JP2023130120A - ペプチド合成方法 - Google Patents

Abstract

【課題】本発明は、担体（Ｔａｇ）を用いた液相ペプチド合成方法において、ペプチドの特性に依存することなく、ペプチド合成を行うことができる担体（Ｔａｇ）を提供することを目的とする。【解決手段】以下の式：JPEG2023130120000059.jpg3436（式中、Ｒは、（ＣＨ2）nＲ1、ＣＨ（ＣＨ３）Ｒ1、又はＣ（ＣＨ３）2Ｒ1であり、Ｒ1は、ヒドロキシル基、チオール基、アミノ基、アルキルアミノ基又はカルボキシル基であり、Ｒａは、同一でも異なってもよく、それぞれ独立に炭素数１４以上６０以下である不飽和炭化水素基であり、ｍは２又は３であり、ｎは１～３の自然数である。）で表される不飽和アルコキシ置換芳香族化合物が提供される。また、該不飽和アルコキシ置換芳香族化合物を用いたペプチド合成方法が提供される。【選択図】なし

Description

本発明は、分離用担体又は液相ペプチド合成用試薬として用いることができる新規化合物に関する。本発明はまた、該化合物を用いたペプチド合成方法などに関する。

ペプチド合成技術には、固相ペプチド合成法（ＳＰＰＳ法）と液相ペプチド合成法（ＬＰＰＳ法）がある。固相ペプチド合成法は、原理的に、アミノ酸伸長反応の各段階で精製することができない。また、合成コストが高く、そのため、少量生産に向いている。一方、液相ペプチド合成法は、大量生産に汎用されているが、ペプチド鎖が長くなると、ペプチド伸長反応が難しくなり、長鎖のペプチド合成に課題がある。

そこで、溶解状態と不溶化（結晶化）状態を可逆的に繰り返すことができる担体を用いてペプチド合成を行うことが提案されている。溶解状態と不溶化状態を可逆的に繰り返すことができる担体として、様々な化合物が提案されている。例えば、本発明者らにより提案されている長鎖脂肪酸を導入したベンジル化合物（特許文献１～４：（１）特開２００３－１８３２９８号公報、（２）特開２００４－０５９５０９号公報、（３）ＷＯ２００７／０３４８１２号公報、（４）ＷＯ２００７／１２２８４７号公報）がある。これらの化合物を担体として用いることにより、ペプチド合成の工程において、担体が結合したペプチドを反応溶液に可溶化でき、また、反応後は結晶化して分離することができる。

ペプチドは、ペプチド同士が相互に作用し合って凝集することがある（いわゆる、自己集合という）。その結果、超分子ネットワークを形成して水溶液中でゲル化するという性質を持つ。凝集性が著しく高いペプチドとしてエラスチンペプチド（－Ｐｒｏ－Ｇlｙ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－）ｎが知られている。エラスチンペプチドは、Ｃ末端に上記の可溶化担体を導入したとしても有機溶媒中でゲル化してしまう。ゲル化してしまった場合には、通常の攪拌機では攪拌することができず、基質や試薬の運動性も低下することから反応は事実上停止するという問題がある。

この問題を解決する方法として、Okadaらは、基質や試薬等を含む有機溶媒に物理的に強い力を加え強制的に流動させることで混合を促し、分子同士の衝突機会を増やすことで、反応を進ませるシリンダーリアクターを用いる高圧攪拌を提案している（Okadaら、Organic Letters 2014, 16, 6448-6451：非特許文献１）。そこでは、耐圧性を有する２つのシリンダーをその先端の細管同士で連結したシリンダーリアクターを用いている。反応混合液を充填した一方のシリンダーのピストンを押すことにより、反応混合液が細管を通って別のシリンダー内に注入される。反応混合液は、細管を通る際、高圧になりまた強制的に流動させられるので、乱流を生じて混合されて、別のシリンダー内に移動した反応混合液内で反応が進む。その結果、通常のフラスコを用いた反応系では困難であったエラスチンペプチドの合成が可能となる。

しかしながらこの方法ではシリンダーリアクターのような特殊な反応装置を用いることが必要であり、反応液の混合操作が煩雑となる。また、次の工程に進めるためにはシリンダー内から反応が完了した混合液を回収しなければならない。従って、この反応系は、工業的ペプチド合成には不向きである。

特開２００３－１８３２９８号公報 特開２００４－０５９５０９号公報 ＷＯ２００７／０３４８１２号公報 ＷＯ２００７／１２２８４７号公報

Okadaら、Organic Letters 2014, 16, 6448-6451

本発明は、担体（Ｔａｇ）を用いた液相ペプチド合成方法において、ペプチドの特性に依存することなく、ペプチド合成を行うことができる担体（Ｔａｇ）を提供することを目的とする。より具体的には、凝集性の高いペプチドを合成する場合であっても、特殊な装置を用いることなく、ペプチド合成を行うことができる担体（Ｔａｇ）を提供することを目的とする。

本発明者らは、上記課題に鑑み、鋭意検討を行った結果、本明細書に記載の構造の化合物を担体として用いることにより前記課題を解決できることを見いだし、本発明を完成した。本発明は以下の態様を含む。

［１］式（Ｉ）：

（式中、Ｒは、（ＣＨ₂）nＲ₁、ＣＨ（ＣＨ_３）Ｒ₁、又はＣ（ＣＨ_３）₂Ｒ₁であり、Ｒ₁は、ヒドロキシル基、チオール基、アミノ基、アルキルアミノ基又はカルボキシル基であり、Ｒａは、同一でも異なってもよく、それぞれ独立に炭素数１４以上６０以下である不飽和炭化水素基であり、ｍは２又は３であり、ｎは１～３の自然数である。）
で表される不飽和アルコキシ置換芳香族化合物。
［２］前記式（Ｉ）が、以下のいずれかの式：

（ここで、Ｒは、（ＣＨ₂）Ｒ₁、ＣＨ（ＣＨ_３）Ｒ₁、又はＣ（ＣＨ_３）₂Ｒ₁であり、Ｒ₁は、ヒドロキシル基、チオール基、アミノ基、アルキルアミノ基又はカルボキシル基であり、Ｒａは、同一でも異なってもよく、それぞれ独立に炭素数１４以上６０以下である不飽和炭化水素基である。）
で表される上記１に記載の不飽和アルコキシ置換芳香族化合物。
［３］前記式（Ｉ）が、以下のいずれかの式：

（ここで、Ｒは（ＣＨ₂）Ｒ₁であり、Ｒ₁は、ヒドロキシル基、チオール基、アミノ基、アルキルアミノ基又はカルボキシル基であり、Ｒａは、同一でも異なってもよく、それぞれ独立に炭素数１４以上６０以下である不飽和炭化水素基である。）
で表される上記１に記載の不飽和アルコキシ置換芳香族化合物。
［４］Ｒａが、直鎖状の不飽和炭化水素基である上記［１］～［３］のいずれか一つに記載の不飽和アルコキシ置換芳香族化合物。
［５］Ｒａのそれぞれが独立して、ミリストレイン酸（C14）、パルミトレイン酸（C16）、サピエン酸（C16）、オレイン酸（C18）、エライジン酸（C18）、バクセン酸（C18）、ガドレイン酸（C20）、エイコセン酸（C20）、エルカ酸（C22）、ネルボン酸（C24）、リノール酸（C18）、エイコサジエン酸（C20）、ドコサジエン酸（C22）、α－及びγ－リノレン酸（C18）、ピノレン酸（C18）、エレオステアリン酸（C18）、ミード酸（C20）、ジホモ－γ－リノレン酸（C20）、エイコサトリエン酸（C20）、ステアリドン酸（C18）、アラキドン酸（C20）、エイコサテトラエン酸（C20）、アドレン酸（C22）、ボセオペンタエン酸（C18）、エイコサペンタエン酸（C20）、オズボンド酸（C22）、イワシ酸（C22）、テトラコサペンタエン酸（C24）、ドコサヘキサエン酸（C22）、及びニシン酸（C24）からなる群より選ばれる化合物に由来する不飽和炭化水素基である上記［４］に記載の不飽和アルコキシ置換芳香族化合物。
［６］Ｒａのそれぞれが、オレイン酸、エライジン酸、リノール酸、パルミトレイン酸、ガドレイン酸、α－リノレン酸、γ－リノレン酸、エルカ酸、ドコサジエン酸及びドコサヘキサエン酸からなる群より選ばれる化合物に由来する不飽和炭化水素基である上記［５］に記載の不飽和アルコキシ置換芳香族化合物。
［７］Ｒａのそれぞれが、オレイン酸、エライジン酸、リノール酸、パルミトレイン酸、及びガドレイン酸からなる群より選ばれる化合物に由来する不飽和炭化水素基である上記［５］に記載の不飽和アルコキシ置換芳香族化合物。
［８］式（Ｉ）で表される化合物が、2,4-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,5-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((E)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylamine、2,4-Bis((Z,Z)-octadec-9,12-dien-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylethylamine、2,4-Bis((Z)-docos-13-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、3,4,5-Tris((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((Z,Z)-docos-13,16-dien-1-yl)oxy)benzylalcohol、3,5-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((Z,Z,Z,Z,Z,Z)-docos-4,7,10,13,16,19-hexaen-1-yl)oxy)benzylalcohol、及び 2,4,5-Tris((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol からなる群より選ばれる上記［１］に記載の不飽和アルコキシ置換芳香族化合物。

［９］上記［１］～［８］のいずれか一つに記載の不飽和アルコキシ置換芳香族化合物である分離用担体。
［１０］上記［１］～［８］のいずれか一つに記載の不飽和アルコキシ置換芳香族化合物の分離用担体としての使用。
［１１］上記［１］～［８］のいずれか一つに記載の不飽和アルコキシ置換芳香族化合物であるペプチド合成用試薬。
［１２］上記［１］～［８］のいずれか一つに記載の不飽和アルコキシ置換芳香族化合物のペプチド合成用試薬としての使用。

［１３］下記式（Ｉ）で示される不飽和アルキル含有芳香族化合物由来の担体で保護された保護アミノ酸又は保護ペプチドの分離方法であって、以下の工程：
工程（１）：有機溶媒又は有機溶媒の混合液中で、
以下の式（Ｉ）：
式（Ｉ）：

（式中、Ｒは、（ＣＨ₂）nＲ₁、ＣＨ（ＣＨ_３）Ｒ₁、又はＣ（ＣＨ_３）₂Ｒ₁であり、Ｒ₁は、ヒドロキシル基、チオール基、アミノ基、アルキルアミノ基又はカルボキシル基であり、Ｒａは、同一でも異なってもよく、それぞれ独立に炭素数１４以上６０以下である不飽和炭化水素基であり、ｍは２又は３であり、ｎは１～３の自然数である。）で表される不飽和アルコキシ置換芳香族化合物とＮ末端のアミノ基が保護された（以下、「Ｎ－保護」という）アミノ酸とを縮合させて、該不飽和アルコキシ置換芳香族化合物由来の担体でＣ末端が保護された（以下、「Ｃ－担体保護」という）Ｎ－保護アミノ酸を得る工程、若しくはＣ－担体保護アミノ酸又はＣ－担体保護ペプチドにＮ－保護アミノ酸又はＮ－保護ペプチドを縮合させて、Ｃ－担体保護－Ｎ－保護ペプチドを得る工程。
工程（２）：工程（１）で得られたC-担体保護－Ｎ－保護アミノ酸又はC-担体保護－Ｎ－保護ペプチドのＮ末端の保護基を除去する工程、及び、
工程（３）：工程（２）で得られたＣ－担体保護アミノ酸又はＣ－担体保護ペプチドを分離する工程、
を含む分離方法。
［１４］前記工程（３）は、
（ｉ）担体保護アミノ酸又は担体保護ペプチドを不溶化（結晶化）状態にして分離する固液分離工程、又は
（ｉｉ）担体保護アミノ酸又は担体保護ペプチドを含有する有機溶媒と、不純物を含有する、水あるいは有機溶媒を含む水溶液又は有機溶媒とを分離する分液操作工程、
により行う、上記［１３］に記載の分離方法。
［１５］前記Ｎ－保護アミノ酸又はＮ－保護ペプチドが、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基でアミノ基が保護された（以下、「Ｎ－Ｆｍｏｃ保護」という）アミノ酸又はＮ－Ｆｍｏｃ保護ペプチドである、上記［１３］又は［１４］に記載の分離方法。
［１６］前記工程（１）の有機溶媒又は有機溶媒の混合液が、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ペンタン、ノルマルヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン、ＣＰＭＥ，ＭＴＢＥ、２－メチルＴＨＦ、４－メチルＴＨＰ、酢酸イソプロピル、ＤＣＭ、クロロホルム、ＤＭＳＯ、１,３-ジメチル-２-イミダゾリジノン、Ｎ－メチルピロリドン及びアセトニトリルからなる群より選ばれる少なくとも一つの有機溶媒又それらの２以上の混合液である、上記［１３］～［１５］のいずれか一つに記載の分離方法。
［１７］前記式（Ｉ）で表される化合物が、以下の何れかの式：

（ここで、Ｒは、（ＣＨ₂）Ｒ₁、ＣＨ（ＣＨ_３）Ｒ₁、又はＣ（ＣＨ_３）₂Ｒ₁であり、Ｒ₁は、ヒドロキシル基、チオール基、アミノ基、アルキルアミノ基又はカルボキシル基であり、Ｒａは、同一でも異なってもよく、それぞれ独立に炭素数１４以上６０以下である不飽和炭化水素基である）
で表される化合物である、上記［１３］～［１６］のいずれか一つに記載の分離方法。
［１８］Ｒａが、直鎖状の不飽和炭化水素基である請求項［１３］～［１７］のいずれか一つに記載の分離方法。
［１９］Ｒａのそれぞれが独立して、ミリストレイン酸（C14）、パルミトレイン酸（C16）、サピエン酸（C16）、オレイン酸（C18）、エライジン酸（C18）、バクセン酸（C18）、ガドレイン酸（C20）、エイコセン酸（C20）、エルカ酸（C22）、ネルボン酸（C24）、リノール酸（C18）、エイコサジエン酸（C20）、ドコサジエン酸（C22）、α－及びγ－リノレン酸（C18）、ピノレン酸（C18）、エレオステアリン酸（C18）、ミード酸（C20）、ジホモ－γ－リノレン酸（C20）、エイコサトリエン酸（C20）、ステアリドン酸（C18）、アラキドン酸（C20）、エイコサテトラエン酸（C20）、アドレン酸（C22）、ボセオペンタエン酸（C18）、エイコサペンタエン酸（C20）、オズボンド酸（C22）、イワシ酸（C22）、テトラコサペンタエン酸（C24）、ドコサヘキサエン酸（C22）、及びニシン酸（C24）からなる群より選ばれる化合物に由来する不飽和炭化水素基である上記［１８］に記載の分離方法。
［２０］Ｒａのそれぞれが独立して、オレイン酸、エライジン酸、リノール酸、パルミトレイン酸、ガドレイン酸、α－リノレン酸、γ－リノレン酸、エルカ酸、ドコサジエン酸、及びドコサヘキサエン酸からなる群より選ばれる化合物に由来する不飽和炭化水素基である上記［１９］に記載の分離方法。
［２１］Ｒａのそれぞれが、オレイン酸、エライジン酸、リノール酸、パルミトレイン酸、及びガドレイン酸からなる群より選ばれる化合物に由来する不飽和炭化水素基である上記［１９］に記載の分離方法。
［２２］式（Ｉ）で表される化合物が、2,4-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,5-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((E)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylamine、2,4-Bis((Z,Z)-octadec-9,12-dien-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylethylamine、2,4-Bis((Z)-docos-13-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、3,4,5-Tris((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((Z,Z)-docos-13,16-dien-1-yl)oxy)benzylalcohol、3,5-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((Z,Z,Z,Z,Z,Z)-docos-4,7,10,13,16,19-hexaen-1-yl)oxy)benzylalcohol、及び 2,4,5-Tris((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol からなる群より選ばれる上記［１３］～［１６］のいずれか一つに記載の分離方法。

