgaatggagtctctaagctacataataccaacttacactttacaaaatgttgtcccccaaaatgtagccattcgtatctgctcctaataaaaagaaagtttcttcacattctCTCGAGAAAAAAAAAAAATGGAAAAAAAAAAAACGGAAAAAAAAAAAAGGTAAAAAAAAAAAATATAAAAAAAAAAAACATAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACGTAAAAAAAAAAAACTCAAAAAAAAAAAAGATAAAAAAAAAAAACCTAAAAAAAAAAAATGTAAAAAAAAAAAAGGGAAAAAAAAAAAACGCAAAAAAAAAAAACACAAAAAAAAAAAATGCAAAAAAAAAAAATCGAAAAAAAAAAAATCTAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACCCAAAAAAAAAAAAGACAAAAAAAAAAAATAGAAAAAAAAAAAAGTTAAAAAAAAAAAACTGAAAAAAAAAAAATTTAAAAAAAAAAAAT
171 編碼Nme2Cas9之mRNA J GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGUGCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGGAGGACAAGCGGCCCGCCGCCACCAAGAAGGCCGGCCAGGCCAAGAAGAAGAAGAUGGCCGCCUUCAAGCCCAACCCCAUCAACUACAUCCUGGGCCUGGACAUCGGCAUCGCCUCCGUGGGCUGGGCCAUGGUGGAGAUCGACGAGGAGGAGAACCCCAUCCGGCUGAUCGACCUGGGCGUGCGGGUGUUCGAGCGGGCCGAGGUGCCCAAGACCGGCGACUCCCUGGCCAUGGCCCGGCGGCUGGCCCGGUCCGUGCGGCGGCUGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCUGCUGCGGGCCCGGCGGCUGCUGAAGCGGGAGGGCGUGCUGCAGGCCGCCGACUUCGACGAGAACGGCCUGAUCAAGUCCCUGCCCAACACCCCCUGGCAGCUGCGGGCCGCCGCCCUGGACCGGAAGCUGACCCCCCUGGAGUGGUCCGCCGUGCUGCUGCACCUGAUCAAGCACCGGGGCUACCUGUCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCUGGGCGCCCUGCUGAAGGGCGUGGCCAACAACGCCCACGCCCUGCAGACCGGCGACUUCCGGACCCCCGCCGAGCUGGCCCUGAACAAGUUCGAGAAGGAGUCCGGCCACAUCCGGAACCAGCGGGGCGACUACUCCCACACCUUCUCCCGGAAGGACCUGCAGGCCGAGCUGAUCCUGCUGUUCGAGAAGCAGAAGGAGUUCGGCAACCCCCACGUGUCCGGCGGCCUGAAGGAGGGCAUCGAGACCCUGCUGAUGACCCAGCGGCCCGCCCUGUCCGGCGACGCCGUGCAGAAGAUGCUGGGCCACUGCACCUUCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCUACACCGCCGAGCGGUUCAUCUGGCUGACCAAGCUGAACAACCUGCGGAUCCUGGAGCAGGGCUCCGAGCGGCCCCUGACCGACACCGAGCGGGCCACCCUGAUGGACGAGCCCUACCGGAAGUCCAAGCUGACCUACGCCCAGGCCCGGAAGCUGCUGGGCCUGGAGGACACCGCCUUCUUCAAGGGCCUGCGGUACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCUCCACCCUGAUGGAGAUGAAGGCCUACCACGCCAUCUCCCGGGCCCUGGAGAAGGAGGGCCUGAAGGACAAGAAGUCCCCCCUGAACCUGUCCUCCGAGCUGCAGGACGAGAUCGGCACCGCCUUCUCCCUGUUCAAGACCGACGAGGACAUCACCGGCCGGCUGAAGGACCGGGUGCAGCCCGAGAUCCUGGAGGCCCUGCUGAAGCACAUCUCCUUCGACAAGUUCGUGCAGAUCUCCCUGAAGGCCCUGCGGCGGAUCGUGCCCCUGAUGGAGCAGGGCAAGCGGUACGACGAGGCCUGCGCCGAGAUCUACGGCGACCACUACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGAUCUACCUGCCCCCCAUCCCCGCCGACGAGAUCCGGAACCCCGUGGUGCUGCGGGCCCUGUCCCAGGCCCGGAAGGUGAUCAACGGCGUGGUGCGGCGGUACGGCUCCCCCGCCCGGAUCCACAUCGAGACCGCCCGGGAGGUGGGCAAGUCCUUCAAGGACCGGAAGGAGAUCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGUUCCGGGAGUACUUCCCCAACUUCGUGGGCGAGCCCAAGUCCAAGGACAUCCUGAAGCUGCGGCUGUACGAGCAGCAGCACGGCAAGUGCCUGUACUCCGGCAAGGAGAUCAACCUGGUGCGGCUGAACGAGAAGGGCUACGUGGAGAUCGACCACGCCCUGCCCUUCUCCCGGACCUGGGACGACUCCUUCAACAACAAGGUGCUGGUGCUGGGCUCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCUACGAGUACUUCAACGGCAAGGACAACUCCCGGGAGUGGCAGGAGUUCAAGGCCCGGGUGGAGACCUCCCGGUUCCCCCGGUCCAAGAAGCAGCGGAUCCUGCUGCAGAAGUUCGACGAGGACGGCUUCAAGGAGUGCAACCUGAACGACACCCGGUACGUGAACCGGUUCCUGUGCCAGUUCGUGGCCGACCACAUCCUGCUGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGUGUUCGCCUCCAACGGCCAGAUCACCAACCUGCUGCGGGGCUUCUGGGGCCUGCGGAAGGUGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCUGGACGCCGUGGUGGUGGCCUGCUCCACCGUGGCCAUGCAGCAGAAGAUCACCCGGUUCGUGCGGUACAAGGAGAUGAACGCCUUCGACGGCAAGACCAUCGACAAGGAGACCGGCAAGGUGCUGCACCAGAAGACCCACUUCCCCCAGCCCUGGGAGUUCUUCGCCCAGGAGGUGAUGAUCCGGGUGUUCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGUUCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCUGCGGACCCUGCUGGCCGAGAAGCUGUCCUCCCGGCCCGAGGCCGUGCACGAGUACGUGACCCCCCUGUUCGUGUCCCGGGCCCCCAACCGGAAGAUGUCCGGCGCCCACAAGGACACCCUGCGGUCCGCCAAGCGGUUCGUGAAGCACAACGAGAAGAUCUCCGUGAAGCGGGUGUGGCUGACCGAGAUCAAGCUGGCCGACCUGGAGAACAUGGUGAACUACAAGAACGGCCGGGAGAUCGAGCUGUACGAGGCCCUGAAGGCCCGGCUGGAGGCCUACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCUUCGACCCCAAGGACAACCCCUUCUACAAGAAGGGCGGCCAGCUGGUGAAGGCCGUGCGGGUGGAGAAGACCCAGGAGUCCGGCGUGCUGCUGAACAAGAAGAACGCCUACACCAUCGCCGACAACGGCGACAUGGUGCGGGUGGACGUGUUCUGCAAGGUGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGUACUUCAUCGUGCCCAUCUACGCCUGGCAGGUGGCCGAGAACAUCCUGCCCGACAUCGACUGCAAGGGCUACCGGAUCGACGACUCCUACACCUUCUGCUUCUCCCUGCACAAGUACGACCUGAUCGCCUUCCAGAAGGACGAGAAGUCCAAGGUGGAGUUCGCCUACUACAUCAACUGCGACUCCUCCAACGGCCGGUUCUACCUGGCCUGGCACGACAAGGGCUCCAAGGAGCAGCAGUUCCGGAUCUCCACCCAGAACCUGGUGCUGAUCCAGAAGUACCAGGUGAACGAGCUGGGCAAGGAGAUCCGGCCCUGCCGGCUGAAGAAGCGGCCCCCCGUGCGGGAGGACAAGCGGCCCGCCGCCACCAAGAAGGCCGGCCAGGCCAAGAAGAAGAAGUACCCCUACGACGUGCCCGACUACGCCGGCUACCCCUACGACGUGCCCGACUACGCCGGCUCCUACCCCUACGACGUGCCCGACUACGCCGCCGCCCCCGCCGCCAAGAAGAAGAAGCUGGACUAGCUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAUGGAAAAAAAAAAAACGGAAAAAAAAAAAAGGUAAAAAAAAAAAAUAUAAAAAAAAAAAACAUAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACGUAAAAAAAAAAAACUCAAAAAAAAAAAAGAUAAAAAAAAAAAACCUAAAAAAAAAAAAUGUAAAAAAAAAAAAGGGAAAAAAAAAAAACGCAAAAAAAAAAAACACAAAAAAAAAAAAUGCAAAAAAAAAAAAUCGAAAAAAAAAAAAUCUAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACCCAAAAAAAAAAAAGACAAAAAAAAAAAAUAGAAAAAAAAAAAAGUUAAAAAAAAAAAACUGAAAAAAAAAAAAUUUAAAAAAAAAAAAUCUAG
172 編碼Nme2Cas9之mRNA K GGGaagctcagaataaacgctcaactttggccggatctgccacCatggccgccttcaagcccaaccccatcaactacatcctgggcctggacatcggcatcgcctccgtgggctgggccatggtggagatcgacgaggaggagaaccccatccggctgatcgacctgggcgtgcgggtgttcgagcgggccgaggtgcccaagaccggcgactccctggccatggcccggcggctggcccggtccgtgcggcggctgacccggcggcgggcccaccggctgctgcgggcccggcggctgctgaagcgggagggcgtgctgcaggccgccgacttcgacgagaacggcctgatcaagtccctgcccaacaccccctggcagctgcgggccgccgccctggaccggaagctgacccccctggagtggtccgccgtgctgctgcacctgatcaagcaccggggctacctgtcccagcggaagaacgagggcgagaccgccgacaaggagctgggcgccctgctgaagggcgtggccaacaacgcccacgccctgcagaccggcgacttccggacccccgccgagctggccctgaacaagttcgagaaggagtccggccacatccggaaccagcggggcgactactcccacaccttctcccggaaggacctgcaggccgagctgatcctgctgttcgagaagcagaaggagttcggcaacccccacgtgtccggcggcctgaaggagggcatcgagaccctgctgatgacccagcggcccgccctgtccggcgacgccgtgcagaagatgctgggccactgcaccttcgagcccgccgagcccaaggccgccaagaacacctacaccgccgagcggttcatctggctgaccaagctgaacaacctgcggatcctggagcagggctccgagcggcccctgaccgacaccgagcgggccaccctgatggacgagccctaccggaagtccaagctgacctacgcccaggcccggaagctgctgggcctggaggacaccgccttcttcaagggcctgcggtacggcaaggacaacgccgaggcctccaccctgatggagatgaaggcctaccacgccatctcccgggccctggagaaggagggcctgaaggacaagaagtcccccctgaacctgtcctccgagctgcaggacgagatcggcaccgccttctccctgttcaagaccgacgaggacatcaccggccggctgaaggaccgggtgcagcccgagatcctggaggccctgctgaagcacatctccttcgacaagttcgtgcagatctccctgaaggccctgcggcggatcgtgcccctgatggagcagggcaagcggtacgacgaggcctgcgccgagatctacggcgaccactacggcaagaagaacaccgaggagaagatctacctgccccccatccccgccgacgagatccggaaccccgtggtgctgcgggccctgtcccaggcccggaaggtgatcaacggcgtggtgcggcggtacggctcccccgcccggatccacatcgagaccgcccgggaggtgggcaagtccttcaaggaccggaaggagatcgagaagcggcaggaggagaaccggaaggaccgggagaaggccgccgccaagttccgggagtacttccccaacttcgtgggcgagcccaagtccaaggacatcctgaagctgcggctgtacgagcagcagcacggcaagtgcctgtactccggcaaggagatcaacctggtgcggctgaacgagaagggctacgtggagatcgaccacgccctgcccttctcccggacctgggacgactccttcaacaacaaggtgctggtgctgggctccgagaaccagaacaagggcaaccagaccccctacgagtacttcaacggcaaggacaactcccgggagtggcaggagttcaaggcccgggtggagacctcccggttcccccggtccaagaagcagcggatcctgctgcagaagttcgacgaggacggcttcaaggagtgcaacctgaacgacacccggtacgtgaaccggttcctgtgccagttcgtggccgaccacatcctgctgaccggcaagggcaagcggcgggtgttcgcctccaacggccagatcaccaacctgctgcggggcttctggggcctgcggaaggtgcgggccgagaacgaccggcaccacgccctggacgccgtggtggtggcctgctccaccgtggccatgcagcagaagatcacccggttcgtgcggtacaaggagatgaacgccttcgacggcaagaccatcgacaaggagaccggcaaggtgctgcaccagaagacccacttcccccagccctgggagttcttcgcccaggaggtgatgatccgggtgttcggcaagcccgacggcaagcccgagttcgaggaggccgacacccccgagaagctgcggaccctgctggccgagaagctgtcctcccggcccgaggccgtgcacgagtacgtgacccccctgttcgtgtcccgggcccccaaccggaagatgtccggcgcccacaaggacaccctgcggtccgccaagcggttcgtgaagcacaacgagaagatctccgtgaagcgggtgtggctgaccgagatcaagctggccgacctggagaacatggtgaactacaagaacggccgggagatcgagctgtacgaggccctgaaggcccggctggaggcctacggcggcaacgccaagcaggccttcgaccccaaggacaaccccttctacaagaagggcggccagctggtgaaggccgtgcgggtggagaagacccaggagtccggcgtgctgctgaacaagaagaacgcctacaccatcgccgacaacggcgacatggtgcgggtggacgtgttctgcaaggtggacaagaagggcaagaaccagtacttcatcgtgcccatctacgcctggcaggtggccgagaacatcctgcccgacatcgactgcaagggctaccggatcgacgactcctacaccttctgcttctccctgcacaagtacgacctgatcgccttccagaaggacgagaagtccaaggtggagttcgcctactacatcaactgcgactcctccaacggccggttctacctggcctggcacgacaagggctccaaggagcagcagttccggatctccacccagaacctggtgctgatccagaagtaccaggtgaacgagctgggcaaggagatccggccctgccggctgaagaagcggccccccgtgcggTCCGGAAAGCGGACCGCCGACGGCTCCGGAGGAGGAAGCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGTGtagctagcaccagcctcaagaacacccgaatggagtctctaagctacataataccaacttacactttacaaaatgttgtcccccaaaatgtagccattcgtatctgctcctaataaaaagaaagtttcttcacattctctcgagAAAAAAAAAAAATGGAAAAAAAAAAAACGGAAAAAAAAAAAAGGTAAAAAAAAAAAATATAAAAAAAAAAAACATAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACGTAAAAAAAAAAACTCAAAAAAAAAAAGATAAAAAAAAAAAACCTAAAAAAAAAAAATGTAAAAAAAAAAAAGGGAAAAAAAAAAAACGCAAAAAAAAAAAACACAAAAAAAAAAAATGCAAAAAAAAAAAATCGAAAAAAAAAAAATCTAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACCCAAAAAAAAAAAAGACAAAAAAAAAAAATAGAAAAAAAAAAAGTTAAAAAAAAAAAACTGAAAAAAAAAAAATTTAAAAAAAAAAAAT
173 編碼Nme2Cas9之mRNA L GGGaagctcagaataaacgctcaactttggccggatctgccacCatgGACGGCTCCGGCGGCGGCTCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGTGGGCGGCTCCGGCGGCGGCgccgccttcaagcccaaccccatcaactacatcctgggcctggacatcggcatcgcctccgtgggctgggccatggtggagatcgacgaggaggagaaccccatccggctgatcgacctgggcgtgcgggtgttcgagcgggccgaggtgcccaagaccggcgactccctggccatggcccggcggctggcccggtccgtgcggcggctgacccggcggcgggcccaccggctgctgcgggcccggcggctgctgaagcgggagggcgtgctgcaggccgccgacttcgacgagaacggcctgatcaagtccctgcccaacaccccctggcagctgcgggccgccgccctggaccggaagctgacccccctggagtggtccgccgtgctgctgcacctgatcaagcaccggggctacctgtcccagcggaagaacgagggcgagaccgccgacaaggagctgggcgccctgctgaagggcgtggccaacaacgcccacgccctgcagaccggcgacttccggacccccgccgagctggccctgaacaagttcgagaaggagtccggccacatccggaaccagcggggcgactactcccacaccttctcccggaaggacctgcaggccgagctgatcctgctgttcgagaagcagaaggagttcggcaacccccacgtgtccggcggcctgaaggagggcatcgagaccctgctgatgacccagcggcccgccctgtccggcgacgccgtgcagaagatgctgggccactgcaccttcgagcccgccgagcccaaggccgccaagaacacctacaccgccgagcggttcatctggctgaccaagctgaacaacctgcggatcctggagcagggctccgagcggcccctgaccgacaccgagcgggccaccctgatggacgagccctaccggaagtccaagctgacctacgcccaggcccggaagctgctgggcctggaggacaccgccttcttcaagggcctgcggtacggcaaggacaacgccgaggcctccaccctgatggagatgaaggcctaccacgccatctcccgggccctggagaaggagggcctgaaggacaagaagtcccccctgaacctgtcctccgagctgcaggacgagatcggcaccgccttctccctgttcaagaccgacgaggacatcaccggccggctgaaggaccgggtgcagcccgagatcctggaggccctgctgaagcacatctccttcgacaagttcgtgcagatctccctgaaggccctgcggcggatcgtgcccctgatggagcagggcaagcggtacgacgaggcctgcgccgagatctacggcgaccactacggcaagaagaacaccgaggagaagatctacctgccccccatccccgccgacgagatccggaaccccgtggtgctgcgggccctgtcccaggcccggaaggtgatcaacggcgtggtgcggcggtacggctcccccgcccggatccacatcgagaccgcccgggaggtgggcaagtccttcaaggaccggaaggagatcgagaagcggcaggaggagaaccggaaggaccgggagaaggccgccgccaagttccgggagtacttccccaacttcgtgggcgagcccaagtccaaggacatcctgaagctgcggctgtacgagcagcagcacggcaagtgcctgtactccggcaaggagatcaacctggtgcggctgaacgagaagggctacgtggagatcgaccacgccctgcccttctcccggacctgggacgactccttcaacaacaaggtgctggtgctgggctccgagaaccagaacaagggcaaccagaccccctacgagtacttcaacggcaaggacaactcccgggagtggcaggagttcaaggcccgggtggagacctcccggttcccccggtccaagaagcagcggatcctgctgcagaagttcgacgaggacggcttcaaggagtgcaacctgaacgacacccggtacgtgaaccggttcctgtgccagttcgtggccgaccacatcctgctgaccggcaagggcaagcggcgggtgttcgcctccaacggccagatcaccaacctgctgcggggcttctggggcctgcggaaggtgcgggccgagaacgaccggcaccacgccctggacgccgtggtggtggcctgctccaccgtggccatgcagcagaagatcacccggttcgtgcggtacaaggagatgaacgccttcgacggcaagaccatcgacaaggagaccggcaaggtgctgcaccagaagacccacttcccccagccctgggagttcttcgcccaggaggtgatgatccgggtgttcggcaagcccgacggcaagcccgagttcgaggaggccgacacccccgagaagctgcggaccctgctggccgagaagctgtcctcccggcccgaggccgtgcacgagtacgtgacccccctgttcgtgtcccgggcccccaaccggaagatgtccggcgcccacaaggacaccctgcggtccgccaagcggttcgtgaagcacaacgagaagatctccgtgaagcgggtgtggctgaccgagatcaagctggccgacctggagaacatggtgaactacaagaacggccgggagatcgagctgtacgaggccctgaaggcccggctggaggcctacggcggcaacgccaagcaggccttcgaccccaaggacaaccccttctacaagaagggcggccagctggtgaaggccgtgcgggtggagaagacccaggagtccggcgtgctgctgaacaagaagaacgcctacaccatcgccgacaacggcgacatggtgcgggtggacgtgttctgcaaggtggacaagaagggcaagaaccagtacttcatcgtgcccatctacgcctggcaggtggccgagaacatcctgcccgacatcgactgcaagggctaccggatcgacgactcctacaccttctgcttctccctgcacaagtacgacctgatcgccttccagaaggacgagaagtccaaggtggagttcgcctactacatcaactgcgactcctccaacggccggttctacctggcctggcacgacaagggctccaaggagcagcagttccggatctccacccagaacctggtgctgatccagaagtaccaggtgaacgagctgggcaaggagatccggccctgccggctgaagaagcggccccccgtgcggtagctagcaccagcctcaagaacacccgaatggagtctctaagctacataataccaacttacactttacaaaatgttgtcccccaaaatgtagccattcgtatctgctcctaataaaaagaaagtttcttcacattctctcgagAAAAAAAAAAAATGGAAAAAAAAAAAACGGAAAAAAAAAAAAGGTAAAAAAAAAAAATATAAAAAAAAAAAACATAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACGTAAAAAAAAAAAACTCAAAAAAAAAAAGATAAAAAAAAAAAACCTAAAAAAAAAAAATGTAAAAAAAAAAAAGGGAAAAAAAAAAAACGCAAAAAAAAAAAACACAAAAAAAAAAAATGCAAAAAAAAAAAATCGAAAAAAAAAAAATCTAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACCCAAAAAAAAAAAAGACAAAAAAAAAAAATAGAAAAAAAAAAAGTTAAAAAAAAAAAACTGAAAAAAAAAAAATTTAAAAAAAAAAAAT
174 編碼帶有HiBiT標籤之Nme2Cas9之mRNA M GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACGGCUCCGGCGGCGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGGGCGGCUCCGGCGGCGGCGCCGCCUUCAAGCCCAACCCCAUCAACUACAUCCUGGGCCUGGACAUCGGCAUCGCCUCCGUGGGCUGGGCCAUGGUGGAGAUCGACGAGGAGGAGAACCCCAUCCGGCUGAUCGACCUGGGCGUGCGGGUGUUCGAGCGGGCCGAGGUGCCCAAGACCGGCGACUCCCUGGCCAUGGCCCGGCGGCUGGCCCGGUCCGUGCGGCGGCUGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCUGCUGCGGGCCCGGCGGCUGCUGAAGCGGGAGGGCGUGCUGCAGGCCGCCGACUUCGACGAGAACGGCCUGAUCAAGUCCCUGCCCAACACCCCCUGGCAGCUGCGGGCCGCCGCCCUGGACCGGAAGCUGACCCCCCUGGAGUGGUCCGCCGUGCUGCUGCACCUGAUCAAGCACCGGGGCUACCUGUCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCUGGGCGCCCUGCUGAAGGGCGUGGCCAACAACGCCCACGCCCUGCAGACCGGCGACUUCCGGACCCCCGCCGAGCUGGCCCUGAACAAGUUCGAGAAGGAGUCCGGCCACAUCCGGAACCAGCGGGGCGACUACUCCCACACCUUCUCCCGGAAGGACCUGCAGGCCGAGCUGAUCCUGCUGUUCGAGAAGCAGAAGGAGUUCGGCAACCCCCACGUGUCCGGCGGCCUGAAGGAGGGCAUCGAGACCCUGCUGAUGACCCAGCGGCCCGCCCUGUCCGGCGACGCCGUGCAGAAGAUGCUGGGCCACUGCACCUUCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCUACACCGCCGAGCGGUUCAUCUGGCUGACCAAGCUGAACAACCUGCGGAUCCUGGAGCAGGGCUCCGAGCGGCCCCUGACCGACACCGAGCGGGCCACCCUGAUGGACGAGCCCUACCGGAAGUCCAAGCUGACCUACGCCCAGGCCCGGAAGCUGCUGGGCCUGGAGGACACCGCCUUCUUCAAGGGCCUGCGGUACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCUCCACCCUGAUGGAGAUGAAGGCCUACCACGCCAUCUCCCGGGCCCUGGAGAAGGAGGGCCUGAAGGACAAGAAGUCCCCCCUGAACCUGUCCUCCGAGCUGCAGGACGAGAUCGGCACCGCCUUCUCCCUGUUCAAGACCGACGAGGACAUCACCGGCCGGCUGAAGGACCGGGUGCAGCCCGAGAUCCUGGAGGCCCUGCUGAAGCACAUCUCCUUCGACAAGUUCGUGCAGAUCUCCCUGAAGGCCCUGCGGCGGAUCGUGCCCCUGAUGGAGCAGGGCAAGCGGUACGACGAGGCCUGCGCCGAGAUCUACGGCGACCACUACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGAUCUACCUGCCCCCCAUCCCCGCCGACGAGAUCCGGAACCCCGUGGUGCUGCGGGCCCUGUCCCAGGCCCGGAAGGUGAUCAACGGCGUGGUGCGGCGGUACGGCUCCCCCGCCCGGAUCCACAUCGAGACCGCCCGGGAGGUGGGCAAGUCCUUCAAGGACCGGAAGGAGAUCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGUUCCGGGAGUACUUCCCCAACUUCGUGGGCGAGCCCAAGUCCAAGGACAUCCUGAAGCUGCGGCUGUACGAGCAGCAGCACGGCAAGUGCCUGUACUCCGGCAAGGAGAUCAACCUGGUGCGGCUGAACGAGAAGGGCUACGUGGAGAUCGACCACGCCCUGCCCUUCUCCCGGACCUGGGACGACUCCUUCAACAACAAGGUGCUGGUGCUGGGCUCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCUACGAGUACUUCAACGGCAAGGACAACUCCCGGGAGUGGCAGGAGUUCAAGGCCCGGGUGGAGACCUCCCGGUUCCCCCGGUCCAAGAAGCAGCGGAUCCUGCUGCAGAAGUUCGACGAGGACGGCUUCAAGGAGUGCAACCUGAACGACACCCGGUACGUGAACCGGUUCCUGUGCCAGUUCGUGGCCGACCACAUCCUGCUGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGUGUUCGCCUCCAACGGCCAGAUCACCAACCUGCUGCGGGGCUUCUGGGGCCUGCGGAAGGUGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCUGGACGCCGUGGUGGUGGCCUGCUCCACCGUGGCCAUGCAGCAGAAGAUCACCCGGUUCGUGCGGUACAAGGAGAUGAACGCCUUCGACGGCAAGACCAUCGACAAGGAGACCGGCAAGGUGCUGCACCAGAAGACCCACUUCCCCCAGCCCUGGGAGUUCUUCGCCCAGGAGGUGAUGAUCCGGGUGUUCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGUUCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCUGCGGACCCUGCUGGCCGAGAAGCUGUCCUCCCGGCCCGAGGCCGUGCACGAGUACGUGACCCCCCUGUUCGUGUCCCGGGCCCCCAACCGGAAGAUGUCCGGCGCCCACAAGGACACCCUGCGGUCCGCCAAGCGGUUCGUGAAGCACAACGAGAAGAUCUCCGUGAAGCGGGUGUGGCUGACCGAGAUCAAGCUGGCCGACCUGGAGAACAUGGUGAACUACAAGAACGGCCGGGAGAUCGAGCUGUACGAGGCCCUGAAGGCCCGGCUGGAGGCCUACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCUUCGACCCCAAGGACAACCCCUUCUACAAGAAGGGCGGCCAGCUGGUGAAGGCCGUGCGGGUGGAGAAGACCCAGGAGUCCGGCGUGCUGCUGAACAAGAAGAACGCCUACACCAUCGCCGACAACGGCGACAUGGUGCGGGUGGACGUGUUCUGCAAGGUGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGUACUUCAUCGUGCCCAUCUACGCCUGGCAGGUGGCCGAGAACAUCCUGCCCGACAUCGACUGCAAGGGCUACCGGAUCGACGACUCCUACACCUUCUGCUUCUCCCUGCACAAGUACGACCUGAUCGCCUUCCAGAAGGACGAGAAGUCCAAGGUGGAGUUCGCCUACUACAUCAACUGCGACUCCUCCAACGGCCGGUUCUACCUGGCCUGGCACGACAAGGGCUCCAAGGAGCAGCAGUUCCGGAUCUCCACCCAGAACCUGGUGCUGAUCCAGAAGUACCAGGUGAACGAGCUGGGCAAGGAGAUCCGGCCCUGCCGGCUGAAGAAGCGGCCCCCCGUGCGGUCCGAGUCCGCCACCCCCGAGUCCGUGUCCGGCUGGCGGCUGUUCAAGAAGAUCUCCUAGCUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAUGGAAAAAAAAAAAACGGAAAAAAAAAAAAGGUAAAAAAAAAAAAUAUAAAAAAAAAAAACAUAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACGUAAAAAAAAAAAACUCAAAAAAAAAAAAGAUAAAAAAAAAAAACCUAAAAAAAAAAAAUGUAAAAAAAAAAAAGGGAAAAAAAAAAAACGCAAAAAAAAAAAACACAAAAAAAAAAAAUGCAAAAAAAAAAAAUCGAAAAAAAAAAAAUCUAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACCCAAAAAAAAAAAAGACAAAAAAAAAAAAUAGAAAAAAAAAAAAGUUAAAAAAAAAAAACUGAAAAAAAAAAAAUUUAAAAAAAAAAAAUCUAG
175 編碼Nme2Cas9之mRNA N GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACGGCUCCGGCGGCGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGGGCGGCUCCGGCGGCGGCGCCGCCUUCAAGCCCAACCCCAUCAACUACAUCCUGGGCCUGGACAUCGGCAUCGCCUCCGUGGGCUGGGCCAUGGUGGAGAUCGACGAGGAGGAGAACCCCAUCCGGCUGAUCGACCUGGGCGUGCGGGUGUUCGAGCGGGCCGAGGUGCCCAAGACCGGCGACUCCCUGGCCAUGGCCCGGCGGCUGGCCCGGUCCGUGCGGCGGCUGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCUGCUGCGGGCCCGGCGGCUGCUGAAGCGGGAGGGCGUGCUGCAGGCCGCCGACUUCGACGAGAACGGCCUGAUCAAGUCCCUGCCCAACACCCCCUGGCAGCUGCGGGCCGCCGCCCUGGACCGGAAGCUGACCCCCCUGGAGUGGUCCGCCGUGCUGCUGCACCUGAUCAAGCACCGGGGCUACCUGUCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCUGGGCGCCCUGCUGAAGGGCGUGGCCAACAACGCCCACGCCCUGCAGACCGGCGACUUCCGGACCCCCGCCGAGCUGGCCCUGAACAAGUUCGAGAAGGAGUCCGGCCACAUCCGGAACCAGCGGGGCGACUACUCCCACACCUUCUCCCGGAAGGACCUGCAGGCCGAGCUGAUCCUGCUGUUCGAGAAGCAGAAGGAGUUCGGCAACCCCCACGUGUCCGGCGGCCUGAAGGAGGGCAUCGAGACCCUGCUGAUGACCCAGCGGCCCGCCCUGUCCGGCGACGCCGUGCAGAAGAUGCUGGGCCACUGCACCUUCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCUACACCGCCGAGCGGUUCAUCUGGCUGACCAAGCUGAACAACCUGCGGAUCCUGGAGCAGGGCUCCGAGCGGCCCCUGACCGACACCGAGCGGGCCACCCUGAUGGACGAGCCCUACCGGAAGUCCAAGCUGACCUACGCCCAGGCCCGGAAGCUGCUGGGCCUGGAGGACACCGCCUUCUUCAAGGGCCUGCGGUACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCUCCACCCUGAUGGAGAUGAAGGCCUACCACGCCAUCUCCCGGGCCCUGGAGAAGGAGGGCCUGAAGGACAAGAAGUCCCCCCUGAACCUGUCCUCCGAGCUGCAGGACGAGAUCGGCACCGCCUUCUCCCUGUUCAAGACCGACGAGGACAUCACCGGCCGGCUGAAGGACCGGGUGCAGCCCGAGAUCCUGGAGGCCCUGCUGAAGCACAUCUCCUUCGACAAGUUCGUGCAGAUCUCCCUGAAGGCCCUGCGGCGGAUCGUGCCCCUGAUGGAGCAGGGCAAGCGGUACGACGAGGCCUGCGCCGAGAUCUACGGCGACCACUACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGAUCUACCUGCCCCCCAUCCCCGCCGACGAGAUCCGGAACCCCGUGGUGCUGCGGGCCCUGUCCCAGGCCCGGAAGGUGAUCAACGGCGUGGUGCGGCGGUACGGCUCCCCCGCCCGGAUCCACAUCGAGACCGCCCGGGAGGUGGGCAAGUCCUUCAAGGACCGGAAGGAGAUCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGUUCCGGGAGUACUUCCCCAACUUCGUGGGCGAGCCCAAGUCCAAGGACAUCCUGAAGCUGCGGCUGUACGAGCAGCAGCACGGCAAGUGCCUGUACUCCGGCAAGGAGAUCAACCUGGUGCGGCUGAACGAGAAGGGCUACGUGGAGAUCGACCACGCCCUGCCCUUCUCCCGGACCUGGGACGACUCCUUCAACAACAAGGUGCUGGUGCUGGGCUCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCUACGAGUACUUCAACGGCAAGGACAACUCCCGGGAGUGGCAGGAGUUCAAGGCCCGGGUGGAGACCUCCCGGUUCCCCCGGUCCAAGAAGCAGCGGAUCCUGCUGCAGAAGUUCGACGAGGACGGCUUCAAGGAGUGCAACCUGAACGACACCCGGUACGUGAACCGGUUCCUGUGCCAGUUCGUGGCCGACCACAUCCUGCUGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGUGUUCGCCUCCAACGGCCAGAUCACCAACCUGCUGCGGGGCUUCUGGGGCCUGCGGAAGGUGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCUGGACGCCGUGGUGGUGGCCUGCUCCACCGUGGCCAUGCAGCAGAAGAUCACCCGGUUCGUGCGGUACAAGGAGAUGAACGCCUUCGACGGCAAGACCAUCGACAAGGAGACCGGCAAGGUGCUGCACCAGAAGACCCACUUCCCCCAGCCCUGGGAGUUCUUCGCCCAGGAGGUGAUGAUCCGGGUGUUCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGUUCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCUGCGGACCCUGCUGGCCGAGAAGCUGUCCUCCCGGCCCGAGGCCGUGCACGAGUACGUGACCCCCCUGUUCGUGUCCCGGGCCCCCAACCGGAAGAUGUCCGGCGCCCACAAGGACACCCUGCGGUCCGCCAAGCGGUUCGUGAAGCACAACGAGAAGAUCUCCGUGAAGCGGGUGUGGCUGACCGAGAUCAAGCUGGCCGACCUGGAGAACAUGGUGAACUACAAGAACGGCCGGGAGAUCGAGCUGUACGAGGCCCUGAAGGCCCGGCUGGAGGCCUACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCUUCGACCCCAAGGACAACCCCUUCUACAAGAAGGGCGGCCAGCUGGUGAAGGCCGUGCGGGUGGAGAAGACCCAGGAGUCCGGCGUGCUGCUGAACAAGAAGAACGCCUACACCAUCGCCGACAACGGCGACAUGGUGCGGGUGGACGUGUUCUGCAAGGUGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGUACUUCAUCGUGCCCAUCUACGCCUGGCAGGUGGCCGAGAACAUCCUGCCCGACAUCGACUGCAAGGGCUACCGGAUCGACGACUCCUACACCUUCUGCUUCUCCCUGCACAAGUACGACCUGAUCGCCUUCCAGAAGGACGAGAAGUCCAAGGUGGAGUUCGCCUACUACAUCAACUGCGACUCCUCCAACGGCCGGUUCUACCUGGCCUGGCACGACAAGGGCUCCAAGGAGCAGCAGUUCCGGAUCUCCACCCAGAACCUGGUGCUGAUCCAGAAGUACCAGGUGAACGAGCUGGGCAAGGAGAUCCGGCCCUGCCGGCUGAAGAAGCGGCCCCCCGUGCGGUCCGGAAAGCGGACCGCCGACGGCUCCGGAGGAGGAAGCCCCGCCGCCAAGAAGAAGAAGCUGGACUAGCUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAUGGAAAAAAAAAAAACGGAAAAAAAAAAAAGGUAAAAAAAAAAAAUAUAAAAAAAAAAAACAUAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACGUAAAAAAAAAAAACUCAAAAAAAAAAAGAUAAAAAAAAAAAACCUAAAAAAAAAAAAUGUAAAAAAAAAAAAGGGAAAAAAAAAAAACGCAAAAAAAAAAAACACAAAAAAAAAAAAUGCAAAAAAAAAAAAUCGAAAAAAAAAAAAUCUAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACCCAAAAAAAAAAAAGACAAAAAAAAAAAAUAGAAAAAAAAAAAGUUAAAAAAAAAAAACUGAAAAAAAAAAAAUUUAAAAAAAAAAAAUCUAG
176 編碼Nme2Cas9之mRNA O GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACGGCUCCGGCGGCGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGGAGGACAAGCGGCCCGCCGCCACCAAGAAGGCCGGCCAGGCCAAGAAGAAGAAGGGCGGCUCCGGCGGCGGCGCCGCCUUCAAGCCCAACCCCAUCAACUACAUCCUGGGCCUGGACAUCGGCAUCGCCUCCGUGGGCUGGGCCAUGGUGGAGAUCGACGAGGAGGAGAACCCCAUCCGGCUGAUCGACCUGGGCGUGCGGGUGUUCGAGCGGGCCGAGGUGCCCAAGACCGGCGACUCCCUGGCCAUGGCCCGGCGGCUGGCCCGGUCCGUGCGGCGGCUGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCUGCUGCGGGCCCGGCGGCUGCUGAAGCGGGAGGGCGUGCUGCAGGCCGCCGACUUCGACGAGAACGGCCUGAUCAAGUCCCUGCCCAACACCCCCUGGCAGCUGCGGGCCGCCGCCCUGGACCGGAAGCUGACCCCCCUGGAGUGGUCCGCCGUGCUGCUGCACCUGAUCAAGCACCGGGGCUACCUGUCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCUGGGCGCCCUGCUGAAGGGCGUGGCCAACAACGCCCACGCCCUGCAGACCGGCGACUUCCGGACCCCCGCCGAGCUGGCCCUGAACAAGUUCGAGAAGGAGUCCGGCCACAUCCGGAACCAGCGGGGCGACUACUCCCACACCUUCUCCCGGAAGGACCUGCAGGCCGAGCUGAUCCUGCUGUUCGAGAAGCAGAAGGAGUUCGGCAACCCCCACGUGUCCGGCGGCCUGAAGGAGGGCAUCGAGACCCUGCUGAUGACCCAGCGGCCCGCCCUGUCCGGCGACGCCGUGCAGAAGAUGCUGGGCCACUGCACCUUCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCUACACCGCCGAGCGGUUCAUCUGGCUGACCAAGCUGAACAACCUGCGGAUCCUGGAGCAGGGCUCCGAGCGGCCCCUGACCGACACCGAGCGGGCCACCCUGAUGGACGAGCCCUACCGGAAGUCCAAGCUGACCUACGCCCAGGCCCGGAAGCUGCUGGGCCUGGAGGACACCGCCUUCUUCAAGGGCCUGCGGUACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCUCCACCCUGAUGGAGAUGAAGGCCUACCACGCCAUCUCCCGGGCCCUGGAGAAGGAGGGCCUGAAGGACAAGAAGUCCCCCCUGAACCUGUCCUCCGAGCUGCAGGACGAGAUCGGCACCGCCUUCUCCCUGUUCAAGACCGACGAGGACAUCACCGGCCGGCUGAAGGACCGGGUGCAGCCCGAGAUCCUGGAGGCCCUGCUGAAGCACAUCUCCUUCGACAAGUUCGUGCAGAUCUCCCUGAAGGCCCUGCGGCGGAUCGUGCCCCUGAUGGAGCAGGGCAAGCGGUACGACGAGGCCUGCGCCGAGAUCUACGGCGACCACUACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGAUCUACCUGCCCCCCAUCCCCGCCGACGAGAUCCGGAACCCCGUGGUGCUGCGGGCCCUGUCCCAGGCCCGGAAGGUGAUCAACGGCGUGGUGCGGCGGUACGGCUCCCCCGCCCGGAUCCACAUCGAGACCGCCCGGGAGGUGGGCAAGUCCUUCAAGGACCGGAAGGAGAUCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGUUCCGGGAGUACUUCCCCAACUUCGUGGGCGAGCCCAAGUCCAAGGACAUCCUGAAGCUGCGGCUGUACGAGCAGCAGCACGGCAAGUGCCUGUACUCCGGCAAGGAGAUCAACCUGGUGCGGCUGAACGAGAAGGGCUACGUGGAGAUCGACCACGCCCUGCCCUUCUCCCGGACCUGGGACGACUCCUUCAACAACAAGGUGCUGGUGCUGGGCUCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCUACGAGUACUUCAACGGCAAGGACAACUCCCGGGAGUGGCAGGAGUUCAAGGCCCGGGUGGAGACCUCCCGGUUCCCCCGGUCCAAGAAGCAGCGGAUCCUGCUGCAGAAGUUCGACGAGGACGGCUUCAAGGAGUGCAACCUGAACGACACCCGGUACGUGAACCGGUUCCUGUGCCAGUUCGUGGCCGACCACAUCCUGCUGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGUGUUCGCCUCCAACGGCCAGAUCACCAACCUGCUGCGGGGCUUCUGGGGCCUGCGGAAGGUGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCUGGACGCCGUGGUGGUGGCCUGCUCCACCGUGGCCAUGCAGCAGAAGAUCACCCGGUUCGUGCGGUACAAGGAGAUGAACGCCUUCGACGGCAAGACCAUCGACAAGGAGACCGGCAAGGUGCUGCACCAGAAGACCCACUUCCCCCAGCCCUGGGAGUUCUUCGCCCAGGAGGUGAUGAUCCGGGUGUUCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGUUCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCUGCGGACCCUGCUGGCCGAGAAGCUGUCCUCCCGGCCCGAGGCCGUGCACGAGUACGUGACCCCCCUGUUCGUGUCCCGGGCCCCCAACCGGAAGAUGUCCGGCGCCCACAAGGACACCCUGCGGUCCGCCAAGCGGUUCGUGAAGCACAACGAGAAGAUCUCCGUGAAGCGGGUGUGGCUGACCGAGAUCAAGCUGGCCGACCUGGAGAACAUGGUGAACUACAAGAACGGCCGGGAGAUCGAGCUGUACGAGGCCCUGAAGGCCCGGCUGGAGGCCUACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCUUCGACCCCAAGGACAACCCCUUCUACAAGAAGGGCGGCCAGCUGGUGAAGGCCGUGCGGGUGGAGAAGACCCAGGAGUCCGGCGUGCUGCUGAACAAGAAGAACGCCUACACCAUCGCCGACAACGGCGACAUGGUGCGGGUGGACGUGUUCUGCAAGGUGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGUACUUCAUCGUGCCCAUCUACGCCUGGCAGGUGGCCGAGAACAUCCUGCCCGACAUCGACUGCAAGGGCUACCGGAUCGACGACUCCUACACCUUCUGCUUCUCCCUGCACAAGUACGACCUGAUCGCCUUCCAGAAGGACGAGAAGUCCAAGGUGGAGUUCGCCUACUACAUCAACUGCGACUCCUCCAACGGCCGGUUCUACCUGGCCUGGCACGACAAGGGCUCCAAGGAGCAGCAGUUCCGGAUCUCCACCCAGAACCUGGUGCUGAUCCAGAAGUACCAGGUGAACGAGCUGGGCAAGGAGAUCCGGCCCUGCCGGCUGAAGAAGCGGCCCCCCGUGCGGUAGCUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAUGGAAAAAAAAAAAACGGAAAAAAAAAAAAGGUAAAAAAAAAAAAUAUAAAAAAAAAAAACAUAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACGUAAAAAAAAAAAACUCAAAAAAAAAAAGAUAAAAAAAAAAAACCUAAAAAAAAAAAAUGUAAAAAAAAAAAAGGGAAAAAAAAAAAACGCAAAAAAAAAAAACACAAAAAAAAAAAAUGCAAAAAAAAAAAAUCGAAAAAAAAAAAAUCUAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACCCAAAAAAAAAAAAGACAAAAAAAAAAAAUAGAAAAAAAAAAAGUUAAAAAAAAAAAACUGAAAAAAAAAAAAUUUAAAAAAAAAAAAUCUAG
177 編碼帶有HiBiT標籤之Nme2Cas9之mRNA P GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACGGCUCCGGCGGCGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGGAGGACAAGCGGCCCGCCGCCACCAAGAAGGCCGGCCAGGCCAAGAAGAAGAAGGGCGGCUCCGGCGGCGGCGCCGCCUUCAAGCCCAACCCCAUCAACUACAUCCUGGGCCUGGACAUCGGCAUCGCCUCCGUGGGCUGGGCCAUGGUGGAGAUCGACGAGGAGGAGAACCCCAUCCGGCUGAUCGACCUGGGCGUGCGGGUGUUCGAGCGGGCCGAGGUGCCCAAGACCGGCGACUCCCUGGCCAUGGCCCGGCGGCUGGCCCGGUCCGUGCGGCGGCUGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCUGCUGCGGGCCCGGCGGCUGCUGAAGCGGGAGGGCGUGCUGCAGGCCGCCGACUUCGACGAGAACGGCCUGAUCAAGUCCCUGCCCAACACCCCCUGGCAGCUGCGGGCCGCCGCCCUGGACCGGAAGCUGACCCCCCUGGAGUGGUCCGCCGUGCUGCUGCACCUGAUCAAGCACCGGGGCUACCUGUCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCUGGGCGCCCUGCUGAAGGGCGUGGCCAACAACGCCCACGCCCUGCAGACCGGCGACUUCCGGACCCCCGCCGAGCUGGCCCUGAACAAGUUCGAGAAGGAGUCCGGCCACAUCCGGAACCAGCGGGGCGACUACUCCCACACCUUCUCCCGGAAGGACCUGCAGGCCGAGCUGAUCCUGCUGUUCGAGAAGCAGAAGGAGUUCGGCAACCCCCACGUGUCCGGCGGCCUGAAGGAGGGCAUCGAGACCCUGCUGAUGACCCAGCGGCCCGCCCUGUCCGGCGACGCCGUGCAGAAGAUGCUGGGCCACUGCACCUUCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCUACACCGCCGAGCGGUUCAUCUGGCUGACCAAGCUGAACAACCUGCGGAUCCUGGAGCAGGGCUCCGAGCGGCCCCUGACCGACACCGAGCGGGCCACCCUGAUGGACGAGCCCUACCGGAAGUCCAAGCUGACCUACGCCCAGGCCCGGAAGCUGCUGGGCCUGGAGGACACCGCCUUCUUCAAGGGCCUGCGGUACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCUCCACCCUGAUGGAGAUGAAGGCCUACCACGCCAUCUCCCGGGCCCUGGAGAAGGAGGGCCUGAAGGACAAGAAGUCCCCCCUGAACCUGUCCUCCGAGCUGCAGGACGAGAUCGGCACCGCCUUCUCCCUGUUCAAGACCGACGAGGACAUCACCGGCCGGCUGAAGGACCGGGUGCAGCCCGAGAUCCUGGAGGCCCUGCUGAAGCACAUCUCCUUCGACAAGUUCGUGCAGAUCUCCCUGAAGGCCCUGCGGCGGAUCGUGCCCCUGAUGGAGCAGGGCAAGCGGUACGACGAGGCCUGCGCCGAGAUCUACGGCGACCACUACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGAUCUACCUGCCCCCCAUCCCCGCCGACGAGAUCCGGAACCCCGUGGUGCUGCGGGCCCUGUCCCAGGCCCGGAAGGUGAUCAACGGCGUGGUGCGGCGGUACGGCUCCCCCGCCCGGAUCCACAUCGAGACCGCCCGGGAGGUGGGCAAGUCCUUCAAGGACCGGAAGGAGAUCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGUUCCGGGAGUACUUCCCCAACUUCGUGGGCGAGCCCAAGUCCAAGGACAUCCUGAAGCUGCGGCUGUACGAGCAGCAGCACGGCAAGUGCCUGUACUCCGGCAAGGAGAUCAACCUGGUGCGGCUGAACGAGAAGGGCUACGUGGAGAUCGACCACGCCCUGCCCUUCUCCCGGACCUGGGACGACUCCUUCAACAACAAGGUGCUGGUGCUGGGCUCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCUACGAGUACUUCAACGGCAAGGACAACUCCCGGGAGUGGCAGGAGUUCAAGGCCCGGGUGGAGACCUCCCGGUUCCCCCGGUCCAAGAAGCAGCGGAUCCUGCUGCAGAAGUUCGACGAGGACGGCUUCAAGGAGUGCAACCUGAACGACACCCGGUACGUGAACCGGUUCCUGUGCCAGUUCGUGGCCGACCACAUCCUGCUGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGUGUUCGCCUCCAACGGCCAGAUCACCAACCUGCUGCGGGGCUUCUGGGGCCUGCGGAAGGUGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCUGGACGCCGUGGUGGUGGCCUGCUCCACCGUGGCCAUGCAGCAGAAGAUCACCCGGUUCGUGCGGUACAAGGAGAUGAACGCCUUCGACGGCAAGACCAUCGACAAGGAGACCGGCAAGGUGCUGCACCAGAAGACCCACUUCCCCCAGCCCUGGGAGUUCUUCGCCCAGGAGGUGAUGAUCCGGGUGUUCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGUUCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCUGCGGACCCUGCUGGCCGAGAAGCUGUCCUCCCGGCCCGAGGCCGUGCACGAGUACGUGACCCCCCUGUUCGUGUCCCGGGCCCCCAACCGGAAGAUGUCCGGCGCCCACAAGGACACCCUGCGGUCCGCCAAGCGGUUCGUGAAGCACAACGAGAAGAUCUCCGUGAAGCGGGUGUGGCUGACCGAGAUCAAGCUGGCCGACCUGGAGAACAUGGUGAACUACAAGAACGGCCGGGAGAUCGAGCUGUACGAGGCCCUGAAGGCCCGGCUGGAGGCCUACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCUUCGACCCCAAGGACAACCCCUUCUACAAGAAGGGCGGCCAGCUGGUGAAGGCCGUGCGGGUGGAGAAGACCCAGGAGUCCGGCGUGCUGCUGAACAAGAAGAACGCCUACACCAUCGCCGACAACGGCGACAUGGUGCGGGUGGACGUGUUCUGCAAGGUGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGUACUUCAUCGUGCCCAUCUACGCCUGGCAGGUGGCCGAGAACAUCCUGCCCGACAUCGACUGCAAGGGCUACCGGAUCGACGACUCCUACACCUUCUGCUUCUCCCUGCACAAGUACGACCUGAUCGCCUUCCAGAAGGACGAGAAGUCCAAGGUGGAGUUCGCCUACUACAUCAACUGCGACUCCUCCAACGGCCGGUUCUACCUGGCCUGGCACGACAAGGGCUCCAAGGAGCAGCAGUUCCGGAUCUCCACCCAGAACCUGGUGCUGAUCCAGAAGUACCAGGUGAACGAGCUGGGCAAGGAGAUCCGGCCCUGCCGGCUGAAGAAGCGGCCCCCCGUGCGGUCCGAGUCCGCCACCCCCGAGUCCGUGUCCGGCUGGCGGCUGUUCAAGAAGAUCUCCUAGCUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAUGGAAAAAAAAAAAACGGAAAAAAAAAAAAGGUAAAAAAAAAAAAUAUAAAAAAAAAAAACAUAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACGUAAAAAAAAAAAACUCAAAAAAAAAAAAGAUAAAAAAAAAAAACCUAAAAAAAAAAAAUGUAAAAAAAAAAAAGGGAAAAAAAAAAAACGCAAAAAAAAAAAACACAAAAAAAAAAAAUGCAAAAAAAAAAAAUCGAAAAAAAAAAAAUCUAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACCCAAAAAAAAAAAAGACAAAAAAAAAAAAUAGAAAAAAAAAAAAGUUAAAAAAAAAAAACUGAAAAAAAAAAAAUUUAAAAAAAAAAAAUCUAG
178 編碼Nme2Cas9之mRNA Q GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACGGCUCCGGCGGCGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGGGCGGCUCCGGCGGCGGCGCCGCCUUCAAGCCCAACCCCAUCAACUACAUCCUGGGCCUGGACAUCGGCAUCGCCUCCGUGGGCUGGGCCAUGGUGGAGAUCGACGAGGAGGAGAACCCCAUCCGGCUGAUCGACCUGGGCGUGCGGGUGUUCGAGCGGGCCGAGGUGCCCAAGACCGGCGACUCCCUGGCCAUGGCCCGGCGGCUGGCCCGGUCCGUGCGGCGGCUGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCUGCUGCGGGCCCGGCGGCUGCUGAAGCGGGAGGGCGUGCUGCAGGCCGCCGACUUCGACGAGAACGGCCUGAUCAAGUCCCUGCCCAACACCCCCUGGCAGCUGCGGGCCGCCGCCCUGGACCGGAAGCUGACCCCCCUGGAGUGGUCCGCCGUGCUGCUGCACCUGAUCAAGCACCGGGGCUACCUGUCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCUGGGCGCCCUGCUGAAGGGCGUGGCCAACAACGCCCACGCCCUGCAGACCGGCGACUUCCGGACCCCCGCCGAGCUGGCCCUGAACAAGUUCGAGAAGGAGUCCGGCCACAUCCGGAACCAGCGGGGCGACUACUCCCACACCUUCUCCCGGAAGGACCUGCAGGCCGAGCUGAUCCUGCUGUUCGAGAAGCAGAAGGAGUUCGGCAACCCCCACGUGUCCGGCGGCCUGAAGGAGGGCAUCGAGACCCUGCUGAUGACCCAGCGGCCCGCCCUGUCCGGCGACGCCGUGCAGAAGAUGCUGGGCCACUGCACCUUCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCUACACCGCCGAGCGGUUCAUCUGGCUGACCAAGCUGAACAACCUGCGGAUCCUGGAGCAGGGCUCCGAGCGGCCCCUGACCGACACCGAGCGGGCCACCCUGAUGGACGAGCCCUACCGGAAGUCCAAGCUGACCUACGCCCAGGCCCGGAAGCUGCUGGGCCUGGAGGACACCGCCUUCUUCAAGGGCCUGCGGUACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCUCCACCCUGAUGGAGAUGAAGGCCUACCACGCCAUCUCCCGGGCCCUGGAGAAGGAGGGCCUGAAGGACAAGAAGUCCCCCCUGAACCUGUCCUCCGAGCUGCAGGACGAGAUCGGCACCGCCUUCUCCCUGUUCAAGACCGACGAGGACAUCACCGGCCGGCUGAAGGACCGGGUGCAGCCCGAGAUCCUGGAGGCCCUGCUGAAGCACAUCUCCUUCGACAAGUUCGUGCAGAUCUCCCUGAAGGCCCUGCGGCGGAUCGUGCCCCUGAUGGAGCAGGGCAAGCGGUACGACGAGGCCUGCGCCGAGAUCUACGGCGACCACUACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGAUCUACCUGCCCCCCAUCCCCGCCGACGAGAUCCGGAACCCCGUGGUGCUGCGGGCCCUGUCCCAGGCCCGGAAGGUGAUCAACGGCGUGGUGCGGCGGUACGGCUCCCCCGCCCGGAUCCACAUCGAGACCGCCCGGGAGGUGGGCAAGUCCUUCAAGGACCGGAAGGAGAUCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGUUCCGGGAGUACUUCCCCAACUUCGUGGGCGAGCCCAAGUCCAAGGACAUCCUGAAGCUGCGGCUGUACGAGCAGCAGCACGGCAAGUGCCUGUACUCCGGCAAGGAGAUCAACCUGGUGCGGCUGAACGAGAAGGGCUACGUGGAGAUCGACCACGCCCUGCCCUUCUCCCGGACCUGGGACGACUCCUUCAACAACAAGGUGCUGGUGCUGGGCUCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCUACGAGUACUUCAACGGCAAGGACAACUCCCGGGAGUGGCAGGAGUUCAAGGCCCGGGUGGAGACCUCCCGGUUCCCCCGGUCCAAGAAGCAGCGGAUCCUGCUGCAGAAGUUCGACGAGGACGGCUUCAAGGAGUGCAACCUGAACGACACCCGGUACGUGAACCGGUUCCUGUGCCAGUUCGUGGCCGACCACAUCCUGCUGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGUGUUCGCCUCCAACGGCCAGAUCACCAACCUGCUGCGGGGCUUCUGGGGCCUGCGGAAGGUGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCUGGACGCCGUGGUGGUGGCCUGCUCCACCGUGGCCAUGCAGCAGAAGAUCACCCGGUUCGUGCGGUACAAGGAGAUGAACGCCUUCGACGGCAAGACCAUCGACAAGGAGACCGGCAAGGUGCUGCACCAGAAGACCCACUUCCCCCAGCCCUGGGAGUUCUUCGCCCAGGAGGUGAUGAUCCGGGUGUUCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGUUCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCUGCGGACCCUGCUGGCCGAGAAGCUGUCCUCCCGGCCCGAGGCCGUGCACGAGUACGUGACCCCCCUGUUCGUGUCCCGGGCCCCCAACCGGAAGAUGUCCGGCGCCCACAAGGACACCCUGCGGUCCGCCAAGCGGUUCGUGAAGCACAACGAGAAGAUCUCCGUGAAGCGGGUGUGGCUGACCGAGAUCAAGCUGGCCGACCUGGAGAACAUGGUGAACUACAAGAACGGCCGGGAGAUCGAGCUGUACGAGGCCCUGAAGGCCCGGCUGGAGGCCUACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCUUCGACCCCAAGGACAACCCCUUCUACAAGAAGGGCGGCCAGCUGGUGAAGGCCGUGCGGGUGGAGAAGACCCAGGAGUCCGGCGUGCUGCUGAACAAGAAGAACGCCUACACCAUCGCCGACAACGGCGACAUGGUGCGGGUGGACGUGUUCUGCAAGGUGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGUACUUCAUCGUGCCCAUCUACGCCUGGCAGGUGGCCGAGAACAUCCUGCCCGACAUCGACUGCAAGGGCUACCGGAUCGACGACUCCUACACCUUCUGCUUCUCCCUGCACAAGUACGACCUGAUCGCCUUCCAGAAGGACGAGAAGUCCAAGGUGGAGUUCGCCUACUACAUCAACUGCGACUCCUCCAACGGCCGGUUCUACCUGGCCUGGCACGACAAGGGCUCCAAGGAGCAGCAGUUCCGGAUCUCCACCCAGAACCUGGUGCUGAUCCAGAAGUACCAGGUGAACGAGCUGGGCAAGGAGAUCCGGCCCUGCCGGCUGAAGAAGCGGCCCCCCGUGCGGUAGCUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAUGGAAAAAAAAAAAACGGAAAAAAAAAAAAGGUAAAAAAAAAAAAUAUAAAAAAAAAAAACAUAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACGUAAAAAAAAAAAACUCAAAAAAAAAAAGAUAAAAAAAAAAAACCUAAAAAAAAAAAAUGUAAAAAAAAAAAAGGGAAAAAAAAAAAACGCAAAAAAAAAAAACACAAAAAAAAAAAAUGCAAAAAAAAAAAAUCGAAAAAAAAAAAAUCUAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACCCAAAAAAAAAAAAGACAAAAAAAAAAAAUAGAAAAAAAAAAAGUUAAAAAAAAAAAACUGAAAAAAAAAAAAUUUAAAAAAAAAAAAUCUAG
