ES2660775T3 - Nuevas bacterias del ácido láctico y composiciones que las contienen contra los resfriados bacterianos - Google Patents
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Abstract
Una bacteria láctica o su lisado celular para su uso en la prevención y/o el tratamiento de enfermedades microbianas de la piel, de las membranas mucosas y/o de la cavidad oral, en la que la bacteria del ácido láctico se coagrega con un Streptococcus pyogenes, y estando la bacteria del ácido láctico seleccionada del grupo que comprende los siguientes microorganismos depositados en la Colección Alemana de Microorganismos y Cultivos Celulares, y numerados como DSM 25972, DSM 25987, DSM 25988, DSM 25989 y DSM 25973.
Description
la flora de la piel, sino que simplemente se unan y/o se agrupen con la bacteria patógena Streptococcus pyogenes.
No menos importante, las bacterias del ácido láctico de acuerdo con la invención evitan la unión a la fibronectina y así evitan la invasión de las células. Debido al hecho de que las bacterias del ácido láctico preferidas se coagregan
5 con Streptococcus pyogenes y/o tienen propiedades adhesivas con respecto a estas bacterias, esto conduce a un enmascaramiento, en particular, y a la ocultación de factores de patogenicidad, lo que conduce a una reducción de la carga bacteriana y/o a la inhibición de la unión a la fibronectina y/o a las células de la zona de la garganta.
Aunque la presente invención se refiere a un grupo de bacterias del ácido láctico en particular, coincide con la enseñanza de acuerdo con la solicitud de patente. Las bacterias del ácido láctico reivindicadas tienen una propiedad
o efecto común. La suma de las características comunes estructurales o funcionales conduce a la relación funcional de coagregación de Streptococcus pyogenes, la no unión de microorganismos comensales de la piel y/o de las mucosas y la prevención de la unión a la fibronectina por Streptococcus pyogenes. Por lo tanto, las características comunes no representan una suma arbitraria de características, sino que constituyen la identificación genética 15 común de los microorganismos reivindicados, por así decirlo, lo que permite y caracteriza ventajosamente la idoneidad de estas bacterias del ácido láctico para este fin. Además, se ha descubierto que, sorprendentemente, la propiedad sorprendente de las bacterias del ácido láctico de acuerdo con la invención, en concreto, la coagregación de Streptococcus pyogenes, no se inhibe en la saliva ni en presencia de azúcares. Esto es ventajoso, en particular, porque el sitio de uso preferido de las bacterias del ácido láctico y la composición está en la cavidad oral, y se sabe por la técnica anterior que los procesos de coagregación, en general, se inhiben mediante altas concentraciones de azúcar. Sin embargo, los ensayos han demostrado que este no es el caso para las bacterias del ácido láctico de acuerdo con la invención, porque se siguen agrupando con Streptococcus pyogenes, incluso a altas concentraciones de azúcar (como las que se producen en la saliva, por ejemplo, así como en posibles formas farmacéuticas tales como comprimidos efervescentes, comprimidos de vitaminas, comprimidos minerales, comprimidos de
25 oligoelementos, bebidas en polvo, bebidas, zumos, bebidas lácteas, yogures, caramelos, caramelos masticables, chicles, zumos o jarabes, comprimidos para la garganta, píldoras recubiertas y aerosoles).
También fue sorprendente que las bacterias del ácido láctico preferidas también se pudieran usar en la piel, donde también se coagregan con Streptococcus pyogenes. Los expertos en la materia saben que Streptococcus pyogenes también se conoce como un organismo patógeno de las heridas, por lo que es especialmente ventajoso que la capacidad de coagregación de las bacterias del ácido láctico preferidas no se limite a la cavidad oral, sino que también se pueda aplicar a zonas cutáneas.