［２３］液相ペプチド合成方法であって、以下の工程：
工程（Ａ）：有機溶媒又は有機溶媒の混合液中で、
以下の式（Ｉ）：
式（Ｉ）：

（式中、Ｒは、（ＣＨ₂）nＲ₁、ＣＨ（ＣＨ_３）Ｒ₁、又はＣ（ＣＨ_３）₂Ｒ₁であり、Ｒ₁は、ヒドロキシル基、チオール基、アミノ基、アルキルアミノ基又はカルボキシル基であり、Ｒａは、同一でも異なってもよく、それぞれ独立に炭素数１４以上６０以下である不飽和炭化水素基であり、ｍは２又は３であり、ｎは１～３の自然数である。）で表される不飽和アルコキシ置換芳香族化合物由来する担体でＣ末端が保護された（以下、「Ｃ－担体保護」という）アミノ酸又はＣ－担体保護ペプチドと、Ｎ末端のアミノ基が保護された（以下、「Ｎ－保護」という）アミノ酸又はＮ－保護ペプチドとを縮合剤の存在下で縮合して、Ｃ－担体保護－Ｎ－保護ペプチドを得る工程、
工程（Ｂ）：前記Ｃ－担体保護－Ｎ－保護ペプチドのＮ末端の保護基を脱保護してＣ－担体保護ペプチドを得る工程、及び
工程（Ｃ）：前記Ｃ－担体保護ペプチドを分離する工程、
を含むペプチド合成方法。
［２４］前記Ｎ－保護アミノ酸又はＮ－保護ペプチドが、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基でアミノ基が保護された（以下、「Ｎ－Ｆｍｏｃ保護」という）アミノ酸又はＮ－Ｆｍｏｃ保護ペプチドである、上記［２３］に記載のペプチド合成方法。
［２５］前記工程（Ａ）の有機溶媒又は有機溶媒の混合液が、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ペンタン、ノルマルヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン、ＣＰＭＥ，ＭＴＢＥ、２－メチルＴＨＦ、４－メチルＴＨＰ、酢酸イソプロピル、クロロホルム、ＤＣＭ、ＤＭＳＯ、１,３-ジメチル-２-イミダゾリジノン、Ｎ－メチルピロリドン及びアセトニトリルからなる群より選ばれる少なくとも一つの有機溶媒又それらの２以上の混合液である、上記［２３］又は［２４］に記載のペプチド合成方法。
［２６］前記工程（Ａ）の後に、以下の工程（ａ１）：縮合反応後の反応液に水溶性アミンを添加する工程（以下、本発明のスカベンジ反応工程という場合がある）、をさらに含む上記［２３］～［２５］のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。
［２７］前記工程（Ｂ）が、水溶性アミンの存在下で脱保護を行う工程（以下、本発明の脱保護反応工程という場合がある）である、上記［２６］に記載のペプチド合成方法。
［２８］前記工程（Ｃ）が、反応液に酸を添加して中和し、さらに酸性水溶液を添加して洗浄した後、分液し、水層を除去し、有機層を得てＣ－担体保護ペプチドを分離する工程である、上記［２３］～［２７］のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。
［２９］前記式（Ｉ）の化合物が、以下のいずれかの式：

（ここで、Ｒは、（ＣＨ₂）Ｒ₁、ＣＨ（ＣＨ_３）Ｒ₁、又はＣ（ＣＨ_３）₂Ｒ₁であり、Ｒ₁は、ヒドロキシル基、チオール基、アミノ基、アルキルアミノ基又はカルボキシル基であり、Ｒａは、同一でも異なってもよく、それぞれ独立に炭素数１４以上６０以下である不飽和炭化水素基である。）
で表される化合物である、上記［２３］～［２８］のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。
［３０］Ｒａが、直鎖状の不飽和炭化水素基である上記［２３］～［２９］のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。
［３１］Ｒａのそれぞれが独立して、ミリストレイン酸（C14）、パルミトレイン酸（C16）、サピエン酸（C16）、オレイン酸（C18）、エライジン酸（C18）、バクセン酸（C18）、ガドレイン酸（C20）、エイコセン酸（C20）、エルカ酸（C22）、ネルボン酸（C24）、リノール酸（C18）、エイコサジエン酸（C20）、ドコサジエン酸（C22）、α－及びγ－リノレン酸（C18）、ピノレン酸（C18）、エレオステアリン酸（C18）、ミード酸（C20）、ジホモ－γ－リノレン酸（C20）、エイコサトリエン酸（C20）、ステアリドン酸（C18）、アラキドン酸（C20）、エイコサテトラエン酸（C20）、アドレン酸（C22）、ボセオペンタエン酸（C18）、エイコサペンタエン酸（C20）、オズボンド酸（C22）、イワシ酸（C22）、テトラコサペンタエン酸（C24）、ドコサヘキサエン酸（C22）、及びニシン酸（C24）からなる群より選ばれる化合物に由来する不飽和炭化水素基である上記［３０］に記載のペプチド合成方法。
［３２］Ｒａのそれぞれが独立して、オレイン酸、エライジン酸、リノール酸、パルミトレイン酸、ガドレイン酸、α－リノレン酸、γ－リノレン酸、エルカ酸、ドコサジエン酸及びドコサヘキサエン酸からなる群より選ばれる化合物に由来する不飽和炭化水素基である上記［３１］に記載のペプチド合成方法。
［３３］Ｒａのそれぞれが、オレイン酸、エライジン酸、リノール酸、パルミトレイン酸、及びガドレイン酸からなる群より選ばれる化合物に由来する不飽和炭化水素基である上記［３１］に記載のペプチド合成方法。
［３４］式（Ｉ）で表される化合物が、2,4-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,5-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((E)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylamine、2,4-Bis((Z,Z)-octadec-9,12-dien-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylethylamine、2,4-Bis((Z)-docos-13-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、3,4,5-Tris((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((Z,Z)-docos-13,16-dien-1-yl)oxy)benzylalcohol、3,5-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((Z,Z,Z,Z,Z,Z)-docos-4,7,10,13,16,19-hexaen-1-yl)oxy)benzylalcohol、及び 2,4,5-Tris((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol からなる群より選ばれる上記［２３］～［２８］のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。
［３５］前記工程（Ｃ）より分離されたＣ－担体保護ペプチドを用いて、前記工程の繰り返しを１回以上行うことを含む、上記［２３］～［３４］のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。
［３６］前記各工程をワンポットで行う、上記［２３］～［３５］のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。

本発明により、新規な分離用担体又はペプチド合成用試薬が提供される。本発明の一つの態様において、液相ペプチド合成において、本発明の不飽和アルキル含有芳香族化合物を担体として用いることにより高濃度の合成中間体を含む溶液を用いることができるため、高効率でペプチドを合成することが可能となる。

以下、本発明を、例示的な実施態様を例として、本発明の実施において使用することができる好ましい方法及び材料とともに説明する。
なお、文中で特に断らない限り、本明細書で用いるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解されるのと同じ意味をもつ。また、本明細書に記載されたものと同等又は同様の任意の材料及び方法は、本発明の実施において同様に使用することができる。
また、本明細書に記載された発明に関連して本明細書中で引用されるすべての刊行物及び特許は、例えば、本発明で使用できる方法や材料その他を示すものとして、本明細書の一部を構成するものである。

本明細書中で、「Ｘ～Ｙ」という表現を用いた場合は、下限としてＸを上限としてＹを、あるいは上限としてＸを下限としてＹを含む意味で用いる。本明細書において「約」とは、±１０％を許容する意味で用いる。
本明細書中で「アミノ酸」とは、天然のアミノ酸、非天然のアミノ酸、Ｌ型アミノ酸、Ｄ型アミノ酸のいずれも含む意味であり、また、アミノ酸アミドなどの特殊なアミノ酸も含む意味である。さらには、公知の技術を参照して作成可能な任意の修飾を加えたアミノ酸も含む意味である。

本発明の不飽和アルキル含有芳香族化合物（以下、「本発明化合物」という場合がある。）は、下記式（Ｉ）で表される化合物である。
式（Ｉ）：

式中の記号の定義は以下の通りである。Ｒは、（ＣＨ₂）nＲ₁、ＣＨ（ＣＨ_３）Ｒ₁、又はＣ（ＣＨ_３）₂Ｒ₁であり、Ｒ₁は、ヒドロキシル基、チオール基、アミノ基、アルキルアミノ基又はカルボキシル基である。Ｒａは、同一でも異なってもよく、それぞれ独立に、炭素数１４以上６０以下である不飽和炭化水素基である。ｍは２又は３である。ｎは１～３の自然数である。

本発明化合物は、好ましくは、以下のいずれかの式で表される化合物である。

式中、Ｒは、（ＣＨ₂）Ｒ₁、ＣＨ（ＣＨ_３）Ｒ₁、又はＣ（ＣＨ_３）₂Ｒ₁であり、Ｒ₁及びＲａは上記と同じである。

本発明化合物は、より好ましくは、以下のいずれかの式で表される化合物である。

式中、Ｒは（ＣＨ₂）Ｒ₁であり、Ｒ₁及びＲａは上記と同じである。

本発明化合物は、ベンジル位に一つの反応性基を持ち、かつ、ベンゼン環上に２又は３個の炭素数１４以上６０以下の不飽和炭化水素基からなる不飽和アルコキシ基を持つベンジル化合物であることを特徴とする。反応性基は、ベンジル位炭素を含み、（ＣＨ_２）nＲ₁、ＣＨ（ＣＨ_３）Ｒ₁、又はＣ（ＣＨ_３）₂Ｒ₁の式で表され、ｎは１～３の自然数であり、好ましくは１又は２、より好ましくは１である。Ｒ₁は、ヒドロキシル基、チオール基、アミノ基、アルキルアミノ基又はカルボキシル基であり、好ましくはヒドロキシル基、アミノ基又はアルキルアミノ基、より好ましくはヒドロキシル基である。例えば、具体的には、ＯＨ、ＮＨ_２、ＮＨＣＨ_３、ＮＨＣ_２Ｈ_５が例示される。不飽和炭化水素基の炭素数は、１４以上６０以下、より好ましくは１４以上４０以下、さらに好ましくは１６以上３０以下、よりさらに好ましくは１６以上２４以下である。２又は３個の不飽和炭化水素基は、同じであっても異なってもよいが、好ましくは同じある。不飽和炭化水素基に含まれる不飽和結合の数は特に制限はないが、好ましくは５以下、より好ましくは４以下、さらに好ましくは３以下、よりさらに好ましくは２以下である。また、不飽和炭化水素基に含まれる不飽和結合の位置も特に制限がない。本発明化合物は、不飽和結合に対してcis配置及びtrans配置のいずれの立体構造を取ることができ、いずれも構造も本発明化合物に含まれる。

本発明化合物におけるベンジル環上の不飽和アルコキシ基の位置は特に制限はないが、２，４－置換、２，５－置換、２，６－置換、３，４－置換、３，５－置換、２，３，４－置換、２，４，５－置換、２，４，６－置換、又は３，４，５－置換であり、好ましくは２，４－置換、２，５－置換、３，５－置換、２，４，５－置換又は３，４，５－置換であり、より好ましくは２，４－置換、３，５－置換、又は３，４，５－置換である。

ベンジル環上の置換基である不飽和アルコキシ基を構成する不飽和脂肪族基の種類は、炭素数１４以上６０以下の不飽和炭化水素基であれば特に制限がないが、例えば、ヘキサ不飽和脂肪酸、ペンタ不飽和脂肪酸、テトラ不飽和脂肪酸、トリ不飽和脂肪酸、ジ不飽和脂肪酸、モノ不飽和脂肪酸から由来する不飽和炭化水素基をあげることができる。ヘキサ不飽和脂肪酸としては、例えば、ドコサヘキサエン酸（C22）、及びニシン酸（C24）、ペンタ不飽和脂肪酸としては、例えば、ボセオペンタエン酸（C18）、エイコサペンタエン酸（C20）、オズボンド酸（C22）、イワシ酸（C22）、及びテトラコサペンタエン酸（C24）、テトラ不飽和脂肪酸としては、例えば、ステアリドン酸（C18）、アラキドン酸（C20）、エイコサテトラエン酸（C20）、及びアドレン酸（C22）、トリ不飽和脂肪酸としては、例えば、α－及びγ－リノレン酸（C18）、ピノレン酸（C18）、エレオステアリン酸（C18）、ミード酸（C20）、ジホモ－γ－リノレン酸（C20）、及びエイコサトリエン酸（C20）、ジ不飽和脂肪酸として、例えば、リノール酸（C18）、エイコサジエン酸（C20）、及びドコサジエン酸（C22）、モノ不飽和脂肪酸として、例えば、ウンデシレン酸（C10）、ミリストレイン酸（C14）、パルミトレイン酸（C16）、サピエン酸（C16）、オレイン酸（C18）、エライジン酸（C18）、バクセン酸（C18）、ガドレイン酸（C20）、エイコセン酸（C20）、エルカ酸（C22）、及びネルボン酸（C24）をあげることができる。置換基として、好ましくはオレイン酸、エライジン酸、リノール酸、ステアリドン酸、パルミトレイン酸、ガドレイン酸、α－リノレン酸、γ－リノレン酸、エルカ酸、ドコサジエン酸又はドコサヘキサエン酸、より好ましくはオレイン酸、エライジン酸、リノール酸、パルミトレイン酸、又はガドレイン酸から由来する不飽和炭化水素基をあげることができる。

本発明化合物の製造は公知の方法を適宜参照して行うことができる。Ｒがヒドロキシル基である本発明化合物は、これに限定されないが、例えば以下の工程により製造できる。本発明化合物の不飽和炭化水素基（式（Ｉ）の「Ｒａ」）となる不飽和カルボン酸を原料とし、それを還元反応に付すことにより、対応するアルコールを製造する。次いで、アルコールをＢｒ化して不飽和アルキルブロミドを製造する。その後、不飽和アルキルブロミドをジ又はトリ－ヒドロキシベンズアルデヒドと縮合させ、ヒドロキシル基が不飽和アルキル基で置換されたジ又はトリ－不飽和アルキル置換ベンズアルデヒドを得る。得られた化合物を還元することにより、Ｒがヒドロキシル基である式（Ｉ）の本発明化合物を得ることができる。
不飽和カルボン酸としてオレイン酸を用いて、本発明化合物を製造する例を以下に記載する。

「－（ＣＨ_２）nＲ」がアミノメチル基である式（Ｉ）の本発明化合物は、これに限定されないが、例えば以下の工程により製造できる。上記の方法で製造した「－（ＣＨ_２）nＲ」がメチルヒドロキシル基である本発明化合物を出発物質とし、アジド化を行い、ベンジルアジド誘導体を製造する。それをシュタウディンガー反応に付し、「－（ＣＨ_２）nＲ」がアミノメチル基である本発明化合物を得る。

「－（ＣＨ_２）nＲ」がアミノエチル基である式（Ｉ）の本発明化合物は、これに限定されないが、例えば以下の工程により製造できる。不飽和アルキルブロミドをジ又はトリ－ヒドロキシベンズアルデヒドと縮合させて得たヒドロキシル基が不飽和アルキル基で置換されたジ又はトリ－不飽和アルキル置換ベンズアルデヒドに対し還元的アミノ化反応を行うことにより製造することができる。

本発明化合物の例を以下に記載する。
（１）不飽和炭化水素基（Ｒａ）としてオレイン酸を用いた化合物としては以下が例示される。

（２）不飽和炭化水素基（Ｒａ）としてエライジン酸を用いた化合物としては以下が例示される。

（３）不飽和炭化水素基（Ｒａ）としてリノール酸を用いた化合物としては以下が例示される。

（５）不飽和炭化水素基（Ｒａ）としてエルカ酸を用いた化合物としては以下が例示される。

（６）不飽和炭化水素基（Ｒａ）としてドコサヘキサエン酸を用いた化合物としては以下が例示される。

（７）不飽和炭化水素基（Ｒａ）としてドコサジエン酸を用いた化合物としては以下が例示される。

本発明化合物は、長鎖の脂肪族炭化水素基を有することから有機溶媒に対する溶解度が高く、これにより優れた反応性が期待できる。有機溶媒とは、本技術分野において一般的に用いられる溶媒を意味し、例えば、液相ペプチド合成において用いられる溶媒が該当する。具体的には、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ペンタン、ノルマルヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン、ＣＰＭＥ、ＭＴＢＥ、２－メチルＴＨＦ、４－メチルＴＨＰ、酢酸イソプロピル、クロロホルム、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、１,３-ジメチル-２-イミダゾリジノン、Ｎ－メチルピロリドン、又はこれらの２種以上の混合溶媒である。本発明化合物は、例えば、２０℃における酢酸イソプロピル１００ｇ中の飽和溶解度を、１～９５重量％とすることができる。

以下、有機溶媒の代表例として酢酸イソプロピルを例として、本発明化合物の有機溶媒に対する溶解度を示す。２０℃における酢酸イソプロピル１００ｇ中の本発明化合物の飽和溶解度の下限値は、反応基質との結合やその後の反応が進行しさえすれば特に制限はないが、工業的にあらゆる基質に対しても安定的に反応を進行させられるという観点から２重量％が好ましく、５重量％がより好ましく、１０重量％がさらに好ましく、２５重量％がよりさらに好ましく、５０重量％が特にも好ましい。