179 編碼Nme2Cas9鹼基編輯器之mRNA S GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACGGCUCCGGCGGCGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGGAGGACAAGCGGCCCGCCGCCACCAAGAAGGCCGGCCAGGCCAAGAAGAAGAAGGGCGGCUCCGGCGGCGGCGAGGCCUCCCCCGCCUCCGGCCCCCGGCACCUGAUGGACCCCCACAUCUUCACCUCCAACUUCAACAACGGCAUCGGCCGGCACAAGACCUACCUGUGCUACGAGGUGGAGCGGCUGGACAACGGCACCUCCGUGAAGAUGGACCAGCACCGGGGCUUCCUGCACAACCAGGCCAAGAACCUGCUGUGCGGCUUCUACGGCCGGCACGCCGAGCUGCGGUUCCUGGACCUGGUGCCCUCCCUGCAGCUGGACCCCGCCCAGAUCUACCGGGUGACCUGGUUCAUCUCCUGGUCCCCCUGCUUCUCCUGGGGCUGCGCCGGCGAGGUGCGGGCCUUCCUGCAGGAGAACACCCACGUGCGGCUGCGGAUCUUCGCCGCCCGGAUCUACGACUACGACCCCCUGUACAAGGAGGCCCUGCAGAUGCUGCGGGACGCCGGCGCCCAGGUGUCCAUCAUGACCUACGACGAGUUCAAGCACUGCUGGGACACCUUCGUGGACCACCAGGGCUGCCCCUUCCAGCCCUGGGACGGCCUGGACGAGCACUCCCAGGCCCUGUCCGGCCGGCUGCGGGCCAUCCUGCAGAACCAGGGCAACUCCGGCUCCGAGACCCCCGGCACCUCCGAGUCCGCCACCCCCGAGUCCGCAGCGUUCAAACCAAAUCCCAUCAACUACAUCCUGGGCCUGGCCAUCGGCAUCGCCUCCGUGGGCUGGGCCAUGGUGGAGAUCGACGAGGAGGAGAACCCCAUCCGGCUGAUCGACCUGGGCGUGCGGGUGUUCGAGCGGGCCGAGGUGCCCAAGACCGGCGACUCCCUGGCCAUGGCCCGGCGGCUGGCCCGGUCCGUGCGGCGGCUGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCUGCUGCGGGCCCGGCGGCUGCUGAAGCGGGAGGGCGUGCUGCAGGCCGCCGACUUCGACGAGAACGGCCUGAUCAAGUCCCUGCCCAACACCCCCUGGCAGCUGCGGGCCGCCGCCCUGGACCGGAAGCUGACCCCCCUGGAGUGGUCCGCCGUGCUGCUGCACCUGAUCAAGCACCGGGGCUACCUGUCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCUGGGCGCCCUGCUGAAGGGCGUGGCCAACAACGCCCACGCCCUGCAGACCGGCGACUUCCGGACCCCCGCCGAGCUGGCCCUGAACAAGUUCGAGAAGGAGUCCGGCCACAUCCGGAACCAGCGGGGCGACUACUCCCACACCUUCUCCCGGAAGGACCUGCAGGCCGAGCUGAUCCUGCUGUUCGAGAAGCAGAAGGAGUUCGGCAACCCCCACGUGUCCGGCGGCCUGAAGGAGGGCAUCGAGACCCUGCUGAUGACCCAGCGGCCCGCCCUGUCCGGCGACGCCGUGCAGAAGAUGCUGGGCCACUGCACCUUCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCUACACCGCCGAGCGGUUCAUCUGGCUGACCAAGCUGAACAACCUGCGGAUCCUGGAGCAGGGCUCCGAGCGGCCCCUGACCGACACCGAGCGGGCCACCCUGAUGGACGAGCCCUACCGGAAGUCCAAGCUGACCUACGCCCAGGCCCGGAAGCUGCUGGGCCUGGAGGACACCGCCUUCUUCAAGGGCCUGCGGUACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCUCCACCCUGAUGGAGAUGAAGGCCUACCACGCCAUCUCCCGGGCCCUGGAGAAGGAGGGCCUGAAGGACAAGAAGUCCCCCCUGAACCUGUCCUCCGAGCUGCAGGACGAGAUCGGCACCGCCUUCUCCCUGUUCAAGACCGACGAGGACAUCACCGGCCGGCUGAAGGACCGGGUGCAGCCCGAGAUCCUGGAGGCCCUGCUGAAGCACAUCUCCUUCGACAAGUUCGUGCAGAUCUCCCUGAAGGCCCUGCGGCGGAUCGUGCCCCUGAUGGAGCAGGGCAAGCGGUACGACGAGGCCUGCGCCGAGAUCUACGGCGACCACUACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGAUCUACCUGCCCCCCAUCCCCGCCGACGAGAUCCGGAACCCCGUGGUGCUGCGGGCCCUGUCCCAGGCCCGGAAGGUGAUCAACGGCGUGGUGCGGCGGUACGGCUCCCCCGCCCGGAUCCACAUCGAGACCGCCCGGGAGGUGGGCAAGUCCUUCAAGGACCGGAAGGAGAUCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGUUCCGGGAGUACUUCCCCAACUUCGUGGGCGAGCCCAAGUCCAAGGACAUCCUGAAGCUGCGGCUGUACGAGCAGCAGCACGGCAAGUGCCUGUACUCCGGCAAGGAGAUCAACCUGGUGCGGCUGAACGAGAAGGGCUACGUGGAGAUCGACCACGCCCUGCCCUUCUCCCGGACCUGGGACGACUCCUUCAACAACAAGGUGCUGGUGCUGGGCUCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCUACGAGUACUUCAACGGCAAGGACAACUCCCGGGAGUGGCAGGAGUUCAAGGCCCGGGUGGAGACCUCCCGGUUCCCCCGGUCCAAGAAGCAGCGGAUCCUGCUGCAGAAGUUCGACGAGGACGGCUUCAAGGAGUGCAACCUGAACGACACCCGGUACGUGAACCGCUUCCUGUGCCAGUUCGUGGCCGACCACAUCCUGCUGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGUGUUCGCCUCCAACGGCCAGAUCACCAACCUGCUGCGGGGCUUCUGGGGCCUGCGGAAGGUGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCUGGACGCCGUGGUGGUGGCCUGCUCCACCGUGGCCAUGCAGCAGAAGAUCACCCGGUUCGUGCGGUACAAGGAGAUGAACGCCUUCGACGGCAAGACCAUCGACAAGGAGACCGGCAAGGUGCUGCACCAGAAGACCCACUUCCCCCAGCCCUGGGAGUUCUUCGCCCAGGAGGUGAUGAUCCGGGUGUUCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGUUCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCUGCGGACCCUGCUGGCCGAGAAGCUGUCCUCCCGGCCCGAGGCCGUGCACGAGUACGUGACCCCCCUGUUCGUGUCCCGGGCCCCCAACCGGAAGAUGUCCGGCGCCCACAAGGACACCCUGCGGUCCGCCAAGCGGUUCGUGAAGCACAACGAGAAGAUCUCCGUGAAGCGGGUGUGGCUGACCGAGAUCAAGCUGGCCGACCUGGAGAACAUGGUGAACUACAAGAACGGCCGGGAGAUCGAGCUGUACGAGGCCCUGAAGGCCCGGCUGGAGGCCUACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCUUCGACCCCAAGGACAACCCCUUCUACAAGAAGGGCGGCCAGCUGGUGAAGGCCGUGCGGGUGGAGAAGACCCAGGAGUCCGGCGUGCUGCUGAACAAGAAGAACGCCUACACCAUCGCCGACAACGGCGACAUGGUGCGGGUGGACGUGUUCUGCAAGGUGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGUACUUCAUCGUGCCCAUCUACGCCUGGCAGGUGGCCGAGAACAUCCUGCCCGACAUCGACUGCAAGGGCUACCGGAUCGACGACUCCUACACCUUCUGCUUCUCCCUGCACAAGUACGACCUGAUCGCCUUCCAGAAGGACGAGAAGUCCAAGGUGGAGUUCGCCUACUACAUCAACUGCGACUCCUCCAACGGCCGGUUCUACCUGGCCUGGCACGACAAGGGCUCCAAGGAGCAGCAGUUCCGGAUCUCCACCCAGAACCUGGUGCUGAUCCAGAAGUACCAGGUGAACGAGCUGGGCAAGGAGAUCCGGCCCUGCCGGCUGAAGAAGCGGCCCCCCGUGCGGUAGUGACUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAUGGAAAAAAAAAAAACGGAAAAAAAAAAAGGUAAAAAAAAAAAAUAUAAAAAAAAAAACAUAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACGUAAAAAAAAAAAACUCAAAAAAAAAAAGAUAAAAAAAAAAAACCUAAAAAAAAAAAAUGUAAAAAAAAAAAAGGGAAAAAAAAAAACGCAAAAAAAAAAAACACAAAAAAAAAAAAUGCAAAAAAAAAAAAUCGAAAAAAAAAAAAUCUAAAAAAAAAAAACGAAAAAAAAAAAACCCAAAAAAAAAAAAGACAAAAAAAAAAAAUAGAAAAAAAAAAAGUUAAAAAAAAAAAACUGAAAAAAAAAAAAUUUAAAAAAAAAAAAUCUAG
180 由mRNA C編碼之Nme2Cas9之開放閱讀框 atgaccggtgccgccttcaagcccaaccccatcaactacatcctgggcctggacatcggcatcgcctccgtgggctgggccatggtggagatcgacgaggaggagaaccccatccggctgatcgacctgggcgtgcgggtgttcgagcgggccgaggtgcccaagaccggcgactccctggccatggcccggcggctggcccggtccgtgcggcggctgacccggcggcgggcccaccggctgctgcgggcccggcggctgctgaagcgggagggcgtgctgcaggccgccgacttcgacgagaacggcctgatcaagtccctgcccaacaccccctggcagctgcgggccgccgccctggaccggaagctgacccccctggagtggtccgccgtgctgctgcacctgatcaagcaccggggctacctgtcccagcggaagaacgagggcgagaccgccgacaaggagctgggcgccctgctgaagggcgtggccaacaacgcccacgccctgcagaccggcgacttccggacccccgccgagctggccctgaacaagttcgagaaggagtccggccacatccggaaccagcggggcgactactcccacaccttctcccggaaggacctgcaggccgagctgatcctgctgttcgagaagcagaaggagttcggcaacccccacgtgtccggcggcctgaaggagggcatcgagaccctgctgatgacccagcggcccgccctgtccggcgacgccgtgcagaagatgctgggccactgcaccttcgagcccgccgagcccaaggccgccaagaacacctacaccgccgagcggttcatctggctgaccaagctgaacaacctgcggatcctggagcagggctccgagcggcccctgaccgacaccgagcgggccaccctgatggacgagccctaccggaagtccaagctgacctacgcccaggcccggaagctgctgggcctggaggacaccgccttcttcaagggcctgcggtacggcaaggacaacgccgaggcctccaccctgatggagatgaaggcctaccacgccatctcccgggccctggagaaggagggcctgaaggacaagaagtcccccctgaacctgtcctccgagctgcaggacgagatcggcaccgccttctccctgttcaagaccgacgaggacatcaccggccggctgaaggaccgggtgcagcccgagatcctggaggccctgctgaagcacatctccttcgacaagttcgtgcagatctccctgaaggccctgcggcggatcgtgcccctgatggagcagggcaagcggtacgacgaggcctgcgccgagatctacggcgaccactacggcaagaagaacaccgaggagaagatctacctgccccccatccccgccgacgagatccggaaccccgtggtgctgcgggccctgtcccaggcccggaaggtgatcaacggcgtggtgcggcggtacggctcccccgcccggatccacatcgagaccgcccgggaggtgggcaagtccttcaaggaccggaaggagatcgagaagcggcaggaggagaaccggaaggaccgggagaaggccgccgccaagttccgggagtacttccccaacttcgtgggcgagcccaagtccaaggacatcctgaagctgcggctgtacgagcagcagcacggcaagtgcctgtactccggcaaggagatcaacctggtgcggctgaacgagaagggctacgtggagatcgaccacgccctgcccttctcccggacctgggacgactccttcaacaacaaggtgctggtgctgggctccgagaaccagaacaagggcaaccagaccccctacgagtacttcaacggcaaggacaactcccgggagtggcaggagttcaaggcccgggtggagacctcccggttcccccggtccaagaagcagcggatcctgctgcagaagttcgacgaggacggcttcaaggagtgcaacctgaacgacacccggtacgtgaaccgcttcctgtgccagttcgtggccgaccacatcctgctgaccggcaagggcaagcggcgggtgttcgcctccaacggccagatcaccaacctgctgcggggcttctggggcctgcggaaggtgcgggccgagaacgaccggcaccacgccctggacgccgtggtggtggcctgctccaccgtggccatgcagcagaagatcacccggttcgtgcggtacaaggagatgaacgccttcgacggcaagaccatcgacaaggagaccggcaaggtgctgcaccagaagacccacttcccccagccctgggagttcttcgcccaggaggtgatgatccgggtgttcggcaagcccgacggcaagcccgagttcgaggaggccgacacccccgagaagctgcggaccctgctggccgagaagctgtcctcccggcccgaggccgtgcacgagtacgtgacccccctgttcgtgtcccgggcccccaaccggaagatgtccggcgcccacaaggacaccctgcggtccgccaagcggttcgtgaagcacaacgagaagatctccgtgaagcgggtgtggctgaccgagatcaagctggccgacctggagaacatggtgaactacaagaacggccgggagatcgagctgtacgaggccctgaaggcccggctggaggcctacggcggcaacgccaagcaggccttcgaccccaaggacaaccccttctacaagaagggcggccagctggtgaaggccgtgcgggtggagaagacccaggagtccggcgtgctgctgaacaagaagaacgcctacaccatcgccgacaacggcgacatggtgcgggtggacgtgttctgcaaggtggacaagaagggcaagaaccagtacttcatcgtgcccatctacgcctggcaggtggccgagaacatcctgcccgacatcgactgcaagggctaccggatcgacgactcctacaccttctgcttctccctgcacaagtacgacctgatcgccttccagaaggacgagaagtccaaggtggagttcgcctactacatcaactgcgactcctccaacggccggttctacctggcctggcacgacaagggctccaaggagcagcagttccggatctccacccagaacctggtgctgatccagaagtaccaggtgaacgagctgggcaaggagatccggccctgccggctgaagaagcggccccccgtgcggtccggaaagcggaccgccgacggctccgagttcgagtcccccaagaagaagcggaaggtggagtag
181 由mRNA H編碼之Nme2Cas9之開放閱讀框 ATGGCCGCCTTCAAGCCCAACCCCATCAACTACATCCTGGGCCTGGACATCGGCATCGCCTCCGTGGGCTGGGCCATGGTGGAGATCGACGAGGAGGAGAACCCCATCCGGCTGATCGACCTGGGCGTGCGGGTGTTCGAGCGGGCCGAGGTGCCCAAGACCGGCGACTCCCTGGCCATGGCCCGGCGGCTGGCCCGGTCCGTGCGGCGGCTGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCTGCTGCGGGCCCGGCGGCTGCTGAAGCGGGAGGGCGTGCTGCAGGCCGCCGACTTCGACGAGAACGGCCTGATCAAGTCCCTGCCCAACACCCCCTGGCAGCTGCGGGCCGCCGCCCTGGACCGGAAGCTGACCCCCCTGGAGTGGTCCGCCGTGCTGCTGCACCTGATCAAGCACCGGGGCTACCTGTCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCTGGGCGCCCTGCTGAAGGGCGTGGCCAACAACGCCCACGCCCTGCAGACCGGCGACTTCCGGACCCCCGCCGAGCTGGCCCTGAACAAGTTCGAGAAGGAGTCCGGCCACATCCGGAACCAGCGGGGCGACTACTCCCACACCTTCTCCCGGAAGGACCTGCAGGCCGAGCTGATCCTGCTGTTCGAGAAGCAGAAGGAGTTCGGCAACCCCCACGTGTCCGGCGGCCTGAAGGAGGGCATCGAGACCCTGCTGATGACCCAGCGGCCCGCCCTGTCCGGCGACGCCGTGCAGAAGATGCTGGGCCACTGCACCTTCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCTACACCGCCGAGCGGTTCATCTGGCTGACCAAGCTGAACAACCTGCGGATCCTGGAGCAGGGCTCCGAGCGGCCCCTGACCGACACCGAGCGGGCCACCCTGATGGACGAGCCCTACCGGAAGTCCAAGCTGACCTACGCCCAGGCCCGGAAGCTGCTGGGCCTGGAGGACACCGCCTTCTTCAAGGGCCTGCGGTACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCTCCACCCTGATGGAGATGAAGGCCTACCACGCCATCTCCCGGGCCCTGGAGAAGGAGGGCCTGAAGGACAAGAAGTCCCCCCTGAACCTGTCCTCCGAGCTGCAGGACGAGATCGGCACCGCCTTCTCCCTGTTCAAGACCGACGAGGACATCACCGGCCGGCTGAAGGACCGGGTGCAGCCCGAGATCCTGGAGGCCCTGCTGAAGCACATCTCCTTCGACAAGTTCGTGCAGATCTCCCTGAAGGCCCTGCGGCGGATCGTGCCCCTGATGGAGCAGGGCAAGCGGTACGACGAGGCCTGCGCCGAGATCTACGGCGACCACTACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGATCTACCTGCCCCCCATCCCCGCCGACGAGATCCGGAACCCCGTGGTGCTGCGGGCCCTGTCCCAGGCCCGGAAGGTGATCAACGGCGTGGTGCGGCGGTACGGCTCCCCCGCCCGGATCCACATCGAGACCGCCCGGGAGGTGGGCAAGTCCTTCAAGGACCGGAAGGAGATCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGTTCCGGGAGTACTTCCCCAACTTCGTGGGCGAGCCCAAGTCCAAGGACATCCTGAAGCTGCGGCTGTACGAGCAGCAGCACGGCAAGTGCCTGTACTCCGGCAAGGAGATCAACCTGGTGCGGCTGAACGAGAAGGGCTACGTGGAGATCGACCACGCCCTGCCCTTCTCCCGGACCTGGGACGACTCCTTCAACAACAAGGTGCTGGTGCTGGGCTCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCTACGAGTACTTCAACGGCAAGGACAACTCCCGGGAGTGGCAGGAGTTCAAGGCCCGGGTGGAGACCTCCCGGTTCCCCCGGTCCAAGAAGCAGCGGATCCTGCTGCAGAAGTTCGACGAGGACGGCTTCAAGGAGTGCAACCTGAACGACACCCGGTACGTGAACCGGTTCCTGTGCCAGTTCGTGGCCGACCACATCCTGCTGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGTGTTCGCCTCCAACGGCCAGATCACCAACCTGCTGCGGGGCTTCTGGGGCCTGCGGAAGGTGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCTGGACGCCGTGGTGGTGGCCTGCTCCACCGTGGCCATGCAGCAGAAGATCACCCGGTTCGTGCGGTACAAGGAGATGAACGCCTTCGACGGCAAGACCATCGACAAGGAGACCGGCAAGGTGCTGCACCAGAAGACCCACTTCCCCCAGCCCTGGGAGTTCTTCGCCCAGGAGGTGATGATCCGGGTGTTCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGTTCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCTGCGGACCCTGCTGGCCGAGAAGCTGTCCTCCCGGCCCGAGGCCGTGCACGAGTACGTGACCCCCCTGTTCGTGTCCCGGGCCCCCAACCGGAAGATGTCCGGCGCCCACAAGGACACCCTGCGGTCCGCCAAGCGGTTCGTGAAGCACAACGAGAAGATCTCCGTGAAGCGGGTGTGGCTGACCGAGATCAAGCTGGCCGACCTGGAGAACATGGTGAACTACAAGAACGGCCGGGAGATCGAGCTGTACGAGGCCCTGAAGGCCCGGCTGGAGGCCTACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCTTCGACCCCAAGGACAACCCCTTCTACAAGAAGGGCGGCCAGCTGGTGAAGGCCGTGCGGGTGGAGAAGACCCAGGAGTCCGGCGTGCTGCTGAACAAGAAGAACGCCTACACCATCGCCGACAACGGCGACATGGTGCGGGTGGACGTGTTCTGCAAGGTGGACAAGTCCGGCGGCGGCTCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGTGTCCGGCGGCTCCGGCAAGAACCAGTACTTCATCGTGCCCATCTACGCCTGGCAGGTGGCCGAGAACATCCTGCCCGACATCGACTGCAAGGGCTACCGGATCGACGACTCCTACACCTTCTGCTTCTCCCTGCACAAGTACGACCTGATCGCCTTCCAGAAGGACGAGAAGTCCAAGGTGGAGTTCGCCTACTACATCAACTGCGACTCCTCCAACGGCCGGTTCTACCTGGCCTGGCACGACAAGGGCTCCAAGGAGCAGCAGTTCCGGATCTCCACCCAGAACCTGGTGCTGATCCAGAAGTACCAGGTGAACGAGCTGGGCAAGGAGATCCGGCCCTGCCGGCTGAAGAAGCGGCCCCCCGTGCGGTAG
182 由mRNA I編碼之Nme2Cas9之開放閱讀框 ATGGTGCCCAAGAAGAAGCGGAAGGTGGCCGCCTTCAAGCCCAACCCCATCAACTACATCCTGGGCCTGGACATCGGCATCGCCTCCGTGGGCTGGGCCATGGTGGAGATCGACGAGGAGGAGAACCCCATCCGGCTGATCGACCTGGGCGTGCGGGTGTTCGAGCGGGCCGAGGTGCCCAAGACCGGCGACTCCCTGGCCATGGCCCGGCGGCTGGCCCGGTCCGTGCGGCGGCTGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCTGCTGCGGGCCCGGCGGCTGCTGAAGCGGGAGGGCGTGCTGCAGGCCGCCGACTTCGACGAGAACGGCCTGATCAAGTCCCTGCCCAACACCCCCTGGCAGCTGCGGGCCGCCGCCCTGGACCGGAAGCTGACCCCCCTGGAGTGGTCCGCCGTGCTGCTGCACCTGATCAAGCACCGGGGCTACCTGTCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCTGGGCGCCCTGCTGAAGGGCGTGGCCAACAACGCCCACGCCCTGCAGACCGGCGACTTCCGGACCCCCGCCGAGCTGGCCCTGAACAAGTTCGAGAAGGAGTCCGGCCACATCCGGAACCAGCGGGGCGACTACTCCCACACCTTCTCCCGGAAGGACCTGCAGGCCGAGCTGATCCTGCTGTTCGAGAAGCAGAAGGAGTTCGGCAACCCCCACGTGTCCGGCGGCCTGAAGGAGGGCATCGAGACCCTGCTGATGACCCAGCGGCCCGCCCTGTCCGGCGACGCCGTGCAGAAGATGCTGGGCCACTGCACCTTCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCTACACCGCCGAGCGGTTCATCTGGCTGACCAAGCTGAACAACCTGCGGATCCTGGAGCAGGGCTCCGAGCGGCCCCTGACCGACACCGAGCGGGCCACCCTGATGGACGAGCCCTACCGGAAGTCCAAGCTGACCTACGCCCAGGCCCGGAAGCTGCTGGGCCTGGAGGACACCGCCTTCTTCAAGGGCCTGCGGTACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCTCCACCCTGATGGAGATGAAGGCCTACCACGCCATCTCCCGGGCCCTGGAGAAGGAGGGCCTGAAGGACAAGAAGTCCCCCCTGAACCTGTCCTCCGAGCTGCAGGACGAGATCGGCACCGCCTTCTCCCTGTTCAAGACCGACGAGGACATCACCGGCCGGCTGAAGGACCGGGTGCAGCCCGAGATCCTGGAGGCCCTGCTGAAGCACATCTCCTTCGACAAGTTCGTGCAGATCTCCCTGAAGGCCCTGCGGCGGATCGTGCCCCTGATGGAGCAGGGCAAGCGGTACGACGAGGCCTGCGCCGAGATCTACGGCGACCACTACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGATCTACCTGCCCCCCATCCCCGCCGACGAGATCCGGAACCCCGTGGTGCTGCGGGCCCTGTCCCAGGCCCGGAAGGTGATCAACGGCGTGGTGCGGCGGTACGGCTCCCCCGCCCGGATCCACATCGAGACCGCCCGGGAGGTGGGCAAGTCCTTCAAGGACCGGAAGGAGATCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGTTCCGGGAGTACTTCCCCAACTTCGTGGGCGAGCCCAAGTCCAAGGACATCCTGAAGCTGCGGCTGTACGAGCAGCAGCACGGCAAGTGCCTGTACTCCGGCAAGGAGATCAACCTGGTGCGGCTGAACGAGAAGGGCTACGTGGAGATCGACCACGCCCTGCCCTTCTCCCGGACCTGGGACGACTCCTTCAACAACAAGGTGCTGGTGCTGGGCTCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCTACGAGTACTTCAACGGCAAGGACAACTCCCGGGAGTGGCAGGAGTTCAAGGCCCGGGTGGAGACCTCCCGGTTCCCCCGGTCCAAGAAGCAGCGGATCCTGCTGCAGAAGTTCGACGAGGACGGCTTCAAGGAGTGCAACCTGAACGACACCCGGTACGTGAACCGGTTCCTGTGCCAGTTCGTGGCCGACCACATCCTGCTGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGTGTTCGCCTCCAACGGCCAGATCACCAACCTGCTGCGGGGCTTCTGGGGCCTGCGGAAGGTGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCTGGACGCCGTGGTGGTGGCCTGCTCCACCGTGGCCATGCAGCAGAAGATCACCCGGTTCGTGCGGTACAAGGAGATGAACGCCTTCGACGGCAAGACCATCGACAAGGAGACCGGCAAGGTGCTGCACCAGAAGACCCACTTCCCCCAGCCCTGGGAGTTCTTCGCCCAGGAGGTGATGATCCGGGTGTTCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGTTCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCTGCGGACCCTGCTGGCCGAGAAGCTGTCCTCCCGGCCCGAGGCCGTGCACGAGTACGTGACCCCCCTGTTCGTGTCCCGGGCCCCCAACCGGAAGATGTCCGGCGCCCACAAGGACACCCTGCGGTCCGCCAAGCGGTTCGTGAAGCACAACGAGAAGATCTCCGTGAAGCGGGTGTGGCTGACCGAGATCAAGCTGGCCGACCTGGAGAACATGGTGAACTACAAGAACGGCCGGGAGATCGAGCTGTACGAGGCCCTGAAGGCCCGGCTGGAGGCCTACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCTTCGACCCCAAGGACAACCCCTTCTACAAGAAGGGCGGCCAGCTGGTGAAGGCCGTGCGGGTGGAGAAGACCCAGGAGTCCGGCGTGCTGCTGAACAAGAAGAACGCCTACACCATCGCCGACAACGGCGACATGGTGCGGGTGGACGTGTTCTGCAAGGTGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGTACTTCATCGTGCCCATCTACGCCTGGCAGGTGGCCGAGAACATCCTGCCCGACATCGACTGCAAGGGCTACCGGATCGACGACTCCTACACCTTCTGCTTCTCCCTGCACAAGTACGACCTGATCGCCTTCCAGAAGGACGAGAAGTCCAAGGTGGAGTTCGCCTACTACATCAACTGCGACTCCTCCAACGGCCGGTTCTACCTGGCCTGGCACGACAAGGGCTCCAAGGAGCAGCAGTTCCGGATCTCCACCCAGAACCTGGTGCTGATCCAGAAGTACCAGGTGAACGAGCTGGGCAAGGAGATCCGGCCCTGCCGGCTGAAGAAGCGGCCCCCCGTGCGGTACCCCTACGACGTGCCCGACTACGCCGCCGCCCCCGCCGCCAAGAAGAAGAAGCTGGACTAG
183 由mRNA J編碼之Nme2Cas9之開放閱讀框 ATGGCCGCCTTCAAGCCCAACCCCATCAACTACATCCTGGGCCTGGACATCGGCATCGCCTCCGTGGGCTGGGCCATGGTGGAGATCGACGAGGAGGAGAACCCCATCCGGCTGATCGACCTGGGCGTGCGGGTGTTCGAGCGGGCCGAGGTGCCCAAGACCGGCGACTCCCTGGCCATGGCCCGGCGGCTGGCCCGGTCCGTGCGGCGGCTGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCTGCTGCGGGCCCGGCGGCTGCTGAAGCGGGAGGGCGTGCTGCAGGCCGCCGACTTCGACGAGAACGGCCTGATCAAGTCCCTGCCCAACACCCCCTGGCAGCTGCGGGCCGCCGCCCTGGACCGGAAGCTGACCCCCCTGGAGTGGTCCGCCGTGCTGCTGCACCTGATCAAGCACCGGGGCTACCTGTCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCTGGGCGCCCTGCTGAAGGGCGTGGCCAACAACGCCCACGCCCTGCAGACCGGCGACTTCCGGACCCCCGCCGAGCTGGCCCTGAACAAGTTCGAGAAGGAGTCCGGCCACATCCGGAACCAGCGGGGCGACTACTCCCACACCTTCTCCCGGAAGGACCTGCAGGCCGAGCTGATCCTGCTGTTCGAGAAGCAGAAGGAGTTCGGCAACCCCCACGTGTCCGGCGGCCTGAAGGAGGGCATCGAGACCCTGCTGATGACCCAGCGGCCCGCCCTGTCCGGCGACGCCGTGCAGAAGATGCTGGGCCACTGCACCTTCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCTACACCGCCGAGCGGTTCATCTGGCTGACCAAGCTGAACAACCTGCGGATCCTGGAGCAGGGCTCCGAGCGGCCCCTGACCGACACCGAGCGGGCCACCCTGATGGACGAGCCCTACCGGAAGTCCAAGCTGACCTACGCCCAGGCCCGGAAGCTGCTGGGCCTGGAGGACACCGCCTTCTTCAAGGGCCTGCGGTACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCTCCACCCTGATGGAGATGAAGGCCTACCACGCCATCTCCCGGGCCCTGGAGAAGGAGGGCCTGAAGGACAAGAAGTCCCCCCTGAACCTGTCCTCCGAGCTGCAGGACGAGATCGGCACCGCCTTCTCCCTGTTCAAGACCGACGAGGACATCACCGGCCGGCTGAAGGACCGGGTGCAGCCCGAGATCCTGGAGGCCCTGCTGAAGCACATCTCCTTCGACAAGTTCGTGCAGATCTCCCTGAAGGCCCTGCGGCGGATCGTGCCCCTGATGGAGCAGGGCAAGCGGTACGACGAGGCCTGCGCCGAGATCTACGGCGACCACTACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGATCTACCTGCCCCCCATCCCCGCCGACGAGATCCGGAACCCCGTGGTGCTGCGGGCCCTGTCCCAGGCCCGGAAGGTGATCAACGGCGTGGTGCGGCGGTACGGCTCCCCCGCCCGGATCCACATCGAGACCGCCCGGGAGGTGGGCAAGTCCTTCAAGGACCGGAAGGAGATCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGTTCCGGGAGTACTTCCCCAACTTCGTGGGCGAGCCCAAGTCCAAGGACATCCTGAAGCTGCGGCTGTACGAGCAGCAGCACGGCAAGTGCCTGTACTCCGGCAAGGAGATCAACCTGGTGCGGCTGAACGAGAAGGGCTACGTGGAGATCGACCACGCCCTGCCCTTCTCCCGGACCTGGGACGACTCCTTCAACAACAAGGTGCTGGTGCTGGGCTCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCTACGAGTACTTCAACGGCAAGGACAACTCCCGGGAGTGGCAGGAGTTCAAGGCCCGGGTGGAGACCTCCCGGTTCCCCCGGTCCAAGAAGCAGCGGATCCTGCTGCAGAAGTTCGACGAGGACGGCTTCAAGGAGTGCAACCTGAACGACACCCGGTACGTGAACCGGTTCCTGTGCCAGTTCGTGGCCGACCACATCCTGCTGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGTGTTCGCCTCCAACGGCCAGATCACCAACCTGCTGCGGGGCTTCTGGGGCCTGCGGAAGGTGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCTGGACGCCGTGGTGGTGGCCTGCTCCACCGTGGCCATGCAGCAGAAGATCACCCGGTTCGTGCGGTACAAGGAGATGAACGCCTTCGACGGCAAGACCATCGACAAGGAGACCGGCAAGGTGCTGCACCAGAAGACCCACTTCCCCCAGCCCTGGGAGTTCTTCGCCCAGGAGGTGATGATCCGGGTGTTCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGTTCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCTGCGGACCCTGCTGGCCGAGAAGCTGTCCTCCCGGCCCGAGGCCGTGCACGAGTACGTGACCCCCCTGTTCGTGTCCCGGGCCCCCAACCGGAAGATGTCCGGCGCCCACAAGGACACCCTGCGGTCCGCCAAGCGGTTCGTGAAGCACAACGAGAAGATCTCCGTGAAGCGGGTGTGGCTGACCGAGATCAAGCTGGCCGACCTGGAGAACATGGTGAACTACAAGAACGGCCGGGAGATCGAGCTGTACGAGGCCCTGAAGGCCCGGCTGGAGGCCTACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCTTCGACCCCAAGGACAACCCCTTCTACAAGAAGGGCGGCCAGCTGGTGAAGGCCGTGCGGGTGGAGAAGACCCAGGAGTCCGGCGTGCTGCTGAACAAGAAGAACGCCTACACCATCGCCGACAACGGCGACATGGTGCGGGTGGACGTGTTCTGCAAGGTGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGTACTTCATCGTGCCCATCTACGCCTGGCAGGTGGCCGAGAACATCCTGCCCGACATCGACTGCAAGGGCTACCGGATCGACGACTCCTACACCTTCTGCTTCTCCCTGCACAAGTACGACCTGATCGCCTTCCAGAAGGACGAGAAGTCCAAGGTGGAGTTCGCCTACTACATCAACTGCGACTCCTCCAACGGCCGGTTCTACCTGGCCTGGCACGACAAGGGCTCCAAGGAGCAGCAGTTCCGGATCTCCACCCAGAACCTGGTGCTGATCCAGAAGTACCAGGTGAACGAGCTGGGCAAGGAGATCCGGCCCTGCCGGCTGAAGAAGCGGCCCCCCGTGCGG
184 由mRNA K編碼之Nme2Cas9之開放閱讀框 atggccgccttcaagcccaaccccatcaactacatcctgggcctggacatcggcatcgcctccgtgggctgggccatggtggagatcgacgaggaggagaaccccatccggctgatcgacctgggcgtgcgggtgttcgagcgggccgaggtgcccaagaccggcgactccctggccatggcccggcggctggcccggtccgtgcggcggctgacccggcggcgggcccaccggctgctgcgggcccggcggctgctgaagcgggagggcgtgctgcaggccgccgacttcgacgagaacggcctgatcaagtccctgcccaacaccccctggcagctgcgggccgccgccctggaccggaagctgacccccctggagtggtccgccgtgctgctgcacctgatcaagcaccggggctacctgtcccagcggaagaacgagggcgagaccgccgacaaggagctgggcgccctgctgaagggcgtggccaacaacgcccacgccctgcagaccggcgacttccggacccccgccgagctggccctgaacaagttcgagaaggagtccggccacatccggaaccagcggggcgactactcccacaccttctcccggaaggacctgcaggccgagctgatcctgctgttcgagaagcagaaggagttcggcaacccccacgtgtccggcggcctgaaggagggcatcgagaccctgctgatgacccagcggcccgccctgtccggcgacgccgtgcagaagatgctgggccactgcaccttcgagcccgccgagcccaaggccgccaagaacacctacaccgccgagcggttcatctggctgaccaagctgaacaacctgcggatcctggagcagggctccgagcggcccctgaccgacaccgagcgggccaccctgatggacgagccctaccggaagtccaagctgacctacgcccaggcccggaagctgctgggcctggaggacaccgccttcttcaagggcctgcggtacggcaaggacaacgccgaggcctccaccctgatggagatgaaggcctaccacgccatctcccgggccctggagaaggagggcctgaaggacaagaagtcccccctgaacctgtcctccgagctgcaggacgagatcggcaccgccttctccctgttcaagaccgacgaggacatcaccggccggctgaaggaccgggtgcagcccgagatcctggaggccctgctgaagcacatctccttcgacaagttcgtgcagatctccctgaaggccctgcggcggatcgtgcccctgatggagcagggcaagcggtacgacgaggcctgcgccgagatctacggcgaccactacggcaagaagaacaccgaggagaagatctacctgccccccatccccgccgacgagatccggaaccccgtggtgctgcgggccctgtcccaggcccggaaggtgatcaacggcgtggtgcggcggtacggctcccccgcccggatccacatcgagaccgcccgggaggtgggcaagtccttcaaggaccggaaggagatcgagaagcggcaggaggagaaccggaaggaccgggagaaggccgccgccaagttccgggagtacttccccaacttcgtgggcgagcccaagtccaaggacatcctgaagctgcggctgtacgagcagcagcacggcaagtgcctgtactccggcaaggagatcaacctggtgcggctgaacgagaagggctacgtggagatcgaccacgccctgcccttctcccggacctgggacgactccttcaacaacaaggtgctggtgctgggctccgagaaccagaacaagggcaaccagaccccctacgagtacttcaacggcaaggacaactcccgggagtggcaggagttcaaggcccgggtggagacctcccggttcccccggtccaagaagcagcggatcctgctgcagaagttcgacgaggacggcttcaaggagtgcaacctgaacgacacccggtacgtgaaccggttcctgtgccagttcgtggccgaccacatcctgctgaccggcaagggcaagcggcgggtgttcgcctccaacggccagatcaccaacctgctgcggggcttctggggcctgcggaaggtgcgggccgagaacgaccggcaccacgccctggacgccgtggtggtggcctgctccaccgtggccatgcagcagaagatcacccggttcgtgcggtacaaggagatgaacgccttcgacggcaagaccatcgacaaggagaccggcaaggtgctgcaccagaagacccacttcccccagccctgggagttcttcgcccaggaggtgatgatccgggtgttcggcaagcccgacggcaagcccgagttcgaggaggccgacacccccgagaagctgcggaccctgctggccgagaagctgtcctcccggcccgaggccgtgcacgagtacgtgacccccctgttcgtgtcccgggcccccaaccggaagatgtccggcgcccacaaggacaccctgcggtccgccaagcggttcgtgaagcacaacgagaagatctccgtgaagcgggtgtggctgaccgagatcaagctggccgacctggagaacatggtgaactacaagaacggccgggagatcgagctgtacgaggccctgaaggcccggctggaggcctacggcggcaacgccaagcaggccttcgaccccaaggacaaccccttctacaagaagggcggccagctggtgaaggccgtgcgggtggagaagacccaggagtccggcgtgctgctgaacaagaagaacgcctacaccatcgccgacaacggcgacatggtgcgggtggacgtgttctgcaaggtggacaagaagggcaagaaccagtacttcatcgtgcccatctacgcctggcaggtggccgagaacatcctgcccgacatcgactgcaagggctaccggatcgacgactcctacaccttctgcttctccctgcacaagtacgacctgatcgccttccagaaggacgagaagtccaaggtggagttcgcctactacatcaactgcgactcctccaacggccggttctacctggcctggcacgacaagggctccaaggagcagcagttccggatctccacccagaacctggtgctgatccagaagtaccaggtgaacgagctgggcaaggagatccggccctgccggctgaagaagcggccccccgtgcgg
185 由mRNA L編碼之Nme2Cas9之開放閱讀框 atgGACGGCTCCGGCGGCGGCTCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGTGGGCGGCTCCGGCGGCGGCgccgccttcaagcccaaccccatcaactacatcctgggcctggacatcggcatcgcctccgtgggctgggccatggtggagatcgacgaggaggagaaccccatccggctgatcgacctgggcgtgcgggtgttcgagcgggccgaggtgcccaagaccggcgactccctggccatggcccggcggctggcccggtccgtgcggcggctgacccggcggcgggcccaccggctgctgcgggcccggcggctgctgaagcgggagggcgtgctgcaggccgccgacttcgacgagaacggcctgatcaagtccctgcccaacaccccctggcagctgcgggccgccgccctggaccggaagctgacccccctggagtggtccgccgtgctgctgcacctgatcaagcaccggggctacctgtcccagcggaagaacgagggcgagaccgccgacaaggagctgggcgccctgctgaagggcgtggccaacaacgcccacgccctgcagaccggcgacttccggacccccgccgagctggccctgaacaagttcgagaaggagtccggccacatccggaaccagcggggcgactactcccacaccttctcccggaaggacctgcaggccgagctgatcctgctgttcgagaagcagaaggagttcggcaacccccacgtgtccggcggcctgaaggagggcatcgagaccctgctgatgacccagcggcccgccctgtccggcgacgccgtgcagaagatgctgggccactgcaccttcgagcccgccgagcccaaggccgccaagaacacctacaccgccgagcggttcatctggctgaccaagctgaacaacctgcggatcctggagcagggctccgagcggcccctgaccgacaccgagcgggccaccctgatggacgagccctaccggaagtccaagctgacctacgcccaggcccggaagctgctgggcctggaggacaccgccttcttcaagggcctgcggtacggcaaggacaacgccgaggcctccaccctgatggagatgaaggcctaccacgccatctcccgggccctggagaaggagggcctgaaggacaagaagtcccccctgaacctgtcctccgagctgcaggacgagatcggcaccgccttctccctgttcaagaccgacgaggacatcaccggccggctgaaggaccgggtgcagcccgagatcctggaggccctgctgaagcacatctccttcgacaagttcgtgcagatctccctgaaggccctgcggcggatcgtgcccctgatggagcagggcaagcggtacgacgaggcctgcgccgagatctacggcgaccactacggcaagaagaacaccgaggagaagatctacctgccccccatccccgccgacgagatccggaaccccgtggtgctgcgggccctgtcccaggcccggaaggtgatcaacggcgtggtgcggcggtacggctcccccgcccggatccacatcgagaccgcccgggaggtgggcaagtccttcaaggaccggaaggagatcgagaagcggcaggaggagaaccggaaggaccgggagaaggccgccgccaagttccgggagtacttccccaacttcgtgggcgagcccaagtccaaggacatcctgaagctgcggctgtacgagcagcagcacggcaagtgcctgtactccggcaaggagatcaacctggtgcggctgaacgagaagggctacgtggagatcgaccacgccctgcccttctcccggacctgggacgactccttcaacaacaaggtgctggtgctgggctccgagaaccagaacaagggcaaccagaccccctacgagtacttcaacggcaaggacaactcccgggagtggcaggagttcaaggcccgggtggagacctcccggttcccccggtccaagaagcagcggatcctgctgcagaagttcgacgaggacggcttcaaggagtgcaacctgaacgacacccggtacgtgaaccggttcctgtgccagttcgtggccgaccacatcctgctgaccggcaagggcaagcggcgggtgttcgcctccaacggccagatcaccaacctgctgcggggcttctggggcctgcggaaggtgcgggccgagaacgaccggcaccacgccctggacgccgtggtggtggcctgctccaccgtggccatgcagcagaagatcacccggttcgtgcggtacaaggagatgaacgccttcgacggcaagaccatcgacaaggagaccggcaaggtgctgcaccagaagacccacttcccccagccctgggagttcttcgcccaggaggtgatgatccgggtgttcggcaagcccgacggcaagcccgagttcgaggaggccgacacccccgagaagctgcggaccctgctggccgagaagctgtcctcccggcccgaggccgtgcacgagtacgtgacccccctgttcgtgtcccgggcccccaaccggaagatgtccggcgcccacaaggacaccctgcggtccgccaagcggttcgtgaagcacaacgagaagatctccgtgaagcgggtgtggctgaccgagatcaagctggccgacctggagaacatggtgaactacaagaacggccgggagatcgagctgtacgaggccctgaaggcccggctggaggcctacggcggcaacgccaagcaggccttcgaccccaaggacaaccccttctacaagaagggcggccagctggtgaaggccgtgcgggtggagaagacccaggagtccggcgtgctgctgaacaagaagaacgcctacaccatcgccgacaacggcgacatggtgcgggtggacgtgttctgcaaggtggacaagaagggcaagaaccagtacttcatcgtgcccatctacgcctggcaggtggccgagaacatcctgcccgacatcgactgcaagggctaccggatcgacgactcctacaccttctgcttctccctgcacaagtacgacctgatcgccttccagaaggacgagaagtccaaggtggagttcgcctactacatcaactgcgactcctccaacggccggttctacctggcctggcacgacaagggctccaaggagcagcagttccggatctccacccagaacctggtgctgatccagaagtaccaggtgaacgagctgggcaaggagatccggccctgccggctgaagaagcggccccccgtgcggtag
186 由mRNA M編碼之帶有HiBiT標籤之Nme2Cas9之開放閱讀框 ATGGACGGCTCCGGCGGCGGCTCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGTGGGCGGCTCCGGCGGCGGCGCCGCCTTCAAGCCCAACCCCATCAACTACATCCTGGGCCTGGACATCGGCATCGCCTCCGTGGGCTGGGCCATGGTGGAGATCGACGAGGAGGAGAACCCCATCCGGCTGATCGACCTGGGCGTGCGGGTGTTCGAGCGGGCCGAGGTGCCCAAGACCGGCGACTCCCTGGCCATGGCCCGGCGGCTGGCCCGGTCCGTGCGGCGGCTGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCTGCTGCGGGCCCGGCGGCTGCTGAAGCGGGAGGGCGTGCTGCAGGCCGCCGACTTCGACGAGAACGGCCTGATCAAGTCCCTGCCCAACACCCCCTGGCAGCTGCGGGCCGCCGCCCTGGACCGGAAGCTGACCCCCCTGGAGTGGTCCGCCGTGCTGCTGCACCTGATCAAGCACCGGGGCTACCTGTCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCTGGGCGCCCTGCTGAAGGGCGTGGCCAACAACGCCCACGCCCTGCAGACCGGCGACTTCCGGACCCCCGCCGAGCTGGCCCTGAACAAGTTCGAGAAGGAGTCCGGCCACATCCGGAACCAGCGGGGCGACTACTCCCACACCTTCTCCCGGAAGGACCTGCAGGCCGAGCTGATCCTGCTGTTCGAGAAGCAGAAGGAGTTCGGCAACCCCCACGTGTCCGGCGGCCTGAAGGAGGGCATCGAGACCCTGCTGATGACCCAGCGGCCCGCCCTGTCCGGCGACGCCGTGCAGAAGATGCTGGGCCACTGCACCTTCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCTACACCGCCGAGCGGTTCATCTGGCTGACCAAGCTGAACAACCTGCGGATCCTGGAGCAGGGCTCCGAGCGGCCCCTGACCGACACCGAGCGGGCCACCCTGATGGACGAGCCCTACCGGAAGTCCAAGCTGACCTACGCCCAGGCCCGGAAGCTGCTGGGCCTGGAGGACACCGCCTTCTTCAAGGGCCTGCGGTACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCTCCACCCTGATGGAGATGAAGGCCTACCACGCCATCTCCCGGGCCCTGGAGAAGGAGGGCCTGAAGGACAAGAAGTCCCCCCTGAACCTGTCCTCCGAGCTGCAGGACGAGATCGGCACCGCCTTCTCCCTGTTCAAGACCGACGAGGACATCACCGGCCGGCTGAAGGACCGGGTGCAGCCCGAGATCCTGGAGGCCCTGCTGAAGCACATCTCCTTCGACAAGTTCGTGCAGATCTCCCTGAAGGCCCTGCGGCGGATCGTGCCCCTGATGGAGCAGGGCAAGCGGTACGACGAGGCCTGCGCCGAGATCTACGGCGACCACTACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGATCTACCTGCCCCCCATCCCCGCCGACGAGATCCGGAACCCCGTGGTGCTGCGGGCCCTGTCCCAGGCCCGGAAGGTGATCAACGGCGTGGTGCGGCGGTACGGCTCCCCCGCCCGGATCCACATCGAGACCGCCCGGGAGGTGGGCAAGTCCTTCAAGGACCGGAAGGAGATCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGTTCCGGGAGTACTTCCCCAACTTCGTGGGCGAGCCCAAGTCCAAGGACATCCTGAAGCTGCGGCTGTACGAGCAGCAGCACGGCAAGTGCCTGTACTCCGGCAAGGAGATCAACCTGGTGCGGCTGAACGAGAAGGGCTACGTGGAGATCGACCACGCCCTGCCCTTCTCCCGGACCTGGGACGACTCCTTCAACAACAAGGTGCTGGTGCTGGGCTCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCTACGAGTACTTCAACGGCAAGGACAACTCCCGGGAGTGGCAGGAGTTCAAGGCCCGGGTGGAGACCTCCCGGTTCCCCCGGTCCAAGAAGCAGCGGATCCTGCTGCAGAAGTTCGACGAGGACGGCTTCAAGGAGTGCAACCTGAACGACACCCGGTACGTGAACCGGTTCCTGTGCCAGTTCGTGGCCGACCACATCCTGCTGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGTGTTCGCCTCCAACGGCCAGATCACCAACCTGCTGCGGGGCTTCTGGGGCCTGCGGAAGGTGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCTGGACGCCGTGGTGGTGGCCTGCTCCACCGTGGCCATGCAGCAGAAGATCACCCGGTTCGTGCGGTACAAGGAGATGAACGCCTTCGACGGCAAGACCATCGACAAGGAGACCGGCAAGGTGCTGCACCAGAAGACCCACTTCCCCCAGCCCTGGGAGTTCTTCGCCCAGGAGGTGATGATCCGGGTGTTCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGTTCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCTGCGGACCCTGCTGGCCGAGAAGCTGTCCTCCCGGCCCGAGGCCGTGCACGAGTACGTGACCCCCCTGTTCGTGTCCCGGGCCCCCAACCGGAAGATGTCCGGCGCCCACAAGGACACCCTGCGGTCCGCCAAGCGGTTCGTGAAGCACAACGAGAAGATCTCCGTGAAGCGGGTGTGGCTGACCGAGATCAAGCTGGCCGACCTGGAGAACATGGTGAACTACAAGAACGGCCGGGAGATCGAGCTGTACGAGGCCCTGAAGGCCCGGCTGGAGGCCTACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCTTCGACCCCAAGGACAACCCCTTCTACAAGAAGGGCGGCCAGCTGGTGAAGGCCGTGCGGGTGGAGAAGACCCAGGAGTCCGGCGTGCTGCTGAACAAGAAGAACGCCTACACCATCGCCGACAACGGCGACATGGTGCGGGTGGACGTGTTCTGCAAGGTGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGTACTTCATCGTGCCCATCTACGCCTGGCAGGTGGCCGAGAACATCCTGCCCGACATCGACTGCAAGGGCTACCGGATCGACGACTCCTACACCTTCTGCTTCTCCCTGCACAAGTACGACCTGATCGCCTTCCAGAAGGACGAGAAGTCCAAGGTGGAGTTCGCCTACTACATCAACTGCGACTCCTCCAACGGCCGGTTCTACCTGGCCTGGCACGACAAGGGCTCCAAGGAGCAGCAGTTCCGGATCTCCACCCAGAACCTGGTGCTGATCCAGAAGTACCAGGTGAACGAGCTGGGCAAGGAGATCCGGCCCTGCCGGCTGAAGAAGCGGCCCCCCGTGCGGTCCGAGTCCGCCACCCCCGAGTCCGTGTCCGGCTGGCGGCTGTTCAAGAAGATCTCCTAG
187 由mRNA N編碼之Nme2Cas9之開放閱讀框 atgGACGGCTCCGGCGGCGGCTCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGTGGGCGGCTCCGGCGGCGGCgccgccttcaagcccaaccccatcaactacatcctgggcctggacatcggcatcgcctccgtgggctgggccatggtggagatcgacgaggaggagaaccccatccggctgatcgacctgggcgtgcgggtgttcgagcgggccgaggtgcccaagaccggcgactccctggccatggcccggcggctggcccggtccgtgcggcggctgacccggcggcgggcccaccggctgctgcgggcccggcggctgctgaagcgggagggcgtgctgcaggccgccgacttcgacgagaacggcctgatcaagtccctgcccaacaccccctggcagctgcgggccgccgccctggaccggaagctgacccccctggagtggtccgccgtgctgctgcacctgatcaagcaccggggctacctgtcccagcggaagaacgagggcgagaccgccgacaaggagctgggcgccctgctgaagggcgtggccaacaacgcccacgccctgcagaccggcgacttccggacccccgccgagctggccctgaacaagttcgagaaggagtccggccacatccggaaccagcggggcgactactcccacaccttctcccggaaggacctgcaggccgagctgatcctgctgttcgagaagcagaaggagttcggcaacccccacgtgtccggcggcctgaaggagggcatcgagaccctgctgatgacccagcggcccgccctgtccggcgacgccgtgcagaagatgctgggccactgcaccttcgagcccgccgagcccaaggccgccaagaacacctacaccgccgagcggttcatctggctgaccaagctgaacaacctgcggatcctggagcagggctccgagcggcccctgaccgacaccgagcgggccaccctgatggacgagccctaccggaagtccaagctgacctacgcccaggcccggaagctgctgggcctggaggacaccgccttcttcaagggcctgcggtacggcaaggacaacgccgaggcctccaccctgatggagatgaaggcctaccacgccatctcccgggccctggagaaggagggcctgaaggacaagaagtcccccctgaacctgtcctccgagctgcaggacgagatcggcaccgccttctccctgttcaagaccgacgaggacatcaccggccggctgaaggaccgggtgcagcccgagatcctggaggccctgctgaagcacatctccttcgacaagttcgtgcagatctccctgaaggccctgcggcggatcgtgcccctgatggagcagggcaagcggtacgacgaggcctgcgccgagatctacggcgaccactacggcaagaagaacaccgaggagaagatctacctgccccccatccccgccgacgagatccggaaccccgtggtgctgcgggccctgtcccaggcccggaaggtgatcaacggcgtggtgcggcggtacggctcccccgcccggatccacatcgagaccgcccgggaggtgggcaagtccttcaaggaccggaaggagatcgagaagcggcaggaggagaaccggaaggaccgggagaaggccgccgccaagttccgggagtacttccccaacttcgtgggcgagcccaagtccaaggacatcctgaagctgcggctgtacgagcagcagcacggcaagtgcctgtactccggcaaggagatcaacctggtgcggctgaacgagaagggctacgtggagatcgaccacgccctgcccttctcccggacctgggacgactccttcaacaacaaggtgctggtgctgggctccgagaaccagaacaagggcaaccagaccccctacgagtacttcaacggcaaggacaactcccgggagtggcaggagttcaaggcccgggtggagacctcccggttcccccggtccaagaagcagcggatcctgctgcagaagttcgacgaggacggcttcaaggagtgcaacctgaacgacacccggtacgtgaaccggttcctgtgccagttcgtggccgaccacatcctgctgaccggcaagggcaagcggcgggtgttcgcctccaacggccagatcaccaacctgctgcggggcttctggggcctgcggaaggtgcgggccgagaacgaccggcaccacgccctggacgccgtggtggtggcctgctccaccgtggccatgcagcagaagatcacccggttcgtgcggtacaaggagatgaacgccttcgacggcaagaccatcgacaaggagaccggcaaggtgctgcaccagaagacccacttcccccagccctgggagttcttcgcccaggaggtgatgatccgggtgttcggcaagcccgacggcaagcccgagttcgaggaggccgacacccccgagaagctgcggaccctgctggccgagaagctgtcctcccggcccgaggccgtgcacgagtacgtgacccccctgttcgtgtcccgggcccccaaccggaagatgtccggcgcccacaaggacaccctgcggtccgccaagcggttcgtgaagcacaacgagaagatctccgtgaagcgggtgtggctgaccgagatcaagctggccgacctggagaacatggtgaactacaagaacggccgggagatcgagctgtacgaggccctgaaggcccggctggaggcctacggcggcaacgccaagcaggccttcgaccccaaggacaaccccttctacaagaagggcggccagctggtgaaggccgtgcgggtggagaagacccaggagtccggcgtgctgctgaacaagaagaacgcctacaccatcgccgacaacggcgacatggtgcgggtggacgtgttctgcaaggtggacaagaagggcaagaaccagtacttcatcgtgcccatctacgcctggcaggtggccgagaacatcctgcccgacatcgactgcaagggctaccggatcgacgactcctacaccttctgcttctccctgcacaagtacgacctgatcgccttccagaaggacgagaagtccaaggtggagttcgcctactacatcaactgcgactcctccaacggccggttctacctggcctggcacgacaagggctccaaggagcagcagttccggatctccacccagaacctggtgctgatccagaagtaccaggtgaacgagctgggcaaggagatccggccctgccggctgaagaagcggccccccgtgcggTCCGGAAAGCGGACCGCCGACGGCTCCGGAGGAGGAAGCCCCGCCGCCAAGAAGAAGAAGCTGGACtag
188 由mRNA O編碼之Nme2Cas9之開放閱讀框 atgGACGGCTCCGGCGGCGGCTCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGTGGAGGACAAGCGGCCCGCCGCCACCAAGAAGGCCGGCCAGGCCAAGAAGAAGAAGGGCGGCTCCGGCGGCGGCgccgccttcaagcccaaccccatcaactacatcctgggcctggacatcggcatcgcctccgtgggctgggccatggtggagatcgacgaggaggagaaccccatccggctgatcgacctgggcgtgcgggtgttcgagcgggccgaggtgcccaagaccggcgactccctggccatggcccggcggctggcccggtccgtgcggcggctgacccggcggcgggcccaccggctgctgcgggcccggcggctgctgaagcgggagggcgtgctgcaggccgccgacttcgacgagaacggcctgatcaagtccctgcccaacaccccctggcagctgcgggccgccgccctggaccggaagctgacccccctggagtggtccgccgtgctgctgcacctgatcaagcaccggggctacctgtcccagcggaagaacgagggcgagaccgccgacaaggagctgggcgccctgctgaagggcgtggccaacaacgcccacgccctgcagaccggcgacttccggacccccgccgagctggccctgaacaagttcgagaaggagtccggccacatccggaaccagcggggcgactactcccacaccttctcccggaaggacctgcaggccgagctgatcctgctgttcgagaagcagaaggagttcggcaacccccacgtgtccggcggcctgaaggagggcatcgagaccctgctgatgacccagcggcccgccctgtccggcgacgccgtgcagaagatgctgggccactgcaccttcgagcccgccgagcccaaggccgccaagaacacctacaccgccgagcggttcatctggctgaccaagctgaacaacctgcggatcctggagcagggctccgagcggcccctgaccgacaccgagcgggccaccctgatggacgagccctaccggaagtccaagctgacctacgcccaggcccggaagctgctgggcctggaggacaccgccttcttcaagggcctgcggtacggcaaggacaacgccgaggcctccaccctgatggagatgaaggcctaccacgccatctcccgggccctggagaaggagggcctgaaggacaagaagtcccccctgaacctgtcctccgagctgcaggacgagatcggcaccgccttctccctgttcaagaccgacgaggacatcaccggccggctgaaggaccgggtgcagcccgagatcctggaggccctgctgaagcacatctccttcgacaagttcgtgcagatctccctgaaggccctgcggcggatcgtgcccctgatggagcagggcaagcggtacgacgaggcctgcgccgagatctacggcgaccactacggcaagaagaacaccgaggagaagatctacctgccccccatccccgccgacgagatccggaaccccgtggtgctgcgggccctgtcccaggcccggaaggtgatcaacggcgtggtgcggcggtacggctcccccgcccggatccacatcgagaccgcccgggaggtgggcaagtccttcaaggaccggaaggagatcgagaagcggcaggaggagaaccggaaggaccgggagaaggccgccgccaagttccgggagtacttccccaacttcgtgggcgagcccaagtccaaggacatcctgaagctgcggctgtacgagcagcagcacggcaagtgcctgtactccggcaaggagatcaacctggtgcggctgaacgagaagggctacgtggagatcgaccacgccctgcccttctcccggacctgggacgactccttcaacaacaaggtgctggtgctgggctccgagaaccagaacaagggcaaccagaccccctacgagtacttcaacggcaaggacaactcccgggagtggcaggagttcaaggcccgggtggagacctcccggttcccccggtccaagaagcagcggatcctgctgcagaagttcgacgaggacggcttcaaggagtgcaacctgaacgacacccggtacgtgaaccggttcctgtgccagttcgtggccgaccacatcctgctgaccggcaagggcaagcggcgggtgttcgcctccaacggccagatcaccaacctgctgcggggcttctggggcctgcggaaggtgcgggccgagaacgaccggcaccacgccctggacgccgtggtggtggcctgctccaccgtggccatgcagcagaagatcacccggttcgtgcggtacaaggagatgaacgccttcgacggcaagaccatcgacaaggagaccggcaaggtgctgcaccagaagacccacttcccccagccctgggagttcttcgcccaggaggtgatgatccgggtgttcggcaagcccgacggcaagcccgagttcgaggaggccgacacccccgagaagctgcggaccctgctggccgagaagctgtcctcccggcccgaggccgtgcacgagtacgtgacccccctgttcgtgtcccgggcccccaaccggaagatgtccggcgcccacaaggacaccctgcggtccgccaagcggttcgtgaagcacaacgagaagatctccgtgaagcgggtgtggctgaccgagatcaagctggccgacctggagaacatggtgaactacaagaacggccgggagatcgagctgtacgaggccctgaaggcccggctggaggcctacggcggcaacgccaagcaggccttcgaccccaaggacaaccccttctacaagaagggcggccagctggtgaaggccgtgcgggtggagaagacccaggagtccggcgtgctgctgaacaagaagaacgcctacaccatcgccgacaacggcgacatggtgcgggtggacgtgttctgcaaggtggacaagaagggcaagaaccagtacttcatcgtgcccatctacgcctggcaggtggccgagaacatcctgcccgacatcgactgcaagggctaccggatcgacgactcctacaccttctgcttctccctgcacaagtacgacctgatcgccttccagaaggacgagaagtccaaggtggagttcgcctactacatcaactgcgactcctccaacggccggttctacctggcctggcacgacaagggctccaaggagcagcagttccggatctccacccagaacctggtgctgatccagaagtaccaggtgaacgagctgggcaaggagatccggccctgccggctgaagaagcggccccccgtgcggtag