La presente invención también se refiere a bacterias del ácido láctico o a su lisado celular, así como a
35 composiciones que las contienen, en particular, para su uso en el tratamiento o la prevención en bebés, niños pequeños, personas sanas, ancianos, personas inmunodeprimidas, personas con cambios patológicos en la piel (en particular, síndrome de la piel escaldada estafilocócica, impétigo contagioso, foliculitis superficial, impetiginización, abscesos cutáneos, forúnculos (furunculosis), carbuncos (abscesos), flemones, piel seca, piel con picor, piel enrojecida, piel irritada, piel extremadamente grasa, acné, pie diabético, úlceras decúbito, neurodermatitis, linfadenitis aguda, quistes pilonidales (incluyendo las fístulas pilonidales, el seno pilonidal, la fístula coccígea, los quistes coccígeos), otras infecciones locales de la piel y del tejido subcutáneo (por ejemplo, pioderma, dermatitis purulenta, dermatitis séptica, dermatitis supurativa); también se pueden usar para tratar las diversas formas de dermatitis y eczema (por ejemplo,, eczema atópico, eczema seborreico, erupción o dermatitis del pañal, dermatitis de contacto alérgica, dermatitis seborreica, dermatitis exfoliativa, dermatitis de contacto tóxica, liquen simple crónico,
45 prurigo, prurito y otras formas de dermatitis); también enfermedades papuloescamosas de la piel (soriasis, parasoriasis), enfermedades de los apéndices integumentarios (por ejemplo, alopecia con cicatrización incluyendo foliculitis decalvans), más otras enfermedades de la piel y del tejido subcutáneo (por ejemplo, úlceras crurales), personas con daño cutáneo preexistente (por ejemplo, piel seca), lesiones de la piel (por ejemplo, costras, heridas, incluso después de accidentes o cirugía) en seres humanos o en animales comerciales y mascotas.
En el sentido de la presente invención, se entiende que la piel, en las realizaciones preferidas, es, en particular, el órgano externo del cuerpo humano o animal que sirve para delimitar el interior desde el exterior. En realizaciones preferidas, una zona de piel en el sentido de la presente invención incluye componentes de la capa superior de la piel, el corion o piel verdadera o el tejido subcutáneo. La capa superior de la piel (epidermis) también consiste en las 55 siguientes capas de acuerdo con la invención: el estrato córneo (capa córnea), el estrato lúcido (capa transparente), el estrato granuloso (capa granular), el estrato espinoso (capa espinosa) y/o el estrato basal (capa basal). Cada modificación de las células de esta zona constituye una modificación celular en una zona de la piel en el sentido de la presente invención. De acuerdo con la invención, la dermis o corion, que también puede ser un componente de la zona de la piel, preferentemente consiste en fibras de tejido conjuntivo, y sirve para proporcionar alimento y anclaje a la epidermis. El sistema de vasos capilares de la zona que limita con la epidermis también pertenece a una zona de la piel en el sentido de la invención, al igual que las glándulas sebáceas y las glándulas sudoriporosas o glándulas sudoríparas. La dermis en el sentido de la presente invención se puede subdividir en un estrato papilar y un estrato reticular. Además, una zona de piel en el sentido de la invención puede ser cualquier zona, es decir, cualquier ubicación en o sobre el tejido subcutáneo (subcutis) o tejido del interior del organismo, o cualquier órgano 65 o componente orgánico. Una barrera de tejido que delimita un órgano de las estructuras circundantes puede ser una piel en el sentido de la presente invención. Además, también puede entenderse que el concepto de la invención de
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implantar la incorporación de la composición de acuerdo con la invención en una composición para caramelos, grageas o pastillas recubiertas. A este sentido, fue completamente sorprendente que fuera posible disponer de bacterias del ácido láctico que tuvieran una actividad y temperatura corporales, pero que pudieran sobrevivir a un tratamiento térmico a una temperatura de 70 a 90 ºC de manera que siguieran teniendo las habilidades preferidas, 5 en particular, la de coagregación de Streptococcus pyogenes incluso después del tratamiento. Esto es especialmente ventajoso, porque se suelen alcanzar temperaturas de 70 ºC en la producción de caramelos, de modo que es ventajoso para el uso de las bacterias del ácido láctico o la composición en forma de caramelos que las bacterias del ácido láctico sigan teniendo la capacidad de coagregarse incluso después de la producción de los caramelos. Nada de este tipo se conoce de la técnica anterior. Por lo tanto, las bacterias del ácido láctico preferidas tienen capacidades que definitivamente las diferencian de los microorganismos conocidos. Además, era sorprendente que los caramelos que tenían la composición con las bacterias del ácido láctico se disolverían más lentamente en la boca y, por lo tanto, que el caramelo consiguiera un efecto mejor y de mayor duración. Esto fue completamente sorprendente para los inventores. Además, los experimentos han demostrado que, en particular, a través de la liberación lenta de las bacterias del ácido láctico, esencialmente todas las células de Streptococcus
15 pyogenes de la cavidad oral se pueden agrupar.