本発明化合物は、アミノ酸又はペプチドに結合させ、アミノ酸又はペプチドとともに分離・回収することができる。分離・回収は、溶媒に溶解している本発明化合物が結合したアミノ酸又はペプチドを不溶化又は結晶化することにより容易に行える。不溶化又は結晶化の条件は、公知の報告を参照して行うことができ、例えば、ＷＯ２００７／０３４８１２号公報やＷＯ２００７／１２２８４７号公報を参考にすることができる。本発明化合物はまた、分液操作性の優れた溶媒、例えば、シクロヘキサン、２－メチルＴＨＦ、酢酸イソプロピル、ＣＰＭＥ、ＤＣＭなどに容易に溶解する。そのため、本発明化合物が結合したアミノ酸やペプチドは分液操作により、反応残渣から分離することが容易である。分液操作は、例えば、本発明化合物が結合したアミノ酸又はペプチドを含む反応液に水、又は水とアセトニトリルなどの親水性有機溶媒の混合物、又は本発明化合物が溶解している有機溶媒と混和しない有機溶媒（例えば、極性有機溶媒）を添加し、攪拌、洗浄し、水及び／又は親水性有機溶媒に可溶の反応残渣を分層により除去することで行える。よって、本発明化合物は、アミノ酸やペプチドの分離用担体としても用いることができる。本発明は、分離用担体を提供するものであり、また、本発明化合物の分離用担体としての使用も含む。さらには、本発明は、本発明化合物を用いた分離方法を提供するものである。

［分離方法］
本発明化合物を用いたアミノ酸やペプチドの分離方法は、以下の工程により行うことができる。
工程（１）：有機溶媒又は有機溶媒の混合液中で、本発明化合物である不飽和アルコキシ置換芳香族化合物と、Ｎ末端のアミノ基が保護された（Ｎ－保護）アミノ酸とを縮合させて、該不飽和アルキル含有芳香族化合物由来の担体で保護された（C-担体保護）Ｎ－保護アミノ酸を得る工程、又はＣ－担体保護アミノ酸若しくはＣ－担体保護ペプチドにＮ－保護アミノ酸若しくはＮ－保護ペプチドを縮合させて、Ｃ－担体保護－Ｎ－保護ペプチドを得る工程、
工程（２）：工程（１）で得られたＣ－担体保護－Ｎ－保護アミノ酸又はＣ－担体保護－Ｎ－保護ペプチドのＮ末端の保護基を除去して、Ｃ－担体保護アミノ酸又はＣ－担体保護ペプチドを得る工程、及び
工程（３）：工程（２）で得られたＣ－担体保護アミノ酸又はＣ－担体保護ペプチドを分離する工程。

本発明の分離方法においては、最初に本発明化合物あるいはアミノ酸又はペプチドと結合した本発明化合物を有機溶媒又は有機溶媒の混合液に溶解する。本発明の分離方法においては、本発明化合物あるいはアミノ酸又はペプチドと結合した本発明化合物が溶解する限り、一般的な有機溶媒を用いることができ、エーテル類、酢酸エステル類、ハロゲン化炭化水素類、芳香族炭化水素類、エチレン系炭化水素類、環状飽和炭化水素類などをあげることができる。具体的な溶媒としては、これに限定されないが、例えば、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ペンタン、ノルマルヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン、ＣＰＭＥ，ＭＴＢＥ、2－メチルＴＨＦ、４－メチルＴＨＰ、酢酸イソプロピル、ＤＣＭ，クロロホルム、ＤＭＳＯ、１,３-ジメチル-２-イミダゾリジノン、Ｎ－メチルピロリドンを挙げることができる。また、上記溶媒の２種以上の混合溶媒でもよい。分液操作性に優れた溶媒であれば上記溶媒を制限なく用いることができるが、特に好ましくは、ＴＨＦ、ＤＭＦ、シクロヘキサン、ＣＰＭＥ，ＭＴＢＥ、２－メチルＴＨＦ、４－メチルＴＨＰ、酢酸イソプロピル、ＤＣＭ、ＤＭＳＯ及びＮ－メチルピロリドンからなる群より選ばれる少なくとも一つの有機溶媒又それらの２以上の混合液である。

なお、上記有機溶媒には、反応時点における基質の溶解性を向上させるため；抽出時点における未反応物及び副生物の水層への溶解度を向上させるため（すなわち、未反応物及び副生物の除去を容易にするため）；又は分層性を向上させるために、各種親水性有機溶媒を添加しても構わない。また、抽出時点で未反応物や副生物を除去・洗浄するために、水の代わりに、各種親水性有機溶媒、例えばアセトニトリルやメタノールを使用しても構わない。具体的には、ヘプタンを反応溶媒として使用した場合に、アセトニトリルを用いて抽出・洗浄しても構わない。

各種親水性有機溶媒としては、具体的には、アセトニトリル、プロピオニトリル等のニトリル類；アセトン、メチルエチルケトン、２－ブタノン等のケトン類；Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ－メチルピロリドン等のアミド類；ジメチルスルホキシド等のスルホキシド類が挙げられる。溶解性を補助しつつ、分層性に影響を与えないという観点から、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ－メチルピロリドンが好ましく、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ－メチルピロリドン、ＤＭＳＯがより好ましく、Ｎ－メチルピロリドンがさらに好ましい。

本発明の分離方法の工程（１）で用いるＮ－保護アミノ酸（又はペプチド）におけるＮ末端の保護は、公知の保護基を用い公知の方法を参照して行うことができる。例えば、ｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基又は９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基をあげることができるが、好ましくはＦｍｏｃ基である。

本発明の分離方法の工程（１）における、本発明化合物と、Ｎ－保護アミノ酸との縮合は、縮合剤を用いた公知の方法を用いて行うことができる。これに限定されないが、例えば、本発明化合物をＴＨＦ等の溶媒に溶解し、Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸（又はペプチド）及び縮合剤、例えば、ＤＩＰＣＩを添加して縮合を行い、アミノ酸のカルボキシル基に本発明化合物（担体）が結合したＣ－担体保護－Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸（又はペプチド）を作製できる。又は、本発明化合物（担体）をＴＨＦ等の溶媒に溶解し、Ｂｏｃ保護アミノ酸（又はペプチド）及び縮合剤、例えば、ＤＩＰＣＩを添加して縮合を行い、アミノ酸のカルボキシル基に担体が結合したＣ－担体保護－Ｎ－Ｂｏｃ保護アミノ酸（又はペプチド）を作製できる。

本発明化合物に対する、Ｎ－保護アミノ酸（又はペプチド）の使用量は、本発明化合物に対して、通常１．０１～４当量、好ましくは１．０３～３当量、より好ましくは１．０５～２当量、さらに好ましくは１．１～１．５当量である。この範囲より少ないと、未反応の本発明化合物が残存することがある。

本発明の分離方法の工程（１）における、アミノ酸又はペプチドと結合した本発明化合物（Ｃ－担体保護アミノ酸又はＣ－担体保護ペプチド）と、Ｎ－保護アミノ酸（又はペプチド）との縮合は、縮合剤を用いた公知の方法を用いて行うことができる。これに限定されないが、例えば、Ｃ－担体保護アミノ酸（又はペプチド）をＴＨＦ等の溶媒に溶解し、Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸（又はペプチド）、及び縮合剤、例えば、ＨＢＴＵを添加して縮合を行い、Ｃ－担体保護－Ｎ－Ｆｍｏｃ保護ペプチドを作製できる。又は、Ｃ－担体保護アミノ酸（又はペプチド）をＴＨＦ等の溶媒に溶解し、Ｂｏｃ保護アミノ酸又はＢｏｃ保護ペプチド、及び縮合剤、例えば、ＨＢＴＵを添加して縮合を行い、Ｃ－担体保護－Ｎ－Ｂｏｃ保護ペプチドを作製できる。

縮合剤としては、本技術分野において一般的に用いられる縮合剤が、本発明においても制限なく用いることができ、これに限定されないが、例えば、４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホニウムクロリド（ＤＭＴ－ＭＭ）、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、Ｏ－（６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ（６－Ｃｌ））、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、Ｏ－（６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ）、（１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ－モルホリノ－カルベニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＣＯＭＵ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、及び１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣ）を挙げることができ、好ましくは、ＤＭＴ－ＭＭ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、又はＣＯＭＵである。縮合剤の使用量は、本発明化合物に対して、通常１～４当量、好ましくは１～２当量、より好ましくは１．０５～１．３当量である。

本発明の分離方法の工程（１）において作製されたＣ－担体保護－Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸（又はペプチド）、あるいはＣ－担体保護－Ｎ－Ｂｏｃ保護アミノ酸（又はペプチド）は、分液操作により回収してもよく、また、固形化（結晶化）させて回収してもよい。以下、本発明化合物（担体）が結合したアミノ酸（Ｃ－担体保護アミノ酸）を例にして説明する。例えば、分液操作を行う場合は、これに限定されないが、縮合反応後の反応液にヘキサン、トルエン等の有機溶媒を加えて攪拌、洗浄し、分層して、水層（及び／又は親水性溶媒層）を除去することによりＣ－担体保護－Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸又はＣ－担体保護－Ｎ－Ｂｏｃ保護アミノ酸を得ることができる。また、固形化で回収する場合は、これに限定されないが、縮合反応後の反応液を、減圧下で留去し、次いで、残渣に、Ｃ－担体保護－Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸又はＣ－担体保護－Ｎ－Ｂｏｃ保護アミノ酸が固形化（結晶化）する溶媒、例えば、メタノールやアセトニトリルを添加して析出させ、沈殿物をろ過した後、溶媒で懸洗を行い、得られた固形物を乾燥してＣ－担体保護－Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸又はＣ－担体保護－Ｎ－Ｂｏｃ保護アミノ酸を得ることができる。Ｃ－担体保護―Ｎ－保護ペプチドの場合も同様に適用できる。

このようにして得られたＣ－担体保護－Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸又はＣ－担体保護－Ｎ－Ｂｏｃ保護アミノ酸はペプチド合成等の技術分野において用いられる、公知の方法を適宜参照してＮ末端保護基を除去することで、本発明化合物（担体）が結合したアミノ酸を作製することができる。例えば、これに限定されないが、Ｃ－担体保護－Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸はＴＨＦ等の溶媒に溶解し、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン（ＤＢＵ）、１，５－ジアザビシクロ［４．３．０］－５－ノネン（ＤＢＮ）、１，４－ジアザビシクロ［２．２．２］－オクタン（ＤＡＢＣＯ）、トリエチルアミン、トリブチルアミン、ピペラジン等（好ましくは、ＤＢＵ）の脱Ｆｍｏｃ試薬を添加して脱Ｆｍｏｃ反応を行い、作製できる。一方、これに限定されないが、Ｃ－担体保護－Ｎ－Ｂｏｃ保護アミノ酸はＣＰＭＥ等の溶媒に溶解し、ＴＦＡ等の脱Ｂｏｃ試薬を添加して脱Ｂｏｃ反応を行い、Ｃ－担体保護アミノ酸が作製できる。このようにして作製したＣ－担体保護アミノ酸は、分液操作又は固形化（結晶化）を行い、分離することができる。Ｃ－担体保護―Ｎ－保護ペプチドの場合も同様に適用できる。

［ペプチド合成方法］
本発明化合物は、ペプチド合成において、アミノ酸又はペプチドの保護化試薬あるいは担体としても用いることができる。よって、本発明は、ペプチド合成試薬を提供するものであり、又は本発明化合物のペプチド合成試薬としての使用も含む。さらには、本発明は、本発明化合物を用いたペプチド合成方法も含む。

本発明化合物を用いた分離方法やペプチド合成方法においては、一般に知られているアミノ酸やペプチドを制限なく用いることができる。アミノ酸は、天然のアミノ酸又は非天然のアミノ酸のいずれもよく、Ｌ型又はＤ型のいずれのアミノ酸でもよく、アミノ酸アミドなどの特殊なアミノ酸でもよい。非天然アミノ酸としては、特に制限されず、公知の非天然の任意のアミノ酸をあげることができ、これに限定されないが、例えば、Ｎ－メチル修飾アミノ酸、Ｎ－２，４－ジメトキシベンジル修飾アミノ酸、２－アミノイソ酪酸、Ｄ－１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボン酸、及び、Ｌ－オクタヒドロインドリン－２－カルボン酸を挙げることができる。また、必要に応じて天然又は非天然の又は特殊なアミノ酸の側鎖官能基を一時的に保護する保護基を用いて保護されたアミノ酸も本発明の方法において用いることが出来る。さらに、天然のアミノ酸又は非天然のアミノ酸又は特殊なアミノ酸に、公知の技術を参照して任意の修飾を加えたアミノ酸も本発明の方法において用いることができる。任意の修飾としては、特に制限されず、アミノ酸合成に関わる技術分野において、公知又は慣用の技術を用いてアミノ酸に付加できる修飾であれば制限なく用いることができる。例えば、低分子の有機化合物の付加、リン酸化、ビオチン化、ＰＥＧ化、糖鎖修飾、蛍光修飾を挙げることができる。ペプチドは、上記のアミノ酸の任意の組み合わせから構成されるものをあげることができるが、それに加え、シュードプロリン型ジペプチドやＯ－アシルイソペプチドも本発明において用いることができる。

本発明化合物を用いたペプチド合成方法は、以下の工程により行うことができる。
工程（Ａ）：有機溶媒又は有機溶媒の混合液中で、本発明化合物に由来する担体でＣ末端が保護された（以下、「Ｃ－担体保護」という）アミノ酸又はＣ－担体保護ペプチドと、Ｎ末端のアミノ基が保護された（以下、「Ｎ－保護」という）アミノ酸又はＮ－保護ペプチドとを縮合剤の存在下で縮合して、Ｃ－担体保護－Ｎ－保護ペプチドを得る工程（以下、本発明の縮合反応工程という場合がある）；
工程（Ｂ）：前記Ｃ－担体保護－Ｎ－保護ペプチドのＮ末端の保護基を脱保護してＣ－担体保護ペプチドを得る工程（以下、本発明の脱保護工程という場合がある）；及び
工程（Ｃ）：前記Ｃ－担体保護ペプチドを分離する工程（以下、本発明の分離・回収工程という場合がある）。

本発明化合物を用いたペプチド合成方法は、さらに工程（Ａ）の後に、工程（ａ１）：縮合反応後の反応液に水溶性アミンを添加する工程（以下、本発明のスカベンジ反応工程という場合がある）、を含むことができる。

本発明化合物を用いたペプチド合成方法は、工程（Ｂ）において、水溶性アミンの存在下で脱保護を行う工程とすることができる。

本発明化合物を用いたアミノ酸やペプチド合成方法は、工程（Ｃ）において、反応液に酸を添加して中和し、さらに酸性水溶液を添加して洗浄した後、分液し、水層を除去し、有機層を得てＣ－担体保護ペプチドを分離する工程（以下、本発明の酸性水溶液洗浄工程という場合がある）とすることができる。

本発明化合物を用いたアミノ酸やペプチド合成方法は、工程（Ｃ）より得られたＣ－担体保護ペプチドを用いて、工程（Ａ）～（Ｃ）の繰り返しを１回以上行うこともでき、また、前記の各工程をワンポットで行うこともできる。

本発明のペプチド合成方法の工程（Ａ）におけるＮ－保護アミノ酸（又はペプチド）におけるＮ末端の保護は、公知の保護基を用いて行うことができ、例えば、ｔ－ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ基）又は９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基をあげることができるが、好ましくはＦｍｏｃ基である。
以下、Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸（又はペプチド）を用いた例を参考に本発明のペプチド合成方法を説明する。

１．溶媒
本発明のペプチド合成方法において用いることができる溶媒は、特に制限されず、液相ペプチド合成において用いられる溶媒をあげることができる。溶媒としては、これに限定されないが、例えば、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ペンタン、ノルマルヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン、ＣＰＭＥ，ＭＴＢＥ、2－メチルＴＨＦ、４－メチルＴＨＰ、酢酸イソプロピル、クロロホルム、ＤＣＭ、ＤＭＳＯ、１,３-ジメチル-２-イミダゾリジノン、Ｎ－メチルピロリドンを挙げることができ、好ましくは、ＴＨＦ、ＤＭＦ、シクロヘキサン、ＣＰＭＥ，ＭＴＢＥ、２－メチルＴＨＦ、４－メチルＴＨＰ、酢酸イソプロピル、ＤＭＳＯ、Ｎ－メチルピロリドンをあげることができる。さらに、上記溶媒の２種以上の混合溶媒でもよい。

本発明のペプチド合成方法に用いる出発物質の調製のために、又は、本発明のペプチド合成方法を用いて合成したペプチドを回収するために、本発明化合物（担体）を固体化（結晶化）する場合は、極性溶媒を用いる。用いる極性溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトニトリル、プロピオニトリル、ＤＭＦ、ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、水等、ならびにこれら２種以上の混合溶媒が挙げられる。中でも、メタノール又はアセトニトリルが好適に使用される。

２．液相ペプチド合成用担体
本発明のペプチド合成方法で用いる担体とは、以下の式で表される不飽和アルコキシ置換芳香族化合物に由来する化合物であり、
式（Ｉ）：

（式中、Ｒは、（ＣＨ₂）nＲ₁、ＣＨ（ＣＨ_３）Ｒ₁、又はＣ（ＣＨ_３）₂Ｒ₁であり、Ｒ₁は、ヒドロキシル基、チオール基、アミノ基、アルキルアミノ基又はカルボキシル基であり、Ｒａは、同一でも異なってもよく、それぞれ独立に炭素数１４以上６０以下である不飽和炭化水素基であり、ｍは２又は３であり、ｎは１～３の自然数である。）、好ましくは、上記式において、Ｒが、（ＣＨ₂）nＲ₁で表される不飽和アルコキシ置換芳香族化合物に由来する化合物である。

