JP2022511913A - ワイセラ属細菌由来のナノ小胞およびその用途 - Google Patents
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Abstract
Description
細菌と細菌由来の小胞が胃腸管を通じて全身的に吸収されるかを評価するために、次のような方法で実験を行った。マウスの胃腸に蛍光で標識した細菌と細菌由来の小胞をそれぞれ50μgの用量で胃腸管に投与し、0分、5分、3時間、6時間、12時間後に蛍光を測定した。マウスの全体イメージを観察した結果、図1aに示されたように、細菌である場合には、全身的に吸収されなかったが、細菌由来の小胞である場合には、投与後5分に全身的に吸収され、投与3時間後には、膀胱に蛍光が濃く観察されて、小胞が泌尿器系に排泄されることが分かった。また、小胞は、投与12時間まで体内に存在することが分かった(図1a参照)。
細菌と細菌由来の小胞が腸粘膜の防御膜を通過して腸組織に浸潤されるかを評価するために、細菌と細菌由来の小胞を腸に直接投与した後、免疫組織化学(Immunohistochemistry)方法で腸粘膜の防御膜を通過して腸組織への浸潤を評価した。腸粘膜で細菌と小胞の存在を評価するために、細菌と小胞に対する抗体を製作して、GFP(Green fluorescent protein)を付けて使用し、DAPI(4,6-diamidino 2-phenylindole)染色を行った後、顕微鏡で観察した。
ワイセラ・シバリア(Weissella cibaria)菌株を培養した後、これの小胞を分離して特性を分析した。まず、ワイセラ・シバリア(Weissella cibaria)菌株を37℃の培養器で吸光度(OD600)が1.0~1.5になるまでMRS(de Man-Rogosa and Sharpe)培地で培養した後、LB(Luria-Bertani)培地にサブ-カルチャー(sub-culture)した。以後、菌株が含まれている培養液を回収して、10,000×g、4℃で20分間遠心分離して菌体を除去し、0.22μmのフィルターに濾過した。濾過した上澄み液を100kDa Pellicon 2 Cassetteフィルターメンブレイン(Merck Millipore,US)でMasterFlexポンプシステム(Cole-Parmer,US)を用いて微細濾過(microfiltration)を通じて50ml以下の体積で濃縮した。濃縮させた上澄み液をもう一度0.22μmフィルターで濾過した。以後、BCA(Bicinchoninic acid)assayを用いてタンパク質を定量し、得られた小胞に対して下記実験を実施した。
炎症細胞でワイセラ・シバリア由来の小胞(Weissella cibaria EV)の炎症性メディエーター(IL-6、TNF-α)の分泌に対する影響を調べてみるために、マウスマクロファージ細胞株 であるRaw 264.7細胞にワイセラ・シバリア由来の小胞を多様な濃度(0.1、1、10μg/ml)で処理した後、細胞死滅とELISAを進めた。
前記実施例4の結果を基に、ワイセラ・シバリア由来の小胞の抗炎症効果を評価するために、多様な濃度(0.1、1、10μg/ml)のワイセラ・シバリア由来の小胞をマウスマクロファージ細胞株に12時間前処理した後、病原性原因因子である大腸菌由来の小胞1μg/mlを処理し、12時間後に、炎症性サイトカインの分泌をELISAで測定した。
Claims (15)
- ワイセラ(Weissella)属細菌由来の小胞を有効成分として含む、炎症疾患の予防または治療用薬学的組成物。
- 前記ワイセラ属細菌由来の小胞は、ワイセラ・シバリア(Weissella cibaria)から分泌されることを特徴とする、請求項1に記載の炎症疾患の予防または治療用薬学的組成物。
- 前記小胞は、平均直径が10~200nmであることを特徴とする、請求項1に記載の炎症疾患の予防または治療用薬学的組成物。
- 前記小胞は、ワイセラ属細菌から自然的または人工的に分泌されることを特徴とする、請求項1に記載の炎症疾患の予防または治療用薬学的組成物。
- 前記炎症疾患は、歯肉炎、歯周炎および口腔癌を含む口腔炎症疾患;胃炎および胃癌を含む胃炎症疾患;大腸炎、大腸ポリープおよび大腸癌を含む大腸炎症疾患;アトピー皮膚炎および乾癬を含む皮膚炎症疾患;鼻炎、鼻ポリープ、喘息、慢性閉塞性肺疾患および肺癌を含む呼吸器系炎症疾患よりなる群から選ばれる1つ以上の疾患であることを特徴とする、請求項1に記載の炎症疾患の予防または治療用薬学的組成物。
- ワイセラ(Weissella)属細菌由来の小胞を有効成分として含む、炎症疾患の予防または改善用食品組成物。
- 前記ワイセラ属細菌由来の小胞は、ワイセラ・シバリア(Weissella cibaria)から分泌されることを特徴とする、請求項6に記載の炎症疾患の予防または改善用食品組成物。
- 前記小胞は、平均直径が10~200nmであることを特徴とする、請求項6に記載の炎症疾患の予防または改善用食品組成物。
- 前記小胞は、ワイセラ属細菌から自然的または人工的に分泌されることを特徴とする、請求項6に記載の炎症疾患の予防または改善用食品組成物。
- 前記炎症疾患は、歯肉炎、歯周炎および口腔癌を含む口腔炎症疾患;胃炎および胃癌を含む胃炎症疾患;大腸炎、大腸ポリープおよび大腸癌を含む大腸炎症疾患;アトピー皮膚炎および乾癬を含む皮膚炎症疾患;鼻炎、鼻ポリープ、喘息、慢性閉塞性肺疾患および肺癌を含む呼吸器系炎症疾患よりなる群から選ばれた1つ以上の疾患であることを特徴とする、請求項6に記載の炎症疾患の予防または改善用食品組成物。
- ワイセラ(Weissella)属細菌由来の小胞を有効成分として含む、炎症疾患の予防または改善用化粧料組成物。
- 前記小胞は、ワイセラ属細菌から自然的または人工的に分泌されることを特徴とする、請求項11に記載の炎症疾患の予防または改善用化粧料組成物。
- ワイセラ(Weissella)属細菌由来の小胞を有効成分として含む、炎症疾患の予防または治療用吸入剤組成物。
- ワイセラ(Weissella)属細菌由来の小胞を有効成分として含む組成物を個体に投与する段階を含む、炎症疾患の予防または治療方法。
- ワイセラ(Weissella)属細菌由来の小胞の炎症疾患に用いられる薬剤を生産するための用途。
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