Los expertos en la materia saben lo que debe subsumirse en la expresión "temperatura corporal" y cómo se puede determinar. La temperatura corporal en el presente documento se refiere esencialmente a los seres humanos y animales. Los expertos en la materia también están familiarizados con el término "caramelo", y también saben en qué material publicado convencional buscar los ingredientes o el método de preparación de un caramelo. La presente invención no se limita a los caramelos simples, sino que la invención se puede combinar fundamentalmente con todos los caramelos con los que los expertos en la materia están familiarizados. Los caramelos y su producción están descritos por los expertos en la materia en la correspondiente literatura técnica de libre acceso, por ejemplo, en Candy Ind. 27, 161 (1996); H. Hoffmann, W. Mauch, W. Untze, “Sugar and Sugar Products”, 2ª edición, Behr's:
25 Hamburg (2002); R. Lees, B. Jackson, “Sugar Confectionery and Chocolate Manufacture”, Leonard Hill Books: Plymouth (1999); Federal Association of the German Confectionery Industry (BDSI), editores, Confectioner's Handbook, Molberg, Bonn (2001); “Handbook for the Food Chemist, Food Leader”, Thieme, Stuttgart (1995).
Los caramelos pueden preferirse en una variedad de formas, sabores, consistencias y colores. Por lo general, son fragmentos del tamaño de un bocado. Los caramelos pueden ser sólidos o rellenos, redondos, ovalados, cuboides o en forma de cubo. Dependiendo del contenido de agua residual, son duros (caramelos duros) o blandos y masticables (caramelos blandos). Dependiendo de los aditivos, se hace una distinción, en particular, entre los caramelos para la garganta y los caramelos para la tos, los caramelos de fruta, de caramelo y refrescantes. Los efectos y el sabor de los caramelos pueden determinarse mediante el uso de extractos de hierbas, aceites
35 esenciales (por ejemplo, eucalipto) y principios activos como el mentol. En el caso de los caramelos de frutas, las sustancias aromatizantes y los componentes ácidos pueden producir un sabor individual. También se pueden añadir extractos naturales de frutas y plantas o colorantes alimentarios para conferir color a los caramelos. Los caramelos de caramelo se preparan, en particular, a partir de productos lácteos tales como la leche condensada, mantequilla y crema. Al aromatizar y añadir diversos aditivos, son posibles variantes de sabor tales como nueces, almendras, miel, cacao, coco y similares. Además, se prefieren caramelos masticables, cortados, estampados, colados o laminados. Se pueden proporcionar caramelos ventajosos con una variedad de ingredientes, por ejemplo, vitaminas, aminoácidos, aceites, hierbas, grasas, diversos hidratos de carbono o sustitutos del azúcar, potenciadores del sabor y/o emulsionantes. Los caramelos duros, en particular, contienen sacarosa y glucosa que se producen preferentemente usando sustancias colorantes y sustancias que confieren olor y que confieren sabor, que influyen
45 en las propiedades de los caramelos. Debido al bajo contenido de agua residual del 1-3 %, los caramelos duros tienen una consistencia dura y a menudo brillante. Los caramelos duros también pueden producirse sin azúcar mediante el uso de edulcorantes y sustitutos del azúcar.
Los caramelos blandos denotan, en particular, un grupo de productos de confitería que tienen una consistencia masticable, en contraste con los caramelos duros, y que se producen con un contenido de agua del 6 al 10 % de los ingredientes principales que son sacarosa, otros tipos de azúcar, edulcorantes y/o alcoholes de azúcar, así como jarabe de glucosa por cocción discontinua o continua, conteniendo preferentemente también grasas, ingredientes lácteos, espesantes, emulsionantes, aromatizantes y sustancias saborizantes como aditivos. También se pueden producir en una amplia variedad de formas y colores, con y sin relleno.
55 Además, se ha demostrado que es ventajoso que los caramelos tengan un sistema multicámara, de modo que las vitaminas u otros cofactores estén presentes en una cámara y la composición o bacteria del ácido láctico preferida esté presente en una o más cámaras adicionales. A través de este sistema de cámaras, es posible garantizar que las bacterias del ácido láctico se liberen en un momento óptimo y, opcionalmente, a diferentes dosis. Las vitaminas u otros cofactores también pueden potenciar la actividad de las bacterias del ácido láctico. Por ejemplo, sorprendentemente se ha encontrado que los arándanos tienen el efecto de prevenir el desarrollo de una biopelícula, por lo que son un suplemento óptimo para las bacterias del ácido láctico preferidas. Los ensayos han demostrado que la coagregación de Streptococcus pyogenes es un 50 % más eficaz si también hay presentes ingredientes o una solución de arándanos.