本発明化合物は、好ましくは、溶解している溶媒の組成変化により、溶解状態と不溶化（結晶化又はオイル化）状態とが可逆的に変化する特性を有する化合物である。なお、本発明のペプチド合成方法の実施態様において、担体である本発明の化合物を不溶化（結晶化）して分離することもできるが、担体が不溶化することは必須ではなく、また、担体が不溶化するような溶媒の組成変化を行うことも必須ではない。担体を不溶化（結晶化）する工程としては、これに限定されないが、本発明のペプチド合成方法に用いるＣ－担体保護アミノ酸（又はペプチド）を調製する工程、又は、本発明のペプチド合成方法により得られた有機層（有機溶媒又は有機溶媒の混合物の層）に溶解したＣ－担体保護ペプチドを回収する工程をあげることができる。

３．リンカー
本発明のペプチド合成方法で用いるＣ－担体保護アミノ酸（又はペプチド）は、アミノ酸又はペプチドのカルボキシル基に、直接又はリンカーを介して本発明化合物に結合している。
ここでいうリンカーとは、リンカーの一方が、アミノ酸又はペプチドが有するカルボキシル基と結合し、他方が担体である本発明化合物の反応基（式（Ｉ）の「（ＣＨ₂）nＲ₁、ＣＨ（ＣＨ_３）Ｒ₁、又はＣ（ＣＨ_３）₂Ｒ₁」）と結合する２つの反応基をもつ有機基である。好ましくは、本発明で用いることができるリンカーは、分子量が約２０００以下（好ましくは約１５００以下、より好ましくは約１０００以下）の有機基であって、反応基として、同じでも異なってもよい、アミノ基、カルボキシル基、及びハロメチル基からなる群より選ばれる少なくとも２つの基を分子内にもつ化合物である。これらに限定されないが、例えば、以下の化合物を挙げることができる。

（式中、Ｙは１～６、好ましくは１～４の整数である）。

（式中、Ｘはハロゲン原子、好ましくは、塩素又は臭素である）。

（式中、Ｚは２～４０、好ましくは２～３５、より好ましくは、２～２８の整数である）。
（上記リンカーの構造式は、アミノ酸又はペプチドのカルボキシル基に結合する前の状態かつ担体である本発明化合物の反応基と結合する前の状態を示す）。

上記リンカーを含むＣ－担体保護アミノ酸（又はペプチド）の調製においては、リンカーへの結合の順番は特に限定されず、上記リンカーの一方をアミノ酸又はペプチドに結合した後に他方を担体である本発明化合物に結合しても良く、あるいは、上記リンカーの一方を担体である本発明化合物に結合した後に他方をアミノ酸又はペプチドに結合してもよい。
上記リンカーの一方とアミノ酸又はペプチドとの結合は、互いに結合するリンカーの基及びアミノ酸又はペプチドの基に応じて、公知の方法を適宜参照して行うことができる。例えば、これに限定されないが、ＤＩＰＣＩ／ＨＯＢｔによるアミド化を挙げることができる。
上記リンカーの一方と担体としての本発明化合物の結合は、互いに結合するリンカーの基及び担体の基に応じて、公知の方法を適宜参照して行うことができる。例えば、これに限定されないが、ＤＩＰＣＩによるエステル化を挙げることができる。

4．Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸及びＮ－Ｆｍｏｃ保護ペプチド
９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基でアミノ基が保護されたアミノ酸（Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸）又はＮ－Ｆｍｏｃ保護ペプチドとは、アミノ酸又はペプチドのアミノ基がＦｍｏｃ基で保護されており、一方、カルボキシル基は保護されておらず反応性であるアミノ酸又はペプチドを意味する。アミノ酸又はペプチドが１以上のアミノ基を有する場合は、少なくとも一つのアミノ基がＦｍｏｃ基で保護されていれば良い。
なお、Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸（又はペプチド）が、水酸基、アミノ基、グアニジル基、カルボキシル基、チオール基、インドール基、イミダゾール基等の反応性に富む官能基を有する場合、これらの官能基にペプチド合成で用いられる一般的な保護基が導入されていてもよく、反応終了後の任意の時点で、必要に応じて保護基を除去することで目的化合物を得ることができる。
水酸基の保護基としてはｔＢｕ基、Ｔｒｔ基、Ｂｚ基、アセチル基、シリル基等が挙げられ、アミノ基の保護基としては、Ｂｏｃ基、Ｆｍｏｃ基、Ｃｂｚ基、Ｔｒｔ基、Ｍｍｔ基、ｉｖＤｄｅ基等が挙げられ、グアニジル基の保護基としては、Ｐｂｆ基、Ｐｍｃ基、ニトロ基等が挙げられ、カルボキシル基の保護基としてはｔＢｕ基、メチル基、エチル基、Ｂｚ基等が挙げられ、チオール基の保護基としては、Ｔｒｔ基、Ａｃｍ基、ｔＢｕ基、Ｓ－ｔＢｕ基等が挙げられ、インドール基の保護基としては、Ｂｏｃ基等が挙げられ、イミダゾール基の保護基としては、Ｂｏｃ基、Ｂｏｍ基、Ｂｕｍ基、Ｔｒｔ基等を挙げることができる。
また、水酸基又はチオール基とα－アミノ基をアセタール架橋したシュードプロリン構造持つペプチドがＦｍｏｃで保護されたものを挙げることが出来る。
また、水酸基に対してＮ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸をエステル結合させ、α－アミノ基をＢｏｃ基で保護したＯ－アシルイソペプチドを挙げることが出来る。

5．Ｃ－担体保護アミノ酸及びＣ－担体保護アミノ酸ペプチド
本発明化合物に由来する液相ペプチド合成用担体で保護されたアミノ酸（Ｃ－担体保護アミノ酸）又はＣ－担体保護ペプチドとは、アミノ酸又はペプチドのＣ末端のカルボキシル基が上記の本発明化合物（担体）により直接又はリンカーを介して保護されており、少なくともＮ末端のアミノ基が反応性の状態であるアミノ酸又はペプチドをいう。
なお、Ｃ－担体保護アミノ酸（又はペプチド）が、水酸基、アミノ基、グアニジル基、カルボキシル基、チオール基、インドール基、イミダゾール基等の反応性に富む官能基を有する場合、これらの官能基にペプチド合成で用いられる一般的な保護基が導入されていてもよく、反応終了後に、必要に応じて保護基を除去することで目的化合物を得ることができる。
水酸基の保護基としてはｔＢｕ基、Ｔｒｔ基、Ｂｚ基、アセチル基、シリル基等が挙げられ、アミノ基の保護基としては、Ｂｏｃ基、Ｆｍｏｃ基、Ｃｂｚ基、Ｔｒｔ基、Ｍｍｔ基、ｉｖＤｄｅ基等が挙げられ、グアニジル基の保護基としては、Ｐｂｆ基、Ｐｍｃ基、ニトロ基等が挙げられ、カルボキシル基の保護基としてはｔＢｕ基、メチル基、エチル基、Ｂｚ基等が挙げられ、チオール基の保護基としては、Ｔｒｔ基、Ａｃｍ基、ｔＢｕ基、Ｓ－ｔＢｕ基等が挙げられ、インドール基の保護基としては、Ｂｏｃ基等が挙げられ、イミダゾール基の保護基としては、Ｂｏｃ基、Ｂｏｍ基、Ｂｕｍ基、Ｔｒｔ基等を挙げることができる。

６．ペプチドの合成方法
本発明のペプチド合成方法は、縮合反応工程、Ｆｍｏｃ基の脱保護工程、及びＣ－担体保護ペプチドの分離・回収工程までの各工程の間で固液分離操作を行ってもよく、あるいは、これらの一連の工程を、固液分離操作を行うことなく連続して行ってもよいが、好ましくは、固液分離操作を行うことなく連続して行う。また、本発明のペプチド合成方法においては、合成工程で発生する不純物を分液分離により軽減又は除去することができる。そのため、連続ペプチド合成方法として適している。

本発明のペプチド合成方法によるペプチドの合成の好ましい態様は、任意の工程であるスカベンジ反応工程及び／又は酸性水溶液洗浄工程を含む、以下の工程（ｉ）～（ｉｖ）を含む。以下は、アミノ基の保護基としてＦｍｏｃを用いた場合を記載しているが、保護基としてＢｏｃを用いても同様に行うことができる。
（ｉ）縮合反応工程
有機溶媒又は有機溶媒の混合液中で、縮合剤の存在下、Ｃ－担体保護アミノ酸又はＣ－担体保護ペプチドと、Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸又はＮ－Ｆｍｏｃ保護ペプチドとを縮合して、Ｃ－担体保護－Ｎ－Ｆｍｏｃ保護ペプチドを得る工程、
（ｉｉ）スカベンジ反応工程
縮合反応後の反応液に、水溶性アミン（以下、アミンスカベンジャーと呼ぶ場合がある）を添加して、アミノ酸活性エステルのスカベンジ体を形成する工程、
（ｉｉｉ）脱Ｆｍｏｃ工程
水溶性アミンの存在下で保護されたＮ末端からＦｍｏｃ基を脱保護する工程、及び
（ｉｖ）酸性水溶液洗浄工程
反応液に酸を添加して中和し、さらに酸性水溶液を添加し洗浄した後、分液し、水層を除去し、Ｃ－担体保護ペプチドを含む有機溶媒層を回収する工程。

上記工程は、Ｃ－担体保護アミノ酸又はＣ－担体保護ペプチド、Ｃ－担体保護－Ｎ－Ｆｍｏｃ－担体保護ペプチドの固形化（結晶化）を伴う固液分離操作を必要としないので、ワンポットで行うことができる。
さらに、上記工程を行うことにより、合成反応の開始時に比べアミノ酸又はペプチドが付加されたＣ－担体保護ペプチドが有機層に溶解された状態で回収できる。また、Ｃ－担体保護ペプチドが溶解した有機層からは不純物が軽減又は除去されているので、そのままの状態で、次のペプチド合成反応を続けて行うことができる。
よって、本発明化合物を用いたペプチド合成方法の一つの態様として、上記工程（ｉ）～（ｉｖ）の工程を必要回数繰り返す工程からなる、ペプチド合成方法を挙げることができる。本発明の方法を用いることにより、連続するペプチド合成をワンポットで行うことができる。

本発明のペプチド合成方法の工程（ｉ）におけるＣ－担体保護アミノ酸又はＣ－担体保護ペプチドは、ペプチド合成において用いられる公知の方法を適宜参照して作製することができる。以下、Ｃ－担体保護アミノ酸を例にして説明する。例えば、本発明化合物（担体）は、アミノ酸のカルボキシル基に、直接又はリンカーを介して結合させることができる。これに限定されないが、例えば、担体化合物をＴＨＦ等の溶媒に溶解し、Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸、及び縮合剤、例えば、ＤＩＰＣＩを添加して縮合を行い、アミノ酸のカルボキシル基に担体が結合した中間体であるＣ－担体保護－Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸を作製できる。又は、担体化合物をＴＨＦ等の溶媒に溶解し、Ｂｏｃ保護アミノ酸、及び縮合剤、例えば、ＤＩＰＣＩを添加して縮合を行い、アミノ酸のカルボキシル基に担体が結合した中間体であるＣ－担体保護－Ｎ－Ｂｏｃ保護アミノ酸を作製できる。

作製されたＣ－担体保護－Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸又はＣ－担体保護－Ｎ－Ｂｏｃ保護アミノ酸は、好ましくは、固形化（結晶化）させて回収することにより、高純度で得ることができる。例えば、これに限定されないが、Ｃ－担体保護－Ｎ－Ｆｍｏｃ（又はＢｏｃ）保護アミノ酸を含んだ反応液を、減圧下で留去し、次いで、残渣に、Ｃ－担体保護－Ｎ－Ｆｍｏｃ（又はＢｏｃ）保護アミノ酸が固形化（結晶化）する溶媒、例えば、メタノールやアセトニトリルを添加して析出させ、沈殿物をろ過した後、溶媒で懸洗を行い、得られた固形物を乾燥してＣ－担体保護－Ｎ－Ｆｍｏｃ（又はＢｏｃ）保護アミノ酸として得ることができる。

このようにして得られたＣ－担体保護－Ｎ－Ｆｍｏｃ（又はＢｏｃ）保護アミノ酸はペプチド合成において用いられる、公知の方法を適宜参照してＮ末端保護基を除去することで、Ｃ－担体保護アミノ酸を作製することができる。例えば、これに限定されないが、Ｃ－担体保護－Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸をＴＨＦ等の溶媒に溶解し、ＤＢＵ、ピペラジン等の脱Ｆｍｏｃ試薬を添加して脱Ｆｍｏｃ反応を行うことができる。又はＣ－担体保護－Ｎ－Ｂｏｃ保護アミノ酸をＣＰＭＥ等の溶媒に溶解し、ＴＦＡ等の脱Ｂｏｃ試薬を添加して脱Ｂｏｃ反応を行うことができる。

このようにして得られたＣ－担体保護アミノ酸は、溶液状態で調製できるので、そのままの状態で、本発明の工程（ｉｖ）と同様の酸性水溶液洗浄工程に供することが可能であり、酸性水溶液洗浄を行った後のＣ－担体保護アミノ酸を、本発明の方法の工程（ｉ）の原料として本発明の方法に用いることができる。かかる場合は、Ｃ－担体保護アミノ酸の調製工程も含めて、ワンポットでのペプチド合成が可能である。

また、必要に応じて、得られたＣ－担体保護アミノ酸は、固形化（結晶化）させて回収することもできる。例えば、これに限定されないが、Ｃ－担体保護アミノ酸を含んだ反応液を、減圧下で留去し、次いで、残渣に、担体が固形化（結晶化）する溶媒、例えば、メタノールやアセトニトリルを添加して析出させ、沈殿物をろ過した後、溶媒で懸洗を行い、得られた固形物を乾燥してＣ－担体保護アミノ酸として得ることができる。

このようにして得たＣ－担体保護アミノ酸を出発物質として、本発明のペプチド合成方法に用いることができる。
よって、本発明のペプチド合成方法の一つの態様として、上記工程（ｉ）～（ｉｖ）の前に、Ｃ－担体保護アミノ酸の調製工程をさらに含むペプチド合成方法を挙げることができる。

本発明のペプチド合成方法を用いて得たＣ－担体保護ペプチドは、ペプチド合成分野で用いられている公知の方法を用いて回収できる。例えば、結晶化させることにより溶媒中から回収できる。例えば、これに限定されないが、得られたＣ－担体保護ペプチドを含んだ有機層を、減圧下で溶媒留去し、次いで、残渣に、貧溶媒、例えば冷アセトニトリルを添加して析出させ、沈殿物をろ過した後、溶媒で懸洗を行い、得られた固形物を乾燥して合成した担体保護ペプチドを得ることができる。
よって、本発明のペプチド合成方法の一つの態様として、上記工程（ｉ）～（ｉｖ）の後に、Ｃ－担体保護ペプチドを晶析・分離する工程を含むペプチド合成方法を挙げることができる。

以下、それぞれの工程について説明する。なお、以下の説明においては、Ｃ－担体保護ペプチドとＮ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸を例として記載しているが、Ｃ－担体保護ペプチドは、本発明において用いることができるＣ－担体保護アミノ酸又はＣ－担体保護ペプチドの例示であり、Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸は、本発明において用いることができるＮ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸又はＮ－Ｆｍｏｃ保護ペプチドの例示である。

６－１．縮合反応工程
本工程では、溶媒中において、Ｃ－担体保護ペプチドと、Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸と、縮合剤（好ましくは縮合剤及び活性化剤）とを混合することによって、アミノ酸残基数が伸長したＣ－担体保護－Ｎ－Ｆｍｏｃ保護ペプチドが得られる。
各成分の添加の方法や順序は、特に制限なく行うことができ、ペプチド合成における縮合工程において通常用いられている方法を用いることができる。

担体保護ペプチドに対する、Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸の使用量は、Ｃ－担体保護ペプチドに対して、通常１．０１～４当量、好ましくは１．０３～３当量、より好ましくは１．０５～２当量、さらに好ましくは１．１～１．５当量である。この範囲より少ないと、未反応の担体保護ペプチドが残りやすく、アミノ酸の欠落を起こし易くなる。本発明のペプチド合成方法では、未反応のアミノ酸の活性エステルをその後に添加する水溶性アミンでスカベンジして（捕獲して）不活性化することができる。そのため、より多くのＮ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸を用いても、従来の方法に比べ残存の問題が生じない。