189 由mRNA P編碼之帶有HiBiT標籤之Nme2Cas9之開放閱讀框 atgGACGGCTCCGGCGGCGGCTCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGTGGAGGACAAGCGGCCCGCCGCCACCAAGAAGGCCGGCCAGGCCAAGAAGAAGAAGGGCGGCTCCGGCGGCGGCGCCGCCTTCAAGCCCAACCCCATCAACTACATCCTGGGCCTGGACATCGGCATCGCCTCCGTGGGCTGGGCCATGGTGGAGATCGACGAGGAGGAGAACCCCATCCGGCTGATCGACCTGGGCGTGCGGGTGTTCGAGCGGGCCGAGGTGCCCAAGACCGGCGACTCCCTGGCCATGGCCCGGCGGCTGGCCCGGTCCGTGCGGCGGCTGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCTGCTGCGGGCCCGGCGGCTGCTGAAGCGGGAGGGCGTGCTGCAGGCCGCCGACTTCGACGAGAACGGCCTGATCAAGTCCCTGCCCAACACCCCCTGGCAGCTGCGGGCCGCCGCCCTGGACCGGAAGCTGACCCCCCTGGAGTGGTCCGCCGTGCTGCTGCACCTGATCAAGCACCGGGGCTACCTGTCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCTGGGCGCCCTGCTGAAGGGCGTGGCCAACAACGCCCACGCCCTGCAGACCGGCGACTTCCGGACCCCCGCCGAGCTGGCCCTGAACAAGTTCGAGAAGGAGTCCGGCCACATCCGGAACCAGCGGGGCGACTACTCCCACACCTTCTCCCGGAAGGACCTGCAGGCCGAGCTGATCCTGCTGTTCGAGAAGCAGAAGGAGTTCGGCAACCCCCACGTGTCCGGCGGCCTGAAGGAGGGCATCGAGACCCTGCTGATGACCCAGCGGCCCGCCCTGTCCGGCGACGCCGTGCAGAAGATGCTGGGCCACTGCACCTTCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCTACACCGCCGAGCGGTTCATCTGGCTGACCAAGCTGAACAACCTGCGGATCCTGGAGCAGGGCTCCGAGCGGCCCCTGACCGACACCGAGCGGGCCACCCTGATGGACGAGCCCTACCGGAAGTCCAAGCTGACCTACGCCCAGGCCCGGAAGCTGCTGGGCCTGGAGGACACCGCCTTCTTCAAGGGCCTGCGGTACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCTCCACCCTGATGGAGATGAAGGCCTACCACGCCATCTCCCGGGCCCTGGAGAAGGAGGGCCTGAAGGACAAGAAGTCCCCCCTGAACCTGTCCTCCGAGCTGCAGGACGAGATCGGCACCGCCTTCTCCCTGTTCAAGACCGACGAGGACATCACCGGCCGGCTGAAGGACCGGGTGCAGCCCGAGATCCTGGAGGCCCTGCTGAAGCACATCTCCTTCGACAAGTTCGTGCAGATCTCCCTGAAGGCCCTGCGGCGGATCGTGCCCCTGATGGAGCAGGGCAAGCGGTACGACGAGGCCTGCGCCGAGATCTACGGCGACCACTACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGATCTACCTGCCCCCCATCCCCGCCGACGAGATCCGGAACCCCGTGGTGCTGCGGGCCCTGTCCCAGGCCCGGAAGGTGATCAACGGCGTGGTGCGGCGGTACGGCTCCCCCGCCCGGATCCACATCGAGACCGCCCGGGAGGTGGGCAAGTCCTTCAAGGACCGGAAGGAGATCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGTTCCGGGAGTACTTCCCCAACTTCGTGGGCGAGCCCAAGTCCAAGGACATCCTGAAGCTGCGGCTGTACGAGCAGCAGCACGGCAAGTGCCTGTACTCCGGCAAGGAGATCAACCTGGTGCGGCTGAACGAGAAGGGCTACGTGGAGATCGACCACGCCCTGCCCTTCTCCCGGACCTGGGACGACTCCTTCAACAACAAGGTGCTGGTGCTGGGCTCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCTACGAGTACTTCAACGGCAAGGACAACTCCCGGGAGTGGCAGGAGTTCAAGGCCCGGGTGGAGACCTCCCGGTTCCCCCGGTCCAAGAAGCAGCGGATCCTGCTGCAGAAGTTCGACGAGGACGGCTTCAAGGAGTGCAACCTGAACGACACCCGGTACGTGAACCGGTTCCTGTGCCAGTTCGTGGCCGACCACATCCTGCTGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGTGTTCGCCTCCAACGGCCAGATCACCAACCTGCTGCGGGGCTTCTGGGGCCTGCGGAAGGTGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCTGGACGCCGTGGTGGTGGCCTGCTCCACCGTGGCCATGCAGCAGAAGATCACCCGGTTCGTGCGGTACAAGGAGATGAACGCCTTCGACGGCAAGACCATCGACAAGGAGACCGGCAAGGTGCTGCACCAGAAGACCCACTTCCCCCAGCCCTGGGAGTTCTTCGCCCAGGAGGTGATGATCCGGGTGTTCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGTTCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCTGCGGACCCTGCTGGCCGAGAAGCTGTCCTCCCGGCCCGAGGCCGTGCACGAGTACGTGACCCCCCTGTTCGTGTCCCGGGCCCCCAACCGGAAGATGTCCGGCGCCCACAAGGACACCCTGCGGTCCGCCAAGCGGTTCGTGAAGCACAACGAGAAGATCTCCGTGAAGCGGGTGTGGCTGACCGAGATCAAGCTGGCCGACCTGGAGAACATGGTGAACTACAAGAACGGCCGGGAGATCGAGCTGTACGAGGCCCTGAAGGCCCGGCTGGAGGCCTACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCTTCGACCCCAAGGACAACCCCTTCTACAAGAAGGGCGGCCAGCTGGTGAAGGCCGTGCGGGTGGAGAAGACCCAGGAGTCCGGCGTGCTGCTGAACAAGAAGAACGCCTACACCATCGCCGACAACGGCGACATGGTGCGGGTGGACGTGTTCTGCAAGGTGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGTACTTCATCGTGCCCATCTACGCCTGGCAGGTGGCCGAGAACATCCTGCCCGACATCGACTGCAAGGGCTACCGGATCGACGACTCCTACACCTTCTGCTTCTCCCTGCACAAGTACGACCTGATCGCCTTCCAGAAGGACGAGAAGTCCAAGGTGGAGTTCGCCTACTACATCAACTGCGACTCCTCCAACGGCCGGTTCTACCTGGCCTGGCACGACAAGGGCTCCAAGGAGCAGCAGTTCCGGATCTCCACCCAGAACCTGGTGCTGATCCAGAAGTACCAGGTGAACGAGCTGGGCAAGGAGATCCGGCCCTGCCGGCTGAAGAAGCGGCCCCCCGTGCGGTCCGAGTCCGCCACCCCCGAGTCCGTGTCCGGCTGGCGGCTGTTCAAGAAGATCTCCTAG
190 由mRNA Q編碼之Nme2Cas9之開放閱讀框 atgGACGGCTCCGGCGGCGGCTCCGAGGACAAGCGGCCCGCCGCCACCAAGAAGGCCGGCCAGGCCAAGAAGAAGAAGGGCGGCTCCGGCGGCGGCgccgccttcaagcccaaccccatcaactacatcctgggcctggacatcggcatcgcctccgtgggctgggccatggtggagatcgacgaggaggagaaccccatccggctgatcgacctgggcgtgcgggtgttcgagcgggccgaggtgcccaagaccggcgactccctggccatggcccggcggctggcccggtccgtgcggcggctgacccggcggcgggcccaccggctgctgcgggcccggcggctgctgaagcgggagggcgtgctgcaggccgccgacttcgacgagaacggcctgatcaagtccctgcccaacaccccctggcagctgcgggccgccgccctggaccggaagctgacccccctggagtggtccgccgtgctgctgcacctgatcaagcaccggggctacctgtcccagcggaagaacgagggcgagaccgccgacaaggagctgggcgccctgctgaagggcgtggccaacaacgcccacgccctgcagaccggcgacttccggacccccgccgagctggccctgaacaagttcgagaaggagtccggccacatccggaaccagcggggcgactactcccacaccttctcccggaaggacctgcaggccgagctgatcctgctgttcgagaagcagaaggagttcggcaacccccacgtgtccggcggcctgaaggagggcatcgagaccctgctgatgacccagcggcccgccctgtccggcgacgccgtgcagaagatgctgggccactgcaccttcgagcccgccgagcccaaggccgccaagaacacctacaccgccgagcggttcatctggctgaccaagctgaacaacctgcggatcctggagcagggctccgagcggcccctgaccgacaccgagcgggccaccctgatggacgagccctaccggaagtccaagctgacctacgcccaggcccggaagctgctgggcctggaggacaccgccttcttcaagggcctgcggtacggcaaggacaacgccgaggcctccaccctgatggagatgaaggcctaccacgccatctcccgggccctggagaaggagggcctgaaggacaagaagtcccccctgaacctgtcctccgagctgcaggacgagatcggcaccgccttctccctgttcaagaccgacgaggacatcaccggccggctgaaggaccgggtgcagcccgagatcctggaggccctgctgaagcacatctccttcgacaagttcgtgcagatctccctgaaggccctgcggcggatcgtgcccctgatggagcagggcaagcggtacgacgaggcctgcgccgagatctacggcgaccactacggcaagaagaacaccgaggagaagatctacctgccccccatccccgccgacgagatccggaaccccgtggtgctgcgggccctgtcccaggcccggaaggtgatcaacggcgtggtgcggcggtacggctcccccgcccggatccacatcgagaccgcccgggaggtgggcaagtccttcaaggaccggaaggagatcgagaagcggcaggaggagaaccggaaggaccgggagaaggccgccgccaagttccgggagtacttccccaacttcgtgggcgagcccaagtccaaggacatcctgaagctgcggctgtacgagcagcagcacggcaagtgcctgtactccggcaaggagatcaacctggtgcggctgaacgagaagggctacgtggagatcgaccacgccctgcccttctcccggacctgggacgactccttcaacaacaaggtgctggtgctgggctccgagaaccagaacaagggcaaccagaccccctacgagtacttcaacggcaaggacaactcccgggagtggcaggagttcaaggcccgggtggagacctcccggttcccccggtccaagaagcagcggatcctgctgcagaagttcgacgaggacggcttcaaggagtgcaacctgaacgacacccggtacgtgaaccggttcctgtgccagttcgtggccgaccacatcctgctgaccggcaagggcaagcggcgggtgttcgcctccaacggccagatcaccaacctgctgcggggcttctggggcctgcggaaggtgcgggccgagaacgaccggcaccacgccctggacgccgtggtggtggcctgctccaccgtggccatgcagcagaagatcacccggttcgtgcggtacaaggagatgaacgccttcgacggcaagaccatcgacaaggagaccggcaaggtgctgcaccagaagacccacttcccccagccctgggagttcttcgcccaggaggtgatgatccgggtgttcggcaagcccgacggcaagcccgagttcgaggaggccgacacccccgagaagctgcggaccctgctggccgagaagctgtcctcccggcccgaggccgtgcacgagtacgtgacccccctgttcgtgtcccgggcccccaaccggaagatgtccggcgcccacaaggacaccctgcggtccgccaagcggttcgtgaagcacaacgagaagatctccgtgaagcgggtgtggctgaccgagatcaagctggccgacctggagaacatggtgaactacaagaacggccgggagatcgagctgtacgaggccctgaaggcccggctggaggcctacggcggcaacgccaagcaggccttcgaccccaaggacaaccccttctacaagaagggcggccagctggtgaaggccgtgcgggtggagaagacccaggagtccggcgtgctgctgaacaagaagaacgcctacaccatcgccgacaacggcgacatggtgcgggtggacgtgttctgcaaggtggacaagaagggcaagaaccagtacttcatcgtgcccatctacgcctggcaggtggccgagaacatcctgcccgacatcgactgcaagggctaccggatcgacgactcctacaccttctgcttctccctgcacaagtacgacctgatcgccttccagaaggacgagaagtccaaggtggagttcgcctactacatcaactgcgactcctccaacggccggttctacctggcctggcacgacaagggctccaaggagcagcagttccggatctccacccagaacctggtgctgatccagaagtaccaggtgaacgagctgggcaaggagatccggccctgccggctgaagaagcggccccccgtgcggtag
191 Nme1Cas9裂解酶之例示性胺基酸序列 MAAFKPNSINYILGLDIGIASVGWAMVEIDEEENPIRLIDLGVRVFERAEVPKTGDSLAMARRLARSVRRLTRRRAHRLLRTRRLLKREGVLQAANFDENGLIKSLPNTPWQLRAAALDRKLTPLEWSAVLLHLIKHRGYLSQRKNEGETADKELGALLKGVAGNAHALQTGDFRTPAELALNKFEKESGHIRNQRSDYSHTFSRKDLQAELILLFEKQKEFGNPHVSGGLKEGIETLLMTQRPALSGDAVQKMLGHCTFEPAEPKAAKNTYTAERFIWLTKLNNLRILEQGSERPLTDTERATLMDEPYRKSKLTYAQARKLLGLEDTAFFKGLRYGKDNAEASTLMEMKAYHAISRALEKEGLKDKKSPLNLSPELQDEIGTAFSLFKTDEDITGRLKDRIQPEILEALLKHISFDKFVQISLKALRRIVPLMEQGKRYDEACAEIYGDHYGKKNTEEKIYLPPIPADEIRNPVVLRALSQARKVINGVVRRYGSPARIHIETAREVGKSFKDRKEIEKRQEENRKDREKAAAKFREYFPNFVGEPKSKDILKLRLYEQQHGKCLYSGKEINLGRLNEKGYVEIDHALPFSRTWDDSFNNKVLVLGSENQNKGNQTPYEYFNGKDNSREWQEFKARVETSRFPRSKKQRILLQKFDEDGFKERNLNDTRYVNRFLCQFVADRMRLTGKGKKRVFASNGQITNLLRGFWGLRKVRAENDRHHALDAVVVACSTVAMQQKITRFVRYKEMNAFDGKTIDKETGEVLHQKTHFPQPWEFFAQEVMIRVFGKPDGKPEFEEADTLEKLRTLLAEKLSSRPEAVHEYVTPLFVSRAPNRKMSGQGHMETVKSAKRLDEGVSVLRVPLTQLKLKDLEKMVNREREPKLYEALKARLEAHKDDPAKAFAEPFYKYDKAGNRTQQVKAVRVEQVQKTGVWVRNHNGIADNATMVRVDVFEKGDKYYLVPIYSWQVAKGILPDRAVVQGKDEEDWQLIDDSFNFKFSLHPNDLVEVITKKARMFGYFASCHRGTGNINIRIHDLDHKIGKNGILEGIGVKTALSFQKYQIDELGKEIRPCRLKKRPPVR
192 編碼Nme1Cas9裂解酶之例示性編碼序列 GCTGCTTTTAAGCCTAATTCTATTAATTATATTCTTGGTCTTGATATTGGTATTGCTTCTGTTGGTTGGGCTATGGTTGAGATTGATGAGGAGGAGAATCCTATTCGTCTTATTGATCTTGGTGTTCGTGTTTTTGAGCGTGCTGAGGTTCCTAAGACTGGTGATTCTCTTGCTATGGCTCGTCGTCTTGCTCGTTCTGTTCGTCGTCTTACTCGTCGTCGTGCTCATCGTCTTCTTCGTACTCGTCGTCTTCTTAAGCGTGAGGGTGTTCTTCAGGCTGCTAATTTTGATGAGAATGGTCTTATTAAGTCTCTTCCTAATACTCCTTGGCAGCTTCGTGCTGCTGCTCTTGATCGTAAGCTTACTCCTCTTGAGTGGTCTGCTGTTCTTCTTCATCTTATTAAGCATCGTGGTTATCTTTCTCAGCGTAAGAATGAGGGTGAGACTGCTGATAAGGAGCTTGGTGCTCTTCTTAAGGGTGTTGCTGGTAATGCTCATGCTCTTCAGACTGGTGATTTTCGTACTCCTGCTGAGCTTGCTCTTAATAAGTTTGAGAAGGAGTCTGGTCATATTCGTAATCAGCGTTCTGATTATTCTCATACTTTTTCTCGTAAGGATCTTCAGGCTGAGCTTATTCTTCTTTTTGAGAAGCAGAAGGAGTTTGGTAATCCTCATGTTTCTGGTGGTCTTAAGGAGGGTATTGAGACTCTTCTTATGACTCAGCGTCCTGCTCTTTCTGGTGATGCTGTTCAGAAGATGCTTGGTCATTGTACTTTTGAGCCTGCTGAGCCTAAGGCTGCTAAGAATACTTATACTGCTGAGCGTTTTATTTGGCTTACTAAGCTTAATAATCTTCGTATTCTTGAGCAGGGTTCTGAGCGTCCTCTTACTGATACTGAGCGTGCTACTCTTATGGATGAGCCTTATCGTAAGTCTAAGCTTACTTATGCTCAGGCTCGTAAGCTTCTTGGTCTTGAGGATACTGCTTTTTTTAAGGGTCTTCGTTATGGTAAGGATAATGCTGAGGCTTCTACTCTTATGGAGATGAAGGCTTATCATGCTATTTCTCGTGCTCTTGAGAAGGAGGGTCTTAAGGATAAGAAGTCTCCTCTTAATCTTTCTCCTGAGCTTCAGGATGAGATTGGTACTGCTTTTTCTCTTTTTAAGACTGATGAGGATATTACTGGTCGTCTTAAGGATCGTATTCAGCCTGAGATTCTTGAGGCTCTTCTTAAGCATATTTCTTTTGATAAGTTTGTTCAGATTTCTCTTAAGGCTCTTCGTCGTATTGTTCCTCTTATGGAGCAGGGTAAGCGTTATGATGAGGCTTGTGCTGAGATTTATGGTGATCATTATGGTAAGAAGAATACTGAGGAGAAGATTTATCTTCCTCCTATTCCTGCTGATGAGATTCGTAATCCTGTTGTTCTTCGTGCTCTTTCTCAGGCTCGTAAGGTTATTAATGGTGTTGTTCGTCGTTATGGTTCTCCTGCTCGTATTCATATTGAGACTGCTCGTGAGGTTGGTAAGTCTTTTAAGGATCGTAAGGAGATTGAGAAGCGTCAGGAGGAGAATCGTAAGGATCGTGAGAAGGCTGCTGCTAAGTTTCGTGAGTATTTTCCTAATTTTGTTGGTGAGCCTAAGTCTAAGGATATTCTTAAGCTTCGTCTTTATGAGCAGCAGCATGGTAAGTGTCTTTATTCTGGTAAGGAGATTAATCTTGGTCGTCTTAATGAGAAGGGTTATGTTGAGATTGATCATGCTCTTCCTTTTTCTCGTACTTGGGATGATTCTTTTAATAATAAGGTTCTTGTTCTTGGTTCTGAGAATCAGAATAAGGGTAATCAGACTCCTTATGAGTATTTTAATGGTAAGGATAATTCTCGTGAGTGGCAGGAGTTTAAGGCTCGTGTTGAGACTTCTCGTTTTCCTCGTTCTAAGAAGCAGCGTATTCTTCTTCAGAAGTTTGATGAGGATGGTTTTAAGGAGCGTAATCTTAATGATACTCGTTATGTTAATCGTTTTCTTTGTCAGTTTGTTGCTGATCGTATGCGTCTTACTGGTAAGGGTAAGAAGCGTGTTTTTGCTTCTAATGGTCAGATTACTAATCTTCTTCGTGGTTTTTGGGGTCTTCGTAAGGTTCGTGCTGAGAATGATCGTCATCATGCTCTTGATGCTGTTGTTGTTGCTTGTTCTACTGTTGCTATGCAGCAGAAGATTACTCGTTTTGTTCGTTATAAGGAGATGAATGCTTTTGATGGTAAGACTATTGATAAGGAGACTGGTGAGGTTCTTCATCAGAAGACTCATTTTCCTCAGCCTTGGGAGTTTTTTGCTCAGGAGGTTATGATTCGTGTTTTTGGTAAGCCTGATGGTAAGCCTGAGTTTGAGGAGGCTGATACTCTTGAGAAGCTTCGTACTCTTCTTGCTGAGAAGCTTTCTTCTCGTCCTGAGGCTGTTCATGAGTATGTTACTCCTCTTTTTGTTTCTCGTGCTCCTAATCGTAAGATGTCTGGTCAGGGTCATATGGAGACTGTTAAGTCTGCTAAGCGTCTTGATGAGGGTGTTTCTGTTCTTCGTGTTCCTCTTACTCAGCTTAAGCTTAAGGATCTTGAGAAGATGGTTAATCGTGAGCGTGAGCCTAAGCTTTATGAGGCTCTTAAGGCTCGTCTTGAGGCTCATAAGGATGATCCTGCTAAGGCTTTTGCTGAGCCTTTTTATAAGTATGATAAGGCTGGTAATCGTACTCAGCAGGTTAAGGCTGTTCGTGTTGAGCAGGTTCAGAAGACTGGTGTTTGGGTTCGTAATCATAATGGTATTGCTGATAATGCTACTATGGTTCGTGTTGATGTTTTTGAGAAGGGTGATAAGTATTATCTTGTTCCTATTTATTCTTGGCAGGTTGCTAAGGGTATTCTTCCTGATCGTGCTGTTGTTCAGGGTAAGGATGAGGAGGATTGGCAGCTTATTGATGATTCTTTTAATTTTAAGTTTTCTCTTCATCCTAATGATCTTGTTGAGGTTATTACTAAGAAGGCTCGTATGTTTGGTTATTTTGCTTCTTGTCATCGTGGTACTGGTAATATTAATATTCGTATTCATGATCTTGATCATAAGATTGGTAAGAATGGTATTCTTGAGGGTATTGGTGTTAAGACTGCTCTTTCTTTTCAGAAGTATCAGATTGATGAGCTTGGTAAGGAGATTCGTCCTTGTCGTCTTAAGAAGCGTCCTCCTGTTCGT
193 編碼Nme1Cas9裂解酶之例示性編碼序列 GCCGCCTTCAAGCCCAACTCCATCAACTACATCCTGGGCCTGGACATCGGCATCGCCTCCGTGGGCTGGGCCATGGTGGAGATCGACGAGGAGGAGAACCCCATCCGGCTGATCGACCTGGGCGTGCGGGTGTTCGAGCGGGCCGAGGTGCCCAAGACCGGCGACTCCCTGGCCATGGCCCGGCGGCTGGCCCGGTCCGTGCGGCGGCTGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCTGCTGCGGACCCGGCGGCTGCTGAAGCGGGAGGGCGTGCTGCAGGCCGCCAACTTCGACGAGAACGGCCTGATCAAGTCCCTGCCCAACACCCCCTGGCAGCTGCGGGCCGCCGCCCTGGACCGGAAGCTGACCCCCCTGGAGTGGTCCGCCGTGCTGCTGCACCTGATCAAGCACCGGGGCTACCTGTCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCTGGGCGCCCTGCTGAAGGGCGTGGCCGGCAACGCCCACGCCCTGCAGACCGGCGACTTCCGGACCCCCGCCGAGCTGGCCCTGAACAAGTTCGAGAAGGAGTCCGGCCACATCCGGAACCAGCGGTCCGACTACTCCCACACCTTCTCCCGGAAGGACCTGCAGGCCGAGCTGATCCTGCTGTTCGAGAAGCAGAAGGAGTTCGGCAACCCCCACGTGTCCGGCGGCCTGAAGGAGGGCATCGAGACCCTGCTGATGACCCAGCGGCCCGCCCTGTCCGGCGACGCCGTGCAGAAGATGCTGGGCCACTGCACCTTCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCTACACCGCCGAGCGGTTCATCTGGCTGACCAAGCTGAACAACCTGCGGATCCTGGAGCAGGGCTCCGAGCGGCCCCTGACCGACACCGAGCGGGCCACCCTGATGGACGAGCCCTACCGGAAGTCCAAGCTGACCTACGCCCAGGCCCGGAAGCTGCTGGGCCTGGAGGACACCGCCTTCTTCAAGGGCCTGCGGTACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCTCCACCCTGATGGAGATGAAGGCCTACCACGCCATCTCCCGGGCCCTGGAGAAGGAGGGCCTGAAGGACAAGAAGTCCCCCCTGAACCTGTCCCCCGAGCTGCAGGACGAGATCGGCACCGCCTTCTCCCTGTTCAAGACCGACGAGGACATCACCGGCCGGCTGAAGGACCGGATCCAGCCCGAGATCCTGGAGGCCCTGCTGAAGCACATCTCCTTCGACAAGTTCGTGCAGATCTCCCTGAAGGCCCTGCGGCGGATCGTGCCCCTGATGGAGCAGGGCAAGCGGTACGACGAGGCCTGCGCCGAGATCTACGGCGACCACTACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGATCTACCTGCCCCCCATCCCCGCCGACGAGATCCGGAACCCCGTGGTGCTGCGGGCCCTGTCCCAGGCCCGGAAGGTGATCAACGGCGTGGTGCGGCGGTACGGCTCCCCCGCCCGGATCCACATCGAGACCGCCCGGGAGGTGGGCAAGTCCTTCAAGGACCGGAAGGAGATCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGTTCCGGGAGTACTTCCCCAACTTCGTGGGCGAGCCCAAGTCCAAGGACATCCTGAAGCTGCGGCTGTACGAGCAGCAGCACGGCAAGTGCCTGTACTCCGGCAAGGAGATCAACCTGGGCCGGCTGAACGAGAAGGGCTACGTGGAGATCGACCACGCCCTGCCCTTCTCCCGGACCTGGGACGACTCCTTCAACAACAAGGTGCTGGTGCTGGGCTCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCTACGAGTACTTCAACGGCAAGGACAACTCCCGGGAGTGGCAGGAGTTCAAGGCCCGGGTGGAGACCTCCCGGTTCCCCCGGTCCAAGAAGCAGCGGATCCTGCTGCAGAAGTTCGACGAGGACGGCTTCAAGGAGCGGAACCTGAACGACACCCGGTACGTGAACCGGTTCCTGTGCCAGTTCGTGGCCGACCGGATGCGGCTGACCGGCAAGGGCAAGAAGCGGGTGTTCGCCTCCAACGGCCAGATCACCAACCTGCTGCGGGGCTTCTGGGGCCTGCGGAAGGTGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCTGGACGCCGTGGTGGTGGCCTGCTCCACCGTGGCCATGCAGCAGAAGATCACCCGGTTCGTGCGGTACAAGGAGATGAACGCCTTCGACGGCAAGACCATCGACAAGGAGACCGGCGAGGTGCTGCACCAGAAGACCCACTTCCCCCAGCCCTGGGAGTTCTTCGCCCAGGAGGTGATGATCCGGGTGTTCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGTTCGAGGAGGCCGACACCCTGGAGAAGCTGCGGACCCTGCTGGCCGAGAAGCTGTCCTCCCGGCCCGAGGCCGTGCACGAGTACGTGACCCCCCTGTTCGTGTCCCGGGCCCCCAACCGGAAGATGTCCGGCCAGGGCCACATGGAGACCGTGAAGTCCGCCAAGCGGCTGGACGAGGGCGTGTCCGTGCTGCGGGTGCCCCTGACCCAGCTGAAGCTGAAGGACCTGGAGAAGATGGTGAACCGGGAGCGGGAGCCCAAGCTGTACGAGGCCCTGAAGGCCCGGCTGGAGGCCCACAAGGACGACCCCGCCAAGGCCTTCGCCGAGCCCTTCTACAAGTACGACAAGGCCGGCAACCGGACCCAGCAGGTGAAGGCCGTGCGGGTGGAGCAGGTGCAGAAGACCGGCGTGTGGGTGCGGAACCACAACGGCATCGCCGACAACGCCACCATGGTGCGGGTGGACGTGTTCGAGAAGGGCGACAAGTACTACCTGGTGCCCATCTACTCCTGGCAGGTGGCCAAGGGCATCCTGCCCGACCGGGCCGTGGTGCAGGGCAAGGACGAGGAGGACTGGCAGCTGATCGACGACTCCTTCAACTTCAAGTTCTCCCTGCACCCCAACGACCTGGTGGAGGTGATCACCAAGAAGGCCCGGATGTTCGGCTACTTCGCCTCCTGCCACCGGGGCACCGGCAACATCAACATCCGGATCCACGACCTGGACCACAAGATCGGCAAGAACGGCATCCTGGAGGGCATCGGCGTGAAGACCGCCCTGTCCTTCCAGAAGTACCAGATCGACGAGCTGGGCAAGGAGATCCGGCCCTGCCGGCTGAAGAAGCGGCCCCCCGTGCGG
194 編碼Nme1Cas9裂解酶之例示性編碼序列 GCAGCATTCAAACCAAACTCAATCAACTACATCCTAGGACTAGACATCGGAATCGCATCAGTAGGATGAGCAATGGTAGAAATCGACGAAGAAGAAAACCCAATCCGACTAATCGACCTAGGAGTACGAGTATTCGAACGAGCAGAAGTACCAAAAACAGGAGACTCACTAGCAATGGCACGACGACTAGCACGATCAGTACGACGACTAACACGACGACGAGCACACCGACTACTACGAACACGACGACTACTAAAACGAGAAGGAGTACTACAAGCAGCAAACTTCGACGAAAACGGACTAATCAAATCACTACCAAACACACCATGACAACTACGAGCAGCAGCACTAGACCGAAAACTAACACCACTAGAATGATCAGCAGTACTACTACACCTAATCAAACACCGAGGATACCTATCACAACGAAAAAACGAAGGAGAAACAGCAGACAAAGAACTAGGAGCACTACTAAAAGGAGTAGCAGGAAACGCACACGCACTACAAACAGGAGACTTCCGAACACCAGCAGAACTAGCACTAAACAAATTCGAAAAAGAATCAGGACACATCCGAAACCAACGATCAGACTACTCACACACATTCTCACGAAAAGACCTACAAGCAGAACTAATCCTACTATTCGAAAAACAAAAAGAATTCGGAAACCCACACGTATCAGGAGGACTAAAAGAAGGAATCGAAACACTACTAATGACACAACGACCAGCACTATCAGGAGACGCAGTACAAAAAATGCTAGGACACTGCACATTCGAACCAGCAGAACCAAAAGCAGCAAAAAACACATACACAGCAGAACGATTCATCTGACTAACAAAACTAAACAACCTACGAATCCTAGAACAAGGATCAGAACGACCACTAACAGACACAGAACGAGCAACACTAATGGACGAACCATACCGAAAATCAAAACTAACATACGCACAAGCACGAAAACTACTAGGACTAGAAGACACAGCATTCTTCAAAGGACTACGATACGGAAAAGACAACGCAGAAGCATCAACACTAATGGAAATGAAAGCATACCACGCAATCTCACGAGCACTAGAAAAAGAAGGACTAAAAGACAAAAAATCACCACTAAACCTATCACCAGAACTACAAGACGAAATCGGAACAGCATTCTCACTATTCAAAACAGACGAAGACATCACAGGACGACTAAAAGACCGAATCCAACCAGAAATCCTAGAAGCACTACTAAAACACATCTCATTCGACAAATTCGTACAAATCTCACTAAAAGCACTACGACGAATCGTACCACTAATGGAACAAGGAAAACGATACGACGAAGCATGCGCAGAAATCTACGGAGACCACTACGGAAAAAAAAACACAGAAGAAAAAATCTACCTACCACCAATCCCAGCAGACGAAATCCGAAACCCAGTAGTACTACGAGCACTATCACAAGCACGAAAAGTAATCAACGGAGTAGTACGACGATACGGATCACCAGCACGAATCCACATCGAAACAGCACGAGAAGTAGGAAAATCATTCAAAGACCGAAAAGAAATCGAAAAACGACAAGAAGAAAACCGAAAAGACCGAGAAAAAGCAGCAGCAAAATTCCGAGAATACTTCCCAAACTTCGTAGGAGAACCAAAATCAAAAGACATCCTAAAACTACGACTATACGAACAACAACACGGAAAATGCCTATACTCAGGAAAAGAAATCAACCTAGGACGACTAAACGAAAAAGGATACGTAGAAATCGACCACGCACTACCATTCTCACGAACATGAGACGACTCATTCAACAACAAAGTACTAGTACTAGGATCAGAAAACCAAAACAAAGGAAACCAAACACCATACGAATACTTCAACGGAAAAGACAACTCACGAGAATGACAAGAATTCAAAGCACGAGTAGAAACATCACGATTCCCACGATCAAAAAAACAACGAATCCTACTACAAAAATTCGACGAAGACGGATTCAAAGAACGAAACCTAAACGACACACGATACGTAAACCGATTCCTATGCCAATTCGTAGCAGACCGAATGCGACTAACAGGAAAAGGAAAAAAACGAGTATTCGCATCAAACGGACAAATCACAAACCTACTACGAGGATTCTGAGGACTACGAAAAGTACGAGCAGAAAACGACCGACACCACGCACTAGACGCAGTAGTAGTAGCATGCTCAACAGTAGCAATGCAACAAAAAATCACACGATTCGTACGATACAAAGAAATGAACGCATTCGACGGAAAAACAATCGACAAAGAAACAGGAGAAGTACTACACCAAAAAACACACTTCCCACAACCATGAGAATTCTTCGCACAAGAAGTAATGATCCGAGTATTCGGAAAACCAGACGGAAAACCAGAATTCGAAGAAGCAGACACACTAGAAAAACTACGAACACTACTAGCAGAAAAACTATCATCACGACCAGAAGCAGTACACGAATACGTAACACCACTATTCGTATCACGAGCACCAAACCGAAAAATGTCAGGACAAGGACACATGGAAACAGTAAAATCAGCAAAACGACTAGACGAAGGAGTATCAGTACTACGAGTACCACTAACACAACTAAAACTAAAAGACCTAGAAAAAATGGTAAACCGAGAACGAGAACCAAAACTATACGAAGCACTAAAAGCACGACTAGAAGCACACAAAGACGACCCAGCAAAAGCATTCGCAGAACCATTCTACAAATACGACAAAGCAGGAAACCGAACACAACAAGTAAAAGCAGTACGAGTAGAACAAGTACAAAAAACAGGAGTATGAGTACGAAACCACAACGGAATCGCAGACAACGCAACAATGGTACGAGTAGACGTATTCGAAAAAGGAGACAAATACTACCTAGTACCAATCTACTCATGACAAGTAGCAAAAGGAATCCTACCAGACCGAGCAGTAGTACAAGGAAAAGACGAAGAAGACTGACAACTAATCGACGACTCATTCAACTTCAAATTCTCACTACACCCAAACGACCTAGTAGAAGTAATCACAAAAAAAGCACGAATGTTCGGATACTTCGCATCATGCCACCGAGGAACAGGAAACATCAACATCCGAATCCACGACCTAGACCACAAAATCGGAAAAAACGGAATCCTAGAAGGAATCGGAGTAAAAACAGCACTATCATTCCAAAAATACCAAATCGACGAACTAGGAAAAGAAATCCGACCATGCCGACTAAAAAAACGACCACCAGTACGA
195 Nme1Cas9裂解酶之例示性開放閱讀框 ATGGCTGCTTTTAAGCCTAATTCTATTAATTATATTCTTGGTCTTGATATTGGTATTGCTTCTGTTGGTTGGGCTATGGTTGAGATTGATGAGGAGGAGAATCCTATTCGTCTTATTGATCTTGGTGTTCGTGTTTTTGAGCGTGCTGAGGTTCCTAAGACTGGTGATTCTCTTGCTATGGCTCGTCGTCTTGCTCGTTCTGTTCGTCGTCTTACTCGTCGTCGTGCTCATCGTCTTCTTCGTACTCGTCGTCTTCTTAAGCGTGAGGGTGTTCTTCAGGCTGCTAATTTTGATGAGAATGGTCTTATTAAGTCTCTTCCTAATACTCCTTGGCAGCTTCGTGCTGCTGCTCTTGATCGTAAGCTTACTCCTCTTGAGTGGTCTGCTGTTCTTCTTCATCTTATTAAGCATCGTGGTTATCTTTCTCAGCGTAAGAATGAGGGTGAGACTGCTGATAAGGAGCTTGGTGCTCTTCTTAAGGGTGTTGCTGGTAATGCTCATGCTCTTCAGACTGGTGATTTTCGTACTCCTGCTGAGCTTGCTCTTAATAAGTTTGAGAAGGAGTCTGGTCATATTCGTAATCAGCGTTCTGATTATTCTCATACTTTTTCTCGTAAGGATCTTCAGGCTGAGCTTATTCTTCTTTTTGAGAAGCAGAAGGAGTTTGGTAATCCTCATGTTTCTGGTGGTCTTAAGGAGGGTATTGAGACTCTTCTTATGACTCAGCGTCCTGCTCTTTCTGGTGATGCTGTTCAGAAGATGCTTGGTCATTGTACTTTTGAGCCTGCTGAGCCTAAGGCTGCTAAGAATACTTATACTGCTGAGCGTTTTATTTGGCTTACTAAGCTTAATAATCTTCGTATTCTTGAGCAGGGTTCTGAGCGTCCTCTTACTGATACTGAGCGTGCTACTCTTATGGATGAGCCTTATCGTAAGTCTAAGCTTACTTATGCTCAGGCTCGTAAGCTTCTTGGTCTTGAGGATACTGCTTTTTTTAAGGGTCTTCGTTATGGTAAGGATAATGCTGAGGCTTCTACTCTTATGGAGATGAAGGCTTATCATGCTATTTCTCGTGCTCTTGAGAAGGAGGGTCTTAAGGATAAGAAGTCTCCTCTTAATCTTTCTCCTGAGCTTCAGGATGAGATTGGTACTGCTTTTTCTCTTTTTAAGACTGATGAGGATATTACTGGTCGTCTTAAGGATCGTATTCAGCCTGAGATTCTTGAGGCTCTTCTTAAGCATATTTCTTTTGATAAGTTTGTTCAGATTTCTCTTAAGGCTCTTCGTCGTATTGTTCCTCTTATGGAGCAGGGTAAGCGTTATGATGAGGCTTGTGCTGAGATTTATGGTGATCATTATGGTAAGAAGAATACTGAGGAGAAGATTTATCTTCCTCCTATTCCTGCTGATGAGATTCGTAATCCTGTTGTTCTTCGTGCTCTTTCTCAGGCTCGTAAGGTTATTAATGGTGTTGTTCGTCGTTATGGTTCTCCTGCTCGTATTCATATTGAGACTGCTCGTGAGGTTGGTAAGTCTTTTAAGGATCGTAAGGAGATTGAGAAGCGTCAGGAGGAGAATCGTAAGGATCGTGAGAAGGCTGCTGCTAAGTTTCGTGAGTATTTTCCTAATTTTGTTGGTGAGCCTAAGTCTAAGGATATTCTTAAGCTTCGTCTTTATGAGCAGCAGCATGGTAAGTGTCTTTATTCTGGTAAGGAGATTAATCTTGGTCGTCTTAATGAGAAGGGTTATGTTGAGATTGATCATGCTCTTCCTTTTTCTCGTACTTGGGATGATTCTTTTAATAATAAGGTTCTTGTTCTTGGTTCTGAGAATCAGAATAAGGGTAATCAGACTCCTTATGAGTATTTTAATGGTAAGGATAATTCTCGTGAGTGGCAGGAGTTTAAGGCTCGTGTTGAGACTTCTCGTTTTCCTCGTTCTAAGAAGCAGCGTATTCTTCTTCAGAAGTTTGATGAGGATGGTTTTAAGGAGCGTAATCTTAATGATACTCGTTATGTTAATCGTTTTCTTTGTCAGTTTGTTGCTGATCGTATGCGTCTTACTGGTAAGGGTAAGAAGCGTGTTTTTGCTTCTAATGGTCAGATTACTAATCTTCTTCGTGGTTTTTGGGGTCTTCGTAAGGTTCGTGCTGAGAATGATCGTCATCATGCTCTTGATGCTGTTGTTGTTGCTTGTTCTACTGTTGCTATGCAGCAGAAGATTACTCGTTTTGTTCGTTATAAGGAGATGAATGCTTTTGATGGTAAGACTATTGATAAGGAGACTGGTGAGGTTCTTCATCAGAAGACTCATTTTCCTCAGCCTTGGGAGTTTTTTGCTCAGGAGGTTATGATTCGTGTTTTTGGTAAGCCTGATGGTAAGCCTGAGTTTGAGGAGGCTGATACTCTTGAGAAGCTTCGTACTCTTCTTGCTGAGAAGCTTTCTTCTCGTCCTGAGGCTGTTCATGAGTATGTTACTCCTCTTTTTGTTTCTCGTGCTCCTAATCGTAAGATGTCTGGTCAGGGTCATATGGAGACTGTTAAGTCTGCTAAGCGTCTTGATGAGGGTGTTTCTGTTCTTCGTGTTCCTCTTACTCAGCTTAAGCTTAAGGATCTTGAGAAGATGGTTAATCGTGAGCGTGAGCCTAAGCTTTATGAGGCTCTTAAGGCTCGTCTTGAGGCTCATAAGGATGATCCTGCTAAGGCTTTTGCTGAGCCTTTTTATAAGTATGATAAGGCTGGTAATCGTACTCAGCAGGTTAAGGCTGTTCGTGTTGAGCAGGTTCAGAAGACTGGTGTTTGGGTTCGTAATCATAATGGTATTGCTGATAATGCTACTATGGTTCGTGTTGATGTTTTTGAGAAGGGTGATAAGTATTATCTTGTTCCTATTTATTCTTGGCAGGTTGCTAAGGGTATTCTTCCTGATCGTGCTGTTGTTCAGGGTAAGGATGAGGAGGATTGGCAGCTTATTGATGATTCTTTTAATTTTAAGTTTTCTCTTCATCCTAATGATCTTGTTGAGGTTATTACTAAGAAGGCTCGTATGTTTGGTTATTTTGCTTCTTGTCATCGTGGTACTGGTAATATTAATATTCGTATTCATGATCTTGATCATAAGATTGGTAAGAATGGTATTCTTGAGGGTATTGGTGTTAAGACTGCTCTTTCTTTTCAGAAGTATCAGATTGATGAGCTTGGTAAGGAGATTCGTCCTTGTCGTCTTAAGAAGCGTCCTCCTGTTCGTUGA
196 Nme1Cas9裂解酶之例示性開放閱讀框 ATGGCCGCCTTCAAGCCCAACTCCATCAACTACATCCTGGGCCTGGACATCGGCATCGCCTCCGTGGGCTGGGCCATGGTGGAGATCGACGAGGAGGAGAACCCCATCCGGCTGATCGACCTGGGCGTGCGGGTGTTCGAGCGGGCCGAGGTGCCCAAGACCGGCGACTCCCTGGCCATGGCCCGGCGGCTGGCCCGGTCCGTGCGGCGGCTGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCTGCTGCGGACCCGGCGGCTGCTGAAGCGGGAGGGCGTGCTGCAGGCCGCCAACTTCGACGAGAACGGCCTGATCAAGTCCCTGCCCAACACCCCCTGGCAGCTGCGGGCCGCCGCCCTGGACCGGAAGCTGACCCCCCTGGAGTGGTCCGCCGTGCTGCTGCACCTGATCAAGCACCGGGGCTACCTGTCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCTGGGCGCCCTGCTGAAGGGCGTGGCCGGCAACGCCCACGCCCTGCAGACCGGCGACTTCCGGACCCCCGCCGAGCTGGCCCTGAACAAGTTCGAGAAGGAGTCCGGCCACATCCGGAACCAGCGGTCCGACTACTCCCACACCTTCTCCCGGAAGGACCTGCAGGCCGAGCTGATCCTGCTGTTCGAGAAGCAGAAGGAGTTCGGCAACCCCCACGTGTCCGGCGGCCTGAAGGAGGGCATCGAGACCCTGCTGATGACCCAGCGGCCCGCCCTGTCCGGCGACGCCGTGCAGAAGATGCTGGGCCACTGCACCTTCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCTACACCGCCGAGCGGTTCATCTGGCTGACCAAGCTGAACAACCTGCGGATCCTGGAGCAGGGCTCCGAGCGGCCCCTGACCGACACCGAGCGGGCCACCCTGATGGACGAGCCCTACCGGAAGTCCAAGCTGACCTACGCCCAGGCCCGGAAGCTGCTGGGCCTGGAGGACACCGCCTTCTTCAAGGGCCTGCGGTACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCTCCACCCTGATGGAGATGAAGGCCTACCACGCCATCTCCCGGGCCCTGGAGAAGGAGGGCCTGAAGGACAAGAAGTCCCCCCTGAACCTGTCCCCCGAGCTGCAGGACGAGATCGGCACCGCCTTCTCCCTGTTCAAGACCGACGAGGACATCACCGGCCGGCTGAAGGACCGGATCCAGCCCGAGATCCTGGAGGCCCTGCTGAAGCACATCTCCTTCGACAAGTTCGTGCAGATCTCCCTGAAGGCCCTGCGGCGGATCGTGCCCCTGATGGAGCAGGGCAAGCGGTACGACGAGGCCTGCGCCGAGATCTACGGCGACCACTACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGATCTACCTGCCCCCCATCCCCGCCGACGAGATCCGGAACCCCGTGGTGCTGCGGGCCCTGTCCCAGGCCCGGAAGGTGATCAACGGCGTGGTGCGGCGGTACGGCTCCCCCGCCCGGATCCACATCGAGACCGCCCGGGAGGTGGGCAAGTCCTTCAAGGACCGGAAGGAGATCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGTTCCGGGAGTACTTCCCCAACTTCGTGGGCGAGCCCAAGTCCAAGGACATCCTGAAGCTGCGGCTGTACGAGCAGCAGCACGGCAAGTGCCTGTACTCCGGCAAGGAGATCAACCTGGGCCGGCTGAACGAGAAGGGCTACGTGGAGATCGACCACGCCCTGCCCTTCTCCCGGACCTGGGACGACTCCTTCAACAACAAGGTGCTGGTGCTGGGCTCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCTACGAGTACTTCAACGGCAAGGACAACTCCCGGGAGTGGCAGGAGTTCAAGGCCCGGGTGGAGACCTCCCGGTTCCCCCGGTCCAAGAAGCAGCGGATCCTGCTGCAGAAGTTCGACGAGGACGGCTTCAAGGAGCGGAACCTGAACGACACCCGGTACGTGAACCGGTTCCTGTGCCAGTTCGTGGCCGACCGGATGCGGCTGACCGGCAAGGGCAAGAAGCGGGTGTTCGCCTCCAACGGCCAGATCACCAACCTGCTGCGGGGCTTCTGGGGCCTGCGGAAGGTGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCTGGACGCCGTGGTGGTGGCCTGCTCCACCGTGGCCATGCAGCAGAAGATCACCCGGTTCGTGCGGTACAAGGAGATGAACGCCTTCGACGGCAAGACCATCGACAAGGAGACCGGCGAGGTGCTGCACCAGAAGACCCACTTCCCCCAGCCCTGGGAGTTCTTCGCCCAGGAGGTGATGATCCGGGTGTTCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGTTCGAGGAGGCCGACACCCTGGAGAAGCTGCGGACCCTGCTGGCCGAGAAGCTGTCCTCCCGGCCCGAGGCCGTGCACGAGTACGTGACCCCCCTGTTCGTGTCCCGGGCCCCCAACCGGAAGATGTCCGGCCAGGGCCACATGGAGACCGTGAAGTCCGCCAAGCGGCTGGACGAGGGCGTGTCCGTGCTGCGGGTGCCCCTGACCCAGCTGAAGCTGAAGGACCTGGAGAAGATGGTGAACCGGGAGCGGGAGCCCAAGCTGTACGAGGCCCTGAAGGCCCGGCTGGAGGCCCACAAGGACGACCCCGCCAAGGCCTTCGCCGAGCCCTTCTACAAGTACGACAAGGCCGGCAACCGGACCCAGCAGGTGAAGGCCGTGCGGGTGGAGCAGGTGCAGAAGACCGGCGTGTGGGTGCGGAACCACAACGGCATCGCCGACAACGCCACCATGGTGCGGGTGGACGTGTTCGAGAAGGGCGACAAGTACTACCTGGTGCCCATCTACTCCTGGCAGGTGGCCAAGGGCATCCTGCCCGACCGGGCCGTGGTGCAGGGCAAGGACGAGGAGGACTGGCAGCTGATCGACGACTCCTTCAACTTCAAGTTCTCCCTGCACCCCAACGACCTGGTGGAGGTGATCACCAAGAAGGCCCGGATGTTCGGCTACTTCGCCTCCTGCCACCGGGGCACCGGCAACATCAACATCCGGATCCACGACCTGGACCACAAGATCGGCAAGAACGGCATCCTGGAGGGCATCGGCGTGAAGACCGCCCTGTCCTTCCAGAAGTACCAGATCGACGAGCTGGGCAAGGAGATCCGGCCCTGCCGGCTGAAGAAGCGGCCCCCCGTGCGGUGA
197 Nme1Cas9裂解酶之例示性開放閱讀框 ATGGCAGCATTCAAACCAAACTCAATCAACTACATCCTAGGACTAGACATCGGAATCGCATCAGTAGGATGAGCAATGGTAGAAATCGACGAAGAAGAAAACCCAATCCGACTAATCGACCTAGGAGTACGAGTATTCGAACGAGCAGAAGTACCAAAAACAGGAGACTCACTAGCAATGGCACGACGACTAGCACGATCAGTACGACGACTAACACGACGACGAGCACACCGACTACTACGAACACGACGACTACTAAAACGAGAAGGAGTACTACAAGCAGCAAACTTCGACGAAAACGGACTAATCAAATCACTACCAAACACACCATGACAACTACGAGCAGCAGCACTAGACCGAAAACTAACACCACTAGAATGATCAGCAGTACTACTACACCTAATCAAACACCGAGGATACCTATCACAACGAAAAAACGAAGGAGAAACAGCAGACAAAGAACTAGGAGCACTACTAAAAGGAGTAGCAGGAAACGCACACGCACTACAAACAGGAGACTTCCGAACACCAGCAGAACTAGCACTAAACAAATTCGAAAAAGAATCAGGACACATCCGAAACCAACGATCAGACTACTCACACACATTCTCACGAAAAGACCTACAAGCAGAACTAATCCTACTATTCGAAAAACAAAAAGAATTCGGAAACCCACACGTATCAGGAGGACTAAAAGAAGGAATCGAAACACTACTAATGACACAACGACCAGCACTATCAGGAGACGCAGTACAAAAAATGCTAGGACACTGCACATTCGAACCAGCAGAACCAAAAGCAGCAAAAAACACATACACAGCAGAACGATTCATCTGACTAACAAAACTAAACAACCTACGAATCCTAGAACAAGGATCAGAACGACCACTAACAGACACAGAACGAGCAACACTAATGGACGAACCATACCGAAAATCAAAACTAACATACGCACAAGCACGAAAACTACTAGGACTAGAAGACACAGCATTCTTCAAAGGACTACGATACGGAAAAGACAACGCAGAAGCATCAACACTAATGGAAATGAAAGCATACCACGCAATCTCACGAGCACTAGAAAAAGAAGGACTAAAAGACAAAAAATCACCACTAAACCTATCACCAGAACTACAAGACGAAATCGGAACAGCATTCTCACTATTCAAAACAGACGAAGACATCACAGGACGACTAAAAGACCGAATCCAACCAGAAATCCTAGAAGCACTACTAAAACACATCTCATTCGACAAATTCGTACAAATCTCACTAAAAGCACTACGACGAATCGTACCACTAATGGAACAAGGAAAACGATACGACGAAGCATGCGCAGAAATCTACGGAGACCACTACGGAAAAAAAAACACAGAAGAAAAAATCTACCTACCACCAATCCCAGCAGACGAAATCCGAAACCCAGTAGTACTACGAGCACTATCACAAGCACGAAAAGTAATCAACGGAGTAGTACGACGATACGGATCACCAGCACGAATCCACATCGAAACAGCACGAGAAGTAGGAAAATCATTCAAAGACCGAAAAGAAATCGAAAAACGACAAGAAGAAAACCGAAAAGACCGAGAAAAAGCAGCAGCAAAATTCCGAGAATACTTCCCAAACTTCGTAGGAGAACCAAAATCAAAAGACATCCTAAAACTACGACTATACGAACAACAACACGGAAAATGCCTATACTCAGGAAAAGAAATCAACCTAGGACGACTAAACGAAAAAGGATACGTAGAAATCGACCACGCACTACCATTCTCACGAACATGAGACGACTCATTCAACAACAAAGTACTAGTACTAGGATCAGAAAACCAAAACAAAGGAAACCAAACACCATACGAATACTTCAACGGAAAAGACAACTCACGAGAATGACAAGAATTCAAAGCACGAGTAGAAACATCACGATTCCCACGATCAAAAAAACAACGAATCCTACTACAAAAATTCGACGAAGACGGATTCAAAGAACGAAACCTAAACGACACACGATACGTAAACCGATTCCTATGCCAATTCGTAGCAGACCGAATGCGACTAACAGGAAAAGGAAAAAAACGAGTATTCGCATCAAACGGACAAATCACAAACCTACTACGAGGATTCTGAGGACTACGAAAAGTACGAGCAGAAAACGACCGACACCACGCACTAGACGCAGTAGTAGTAGCATGCTCAACAGTAGCAATGCAACAAAAAATCACACGATTCGTACGATACAAAGAAATGAACGCATTCGACGGAAAAACAATCGACAAAGAAACAGGAGAAGTACTACACCAAAAAACACACTTCCCACAACCATGAGAATTCTTCGCACAAGAAGTAATGATCCGAGTATTCGGAAAACCAGACGGAAAACCAGAATTCGAAGAAGCAGACACACTAGAAAAACTACGAACACTACTAGCAGAAAAACTATCATCACGACCAGAAGCAGTACACGAATACGTAACACCACTATTCGTATCACGAGCACCAAACCGAAAAATGTCAGGACAAGGACACATGGAAACAGTAAAATCAGCAAAACGACTAGACGAAGGAGTATCAGTACTACGAGTACCACTAACACAACTAAAACTAAAAGACCTAGAAAAAATGGTAAACCGAGAACGAGAACCAAAACTATACGAAGCACTAAAAGCACGACTAGAAGCACACAAAGACGACCCAGCAAAAGCATTCGCAGAACCATTCTACAAATACGACAAAGCAGGAAACCGAACACAACAAGTAAAAGCAGTACGAGTAGAACAAGTACAAAAAACAGGAGTATGAGTACGAAACCACAACGGAATCGCAGACAACGCAACAATGGTACGAGTAGACGTATTCGAAAAAGGAGACAAATACTACCTAGTACCAATCTACTCATGACAAGTAGCAAAAGGAATCCTACCAGACCGAGCAGTAGTACAAGGAAAAGACGAAGAAGACTGACAACTAATCGACGACTCATTCAACTTCAAATTCTCACTACACCCAAACGACCTAGTAGAAGTAATCACAAAAAAAGCACGAATGTTCGGATACTTCGCATCATGCCACCGAGGAACAGGAAACATCAACATCCGAATCCACGACCTAGACCACAAAATCGGAAAAAACGGAATCCTAGAAGGAATCGGAGTAAAAACAGCACTATCATTCCAAAAATACCAAATCGACGAACTAGGAAAAGAAATCCGACCATGCCGACTAAAAAAACGACCACCAGTACGAUAA
198 Nme1Cas9 HNH切口酶之例示性胺基酸序列 MAAFKPNSINYILGLDIGIASVGWAMVEIDEEENPIRLIDLGVRVFERAEVPKTGDSLAMARRLARSVRRLTRRRAHRLLRTRRLLKREGVLQAANFDENGLIKSLPNTPWQLRAAALDRKLTPLEWSAVLLHLIKHRGYLSQRKNEGETADKELGALLKGVAGNAHALQTGDFRTPAELALNKFEKESGHIRNQRSDYSHTFSRKDLQAELILLFEKQKEFGNPHVSGGLKEGIETLLMTQRPALSGDAVQKMLGHCTFEPAEPKAAKNTYTAERFIWLTKLNNLRILEQGSERPLTDTERATLMDEPYRKSKLTYAQARKLLGLEDTAFFKGLRYGKDNAEASTLMEMKAYHAISRALEKEGLKDKKSPLNLSPELQDEIGTAFSLFKTDEDITGRLKDRIQPEILEALLKHISFDKFVQISLKALRRIVPLMEQGKRYDEACAEIYGDHYGKKNTEEKIYLPPIPADEIRNPVVLRALSQARKVINGVVRRYGSPARIHIETAREVGKSFKDRKEIEKRQEENRKDREKAAAKFREYFPNFVGEPKSKDILKLRLYEQQHGKCLYSGKEINLGRLNEKGYVEIDAALPFSRTWDDSFNNKVLVLGSENQNKGNQTPYEYFNGKDNSREWQEFKARVETSRFPRSKKQRILLQKFDEDGFKERNLNDTRYVNRFLCQFVADRMRLTGKGKKRVFASNGQITNLLRGFWGLRKVRAENDRHHALDAVVVACSTVAMQQKITRFVRYKEMNAFDGKTIDKETGEVLHQKTHFPQPWEFFAQEVMIRVFGKPDGKPEFEEADTLEKLRTLLAEKLSSRPEAVHEYVTPLFVSRAPNRKMSGQGHMETVKSAKRLDEGVSVLRVPLTQLKLKDLEKMVNREREPKLYEALKARLEAHKDDPAKAFAEPFYKYDKAGNRTQQVKAVRVEQVQKTGVWVRNHNGIADNATMVRVDVFEKGDKYYLVPIYSWQVAKGILPDRAVVQGKDEEDWQLIDDSFNFKFSLHPNDLVEVITKKARMFGYFASCHRGTGNINIRIHDLDHKIGKNGILEGIGVKTALSFQKYQIDELGKEIRPCRLKKRPPVR
199 編碼Nme1Cas9 HNH切口酶之例示性編碼序列 GCTGCTTTTAAGCCTAATTCTATTAATTATATTCTTGGTCTTGATATTGGTATTGCTTCTGTTGGTTGGGCTATGGTTGAGATTGATGAGGAGGAGAATCCTATTCGTCTTATTGATCTTGGTGTTCGTGTTTTTGAGCGTGCTGAGGTTCCTAAGACTGGTGATTCTCTTGCTATGGCTCGTCGTCTTGCTCGTTCTGTTCGTCGTCTTACTCGTCGTCGTGCTCATCGTCTTCTTCGTACTCGTCGTCTTCTTAAGCGTGAGGGTGTTCTTCAGGCTGCTAATTTTGATGAGAATGGTCTTATTAAGTCTCTTCCTAATACTCCTTGGCAGCTTCGTGCTGCTGCTCTTGATCGTAAGCTTACTCCTCTTGAGTGGTCTGCTGTTCTTCTTCATCTTATTAAGCATCGTGGTTATCTTTCTCAGCGTAAGAATGAGGGTGAGACTGCTGATAAGGAGCTTGGTGCTCTTCTTAAGGGTGTTGCTGGTAATGCTCATGCTCTTCAGACTGGTGATTTTCGTACTCCTGCTGAGCTTGCTCTTAATAAGTTTGAGAAGGAGTCTGGTCATATTCGTAATCAGCGTTCTGATTATTCTCATACTTTTTCTCGTAAGGATCTTCAGGCTGAGCTTATTCTTCTTTTTGAGAAGCAGAAGGAGTTTGGTAATCCTCATGTTTCTGGTGGTCTTAAGGAGGGTATTGAGACTCTTCTTATGACTCAGCGTCCTGCTCTTTCTGGTGATGCTGTTCAGAAGATGCTTGGTCATTGTACTTTTGAGCCTGCTGAGCCTAAGGCTGCTAAGAATACTTATACTGCTGAGCGTTTTATTTGGCTTACTAAGCTTAATAATCTTCGTATTCTTGAGCAGGGTTCTGAGCGTCCTCTTACTGATACTGAGCGTGCTACTCTTATGGATGAGCCTTATCGTAAGTCTAAGCTTACTTATGCTCAGGCTCGTAAGCTTCTTGGTCTTGAGGATACTGCTTTTTTTAAGGGTCTTCGTTATGGTAAGGATAATGCTGAGGCTTCTACTCTTATGGAGATGAAGGCTTATCATGCTATTTCTCGTGCTCTTGAGAAGGAGGGTCTTAAGGATAAGAAGTCTCCTCTTAATCTTTCTCCTGAGCTTCAGGATGAGATTGGTACTGCTTTTTCTCTTTTTAAGACTGATGAGGATATTACTGGTCGTCTTAAGGATCGTATTCAGCCTGAGATTCTTGAGGCTCTTCTTAAGCATATTTCTTTTGATAAGTTTGTTCAGATTTCTCTTAAGGCTCTTCGTCGTATTGTTCCTCTTATGGAGCAGGGTAAGCGTTATGATGAGGCTTGTGCTGAGATTTATGGTGATCATTATGGTAAGAAGAATACTGAGGAGAAGATTTATCTTCCTCCTATTCCTGCTGATGAGATTCGTAATCCTGTTGTTCTTCGTGCTCTTTCTCAGGCTCGTAAGGTTATTAATGGTGTTGTTCGTCGTTATGGTTCTCCTGCTCGTATTCATATTGAGACTGCTCGTGAGGTTGGTAAGTCTTTTAAGGATCGTAAGGAGATTGAGAAGCGTCAGGAGGAGAATCGTAAGGATCGTGAGAAGGCTGCTGCTAAGTTTCGTGAGTATTTTCCTAATTTTGTTGGTGAGCCTAAGTCTAAGGATATTCTTAAGCTTCGTCTTTATGAGCAGCAGCATGGTAAGTGTCTTTATTCTGGTAAGGAGATTAATCTTGGTCGTCTTAATGAGAAGGGTTATGTTGAGATTGATGCTGCTCTTCCTTTTTCTCGTACTTGGGATGATTCTTTTAATAATAAGGTTCTTGTTCTTGGTTCTGAGAATCAGAATAAGGGTAATCAGACTCCTTATGAGTATTTTAATGGTAAGGATAATTCTCGTGAGTGGCAGGAGTTTAAGGCTCGTGTTGAGACTTCTCGTTTTCCTCGTTCTAAGAAGCAGCGTATTCTTCTTCAGAAGTTTGATGAGGATGGTTTTAAGGAGCGTAATCTTAATGATACTCGTTATGTTAATCGTTTTCTTTGTCAGTTTGTTGCTGATCGTATGCGTCTTACTGGTAAGGGTAAGAAGCGTGTTTTTGCTTCTAATGGTCAGATTACTAATCTTCTTCGTGGTTTTTGGGGTCTTCGTAAGGTTCGTGCTGAGAATGATCGTCATCATGCTCTTGATGCTGTTGTTGTTGCTTGTTCTACTGTTGCTATGCAGCAGAAGATTACTCGTTTTGTTCGTTATAAGGAGATGAATGCTTTTGATGGTAAGACTATTGATAAGGAGACTGGTGAGGTTCTTCATCAGAAGACTCATTTTCCTCAGCCTTGGGAGTTTTTTGCTCAGGAGGTTATGATTCGTGTTTTTGGTAAGCCTGATGGTAAGCCTGAGTTTGAGGAGGCTGATACTCTTGAGAAGCTTCGTACTCTTCTTGCTGAGAAGCTTTCTTCTCGTCCTGAGGCTGTTCATGAGTATGTTACTCCTCTTTTTGTTTCTCGTGCTCCTAATCGTAAGATGTCTGGTCAGGGTCATATGGAGACTGTTAAGTCTGCTAAGCGTCTTGATGAGGGTGTTTCTGTTCTTCGTGTTCCTCTTACTCAGCTTAAGCTTAAGGATCTTGAGAAGATGGTTAATCGTGAGCGTGAGCCTAAGCTTTATGAGGCTCTTAAGGCTCGTCTTGAGGCTCATAAGGATGATCCTGCTAAGGCTTTTGCTGAGCCTTTTTATAAGTATGATAAGGCTGGTAATCGTACTCAGCAGGTTAAGGCTGTTCGTGTTGAGCAGGTTCAGAAGACTGGTGTTTGGGTTCGTAATCATAATGGTATTGCTGATAATGCTACTATGGTTCGTGTTGATGTTTTTGAGAAGGGTGATAAGTATTATCTTGTTCCTATTTATTCTTGGCAGGTTGCTAAGGGTATTCTTCCTGATCGTGCTGTTGTTCAGGGTAAGGATGAGGAGGATTGGCAGCTTATTGATGATTCTTTTAATTTTAAGTTTTCTCTTCATCCTAATGATCTTGTTGAGGTTATTACTAAGAAGGCTCGTATGTTTGGTTATTTTGCTTCTTGTCATCGTGGTACTGGTAATATTAATATTCGTATTCATGATCTTGATCATAAGATTGGTAAGAATGGTATTCTTGAGGGTATTGGTGTTAAGACTGCTCTTTCTTTTCAGAAGTATCAGATTGATGAGCTTGGTAAGGAGATTCGTCCTTGTCGTCTTAAGAAGCGTCCTCCTGTTCGT
200 編碼Nme1Cas9 HNH切口酶之例示性編碼序列 GCCGCCTTCAAGCCCAACTCCATCAACTACATCCTGGGCCTGGACATCGGCATCGCCTCCGTGGGCTGGGCCATGGTGGAGATCGACGAGGAGGAGAACCCCATCCGGCTGATCGACCTGGGCGTGCGGGTGTTCGAGCGGGCCGAGGTGCCCAAGACCGGCGACTCCCTGGCCATGGCCCGGCGGCTGGCCCGGTCCGTGCGGCGGCTGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCTGCTGCGGACCCGGCGGCTGCTGAAGCGGGAGGGCGTGCTGCAGGCCGCCAACTTCGACGAGAACGGCCTGATCAAGTCCCTGCCCAACACCCCCTGGCAGCTGCGGGCCGCCGCCCTGGACCGGAAGCTGACCCCCCTGGAGTGGTCCGCCGTGCTGCTGCACCTGATCAAGCACCGGGGCTACCTGTCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCTGGGCGCCCTGCTGAAGGGCGTGGCCGGCAACGCCCACGCCCTGCAGACCGGCGACTTCCGGACCCCCGCCGAGCTGGCCCTGAACAAGTTCGAGAAGGAGTCCGGCCACATCCGGAACCAGCGGTCCGACTACTCCCACACCTTCTCCCGGAAGGACCTGCAGGCCGAGCTGATCCTGCTGTTCGAGAAGCAGAAGGAGTTCGGCAACCCCCACGTGTCCGGCGGCCTGAAGGAGGGCATCGAGACCCTGCTGATGACCCAGCGGCCCGCCCTGTCCGGCGACGCCGTGCAGAAGATGCTGGGCCACTGCACCTTCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCTACACCGCCGAGCGGTTCATCTGGCTGACCAAGCTGAACAACCTGCGGATCCTGGAGCAGGGCTCCGAGCGGCCCCTGACCGACACCGAGCGGGCCACCCTGATGGACGAGCCCTACCGGAAGTCCAAGCTGACCTACGCCCAGGCCCGGAAGCTGCTGGGCCTGGAGGACACCGCCTTCTTCAAGGGCCTGCGGTACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCTCCACCCTGATGGAGATGAAGGCCTACCACGCCATCTCCCGGGCCCTGGAGAAGGAGGGCCTGAAGGACAAGAAGTCCCCCCTGAACCTGTCCCCCGAGCTGCAGGACGAGATCGGCACCGCCTTCTCCCTGTTCAAGACCGACGAGGACATCACCGGCCGGCTGAAGGACCGGATCCAGCCCGAGATCCTGGAGGCCCTGCTGAAGCACATCTCCTTCGACAAGTTCGTGCAGATCTCCCTGAAGGCCCTGCGGCGGATCGTGCCCCTGATGGAGCAGGGCAAGCGGTACGACGAGGCCTGCGCCGAGATCTACGGCGACCACTACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGATCTACCTGCCCCCCATCCCCGCCGACGAGATCCGGAACCCCGTGGTGCTGCGGGCCCTGTCCCAGGCCCGGAAGGTGATCAACGGCGTGGTGCGGCGGTACGGCTCCCCCGCCCGGATCCACATCGAGACCGCCCGGGAGGTGGGCAAGTCCTTCAAGGACCGGAAGGAGATCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGTTCCGGGAGTACTTCCCCAACTTCGTGGGCGAGCCCAAGTCCAAGGACATCCTGAAGCTGCGGCTGTACGAGCAGCAGCACGGCAAGTGCCTGTACTCCGGCAAGGAGATCAACCTGGGCCGGCTGAACGAGAAGGGCTACGTGGAGATCGACGCCGCCCTGCCCTTCTCCCGGACCTGGGACGACTCCTTCAACAACAAGGTGCTGGTGCTGGGCTCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCTACGAGTACTTCAACGGCAAGGACAACTCCCGGGAGTGGCAGGAGTTCAAGGCCCGGGTGGAGACCTCCCGGTTCCCCCGGTCCAAGAAGCAGCGGATCCTGCTGCAGAAGTTCGACGAGGACGGCTTCAAGGAGCGGAACCTGAACGACACCCGGTACGTGAACCGGTTCCTGTGCCAGTTCGTGGCCGACCGGATGCGGCTGACCGGCAAGGGCAAGAAGCGGGTGTTCGCCTCCAACGGCCAGATCACCAACCTGCTGCGGGGCTTCTGGGGCCTGCGGAAGGTGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCTGGACGCCGTGGTGGTGGCCTGCTCCACCGTGGCCATGCAGCAGAAGATCACCCGGTTCGTGCGGTACAAGGAGATGAACGCCTTCGACGGCAAGACCATCGACAAGGAGACCGGCGAGGTGCTGCACCAGAAGACCCACTTCCCCCAGCCCTGGGAGTTCTTCGCCCAGGAGGTGATGATCCGGGTGTTCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGTTCGAGGAGGCCGACACCCTGGAGAAGCTGCGGACCCTGCTGGCCGAGAAGCTGTCCTCCCGGCCCGAGGCCGTGCACGAGTACGTGACCCCCCTGTTCGTGTCCCGGGCCCCCAACCGGAAGATGTCCGGCCAGGGCCACATGGAGACCGTGAAGTCCGCCAAGCGGCTGGACGAGGGCGTGTCCGTGCTGCGGGTGCCCCTGACCCAGCTGAAGCTGAAGGACCTGGAGAAGATGGTGAACCGGGAGCGGGAGCCCAAGCTGTACGAGGCCCTGAAGGCCCGGCTGGAGGCCCACAAGGACGACCCCGCCAAGGCCTTCGCCGAGCCCTTCTACAAGTACGACAAGGCCGGCAACCGGACCCAGCAGGTGAAGGCCGTGCGGGTGGAGCAGGTGCAGAAGACCGGCGTGTGGGTGCGGAACCACAACGGCATCGCCGACAACGCCACCATGGTGCGGGTGGACGTGTTCGAGAAGGGCGACAAGTACTACCTGGTGCCCATCTACTCCTGGCAGGTGGCCAAGGGCATCCTGCCCGACCGGGCCGTGGTGCAGGGCAAGGACGAGGAGGACTGGCAGCTGATCGACGACTCCTTCAACTTCAAGTTCTCCCTGCACCCCAACGACCTGGTGGAGGTGATCACCAAGAAGGCCCGGATGTTCGGCTACTTCGCCTCCTGCCACCGGGGCACCGGCAACATCAACATCCGGATCCACGACCTGGACCACAAGATCGGCAAGAACGGCATCCTGGAGGGCATCGGCGTGAAGACCGCCCTGTCCTTCCAGAAGTACCAGATCGACGAGCTGGGCAAGGAGATCCGGCCCTGCCGGCTGAAGAAGCGGCCCCCCGTGCGG