65 Los ensayos han demostrado que las bacterias del ácido láctico preferidas se coagregan al entrar en contacto con
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física, y el reconocimiento y la adhesión mutuos de células que pertenecen genéticamente a diferentes tipos de células. La coagregación se entiende en el sentido de la invención en particular como adhesión, interacción, unión, unión específica, afinidad o interacción, y caracteriza, en particular, la capacidad de las bacterias del ácido láctico preferidas para formar aglomerados con Streptococcus pyogenes. En su superficie celular, las bacterias expresan 5 receptores y estructuras para las adhesinas a otros tipos de células que se usan para la adhesión entre las células. Esta adhesión desempeña un papel excelente en la colonización con microorganismos patógenos y comensales, de modo que una intervención en la adherencia podría tener consecuencias de gran alcance. Debido al hecho de que las bacterias del ácido láctico de acuerdo con la invención tienen la capacidad de unión específica, en particular, de coagregación con al menos un microorganismo del grupo de Streptococcus pyogenes, los agregados de las bacterias del ácido láctico de acuerdo con la invención y los microorganismos patógenos. Los coagregados resultantes se pueden eliminar fácilmente, por ejemplo, enjuagando las superficies, la piel, el tejido y/o algún otro sitio o reservorio de colonización, de modo que se reduzca definitivamente el número de microorganismos patógenos. Además, una adherencia inicial y/o renovada a las superficies, la piel, los tejidos y/u otros sitios o depósitos de colonización se previenen y/o reducen enmascarando las estructuras superficiales de los
15 microorganismos patógenos. Si las células se unen entre sí y forman agregados, este proceso se conoce, en particular, como agregación. Si solo participa una especie de célula en esta formación de un agregado, entonces eso se conoce como autoagregación. Si participan al menos dos especies celulares diferentes en la formación del agregado, este proceso se conoce, en particular, como coagregación.
En el sentido de la presente invención, "unión específica de al menos un microorganismo patógeno" se entiende que se refiere, en particular, a la propiedad de las bacterias del ácido láctico de acuerdo con la invención para unirse específicamente a al menos una bacteria del grupo de Streptococcus pyogenes.
De acuerdo con una realización preferida de las bacterias del ácido láctico de acuerdo con la invención, también se
25 caracterizan porque existe la capacidad de unión específica a al menos un microorganismo patógeno incluso después de un tratamiento biológico, químico o físico, por ejemplo, un tratamiento térmico a una temperatura mínima de 70 ºC. En otras palabras, las bacterias del ácido láctico preferidas pueden estar presentes preferentemente en forma muerta en una composición preferida, porque la capacidad de interacción específica o unión a bacterias patógenas, en particular, a Streptococcus pyogenes, no se ve afectada y, por lo tanto, se puede establecer una unión o interacción.
El tratamiento térmico mencionado anteriormente y/o "resistencia a un tratamiento térmico" o "estabilidad térmica" se entiende que se refieren a la propiedad de una bacteria de seguir siendo capaz de entrar en un enlace específico con al menos un microorganismo patógeno seleccionado del grupo de Streptococcus pyogenes e incluso después
35 de un cierto período de tiempo de al menos 30 minutos a una temperatura elevada de 70 ºC o superior. Las células muertas o destruidas de bacterias del ácido láctico pueden ser especialmente ventajosas, porque las células de bacterias del ácido láctico no pueden desencadenar ninguna actividad metabólica. Las formas "muertas" o "destruidas" se caracterizan, en particular en el sentido de la invención, porque estas formas de bacterias del ácido láctico de acuerdo con la invención ya no son capaces de dividirse, por ejemplo, no pueden teñirse con colorantes vivos, no son metabólicamente activas ni presentan ninguna replicación del ADN, o biosíntesis o secreción de proteínas, por ejemplo, de productos metabólicos.
De acuerdo con otra propiedad preferida de las bacterias del ácido láctico, las bacterias del ácido láctico de acuerdo con la invención también pueden caracterizarse por una estabilidad térmica además de la propiedad descrita
45 anteriormente, en concreto, la capacidad de unión específica de al menos un microorganismo patógeno seleccionado entre Streptococcus pyogenes, y pueden sobrevivir a un tratamiento a altas temperaturas preferentemente de al menos aprox. 60 ºC, más preferentemente al menos 65 ºC e incluso más preferentemente al menos 70 ºC durante un período de al menos 20 minutos, preferentemente de 25 minutos y más preferentemente de al menos aprox. 30 minutos, y permanecen sin cambios con respecto a su capacidad para la coagregación de la unión específica de los microorganismos patógenos anteriormente mencionados.
En una realización preferida de la composición, se prefieren las bacterias del ácido láctico que están vivas o muertas
o son partes y fragmentos, por ejemplo, productos de escisión enzimática o mecánica (por ejemplo, prensa francesa, etc.) o productos metabólicos de estas bacterias, en la medida en que todavía tienen la capacidad de coagregación
55 y/o de prevenir la unión a la fibronectina. También es preferible usar las bacterias del ácido láctico en forma encapsulada, secada por pulverización y/o liofilizada, es decir, que estén presentes en forma encapsulada, secada por pulverización o liofilizada en una composición preferida. Además, puede ser ventajoso usar las bacterias del ácido láctico en forma de células digeridas.