縮合剤としては、ペプチド合成において一般的に用いられる縮合剤が、本発明においても制限なく用いることができ、これに限定されないが、例えば、４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホニウムクロリド（ＤＭＴ－ＭＭ）、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、Ｏ－（６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ（６－Ｃｌ））、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、Ｏ－（６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ）、（１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ－モルホリノ－カルベニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＣＯＭＵ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、及び１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣ）を挙げることができ、好ましくは、ＤＭＴ－ＭＭ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、又はＣＯＭＵである。縮合剤の使用量は、担体保護ペプチドに対して、通常１～４当量、好ましくは１～２当量、より好ましくは１．０５～１．３当量である。

縮合工程において、反応を促進し、ラセミ化などの副反応を抑制するために、好ましくは、活性化剤が添加される。ここで活性化剤とは、縮合剤との共存化で、アミノ酸を、対応する活性エステル、対称酸無水物などに導いて、ペプチド結合（アミド結合）を形成させやすくする試薬である。活性化剤としては、ペプチド合成において一般的に用いられる活性化剤が、本発明においても制限なく用いることができ、例えば、ＨＯＢｔ、ＨＯＣｔ、ＨＯＡｔ、ＨＯＯＢｔ、ＨＯＳｕ、ＨＯＰｈｔ、ＨＯＮｂ、ペンタフルオロフェノール、シアノ（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル（Ｏｘｙｍａ）等を挙げることができ、好ましくは、ＨＯＢｔ、ＨＯＯＢｔ、ＨＯＣｔ、ＨＯＡｔ、ＨＯＮｂ、ＨＯＳｕ、Ｏｘｙｍａである。活性化剤の使用量は、担体保護ペプチドに対して、通常１～４当量、好ましくは１～２当量、より好ましくは１．０５～１．３当量である。
縮合工程で使用する溶媒は、ペプチド合成において一般的に用いられる溶媒が、本発明においても制限なく用いることができ、これに限定されないが、例えば、前記した溶媒が例示される。溶媒の使用量は、担体保護ペプチド等を溶解した濃度が、通常０．１ｍＭ～１Ｍとなる量であり、好ましくは１ｍＭ～０．５Ｍとなる量である。

反応温度は、ペプチド合成において一般的に用いられる温度が、本発明においても用いられ、例えば、通常－２０～４０℃、好ましくは０～３０℃の範囲内である。反応時間（１サイクルの時間）は、通常０．５～３０時間である。

６－２．スカベンジ反応工程
本発明のペプチド合成方法は、アミノ酸の縮合反応工程の後に、水溶性アミンを反応系に添加して、未反応のアミノ酸活性エステルをスカベンジ（捕獲）する工程を追加することができる。本工程において、水溶性アミンはアミノ酸活性エステルと結合してスカベンジ体を形成し、活性エステルを不活性化する。本明細書においては、本発明で用いる水溶性アミンを、アミンスカベンジャーと称する場合がある。
本発明において用いることができるスカベンジャーとしての水溶性アミンは、好ましくは、１級又は２級のアミノ基を少なくとも１つ持つ２価以上の水溶性アミンであり、例えば、１－メチルピペラジン、４－アミノピペリジン、ジエチレントリアミン、トリアミノエチルアミン、１－エチルピペラジン、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン、エチレンジアミン、ピペラジンを挙げることができ、好ましくは、１－メチルピペラジン、４－アミノピペリジン、ジエチレントリアミン、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン、エチレンジアミンであり、より好ましくは、１－メチルピペラジン、４－アミノピペリジン、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン、ジエチレントリアミンであり、さらに好ましくは、１－メチルピペラジンである。ここで、２価以上の水溶性アミンとは、２つ以上のアミノ基を有する水溶性アミンを意味する。

工程（ｉｉ）における水溶性アミンの添加量は、理論上残存するアミノ酸当量に対して、通常１～１０当量、好ましくは１～６当量、より好ましくは１～４当量である。アミンの添加量がこの範囲より少ないと、アミノ酸活性エステルのスカベンジ（捕獲）が不充分となり、残存したアミノ酸活性エステルと次工程（ｉｉｉ）の際に再生したアミノ基が反応するダブルヒットが起こり、純度、収率を低下させ、一方、この範囲より多いと、同時に脱Ｆｍｏｃ反応が進行し、残存しているアミノ酸活性エステルが再生したアミノ基と反応するダブルヒットが起こり、純度、収率を低下させる。
本発明のペプチド合成方法においては、本工程を追加することにより、次の工程であるＮ－Ｆｍｏｃ－担体保護ペプチドからのＦｍｏｃ基の除去を、反応系中のアミノ酸活性エステルをアミンスカベンジャーによりスカベンジ（捕獲）してスカベンジ体を形成させた後に行うことができる。これにより、脱Ｆｍｏｃ反応時においては、反応液中のアミノ酸活性エステルが不活性化されており、それらを反応系から取り除かなくても脱保護時にアミノ酸のダブルヒットを防ぐことができる。また、水溶性アミンに捕捉されたアミノ酸活性エステルは、後の洗浄工程において容易に除去できる。

６－３．脱Ｆｍｏｃ工程
本発明のペプチド合成方法においては、Ｃ－担体保護－Ｎ－Ｆｍｏｃ保護ペプチドからＦｍｏｃ基の除去を行う。Ｎ末端からのＦｍｏｃ基の除去は、ペプチド合成において一般的に用いられる除去方法が、必要に応じて適宜変更して本発明において用いることができる。本発明において用いることができる脱Ｆｍｏｃ試薬としては、これに限定されないが、例えば、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン（ＤＢＵ）、１，５－ジアザビシクロ［４．３．０］－５－ノネン（ＤＢＮ）、１，４－ジアザビシクロ［２．２．２］－オクタン（ＤＡＢＣＯ）、トリエチルアミン、トリブチルアミンを挙げることができ、好ましくは、ＤＢＵである。

Ｆｍｏｃ基の除去は、水溶性アミンの存在下で行うのが好ましく、さらには、本工程において水溶性アミンを反応系に追加で添加するのが好ましい。本工程において用いることができる水溶性アミンは、好ましくは、１級又は２級のアミノ基を少なくとも１つ持つ２価以上の水溶性アミンであり、例えば、１－メチルピペラジン、４－アミノピペリジン、ジエチレントリアミン、トリアミノエチルアミン、１－エチルピペラジン、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン、エチレンジアミン、ピペラジンを挙げることができ、好ましくは、１－メチルピペラジン、４－アミノピペリジン、ジエチレントリアミンであり、より好ましくは、１－メチルピペラジンである。本工程における水溶性アミンは、工程(ｉｉ)（スカベンジ反応工程）で添加した水溶性アミンと同じでも異なってもよい。
本工程（ｉｉｉ）において添加する水溶性アミンの当量は、系に存在するＦｍｏｃ基の量に対して、５～３０当量、好ましくは５～２０当量、より好ましくは１０～２０当量である。アミンの添加量がこの範囲より少ないと、脱Ｆｍｏｃ反応により生じるジベンゾフルベン（ＤＢＦ）のスカベンジ（捕獲）が不充分となり、不純物を後の酸性水溶液洗浄工程で除去しにくくなり、一方、この範囲より多いと、中和に要する酸の量が増大し、それに伴う中和工程によって副反応（分解、ラセミ化）が起き、純度低下、収率減少の原因となる。

本工程は水溶性アミンの存在下で脱Ｆｍｏｃ反応を行うが、系に存在する水溶性アミンが脱Ｆｍｏｃ試薬としての機能を有する場合は、他の脱Ｆｍｏｃ試薬を系に添加しなくてもよい。一方、効率よく脱Ｆｍｏｃ反応を行うために他の脱Ｆｍｏｃ試薬を系に添加してもよい。脱Ｆｍｏｃ試薬としての機能を有する水溶性アミンとして、例えば、上記で例示した水溶性アミンを挙げることができる。好ましくは、本工程では、水溶性アミンとともに脱Ｆｍｏｃ試薬が添加される。
本工程において水溶性アミンとともに脱Ｆｍｏｃ試薬を反応系に添加する場合は、水溶性アミンと脱Ｆｍｏｃ試薬の添加は、同時に系に添加してもよく、あるいは、水溶性アミンを系に添加した後、脱Ｆｍｏｃ試薬を添加してもよい。ここでいう、同時とは、本技術分野における反応において同時と考えられる範囲内で前後して添加することを含む意味である。なお、水溶性アミンを系に添加した後に脱Ｆｍｏｃ試薬を添加する場合、添加間隔の時間は、操作やその他の要因を考慮して、適宜調整できる。
脱Ｆｍｏｃ反応時には、ＤＢＦが生じるが、本工程で添加した水溶性アミンは、これらの不純物をスカベンジ（捕捉）することができる。水溶性アミンに捕捉されたＤＢＦは、後の酸性水溶液洗浄工程において容易に除去できる。

６－４．酸性水溶液洗浄工程
工程（ｉｖ）の中和工程により、系に存在する過剰な塩基、スカベンジ体を塩に変え、それらの水溶性を向上させることができる。中和に使用する酸としては、反応液中の塩基を中和できるものであれば特に限定されないが、例えば、塩化水素、リン酸、酢酸、硫酸等の水溶液が挙げられる。例えば、塩酸を用いる場合は、これに限定されないが、１Ｎ～１２Ｎ、好ましくは２Ｎ～１２Ｎ、より好ましくは５Ｎ～１２Ｎの塩酸を添加する。
ここでいう中和とは、反応液が中性のｐＨになれば良く、ｐＨが７．０以下になってもよい。

工程（ｉｖ）においては、酸で中和した反応中和液に、さらに、酸性水溶液を加え、洗浄し、次いで、分液して、水層を廃棄し、有機層を回収する。これにより、酸性水溶液に溶解性の不純物を除くことができる。
用いる酸性水溶液は、特に限定されないが、例えば、塩酸水、希硫酸、リン酸水溶液、酢酸水溶液が挙げられ、好ましくは、塩酸水である。酸性水溶液のｐＨは、１～５、好ましくは１～４、より好ましくは１～３である。
洗浄に用いる酸性水溶液は、添加量は洗浄効果を示す限り特に制限がないが、反応液に対して、０．１～３倍量、好ましくは０．５～２倍量、より好ましくは０．８～１．５倍量で用いることができる。
洗浄、分液、水層の廃棄工程は、回数に制限なく、１回でもよくまた複数回行ってもよい。回数は、反応系中の化合物の種類や不純物の量、及び目的に応じて、適宜選択される。

本発明においては、工程（ｉｖ）の酸性水溶液の洗浄により不純物を除くことができる。酸性水溶液の分液操作により、例えば、Ｈ₂Ｎ－ＡＡｘ－アミン（スカベンジャー）結合体（ＡＡはアミノ酸を示し、ｘはその数を示す）、縮合剤分解物、ｐＨ調整塩基、ＤＢＦ－アミン（スカベンジャー）結合体、アミン（スカベンジャー）、脱Ｆｍｏｃ試薬などの不純物を除去することができ、不純物が軽減又は除去された反応系に溶解した担体保護ペプチドを得ることができる。
また、水溶液を用いた分液操作は、簡便であり、工程時間の短縮に寄与する。更には、固液分離操作が必要でなく担体保護ペプチドの固形化のための貧溶媒の使用を削減できる。
なお、本発明の方法を用いた連続するペプチド合成では、最後のサイクルにおいて、脱Ｆｍｏｃ工程後に、酸で中和した後、担体保護ペプチドを固形化（結晶化）して、固液分離操作を用いて担体保護ペプチドを回収してもよいが、不純物のより完全な除去の観点より、酸性水溶液による洗浄を行うのが好ましい。

本発明のペプチド合成方法の一態様においては、縮合工程及び脱Ｆｍｏｃ工程において生じる不純物を軽減又は除去するための酸性水溶液での洗浄工程を含むが、C－担体保護ペプチドを有機溶媒中に溶解された状態で回収することを妨げない限り、他の洗浄工程を追加してもよい。例えば、弱塩基性水溶液での洗浄や食塩水での洗浄を挙げることができる。また、食塩水での洗浄に代えて無水硫酸ナトリウム等の脱水剤を加えて脱水することもできる。弱塩基性水溶液での洗浄は、例えば、ｐＨ８～１２（好ましくは８～１０）の炭酸水素ナトリウム水溶液、炭酸ナトリウム水溶液、又は炭酸カリウム水溶液での洗浄を挙げることができる。

７．Ｃ－担体保護ペプチドの晶析・分離工程
本発明のペプチド合成方法で合成したＣ－担体保護ペプチドは、工程（ｉｖ）の酸による中和後、好ましくは工程（ｉｖ）の酸性水溶液による分液操作の後に、不溶化して（例えば、結晶化又はオイル化させて）分離することができる。または、本発明の方法を用い、工程（ｉ）～（ｉｖ）を必要回数繰り返して合成したＣ－担体保護ペプチドは、工程（ｉ）の後、Ｎ末端を脱保護しない場合は工程（ｉｉｉ）を行わず、工程（ｉ）以降の任意の工程後に不溶化して分離することができる。不溶化は、Ｃ－担体保護ペプチドが溶解している溶媒を濃縮して固化させる方法、あるいは溶媒の組成変化により不溶化（結晶化又はオイル化）させる方法をあげることができる。溶媒の組成変化により不溶化させる場合は、溶解状態と不溶化状態とが可逆的に変化する特性を有する担体を用いるペプチド合成分野において公知の方法を適宜参照して行うことができる。

８．担体脱保護工程
担体脱保護は、本発明の方法で合成したＣ－担体保護ペプチドにおいて、ペプチドに直接又はリンカーを介して結合した担体を、切り離すことにより行う。
担体が直接、ペプチドに結合している場合は、担体脱保護は、合成したペプチドのカルボキシル基に結合した担体を除去（脱保護）することによって行うことができる。
担体の除去の方法は特に限定はなく、公知の脱保護法を使用すればよいが、好ましくは酸処理により行われる。例えば、ＴＦＡを用いた脱保護法を用いることができ、より具体的には、以下の担体Ａ又はＤを用いた場合は５０～１００％トリフルオロ酢酸で、担体Ｂ又はＥを用いた場合は１～１００％トリフルオロ酢酸で、担体Ｃを用いた場合は９５～１００％トリフルオロ酢酸で脱保護するのが好ましい。

本発明の方法において、担体がリンカーを介してペプチドに結合している場合は、担体の脱保護は、（ｉ）リンカーとペプチドの間の結合を切断することにより行う、又は、（ｉｉ）リンカーと担体の間の結合を切断することにより行う、のいずれでもよい。後者の場合は、ペプチドはリンカーをもった状態で担体から切り離され、末端又は側鎖がリンカーにより修飾されたペプチドを得ることができる。
（ｉ）の場合における担体脱保護は、これに限定されないが、例えば、エステル結合又はアミド結合によりリンカーとペプチドが結合している場合は、ＴＦＡを用いた脱保護法により行うことができる。
（ｉｉ）の場合における担体脱保護は、上記の直接結合した場合における脱保護法を用いることができる。

９．Ｃ末端修飾ペプチドの合成
Ｃ末端のアミド化は、生物活性があるペプチドで頻繁に見られる修飾であり、例えば、カルシトニン、カストリン、セクレチン、ホルモン放出因子などを挙げることができる。本発明のペプチド合成方法を用いて、アミノ基を含む反応基を有する担体を使用することにより、Ｃ末端がアミド化されたペプチドを効率良く合成することができる。
例えば、本発明の方法において、任意のアミノ酸又はペプチドのカルボキシル基末端に、カルボキシル基と結合するアミノ基を反応性基として持つ本発明化合物（担体）が結合したＣ－担体保護アミノ酸（又はペプチド）を用いることにより、Ｃ末端がアミド化された、例えば、アミノ基やアミノアルキル基で修飾されたペプチドを得ることができる。アミド担体としては、反応基にアミノ基又はアルキルアミノ基を有する本発明の化合物を挙げることができる。

このような本発明化合物（担体）を用いることにより、アミノ基又はアルキルアミノ基でＣ末端が修飾されたペプチドを得ることができる。これに限定されないが、例えば、Ｃ末端のプロリンがアミノエチル化されたペプチドを得ることができる。本発明の一態様として、アミド担体を用いた本発明の方法は、Ｃ末端のアミド化されたペプチドの合成において有用である。

本発明のペプチド合成方法を用いて得られたペプチドは、ペプチド合成で常用される方法に従って、単離精製することができる。例えば、反応混合物を抽出洗浄、晶析、クロマトグラフィーなどによって、目的物であるペプチドを単離精製することができる。

本発明のペプチド合成方法により製造されるペプチドは特に限定されないが、ペプチドのアミノ酸残基数が、例えば、数十以下程度であることが好ましい。本発明のペプチド合成方法によって得られるペプチドは、既存の又は未知の合成ペプチドや天然ペプチドと同様に、様々な分野、例えばこれに限定されないが、医薬、食品、化粧品、電子材料等の分野に利用できる。

以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
以下の実施例のようにして本発明の担体（ＴＡＧ）を合成した。
（実施例１）2,4-Di-{(Z)-octadec-9-enyloxy)}benzylalcohol（１）の合成
（１－１）Oleyl-OH（１）の合成