201 編碼Nme1Cas9 HNH切口酶之例示性編碼序列 GCAGCATTCAAACCAAACTCAATCAACTACATCCTAGGACTAGACATCGGAATCGCATCAGTAGGATGAGCAATGGTAGAAATCGACGAAGAAGAAAACCCAATCCGACTAATCGACCTAGGAGTACGAGTATTCGAACGAGCAGAAGTACCAAAAACAGGAGACTCACTAGCAATGGCACGACGACTAGCACGATCAGTACGACGACTAACACGACGACGAGCACACCGACTACTACGAACACGACGACTACTAAAACGAGAAGGAGTACTACAAGCAGCAAACTTCGACGAAAACGGACTAATCAAATCACTACCAAACACACCATGACAACTACGAGCAGCAGCACTAGACCGAAAACTAACACCACTAGAATGATCAGCAGTACTACTACACCTAATCAAACACCGAGGATACCTATCACAACGAAAAAACGAAGGAGAAACAGCAGACAAAGAACTAGGAGCACTACTAAAAGGAGTAGCAGGAAACGCACACGCACTACAAACAGGAGACTTCCGAACACCAGCAGAACTAGCACTAAACAAATTCGAAAAAGAATCAGGACACATCCGAAACCAACGATCAGACTACTCACACACATTCTCACGAAAAGACCTACAAGCAGAACTAATCCTACTATTCGAAAAACAAAAAGAATTCGGAAACCCACACGTATCAGGAGGACTAAAAGAAGGAATCGAAACACTACTAATGACACAACGACCAGCACTATCAGGAGACGCAGTACAAAAAATGCTAGGACACTGCACATTCGAACCAGCAGAACCAAAAGCAGCAAAAAACACATACACAGCAGAACGATTCATCTGACTAACAAAACTAAACAACCTACGAATCCTAGAACAAGGATCAGAACGACCACTAACAGACACAGAACGAGCAACACTAATGGACGAACCATACCGAAAATCAAAACTAACATACGCACAAGCACGAAAACTACTAGGACTAGAAGACACAGCATTCTTCAAAGGACTACGATACGGAAAAGACAACGCAGAAGCATCAACACTAATGGAAATGAAAGCATACCACGCAATCTCACGAGCACTAGAAAAAGAAGGACTAAAAGACAAAAAATCACCACTAAACCTATCACCAGAACTACAAGACGAAATCGGAACAGCATTCTCACTATTCAAAACAGACGAAGACATCACAGGACGACTAAAAGACCGAATCCAACCAGAAATCCTAGAAGCACTACTAAAACACATCTCATTCGACAAATTCGTACAAATCTCACTAAAAGCACTACGACGAATCGTACCACTAATGGAACAAGGAAAACGATACGACGAAGCATGCGCAGAAATCTACGGAGACCACTACGGAAAAAAAAACACAGAAGAAAAAATCTACCTACCACCAATCCCAGCAGACGAAATCCGAAACCCAGTAGTACTACGAGCACTATCACAAGCACGAAAAGTAATCAACGGAGTAGTACGACGATACGGATCACCAGCACGAATCCACATCGAAACAGCACGAGAAGTAGGAAAATCATTCAAAGACCGAAAAGAAATCGAAAAACGACAAGAAGAAAACCGAAAAGACCGAGAAAAAGCAGCAGCAAAATTCCGAGAATACTTCCCAAACTTCGTAGGAGAACCAAAATCAAAAGACATCCTAAAACTACGACTATACGAACAACAACACGGAAAATGCCTATACTCAGGAAAAGAAATCAACCTAGGACGACTAAACGAAAAAGGATACGTAGAAATCGACGCAGCACTACCATTCTCACGAACATGAGACGACTCATTCAACAACAAAGTACTAGTACTAGGATCAGAAAACCAAAACAAAGGAAACCAAACACCATACGAATACTTCAACGGAAAAGACAACTCACGAGAATGACAAGAATTCAAAGCACGAGTAGAAACATCACGATTCCCACGATCAAAAAAACAACGAATCCTACTACAAAAATTCGACGAAGACGGATTCAAAGAACGAAACCTAAACGACACACGATACGTAAACCGATTCCTATGCCAATTCGTAGCAGACCGAATGCGACTAACAGGAAAAGGAAAAAAACGAGTATTCGCATCAAACGGACAAATCACAAACCTACTACGAGGATTCTGAGGACTACGAAAAGTACGAGCAGAAAACGACCGACACCACGCACTAGACGCAGTAGTAGTAGCATGCTCAACAGTAGCAATGCAACAAAAAATCACACGATTCGTACGATACAAAGAAATGAACGCATTCGACGGAAAAACAATCGACAAAGAAACAGGAGAAGTACTACACCAAAAAACACACTTCCCACAACCATGAGAATTCTTCGCACAAGAAGTAATGATCCGAGTATTCGGAAAACCAGACGGAAAACCAGAATTCGAAGAAGCAGACACACTAGAAAAACTACGAACACTACTAGCAGAAAAACTATCATCACGACCAGAAGCAGTACACGAATACGTAACACCACTATTCGTATCACGAGCACCAAACCGAAAAATGTCAGGACAAGGACACATGGAAACAGTAAAATCAGCAAAACGACTAGACGAAGGAGTATCAGTACTACGAGTACCACTAACACAACTAAAACTAAAAGACCTAGAAAAAATGGTAAACCGAGAACGAGAACCAAAACTATACGAAGCACTAAAAGCACGACTAGAAGCACACAAAGACGACCCAGCAAAAGCATTCGCAGAACCATTCTACAAATACGACAAAGCAGGAAACCGAACACAACAAGTAAAAGCAGTACGAGTAGAACAAGTACAAAAAACAGGAGTATGAGTACGAAACCACAACGGAATCGCAGACAACGCAACAATGGTACGAGTAGACGTATTCGAAAAAGGAGACAAATACTACCTAGTACCAATCTACTCATGACAAGTAGCAAAAGGAATCCTACCAGACCGAGCAGTAGTACAAGGAAAAGACGAAGAAGACTGACAACTAATCGACGACTCATTCAACTTCAAATTCTCACTACACCCAAACGACCTAGTAGAAGTAATCACAAAAAAAGCACGAATGTTCGGATACTTCGCATCATGCCACCGAGGAACAGGAAACATCAACATCCGAATCCACGACCTAGACCACAAAATCGGAAAAAACGGAATCCTAGAAGGAATCGGAGTAAAAACAGCACTATCATTCCAAAAATACCAAATCGACGAACTAGGAAAAGAAATCCGACCATGCCGACTAAAAAAACGACCACCAGTACGA
202 Nme1Cas9 HNH切口酶之例示性開放閱讀框 ATGGCTGCTTTTAAGCCTAATTCTATTAATTATATTCTTGGTCTTGATATTGGTATTGCTTCTGTTGGTTGGGCTATGGTTGAGATTGATGAGGAGGAGAATCCTATTCGTCTTATTGATCTTGGTGTTCGTGTTTTTGAGCGTGCTGAGGTTCCTAAGACTGGTGATTCTCTTGCTATGGCTCGTCGTCTTGCTCGTTCTGTTCGTCGTCTTACTCGTCGTCGTGCTCATCGTCTTCTTCGTACTCGTCGTCTTCTTAAGCGTGAGGGTGTTCTTCAGGCTGCTAATTTTGATGAGAATGGTCTTATTAAGTCTCTTCCTAATACTCCTTGGCAGCTTCGTGCTGCTGCTCTTGATCGTAAGCTTACTCCTCTTGAGTGGTCTGCTGTTCTTCTTCATCTTATTAAGCATCGTGGTTATCTTTCTCAGCGTAAGAATGAGGGTGAGACTGCTGATAAGGAGCTTGGTGCTCTTCTTAAGGGTGTTGCTGGTAATGCTCATGCTCTTCAGACTGGTGATTTTCGTACTCCTGCTGAGCTTGCTCTTAATAAGTTTGAGAAGGAGTCTGGTCATATTCGTAATCAGCGTTCTGATTATTCTCATACTTTTTCTCGTAAGGATCTTCAGGCTGAGCTTATTCTTCTTTTTGAGAAGCAGAAGGAGTTTGGTAATCCTCATGTTTCTGGTGGTCTTAAGGAGGGTATTGAGACTCTTCTTATGACTCAGCGTCCTGCTCTTTCTGGTGATGCTGTTCAGAAGATGCTTGGTCATTGTACTTTTGAGCCTGCTGAGCCTAAGGCTGCTAAGAATACTTATACTGCTGAGCGTTTTATTTGGCTTACTAAGCTTAATAATCTTCGTATTCTTGAGCAGGGTTCTGAGCGTCCTCTTACTGATACTGAGCGTGCTACTCTTATGGATGAGCCTTATCGTAAGTCTAAGCTTACTTATGCTCAGGCTCGTAAGCTTCTTGGTCTTGAGGATACTGCTTTTTTTAAGGGTCTTCGTTATGGTAAGGATAATGCTGAGGCTTCTACTCTTATGGAGATGAAGGCTTATCATGCTATTTCTCGTGCTCTTGAGAAGGAGGGTCTTAAGGATAAGAAGTCTCCTCTTAATCTTTCTCCTGAGCTTCAGGATGAGATTGGTACTGCTTTTTCTCTTTTTAAGACTGATGAGGATATTACTGGTCGTCTTAAGGATCGTATTCAGCCTGAGATTCTTGAGGCTCTTCTTAAGCATATTTCTTTTGATAAGTTTGTTCAGATTTCTCTTAAGGCTCTTCGTCGTATTGTTCCTCTTATGGAGCAGGGTAAGCGTTATGATGAGGCTTGTGCTGAGATTTATGGTGATCATTATGGTAAGAAGAATACTGAGGAGAAGATTTATCTTCCTCCTATTCCTGCTGATGAGATTCGTAATCCTGTTGTTCTTCGTGCTCTTTCTCAGGCTCGTAAGGTTATTAATGGTGTTGTTCGTCGTTATGGTTCTCCTGCTCGTATTCATATTGAGACTGCTCGTGAGGTTGGTAAGTCTTTTAAGGATCGTAAGGAGATTGAGAAGCGTCAGGAGGAGAATCGTAAGGATCGTGAGAAGGCTGCTGCTAAGTTTCGTGAGTATTTTCCTAATTTTGTTGGTGAGCCTAAGTCTAAGGATATTCTTAAGCTTCGTCTTTATGAGCAGCAGCATGGTAAGTGTCTTTATTCTGGTAAGGAGATTAATCTTGGTCGTCTTAATGAGAAGGGTTATGTTGAGATTGATGCTGCTCTTCCTTTTTCTCGTACTTGGGATGATTCTTTTAATAATAAGGTTCTTGTTCTTGGTTCTGAGAATCAGAATAAGGGTAATCAGACTCCTTATGAGTATTTTAATGGTAAGGATAATTCTCGTGAGTGGCAGGAGTTTAAGGCTCGTGTTGAGACTTCTCGTTTTCCTCGTTCTAAGAAGCAGCGTATTCTTCTTCAGAAGTTTGATGAGGATGGTTTTAAGGAGCGTAATCTTAATGATACTCGTTATGTTAATCGTTTTCTTTGTCAGTTTGTTGCTGATCGTATGCGTCTTACTGGTAAGGGTAAGAAGCGTGTTTTTGCTTCTAATGGTCAGATTACTAATCTTCTTCGTGGTTTTTGGGGTCTTCGTAAGGTTCGTGCTGAGAATGATCGTCATCATGCTCTTGATGCTGTTGTTGTTGCTTGTTCTACTGTTGCTATGCAGCAGAAGATTACTCGTTTTGTTCGTTATAAGGAGATGAATGCTTTTGATGGTAAGACTATTGATAAGGAGACTGGTGAGGTTCTTCATCAGAAGACTCATTTTCCTCAGCCTTGGGAGTTTTTTGCTCAGGAGGTTATGATTCGTGTTTTTGGTAAGCCTGATGGTAAGCCTGAGTTTGAGGAGGCTGATACTCTTGAGAAGCTTCGTACTCTTCTTGCTGAGAAGCTTTCTTCTCGTCCTGAGGCTGTTCATGAGTATGTTACTCCTCTTTTTGTTTCTCGTGCTCCTAATCGTAAGATGTCTGGTCAGGGTCATATGGAGACTGTTAAGTCTGCTAAGCGTCTTGATGAGGGTGTTTCTGTTCTTCGTGTTCCTCTTACTCAGCTTAAGCTTAAGGATCTTGAGAAGATGGTTAATCGTGAGCGTGAGCCTAAGCTTTATGAGGCTCTTAAGGCTCGTCTTGAGGCTCATAAGGATGATCCTGCTAAGGCTTTTGCTGAGCCTTTTTATAAGTATGATAAGGCTGGTAATCGTACTCAGCAGGTTAAGGCTGTTCGTGTTGAGCAGGTTCAGAAGACTGGTGTTTGGGTTCGTAATCATAATGGTATTGCTGATAATGCTACTATGGTTCGTGTTGATGTTTTTGAGAAGGGTGATAAGTATTATCTTGTTCCTATTTATTCTTGGCAGGTTGCTAAGGGTATTCTTCCTGATCGTGCTGTTGTTCAGGGTAAGGATGAGGAGGATTGGCAGCTTATTGATGATTCTTTTAATTTTAAGTTTTCTCTTCATCCTAATGATCTTGTTGAGGTTATTACTAAGAAGGCTCGTATGTTTGGTTATTTTGCTTCTTGTCATCGTGGTACTGGTAATATTAATATTCGTATTCATGATCTTGATCATAAGATTGGTAAGAATGGTATTCTTGAGGGTATTGGTGTTAAGACTGCTCTTTCTTTTCAGAAGTATCAGATTGATGAGCTTGGTAAGGAGATTCGTCCTTGTCGTCTTAAGAAGCGTCCTCCTGTTCGTUGA
203 Nme1Cas9 HNH切口酶之例示性開放閱讀框 ATGGCCGCCTTCAAGCCCAACTCCATCAACTACATCCTGGGCCTGGACATCGGCATCGCCTCCGTGGGCTGGGCCATGGTGGAGATCGACGAGGAGGAGAACCCCATCCGGCTGATCGACCTGGGCGTGCGGGTGTTCGAGCGGGCCGAGGTGCCCAAGACCGGCGACTCCCTGGCCATGGCCCGGCGGCTGGCCCGGTCCGTGCGGCGGCTGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCTGCTGCGGACCCGGCGGCTGCTGAAGCGGGAGGGCGTGCTGCAGGCCGCCAACTTCGACGAGAACGGCCTGATCAAGTCCCTGCCCAACACCCCCTGGCAGCTGCGGGCCGCCGCCCTGGACCGGAAGCTGACCCCCCTGGAGTGGTCCGCCGTGCTGCTGCACCTGATCAAGCACCGGGGCTACCTGTCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCTGGGCGCCCTGCTGAAGGGCGTGGCCGGCAACGCCCACGCCCTGCAGACCGGCGACTTCCGGACCCCCGCCGAGCTGGCCCTGAACAAGTTCGAGAAGGAGTCCGGCCACATCCGGAACCAGCGGTCCGACTACTCCCACACCTTCTCCCGGAAGGACCTGCAGGCCGAGCTGATCCTGCTGTTCGAGAAGCAGAAGGAGTTCGGCAACCCCCACGTGTCCGGCGGCCTGAAGGAGGGCATCGAGACCCTGCTGATGACCCAGCGGCCCGCCCTGTCCGGCGACGCCGTGCAGAAGATGCTGGGCCACTGCACCTTCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCTACACCGCCGAGCGGTTCATCTGGCTGACCAAGCTGAACAACCTGCGGATCCTGGAGCAGGGCTCCGAGCGGCCCCTGACCGACACCGAGCGGGCCACCCTGATGGACGAGCCCTACCGGAAGTCCAAGCTGACCTACGCCCAGGCCCGGAAGCTGCTGGGCCTGGAGGACACCGCCTTCTTCAAGGGCCTGCGGTACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCTCCACCCTGATGGAGATGAAGGCCTACCACGCCATCTCCCGGGCCCTGGAGAAGGAGGGCCTGAAGGACAAGAAGTCCCCCCTGAACCTGTCCCCCGAGCTGCAGGACGAGATCGGCACCGCCTTCTCCCTGTTCAAGACCGACGAGGACATCACCGGCCGGCTGAAGGACCGGATCCAGCCCGAGATCCTGGAGGCCCTGCTGAAGCACATCTCCTTCGACAAGTTCGTGCAGATCTCCCTGAAGGCCCTGCGGCGGATCGTGCCCCTGATGGAGCAGGGCAAGCGGTACGACGAGGCCTGCGCCGAGATCTACGGCGACCACTACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGATCTACCTGCCCCCCATCCCCGCCGACGAGATCCGGAACCCCGTGGTGCTGCGGGCCCTGTCCCAGGCCCGGAAGGTGATCAACGGCGTGGTGCGGCGGTACGGCTCCCCCGCCCGGATCCACATCGAGACCGCCCGGGAGGTGGGCAAGTCCTTCAAGGACCGGAAGGAGATCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGTTCCGGGAGTACTTCCCCAACTTCGTGGGCGAGCCCAAGTCCAAGGACATCCTGAAGCTGCGGCTGTACGAGCAGCAGCACGGCAAGTGCCTGTACTCCGGCAAGGAGATCAACCTGGGCCGGCTGAACGAGAAGGGCTACGTGGAGATCGACGCCGCCCTGCCCTTCTCCCGGACCTGGGACGACTCCTTCAACAACAAGGTGCTGGTGCTGGGCTCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCTACGAGTACTTCAACGGCAAGGACAACTCCCGGGAGTGGCAGGAGTTCAAGGCCCGGGTGGAGACCTCCCGGTTCCCCCGGTCCAAGAAGCAGCGGATCCTGCTGCAGAAGTTCGACGAGGACGGCTTCAAGGAGCGGAACCTGAACGACACCCGGTACGTGAACCGGTTCCTGTGCCAGTTCGTGGCCGACCGGATGCGGCTGACCGGCAAGGGCAAGAAGCGGGTGTTCGCCTCCAACGGCCAGATCACCAACCTGCTGCGGGGCTTCTGGGGCCTGCGGAAGGTGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCTGGACGCCGTGGTGGTGGCCTGCTCCACCGTGGCCATGCAGCAGAAGATCACCCGGTTCGTGCGGTACAAGGAGATGAACGCCTTCGACGGCAAGACCATCGACAAGGAGACCGGCGAGGTGCTGCACCAGAAGACCCACTTCCCCCAGCCCTGGGAGTTCTTCGCCCAGGAGGTGATGATCCGGGTGTTCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGTTCGAGGAGGCCGACACCCTGGAGAAGCTGCGGACCCTGCTGGCCGAGAAGCTGTCCTCCCGGCCCGAGGCCGTGCACGAGTACGTGACCCCCCTGTTCGTGTCCCGGGCCCCCAACCGGAAGATGTCCGGCCAGGGCCACATGGAGACCGTGAAGTCCGCCAAGCGGCTGGACGAGGGCGTGTCCGTGCTGCGGGTGCCCCTGACCCAGCTGAAGCTGAAGGACCTGGAGAAGATGGTGAACCGGGAGCGGGAGCCCAAGCTGTACGAGGCCCTGAAGGCCCGGCTGGAGGCCCACAAGGACGACCCCGCCAAGGCCTTCGCCGAGCCCTTCTACAAGTACGACAAGGCCGGCAACCGGACCCAGCAGGTGAAGGCCGTGCGGGTGGAGCAGGTGCAGAAGACCGGCGTGTGGGTGCGGAACCACAACGGCATCGCCGACAACGCCACCATGGTGCGGGTGGACGTGTTCGAGAAGGGCGACAAGTACTACCTGGTGCCCATCTACTCCTGGCAGGTGGCCAAGGGCATCCTGCCCGACCGGGCCGTGGTGCAGGGCAAGGACGAGGAGGACTGGCAGCTGATCGACGACTCCTTCAACTTCAAGTTCTCCCTGCACCCCAACGACCTGGTGGAGGTGATCACCAAGAAGGCCCGGATGTTCGGCTACTTCGCCTCCTGCCACCGGGGCACCGGCAACATCAACATCCGGATCCACGACCTGGACCACAAGATCGGCAAGAACGGCATCCTGGAGGGCATCGGCGTGAAGACCGCCCTGTCCTTCCAGAAGTACCAGATCGACGAGCTGGGCAAGGAGATCCGGCCCTGCCGGCTGAAGAAGCGGCCCCCCGTGCGGUGA
204 Nme1Cas9 HNH切口酶之例示性開放閱讀框 ATGGCAGCATTCAAACCAAACTCAATCAACTACATCCTAGGACTAGACATCGGAATCGCATCAGTAGGATGAGCAATGGTAGAAATCGACGAAGAAGAAAACCCAATCCGACTAATCGACCTAGGAGTACGAGTATTCGAACGAGCAGAAGTACCAAAAACAGGAGACTCACTAGCAATGGCACGACGACTAGCACGATCAGTACGACGACTAACACGACGACGAGCACACCGACTACTACGAACACGACGACTACTAAAACGAGAAGGAGTACTACAAGCAGCAAACTTCGACGAAAACGGACTAATCAAATCACTACCAAACACACCATGACAACTACGAGCAGCAGCACTAGACCGAAAACTAACACCACTAGAATGATCAGCAGTACTACTACACCTAATCAAACACCGAGGATACCTATCACAACGAAAAAACGAAGGAGAAACAGCAGACAAAGAACTAGGAGCACTACTAAAAGGAGTAGCAGGAAACGCACACGCACTACAAACAGGAGACTTCCGAACACCAGCAGAACTAGCACTAAACAAATTCGAAAAAGAATCAGGACACATCCGAAACCAACGATCAGACTACTCACACACATTCTCACGAAAAGACCTACAAGCAGAACTAATCCTACTATTCGAAAAACAAAAAGAATTCGGAAACCCACACGTATCAGGAGGACTAAAAGAAGGAATCGAAACACTACTAATGACACAACGACCAGCACTATCAGGAGACGCAGTACAAAAAATGCTAGGACACTGCACATTCGAACCAGCAGAACCAAAAGCAGCAAAAAACACATACACAGCAGAACGATTCATCTGACTAACAAAACTAAACAACCTACGAATCCTAGAACAAGGATCAGAACGACCACTAACAGACACAGAACGAGCAACACTAATGGACGAACCATACCGAAAATCAAAACTAACATACGCACAAGCACGAAAACTACTAGGACTAGAAGACACAGCATTCTTCAAAGGACTACGATACGGAAAAGACAACGCAGAAGCATCAACACTAATGGAAATGAAAGCATACCACGCAATCTCACGAGCACTAGAAAAAGAAGGACTAAAAGACAAAAAATCACCACTAAACCTATCACCAGAACTACAAGACGAAATCGGAACAGCATTCTCACTATTCAAAACAGACGAAGACATCACAGGACGACTAAAAGACCGAATCCAACCAGAAATCCTAGAAGCACTACTAAAACACATCTCATTCGACAAATTCGTACAAATCTCACTAAAAGCACTACGACGAATCGTACCACTAATGGAACAAGGAAAACGATACGACGAAGCATGCGCAGAAATCTACGGAGACCACTACGGAAAAAAAAACACAGAAGAAAAAATCTACCTACCACCAATCCCAGCAGACGAAATCCGAAACCCAGTAGTACTACGAGCACTATCACAAGCACGAAAAGTAATCAACGGAGTAGTACGACGATACGGATCACCAGCACGAATCCACATCGAAACAGCACGAGAAGTAGGAAAATCATTCAAAGACCGAAAAGAAATCGAAAAACGACAAGAAGAAAACCGAAAAGACCGAGAAAAAGCAGCAGCAAAATTCCGAGAATACTTCCCAAACTTCGTAGGAGAACCAAAATCAAAAGACATCCTAAAACTACGACTATACGAACAACAACACGGAAAATGCCTATACTCAGGAAAAGAAATCAACCTAGGACGACTAAACGAAAAAGGATACGTAGAAATCGACGCAGCACTACCATTCTCACGAACATGAGACGACTCATTCAACAACAAAGTACTAGTACTAGGATCAGAAAACCAAAACAAAGGAAACCAAACACCATACGAATACTTCAACGGAAAAGACAACTCACGAGAATGACAAGAATTCAAAGCACGAGTAGAAACATCACGATTCCCACGATCAAAAAAACAACGAATCCTACTACAAAAATTCGACGAAGACGGATTCAAAGAACGAAACCTAAACGACACACGATACGTAAACCGATTCCTATGCCAATTCGTAGCAGACCGAATGCGACTAACAGGAAAAGGAAAAAAACGAGTATTCGCATCAAACGGACAAATCACAAACCTACTACGAGGATTCTGAGGACTACGAAAAGTACGAGCAGAAAACGACCGACACCACGCACTAGACGCAGTAGTAGTAGCATGCTCAACAGTAGCAATGCAACAAAAAATCACACGATTCGTACGATACAAAGAAATGAACGCATTCGACGGAAAAACAATCGACAAAGAAACAGGAGAAGTACTACACCAAAAAACACACTTCCCACAACCATGAGAATTCTTCGCACAAGAAGTAATGATCCGAGTATTCGGAAAACCAGACGGAAAACCAGAATTCGAAGAAGCAGACACACTAGAAAAACTACGAACACTACTAGCAGAAAAACTATCATCACGACCAGAAGCAGTACACGAATACGTAACACCACTATTCGTATCACGAGCACCAAACCGAAAAATGTCAGGACAAGGACACATGGAAACAGTAAAATCAGCAAAACGACTAGACGAAGGAGTATCAGTACTACGAGTACCACTAACACAACTAAAACTAAAAGACCTAGAAAAAATGGTAAACCGAGAACGAGAACCAAAACTATACGAAGCACTAAAAGCACGACTAGAAGCACACAAAGACGACCCAGCAAAAGCATTCGCAGAACCATTCTACAAATACGACAAAGCAGGAAACCGAACACAACAAGTAAAAGCAGTACGAGTAGAACAAGTACAAAAAACAGGAGTATGAGTACGAAACCACAACGGAATCGCAGACAACGCAACAATGGTACGAGTAGACGTATTCGAAAAAGGAGACAAATACTACCTAGTACCAATCTACTCATGACAAGTAGCAAAAGGAATCCTACCAGACCGAGCAGTAGTACAAGGAAAAGACGAAGAAGACTGACAACTAATCGACGACTCATTCAACTTCAAATTCTCACTACACCCAAACGACCTAGTAGAAGTAATCACAAAAAAAGCACGAATGTTCGGATACTTCGCATCATGCCACCGAGGAACAGGAAACATCAACATCCGAATCCACGACCTAGACCACAAAATCGGAAAAAACGGAATCCTAGAAGGAATCGGAGTAAAAACAGCACTATCATTCCAAAAATACCAAATCGACGAACTAGGAAAAGAAATCCGACCATGCCGACTAAAAAAACGACCACCAGTACGAUAA
205 Nme2Cas9裂解酶之例示性胺基酸序列 MAAFKPNPINYILGLDIGIASVGWAMVEIDEEENPIRLIDLGVRVFERAEVPKTGDSLAMARRLARSVRRLTRRRAHRLLRARRLLKREGVLQAADFDENGLIKSLPNTPWQLRAAALDRKLTPLEWSAVLLHLIKHRGYLSQRKNEGETADKELGALLKGVANNAHALQTGDFRTPAELALNKFEKESGHIRNQRGDYSHTFSRKDLQAELILLFEKQKEFGNPHVSGGLKEGIETLLMTQRPALSGDAVQKMLGHCTFEPAEPKAAKNTYTAERFIWLTKLNNLRILEQGSERPLTDTERATLMDEPYRKSKLTYAQARKLLGLEDTAFFKGLRYGKDNAEASTLMEMKAYHAISRALEKEGLKDKKSPLNLSSELQDEIGTAFSLFKTDEDITGRLKDRVQPEILEALLKHISFDKFVQISLKALRRIVPLMEQGKRYDEACAEIYGDHYGKKNTEEKIYLPPIPADEIRNPVVLRALSQARKVINGVVRRYGSPARIHIETAREVGKSFKDRKEIEKRQEENRKDREKAAAKFREYFPNFVGEPKSKDILKLRLYEQQHGKCLYSGKEINLVRLNEKGYVEIDHALPFSRTWDDSFNNKVLVLGSENQNKGNQTPYEYFNGKDNSREWQEFKARVETSRFPRSKKQRILLQKFDEDGFKECNLNDTRYVNRFLCQFVADHILLTGKGKRRVFASNGQITNLLRGFWGLRKVRAENDRHHALDAVVVACSTVAMQQKITRFVRYKEMNAFDGKTIDKETGKVLHQKTHFPQPWEFFAQEVMIRVFGKPDGKPEFEEADTPEKLRTLLAEKLSSRPEAVHEYVTPLFVSRAPNRKMSGAHKDTLRSAKRFVKHNEKISVKRVWLTEIKLADLENMVNYKNGREIELYEALKARLEAYGGNAKQAFDPKDNPFYKKGGQLVKAVRVEKTQESGVLLNKKNAYTIADNGDMVRVDVFCKVDKKGKNQYFIVPIYAWQVAENILPDIDCKGYRIDDSYTFCFSLHKYDLIAFQKDEKSKVEFAYYINCDSSNGRFYLAWHDKGSKEQQFRISTQNLVLIQKYQVNELGKEIRPCRLKKRPPVR
206 編碼Nme2Cas9裂解酶之例示性編碼序列 GCTGCTTTTAAGCCTAATCCTATTAATTATATTCTTGGTCTTGATATTGGTATTGCTTCTGTTGGTTGGGCTATGGTTGAGATTGATGAGGAGGAGAATCCTATTCGTCTTATTGATCTTGGTGTTCGTGTTTTTGAGCGTGCTGAGGTTCCTAAGACTGGTGATTCTCTTGCTATGGCTCGTCGTCTTGCTCGTTCTGTTCGTCGTCTTACTCGTCGTCGTGCTCATCGTCTTCTTCGTGCTCGTCGTCTTCTTAAGCGTGAGGGTGTTCTTCAGGCTGCTGATTTTGATGAGAATGGTCTTATTAAGTCTCTTCCTAATACTCCTTGGCAGCTTCGTGCTGCTGCTCTTGATCGTAAGCTTACTCCTCTTGAGTGGTCTGCTGTTCTTCTTCATCTTATTAAGCATCGTGGTTATCTTTCTCAGCGTAAGAATGAGGGTGAGACTGCTGATAAGGAGCTTGGTGCTCTTCTTAAGGGTGTTGCTAATAATGCTCATGCTCTTCAGACTGGTGATTTTCGTACTCCTGCTGAGCTTGCTCTTAATAAGTTTGAGAAGGAGTCTGGTCATATTCGTAATCAGCGTGGTGATTATTCTCATACTTTTTCTCGTAAGGATCTTCAGGCTGAGCTTATTCTTCTTTTTGAGAAGCAGAAGGAGTTTGGTAATCCTCATGTTTCTGGTGGTCTTAAGGAGGGTATTGAGACTCTTCTTATGACTCAGCGTCCTGCTCTTTCTGGTGATGCTGTTCAGAAGATGCTTGGTCATTGTACTTTTGAGCCTGCTGAGCCTAAGGCTGCTAAGAATACTTATACTGCTGAGCGTTTTATTTGGCTTACTAAGCTTAATAATCTTCGTATTCTTGAGCAGGGTTCTGAGCGTCCTCTTACTGATACTGAGCGTGCTACTCTTATGGATGAGCCTTATCGTAAGTCTAAGCTTACTTATGCTCAGGCTCGTAAGCTTCTTGGTCTTGAGGATACTGCTTTTTTTAAGGGTCTTCGTTATGGTAAGGATAATGCTGAGGCTTCTACTCTTATGGAGATGAAGGCTTATCATGCTATTTCTCGTGCTCTTGAGAAGGAGGGTCTTAAGGATAAGAAGTCTCCTCTTAATCTTTCTTCTGAGCTTCAGGATGAGATTGGTACTGCTTTTTCTCTTTTTAAGACTGATGAGGATATTACTGGTCGTCTTAAGGATCGTGTTCAGCCTGAGATTCTTGAGGCTCTTCTTAAGCATATTTCTTTTGATAAGTTTGTTCAGATTTCTCTTAAGGCTCTTCGTCGTATTGTTCCTCTTATGGAGCAGGGTAAGCGTTATGATGAGGCTTGTGCTGAGATTTATGGTGATCATTATGGTAAGAAGAATACTGAGGAGAAGATTTATCTTCCTCCTATTCCTGCTGATGAGATTCGTAATCCTGTTGTTCTTCGTGCTCTTTCTCAGGCTCGTAAGGTTATTAATGGTGTTGTTCGTCGTTATGGTTCTCCTGCTCGTATTCATATTGAGACTGCTCGTGAGGTTGGTAAGTCTTTTAAGGATCGTAAGGAGATTGAGAAGCGTCAGGAGGAGAATCGTAAGGATCGTGAGAAGGCTGCTGCTAAGTTTCGTGAGTATTTTCCTAATTTTGTTGGTGAGCCTAAGTCTAAGGATATTCTTAAGCTTCGTCTTTATGAGCAGCAGCATGGTAAGTGTCTTTATTCTGGTAAGGAGATTAATCTTGTTCGTCTTAATGAGAAGGGTTATGTTGAGATTGATCATGCTCTTCCTTTTTCTCGTACTTGGGATGATTCTTTTAATAATAAGGTTCTTGTTCTTGGTTCTGAGAATCAGAATAAGGGTAATCAGACTCCTTATGAGTATTTTAATGGTAAGGATAATTCTCGTGAGTGGCAGGAGTTTAAGGCTCGTGTTGAGACTTCTCGTTTTCCTCGTTCTAAGAAGCAGCGTATTCTTCTTCAGAAGTTTGATGAGGATGGTTTTAAGGAGTGTAATCTTAATGATACTCGTTATGTTAATCGTTTTCTTTGTCAGTTTGTTGCTGATCATATTCTTCTTACTGGTAAGGGTAAGCGTCGTGTTTTTGCTTCTAATGGTCAGATTACTAATCTTCTTCGTGGTTTTTGGGGTCTTCGTAAGGTTCGTGCTGAGAATGATCGTCATCATGCTCTTGATGCTGTTGTTGTTGCTTGTTCTACTGTTGCTATGCAGCAGAAGATTACTCGTTTTGTTCGTTATAAGGAGATGAATGCTTTTGATGGTAAGACTATTGATAAGGAGACTGGTAAGGTTCTTCATCAGAAGACTCATTTTCCTCAGCCTTGGGAGTTTTTTGCTCAGGAGGTTATGATTCGTGTTTTTGGTAAGCCTGATGGTAAGCCTGAGTTTGAGGAGGCTGATACTCCTGAGAAGCTTCGTACTCTTCTTGCTGAGAAGCTTTCTTCTCGTCCTGAGGCTGTTCATGAGTATGTTACTCCTCTTTTTGTTTCTCGTGCTCCTAATCGTAAGATGTCTGGTGCTCATAAGGATACTCTTCGTTCTGCTAAGCGTTTTGTTAAGCATAATGAGAAGATTTCTGTTAAGCGTGTTTGGCTTACTGAGATTAAGCTTGCTGATCTTGAGAATATGGTTAATTATAAGAATGGTCGTGAGATTGAGCTTTATGAGGCTCTTAAGGCTCGTCTTGAGGCTTATGGTGGTAATGCTAAGCAGGCTTTTGATCCTAAGGATAATCCTTTTTATAAGAAGGGTGGTCAGCTTGTTAAGGCTGTTCGTGTTGAGAAGACTCAGGAGTCTGGTGTTCTTCTTAATAAGAAGAATGCTTATACTATTGCTGATAATGGTGATATGGTTCGTGTTGATGTTTTTTGTAAGGTTGATAAGAAGGGTAAGAATCAGTATTTTATTGTTCCTATTTATGCTTGGCAGGTTGCTGAGAATATTCTTCCTGATATTGATTGTAAGGGTTATCGTATTGATGATTCTTATACTTTTTGTTTTTCTCTTCATAAGTATGATCTTATTGCTTTTCAGAAGGATGAGAAGTCTAAGGTTGAGTTTGCTTATTATATTAATTGTGATTCTTCTAATGGTCGTTTTTATCTTGCTTGGCATGATAAGGGTTCTAAGGAGCAGCAGTTTCGTATTTCTACTCAGAATCTTGTTCTTATTCAGAAGTATCAGGTTAATGAGCTTGGTAAGGAGATTCGTCCTTGTCGTCTTAAGAAGCGTCCTCCTGTTCGT
207 編碼Nme2Cas9裂解酶之例示性編碼序列 GCCGCCTTCAAGCCCAACCCCATCAACTACATCCTGGGCCTGGACATCGGCATCGCCTCCGTGGGCTGGGCCATGGTGGAGATCGACGAGGAGGAGAACCCCATCCGGCTGATCGACCTGGGCGTGCGGGTGTTCGAGCGGGCCGAGGTGCCCAAGACCGGCGACTCCCTGGCCATGGCCCGGCGGCTGGCCCGGTCCGTGCGGCGGCTGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCTGCTGCGGGCCCGGCGGCTGCTGAAGCGGGAGGGCGTGCTGCAGGCCGCCGACTTCGACGAGAACGGCCTGATCAAGTCCCTGCCCAACACCCCCTGGCAGCTGCGGGCCGCCGCCCTGGACCGGAAGCTGACCCCCCTGGAGTGGTCCGCCGTGCTGCTGCACCTGATCAAGCACCGGGGCTACCTGTCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCTGGGCGCCCTGCTGAAGGGCGTGGCCAACAACGCCCACGCCCTGCAGACCGGCGACTTCCGGACCCCCGCCGAGCTGGCCCTGAACAAGTTCGAGAAGGAGTCCGGCCACATCCGGAACCAGCGGGGCGACTACTCCCACACCTTCTCCCGGAAGGACCTGCAGGCCGAGCTGATCCTGCTGTTCGAGAAGCAGAAGGAGTTCGGCAACCCCCACGTGTCCGGCGGCCTGAAGGAGGGCATCGAGACCCTGCTGATGACCCAGCGGCCCGCCCTGTCCGGCGACGCCGTGCAGAAGATGCTGGGCCACTGCACCTTCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCTACACCGCCGAGCGGTTCATCTGGCTGACCAAGCTGAACAACCTGCGGATCCTGGAGCAGGGCTCCGAGCGGCCCCTGACCGACACCGAGCGGGCCACCCTGATGGACGAGCCCTACCGGAAGTCCAAGCTGACCTACGCCCAGGCCCGGAAGCTGCTGGGCCTGGAGGACACCGCCTTCTTCAAGGGCCTGCGGTACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCTCCACCCTGATGGAGATGAAGGCCTACCACGCCATCTCCCGGGCCCTGGAGAAGGAGGGCCTGAAGGACAAGAAGTCCCCCCTGAACCTGTCCTCCGAGCTGCAGGACGAGATCGGCACCGCCTTCTCCCTGTTCAAGACCGACGAGGACATCACCGGCCGGCTGAAGGACCGGGTGCAGCCCGAGATCCTGGAGGCCCTGCTGAAGCACATCTCCTTCGACAAGTTCGTGCAGATCTCCCTGAAGGCCCTGCGGCGGATCGTGCCCCTGATGGAGCAGGGCAAGCGGTACGACGAGGCCTGCGCCGAGATCTACGGCGACCACTACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGATCTACCTGCCCCCCATCCCCGCCGACGAGATCCGGAACCCCGTGGTGCTGCGGGCCCTGTCCCAGGCCCGGAAGGTGATCAACGGCGTGGTGCGGCGGTACGGCTCCCCCGCCCGGATCCACATCGAGACCGCCCGGGAGGTGGGCAAGTCCTTCAAGGACCGGAAGGAGATCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGTTCCGGGAGTACTTCCCCAACTTCGTGGGCGAGCCCAAGTCCAAGGACATCCTGAAGCTGCGGCTGTACGAGCAGCAGCACGGCAAGTGCCTGTACTCCGGCAAGGAGATCAACCTGGTGCGGCTGAACGAGAAGGGCTACGTGGAGATCGACCACGCCCTGCCCTTCTCCCGGACCTGGGACGACTCCTTCAACAACAAGGTGCTGGTGCTGGGCTCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCTACGAGTACTTCAACGGCAAGGACAACTCCCGGGAGTGGCAGGAGTTCAAGGCCCGGGTGGAGACCTCCCGGTTCCCCCGGTCCAAGAAGCAGCGGATCCTGCTGCAGAAGTTCGACGAGGACGGCTTCAAGGAGTGCAACCTGAACGACACCCGGTACGTGAACCGGTTCCTGTGCCAGTTCGTGGCCGACCACATCCTGCTGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGTGTTCGCCTCCAACGGCCAGATCACCAACCTGCTGCGGGGCTTCTGGGGCCTGCGGAAGGTGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCTGGACGCCGTGGTGGTGGCCTGCTCCACCGTGGCCATGCAGCAGAAGATCACCCGGTTCGTGCGGTACAAGGAGATGAACGCCTTCGACGGCAAGACCATCGACAAGGAGACCGGCAAGGTGCTGCACCAGAAGACCCACTTCCCCCAGCCCTGGGAGTTCTTCGCCCAGGAGGTGATGATCCGGGTGTTCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGTTCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCTGCGGACCCTGCTGGCCGAGAAGCTGTCCTCCCGGCCCGAGGCCGTGCACGAGTACGTGACCCCCCTGTTCGTGTCCCGGGCCCCCAACCGGAAGATGTCCGGCGCCCACAAGGACACCCTGCGGTCCGCCAAGCGGTTCGTGAAGCACAACGAGAAGATCTCCGTGAAGCGGGTGTGGCTGACCGAGATCAAGCTGGCCGACCTGGAGAACATGGTGAACTACAAGAACGGCCGGGAGATCGAGCTGTACGAGGCCCTGAAGGCCCGGCTGGAGGCCTACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCTTCGACCCCAAGGACAACCCCTTCTACAAGAAGGGCGGCCAGCTGGTGAAGGCCGTGCGGGTGGAGAAGACCCAGGAGTCCGGCGTGCTGCTGAACAAGAAGAACGCCTACACCATCGCCGACAACGGCGACATGGTGCGGGTGGACGTGTTCTGCAAGGTGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGTACTTCATCGTGCCCATCTACGCCTGGCAGGTGGCCGAGAACATCCTGCCCGACATCGACTGCAAGGGCTACCGGATCGACGACTCCTACACCTTCTGCTTCTCCCTGCACAAGTACGACCTGATCGCCTTCCAGAAGGACGAGAAGTCCAAGGTGGAGTTCGCCTACTACATCAACTGCGACTCCTCCAACGGCCGGTTCTACCTGGCCTGGCACGACAAGGGCTCCAAGGAGCAGCAGTTCCGGATCTCCACCCAGAACCTGGTGCTGATCCAGAAGTACCAGGTGAACGAGCTGGGCAAGGAGATCCGGCCCTGCCGGCTGAAGAAGCGGCCCCCCGTGCGG
208 編碼Nme2Cas9裂解酶之例示性編碼序列 GCAGCATTCAAACCAAACCCAATCAACTACATCCTAGGACTAGACATCGGAATCGCATCAGTAGGATGAGCAATGGTAGAAATCGACGAAGAAGAAAACCCAATCCGACTAATCGACCTAGGAGTACGAGTATTCGAACGAGCAGAAGTACCAAAAACAGGAGACTCACTAGCAATGGCACGACGACTAGCACGATCAGTACGACGACTAACACGACGACGAGCACACCGACTACTACGAGCACGACGACTACTAAAACGAGAAGGAGTACTACAAGCAGCAGACTTCGACGAAAACGGACTAATCAAATCACTACCAAACACACCATGACAACTACGAGCAGCAGCACTAGACCGAAAACTAACACCACTAGAATGATCAGCAGTACTACTACACCTAATCAAACACCGAGGATACCTATCACAACGAAAAAACGAAGGAGAAACAGCAGACAAAGAACTAGGAGCACTACTAAAAGGAGTAGCAAACAACGCACACGCACTACAAACAGGAGACTTCCGAACACCAGCAGAACTAGCACTAAACAAATTCGAAAAAGAATCAGGACACATCCGAAACCAACGAGGAGACTACTCACACACATTCTCACGAAAAGACCTACAAGCAGAACTAATCCTACTATTCGAAAAACAAAAAGAATTCGGAAACCCACACGTATCAGGAGGACTAAAAGAAGGAATCGAAACACTACTAATGACACAACGACCAGCACTATCAGGAGACGCAGTACAAAAAATGCTAGGACACTGCACATTCGAACCAGCAGAACCAAAAGCAGCAAAAAACACATACACAGCAGAACGATTCATCTGACTAACAAAACTAAACAACCTACGAATCCTAGAACAAGGATCAGAACGACCACTAACAGACACAGAACGAGCAACACTAATGGACGAACCATACCGAAAATCAAAACTAACATACGCACAAGCACGAAAACTACTAGGACTAGAAGACACAGCATTCTTCAAAGGACTACGATACGGAAAAGACAACGCAGAAGCATCAACACTAATGGAAATGAAAGCATACCACGCAATCTCACGAGCACTAGAAAAAGAAGGACTAAAAGACAAAAAATCACCACTAAACCTATCATCAGAACTACAAGACGAAATCGGAACAGCATTCTCACTATTCAAAACAGACGAAGACATCACAGGACGACTAAAAGACCGAGTACAACCAGAAATCCTAGAAGCACTACTAAAACACATCTCATTCGACAAATTCGTACAAATCTCACTAAAAGCACTACGACGAATCGTACCACTAATGGAACAAGGAAAACGATACGACGAAGCATGCGCAGAAATCTACGGAGACCACTACGGAAAAAAAAACACAGAAGAAAAAATCTACCTACCACCAATCCCAGCAGACGAAATCCGAAACCCAGTAGTACTACGAGCACTATCACAAGCACGAAAAGTAATCAACGGAGTAGTACGACGATACGGATCACCAGCACGAATCCACATCGAAACAGCACGAGAAGTAGGAAAATCATTCAAAGACCGAAAAGAAATCGAAAAACGACAAGAAGAAAACCGAAAAGACCGAGAAAAAGCAGCAGCAAAATTCCGAGAATACTTCCCAAACTTCGTAGGAGAACCAAAATCAAAAGACATCCTAAAACTACGACTATACGAACAACAACACGGAAAATGCCTATACTCAGGAAAAGAAATCAACCTAGTACGACTAAACGAAAAAGGATACGTAGAAATCGACCACGCACTACCATTCTCACGAACATGAGACGACTCATTCAACAACAAAGTACTAGTACTAGGATCAGAAAACCAAAACAAAGGAAACCAAACACCATACGAATACTTCAACGGAAAAGACAACTCACGAGAATGACAAGAATTCAAAGCACGAGTAGAAACATCACGATTCCCACGATCAAAAAAACAACGAATCCTACTACAAAAATTCGACGAAGACGGATTCAAAGAATGCAACCTAAACGACACACGATACGTAAACCGATTCCTATGCCAATTCGTAGCAGACCACATCCTACTAACAGGAAAAGGAAAACGACGAGTATTCGCATCAAACGGACAAATCACAAACCTACTACGAGGATTCTGAGGACTACGAAAAGTACGAGCAGAAAACGACCGACACCACGCACTAGACGCAGTAGTAGTAGCATGCTCAACAGTAGCAATGCAACAAAAAATCACACGATTCGTACGATACAAAGAAATGAACGCATTCGACGGAAAAACAATCGACAAAGAAACAGGAAAAGTACTACACCAAAAAACACACTTCCCACAACCATGAGAATTCTTCGCACAAGAAGTAATGATCCGAGTATTCGGAAAACCAGACGGAAAACCAGAATTCGAAGAAGCAGACACACCAGAAAAACTACGAACACTACTAGCAGAAAAACTATCATCACGACCAGAAGCAGTACACGAATACGTAACACCACTATTCGTATCACGAGCACCAAACCGAAAAATGTCAGGAGCACACAAAGACACACTACGATCAGCAAAACGATTCGTAAAACACAACGAAAAAATCTCAGTAAAACGAGTATGACTAACAGAAATCAAACTAGCAGACCTAGAAAACATGGTAAACTACAAAAACGGACGAGAAATCGAACTATACGAAGCACTAAAAGCACGACTAGAAGCATACGGAGGAAACGCAAAACAAGCATTCGACCCAAAAGACAACCCATTCTACAAAAAAGGAGGACAACTAGTAAAAGCAGTACGAGTAGAAAAAACACAAGAATCAGGAGTACTACTAAACAAAAAAAACGCATACACAATCGCAGACAACGGAGACATGGTACGAGTAGACGTATTCTGCAAAGTAGACAAAAAAGGAAAAAACCAATACTTCATCGTACCAATCTACGCATGACAAGTAGCAGAAAACATCCTACCAGACATCGACTGCAAAGGATACCGAATCGACGACTCATACACATTCTGCTTCTCACTACACAAATACGACCTAATCGCATTCCAAAAAGACGAAAAATCAAAAGTAGAATTCGCATACTACATCAACTGCGACTCATCAAACGGACGATTCTACCTAGCATGACACGACAAAGGATCAAAAGAACAACAATTCCGAATCTCAACACAAAACCTAGTACTAATCCAAAAATACCAAGTAAACGAACTAGGAAAAGAAATCCGACCATGCCGACTAAAAAAACGACCACCAGTACGA
209 Nme2Cas9裂解酶之例示性開放閱讀框 ATGGCTGCTTTTAAGCCTAATCCTATTAATTATATTCTTGGTCTTGATATTGGTATTGCTTCTGTTGGTTGGGCTATGGTTGAGATTGATGAGGAGGAGAATCCTATTCGTCTTATTGATCTTGGTGTTCGTGTTTTTGAGCGTGCTGAGGTTCCTAAGACTGGTGATTCTCTTGCTATGGCTCGTCGTCTTGCTCGTTCTGTTCGTCGTCTTACTCGTCGTCGTGCTCATCGTCTTCTTCGTGCTCGTCGTCTTCTTAAGCGTGAGGGTGTTCTTCAGGCTGCTGATTTTGATGAGAATGGTCTTATTAAGTCTCTTCCTAATACTCCTTGGCAGCTTCGTGCTGCTGCTCTTGATCGTAAGCTTACTCCTCTTGAGTGGTCTGCTGTTCTTCTTCATCTTATTAAGCATCGTGGTTATCTTTCTCAGCGTAAGAATGAGGGTGAGACTGCTGATAAGGAGCTTGGTGCTCTTCTTAAGGGTGTTGCTAATAATGCTCATGCTCTTCAGACTGGTGATTTTCGTACTCCTGCTGAGCTTGCTCTTAATAAGTTTGAGAAGGAGTCTGGTCATATTCGTAATCAGCGTGGTGATTATTCTCATACTTTTTCTCGTAAGGATCTTCAGGCTGAGCTTATTCTTCTTTTTGAGAAGCAGAAGGAGTTTGGTAATCCTCATGTTTCTGGTGGTCTTAAGGAGGGTATTGAGACTCTTCTTATGACTCAGCGTCCTGCTCTTTCTGGTGATGCTGTTCAGAAGATGCTTGGTCATTGTACTTTTGAGCCTGCTGAGCCTAAGGCTGCTAAGAATACTTATACTGCTGAGCGTTTTATTTGGCTTACTAAGCTTAATAATCTTCGTATTCTTGAGCAGGGTTCTGAGCGTCCTCTTACTGATACTGAGCGTGCTACTCTTATGGATGAGCCTTATCGTAAGTCTAAGCTTACTTATGCTCAGGCTCGTAAGCTTCTTGGTCTTGAGGATACTGCTTTTTTTAAGGGTCTTCGTTATGGTAAGGATAATGCTGAGGCTTCTACTCTTATGGAGATGAAGGCTTATCATGCTATTTCTCGTGCTCTTGAGAAGGAGGGTCTTAAGGATAAGAAGTCTCCTCTTAATCTTTCTTCTGAGCTTCAGGATGAGATTGGTACTGCTTTTTCTCTTTTTAAGACTGATGAGGATATTACTGGTCGTCTTAAGGATCGTGTTCAGCCTGAGATTCTTGAGGCTCTTCTTAAGCATATTTCTTTTGATAAGTTTGTTCAGATTTCTCTTAAGGCTCTTCGTCGTATTGTTCCTCTTATGGAGCAGGGTAAGCGTTATGATGAGGCTTGTGCTGAGATTTATGGTGATCATTATGGTAAGAAGAATACTGAGGAGAAGATTTATCTTCCTCCTATTCCTGCTGATGAGATTCGTAATCCTGTTGTTCTTCGTGCTCTTTCTCAGGCTCGTAAGGTTATTAATGGTGTTGTTCGTCGTTATGGTTCTCCTGCTCGTATTCATATTGAGACTGCTCGTGAGGTTGGTAAGTCTTTTAAGGATCGTAAGGAGATTGAGAAGCGTCAGGAGGAGAATCGTAAGGATCGTGAGAAGGCTGCTGCTAAGTTTCGTGAGTATTTTCCTAATTTTGTTGGTGAGCCTAAGTCTAAGGATATTCTTAAGCTTCGTCTTTATGAGCAGCAGCATGGTAAGTGTCTTTATTCTGGTAAGGAGATTAATCTTGTTCGTCTTAATGAGAAGGGTTATGTTGAGATTGATCATGCTCTTCCTTTTTCTCGTACTTGGGATGATTCTTTTAATAATAAGGTTCTTGTTCTTGGTTCTGAGAATCAGAATAAGGGTAATCAGACTCCTTATGAGTATTTTAATGGTAAGGATAATTCTCGTGAGTGGCAGGAGTTTAAGGCTCGTGTTGAGACTTCTCGTTTTCCTCGTTCTAAGAAGCAGCGTATTCTTCTTCAGAAGTTTGATGAGGATGGTTTTAAGGAGTGTAATCTTAATGATACTCGTTATGTTAATCGTTTTCTTTGTCAGTTTGTTGCTGATCATATTCTTCTTACTGGTAAGGGTAAGCGTCGTGTTTTTGCTTCTAATGGTCAGATTACTAATCTTCTTCGTGGTTTTTGGGGTCTTCGTAAGGTTCGTGCTGAGAATGATCGTCATCATGCTCTTGATGCTGTTGTTGTTGCTTGTTCTACTGTTGCTATGCAGCAGAAGATTACTCGTTTTGTTCGTTATAAGGAGATGAATGCTTTTGATGGTAAGACTATTGATAAGGAGACTGGTAAGGTTCTTCATCAGAAGACTCATTTTCCTCAGCCTTGGGAGTTTTTTGCTCAGGAGGTTATGATTCGTGTTTTTGGTAAGCCTGATGGTAAGCCTGAGTTTGAGGAGGCTGATACTCCTGAGAAGCTTCGTACTCTTCTTGCTGAGAAGCTTTCTTCTCGTCCTGAGGCTGTTCATGAGTATGTTACTCCTCTTTTTGTTTCTCGTGCTCCTAATCGTAAGATGTCTGGTGCTCATAAGGATACTCTTCGTTCTGCTAAGCGTTTTGTTAAGCATAATGAGAAGATTTCTGTTAAGCGTGTTTGGCTTACTGAGATTAAGCTTGCTGATCTTGAGAATATGGTTAATTATAAGAATGGTCGTGAGATTGAGCTTTATGAGGCTCTTAAGGCTCGTCTTGAGGCTTATGGTGGTAATGCTAAGCAGGCTTTTGATCCTAAGGATAATCCTTTTTATAAGAAGGGTGGTCAGCTTGTTAAGGCTGTTCGTGTTGAGAAGACTCAGGAGTCTGGTGTTCTTCTTAATAAGAAGAATGCTTATACTATTGCTGATAATGGTGATATGGTTCGTGTTGATGTTTTTTGTAAGGTTGATAAGAAGGGTAAGAATCAGTATTTTATTGTTCCTATTTATGCTTGGCAGGTTGCTGAGAATATTCTTCCTGATATTGATTGTAAGGGTTATCGTATTGATGATTCTTATACTTTTTGTTTTTCTCTTCATAAGTATGATCTTATTGCTTTTCAGAAGGATGAGAAGTCTAAGGTTGAGTTTGCTTATTATATTAATTGTGATTCTTCTAATGGTCGTTTTTATCTTGCTTGGCATGATAAGGGTTCTAAGGAGCAGCAGTTTCGTATTTCTACTCAGAATCTTGTTCTTATTCAGAAGTATCAGGTTAATGAGCTTGGTAAGGAGATTCGTCCTTGTCGTCTTAAGAAGCGTCCTCCTGTTCGTUGA
210 Nme2Cas9裂解酶之例示性開放閱讀框 ATGGCCGCCTTCAAGCCCAACCCCATCAACTACATCCTGGGCCTGGACATCGGCATCGCCTCCGTGGGCTGGGCCATGGTGGAGATCGACGAGGAGGAGAACCCCATCCGGCTGATCGACCTGGGCGTGCGGGTGTTCGAGCGGGCCGAGGTGCCCAAGACCGGCGACTCCCTGGCCATGGCCCGGCGGCTGGCCCGGTCCGTGCGGCGGCTGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCTGCTGCGGGCCCGGCGGCTGCTGAAGCGGGAGGGCGTGCTGCAGGCCGCCGACTTCGACGAGAACGGCCTGATCAAGTCCCTGCCCAACACCCCCTGGCAGCTGCGGGCCGCCGCCCTGGACCGGAAGCTGACCCCCCTGGAGTGGTCCGCCGTGCTGCTGCACCTGATCAAGCACCGGGGCTACCTGTCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCTGGGCGCCCTGCTGAAGGGCGTGGCCAACAACGCCCACGCCCTGCAGACCGGCGACTTCCGGACCCCCGCCGAGCTGGCCCTGAACAAGTTCGAGAAGGAGTCCGGCCACATCCGGAACCAGCGGGGCGACTACTCCCACACCTTCTCCCGGAAGGACCTGCAGGCCGAGCTGATCCTGCTGTTCGAGAAGCAGAAGGAGTTCGGCAACCCCCACGTGTCCGGCGGCCTGAAGGAGGGCATCGAGACCCTGCTGATGACCCAGCGGCCCGCCCTGTCCGGCGACGCCGTGCAGAAGATGCTGGGCCACTGCACCTTCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCTACACCGCCGAGCGGTTCATCTGGCTGACCAAGCTGAACAACCTGCGGATCCTGGAGCAGGGCTCCGAGCGGCCCCTGACCGACACCGAGCGGGCCACCCTGATGGACGAGCCCTACCGGAAGTCCAAGCTGACCTACGCCCAGGCCCGGAAGCTGCTGGGCCTGGAGGACACCGCCTTCTTCAAGGGCCTGCGGTACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCTCCACCCTGATGGAGATGAAGGCCTACCACGCCATCTCCCGGGCCCTGGAGAAGGAGGGCCTGAAGGACAAGAAGTCCCCCCTGAACCTGTCCTCCGAGCTGCAGGACGAGATCGGCACCGCCTTCTCCCTGTTCAAGACCGACGAGGACATCACCGGCCGGCTGAAGGACCGGGTGCAGCCCGAGATCCTGGAGGCCCTGCTGAAGCACATCTCCTTCGACAAGTTCGTGCAGATCTCCCTGAAGGCCCTGCGGCGGATCGTGCCCCTGATGGAGCAGGGCAAGCGGTACGACGAGGCCTGCGCCGAGATCTACGGCGACCACTACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGATCTACCTGCCCCCCATCCCCGCCGACGAGATCCGGAACCCCGTGGTGCTGCGGGCCCTGTCCCAGGCCCGGAAGGTGATCAACGGCGTGGTGCGGCGGTACGGCTCCCCCGCCCGGATCCACATCGAGACCGCCCGGGAGGTGGGCAAGTCCTTCAAGGACCGGAAGGAGATCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGTTCCGGGAGTACTTCCCCAACTTCGTGGGCGAGCCCAAGTCCAAGGACATCCTGAAGCTGCGGCTGTACGAGCAGCAGCACGGCAAGTGCCTGTACTCCGGCAAGGAGATCAACCTGGTGCGGCTGAACGAGAAGGGCTACGTGGAGATCGACCACGCCCTGCCCTTCTCCCGGACCTGGGACGACTCCTTCAACAACAAGGTGCTGGTGCTGGGCTCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCTACGAGTACTTCAACGGCAAGGACAACTCCCGGGAGTGGCAGGAGTTCAAGGCCCGGGTGGAGACCTCCCGGTTCCCCCGGTCCAAGAAGCAGCGGATCCTGCTGCAGAAGTTCGACGAGGACGGCTTCAAGGAGTGCAACCTGAACGACACCCGGTACGTGAACCGGTTCCTGTGCCAGTTCGTGGCCGACCACATCCTGCTGACCGGCAAGGGCAAGCGGCGGGTGTTCGCCTCCAACGGCCAGATCACCAACCTGCTGCGGGGCTTCTGGGGCCTGCGGAAGGTGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCTGGACGCCGTGGTGGTGGCCTGCTCCACCGTGGCCATGCAGCAGAAGATCACCCGGTTCGTGCGGTACAAGGAGATGAACGCCTTCGACGGCAAGACCATCGACAAGGAGACCGGCAAGGTGCTGCACCAGAAGACCCACTTCCCCCAGCCCTGGGAGTTCTTCGCCCAGGAGGTGATGATCCGGGTGTTCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGTTCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCTGCGGACCCTGCTGGCCGAGAAGCTGTCCTCCCGGCCCGAGGCCGTGCACGAGTACGTGACCCCCCTGTTCGTGTCCCGGGCCCCCAACCGGAAGATGTCCGGCGCCCACAAGGACACCCTGCGGTCCGCCAAGCGGTTCGTGAAGCACAACGAGAAGATCTCCGTGAAGCGGGTGTGGCTGACCGAGATCAAGCTGGCCGACCTGGAGAACATGGTGAACTACAAGAACGGCCGGGAGATCGAGCTGTACGAGGCCCTGAAGGCCCGGCTGGAGGCCTACGGCGGCAACGCCAAGCAGGCCTTCGACCCCAAGGACAACCCCTTCTACAAGAAGGGCGGCCAGCTGGTGAAGGCCGTGCGGGTGGAGAAGACCCAGGAGTCCGGCGTGCTGCTGAACAAGAAGAACGCCTACACCATCGCCGACAACGGCGACATGGTGCGGGTGGACGTGTTCTGCAAGGTGGACAAGAAGGGCAAGAACCAGTACTTCATCGTGCCCATCTACGCCTGGCAGGTGGCCGAGAACATCCTGCCCGACATCGACTGCAAGGGCTACCGGATCGACGACTCCTACACCTTCTGCTTCTCCCTGCACAAGTACGACCTGATCGCCTTCCAGAAGGACGAGAAGTCCAAGGTGGAGTTCGCCTACTACATCAACTGCGACTCCTCCAACGGCCGGTTCTACCTGGCCTGGCACGACAAGGGCTCCAAGGAGCAGCAGTTCCGGATCTCCACCCAGAACCTGGTGCTGATCCAGAAGTACCAGGTGAACGAGCTGGGCAAGGAGATCCGGCCCTGCCGGCTGAAGAAGCGGCCCCCCGTGCGGUGA
211 Nme2Cas9裂解酶之例示性開放閱讀框 ATGGCAGCATTCAAACCAAACCCAATCAACTACATCCTAGGACTAGACATCGGAATCGCATCAGTAGGATGAGCAATGGTAGAAATCGACGAAGAAGAAAACCCAATCCGACTAATCGACCTAGGAGTACGAGTATTCGAACGAGCAGAAGTACCAAAAACAGGAGACTCACTAGCAATGGCACGACGACTAGCACGATCAGTACGACGACTAACACGACGACGAGCACACCGACTACTACGAGCACGACGACTACTAAAACGAGAAGGAGTACTACAAGCAGCAGACTTCGACGAAAACGGACTAATCAAATCACTACCAAACACACCATGACAACTACGAGCAGCAGCACTAGACCGAAAACTAACACCACTAGAATGATCAGCAGTACTACTACACCTAATCAAACACCGAGGATACCTATCACAACGAAAAAACGAAGGAGAAACAGCAGACAAAGAACTAGGAGCACTACTAAAAGGAGTAGCAAACAACGCACACGCACTACAAACAGGAGACTTCCGAACACCAGCAGAACTAGCACTAAACAAATTCGAAAAAGAATCAGGACACATCCGAAACCAACGAGGAGACTACTCACACACATTCTCACGAAAAGACCTACAAGCAGAACTAATCCTACTATTCGAAAAACAAAAAGAATTCGGAAACCCACACGTATCAGGAGGACTAAAAGAAGGAATCGAAACACTACTAATGACACAACGACCAGCACTATCAGGAGACGCAGTACAAAAAATGCTAGGACACTGCACATTCGAACCAGCAGAACCAAAAGCAGCAAAAAACACATACACAGCAGAACGATTCATCTGACTAACAAAACTAAACAACCTACGAATCCTAGAACAAGGATCAGAACGACCACTAACAGACACAGAACGAGCAACACTAATGGACGAACCATACCGAAAATCAAAACTAACATACGCACAAGCACGAAAACTACTAGGACTAGAAGACACAGCATTCTTCAAAGGACTACGATACGGAAAAGACAACGCAGAAGCATCAACACTAATGGAAATGAAAGCATACCACGCAATCTCACGAGCACTAGAAAAAGAAGGACTAAAAGACAAAAAATCACCACTAAACCTATCATCAGAACTACAAGACGAAATCGGAACAGCATTCTCACTATTCAAAACAGACGAAGACATCACAGGACGACTAAAAGACCGAGTACAACCAGAAATCCTAGAAGCACTACTAAAACACATCTCATTCGACAAATTCGTACAAATCTCACTAAAAGCACTACGACGAATCGTACCACTAATGGAACAAGGAAAACGATACGACGAAGCATGCGCAGAAATCTACGGAGACCACTACGGAAAAAAAAACACAGAAGAAAAAATCTACCTACCACCAATCCCAGCAGACGAAATCCGAAACCCAGTAGTACTACGAGCACTATCACAAGCACGAAAAGTAATCAACGGAGTAGTACGACGATACGGATCACCAGCACGAATCCACATCGAAACAGCACGAGAAGTAGGAAAATCATTCAAAGACCGAAAAGAAATCGAAAAACGACAAGAAGAAAACCGAAAAGACCGAGAAAAAGCAGCAGCAAAATTCCGAGAATACTTCCCAAACTTCGTAGGAGAACCAAAATCAAAAGACATCCTAAAACTACGACTATACGAACAACAACACGGAAAATGCCTATACTCAGGAAAAGAAATCAACCTAGTACGACTAAACGAAAAAGGATACGTAGAAATCGACCACGCACTACCATTCTCACGAACATGAGACGACTCATTCAACAACAAAGTACTAGTACTAGGATCAGAAAACCAAAACAAAGGAAACCAAACACCATACGAATACTTCAACGGAAAAGACAACTCACGAGAATGACAAGAATTCAAAGCACGAGTAGAAACATCACGATTCCCACGATCAAAAAAACAACGAATCCTACTACAAAAATTCGACGAAGACGGATTCAAAGAATGCAACCTAAACGACACACGATACGTAAACCGATTCCTATGCCAATTCGTAGCAGACCACATCCTACTAACAGGAAAAGGAAAACGACGAGTATTCGCATCAAACGGACAAATCACAAACCTACTACGAGGATTCTGAGGACTACGAAAAGTACGAGCAGAAAACGACCGACACCACGCACTAGACGCAGTAGTAGTAGCATGCTCAACAGTAGCAATGCAACAAAAAATCACACGATTCGTACGATACAAAGAAATGAACGCATTCGACGGAAAAACAATCGACAAAGAAACAGGAAAAGTACTACACCAAAAAACACACTTCCCACAACCATGAGAATTCTTCGCACAAGAAGTAATGATCCGAGTATTCGGAAAACCAGACGGAAAACCAGAATTCGAAGAAGCAGACACACCAGAAAAACTACGAACACTACTAGCAGAAAAACTATCATCACGACCAGAAGCAGTACACGAATACGTAACACCACTATTCGTATCACGAGCACCAAACCGAAAAATGTCAGGAGCACACAAAGACACACTACGATCAGCAAAACGATTCGTAAAACACAACGAAAAAATCTCAGTAAAACGAGTATGACTAACAGAAATCAAACTAGCAGACCTAGAAAACATGGTAAACTACAAAAACGGACGAGAAATCGAACTATACGAAGCACTAAAAGCACGACTAGAAGCATACGGAGGAAACGCAAAACAAGCATTCGACCCAAAAGACAACCCATTCTACAAAAAAGGAGGACAACTAGTAAAAGCAGTACGAGTAGAAAAAACACAAGAATCAGGAGTACTACTAAACAAAAAAAACGCATACACAATCGCAGACAACGGAGACATGGTACGAGTAGACGTATTCTGCAAAGTAGACAAAAAAGGAAAAAACCAATACTTCATCGTACCAATCTACGCATGACAAGTAGCAGAAAACATCCTACCAGACATCGACTGCAAAGGATACCGAATCGACGACTCATACACATTCTGCTTCTCACTACACAAATACGACCTAATCGCATTCCAAAAAGACGAAAAATCAAAAGTAGAATTCGCATACTACATCAACTGCGACTCATCAAACGGACGATTCTACCTAGCATGACACGACAAAGGATCAAAAGAACAACAATTCCGAATCTCAACACAAAACCTAGTACTAATCCAAAAATACCAAGTAAACGAACTAGGAAAAGAAATCCGACCATGCCGACTAAAAAAACGACCACCAGTACGAUAA
212 Nme3Cas9裂解酶之例示性胺基酸序列 MAAFKPNPINYILGLDIGIASVGWAMVEIDEEENPIRLIDLGVRVFERAEVPKTGDSLAMARRLARSVRRLTRRRAHRLLRARRLLKREGVLQAADFDENGLIKSLPNTPWQLRAAALDRKLTPLEWSAVLLHLIKHRGYLSQRKNEGETADKELGALLKGVADNAHALQTGDFRTPAELALNKFEKECGHIRNQRGDYSHTFSRKDLQAELNLLFEKQKEFGNPHVSGGLKEGIETLLMTQRPALSGDAVQKMLGHCTFEPAEPKAAKNTYTAERFIWLTKLNNLRILEQGSERPLTDTERATLMDEPYRKSKLTYAQARKLLSLEDTAFFKGLRYGKDNAEASTLMEMKAYHTISRALEKEGLKDKKSPLNLSPELQDEIGTAFSLFKTDEDITGRLKDRIQPEILEALLKHISFDKFVQISLKALRRIVPLMEQGKRYDEACAEIYGDHYGKKNTEEKIYLPPIPADEIRNPVVLRALSQARKVINGVVRRYGSPARIHIETAREVGKSFKDRKEIEKRQEENRKDREKAAAKFREYFPNFVGEPKSKDILKLRLYEQQHGKCLYSGKEINLGRLNEKGYVEIDHALPFSRTWDDSFNNKVLVLGSENQNKGNQTPYEYFNGKDNSREWQEFKARVETSRFPRSKKQRILLQKFDEDGFKERNLNDTRYVNRFLCQFVADRMRLTGKGKKRVFASNGQITNLLRGFWGLRKVRAENDRHHALDAVVVACSTVAMQQKITRFVRYKEMNAFDGKTIDKETGEVLHQKTHFPQPWEFFAQEVMIRVFGKPDGKPEFEEADTPEKLRTLLAEKLSSRPEAVHEYVTPLFVSRAPNRKMSGQGHMETVKSAKRLDEGVSVLRVPLTQLKLKDLEKMVNREREPKLYEALKARLEAHKDDPAKAFAEPFYKYDKAGNRTQQVKAVRVEQVQKTGVWVRNHNGIADNATMVRVDVFEKGDKYYLVPIYSWQVAKGILPDRAVVAYADEEDWTVIDESFRFKFVLYSNDLIKVQLKKDSFLGYFSGLDRATGAISLREHDLEKSKGKDGMHRIGVKTALSFQKYQIDEMGKEIRPCRLKKRPPVR