Además, es preferible si la capacidad de las bacterias del ácido láctico de acuerdo con la invención para la unión específica de los microorganismos patógenos también persiste a un pH entre aprox. 3 y 8. Esto significa que las bacterias del ácido láctico pueden estar en un medio que tiene un pH de 3 a 8 y seguir teniendo su capacidad de unirse a Streptococcus pyogenes. Las bacterias del ácido láctico preferidas se pueden usar ventajosamente en un amplio intervalo de pH y/o tienen las propiedades preferidas en el intervalo preferido. Por lo tanto, las bacterias del 65 ácido láctico preferidas pueden usarse universalmente en diferentes zonas del cuerpo. Las bacterias del ácido láctico de acuerdo con la invención han mostrado sorprendentemente propiedades de coagregación con
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autoclave producen la destrucción de células y también conducen a fragmentos de bacterias del ácido láctico de acuerdo con la invención, como lo hacen la irradiación UV, los métodos de autolisis o procesos especiales de almacenamiento a diferentes temperaturas.
5 Los expertos en la materia pueden ensayar y verificar si una bacteria del ácido láctico que pertenece al género de las bacterias del ácido láctico tiene las propiedades de acuerdo con la invención, por ejemplo, basándose en los ensayos descritos en el presente documento y a continuación. La expresión "células de Lactobacillus" también se puede usar en el sentido de la presente invención para incluir bacterias del ácido láctico o lactobacilos, e incluye microorganismos que requieren hidratos de carbono, en particular, glucosa y lactosa para la fermentación del ácido láctico, y normalmente usan la vía de biosíntesis de Embden-Meyerhof. Las células de Lactobacillus se clasifican taxonómicamente en la familia Lactobacteriaceae. Son Gram-positivas, no forman esporas y, en general, son inmóviles. Las células de Lactobacillus son anaerobias, pero son aerotolerantes, aunque no contienen heminas (citocromo, catalasa) (Schleifer et al., System. Appl. Microb. 18, 461-467 (1995) o Ludwiq et al., System. Appl. Microb. 15, 487-501 (1992). Las células y/o la especie Lactobacillus pueden determinarse basándose en el patrón de
15 utilización de los hidratos de carbono, en particular, usando el ensayo API (de la empresa Biomerieux). De acuerdo con la invención, estas incluyen, en particular, especies que son adecuadas para la fermentación del ácido láctico homofermentativo o la fermentación del ácido láctico heterofermentativo. Dichas células de Lactobacillus también se seleccionan preferentemente del grupo que comprende Lactobacillus lactis, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus jensenii, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus amylovorus, Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus casei, Lactobacillus crispatus, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus pentosus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus curvatus y Lactobacillus plantarum (siendo todas ellas homofermentativas), también Lactobacillus brevis, Lactobacillus buchneri, Lactobacillus fructivorans, Lactobacillus hilgardii, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus viridescens, así como Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus ingluviei (siendo todas ellas heterofermentativas). Las células de Lactobacillus
25 que son adecuadas como ejemplos y han sido depositadas por el solicitante incluyen: Lactobacillus paracasei subespecie paracasei (DSM 25972), Lactobacillus crispatus (DSM 25987, DSM 25988), Lactobacillus plantarum (DSM 25989), Lactobacillus ingluviei (DSM 25973), siendo todas ellas preferidas de acuerdo con la presente invención.
En una realización preferida de la presente invención, la bacteria del ácido láctico de acuerdo con la invención se selecciona de Lactobacillus paracasei subespecie paracasei, Lactobacillus crispatus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus ingluviei, cada una de las cuales se ha depositado en la Colección Alemana de Microorganismos y cultivos celulares (DSMZ) en Braunschweig con los números de deposición DSM 25972, DSM 25987, DSM 25988, DSM 25989, DSM 25973. Las deposiciones de la DSMZ mencionadas anteriormente se hicieron de acuerdo con el
35 Tratado de Budapest relativo al Reconocimiento Internacional de la Deposición de Microorganismos con el propósito de la deposición de patentes.
Como se ha mencionado anteriormente, la presente invención también se refiere a composiciones que contienen bacterias del ácido láctico, preferentemente viables, así como preferentemente al menos un vehículo o excipiente seleccionado de al menos uno de los siguientes: un vehículo o excipiente cosméticamente aceptable, un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable, o un vehículo o excipiente dermatológicamente aceptable.