Oleic Acid（１４．２６ｇ、５０．００ｍｍｏｌ）を、ＬｉＡｌＨ_４（２．８５０ｇ、７５．００ｍｍｏｌ）が入っている脱水ＴＨＦ（２５０ｍＬ）に氷浴上で加え、室温で１９時間攪拌させた。反応終了後、反応液を冷やしながら１Ｎ ＨＣｌ（４ｍＬ）を水（１０ｍＬ）で希釈した水溶液を加え、１０分間攪拌した。静置して沈殿が落ち着いたら、ＥｔＯＡｃでセライトろ過に供した。ろ液を０．５Ｎ ＮａＨＣＯ_３ａｑ．（２０ｍＬ）で洗い、水層をＥｔＯＡｃで抽出した後、１７％ ＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４を加えて乾燥させた。ろ過後、ろ液を減圧濃縮し、化合物１を収率９０％(１２．２２ｇ、４５．５０ｍｍｏｌ)で得た。

（１－２）Oleyl-Br（２）の合成

Oleyl-OH（化合物１、１２．２２ｇ、４５．５０ｍｍｏｌ）を脱水ＤＣＭ（２５０ｍＬ）に溶解させ、溶液を冷やしながらＰＰｈ_３（１４．３２g、５４．６０ｍｍｏｌ）及びＣＢｒ_４（２２．６３g、６８．２５ｍｍｏｌ）を加え、室温で１７時間撹拌した。反応終了後、反応液を減圧濃縮し、ＭｅＣＮとヘキサンで抽出した。ヘキサン層を減圧濃縮した後、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１）で精製し、化合物２を定量的に（１５．０８ｇ、４５．５０ｍｍｏｌ）得た。

（１－３）2,4-Di-{(Z)-octadec-9-enyloxy)}benzylalcohol（３）の合成

2,4-Dihydroxybenzaldehyde（１７．９６ｇ、１３．００ｍｍｏｌ）を脱水ＤＭＦ（２７ｍＬ）に溶解させ、そこに乳鉢で砕いたＫ_２ＣＯ_３（５．７５ｇ、４１．６０ｍｍｏｌ）及びOleyl-Br（２、１０．７７ｇ、３２．５０ｍｍｏｌ）を加え、１１０℃で２１時間撹拌した。反応終了後、ヘキサンと１７％食塩水で抽出し、有機層を減圧濃縮した。濃縮物を脱水ＴＨＦ（６０ｍＬ）及び脱水２－プロパノール（２４ｍＬ）の混合溶媒に溶解させ、ＮａＢＨ_４（０．７４ｇ、１９．５０ｍｍｏｌ）を加え、室温で１８．５時間撹拌した。ヘキサンと１７％食塩水で抽出し、有機層を減圧濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１）で精製し、化合物３を収率５２％（４．３７ｇ、６．８１ｍｍｏｌ）で得た。

（実施例２）2,5-Di-{(Z)-octadec-9-enyloxy)}benzylalcohol（４）の合成

2,5-Dihydroxybenzaldehyde（６９．１ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を脱水ＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解させ、そこに乳鉢で砕いたＫ_２ＣＯ_３（２２１．１ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ）及びOleyl-Br（２、４１４．２ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）を加え、１１０℃で７２時間撹拌した。反応終了後、ヘキサンと１７％食塩水で抽出し、有機層を減圧濃縮した。濃縮物を脱水ＴＨＦ（２．５ｍＬ）及び脱水２－プロパノール（１．０ｍＬ)の混合溶媒に溶解させ、ＮａＢＨ_４（２８．４ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。ヘキサンと１７％食塩水で抽出し、有機層を減圧濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１）で精製し、化合物４を収率７３％（１４１．８ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ)で得た。

（実施例３）2,4,5-Tri-{(Z)-octadec-9-enyloxy)}benzylalcohol（５）の合成

2,4,5-Trihydroxybenzaldehyde（３０８．２ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）を脱水ＤＭＦ（６．５ｍＬ）に溶解させ、そこに乳鉢で砕いたＫ_２ＣＯ_３（３７０３．９ｍｇ、２６．８０ｍｍｏｌ）及びOleyl-Br（２、２５８４．８ｍｇ、７．８０ｍｍｏｌ）を加え、１１０℃で２４時間撹拌した。反応終了後、ヘキサンと１７％食塩水で抽出し、有機層を減圧濃縮した。濃縮物を脱水ＴＨＦ（１２．５ｍＬ)及び脱水２－プロパノール（５．０ｍＬ）の混合溶媒に溶解させ、ＮａＢＨ_４（１１３．５ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間撹拌した。ヘキサンと１７％食塩水で抽出し、有機層を減圧濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１）で精製し、化合物５を収率４０％（７２７．５ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）で得た。

（実施例４）3,5-Di-{(Z)-octadec-9-enyloxy)}benzylalcohol（６）の合成

Methyl 3,5-Dihydroxy benzoate（５０４．４ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ)を脱水ＤＭＦ（１５ｍＬ)に溶解させ、そこに乳鉢で砕いたＫ_２ＣＯ_３（３２３４．０ｍｇ、２３．４０ｍｍｏｌ）及びOleyl-Br（２、２９８２．４ｍｇ、９．００ｍｍｏｌ）を加え、１１０℃で４４．５時間撹拌した。反応終了後、ヘキサンと１７％食塩水で抽出し、有機層を減圧濃縮した。濃縮物を、ＬｉＡｌＨ_４（２６１．９ｍｇ、６．９０ｍｍｏｌ)が入っている脱水ＴＨＦ（６０ｍＬ）に氷浴上で加え、４５℃で３時間攪拌させた。反応終了後、反応液を冷やしながら１Ｎ ＨＣｌ（４ｍＬ）を水（１０ｍＬ）で希釈した水溶液を加え、１０分間攪拌した。静置して沈殿が落ち着いたら、ＴＨＦでセライトろ過に供した。ろ液を０．５Ｎ ＮａＨＣＯ_３ａｑ．（２０ｍＬ）で洗い、水層をヘキサンで抽出した後、ろ液を減圧濃縮した。カラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝９５：５）で精製し、化合物６を収率５７％（１０９１．９ｍｇ、１．７０ｍｍｏｌ）で得た。

（実施例５）3,4,5-Tri-{(Z)-octadec-9-enyloxy)}benzylalcohol（７）の合成

Methyl gallate（５５２．５ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ)を脱水ＤＭＦ（１２ｍＬ）に溶解させ、そこに乳鉢で砕いたＫ_２ＣＯ_３（５５５５．８ｍｇ、４０．２０ｍｍｏｌ）及びOleyl-Br（２、３８７７．２ｍｇ、１１．７０ｍｍｏｌ）を加え、１１０℃で４５．５時間撹拌した。反応終了後、ヘキサンと１７％食塩水で抽出し、有機層を減圧濃縮した。濃縮物を、ＬｉＡｌＨ_４（５３５．１ｍｇ、１４．１０ｍｍｏｌ）が入っている脱水ＴＨＦ（６７ｍＬ）に氷浴上で加え、４５℃で４時間攪拌させた。反応終了後、反応液を冷やしながら１Ｎ ＨＣｌ（４ｍＬ）を水（１０ｍＬ）で希釈した水溶液を加え、１０分間攪拌した。静置して沈殿が落ち着いたら、ＴＨＦでセライトろ過に供した。ろ液を０．５Ｎ ＮａＨＣＯ_３ａｑ．（２０ｍＬ）で洗い、水層をヘキサンで抽出した後、ろ液を減圧濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１）で精製し、化合物７を収率３１％（８４４．０ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）で得た。

（実施例６）2,4-Di-{(Z)-octadec-9-enyloxy)}benzylazide（８）の合成

2,4-Di-{(Z)-octadec-9-enyloxy)}benzylalcohol（化合物３、３２０.５ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）をモレキュラーシーブで脱水させたトルエン（５ｍＬ）に溶解させ、そこにＤＢＵ（２２４μＬ、１．５０ｍｍｏｌ）及びＤＰＰＡ（３２３μＬ、１．５０ｍｍｏｌ）を加え、６０℃で７５分間撹拌した。反応終了後、ろ過によってモレキュラーシーブを除去し、減圧濃縮した。濃縮物をシクロヘキサン：ヘキサン＝1：1の混合溶媒に溶かし、アセトニトリルで洗浄した。トルエン共沸させ濃縮した後、トルエン：ヘキサン＝１：３の混合溶媒に溶かし、シリカゲルを加え、４０℃で２０分間撹拌した。綿ろ過によってシリカゲルを除去し、減圧濃縮・乾燥させ、化合物８を収率８８％（２９４．１ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）で得た。

（実施例７）2,4-Di-{(Z)-octadec-9-enyloxy)}benzylamine（９）の合成

2,4-Di-{(Z)-octadec-9-enyloxy)}benzylazide（化合物８、１３３２．１ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）をトルエン（４０ｍＬ）に溶解させ、そこに水（７２０μＬ、４０．０ｍｍｏｌ）及びＰｈ_３Ｐ（２０９８．３ｍｇ、８．００ｍｍｏｌ）を加え、６０℃で１．５時間撹拌した。反応終了後は減圧濃縮し、ヘキサンとアセトニトリルで抽出し、ヘキサン層を減圧濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１）で精製し、化合物９を収率９４％（１２０３．４ｍｇ、１．８８ｍｍｏｌ）で得た。

（実施例８）2,4-Di-{(Z)-octadec-9-enyloxy)}benzyl ethylamine 塩酸塩（１０）の合成

2,4-Dihydroxybenzaldehyde（１３８．１ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）を脱水ＤＭＦ（２ｍＬ)に溶解させ、そこに乳鉢で砕いたＫ_２ＣＯ_３（４４２．３ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ)及びOleyl-Br（２、８２８．５ｍｇ、２．５０ｍｍｏｌ）を加え、１１０℃で２１時間撹拌した。反応終了後、ヘキサンと１７％食塩水で抽出し、有機層を減圧濃縮した。濃縮物を脱水ＴＨＦ（１４ｍＬ）及び脱水ＤＭＦ（６ｍＬ）の混合溶媒に溶解させ、そこにEthylamine Hydrochloride（４０７．７ｍｇ、５．００ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１７４２μＬ、１０．０ｍｍｏｌ）、硫酸マグネシウムを加え、そこに酢酸をｐＨ ５になるまで添加し、室温で１．５時間撹拌した。反応液にＮａＢＨ（ＯＡｃ）_３（１６９５．５ｍｇ、８．００ｍｍｏｌ）を４回に分けて加え、室温でさらに８０分間撹拌した。反応終了後、ＴＨＦに反応液を溶かしてセライトろ過し、ろ液にシクロヘキサンを加えた。この溶液を０．１Ｎ ＨＣｌａｑ．及び１７％ ＮａＣｌａｑ．で洗浄し、有機層を減圧濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）で精製し、化合物１０を収率３６％（２５０．５ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）で得た。

（実施例９）2,4-Di-{(Z)-hexadec-9-enyloxy)}benzylalcohol（１３）の合成
（９－１）(Z)-Hexadec-9-en-1-ol（１１）の合成

cis-9-Hexadecenoic acid（２７９８．５ｍｇ、１１．００ｍｍｏｌ）を、ＬｉＡｌＨ_４（６２６．２ｍｇ、１６．５０ｍｍｏｌ）が入っている脱水ＴＨＦ（１００ｍＬ）に氷浴上で加え、室温で２時間攪拌させた。反応終了後、反応液を冷やしながら１Ｎ ＨＣｌ（４ｍＬ）を水（１０ｍＬ）で希釈した水溶液を加え、１０分間攪拌した。静置して沈殿が落ち着いたら、ＥｔＯＡｃでセライトろ過に供した。ろ液を０．５Ｎ ＮａＨＣＯ_３ａｑ．で洗い、水層をＥｔＯＡｃで抽出した後、１７％ ＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４を加えて乾燥させた。ろ過後、ろ液を減圧濃縮し、化合物１１を収率９６％（２５３９．０ｍｇ、１０．５６ｍｍｏｌ）で得た。

（９－２）(Z)-16-Bromohexadec-7-ene（１２） の合成

(Z)-Hexadec-9-en-1-ol（化合物１１、２４０４．３ｍｇ、１０．００ｍｍｏｌ）を脱水ＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶解させ、溶液を冷やしながらＰＰｈ_３（３１４７．５ｍｇ、１２．００ｍｍｏｌ）及びＣＢｒ_４（４９７４．５ｍｇ、１５．００ｍｍｏｌ）を加え、室温で２１時間撹拌した。反応終了後、反応液を減圧濃縮し、ＭｅＣＮとヘキサンで抽出した。ヘキサン層を減圧濃縮した後、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１)で精製し、化合物１２を定量的に（３０３３．３ｍｇ、１０．００ｍｍｏｌ）得た。

（９－３）2,4-Di-{(Z)-hexadec-9-enyloxy)}benzylalcohol（１３）の合成

2,4-Dihydroxybenzaldehyde（５５２．５ｍｇ、４．００ｍｍｏｌ）を脱水ＤＭＦ（８ｍＬ）に溶解させ、そこに乳鉢で砕いたＫ_２ＣＯ_３（１７６９．０ｍｇ、１２．８０ｍｍｏｌ）及び(Z)-16-Bromohexadec-7-ene（化合物１２、３０３３．３ｍｇ、１０．００ｍｍｏｌ）を加え、１１０℃で２３時間撹拌した。反応終了後、ヘキサンと１７％食塩水で抽出し、有機層を減圧濃縮した。濃縮物を脱水ＴＨＦ（１７ｍＬ）及び脱水２－プロパノール（７ｍＬ）の混合溶媒に溶解させ、ＮａＢＨ_４（２２７．０ｍｇ、６．００ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５時間撹拌した。ヘキサンと１７％食塩水で抽出し、有機層を減圧濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１）で精製し、化合物１３を収率５６％（１３１０．３ｍｇ、２．２４ｍｍｏｌ）で得た。

（実施例１０）2,4-Di-{(E)-octadec-9-enyloxy)}benzylalcohol（１６）の合成
（１０－１）(E)-octadec-9-en-1-ol（１４）の合成

Elaidic acid（２８２４．６ｍｇ、１０．００ｍｍｏｌ）を、ＬｉＡｌＨ_４（５６９．３ｍｇ、１５．００ｍｍｏｌ）が入っている脱水ＴＨＦ（１００ｍＬ）に氷浴上で加え、室温で１６時間攪拌させた。反応終了後、反応液を冷やしながら１Ｎ ＨＣｌ（４ｍＬ）を水（１０ｍＬ）で希釈した水溶液を加え、１０分間攪拌した。静置して沈殿が落ち着いたら、ＥｔＯＡｃでセライトろ過に供した。ろ液を０．５Ｎ ＮａＨＣＯ_３ａｑ．で洗い、水層をＥｔＯＡｃで抽出した後、１７％ ＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４を加えて乾燥させた。ろ過後、ろ液を減圧濃縮し、化合物１４を定量的に（２６８４．９ｍｇ、１０．００ｍｍｏｌ）で得た。

（１０－２）(E)-1-bromooctadec-9-ene（１５）の合成

(E)-octadec-9-en-1-ol（化合物１４、２６８４．９ｍｇ、１０．００ｍｍｏｌ）を脱水ＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶解させ、溶液を冷やしながらＰＰｈ_３（３１４７．５ｍｇ、１２．００ｍｍｏｌ）及びＣＢｒ_４（４９７４．５ｍｇ、１５．００ｍｍｏｌ）を加え、室温で６．５時間撹拌した。反応終了後、反応液を減圧濃縮し、ＭｅＣＮとヘキサンで抽出した。ヘキサン層を減圧濃縮した後、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１）で精製し、化合物１５を定量的に（３３１３．８ｍｇ、１０．００ｍｍｏｌ）得た。

（１０－３）2,4-Di-{(E)-octadec-9-enyloxy)}benzylalcohol（１６）の合成

2,4-Dihydroxybenzaldehyde（３４５．３ｍｇ、２．５０ｍｍｏｌ）を脱水ＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解させ、そこに乳鉢で砕いたＫ_２ＣＯ_３（１１０５．６ｍｇ、８．００ｍｍｏｌ）及び(E)-1-bromooctadec-9-ene（化合物１５、２０７１．１ｍｇ、６．２５ｍｍｏｌ）を加え、１１０℃で５６．５時間撹拌した。反応終了後、ヘキサンと１７％食塩水で抽出し、有機層を減圧濃縮した。濃縮物を脱水ＴＨＦ（１２．５ｍＬ）及び脱水２－プロパノール（５．０ｍＬ）の混合溶媒に溶解させ、ＮａＢＨ_４（１４１．９ｍｇ、３．７５ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。ヘキサンと１７％食塩水で抽出し、有機層を減圧濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１）で精製し、化合物１６を収率６２％（９９３．７ｍｇ、１．５５ｍｍｏｌ）で得た。