213 編碼Nme3Cas9裂解酶之例示性編碼序列 GCTGCTTTTAAGCCTAATCCTATTAATTATATTCTTGGTCTTGATATTGGTATTGCTTCTGTTGGTTGGGCTATGGTTGAGATTGATGAGGAGGAGAATCCTATTCGTCTTATTGATCTTGGTGTTCGTGTTTTTGAGCGTGCTGAGGTTCCTAAGACTGGTGATTCTCTTGCTATGGCTCGTCGTCTTGCTCGTTCTGTTCGTCGTCTTACTCGTCGTCGTGCTCATCGTCTTCTTCGTGCTCGTCGTCTTCTTAAGCGTGAGGGTGTTCTTCAGGCTGCTGATTTTGATGAGAATGGTCTTATTAAGTCTCTTCCTAATACTCCTTGGCAGCTTCGTGCTGCTGCTCTTGATCGTAAGCTTACTCCTCTTGAGTGGTCTGCTGTTCTTCTTCATCTTATTAAGCATCGTGGTTATCTTTCTCAGCGTAAGAATGAGGGTGAGACTGCTGATAAGGAGCTTGGTGCTCTTCTTAAGGGTGTTGCTGATAATGCTCATGCTCTTCAGACTGGTGATTTTCGTACTCCTGCTGAGCTTGCTCTTAATAAGTTTGAGAAGGAGTGTGGTCATATTCGTAATCAGCGTGGTGATTATTCTCATACTTTTTCTCGTAAGGATCTTCAGGCTGAGCTTAATCTTCTTTTTGAGAAGCAGAAGGAGTTTGGTAATCCTCATGTTTCTGGTGGTCTTAAGGAGGGTATTGAGACTCTTCTTATGACTCAGCGTCCTGCTCTTTCTGGTGATGCTGTTCAGAAGATGCTTGGTCATTGTACTTTTGAGCCTGCTGAGCCTAAGGCTGCTAAGAATACTTATACTGCTGAGCGTTTTATTTGGCTTACTAAGCTTAATAATCTTCGTATTCTTGAGCAGGGTTCTGAGCGTCCTCTTACTGATACTGAGCGTGCTACTCTTATGGATGAGCCTTATCGTAAGTCTAAGCTTACTTATGCTCAGGCTCGTAAGCTTCTTTCTCTTGAGGATACTGCTTTTTTTAAGGGTCTTCGTTATGGTAAGGATAATGCTGAGGCTTCTACTCTTATGGAGATGAAGGCTTATCATACTATTTCTCGTGCTCTTGAGAAGGAGGGTCTTAAGGATAAGAAGTCTCCTCTTAATCTTTCTCCTGAGCTTCAGGATGAGATTGGTACTGCTTTTTCTCTTTTTAAGACTGATGAGGATATTACTGGTCGTCTTAAGGATCGTATTCAGCCTGAGATTCTTGAGGCTCTTCTTAAGCATATTTCTTTTGATAAGTTTGTTCAGATTTCTCTTAAGGCTCTTCGTCGTATTGTTCCTCTTATGGAGCAGGGTAAGCGTTATGATGAGGCTTGTGCTGAGATTTATGGTGATCATTATGGTAAGAAGAATACTGAGGAGAAGATTTATCTTCCTCCTATTCCTGCTGATGAGATTCGTAATCCTGTTGTTCTTCGTGCTCTTTCTCAGGCTCGTAAGGTTATTAATGGTGTTGTTCGTCGTTATGGTTCTCCTGCTCGTATTCATATTGAGACTGCTCGTGAGGTTGGTAAGTCTTTTAAGGATCGTAAGGAGATTGAGAAGCGTCAGGAGGAGAATCGTAAGGATCGTGAGAAGGCTGCTGCTAAGTTTCGTGAGTATTTTCCTAATTTTGTTGGTGAGCCTAAGTCTAAGGATATTCTTAAGCTTCGTCTTTATGAGCAGCAGCATGGTAAGTGTCTTTATTCTGGTAAGGAGATTAATCTTGGTCGTCTTAATGAGAAGGGTTATGTTGAGATTGATCATGCTCTTCCTTTTTCTCGTACTTGGGATGATTCTTTTAATAATAAGGTTCTTGTTCTTGGTTCTGAGAATCAGAATAAGGGTAATCAGACTCCTTATGAGTATTTTAATGGTAAGGATAATTCTCGTGAGTGGCAGGAGTTTAAGGCTCGTGTTGAGACTTCTCGTTTTCCTCGTTCTAAGAAGCAGCGTATTCTTCTTCAGAAGTTTGATGAGGATGGTTTTAAGGAGCGTAATCTTAATGATACTCGTTATGTTAATCGTTTTCTTTGTCAGTTTGTTGCTGATCGTATGCGTCTTACTGGTAAGGGTAAGAAGCGTGTTTTTGCTTCTAATGGTCAGATTACTAATCTTCTTCGTGGTTTTTGGGGTCTTCGTAAGGTTCGTGCTGAGAATGATCGTCATCATGCTCTTGATGCTGTTGTTGTTGCTTGTTCTACTGTTGCTATGCAGCAGAAGATTACTCGTTTTGTTCGTTATAAGGAGATGAATGCTTTTGATGGTAAGACTATTGATAAGGAGACTGGTGAGGTTCTTCATCAGAAGACTCATTTTCCTCAGCCTTGGGAGTTTTTTGCTCAGGAGGTTATGATTCGTGTTTTTGGTAAGCCTGATGGTAAGCCTGAGTTTGAGGAGGCTGATACTCCTGAGAAGCTTCGTACTCTTCTTGCTGAGAAGCTTTCTTCTCGTCCTGAGGCTGTTCATGAGTATGTTACTCCTCTTTTTGTTTCTCGTGCTCCTAATCGTAAGATGTCTGGTCAGGGTCATATGGAGACTGTTAAGTCTGCTAAGCGTCTTGATGAGGGTGTTTCTGTTCTTCGTGTTCCTCTTACTCAGCTTAAGCTTAAGGATCTTGAGAAGATGGTTAATCGTGAGCGTGAGCCTAAGCTTTATGAGGCTCTTAAGGCTCGTCTTGAGGCTCATAAGGATGATCCTGCTAAGGCTTTTGCTGAGCCTTTTTATAAGTATGATAAGGCTGGTAATCGTACTCAGCAGGTTAAGGCTGTTCGTGTTGAGCAGGTTCAGAAGACTGGTGTTTGGGTTCGTAATCATAATGGTATTGCTGATAATGCTACTATGGTTCGTGTTGATGTTTTTGAGAAGGGTGATAAGTATTATCTTGTTCCTATTTATTCTTGGCAGGTTGCTAAGGGTATTCTTCCTGATCGTGCTGTTGTTGCTTATGCTGATGAGGAGGATTGGACTGTTATTGATGAGTCTTTTCGTTTTAAGTTTGTTCTTTATTCTAATGATCTTATTAAGGTTCAGCTTAAGAAGGATTCTTTTCTTGGTTATTTTTCTGGTCTTGATCGTGCTACTGGTGCTATTTCTCTTCGTGAGCATGATCTTGAGAAGTCTAAGGGTAAGGATGGTATGCATCGTATTGGTGTTAAGACTGCTCTTTCTTTTCAGAAGTATCAGATTGATGAGATGGGTAAGGAGATTCGTCCTTGTCGTCTTAAGAAGCGTCCTCCTGTTCGT
214 編碼Nme3Cas9裂解酶之例示性編碼序列 GCCGCCTTCAAGCCCAACCCCATCAACTACATCCTGGGCCTGGACATCGGCATCGCCTCCGTGGGCTGGGCCATGGTGGAGATCGACGAGGAGGAGAACCCCATCCGGCTGATCGACCTGGGCGTGCGGGTGTTCGAGCGGGCCGAGGTGCCCAAGACCGGCGACTCCCTGGCCATGGCCCGGCGGCTGGCCCGGTCCGTGCGGCGGCTGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCTGCTGCGGGCCCGGCGGCTGCTGAAGCGGGAGGGCGTGCTGCAGGCCGCCGACTTCGACGAGAACGGCCTGATCAAGTCCCTGCCCAACACCCCCTGGCAGCTGCGGGCCGCCGCCCTGGACCGGAAGCTGACCCCCCTGGAGTGGTCCGCCGTGCTGCTGCACCTGATCAAGCACCGGGGCTACCTGTCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCTGGGCGCCCTGCTGAAGGGCGTGGCCGACAACGCCCACGCCCTGCAGACCGGCGACTTCCGGACCCCCGCCGAGCTGGCCCTGAACAAGTTCGAGAAGGAGTGCGGCCACATCCGGAACCAGCGGGGCGACTACTCCCACACCTTCTCCCGGAAGGACCTGCAGGCCGAGCTGAACCTGCTGTTCGAGAAGCAGAAGGAGTTCGGCAACCCCCACGTGTCCGGCGGCCTGAAGGAGGGCATCGAGACCCTGCTGATGACCCAGCGGCCCGCCCTGTCCGGCGACGCCGTGCAGAAGATGCTGGGCCACTGCACCTTCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCTACACCGCCGAGCGGTTCATCTGGCTGACCAAGCTGAACAACCTGCGGATCCTGGAGCAGGGCTCCGAGCGGCCCCTGACCGACACCGAGCGGGCCACCCTGATGGACGAGCCCTACCGGAAGTCCAAGCTGACCTACGCCCAGGCCCGGAAGCTGCTGTCCCTGGAGGACACCGCCTTCTTCAAGGGCCTGCGGTACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCTCCACCCTGATGGAGATGAAGGCCTACCACACCATCTCCCGGGCCCTGGAGAAGGAGGGCCTGAAGGACAAGAAGTCCCCCCTGAACCTGTCCCCCGAGCTGCAGGACGAGATCGGCACCGCCTTCTCCCTGTTCAAGACCGACGAGGACATCACCGGCCGGCTGAAGGACCGGATCCAGCCCGAGATCCTGGAGGCCCTGCTGAAGCACATCTCCTTCGACAAGTTCGTGCAGATCTCCCTGAAGGCCCTGCGGCGGATCGTGCCCCTGATGGAGCAGGGCAAGCGGTACGACGAGGCCTGCGCCGAGATCTACGGCGACCACTACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGATCTACCTGCCCCCCATCCCCGCCGACGAGATCCGGAACCCCGTGGTGCTGCGGGCCCTGTCCCAGGCCCGGAAGGTGATCAACGGCGTGGTGCGGCGGTACGGCTCCCCCGCCCGGATCCACATCGAGACCGCCCGGGAGGTGGGCAAGTCCTTCAAGGACCGGAAGGAGATCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGTTCCGGGAGTACTTCCCCAACTTCGTGGGCGAGCCCAAGTCCAAGGACATCCTGAAGCTGCGGCTGTACGAGCAGCAGCACGGCAAGTGCCTGTACTCCGGCAAGGAGATCAACCTGGGCCGGCTGAACGAGAAGGGCTACGTGGAGATCGACCACGCCCTGCCCTTCTCCCGGACCTGGGACGACTCCTTCAACAACAAGGTGCTGGTGCTGGGCTCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCTACGAGTACTTCAACGGCAAGGACAACTCCCGGGAGTGGCAGGAGTTCAAGGCCCGGGTGGAGACCTCCCGGTTCCCCCGGTCCAAGAAGCAGCGGATCCTGCTGCAGAAGTTCGACGAGGACGGCTTCAAGGAGCGGAACCTGAACGACACCCGGTACGTGAACCGGTTCCTGTGCCAGTTCGTGGCCGACCGGATGCGGCTGACCGGCAAGGGCAAGAAGCGGGTGTTCGCCTCCAACGGCCAGATCACCAACCTGCTGCGGGGCTTCTGGGGCCTGCGGAAGGTGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCTGGACGCCGTGGTGGTGGCCTGCTCCACCGTGGCCATGCAGCAGAAGATCACCCGGTTCGTGCGGTACAAGGAGATGAACGCCTTCGACGGCAAGACCATCGACAAGGAGACCGGCGAGGTGCTGCACCAGAAGACCCACTTCCCCCAGCCCTGGGAGTTCTTCGCCCAGGAGGTGATGATCCGGGTGTTCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGTTCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCTGCGGACCCTGCTGGCCGAGAAGCTGTCCTCCCGGCCCGAGGCCGTGCACGAGTACGTGACCCCCCTGTTCGTGTCCCGGGCCCCCAACCGGAAGATGTCCGGCCAGGGCCACATGGAGACCGTGAAGTCCGCCAAGCGGCTGGACGAGGGCGTGTCCGTGCTGCGGGTGCCCCTGACCCAGCTGAAGCTGAAGGACCTGGAGAAGATGGTGAACCGGGAGCGGGAGCCCAAGCTGTACGAGGCCCTGAAGGCCCGGCTGGAGGCCCACAAGGACGACCCCGCCAAGGCCTTCGCCGAGCCCTTCTACAAGTACGACAAGGCCGGCAACCGGACCCAGCAGGTGAAGGCCGTGCGGGTGGAGCAGGTGCAGAAGACCGGCGTGTGGGTGCGGAACCACAACGGCATCGCCGACAACGCCACCATGGTGCGGGTGGACGTGTTCGAGAAGGGCGACAAGTACTACCTGGTGCCCATCTACTCCTGGCAGGTGGCCAAGGGCATCCTGCCCGACCGGGCCGTGGTGGCCTACGCCGACGAGGAGGACTGGACCGTGATCGACGAGTCCTTCCGGTTCAAGTTCGTGCTGTACTCCAACGACCTGATCAAGGTGCAGCTGAAGAAGGACTCCTTCCTGGGCTACTTCTCCGGCCTGGACCGGGCCACCGGCGCCATCTCCCTGCGGGAGCACGACCTGGAGAAGTCCAAGGGCAAGGACGGCATGCACCGGATCGGCGTGAAGACCGCCCTGTCCTTCCAGAAGTACCAGATCGACGAGATGGGCAAGGAGATCCGGCCCTGCCGGCTGAAGAAGCGGCCCCCCGTGCGG
215 編碼Nme3Cas9裂解酶之例示性編碼序列 GCAGCATTCAAACCAAACCCAATCAACTACATCCTAGGACTAGACATCGGAATCGCATCAGTAGGATGAGCAATGGTAGAAATCGACGAAGAAGAAAACCCAATCCGACTAATCGACCTAGGAGTACGAGTATTCGAACGAGCAGAAGTACCAAAAACAGGAGACTCACTAGCAATGGCACGACGACTAGCACGATCAGTACGACGACTAACACGACGACGAGCACACCGACTACTACGAGCACGACGACTACTAAAACGAGAAGGAGTACTACAAGCAGCAGACTTCGACGAAAACGGACTAATCAAATCACTACCAAACACACCATGACAACTACGAGCAGCAGCACTAGACCGAAAACTAACACCACTAGAATGATCAGCAGTACTACTACACCTAATCAAACACCGAGGATACCTATCACAACGAAAAAACGAAGGAGAAACAGCAGACAAAGAACTAGGAGCACTACTAAAAGGAGTAGCAGACAACGCACACGCACTACAAACAGGAGACTTCCGAACACCAGCAGAACTAGCACTAAACAAATTCGAAAAAGAATGCGGACACATCCGAAACCAACGAGGAGACTACTCACACACATTCTCACGAAAAGACCTACAAGCAGAACTAAACCTACTATTCGAAAAACAAAAAGAATTCGGAAACCCACACGTATCAGGAGGACTAAAAGAAGGAATCGAAACACTACTAATGACACAACGACCAGCACTATCAGGAGACGCAGTACAAAAAATGCTAGGACACTGCACATTCGAACCAGCAGAACCAAAAGCAGCAAAAAACACATACACAGCAGAACGATTCATCTGACTAACAAAACTAAACAACCTACGAATCCTAGAACAAGGATCAGAACGACCACTAACAGACACAGAACGAGCAACACTAATGGACGAACCATACCGAAAATCAAAACTAACATACGCACAAGCACGAAAACTACTATCACTAGAAGACACAGCATTCTTCAAAGGACTACGATACGGAAAAGACAACGCAGAAGCATCAACACTAATGGAAATGAAAGCATACCACACAATCTCACGAGCACTAGAAAAAGAAGGACTAAAAGACAAAAAATCACCACTAAACCTATCACCAGAACTACAAGACGAAATCGGAACAGCATTCTCACTATTCAAAACAGACGAAGACATCACAGGACGACTAAAAGACCGAATCCAACCAGAAATCCTAGAAGCACTACTAAAACACATCTCATTCGACAAATTCGTACAAATCTCACTAAAAGCACTACGACGAATCGTACCACTAATGGAACAAGGAAAACGATACGACGAAGCATGCGCAGAAATCTACGGAGACCACTACGGAAAAAAAAACACAGAAGAAAAAATCTACCTACCACCAATCCCAGCAGACGAAATCCGAAACCCAGTAGTACTACGAGCACTATCACAAGCACGAAAAGTAATCAACGGAGTAGTACGACGATACGGATCACCAGCACGAATCCACATCGAAACAGCACGAGAAGTAGGAAAATCATTCAAAGACCGAAAAGAAATCGAAAAACGACAAGAAGAAAACCGAAAAGACCGAGAAAAAGCAGCAGCAAAATTCCGAGAATACTTCCCAAACTTCGTAGGAGAACCAAAATCAAAAGACATCCTAAAACTACGACTATACGAACAACAACACGGAAAATGCCTATACTCAGGAAAAGAAATCAACCTAGGACGACTAAACGAAAAAGGATACGTAGAAATCGACCACGCACTACCATTCTCACGAACATGAGACGACTCATTCAACAACAAAGTACTAGTACTAGGATCAGAAAACCAAAACAAAGGAAACCAAACACCATACGAATACTTCAACGGAAAAGACAACTCACGAGAATGACAAGAATTCAAAGCACGAGTAGAAACATCACGATTCCCACGATCAAAAAAACAACGAATCCTACTACAAAAATTCGACGAAGACGGATTCAAAGAACGAAACCTAAACGACACACGATACGTAAACCGATTCCTATGCCAATTCGTAGCAGACCGAATGCGACTAACAGGAAAAGGAAAAAAACGAGTATTCGCATCAAACGGACAAATCACAAACCTACTACGAGGATTCTGAGGACTACGAAAAGTACGAGCAGAAAACGACCGACACCACGCACTAGACGCAGTAGTAGTAGCATGCTCAACAGTAGCAATGCAACAAAAAATCACACGATTCGTACGATACAAAGAAATGAACGCATTCGACGGAAAAACAATCGACAAAGAAACAGGAGAAGTACTACACCAAAAAACACACTTCCCACAACCATGAGAATTCTTCGCACAAGAAGTAATGATCCGAGTATTCGGAAAACCAGACGGAAAACCAGAATTCGAAGAAGCAGACACACCAGAAAAACTACGAACACTACTAGCAGAAAAACTATCATCACGACCAGAAGCAGTACACGAATACGTAACACCACTATTCGTATCACGAGCACCAAACCGAAAAATGTCAGGACAAGGACACATGGAAACAGTAAAATCAGCAAAACGACTAGACGAAGGAGTATCAGTACTACGAGTACCACTAACACAACTAAAACTAAAAGACCTAGAAAAAATGGTAAACCGAGAACGAGAACCAAAACTATACGAAGCACTAAAAGCACGACTAGAAGCACACAAAGACGACCCAGCAAAAGCATTCGCAGAACCATTCTACAAATACGACAAAGCAGGAAACCGAACACAACAAGTAAAAGCAGTACGAGTAGAACAAGTACAAAAAACAGGAGTATGAGTACGAAACCACAACGGAATCGCAGACAACGCAACAATGGTACGAGTAGACGTATTCGAAAAAGGAGACAAATACTACCTAGTACCAATCTACTCATGACAAGTAGCAAAAGGAATCCTACCAGACCGAGCAGTAGTAGCATACGCAGACGAAGAAGACTGAACAGTAATCGACGAATCATTCCGATTCAAATTCGTACTATACTCAAACGACCTAATCAAAGTACAACTAAAAAAAGACTCATTCCTAGGATACTTCTCAGGACTAGACCGAGCAACAGGAGCAATCTCACTACGAGAACACGACCTAGAAAAATCAAAAGGAAAAGACGGAATGCACCGAATCGGAGTAAAAACAGCACTATCATTCCAAAAATACCAAATCGACGAAATGGGAAAAGAAATCCGACCATGCCGACTAAAAAAACGACCACCAGTACGA
216 Nme3Cas9裂解酶之例示性開放閱讀框 ATGGCTGCTTTTAAGCCTAATCCTATTAATTATATTCTTGGTCTTGATATTGGTATTGCTTCTGTTGGTTGGGCTATGGTTGAGATTGATGAGGAGGAGAATCCTATTCGTCTTATTGATCTTGGTGTTCGTGTTTTTGAGCGTGCTGAGGTTCCTAAGACTGGTGATTCTCTTGCTATGGCTCGTCGTCTTGCTCGTTCTGTTCGTCGTCTTACTCGTCGTCGTGCTCATCGTCTTCTTCGTGCTCGTCGTCTTCTTAAGCGTGAGGGTGTTCTTCAGGCTGCTGATTTTGATGAGAATGGTCTTATTAAGTCTCTTCCTAATACTCCTTGGCAGCTTCGTGCTGCTGCTCTTGATCGTAAGCTTACTCCTCTTGAGTGGTCTGCTGTTCTTCTTCATCTTATTAAGCATCGTGGTTATCTTTCTCAGCGTAAGAATGAGGGTGAGACTGCTGATAAGGAGCTTGGTGCTCTTCTTAAGGGTGTTGCTGATAATGCTCATGCTCTTCAGACTGGTGATTTTCGTACTCCTGCTGAGCTTGCTCTTAATAAGTTTGAGAAGGAGTGTGGTCATATTCGTAATCAGCGTGGTGATTATTCTCATACTTTTTCTCGTAAGGATCTTCAGGCTGAGCTTAATCTTCTTTTTGAGAAGCAGAAGGAGTTTGGTAATCCTCATGTTTCTGGTGGTCTTAAGGAGGGTATTGAGACTCTTCTTATGACTCAGCGTCCTGCTCTTTCTGGTGATGCTGTTCAGAAGATGCTTGGTCATTGTACTTTTGAGCCTGCTGAGCCTAAGGCTGCTAAGAATACTTATACTGCTGAGCGTTTTATTTGGCTTACTAAGCTTAATAATCTTCGTATTCTTGAGCAGGGTTCTGAGCGTCCTCTTACTGATACTGAGCGTGCTACTCTTATGGATGAGCCTTATCGTAAGTCTAAGCTTACTTATGCTCAGGCTCGTAAGCTTCTTTCTCTTGAGGATACTGCTTTTTTTAAGGGTCTTCGTTATGGTAAGGATAATGCTGAGGCTTCTACTCTTATGGAGATGAAGGCTTATCATACTATTTCTCGTGCTCTTGAGAAGGAGGGTCTTAAGGATAAGAAGTCTCCTCTTAATCTTTCTCCTGAGCTTCAGGATGAGATTGGTACTGCTTTTTCTCTTTTTAAGACTGATGAGGATATTACTGGTCGTCTTAAGGATCGTATTCAGCCTGAGATTCTTGAGGCTCTTCTTAAGCATATTTCTTTTGATAAGTTTGTTCAGATTTCTCTTAAGGCTCTTCGTCGTATTGTTCCTCTTATGGAGCAGGGTAAGCGTTATGATGAGGCTTGTGCTGAGATTTATGGTGATCATTATGGTAAGAAGAATACTGAGGAGAAGATTTATCTTCCTCCTATTCCTGCTGATGAGATTCGTAATCCTGTTGTTCTTCGTGCTCTTTCTCAGGCTCGTAAGGTTATTAATGGTGTTGTTCGTCGTTATGGTTCTCCTGCTCGTATTCATATTGAGACTGCTCGTGAGGTTGGTAAGTCTTTTAAGGATCGTAAGGAGATTGAGAAGCGTCAGGAGGAGAATCGTAAGGATCGTGAGAAGGCTGCTGCTAAGTTTCGTGAGTATTTTCCTAATTTTGTTGGTGAGCCTAAGTCTAAGGATATTCTTAAGCTTCGTCTTTATGAGCAGCAGCATGGTAAGTGTCTTTATTCTGGTAAGGAGATTAATCTTGGTCGTCTTAATGAGAAGGGTTATGTTGAGATTGATCATGCTCTTCCTTTTTCTCGTACTTGGGATGATTCTTTTAATAATAAGGTTCTTGTTCTTGGTTCTGAGAATCAGAATAAGGGTAATCAGACTCCTTATGAGTATTTTAATGGTAAGGATAATTCTCGTGAGTGGCAGGAGTTTAAGGCTCGTGTTGAGACTTCTCGTTTTCCTCGTTCTAAGAAGCAGCGTATTCTTCTTCAGAAGTTTGATGAGGATGGTTTTAAGGAGCGTAATCTTAATGATACTCGTTATGTTAATCGTTTTCTTTGTCAGTTTGTTGCTGATCGTATGCGTCTTACTGGTAAGGGTAAGAAGCGTGTTTTTGCTTCTAATGGTCAGATTACTAATCTTCTTCGTGGTTTTTGGGGTCTTCGTAAGGTTCGTGCTGAGAATGATCGTCATCATGCTCTTGATGCTGTTGTTGTTGCTTGTTCTACTGTTGCTATGCAGCAGAAGATTACTCGTTTTGTTCGTTATAAGGAGATGAATGCTTTTGATGGTAAGACTATTGATAAGGAGACTGGTGAGGTTCTTCATCAGAAGACTCATTTTCCTCAGCCTTGGGAGTTTTTTGCTCAGGAGGTTATGATTCGTGTTTTTGGTAAGCCTGATGGTAAGCCTGAGTTTGAGGAGGCTGATACTCCTGAGAAGCTTCGTACTCTTCTTGCTGAGAAGCTTTCTTCTCGTCCTGAGGCTGTTCATGAGTATGTTACTCCTCTTTTTGTTTCTCGTGCTCCTAATCGTAAGATGTCTGGTCAGGGTCATATGGAGACTGTTAAGTCTGCTAAGCGTCTTGATGAGGGTGTTTCTGTTCTTCGTGTTCCTCTTACTCAGCTTAAGCTTAAGGATCTTGAGAAGATGGTTAATCGTGAGCGTGAGCCTAAGCTTTATGAGGCTCTTAAGGCTCGTCTTGAGGCTCATAAGGATGATCCTGCTAAGGCTTTTGCTGAGCCTTTTTATAAGTATGATAAGGCTGGTAATCGTACTCAGCAGGTTAAGGCTGTTCGTGTTGAGCAGGTTCAGAAGACTGGTGTTTGGGTTCGTAATCATAATGGTATTGCTGATAATGCTACTATGGTTCGTGTTGATGTTTTTGAGAAGGGTGATAAGTATTATCTTGTTCCTATTTATTCTTGGCAGGTTGCTAAGGGTATTCTTCCTGATCGTGCTGTTGTTGCTTATGCTGATGAGGAGGATTGGACTGTTATTGATGAGTCTTTTCGTTTTAAGTTTGTTCTTTATTCTAATGATCTTATTAAGGTTCAGCTTAAGAAGGATTCTTTTCTTGGTTATTTTTCTGGTCTTGATCGTGCTACTGGTGCTATTTCTCTTCGTGAGCATGATCTTGAGAAGTCTAAGGGTAAGGATGGTATGCATCGTATTGGTGTTAAGACTGCTCTTTCTTTTCAGAAGTATCAGATTGATGAGATGGGTAAGGAGATTCGTCCTTGTCGTCTTAAGAAGCGTCCTCCTGTTCGTUGA
217 Nme3Cas9裂解酶之例示性開放閱讀框 ATGGCCGCCTTCAAGCCCAACCCCATCAACTACATCCTGGGCCTGGACATCGGCATCGCCTCCGTGGGCTGGGCCATGGTGGAGATCGACGAGGAGGAGAACCCCATCCGGCTGATCGACCTGGGCGTGCGGGTGTTCGAGCGGGCCGAGGTGCCCAAGACCGGCGACTCCCTGGCCATGGCCCGGCGGCTGGCCCGGTCCGTGCGGCGGCTGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCTGCTGCGGGCCCGGCGGCTGCTGAAGCGGGAGGGCGTGCTGCAGGCCGCCGACTTCGACGAGAACGGCCTGATCAAGTCCCTGCCCAACACCCCCTGGCAGCTGCGGGCCGCCGCCCTGGACCGGAAGCTGACCCCCCTGGAGTGGTCCGCCGTGCTGCTGCACCTGATCAAGCACCGGGGCTACCTGTCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCTGGGCGCCCTGCTGAAGGGCGTGGCCGACAACGCCCACGCCCTGCAGACCGGCGACTTCCGGACCCCCGCCGAGCTGGCCCTGAACAAGTTCGAGAAGGAGTGCGGCCACATCCGGAACCAGCGGGGCGACTACTCCCACACCTTCTCCCGGAAGGACCTGCAGGCCGAGCTGAACCTGCTGTTCGAGAAGCAGAAGGAGTTCGGCAACCCCCACGTGTCCGGCGGCCTGAAGGAGGGCATCGAGACCCTGCTGATGACCCAGCGGCCCGCCCTGTCCGGCGACGCCGTGCAGAAGATGCTGGGCCACTGCACCTTCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCTACACCGCCGAGCGGTTCATCTGGCTGACCAAGCTGAACAACCTGCGGATCCTGGAGCAGGGCTCCGAGCGGCCCCTGACCGACACCGAGCGGGCCACCCTGATGGACGAGCCCTACCGGAAGTCCAAGCTGACCTACGCCCAGGCCCGGAAGCTGCTGTCCCTGGAGGACACCGCCTTCTTCAAGGGCCTGCGGTACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCTCCACCCTGATGGAGATGAAGGCCTACCACACCATCTCCCGGGCCCTGGAGAAGGAGGGCCTGAAGGACAAGAAGTCCCCCCTGAACCTGTCCCCCGAGCTGCAGGACGAGATCGGCACCGCCTTCTCCCTGTTCAAGACCGACGAGGACATCACCGGCCGGCTGAAGGACCGGATCCAGCCCGAGATCCTGGAGGCCCTGCTGAAGCACATCTCCTTCGACAAGTTCGTGCAGATCTCCCTGAAGGCCCTGCGGCGGATCGTGCCCCTGATGGAGCAGGGCAAGCGGTACGACGAGGCCTGCGCCGAGATCTACGGCGACCACTACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGATCTACCTGCCCCCCATCCCCGCCGACGAGATCCGGAACCCCGTGGTGCTGCGGGCCCTGTCCCAGGCCCGGAAGGTGATCAACGGCGTGGTGCGGCGGTACGGCTCCCCCGCCCGGATCCACATCGAGACCGCCCGGGAGGTGGGCAAGTCCTTCAAGGACCGGAAGGAGATCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGTTCCGGGAGTACTTCCCCAACTTCGTGGGCGAGCCCAAGTCCAAGGACATCCTGAAGCTGCGGCTGTACGAGCAGCAGCACGGCAAGTGCCTGTACTCCGGCAAGGAGATCAACCTGGGCCGGCTGAACGAGAAGGGCTACGTGGAGATCGACCACGCCCTGCCCTTCTCCCGGACCTGGGACGACTCCTTCAACAACAAGGTGCTGGTGCTGGGCTCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCTACGAGTACTTCAACGGCAAGGACAACTCCCGGGAGTGGCAGGAGTTCAAGGCCCGGGTGGAGACCTCCCGGTTCCCCCGGTCCAAGAAGCAGCGGATCCTGCTGCAGAAGTTCGACGAGGACGGCTTCAAGGAGCGGAACCTGAACGACACCCGGTACGTGAACCGGTTCCTGTGCCAGTTCGTGGCCGACCGGATGCGGCTGACCGGCAAGGGCAAGAAGCGGGTGTTCGCCTCCAACGGCCAGATCACCAACCTGCTGCGGGGCTTCTGGGGCCTGCGGAAGGTGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCTGGACGCCGTGGTGGTGGCCTGCTCCACCGTGGCCATGCAGCAGAAGATCACCCGGTTCGTGCGGTACAAGGAGATGAACGCCTTCGACGGCAAGACCATCGACAAGGAGACCGGCGAGGTGCTGCACCAGAAGACCCACTTCCCCCAGCCCTGGGAGTTCTTCGCCCAGGAGGTGATGATCCGGGTGTTCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGTTCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCTGCGGACCCTGCTGGCCGAGAAGCTGTCCTCCCGGCCCGAGGCCGTGCACGAGTACGTGACCCCCCTGTTCGTGTCCCGGGCCCCCAACCGGAAGATGTCCGGCCAGGGCCACATGGAGACCGTGAAGTCCGCCAAGCGGCTGGACGAGGGCGTGTCCGTGCTGCGGGTGCCCCTGACCCAGCTGAAGCTGAAGGACCTGGAGAAGATGGTGAACCGGGAGCGGGAGCCCAAGCTGTACGAGGCCCTGAAGGCCCGGCTGGAGGCCCACAAGGACGACCCCGCCAAGGCCTTCGCCGAGCCCTTCTACAAGTACGACAAGGCCGGCAACCGGACCCAGCAGGTGAAGGCCGTGCGGGTGGAGCAGGTGCAGAAGACCGGCGTGTGGGTGCGGAACCACAACGGCATCGCCGACAACGCCACCATGGTGCGGGTGGACGTGTTCGAGAAGGGCGACAAGTACTACCTGGTGCCCATCTACTCCTGGCAGGTGGCCAAGGGCATCCTGCCCGACCGGGCCGTGGTGGCCTACGCCGACGAGGAGGACTGGACCGTGATCGACGAGTCCTTCCGGTTCAAGTTCGTGCTGTACTCCAACGACCTGATCAAGGTGCAGCTGAAGAAGGACTCCTTCCTGGGCTACTTCTCCGGCCTGGACCGGGCCACCGGCGCCATCTCCCTGCGGGAGCACGACCTGGAGAAGTCCAAGGGCAAGGACGGCATGCACCGGATCGGCGTGAAGACCGCCCTGTCCTTCCAGAAGTACCAGATCGACGAGATGGGCAAGGAGATCCGGCCCTGCCGGCTGAAGAAGCGGCCCCCCGTGCGGUGA
218 Nme3Cas9裂解酶之例示性開放閱讀框 ATGGCAGCATTCAAACCAAACCCAATCAACTACATCCTAGGACTAGACATCGGAATCGCATCAGTAGGATGAGCAATGGTAGAAATCGACGAAGAAGAAAACCCAATCCGACTAATCGACCTAGGAGTACGAGTATTCGAACGAGCAGAAGTACCAAAAACAGGAGACTCACTAGCAATGGCACGACGACTAGCACGATCAGTACGACGACTAACACGACGACGAGCACACCGACTACTACGAGCACGACGACTACTAAAACGAGAAGGAGTACTACAAGCAGCAGACTTCGACGAAAACGGACTAATCAAATCACTACCAAACACACCATGACAACTACGAGCAGCAGCACTAGACCGAAAACTAACACCACTAGAATGATCAGCAGTACTACTACACCTAATCAAACACCGAGGATACCTATCACAACGAAAAAACGAAGGAGAAACAGCAGACAAAGAACTAGGAGCACTACTAAAAGGAGTAGCAGACAACGCACACGCACTACAAACAGGAGACTTCCGAACACCAGCAGAACTAGCACTAAACAAATTCGAAAAAGAATGCGGACACATCCGAAACCAACGAGGAGACTACTCACACACATTCTCACGAAAAGACCTACAAGCAGAACTAAACCTACTATTCGAAAAACAAAAAGAATTCGGAAACCCACACGTATCAGGAGGACTAAAAGAAGGAATCGAAACACTACTAATGACACAACGACCAGCACTATCAGGAGACGCAGTACAAAAAATGCTAGGACACTGCACATTCGAACCAGCAGAACCAAAAGCAGCAAAAAACACATACACAGCAGAACGATTCATCTGACTAACAAAACTAAACAACCTACGAATCCTAGAACAAGGATCAGAACGACCACTAACAGACACAGAACGAGCAACACTAATGGACGAACCATACCGAAAATCAAAACTAACATACGCACAAGCACGAAAACTACTATCACTAGAAGACACAGCATTCTTCAAAGGACTACGATACGGAAAAGACAACGCAGAAGCATCAACACTAATGGAAATGAAAGCATACCACACAATCTCACGAGCACTAGAAAAAGAAGGACTAAAAGACAAAAAATCACCACTAAACCTATCACCAGAACTACAAGACGAAATCGGAACAGCATTCTCACTATTCAAAACAGACGAAGACATCACAGGACGACTAAAAGACCGAATCCAACCAGAAATCCTAGAAGCACTACTAAAACACATCTCATTCGACAAATTCGTACAAATCTCACTAAAAGCACTACGACGAATCGTACCACTAATGGAACAAGGAAAACGATACGACGAAGCATGCGCAGAAATCTACGGAGACCACTACGGAAAAAAAAACACAGAAGAAAAAATCTACCTACCACCAATCCCAGCAGACGAAATCCGAAACCCAGTAGTACTACGAGCACTATCACAAGCACGAAAAGTAATCAACGGAGTAGTACGACGATACGGATCACCAGCACGAATCCACATCGAAACAGCACGAGAAGTAGGAAAATCATTCAAAGACCGAAAAGAAATCGAAAAACGACAAGAAGAAAACCGAAAAGACCGAGAAAAAGCAGCAGCAAAATTCCGAGAATACTTCCCAAACTTCGTAGGAGAACCAAAATCAAAAGACATCCTAAAACTACGACTATACGAACAACAACACGGAAAATGCCTATACTCAGGAAAAGAAATCAACCTAGGACGACTAAACGAAAAAGGATACGTAGAAATCGACCACGCACTACCATTCTCACGAACATGAGACGACTCATTCAACAACAAAGTACTAGTACTAGGATCAGAAAACCAAAACAAAGGAAACCAAACACCATACGAATACTTCAACGGAAAAGACAACTCACGAGAATGACAAGAATTCAAAGCACGAGTAGAAACATCACGATTCCCACGATCAAAAAAACAACGAATCCTACTACAAAAATTCGACGAAGACGGATTCAAAGAACGAAACCTAAACGACACACGATACGTAAACCGATTCCTATGCCAATTCGTAGCAGACCGAATGCGACTAACAGGAAAAGGAAAAAAACGAGTATTCGCATCAAACGGACAAATCACAAACCTACTACGAGGATTCTGAGGACTACGAAAAGTACGAGCAGAAAACGACCGACACCACGCACTAGACGCAGTAGTAGTAGCATGCTCAACAGTAGCAATGCAACAAAAAATCACACGATTCGTACGATACAAAGAAATGAACGCATTCGACGGAAAAACAATCGACAAAGAAACAGGAGAAGTACTACACCAAAAAACACACTTCCCACAACCATGAGAATTCTTCGCACAAGAAGTAATGATCCGAGTATTCGGAAAACCAGACGGAAAACCAGAATTCGAAGAAGCAGACACACCAGAAAAACTACGAACACTACTAGCAGAAAAACTATCATCACGACCAGAAGCAGTACACGAATACGTAACACCACTATTCGTATCACGAGCACCAAACCGAAAAATGTCAGGACAAGGACACATGGAAACAGTAAAATCAGCAAAACGACTAGACGAAGGAGTATCAGTACTACGAGTACCACTAACACAACTAAAACTAAAAGACCTAGAAAAAATGGTAAACCGAGAACGAGAACCAAAACTATACGAAGCACTAAAAGCACGACTAGAAGCACACAAAGACGACCCAGCAAAAGCATTCGCAGAACCATTCTACAAATACGACAAAGCAGGAAACCGAACACAACAAGTAAAAGCAGTACGAGTAGAACAAGTACAAAAAACAGGAGTATGAGTACGAAACCACAACGGAATCGCAGACAACGCAACAATGGTACGAGTAGACGTATTCGAAAAAGGAGACAAATACTACCTAGTACCAATCTACTCATGACAAGTAGCAAAAGGAATCCTACCAGACCGAGCAGTAGTAGCATACGCAGACGAAGAAGACTGAACAGTAATCGACGAATCATTCCGATTCAAATTCGTACTATACTCAAACGACCTAATCAAAGTACAACTAAAAAAAGACTCATTCCTAGGATACTTCTCAGGACTAGACCGAGCAACAGGAGCAATCTCACTACGAGAACACGACCTAGAAAAATCAAAAGGAAAAGACGGAATGCACCGAATCGGAGTAAAAACAGCACTATCATTCCAAAAATACCAAATCGACGAAATGGGAAAAGAAATCCGACCATGCCGACTAAAAAAACGACCACCAGTACGAUAA
219 Nme3Cas9 HNH切口酶之例示性胺基酸序列 MAAFKPNPINYILGLDIGIASVGWAMVEIDEEENPIRLIDLGVRVFERAEVPKTGDSLAMARRLARSVRRLTRRRAHRLLRARRLLKREGVLQAADFDENGLIKSLPNTPWQLRAAALDRKLTPLEWSAVLLHLIKHRGYLSQRKNEGETADKELGALLKGVADNAHALQTGDFRTPAELALNKFEKECGHIRNQRGDYSHTFSRKDLQAELNLLFEKQKEFGNPHVSGGLKEGIETLLMTQRPALSGDAVQKMLGHCTFEPAEPKAAKNTYTAERFIWLTKLNNLRILEQGSERPLTDTERATLMDEPYRKSKLTYAQARKLLSLEDTAFFKGLRYGKDNAEASTLMEMKAYHTISRALEKEGLKDKKSPLNLSPELQDEIGTAFSLFKTDEDITGRLKDRIQPEILEALLKHISFDKFVQISLKALRRIVPLMEQGKRYDEACAEIYGDHYGKKNTEEKIYLPPIPADEIRNPVVLRALSQARKVINGVVRRYGSPARIHIETAREVGKSFKDRKEIEKRQEENRKDREKAAAKFREYFPNFVGEPKSKDILKLRLYEQQHGKCLYSGKEINLGRLNEKGYVEIDAALPFSRTWDDSFNNKVLVLGSENQNKGNQTPYEYFNGKDNSREWQEFKARVETSRFPRSKKQRILLQKFDEDGFKERNLNDTRYVNRFLCQFVADRMRLTGKGKKRVFASNGQITNLLRGFWGLRKVRAENDRHHALDAVVVACSTVAMQQKITRFVRYKEMNAFDGKTIDKETGEVLHQKTHFPQPWEFFAQEVMIRVFGKPDGKPEFEEADTPEKLRTLLAEKLSSRPEAVHEYVTPLFVSRAPNRKMSGQGHMETVKSAKRLDEGVSVLRVPLTQLKLKDLEKMVNREREPKLYEALKARLEAHKDDPAKAFAEPFYKYDKAGNRTQQVKAVRVEQVQKTGVWVRNHNGIADNATMVRVDVFEKGDKYYLVPIYSWQVAKGILPDRAVVAYADEEDWTVIDESFRFKFVLYSNDLIKVQLKKDSFLGYFSGLDRATGAISLREHDLEKSKGKDGMHRIGVKTALSFQKYQIDEMGKEIRPCRLKKRPPVR
220 編碼Nme3Cas9 HNH切口酶之例示性編碼序列 GCTGCTTTTAAGCCTAATCCTATTAATTATATTCTTGGTCTTGATATTGGTATTGCTTCTGTTGGTTGGGCTATGGTTGAGATTGATGAGGAGGAGAATCCTATTCGTCTTATTGATCTTGGTGTTCGTGTTTTTGAGCGTGCTGAGGTTCCTAAGACTGGTGATTCTCTTGCTATGGCTCGTCGTCTTGCTCGTTCTGTTCGTCGTCTTACTCGTCGTCGTGCTCATCGTCTTCTTCGTGCTCGTCGTCTTCTTAAGCGTGAGGGTGTTCTTCAGGCTGCTGATTTTGATGAGAATGGTCTTATTAAGTCTCTTCCTAATACTCCTTGGCAGCTTCGTGCTGCTGCTCTTGATCGTAAGCTTACTCCTCTTGAGTGGTCTGCTGTTCTTCTTCATCTTATTAAGCATCGTGGTTATCTTTCTCAGCGTAAGAATGAGGGTGAGACTGCTGATAAGGAGCTTGGTGCTCTTCTTAAGGGTGTTGCTGATAATGCTCATGCTCTTCAGACTGGTGATTTTCGTACTCCTGCTGAGCTTGCTCTTAATAAGTTTGAGAAGGAGTGTGGTCATATTCGTAATCAGCGTGGTGATTATTCTCATACTTTTTCTCGTAAGGATCTTCAGGCTGAGCTTAATCTTCTTTTTGAGAAGCAGAAGGAGTTTGGTAATCCTCATGTTTCTGGTGGTCTTAAGGAGGGTATTGAGACTCTTCTTATGACTCAGCGTCCTGCTCTTTCTGGTGATGCTGTTCAGAAGATGCTTGGTCATTGTACTTTTGAGCCTGCTGAGCCTAAGGCTGCTAAGAATACTTATACTGCTGAGCGTTTTATTTGGCTTACTAAGCTTAATAATCTTCGTATTCTTGAGCAGGGTTCTGAGCGTCCTCTTACTGATACTGAGCGTGCTACTCTTATGGATGAGCCTTATCGTAAGTCTAAGCTTACTTATGCTCAGGCTCGTAAGCTTCTTTCTCTTGAGGATACTGCTTTTTTTAAGGGTCTTCGTTATGGTAAGGATAATGCTGAGGCTTCTACTCTTATGGAGATGAAGGCTTATCATACTATTTCTCGTGCTCTTGAGAAGGAGGGTCTTAAGGATAAGAAGTCTCCTCTTAATCTTTCTCCTGAGCTTCAGGATGAGATTGGTACTGCTTTTTCTCTTTTTAAGACTGATGAGGATATTACTGGTCGTCTTAAGGATCGTATTCAGCCTGAGATTCTTGAGGCTCTTCTTAAGCATATTTCTTTTGATAAGTTTGTTCAGATTTCTCTTAAGGCTCTTCGTCGTATTGTTCCTCTTATGGAGCAGGGTAAGCGTTATGATGAGGCTTGTGCTGAGATTTATGGTGATCATTATGGTAAGAAGAATACTGAGGAGAAGATTTATCTTCCTCCTATTCCTGCTGATGAGATTCGTAATCCTGTTGTTCTTCGTGCTCTTTCTCAGGCTCGTAAGGTTATTAATGGTGTTGTTCGTCGTTATGGTTCTCCTGCTCGTATTCATATTGAGACTGCTCGTGAGGTTGGTAAGTCTTTTAAGGATCGTAAGGAGATTGAGAAGCGTCAGGAGGAGAATCGTAAGGATCGTGAGAAGGCTGCTGCTAAGTTTCGTGAGTATTTTCCTAATTTTGTTGGTGAGCCTAAGTCTAAGGATATTCTTAAGCTTCGTCTTTATGAGCAGCAGCATGGTAAGTGTCTTTATTCTGGTAAGGAGATTAATCTTGGTCGTCTTAATGAGAAGGGTTATGTTGAGATTGATGCTGCTCTTCCTTTTTCTCGTACTTGGGATGATTCTTTTAATAATAAGGTTCTTGTTCTTGGTTCTGAGAATCAGAATAAGGGTAATCAGACTCCTTATGAGTATTTTAATGGTAAGGATAATTCTCGTGAGTGGCAGGAGTTTAAGGCTCGTGTTGAGACTTCTCGTTTTCCTCGTTCTAAGAAGCAGCGTATTCTTCTTCAGAAGTTTGATGAGGATGGTTTTAAGGAGCGTAATCTTAATGATACTCGTTATGTTAATCGTTTTCTTTGTCAGTTTGTTGCTGATCGTATGCGTCTTACTGGTAAGGGTAAGAAGCGTGTTTTTGCTTCTAATGGTCAGATTACTAATCTTCTTCGTGGTTTTTGGGGTCTTCGTAAGGTTCGTGCTGAGAATGATCGTCATCATGCTCTTGATGCTGTTGTTGTTGCTTGTTCTACTGTTGCTATGCAGCAGAAGATTACTCGTTTTGTTCGTTATAAGGAGATGAATGCTTTTGATGGTAAGACTATTGATAAGGAGACTGGTGAGGTTCTTCATCAGAAGACTCATTTTCCTCAGCCTTGGGAGTTTTTTGCTCAGGAGGTTATGATTCGTGTTTTTGGTAAGCCTGATGGTAAGCCTGAGTTTGAGGAGGCTGATACTCCTGAGAAGCTTCGTACTCTTCTTGCTGAGAAGCTTTCTTCTCGTCCTGAGGCTGTTCATGAGTATGTTACTCCTCTTTTTGTTTCTCGTGCTCCTAATCGTAAGATGTCTGGTCAGGGTCATATGGAGACTGTTAAGTCTGCTAAGCGTCTTGATGAGGGTGTTTCTGTTCTTCGTGTTCCTCTTACTCAGCTTAAGCTTAAGGATCTTGAGAAGATGGTTAATCGTGAGCGTGAGCCTAAGCTTTATGAGGCTCTTAAGGCTCGTCTTGAGGCTCATAAGGATGATCCTGCTAAGGCTTTTGCTGAGCCTTTTTATAAGTATGATAAGGCTGGTAATCGTACTCAGCAGGTTAAGGCTGTTCGTGTTGAGCAGGTTCAGAAGACTGGTGTTTGGGTTCGTAATCATAATGGTATTGCTGATAATGCTACTATGGTTCGTGTTGATGTTTTTGAGAAGGGTGATAAGTATTATCTTGTTCCTATTTATTCTTGGCAGGTTGCTAAGGGTATTCTTCCTGATCGTGCTGTTGTTGCTTATGCTGATGAGGAGGATTGGACTGTTATTGATGAGTCTTTTCGTTTTAAGTTTGTTCTTTATTCTAATGATCTTATTAAGGTTCAGCTTAAGAAGGATTCTTTTCTTGGTTATTTTTCTGGTCTTGATCGTGCTACTGGTGCTATTTCTCTTCGTGAGCATGATCTTGAGAAGTCTAAGGGTAAGGATGGTATGCATCGTATTGGTGTTAAGACTGCTCTTTCTTTTCAGAAGTATCAGATTGATGAGATGGGTAAGGAGATTCGTCCTTGTCGTCTTAAGAAGCGTCCTCCTGTTCGT
221 編碼Nme3Cas9 HNH切口酶之例示性編碼序列 GCCGCCTTCAAGCCCAACCCCATCAACTACATCCTGGGCCTGGACATCGGCATCGCCTCCGTGGGCTGGGCCATGGTGGAGATCGACGAGGAGGAGAACCCCATCCGGCTGATCGACCTGGGCGTGCGGGTGTTCGAGCGGGCCGAGGTGCCCAAGACCGGCGACTCCCTGGCCATGGCCCGGCGGCTGGCCCGGTCCGTGCGGCGGCTGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCTGCTGCGGGCCCGGCGGCTGCTGAAGCGGGAGGGCGTGCTGCAGGCCGCCGACTTCGACGAGAACGGCCTGATCAAGTCCCTGCCCAACACCCCCTGGCAGCTGCGGGCCGCCGCCCTGGACCGGAAGCTGACCCCCCTGGAGTGGTCCGCCGTGCTGCTGCACCTGATCAAGCACCGGGGCTACCTGTCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCTGGGCGCCCTGCTGAAGGGCGTGGCCGACAACGCCCACGCCCTGCAGACCGGCGACTTCCGGACCCCCGCCGAGCTGGCCCTGAACAAGTTCGAGAAGGAGTGCGGCCACATCCGGAACCAGCGGGGCGACTACTCCCACACCTTCTCCCGGAAGGACCTGCAGGCCGAGCTGAACCTGCTGTTCGAGAAGCAGAAGGAGTTCGGCAACCCCCACGTGTCCGGCGGCCTGAAGGAGGGCATCGAGACCCTGCTGATGACCCAGCGGCCCGCCCTGTCCGGCGACGCCGTGCAGAAGATGCTGGGCCACTGCACCTTCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCTACACCGCCGAGCGGTTCATCTGGCTGACCAAGCTGAACAACCTGCGGATCCTGGAGCAGGGCTCCGAGCGGCCCCTGACCGACACCGAGCGGGCCACCCTGATGGACGAGCCCTACCGGAAGTCCAAGCTGACCTACGCCCAGGCCCGGAAGCTGCTGTCCCTGGAGGACACCGCCTTCTTCAAGGGCCTGCGGTACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCTCCACCCTGATGGAGATGAAGGCCTACCACACCATCTCCCGGGCCCTGGAGAAGGAGGGCCTGAAGGACAAGAAGTCCCCCCTGAACCTGTCCCCCGAGCTGCAGGACGAGATCGGCACCGCCTTCTCCCTGTTCAAGACCGACGAGGACATCACCGGCCGGCTGAAGGACCGGATCCAGCCCGAGATCCTGGAGGCCCTGCTGAAGCACATCTCCTTCGACAAGTTCGTGCAGATCTCCCTGAAGGCCCTGCGGCGGATCGTGCCCCTGATGGAGCAGGGCAAGCGGTACGACGAGGCCTGCGCCGAGATCTACGGCGACCACTACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGATCTACCTGCCCCCCATCCCCGCCGACGAGATCCGGAACCCCGTGGTGCTGCGGGCCCTGTCCCAGGCCCGGAAGGTGATCAACGGCGTGGTGCGGCGGTACGGCTCCCCCGCCCGGATCCACATCGAGACCGCCCGGGAGGTGGGCAAGTCCTTCAAGGACCGGAAGGAGATCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGTTCCGGGAGTACTTCCCCAACTTCGTGGGCGAGCCCAAGTCCAAGGACATCCTGAAGCTGCGGCTGTACGAGCAGCAGCACGGCAAGTGCCTGTACTCCGGCAAGGAGATCAACCTGGGCCGGCTGAACGAGAAGGGCTACGTGGAGATCGACGCCGCCCTGCCCTTCTCCCGGACCTGGGACGACTCCTTCAACAACAAGGTGCTGGTGCTGGGCTCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCTACGAGTACTTCAACGGCAAGGACAACTCCCGGGAGTGGCAGGAGTTCAAGGCCCGGGTGGAGACCTCCCGGTTCCCCCGGTCCAAGAAGCAGCGGATCCTGCTGCAGAAGTTCGACGAGGACGGCTTCAAGGAGCGGAACCTGAACGACACCCGGTACGTGAACCGGTTCCTGTGCCAGTTCGTGGCCGACCGGATGCGGCTGACCGGCAAGGGCAAGAAGCGGGTGTTCGCCTCCAACGGCCAGATCACCAACCTGCTGCGGGGCTTCTGGGGCCTGCGGAAGGTGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCTGGACGCCGTGGTGGTGGCCTGCTCCACCGTGGCCATGCAGCAGAAGATCACCCGGTTCGTGCGGTACAAGGAGATGAACGCCTTCGACGGCAAGACCATCGACAAGGAGACCGGCGAGGTGCTGCACCAGAAGACCCACTTCCCCCAGCCCTGGGAGTTCTTCGCCCAGGAGGTGATGATCCGGGTGTTCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGTTCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCTGCGGACCCTGCTGGCCGAGAAGCTGTCCTCCCGGCCCGAGGCCGTGCACGAGTACGTGACCCCCCTGTTCGTGTCCCGGGCCCCCAACCGGAAGATGTCCGGCCAGGGCCACATGGAGACCGTGAAGTCCGCCAAGCGGCTGGACGAGGGCGTGTCCGTGCTGCGGGTGCCCCTGACCCAGCTGAAGCTGAAGGACCTGGAGAAGATGGTGAACCGGGAGCGGGAGCCCAAGCTGTACGAGGCCCTGAAGGCCCGGCTGGAGGCCCACAAGGACGACCCCGCCAAGGCCTTCGCCGAGCCCTTCTACAAGTACGACAAGGCCGGCAACCGGACCCAGCAGGTGAAGGCCGTGCGGGTGGAGCAGGTGCAGAAGACCGGCGTGTGGGTGCGGAACCACAACGGCATCGCCGACAACGCCACCATGGTGCGGGTGGACGTGTTCGAGAAGGGCGACAAGTACTACCTGGTGCCCATCTACTCCTGGCAGGTGGCCAAGGGCATCCTGCCCGACCGGGCCGTGGTGGCCTACGCCGACGAGGAGGACTGGACCGTGATCGACGAGTCCTTCCGGTTCAAGTTCGTGCTGTACTCCAACGACCTGATCAAGGTGCAGCTGAAGAAGGACTCCTTCCTGGGCTACTTCTCCGGCCTGGACCGGGCCACCGGCGCCATCTCCCTGCGGGAGCACGACCTGGAGAAGTCCAAGGGCAAGGACGGCATGCACCGGATCGGCGTGAAGACCGCCCTGTCCTTCCAGAAGTACCAGATCGACGAGATGGGCAAGGAGATCCGGCCCTGCCGGCTGAAGAAGCGGCCCCCCGTGCGG
222 編碼Nme3Cas9 HNH切口酶之例示性編碼序列 GCAGCATTCAAACCAAACCCAATCAACTACATCCTAGGACTAGACATCGGAATCGCATCAGTAGGATGAGCAATGGTAGAAATCGACGAAGAAGAAAACCCAATCCGACTAATCGACCTAGGAGTACGAGTATTCGAACGAGCAGAAGTACCAAAAACAGGAGACTCACTAGCAATGGCACGACGACTAGCACGATCAGTACGACGACTAACACGACGACGAGCACACCGACTACTACGAGCACGACGACTACTAAAACGAGAAGGAGTACTACAAGCAGCAGACTTCGACGAAAACGGACTAATCAAATCACTACCAAACACACCATGACAACTACGAGCAGCAGCACTAGACCGAAAACTAACACCACTAGAATGATCAGCAGTACTACTACACCTAATCAAACACCGAGGATACCTATCACAACGAAAAAACGAAGGAGAAACAGCAGACAAAGAACTAGGAGCACTACTAAAAGGAGTAGCAGACAACGCACACGCACTACAAACAGGAGACTTCCGAACACCAGCAGAACTAGCACTAAACAAATTCGAAAAAGAATGCGGACACATCCGAAACCAACGAGGAGACTACTCACACACATTCTCACGAAAAGACCTACAAGCAGAACTAAACCTACTATTCGAAAAACAAAAAGAATTCGGAAACCCACACGTATCAGGAGGACTAAAAGAAGGAATCGAAACACTACTAATGACACAACGACCAGCACTATCAGGAGACGCAGTACAAAAAATGCTAGGACACTGCACATTCGAACCAGCAGAACCAAAAGCAGCAAAAAACACATACACAGCAGAACGATTCATCTGACTAACAAAACTAAACAACCTACGAATCCTAGAACAAGGATCAGAACGACCACTAACAGACACAGAACGAGCAACACTAATGGACGAACCATACCGAAAATCAAAACTAACATACGCACAAGCACGAAAACTACTATCACTAGAAGACACAGCATTCTTCAAAGGACTACGATACGGAAAAGACAACGCAGAAGCATCAACACTAATGGAAATGAAAGCATACCACACAATCTCACGAGCACTAGAAAAAGAAGGACTAAAAGACAAAAAATCACCACTAAACCTATCACCAGAACTACAAGACGAAATCGGAACAGCATTCTCACTATTCAAAACAGACGAAGACATCACAGGACGACTAAAAGACCGAATCCAACCAGAAATCCTAGAAGCACTACTAAAACACATCTCATTCGACAAATTCGTACAAATCTCACTAAAAGCACTACGACGAATCGTACCACTAATGGAACAAGGAAAACGATACGACGAAGCATGCGCAGAAATCTACGGAGACCACTACGGAAAAAAAAACACAGAAGAAAAAATCTACCTACCACCAATCCCAGCAGACGAAATCCGAAACCCAGTAGTACTACGAGCACTATCACAAGCACGAAAAGTAATCAACGGAGTAGTACGACGATACGGATCACCAGCACGAATCCACATCGAAACAGCACGAGAAGTAGGAAAATCATTCAAAGACCGAAAAGAAATCGAAAAACGACAAGAAGAAAACCGAAAAGACCGAGAAAAAGCAGCAGCAAAATTCCGAGAATACTTCCCAAACTTCGTAGGAGAACCAAAATCAAAAGACATCCTAAAACTACGACTATACGAACAACAACACGGAAAATGCCTATACTCAGGAAAAGAAATCAACCTAGGACGACTAAACGAAAAAGGATACGTAGAAATCGACGCAGCACTACCATTCTCACGAACATGAGACGACTCATTCAACAACAAAGTACTAGTACTAGGATCAGAAAACCAAAACAAAGGAAACCAAACACCATACGAATACTTCAACGGAAAAGACAACTCACGAGAATGACAAGAATTCAAAGCACGAGTAGAAACATCACGATTCCCACGATCAAAAAAACAACGAATCCTACTACAAAAATTCGACGAAGACGGATTCAAAGAACGAAACCTAAACGACACACGATACGTAAACCGATTCCTATGCCAATTCGTAGCAGACCGAATGCGACTAACAGGAAAAGGAAAAAAACGAGTATTCGCATCAAACGGACAAATCACAAACCTACTACGAGGATTCTGAGGACTACGAAAAGTACGAGCAGAAAACGACCGACACCACGCACTAGACGCAGTAGTAGTAGCATGCTCAACAGTAGCAATGCAACAAAAAATCACACGATTCGTACGATACAAAGAAATGAACGCATTCGACGGAAAAACAATCGACAAAGAAACAGGAGAAGTACTACACCAAAAAACACACTTCCCACAACCATGAGAATTCTTCGCACAAGAAGTAATGATCCGAGTATTCGGAAAACCAGACGGAAAACCAGAATTCGAAGAAGCAGACACACCAGAAAAACTACGAACACTACTAGCAGAAAAACTATCATCACGACCAGAAGCAGTACACGAATACGTAACACCACTATTCGTATCACGAGCACCAAACCGAAAAATGTCAGGACAAGGACACATGGAAACAGTAAAATCAGCAAAACGACTAGACGAAGGAGTATCAGTACTACGAGTACCACTAACACAACTAAAACTAAAAGACCTAGAAAAAATGGTAAACCGAGAACGAGAACCAAAACTATACGAAGCACTAAAAGCACGACTAGAAGCACACAAAGACGACCCAGCAAAAGCATTCGCAGAACCATTCTACAAATACGACAAAGCAGGAAACCGAACACAACAAGTAAAAGCAGTACGAGTAGAACAAGTACAAAAAACAGGAGTATGAGTACGAAACCACAACGGAATCGCAGACAACGCAACAATGGTACGAGTAGACGTATTCGAAAAAGGAGACAAATACTACCTAGTACCAATCTACTCATGACAAGTAGCAAAAGGAATCCTACCAGACCGAGCAGTAGTAGCATACGCAGACGAAGAAGACTGAACAGTAATCGACGAATCATTCCGATTCAAATTCGTACTATACTCAAACGACCTAATCAAAGTACAACTAAAAAAAGACTCATTCCTAGGATACTTCTCAGGACTAGACCGAGCAACAGGAGCAATCTCACTACGAGAACACGACCTAGAAAAATCAAAAGGAAAAGACGGAATGCACCGAATCGGAGTAAAAACAGCACTATCATTCCAAAAATACCAAATCGACGAAATGGGAAAAGAAATCCGACCATGCCGACTAAAAAAACGACCACCAGTACGA
223 Nme3Cas9 HNH切口酶之例示性開放閱讀框 ATGGCTGCTTTTAAGCCTAATCCTATTAATTATATTCTTGGTCTTGATATTGGTATTGCTTCTGTTGGTTGGGCTATGGTTGAGATTGATGAGGAGGAGAATCCTATTCGTCTTATTGATCTTGGTGTTCGTGTTTTTGAGCGTGCTGAGGTTCCTAAGACTGGTGATTCTCTTGCTATGGCTCGTCGTCTTGCTCGTTCTGTTCGTCGTCTTACTCGTCGTCGTGCTCATCGTCTTCTTCGTGCTCGTCGTCTTCTTAAGCGTGAGGGTGTTCTTCAGGCTGCTGATTTTGATGAGAATGGTCTTATTAAGTCTCTTCCTAATACTCCTTGGCAGCTTCGTGCTGCTGCTCTTGATCGTAAGCTTACTCCTCTTGAGTGGTCTGCTGTTCTTCTTCATCTTATTAAGCATCGTGGTTATCTTTCTCAGCGTAAGAATGAGGGTGAGACTGCTGATAAGGAGCTTGGTGCTCTTCTTAAGGGTGTTGCTGATAATGCTCATGCTCTTCAGACTGGTGATTTTCGTACTCCTGCTGAGCTTGCTCTTAATAAGTTTGAGAAGGAGTGTGGTCATATTCGTAATCAGCGTGGTGATTATTCTCATACTTTTTCTCGTAAGGATCTTCAGGCTGAGCTTAATCTTCTTTTTGAGAAGCAGAAGGAGTTTGGTAATCCTCATGTTTCTGGTGGTCTTAAGGAGGGTATTGAGACTCTTCTTATGACTCAGCGTCCTGCTCTTTCTGGTGATGCTGTTCAGAAGATGCTTGGTCATTGTACTTTTGAGCCTGCTGAGCCTAAGGCTGCTAAGAATACTTATACTGCTGAGCGTTTTATTTGGCTTACTAAGCTTAATAATCTTCGTATTCTTGAGCAGGGTTCTGAGCGTCCTCTTACTGATACTGAGCGTGCTACTCTTATGGATGAGCCTTATCGTAAGTCTAAGCTTACTTATGCTCAGGCTCGTAAGCTTCTTTCTCTTGAGGATACTGCTTTTTTTAAGGGTCTTCGTTATGGTAAGGATAATGCTGAGGCTTCTACTCTTATGGAGATGAAGGCTTATCATACTATTTCTCGTGCTCTTGAGAAGGAGGGTCTTAAGGATAAGAAGTCTCCTCTTAATCTTTCTCCTGAGCTTCAGGATGAGATTGGTACTGCTTTTTCTCTTTTTAAGACTGATGAGGATATTACTGGTCGTCTTAAGGATCGTATTCAGCCTGAGATTCTTGAGGCTCTTCTTAAGCATATTTCTTTTGATAAGTTTGTTCAGATTTCTCTTAAGGCTCTTCGTCGTATTGTTCCTCTTATGGAGCAGGGTAAGCGTTATGATGAGGCTTGTGCTGAGATTTATGGTGATCATTATGGTAAGAAGAATACTGAGGAGAAGATTTATCTTCCTCCTATTCCTGCTGATGAGATTCGTAATCCTGTTGTTCTTCGTGCTCTTTCTCAGGCTCGTAAGGTTATTAATGGTGTTGTTCGTCGTTATGGTTCTCCTGCTCGTATTCATATTGAGACTGCTCGTGAGGTTGGTAAGTCTTTTAAGGATCGTAAGGAGATTGAGAAGCGTCAGGAGGAGAATCGTAAGGATCGTGAGAAGGCTGCTGCTAAGTTTCGTGAGTATTTTCCTAATTTTGTTGGTGAGCCTAAGTCTAAGGATATTCTTAAGCTTCGTCTTTATGAGCAGCAGCATGGTAAGTGTCTTTATTCTGGTAAGGAGATTAATCTTGGTCGTCTTAATGAGAAGGGTTATGTTGAGATTGATGCTGCTCTTCCTTTTTCTCGTACTTGGGATGATTCTTTTAATAATAAGGTTCTTGTTCTTGGTTCTGAGAATCAGAATAAGGGTAATCAGACTCCTTATGAGTATTTTAATGGTAAGGATAATTCTCGTGAGTGGCAGGAGTTTAAGGCTCGTGTTGAGACTTCTCGTTTTCCTCGTTCTAAGAAGCAGCGTATTCTTCTTCAGAAGTTTGATGAGGATGGTTTTAAGGAGCGTAATCTTAATGATACTCGTTATGTTAATCGTTTTCTTTGTCAGTTTGTTGCTGATCGTATGCGTCTTACTGGTAAGGGTAAGAAGCGTGTTTTTGCTTCTAATGGTCAGATTACTAATCTTCTTCGTGGTTTTTGGGGTCTTCGTAAGGTTCGTGCTGAGAATGATCGTCATCATGCTCTTGATGCTGTTGTTGTTGCTTGTTCTACTGTTGCTATGCAGCAGAAGATTACTCGTTTTGTTCGTTATAAGGAGATGAATGCTTTTGATGGTAAGACTATTGATAAGGAGACTGGTGAGGTTCTTCATCAGAAGACTCATTTTCCTCAGCCTTGGGAGTTTTTTGCTCAGGAGGTTATGATTCGTGTTTTTGGTAAGCCTGATGGTAAGCCTGAGTTTGAGGAGGCTGATACTCCTGAGAAGCTTCGTACTCTTCTTGCTGAGAAGCTTTCTTCTCGTCCTGAGGCTGTTCATGAGTATGTTACTCCTCTTTTTGTTTCTCGTGCTCCTAATCGTAAGATGTCTGGTCAGGGTCATATGGAGACTGTTAAGTCTGCTAAGCGTCTTGATGAGGGTGTTTCTGTTCTTCGTGTTCCTCTTACTCAGCTTAAGCTTAAGGATCTTGAGAAGATGGTTAATCGTGAGCGTGAGCCTAAGCTTTATGAGGCTCTTAAGGCTCGTCTTGAGGCTCATAAGGATGATCCTGCTAAGGCTTTTGCTGAGCCTTTTTATAAGTATGATAAGGCTGGTAATCGTACTCAGCAGGTTAAGGCTGTTCGTGTTGAGCAGGTTCAGAAGACTGGTGTTTGGGTTCGTAATCATAATGGTATTGCTGATAATGCTACTATGGTTCGTGTTGATGTTTTTGAGAAGGGTGATAAGTATTATCTTGTTCCTATTTATTCTTGGCAGGTTGCTAAGGGTATTCTTCCTGATCGTGCTGTTGTTGCTTATGCTGATGAGGAGGATTGGACTGTTATTGATGAGTCTTTTCGTTTTAAGTTTGTTCTTTATTCTAATGATCTTATTAAGGTTCAGCTTAAGAAGGATTCTTTTCTTGGTTATTTTTCTGGTCTTGATCGTGCTACTGGTGCTATTTCTCTTCGTGAGCATGATCTTGAGAAGTCTAAGGGTAAGGATGGTATGCATCGTATTGGTGTTAAGACTGCTCTTTCTTTTCAGAAGTATCAGATTGATGAGATGGGTAAGGAGATTCGTCCTTGTCGTCTTAAGAAGCGTCCTCCTGTTCGTUGA