El término "composición" en el sentido de la presente invención se entiende que incluye, en particular, solo una composición que contiene al menos una bacteria del ácido láctico o su lisado celular de acuerdo con la invención,
45 así como otros ingredientes opcionales tales como vehículos o excipientes u, opcionalmente, otros principios activos y sales. Se entiende que los aditivos, vehículos o excipientes cosmética, farmacéutica o dermatológicamente aceptables son cualquier sustancia, en general, en los campos cosmético, farmacéutico o dental de uso cosmético o farmacéutico, administración o aplicación de manera eficaz de un principio activo o una composición, es decir, en el presente caso, al menos una bacteria del ácido láctico o su lisado celular.
El término "mucosa" o "membrana mucosa" en el sentido de la presente invención y las reivindicaciones se entiende que se refiere a la capa interna que reviste órganos huecos mantenidos húmedos por las secreciones glandulares. En particular, esto se refiere a la mucosa oral y nasal, al tejido conjuntivo, a las membranas mucosas del tracto gastrointestinal y a las membranas mucosas de la zona química.
55 Se entiende que "enfermedades inflamatorias", en el contexto de la presente descripción y de las reivindicaciones de patente, se refiere a enfermedades que implican estados patológicos agudos, subagudos, crónicamente relajantes o crónicamente persistentes que implican a la piel, las membranas mucosas o la cavidad oral. Las enfermedades inflamatorias se caracterizan clínicamente por enrojecimiento, hinchazón, dolor, picazón, exudación, vesiculación, hiperqueratosis, hiperescamación, erosiones, úlceras y otros defectos de sustancias, así como costras, vesículas y otras eflorescencias. Las células histológicamente inflamatorias se pueden encontrar en el corion y/o en la epidermis. Se entiende que las "enfermedades inflamatorias" o los "estados inflamatorios", en el sentido de la presente invención y las reivindicaciones de patente, se refieren, en particular, a enfermedades y afecciones tales como, por ejemplo (pero no exclusivamente) eczema, eccema atópico, eczema seborreico, eccema alérgico o de
65 contacto tóxico), soriasis y otras inflamaciones hiperqueratósicas, heridas agudas y crónicas, enfermedades pruriginosas de la piel, así como inflamaciones raras tales como liquen plano, cambios granulomatosos y
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La eficacia de coagregación puede aumentar sorprendentemente de forma significativa en presencia de cofactores (EDTA, MgCl2, CaCl2, SDS). Fue absolutamente inesperado que EDTA, en particular, tuviera un efecto fuertemente positivo en la coagregación de bacterias del ácido láctico de acuerdo con la invención con Streptococcus pyogenes. Como se ha mencionado anteriormente, de acuerdo con una realización preferida, la composición y/o la bacteria del 5 ácido láctico se pueden usar en el zona de prevención y tratamiento de infecciones de garganta y amígdalas para agregar los microorganismos patógenos mencionados anteriormente, es decir, para unirlos. Esta coagregación se puede eliminar fácilmente por deglución o enjuague y/o en el caso de una suspensión, se pueden enjuagar en particular, lo que logra de manera ventajosa una reducción del número de patógenos. Las bacterias del ácido láctico y/o una composición que las contiene se pueden usar con este fin de varias formas. Por ejemplo, se pueden usar en pulverizados, soluciones para hacer gárgaras o enjuagues bucales, en forma de grageas o comprimidos para la garganta, pastillas, píldoras recubiertas, aerosoles, pasta de dientes, zumos, sirope o como un aditivo en los alimentos y/o como un complemento alimentario. Por lo tanto, la presente invención también se refiere a todos los productos usados en el campo de la higiene física, y los productos médicos y la profilaxis, y que contienen las bacterias del ácido láctico de acuerdo con la invención. Por consiguiente, las realizaciones descritas anteriormente
15 se consideran para las zonas de tratamiento, terapia y prevención en mamíferos. Las bacterias del ácido láctico y/o las composiciones que las contienen pueden, por lo tanto, usarse de diversas maneras.
Preferentemente, en particular, la composición de acuerdo con la invención y/o las bacterias del ácido láctico de acuerdo con la invención se usan para producir un fármaco farmacéutico para el tratamiento o la prevención de los síntomas de garganta, faringitis atrófica sicca, faringitis seca, angina lateral, amigdalitis causada por Streptococcus pyogenes. Las bacterias del ácido láctico y las composiciones de acuerdo con la invención que contienen las mismas proporcionan agentes con los que se pueden tratar y/o prevenir estas enfermedades ventajosamente. Las bacterias del ácido láctico y/o las composiciones que las contienen pueden usarse tanto en medicina humana como veterinaria, en particular, en perros, gatos, caballos, camellos y halcones, como ya se ha indicado. La composición
25 y/o las bacterias del ácido láctico de acuerdo con la invención -o los fragmentos, derivados o mutantes de las mismas -se pueden usar, en particular, como aditivos alimentarios, productos de higiene y/o como productos de higiene que contienen las bacterias del ácido láctico o como un preparado farmacéutico.