（比較例１）2,4-Di-(octadecyloxy)benzylalcohol（１７）の合成

2,4-Dihydroxybenzaldehyde（３４５．３ｍｇ、２．５０ｍｍｏｌ）を脱水ＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解させ、そこに乳鉢で砕いたＫ_２ＣＯ_３（１１０５．６ｍｇ、８．００ｍｍｏｌ）及び1-bromoactadecane（２０８３．８ｍｇ、６．２５ｍｍｏｌ）を加え、１１０℃で９６時間撹拌した。反応終了後、水を使って吸引ろ過をし、濾過物をさらにＩＰＡで洗浄した。濾過物を脱水ＴＨＦ（１１．４ｍＬ）及び脱水２－プロパノール（４．６ｍＬ）の混合溶媒に溶解させ、ＮａＢＨ_４（１４１．９ｍｇ、３．７５ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間撹拌した。反応終了後、反応液を減圧濃縮した。そこにアセトニトリルを添加し、析出した固体を吸引ろ過で回収し、乾燥させて化合物１７を収率９１％（１４６７．６ｍｇ、２．２８ｍｍｏｌ）で得た。

（実施例１１）
（１１－１）(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-ol（１８）の合成

Linoleic acid（１５．９９ｇ、５７．００ｍｍｏｌ）を、ＬｉＡｌＨ_４（３．２４ｇ、８５．５０ｍｍｏｌ）が入っている脱水ＴＨＦ（２５０ｍＬ）に氷浴上で加え、５０℃で１９時間攪拌させた。反応終了後、反応液を冷やしながら１Ｎ ＨＣｌ（４ｍＬ）を水（１０ｍＬ）で希釈した水溶液を加え、１０分間攪拌した。静置して沈殿が落ち着いたら、ＥｔＯＡｃでセライトろ過に供した。ろ液を０．５Ｎ ＮａＨＣＯ_３ａｑ．で洗い、水層をＥｔＯＡｃで抽出した後、１７％ ＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４を加えて乾燥させた。ろ過後、ろ液を減圧濃縮し、化合物１８を収率９９％（１５．０４ｇ、５６．４３ｍｍｏｌ）で得た。

（１１－２）(6Z,9Z)-18-bromooctadeca-6,9-diene（１９）の合成

(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-ol（化合物１８、１４．９２ｇ、５６．００ｍｍｏｌ）を脱水ＤＣＭ（２５０ｍＬ）に溶解させ、溶液を冷やしながらＰＰｈ_３（１７．６３ｇ、６７．２０ｍｍｏｌ）及びＣＢｒ_４（２７．８６ｇ、８４．００ｍｍｏｌ）を加え、４０℃で２０時間撹拌した。反応終了後、反応液を減圧濃縮し、ＭｅＣＮとヘキサンで抽出した。ヘキサン層を減圧濃縮した後、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１）で精製し、化合物１９を定量的に（１８．４４ｇ、５６．００ｍｍｏｌ）得た。

（１１－３）2,4-Di-{(9Z, 12Z)-octadec-9,12-dienyloxy)}benzylalcohol（２０）の合成

2,4-Dihydroxybenzaldehyde（３．４５ｇ、２５．００ｍｍｏｌ）を脱水ＤＭＦ（５０ｍＬ）に溶解させ、そこに乳鉢で砕いたＫ_２ＣＯ_３（１１．０６ｇ、８０．００ｍｍｏｌ）及び(6Z,9Z)-18-bromooctadeca-6,9-diene（化合物１９、２０．５９ｇ、６２．５０ｍｍｏｌ）を加え、１１０℃で９６時間撹拌した。反応終了後、ヘキサンと１７％食塩水で抽出し、有機層を減圧濃縮した。濃縮物を脱水ＴＨＦ（１１７ｍＬ）及び脱水２－プロパノール（４７ｍＬ）の混合溶媒に溶解させ、ＮａＢＨ_４（１．４２ｇ、３７．５０ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。ヘキサンと１７％食塩水で抽出し、有機層を減圧濃縮した。カラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝１００：１）で精製し、化合物２０を収率５１％（８．１２ｇ、１２．７５ｍｍｏｌ）で得た。

以下に、本発明化合物を用いた分離方法及びペプチド合成の実施例を示す。
（実施例１２）
本発明化合物として、2,4-Dioleyloxybenzylalcohol又は2,4-Dilinoleyloxybenzylalcoholを用い、以下のようにしてアミノ酸を結合させ、不純物から分離した。
Fmoc-Val-O-TAG（２３ａ；oleyl、２３ｂ；linoleyl、２３ｃ；normal）の合成

担体（ＴＡＧ）として2,4-dioleyloxybenzylalcohol（化合物３、６４０．８ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ；oleyl）または2,4-dilinoleyloxybenzylalcohol（化合物２０、３１８．５ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ；linoleyl）と、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ（１．５０ｅｑ．）およびＤＭＡＰ（０．０５ｅｑ．）を脱水ＤＣＭ（０．１０Ｍ）に溶解させ、撹拌しながらＤＩＰＣＩ（１．５０ｅｑ．）を加え室温で７０分間攪拌させた。比較の担体として2,4-didocosyloxybenzyl alcohol（Ｋｂ－ＯＨ）（３０２３．２ｍｇ、４．００ｍｍｏｌ；normal)を用いた。ＴＬＣで反応の終了を確認した後、反応液にＤＭＦを添加し減圧濃縮した。濃縮後の反応液をヘキサン（Ｈｅｘ）（５ｍＬ）に溶解させた後、ＭｅＣＮ（１０ｍＬｘ２）でヘキサン層を洗浄した。ヘキサン層を減圧濃縮し、次の反応に供した。２３ｃはＭｅＣＮでタグが沈殿したのでろ過により分離精製し、固体として得た。

（実施例１３）
Fmoc-Pro-Gly-Val-Gly-Val-O-TAG（２４ａ；oleyl、２４ｂ；linoleyl、２４ｃ；normal）（配列番号１－３）の合成

実施例１２で得られた本発明化合物又はＫｂ－ＯＨにアミノ酸（Ｖａｌ）が結合したＦｍｏｃ－Ｖａｌ－Ｏ－ＴＡＧを用い、以下のようにしてペプチド合成を行った。
（ｉ）Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－Ｏ－ＴＡＧ（２３ａ－ｃ）をシクロヘキサン（ｃ－Ｈｅｘ）：ＴＨＦ：ＤＭＦ＝５：４：１（０．１０Ｍ）の混合溶媒に溶解させ、撹拌しながら1-Methylpiperazine（２０．０ｅｑ．）およびＤＢＵ（１回目；１．５０ｅｑ．、２回目以降；７．０ｅｑ．）を添加した。１０分間撹拌してＴＬＣで反応の終了を確認した後、反応液に氷浴上で６Ｎ ＨＣｌａｑ．（１回目；４２．５ｅｑ．、２回目以降；５１．３ｅｑ．）を添加して中和した。ＴＨＦを使って分液ロートに移送し、有機層（上層）を０．０１Ｎ ＨＣｌａｑ．および０．５Ｎ ＮａＨＣＯ_３ａｑ．で洗浄した。有機層をそのまま次の反応に供した。
（ｉｉ）有機層にＤＭＦ（ｉで加えたのと同量）を加え、Fmoc-AA-OH（１．３０ｅｑ．）およびＣＯＭＵ（１．２５ｅｑ．）を溶解させ、撹拌しながらＤＩＰＥＡ（２．５０ｅｑ．）を加え室温で６０分間攪拌させた。ＴＬＣで反応の終了を確認した後、1-Methylpiperazine（０．３７５ｅｑ．）を添加して１０分間撹拌した。

以上（ｉ）、（ｉｉ）を繰り返すことにより、ペプチドを伸長した。２４ｃは４残基目のＧｌｙを縮合させる際、撹拌開始から３０分程度で、反応液がゲルのようになった。均一に撹拌することが困難で、反応は均一には進まなかった。
２４ａおよび２４ｂに関しては、５残基目のＰｒｏを縮合した後、反応液にアセトニトリルを添加して減圧濃縮した。反応溶媒が飛びきった後、目的物が入っているナスフラスコを冷却し、目的物を固体として析出させた。析出物を吸引ろ過により分離し、化合物２４ａを収率７７％（９８１．８ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）、化合物２４ｂを収率３０％（１８８．９ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）で得た。

実施例１３で合成した化合物２４ａを用い、さらに伸張したペプチドを合成した。
（実施例１４）
Fmoc-Pro-Gly-Val-Gly-Val-OH（２５）（配列番号４）の合成

Fmoc-Pro-Gly-Val-Gly-Val-O-(2,4-dioleyloxybenzylalcohol)（化合物２４ａ：配列番号１、４４５．８ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ：ＴＦＥ：ＴＦＡ＝８８：１０：２（ＤＣＭ ３．１ｍＬ、ＴＦＥ ０．３５０ｍＬ、ＴＦＡ ０．０７０ｍＬ、０．１０Ｍ）の混合溶媒に溶かし、２．５時間撹拌した。共沸用のアセトニトリル（２．１ｍＬ）を添加し、減圧濃縮した。残留物に冷やしたＩＰＥ（２０ｍＬ）を添加し、３０００ｒｐｍ、－９℃の条件で２０分間凍結遠心した。ＩＰＥで洗いながら沈殿物をろ過し、乾燥させて化合物２５を収率８６％（１９３．７ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）で得た。

（実施例１５）
HCl・H-Pro-Gly-Val-Gly-Val-O-(2,4-dioleyloxybenzylalcohol)（２６）（配列番号５）の合成

Fmoc-Pro-Gly-Val-Gly-Val-O-(2,4-dioleyloxybenzylalcohol)（化合物２４ａ：配列番号１、２８０．７ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）をｃ－Ｈｅｘ（１．１ｍＬ）、ＴＨＦ（０．８８ｍＬ）、ＤＭＦ（０．２２ｍＬ）の混合溶媒に溶かし、ピぺリジン（０．０３ｍＬ、０．３３０ｍｍｏｌ)およびＤＢＵ（０．０３３ｍＬ、０．２２ｍｍｏｌ）を添加した。１０分間撹拌し、反応液に氷浴上で６Ｎ ＨＣｌ（０．１３ｍＬ、０．７ｍｍｏｌ）を添加して中和した。ＴＨＦを使って分液ロートに移送し、有機層（上層）を０．０１Ｎ ＨＣｌａｑ．（４．０ｍＬ）で洗浄し、有機層を減圧濃縮した。アセトニトリルを添加し、析出した沈殿物を吸引ろ過することにより、化合物２６を収率７１％（１７０．４ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）で得た。

HCl・H-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Pro-Gly-Val-Gly-Val-O-(2,4-dioleyloxybenzylalcohol)（２７）（配列番号６）の合成

HCl・H-Pro-Gly-Val-Gly-Val-O-(2,4-dioleyloxybenzylalcohol)（化合物２６：配列番号５、１７０．４ ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）をｃ－Ｈｅｘ（０．７８４ｍＬ）、ＴＨＦ（０．６２７ｍＬ）、ＤＭＦ（０．１５７ｍＬ）の混合溶媒に溶かし、Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－ＯＨ（２５、１１３．１ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）及びＣＯＭＵ（７７．７ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌しながらＤＩＰＥＡ（６８．３μＬ、０．３９ｍｍｏｌ）を加え室温で６０分間攪拌させた。ピぺリジン（０．０１６ｍＬ、０．２３５ｍｍｏｌ）及びＤＢＵ（０．１６４ｍＬ、１．０９７ｍｍｏｌ）を添加した。１０分間撹拌してＴＬＣで反応の終了を確認した後、反応液に氷浴上で６Ｎ ＨＣｌａｑ．（０．３１４ｍＬ、１．９ｍｍｏｌ）を添加して中和した。ＴＨＦを使って分液ロートに移送し、有機層（上層）を０．０１Ｎ ＨＣｌａｑ．（１．７ｍＬ）および１３％ ＮａＣｌａｑ．（０．９ｍＬ）で洗浄した。有機層を減圧濃縮し、アセトニトリルを添加して生じたゲルをスパチュラでほぐし、ろ過で固体を得た。固体を乾燥させ、化合物２７を定量的に（２３８．５ｍｇ、０．１５９ｍｍｏｌ）得た。

HCl・H-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Pro-Gly-Val-Gly-Val-OH（２８）（配列番号７）の合成

HCl・H-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Pro-Gly-Val-Gly-Val-O-(2,4-dioleyloxybenzylalcohol) （化合物２７：配列番号６、２３０．０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ：ＴＦＥ：ＴＦＡ＝８８：１０：２（ＤＣＭ １．３５ｍＬ、ＴＦＥ ０．１５４ｍＬ、ＴＦＡ ０．０３１ｍＬ，０．１０Ｍ）の混合溶媒に溶かし、８０分間撹拌した。塩酸塩を形成するため、４ｍｏｌ ＨＣｌ／ＣＰＭＥ（０．１００ｍＬ）を添加し、さらに２０分間撹拌した。共沸用のアセトニトリル（４．６ｍＬ）を添加し、減圧濃縮した。残留物に冷やしたＩＰＥ（１２ｍＬ）を添加し、３０００ｒｐｍ、－９℃の条件で２０分間凍結遠心した。上清を除去し、沈殿物をろ紙上で乾燥させて化合物２８を収率９２％（１２０．６ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）で得た。

（実施例１６）
本発明化合物である2,4-Dioleyloxybenzyl ethylamineを担体（ＴＡＧ）として用い、以下のようにしてペプチド合成を行った。
H-Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Leu-Leu-Arg(Pbf)-Pro-NEt-(2,4-dioleyloxybenzylalcohol)（２９）（配列番号８）の合成

2,4-Dioleyloxybenzyl ethylamine（化合物１０、８６９．３ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ－ＡＡ－ＯＨ（１．３５ｅｑ．）およびＣＯＭＵ（１．２５ｅｑ．）をｃ－Ｈｅｘ（５ｍＬ）、ＴＨＦ（４ｍＬ）、ＤＭＦ（１ｍＬ）の混合溶媒に溶解させ、撹拌しながらＤＩＰＥＡ（２．５８ｅｑ．）を加え室温で２０分間攪拌させた。1-Methylpiperazine（０．３８６ｅｑ．）を添加して１０分間撹拌した。そして1-Methylpiperazine（２０．６ｅｑ．）およびＤＢＵ（７．２１ｅｑ．）を添加した。１０分間撹拌してＴＬＣで反応の終了を確認した後、反応液に氷浴上で６Ｎ ＨＣｌａｑ．（５２．８ｅｑ．）を添加して中和した。ＴＨＦを用いて分液ロートに移送し、有機層（上層）を０．０１Ｎ ＨＣｌａｑ．および０．５Ｎ ＮａＨＣＯ_３ａｑ．で洗浄した。有機層をそのまま次の反応に供した。この作業を９残基分繰り返し、Ｈ－Ｐｙｒ－ＯＨを縮合した反応液を減圧濃縮した。この際、アセトニトリルを加えてもタグペプチドは固体として沈殿せず、水あめ状の物性を呈した。クロロホルム：メタノール＝２０：１でカラムクロマトグラフィー精製をし、化合物２９を含む分画をすべて濃縮し、化合物２９との混合物を得た。

H-Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt（３０）（配列番号９）の合成

H-Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Leu-Leu-Arg(Pbf)-Pro-NEt-(2,4-dioleyloxybenzylalcohol)（化合物２９：配列番号８）をＴＦＡ：ＴＩＳ：Ｈ_２Ｏ＝９５：２．５：２．５（ＴＦＡ ６．５１６ｍＬ、ＴＩＳ ０．１７２ｍＬ、Ｈ_２Ｏ ０．１７２ｍＬ、０．１０Ｍ）の混合溶媒に溶解させ、３０分間撹拌した。ＴＬＣで反応の終了を確認した後、塩酸塩を形成させるために４ｍｏｌ ＨＣｌ／ＣＰＭＥ（０．３４３ｍＬ）を添加し、さらに１５分間撹拌した。共沸のためにアセトニトリルやトルエンを加えて減圧濃縮したものの、溶媒は飛びきらなかった。そこにＩＰＥを４０ｍＬ添加し、３０００ｒｐｍ、－９℃の条件で４０分間凍結遠心した。上清を除去した後、もう一度ＩＰＥを添加し同条件で凍結遠心した。上清を除去した後、沈殿物を減圧濃縮により乾燥させた。得られた固形物をＥＳＩ－ＭＳに供し化合物３０の生成を確認した。

上記の詳細な記載は、本発明の目的及び対象を単に説明するものであり、添付の特許請求の範囲を限定するものではない。添付の特許請求の範囲から離れることなしに、記載された実施態様に対しての、種々の変更及び置換は、本明細書に記載された教示より当業者にとって明らかである。

本発明の不飽和アルキル含有芳香族化合物を用いることにより、液相ペプチド合成方法において、ペプチドの特性に依存することなく、ペプチド合成を行うことができる。さらには、凝集性の高いペプチドを合成する場合であっても、特殊な装置を用いることなく、ペプチド合成を行うことができる。
また、本発明のペプチド合成方法は、分液操作のみで最終生成物を分離できるので、実用的な工業的プロセスとしても有用である。

Claims (36)