224 Nme3Cas9 HNH切口酶之例示性開放閱讀框 ATGGCCGCCTTCAAGCCCAACCCCATCAACTACATCCTGGGCCTGGACATCGGCATCGCCTCCGTGGGCTGGGCCATGGTGGAGATCGACGAGGAGGAGAACCCCATCCGGCTGATCGACCTGGGCGTGCGGGTGTTCGAGCGGGCCGAGGTGCCCAAGACCGGCGACTCCCTGGCCATGGCCCGGCGGCTGGCCCGGTCCGTGCGGCGGCTGACCCGGCGGCGGGCCCACCGGCTGCTGCGGGCCCGGCGGCTGCTGAAGCGGGAGGGCGTGCTGCAGGCCGCCGACTTCGACGAGAACGGCCTGATCAAGTCCCTGCCCAACACCCCCTGGCAGCTGCGGGCCGCCGCCCTGGACCGGAAGCTGACCCCCCTGGAGTGGTCCGCCGTGCTGCTGCACCTGATCAAGCACCGGGGCTACCTGTCCCAGCGGAAGAACGAGGGCGAGACCGCCGACAAGGAGCTGGGCGCCCTGCTGAAGGGCGTGGCCGACAACGCCCACGCCCTGCAGACCGGCGACTTCCGGACCCCCGCCGAGCTGGCCCTGAACAAGTTCGAGAAGGAGTGCGGCCACATCCGGAACCAGCGGGGCGACTACTCCCACACCTTCTCCCGGAAGGACCTGCAGGCCGAGCTGAACCTGCTGTTCGAGAAGCAGAAGGAGTTCGGCAACCCCCACGTGTCCGGCGGCCTGAAGGAGGGCATCGAGACCCTGCTGATGACCCAGCGGCCCGCCCTGTCCGGCGACGCCGTGCAGAAGATGCTGGGCCACTGCACCTTCGAGCCCGCCGAGCCCAAGGCCGCCAAGAACACCTACACCGCCGAGCGGTTCATCTGGCTGACCAAGCTGAACAACCTGCGGATCCTGGAGCAGGGCTCCGAGCGGCCCCTGACCGACACCGAGCGGGCCACCCTGATGGACGAGCCCTACCGGAAGTCCAAGCTGACCTACGCCCAGGCCCGGAAGCTGCTGTCCCTGGAGGACACCGCCTTCTTCAAGGGCCTGCGGTACGGCAAGGACAACGCCGAGGCCTCCACCCTGATGGAGATGAAGGCCTACCACACCATCTCCCGGGCCCTGGAGAAGGAGGGCCTGAAGGACAAGAAGTCCCCCCTGAACCTGTCCCCCGAGCTGCAGGACGAGATCGGCACCGCCTTCTCCCTGTTCAAGACCGACGAGGACATCACCGGCCGGCTGAAGGACCGGATCCAGCCCGAGATCCTGGAGGCCCTGCTGAAGCACATCTCCTTCGACAAGTTCGTGCAGATCTCCCTGAAGGCCCTGCGGCGGATCGTGCCCCTGATGGAGCAGGGCAAGCGGTACGACGAGGCCTGCGCCGAGATCTACGGCGACCACTACGGCAAGAAGAACACCGAGGAGAAGATCTACCTGCCCCCCATCCCCGCCGACGAGATCCGGAACCCCGTGGTGCTGCGGGCCCTGTCCCAGGCCCGGAAGGTGATCAACGGCGTGGTGCGGCGGTACGGCTCCCCCGCCCGGATCCACATCGAGACCGCCCGGGAGGTGGGCAAGTCCTTCAAGGACCGGAAGGAGATCGAGAAGCGGCAGGAGGAGAACCGGAAGGACCGGGAGAAGGCCGCCGCCAAGTTCCGGGAGTACTTCCCCAACTTCGTGGGCGAGCCCAAGTCCAAGGACATCCTGAAGCTGCGGCTGTACGAGCAGCAGCACGGCAAGTGCCTGTACTCCGGCAAGGAGATCAACCTGGGCCGGCTGAACGAGAAGGGCTACGTGGAGATCGACGCCGCCCTGCCCTTCTCCCGGACCTGGGACGACTCCTTCAACAACAAGGTGCTGGTGCTGGGCTCCGAGAACCAGAACAAGGGCAACCAGACCCCCTACGAGTACTTCAACGGCAAGGACAACTCCCGGGAGTGGCAGGAGTTCAAGGCCCGGGTGGAGACCTCCCGGTTCCCCCGGTCCAAGAAGCAGCGGATCCTGCTGCAGAAGTTCGACGAGGACGGCTTCAAGGAGCGGAACCTGAACGACACCCGGTACGTGAACCGGTTCCTGTGCCAGTTCGTGGCCGACCGGATGCGGCTGACCGGCAAGGGCAAGAAGCGGGTGTTCGCCTCCAACGGCCAGATCACCAACCTGCTGCGGGGCTTCTGGGGCCTGCGGAAGGTGCGGGCCGAGAACGACCGGCACCACGCCCTGGACGCCGTGGTGGTGGCCTGCTCCACCGTGGCCATGCAGCAGAAGATCACCCGGTTCGTGCGGTACAAGGAGATGAACGCCTTCGACGGCAAGACCATCGACAAGGAGACCGGCGAGGTGCTGCACCAGAAGACCCACTTCCCCCAGCCCTGGGAGTTCTTCGCCCAGGAGGTGATGATCCGGGTGTTCGGCAAGCCCGACGGCAAGCCCGAGTTCGAGGAGGCCGACACCCCCGAGAAGCTGCGGACCCTGCTGGCCGAGAAGCTGTCCTCCCGGCCCGAGGCCGTGCACGAGTACGTGACCCCCCTGTTCGTGTCCCGGGCCCCCAACCGGAAGATGTCCGGCCAGGGCCACATGGAGACCGTGAAGTCCGCCAAGCGGCTGGACGAGGGCGTGTCCGTGCTGCGGGTGCCCCTGACCCAGCTGAAGCTGAAGGACCTGGAGAAGATGGTGAACCGGGAGCGGGAGCCCAAGCTGTACGAGGCCCTGAAGGCCCGGCTGGAGGCCCACAAGGACGACCCCGCCAAGGCCTTCGCCGAGCCCTTCTACAAGTACGACAAGGCCGGCAACCGGACCCAGCAGGTGAAGGCCGTGCGGGTGGAGCAGGTGCAGAAGACCGGCGTGTGGGTGCGGAACCACAACGGCATCGCCGACAACGCCACCATGGTGCGGGTGGACGTGTTCGAGAAGGGCGACAAGTACTACCTGGTGCCCATCTACTCCTGGCAGGTGGCCAAGGGCATCCTGCCCGACCGGGCCGTGGTGGCCTACGCCGACGAGGAGGACTGGACCGTGATCGACGAGTCCTTCCGGTTCAAGTTCGTGCTGTACTCCAACGACCTGATCAAGGTGCAGCTGAAGAAGGACTCCTTCCTGGGCTACTTCTCCGGCCTGGACCGGGCCACCGGCGCCATCTCCCTGCGGGAGCACGACCTGGAGAAGTCCAAGGGCAAGGACGGCATGCACCGGATCGGCGTGAAGACCGCCCTGTCCTTCCAGAAGTACCAGATCGACGAGATGGGCAAGGAGATCCGGCCCTGCCGGCTGAAGAAGCGGCCCCCCGTGCGGUGA
225 Nme3Cas9 HNH切口酶之例示性開放閱讀框 ATGGCAGCATTCAAACCAAACCCAATCAACTACATCCTAGGACTAGACATCGGAATCGCATCAGTAGGATGAGCAATGGTAGAAATCGACGAAGAAGAAAACCCAATCCGACTAATCGACCTAGGAGTACGAGTATTCGAACGAGCAGAAGTACCAAAAACAGGAGACTCACTAGCAATGGCACGACGACTAGCACGATCAGTACGACGACTAACACGACGACGAGCACACCGACTACTACGAGCACGACGACTACTAAAACGAGAAGGAGTACTACAAGCAGCAGACTTCGACGAAAACGGACTAATCAAATCACTACCAAACACACCATGACAACTACGAGCAGCAGCACTAGACCGAAAACTAACACCACTAGAATGATCAGCAGTACTACTACACCTAATCAAACACCGAGGATACCTATCACAACGAAAAAACGAAGGAGAAACAGCAGACAAAGAACTAGGAGCACTACTAAAAGGAGTAGCAGACAACGCACACGCACTACAAACAGGAGACTTCCGAACACCAGCAGAACTAGCACTAAACAAATTCGAAAAAGAATGCGGACACATCCGAAACCAACGAGGAGACTACTCACACACATTCTCACGAAAAGACCTACAAGCAGAACTAAACCTACTATTCGAAAAACAAAAAGAATTCGGAAACCCACACGTATCAGGAGGACTAAAAGAAGGAATCGAAACACTACTAATGACACAACGACCAGCACTATCAGGAGACGCAGTACAAAAAATGCTAGGACACTGCACATTCGAACCAGCAGAACCAAAAGCAGCAAAAAACACATACACAGCAGAACGATTCATCTGACTAACAAAACTAAACAACCTACGAATCCTAGAACAAGGATCAGAACGACCACTAACAGACACAGAACGAGCAACACTAATGGACGAACCATACCGAAAATCAAAACTAACATACGCACAAGCACGAAAACTACTATCACTAGAAGACACAGCATTCTTCAAAGGACTACGATACGGAAAAGACAACGCAGAAGCATCAACACTAATGGAAATGAAAGCATACCACACAATCTCACGAGCACTAGAAAAAGAAGGACTAAAAGACAAAAAATCACCACTAAACCTATCACCAGAACTACAAGACGAAATCGGAACAGCATTCTCACTATTCAAAACAGACGAAGACATCACAGGACGACTAAAAGACCGAATCCAACCAGAAATCCTAGAAGCACTACTAAAACACATCTCATTCGACAAATTCGTACAAATCTCACTAAAAGCACTACGACGAATCGTACCACTAATGGAACAAGGAAAACGATACGACGAAGCATGCGCAGAAATCTACGGAGACCACTACGGAAAAAAAAACACAGAAGAAAAAATCTACCTACCACCAATCCCAGCAGACGAAATCCGAAACCCAGTAGTACTACGAGCACTATCACAAGCACGAAAAGTAATCAACGGAGTAGTACGACGATACGGATCACCAGCACGAATCCACATCGAAACAGCACGAGAAGTAGGAAAATCATTCAAAGACCGAAAAGAAATCGAAAAACGACAAGAAGAAAACCGAAAAGACCGAGAAAAAGCAGCAGCAAAATTCCGAGAATACTTCCCAAACTTCGTAGGAGAACCAAAATCAAAAGACATCCTAAAACTACGACTATACGAACAACAACACGGAAAATGCCTATACTCAGGAAAAGAAATCAACCTAGGACGACTAAACGAAAAAGGATACGTAGAAATCGACGCAGCACTACCATTCTCACGAACATGAGACGACTCATTCAACAACAAAGTACTAGTACTAGGATCAGAAAACCAAAACAAAGGAAACCAAACACCATACGAATACTTCAACGGAAAAGACAACTCACGAGAATGACAAGAATTCAAAGCACGAGTAGAAACATCACGATTCCCACGATCAAAAAAACAACGAATCCTACTACAAAAATTCGACGAAGACGGATTCAAAGAACGAAACCTAAACGACACACGATACGTAAACCGATTCCTATGCCAATTCGTAGCAGACCGAATGCGACTAACAGGAAAAGGAAAAAAACGAGTATTCGCATCAAACGGACAAATCACAAACCTACTACGAGGATTCTGAGGACTACGAAAAGTACGAGCAGAAAACGACCGACACCACGCACTAGACGCAGTAGTAGTAGCATGCTCAACAGTAGCAATGCAACAAAAAATCACACGATTCGTACGATACAAAGAAATGAACGCATTCGACGGAAAAACAATCGACAAAGAAACAGGAGAAGTACTACACCAAAAAACACACTTCCCACAACCATGAGAATTCTTCGCACAAGAAGTAATGATCCGAGTATTCGGAAAACCAGACGGAAAACCAGAATTCGAAGAAGCAGACACACCAGAAAAACTACGAACACTACTAGCAGAAAAACTATCATCACGACCAGAAGCAGTACACGAATACGTAACACCACTATTCGTATCACGAGCACCAAACCGAAAAATGTCAGGACAAGGACACATGGAAACAGTAAAATCAGCAAAACGACTAGACGAAGGAGTATCAGTACTACGAGTACCACTAACACAACTAAAACTAAAAGACCTAGAAAAAATGGTAAACCGAGAACGAGAACCAAAACTATACGAAGCACTAAAAGCACGACTAGAAGCACACAAAGACGACCCAGCAAAAGCATTCGCAGAACCATTCTACAAATACGACAAAGCAGGAAACCGAACACAACAAGTAAAAGCAGTACGAGTAGAACAAGTACAAAAAACAGGAGTATGAGTACGAAACCACAACGGAATCGCAGACAACGCAACAATGGTACGAGTAGACGTATTCGAAAAAGGAGACAAATACTACCTAGTACCAATCTACTCATGACAAGTAGCAAAAGGAATCCTACCAGACCGAGCAGTAGTAGCATACGCAGACGAAGAAGACTGAACAGTAATCGACGAATCATTCCGATTCAAATTCGTACTATACTCAAACGACCTAATCAAAGTACAACTAAAAAAAGACTCATTCCTAGGATACTTCTCAGGACTAGACCGAGCAACAGGAGCAATCTCACTACGAGAACACGACCTAGAAAAATCAAAAGGAAAAGACGGAATGCACCGAATCGGAGTAAAAACAGCACTATCATTCCAAAAATACCAAATCGACGAAATGGGAAAAGAAATCCGACCATGCCGACTAAAAAAACGACCACCAGTACGAUAA
226 例示性SpyCas9 sgRNA-1 GUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC
227 向導序列3’端後之例示性核苷酸序列 GUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU
228 例示性經修飾之SpyCas9模體 mN*mN*mN*NNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU
229 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體 (mN*3N17GUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmA mAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmC
230 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體 (mN*3N17GUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmA mAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU
231 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體 (mN*3N17GUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGGCACCGAGUCGG*mU*mG*mC
232 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體 (mN*3N17GUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAAAAUGGCACCGAGUC GG*mU*mG*mC
233 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體 (mN*3N17GUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmAmAmUmGmGmC mAmCmCmGmAmGmUmCmGmG*mU*mG*mC
234 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體 (mN*3N17GUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCACGAAAGGGCACCGAGUCGG*mU*mG*mC
235 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體 (mN*3N17GUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmCmGmAmAmAmGmG mGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmG*mU*mG*mC
236 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體 (mN*3N17GUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCACGAAAGGGCACCG AGUCGGU*mG*mC*mU
237 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體 (mN*3N17GUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCACGAAAGGGCACCGAGUCGGmUmGmC*mU
238 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體 (mN*3N17GUUUfUAGmAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCmAmAGUfUmAfAmAfAmUAmAmGmGmCmUmAGUmCmCGUfUAmUmCAmCmGmAmAmAmGmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmU*mG*mC*mU
239 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體 (mN*3N17GUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCACGAAAGGGCACCGAGUCGGmU*mG*mC*mU
240 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體 (mN*3N17GUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmC
241 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體 (mN*3N17GUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU
242 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體 (mN*3N17GUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGGCACCGAGUCGG*mU*mG*mC
243 例示性NmeCas9 sgRNA-1 GUUGUAGCUCCCUUUCUCAUUUCGGAAACGAAAUGAGAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCUGAAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCCCUUAAAGCUUCUGCUUUAAGGGGCAUCGUUUA
244 例示性未經修飾之保守部分核苷酸序列 GUUGUAGCUCCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU
245 例示性未經修飾之保守部分核苷酸序列 GUUGUAGCUCCCUGGAAACCCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUUUAUU
246 例示性經修飾之保守部分模體 GUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAU*AAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGCmAmAmCmGCUCUmGmCCmUmUmCmUGmGCmAmUC*mG*mU*mU
247 例示性經修飾之保守部分模體 GUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAU*AAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU
248 例示性經修飾之保守部分模體 mN*mNNNNNNNNmNNNmNNNNNNNNNNNNmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAU*AAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGCmAmAmCmGCUCUmGmCCmUmUmCmUGmGCmAmUC*mG*mU*mU
249 例示性經修飾之保守部分模體 (N)20-25GUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAU*AAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGCmAmAmCmGCUCUmGmCCmUmUmCmUGmGCmAmUC*mG*mU*mU
250 例示性經修飾之保守部分模體 mN*mN*mN*mNmNNNmNmNNmNNmNNNNNmNNNNmNNNmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAU*AAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU
251 G000562 CCAAUAUCAGGAGACUAGGA
252 G013515 CCAUCGUAAGCAAACCUUAG
253 G013519 GCAAGGAGAGAGAUGGCUCC
254 G013520 GAGAGAUGGCUCCAGGAAAU
255 G013523 GGUGACACACCCCCAUUUCC
256 G013533 AGACCCAAUAUCAGGAGACU
257 G013543 UGUCCCUAGUGGCCCCACUG
258 G013559 CCGGCCCUGGGAAUAUAAGG
259 G013562 AAUAUAAGGUGGUCCCAGCU
260 G013563 AUAUAAGGUGGUCCCAGCUC
261 G013564 UAUAAGGUGGUCCCAGCUCG
262 G013565 GGAUCCUGUGUCCCCGAGCU
263 G013582 CCUGUCAUGGCAUCUUCCAG
264 G013584 CCCUGGAAGAUGCCAUGACA
265 G000562 (例示性全序列) CCAAUAUCAGGAGACUAGGAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU
266 G013515 (例示性全序列) CCAUCGUAAGCAAACCUUAGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU
267 G013519 (例示性全序列) GCAAGGAGAGAGAUGGCUCCGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU
268 G013520 (例示性全序列) GAGAGAUGGCUCCAGGAAAUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU
269 G013523 (例示性全序列) GGUGACACACCCCCAUUUCCGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU
270 G013533 (例示性全序列) AGACCCAAUAUCAGGAGACUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU
271 G013543 (例示性全序列) UGUCCCUAGUGGCCCCACUGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU
272 G013559 (例示性全序列) CCGGCCCUGGGAAUAUAAGGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU
273 G013562 (例示性全序列) AAUAUAAGGUGGUCCCAGCUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU
274 G013563 (例示性全序列) AUAUAAGGUGGUCCCAGCUCGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU
275 G013564 (例示性全序列) UAUAAGGUGGUCCCAGCUCGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU
276 G013565 (例示性全序列) GGAUCCUGUGUCCCCGAGCUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU
277 G013582 (例示性全序列) CCUGUCAUGGCAUCUUCCAGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU
278 G013584 (例示性全序列) CCCUGGAAGAUGCCAUGACAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU
279 G000562 (例示性經修飾序列) mC*mC*mA*AUAUCAGGAGACUAGGAGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU
280 G013515 (例示性經修飾序列) mC*mC*mA*UCGUAAGCAAACCUUAGGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU
281 G013519 (例示性經修飾序列) mG*mC*mA*AGGAGAGAGAUGGCUCCGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU
282 G013520 (例示性經修飾序列) mG*mA*mG*AGAUGGCUCCAGGAAAUGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU
283 G013523 (例示性經修飾序列) mG*mG*mU*GACACACCCCCAUUUCCGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU
284 G013533 (例示性經修飾序列) mA*mG*mA*CCCAAUAUCAGGAGACUGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU
285 G013543 (例示性經修飾序列) mU*mG*mU*CCCUAGUGGCCCCACUGGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU
286 G013559 (例示性經修飾序列) mC*mC*mG*GCCCUGGGAAUAUAAGGGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU
287 G013562 (例示性經修飾序列) mA*mA*mU*AUAAGGUGGUCCCAGCUGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU
288 G013563 (例示性經修飾序列) mA*mU*mA*UAAGGUGGUCCCAGCUCGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU
289 G013564 (例示性經修飾序列) mU*mA*mU*AAGGUGGUCCCAGCUCGGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU
290 G013565 (例示性經修飾序列) mG*mG*mA*UCCUGUGUCCCCGAGCUGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU
291 G013582 (例示性經修飾序列) mC*mC*mU*GUCAUGGCAUCUUCCAGGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU
292 G013584 (例示性經修飾序列) mC*mC*mC*UGGAAGAUGCCAUGACAGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU
293 Cas9之開放閱讀框 AUGGACAAGAAGUACAGCAUCGGACUGGACAUCGGAACAAACAGCGUCGGAUGGGCAGUCAUCACAGACGAAUACAAGGUCCCGAGCAAGAAGUUCAAGGUCCUGGGAAACACAGACAGACACAGCAUCAAGAAGAACCUGAUCGGAGCACUGCUGUUCGACAGCGGAGAAACAGCAGAAGCAACAAGACUGAAGAGAACAGCAAGAAGAAGAUACACAAGAAGAAAGAACAGAAUCUGCUACCUGCAGGAAAUCUUCAGCAACGAAAUGGCAAAGGUCGACGACAGCUUCUUCCACAGACUGGAAGAAAGCUUCCUGGUCGAAGAAGACAAGAAGCACGAAAGACACCCGAUCUUCGGAAACAUCGUCGACGAAGUCGCAUACCACGAAAAGUACCCGACAAUCUACCACCUGAGAAAGAAGCUGGUCGACAGCACAGACAAGGCAGACCUGAGACUGAUCUACCUGGCACUGGCACACAUGAUCAAGUUCAGAGGACACUUCCUGAUCGAAGGAGACCUGAACCCGGACAACAGCGACGUCGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUCCAGACAUACAACCAGCUGUUCGAAGAAAACCCGAUCAACGCAAGCGGAGUCGACGCAAAGGCAAUCCUGAGCGCAAGACUGAGCAAGAGCAGAAGACUGGAAAACCUGAUCGCACAGCUGCCGGGAGAAAAGAAGAACGGACUGUUCGGAAACCUGAUCGCACUGAGCCUGGGACUGACACCGAACUUCAAGAGCAACUUCGACCUGGCAGAAGACGCAAAGCUGCAGCUGAGCAAGGACACAUACGACGACGACCUGGACAACCUGCUGGCACAGAUCGGAGACCAGUACGCAGACCUGUUCCUGGCAGCAAAGAACCUGAGCGACGCAAUCCUGCUGAGCGACAUCCUGAGAGUCAACACAGAAAUCACAAAGGCACCGCUGAGCGCAAGCAUGAUCAAGAGAUACGACGAACACCACCAGGACCUGACACUGCUGAAGGCACUGGUCAGACAGCAGCUGCCGGAAAAGUACAAGGAAAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAACGGAUACGCAGGAUACAUCGACGGAGGAGCAAGCCAGGAAGAAUUCUACAAGUUCAUCAAGCCGAUCCUGGAAAAGAUGGACGGAACAGAAGAACUGCUGGUCAAGCUGAACAGAGAAGACCUGCUGAGAAAGCAGAGAACAUUCGACAACGGAAGCAUCCCGCACCAGAUCCACCUGGGAGAACUGCACGCAAUCCUGAGAAGACAGGAAGACUUCUACCCGUUCCUGAAGGACAACAGAGAAAAGAUCGAAAAGAUCCUGACAUUCAGAAUCCCGUACUACGUCGGACCGCUGGCAAGAGGAAACAGCAGAUUCGCAUGGAUGACAAGAAAGAGCGAAGAAACAAUCACACCGUGGAACUUCGAAGAAGUCGUCGACAAGGGAGCAAGCGCACAGAGCUUCAUCGAAAGAAUGACAAACUUCGACAAGAACCUGCCGAACGAAAAGGUCCUGCCGAAGCACAGCCUGCUGUACGAAUACUUCACAGUCUACAACGAACUGACAAAGGUCAAGUACGUCACAGAAGGAAUGAGAAAGCCGGCAUUCCUGAGCGGAGAACAGAAGAAGGCAAUCGUCGACCUGCUGUUCAAGACAAACAGAAAGGUCACAGUCAAGCAGCUGAAGGAAGACUACUUCAAGAAGAUCGAAUGCUUCGACAGCGUCGAAAUCAGCGGAGUCGAAGACAGAUUCAACGCAAGCCUGGGAACAUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAAGAAAACGAAGACAUCCUGGAAGACAUCGUCCUGACACUGACACUGUUCGAAGACAGAGAAAUGAUCGAAGAAAGACUGAAGACAUACGCACACCUGUUCGACGACAAGGUCAUGAAGCAGCUGAAGAGAAGAAGAUACACAGGAUGGGGAAGACUGAGCAGAAAGCUGAUCAACGGAAUCAGAGACAAGCAGAGCGGAAAGACAAUCCUGGACUUCCUGAAGAGCGACGGAUUCGCAAACAGAAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACAGCCUGACAUUCAAGGAAGACAUCCAGAAGGCACAGGUCAGCGGACAGGGAGACAGCCUGCACGAACACAUCGCAAACCUGGCAGGAAGCCCGGCAAUCAAGAAGGGAAUCCUGCAGACAGUCAAGGUCGUCGACGAACUGGUCAAGGUCAUGGGAAGACACAAGCCGGAAAACAUCGUCAUCGAAAUGGCAAGAGAAAACCAGACAACACAGAAGGGACAGAAGAACAGCAGAGAAAGAAUGAAGAGAAUCGAAGAAGGAAUCAAGGAACUGGGAAGCCAGAUCCUGAAGGAACACCCGGUCGAAAACACACAGCUGCAGAACGAAAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAACGGAAGAGACAUGUACGUCGACCAGGAACUGGACAUCAACAGACUGAGCGACUACGACGUCGACCACAUCGUCCCGCAGAGCUUCCUGAAGGACGACAGCAUCGACAACAAGGUCCUGACAAGAAGCGACAAGAACAGAGGAAAGAGCGACAACGUCCCGAGCGAAGAAGUCGUCAAGAAGAUGAAGAACUACUGGAGACAGCUGCUGAACGCAAAGCUGAUCACACAGAGAAAGUUCGACAACCUGACAAAGGCAGAGAGAGGAGGACUGAGCGAACUGGACAAGGCAGGAUUCAUCAAGAGACAGCUGGUCGAAACAAGACAGAUCACAAAGCACGUCGCACAGAUCCUGGACAGCAGAAUGAACACAAAGUACGACGAAAACGACAAGCUGAUCAGAGAAGUCAAGGUCAUCACACUGAAGAGCAAGCUGGUCAGCGACUUCAGAAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUCAGAGAAAUCAACAACUACCACCACGCACACGACGCAUACCUGAACGCAGUCGUCGGAACAGCACUGAUCAAGAAGUACCCGAAGCUGGAAAGCGAAUUCGUCUACGGAGACUACAAGGUCUACGACGUCAGAAAGAUGAUCGCAAAGAGCGAACAGGAAAUCGGAAAGGCAACAGCAAAGUACUUCUUCUACAGCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACAGAAAUCACACUGGCAAACGGAGAAAUCAGAAAGAGACCGCUGAUCGAAACAAACGGAGAAACAGGAGAAAUCGUCUGGGACAAGGGAAGAGACUUCGCAACAGUCAGAAAGGUCCUGAGCAUGCCGCAGGUCAACAUCGUCAAGAAGACAGAAGUCCAGACAGGAGGAUUCAGCAAGGAAAGCAUCCUGCCGAAGAGAAACAGCGACAAGCUGAUCGCAAGAAAGAAGGACUGGGACCCGAAGAAGUACGGAGGAUUCGACAGCCCGACAGUCGCAUACAGCGUCCUGGUCGUCGCAAAGGUCGAAAAGGGAAAGAGCAAGAAGCUGAAGAGCGUCAAGGAACUGCUGGGAAUCACAAUCAUGGAAAGAAGCAGCUUCGAAAAGAACCCGAUCGACUUCCUGGAAGCAAAGGGAUACAAGGAAGUCAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUGCCGAAGUACAGCCUGUUCGAACUGGAAAACGGAAGAAAGAGAAUGCUGGCAAGCGCAGGAGAACUGCAGAAGGGAAACGAACUGGCACUGCCGAGCAAGUACGUCAACUUCCUGUACCUGGCAAGCCACUACGAAAAGCUGAAGGGAAGCCCGGAAGACAACGAACAGAAGCAGCUGUUCGUCGAACAGCACAAGCACUACCUGGACGAAAUCAUCGAACAGAUCAGCGAAUUCAGCAAGAGAGUCAUCCUGGCAGACGCAAACCUGGACAAGGUCCUGAGCGCAUACAACAAGCACAGAGACAAGCCGAUCAGAGAACAGGCAGAAAACAUCAUCCACCUGUUCACACUGACAAACCUGGGAGCACCGGCAGCAUUCAAGUACUUCGACACAACAAUCGACAGAAAGAGAUACACAAGCACAAAGGAAGUCCUGGACGCAACACUGAUCCACCAGAGCAUCACAGGACUGUACGAAACAAGAAUCGACCUGAGCCAGCUGGGAGGAGACGGAGGAGGAAGCCCGAAGAAGAAGAGAAAGGUCUAG
294 Cas9之胺基酸序列 MDKKYSIGLDIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDGGGSPKKKRKV
295 Cas9之開放閱讀框 AUGGACAAGAAGUACUCCAUCGGCCUGGACAUCGGCACCAACUCCGUGGGCUGGGCCGUGAUCACCGACGAGUACAAGGUGCCCUCCAAGAAGUUCAAGGUGCUGGGCAACACCGACCGGCACUCCAUCAAGAAGAACCUGAUCGGCGCCCUGCUGUUCGACUCCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCUGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGUACACCCGGCGGAAGAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCUCCAACGAGAUGGCCAAGGUGGACGACUCCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGUCCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAGGUGGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUGGACUCCACCGACAAGGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCCCUGGCCCACAUGAUCAAGUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCCGACAACUCCGACGUGGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACCUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCUCCGGCGUGGACGCCAAGGCCAUCCUGUCCGCCCGGCUGUCCAAGUCCCGGCGGCUGGAGAACCUGAUCGCCCAGCUGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCUGUUCGGCAACCUGAUCGCCCUGUCCCUGGGCCUGACCCCCAACUUCAAGUCCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAGCUGCAGCUGUCCAAGGACACCUACGACGACGACCUGGACAACCUGCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCCGCCAAGAACCUGUCCGACGCCAUCCUGCUGUCCGACAUCCUGCGGGUGAACACCGAGAUCACCAAGGCCCCCCUGUCCGCCUCCAUGAUCAAGCGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACCCUGCUGAAGGCCCUGGUGCGGCAGCAGCUGCCCGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGUCCAAGAACGGCUACGCCGGCUACAUCGACGGCGGCGCCUCCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUGGAGAAGAUGGACGGCACCGAGGAGCUGCUGGUGAAGCUGAACCGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGCGGACCUUCGACAACGGCUCCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGCGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACCGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUGACCUUCCGGAUCCCCUACUACGUGGGCCCCCUGGCCCGGGGCAACUCCCGGUUCGCCUGGAUGACCCGGAAGUCCGAGGAGACCAUCACCCCCUGGAACUUCGAGGAGGUGGUGGACAAGGGCGCCUCCGCCCAGUCCUUCAUCGAGCGGAUGACCAACUUCGACAAGAACCUGCCCAACGAGAAGGUGCUGCCCAAGCACUCCCUGCUGUACGAGUACUUCACCGUGUACAACGAGCUGACCAAGGUGAAGUACGUGACCGAGGGCAUGCGGAAGCCCGCCUUCCUGUCCGGCGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAGACCAACCGGAAGGUGACCGUGAAGCAGCUGAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACUCCGUGGAGAUCUCCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCUCCCUGGGCACCUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACCCUGACCCUGUUCGAGGACCGGGAGAUGAUCGAGGAGCGGCUGAAGACCUACGCCCACCUGUUCGACGACAAGGUGAUGAAGCAGCUGAAGCGGCGGCGGUACACCGGCUGGGGCCGGCUGUCCCGGAAGCUGAUCAACGGCAUCCGGGACAAGCAGUCCGGCAAGACCAUCCUGGACUUCCUGAAGUCCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACUCCCUGACCUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUGUCCGGCCAGGGCGACUCCCUGCACGAGCACAUCGCCAACCUGGCCGGCUCCCCCGCCAUCAAGAAGGGCAUCCUGCAGACCGUGAAGGUGGUGGACGAGCUGGUGAAGGUGAUGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACUCCCGGGAGCGGAUGAAGCGGAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCUCCCAGAUCCUGAAGGAGCACCCCGUGGAGAACACCCAGCUGCAGAACGAGAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAACGGCCGGGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUGUCCGACUACGACGUGGACCACAUCGUGCCCCAGUCCUUCCUGAAGGACGACUCCAUCGACAACAAGGUGCUGACCCGGUCCGACAAGAACCGGGGCAAGUCCGACAACGUGCCCUCCGAGGAGGUGGUGAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAGCUGAUCACCCAGCGGAAGUUCGACAACCUGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCUGUCCGAGCUGGACAAGGCCGGCUUCAUCAAGCGGCAGCUGGUGGAGACCCGGCAGAUCACCAAGCACGUGGCCCAGAUCCUGGACUCCCGGAUGAACACCAAGUACGACGAGAACGACAAGCUGAUCCGGGAGGUGAAGGUGAUCACCCUGAAGUCCAAGCUGGUGUCCGACUUCCGGAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUGCGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCCGUGGUGGGCACCGCCCUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUGGAGUCCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAGGUGUACGACGUGCGGAAGAUGAUCGCCAAGUCCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACCGCCAAGUACUUCUUCUACUCCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACCGAGAUCACCCUGGCCAACGGCGAGAUCCGGAAGCGGCCCCUGAUCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGAUCGUGUGGGACAAGGGCCGGGACUUCGCCACCGUGCGGAAGGUGCUGUCCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAGAAGACCGAGGUGCAGACCGGCGGCUUCUCCAAGGAGUCCAUCCUGCCCAAGCGGAACUCCGACAAGCUGAUCGCCCGGAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGCGGCUUCGACUCCCCCACCGUGGCCUACUCCGUGCUGGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGCAAGUCCAAGAAGCUGAAGUCCGUGAAGGAGCUGCUGGGCAUCACCAUCAUGGAGCGGUCCUCCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAGGCCAAGGGCUACAAGGAGGUGAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUGCCCAAGUACUCCCUGUUCGAGCUGGAGAACGGCCGGAAGCGGAUGCUGGCCUCCGCCGGCGAGCUGCAGAAGGGCAACGAGCUGGCCCUGCCCUCCAAGUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCUCCCACUACGAGAAGCUGAAGGGCUCCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAGCACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCUCCGAGUUCUCCAAGCGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAACCUGGACAAGGUGCUGUCCGCCUACAACAAGCACCGGGACAAGCCCAUCCGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACCCUGACCAACCUGGGCGCCCCCGCCGCCUUCAAGUACUUCGACACCACCAUCGACCGGAAGCGGUACACCUCCACCAAGGAGGUGCUGGACGCCACCCUGAUCCACCAGUCCAUCACCGGCCUGUACGAGACCCGGAUCGACCUGUCCCAGCUGGGCGGCGACGGCGGCGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGUGA
296 Cas9-NLS之胺基酸序列 MDKKYSIGLDIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDGGGSPKKKRKV
297 在TRAC G013006切割位點側翼具有同源臂之TCR插入構築體-包括ITR TTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTagatcttgccaacataccataaacctcccattctgctaatgcccagcctaagttggggagaccactccagattccaagatgtacagtttgctttgctgggcctttttcccatgcctgcctttactctgccagagttatattgctggggttttgaagaagatcctattaaataaaagaataagcagtattattaagtagccctgcatttcaggtttccttgagtggcaggccaggcctggccgtgaacgttcactgaaatcatggcctcttggccaagattgatagcttgtgcctgtccctgagtcccagtccatcacgagcagctggtttctaagatgctatttcccgtataaagcatgagaccgtgacttgccagccccacagagccccgcccttgtccatcactggcatctggactccagcctgggttggggcaaagagggaaatgagatcatgtcctaaccctgatcctcttgtcccacagATATCCAGAACCCTGACCCTGCGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACGCCCCTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCTTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCGACGCTTTTTTTCTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATgTGCACACTGGTATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTTTTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAGTTTTTTTCTTCCATTTCAGGTGTCGTGAtGCGGCCGCCACCATGGCCCTGCCCGTGACCGCCCTGCTGCTGCCCCTGGCCCTGCTGCTGCACGCCGCCCGGCCCCAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGCGGCTGAGCTGCGTGGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCAGCAACGCCATGAGCTGGGTGCGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCGCCATCAGCGGCAGCGGCGACTACACCCACTACAGCGACAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAAGGAGGTGCCCGGCGGCCCCCTGGTGGACTTCGACAGCCGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCCAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGCGGCTGAGCTGCGTGGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCAGCAACGCCATGAGCTGGGTGCGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCGCCATCAGCGGCAGCGGCGACTACACCCACTACAGCGACAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAAGGAGGTGCCCGGCGGCCCCCTGGTGGACTTCGACAGCCGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCACCACCACCCCCGCCCCCCGGCCCCCCACCCCCGCCCCCACCATCGCCAGCCAGCCCCTGAGCCTGCGGCCCGAGGCCTGCCGGCCCGCCGCCGGCGGCGCCGTGCACACCCGGGGCCTGGACTTCGCCTGCGACTTCTGGGTGCTGGTGGTGGTGGGCGGCGTGCTGGCCTGCTACAGCCTGCTGGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTCTGGGTGCGGAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCCGGCGGCCCGGCCCCACCCGGAAGCACTACCAGCCCTACGCCCCCCCCCGGGACTTCGCCGCCTACCGGAGCCGGGTGAAGTTCAGCCGGAGCGCCGACGCCCCCGCCTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCCGGCGGGAGGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGCGGGGCCGGGACCCCGAGATGGGCGGCAAGCCCCGGCGGAAGAACCCCCAGGAGGGCCTGTACAACGAGCTGCAGAAGGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGCGGCGGGGCAAGGGCCACGACGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCCGGTAATGACCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGCTTCTGAGGCGGAAAGAACCAGCTGGGGCTCTAGGGGGTATCCCCACTAGTCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGgtaagggcagctttggtgccttcgcaggctgtttccttgcttcaggaatggccaggttctgcccagagctctggtcaatgatgtctaaaactcctctgattggtggtctcggccttatccattgccaccaaaaccctctttttactaagaaacagtgagccttgttctggcagtccagagaatgacacgggaaaaaagcagatgaagagaaggtggcaggagagggcacgtggcccagcctcagtctctAGATCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAA
298 雙向SERPINA插入構築體 taggtcagtgaagagaagaacaaaaagcagcatattacagttagttgtcttcatcaatctttaaatatgttgtgtggtttttctctccctgtttccacagttGAGGACCCCCAGGGCGACGCCGCCCAGAAGACCGACACCAGCCACCACGACCAGGACCACCCCACCTTCAACAAGATCACCCCCAACCTGGCCGAGTTCGCCTTCAGCCTGTACAGGCAGCTGGCCCACCAGAGCAACAGCACCAACATCTTCTTCAGCCCCGTGAGCATCGCCACCGCCTTCGCCATGCTGAGCCTGGGCACCAAGGCCGACACCCACGACGAGATCCTGGAGGGCCTGAACTTCAACCTGACCGAGATCCCCGAGGCCCAGATCCACGAGGGCTTCCAGGAGCTGCTGAGGACCCTGAACCAGCCCGACAGCCAGCTGCAGCTGACCACCGGCAACGGCCTGTTCCTGAGCGAGGGCCTGAAGCTGGTGGACAAGTTCCTGGAGGACGTGAAGAAGCTGTACCACAGCGAGGCCTTCACCGTGAACTTCGGCGACACCGAGGAGGCCAAGAAGCAGATCAACGACTACGTGGAGAAGGGCACCCAGGGCAAGATCGTGGACCTGGTGAAGGAGCTGGACAGGGACACCGTGTTCGCCCTGGTGAACTACATCTTCTTCAAGGGCAAGTGGGAGAGGCCCTTCGAGGTGAAGGACACCGAGGAGGAGGACTTCCACGTGGACCAGGTGACCACCGTGAAGGTGCCCATGATGAAGAGGCTGGGCATGTTCAACATCCAGCACTGCAAGAAGCTGAGCAGCTGGGTGCTGCTGATGAAGTACCTGGGCAACGCCACCGCCATCTTCTTCCTGCCCGACGAGGGCAAGCTGCAGCACCTGGAGAACGAGCTGACCCACGACATCATCACCAAGTTCCTGGAGAACGAGGACAGGAGGAGCGCCAGCCTGCACCTGCCCAAGCTGAGCATCACCGGCACCTACGACCTGAAGAGCGTGCTGGGCCAGCTGGGCATCACCAAGGTGTTCAGCAACGGCGCCGACCTGAGCGGCGTGACCGAGGAGGCCCCCCTGAAGCTGAGCAAGGCCGTGCACAAGGCCGTGCTGACCATCGACGAGAAGGGCACCGAGGCCGCCGGCGCCATGTTCCTGGAGGCCATCCCCATGAGCATCCCCCCCGAGGTGAAGTTCAACAAGCCCTTCGTGTTCCTGATGATCGAGCAGAACACCAAGAGCCCCCTGTTCATGGGCAAGGTGGTGAACCCCACCCAGAAGTAACAGACATGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGGTGTGGGAGGTTTTTTggggataccccctagagccccagctggttctttccgcctcagaagCCATAGAGCCCACCGCATCCCCAGCATGCCTGCTATTGTCTTCCCAATCCTCCCCCTTGCTGTCCTGCCCCACCCCACCCCCCAGAATAGAATGACACCTACTCAGACAATGCGATGCAATTTCCTCATTTTATTAGGAAAGGACAGTGGGAGTGGCACCTTCCAGGGTCAAGGAAGGCACGGGGGAGGGGCAAACAACAGATGGCTGGCAACTAGAAGGCACAGTCGaggttaTTTTTGGGTGGGATTCACCACTTTTCCCATGAAGAGGGGAGACTTGGTATTTTGTTCAATCATTAAGAAGACAAAGGGTTTGTTGAACTTGACCTCGGGGGGGATAGACATGGGTATGGCCTCTAAAAACATGGCCCCAGCAGCTTCAGTCCCTTTCTCGTCGATGGTCAGCACAGCCTTATGCACGGCCTTGGAGAGCTTCAGGGGTGCCTCCTCTGTGACCCCGGAGAGGTCAGCCCCATTGCTGAAGACCTTAGTGATGCCCAGTTGACCCAGGACGCTCTTCAGATCATAGGTTCCAGTAATGGACAGTTTGGGTAAATGTAAGCTGGCAGACCTTCTGTCTTCATTTTCCAGGAACTTGGTGATGATATCGTGGGTGAGTTCATTTTCCAGGTGCTGTAGTTTCCCCTCATCAGGCAGGAAGAAGATGGCGGTGGCATTGCCCAGGTATTTCATCAGCAGCACCCAGCTGGACAGCTTCTTACAGTGCTGGATGTTAAACATGCCTAAACGCTTCATCATAGGCACCTTCACGGTGGTCACCTGGTCCACGTGGAAGTCCTCTTCCTCGGTGTCCTTGACTTCAAAGGGTCTCTCCCATTTGCCTTTAAAGAAGATGTAATTCACCAGAGCAAAAACTGTGTCTCTGTCAAGCTCCTTGACCAAATCCACAATTTTCCCTTGAGTACCCTTCTCCACGTAATCGTTGATCTGTTTCTTGGCCTCTTCGGTGTCCCCGAAGTTGACAGTGAAGGCTTCTGAGTGGTACAACTTTTTAACATCCTCCAAAAACTTATCCACTAGCTTCAGGCCCTCGCTGAGGAACAGGCCATTGCCGGTGGTCAGCTGGAGCTGGCTGTCTGGCTGGTTGAGGGTACGGAGGAGTTCCTGGAAGCCTTCATGGATCTGAGCCTCCGGAATCTCCGTGAGGTTGAAATTCAGGCCCTCCAGGATTTCATCGTGAGTGTCAGCCTTGGTCCCCAGGGAGAGCATTGCAAAGGCTGTAGCGATGCTCACTGGGGAGAAGAAGATATTGGTGCTGTTGGACTGGTGTGCCAGCTGGCGGTATAGGCTGAAGGCGAACTCAGCCAGGTTGGGGGTGATCTTGTTGAAGGTTGGGTGATCCTGATCATGGTGGGATGTATCTGTCTTCTGGGCAGCATCTCCCTGGGGATCCTCaactgtggaaacagggagagaaaaaccacacaacatatttaaagattgatgaagacaactaactgtaatatgctgctttttgttcttctcttcactgaccta
299 具有與小鼠AAVS1之同源臂之模板A eGFP插入構築體 tggccctggctttggcagcctgtgctgacccatgcagtcctccttaccatccctccctcgacttcccctcttccgatgttgagcccctccagccggtcctggactttgtctccttccctgccctgccctctcctgaacctgagccagctcccatagctcagtctggtctatctgcctggccctggccattgtcactttgcgctgccctcctctcgcccccgagtgcccttgctgtgccgccggaactctgccctctaacgctgccgtctctctcctgagtccggaccactttgagctctactggcttctgcgccgcctctggcccactgtttccccttcccaggcaggtcctgctttctctgacctgcattctctcccctgggcctgtgccgctttctgtctgcagcttgtggcctgggtcacctctacggctggcccagatccttccctgccgcctccttcaggttccgtcttcctccactccctcttccccttgctctctgctgtgttgctgcccaaggatgctctttccggagcacttccttctcggcgctgcaccacgtgatgtcctctgagcggatcctccccgtgtctgggtcctctccgggcatctctcctccctcacccaaccccatgccgtcttcactcgctgggttcccttttccttctccttctggggcctgtgccatctctcgtttcttaggatggccttctccgacggatgtctcccttgcgtcccgcctccccttcttgtaggcctgcatcatcaccgtttttctggacaaccccaaagtaccccgtctccctggctttagccacctctccatcctcttgctttctttgcctggacaccccgttctcctgtggattcgggtcacctctcactcctttcatttgggcagctcccctaccccccttacctctctagtctgtgctagctcttccagccctagttattaatgagtaattcatacaaaaggactcgcccctgccttggggaatcccagggaccgtcgttaaactcccactaacgtagaacccagagatcgctgcgttcccgccccctcacccgcccgctctcgtcatcactgaggtggagaagagcatgcgtgaggctccggtgcccgtcagtgggcagagcgcacatcgcccacagtccccgagaagttggggggaggggtcggcaattgaaccggtgcctagagaaggtggcgcggggtaaactgggaaagtgatgtcgtgtactggctccgcctttttcccgagggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagtcgccgtgaacgttctttttcgcaacgggtttgccgccagaacacaggtaagtgccgtgtgtggttcccgcgggcctggcctctttacgggttatggcccttgcgtgccttgaattacttccacgcccctggctgcagtacgtgattcttgatcccgagcttcgggttggaagtgggtgggagagttcgaggccttgcgcttaaggagccccttcgcctcgtgcttgagttgaggcctggcttgggcgctggggccgccgcgtgcgaatctggtggcaccttcgcgcctgtctcgctgctttcgataagtctctagccatttaaaatttttgatgacctgctgcgacgctttttttctggcaagatagtcttgtaaatgcgggccaaCatctgcacactggtatttcggtttttggggccgcgggcggcgacggggcccgtgcgtcccagcgcacatgttcggcgaggcggggcctgcgagcgcggccaccgagaatcggacgggggtagtctcaagctggccggcctgctctggtgcctggcctcgcgccgccgtgtatcgccccgccctgggcggcaaggctggcccggtcggcaccagttgcgtgagcggaaagatggccgcttcccggccctgctgcagggagctcaaaatggaggacgcggcgctcgggagagcgggcgggtgagtcacccacacaaaggaaaagggcctttccgtcctcagccgtcgcttcatgtgactccacggagtaccgggcgccgtccaggcacctcgattagttctcgagcttttggagtacgtcgtctttaggttggggggaggggttttatgcgatggagtttccccacactgagtgggtggagactgaagttaggccagcttggcacttgatgtaattctccttggaatttgccctttttgagtttggatcttggttcattctcaagcctcagacagtggttcaaagtttttttcttccatttcaggtgtcgtgacgctagcgctaccggactcaatctcgagctcaagcttcgaattctgcagtcgacggtaccgcgggcccgggatccaccggtcgccaccATGgtgAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAtagcggccgcgactctagatcataatcagccataccacatttgtagaggttttacttgctttaaaaaacctcccacacctccccctgaacctgaaacataaaatgaatgcaattgttgttgttaacttgtttattgcagcttataatggttacaaataaagcaatagcatcacaaatttcacaaataaagcatttttttcactgcattctagttgtggtttgtccaaactcatcaatgtatcttaaggcgttgggaccaccttatattcccagggccggttaatgtggctctggttctgggtacttttatctgtcccctccaccccacagtggggccactagggacaggattggtgacagaaaagccccatccttaggcctcctccttcctagtctcctgatattgggtctaacccccacctcctgttaggcagattccttatctggtgacacacccccatttcctggagccatctctctccttgccagaacctctaaggtttgcttacgatggagccagagaggatcctgggagggagagcttggcagggggtgggagggaagggggggatgcgtgacctgcccggttctcagtggccaccctgcgctaccctctcccagaacctgagctgctctgacgcggccgtctggtgcgtttcactgatcctggtgctgcagcttccttacacttcccaagaggagaagcagtttggaaaaacaaaatcagaataagttggtcctgagttctaactttggctcttcacctttctagtccccaatttatattgttcctccgtgcgtcagttttacctgtgagataaggccagtagccagccccgtcctggcagggctgtggtgaggaggggggtgtccgtgtggaaaactccctttgtgagaatggtgcgtcctaggtgttcaccaggtcgtggccgcctctactccctttctctttctccatccttctttccttaaagagtccccagtgctatctgggacatattcctccgcccagagcagggtcccgcttccctaaggccctgctctgggcttctgggtttgagtccttggcaagcccaggagaggcgctcaggcttccctgtcccccttcctcgtccaccatctcatgcccctggctctcctgccccttccctacaggggttcctggctctgctcttcagactgagccccgttcccctgcatc
300 具有與小鼠AAVS1之同源臂之模板B eGFP插入構築體 ccctgccctgccctctcctgaacctgagccagctcccatagctcagtctggtctatctgcctggccctggccattgtcactttgcgctgccctcctctcgcccccgagtgcccttgctgtgccgccggaactctgccctctaacgctgccgtctctctcctgagtccggaccactttgagctctactggcttctgcgccgcctctggcccactgtttccccttcccaggcaggtcctgctttctctgacctgcattctctcccctgggcctgtgccgctttctgtctgcagcttgtggcctgggtcacctctacggctggcccagatccttccctgccgcctccttcaggttccgtcttcctccactccctcttccccttgctctctgctgtgttgctgcccaaggatgctctttccggagcacttccttctcggcgctgcaccacgtgatgtcctctgagcggatcctccccgtgtctgggtcctctccgggcatctctcctccctcacccaaccccatgccgtcttcactcgctgggttcccttttccttctccttctggggcctgtgccatctctcgtttcttaggatggccttctccgacggatgtctcccttgcgtcccgcctccccttcttgtaggcctgcatcatcaccgtttttctggacaaccccaaagtaccccgtctccctggctttagccacctctccatcctcttgctttctttgcctggacaccccgttctcctgtggattcgggtcacctctcactcctttcatttgggcagctcccctaccccccttacctctctagtctgtgctagctcttccagccccctgtcatggcatcttccaggggtccgagagctcagctagtcttcttcctccaacccgggcccctatgtccacttcaggacagcatgtttgctgcctccagggatcctgtgtccctagttattaatgagtaattcatacaaaaggactcgcccctgccttggggaatcccagggaccgtcgttaaactcccactaacgtagaacccagagatcgctgcgttcccgccccctcacccgcccgctctcgtcatcactgaggtggagaagagcatgcgtgaggctccggtgcccgtcagtgggcagagcgcacatcgcccacagtccccgagaagttggggggaggggtcggcaattgaaccggtgcctagagaaggtggcgcggggtaaactgggaaagtgatgtcgtgtactggctccgcctttttcccgagggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagtcgccgtgaacgttctttttcgcaacgggtttgccgccagaacacaggtaagtgccgtgtgtggttcccgcgggcctggcctctttacgggttatggcccttgcgtgccttgaattacttccacgcccctggctgcagtacgtgattcttgatcccgagcttcgggttggaagtgggtgggagagttcgaggccttgcgcttaaggagccccttcgcctcgtgcttgagttgaggcctggcttgggcgctggggccgccgcgtgcgaatctggtggcaccttcgcgcctgtctcgctgctttcgataagtctctagccatttaaaatttttgatgacctgctgcgacgctttttttctggcaagatagtcttgtaaatgcgggccaaCatctgcacactggtatttcggtttttggggccgcgggcggcgacggggcccgtgcgtcccagcgcacatgttcggcgaggcggggcctgcgagcgcggccaccgagaatcggacgggggtagtctcaagctggccggcctgctctggtgcctggcctcgcgccgccgtgtatcgccccgccctgggcggcaaggctggcccggtcggcaccagttgcgtgagcggaaagatggccgcttcccggccctgctgcagggagctcaaaatggaggacgcggcgctcgggagagcgggcgggtgagtcacccacacaaaggaaaagggcctttccgtcctcagccgtcgcttcatgtgactccacggagtaccgggcgccgtccaggcacctcgattagttctcgagcttttggagtacgtcgtctttaggttggggggaggggttttatgcgatggagtttccccacactgagtgggtggagactgaagttaggccagcttggcacttgatgtaattctccttggaatttgccctttttgagtttggatcttggttcattctcaagcctcagacagtggttcaaagtttttttcttccatttcaggtgtcgtgacgctagcgctaccggactcaatctcgagctcaagcttcgaattctgcagtcgacggtaccgcgggcccgggatccaccggtcgccaccATGgtgAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAtagcggccgcgactctagatcataatcagccataccacatttgtagaggttttacttgctttaaaaaacctcccacacctccccctgaacctgaaacataaaatgaatgcaattgttgttgttaacttgtttattgcagcttataatggttacaaataaagcaatagcatcacaaatttcacaaataaagcatttttttcactgcattctagttgtggtttgtccaaactcatcaatgtatcttaaggcgtagaaaagccccatccttaggcctcctccttcctagtctcctgatattgggtctaacccccacctcctgttaggcagattccttatctggtgacacacccccatttcctggagccatctctctccttgccagaacctctaaggtttgcttacgatggagccagagaggatcctgggagggagagcttggcagggggtgggagggaagggggggatgcgtgacctgcccggttctcagtggccaccctgcgctaccctctcccagaacctgagctgctctgacgcggccgtctggtgcgtttcactgatcctggtgctgcagcttccttacacttcccaagaggagaagcagtttggaaaaacaaaatcagaataagttggtcctgagttctaactttggctcttcacctttctagtccccaatttatattgttcctccgtgcgtcagttttacctgtgagataaggccagtagccagccccgtcctggcagggctgtggtgaggaggggggtgtccgtgtggaaaactccctttgtgagaatggtgcgtcctaggtgttcaccaggtcgtggccgcctctactccctttctctttctccatccttctttccttaaagagtccccagtgctatctgggacatattcctccgcccagagcagggtcccgcttccctaaggccctgctctgggcttctgggtttgagtccttggcaagcccaggagaggcgctcaggcttccctgtcccccttcctcgtccaccatctcatgcccctggctctcctgccccttccctacaggggttcctggctctgctcttcagactgagccccgttcccctgcatccccgttcccctgcatcccccttcccctgcatcccccagaggccccaggccacctacttggcctggaccccacgagaggccaccccagccctgtctaccaggctgcct