La presente invención también se refiere a un método de identificación y/o selección de un microorganismo del género Lactobacillus sp. que tiene las propiedades de acuerdo con la invención, de manera que el método comprende al menos los siguientes etapas: a) incubar un lote de un microorganismo patógeno seleccionado de Streptococcus pyogenes para unirse a la fibronectina; b) añadir el microorganismo del género Lactobacillus que se va a examinar e incubar el lote para formar la unión específica entre el microorganismo patógeno y el microorganismo del género que se va a examinar; c) separar los microorganismos no unidos del género
35 Lactobacillus retirando el sobrenadante; y d) determinar la unión a la fibronectina con respecto a los microorganismos unidos y agregados del género Lactobacillus.
En una realización preferida, el método de acuerdo con la invención también comprende la etapa de examinar la prevención de la unión a la fibronectina por Streptococcus pyogenes. Los microorganismos del género Lactobacillus que se van a examinar se añadieron en el presente documento durante la incubación del microorganismo patógeno marcado con fluorescencia que se une a la fibronectina. Tras retirar las células no unidas, preferentemente se realiza la cuantificación específica de la unión a la fibronectina midiendo la fluorescencia en comparación con los controles mediante la adición de los microorganismos que se van a ensayar.
45 Es evidente que las características mencionadas anteriormente y las que aún deben describirse a continuación pueden usarse no solo en la combinación particular dada, sino también solo sin ir más allá del alcance de la presente invención.
Se derivan ventajas adicionales a partir de las siguientes figuras y los experimentos realizados en este sentido, así como las realizaciones a modo de ejemplo. Los experimentos se realizaron usando todas las bacterias del ácido láctico preferidas, aunque, en el presente documento, solo se presentan algunos de los experimentos. Los expertos en la materia pueden reproducir la invención basándose en los ejemplos, en los que:
55 La Figura 1 muestra la unión específica y/o agregación de una realización ilustrativa de los microorganismos de acuerdo con la invención (DSM 25972, DSM 25989, DSM 25973) a una biopelícula formada por Streptococcus pyogenes (ensayo de unión) después de lavar las células no unidas tres veces y, a modo comparativo, cepas de Lactobacillus adicionales que no son de acuerdo con la invención y que no son capaces de unirse a Streptococcus pyogenes (especie de Lactobacillus 1 y especie de Lactobacillus 2); la cuantificación específica de la unión y/o agregación de cepas de Lactobacillus marcadas con CFDA de acuerdo con la invención a la biopelícula de S. pyogenes en placas de microtitulación de 96 pocillos basadas en la medición de la fluorescencia (Ex 485 nm/Em 535 nm). De esta forma, los expertos en la materia aprenderán que los microorganismos preferidos pueden usarse en infecciones bacterianas que se producen especialmente en el zona orofaríngea en particular.
65 La Figura 2 muestra los controles macroscópicos (fotografía de una placa de microtitulación de 24 pocillos) de la
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unión específica de una realización ilustrativa de un microorganismo de acuerdo con la invención (DSM 25972, DSM 25987, DSM 25988, DSM 25989 y DSM 25973) a Streptococcus pyogenes en el lote de coagregación a escala de 24 pocillos, así como las cepas de Lactobacillus de acuerdo con la invención y la cepa diana de Streptococcus pyogenes, ambas solas y en un sistema de documentación fotográfica. Se forma un precipitante blanco mediante
5 coagregación (y la precipitación asociada). Entonces, el aglomerado hace que Streptococcus pyogenes, en particular, no pueda unirse a las células epiteliales de la garganta. Los ensayos en pacientes han demostrado que las infecciones bacterianas pueden prevenirse o reducirse por medio de los microorganismos preferidos.
La Figura 3 muestra la representación microscópica de la unión específica de una realización ilustrativa de un microorganismo de acuerdo con la invención (DSM 25987 y DMS25973) a células de Streptococcus pyogenes tras la coagregación, así como las cepas de Lactobacillus de acuerdo con la invención y Streptococcus pyogenes sola. Mediante formación de imágenes microscópicas (contraste de fase, aumento de x1000); los coagregados pueden verse como aglomerados de células grandes.