1. 式（Ｉ）：
   （式中、Ｒは、（ＣＨ₂）nＲ₁、ＣＨ（ＣＨ_３）Ｒ₁、又はＣ（ＣＨ_３）₂Ｒ₁であり、Ｒ₁は、ヒドロキシル基、チオール基、アミノ基、アルキルアミノ基又はカルボキシル基であり、Ｒａは、同一でも異なってもよく、それぞれ独立に炭素数１４以上６０以下である不飽和炭化水素基であり、ｍは２又は３であり、ｎは１～３の自然数である。）
   で表される不飽和アルコキシ置換芳香族化合物。
2. 前記式（Ｉ）が、以下のいずれかの式：
   （ここで、Ｒは、（ＣＨ₂）Ｒ₁、ＣＨ（ＣＨ_３）Ｒ₁、又はＣ（ＣＨ_３）₂Ｒ₁であり、Ｒ₁は、ヒドロキシル基、チオール基、アミノ基、アルキルアミノ基又はカルボキシル基であり、Ｒａは、同一でも異なってもよく、それぞれ独立に炭素数１４以上６０以下である不飽和炭化水素基である。）
   で表される請求項１に記載の不飽和アルコキシ置換芳香族化合物。
3. 前記式（Ｉ）が、以下のいずれかの式：
   
   （ここで、Ｒは（ＣＨ₂）Ｒ₁であり、Ｒ₁は、ヒドロキシル基、チオール基、アミノ基、アルキルアミノ基又はカルボキシル基であり、Ｒａは、同一でも異なってもよく、それぞれ独立に炭素数１４以上６０以下である不飽和炭化水素基である。）
   で表される請求項１に記載の不飽和アルコキシ置換芳香族化合物。
4. Ｒａが、直鎖状の不飽和炭化水素基である請求項１～３のいずれか一つに記載の不飽和アルコキシ置換芳香族化合物。
5. Ｒａのそれぞれが独立して、ミリストレイン酸（C14）、パルミトレイン酸（C16）、サピエン酸（C16）、オレイン酸（C18）、エライジン酸（C18）、バクセン酸（C18）、ガドレイン酸（C20）、エイコセン酸（C20）、エルカ酸（C22）、ネルボン酸（C24）、リノール酸（C18）、エイコサジエン酸（C20）、ドコサジエン酸（C22）、α－及びγ－リノレン酸（C18）、ピノレン酸（C18）、エレオステアリン酸（C18）、ミード酸（C20）、ジホモ－γ－リノレン酸（C20）、エイコサトリエン酸（C20）、ステアリドン酸（C18）、アラキドン酸（C20）、エイコサテトラエン酸（C20）、アドレン酸（C22）、ボセオペンタエン酸（C18）、エイコサペンタエン酸（C20）、オズボンド酸（C22）、イワシ酸（C22）、テトラコサペンタエン酸（C24）、ドコサヘキサエン酸（C22）、及びニシン酸（C24）からなる群より選ばれる化合物に由来する不飽和炭化水素基である請求項４に記載の不飽和アルコキシ置換芳香族化合物。
6. Ｒａのそれぞれが、オレイン酸、エライジン酸、リノール酸、パルミトレイン酸、ガドレイン酸、α－リノレン酸、γ－リノレン酸、エルカ酸、ドコサジエン酸及びドコサヘキサエン酸からなる群より選ばれる化合物に由来する不飽和炭化水素基である請求項５に記載の不飽和アルコキシ置換芳香族化合物。
7. Ｒａのそれぞれが、オレイン酸、エライジン酸、リノール酸、パルミトレイン酸、及びガドレイン酸からなる群より選ばれる化合物に由来する不飽和炭化水素基である請求項５に記載の不飽和アルコキシ置換芳香族化合物。
8. 式（Ｉ）で表される化合物が、2,4-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,5-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((E)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylamine、2,4-Bis((Z,Z)-octadec-9,12-dien-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylethylamine、2,4-Bis((Z)-docos-13-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、3,4,5-Tris((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((Z,Z)-docos-13,16-dien-1-yl)oxy)benzylalcohol、3,5-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((Z,Z,Z,Z,Z,Z)-docos-4,7,10,13,16,19-hexaen-1-yl)oxy)benzylalcohol、及び 2,4,5-Tris((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcoholからなる群より選ばれる請求項１に記載の不飽和アルコキシ置換芳香族化合物。
9. 請求項１～８のいずれか一つに記載の不飽和アルコキシ置換芳香族化合物である分離用担体。
10. 請求項１～８のいずれか一つに記載の不飽和アルコキシ置換芳香族化合物の分離用担体としての使用。
11. 請求項１～８のいずれか一つに記載の不飽和アルコキシ置換芳香族化合物であるペプチド合成用試薬。
12. 請求項１～８のいずれか一つに記載の不飽和アルコキシ置換芳香族化合物のペプチド合成用試薬としての使用。
13. 下記式（Ｉ）で示される不飽和アルキル含有芳香族化合物由来の担体で保護された保護アミノ酸又は保護ペプチドの分離方法であって、以下の工程：
    工程（１）：有機溶媒又は有機溶媒の混合液中で、
    以下の式（Ｉ）：
    式（Ｉ）：
    （式中、Ｒは、（ＣＨ₂）nＲ₁、ＣＨ（ＣＨ_３）Ｒ₁、又はＣ（ＣＨ_３）₂Ｒ₁であり、Ｒ₁は、ヒドロキシル基、チオール基、アミノ基、アルキルアミノ基又はカルボキシル基であり、Ｒａは、同一でも異なってもよく、それぞれ独立に炭素数１４以上６０以下である不飽和炭化水素基であり、ｍは２又は３であり、ｎは１～３の自然数である。）で表される不飽和アルコキシ置換芳香族化合物にＮ末端のアミノ基が保護された（「Ｎ－保護」）アミノ酸と縮合させて、該不飽和アルコキシ置換芳香族化合物由来の担体でＣ末端が保護された（「Ｃ－担体保護」）Ｎ－保護アミノ酸を得る工程、若しくはＣ－担体保護アミノ酸又はＣ－担体保護ペプチドにＮ－保護アミノ酸を縮合させて、Ｃ－担体保護－Ｎ－保護ペプチドを得る工程。
    工程（２）：工程（１）で得られた担体保護－Ｎ－保護アミノ酸又は担体保護－Ｎ－保護ペプチドのＮ末端の保護基を除去する工程、及び、
    工程（３）：工程（２）で得られた担体保護アミノ酸又は担体保護ペプチドを分離する工程、
    を含む分離方法。
14. 前記工程（３）は、
    （ｉ）担体保護アミノ酸又は担体保護ペプチドを不溶化（結晶化）状態にして分離する固液分離工程、又は
    （ｉｉ）担体保護アミノ酸又は担体保護ペプチドを含有する有機溶媒と、不純物を含有する水あるいは有機溶媒を含む水溶液又は有機溶媒とを分離する分液操作工程、
    により行う、請求項１３に記載の分離方法。
15. 前記Ｎ－保護アミノ酸又はＮ－保護ペプチドが、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基でアミノ基が保護された（以下、「Ｎ－Ｆｍｏｃ保護」という）アミノ酸又はＮ－Ｆｍｏｃ保護ペプチドである、請求項１３又は１４に記載の分離方法。
16. 前記有機溶媒又は有機溶媒の混合液が、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ペンタン、ノルマルヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン、ＣＰＭＥ，ＭＴＢＥ、２－メチルＴＨＦ、４－メチルＴＨＰ、酢酸イソプロピル、ＤＣＭ、クロロホルム、ＤＭＳＯ、１,３-ジメチル-２-イミダゾリジノン、Ｎ－メチルピロリドン、及びアセトニトリルからなる群より選ばれる少なくとも一つの有機溶媒又それらの２以上の混合液である、請求項１３～１５のいずれか一つに記載の分離方法。
17. 前記式（Ｉ）で表される化合物が、以下の何れかの式：
    （ここで、Ｒは、（ＣＨ₂）Ｒ₁、ＣＨ（ＣＨ_３）Ｒ₁、又はＣ（ＣＨ_３）₂Ｒ₁であり、Ｒ₁は、ヒドロキシル基、チオール基、アミノ基、アルキルアミノ基又はカルボキシル基であり、Ｒａは、同一でも異なってもよく、それぞれ独立に炭素数１４以上６０以下である不飽和炭化水素基である。）
    で表される化合物である、請求項１３～１６のいずれか一つに記載の分離方法。
18. Ｒａが、直鎖状の不飽和炭化水素基である請求項１３～１７のいずれか一つに記載の分離方法。
19. Ｒａのそれぞれが独立して、ミリストレイン酸（C14）、パルミトレイン酸（C16）、サピエン酸（C16）、オレイン酸（C18）、エライジン酸（C18）、バクセン酸（C18）、ガドレイン酸（C20）、エイコセン酸（C20）、エルカ酸（C22）、ネルボン酸（C24）、リノール酸（C18）、エイコサジエン酸（C20）、ドコサジエン酸（C22）、α－及びγ－リノレン酸（C18）、ピノレン酸（C18）、エレオステアリン酸（C18）、ミード酸（C20）、ジホモ－γ－リノレン酸（C20）、エイコサトリエン酸（C20）、ステアリドン酸（C18）、アラキドン酸（C20）、エイコサテトラエン酸（C20）、アドレン酸（C22）、ボセオペンタエン酸（C18）、エイコサペンタエン酸（C20）、オズボンド酸（C22）、イワシ酸（C22）、テトラコサペンタエン酸（C24）、ドコサヘキサエン酸（C22）、及びニシン酸（C24）からなる群より選ばれる化合物に由来する不飽和炭化水素基である請求項１８に記載の分離方法。
20. Ｒａのそれぞれが独立して、オレイン酸、エライジン酸、リノール酸、パルミトレイン酸、ガドレイン酸、α－リノレン酸、γ－リノレン酸、エルカ酸、ドコサジエン酸、及びドコサヘキサエン酸からなる群より選ばれる化合物に由来する不飽和炭化水素基である請求項１９に記載の分離方法。
21. Ｒａのそれぞれが、オレイン酸、エライジン酸、リノール酸、パルミトレイン酸、及びガドレイン酸からなる群より選ばれる化合物に由来する不飽和炭化水素基である請求項１９に記載の分離方法。
22. 式（Ｉ）で表される化合物が、2,4-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,5-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((E)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylamine、2,4-Bis((Z,Z)-octadec-9,12-dien-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylethylamine、2,4-Bis((Z)-docos-13-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、3,4,5-Tris((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((Z,Z)-docos-13,16-dien-1-yl)oxy)benzylalcohol、3,5-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((Z,Z,Z,Z,Z,Z)-docos-4,7,10,13,16,19-hexaen-1-yl)oxy)benzylalcohol、及び 2,4,5-Tris((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcoholからなる群より選ばれる請求項１３～１６のいずれか一つに記載の分離方法。
23. 液相ペプチド合成方法であって、以下の工程：
    工程（Ａ）：有機溶媒又は有機溶媒の混合液中で、
    以下の式（Ｉ）：
    式（Ｉ）：
    （式中、Ｒは、（ＣＨ₂）nＲ₁、ＣＨ（ＣＨ_３）Ｒ₁、又はＣ（ＣＨ_３）₂Ｒ₁であり、Ｒ₁は、ヒドロキシル基、チオール基、アミノ基、アルキルアミノ基又はカルボキシル基であり、Ｒａは、同一でも異なってもよく、それぞれ独立に炭素数１４以上６０以下である不飽和炭化水素基であり、ｍは２又は３であり、ｎは１～３の自然数である。）で表される不飽和アルコキシ置換芳香族化合物由来する担体でＣ末端が保護された（「Ｃ－担体保護」）アミノ酸又はＣ－担体保護ペプチドと、Ｎ末端のアミノ基が保護された（「Ｎ－保護」）アミノ酸又はＮ－保護ペプチドとを縮合剤の存在下で縮合して、Ｃ－担体保護－Ｎ－保護ペプチドを得る工程、
    工程（Ｂ）：前記Ｃ－担体保護－Ｎ－保護ペプチドのＮ末端の保護基を脱保護してＣ－担体保護ペプチドを得る工程、及び
    工程（Ｃ）：前記Ｃ－担体保護ペプチドを分離する工程、
    を含むペプチド合成方法。
24. 前記Ｎ－保護アミノ酸又はＮ－保護ペプチドが、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基でアミノ基が保護された（「Ｎ－Ｆｍｏｃ保護」）アミノ酸又はＮ－Ｆｍｏｃ保護ペプチドである、請求項２３に記載のペプチド合成方法。
25. 前記有機溶媒又は有機溶媒の混合液が、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ペンタン、ノルマルヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン、ＣＰＭＥ，ＭＴＢＥ、２－メチルＴＨＦ、４－メチルＴＨＰ、酢酸イソプロピル、ＤＣＭ、クロロホルム、ＤＭＳＯ、１,３-ジメチル-２-イミダゾリジノン、Ｎ－メチルピロリドン及びアセトニトリルからなる群より選ばれる少なくとも一つの有機溶媒又それらの２以上の混合液である、請求項２３又は２４に記載のペプチド合成方法。
26. 前記工程（Ａ）の後に、以下の工程（ａ１）：縮合反応後の反応液に水溶性アミンを添加する工程、をさらに含む請求項２３～２５のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。
27. 前記工程（Ｂ）が、水溶性アミンの存在下で脱保護を行う工程である、請求項２６に記載のペプチド合成方法。
28. 前記工程（Ｃ）が、反応液に酸を添加して中和し、さらに酸性水溶液を添加して洗浄した後、分液し、水層を除去し、有機層を得てＣ－担体保護ペプチドを分離する工程である、請求項２３～２７のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。
29. 前記式（Ｉ）の化合物が、以下のいずれかの式：
    （ここで、Ｒは、（ＣＨ₂）Ｒ₁、ＣＨ（ＣＨ_３）Ｒ₁、又はＣ（ＣＨ_３）₂Ｒ₁であり、Ｒ₁は、ヒドロキシル基、チオール基、アミノ基、アルキルアミノ基又はカルボキシル基であり、Ｒａは、同一でも異なってもよく、それぞれ独立に炭素数１４以上６０以下である不飽和炭化水素基である。）
    で表される化合物である、請求項２３～２８のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。
30. Ｒａが、直鎖状の不飽和炭化水素基である請求項２３～２９のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。
31. Ｒａのそれぞれが独立して、ミリストレイン酸（C14）、パルミトレイン酸（C16）、サピエン酸（C16）、オレイン酸（C18）、エライジン酸（C18）、バクセン酸（C18）、ガドレイン酸（C20）、エイコセン酸（C20）、エルカ酸（C22）、ネルボン酸（C24）、リノール酸（C18）、エイコサジエン酸（C20）、ドコサジエン酸（C22）、α－及びγ－リノレン酸（C18）、ピノレン酸（C18）、エレオステアリン酸（C18）、ミード酸（C20）、ジホモ－γ－リノレン酸（C20）、エイコサトリエン酸（C20）、ステアリドン酸（C18）、アラキドン酸（C20）、エイコサテトラエン酸（C20）、アドレン酸（C22）、ボセオペンタエン酸（C18）、エイコサペンタエン酸（C20）、オズボンド酸（C22）、イワシ酸（C22）、テトラコサペンタエン酸（C24）、ドコサヘキサエン酸（C22）、及びニシン酸（C24）からなる群より選ばれる化合物に由来する不飽和炭化水素基である請求項３０に記載のペプチド合成方法。
32. Ｒａのそれぞれが独立して、オレイン酸、エライジン酸、リノール酸、パルミトレイン酸、ガドレイン酸、α－リノレン酸、γ－リノレン酸、エルカ酸、ドコサジエン酸及びドコサヘキサエン酸からなる群より選ばれる化合物に由来する不飽和炭化水素基である請求項３１に記載のペプチド合成方法。
33. Ｒａのそれぞれが、オレイン酸、エライジン酸、リノール酸、パルミトレイン酸、及びガドレイン酸からなる群より選ばれる化合物に由来する不飽和炭化水素基である請求項３１に記載のペプチド合成方法。
34. 式（Ｉ）で表される化合物が、2,4-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,5-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((E)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylamine、2,4-Bis((Z,Z)-octadec-9,12-dien-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylethylamine、2,4-Bis((Z)-docos-13-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、3,4,5-Tris((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((Z,Z)-docos-13,16-dien-1-yl)oxy)benzylalcohol、3,5-Bis((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcohol、2,4-Bis((Z,Z,Z,Z,Z,Z)-docos-4,7,10,13,16,19-hexaen-1-yl)oxy)benzylalcohol、及び 2,4,5-Tris((Z)-octadec-9-en-1-yl)oxy)benzylalcoholからなる群より選ばれる請求項２３～２８のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。
35. 前記工程（Ｃ）より分離されたＣ－担体保護ペプチドを用いて、前記工程の繰り返しを１回以上行うことを含む、請求項２３～３４のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。
36. 前記各工程をワンポットで行う、請求項２３～３５のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。