301 具有與小鼠AAVS1之同源臂之模板C eGFP插入構築體 taacgctgccgtctctctcctgagtccggaccactttgagctctactggcttctgcgccgcctctggcccactgtttccccttcccaggcaggtcctgctttctctgacctgcattctctcccctgggcctgtgccgctttctgtctgcagcttgtggcctgggtcacctctacggctggcccagatccttccctgccgcctccttcaggttccgtcttcctccactccctcttccccttgctctctgctgtgttgctgcccaaggatgctctttccggagcacttccttctcggcgctgcaccacgtgatgtcctctgagcggatcctccccgtgtctgggtcctctccgggcatctctcctccctcacccaaccccatgccgtcttcactcgctgggttcccttttccttctccttctggggcctgtgccatctctcgtttcttaggatggccttctccgacggatgtctcccttgcgtcccgcctccccttcttgtaggcctgcatcatcaccgtttttctggacaaccccaaagtaccccgtctccctggctttagccacctctccatcctcttgctttctttgcctggacaccccgttctcctgtggattcgggtcacctctcactcctttcatttgggcagctcccctaccccccttacctctctagtctgtgctagctcttccagccccctgtcatggcatcttccaggggtccgagagctcagctagtcttcttcctccaacccgggcccctatgtccacttcaggacagcatgtttgctgcctccagggatcctgtgtccccgagctgggaccaccttatattcccagggccggttaatgtggctctggttctgggtacttttatctgtcccctccaccccacagtggggccactagggacaggattggtgacagaaaagccccatccttaggcctcctcctagttattaatgagtaattcatacaaaaggactcgcccctgccttggggaatcccagggaccgtcgttaaactcccactaacgtagaacccagagatcgctgcgttcccgccccctcacccgcccgctctcgtcatcactgaggtggagaagagcatgcgtgaggctccggtgcccgtcagtgggcagagcgcacatcgcccacagtccccgagaagttggggggaggggtcggcaattgaaccggtgcctagagaaggtggcgcggggtaaactgggaaagtgatgtcgtgtactggctccgcctttttcccgagggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagtcgccgtgaacgttctttttcgcaacgggtttgccgccagaacacaggtaagtgccgtgtgtggttcccgcgggcctggcctctttacgggttatggcccttgcgtgccttgaattacttccacgcccctggctgcagtacgtgattcttgatcccgagcttcgggttggaagtgggtgggagagttcgaggccttgcgcttaaggagccccttcgcctcgtgcttgagttgaggcctggcttgggcgctggggccgccgcgtgcgaatctggtggcaccttcgcgcctgtctcgctgctttcgataagtctctagccatttaaaatttttgatgacctgctgcgacgctttttttctggcaagatagtcttgtaaatgcgggccaaCatctgcacactggtatttcggtttttggggccgcgggcggcgacggggcccgtgcgtcccagcgcacatgttcggcgaggcggggcctgcgagcgcggccaccgagaatcggacgggggtagtctcaagctggccggcctgctctggtgcctggcctcgcgccgccgtgtatcgccccgccctgggcggcaaggctggcccggtcggcaccagttgcgtgagcggaaagatggccgcttcccggccctgctgcagggagctcaaaatggaggacgcggcgctcgggagagcgggcgggtgagtcacccacacaaaggaaaagggcctttccgtcctcagccgtcgcttcatgtgactccacggagtaccgggcgccgtccaggcacctcgattagttctcgagcttttggagtacgtcgtctttaggttggggggaggggttttatgcgatggagtttccccacactgagtgggtggagactgaagttaggccagcttggcacttgatgtaattctccttggaatttgccctttttgagtttggatcttggttcattctcaagcctcagacagtggttcaaagtttttttcttccatttcaggtgtcgtgacgctagcgctaccggactcaatctcgagctcaagcttcgaattctgcagtcgacggtaccgcgggcccgggatccaccggtcgccaccATGgtgAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAtagcggccgcgactctagatcataatcagccataccacatttgtagaggttttacttgctttaaaaaacctcccacacctccccctgaacctgaaacataaaatgaatgcaattgttgttgttaacttgtttattgcagcttataatggttacaaataaagcaatagcatcacaaatttcacaaataaagcatttttttcactgcattctagttgtggtttgtccaaactcatcaatgtatcttaaggcgttacgatggagccagagaggatcctgggagggagagcttggcagggggtgggagggaagggggggatgcgtgacctgcccggttctcagtggccaccctgcgctaccctctcccagaacctgagctgctctgacgcggccgtctggtgcgtttcactgatcctggtgctgcagcttccttacacttcccaagaggagaagcagtttggaaaaacaaaatcagaataagttggtcctgagttctaactttggctcttcacctttctagtccccaatttatattgttcctccgtgcgtcagttttacctgtgagataaggccagtagccagccccgtcctggcagggctgtggtgaggaggggggtgtccgtgtggaaaactccctttgtgagaatggtgcgtcctaggtgttcaccaggtcgtggccgcctctactccctttctctttctccatccttctttccttaaagagtccccagtgctatctgggacatattcctccgcccagagcagggtcccgcttccctaaggccctgctctgggcttctgggtttgagtccttggcaagcccaggagaggcgctcaggcttccctgtcccccttcctcgtccaccatctcatgcccctggctctcctgccccttccctacaggggttcctggctctgctcttcagactgagccccgttcccctgcatccccgttcccctgcatcccccttcccctgcatcccccagaggccccaggccacctacttggcctggaccccacgagaggccaccccagccctgtctaccaggctgccttttgggtggattctcctccaactgtggggtgactgcttggcaaactcactcttcggggtatcccaggaggcctggagcattggggtgggctggggttcagagaggagggattcccttctcaggttacgtggccaagaagcaggggagc
302 具有與小鼠AAVS1之同源臂之模板D eGFP插入構築體 gtttccccttcccaggcaggtcctgctttctctgacctgcattctctcccctgggcctgtgccgctttctgtctgcagcttgtggcctgggtcacctctacggctggcccagatccttccctgccgcctccttcaggttccgtcttcctccactccctcttccccttgctctctgctgtgttgctgcccaaggatgctctttccggagcacttccttctcggcgctgcaccacgtgatgtcctctgagcggatcctccccgtgtctgggtcctctccgggcatctctcctccctcacccaaccccatgccgtcttcactcgctgggttcccttttccttctccttctggggcctgtgccatctctcgtttcttaggatggccttctccgacggatgtctcccttgcgtcccgcctccccttcttgtaggcctgcatcatcaccgtttttctggacaaccccaaagtaccccgtctccctggctttagccacctctccatcctcttgctttctttgcctggacaccccgttctcctgtggattcgggtcacctctcactcctttcatttgggcagctcccctaccccccttacctctctagtctgtgctagctcttccagccccctgtcatggcatcttccaggggtccgagagctcagctagtcttcttcctccaacccgggcccctatgtccacttcaggacagcatgtttgctgcctccagggatcctgtgtccccgagctgggaccaccttatattcccagggccggttaatgtggctctggttctgggtacttttatctgtcccctccaccccacagtggggccactagggacaggattggtgacagaaaagccccatccttaggcctcctccttcctagtctcctgatattgggtctaacccccacctcctgttaggcagattccttatctggtgacacaccccctagttattaatgagtaattcatacaaaaggactcgcccctgccttggggaatcccagggaccgtcgttaaactcccactaacgtagaacccagagatcgctgcgttcccgccccctcacccgcccgctctcgtcatcactgaggtggagaagagcatgcgtgaggctccggtgcccgtcagtgggcagagcgcacatcgcccacagtccccgagaagttggggggaggggtcggcaattgaaccggtgcctagagaaggtggcgcggggtaaactgggaaagtgatgtcgtgtactggctccgcctttttcccgagggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagtcgccgtgaacgttctttttcgcaacgggtttgccgccagaacacaggtaagtgccgtgtgtggttcccgcgggcctggcctctttacgggttatggcccttgcgtgccttgaattacttccacgcccctggctgcagtacgtgattcttgatcccgagcttcgggttggaagtgggtgggagagttcgaggccttgcgcttaaggagccccttcgcctcgtgcttgagttgaggcctggcttgggcgctggggccgccgcgtgcgaatctggtggcaccttcgcgcctgtctcgctgctttcgataagtctctagccatttaaaatttttgatgacctgctgcgacgctttttttctggcaagatagtcttgtaaatgcgggccaaCatctgcacactggtatttcggtttttggggccgcgggcggcgacggggcccgtgcgtcccagcgcacatgttcggcgaggcggggcctgcgagcgcggccaccgagaatcggacgggggtagtctcaagctggccggcctgctctggtgcctggcctcgcgccgccgtgtatcgccccgccctgggcggcaaggctggcccggtcggcaccagttgcgtgagcggaaagatggccgcttcccggccctgctgcagggagctcaaaatggaggacgcggcgctcgggagagcgggcgggtgagtcacccacacaaaggaaaagggcctttccgtcctcagccgtcgcttcatgtgactccacggagtaccgggcgccgtccaggcacctcgattagttctcgagcttttggagtacgtcgtctttaggttggggggaggggttttatgcgatggagtttccccacactgagtgggtggagactgaagttaggccagcttggcacttgatgtaattctccttggaatttgccctttttgagtttggatcttggttcattctcaagcctcagacagtggttcaaagtttttttcttccatttcaggtgtcgtgacgctagcgctaccggactcaatctcgagctcaagcttcgaattctgcagtcgacggtaccgcgggcccgggatccaccggtcgccaccATGgtgAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAtagcggccgcgactctagatcataatcagccataccacatttgtagaggttttacttgctttaaaaaacctcccacacctccccctgaacctgaaacataaaatgaatgcaattgttgttgttaacttgtttattgcagcttataatggttacaaataaagcaatagcatcacaaatttcacaaataaagcatttttttcactgcattctagttgtggtttgtccaaactcatcaatgtatcttaaggcgtcggttctcagtggccaccctgcgctaccctctcccagaacctgagctgctctgacgcggccgtctggtgcgtttcactgatcctggtgctgcagcttccttacacttcccaagaggagaagcagtttggaaaaacaaaatcagaataagttggtcctgagttctaactttggctcttcacctttctagtccccaatttatattgttcctccgtgcgtcagttttacctgtgagataaggccagtagccagccccgtcctggcagggctgtggtgaggaggggggtgtccgtgtggaaaactccctttgtgagaatggtgcgtcctaggtgttcaccaggtcgtggccgcctctactccctttctctttctccatccttctttccttaaagagtccccagtgctatctgggacatattcctccgcccagagcagggtcccgcttccctaaggccctgctctgggcttctgggtttgagtccttggcaagcccaggagaggcgctcaggcttccctgtcccccttcctcgtccaccatctcatgcccctggctctcctgccccttccctacaggggttcctggctctgctcttcagactgagccccgttcccctgcatccccgttcccctgcatcccccttcccctgcatcccccagaggccccaggccacctacttggcctggaccccacgagaggccaccccagccctgtctaccaggctgccttttgggtggattctcctccaactgtggggtgactgcttggcaaactcactcttcggggtatcccaggaggcctggagcattggggtgggctggggttcagagaggagggattcccttctcaggttacgtggccaagaagcaggggagctgggtttgggtcaggtctgggtgtggggtgaccagcttatgctgtttgcccaggacagcctagttttagcactgaaac
303 具有與小鼠AAVS1之同源臂之模板OG eGFP插入構築體 actagtccgcgggcggccgcgctgccctcctctcgcccccgagtgcccttgctgtgccgccggaactctgccctctaacgctgccgtctctctcctgagtccggaccactttgagctctactggcttctgcgccgcctctggcccactgtttccccttcccaggcaggtcctgctttctctgacctgcattctctcccctgggcctgtgccgctttctgtctgcagcttgtggcctgggtcacctctacggctggcccagatccttccctgccgcctccttcaggttccgtcttcctccactccctcttccccttgctctctgctgtgttgctgcccaaggatgctctttccggagcacttccttctcggcgctgcaccacgtgatgtcctctgagcggatcctccccgtgtctgggtcctctccgggcatctctcctccctcacccaaccccatgccgtcttcactcgctgggttcccttttccttctccttctggggcctgtgccatctctcgtttcttaggatggccttctccgacggatgtctcccttgcgtcccgcctccccttcttgtaggcctgcatcatcaccgtttttctggacaaccccaaagtaccccgtctccctggctttagccacctctccatcctcttgctttctttgcctggacaccccgttctcctgtggattcgggtcacctctcactcctttcatttgggcagctcccctaccccccttacctctctagtctgtgctagctcttccagccccctgtcatggcatcttccaggggtccgagagctcagctagtcttcttcctccaacccgggcccctatgtccacttcaggacagcatgtttgctgcctccagggatcctgtgtccccgagctgggaccaccttatattcccagggccggttaatgtggctctggttctgggtacttttatctgtcccctccaccccacagttagttattaatgagtaattcatacaaaaggactcgcccctgccttggggaatcccagggaccgtcgttaaactcccactaacgtagaacccagagatcgctgcgttcccgccccctcacccgcccgctctcgtcatcactgaggtggagaagagcatgcgtgaggctccggtgcccgtcagtgggcagagcgcacatcgcccacagtccccgagaagttggggggaggggtcggcaattgaaccggtgcctagagaaggtggcgcggggtaaactgggaaagtgatgtcgtgtactggctccgcctttttcccgagggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagtcgccgtgaacgttctttttcgcaacgggtttgccgccagaacacaggtaagtgccgtgtgtggttcccgcgggcctggcctctttacgggttatggcccttgcgtgccttgaattacttccacgcccctggctgcagtacgtgattcttgatcccgagcttcgggttggaagtgggtgggagagttcgaggccttgcgcttaaggagccccttcgcctcgtgcttgagttgaggcctggcttgggcgctggggccgccgcgtgcgaatctggtggcaccttcgcgcctgtctcgctgctttcgataagtctctagccatttaaaatttttgatgacctgctgcgacgctttttttctggcaagatagtcttgtaaatgcgggccaacatctgcacactggtatttcggtttttggggccgcgggcggcgacggggcccgtgcgtcccagcgcacatgttcggcgaggcggggcctgcgagcgcggccaccgagaatcggacgggggtagtctcaagctggccggcctgctctggtgcctggcctcgcgccgccgtgtatcgccccgccctgggcggcaaggctggcccggtcggcaccagttgcgtgagcggaaagatggccgcttcccggccctgctgcagggagctcaaaatggaggacgcggcgctcgggagagcgggcgggtgagtcacccacacaaaggaaaagggcctttccgtcctcagccgtcgcttcatgtgactccacggagtaccgggcgccgtccaggcacctcgattagttctcgagcttttggagtacgtcgtctttaggttggggggaggggttttatgcgatggagtttccccacactgagtgggtggagactgaagttaggccagcttggcacttgatgtaattctccttggaatttgccctttttgagtttggatcttggttcattctcaagcctcagacagtggttcaaagtttttttcttccatttcaggtgtcgtgacaccggtcgccaccatggtgAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGtaatagcggccgcgactctagatcataatcagccataccacatttgtagaggttttacttgctttaaaaaacctcccacacctccccctgaacctgaaacataaaatgaatgcaattgttgttgttaacttgtttattgcagcttataatggttacaaataaagcaatagcatcacaaatttcacaaataaagcatttttttcactgcattctagttgtggtttgtccaaactcatcaatgtatcttaaggcgttttcctggagccatctctctccttgccagaacctctaaggtttgcttacgatggagccagagaggatcctgggagggagagcttggcagggggtgggagggaagggggggatgcgtgacctgcccggttctcagtggccaccctgcgctaccctctcccagaacctgagctgctctgacgcggccgtctggtgcgtttcactgatcctggtgctgcagcttccttacacttcccaagaggagaagcagtttggaaaaacaaaatcagaataagttggtcctgagttctaactttggctcttcacctttctagtccccaatttatattgttcctccgtgcgtcagttttacctgtgagataaggccagtagccagccccgtcctggcagggctgtggtgaggaggggggtgtccgtgtggaaaactccctttgtgagaatggtgcgtcctaggtgttcaccaggtcgtggccgcctctactccctttctctttctccatccttctttccttaaagagtccccagtgctatctgggacatattcctccgcccagagcagggtcccgcttccctaaggccctgctctgggcttctgggtttgagtccttggcaagcccaggagaggcgctcaggcttccctgtcccccttcctcgtccaccatctcatgcccctggctctcctgccccttccctacaggggttcctggctctgctcttcagactgagccccgttcccctgcatccccgttcccctgcatcccccttcccctgcatcccccagaggccccaggccacctacttggcctggaccccacgagaggccaccccagccctgtctaccaggctgccttttgggtggattctcctccaactgtggggtgactgcttggcaaactcactcttcggggtatcccaggaggcctggagcattggggtgggctggggttcagaggcggccgcccgcggactagt
304 雙向NanoLuc插入構築體 TTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTagatctctATAACTTCGTATAGCATACATTATACGAAGTTATATGTATGCtaggtcagtgaagagaagaacaaaaagcagcatattacagttagttgtcttcatcaatctttaaatatgttgtgtggtttttctctccctgtttccacagtttttcttgatcatgaaaacgccaacaaaattctgaatcggccaaagaggtataattcaggtaaattggaagagtttgttcaagggaaccttgagagagaatgtatggaagaaaagtgtagttttgaagaagcaGTATTCACTTTGGAGGACTTTGTCGGTGACTGGAGGCAAACCGCTGGTTATAATCTCGACCAaGTACTGGAACAGGGCGGGGTAAGTTCCCTCTTTCAGAATTTGGGTGTAAGCGTCACACCAATCCAGCGGATTGTGTTGTCTGGAGAGAACGGACTCAAAATTGACATCCATGTTATCATTCCATATGAAGGTCTCAGTGGAGACCAAATGGGGCAGATCGAGAAGATTTTCAAGGTAGTTTACCCAGTCGACGATCACCACTTCAAAGTCATtCTCCACTATGGCACACTTGTTATCGACGGAGTAACTCCTAATATGATTGATTACTTTGGTCGCCCGTATGAGGGCATCGCAGTGTTTGATGGCAAAAAGATCACCGTAACAGGAACGTTGTGGAATGGGAACAAGATAATCGACGAGAGATTGATAAATCCAGACGGGTCACTCCTGTTCAGGGTTACAATTAACGGCGTCACAGGATGGAGACTCTGTGAACGAATACTGGCCacaaatttttcactcctgaagcaggccggagacgtggaggaaaacccagggcccgtgAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGGGAGGAGGAAGCCCGAAGAAGAAGAGAAAGGTCTAAcctCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGcttctgaggcggaaagaaccagctggggctctagggggtatccccAAAAAACCTCCCACACCTCCCCCTGAACCTGAAACATAAAATGAATGCAATTGTTGTTGTTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGTTACACCTTCCTCTTCTTCTTGGGGCTGCCGCCGCCCTTGTACAGCTCGTCCATGCCCAGGGTGATGCCGGCGGCGGTCACGAACTCCAGCAGCACCATGTGGTCCCTCTTCTCGTTGGGGTCCTTGCTCAGGGCGCTCTGGGTGCTCAGGTAGTGGTTGTCGGGCAGCAGCACGGGGCCGTCGCCGATGGGGGTGTTCTGCTGGTAGTGGTCGGCCAGCTGCACGCTGCCGTCCTCGATGTTGTGCCTGATCTTGAAGTTCACCTTGATGCCGTTCTTCTGCTTGTCGGCCATGATGTACACGTTGTGGCTGTTGTAGTTGTACTCCAGCTTGTGGCCCAGGATGTTGCCGTCCTCCTTGAAGTCGATGCCCTTCAGCTCGATCCTGTTCACCAGGGTGTCGCCCTCGAACTTCACCTCGGCCCTGGTCTTGTAGTTGCCGTCGTCCTTGAAGAAGATGGTCCTCTCCTGCACGTAGCCCTCGGGCATGGCGCTCTTGAAGAAGTCGTGCTGCTTCATGTGGTCGGGGTACCTGCTGAAGCACTGCACGCCGTAGGTCAGGGTGGTCACCAGGGTGGGCCAGGGCACGGGCAGCTTGCCGGTGGTGCAGATGAACTTCAGGGTCAGCTTGCCGTAGGTGGCGTCGCCCTCGCCCTCGCCGCTCACGCTGAACTTGTGGCCGTTCACGTCGCCGTCCAGCTCCACCAGGATGGGCACCACGCCGGTGAACAGCTCCTCGCCCTTGCTCACGGGGCCGGGGTTCTCCTCCACGTCGCCGGCCTGCTTCAGCAGGCTGAAGTTGGTGGCCAGGATCCTCTCGCACAGCCTCCAGCCGGTCACGCCGTTGATGGTCACCCTGAACAGCAGGCTGCCGTCGGGGTTGATCAGCCTCTCGTCGATGATCTTGTTGCCGTTCCACAGGGTGCCGGTCACGGTGATCTTCTTGCCGTCGAACACGGCGATGCCCTCGTAGGGCCTGCCGAAGTAGTCGATCATGTTGGGGGTCACGCCGTCGATCACCAGGGTGCCGTAGTGCAGGATCACCTTGAAGTGGTGGTCGTCCACGGGGTACACCACCTTGAAAATCTTCTCGATCTGGCCCATCTGGTCGCCGCTCAGGCCCTCGTAGGGGATGATCACGTGGATGTCGATCTTCAGGCCGTTCTCGCCGCTCAGCACGATCCTCTGGATGGGGGTCACGCTCACGCCCAGGTTCTGGAACAGGCTGCTCACGCCGCCCTGCTCCAGCACCTGGTCCAGGTTGTAGCCGGCGGTCTGCCTCCAGTCGCCCACGAAGTCCTCCAGGGTGAACACGGCCTCCTCGAAGCTGCACTTCTCCTCCATGCACTCCCTCTCCAGGTTGCCCTGCACGAACTCCTCCAGCTTGCCGCTGTTGTACCTCTTGGGCCTGTTCAGGATCTTGTTGGCGTTCTCGTGGTCCAGGAAaactgtggaaacagggagagaaaaaccacacaacatatttaaagattgatgaagacaactaactgtaatatgctgctttttgttcttctcttcactgacctaATGTATGCATAACTTCGTATAGCATACATTATACGAAGTTATagagatctAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAA
305 Nme2 Cas9之開放閱讀框 AUGGAGGCCUCCCCCGCCUCCGGCCCCCGGCACCUGAUGGACCCCCACAUCUUCACCUCCAACUUCAACAACGGCAUCGGCCGGCACAAGACCUACCUGUGCUACGAGGUGGAGCGGCUGGACAACGGCACCUCCGUGAAGAUGGACCAGCACCGGGGCUUCCUGCACAACCAGGCCAAGAACCUGCUGUGCGGCUUCUACGGCCGGCACGCCGAGCUGCGGUUCCUGGACCUGGUGCCCUCCCUGCAGCUGGACCCCGCCCAGAUCUACCGGGUGACCUGGUUCAUCUCCUGGUCCCCCUGCUUCUCCUGGGGCUGCGCCGGCGAGGUGCGGGCCUUCCUGCAGGAGAACACCCACGUGCGGCUGCGGAUCUUCGCCGCCCGGAUCUACGACUACGACCCCCUGUACAAGGAGGCCCUGCAGAUGCUGCGGGACGCCGGCGCCCAGGUGUCCAUCAUGACCUACGACGAGUUCAAGCACUGCUGGGACACCUUCGUGGACCACCAGGGCUGCCCCUUCCAGCCCUGGGACGGCCUGGACGAGCACUCCCAGGCCCUGUCCGGCCGGCUGCGGGCCAUCCUGCAGAACCAGGGCAACUCCGGCUCCGAGACCCCCGGCACCUCCGAGUCCGCCACCCCCGAGUCCGACAAGAAGUACUCCAUCGGCCUGGCCAUCGGCACCAACUCCGUGGGCUGGGCCGUGAUCACCGACGAGUACAAGGUGCCCUCCAAGAAGUUCAAGGUGCUGGGCAACACCGACCGGCACUCCAUCAAGAAGAACCUGAUCGGCGCCCUGCUGUUCGACUCCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCUGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGUACACCCGGCGGAAGAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCUCCAACGAGAUGGCCAAGGUGGACGACUCCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGUCCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAGGUGGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUGGACUCCACCGACAAGGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCCCUGGCCCACAUGAUCAAGUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCCGACAACUCCGACGUGGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACCUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCUCCGGCGUGGACGCCAAGGCCAUCCUGUCCGCCCGGCUGUCCAAGUCCCGGCGGCUGGAGAACCUGAUCGCCCAGCUGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCUGUUCGGCAACCUGAUCGCCCUGUCCCUGGGCCUGACCCCCAACUUCAAGUCCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAGCUGCAGCUGUCCAAGGACACCUACGACGACGACCUGGACAACCUGCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCCGCCAAGAACCUGUCCGACGCCAUCCUGCUGUCCGACAUCCUGCGGGUGAACACCGAGAUCACCAAGGCCCCCCUGUCCGCCUCCAUGAUCAAGCGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACCCUGCUGAAGGCCCUGGUGCGGCAGCAGCUGCCCGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGUCCAAGAACGGCUACGCCGGCUACAUCGACGGCGGCGCCUCCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUGGAGAAGAUGGACGGCACCGAGGAGCUGCUGGUGAAGCUGAACCGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGCGGACCUUCGACAACGGCUCCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGCGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACCGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUGACCUUCCGGAUCCCCUACUACGUGGGCCCCCUGGCCCGGGGCAACUCCCGGUUCGCCUGGAUGACCCGGAAGUCCGAGGAGACCAUCACCCCCUGGAACUUCGAGGAGGUGGUGGACAAGGGCGCCUCCGCCCAGUCCUUCAUCGAGCGGAUGACCAACUUCGACAAGAACCUGCCCAACGAGAAGGUGCUGCCCAAGCACUCCCUGCUGUACGAGUACUUCACCGUGUACAACGAGCUGACCAAGGUGAAGUACGUGACCGAGGGCAUGCGGAAGCCCGCCUUCCUGUCCGGCGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAGACCAACCGGAAGGUGACCGUGAAGCAGCUGAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACUCCGUGGAGAUCUCCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCUCCCUGGGCACCUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACCCUGACCCUGUUCGAGGACCGGGAGAUGAUCGAGGAGCGGCUGAAGACCUACGCCCACCUGUUCGACGACAAGGUGAUGAAGCAGCUGAAGCGGCGGCGGUACACCGGCUGGGGCCGGCUGUCCCGGAAGCUGAUCAACGGCAUCCGGGACAAGCAGUCCGGCAAGACCAUCCUGGACUUCCUGAAGUCCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACUCCCUGACCUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUGUCCGGCCAGGGCGACUCCCUGCACGAGCACAUCGCCAACCUGGCCGGCUCCCCCGCCAUCAAGAAGGGCAUCCUGCAGACCGUGAAGGUGGUGGACGAGCUGGUGAAGGUGAUGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACUCCCGGGAGCGGAUGAAGCGGAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCUCCCAGAUCCUGAAGGAGCACCCCGUGGAGAACACCCAGCUGCAGAACGAGAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAACGGCCGGGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUGUCCGACUACGACGUGGACCACAUCGUGCCCCAGUCCUUCCUGAAGGACGACUCCAUCGACAACAAGGUGCUGACCCGGUCCGACAAGAACCGGGGCAAGUCCGACAACGUGCCCUCCGAGGAGGUGGUGAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAGCUGAUCACCCAGCGGAAGUUCGACAACCUGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCUGUCCGAGCUGGACAAGGCCGGCUUCAUCAAGCGGCAGCUGGUGGAGACCCGGCAGAUCACCAAGCACGUGGCCCAGAUCCUGGACUCCCGGAUGAACACCAAGUACGACGAGAACGACAAGCUGAUCCGGGAGGUGAAGGUGAUCACCCUGAAGUCCAAGCUGGUGUCCGACUUCCGGAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUGCGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCCGUGGUGGGCACCGCCCUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUGGAGUCCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAGGUGUACGACGUGCGGAAGAUGAUCGCCAAGUCCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACCGCCAAGUACUUCUUCUACUCCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACCGAGAUCACCCUGGCCAACGGCGAGAUCCGGAAGCGGCCCCUGAUCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGAUCGUGUGGGACAAGGGCCGGGACUUCGCCACCGUGCGGAAGGUGCUGUCCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAGAAGACCGAGGUGCAGACCGGCGGCUUCUCCAAGGAGUCCAUCCUGCCCAAGCGGAACUCCGACAAGCUGAUCGCCCGGAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGCGGCUUCGACUCCCCCACCGUGGCCUACUCCGUGCUGGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGCAAGUCCAAGAAGCUGAAGUCCGUGAAGGAGCUGCUGGGCAUCACCAUCAUGGAGCGGUCCUCCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAGGCCAAGGGCUACAAGGAGGUGAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUGCCCAAGUACUCCCUGUUCGAGCUGGAGAACGGCCGGAAGCGGAUGCUGGCCUCCGCCGGCGAGCUGCAGAAGGGCAACGAGCUGGCCCUGCCCUCCAAGUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCUCCCACUACGAGAAGCUGAAGGGCUCCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAGCACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCUCCGAGUUCUCCAAGCGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAACCUGGACAAGGUGCUGUCCGCCUACAACAAGCACCGGGACAAGCCCAUCCGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACCCUGACCAACCUGGGCGCCCCCGCCGCCUUCAAGUACUUCGACACCACCAUCGACCGGAAGCGGUACACCUCCACCAAGGAGGUGCUGGACGCCACCCUGAUCCACCAGUCCAUCACCGGCCUGUACGAGACCCGGAUCGACCUGUCCCAGCUGGGCGGCGACGGCGGCGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGUGA
306 Sp. BC22n鹼基編輯器之開放閱讀框 ATGgaggccTcccccgccTccggcccccggcaccTgaTggacccccacaTcTTcaccTccAACTTCAACAACggcATCggccggCACAAGaccTACCTGTGCTACgaggTggagcggCTGGACAACggcaccTccgTgAAGATGGACCAGCACcggggcTTCCTGCACAACCAGgccAAGAACCTGCTGTGCggcTTCTACggccggCACgccgagCTGcggTTCCTGGACCTGgTgcccTccCTGCAGCTGGACcccgccCAGATCTACcgggTgaccTGGTTCATCTccTGGTcccccTGCTTCTccTGGggcTGCgccggcgaggTgcgggccTTCCTGCAGgagAACaccCACgTgcggCTGcggATCTTCgccgcccggATCTACGACTACGACcccCTGTACAAGgaggccCTGCAGATGCTGcggGACgccggcgccCAGgTgTccATCATGaccTACGACgagTTCAAGCACTGCTGGGACaccTTCgTgGACCACCAGggcTGCcccTTCCAGcccTGGGACggcCTGGACgagCACTccCAGgccCTGTccggccggCTGcgggccATCCTGCAGAACCAGggcAACTccggcTccgagacccccggcaccTccgagTccgccacccccgagTccgacaagaagTacTccaTcggccTggCcaTcggcaccaacTccgTgggcTgggccgTgaTcaccgacgagTacaaggTgcccTccaagaagTTcaaggTgcTgggcaacaccgaccggcacTccaTcaagaagaaccTgaTcggcgcccTgcTgTTcgacTccggcgagaccgccgaggccacccggcTgaagcggaccgcccggcggcggTacacccggcggaagaaccggaTcTgcTaccTgcaggagaTcTTcTccaacgagaTggccaaggTggacgacTccTTcTTccaccggcTggaggagTccTTccTggTggaggaggacaagaagcacgagcggcaccccaTcTTcggcaacaTcgTggacgaggTggccTaccacgagaagTaccccaccaTcTaccaccTgcggaagaagcTggTggacTccaccgacaaggccgaccTgcggcTgaTcTaccTggcccTggcccacaTgaTcaagTTccggggccacTTccTgaTcgagggcgaccTgaaccccgacaacTccgacgTggacaagcTgTTcaTccagcTggTgcagaccTacaaccagcTgTTcgaggagaaccccaTcaacgccTccggcgTggacgccaaggccaTccTgTccgcccggcTgTccaagTcccggcggcTggagaaccTgaTcgcccagcTgcccggcgagaagaagaacggccTgTTcggcaaccTgaTcgcccTgTcccTgggccTgacccccaacTTcaagTccaacTTcgaccTggccgaggacgccaagcTgcagcTgTccaaggacaccTacgacgacgaccTggacaaccTgcTggcccagaTcggcgaccagTacgccgaccTgTTccTggccgccaagaaccTgTccgacgccaTccTgcTgTccgacaTccTgcgggTgaacaccgagaTcaccaaggccccccTgTccgccTccaTgaTcaagcggTacgacgagcaccaccaggaccTgacccTgcTgaaggcccTggTgcggcagcagcTgcccgagaagTacaaggagaTcTTcTTcgaccagTccaagaacggcTacgccggcTacaTcgacggcggcgccTcccaggaggagTTcTacaagTTcaTcaagcccaTccTggagaagaTggacggcaccgaggagcTgcTggTgaagcTgaaccgggaggaccTgcTgcggaagcagcggaccTTcgacaacggcTccaTcccccaccagaTccaccTgggcgagcTgcacgccaTccTgcggcggcaggaggacTTcTaccccTTccTgaaggacaaccgggagaagaTcgagaagaTccTgaccTTccggaTccccTacTacgTgggcccccTggcccggggcaacTcccggTTcgccTggaTgacccggaagTccgaggagaccaTcacccccTggaacTTcgaggaggTggTggacaagggcgccTccgcccagTccTTcaTcgagcggaTgaccaacTTcgacaagaaccTgcccaacgagaaggTgcTgcccaagcacTcccTgcTgTacgagTacTTcaccgTgTacaacgagcTgaccaaggTgaagTacgTgaccgagggcaTgcggaagcccgccTTccTgTccggcgagcagaagaaggccaTcgTggaccTgcTgTTcaagaccaaccggaaggTgaccgTgaagcagcTgaaggaggacTacTTcaagaagaTcgagTgcTTcgacTccgTggagaTcTccggcgTggaggaccggTTcaacgccTcccTgggcaccTaccacgaccTgcTgaagaTcaTcaaggacaaggacTTccTggacaacgaggagaacgaggacaTccTggaggacaTcgTgcTgacccTgacccTgTTcgaggaccgggagaTgaTcgaggagcggcTgaagaccTacgcccaccTgTTcgacgacaaggTgaTgaagcagcTgaagcggcggcggTacaccggcTggggccggcTgTcccggaagcTgaTcaacggcaTccgggacaagcagTccggcaagaccaTccTggacTTccTgaagTccgacggcTTcgccaaccggaacTTcaTgcagcTgaTccacgacgacTcccTgaccTTcaaggaggacaTccagaaggcccaggTgTccggccagggcgacTcccTgcacgagcacaTcgccaaccTggccggcTcccccgccaTcaagaagggcaTccTgcagaccgTgaaggTggTggacgagcTggTgaaggTgaTgggccggcacaagcccgagaacaTcgTgaTcgagaTggcccgggagaaccagaccacccagaagggccagaagaacTcccgggagcggaTgaagcggaTcgaggagggcaTcaaggagcTgggcTcccagaTccTgaaggagcaccccgTggagaacacccagcTgcagaacgagaagcTgTaccTgTacTaccTgcagaacggccgggacaTgTacgTggaccaggagcTggacaTcaaccggcTgTccgacTacgacgTggaccacaTcgTgccccagTccTTccTgaaggacgacTccaTcgacaacaaggTgcTgacccggTccgacaagaaccggggcaagTccgacaacgTgcccTccgaggaggTggTgaagaagaTgaagaacTacTggcggcagcTgcTgaacgccaagcTgaTcacccagcggaagTTcgacaaccTgaccaaggccgagcggggcggccTgTccgagcTggacaaggccggcTTcaTcaagcggcagcTggTggagacccggcagaTcaccaagcacgTggcccagaTccTggacTcccggaTgaacaccaagTacgacgagaacgacaagcTgaTccgggaggTgaaggTgaTcacccTgaagTccaagcTggTgTccgacTTccggaaggacTTccagTTcTacaaggTgcgggagaTcaacaacTaccaccacgcccacgacgccTaccTgaacgccgTggTgggcaccgcccTgaTcaagaagTaccccaagcTggagTccgagTTcgTgTacggcgacTacaaggTgTacgacgTgcggaagaTgaTcgccaagTccgagcaggagaTcggcaaggccaccgccaagTacTTcTTcTacTccaacaTcaTgaacTTcTTcaagaccgagaTcacccTggccaacggcgagaTccggaagcggccccTgaTcgagaccaacggcgagaccggcgagaTcgTgTgggacaagggccgggacTTcgccaccgTgcggaaggTgcTgTccaTgccccaggTgaacaTcgTgaagaagaccgaggTgcagaccggcggcTTcTccaaggagTccaTccTgcccaagcggaacTccgacaagcTgaTcgcccggaagaaggacTgggaccccaagaagTacggcggcTTcgacTcccccaccgTggccTacTccgTgcTggTggTggccaaggTggagaagggcaagTccaagaagcTgaagTccgTgaaggagcTgcTgggcaTcaccaTcaTggagcggTccTccTTcgagaagaaccccaTcgacTTccTggaggccaagggcTacaaggaggTgaagaaggaccTgaTcaTcaagcTgcccaagTacTcccTgTTcgagcTggagaacggccggaagcggaTgcTggccTccgccggcgagcTgcagaagggcaacgagcTggcccTgcccTccaagTacgTgaacTTccTgTaccTggccTcccacTacgagaagcTgaagggcTcccccgaggacaacgagcagaagcagcTgTTcgTggagcagcacaagcacTaccTggacgagaTcaTcgagcagaTcTccgagTTcTccaagcgggTgaTccTggccgacgccaaccTggacaaggTgcTgTccgccTacaacaagcaccgggacaagcccaTccgggagcaggccgagaacaTcaTccaccTgTTcacccTgaccaaccTgggcgcccccgccgccTTcaagTacTTcgacaccaccaTcgaccggaagcggTacaccTccaccaaggaggTgcTggacgccacccTgaTccaccagTccaTcaccggccTgTacgagacccggaTcgaccTgTcccagcTgggcggcgacggcggcggcTcccccaagaagaagcggaaggTgTgA
307 Sp. Cas9之開放閱讀框 aTggacaagaagTacTccaTcggccTggacaTcggcaccaacTccgTgggcTgggccgTgaTcaccgacgagTacaaggTgcccTccaagaagTTcaaggTgcTgggcaacaccgaccggcacTccaTcaagaagaaccTgaTcggcgcccTgcTgTTcgacTccggcgagaccgccgaggccacccggcTgaagcggaccgcccggcggcggTacacccggcggaagaaccggaTcTgcTaccTgcaggagaTcTTcTccaacgagaTggccaaggTggacgacTccTTcTTccaccggcTggaggagTccTTccTggTggaggaggacaagaagcacgagcggcaccccaTcTTcggcaacaTcgTggacgaggTggccTaccacgagaagTaccccaccaTcTaccaccTgcggaagaagcTggTggacTccaccgacaaggccgaccTgcggcTgaTcTaccTggcccTggcccacaTgaTcaagTTccggggccacTTccTgaTcgagggcgaccTgaaccccgacaacTccgacgTggacaagcTgTTcaTccagcTggTgcagaccTacaaccagcTgTTcgaggagaaccccaTcaacgccTccggcgTggacgccaaggccaTccTgTccgcccggcTgTccaagTcccggcggcTggagaaccTgaTcgcccagcTgcccggcgagaagaagaacggccTgTTcggcaaccTgaTcgcccTgTcccTgggccTgacccccaacTTcaagTccaacTTcgaccTggccgaggacgccaagcTgcagcTgTccaaggacaccTacgacgacgaccTggacaaccTgcTggcccagaTcggcgaccagTacgccgaccTgTTccTggccgccaagaaccTgTccgacgccaTccTgcTgTccgacaTccTgcgggTgaacaccgagaTcaccaaggccccccTgTccgccTccaTgaTcaagcggTacgacgagcaccaccaggaccTgacccTgcTgaaggcccTggTgcggcagcagcTgcccgagaagTacaaggagaTcTTcTTcgaccagTccaagaacggcTacgccggcTacaTcgacggcggcgccTcccaggaggagTTcTacaagTTcaTcaagcccaTccTggagaagaTggacggcaccgaggagcTgcTggTgaagcTgaaccgggaggaccTgcTgcggaagcagcggaccTTcgacaacggcTccaTcccccaccagaTccaccTgggcgagcTgcacgccaTccTgcggcggcaggaggacTTcTaccccTTccTgaaggacaaccgggagaagaTcgagaagaTccTgaccTTccggaTccccTacTacgTgggcccccTggcccggggcaacTcccggTTcgccTggaTgacccggaagTccgaggagaccaTcacccccTggaacTTcgaggaggTggTggacaagggcgccTccgcccagTccTTcaTcgagcggaTgaccaacTTcgacaagaaccTgcccaacgagaaggTgcTgcccaagcacTcccTgcTgTacgagTacTTcaccgTgTacaacgagcTgaccaaggTgaagTacgTgaccgagggcaTgcggaagcccgccTTccTgTccggcgagcagaagaaggccaTcgTggaccTgcTgTTcaagaccaaccggaaggTgaccgTgaagcagcTgaaggaggacTacTTcaagaagaTcgagTgcTTcgacTccgTggagaTcTccggcgTggaggaccggTTcaacgccTcccTgggcaccTaccacgaccTgcTgaagaTcaTcaaggacaaggacTTccTggacaacgaggagaacgaggacaTccTggaggacaTcgTgcTgacccTgacccTgTTcgaggaccgggagaTgaTcgaggagcggcTgaagaccTacgcccaccTgTTcgacgacaaggTgaTgaagcagcTgaagcggcggcggTacaccggcTggggccggcTgTcccggaagcTgaTcaacggcaTccgggacaagcagTccggcaagaccaTccTggacTTccTgaagTccgacggcTTcgccaaccggaacTTcaTgcagcTgaTccacgacgacTcccTgaccTTcaaggaggacaTccagaaggcccaggTgTccggccagggcgacTcccTgcacgagcacaTcgccaaccTggccggcTcccccgccaTcaagaagggcaTccTgcagaccgTgaaggTggTggacgagcTggTgaaggTgaTgggccggcacaagcccgagaacaTcgTgaTcgagaTggcccgggagaaccagaccacccagaagggccagaagaacTcccgggagcggaTgaagcggaTcgaggagggcaTcaaggagcTgggcTcccagaTccTgaaggagcaccccgTggagaacacccagcTgcagaacgagaagcTgTaccTgTacTaccTgcagaacggccgggacaTgTacgTggaccaggagcTggacaTcaaccggcTgTccgacTacgacgTggaccacaTcgTgccccagTccTTccTgaaggacgacTccaTcgacaacaaggTgcTgacccggTccgacaagaaccggggcaagTccgacaacgTgcccTccgaggaggTggTgaagaagaTgaagaacTacTggcggcagcTgcTgaacgccaagcTgaTcacccagcggaagTTcgacaaccTgaccaaggccgagcggggcggccTgTccgagcTggacaaggccggcTTcaTcaagcggcagcTggTggagacccggcagaTcaccaagcacgTggcccagaTccTggacTcccggaTgaacaccaagTacgacgagaacgacaagcTgaTccgggaggTgaaggTgaTcacccTgaagTccaagcTggTgTccgacTTccggaaggacTTccagTTcTacaaggTgcgggagaTcaacaacTaccaccacgcccacgacgccTaccTgaacgccgTggTgggcaccgcccTgaTcaagaagTaccccaagcTggagTccgagTTcgTgTacggcgacTacaaggTgTacgacgTgcggaagaTgaTcgccaagTccgagcaggagaTcggcaaggccaccgccaagTacTTcTTcTacTccaacaTcaTgaacTTcTTcaagaccgagaTcacccTggccaacggcgagaTccggaagcggccccTgaTcgagaccaacggcgagaccggcgagaTcgTgTgggacaagggccgggacTTcgccaccgTgcggaaggTgcTgTccaTgccccaggTgaacaTcgTgaagaagaccgaggTgcagaccggcggcTTcTccaaggagTccaTccTgcccaagcggaacTccgacaagcTgaTcgcccggaagaaggacTgggaccccaagaagTacggcggcTTcgacTcccccaccgTggccTacTccgTgcTggTggTggccaaggTggagaagggcaagTccaagaagcTgaagTccgTgaaggagcTgcTgggcaTcaccaTcaTggagcggTccTccTTcgagaagaaccccaTcgacTTccTggaggccaagggcTacaaggaggTgaagaaggaccTgaTcaTcaagcTgcccaagTacTcccTgTTcgagcTggagaacggccggaagcggaTgcTggccTccgccggcgagcTgcagaagggcaacgagcTggcccTgcccTccaagTacgTgaacTTccTgTaccTggccTcccacTacgagaagcTgaagggcTcccccgaggacaacgagcagaagcagcTgTTcgTggagcagcacaagcacTaccTggacgagaTcaTcgagcagaTcTccgagTTcTccaagcgggTgaTccTggccgacgccaaccTggacaaggTgcTgTccgccTacaacaagcaccgggacaagcccaTccgggagcaggccgagaacaTcaTccaccTgTTcacccTgaccaaccTgggcgcccccgccgccTTcaagTacTTcgacaccaccaTcgaccggaagcggTacaccTccaccaaggaggTgcTggacgccacccTgaTccaccagTccaTcaccggccTgTacgagacccggaTcgaccTgTcccagcTgggcggcgacggcggcggcTcccccaagaagaagcggaaggTgTga
308 Nme2 BC22n鹼基編輯器之開放閱讀框 AUGGACGGCUCCGGCGGCGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGGAGGACAAGCGGCCCGCCGCCACCAAGAAGGCCGGCCAGGCCAAGAAGAAGAAGGGCGGCUCCGGCGGCGGCGAGGCCUCCCCCGCCUCCGGCCCCCGGCACCUGAUGGACCCCCACAUCUUCACCUCCAACUUCAACAACGGCAUCGGCCGGCACAAGACCUACCUGUGCUACGAGGUGGAGCGGCUGGACAACGGCACCUCCGUGAAGAUGGACCAGCACCGGGGCUUCCUGCACAACCAGGCCAAGAACCUGCUGUGCGGCUUCUACGGCCGGCACGCCGAGCUGCGGUUCCUGGACCUGGUGCCCUCCCUGCAGCUGGACCCCGCCCAGAUCUACCGGGUGACCUGGUUCAUCUCCUGGUCCCCCUGCUUCUCCUGGGGCUGCGCCGGCGAGGUGCGGGCCUUCCUGCAGGAGAACACCCACGUGCGGCUGCGGAUCUUCGCCGCCCGGAUCUACGACUACGACCCCCUGUACAAGGAGGCCCUGCAGAUGCUGCGGGACGCCGGCGCCCAGGUGUCCAUCAUGACCUACGACGAGUUCAAGCACUGCUGGGACACCUUCGUGGACCACCAGGGCUGCCCCUUCCAGCCCUGGGACGGCCUGGACGAGCACUCCCAGGCCCUGUCCGGCCGGCUGCGGGCCAUCCUGCAGAACCAGGGCAACUCCGGCUCCGAGACCCCCGGCACCUCCGAGUCCGCCACCCCCGAGUCCGCAGCGUUCAAACCAAAUcccaucaacuacauccugggccuggccaucggcaucgccuccgugggcugggccaugguggagaucgacgaggaggagaaccccauccggcugaucgaccugggcgugcggguguucgagcgggccgaggugcccaagaccggcgacucccuggccauggcccggcggcuggcccgguccgugcggcggcugacccggcggcgggcccaccggcugcugcgggcccggcggcugcugaagcgggagggcgugcugcaggccgccgacuucgacgagaacggccugaucaagucccugcccaacacccccuggcagcugcgggccgccgcccuggaccggaagcugaccccccuggagugguccgccgugcugcugcaccugaucaagcaccggggcuaccugucccagcggaagaacgagggcgagaccgccgacaaggagcugggcgcccugcugaagggcguggccaacaacgcccacgcccugcagaccggcgacuuccggacccccgccgagcuggcccugaacaaguucgagaaggaguccggccacauccggaaccagcggggcgacuacucccacaccuucucccggaaggaccugcaggccgagcugauccugcuguucgagaagcagaaggaguucggcaacccccacguguccggcggccugaaggagggcaucgagacccugcugaugacccagcggcccgcccuguccggcgacgccgugcagaagaugcugggccacugcaccuucgagcccgccgagcccaaggccgccaagaacaccuacaccgccgagcgguucaucuggcugaccaagcugaacaaccugcggauccuggagcagggcuccgagcggccccugaccgacaccgagcgggccacccugauggacgagcccuaccggaaguccaagcugaccuacgcccaggcccggaagcugcugggccuggaggacaccgccuucuucaagggccugcgguacggcaaggacaacgccgaggccuccacccugauggagaugaaggccuaccacgccaucucccgggcccuggagaaggagggccugaaggacaagaaguccccccugaaccuguccuccgagcugcaggacgagaucggcaccgccuucucccuguucaagaccgacgaggacaucaccggccggcugaaggaccgggugcagcccgagauccuggaggcccugcugaagcacaucuccuucgacaaguucgugcagaucucccugaaggcccugcggcggaucgugccccugauggagcagggcaagcgguacgacgaggccugcgccgagaucuacggcgaccacuacggcaagaagaacaccgaggagaagaucuaccugccccccauccccgccgacgagauccggaaccccguggugcugcgggcccugucccaggcccggaaggugaucaacggcguggugcggcgguacggcucccccgcccggauccacaucgagaccgcccgggaggugggcaaguccuucaaggaccggaaggagaucgagaagcggcaggaggagaaccggaaggaccgggagaaggccgccgccaaguuccgggaguacuuccccaacuucgugggcgagcccaaguccaaggacauccugaagcugcggcuguacgagcagcagcacggcaagugccuguacuccggcaaggagaucaaccuggugcggcugaacgagaagggcuacguggagaucgaccacgcccugcccuucucccggaccugggacgacuccuucaacaacaaggugcuggugcugggcuccgagaaccagaacaagggcaaccagacccccuacgaguacuucaacggcaaggacaacucccgggaguggcaggaguucaaggcccggguggagaccucccgguucccccgguccaagaagcagcggauccugcugcagaaguucgacgaggacggcuucaaggagugcaaccugaacgacacccgguacgugaaccgcuuccugugccaguucguggccgaccacauccugcugaccggcaagggcaagcggcggguguucgccuccaacggccagaucaccaaccugcugcggggcuucuggggccugcggaaggugcgggccgagaacgaccggcaccacgcccuggacgccguggugguggccugcuccaccguggccaugcagcagaagaucacccgguucgugcgguacaaggagaugaacgccuucgacggcaagaccaucgacaaggagaccggcaaggugcugcaccagaagacccacuucccccagcccugggaguucuucgcccaggaggugaugauccggguguucggcaagcccgacggcaagcccgaguucgaggaggccgacacccccgagaagcugcggacccugcuggccgagaagcuguccucccggcccgaggccgugcacgaguacgugaccccccuguucgugucccgggcccccaaccggaagauguccggcgcccacaaggacacccugcgguccgccaagcgguucgugaagcacaacgagaagaucuccgugaagcggguguggcugaccgagaucaagcuggccgaccuggagaacauggugaacuacaagaacggccgggagaucgagcuguacgaggcccugaaggcccggcuggaggccuacggcggcaacgccaagcaggccuucgaccccaaggacaaccccuucuacaagaagggcggccagcuggugaaggccgugcggguggagaagacccaggaguccggcgugcugcugaacaagaagaacgccuacaccaucgccgacaacggcgacauggugcggguggacguguucugcaagguggacaagaagggcaagaaccaguacuucaucgugcccaucuacgccuggcagguggccgagaacauccugcccgacaucgacugcaagggcuaccggaucgacgacuccuacaccuucugcuucucccugcacaaguacgaccugaucgccuuccagaaggacgagaaguccaagguggaguucgccuacuacaucaacugcgacuccuccaacggccgguucuaccuggccuggcacgacaagggcuccaaggagcagcaguuccggaucuccacccagaaccuggugcugauccagaaguaccaggugaacgagcugggcaaggagauccggcccugccggcugaagaagcggccccccgugcgguag
309 尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)之開放閱讀框 AUGACCAACCUGUCCGACAUCAUCGAGAAGGAGACCGGCAAGCAGCUGGUGAUCCAGGAGUCCAUCCUGAUGCUGCCCGAGGAGGUGGAGGAGGUGAUCGGCAACAAGCCCGAGUCCGACAUCCUGGUGCACACCGCCUACGACGAGUCCACCGACGAGAACGUGAUGCUGCUGACCUCCGACGCCCCCGAGUACAAGCCCUGGGCCCUGGUGAUCCAGGACUCCAACGGCGAGAACAAGAUCAAGAUGCUGUCCGGCGGCUCCAAGCGGACCGCCGACGGCUCCGAGUUCGAGUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGGAGUGAUAG
310 編碼Nme2鹼基編輯器之開放閱讀框 AUGGACGGCUCCGGCGGCGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGGAGGACAAGCGGCCCGCCGCCACCAAGAAGGCCGGCCAGGCCAAGAAGAAGAAGGGCGGCUCCGGCGGCGGCGAGGCCUCCCCCGCCUCCGGCCCCCGGCACCUGAUGGACCCCCACAUCUUCACCUCCAACUUCAACAACGGCAUCGGCCGGCACAAGACCUACCUGUGCUACGAGGUGGAGCGGCUGGACAACGGCACCUCCGUGAAGAUGGACCAGCACCGGGGCUUCCUGCACAACCAGGCCAAGAACCUGCUGUGCGGCUUCUACGGCCGGCACGCCGAGCUGCGGUUCCUGGACCUGGUGCCCUCCCUGCAGCUGGACCCCGCCCAGAUCUACCGGGUGACCUGGUUCAUCUCCUGGUCCCCCUGCUUCUCCUGGGGCUGCGCCGGCGAGGUGCGGGCCUUCCUGCAGGAGAACACCCACGUGCGGCUGCGGAUCUUCGCCGCCCGGAUCUACGACUACGACCCCCUGUACAAGGAGGCCCUGCAGAUGCUGCGGGACGCCGGCGCCCAGGUGUCCAUCAUGACCUACGACGAGUUCAAGCACUGCUGGGACACCUUCGUGGACCACCAGGGCUGCCCCUUCCAGCCCUGGGACGGCCUGGACGAGCACUCCCAGGCCCUGUCCGGCCGGCUGCGGGCCAUCCUGCAGAACCAGGGCAACggcaccaaggacuccaccaaggacauccccgagacccccuccaaggacGCAGCGUUCAAACCAAAUcccaucaacuacauccugggccuggccaucggcaucgccuccgugggcugggccaugguggagaucgacgaggaggagaaccccauccggcugaucgaccugggcgugcggguguucgagcgggccgaggugcccaagaccggcgacucccuggccauggcccggcggcuggcccgguccgugcggcggcugacccggcggcgggcccaccggcugcugcgggcccggcggcugcugaagcgggagggcgugcugcaggccgccgacuucgacgagaacggccugaucaagucccugcccaacacccccuggcagcugcgggccgccgcccuggaccggaagcugaccccccuggagugguccgccgugcugcugcaccugaucaagcaccggggcuaccugucccagcggaagaacgagggcgagaccgccgacaaggagcugggcgcccugcugaagggcguggccaacaacgcccacgcccugcagaccggcgacuuccggacccccgccgagcuggcccugaacaaguucgagaaggaguccggccacauccggaaccagcggggcgacuacucccacaccuucucccggaaggaccugcaggccgagcugauccugcuguucgagaagcagaaggaguucggcaacccccacguguccggcggccugaaggagggcaucgagacccugcugaugacccagcggcccgcccuguccggcgacgccgugcagaagaugcugggccacugcaccuucgagcccgccgagcccaaggccgccaagaacaccuacaccgccgagcgguucaucuggcugaccaagcugaacaaccugcggauccuggagcagggcuccgagcggccccugaccgacaccgagcgggccacccugauggacgagcccuaccggaaguccaagcugaccuacgcccaggcccggaagcugcugggccuggaggacaccgccuucuucaagggccugcgguacggcaaggacaacgccgaggccuccacccugauggagaugaaggccuaccacgccaucucccgggcccuggagaaggagggccugaaggacaagaaguccccccugaaccuguccuccgagcugcaggacgagaucggcaccgccuucucccuguucaagaccgacgaggacaucaccggccggcugaaggaccgggugcagcccgagauccuggaggcccugcugaagcacaucuccuucgacaaguucgugcagaucucccugaaggcccugcggcggaucgugccccugauggagcagggcaagcgguacgacgaggccugcgccgagaucuacggcgaccacuacggcaagaagaacaccgaggagaagaucuaccugccccccauccccgccgacgagauccggaaccccguggugcugcgggcccugucccaggcccggaaggugaucaacggcguggugcggcgguacggcucccccgcccggauccacaucgagaccgcccgggaggugggcaaguccuucaaggaccggaaggagaucgagaagcggcaggaggagaaccggaaggaccgggagaaggccgccgccaaguuccgggaguacuuccccaacuucgugggcgagcccaaguccaaggacauccugaagcugcggcuguacgagcagcagcacggcaagugccuguacuccggcaaggagaucaaccuggugcggcugaacgagaagggcuacguggagaucgaccacgcccugcccuucucccggaccugggacgacuccuucaacaacaaggugcuggugcugggcuccgagaaccagaacaagggcaaccagacccccuacgaguacuucaacggcaaggacaacucccgggaguggcaggaguucaaggcccggguggagaccucccgguucccccgguccaagaagcagcggauccugcugcagaaguucgacgaggacggcuucaaggagugcaaccugaacgacacccgguacgugaaccgcuuccugugccaguucguggccgaccacauccugcugaccggcaagggcaagcggcggguguucgccuccaacggccagaucaccaaccugcugcggggcuucuggggccugcggaaggugcgggccgagaacgaccggcaccacgcccuggacgccguggugguggccugcuccaccguggccaugcagcagaagaucacccgguucgugcgguacaaggagaugaacgccuucgacggcaagaccaucgacaaggagaccggcaaggugcugcaccagaagacccacuucccccagcccugggaguucuucgcccaggaggugaugauccggguguucggcaagcccgacggcaagcccgaguucgaggaggccgacacccccgagaagcugcggacccugcuggccgagaagcuguccucccggcccgaggccgugcacgaguacgugaccccccuguucgugucccgggcccccaaccggaagauguccggcgcccacaaggacacccugcgguccgccaagcgguucgugaagcacaacgagaagaucuccgugaagcggguguggcugaccgagaucaagcuggccgaccuggagaacauggugaacuacaagaacggccgggagaucgagcuguacgaggcccugaaggcccggcuggaggccuacggcggcaacgccaagcaggccuucgaccccaaggacaaccccuucuacaagaagggcggccagcuggugaaggccgugcggguggagaagacccaggaguccggcgugcugcugaacaagaagaacgccuacaccaucgccgacaacggcgacauggugcggguggacguguucugcaagguggacaagaagggcaagaaccaguacuucaucgugcccaucuacgccuggcagguggccgagaacauccugcccgacaucgacugcaagggcuaccggaucgacgacuccuacaccuucugcuucucccugcacaaguacgaccugaucgccuuccagaaggacgagaaguccaagguggaguucgccuacuacaucaacugcgacuccuccaacggccgguucuaccuggccuggcacgacaagggcuccaaggagcagcaguuccggaucuccacccagaaccuggugcugauccagaaguaccaggugaacgagcugggcaaggagauccggcccugccggcugaagaagcggccccccgugcgguag