15 La Figura 4 muestra los controles macroscópicos (fotografía de una placa de microtitulación de 24 pocillos) de la unión específica de una realización ilustrativa de un microorganismo de acuerdo con la invención (DSM 25972, DSM 25987, DSM 25988, DMS25989 and DMS25973) a células de Streptococcus pyogenes (coagregación) en saliva humana, así como las cepas de Lactobacillus de acuerdo con la invención y Streptococcus pyogenes sola en un sistema de documentación fotográfica. También se produce un depósito blanco mediante coagregación (y la precipitación asociada). Fue sorprendente que los microorganismos preferidos ya se unieran a Streptococcus pyogenes en la saliva, en particular, coagregándose allí y evitando así la unión de Streptococcus pyogenes a las células epiteliales. También fue sorprendente que los microorganismos preferidos no perdieran sus capacidades preferidas debido a las enzimas presentes en la saliva. Por lo tanto, los microorganismos preferidos son ventajosos de usar en un agente de aplicación oral tal como, en particular, un caramelo.
25 La Figura 5 muestra la influencia de una realización ilustrativa de los microorganismos de acuerdo con la invención (DSM 25972, DSM 25987, DSM 25988, DSM 25989 y DSM 25973) sobre la prevención de la unión a la fibronectina de la cepa ATCC 19615 de Streptococcus pyogenes tras 2 horas de incubación a 37 ºC con suspensión de Lactobacillus (viable) lavada en PBS y suspensión de Lactobacillus (muerta) destruida mediante un tratamiento térmico. La cuantificación específica es la unión de Streptococcus pyogenes marcado con CFDA a la placa de microtitulación de 96 pocillos recubierta con fibronectina. Esto muestra la unión de Streptococcus pyogenes en porcentaje, en la que el 100 % representa la unión de S. pyogenes (ATCC 19615) sola al recubrimiento de fibronectina de la placa de microtitulación sin la adición de la suspensión de Lactobacillus. Se encuentra que los microorganismos preferidos evitan la unión de Streptococcus pyogenes a las células epiteliales en la garganta y, por
35 lo tanto, también previenen la infección bacteriana.
La Figura 6 muestra la influencia de una realización ilustrativa de los microorganismos de acuerdo con la invención (DSM 25972, DSM 25987, DSM 25988, DSM 25989 y DSM 25973) sobre la unión de Streptococcus pyogenes (cepa ATCC 12344) a la fibronectina tras 2 horas de incubación a 37 ºC (con suspensión de Lactobacillus (viable) lavada en PBS y suspensión de Lactobacillus (muerta), en la que el Lactobacillus se destruye mediante tratamiento térmico). Esto muestra la cuantificación específica de la unión de Streptococcus pyogenes marcado con CFDA a la placa de microtitulación de 96 pocillos recubierta con fibronectina. Esto muestra la unión de Streptococcus pyogenes en porcentaje, en la que el 100 % representa la unión de S. pyogenes sola al recubrimiento de fibronectina de la placa de microtitulación sin la adición de la suspensión de Lactobacillus.
45 La Figura 7 muestra la representación macroscópica (fotografía de una placa de microtitulación de 24 pocillos) de la coagregación de una realización ilustrativa del microorganismo de acuerdo con la invención (DSM 25972, DSM 25987, DSM 25988, DMS 25989 y DMS 25973) y Streptococcus salivarius en tampón de PBS, así como las cepas de Lactobacillus de acuerdo con la invención y Streptococcus salivarius sola en un sistema de documentación fotográfica.. El depósito blanco se forma por coagregación (y la precipitación resultante).
Descripción detallada de las realizaciones ilustrativas
55 Para la identificación y selección de microorganismos de acuerdo con la invención, se analizaron diversas cepas de un banco de cepas de Lactobacillus mediante un proceso de exploración de cuatro etapas en el que se exploraron primero con respecto a la capacidad de unirse al microorganismo patógeno diana Streptococcus pyogenes (en lo sucesivo también denominado "microorganismo diana") (ensayo de unión) y, después, las cepas identificadas en la primer etapa se ensayaron en un ensayo de coagregación a escala de placa de microtitulación, en el que se midió cualitativamente la coagregación con el microorganismo diana respectivo usando un estereomicroscopio binocular. En el sentido de la presente invención, el término "co-agregación" se usa como sinónimo del término "coagregación". Además, se examinaron la intensidad de la coagregación y la estabilidad de la unión al microorganismo diana, así como la capacidad de evitar la unión a la fibronectina, lo que finalmente condujo a los microorganismos ilustrativos
65 de acuerdo con la invención que se identificaron (Lactobacillus).
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