311 Nme2鹼基編輯器之胺基酸序列 MDGSGGGSPKKKRKVEDKRPAATKKAGQAKKKKGGSGGGEASPASGPRHLMDPHIFTSNFNNGIGRHKTYLCYEVERLDNGTSVKMDQHRGFLHNQAKNLLCGFYGRHAELRFLDLVPSLQLDPAQIYRVTWFISWSPCFSWGCAGEVRAFLQENTHVRLRIFAARIYDYDPLYKEALQMLRDAGAQVSIMTYDEFKHCWDTFVDHQGCPFQPWDGLDEHSQALSGRLRAILQNQGNGTKDSTKDIPETPSKDAAFKPNPINYILGLAIGIASVGWAMVEIDEEENPIRLIDLGVRVFERAEVPKTGDSLAMARRLARSVRRLTRRRAHRLLRARRLLKREGVLQAADFDENGLIKSLPNTPWQLRAAALDRKLTPLEWSAVLLHLIKHRGYLSQRKNEGETADKELGALLKGVANNAHALQTGDFRTPAELALNKFEKESGHIRNQRGDYSHTFSRKDLQAELILLFEKQKEFGNPHVSGGLKEGIETLLMTQRPALSGDAVQKMLGHCTFEPAEPKAAKNTYTAERFIWLTKLNNLRILEQGSERPLTDTERATLMDEPYRKSKLTYAQARKLLGLEDTAFFKGLRYGKDNAEASTLMEMKAYHAISRALEKEGLKDKKSPLNLSSELQDEIGTAFSLFKTDEDITGRLKDRVQPEILEALLKHISFDKFVQISLKALRRIVPLMEQGKRYDEACAEIYGDHYGKKNTEEKIYLPPIPADEIRNPVVLRALSQARKVINGVVRRYGSPARIHIETAREVGKSFKDRKEIEKRQEENRKDREKAAAKFREYFPNFVGEPKSKDILKLRLYEQQHGKCLYSGKEINLVRLNEKGYVEIDHALPFSRTWDDSFNNKVLVLGSENQNKGNQTPYEYFNGKDNSREWQEFKARVETSRFPRSKKQRILLQKFDEDGFKECNLNDTRYVNRFLCQFVADHILLTGKGKRRVFASNGQITNLLRGFWGLRKVRAENDRHHALDAVVVACSTVAMQQKITRFVRYKEMNAFDGKTIDKETGKVLHQKTHFPQPWEFFAQEVMIRVFGKPDGKPEFEEADTPEKLRTLLAEKLSSRPEAVHEYVTPLFVSRAPNRKMSGAHKDTLRSAKRFVKHNEKISVKRVWLTEIKLADLENMVNYKNGREIELYEALKARLEAYGGNAKQAFDPKDNPFYKKGGQLVKAVRVEKTQESGVLLNKKNAYTIADNGDMVRVDVFCKVDKKGKNQYFIVPIYAWQVAENILPDIDCKGYRIDDSYTFCFSLHKYDLIAFQKDEKSKVEFAYYINCDSSNGRFYLAWHDKGSKEQQFRISTQNLVLIQKYQVNELGKEIRPCRLKKRPPVR*
312 例示性經修飾之Nme向導sgRNA mN*mN*mN*mNmNNNmNmNNmNNmNNNNNmNNNNmNNNmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAUAAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU
313 例示性經修飾之Nme向導sgRNA mN*mN*mN*mNmNNNmNmNNmNNmNNNNNmNNNNmNNNmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAU*AAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGmCmUmCmUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU
314 例示性經修飾之Nme向導sgRNA mN*mN*mN*mNmNNNmNmNNmNNmNNNNNmNNNNmNNNmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAUAAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGmCmUmCmUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU
表 19. 例示性 SpyCas9 sgRNA 保守部分 (SEQ ID NO: 226)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
G U U U U A G A G C U A G A A A U A G C A A G U U A A A A U
LS1-LS6 B1-B2 US1-US12 B2-B6 LS7-LS12
31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60
A A G G C U A G U C C G U U A U C A A C U U G A A A A A G U
Nexus H1-1至H1-12
61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76
G G C A C C G A G U C G G U G C
N H2-1至H2-15
表 20. 例示性 NmeCas9 sgRNA 保守部分 (SEQ ID NO: 400 ( 「例示性 NmeCas9 sgRNA-1 」 )
1-24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48
NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN G U U G U A G C U C C C U U U C U C A U U U C G
   下莖    上莖
向導區 重複序列 / 抗重複序列區
49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77
G A A A C G A A A U G A G A A C C G U U G C U A C A A U A
環 上莖    下莖   
重複序列 / 抗重複序列區   
78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108
A G G C C G U C U G A A A A G A U G U G C C G C A A C G C U C
莖 環 莖(96：未配對)    下莖 凸起
髮夾 1    髮夾 2
109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134
U G C C C C U U A A A G C U U C U G C U U U A A G G
上莖 環 上莖
髮夾 2
135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145
G G C A U C G U U U A
上莖 凸起 下莖   
髮夾2 尾
表 21. 其他例示性 Nme 向導 RNA
向導ID 靶標 向導序列 例示性向導RNA全序列 例示性向導RNA經修飾序列 基因體坐標(hg38)
G013006 TRAC CUCUCAGCUGGUACACGGCA (SEQ ID NO: 315) CUCUCAGCUGGUACACGGCAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 316) mC*mU*mC*UCAGCUGGUACACGGCAGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU (SEQ ID NO: 317) chr14:22547524-22547544
G013675 CIITA CCCCCGGACGGUUCAAGCAA (SEQ ID NO: 318) CCCCCGGACGGUUCAAGCAAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 319) mC*mC*mC*CCGGACGGUUCAAGCAAGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU (SEQ ID NO: 320) chr16:10906853-10906873
G014832 TRBC1 GGCUCUCGGAGAAUGACGAG (SEQ ID NO: 321) GGCUCUCGGAGAAUGACGAGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 322) mG*mG*mC*UCUCGGAGAAUGACGAGGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU (SEQ ID NO: 323) chr7:142791996-142792016
G016239 TRBC1 GGCCUCGGCGCUGACGAUCU (SEQ ID NO: 324) GGCCUCGGCGCUGACGAUCUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 325) mG*mG*mC*CUCGGCGCUGACGAUCUGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU (SEQ ID NO: 326) chr7:142792047-142792067
G018995 HLA-A ACAGCGACGCCGCGAGCCAG (SEQ ID NO: 327) ACAGCGACGCCGCGAGCCAGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 328) mA*mC*mA*GCGACGCCGCGAGCCAGGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU (SEQ ID NO: 329) chr6:29942864-29942884
G021469 TRAC AUAUCCAGAACCCUGACCCUGCCG (SEQ ID NO: 330) AUAUCCAGAACCCUGACCCUGCCGGUUGUAGCUCCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU (SEQ ID NO: 331) mA*mU*mA*mUmCCAmGmAAmCCmCUGACmCCUGmCCGmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAU*AAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 332) chr14:22547505-22547529
G023520 TRAC UUCAAAACCUGUCAGUGAUU (SEQ ID NO: 333) UUCAAAACCUGUCAGUGAUUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCACGAAAGGGCACCGAGUCGGUGCU (SEQ ID NO: 334) mU*mU*mC*AAAACCUGUCAGUGAUUGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCACGAAAGGGCACCGAGUCGGmUmGmC*mU (SEQ ID NO: 335) chr14:22550571-22550591
G023521 CIITA CGCCCAGGUCCUCACGUCUG (SEQ ID NO: 336) CGCCCAGGUCCUCACGUCUGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCACGAAAGGGCACCGAGUCGGUGCU (SEQ ID NO: 337) mC*mG*mC*CCAGGUCCUCACGUCUGGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCACGAAAGGGCACCGAGUCGGmUmGmC*mU (SEQ ID NO: 338) chr16:10907539-10907559
G023523 HLA-A GCUGCAGCGCACGGGUACCA (SEQ ID NO: 339) GCUGCAGCGCACGGGUACCAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCACGAAAGGGCACCGAGUCGGUGCU (SEQ ID NO: 340) mG*mC*mU*GCAGCGCACGGGUACCAGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCACGAAAGGGCACCGAGUCGGmUmGmC*mU (SEQ ID NO: 341) chr6:29943529-29943549
G023524 TRBC2 CCACACCCAAAAGGCCACAC (SEQ ID NO: 342) CCACACCCAAAAGGCCACACGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCACGAAAGGGCACCGAGUCGGUGCU (SEQ ID NO: 343) mC*mC*mA*CACCCAAAAGGCCACACGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCACGAAAGGGCACCGAGUCGGmUmGmC*mU (SEQ ID NO: 344) chr7:142801104-142801124
G026584 CIITA UCAAAGUACCCUACAGGAGGACCA (SEQ ID NO: 345) UCAAAGUACCCUACAGGAGGACCAGUUGUAGCUCCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU (SEQ ID NO: 346) mU*mC*mA*mAmAGUmAmCCmCUmACAGGmAGGAmCCAmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAU*AAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 347) chr16:10907504-10907528
G027891 TRAC UUCAAAACCUGUCAGUGAUU (SEQ ID NO: 348) UUCAAAACCUGUCAGUGAUUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCACGAAAGGGCACCGAGUCGGUGCU (SEQ ID NO: 349) mU*mU*mC*AAAACCUGUCAGUGAUUGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCACGAAAGGGCACCGAGUCGGmU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 350) chr14:22550571-22550591
G027904 TRBC2 CCACACCCAAAAGGCCACAC (SEQ ID NO: 351) CCACACCCAAAAGGCCACACGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCACGAAAGGGCACCGAGUCGGUGCU (SEQ ID NO: 352) mC*mC*mA*CACCCAAAAGGCCACACGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCACGAAAGGGCACCGAGUCGGmU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 353) chr7:142801104-142801124
G028535 CIITA CGCCCAGGUCCUCACGUCUG (SEQ ID NO: 354) CGCCCAGGUCCUCACGUCUGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCACGAAAGGGCACCGAGUCGGUGCU (SEQ ID NO: 355) mC*mG*mC*CCAGGUCCUCACGUCUGGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCACGAAAGGGCACCGAGUCGGmU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 356) chr16:10907539-10907559
G028536 HLA-A GCUGCAGCGCACGGGUACCA (SEQ ID NO: 357) GCUGCAGCGCACGGGUACCAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCACGAAAGGGCACCGAGUCGGUGCU (SEQ ID NO: 358) mG*mC*mU*GCAGCGCACGGGUACCAGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCACGAAAGGGCACCGAGUCGGmU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 359) chr6:29943529-29943549
G028907 HLA-A UCCUGCUCUAUCCACGGCGCCCGC (SEQ ID NO: 360) UCCUGCUCUAUCCACGGCGCCCGCGUUGUAGCUCCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU (SEQ ID NO: 361) mU*mC*mC*mUmGCUmCmUAmUCmCACGGmCGCCmCGCmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAU*AAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 362) chr6:29942895-29942919
G028986 TRBC1 GUGUCCUACCAGCAAGGGGUCCUG (SEQ ID NO: 363) GUGUCCUACCAGCAAGGGGUCCUGGUUGUAGCUCCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU (SEQ ID NO: 364) mG*mU*mG*mUmCCUmAmCCmAGmCAAGGmGGUCmCUGmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAU*AAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 365) chr7:142792690-142792714
G028918 HLA-A GCUCUAUCCACGGCGCCCGCGGCU (SEQ ID NO: 366) GCUCUAUCCACGGCGCCCGCGGCUGUUGUAGCUCCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU (SEQ ID NO: 367) mG*mC*mU*mCmUAUmCmCAmCGmGCGCCmCGCGmGCUmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAU*AAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 368) chr6:29942891-29942915
G034202 HLA-A GCUCUAUCCACGGCGCCCGCGGCU (SEQ ID NO: 366) GCUCUAUCCACGGCGCCCGCGGCUGUUGUAGCUCCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU (SEQ ID NO: 367) mG*mC*mU*mCmUAUmCmCAmCGmGCGCCmCGCGmGCUmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAUAAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 369) chr6:29942891-29942915
G028913 HLA-A CACUCACCCGCCCAGGUCUGGGUC (SEQ ID NO: 370) CACUCACCCGCCCAGGUCUGGGUCGUUGUAGCUCCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU (SEQ ID NO: 371) mC*mA*mC*mUmCACmCmCGmCCmCAGGUmCUGGmGUCmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAU*AAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 372) chr6:29942609-29942633
G034617 HLA-A CACUCACCCGCCCAGGUCUGGGUC (SEQ ID NO: 370) CACUCACCCGCCCAGGUCUGGGUCGUUGUAGCUCCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU (SEQ ID NO: 371) mC*mA*mC*mUmCACmCmCGmCCmCAGGUmCUGGmGUCmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAUAAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 373) chr6:29942609-29942633
G028943 TRAC AAAACCUGUCAGUGAUUGGGUUCC (SEQ ID NO: 374) AAAACCUGUCAGUGAUUGGGUUCCGUUGUAGCUCCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU (SEQ ID NO: 375) mA*mA*mA*mAmCCUmGmUCmAGmUGAUUmGGGUmUCCmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAU*AAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 376) chr14:22550574-22550598
G034982 TRAC AAAACCUGUCAGUGAUUGGGUUCC (SEQ ID NO: 374) AAAACCUGUCAGUGAUUGGGUUCCGUUGUAGCUCCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU (SEQ ID NO: 375) mA*mA*mA*mAmCCUmGmUCmAGmUGAUUmGGGUmUCCmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAUAAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 377) chr14:22550574-22550598
G028939 TRAC UUAGGUUCGUAUCUGUAAAACCAA (SEQ ID NO: 378) UUAGGUUCGUAUCUGUAAAACCAAGUUGUAGCUCCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU (SEQ ID NO: 379) mU*mU*mA*mGmGUUmCmGUmAUmCUGUAmAAACmCAAmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAU*AAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 380) chr14:22550544-22550568
G034981 TRAC UUAGGUUCGUAUCUGUAAAACCAA (SEQ ID NO: 378) UUAGGUUCGUAUCUGUAAAACCAAGUUGUAGCUCCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU (SEQ ID NO: 379) mU*mU*mA*mGmGUUmCmGUmAUmCUGUAmAAACmCAAmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAUAAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 381) chr14:22550544-22550568
G028986 TRBC1 GUGUCCUACCAGCAAGGGGUCCUG (SEQ ID NO: 363) GUGUCCUACCAGCAAGGGGUCCUGGUUGUAGCUCCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU (SEQ ID NO: 364) mG*mU*mG*mUmCCUmAmCCmAGmCAAGGmGGUCmCUGmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAU*AAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 365) chr7:142792690-142792714
G034618 TRBC1 GUGUCCUACCAGCAAGGGGUCCUG (SEQ ID NO: 363) GUGUCCUACCAGCAAGGGGUCCUGGUUGUAGCUCCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU (SEQ ID NO: 364) mG*mU*mG*mUmCCUmAmCCmAGmCAAGGmGGUCmCUGmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAUAAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 382) chr7:142792690-142792714
G026584 CIITA UCAAAGUACCCUACAGGAGGACCA (SEQ ID NO: 345) UCAAAGUACCCUACAGGAGGACCAGUUGUAGCUCCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU (SEQ ID NO: 346) mU*mC*mA*mAmAGUmAmCCmCUmACAGGmAGGAmCCAmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAU*AAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 347) chr16:10907504-10907528
G034201 CIITA UCAAAGUACCCUACAGGAGGACCA (SEQ ID NO: 345) UCAAAGUACCCUACAGGAGGACCAGUUGUAGCUCCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU (SEQ ID NO: 346) mU*mC*mA*mAmAGUmAmCCmCUmACAGGmAGGAmCCAmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAUAAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 383) chr16:10907504-10907528
G029131 CIITA AGCUGCCGUUCUGCCCAGUCCGGG (SEQ ID NO: 384) AGCUGCCGUUCUGCCCAGUCCGGGGUUGUAGCUCCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU (SEQ ID NO: 385) mA*mG*mC*mUmGCCmGmUUmCUmGCCCAmGUCCmGGGmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAU*AAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 386) chr16:10906643-10906667
G034619 CIITA AGCUGCCGUUCUGCCCAGUCCGGG (SEQ ID NO: 384) AGCUGCCGUUCUGCCCAGUCCGGGGUUGUAGCUCCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU (SEQ ID NO: 385) mA*mG*mC*mUmGCCmGmUUmCUmGCCCAmGUCCmGGGmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAUAAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 387) chr16:10906643-10906667
G032794 HLA-B UCUGGGAAAGGAGGGGAAGAUGAG (SEQ ID NO: 388) UCUGGGAAAGGAGGGGAAGAUGAGGUUGUAGCUCCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU (SEQ ID NO: 389) mU*mC*mU*mGmGGAmAmAGmGAmGGGGAmAGAUmGAGmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAU*AAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 390) chr6:31355222-31355246
G034208 HLA-B UCUGGGAAAGGAGGGGAAGAUGAG (SEQ ID NO: 388) UCUGGGAAAGGAGGGGAAGAUGAGGUUGUAGCUCCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU (SEQ ID NO: 389) mU*mC*mU*mGmGGAmAmAGmGAmGGGGAmAGAUmGAGmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAUAAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 391) chr6:31355222-31355246
G032795 HLA-B CUCUGGGAAAGGAGGGGAAGAUGA (SEQ ID NO: 392) CUCUGGGAAAGGAGGGGAAGAUGAGUUGUAGCUCCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU (SEQ ID NO: 393) mC*mU*mC*mUmGGGmAmAAmGGmAGGGGmAAGAmUGAmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAU*AAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 394) chr6:31355221-31355245
G034209 HLA-B CUCUGGGAAAGGAGGGGAAGAUGA (SEQ ID NO: 392) CUCUGGGAAAGGAGGGGAAGAUGAGUUGUAGCUCCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU (SEQ ID NO: 393) mC*mU*mC*mUmGGGmAmAAmGGmAGGGGmAAGAmUGAmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAUAAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 395) chr6:31355221-31355245
G032806 HLA-B UCCCAGAGCCGUCUUCCCAGUCCA (SEQ ID NO: 396) UCCCAGAGCCGUCUUCCCAGUCCAGUUGUAGCUCCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU (SEQ ID NO: 397) mU*mC*mC*mCmAGAmGmCCmGUmCUUCCmCAGUmCCAmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAU*AAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 398) chr6:31355205-31355229
G034211 HLA-B UCCCAGAGCCGUCUUCCCAGUCCA (SEQ ID NO: 396) UCCCAGAGCCGUCUUCCCAGUCCAGUUGUAGCUCCCUGAAACCGUUGCUACAAUAAGGCCGUCGAAAGAUGUGCCGCAACGCUCUGCCUUCUGGCAUCGUU (SEQ ID NO: 397) mU*mC*mC*mCmAGAmGmCCmGUmCUUCCmCAGUmCCAmGUUGmUmAmGmCUCCCmUmGmAmAmAmCmCGUUmGmCUAmCAAUAAGmGmCCmGmUmCmGmAmAmAmGmAmUGUGCmCGmCAAmCGCUCUmGmCCmUmUmCmUGGCAUCG*mU*mU (SEQ ID NO: 399) chr6:31355205-31355229
圖1A-圖1C顯示在3個供體中同時插入及鹼基編輯後，缺少HLA-A表面表現之T細胞百分比。 圖2A-圖2C顯示在3個供體中同時插入及鹼基編輯後，缺少CD3表面表現之T細胞百分比。 圖3A-圖3C顯示在3個供體中同時插入及鹼基編輯後，表現基因轉殖T細胞受體之T細胞百分比。 圖4A-圖4H顯示在3個供體中同時插入及鹼基編輯後，T細胞中之編輯百分比。 圖5A顯示在4個供體中使用脂質奈米顆粒同時插入及鹼基編輯後，顯示完全編輯標記物之T細胞百分比。 圖5B顯示在4個供體中使用脂質奈米顆粒同時插入及鹼基編輯後，缺少CD3表面表現之T細胞百分比。 圖5C顯示在4個供體中使用脂質奈米顆粒同時插入及鹼基編輯後，缺少HLA-A2表面表現、HLA-A3表面表現或該兩者之T細胞百分比。 圖5D顯示在4個供體中使用脂質奈米顆粒同時插入及鹼基編輯後，缺少HLA-DP、DQ、DR表面表現之T細胞百分比。 圖5E顯示在4個供體中使用脂質奈米顆粒同時插入及鹼基編輯後，基因轉殖TCR之表面表現呈陽性之T細胞百分比。 圖6A顯示原代小鼠肝細胞中白蛋白基因座處之編輯百分比及相對發光。 圖6B顯示原代小鼠肝細胞中TTR基因座處之平均編輯百分比。 圖7A顯示小鼠肝臟中TTR基因座處之編輯百分比。 圖7B顯示小鼠肝臟中白蛋白基因座處之編輯百分比。 圖7C顯示血清A1AT水準。 圖8A顯示在AAVS1處插入後，GFP陽性供體1 T細胞之百分比。 圖8B顯示在AAVS1處插入後，GFP陽性供體2 T細胞之百分比。 圖9顯示在擴增培養基中指示天數後，細胞群體之倍數增加。 圖10A-圖10B分別顯示CD4+及CD8+亞群體之完全編輯T細胞之平均百分比。 圖11A-圖11C顯示鹼基編輯後TRAC、TRBC1、TRBC2及CIITA基因座之平均編輯百分比。 圖12A顯示藉由流式細胞術以CD3-或Vb8+評分之CD8+ T細胞之平均百分比。圖12B顯示藉由流式細胞術，HLA-DP、DQ、DR、HLA-A2或HLA-A3表面標記物之評分為陰性的CD8+ T細胞之平均百分比。 圖13A顯示展示中樞記憶幹細胞表型之CD8+工程化T細胞之平均百分比。圖13B顯示展示中樞記憶細胞表型標記物之CD8+工程化T細胞之平均百分比。圖13C顯示展示效應記憶細胞表型標記物之CD8+工程化T細胞之平均百分比。 圖14顯示工程化T細胞殺死靶細胞之平均百分比。 圖15顯示用1.0 ug/ml或0.5 ug.ml鹼基編輯器mRNA處理後之平均編輯百分比。 圖16顯示所指示之表面蛋白質表現呈陰性的T細胞之平均百分比。 對所揭示序列之簡要說明
SEQ ID NO 說明
1 編碼SpyCas9 BC22n之mRNA
2 Sp BC22n之開放閱讀框
3 Sp BC22n之胺基酸序列
4 編碼帶有Hibit標籤之Sp BC22n之mRNA
5 帶有Hibit標籤之Sp BC22n之開放閱讀框
6 帶有Hibit標籤之Sp BC22n之胺基酸序列
7 編碼BE3之mRNA
8 BE3之開放閱讀框
9 BE3之胺基酸序列
10 編碼BE3之mRNA
11 BE3之開放閱讀框
12 BE3之胺基酸序列
13 編碼UGI之mRNA
14 UGI之開放閱讀框
15 UGI之胺基酸序列
16 編碼具有2× UGI之Sp BC22之mRNA
17 具有2× UGI之Sp BC22之開放閱讀框
18 具有2× UGI之Sp BC22之胺基酸序列
19 編碼BE4MAX蛋白之mRNA
20 BE4MAX蛋白之開放閱讀框
21 BE4MAX蛋白之胺基酸序列
22 智人(H. sapiens) APOBEC3A去胺酶(A3A)之胺基酸序列，參見BC22
23   
24 例示性UGI
25 例示性XTEN
26 例示性XTEN
27 例示性XTEN
28 例示性連接體之胺基酸序列
29 例示性連接體之胺基酸序列
30 例示性連接體之胺基酸序列
31 例示性連接體之胺基酸序列
32 例示性連接體之胺基酸序列
33 例示性連接體之胺基酸序列
34 例示性連接體之胺基酸序列
35 例示性連接體之胺基酸序列
36 例示性連接體之胺基酸序列
37 例示性連接體之胺基酸序列
38 例示性連接體之胺基酸序列
39 例示性連接體SGGS之胺基酸序列
40 SV40 NLS之胺基酸序列
41 具有作為C末端7胺基酸之1× NLS之Sp Cas9切口酶(D10A)之胺基酸序列
42 使用如表3中所列示之最小尿苷密碼子(無起始或終止密碼子；適於包括在融合蛋白編碼序列中)之Sp Cas9切口酶(D10A) mRNA編碼序列
43 Sp Cas9切口酶(不含NLS)之胺基酸序列
44 使用如表3中所列示之最小尿苷密碼子(無起始或終止密碼子；適於包括在融合蛋白編碼序列中)，編碼SEQ ID NO: 43之Cas9切口酶編碼序列
45 具有兩個核定位信號作為C末端胺基酸之Sp Cas9切口酶之胺基酸序列
46 使用如表3中所列示之最小尿苷密碼子(無起始或終止密碼子；適於包括在融合蛋白編碼序列中)，編碼SEQ ID NO: 45之Sp Cas9切口酶編碼序列
47 使用表4之低A密碼子之Sp Cas9切口酶ORF，具有起始及終止密碼子
48 使用表4之低A密碼子之Sp Cas9切口酶ORF，具有起始及終止密碼子且無NLS
49 使用表4之低A密碼子之Sp Cas9切口酶ORF，具有兩個C末端NLS序列以及起始及終止密碼子
50 使用表4之低A/U密碼子之Sp Cas9切口酶ORF，具有起始及終止密碼子
51 使用表4之低A/U密碼子之Sp Cas9切口酶ORF，具有兩個C末端NLS序列以及起始及終止密碼子
52 使用表4之低A/U密碼子之Sp Cas9切口酶ORF，具有起始及終止密碼子且無NLS
53 使用表4之低A密碼子之Sp Cas9切口酶ORF (無起始或終止密碼子；適於包括在融合蛋白編碼序列中)
54 使用表4之低A密碼子之Sp Cas9切口酶ORF (無NLS且無起始或終止密碼子；適於包括在融合蛋白編碼序列中)
55 使用表4之低A密碼子之Sp Cas9切口酶ORF，具有兩個C末端NLS序列(無起始或終止密碼子；適於包括在融合蛋白編碼序列中)
56 使用表4之低A/U密碼子之Sp Cas9切口酶ORF (無起始或終止密碼子；適於包括在融合蛋白編碼序列中)
57 使用表4之低A/U密碼子之Sp Cas9切口酶ORF，具有兩個C末端NLS序列(無起始或終止密碼子；適於包括在融合蛋白編碼序列中)
58 使用表4之低A/U密碼子之Sp Cas9切口酶ORF (無NLS且無起始或終止密碼子；適於包括在融合蛋白編碼序列中)
59 例示性NLS 1
60 例示性NLS 2
61 例示性NLS 3
62 例示性NLS 4
63 例示性NLS 5
64 例示性NLS 6
65 例示性NLS 7
66 例示性NLS 8
67 例示性NLS 9
68 例示性NLS 10
69 例示性NLS 11
70 交替性SV40 NLS
71 核質蛋白NLS
72 例示性連接體之胺基酸序列
73 例示性連接體之胺基酸序列
74 例示性連接體之胺基酸序列
75 例示性連接體之胺基酸序列
76 例示性連接體之胺基酸序列
77 例示性連接體之胺基酸序列
78 例示性連接體之胺基酸序列
79 例示性連接體之胺基酸序列
80 例示性連接體之胺基酸序列
81 例示性連接體之胺基酸序列
82 例示性連接體之胺基酸序列
83 例示性連接體之胺基酸序列
84 例示性連接體之胺基酸序列
85 例示性連接體之胺基酸序列
86 例示性連接體之胺基酸序列
87 例示性連接體之胺基酸序列
88 例示性連接體之胺基酸序列
89 例示性連接體之胺基酸序列
90 例示性連接體之胺基酸序列
91 例示性連接體之胺基酸序列
92 例示性連接體之胺基酸序列
93 例示性連接體之胺基酸序列
94 例示性連接體之胺基酸序列
95 例示性連接體之胺基酸序列
96 例示性連接體之胺基酸序列
97 例示性連接體之胺基酸序列
98 例示性連接體之胺基酸序列
99 例示性連接體之胺基酸序列
100 例示性連接體之胺基酸序列
101 例示性連接體之胺基酸序列
102 例示性連接體之胺基酸序列
103 例示性連接體之胺基酸序列
104 例示性連接體之胺基酸序列
105 例示性連接體之胺基酸序列
106 例示性連接體之胺基酸序列
107 例示性連接體之胺基酸序列
108 例示性連接體之胺基酸序列
109 例示性連接體之胺基酸序列
110 例示性連接體之胺基酸序列
111 例示性連接體之胺基酸序列
112 例示性連接體之胺基酸序列
113 例示性連接體之胺基酸序列
114 例示性連接體之胺基酸序列
115 例示性連接體之胺基酸序列
116 例示性連接體之胺基酸序列
117 例示性連接體之胺基酸序列
118 例示性連接體之胺基酸序列
119 例示性連接體之胺基酸序列
120 例示性連接體之胺基酸序列
121 例示性連接體之胺基酸序列
122 例示性連接體之胺基酸序列
123 例示性連接體之胺基酸序列
124 例示性連接體之胺基酸序列
125 例示性連接體之胺基酸序列
126 例示性連接體之胺基酸序列
127 例示性連接體之胺基酸序列
128 例示性連接體之胺基酸序列
129 例示性連接體之胺基酸序列
130 例示性連接體之胺基酸序列
131 例示性連接體之胺基酸序列
132 例示性連接體之胺基酸序列
133 例示性連接體之胺基酸序列
134 編碼APOBEC3A-Nme2D16A之例示性mRNA
135 APOBEC3A-Nme2D16A之例示性開放閱讀框
136 APOBEC3A-Nme2D16A之例示性胺基酸序列
137 編碼APOBEC3A-Nme2D16A之例示性mRNA
138 APOBEC3A-Nme2D16A之例示性開放閱讀框
139 APOBEC3A-Nme2D16A之例示性胺基酸序列
140 編碼APOBEC3A-Nme2D16A之例示性mRNA
141 APOBEC3A-Nme2D16A之例示性開放閱讀框
142 APOBEC3A-Nme2D16A之例示性胺基酸序列
143 編碼APOBEC3A-NME2D16A之例示性MRNA
144 APOBEC3A-Nme2D16A之例示性開放閱讀框
145 APOBEC3A-Nme2D16A之例示性胺基酸序列
146 NLS-NLS-APOBEC3A-L070-Nme2D16A之例示性胺基酸序列
147 編碼BC22-Nme2D16A (Nme2 BC22n)之mRNA
148 具有連接體L070之鹼基編輯器之胺基酸序列
149 D16A Nme2Cas9切口酶之胺基酸序列
150 D16A Nme2Cas9切口酶之編碼序列
151 D16A Nme2Cas9切口酶之編碼序列
152 D16A Nme2Cas9切口酶之編碼序列
153 D16A Nme2Cas9切口酶之開放閱讀框
154 D16A Nme2Cas9切口酶之開放閱讀框
155 D16A Nme2Cas9切口酶之開放閱讀框
156 Cas9胺基酸序列
157 由mRNA C編碼之Nme2Cas9之胺基酸序列
158 由mRNA H編碼之Nme2Cas9之胺基酸序列
159 由mRNA I編碼之Nme2Cas9之胺基酸序列
160 由mRNA J編碼之Nme2Cas9之胺基酸序列
161 由mRNA K編碼之Nme2Cas9之胺基酸序列
162 由mRNA L編碼之Nme2Cas9之胺基酸序列
163 由mRNA M編碼之帶有HiBiT標籤之Nme2Cas9之胺基酸序列
164 由mRNA N編碼之Nme2Cas9之胺基酸序列
165 由mRNA O編碼之Nme2Cas9之胺基酸序列
166 由mRNA P編碼之帶有HiBiT標籤之Nme2Cas9之胺基酸序列
167 由mRNA Q編碼之Nme2Cas9之胺基酸序列
168 編碼Nme2Cas9之mRNA C
169 編碼Nme2Cas9之mRNA H
170 編碼Nme2Cas9之mRNA I
171 編碼Nme2Cas9之mRNA J
172 編碼Nme2Cas9之mRNA K
173 編碼Nme2Cas9之mRNA L
174 編碼帶有HiBiT標籤之Nme2Cas9之mRNA M
175 編碼Nme2Cas9之mRNA N
176 編碼Nme2Cas9之mRNA O
177 編碼帶有HiBiT標籤之Nme2Cas9之mRNA P
178 編碼Nme2Cas9之mRNA Q
179 編碼Nme2Cas9鹼基編輯器之mRNA S
180 由mRNA C編碼之Nme2Cas9之開放閱讀框
181 由mRNA H編碼之Nme2Cas9之開放閱讀框
182 由mRNA I編碼之Nme2Cas9之開放閱讀框
183 由mRNA J編碼之Nme2Cas9之開放閱讀框
184 由mRNA K編碼之Nme2Cas9之開放閱讀框
185 由mRNA L編碼之Nme2Cas9之開放閱讀框
186 由mRNA M編碼之帶有HiBiT標籤之Nme2Cas9之開放閱讀框
187 由mRNA N編碼之Nme2Cas9之開放閱讀框
188 由mRNA O編碼之Nme2Cas9之開放閱讀框
189 由mRNA P編碼之帶有HiBiT標籤之Nme2Cas9之開放閱讀框
190 由mRNA Q編碼之Nme2Cas9之開放閱讀框
191 Nme1Cas9裂解酶之例示性胺基酸序列
192 編碼Nme1Cas9裂解酶之例示性編碼序列
193 編碼Nme1Cas9裂解酶之例示性編碼序列
194 編碼Nme1Cas9裂解酶之例示性編碼序列
195 Nme1Cas9裂解酶之例示性開放閱讀框
196 Nme1Cas9裂解酶之例示性開放閱讀框
197 Nme1Cas9裂解酶之例示性開放閱讀框
198 Nme1Cas9 HNH切口酶之例示性胺基酸序列
199 編碼Nme1Cas9 HNH切口酶之例示性編碼序列
200 編碼Nme1Cas9 HNH切口酶之例示性編碼序列
201 編碼Nme1Cas9 HNH切口酶之例示性編碼序列
202 Nme1Cas9 HNH切口酶之例示性開放閱讀框
203 Nme1Cas9 HNH切口酶之例示性開放閱讀框
204 Nme1Cas9 HNH切口酶之例示性開放閱讀框
205 Nme2Cas9裂解酶之例示性胺基酸序列
206 編碼Nme2Cas9裂解酶之例示性編碼序列
207 編碼Nme2Cas9裂解酶之例示性編碼序列
208 編碼Nme2Cas9裂解酶之例示性編碼序列
209 Nme2Cas9裂解酶之例示性開放閱讀框
210 Nme2Cas9裂解酶之例示性開放閱讀框
211 Nme2Cas9裂解酶之例示性開放閱讀框
212 Nme3Cas9裂解酶之例示性胺基酸序列
213 編碼Nme3Cas9裂解酶之例示性編碼序列
214 編碼Nme3Cas9裂解酶之例示性編碼序列
215 編碼Nme3Cas9裂解酶之例示性編碼序列
216 Nme3Cas9裂解酶之例示性開放閱讀框
217 Nme3Cas9裂解酶之例示性開放閱讀框
218 Nme3Cas9裂解酶之例示性開放閱讀框
219 Nme3Cas9 HNH切口酶之例示性胺基酸序列
220 編碼Nme3Cas9 HNH切口酶之例示性編碼序列
221 編碼Nme3Cas9 HNH切口酶之例示性編碼序列
222 編碼Nme3Cas9 HNH切口酶之例示性編碼序列
223 Nme3Cas9 HNH切口酶之例示性開放閱讀框
224 Nme3Cas9 HNH切口酶之例示性開放閱讀框
225 Nme3Cas9 HNH切口酶之例示性開放閱讀框
226 例示性SpyCas9 sgRNA-1
227 向導序列3’端後之例示性核苷酸序列
228 例示性經修飾之SpyCas9模體
229 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體
230 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體
231 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體
232 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體
233 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體
234 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體
235 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體
236 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體
237 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體
238 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體
239 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體
240 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體
241 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體
242 例示性經修飾之SpyCas9保守部分模體
243 例示性未經修飾之保守部分核苷酸序列
244 例示性未經修飾之保守部分核苷酸序列
245 例示性未經修飾之保守部分核苷酸序列
246 例示性經修飾之保守部分模體
247 例示性經修飾之保守部分模體
248 例示性經修飾之保守部分模體
249 例示性經修飾之保守部分模體
250 例示性經修飾之保守部分模體
251 G000562
252 G013515
253 G013519
254 G013520
255 G013523
256 G013533
257 G013543
258 G013559
259 G013562
260 G013563
261 G013564
262 G013565
263 G013582
264 G013584
265 G000562 (例示性全序列)
266 G013515 (例示性全序列)
267 G013519 (例示性全序列)
268 G013520 (例示性全序列)
269 G013523 (例示性全序列)
270 G013533 (例示性全序列)
271 G013543 (例示性全序列)
272 G013559 (例示性全序列)
273 G013562 (例示性全序列)
274 G013563 (例示性全序列)
275 G013564 (例示性全序列)
276 G013565 (例示性全序列)
277 G013582 (例示性全序列)
278 G013584 (例示性全序列)
279 G000562 (例示性經修飾序列)
280 G013515 (例示性經修飾序列)
281 G013519 (例示性經修飾序列)
282 G013520 (例示性經修飾序列)
283 G013523 (例示性經修飾序列)
284 G013533 (例示性經修飾序列)
285 G013543 (例示性經修飾序列)
286 G013559 (例示性經修飾序列)
287 G013562 (例示性經修飾序列)
288 G013563 (例示性經修飾序列)
289 G013564 (例示性經修飾序列)
290 G013565 (例示性經修飾序列)
291 G013582 (例示性經修飾序列)
292 G013584 (例示性經修飾序列)
293 Cas9之開放閱讀框
294 Cas9之胺基酸序列
295 Cas9之開放閱讀框
296 Cas9-NLS之胺基酸序列
297 在TRAC G013006切割位點側翼具有同源臂之TCR插入構築體-包括ITR
298 雙向SERPINA插入構築體
299 具有與小鼠AAVS1之同源臂之模板A eGFP插入構築體
300 具有與小鼠AAVS1之同源臂之模板B eGFP插入構築體
301 具有與小鼠AAVS1之同源臂之模板C eGFP插入構築體
302 具有與小鼠AAVS1之同源臂之模板D eGFP插入構築體
303 具有與小鼠AAVS1之同源臂之模板OG eGFP插入構築體
304 雙向NanoLuc插入構築體
305 Nme2 Cas9之開放閱讀框
306 Sp鹼基編輯器BC22n之開放閱讀框
307 Sp Cas9之開放閱讀框
308 Nme2鹼基編輯器BC22n之開放閱讀框
309 尿嘧啶糖苷酶抑制劑(UGI)之開放閱讀框
310 編碼Nme2鹼基編輯器之開放閱讀框
311 Nme2鹼基編輯器之胺基酸序列
312 例示性經修飾之Nme向導sgRNA
313 例示性經修飾之Nme向導sgRNA
314 例示性經修飾之Nme向導sgRNA
315-399 向導序列或向導RNA全序列或經修飾序列(參見表21)
400 例示性NmeCas9 sgRNA-1
TW202408595A_112122500_SEQL.xml

Claims (84)

  1. 一種對細胞進行遺傳修飾之方法，其包括： (a)     使該細胞與第一基因體編輯工具接觸，其中該第一基因體編輯工具包含第一基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該第一基因體編輯器同源之向導RNA (gRNA)；及 (b)     使該細胞與第二基因體編輯工具接觸，其中該第二基因體編輯工具包含第二基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該第二基因體編輯器同源之gRNA，其中該第一基因體編輯器與該第二基因體編輯器正交， 藉此在該細胞中產生至少兩種基因體編輯物。
  2. 如請求項1之方法，其中該第一基因體編輯器或該第二基因體編輯器係作為至少一種多肽或至少一種編碼該多肽之多核苷酸遞送至該細胞。
  3. 如請求項2之方法，其中該至少一種多核苷酸為至少一種mRNA。
  4. 如請求項1至3中任一項之方法，其中該至少一種gRNA係作為至少一種編碼該gRNA之多核苷酸遞送至該細胞。
  5. 如請求項1至4中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器包含裂解酶、切口酶、無催化活性之核酸酶、鹼基編輯器、視情況C至T鹼基編輯器或A至G鹼基編輯器，或包含DNA聚合酶及切口酶之融合蛋白。
  6. 如請求項1至5中任一項之方法，其中該第二基因體編輯器包含裂解酶、切口酶、無催化活性之核酸酶、鹼基編輯器、視情況C至T鹼基編輯器或A至G鹼基編輯器，或包含DNA聚合酶及切口酶之融合蛋白。
  7. 如請求項1至6中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器及該第二基因體編輯器中之一者包含鹼基編輯器、視情況C至T鹼基編輯器或A至G鹼基編輯器，且該第一基因體編輯器及該第二基因體編輯器中之另一者包含裂解酶。
  8. 如請求項7之方法，其進一步包括使該細胞與編碼外源基因之核酸接觸。
  9. 如請求項1至8中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器及該第二基因體編輯器中之一者包含腦膜炎奈瑟菌( N. meningitidis) (Nme) RNA引導之切口酶或裂解酶，且該第一基因體編輯器及該第二基因體編輯器中之另一者包含釀膿鏈球菌( S. pyogenes) (Spy) RNA引導之切口酶或裂解酶。
  10. 如請求項1至9中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器或該第二基因體編輯器包含Nme1Cas9、Nme2Cas9、Nme3Cas9或SpyCas9。
  11. 一種對細胞進行遺傳修飾之方法，其包括： (a)     使該細胞與第一基因體編輯工具接觸，該第一基因體編輯工具包含含有鹼基編輯器之第一基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該鹼基編輯器同源之向導RNA (gRNA)；及 (b)     使該細胞與第二基因體編輯工具接觸，該第二基因體編輯工具包含含有RNA引導之裂解酶的第二基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該RNA引導之裂解酶同源之gRNA，其中該鹼基編輯器與該RNA引導之裂解酶正交， 藉此在該細胞中產生至少兩種基因體編輯物。
  12. 一種產生包含經編輯細胞之細胞群體之方法，其包括： (a)     使該細胞與第一基因體編輯工具接觸，該第一基因體編輯工具包含含有鹼基編輯器之第一基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該鹼基編輯器同源之向導RNA (gRNA)； (b)     使該細胞與第二基因體編輯工具接觸，該第二基因體編輯工具包含含有RNA引導之裂解酶的第二基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該RNA引導之裂解酶同源之gRNA，其中該鹼基編輯器與該RNA引導之裂解酶正交；及 (c)     培養該細胞，藉此產生該包含經編輯細胞之細胞群體，該等經編輯細胞之每個細胞包含至少兩種基因體編輯物。
  13. 如請求項11或12之方法，其中該鹼基編輯器為C至T鹼基編輯器，視情況包含胞苷去胺酶，或為A至G鹼基編輯器，視情況包含腺苷去胺酶。
  14. 如請求項1至13中任一項之方法，其中該至少兩種基因體編輯物中之一者包含雙股斷裂，且該至少兩種基因體編輯物中之另一者包含轉變或鹼基編輯物(例如A至G或C至T)。
  15. 如請求項1至14中任一項之方法，其中該第一基因體編輯工具或該第二基因體編輯工具係經由至少一種脂質奈米顆粒(LNP)遞送至該細胞。
  16. 如請求項1至15中任一項之方法，其中步驟(a)與步驟(b)同時實施。
  17. 如請求項1至16中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器包含與SEQ ID NO: 3、146或311至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之胺基酸序列。
  18. 如請求項1至17中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器係作為包含與SEQ ID NO: 1至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之核苷酸序列的核酸遞送至該細胞，且該第二基因體編輯器係作為包含與SEQ ID NO: 180-190中之任一者至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之核苷酸序列的核酸遞送至該細胞。
  19. 如請求項1至18中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器係作為包含與SEQ ID NO: 147或310至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之核苷酸序列的核酸遞送至該細胞，且該第二基因體編輯器係作為包含與SEQ ID NO: 293或295至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之核苷酸序列的核酸遞送至該細胞。
  20. 如請求項1至16中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含與SEQ ID NO: 9、12、18及21中之任一者至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之胺基酸序列。
  21. 如請求項1至20中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含胞苷去胺酶，且其中該胞苷去胺酶包含與SEQ ID NO: 22至少80%、85%、87%、90%、95%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。
  22. 如請求項21之方法，其中該胞苷去胺酶包含APOBEC3A去胺酶(A3A)。
  23. 如請求項1至22中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含Cas9切口酶。
  24. 如請求項1至23中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含腦膜炎奈瑟菌(Nme) Cas9切口酶。
  25. 如請求項1至24中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含D16A NmeCas9切口酶，視情況為D16A Nme2Cas9。
  26. 如請求項1至25中任一項之方法，其中該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶包含Cas9裂解酶。
  27. 如請求項1至26中任一項之方法，其中該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶包含釀膿鏈球菌(Spy) Cas9裂解酶。
  28. 如請求項1至23中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含釀膿鏈球菌(Spy) Cas9切口酶。
  29. 如請求項1至23及28中任一項之方法，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含D10A SpyCas9切口酶。
  30. 如請求項1至23及29中任一項之方法，其中該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶包含腦膜炎奈瑟菌(Nme) Cas9裂解酶。
  31. 如請求項1至30中任一項之方法，其中至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶不同源。
  32. 如請求項1至31中任一項之方法，其中至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器不同源。
  33. 如請求項1至32中任一項之方法，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含至少兩種靶向至少兩個不同基因體基因座之gRNA。
  34. 如請求項1至33中任一項之方法，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含至少三種靶向至少三個不同基因體基因座之gRNA。
  35. 如請求項1至34中任一項之方法，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含至少四種靶向至少四個不同基因體基因座之gRNA。
  36. 如請求項1至35中任一項之方法，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含至少五種靶向至少五個不同基因體基因座之gRNA。
  37. 一種組合物，其包含： (a)     第一基因體編輯工具，其中該第一基因體編輯工具包含第一基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該第一基因體編輯器同源之向導RNA (gRNA)；及 (b)     第二基因體編輯工具，其中該第二基因體編輯工具包含第二基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該第二基因體編輯器同源之gRNA，其中該第一基因體編輯器與該第二基因體編輯器正交。
  38. 如請求項37之組合物，其中該第一基因體編輯器或該第二基因體編輯器包含至少一種多肽或至少一種mRNA。
  39. 如請求項37或38之組合物，其中該至少一種gRNA包含至少一種編碼該gRNA之多核苷酸。
  40. 如請求項37至39中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器包含裂解酶、切口酶、無催化活性之核酸酶、鹼基編輯器、視情況C至T鹼基編輯器或A至G鹼基編輯器，或包含DNA聚合酶及切口酶之融合蛋白。
  41. 如請求項37至40中任一項之組合物，其中該第二基因體編輯器包含裂解酶、切口酶、無催化活性之核酸酶、鹼基編輯器、視情況C至T鹼基編輯器或A至G鹼基編輯器，或包含DNA聚合酶及切口酶之融合蛋白。
  42. 如請求項37至41中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器及該第二基因體編輯器中之一者包含鹼基編輯器、視情況C至T鹼基編輯器或A至G鹼基編輯器，且該第一基因體編輯器及該第二基因體編輯器中之另一者包含裂解酶。
  43. 如請求項42之組合物，其進一步包含編碼外源基因之核酸。
  44. 如請求項37至41中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器及該第二基因體編輯器中之一者包含C至T鹼基編輯器，且該第一基因體編輯器及該第二基因體編輯器中之另一者包含A至G鹼基編輯器。
  45. 如請求項37至44中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器及該第二基因體編輯器中之一者包含腦膜炎奈瑟菌(Nme) RNA引導之切口酶，且該第一基因體編輯器及該第二基因體編輯器中之另一者包含釀膿鏈球菌(Spy) RNA引導之切口酶。
  46. 如請求項37至45中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器或該第二基因體編輯器為Nme1Cas9、Nme2Cas9、Nme3Cas9或SpyCas9。
  47. 一種組合物，其包含： (a)     第一基因體編輯工具，其中該第一基因體編輯工具包含含有鹼基編輯器之第一基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該鹼基編輯器同源之向導RNA (gRNA)；及 (b)     第二基因體編輯工具，該第二基因體編輯工具包含含有RNA引導之裂解酶的第二基因體編輯器及至少一種靶向至少一個基因體基因座且與該RNA引導之裂解酶同源之gRNA，其中該鹼基編輯器與該RNA引導之裂解酶正交。
  48. 如請求項47之組合物，其中該鹼基編輯器為C至T鹼基編輯器，視情況包含胞苷去胺酶，或為A至G鹼基編輯器，視情況包含腺苷去胺酶。
  49. 如請求項37至48中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯工具或該第二基因體編輯工具含於至少一種脂質奈米顆粒(LNP)中。
  50. 如請求項37至50中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器包含與SEQ ID NO: 3、146或311至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之胺基酸序列。
  51. 如請求項37至51中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器係作為包含與SEQ ID NO: 1至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之核苷酸序列的核酸遞送至細胞，且該第二基因體編輯器係作為包含與SEQ ID NO: 180-190中之任一者至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之核苷酸序列的核酸遞送至細胞。
  52. 如請求項37至52中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器係作為包含與SEQ ID NO: 147或310至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之核苷酸序列的核酸遞送至細胞，且該第二基因體編輯器係作為包含與SEQ ID NO: 293或295至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之核苷酸序列的核酸遞送至細胞。
  53. 如請求項37至50中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含與SEQ ID NO: 9、12、18及21中之任一者至少80%、85%、90%、95%、98%或100%一致之胺基酸序列。
  54. 如請求項37至54中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含胞苷去胺酶，且其中該胞苷去胺酶包含與SEQ ID NO: 22至少80%、85%、87%、90%、95%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。
  55. 如請求項55之組合物，其中該胞苷去胺酶包含APOBEC3A去胺酶(A3A)。
  56. 如請求項37至56中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含Cas9切口酶。
  57. 如請求項37至57中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含腦膜炎奈瑟菌(Nme) Cas9切口酶。
  58. 如請求項37至58中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含D16A NmeCas9切口酶，視情況為D16A Nme2Cas9。
  59. 如請求項37至59中任一項之組合物，其中該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶包含Cas9裂解酶。
  60. 如請求項37至60中任一項之組合物，其中該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶包含釀膿鏈球菌(Spy) Cas9裂解酶。
  61. 如請求項37至57中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含釀膿鏈球菌(Spy) Cas9切口酶。
  62. 如請求項37至57及62中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器包含D10A SpyCas9切口酶。
  63. 如請求項37至57、62及63中任一項之組合物，其中該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶包含腦膜炎奈瑟菌(Nme) Cas9裂解酶。
  64. 如請求項37至64中任一項之組合物，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶不同源。
  65. 如請求項37至65中任一項之組合物，其中該至少一種與該第二基因體編輯器或該RNA引導之裂解酶同源之gRNA與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器不同源。
  66. 如請求項37至66中任一項之組合物，其中該至少一種gRNA包含至少一種單一向導RNA (sgRNA)。
  67. 如請求項37至67中任一項之組合物，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含至少兩種靶向至少兩個不同基因體基因座之gRNA。
  68. 如請求項37至68中任一項之組合物，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含至少三種靶向至少三個不同基因體基因座之gRNA。
  69. 如請求項37至69中任一項之組合物，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含至少四種靶向至少四個不同基因體基因座之gRNA。
  70. 如請求項37至70中任一項之組合物，其中該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源之gRNA包含至少五種靶向至少五個不同基因體基因座之gRNA。
  71. 如請求項68至71中任一項之組合物，其中該第一基因體編輯器及該至少一種與該第一基因體編輯器或該鹼基編輯器同源且靶向不同基因體基因座之gRNA中之一者、兩者、三者、四者、五者或六者 含於同一脂質奈米顆粒(LNP)中。
  72. 如請求項15至36及49至72中任一項之方法或組合物，其中該LNP包含可電離脂質。
  73. 如請求項73之方法或組合物，其中該可電離脂質包含生物可降解之可電離脂質。
  74. 如請求項15至36及49至74中任一項之方法或組合物，其中該LNP包含脂質組分且該脂質組分包含：約50-60 mol%胺脂質，諸如脂質A；約8-10 mol%中性脂質；及約2.5-4 mol%隱形脂質(例如PEG脂質)，其中該脂質組分之其餘部分為輔助脂質，且其中該脂質LNP之N/P比為約3-7。
  75. 如請求項15至36及49至75中任一項之方法或組合物，其中該LNP包含脂質組分且該脂質組分包含：約25-45 mol%胺脂質，諸如脂質A；約10-30 mol%中性脂質；約25-65 mol%輔助脂質；及約1.5-3.5 mol%隱形脂質(例如PEG脂質)，且其中該LNP之N/P比為約3-7。
  76. 一種細胞，其中該細胞在活體外經如請求項1至76中任一項之方法或組合物處理。
  77. 如請求項77之細胞，其中該細胞為人類細胞。
  78. 如請求項77或78之細胞，其中該細胞選自：間質幹細胞；造血幹細胞(HSC)；單核細胞；內皮祖細胞(EPC)；神經幹細胞(NSC)；緣幹細胞(LSC)；組織特異性原代細胞或由其衍生之細胞(TSC)、誘導型多能幹細胞(iPSC)；眼幹細胞；多能幹細胞(PSC)；胚胎幹細胞(ESC)；及用於器官或組織移植之細胞，以及視情況用於ACT療法中之細胞。
  79. 如請求項77至79中任一項之細胞，其中該細胞為免疫細胞。
  80. 一種細胞群體，其包含如請求項77至80中任一項之細胞。
  81. 如請求項81之細胞群體，其中該等細胞離體培養、擴增或增殖。
  82. 如請求項37至82中任一項之細胞、細胞群體或組合物，其用於治療癌症。
  83. 一種如請求項37至83中任一項之細胞、細胞群體或組合物之用途，其用於製備用以治療癌症之藥劑。
  84. 一種工程化細胞，其包含在至少三個基因體基因座中之至少三種鹼基編輯物以及至少一個外源基因。
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